NL8303369A - PROCESS FOR PREPARING L-PHENYLALANINE BY RE-USING PHENYLALANINE AMMONIAKLYASE. - Google Patents
PROCESS FOR PREPARING L-PHENYLALANINE BY RE-USING PHENYLALANINE AMMONIAKLYASE. Download PDFInfo
- Publication number
- NL8303369A NL8303369A NL8303369A NL8303369A NL8303369A NL 8303369 A NL8303369 A NL 8303369A NL 8303369 A NL8303369 A NL 8303369A NL 8303369 A NL8303369 A NL 8303369A NL 8303369 A NL8303369 A NL 8303369A
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- phenylalanine
- ammonium
- substrate solution
- acid
- pal
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/22—Tryptophan; Tyrosine; Phenylalanine; 3,4-Dihydroxyphenylalanine
- C12P13/222—Phenylalanine
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Description
* \ . * VO 5096* \. * VO 5096
Titel: Werkwijze voor het bereiden van L-fenylalanine door het opnieuw gebruiken van fenylalanineammoniaklyase.Title: Method for preparing L-phenylalanine by reusing phenylalanine ammonia glyase.
De uitvinding heeft betrekking op een werkwijze voor het bereiden van fenylalanine uit de fenylalanineaimnoniaklyase (PAL) gekatalyseerde reactie vein t-kaneelzuur en ammoniak. In het bijzonder heeft de uitvin-i... ding betrekking op een werkwijze voor het bereiden van fenylalanine, 5 waarbij een hoge mate van de werkzaamheid van de PAL katalysator behouden blijft en de katalysator opnieuw kan worden gebruikt.The invention relates to a process for preparing phenylalanine from the phenylalanine imnonia kase (PAL) catalyzed reaction of t-cinnamic acid and ammonia. In particular, the invention relates to a process for preparing phenylalanine, wherein a high degree of activity of the PAL catalyst is retained and the catalyst can be reused.
L-fenylalanine is een essentieel aminozuur dat belangrijk is in voeding en andere voedsel- en medische gebieden. Het is commercieel geïsoleerd uit verscheidene eiwitten, waaronder ovalbumine en lactalbumine.L-phenylalanine is an essential amino acid that is important in food and other food and medical areas. It has been commercially isolated from a variety of proteins, including ovalbumin and lactalbumin.
10 Een laboratoriumwerkwijze voor het bereiden van L-fenylalanine, die wel bekend is, maakt gebruik van het enzym fenylalanineammoniaklyase (verder aangeduid als PAL) om de reversibele reaktie: L-fenylalanine----£ trans-kaneelzuur + ammoniak te katalyseren; zie het Britse octrooischrift 1.489.468 (19 October 1977). 15 Het evenwicht van deze reaktie is normaal 80:20 in het voordeel van het t-kaneelzuur en verscheidene middelen zijn geprobeerd om een hoge omzettingsgraad in L-fenylalanine te realiseren. In het Britse octrooischrift 1.489.468 wordt beschreven dat een opbrengst, die de theoretische 20% L-fènylalanine benadert, kan worden gerealiseerd door 20 gebruik te maken van een grote massa cellen, die de PAL katalysator bevatten en een overmaat ammoniumionen. Volgens de werkwijze volgens genoemde publikatie is de bron voor ammoniumionen bij voorkeur ammonium-chloride, en wordt de reaktie bij voorkeur uitgevoerd bij een pH tussen 3,5 en 9,7.A laboratory method of preparing L-phenylalanine, which is well known, uses the enzyme phenylalanine ammonia glyase (hereinafter referred to as PAL) to catalyze the reversible reaction: L-phenylalanine - trans-cinnamic acid + ammonia; see British Patent 1,489,468 (October 19, 1977). The equilibrium of this reaction is normally 80:20 in favor of the t-cinnamic acid and various means have been attempted to realize a high conversion rate to L-phenylalanine. British Patent 1,489,468 describes that a yield approximating the theoretical 20% L-phenylalanine can be achieved using a large mass of cells containing the PAL catalyst and an excess of ammonium ions. According to the method of said publication, the source of ammonium ions is preferably ammonium chloride, and the reaction is preferably carried out at a pH between 3.5 and 9.7.
25 Yamada, S., et al., Appl. Environ. Microbiol. 42:773-78 (1981), vermeldt dat de omzettingsopbrengst tot meer dan 70% kan worden verhoogd door de pH van de substraatoplossing met waterstofchloride in te stellen op 10,0. Deze condities zijn echter zo hard, dat de PAL werkzaamheid van de teruggewonnen cellen sterk verlaagd wordt, in zodanige mate dat op-30 nieuw gebruik van het enzym niet praktisch is. Bovendien wordt in deze publikatie opgemerkt dat i.mmobilisatie van het cellulaire eizym geen voordelen biedt ten opzichte van het gebruik van intacte cellen. Hoewel behalve een hoge concentratie van L-fenylalanine met deze methode aan- “ *· * - 2 - vankelijk mogelijk is, wordt deze methode door de onmogelijkheid om het katalytisch enzym opnieuw te gebruiken voor toepassing op grote schaal oneconomisch gemaakt.Yamada, S., et al., Appl. Environ. Microbiol. 42: 773-78 (1981), reports that the conversion yield can be increased to over 70% by adjusting the pH of the substrate solution with hydrogen chloride to 10.0. However, these conditions are so hard that the PAL activity of the recovered cells is greatly reduced, such that reuse of the enzyme is not practical. In addition, it is noted in this publication that immobilization of the cellular enzyme has no advantages over the use of intact cells. Although apart from a high concentration of L-phenylalanine, this method is initially possible, the inability to reuse the catalytic enzyme for large-scale use makes this method uneconomical.
Er bestaat derhalve een blijvende behoefte aan een procedure voor 5 het bereiden van L-fenylalanine uit t-kaneelzuur en ammoniak, waarbij zowel een hoge opbrengst aan L-fenylalanine wordt gerealiseerd als het PAL voldoende katalytische werkzaamheid behoudt, opdat het opnieuw kan worden gebruikt.There is therefore a continuing need for a procedure for preparing L-phenylalanine from t-cinnamic acid and ammonia, both achieving a high yield of L-phenylalanine and retaining the PAL sufficient catalytic activity for reuse.
Een doel van de onderhavige uitvinding is derhalve om een methode 10 te verschaffen voor het bereiden van L-fenylalanine uit t-kaneelzuur waardoor het produkt in hoge concentraties wordt geproduceerd en het PAL enzym herhaalde malen kan worden gebruikt.It is therefore an object of the present invention to provide a method for preparing L-phenylalanine from t-cinnamic acid whereby the product is produced in high concentrations and the PAL enzyme can be used repeatedly.
Ook is een doel van de uitvinding een middel te verschaffen voor het bereiden van L-fenylalanine, waarbij de reaktie in een ladingsgewijs 15 systeem van vrije cellen of in een geïmmobiliseerde cel--of enzymsysteem kan worden uitgevoerd.It is also an object of the invention to provide a means of preparing L-phenylalanine, wherein the reaction can be carried out in a batch free cell system or in an immobilized cell or enzyme system.
Een verder doel van de uitvinding is om een economische manier te verschaffen om PAL in de bereiding van L-fenylalanine te gebruiken.A further object of the invention is to provide an economical way to use PAL in the preparation of L-phenylalanine.
De werkwijze voor het bereiden van L-fenylalanine door t-kaneel-20 zuur en ammoniak in tegenwoordigheid van fenylalanineammoniaklyase te laten reageren, is zodanig verbeterd dat hoge opbrengsten van L-fenylalanine worden verkregen en de katalytische werkzaamheid van het PAL in hoge mate wordt behouden. Onder beheerste reaktiecondities wordt de stabiliteit van het PAL zodanig verhoogd, dat het herhaalde malen kan 25 worden gebruikt voor het bereiden van L-fenylalanine in hoge concentraties.The method of preparing L-phenylalanine by reacting t-cinnamic acid and ammonia in the presence of phenylalanine ammonia glyase has been improved to obtain high yields of L-phenylalanine and to maintain the catalytic activity of the PAL to a high degree . Under controlled reaction conditions, the stability of the PAL is increased such that it can be used repeatedly to prepare L-phenylalanine in high concentrations.
Teneinde dit gewenste resultaat te realiseren wordt een substraat-oplossing bereid- door zuur te laten reageren met een bron voor ammonium-ionen. De bron voor ammoniumionen kan elk non-halogeenammoniumzout zijn.In order to achieve this desired result, a substrate solution is prepared by reacting acid with a source of ammonium ions. The source of ammonium ions can be any non-halogen ammonium salt.
30 De pH van de substraatoplossing wordt ingesteld binnen het gebied van ongeveer 8,0 tot 10,0 onder toepassing van een non-halogeenbevattend zuur, waarna de oplossing wordt toegevoegd aan een PAL bron zoals een vrij, intacte celsvsteem of een geïmmobiliseerde cel of een enzymsysteem dat PAL bevat.The pH of the substrate solution is adjusted within the range of about 8.0 to 10.0 using a non-halogen-containing acid, after which the solution is added to a PAL source such as a free, intact cell system or an immobilized cell or an enzyme system containing PAL.
35 In overeenstemming met de werkwijze volgens de onderhavige uit- - >i ' " * * " - 3 -35 In accordance with the method of the present invention - -> i '"* *" - 3 -
Aa
vinding/ wordt een substraatoplossing bereid met t-kaneelzuur en een bron voor ammoniumionen. De bron voor ammoniumionen kan worden geïntroduceerd door direkt een ammoniumzout van een organische zuur of een mineraalzuur aan het t-kaneelzuur toe te voegen, of door het in de sub-5 straatoplossing te maken / bijvoorbeeld door amminiumhydroxyde en een non-halogeenzuur te mengen.invention / a substrate solution is prepared with t-cinnamic acid and a source of ammonium ions. The source of ammonium ions can be introduced by adding an ammonium salt of an organic acid or a mineral acid directly to the t-cinnamic acid, or by making it in the substrate solution / for example by mixing ammonium hydroxide and a non-halo acid.
Volgens het Britse octrooischrift 1.489.468 is een mengsel van ammoniumchloride en ammoniumhydroxyde een geprefereerde bron voor ammoniumionen (blz. 3, regels 25 - 26). In de procedure volgens Yamada 10 et al. wordt eveneens gebruik gemaakt van ammoniumchloride,In tegenstelling tot deze bekende wijze van werken, is gevonden dat het voordelig is wanneer het ammoniumzout geen halogeenionen bevat. De aanwezigheid van halogenen in de substraatoplossingen blijkt de katalytische werkzaamheid van PAL te belemmeren. Geprefereerde ammoniumzouten omvatten 15 daarom ammoniumsulfaat, ammoniumnitraat, aramoniumcltraat, ammonium-acetaat, en ammoniumfosfaat. Een bijzonder geprefereerd ammoniumzout is ammoniumsulfaat.According to British Patent 1,489,468, a mixture of ammonium chloride and ammonium hydroxide is a preferred source of ammonium ions (page 3, lines 25-26). The procedure of Yamada 10 et al. Also uses ammonium chloride. Contrary to this known mode of operation, it has been found to be advantageous if the ammonium salt does not contain halogen ions. The presence of halogens in the substrate solutions appears to interfere with the catalytic activity of PAL. Preferred ammonium salts, therefore, include ammonium sulfate, ammonium nitrate, aramium chloride, ammonium acetate, and ammonium phosphate. A particularly preferred ammonium salt is ammonium sulfate.
Het is ook gewenst, dat het ammoniumzout in hoge concentraties aan de substraatoplossing wordt toegevoegd. De concentratie van am-20 moniumionen loopt in het algemeen van ongeveer 0,1 tot 7,5m bij voorkeur van ongeveer 1 tot 5M. De hoge concentratie van ammoniumzout verhoogt de ammoniakconcentratie in een systeem en werkt ook als buffer zodat instelling van de pH van de reactie gemakkelijker kan worden beheerst.It is also desirable that the ammonium salt be added to the substrate solution in high concentrations. The concentration of am-20 monium ions generally ranges from about 0.1 to 7.5m, preferably from about 1 to 5M. The high concentration of ammonium salt increases the ammonia concentration in a system and also acts as a buffer to more easily control the pH of the reaction.
25 Wanneer de concentratie van ammoniumionen binnen de aangegeven bereiken ligt, ligt de concentratie van t-kaneelzuur in de oplossing in het algemeen van ongeveer 30 tot ongeveer 200 mM en bij voorkeur van ongeveer 60 - ongeveer 150 mM.When the concentration of ammonium ions is within the ranges indicated, the concentration of t-cinnamic acid in the solution is generally from about 30 to about 200 mM, and preferably from about 60 to about 150 mM.
Volgens Yamada et al. dient de substraatoplossing te worden in-30 gesteld op een pH van 10,0. In de werkwijze volgens de onderhavige uitvinding kan de pH echter worden ingesteld binnen het bereik van ongeveer 8 - ongeveer 10, en ligt de pH bij voorkeur binnen het bereik van ongeveer 8,5 tot ongeveer 9,5. Ook wordt volgens de Yamada publi-katie de pH van de substraatoplossing ingesteld met waterstofchloride.According to Yamada et al., The substrate solution should be adjusted to a pH of 10.0. However, in the method of the present invention, the pH can be adjusted within the range of about 8 - about 10, and the pH is preferably within the range of about 8.5 to about 9.5. Also, according to the Yamada publication, the pH of the substrate solution is adjusted with hydrogen chloride.
35 Hierdoor kan een significante hoeveelheid chloride aan het substraat worden toegevoegd. In de onderhavige werkwijze is het echter, zoals y·.This allows a significant amount of chloride to be added to the substrate. However, in the present method, it is like y ·.
V v -4- ·* eerder is aangegeven, voordelig om de pH van de substraatoplossing in te stellen met een non-halogeen-bevattend zuur. Zuren die voor het instellen van de pH de voorkeur hebben, zijn zwavelzuur, fosforzuur, en azijnzuur, hoewel andere non-halogeenzuren kunnen worden gebruikt.V v -4- * * has previously been indicated, advantageous to adjust the pH of the substrate solution with a non-halogen-containing acid. Preferred acids for adjusting the pH are sulfuric acid, phosphoric acid, and acetic acid, although other non-halo acids can be used.
5 Een bijzonder geprefereerd zuur is zwavelzuur, want wanneer dit wordt toegevoegd aan een substraatoplossing die ammoniumhydroxyde bevat, zal het reageren onder vorming van ammoniumsulfaat, dat een bekend enzym-stabiliserend middel is.A particularly preferred acid is sulfuric acid, because when added to a substrate solution containing ammonium hydroxide, it will react to form ammonium sulfate, which is a known enzyme stabilizing agent.
De substraatoplossing wordt aan een PAL bevattende cultuurvloei-10 stof, de' daarvan afgescheiden cellen, of het geïsoleerde enzym toegevoegd. Het PAL wordt geproduceerd volgens conventionele methoden die in de stand der techniek zijn beschreven. De PAL-gekatalyseerde reactie verloopt onder L-fenylalanine producerende condities, die bij voorkeur o een reactietemperatuur omvatten van ongeveer 10 tot ongeveer 45 C. Onder 15 de condities van de werkwijze volgens de uitvinding wordt de stabiliteit van het PAL zodanig verhoogd, dat het herhaalde malen kan worden gebruikt voor het bereiden van L-fenylalanine in hoge concentraties.The substrate solution is added to a PAL containing culture liquid, the cells separated therefrom, or the isolated enzyme. The PAL is produced according to conventional methods described in the prior art. The PAL catalyzed reaction proceeds under L-phenylalanine producing conditions, which preferably include a reaction temperature of about 10 to about 45 ° C. Under the conditions of the process of the invention, the stability of the PAL is increased such that it repeats grinding can be used to prepare L-phenylalanine in high concentrations.
De onderhavige werkwijze voor het bereiden van L-fenylalanine kan worden benut in een ladingsgewijze systeem van vrije cellen of een 20 geïmmobiliseerde cel of enzymsysteem. Het ladingsgewijze systeem kan een eenvoudig ladingsgewijze systeem of een ladingsgewijze systeem met continue toevoer zijn. Indien het PAL wordt geïmmobiliseerd in een kolom, kan de kolom worden gebruikt als een systeem van een enkele doorgang, een systeem met recirculatie of een recirculatiesysteem met conti-25 nue toevoer. Een geprefereerde werkwijze voor het immobiliseren van het PAL enzym of cellen die het enzym bevatten wordt beschreven in de Amerikaanse octrooiaanvrage 400.141, die op 20 juli 1982 is ingediend. Wanneer de PAL enzymen of cellen die het enzym bevatten op een kolom worden geïmmobiliseerd, kan de kolom op een temperatuur worden gehouden van onge-30 veer 10 - ongeveer 40°C. en bij voorkeur ongeveer 18 - 30°C. terwijl de substraatoplossing door de kolom wordt gepompt.The present method of preparing L-phenylalanine can be utilized in a free cell batch system or an immobilized cell or enzyme system. The batch system can be a simple batch system or a continuous feed batch system. If the PAL is immobilized in a column, the column can be used as a single pass system, a recirculation system or a continuous feed recirculation system. A preferred method of immobilizing the PAL enzyme or cells containing the enzyme is described in U.S. Patent Application 400,141, filed July 20, 1982. When the PAL enzymes or cells containing the enzyme are immobilized on a column, the column can be kept at a temperature of about 10 - about 40 ° C. and preferably about 18-30 ° C. while pumping the substrate solution through the column.
Het reactiemengsel wordt met conventionele methoden op de pro-duktie van L-fenylalanine geanalyseerd. Wanneer zwavelzuur wordt gebruikt in plaats van waterstofchloride in de substraatoplossing, is de 35 geproduceerde hoeveelheid L-fenylalanine ongeveer 3 tot 10 keer de hoeveelheid die verkregen wordt wanneer waterstofchloride wordt gebruikt. Wanneer PAL enzym is geïmmobiliseerd, vertoont het ongeveer 50 % behoud -5- van werkzaamheid na 41 dagen reactietijd. Dit staat in tegenstelling tot het 20 % behoud van werkzaamheid na 24 uren, zoals vermeld door Yamada et al.The reaction mixture is analyzed for the production of L-phenylalanine by conventional methods. When sulfuric acid is used in place of hydrogen chloride in the substrate solution, the amount of L-phenylalanine produced is about 3 to 10 times the amount obtained when hydrogen chloride is used. When PAL enzyme is immobilized, it shows approximately 50% retention of activity after 41 days of reaction time. This is in contrast to the 20% efficacy retention after 24 hours, as reported by Yamada et al.
Het L-fenylalanine kan uit het reactiemengsel met conventionele 5 methoden worden geïsoleerd.The L-phenylalanine can be isolated from the reaction mixture by conventional methods.
De uitvinding wordt aan de hand van de volgende voorbeelden, die slechts ter toelichting en niet ter beperking van de uitvinding dienen, nader toegelicht.The invention is further elucidated by means of the following examples, which only serve to illustrate and not limit the invention.
Voorbeeld I.Example I.
10 Men bereidde een cultuurmedium volgens de hiernavolgende algemene procedure:A culture medium was prepared according to the following general procedure:
Aan 1 liter gedeïoniseerd water wordt 10 gram Pepton, 10 gram gistextract, 0,5 gram D, L-fenylalanine, 5 gram natriumchloride, en 5 gram L-isoleucine toegevoegd. De pH wordt met zwavelzuur ingesteld op 15 6,0 en een autoclaafbehandeling gedurende 10 minuten bij 120°C op een druk van 103 kPa volgt. Dit is standaardinductiemedium voor cultuurhuizen en schudkolven.10 grams of Pepton, 10 grams of yeast extract, 0.5 grams of D, L-phenylalanine, 5 grams of sodium chloride, and 5 grams of L-isoleucine are added to 1 liter of deionized water. The pH is adjusted to 6.0 with sulfuric acid and an autoclave treatment for 10 minutes at 120 ° C at a pressure of 103 kPa follows. This is standard induction medium for culture houses and shake flasks.
Voorbeeld II.Example II.
De algemene procedure van Voorbeeld I werd herhaald, behalve dat 20 100 mM kalium jodide (KI) aan het medium werd toegevoegd. Dit is hoog- inductie-selectie medium.The general procedure of Example I was repeated, except that 100 mM potassium iodide (KI) was added to the medium. This is high induction selection medium.
Voorbeeld III.Example III.
De algemene procedure van Voorbeeld I werd gevolgd , behalve dat 200 mM KI aan het medium werd toegevoegd. Dit is eveneens hoog-inductie-25 selectie medium.The general procedure of Example I was followed, except that 200 mM KI was added to the medium. This is also high induction selection medium.
Voorbeeld IV.Example IV.
De algemene procedure van Voorbeeld I werd gevolgd, behalve dat 15 gram gistextract werd gebruikt en Pepton werd verwijderd. Men voegde ook 200 mM KI toe. Dit is hoog-inductie-schudkolf-produktie medium.The general procedure of Example I was followed, except that 15 grams of yeast extract was used and Pepton was removed. 200 mM KI was also added. This is high induction shake flask production medium.
30 Voorbeeld V.30 Example V.
Men bereidde een fermentatiemedium volgens de algemene procedure van Voorbeeld IV, behalve dat natriumchloride en L-isoleucine werden weggelaten. Dit is hoog-inductie-fermentatie-produktie medium.A fermentation medium was prepared according to the general procedure of Example IV, except that sodium chloride and L-isoleucine were omitted. This is high induction fermentation production medium.
Voorbeeld VI.Example VI.
Drie cultuurmediums werden bereid als in de Voorbeelden I, II en 35 III. Een PAL-producerende stam van Rhodotorula rubra (ATCC Nr. 4056) die op hellingen van voedingsagar was gehouden, werd gebruikt voor het enten -6- van 4,.5 cm^ van elke testbuiscultuur, De buizen werden daarna op een schudmachine gebracht bij 30°c en 250 omw/min. Van elke buis werden 7 3 overdrachten (0,2 cm ) in 4,5 ml vers cultuurmedium uitgevoerd na 24 of 48 uur. Cultuurhuizen werden gebruikt om 200 cm^ medium in schud-5 kolven van 1000 ml te enten. Een. kolf van elk medium werd na 30 uur en na 54 uur geoogst. De celopbrengst na 30 uur bedroeg gemiddeld 14 gram pasta/liter en na 54 uur gemiddeld 29 gram pasta/liter.Three culture mediums were prepared as in Examples I, II and 35 III. A PAL producing strain of Rhodotorula rubra (ATCC No. 4056) kept on slopes of nutrient agar was used to inoculate 4.5 cm of each test tube culture. The tubes were then placed on a shaker at 30 ° c and 250 rpm. From each tube, 7 transfers (0.2 cm) in 4.5 ml fresh culture medium were performed after 24 or 48 hours. Culture houses were used to inoculate 200 ml medium in 1000 ml shaking flasks. A. flask from each medium was harvested after 30 hours and after 54 hours. The cell yield after 30 hours averaged 14 grams of paste / liter and after 54 hours averaged 29 grams of paste / liter.
De PAL-werkzaamheid van 100 mM KI was 31 % hoger dan van de controle.The PAL efficacy of 100 mM KI was 31% higher than that of the control.
De PAL-werkzaamheid van 200 mM KI was 39 % hoger dan van de controle.The PAL efficacy of 200 mM KI was 39% higher than that of the control.
10 Voorbeeld VII.Example VII.
De algemene procedure van Voorbeeld VI voor het groeien van R. rubra cellen in 200 mM KI hoog-inductie medium werd gevolgd, behalve dat 25 selectie-overdrachten van de 200mM KI cultuur werden uitgevoerd. Ook werd 24 uur nadat de schudkolf was geënt, 2,5 % van het medium 15 gebruikt om 15 verse (laatste kolf) schudkolven te enten, en na 24 uur cultuurtijd werden deze kolven geoogst. Celopbrengsten en PAL-werkzaamheid werden bepaald aan een paar kolven en het uiteindelijke samengevoegde celpastaprodukt. De hoogste PAL-werkzaamheid bij 28,7 gram pasta/liter medium was 18,4 U/gram pasta (528 ü PAL/liter) . (1 een-20 heid = 1 mol L-fenylalanine omgezet in t-kaneelzuur en ammoniak/min bij 30°C. De werkzaamheid werd bepaald door een modificatie van de methode beschreven door Kalghatgi en Sübba Rao, Biochem. J. 149: 65-72. 1975. Het uiteindelijke samengevoegde celprodukt had 15,0 eenheden PAL/gram pasta bij 27 gram pasta/liter gemiddelde celopbrengst (405 ü 25 PAL/liter) .The general procedure of Example VI for growing R. rubra cells in 200mM KI high-induction medium was followed, except that selection transfers of the 200mM KI culture were performed. Also, 24 hours after the shake flask was inoculated, 2.5% of the medium 15 was used to inoculate 15 fresh (last flask) shake flasks, and after 24 hours of culture time, these flasks were harvested. Cell yields and PAL activity were determined on a pair of flasks and the final pooled cell paste product. The highest PAL efficacy at 28.7 grams of paste / liter of medium was 18.4 U / gram of paste (528 µl PAL / liter). (1 unit = 1 mole L-phenylalanine converted to t-cinnamic acid and ammonia / min at 30 ° C. The activity was determined by a modification of the method described by Kalghatgi and Sübba Rao, Biochem. J. 149: 65 -72, 1975. The final combined cell product had 15.0 units of PAL / gram of paste at 27 grams of paste / liter of average cell yield (405 µl PAL / liter).
Voorbeeld VIII.Example VIII.
Ammonium Cinnamaat sübstraat-oplossing werd bereid door de volgende algemene procedure. Kaneelzuur werd toegevoegd aan 28 %'s ammonium-hydroxyde totdat, het was opgelost. Water en zuur werden daarna toegevoegd 30 om het substraatvolume respectievelijk de pH in te stellen. De kaneel-zuur-concentratie, de ammoniak-concentratie en de pH (hoeveelheid toegevoegd zuur) zullen in de volgende voorbeelden variëren; daardoor zullen ook de geproduceerde hoeveelheden ammoniumzout variëren.Ammonium Cinnamate Substrate Solution was prepared by the following general procedure. Cinnamic acid was added to 28% ammonium hydroxide until dissolved. Water and acid were then added to adjust the substrate volume and pH, respectively. The cinnamic acid concentration, the ammonia concentration and the pH (amount of acid added) will vary in the following examples; therefore the quantities of ammonium salt produced will also vary.
Voorbeeld IX.Example IX.
35 De invloed van hoge concentraties van halogeen op PAL werd onderzocht door verschillende zuren voor het verlagen van de pH van substraatoplossingen te gebruiken. Twee substraten werden bereid met de -7- algemene procedure volgens Voorbeeld VIII (60 mM CA; 7,5 M NH^; pH 10/0). De pH van oplossing A werd ingesteld met waterstof chloride en van oplossing LB met zwavelzuur. R. rubra cellen, gegroeid op de in Voorbeeld IV vermelde wijze, werden geplaatst in van watermantel 5 voorziene geroerde bekers op 30°C. Op bepaalde tijden werden monsters genomen en geanalyseerd op L-fenylalanine door zowel dunnelaag chromato-grafie als een L-aminozuuroxidase enzymatische analyse toe te passen. Substraatoplossing A (die ammoniumchloride bevatte) bleek inhibitie van het PAL-enzym te geven. Substraatoplossing B cellen gaven 10 keer 10 zoveel L-fenylalanine (na 24 uur reactietijd) dan substraatoplossing A cellen.The influence of high concentrations of halogen on PAL was investigated by using different acids to lower the pH of substrate solutions. Two substrates were prepared by the -7- general procedure of Example VIII (60 mM CA; 7.5 M NH4; pH 10/0). The pH of solution A was adjusted with hydrogen chloride and solution LB with sulfuric acid. R. rubra cells, grown in the manner described in Example IV, were placed in water jacketed stirred beakers at 30 ° C. Samples were taken at certain times and analyzed for L-phenylalanine using both thin layer chromatography and an L-amino acid oxidase enzymatic analysis. Substrate solution A (containing ammonium chloride) was found to inhibit the PAL enzyme. Substrate solution B cells gave 10 times as much L-phenylalanine (after 24 hours reaction time) as substrate solution A cells.
Voorbeeld X.Example X.
De algemene procedure van Voorbeeld IX werd herhaald, waarbij fosforzuur werd vergeleken met zwavelzuur. De R. rubra cellen in het 15 substraat waarvan de pH met fosforzuur was ingesteld, gaven 90 % van het L-fenylalanine dat door het met zwavelzuur ingestelde substraat werd geleverd.The general procedure of Example IX was repeated, comparing phosphoric acid with sulfuric acid. The R. rubra cells in the substrate whose pH was adjusted with phosphoric acid gave 90% of the L-phenylalanine supplied by the substrate adjusted with sulfuric acid.
Voorbeeld XI.Example XI.
De algemene procedure van Voorbeeld IX werd gevolgd waarbij 20 azijnzuur werd vergeleken met zwavelzuur. De in de reactors geproduceerde hoeveelheid L-fenylalanine was gelijk.The general procedure of Example IX was followed comparing acetic acid with sulfuric acid. The amount of L-phenylalanine produced in the reactors was the same.
Voorbeeld XII.Example XII.
Men bereidde cellen volgens de algemene procedure van Voorbeeld VI. Deze cellen werden gebruikt om de . hernieuwde bruikbaarheid (sta-25 biliteit) van hele cellen te bestuderen. Drie substraten werden bereid, 60 mM t-kaneelzuur, 7,5 M ammoniak, waarbij de pH met zwavelzuur werd verlaagd tot respectievelijk 10,0, 9,0 en 8,0. Cellen (4,5 gram 3 cel pasta) werden in elk substraat (45 cm ) geplaatst gedurende 16 uur bij 30°C. De L-fenylalanine-concentratie werd door L-aminozuur-30 oxidase-analyse en door dunnelaag chromatografie vastgesteld. De cellen werden gecentrifugeerd, gewassen en gedurende 16 uren in een vers substraat geplaatst. De resultaten zijn in onderstaande tabel vermeld.Cells were prepared according to the general procedure of Example VI. These cells were used to determine the. to study renewability (stability) of whole cells. Three substrates were prepared, 60 mM t-cinnamic acid, 7.5 M ammonia, with the pH lowered with sulfuric acid to 10.0, 9.0 and 8.0, respectively. Cells (4.5 grams of 3 cell paste) were placed in each substrate (45 cm) for 16 hours at 30 ° C. The L-phenylalanine concentration was determined by L-amino acid oxidase analysis and by thin layer chromatography. The cells were centrifuged, washed and placed in a fresh substrate for 16 hours. The results are shown in the table below.
• ♦ -8-• ♦ -8-
TABELTABLE
pH Run I Run II % werkzaamheid- _mg/ml L-PHE_mg/ml L-PHE_behoud_ 8 0,22 0,12 55 5 9 0,95 0,78 82 10 2,02 0,43 21pH Run I Run II% efficacy - mg / ml L-PHE_mg / ml L-PHE_contain_ 8 0.22 0.12 55 5 9 0.95 0.78 82 10 2.02 0.43 21
De resultaten tonen dat hoewel een pH 10,0 een 2 keer zo hoge aanvankelijke werkzaamheid gaf dan een pH van 9,0, na een run de 10 cellen met pH 9,0 een 163 % hogere werkzaamheid hadden dan pH 10,0. Voorbeeld XIII.The results show that although a pH 10.0 gave a 2 times higher initial activity than a pH of 9.0, after a run the 10 cells with pH 9.0 had a 163% higher activity than pH 10.0. Example XIII.
Een stabiliteitsonderzoek van 2 weken werd uitgevoerd zoals in Voorbeeld XII. De pH's van de reactoren waren echter 8,75, 9,00 en 9,25 en de ammoniakconcentratie was 5,5 M. De 14 dagen durende proef 15 werd uitgevoerd met 6 opvolgende ladingsgewijze analyses van vrije R. rubra cellen. De resultaten staan in de volgende tabel.A 2 week stability study was performed as in Example XII. However, the pH of the reactors was 8.75, 9.00 and 9.25 and the ammonia concentration was 5.5 M. The 14 day Run 15 was performed with 6 subsequent batch analyzes of free R. rubra cells. The results are shown in the following table.
TABELTABLE
mg L-fenylalanine geproduceerd/ 2q uur/gram droog gewicht cellen (% van aanvankelijke werkzaamheid behouden)_ dagen bij _Reactie pH______ aangegeven pH 8,75 9,00 9,25 1 5,9 5,7 5,7 25 7 3,6 3,8 4,2 (61) (67) (74) 14 3,5 3,5 4,0 (59) (61) (70)mg L-phenylalanine produced / 2q hours / gram dry weight cells (% of initial activity retained) _ days at _Reaction pH______ indicated pH 8.75 9.00 9.25 1 5.9 5.7 5.7 25 7 3, 6 3.8 4.2 (61) (67) (74) 14 3.5 3.5 4.0 (59) (61) (70)
De resultaten tonen dat de juiste condities hernieuwd gebruik 30 van PAL voor het bereiden van L-fenylalanine mogelijk kunnen maken en dat de niveaus van werkzaamheid-behoud voor vrije cellen hoog zijn. Voorbeeld XIV.The results show that the proper conditions can allow re-use of PAL to prepare L-phenylalanine and that the levels of efficacy retention for free cells are high. Example XIV.
De celpasta van Voorbeeld VII werd geïmmobiliseerd door de algemene procedure volgens het Amerikaanse octrooiaanvrage 400.141. Subtraat 35 (80 mM? 4,8 M NH^; pH 9,23) werd stroomopwaarts door een kolom gepompt, die gepakt was met geïmmobiliseerde R. rubra cellen. De stroomsnelheden i -9- varieerden op 0,10, 0,25 en 0,50 SV*1 ^ bij 22°C en op 0,25 en 0,50 SV^ ^ bij 28°C. Het effluent werd getest op L-fenylalanine. De resultaten staan in de volgende tabel.The cell paste of Example VII was immobilized by the general procedure of U.S. Patent Application 400,141. Substrate 35 (80 mM? 4.8 M NH4; pH 9.23) was pumped upstream through a column packed with immobilized R. rubra cells. The flow rates 99- varied at 0.10, 0.25, and 0.50 SV * 1 ^ at 22 ° C and at 0.25 and 0.50 SV * ^ at 28 ° C. The effluent was tested for L-phenylalanine. The results are shown in the following table.
^ Temp stroom L-PHE Productiviteit^ Temp flow L-PHE Productivity
Cc) (SVh_1) geproduceerd ( g/l/hr) 0,10 5,4 0,54 10 22 0,25 2,7 0,68 0,50 2,1 1,05 0,25 3,8 0,95 15 28 0,50 2,8 1,40Cc) (SVh_1) produced (g / l / hr) 0.10 5.4 0.54 10 22 0.25 2.7 0.68 0.50 2.1 1.05 0.25 3.8 0, 95 15 28 0.50 2.8 1.40
Bij 0,1 SV*1-* werd een 40 % omzetting van substraat waargenomen, waarbij 5,4 gram L-fenylalanine/liter bij 22°C werd geproduceerd.At 0.1 SV * 1- *, a 40% conversion of substrate was observed, producing 5.4 grams of L-phenylalanine / liter at 22 ° C.
Voorbeeld XV.Example XV.
20 Men volgde de kweek- en i.mmobilisatie-conditles van Voorbeeld XIV. Een kolom van geïmmobiliseerde R. rubra cellen die PAL bevatten, werd gebruikt om de halfwaardetijd van de produktiviteit van de kolomThe culture and immobilization conditions of Example XIV were followed. A column of immobilized R. rubra cells containing PAL was used to determine the half-life of the column's productivity
onder bepaalde omstandigheden vast te stellen. Het substraaat was 75 mMunder certain circumstances. The substrate was 75 mM
CA; 4,5 Μ NH ; pH 9,25 en werd bij 23°C continu gebruikt bij een stroom- ïi~l 25 snelheid van 0,25 SV .De halfwaardetijd van de produktiviteit bleek 41 dagen te zijn ( zie figuur 1). Deze test toont dat geïmmobiliseerd PAL kan worden gebruikt over een lange tijdsperiode waarin continu L-fenylalanine wordt geproduceerd.CA; 4.5 Μ NH; pH 9.25 and was used continuously at 23 ° C at a flow rate of 0.25 SV. The half-life of productivity was found to be 41 days (see Figure 1). This test shows that immobilized PAL can be used over a long period of time in which L-phenylalanine is continuously produced.
Voorbeeld XVIa 30 Er werd een fermentatiemedium bereid als in Voorbeeld V en ge bruikt om R.. rubra te groeien in een 10 liter fermentor. Het entmate-riaal voor de fermentor werd bereid als in Voorbeeld III. Monsters van cellen werden periodiek uit de fermentor geoogst, De cellen werden geanalyseerd op PAL werkzaamheid om de optimale oogsttijd vast te stellen. 35 Gevonden werd dat binnen 6 uur na het optreden van een piekwerkzaamheid, minder dan 50 % van de piekwerkzaamheid behouden bleef. Ook viel op dat alle D, L-fenylalanine voor de piekwerkzaamheid uit het medium was opgeraakt.Example XVIa A fermentation medium was prepared as in Example V and used to grow R. rubra in a 10 liter fermentor. The inoculum for the fermentor was prepared as in Example III. Samples of cells were harvested periodically from the fermentor. The cells were analyzed for PAL activity to determine the optimal harvest time. It was found that within 6 hours of the peak activity occurring, less than 50% of the peak activity was retained. It was also noted that all D, L-phenylalanine had run out of the medium before peak activity.
. _ — % k -10- — r«v i. _ -% k -10- - r «v i
Voorbeeld XVIb.Example XVIb.
Voorbeeld XVIa werd herhaald. Vlak nadat de piekwerkzaamheid optrad, werd echter D, L-fenylalanine (5 g/10 liter) in de fermentor toegevoerd. Het eerste uur trad een daling in PAL werkzaamheid op als 5 in het geval van XVIa. De PAL werkzaamheid stabiliseerde echter in de volgende drie uren voordat geoogst werd (zie fig. 2) .Example XVIa was repeated. However, just after peak activity occurred, D, L-phenylalanine (5 g / 10 liters) was fed into the fermentor. In the first hour, a decrease in PAL efficacy occurred as 5 in the case of XVIa. However, the PAL activity stabilized in the next three hours before harvesting (see Figure 2).
Voorbeeld XVII.Example XVII.
Cellen werden bereid en geïmmobiliseerd volgens de procedure vanCells were prepared and immobilized according to the procedure of
Voorbeeld XIV. Het toegepaste substraat was echter 75 mM CA; 4,5 M NH_; o h-l ^ 10 pH 9,43 bij 23 C en een stroomsnelheid van Sv = 0,50. De kolom bleek 1,9 gram L-fenylalanine/liter bedvolume drager/uur te produceren. De concentratie van L-fenylalanine in het effluent bedroeg 3,8 gram/liter.Example XIV. However, the substrate used was 75 mM CA; 4.5 M NH_; o h -1 ^ 10 pH 9.43 at 23 ° C and a flow rate of Sv = 0.50. The column was found to produce 1.9 grams of L-phenylalanine / liter bed volume carrier / hour. The concentration of L-phenylalanine in the effluent was 3.8 grams / liter.
Voorbeeld XVIII.Example XVIII.
Cellen werden bereid en geïmmobiliseerd volgens de algemene proce-15 dure van Voorbeeld XIV. De geïmmobiliseerde cellen werden in een kolom gepakt en 352 cm substraat (75 mH CA; 4,5 Μ NH ; pH 9,4) werden met 1,0 SV door de kolom gerecirculeerd. Monsters van de samengevoegde substraten werden na bepaalde tijdsintervallen genomen en de L-fenylala-nine-concentratie werd bepaald door L-amino oxidase enzymatische analyse 20 en dunnelaagchromatografie. De resultaten staan in de onderstaande tabel.Cells were prepared and immobilized according to the general procedure of Example XIV. The immobilized cells were packed in a column and 352 cm substrate (75 mH CA; 4.5 µN NH; pH 9.4) were recycled through the column with 1.0 SV. Samples of the pooled substrates were taken after certain time intervals and the L-phenylalanine concentration was determined by L-amino oxidase enzymatic analysis and thin layer chromatography. The results are shown in the table below.
recirculatietijd L-fenylalanine % omzetting (uur) (gram/liter) 7 2,8 23 21.5 4,6 37 25 24 5,0 40 44.5 6,8 55recirculation time L-phenylalanine% conversion (hours) (grams / liter) 7 2.8 23 21.5 4.6 37 25 24 5.0 40 44.5 6.8 55
Dit voorbeeld toont dat onder de condities van de reactie, 30 L-fenylalanine in hoge concentratie en met hoge omzettingssnelheid kan worden bereid onder toepassing van geïmmobiliseerde cellen die PAL bevatten.This example shows that under the conditions of the reaction, 30 L-phenylalanine can be prepared in high concentration and at high conversion rate using immobilized cells containing PAL.
-M , ·., · r- *-» X *·-M, ·., · R- * - »X * ·
Claims (19)
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US43218282A | 1982-10-01 | 1982-10-01 | |
| US43218282 | 1982-10-01 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL8303369A true NL8303369A (en) | 1984-05-01 |
Family
ID=23715088
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NL8303369A NL8303369A (en) | 1982-10-01 | 1983-09-30 | PROCESS FOR PREPARING L-PHENYLALANINE BY RE-USING PHENYLALANINE AMMONIAKLYASE. |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5991890A (en) |
| AU (1) | AU1864883A (en) |
| BE (2) | BE897889A (en) |
| BR (1) | BR8305366A (en) |
| CA (1) | CA1206435A (en) |
| CH (1) | CH658670A5 (en) |
| DD (1) | DD217822A5 (en) |
| DE (1) | DE3333246A1 (en) |
| DK (1) | DK452783A (en) |
| ES (1) | ES526165A1 (en) |
| FI (1) | FI833552A (en) |
| FR (1) | FR2533941B1 (en) |
| GB (1) | GB2127821B (en) |
| GR (1) | GR79053B (en) |
| IL (1) | IL69672A0 (en) |
| IT (1) | IT8368017A0 (en) |
| LU (1) | LU85019A1 (en) |
| NL (1) | NL8303369A (en) |
| PL (1) | PL243972A1 (en) |
| SE (1) | SE8305151L (en) |
| ZA (1) | ZA836626B (en) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4600692A (en) * | 1983-02-10 | 1986-07-15 | Purification Engineering, Inc. | Immobilized cells for preparing phenylalanine |
| BR8502781A (en) * | 1984-06-11 | 1986-02-18 | Genex Corp | HIGH-PERFORMANCE PRODUCTION OF L-PHENYLALANINE |
| JPS61247395A (en) * | 1985-04-23 | 1986-11-04 | Mitsui Toatsu Chem Inc | Production of l-phenulalanine |
| JP2931623B2 (en) * | 1990-04-20 | 1999-08-09 | 三井化学株式会社 | Method for producing L-phenylalanine |
| JPH0739815Y2 (en) * | 1991-06-14 | 1995-09-13 | 東洋製罐株式会社 | Arched cap that can be opened and closed with one touch |
| US5981239A (en) * | 1997-09-24 | 1999-11-09 | Great Lakes Chemical Corp. | Synthesis of optically active phenylalanine analogs using Rhodotorula graminis |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5015955A (en) * | 1973-06-15 | 1975-02-20 | ||
| ES433764A1 (en) * | 1974-02-22 | 1976-12-01 | Pfizer | Production of l-phenylalanine |
| JPS5922516B2 (en) * | 1977-01-31 | 1984-05-26 | 田辺製薬株式会社 | Method for producing L-phenylalanine |
| JPS5626197A (en) * | 1979-08-09 | 1981-03-13 | Tanabe Seiyaku Co Ltd | Preparation of l-phenylalanine |
| US4434228A (en) * | 1982-04-20 | 1984-02-28 | Genex Corporation | Immobilization of biological materials in condensed polyalkyleneimine polymers |
| US4504582A (en) * | 1982-07-20 | 1985-03-12 | Genex Corporation | Vermiculite as a carrier support for immobilized biological materials |
-
1983
- 1983-08-29 CA CA000435596A patent/CA1206435A/en not_active Expired
- 1983-09-02 AU AU18648/83A patent/AU1864883A/en not_active Abandoned
- 1983-09-06 ZA ZA836626A patent/ZA836626B/en unknown
- 1983-09-06 IL IL69672A patent/IL69672A0/en unknown
- 1983-09-14 DE DE19833333246 patent/DE3333246A1/en not_active Withdrawn
- 1983-09-15 GR GR72447A patent/GR79053B/el unknown
- 1983-09-23 SE SE8305151A patent/SE8305151L/en not_active Application Discontinuation
- 1983-09-26 FR FR8315229A patent/FR2533941B1/en not_active Expired
- 1983-09-27 GB GB08325797A patent/GB2127821B/en not_active Expired
- 1983-09-28 LU LU85019A patent/LU85019A1/en unknown
- 1983-09-29 BR BR8305366A patent/BR8305366A/en unknown
- 1983-09-30 FI FI833552A patent/FI833552A/en not_active Application Discontinuation
- 1983-09-30 DK DK452783A patent/DK452783A/en not_active Application Discontinuation
- 1983-09-30 IT IT8368017A patent/IT8368017A0/en unknown
- 1983-09-30 DD DD83255308A patent/DD217822A5/en unknown
- 1983-09-30 NL NL8303369A patent/NL8303369A/en not_active Application Discontinuation
- 1983-09-30 ES ES526165A patent/ES526165A1/en not_active Expired
- 1983-09-30 CH CH5328/83A patent/CH658670A5/en not_active IP Right Cessation
- 1983-09-30 PL PL24397283A patent/PL243972A1/en unknown
- 1983-09-30 BE BE0/211627A patent/BE897889A/en not_active IP Right Cessation
- 1983-10-01 JP JP58184356A patent/JPS5991890A/en active Pending
-
1985
- 1985-03-14 BE BE0/214649A patent/BE901938R/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL243972A1 (en) | 1984-07-30 |
| SE8305151D0 (en) | 1983-09-23 |
| FR2533941A1 (en) | 1984-04-06 |
| GR79053B (en) | 1984-10-02 |
| BE897889A (en) | 1984-01-16 |
| DE3333246A1 (en) | 1984-04-05 |
| DK452783A (en) | 1984-04-02 |
| BR8305366A (en) | 1984-05-08 |
| CA1206435A (en) | 1986-06-24 |
| BE901938R (en) | 1985-07-01 |
| ZA836626B (en) | 1984-05-30 |
| FR2533941B1 (en) | 1988-02-05 |
| IL69672A0 (en) | 1983-12-30 |
| GB2127821A (en) | 1984-04-18 |
| GB8325797D0 (en) | 1983-10-26 |
| DD217822A5 (en) | 1985-01-23 |
| CH658670A5 (en) | 1986-11-28 |
| LU85019A1 (en) | 1984-03-16 |
| GB2127821B (en) | 1986-04-30 |
| FI833552A0 (en) | 1983-09-30 |
| JPS5991890A (en) | 1984-05-26 |
| FI833552A (en) | 1984-04-02 |
| DK452783D0 (en) | 1983-09-30 |
| AU1864883A (en) | 1984-04-05 |
| ES526165A1 (en) | 1985-05-01 |
| SE8305151L (en) | 1984-04-02 |
| IT8368017A0 (en) | 1983-09-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA1139697A (en) | PROCESS FOR THE CONTINUOUS ENZYMATIC CONVERSION OF WATER-SOLUBLE AND .alpha.-KETOCARBOXYLIC ACIDS INTO THE CORRESPONDING AMINO ACIDS | |
| Chibata et al. | Continuous production of L-malic acid by immobilized cells | |
| US5541090A (en) | Process for production of L-aspartic acid | |
| US4584269A (en) | Method for stabilizing the enzymatic activity of phenylalanine ammonia lyase during L-phenylalanine production | |
| FR2536415A1 (en) | PROCESS FOR THE ENZYMATIC SYNTHESIS OF L-SERINE | |
| NL8303369A (en) | PROCESS FOR PREPARING L-PHENYLALANINE BY RE-USING PHENYLALANINE AMMONIAKLYASE. | |
| EP0206904B1 (en) | Process for the enzymatic production of l-alpha amino acids from alpha keto acids | |
| JPS5922516B2 (en) | Method for producing L-phenylalanine | |
| Millbank | Demonstration of transaminase systems in the alga Chlorella | |
| US3787288A (en) | Method for preparing alpha-aminobenzylpenicillin | |
| Yamanaka et al. | Efficient preparation of optically active p-trimethylsilylphenylalanine by using cell-free extract of Blastobacter sp. A17p-4 | |
| JPH09154589A (en) | Production of erythritol | |
| US6709847B2 (en) | Immobilized euphorbiaceae, poaceae or olacaeae s-hydroxynitrile lyase | |
| JP2721536B2 (en) | Method for obtaining D-β-hydroxy amino acid | |
| Chibata et al. | Applications of immobilized enzymes and immobilized microbial cells for L-amino acid production | |
| Nagasawa et al. | Enzymatic synthesis of D-cysteine by 3-chloro-D-alanine resistant Pseudomonas putida CR 1-1 | |
| JPS6112297A (en) | Production of l-phenylalanine | |
| GB2108128A (en) | Production of aspartase | |
| JP4544695B2 (en) | Microbial production of glycine | |
| Takamatsu et al. | Production of L‐alanine | |
| JP4647059B2 (en) | Microbiological production method that prevents coloring of glycine | |
| JPH047677B2 (en) | ||
| KR970010133B1 (en) | PROCESS FOR PREPARING D-Ñß-AMINO ACIDS | |
| JP2674076B2 (en) | Method for producing D-α-amino acid | |
| JP2931623B2 (en) | Method for producing L-phenylalanine |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A85 | Still pending on 85-01-01 | ||
| BV | The patent application has lapsed |