NL8002391A

NL8002391A - Preparaat en test-strook voor de colorimetrische analyse van ascorbinezuur.

Info

Publication number: NL8002391A
Application number: NL8002391A
Authority: NL
Original assignee: Shionogi & Co
Priority date: 1979-04-24
Filing date: 1980-04-24
Publication date: 1980-10-28
Also published as: JPS6257946B2; GB2049928A; US4303409A; SE8002970L; IT1129080B; FR2455283B1; DK173980A; DE3015877C2; FR2455283A1; AU5768780A; DE3015877A1; JPS55142249A; IT8067648A0; GB2049928B; CA1139646A; AU532839B2; CH645723A5

Description

V

\ *

Br/O/lh/174

Preparaat en test-strook voor de colorimetrische analyse van ascorbinezuur.

De uitvinding heeft betrekking op een preparaat en test-strook voor het colorimetrisch aantonen., en bepalen van ascorbinezuur in een waterige vloeistof, vooral in lichaamsvloeistof.

Ascorbinezuur (in het vervolg met VC.aante duiden) zit vooral in voedingsmiddel, voeders en dranken, vooral de verrijkte., en in pillen, als bijvoeding, in betrekkelijk hoge concentraties. Bij innemen daarvan komt. het dan eveneens in lichaamsweefsels, bloed en uitwerpselen van mens of dier 10 in eveneens hoge concentraties voor.

Bij het aantonen of bepalen van een andere stof in de lichaamsvloeistof, vooral in urine of bloed, kunnen extra fouten ontstaan bij mede aanwezigheid van VC door het grote reduktievermogen daarvan.

15 Bij bijvoorbeeld een kwantitatieve bepaling van glucose, galactose, cholesterol of urinezuur in lichaamsvloeistof met een systeem van een enzyme met een oxiderende werking1'voor de desbetreffende stof, peroxidase en een rédox chromogeen of bij de kwantitatie bepaling van geringe 20 hoeveelheden bloed in urine met een systeem van een peroxidase en een chromogeen kunnen negatieve afwijkingen van de werkelijke hoeveelheid optreden, die groter zijn naar mate de concentratie van de mede aanwezige VC groter is.

Daarentegen zijn de afwijkingen positief bij de 25 kwantitatieve bepaling van glucose, urinezuur en dergelijke volgens eën werkwijze, die op reduktie berust, welke afwijkingen toenemen met het gehalte aan VC in het monster.

Totnutoe is voor de bepaling van VC de colorimetrische titratie veel toegepast. Zulk een werkwijze is 30 in de clinische chemie echter als niet-praktisch te beschouwen.

Bij clinische analyses dient de mede aanwezige 8 0 02391 v

V

-2- VC tegelijk met of bij voorkeur voor voornoemde te analyseren stoffen aangetoond en bepaald te worden. De werkwijze voor het bepalen van laatstgenoemde stoffen dient.aangepast te worden aan de uitkomst van de VC-bepaling enwel zodanig, 5 dat de aanwezigheid van VC de bepaling niet of zo min mogelijk beïnvloedt.

Met name is het streven naar een zo eenvoudig mogelijke werkwijze, die het mogelijk maakt in korte tijd nauwkeurige uitkomsten te verschaffen, waardoor de bepaling 10 van de stof zelf en de ijking ten opzichte van het VC-ge-halte tegelijkertijd kunnen geschieden.

Een gewenste en eenvoudige bepalingswijze is beschreven in de Japanse octrooiaanvrage 712/78.. De werkwijze is hierop gebaseerd, dat fosformolybdaat kan reageren met 15 een stof met een re duk tie vermogen onder vorming, van molybdeen blauw (molybdeenoxide}, welke werkwijze wordt toegepast voor de kwantitatieve bepaling van geringe hoeveelheden anorganische fosfor. Echter voldoet ook deze werkwijze niet vanwege het beperkte gebied van de VC-concentratie, met name slechts. 20 0-40 mg/dl, waarbinnen de bepaling nog nauwkeurig is en vanwege de slechte stabiliteit van de kleurontwikkeling.

De uitvinding verschaft dan ook een preparaat en testustrook voor het op eenvoudige wijze en in korte tijd colorimetrisch. bepalen van VC in een waterige vloeistof, 25 vooral lichaamsvloeistof, voor een groot concentratiegebied ter verschaffing van voldoende nauwkeurige uitkomsten.

Ook verschaft de uitvinding een werkwijze voor het korrigeren of ijken van bepalingsuitkomsten van een desbetreffende stof ten opzichte van de VC-concentratie.

3Q Het preparaat van de uitvinding voor het colori metrisch bepalen van ascorbinezuur bevat een complex van een cheleringsmiddel met een meerwaardig ion in de hogere valentietoestand en een indicator voor het metaalion in de lagere valentietoestand? en een buffer voor het handhaven 35 van een pH 3-6,5.

Een proefstrook voor het colorimetrisch bepalen van ascorbinezuur bevat een absorberend lichaam met een complex van een cheleringsmiddel met een meerwaardig metaal- 8002 3 91 -3- .

+- ion in de hogere valentietoestand; een indicator voor het metaalion in de lagere valentietoestand; een buffer; een kleurstof voor het instellen van de achtergrondkleur en een dispersiemidde1.

5 Een gewenste uiteindelijke test-strook van de uitvinding kan ter vergemakkelijking van het korrlgeren, of calibreren bestaan uit een strook met daarop evenwijdig aan elkaar een eerste stukje van het geprepareerde absorberende lichaam en een tweede stukje voor het aantonen en bepalen 10 van de stof in kwestie, zodat de van het tweede stukje verkregen uitkomst kan worden afgelezen en.geintepreteerd door vergelijken met de uitkomst van het eerste stukje.

Volgens een gewenste uitvoeringsvorm van de uitvinding kan het meerwaardige metaal van het complex bijvoor-15 beeld bestaan uit ijzer, koper, cobalt of nikkel, met voorkeur voor ijzer en koper. Voorbeelden van zouten van metalen in geoxideerde toestand (hogere valentie) zijn ferriechloride, -aminiumoxalaat, -citraat, -ammoniumcitraat, -ammoniumnitraat, -bromide, -ammoniumsulfaat, cuprieacetaat en dergelijke.

20 Voorbeelden' van cheleringsmiddelen voor de vorming van complexen met de meerwaardige metaalionen zijn ethyleen-diaminetetraazijnzuur (EDTA), trans-l,2-cyclohexaandiamine-N,N,N',ïf'-tetraazijnzuur (CyHDTA), diethyleentriamine-N^^1, N",N'"-pentaazijnzuur (DTPA) , trieth:£leentetramine-N,N,N, ,N", 25 N'",N""-hexaazijnzuur (TTHA) en de alkalimetaalzouten daarvan. Als organische metaalindicatoren gaat de voorkeur gewoonlijk uit naar organische middelen voor de N,N-coordina-tie bij de colorimetrische bepaling van het metaal-ion, zoals o-fenanthroline, 4,7-difenyl-l,10-fenanthroline, 2,2'-30 bipyridine (egoC-dipyridyl), cuproine, neocupróine, 2,2’,2"-tripyridine en dergelijke. Ook kunnen andere organische middelen gebruikt worden, waarvan het spectrum bij aanwezigheid van het meerwaardige metaalion in de lagere, waardigheid een aantoonbare absorptieband vertoont. Valt de absorptieband 35 buiten het zichtbare gebied dan kan de bepaling met UV- of IR-straling geschieden.

Het absorberende lichaam voor de test-strook van de uitvinding kan bijvoorbeeld bestaan uit filterpapier, 800 23 94 -4- ¥ doek, niet-geweven stof, Vilt, gesinterd poreus lichaam van glas of keramisch poeder, dat verder absorbent-deeltjes bevat, die gewoonlijk voor de dunne laag chromatografie worden gebruikt.

5 De zouten van de metalen in geoxideerde .toestand zijn bij voorkeur in het preparaat aanwezig in' een concentratie van 0,01-0,1 M, met meer voorkeur voor 0,05-0,08 M.

Het .preparaat bevat het cheleringsmiddel in een grotere molconcentratie dan het metaalion. Bij afwezigheid 10 van het cheleringsmiddel is de reaktie voor VC veel minder specifiek, gepaardgaande met een geringere bestindheid tegen straling. '

Als buffer kan een zout van een organisch zuur met een sterk anorganische base gebruikt worden enwel in een 15 voldoende concentratie voor het bewerkstelligen van een buffereffekt. Hoewel in vorenstaande als de. pH-waarde voor de buffer 3-6,5 is genoemd gaat de voorkeur uit. naar een buffer van pH 4-6 voor het geheél terugdringen van de nadelige invloed van reducerende stoffen, zoals urinezuur, cysteine, 20 sulfieten, silicylaten, glutathion, creatine, creatinine en dergelijke.

Als kleurstof voor het instellen van de achter-grondkleur kunnen voedselkleurstoffen, zoals geel no. 4 of blauw no. 1; of geschikte koperzouten voor de test-strook 25 van de uitvinding gebruikt worden, al naar de gewenste helderheid en gevoeligheid van de detectie.

Als dispersiemiddel kunnen bekende middelen gebruikt worden, zoals polyvinylpyrrolidon (PVP), hydroxy-propylcellulose (HPC) en polyethyleenglycol (PEGl, vooral 30 indien het preparaat zich in droge toestand in de teststrook bevindt. Ook kunnen voornoemde middelen dienst doen als een stabilisator voor de andere ingrediënten en voor het handhaven van de gelijkmatigheid van de ontwikkelde kleur, waarvoor de voorkeur vooral uitgaat naar PVP.

35 De uitvinding zal verder worden verduidelijkt aan de hand van de' volgende niet beperkende voorbeelden.

800 23 91 -5- A* * *

Voorbeeld 1

Filterpapier (Toyo: no. 53) wordt met oplossing I geïmpregneerd; 90 minuten onder verminderde druk bij 45°C gedroogd; weer geïmpregneerd, doch. nu met oplossing II en dan 5 30 minuten onder verminderde druk bij 45°C gedroogd ter ver schaffing van een rol voor test-stroken.

Oplossing I

' CyHTA 2 g

Ferri-chloride 1,2 g 10 Na-citraat 5,5 g . Citroenzuur 1,3 g

Gedestilleerd water 57 ml

Voedselvloeistof blauw no. 1 15 (0,25 w/v %) 2,5 ml

Oplossing II

2,21-bipyridine 0,4 g · ' ' PVP of HPC 0,5 g

Ethanol 10 ml 20 Cyclohexanon 30 ml

De verkregen rol papier wordt bij een lage temperatuur 'in. een donkere kamer bewaard. Een klein stukje daarvan wordt aan een uiteinde van een kunststof-strook beves-h · 25 tigd ter verschaffing van een test-strookje.

* De waardering van de strookjes geschiedt door dompelen in monsters van VC-vrije urine van ogenschijnlijk gevonden vrijwilligers, waaraan verschillende hoeveelheden VC zijn toegevoegd, waarna de kleurontwikkeling op de kleine 30 stukjes na 60 seconden wordt nagegaan. De VC-concentraties en de resultaten van de proeven zijn als volgt: VC-concentratie (mg/dl) Kleur (H-V/C) 0 5 BG-7/6 5 7,5 BG-7/3 35 10 10 BG-6/2 ‘20 7,5 R-5/2 λΛΑΛ_λ. 40 5 R-5/4 800 23 91 go 2,5 R-4/5 -6- /De kleur is uitgedrukt in tint-helderheid/kleur volgens de kleurenstandaard van JIS Z-8721/1964 (van Nihon Kikaku Kyokai (Japan Institute voor Standardisatie)^.

Voorbeeld 2 5 Dezelfde kleurontwikkelingen als die van voorbeeld 1 zijn waargenomen na 30 seconden dopen van test-stroken, die op dezelfde wijze als in voorbeeld 1 zijn beschreven, doch met de volgende oplossing I:

Oplossing I

10 TTHA 2 g

Ferri-chloride 1,1 g

Na-citraat 4 g

Citroenzuur 0,2 g

Gedestilleerd water 42 ml 15 Voedselkleurstof blauw no. 1 (0,25 w/v %) 1,8 ml

Voorbeelden 3-5

Dezelfde kleurontwikkelingen als die in voorbeeld 2Q 1 zijn waargenomen bij 15 êeconden onderdompelen van teststroken, die met de volgende oplossing I zijn verkregen: Oplossing I Voorbeeld 3 Voorbeeld 4 Voorbeeld 5 DTPA - 2 g EDTA-2Na- - 3,5 g 3 g 25 Ferri-chloride 1,2 g

Ferri-axnmonium-oxalaat - 3 g

Ferri-citraat of ferri-ammonium-citraat - *- 2 g

Na-citraat 5,5 g 6g 5 g 30 Citroenzuur 1,2 g 6 g -

Gedestilleerd water 57 ml 95 ml 95 ml

Voedselkléurstof blauw no.l (0,25 w/v %) 2,5 ml 5 ml 5 ml 35 Voorbeelden 6-8

Op dezelfde wijze als in voorbeeld 1 worden proefstroken geprepareerd, doch met de volgende oplossingen I en

