MXPA99009817A - Composiciones farmaceuticas de arglabina y derivados de arglabina. - Google Patents

Composiciones farmaceuticas de arglabina y derivados de arglabina.

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Abstract

Se describen composiciones farmacéuticas que contienen arglabina y derivados de arglabina. Las composiciones pueden estar en forma de dosis unitaria y sonútiles para el tratamiento de cáncer en humanos. También se describen las composiciones y estuches que contienen un primer agente quimioterapéutico que incluye arglabina o un derivado de la misma y un segundo agente quimioterapéutico. Las composiciones y estuches son eficaces para tratar el cáncer en un paciente humano. La invención también proporciona diversos derivados de la arglabina, eficaces para suprimir el crecimiento tumoral en mamífer

Description

COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS DE ARGLABIMA Y DERIVADOS DE ARGLABINA ANTECEDENTES DE LA INVENCION El cáncer es la primera causa de muerte en los Estados Unidos y afecta a la población mundial. La cirugía, la radiación y la quimioterapia son las modalidades terapéuticas utilizadas más ampliamente. Los agentes quimioterapéuticos crean condiciones dentro de la célula que limitan el crecimiento y la replicación celular. La síntesis de ADN puede inhibirse impidiendo la biosíntesis de purina, la biosíntesis de pirimidina, la conversión de ribonucleótidos a desoxiribonucleótidos , antimetabolitos, intercalación o enlaces cruzados. La síntesis de ARN, por ejemplo, puede inhibirse por medio de antimetabolitos. La síntesis de proteínas se puede inhibir, por ejemplo, mediante agentes que desaminan la asparagina. Además, los agentes que inhiben la función de los microtúbulos se pueden utilizar como agentes de quimioterapia. Los agentes de quimioterapia normalmente afectan tanto a las células neoplásicas como a las células de tejido normal que proliferan rápidamente como médula ósea, folículos pilosos y epitelio intestinal. Anorexia, náusea, vómito, diarrea, supresión de la función de la médula espinal y pérdida del cabello son algunos de los efectos negativos asociados comúnmente con la quimioterapia. Sería ventajoso el desarrollo de un agente de quimioterapia que sea un agente antitumoral eficaz con toxicidad mínima.
SUMARIO DE LA INVENCIÓN Se ha descubierto que la arglabina y diversos derivados de ésta pueden funcionar como agentes quimioterapéuticos eficaces, con menos efectos secundarios de los que normalmente siguen al uso de otros agentes quimioterapéuticos. En un aspecto, la invención describe una composición farmacéutica en forma de dosis unitaria adecuada para el tratamiento de un cáncer humano . La composición consiste básicamente de entre aproximadamente 40 mg y 480 mg de arglabina o un derivado de la misma. La dosis unitaria de la composición puede ser, por ejemplo, entre aproximadamente 175 mg y 315 mg o entre aproximadamente 240 mg y 280 mg de arglabina o un derivado de la misma. La arglabina o un derivado de la misma se puede utilizar en la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer. Las composiciones pueden utilizarse en la elaboración de un medicamento para el tratamiento del cáncer. Las composiciones son útiles para el tratamiento de una amplia diversidad de cánceres, entre los que se incluyen, por ejemplo, de mama, colon, rectal, estómago, pancreático, pulmón, hepático, ovárico, cáncer pancreático y esofágico, leucemia y linfoma. La composición es particularmente útil para el tratamiento del cáncer pulmonar, hepático y ovárico. La dimetilaminoarglabina o una sal de la misma farmacéuticamente aceptable es un derivado de arglabina particularmente útil que puede ser usado en la composición farmacéutica. La dimetilaminoarglabina o una sal de la misma farmacéuticamente aceptable puede estar liofilizada. La invención también describe una composición que incluye un primer agente quimioterapéutico que incluye la arglabina o un derivado de la misma y un segundo agente quimioterapéutico. El segundo agente quimioterapéutico no es la arglabina o un derivado de la misma. La composición es eficaz para suprimir el crecimiento tumoral en humanos. Un derivado de arglabina particularmente útil es la dimetilaminoarglabina o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma. El segundo agente quimioterapéutico puede ser por ejemplo, un agente alquilante como ciclofosfamida, sarcolisina o metilnitrosourea, un antimetabolito como metotrexato o fluorouracilo, un alcaloide de la vinca como vinblastina o vincristina, un antibiótico como rubidomicina o un complejo de coordinación de platino como cisplatino. Pueden estar en la composición dos o más agentes quimioterapéuticos con la arglabina o un derivado de la misma. Las composiciones se pueden utilizar en la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer . La invención también describe compuestos que suprimen el crecimiento tumoral en un mamífero. Estos compuestos se seleccionan del grupo representado por las siguientes Fórmulas I, II, III, IV, V y VI: en donde RR, es NHCH2Ph o N (CH2CH2 ) 20, RR2 es NHCH2Ph, N (CH2CH2) 20, N(CH3)2 o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos; y X es OH o Cl . Estos derivados de la arglabina incluyen dimetilaminoepoxiarglabina, dibromoarglabina , arglabina clorhidrina, 11,13 dihidroarglabina, bencilaminoarglabina , morfolina-aminoarglabin , bencilaminoepoxiarglabina, morfolina-aminoepoxiarglabina, epoxiarglabinclorhidrina o sales de los mismos farmacéuticamente aceptables. Los compuestos de la Fórmula I, II, III, IV, V o VI se pueden utilizar en la fabricación de un medicamento que suprima el crecimiento tumoral en un mamífero . A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos usados en la presente tienen los mismos significados que normalmente comprende alguien con experiencia ordinaria en la técnica a la que pertenece esta invención. Aunque se pueden emplear métodos similares o equivalentes a los que se describen aquí para llevar a la práctica o probar la presente invención, más adelante se describen métodos y materiales adecuados. Todas las publicaciones, solicitudes de patente, patentes y otras referencias mencionadas aquí se consideran forman parte de la presente en su totalidad, como referencia. En caso de un conflicto, la presente especificación con sus definiciones prevalecerán. Además, los materiales, métodos y ejemplos son solamente ilustrativos y no pretenden ser limitativos. Otras particularidades y ventajas de la invención serán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada y de las reivindicaciones.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 representa la síntesis de derivados de arglabina del 2 al 9. La Figura 2 representa la síntesis de derivados de arglabina del 10 al 13. La Figura 3 representa la síntesis de derivados de arglabina 14a-14d, 15a-15d y 16. La Figura 4 representa la estructura de los compuestos 17 a 21. La Figura 5 representa el efecto de aumentar las concentraciones de clorhidrato de dimetilaminoarglabina en la viabilidad de las células transformadas. La Figura 6 representa el efecto de aumentar las concentraciones de clorhidrato de dimetilaminoarglabina en la proliferación de las células transformadas. La Figura 7 representa el efecto de aumentar las concentraciones de clorhidrato de dimetilaminoarglabina en la viabilidad de las células normales. La Figura 8 es una gráfica de índice espectral de productos de desdoblamiento del naftol. La Figura 8A representa la [Rijausencia del medicamento. La Figura 8B representa la presencia del medicamento.
DESCRIPCIÓN DE LAS MODALIDADES PREFERIDAS La invención proporciona nuevos compuestos que suprimen el crecimiento tumoral en humanos. Estos compuestos se pueden sintetizar a partir del compuesto precursor arglabina (Figura 1) , que se aisla a partir de Artemisia glabella . Se pueden hacer diversos derivados de arglabina utilizando una gama de sustancias químicas. Por ejemplo, la epoxiarglabina se puede producir mediante la epoxidación con ácido peracético de doble enlace de una olefina trisustituida . Las diclorhidrinas pueden producirse mediante tratamiento de la epoxiarglabina con una solución de éter-acetona en ácido clorhídrico. La dibromoarglabina se puede producir haciendo reaccionar la arglabina con Br2 y tetracloruro de carbono. Las arglabina clorhidrinas se pueden producir a partir de la arglabina mediante reacción con una solución de clorhidrato de metanol. La epoxidación de las arglabina clorhidrinas con ácido peracético y cloroformo da por resultado epoxiarglabin clorhidrinas susceptibles de separarse cromatográfreamente . El arglabin diol, su isómero y dieno pueden producirse hidrolizando la arglabina. El epímero 1,10 de la arglabina, la epiarglabina puede producirse mediante tratamiento de arglabina diol con P0C13. La bencilaminoarglabina y la bencílaminoepoxiarglabina pueden producirse mediante tratamiento de la arglabina y la epoxiarglabina con bencenamina. La dimetilaminoarglabina y la dimetilaminoepoxiarglabina se pueden producir mediante el tratamiento de la arglabina y la epoxiarglabina con dimetilamina . La morfolina-aminoarglabina y la morfolina-aminoepoxiarglabina se pueden producir mediante la aminación de arglabina con morfolina. Las sales farmacéuticamente aceptables de estos compuestos se pueden producir con métodos estándar y emplearse como agentes antitumorales . Por ejemplo, el clorhidrato de dimetilaminoarglabina y el clorhidrato de dimetilaminoepoxiarglabina se pueden producir por clorhidratación . La dihidroarglabina se puede producir mediante el tratamiento de la arglabina con etanol y H2/Ni.
Los diferentes derivados de la arglabina enunciados arriba se representan en las Figuras 1-4. La invención se relaciona también con un método para suprimir el crecimiento tumoral en un paciente humano diagnosticado con cáncer, que comprende administrar al paciente arglabina o un derivado de la misma. Mientras que este método puede emplearse generalmente para el tratamiento de cánceres como el de mama, colon, rectal, estómago, pancreático, pulmón, hepático, ovárico, cáncer pancreático y esofágico, leucemia y linfomas, ciertos tipos de cánceres como el de pulmón, hepático y ovárico, son particularmente sensibles a este régimen terapéutico. Los compuestos se pueden administrar por vía tópica, oral, intravenosa, intraperitoneal , intrapleural , intratecal, subcutánea, intramuscular, intranasal, a través de 52/70 inhalación o por medio de supositorio, dependiendo del tipo de cáncer y de diversas indicaciones en los pacientes. Por ejemplo, la administración intraperitoneal se puede usar para algunos pacientes con ascitis. La administración intrapleural se puede utilizar para ciertos pacientes con cáncer pulmonar. Los supositorios se pueden utilizar en pacientes con cáncer rectal . La arglabina o un derivado de la misma se puede administrar en una cantidad diaria de entre aproximadamente 40 mg y 480 mg, de preferencia entre aproximadamente 175 mg y 315 mg, con mayor preferencia entre aproximadamente 240 mg y 280 mg. Normalmente la dosis varía entre aproximadamente 0.5 mg/kg y 7 mg/kg. En condiciones extremas, se puede administrar hasta aproximadamente 20 mg/kg de arglabina o de un derivado de la misma. Una vez administrados, estos compuestos actúan como agentes antitumorales y pueden inhibir el crecimiento del tumor o pueden hacer que el tumor retroceda. Sin limitarse a ningún mecanismo bioquímico particular, estos compuestos pueden eliminar o inhibir el crecimiento de células cancerosas impidiendo la farnesilación de proteínas, como la proteína ras. El gen ras es un proto-oncogén que desempeña un papel en muchos tipos de cánceres humanos, entre los que se incluyen el carcinoma colorrectal, el carcinoma pancreático exócrino y las leucemias mieloides (Barbacid, 1987, Ann. Rev. Biochem. 52/70 56:779). Aproximadamente entre 20 y 30% de todos los tumores humanos se pueden atribuir a la activación del proto-oncogén ras. Los genes ras constituyen una familia multigénica que transforma las células mediante la acción de una proteína 21 kDa denominada ras p21 (también referida aquí como "ras"). La proteína ras funciona como una proteína reguladora G, que hidroliza la GTP a GDP. En su estado inactivo, la proteína ras se une a GDP. Con la activación de los receptores del factor de crecimiento, la proteína ras intercambia GDP por GTP y experimenta un cambio conformacional . En su estado de unión a GTP, la proteína ras tipo silvestre acopla las señales de los receptores del factor de crecimiento activados a los efectores mitogenicos, corriente abajo. La actividad GTPasa intrínseca de la proteína ras finalmente regresa a la proteína a su estado inactivo de unión a GDP. En células tumorales, una mutación en el gen ras lleva a una pérdida de la función reguladora, que tiene como resultado una transmisión constitutiva de señales estimulantes de crecimiento y activación oncogénica. Tanto en las funciones normales como en las oncogénicas, la proteína ras debe ser localizada en la membrana plasmática, un proceso que depende del apropiado procesamiento post-traduccional de la proteína ras (Hancock, 1989, Cell 57:1167). En la primera etapa del 52/70 procesamiento post-traduccional de la proteína ras, un grupo farnesilo se une a un residuo de cisteína en la posición 186 de la proteína mediante la reacción con pirofosfato de farnesilo. Segundo, los tres aminoácidos carboxi-terminales de la proteína son desdoblados por la acción de una proteasa específica. Tercero, el ácido carboxílico terminal es convertido a un éster metílico mediante alquilacion con un grupo metilo. La modificación post-traduccional de la proteína ras es mediada por un motivo secuencial de aminoácidos con frecuencia referido como "caja CAAX" . En este motivo secuencial, C representa cisteína, A representa un aminoácido alifático y X es otro aminoácido como Metionina, Serina o Glutamina. Dependiendo de la secuencia específica de la caja CAAX, este motivo sirve como una secuencia de señal para la farnesil-proteína transferasa o la geranilgeranil-proteína transferasa, que catalizan la alquilacion del residuo de cisteína de la secuencia CAAX. Se requiere la farnesilación de la proteína ras para el procesamiento proteolítico , palmitoilación y la unión fuerte de la proteína ras a las membranas celulares . En ausencia de f rnesilación, las formas oncogénicas de la proteína ras no pueden transformar oncogénicamente a las células. En efecto, los inhibidores de la farnesil-proteína transferasa han demostrado que 52/70 bloquean el crecimiento de las células transformadas por la proteína ras en agar suave. Por consiguiente, se piensa que los inhibidores de la farnesil-proteína transferasa y de la actividad de la proteína ras en general, son útiles agentes terapéuticos anti cáncer para muchos tipos de cáncer (Gibbs et al., 1984, Proc . Nati. Acad. Sci . USA 81:5704-5708; Jung et al., 1994, Mol. Cell. Biol. 14:3707-3718; Predergast et al., 1994, Mol. Cell. Biol. 14:4193-4202; Vogt et al., 1995, J. Biol. Chem. 270: 660-664; y Marón et al., 1995, J. Biol. Chem. 270: 22263-22270). Como se describe abajo, la arglabina y los derivados de la misma parecen inhibir la far esilación de proteína . En una modalidad alternativa, una composición farmacéutica que contiene entre aproximadamente 40 mg y 480 mg, de preferencia entre aproximadamente 175 mg y 315 mg, con mayor preferencia entre aproximadamente 240 mg y 280 mg de arglabina o un derivado de la misma es proporcionada en forma de dosis unitaria. La dosis puede dividirse en 2-4 dosis diarias. Las dosis típicas de esta composición farmacéutica varían entre aproximadamente 0.5 mg/kg y 7 mg/kg. En condiciones extremas, se pueden administrar hasta aproximadamente 20 mg/kg. La dimetilaminoarglabina liofilizada y las sales liofilizadas de la misma farmacéuticamente aceptables como el clorhidrato de 52/70 dimetilaminoarglabina son particularmente útiles como composiciones farmacéuticas. La concentración óptima de arglabina o un derivado de la misma en una composición farmacéuticamente aceptable puede variar, dependiendo de varios factores, entre los que se incluyen la dosis preferida del compuesto que se va a administrar, las características químicas de los compuestos empleados, la formulación de los excipientes del compuesto y la vía de administración. La dosis óptima de una composición farmacéutica que se va a administrar puede depender también de variables como el tipo y grado de metástasis del cáncer, el estado de salud general del paciente en particular y la eficacia biológica relativa del compuesto seleccionado. Estas composiciones se pueden utilizar para el tratamiento del cáncer, especialmente cáncer pulmonar, cáncer hepático y cáncer ovárico, aunque también otros cánceres como el de mama, rectal, de colon, estómago, pancreático o esofágico son tratados ventajosamente con las composiciones. Además, los cánceres hematopoyéticos como leucemias y linfomas también pueden tratarse ventajosamente. Los compuestos de la invención se pueden formular en composiciones farmacéuticas por la mezcla con excipientes no tóxicos o vehículos farmacéuticamente aceptables. Tales compuestos y composiciones se pueden preparar para administración parenteral, particularmente en 52/70 forma de soluciones líquidas o suspensiones en soluciones amortiguadoras fisiológicas acuosas; para administración oral, particularmente en forma de tabletas o cápsulas; o para administración intranasal, particularmente en forma de polvos, gotas nasales o aerosoles. Las composiciones para otras vías de administración se pueden preparar según se desee utilizando métodos estándar. Un compuesto de la invención se puede administrar de manera conveniente en forma de dosis unitaria y se puede preparar mediante alguno de los métodos muy conocidos en la técnica f rmacéutica, por ejemplo, como se describe en Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Pub. Co . , Easton, PA, 1980). Las formulaciones para administración parenteral pueden contener como excipientes comunes agua estéril o salina, polialquilen glicoles como polietilen glicol, aceites de origen vegetal, naftálenos hidrogenados y lo semejante. En particular, el polímero lactide biodegradable biocompatible, el copolímero lactide/glicólide o los copolímeros polioxietileno-polioxipropileno son ejemplos de excipientes para controlar la liberación de un compuesto de la invención in vivo. Otros sistemas de suministro parenteral adecuados incluyen partículas de copolímero de etileno-acetato de vinilo, bombas osmóticas, sistemas de infusión implantables y liposomas. Las formulaciones para administración por inhalación pueden contener excipientes 52/70 como lactosa, si se desea. Las formulaciones para inhalación pueden ser soluciones acuosas que contienen, por ejemplo, éter polioxietilen-9-laurílico, glicocolato y desoxicolato o pueden ser soluciones oleosas para administración en forma de gotas nasales. Si se desea, los compuestos se pueden formular como gel para aplicarse intranasalmente . Las formulaciones para administración parenteral también pueden incluir glicocolato para administración bucal. La invención también se refiere a un artículo de manufactura que contiene material de empaque y arglabina o un derivado de la misma contenido dentro del material de empaque. La arglabina o los derivados de la misma son terapéuticamente eficaces para suprimir el crecimiento tumoral en humanos. El material de empaque contiene una etiqueta o un folleto de empaque que indica que la arglabina o un derivado de la misma se pueden utilizar para suprimir el crecimiento tumoral en humanos. La dimetilaminoarglabina y las sales de la misma f rmacéuticamente aceptables son derivados de la arglabina que son particularmente útiles en productos elaborados. En una modalidad alterna, la invención se refiere a las composiciones y estuches que comprenden un primer agente quimioterapéutico que incluye arglabina o un derivado de la misma y un segundo agente quimioterapéutico. 52/70 El segundo agente quimioterapéutico no es arglabina o un derivado de la misma. Estas composiciones son eficaces para suprimir el crecimiento tumoral en humanos. La dimetilaminoarglabina o una sal de la misma farmacéuticamente aceptable es un derivado de la arglabina particularmente útil. Se pueden usar en la composición diversas clases de agentes quimioterapéuticos , entre los que se incluyen agentes alquilantes, antimetabolitos , alcaloides de la vinca, antibióticos o complejos de coordinación del platino. Por ejemplo, se pueden utilizar agentes alquilantes como las mostazas de nitrógeno ciclofosfamida y sarcolisina, aunque también son apropiados otros agentes alquilantes como la metilnitrosourea. Se pueden utilizar los antimetabolitos como el metotrexato análogo del ácido fólico o análogos de la pirimidina como el fluorouracilo o 5-fluorouracilo, así como los alcaloides de la vinca como la vinblastina o la vincristina. Un antibiótico como la rubidomicina puede ser apropiado como agente quimioterapéutico, así como los complejos de coordinación del platino como el cisplatino. Varios agentes quimioterapéuticos se pueden combinar con la arglabina o un derivado de la misma. Por ejemplo, la vincristina y la ciclofosfamida o la vincristina y la vinblastina se pueden combinar con la arglabina o un derivado de la misma. La invención también se relaciona con un método 52/70 para suprimir el crecimiento tumoral en un paciente humano administrando a éste una cantidad de una composición que incluye un primer agente quimioterapeutico que incluye la arglabina o un derivado de la misma y un segundo agente quimioterapeutico eficaz para suprimir el crecimiento tumoral en humanos. El segundo agente quimioterapeutico no es la arglabina o un derivado de la misma. Estas composiciones proporcionan un efecto antitumoral intensificado y también pueden impedir el desarrollo de metástasis. En particular, estas composiciones son útiles para vencer tumores que son resistentes a medicamentos. Los agentes se pueden administrar en forma separada o como una combinación. La toxicidad se puede disminuir administrando arglabina o un derivado de la misma varias horas antes de administrar el agente de quimioterapia. Las composiciones pueden ser administradas por cualquier vía. La invención también se relaciona con un método para disminuir el efecto inmunodepresor de un agente de quimioterapia en un paciente humano administrando al paciente una cantidad de arglabina o un derivado de la misma eficaz para aumentar el sistema inmunológico del paciente en el tratamiento del paciente con el agente de quimioterapia. El sistema inmunológico se puede aumentar, por ejemplo, incrementando el número total de leucocitos, linfocitos T, linfocitos B o las inmunoglobulinas . 52/70 La invención se describirá adicionalmente en los ejemplos siguientes, los cuales no limitan el alcance de la invención descrita en las reivindicaciones.
Ejemplos Ejemplo 1: Aislamiento de la Arglabina - El ajenjo suave Artemisia glabella Kar. et ir. Es una planta perenne que se extiende en las colinas de la estepa árida de Kazajstán. Las partes aéreas de A. glabella, incluyendo las hojas, brotes, capullos de flor y tallo, contienen lactonas sesquiterpénicas entre las que se incluye a la arglabina, a lo largo de la etapa de vegetación de la planta (Cuadro I) .
CUADRO I Se utilizó una variedad de disolventes para extraer las lactonas sesquiterpénicas del material vegetal seco (Cuadro II) . Se encontró que extrayendo las lactonas a partir del estado de floración de la planta tres veces con 52/70 cloroformo a 45-50° se producía el rendimiento más alto.
CUADRO II Para las extracciones se usó un dispositivo de extracción que consiste de un extractor continuo a contraflujo, un dispositivo de carga y tres recipientes aislados del ambiente exterior. El recipiente del disolvente tiene filtro, destilador con un evaporador y condensador y una capacidad amortiguadora. El recipiente del agente de secado consiste de un secador, centrífuga, enfriador, ventilador y calentador. El recipiente del agua 52/70 de enfriamiento incluye un cristalizador con ventilación. El dispositivo de extracción también tiene un desodorizante con ventilador, un tanque de desperdicios y un colector de extracto . Aproximadamente 7.7 kg de material seco de Artemisia glabella Kar. et Kir. se colocaron en el dispositivo de extracción y se mezclaron en forma continua con el disolvente a medida que el material se movía a través de la columna del extractor. El disolvente se desplaza en dirección opuesta a la del material vegetal seco y gradualmente llega a saturarse con las sustancias extraídas. A medida que el disolvente saturado se descargaba, éste se filtraba primero para eliminar partículas de material vegetal, después se evaporó. Las partículas vegetales filtradas se hicieron recircular a través del extractor para una segunda extracción. Los vapores provenientes de la evaporación se enviaron al condensador. Del condensador, se recuperó disolvente puro y hizo recircular al dispositivo de extracción. Las superficies de condensación en el condensador se enfriaron con agua bombeada desde el cristalizador en donde el agua se enfrió previamente con aire exterior inyectado en el ventilador. Debido al enfriamiento con aire vaporizado en el cristalizador, el agua se puede enfriar a temperaturas considerablemente menores a la temperatura ambiente. 52/70 Las sustancias extraídas refinadas a partir del disolvente están en forma de una brea. Durante este proceso, se recuperó aproximadamente 7% del material vegetal (539 gramos) . La brea se refino posteriormente mediante la adición de dos volúmenes (aproximadamente 1.08 L) de etanol a 60°C con agitación continua hasta disolver la brea. Se añadió agua destilada, calentada a aproximadamente 70°C en una proporción de aproximadamente 2:1 de alcohol a agua. La solución brea-alcohol-agua se agitó vigorosamente por 30 minutos, después se dejó a temperatura ambiente por aproximadamente 24 horas o hasta que se formó un precipitado. La solución alcohol agua se filtró a través de un filtro cerámico a vacío. El procedimiento se repitió con algún precipitado que quedó después de la filtración. El filtrado se evaporó en un rotavapor y el alcohol se destiló al vacío en forma de una mezcla azeotrópica de agua con un contenido entre 68% y 70% de alcohol. Después de la destilación del alcohol, la solución acuosa dio aproximadamente 286 gramos de brea refinada. La brea refinada se separó en componentes individuales en una columna de gel de sílice KCK, a presión, utilizando benceno como eluyente . Las fracciones de benceno se recolectaron y se analizaron para determinar arglabina empleando cromatografía en capa fina (TLC) 52/70 (silufol, benceno-etanol , 9:1). Las fracciones que contenían arglabina se destilaron para eliminar el benceno. La arglabina en esta etapa tiene un color amarillo. Se produ eron aproximadamente 33 g de arglabina, con un rendimiento de aproximadamente 11.7%. La arglabina se recristalizó disolviéndola en hexano en una proporción de producto a hexano de 1:10 (p/v) y calentando. Después de que la arglabina estuvo en solución, el producto se filtró a vacío. Los cristales de arglabina se aislaron del filtrado a temperatura ambiente.
En esta etapa se recuperaron aproximadamente 21 g de arglabina. La arglabina tiene una estructura de 1(R), 10 (S) -epoxi-5 (S) , 6(S), 7 (S) -guaya-3 (4) , 11 (13) -dien-6, 12-olido. La estereoquímica de la arglabina se determinó por análisis de rayos X. La unión del penteno y el anillo heptano y de los anillos de heptano y ?-lactona en dos moléculas cristalográficamente independientes de arglabina es transoide. Los ángulos de torsión de OjC^C.H,. son -142(1) y -136(2)° y de H6C6C7H7 son -167(2) y -159(3)°, respectivamente. El anillo de penteno acepta la conformación la-sobre (??1^ 2.9 y 1.5°) y el anillo heptano es 7a, 1, ??ß-cadena (AC7S = 2.7 y 4.7°). El grupo metilo por el átomo C-10 tiene una a-orientación ecuatorial. La conformación del anillo ?-lactona fue entre 52/70 7 -sobre y 6ß , 7a-semisilla pero más cercana a la última (AC122 = 2.0 y 6.1°) . El espectro de RMN de la arglabina se trazó en un aparato Varían HA-100D en CDCl . Los desplazamientos químicos se dan en escala-d a partir de la señal T C aceptada para 0. Hay dos singletes de tres protones a 1.34 (metilo en epóxido) y en 1.94 ppm (metilo en doble enlace) . Un doblete de protón simple se registró en 2.95 ppm con J=10 Hz (protón en C) . Un triplete se protón simple se detectó con el centro en 3.97 ppm con J=10 Hz (protón de lactona) . Se obtuvieron dos dobletes de protón simple en 5.42 ppm con J=3 Hz y 6.1 ppm con J=3Hz (exometileno en ciclo de lactona) y una señal de protón simple en 5.56 (protones vinílieos) . La estructura de la arglabina (Figura 1) se confirmó con base en el espectro de RMN del compuesto aislado y de los de las lactonas sesquiterpénicas relacionadas arboresciena y ludartina. Resumen de las características de la arglabina: Incolora, Punto de Fusión de aproximadamente 100-102°C (hexano) ; [a]20D +45.6° (c 0.3, CHC13) ; bandas de IR (KBr) 1760, 1660, 1150, 1125 cm"1; "H-RMN (400 MHz . CDC13) d 1.34 (3H, s, H-14) , 1.94 (3H, s, H-15), 2.95 (1H, d, J 10Hz, H-5), 3.97 (1H, t, J 10Hz, H-6), 5.56 (1H, br s, H-3), 5.42 (1H, d, J 3Hz, H-13a) , 6.10 (1H, d, J 3Hz, H-13b) . 2/70 Ejemplo 2: Derivados de Arglabina - Para ayudar al lector, los nombres de los diferentes compuestos enunciados abajo son seguidos de números para facilitar la identificación con los compuestos representados en las figuras . Se utilizaron reactivos que afectan el grupo epóxido u olefina de la arglabina para derivar la arglabina. La epoxidación del doble enlace de la olefina trisustituída de la arglabina 1 con ácido peracético (Figura 1) se dio con alto rendimiento y 95% de estereoselectividad, formando 3ß, 4ß-epoxiarglabina 2 (1 (10) , 3 (4) -diepoxi-guay-11 (13) -en-6, 12-olido) . Se utilizó cromatografía en columna de gel de sílice con etiléter para recuperar la epoxi arglabina 2 con un rendimiento aproximado del 65%. Se emplearon IR y RM para confirmar la estructura de la epoxiarglabina 2. Resumen de las características de la epoxiarglabina 2: Punto de Fusión 149-151°C (Et20-CH2C12 ) ; [CC]22D +94.0° (c 1.7, CHC13); bandas de IR (KBr) 1760, 1670 cm~\- 'H-RM (400 MHz, py-d5) d 1.30 (3H, s, H-14), 1.68 (3H, s, H-15), 3.31 (1H, s, H-3), 4.11 (1H, t, J 10Hz, H-6), 5.43 (1H, d, J 3Hz, H-13a) , 6.16 (1H, d, J 3Hz, H-13b) . El tratamiento de la epoxiarglabina 2 con una solución éter-acetona HCl produjo diclorhidrinas 3 y 4 (Figura 1) . Se observó una apertura de ambos grupos epoxi con un rendimiento de 60% y 95% de regioselectividad. 52/70 Las diclorhidrinas 3 y 4 se diluyeron con agua, se lavaron con NaHC03, y se purificaron mediante cromatografía en columna de gel de sílice utilizando Et20-iPr20 en una proporción de 1:1. Se usaron datos espectrales de IR y RMN para confirmar la estructura. Resumen de características de las diclorhidrinas 3 y 4 : 3 (60%) punto de fusión 190-191°C; [ ]2°D -90.1°C (c 0.34 acetona); bandas de IR (KBr) 3465, 1750, 1670 cm"1; *H-RMN (400 MHz , py-d5) d 1.61 (3Hz, s, H-14), 1.62 (3H, S, H-15), 4.42 (1H, dd, J10, 7Hz, H-3), 4.48 (1H, t, J 10Hz, H-6), 5.52 (1H, d, J, 3Hz, H-13a) , 6.04 (1H, d, J 3Hz, H-13b). 4 (5%) punto de fusión 176-178°C (CH2C12-Et20) ; [a]24D + 23.25 (c 0.43, CHCl3) ; bandas de IR (KBr) 3680, 1770, 1670 cm"1; 'H-RMN (400 MHz), py-d5) d 1.41 (3H, s, H-14); 1.57 (3H, s, H-15), 3.39 (1H, d, J 10Hz, H-5), 3.42 (1H, s, 10-OH) , 4.05 (1H, d, J 5.5Hz, H-3), 4.40 (1H, s, 4-OH) , 4.55 (1H, t, J 10Hz, H-6), 5.54 (1H, d, J 3Hz, H-13a) , 6.21 (1H, d, J 3Hz, H-13b) . Otros derivados se generaron mediante bromacion e interacción con N-bromosuccinimida en acetona acuosa, dando como resultado la formación de bromhidrinas móviles en los dobles enlaces trisustituídos y bromacion parcial del grupo exometileno. La 3,4 dibromoarglabina 5 se produjo tratando la arglabina 1 con Br2 y tetracloruro de carbono a 0°C. El tratamiento de la arglabina 1 con una solución de metanol HCl dio una mezcla de clorhidrinas 6/7 separable por cromatografía en una proporción aproximada de 6:1 con alto rendimiento (Figura 1). Simultáneamente, se observó el enlace parcial de elementos HCl al doble enlace exometilénico mediante una reacción tipo Michael. La epoxidación del regioisomero 6 predominante con ácido peracético en cloroformo dio como resultado una mezcla de isómeros cromatográficamente separables de epoxiarglabin clorhidrinas 8/9 en una proporción de 1:1. Las estructuras de las clorhidrinas anteriormente desconocidas 6-9 se establecieron con base en análisis elemental y espectral, tomando en consideración los resultados del epóxido 8 por rayos x. El reflujo de aproximadamente 550 mg de arglabina 1 con aproximadamente 15 mi de acetonitrilo y una gota de HBF4 por 1.5 horas dio como resultado un diol 10 como producto principal y su isómero 11 y el dieno 12 en menor rendimiento (Figura 2). Las reacciones se neutralizaron, se diluyó con agua, se extrajo con cloroformo, después se purificó por cromatografía en columna (10, petróleo-éter etílico 2:1; 11, petróleo-éter etílico 1:1; 12, petróleo-éter etílico 1:3). Resumen de las características del diol 10, isómero 11 y dieno 12: 10 punto de fusión 184-185°C (éter etílico); [a]21D +72.3° (c 0.3, CHC13); bandas de IR (KBr) 3440, 1770, 1680 cm"1; 'H-RM (400 MHz, py-d5) d 1.30 (3H, s, H-14) , 1.92 (3H, br s, H-15), 4.18 (1H, dd, J 10, 1Hz, H-6), 5.43 (1H, br s, H-3), 5.38 (1H, d, J 3.5Hz, H-13a) , 6.14 (1H, d, J 3.5Hz, H-13b) . 11; p.f. 149-151°C (CHC13-Et20) ; [CC]"D + 108.6° (c 0.3, CHCl3; bandas de IR (KBr) 3460, 1770, 1670 cm"1; 'H-RMN (400 MHz, py-d5) d 1.35 (3H, s, H-14), 1.92 (3H, br, s, H-15), 3.10 (1H, d, J 10Hz, H-5), 4.39 (1H, t, J 10Hz, H-6), 5.48 (1H, br s, H-3), 5.44 (1H, d, J 3.5Hz, H-13a) , 6.14 (1H, d, J 3.5Hz, H-13b) . 12 punto de fusión 220-222°C (EtOH) ; [cc]22D + 80.6° (c 0.57, CHC13) ; bandas de IR (KBr) 3350, 1770, 1680, 1550 cm"1; XH-RMN (400 MHz, py-d5) d 1.47 (3H, s, H-14), 1.92 (3H, br s, H-15), 4.32 (1H, t, J 10.5Hz, H-6), 5.24 (1H, br s, H-2), 5.50 (1H, br s, H-3), 5.41 (1H, d J 3.5Hz, H-13a) , 6.15 (1H, d, J 3.5Hz, K-13b) . El 1,10-epímero de la arglabina, la epiarglabina 13 se sintetizó adicionando aproximadamente 0.1 mi de POCl3 a una solución fría (aproximadamente 0°C) de 120 mg de diol 10 en piridina. (Figura 2) . Después de agitar por 24 horas a aproximadamente -5°C, la reacción se preparó para extracción con éter etílico. Después de lavar con HCl al 5% y agua, el residuo se cristalizó de petróleo éter etílico para dar 40 mg de 1 , 10-epiarglabina 13. Resumen de las características de 1,10-epiarglabina 13: punto de fusión 193-194°C (EtOH); [ ]2°D +78.4° (c 0.43, CHC13) ; bandas de IR (KBr) 1760, 1665, 1150 cm"1; 'H-RMN (400 MHz, py-d5) d 1.30 (3H, s, H-14) , 1.90 (3H, br s, H-15), 2.66 (1H, m, H-5), 4.18 (1H, dd, J 14.5, 12.5Hz, H-6), 5.43 (1H, m, H-3), 5.38 (1H, m, H-3), 6.14 (1H, d J 3.5Hz, H-13b) . La interacción de la arglabina 1 y la epoxiarglabina 2 con bencenamina, dimetilamina y morfolina en un medio de alcohol procede quimioselectivamente como una reacción de Michael en el doble enlace activado de estas moléculas, dando como resultado de 56 a 85% de los derivados correspondientes 14a-d y 15a-d (Figura 3). La configuración del residuo aminometilo se comprobó espectralmente . Síntesis de la dimetilaminoarglabina 14b: La arglabina 1 se mezcló con 0.21L de alcohol y se calentó a 40 °C hasta que la arglabina se disolvió completamente, Después de filtrar, se añadió gota a gota una solución al 33% de dimetilamina (0.023 L) con agitación. La mezcla se dejó por 24 horas a temperatura ambiente. La reacción se monitoreó con TLC en placas de silufol. Después de que la reacción de aminación se completó, la mezcla se calentó a 52 °C y el alcohol se destiló a vacío. Aproximadamente 0.63 L de cloroformo se añadieron al disolvente restante y se agitó por 30 minutos. La mezcla se vertió en un embudo de separación de donde se colectó el cloroformo que se 52/70 encontraba en la parte inferior del embudo. La extracción de la capa acuosa con cloroformo se repitió dos veces más. Se usó sulfato de magnesio para secar el cloroformo colectado. La mezcla de cloroformo-sulfato de magnesio se agitó por 30 minutos, después se filtró a vacio para eliminar el cloroformo. Se produjeron aproximadamente 22 g de dimetilaminoarglabina 14b. La dimetilaminoarglabina 14b se purificó primero disolviendo en 5 volúmenes (p/v) de cloroformo después mezclando con aproximadamente 3 volúmenes (p/p) de gel de sílice KCK. Después de la evaporación del disolvente, el material seco se separó por cromatografía en una columna de gel de sílice KCK preparada en una proporción de 1:22 de aducto a sorbente. La columna se eluyó mediante una mezcla de diéter de petróleo y éter sulfúrico (1:1, 1:2). Se colectaron fracciones de aproximadamente 14 a 17 mi y se monitorearon con TLC. La dimetilaminoarglabina 14b se recristalizó de la fracción con cloroformo y éter (1:1) . Resumen de características de dimetilaminoarglabina 14b: punto de fusión 94.5-95.5°C, [ ]21D + 47° (c 1.7, CHC13) ; análisis elemental 70.41% C, 8.7% H, 4.82% N (C12H2503N) ; IR (> CHCl max) 3050-3000 (resalte), 2940, 2860, 2835, 2780, 2410, 1770 (carbonilo de lactona) , 1650 (doble enlace) , 1550-1530 (banda ancha) , 52/70 1470, 1450, 1385, 1335, 1180, 1150, 1140, 1125 cm"1 (grupo epoxi); MS (m/z, intensidad en %) M+ HCl 291 (5.07, HC1), 247 (0.5), 188 (1,2), 115 (2,19), 105 (1,6), 97 (3,2), 77 (3,5), 70 (6,2), 67 (2,9), 58 (100); RM (200 MHz, CDCl3, escala d; multiplete, P.P.M. KCCB) 1.90 (3H), 2.27 (6H), 4.00 (1H) = 9.5) singlete amplio 5.53 (1H) , d.m. 2.66 (2H, J4 = J2 = 5.5). El clorhidrato de dimetilaminoarglabina 14d se produjo disolviendo la dimetilaminoarglabina 14b con 0.22 L de alcohol y calentando a 40°C. Después de filtración a vacio, el gas de cloruro de hidrógeno se produjo por adición de 0.2 kg de cloruro de sodio y gotas de ácido sulfúrico concentrado. La reacción se monitoreó mediante TLC. Cuando la reacción fue total, la mezcla se calentó a 52 °C y el etanol de destiló a vacío. Aproximadamente 0.9 L de acetato de etilo se adicionaron a la brea restante con agitación intensa. El precipitado resultante dio aproximadamente 21 g de clorhidrato de dimetilaminoarglabina 14d. Aproximadamente se añadió 0.1 L de cloroformo para disolver el clorhidrato de dimetilaminoarglabina 14d, después se destiló para eliminar el cloroformo. La brea que quedó se mezcló con 0.83 L de acetato de etilo con agitación intensiva. La mezcla se enfrió para asegurar la precipitación completa del producto. El precipitado 52/70 resultante se filtró a vacío para eliminar todo el disolvente. El producto final se secó a vacío en anhidrona y se disolvió con agua destilada apirética en una proporción de 2 gramos de material seco a 100 mi de agua. El rendimiento del clorhidrato de dimetilaminoarglabina 14d fue aproximadamente de 20 gramos (95% de la cantidad estimada en esta etapa) . Resumen de las características del clorhidrato de dimetilaminoarglabina 14d: punto de fusión 203-204°C (etanol-éter) ; [oc]21D + 61.53° (c 0.52, CHC13) ; IR 33050-3000 (banda ancha), 2980, 2970 (banda ancha intensa, N-H) ; 2890, 2970, 2360-2300 (banda ancha), 1775 (carbonilo de lactona) , 1650 (banda débil), 1480, 1450, 1385, 1345, 1185, 1140-1120, 1100, 1065, 1040, 1010 cnf1; MS (m/z, intensidad en %) 291 (3.01, M+ HC1), 115 (2.19), 105 (1.5), 97 (3.2), 91 (4.0), 77 (3.5), 70 (16.2), 67 (2.9), 58 (100); RMN (200 MHz, CDC13, escala 6, multipletes, p.p.m. KCCB) c. 1.30 (3H) , c. 1.87 (3H), c. 2.87 (6H), d.m. 4.17 (1H, Jl = J2 = 10Hz), singlete amplio 5.55 (1H) . La 11,13 dihidroarglabina 16 se produjo tratando la arglabina 1 con etanol y H2/Ni.
Ejemplo 3; Liofilización - La solución de clorhidrato de dimetilaminoarglabina en agua se filtró a través de un tapón de gasa de algodón u 8 capas de gasa y de un filtro 52/70 illipor estéril a un recipiente de vidrio estéril. La solución se extrajo del recipiente a vacío a una bureta graduada y se tomó una alícuota en viales o ampolletas de 2 mi. Los viales o ampolletas llenas se mantuvieron a -40°C en estantes estériles por 24 horas antes de secar en un liofilizador KC-30 o LS-45. Después de este período de templado, se inició el proceso de secado. La temperatura se mantuvo a -40°C por 2 horas, después se aumentó en forma gradual a aproximadamente 50 °C (más o menos aproximadamente 5°C) . La transición a 50°C aproximadamente se dio en aproximadamente 12 a 13 horas de secado. La temperatura final no excedió a +60°C. La duración total del tiempo de secado fue de 24 horas. Después de esto, los viales con el compuesto seco se cubrieron inmediatamente con tapas y se envolvieron. Las ampolletas se sellaron. Cada vial o ampolleta contenía aproximadamente 0.04g de la preparación. Los viales o ampolletas que no se filtraron en condiciones estériles se esterilizaron en autoclave durante 20 minutos a 120°C, a una presión de 1.2 atm. Alternativamente, la solución del clorhidrato de dimetilaminoarglabina preparado se filtró a través de un tapón de gasa de algodón u 8 capas de gasa. Aproximadamente 200 mi de la solución se vaciaron en frascos de 500 mi, se cubrieron con gasa de algodón y se envolvieron con papel engrasado. Los frascos llenos se esterilizaron en autoclave 52/70 durante 30 minutos a 120°C a una presión de 1.2 Atm. La solución estéril se enfrió a temperatura ambiente. Empleando técnica estéril, se vertieron 2 mi de la solución a viales de 10 mi estériles. Los viales se liofilizaron entonces como se describió arriba. Después de la liofilización cada vial contenía aproximadamente 0.04 g del compuesto . El rendimiento del compuesto fue de 17 g, equivalente a 88.2% para esta etapa y 0.22% total de material natural seco. El material liofilizado tenia un color blanco-pajizo y sabor amargo. La autenticidad de la preparación se verificó determinando su punto de fusión y trazando sus espectros de IR, masa y RMN. La calidad de la preparación se controló diluyendo 1 mg de la preparación con 0.2 mi de agua. La adición de una gota de solución de vainillina saturada en ácido sulfúrico concentrado cambió la mezcla a color violeta, indicando la presencia de terpenos . El material liofilizado se puede almacenar por 3 años .
Ejemplo 4; Aislamiento de Otras Lactonas Sesquiterpénicas - Las estructuras para los compuestos 17 a 21 se muestran en la Figura 4. La glabelina 17 también se aisló a partir de Artemisia glabella Kar. et Kir. El rendimiento del compuesto a partir de la materia prima seca fue 52/70 aproximadamente de 0.016%. La estructura de la glabela se determinó por IR, UN, RMN, C13 RMN, espectro de masas y transiciones químicas. Resumen de Características de la Glabelina: punto de fusión 130-131°C (petróleo-diéter); [ ]20D + 90.9° (SO, 17, cloroformo) . Se preparó 3-ceto-eudesm-l ( 2 ) , 4(5), 11(13)-trien-6, 12-olido (1) 18 mediante deshidratación selectiva de -sautonina con un rendimiento de 45% y se puede producir a partir de más de 20 especies de ajenjo. La estructura se determinó por espectros de IR, UV y RMN. Resumen de características de 18: punto de fusión 145-147°C (metanol); [oc]18D -10.4° (con 1, 12; cloroformo) . La anobina 19 se extrajo a partir de Achilles nobilis L. La estructura 2a, 3a-epoxi-4a, 10a-dioxi-5,7a(H), 6ß (H) -guay-11 (13) -en-6, 12-olido de la anobina 19 se estableció mediante espectros de IR, RMN y masas y transiciones químicas. La epoxi estafiatona 20 se produjo isomerizando una lactona terpénica disponible como la etafiatina a través de la isomerización con eterato de trifluoruro de boro después epoxidando con ácido re-clorobenzoilo . La estructura 3-ceto-10a(14)-epoxi-l, 5, 7a(H) 4 , 6ß (H) -guay-11 (13 ) -en-6, 12-olido se determinó mediante espectros de IR, RMN y masa. 52/70 La gaigranina 21 se produjo mediante extracción de la parte aérea de Gaillardio grandiflora con cloroformo separando después por cromatografía en una columna de gel de sílice. La estructura de la gaigranina 21 se confirmó por espectros de IR, UV, RMN y Cesy.
Ejemplo 5; Actividad in vitro de la Arglabina y Derivados-Viabilidad de las Células - Células transformadas y cultivos primarios de células normales se incubaron con concentraciones variables de clorhidrato de dimetilaminoarglabina para determinar su efecto en la viabilidad de las células. Se utilizaron las líneas celulares mastocitoma de ratón (P-815), mieloma (Z-P3x63Ag8.653 y Pai) y eritroleucemia humana (K-562). Se aislaron cultivos primarios de hepatocitos normales de ratón a partir de hígado de ratón empleando colagenasa. Los esplenocitos de ratón se aislaron utilizando un homogenizador de vidrio. Las células de médula se obtuvieron lavando la médula ósea. Ver, por ejemplo, Shears, S.B. y Kirk, C.J. (1984), Biochem. J. 219:375-382. