NL8000962A - METHOD FOR MANUFACTURING MICROPOROUS ARTICLES INCLUDING ONE OR MORE ACTIVE SUBSTANCES - Google Patents
METHOD FOR MANUFACTURING MICROPOROUS ARTICLES INCLUDING ONE OR MORE ACTIVE SUBSTANCES Download PDFInfo
- Publication number
- NL8000962A NL8000962A NL8000962A NL8000962A NL8000962A NL 8000962 A NL8000962 A NL 8000962A NL 8000962 A NL8000962 A NL 8000962A NL 8000962 A NL8000962 A NL 8000962A NL 8000962 A NL8000962 A NL 8000962A
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- polymer mass
- solution
- mixture
- medium
- process according
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
Description
-1--1-
803050/BZ/EB803050 / BZ / EB
tt
Aanvraagster: E.N.I. ENTE NAZIONALE INDROCARBURI te Rome Italië Korte Aanduiding: Werkwijze voor de vervaardiging van microporeuze voorwerpen waarin een of meer werkzame middelen zijn opgesloten.Applicant: E.N.I. ENTE NAZIONALE INDROCARBURI in Rome Italy Brief Description: Process for the manufacture of microporous articles in which one or more active agents are contained.
5 Door Aanvraagster worden als uitvinders genoemd: Paolo Pansolli,5 The Applicant lists as inventors: Paolo Pansolli,
Silvio Gulinelli, Luigi Ciceri en Franco Morisi.Silvio Gulinelli, Luigi Ciceri and Franco Morisi.
De uitvinding heeft betrekking op een werkwijze voor de vervaardiging van microporeuze voorwerpen waarin een of meer werkzame middelen, en meer in het bijzonder biologisch werkzame midde-10 len zijn opgesloten.The invention relates to a method for the production of microporous articles in which one or more active agents, and more particularly biologically active agents, are enclosed.
Volgens de onderhavige werkwijze vermengt men een organische oplossing van een polymeermassa met het betreffende werkzame middel, of een oplossing of dispersie daarvan in een daarmee verenigbaar medium, dat mengbaar is met het organische oplosmiddel 15 voor de polymeermassa en brengt het geheel in een bepaalde vorm.According to the present process, an organic solution of a polymer mass is mixed with the respective active agent, or a solution or dispersion thereof in a compatible medium, which is miscible with the organic solvent for the polymer mass, and the whole is shaped.
Uit het Italiaanse octrooischrift 836.482 is bekend dat het mogelijk is enzymen en enzymen-bevattende preparaten in vezelvormige polymeerstrukturen vast te leggen. Volgens de daarin beschreven werkwijze bereidt men eerst een emulsie van een oplossing 20 van het enzym in water en een oplossing van het polymeer in een oplosmiddel dat niet mengbaar is met water, waarna men de emulsie door een spindop in een coagulerend bad extrudeert onder vorming van een draad die de oorspronkelijk in de emulsie aanwezige enzym-oplossing bevat.It is known from Italian patent 836,482 that it is possible to record enzymes and enzyme-containing preparations in fibrous polymer structures. According to the method described therein, an emulsion of a solution of the enzyme in water and a solution of the polymer in a solvent that is immiscible with water are first prepared, and the emulsion is extruded through a spinneret into a coagulating bath to form a wire containing the enzyme solution originally present in the emulsion.
25 Op deze wijze verkrijgt men biologisch zeer werkzame katalysatoren waarvan de praktische toepassing echter beperkt wordt door de daaraan volgens de bovenbeschreven werkwijze gegeven vorm en de naar verhouding ingewikkelde bereiding.In this way, biologically very active catalysts are obtained, the practical application of which, however, is limited by the form given thereto according to the above-described process and the relatively complicated preparation.
De onderhavige uitvinding heeft betrekking op een ver-30 beterde werkwijze voor de vervaardiging van microporeuze voorwerpen, waarin werkzame middelen van welke aard dan ook zijn in-gesloten, in het bijzonder biologisch werkzame middelen, in elke gewenste vorm, zodat de praktische toepassing, d.w.z. het gebruik bij commerciële uitvoering van de reakties waarbij dergelijke 35 middelen betrekken zijn, in generlei wijze wordt beperkt. Men verkrijgt bijvoorbeeld zeer doeltreffende biologische katalysatoren waarvan het gebruik bij de praktische toepassingen op geen 800 0 9 62 Γ -2- enkele wijze beperkt wordt omdat zij in allerlei vormen kunnen worden vervaardigd. -The present invention relates to an improved method for the production of microporous articles, in which active agents of any kind are enclosed, in particular biologically active agents, in any desired form, so that the practical application, ie the use in commercial implementation of the reactions involving such agents is in no way limited. For example, very effective biological catalysts are obtained, the use of which in practical applications is not limited in any way, because they can be manufactured in all kinds of shapes. -
Meer in het bijzonder verschaft de onderhavige uitvinding een werkwijze voor de vervaardiging van microporeuze 5 lichamen die een of meer werkzame bestanddelen bevatten, die uit de hierna volgende lijst kunnen worden gekozen, welke werkwijze als volgt wordt uitgevoerd: a) bereiding van een oplossing van een polymeermassa in een organisch oplosmiddel, 10 b) eventuele bereiding van een dispersie of oplossing van het betreffende werkzame middel in een daarmee verenigbaar medium, dat mengbaar is met het organische oplosmiddel van de polymeermassa, c) eventuele toevoeging aan het werkzame middel, of aan 15 het onder b) verkregen produkt, van een toevoegsel, waarvan de samenstelling en funktie hierna nog zal worden beschreven, d) vermenging van de opgeloste polymeermassa met het al of niet volgens b) opgeloste of gedispergeerde werk- 20 zame middel, dat al of niet het toevoegsel volgens trap c) bevat, e) vorming van het onder d) verkregen mengsel.More particularly, the present invention provides a process for the manufacture of microporous bodies containing one or more active ingredients, which can be selected from the following list, which process is carried out as follows: a) preparation of a solution of a polymer mass in an organic solvent, b) optional preparation of a dispersion or solution of the active agent in question in a compatible medium, which is miscible with the organic solvent of the polymer mass, c) optional addition to the active agent, or the product obtained under b), of an additive, the composition and function of which will be described further below, d) mixing the dissolved polymer mass with the active or non-dissolved or dispersed active agent according to b), which may or may not be the additive of step c) contains e) formation of the mixture obtained under d).