Il! 800 2 3 91 Λ -7-

Oplossing I Voorbeeld 6 Voorbeeld 7 Voorbeeld 8 EDTA-2Na 3 g 3 g 3 g

Ferri-ammonium-nitraat 3 g

Ferric-bromide - - *“ 2 g 5 Ferri-chloride - 2 g -

Na-citraat 6 g 5,8 g Hg

Citroenzuur 3 g 3 g 5 g

Gedestilleerd water 95 ml 95 ml 95 ml

Voedselkleurstof geel no.4 10 (1 w/v %) 2 ml 2 ml 2 ml

Gemeenschappelijke oplossing IX voor de.voorbeelden 6,7 en 8; 2,2'-bipyridine of o-fenanthroline 0,2 g (beide even nagenoeg dezelfde kleurontwikkeling) 15 PVP of HPC 0,25 g

Ethanol 20 ml

De klèurontwikkelingen op de proef-stroken na 15 seconden dopen' onder dezelfde omstandigheden als in voor-20 beeld 1 zijn als volgt: VC-concentratie (mg/dl) Kleur (H-V/C) 0 5 Y-9/6 “5 10 YR-8/8 10 5 YR-7/8 25 20 2,5 YR-7/10 40 10 R-6/12

Voorbeeld 9

Op dezelfde wijze als in voorbeeld.1 worden proef-30 stroken vervaardigd, waarbij echter oplossing.I de volgende samenstelling bezit:

Oplossing I

EDTA-2Na 3 g

Ferri-ammonium-sulfaat 711 g 35 f. -i. Na-citraat 6 g

Gedestilleerd water 95 ml

Voedselkleurstof blauw no.l 8 0 0 2 3 91 (0,25 w/v «) 5 mi -8- VC-concentratie (mg/dl) Kleur (H-V/C) 0 5 BG-7/6 5 7/5 BG-7/3 10 10 BG-6/2 5 20 7/5 BG-6/2 40 5 BG-5/4 80 2,5 BG-4/4 v De kleurontwikkeling na 10 seconden dopen in 10 het monster bij verschillende VC-concentraties zijn de bovenstaande.

Voorbeeld 10

Op dezelfde wijze als de voorbeelden 6,7 en 8 worden test-stroken verschaft, doch met de volgende oplos- 15 sing I:

Oplossing I

EDTA-2Na 4 g

Ferri-chloride 2 g

Na-citraat 6,3 g 2Q Citroenzuur 3 g

Cupri-acetaat (anhydride) 0,5 g

Gedestilleerd water 95 ml *· . De kleurontwikkelingen.op .de test-strook na 15 seconden dopen in het monster zijn als volgt: 25 VC-concentratie (mg/dl) Kleur (H-V/C).

0 10 GY-8/3 0,5 10 Y-7/3 1 10 YR-7/3 2 10 YR-7/2 30 5 5 YR-7/3 10 10 R-6/4 20 7,5 R-6/6

Voorbeeld 11 35 De werkwijze van voorbeeld 1 wordt gevolgd ter verschaffing van test-stroken uit de volgende oplossingen I en II met daaronder de kleurontwikkelingen.

800 23 91

V

-9-

Qplossing I

Cupri-acetaat (watervrij) 0,2 g EDTA-2Na 0,5 g

Gedestilleerd water 20 ml

5 Oplossing II

4,7-difenyl-l,l0-fenanthroline 0,2 g PVP of HPC 0,4 g

Ehtanol 20 ml

Kleur on twikke ling .1 (na 15 seconden in urine' 10 gedoopt): VC-concentratie (mg/dl) ’ Kleur (H-V/C) 0 5 BG-8/3 5 10 BY-7/3 10 5 GY-7/3 15 20 2,5 GY-7/3 40 7,5 GY-4/4

Kleurontwikkeling 2 (na 30 seconden dopen in serum, met Hyland, Q-PAK Serum I en VC in verschillende concentraties}: 20 VC-concentratie (mg/dl) Kleur (H-V/C) 0 7,5 GY-8/3 1 5 GY-7/4 " . 4 5 YR-7/3 10 . 7,5 R-6/6 25

Voorbeeld 12

De werkwijze is als die van voorbeeld 1, doch met de volgende oplossing I.

Oplossing I

30 EDTA-2Na 3 g

Ferri-chloride 2 g

Na-citraat 5,6 g

Citroenzuur 3 g

Gedestilleerd water 94 ml 35 Voedselkleuring blauw no. 1 (0,25 w/v %) 5 ml

Na 15 seconden dopen in de urinemonsters worden dezelfde kleurontwikkelingen verkrggnn als in voorbeeld 1.

800 2 3 91 -10-

Oplossing II

2,2'-bipyridine 0,4 g PVP 0,5 g

Cyclohexanon 27,5 ml 5 Ethanol 12,5 ml

Voorbeeld 13

De werkwijze van voorbeeld 12 wordt gevolgd, doch met de hieronder volgende oplossing I. De oplossing is vooral 10 geschikt voor het analyseren van serum-monsters. Speciale aandacht is besteed aan de kleurstofconcentratie .voor het instellen van de achtergrondkleur en de vloeistofeigenschap-pen. Onder het recept van oplossing I volgen de kleurontwikke-lingen bij verschillende VC-concentraties.

15 Oplossing I

EDTA-2Na 3 g

Ferri-chloride 2 g

Na-citraat 10 g

Gedestilleerd water 94 ml 20 Voedselkleuring blauw no; 1 (0,25 w/v %) Q,3 ml

Kleurontwikkeling (na 30 seconden dopen in serum): VC-conc’entratie (mg/dl) Kleur (H-V/C) 0 5 Y-8/4 25 0,5 IQ YR-8/3 1 7,5 YR-8/3 2 5 YR-8/4 5 10 R-7/6 10 7,5 R-6/8 30 Bij het nagaan van mogelijke negatieve invloeden van de mede aanwezigheid van andere geneesmiddelen is komen Vast te-staan, dat natriumfluoride, kaliumoxalaat, glutathion (in gereduceerde vorm), creatine, creatinine en pyruvine-zuur tot een concentratie van 100 mg/dl en urinezuur en 35 yitamine E in een concentratie van 5 mg/dl niet storend werken.

Bij toevoeging van cyteine in een hoeveelheid van 25 mg/dl echter wordt een kleurontwikkeling verkregen, 800 23 91 N.

-11- N, die overeenkomt met die bij een VC-concentratie van 0,5 mg/ dl.

Verge lij kings'voorbeeld

De werkwijze van voorbeeld wordt gevolgd/ doch 5 met onderstaande oplossing I, die geen óheleringsmiddel bevat.

Oplossing I

Ferri-chloride 1 g

Citroenzuur 1 g 10 Na-citraat 3 g

Gedestilleerd water 45 ml

Voedingskleuring blauw no. 1 (0,25 w/v %) 2,5 ml

Kleurontwikkeling (na 15 minuten dopen in urine1: 15 VC-concentratie (mg/dl) Kleur (H-V/C) 0 5 G-6/4 5 7,5 GY-4/2 10 . 5 Y-5/1 20 10 R-4/2 20 40 7,5 R-3/4

De verkregen test-stroken plegen bij veroudering te verbleken en kunnen..zelfs niet korte tijd bewaard worden.

Een kleurontwikkeling door silicaten wordt geconstateerd. Voorbeeld 14 25 (quantitatieve bepaling met een .vloeibaar prepa raat)..

Oplossing.I bevat per 100 ml 0,2 g ferri-chloride en 0,3 g ETDA-2Na, opgelost in een 0,3 M citraatbuffer (pH

5,51 en oplossing II 0,5 g 2,21-bipyridine in water, welke 30 oplossingen in het donker worden bewaard.

Voor de bepaling van het VC-gehalte worden aan een mengsel van 5 ml oplossing I en 2 ml oplossing II 0,1 of 1,Q ral verdund (1:10) urine en zoveel 0,3 IJ citraatbuffer (pE 5,5) toegevoegd tot een volume van ls ml wordt verkregen.

35 Het reaktiemengsel wordt 2 minuten of meer in een donkere kamer gehouden voor de spectrale meting bij 520 nm.

De verkregen curve met standaardmonsters blijkt tot een VC-concentratie van 110 mg/dl lineair te zijn en 800 23 91 -12- te voldoen aan de volgende betrekking Y = 0,0097 X - 0,0014, waarin X = VC-concentratie in iag/dl en Y = optische densiteit bij 520 ma.

5 De afwijkingscoefficient (cv) van de reproduceer baarheid van de kwantitatieve, bepaling bedraagt minder dan 1%.

'De negatieve invloeden van de andere stoffen in het monster uitgedrukt in de gevonden waarden, met name de 10 specificiteit van dit;, oplossing-systeem voor VC, zijn in tabel A samengevat.

.80 0 2 3 91 /*- * -13-

TABEL A

VC- concentratie (mq/dl)

Andere 5 . | 20 stoffen (mg/dl) Gemeten - Gevc^den Gemeten' Gevonden 1 ...... .....1 ' " — -1—-T-T-* - ...........

I 0 5-0 100.0 20.0 100.0 p-Amino- , benzcesuur i 100 5*0 ‘ 100.0 20.0 100.0

Benzaezuur 1 100 5-0 100.0 20.0 100.0

Creatine 100 5*0 100.0 20.0 100.0

Creatinine J 200 5-0 100.0 20.0 100.0 .

Cysteine 100 5·1 102.0 20.3 101.5

Cysteine

Methyl I 100 5*1 102.0 20.2 101.0

Ester I

»

Gentisdne j goo 5.1 102.0 20.0 100.0 zuur

Glucose ’ 2000 5-0 100.0 20.0 100.0

Glutathion.

(gereduceerd), 100 5-0 100.0 20.0 100.0 K-oxalaat ' 100 5-0 100.0 20.0 100.0

Pyruvdnezuur j 20 5.1 102.0 20.1 100.5 1 1

Salicyli zuuij* -j^q 5.Q 100.0 20.0 100.0

1 I

Ha-fluoride j 100 k. 9 98.0 20.0 100.0

Ureum J 1000· k-9 98.0 20.0 100.0

Ofeuiüzuur « 100 5-0 100.0 20.1 100.5 800 23 91

Claims

1. Preparaat voor de coloriraetrische analyse van ascorbinezuur, gekenmerkt door de aanwezigheid daarin van een complex van een cheleringsmiddel met een meerwaardig metaal-ion in de hogere valentietoestand; een indicator voor het 5 metaal-ion in de lagere valentietoestand; en een buffer voor het handhaven van een pH 3-6,5.

2. Preparaat volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat het cheleringsmiddel bestaat uit ethy- · leendiaminetetraazijnzuur, trans-l,2-cyclohexaandiamine-N,N, 10 N',Ν'-tetraazijnzuur, diethyleentriamine-Ν,Ν,Ν',N",N'"-pentaazijnzuur, triethyleentetramine-Ν,Ν,Ν',N",N'",N""-hexaazijnzuur of een alkalizout daarvan.

3. Preparaat volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat het meerwaardige metaal bestaat uit 15 ijzer, koper, cobalt of nikkel.

4. Preparaat volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat de indicator bestaat uit o-fenanthro-line, 4,7-difenyl-l/lO-fenanthroline, 2,21-bipyridine, cuproine, neocuproine of 2,21 ,-2”-terpyridine.

5. Test-strook voor de colorimetrische analyse van ascorbinezuur, gekenmerkt door een absorberend lichaam met een»· complex van een cheleringsmiddel met een meerwaardige metaal-ion in de hogere valentietoestand; een indicator voor het metaal-ion in de lagere valentietoestand; een 25 buffer; een kleurstof voor het instellen van de achtergrond-kleur en een dispersiemiddel.

6. Test-strook volgens.conclusie 5, met het kenmerk, dat het absorberende lichaam bestaat uit papier, filterpapier, silicagelpapier, DEAE-cellulosepapier, 3Q doek, vilt of een gesinterd poreus lichaam van glas of keramisch poeder.

7. Strook volgens conclusie 5, met het kenmerk, dat het cheleringsmiddel bestaat uit ethyleendiaminetetraacetaat,vtrans-l,2-cyclohexaandiamine-35 N,N,N',Ν'-tetraazijnzuur, diethyleentriamine-Ν,Ν,Ν',N",N'"-pentaazijnzuur, triethyleentetramine-^N,^ ,N"^N' " ,N""-hexaazijnzuur of een alkalimetaalzout daarvan. 800 2 3 91 V -15-

8. Strook volgens conclusie 5, met het kenmerk, dat het meerwaardige metaal bestaat uit ijzer, koper, cobalt of nikkel.

9. Strook volgens conclusie 5, 5 met het kenmerk, dat de indicator bestaat uit o-fenanthro-linë, 4,7-difenyl-l,10-fenanthroline, 2,21-bipyridine, cuproine, neocuproine of 2,2’,2"-terpyridine.

10. Strook volgens conclusie 3, met hét kenmerk, dat de buffer een pH van 3-6,5 kan handhaven, indien de 10 strook in natte toestand is.

11. Strook volgens conclusie 5, met het kenmerk, dat het dispersiemiddel bestaat uit polyvinylpyrrolidon, hydroxypropylcellulose of polyethyleenglycol. t. 800 2 3 91