De werkzame middelen die volgens de werkwijze der onderhavige uitvinding ingesloten kunnen worden zijn biologische 25 samenstellingen zoals enzymen of enzymcellen, antigenen, antilicha-men, antisera, hormomen en co'énzymen, die op de daarvoor in aanmerking komende wijze met macromoleculaire matrixen zijn verbonden, alsmede stoffen met een andere werkzaamheid of met een bijzonder gedrag, bijvoorbeeld complex-vormende middelen, kleurstoffen met 30 een geselekteerd molecuulgewicht en in het algemeen alle stoffen die niet teruggewonnen maar in dit geval wel kunnen worden teruggewonnen om opnieuw gebruikt te worden of na reaktivering opnieuw gebruikt kunnen worden. Hieraan moet worden toegevoegd dat het volgens de hierboven beschreven werkwijze ook mogelijk is lichamen 35 die volgens de werkwijze der onderhavige uitvinding of op andere wijze reeds werkzame middelen bevatten opnieuw in te sluiten. Verder is het ook mogelijk andere, door fysische of chemische vereni- 800 0 962 -3- * ging van werkzame middelen met daarvoor in aanmerking komende substraten verkregen produkten in te sluiten. Op deze wijze is het bijvoorbeeld mogelijk het werkzame middel zeer goed te beschermen. Het werkzame middel kan eveneens als zodanig of na toevoeging van 5 geschikte inerte vulstoffen worden ingesloten. De werkwijze der uitvinding blijkt bijzonder doeltreffend te zijn voor de bereiding van biologische katalysatoren, ook in verband met de bovenbeschreven mogelijkheid een dergelijke katalysator in een groot aantal verschillende vormen te vervaardigen. Op deze wijze is het mogelijk 10 vezels, vezeltjes, cilindervormige lichamen van verschillende afmetingen, ellipsoïden, kogelvormige lichamen, poeders met uiteenlopende fijnheid te vervaardigen, waarbij de gewenste vorm afhankelijk is van de volgorde van de bij de eindbehandeling gevolgde trappen.The active agents that can be included according to the method of the present invention are biological compositions such as enzymes or enzyme cells, antigens, antibodies, antisera, hormones and coenzymes, which are suitably linked with macromolecular matrices, as well as substances with a different activity or with a special behavior, for example complexing agents, dyes with a selected molecular weight and generally all substances that cannot be recovered but in this case can be recovered for reuse or after reactivation can be used. It should be added that it is also possible, according to the above-described method, to reclose bodies which already contain active agents according to the method of the present invention or otherwise. Furthermore, it is also possible to enclose other products obtained by physical or chemical association of active agents with suitable substrates. In this way it is possible, for example, to protect the active agent very well. The active agent can also be included as such or after addition of suitable inert fillers. The process of the invention has been found to be particularly effective for the preparation of biological catalysts, also in view of the above-described ability to produce such a catalyst in a wide variety of forms. In this way it is possible to produce fibers, fibers, cylindrical bodies of different sizes, ellipsoids, spherical bodies, powders of varying fineness, the desired shape depending on the sequence of the steps followed in the final treatment.
15 De vormgeving kan plaatsvinden door behandeling van het mengsel, bestaande uit de opgeloste polymeermassa en het werkzame middel of een dispersie daarvan, in een medium dat de polymeermassa niet oplost.The shaping can be effected by treating the mixture, consisting of the dissolved polymer mass and the active agent or a dispersion thereof, in a medium that does not dissolve the polymer mass.
De coagulatie vindt plaats door het mengsel in het 20 medium te druppelen, waardoor men bijvoorbeeld bolvormige of ongeveer bolvormige lichamen verkrijgt, of door het mengsel direkt in het medium te voeren, waardoor vezels of dergelijke strukturen verkregen worden.Coagulation takes place by dripping the mixture into the medium, whereby, for example, spherical or approximately spherical bodies are obtained, or by feeding the mixture directly into the medium, whereby fibers or the like structures are obtained.
Een andere vormmethode is droge extrusie onder ver-25 damping van het oplosmiddel van het bovengenoemde mengsel, waardoor men een ononderbroken vezel krijgt die doorgesneden kan worden ter vorming van cilindervormige lichamen en dergelijke., met verschillende dwarsdoorsneden.Another molding method is dry extrusion with evaporation of the solvent of the above mixture, thereby obtaining a continuous fiber that can be cut to form cylindrical bodies and the like, with different cross sections.
Volgens een andere vormmethode wordt het bovengenoem-30 de mengsel met of zonder drijfmiddel uit een onder druk staande houder gespoten, waardoor vezeltjes of poeders van verschillende fijnheid ontstaan.According to another molding method, the above mixture is sprayed with or without propellant from a pressurized container to produce fibers or powders of varying fineness.
De polymeermassa's, die men volgens de werkwijze der uitvinding kan gebruiken, zijn onder andere cellulosepolymeren, 35 veresterde of veretherde cellulosepolymeren, polyamiden, acryloni-trilpolymeren en copolymeren, butadieen en isopreen, acrylaten en methacrylaten, vinylesters, vinylchloriden, polymeren en copolymeren van vinylideenchloride, styreen, vinylbutyraat, gammamethylglu- 800 0 9 62 . *· -4- tomaat enz.The polymer compositions which can be used according to the process of the invention include cellulose polymers, esterified or etherified cellulose polymers, polyamides, acrylonitrile polymers and copolymers, butadiene and isoprene, acrylates and methacrylates, vinyl esters, vinyl chlorides, polymers and copolymers of vinylidene chloride, styrene, vinyl butyrate, gamma methylglu- 800 0 9 62. * · -4- tomato etc.
Cellulose-esters lenen zich in het bijzonder voor de werkwijze der onderhavige uitvinding:Cellulose esters are particularly suitable for the process of the present invention:
Het middel, waarin het werkzame bestanddeel opgelost 5 of gedispergeerd wordt, als het niet mogelijk is met het werkzame middel zelf te werken, kiest men uit middelen die met het betreffende middel verenigbaar zijn, en met het oplosmiddel voor de polymeer-massa kunnen worden vermengd.The agent in which the active ingredient is dissolved or dispersed, if it is not possible to work with the active agent itself, one is chosen from among agents which are compatible with the respective agent and which can be mixed with the polymer mass solvent .
Men kan uit de volgende groepen van verbindingen kie-10 zen, waarbij degenen die de voorkeur verdienen tussen haakjes zijn geplaatst.The following groups of compounds can be selected, with the preferred ones being bracketed.
water, alkoholen (methanol, ethanol, propanol, butanol, tert. butanol, ethyleen glycol, glycerol), 15 ketonen (aceton, methylethylketon), ethers (dioxan, tetrahydrofuran, ethoxyethanol), esters (ethyl- en methylacetaat, propylacetaat, ethylformiaat enz.), zuren, (azijn, propion- en mierenzuur), 20 pyridine, acetonitril, cyclohexaan, dimethylforma- mide.water, alcohols (methanol, ethanol, propanol, butanol, t-butanol, ethylene glycol, glycerol), 15 ketones (acetone, methyl ethyl ketone), ethers (dioxane, tetrahydrofuran, ethoxyethanol), esters (ethyl and methyl acetate, propyl acetate, ethyl formate etc. .), acids, (vinegar, propionic and formic acid), pyridine, acetonitrile, cyclohexane, dimethylformamide.
De oplosmiddelen voor de polymeermassa kunnen op hun beurt uit een groot aantal met de aard van de polymeermassa overeenkomende verbindingen gekozen worden.The polymer mass solvents, in turn, can be selected from a wide variety of compounds corresponding to the nature of the polymer mass.
25 Voorbeelden van dergelijke verbindingen zijn:Examples of such connections are:
Aceton, methylisobutylketon, cyclohexanon, methylacetaat, methylcellulosolve, ethyllactaat, methyleen-chloride, propyleen-chloride, tetrachloorethaan, nitromethaan, chloorfenol, metacresol, azijnzuur, mierenzuur, dimethylformamide, dimethylsulfoxi-• 30 de, alkoholen, dioxaan, koolwaterstoffen, bijv. benzeen, tolueen, ketonen, esters, pyridine, chloroform, mengsels van ethanol en water, ethanol en CCl^, isopropanol en methylethylketon.Acetone, methyl isobutyl ketone, cyclohexanone, methyl acetate, methylcellulosolve, ethyl lactate, methylene chloride, propylene chloride, tetrachloroethane, nitromethane, chlorophenol, metacresol, acetic acid, formic acid, dimethylformamide, dimethyl sulfoxide, alcohols, dioxides. toluene, ketones, esters, pyridine, chloroform, mixtures of ethanol and water, ethanol and CCl 4, isopropanol and methyl ethyl ketone.
De bovengenoemde toevoegsels hebben tot taak het werkzame middel na mengen met de polymeermassa bijeen te houden of 35 te verknopen.The above additives are intended to retain or cross-link the active agent after mixing with the polymer mass.
Toevoegsels die in het bijzonder in aanmerking komen zijn: 800 0 9 62 * > -δα) Polymeren met verschillende molekuulgewichten die niet in het oplosmiddel van de polymeermassa oplosbaar zijn: o.a. polyaminen b.v. polyethyleenimine, kationogene en anionogéne polyacrylamiden, polyamino-5 zuren b.v. polylysinen, gesulfoneerd polystyreén, poly- carbonzuren, polyvinylalkoholen, polyvinylpyrrolidon.Particularly suitable additives are: 800 0 9 62 *> -δα) Polymers of different molecular weights which are not soluble in the solvent of the polymer mass: e.g. polyamines e.g. polyethyleneimine, cationic and anionic polyacrylamides, polyamino-acids, e.g. polylysines, sulfonated polystyrene, polycarboxylic acids, polyvinyl alcohols, polyvinylpyrrolidone.
b) Polyfunktionele reagentia b.v. alifatische aldehyden, isocyanaten, thioisocyanaten enz.b) Polyfunctional reagents e.g. aliphatic aldehydes, isocyanates, thioisocyanates etc.
De uitvinding wordt aan de hand van de volgende voor-JO beelden nader toegelicht.The invention is further elucidated by means of the following pre-JO examples.
VOORBEELD I Beta-qalactooxvdase-bolletjes verkregen door insluiten van Saccharomyces lactis-cellen.EXAMPLE I Beta-qalactooxvdase beads obtained by inclusion of Saccharomyces lactis cells.
Men bereidt een 10 gew.$'s oplossing van cellulose-acetaat (Fluka) in aceton (Carlo Erba) en voegt onder roeren aan 15 375 g van deze polymeeroplossing 154 g cellulaire pasta toe (droog gewicht 35,8 g) afkomstig uit 2 liter gefermenteerde Saccharomyces lactis.A 10% by weight solution of cellulose acetate (Fluka) in acetone (Carlo Erba) is prepared and 154 g of this polymer solution is added with stirring to 15 375 g of cellular paste (dry weight 35.8 g) from 2 liters of fermented Saccharomyces lactis.
Op deze wijze krijgt men een cellulaire dispersie, die vanuit een stalen houder door een capillaire buis met een diameter 20 van 0,4 mm met stikstof onder druk wordt geëxtrudeerd. De dunne geëx-trudeerde vezel verandert na een val van ongeveer 20 cm in een reeks van druppels die na vallen in een waterbad in de vorm van bolletjes coaguleren.In this manner, a cellular dispersion is obtained, which is extruded under pressure from a steel container through a 0.4 mm diameter capillary tube with nitrogen. The thin extruded fiber changes after a drop of about 20 cm into a series of droplets which coagulate in the form of spheres when dropped in a water bath.
Op deze wijze verzamelt men ongeveer 800 g vochtige 25 bolletjes, die na drogen in een luchtstroom in totaal 73 g wegen.About 800 g of moist spheres are collected in this way, which, after drying in an air stream, weigh a total of 73 g.
Eén gram van de bolletjes wordt bij 25°C met 200 ml van een oplossing van watervrije lactose (4,75 gew.$), die 2 millimol MgSO^.Tf^O en 1 millimol EDTA in een 0,1 molaire fosfaatbuffer met pH:7 bevat, geincubeerd. Na een 2 uur durende reaktie is 80$ van de lactose om-30 gezet in glucose en galactose, zoals uit een analyse van de glucose volgens de glucosetest van Boehringer blijkt.One gram of the spheres is added at 25 ° C with 200 ml of a solution of anhydrous lactose (4.75 wt.%) Containing 2 millimoles of MgSO ^ .tf ^ O and 1 millimole of EDTA in a 0.1 molar phosphate buffer with pH : 7 contains, incubated. After a 2 hour reaction, 80% of the lactose has been converted to glucose and galactose, as shown by an analysis of the glucose by Boehringer's glucose test.
De met deze bolletjes uitgevoerde hydrolyse van lactose kan 20 maal worden herhaald zonder dat verlies aan werkzaamheid kan worden aangetoond.The lactose hydrolysis carried out with these spheres can be repeated 20 times without evidence of loss of activity.
35 VOORBEELD II Bolletjes van penicilline-acylase verkregen door in-sluiten van E.coli-cellen die van te voren met polyethyleenimine zijn behandeld.EXAMPLE II Spheres of penicillin acylase obtained by enclosing E. coli cells previously treated with polyethyleneimine.
Men suspendeert 20 g droge E.coli cellen die 1.10 80 0 0 9 62 -6- eenheden bevatten in 875 g water en behandelt 10 minuten onder roeren met 25 g van een 3,3 gew.$ oplossing van polyethyleenimine (Polysciences). Er ontstaan celmassa's die gemakkelijk bezinken.20 g of dry E. coli cells containing 1.10 80 0 0 9 62 -6 units are suspended in 875 g of water and treated with 25 g of a 3.3 wt. Solution of polyethyleneimine (Polysciences) with stirring for 10 minutes. Cell masses are formed that settle easily.
Vervolgens wordt de celpasta in een kleine hoeveelheid 5 water (totaal 127 g) opnieuw gesuspendeerd en krachtig met 157 g van een 10 gew.j£’s oplossing van cellulose-acetaat (Fluka) in aceton (Carlo Erba) geroerd. Volgens de in voorbeeld I beschreven werkwijze verkrijgt men 35 g bolletjes (droog gewicht). Een deel van deze bolletjes (5 g) wordt bij 37°C in 400 ml van een 6%1s oplossing jq van penicilline G (Squibb) in 0,02 molaire fosfaatbuffer met pH=8 geincubeerd. De aanvankelijke werkzaamheid bedraagt 60.000 eenheden (micromol per uur gehydrolyseerde penicilline G) en de totale hydrolyse bereikt men binnen ongeveer 4 uur. De bolletjes behouden na achtereenvolgens 20 maal gebruikt te zijn (hydrolyse) 60% van hun oorspronkelijke werkzaamheid.The cell paste is then resuspended in a small amount of water (total 127 g) and stirred vigorously with 157 g of a 10 wt.% Solution of cellulose acetate (Fluka) in acetone (Carlo Erba). According to the method described in example I, 35 g of spheres (dry weight) are obtained. Part of these spheres (5 g) are incubated at 37 ° C in 400 ml of a 6% 1s solution jq of penicillin G (Squibb) in 0.02 molar phosphate buffer with pH = 8. Initial activity is 60,000 units (micromoles per hour hydrolysed penicillin G) and total hydrolysis is achieved within about 4 hours. The spheres retain 60% of their original activity after being used successively 20 times (hydrolysis).
VOORBEELD III Penicilline-ocylose bolletjes verkregen door insluiten van E. coli cellen die van te voren behandeld zijn met polyethyleenimine en glutaaroldehyde.EXAMPLE III Penicillin-ocylose beads obtained by enclosing E. coli cells previously treated with polyethyleneimine and glutaroldehyde.
Men suspendeert 20 g droge E.coli cellen die 1.10 20 eenheden bevatten in 400 g water en behandelt 10 minuten onder roeren met 25 g van een 3,3 gew.^'s oplossing van polyethyleenimine (Polysciences, Ine.) en 5 g van een 25%'s oplossing van glutaaralde-hyde (Merck).20 g of dry E. coli cells containing 1.10 20 units are suspended in 400 g of water and the mixture is treated with stirring for 10 minutes with 25 g of a 3.3% by weight solution of polyethyleneimine (Polysciences, Ine.) And 5 g of a 25% solution of glutaraldehyde (Merck).
De na bezinken verzamelde cellen worden krachtig met 25 157 g van een 10$'s oplossing van cellulose-acetaat (Fluka) in aceton (Carlo Erba) geroerd.The cells collected after settling are vigorously stirred with 157 g of a 10% solution of cellulose acetate (Fluka) in acetone (Carlo Erba).
Men vormt bolletjes volgens de werkwijze beschreven in de voorgaande voorbeelden en men verkrijgt 40 g droge bolletjes (droog gewicht), waarvan een gedeelte (5 g) gebruikt wordt voor het 30 bepalen van de werkzaamheid onder dezelfde omstandigheden als in voorbeeld II. De gevonden werkzaamheid bedraagt 50.000 eenheden en de hydrolyse is na iets meer dan 4 uur voltooid. In tegenstelling tot de bolletjes die zonder glutaaroldehyde bereid zijn, behouden de bolletjes van dit voorbeeld hun werkzaamheid ongewijzigd. 35 VOORBEELD IV Glucose-isomerase bolletjes verkregen door insluiting van Arthrobacter sp. cellen die van te voren met polyacrylamide (Prodefloc A/1S behandeld zijn.Spheres are formed according to the method described in the previous examples and 40 g of dry spheres (dry weight) are obtained, a portion of which (5 g) is used to determine the activity under the same conditions as in example II. The activity found is 50,000 units and the hydrolysis is completed after just over 4 hours. In contrast to the spheres prepared without glutaroldehyde, the spheres of this example retain their activity unchanged. EXAMPLE IV Glucose Isomerase Spheres Obtained by Inclusion of Arthrobacter sp. cells previously treated with polyacrylamide (Prodefloc A / 1S.
Aan 10 liter van een cultuur van Arthrobacter sp.To 10 liters of a culture of Arthrobacter sp.
800 0 9 62 t -7- cellen die het glucose-isomerase-enzym bevatten voegt men na beëindiging van de fermentatie 500 g van een 0,3$'s oplossing van Pro-derfloc A/1S toe* Men roert de gesuspendeerde cellen 20 minuten en laat bezinken. Men verzamelt de celpasta (droog gewicht 150 g) 5 en suspendeert opnieuw in water totdat een totaal gewicht van 600 g verkregen is en vermengt onder krachtig roeren met 1500 g van een 10$*s oplossing van cellulose-acetaat (Fluka) in aceton (Carlo Erba). Volgens de in het voorgaande beschreven werkwijze vormt men bolletjes. Een gram van deze bolletjes incubeert men bij 10 60°C in 100 ml van een 50 gew,$'s oplossing van glucose die 5.10“^ mol MgSO^.Zf^Q, 10"^ mol CoClg en 0,1 mol en een pH van 7 bevat. Polarimetrisch wordt een werkzaamheid van 100 internationale eenheden gemeten (micromol fructose die in één minuut gevormd wordt) met een opbrengst ontplooide werkzaamheid/ingesloten werkzaamheid 15 van 56$. De bolletjes verliezen na een kontinu gebruik gedurende twee achtereenvolgende dagen onder de vermelde proefomstandigheden hun werkzaamheid niet.800 0 9 62 t -7 cells containing the glucose isomerase enzyme 500 g of a 0.3% solution of Pro-derfloc A / 1S are added after the fermentation has ended. The suspended cells are stirred. minutes and settle. The cell paste (dry weight 150 g) 5 is collected and resuspended in water until a total weight of 600 g is obtained and mixed with vigorous stirring with 1500 g of a 10% solution of cellulose acetate (Fluka) in acetone ( Carlo Erba). Spheres are formed by the method described above. One gram of these spheres is incubated at 100 DEG C. in 100 ml of a 50 wt. Solution of glucose containing 5.10 moles MgSO 2 .zf ^ Q, 10 moles CoClg and 0.1 moles and pH of 7. Polarimetrically measures an activity of 100 international units (micromole of fructose which is formed in one minute) with a yield of deployed activity / entrapped activity of $ 56. The beads lose under continuous use for two consecutive days test conditions do not demonstrate their efficacy.
VOORBEELD V Glucose-isomerase bolletjes verkregen door insluiting van het opgeloste enzym no behandeling met polyethy-20 leenimine en glutaaraldehyde.EXAMPLE V Glucose isomerase beads obtained by entrapping the dissolved enzyme no treatment with polyethylene-leenimine and glutaraldehyde.
Men bereidt een enzymoplossing door 2 g glucose-isome-rase-poeder (Godo Shusei) in 8 g water op te lossen. Aan deze oplossing voegt men onder roeren 4 g van een 3,3$‘s oplossing van polyethyleenimine (Polysciences, Ine.) en 4 g van een 2,5$'s op-25 lossing van glutaaraldehyde (Merck) toe. Dit enzympreparaat vermengt men bij kamertemperatuur met 100 g van een 10$'s oplossing van cellulose-acetaat (Fluka) in aceton (Carlo Erba). Volgens de in de voorgaande voorbeelden beschreven werkwijze vormt men bolletjes, waarvan het gewicht na drogen aan de lucht 12 g bedraagt. Een deel 30 van deze bolletjes (2 g) incubeert men bij 60°C met 100 ml van een 50 gew.$’s glucose-oplossing, die 5.10”^ mol MgSO^^HgO, 10"^ mol C0CI2 en 0,1 mol en een pH van 7 bevat om de werkzaamheid te bepalen, die 500 internationale eenheden bedraagt. De opbrengst is 30-40$.An enzyme solution is prepared by dissolving 2 g of glucose isomeric powder (Godo Shusei) in 8 g of water. To this solution, 4 g of a 3.3% solution of polyethyleneimine (Polysciences, Ine.) And 4 g of a 2.5% solution of glutaraldehyde (Merck) are added with stirring. This enzyme preparation is mixed at room temperature with 100 g of a 10% solution of cellulose acetate (Fluka) in acetone (Carlo Erba). Spheres are formed by the method described in the previous examples, the weight of which after drying in air is 12 g. Part 30 of these spheres (2 g) are incubated at 60 ° C with 100 ml of a 50 wt.% Glucose solution containing 5.10 moles MgSO4 HgO, 10 moles CO2 Cl2 and 0.1 mole and a pH of 7 to determine the activity, which is 500 international units The yield is 30-40 $.
35 VOORBEELD VI Cilindervormige cellulose-acetaat voorwerpen waarin polyethyleenimine als complexvormend middel is inge-sloten.EXAMPLE VI Cylindrical cellulose acetate articles in which polyethyleneimine is included as a complexing agent.
80 0 0 9 62 —8-80 0 0 9 62 —8-
Men lost 15 g cellulose-acetoat (Fluka) op in 85 g aceton (Carlo Erba zuiver reagens). Aan de polymeeroplossing voegt men langzaam onder roeren 15 g van een 33 gew.$*s oplossing van polyethyleeniminehydrochloride (Polysciences, Ine.)in water en 5 5 g van een 1$'s oplossing van glutaaraldehyde (Merck) toe. Men plaatst het mengsel in een stalen cilinder waarop een stikstoffles is aangebracht en die aan de onderzijde is voorzien van een spindop die in een waterbad ondergedompeld is. Onder stikstofdruk komt het mengsel uit de spindop te voorschijn en coaguleert zodat een on-10 onderbroken draad ontstaat die met een snij-inrichting in monsters van 1-2 cm lengte gesneden wordt. Een gram van deze cilindertjes brengt men 4 uur in aanraking met een koperoplossing met een concentratie van 18r 3 delen per millioen (ppm) die men bereidt door oplossen van CuSO^.öf-^O in gedestilleerd water. Men meet met een 15 atoomabsorptiespectrofotometer (Varian-Techtron 1200) met koperge-halte (1,1 ppm) in de oplossing die mei de cilindertjes behandeld is. Na wassen van de cilindertjes met 50 ml 1 N HC1 vindt men 17 ppm koper.15 g of cellulose acetate (Fluka) are dissolved in 85 g of acetone (Carlo Erba pure reagent). To the polymer solution, 15 g of a 33 wt.% Solution of polyethyleneimine hydrochloride (Polysciences, Ine.) In water and 5 g of a 1% solution of glutaraldehyde (Merck) are slowly added with stirring. The mixture is placed in a steel cylinder on which a nitrogen bottle has been placed and which has a spinneret immersed in a water bath at the bottom. Under nitrogen pressure, the mixture emerges from the spinneret and coagulates to form an uninterrupted thread which is cut into 1-2 cm length samples with a cutting device. One gram of these cylinders is contacted with a copper solution at a concentration of 18 3 parts per million (ppm) for 4 hours, which is prepared by dissolving CuSO2 .f... O. in distilled water. It is measured with an atomic absorption spectrophotometer (Varian-Techtron 1200) with copper content (1.1 ppm) in the solution treated with the cylinders. After washing the cylinders with 50 ml of 1 N HCl, 17 ppm of copper is found.
Men brengt de cilindertjes 4 uur in aanraking met de 20 bovengenoemde koperoplossing, waarna men het kopergehalte in de oplossing opnieuw meet en op 1,2 ppm vaststelt. Deze volgorde herhaalt men 10 maal waaruit blijkt dat de cilinders hun complexvormende werking met koper niet verliezen.The cylinders are contacted with the above-mentioned copper solution for 4 hours, after which the copper content in the solution is again measured and determined at 1.2 ppm. This sequence is repeated 10 times, showing that the cylinders do not lose their complexing action with copper.
VOORBEELD VII Invertosevezeltjes verkregen door insluiten van het 25 enzym in een oplossing waaraan polyvinvlpvrrolidon is toegevoegd.EXAMPLE VII Invertose fibers obtained by enclosing the enzyme in a solution to which polyvinylprrolidone has been added.
Men roert een oplossing van 50 g invertase (B.D.H.) na toevoeging van 10 g polyvinylpyrrolidon (K30, Fluka) krachtig met 333 g van een 15/2* s oplossing van cellulose-acetaat (Fluka) in 30 aceton (Carlo Erba). De samenstelling wordt vanuit een autoclaaf onder stikstofdruk (50 atmosfeer) door een mondstuk van 500 micron geSxtrudeerd, waarbij men een droog poeder van het vezeltjestype met een deeltjesgrootte van 160-1600 micron verzamelt. Men heeft de werkzaamheid van het invertase-enzym in de vezeltjes met een 35 oplossing van 20$ saccharose in een 0,1 molaix fosfaatbuffer met pH=4 bij 25°C gemeten. De werkzaamheid in milligrammen geïnverteerde saccharose per minuut en per gram vezeltjes bedraagt 8-50 afhankelijk van de afmeting van de vezeltjes.A solution of 50 g of invertase (B.D.H.) after addition of 10 g of polyvinylpyrrolidone (K30, Fluka) is stirred vigorously with 333 g of a 15/2 * s solution of cellulose acetate (Fluka) in acetone (Carlo Erba). The composition is extruded from an autoclave under nitrogen pressure (50 atmospheres) through a 500 micron nozzle to collect a fiber-type dry powder having a particle size of 160-1600 microns. The activity of the invertase enzyme in the fibers was measured with a solution of 20% sucrose in a 0.1 molaix phosphate buffer with pH = 4 at 25 ° C. The activity in milligrams of sucrose inverted per minute and per gram of fiber is 8-50 depending on the size of the fiber.
VOORBEELD VIII Vezels van hydroxypirimidinehydrolase en N-carba- 800 0 9 62 \ -9- moyl-D-qminozuurhydrolase verkregen door insluiting van Aqrobacterium radiobacter cellen waaraan polyethyleenimine is toegevoegd.EXAMPLE VIII Fibers of hydroxypirimidine hydrolase and N-carba-800 0 9 62 -9-moyl-D-amino acid hydrolase obtained by entrapping Aqrobacterium radiobacter cells to which polyethyleneimine has been added.
Men suspendeert 4 g droge Agrobacterium radiobacter 5 cellen in 100 g water en behandelt onder roeren met 2 g van een 3$'s oplossing van polyethyleenimine (Polysciences, Inc.). Na 10 minuten roeren worden de bezonken cellen verzameld en in 25 g water gesuspendeerd. Men roert de suspensie krachtig met 20 g van een 2D%' s oplossing van cellulose-acetaat (Fluka) in aceton (Carlo Erba). De 10 samenstelling wordt in een stalen cilinder gebracht waarop een stik-stoffles is bevestigd/in de bodem van een nonovezelspindop (diameter 1 mm) is voorzien. Met een doserende pomp wordt het mengsel door de spindop in de vorm van een ononderbroken vezel geëxtrudeerd, die men door het laten verdampen van aceton tijdens een val van 4 meter in 15 de lucht laat drogen. De gehele draad met een droog gewicht van 8 g incubeert men bij 40°C onder stikstofatmosfeer in een 0,1 molair fos-faatbuffer (pH = 8) die 4 g DL-fenylhydantoïne bevat, voor de bepaling van de werkzaamheid van de twee enzymen. Na een 20 uur durende reaktie is hydantoine volledig in D(-)fenylglycine omgezet, 20 zoals blijkt uit de analyse met een aminozuuranalysator. Dezelfde draad gebruikt men 10 maal voor hetzelfde aantal hydrolyses, waarbij 30# van de oorspronkelijke werkzaamheid verloren gaat.4 g of dry Agrobacterium radiobacter 5 cells are suspended in 100 g of water and treated with stirring with 2 g of a 3% solution of polyethyleneimine (Polysciences, Inc.). After stirring for 10 minutes, the settled cells are collected and suspended in 25 g of water. The suspension is stirred vigorously with 20 g of a 2D% solution of cellulose acetate (Fluka) in acetone (Carlo Erba). The composition is placed in a steel cylinder on which a nitrogen bottle is attached / a non-fiber spinneret (diameter 1 mm) is provided in the bottom. With a metering pump, the mixture is extruded through the spinneret in the form of a continuous fiber, which is allowed to air dry by allowing acetone to evaporate during a drop of 4 meters. The whole wire with a dry weight of 8 g is incubated at 40 ° C under a nitrogen atmosphere in a 0.1 molar phosphate buffer (pH = 8) containing 4 g DL-phenylhydantoin, to determine the activity of the two enzymes . After a reaction lasting 20 hours, hydantoin has been completely converted to D (-) phenylglycine, as shown by analysis with an amino acid analyzer. The same thread is used 10 times for the same number of hydrolyses, losing 30 # of the original activity.
800 0 9 62800 0 9 62
Claims (10)
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT7920213A IT1207172B (en) | 1979-02-15 | 1979-02-15 | PROCESS FOR THE PREPARATION OF GLOBAL MICROPOROUS BODIES ONE OR MORE ACTIVE AGENTS. |
| IT2021379 | 1979-02-15 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL8000962A true NL8000962A (en) | 1980-08-19 |
| NL189007B NL189007B (en) | 1992-07-01 |
| NL189007C NL189007C (en) | 1992-12-01 |
Family
ID=11164802
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NLAANVRAGE8000962,A NL189007C (en) | 1979-02-15 | 1980-02-15 | METHOD FOR MANUFACTURING MICROPOROUS SPHERES |
Country Status (35)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS55115827A (en) |
| KR (1) | KR850000252B1 (en) |
| AR (1) | AR228027A1 (en) |
| AT (1) | AT380487B (en) |
| BE (1) | BE881755A (en) |
| BG (1) | BG40485A3 (en) |
| BR (1) | BR8000975A (en) |
| CA (1) | CA1148312A (en) |
| CH (1) | CH644387A5 (en) |
| CS (1) | CS268652B2 (en) |
| DD (1) | DD149075A5 (en) |
| DE (1) | DE3005771A1 (en) |
| DK (1) | DK167286B1 (en) |
| EG (1) | EG14977A (en) |
| ES (1) | ES8102803A1 (en) |
| FR (1) | FR2448971A1 (en) |
| GB (1) | GB2041941B (en) |
| GR (1) | GR73888B (en) |
| HU (1) | HU186733B (en) |
| IE (1) | IE49394B1 (en) |
| IL (1) | IL59278A (en) |
| IN (1) | IN152453B (en) |
| IT (1) | IT1207172B (en) |
| LU (1) | LU82166A1 (en) |
| MW (1) | MW1080A1 (en) |
| NL (1) | NL189007C (en) |
| NO (1) | NO161077C (en) |
| PH (1) | PH20814A (en) |
| PL (1) | PL133437B1 (en) |
| PT (1) | PT70829A (en) |
| RO (1) | RO81372B (en) |
| SE (1) | SE452160B (en) |
| YU (1) | YU44312B (en) |
| ZA (1) | ZA80644B (en) |
| ZM (1) | ZM1780A1 (en) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2584552A (en) * | 1948-04-12 | 1952-02-05 | Delman Corp | Diaphragm pump |
| DE3130606C2 (en) * | 1981-08-01 | 1985-03-21 | Rolf Dr. 8700 Würzburg Siegel | Method for the isolation of cells involved in antibody formation |
| US4732851A (en) * | 1982-03-16 | 1988-03-22 | Purification Engineering, Inc. | Immobilization of cells with a polyazetidine prepolymer |
| DE3215211A1 (en) * | 1982-04-23 | 1983-10-27 | Akzo Gmbh | MICROPOROISIS POWDER LOADED WITH ACTIVE SUBSTANCES |
| IE56509B1 (en) * | 1982-11-04 | 1991-08-28 | Univ California | Methods for oncogenic detection |
| GB2189809A (en) * | 1986-05-03 | 1987-11-04 | Michael Storey Otterburn | Immobilized biological material |
| DE3735397A1 (en) * | 1987-10-20 | 1989-05-03 | Hoechst Ag | MAGNETIC MEMBRANE CAPSULES AND THEIR USE |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE1227855B (en) * | 1960-07-12 | 1966-11-03 | Ichthyol Ges | Process for the production of enzyme bodies for the implementation of enzymatic reactions |
| US3672955A (en) * | 1970-05-20 | 1972-06-27 | Us Agriculture | Preparation of an insoluble active enzyme |
| IT987038B (en) * | 1973-03-22 | 1975-02-20 | Snam Progetti | HIGH PER MEABILITY CELLULOSE FIBERS CONTAINING ENZINES AND PROCEDURE FOR THEIR PREPA RATION |
| FR2222080A1 (en) * | 1973-03-22 | 1974-10-18 | Viejo Jacques | Stabilisation of pepsin - by salt formation with a carboxy polymethylene |
| JPS5844401B2 (en) * | 1973-05-07 | 1983-10-03 | ドル オリバ− インコ−ポレイテツド | Naizousurukousoobunsansitenaru Jiyugoutaimaku Narabini Sonoseizouhouhou |
| JPS50121485A (en) * | 1974-03-08 | 1975-09-23 | ||
| IT1039756B (en) * | 1975-07-10 | 1979-12-10 | Snam Progetti | PROCEDURE TO IMPROVE THE ACTIVITY OF OXIDOREDUCTASE ENZYMES ENCLOSED IN FILAMENT STRUCTURES |
| JPS52145592A (en) * | 1976-05-27 | 1977-12-03 | Kansai Paint Co Ltd | Immobilization of enzymes of microbial cells |
-
1979
- 1979-02-15 IT IT7920213A patent/IT1207172B/en active
-
1980
- 1980-01-25 GR GR61038A patent/GR73888B/el unknown
- 1980-01-31 IL IL59278A patent/IL59278A/en unknown
- 1980-02-04 ZA ZA00800644A patent/ZA80644B/en unknown
- 1980-02-04 MW MW10/80A patent/MW1080A1/en unknown
- 1980-02-04 GB GB8003622A patent/GB2041941B/en not_active Expired
- 1980-02-07 ZM ZM17/80A patent/ZM1780A1/en unknown
- 1980-02-08 YU YU333/80A patent/YU44312B/en unknown
- 1980-02-11 PH PH23629A patent/PH20814A/en unknown
- 1980-02-11 NO NO800351A patent/NO161077C/en unknown
- 1980-02-12 ES ES489196A patent/ES8102803A1/en not_active Expired
- 1980-02-12 DK DK060380A patent/DK167286B1/en active
- 1980-02-13 BG BG8046606A patent/BG40485A3/en unknown
- 1980-02-13 EG EG86/80A patent/EG14977A/en active
- 1980-02-13 PT PT70829A patent/PT70829A/en not_active IP Right Cessation
- 1980-02-13 SE SE8001137A patent/SE452160B/en not_active IP Right Cessation
- 1980-02-13 CA CA000345588A patent/CA1148312A/en not_active Expired
- 1980-02-13 BR BR8000975A patent/BR8000975A/en not_active IP Right Cessation
- 1980-02-14 FR FR8003301A patent/FR2448971A1/en active Granted
- 1980-02-14 LU LU82166A patent/LU82166A1/en unknown
- 1980-02-14 HU HU80335A patent/HU186733B/en not_active IP Right Cessation
- 1980-02-14 IE IE282/80A patent/IE49394B1/en not_active IP Right Cessation
- 1980-02-14 DD DD80219059A patent/DD149075A5/en not_active IP Right Cessation
- 1980-02-14 PL PL1980222024A patent/PL133437B1/en unknown
- 1980-02-14 CS CS801017A patent/CS268652B2/en unknown
- 1980-02-14 KR KR1019800000587A patent/KR850000252B1/en active
- 1980-02-14 AT AT0080480A patent/AT380487B/en not_active IP Right Cessation
- 1980-02-14 CH CH123180A patent/CH644387A5/en not_active IP Right Cessation
- 1980-02-15 DE DE19803005771 patent/DE3005771A1/en active Granted
- 1980-02-15 IN IN173/CAL/80A patent/IN152453B/en unknown
- 1980-02-15 BE BE0/199424A patent/BE881755A/en not_active IP Right Cessation
- 1980-02-15 RO RO100196A patent/RO81372B/en unknown
- 1980-02-15 NL NLAANVRAGE8000962,A patent/NL189007C/en not_active IP Right Cessation
- 1980-02-15 AR AR279986A patent/AR228027A1/en active
- 1980-02-15 JP JP1676280A patent/JPS55115827A/en active Pending
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0075815B1 (en) | Water-insoluble protein material, process for preparing it and its use | |
| McKnight et al. | Synthesis of chitosan-alginate microcapsule membranes | |
| FI68078C (en) | FOERFARANDE FOER FRAMSTAELLNING AV BIOLOGISKT AKTIVA MICROORGANISMMYCELIEPELLETS | |
| WO2000015272A1 (en) | Polymer immobilized living cells and applications thereof | |
| NL8000962A (en) | METHOD FOR MANUFACTURING MICROPOROUS ARTICLES INCLUDING ONE OR MORE ACTIVE SUBSTANCES | |
| CN104099316A (en) | Amphiphilic structure microsphere based on hydrophobic modified sodium alginate material and preparation and application | |
| US4904592A (en) | Stabilized enzymes | |
| SK19422000A3 (en) | Process for preparing a polyvinyl alcohol gel and mechanically highly stable gel produced by this process | |
| DE3315201A1 (en) | METHOD FOR FIXING ENZYMATICALLY ACTIVE MATERIALS | |
| JPH0491142A (en) | Modified cellulose porous carrier | |
| Arslan et al. | The effect of gel composition on the adsorption of invertase on poly (acrylamide/maleic acid) hydrogels | |
| Kokufuta et al. | Use of polyelectrolyte complex for immobilization of microorganisms | |
| US5093253A (en) | Method for microbial immobilization by entrapment in gellan gum | |
| JPH09157433A (en) | Production of polyvinyl alcohol-based gel molding and microorganism-immobilized molding | |
| JP2972877B1 (en) | Dope of polymer material, microbeads made of polymer material and method for producing the beads | |
| Schacht et al. | The use of gelatin and alginate for the immobilisation of bioactive agents | |
| DD294729A5 (en) | PROCESS FOR THE PRODUCTION OF IMMOBILISATES WITH BIOLOGICALLY ACTIVE, MACROMOLECULAR COMPOUNDS | |
| CA1319632C (en) | Method for microbial immobilization | |
| CH634876A5 (en) | Immobilised, support-fixed, enzyme | |
| JPH0383585A (en) | Immobilization of enzyme and microorganism | |
| EP0446948B1 (en) | Biocatalysts immobilized by entrapment and process for their preparation | |
| JPH047377B2 (en) | ||
| CA1063952A (en) | Enzymic catalysts, their preparation, and their use in the preparation of 6-aminopenicillanic acid | |
| JPS6349996B2 (en) | ||
| JPS602188A (en) | Preparation of immobilized mold |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A1A | A request for search or an international-type search has been filed | ||
| BB | A search report has been drawn up | ||
| A85 | Still pending on 85-01-01 | ||
| BC | A request for examination has been filed | ||
| V1 | Lapsed because of non-payment of the annual fee |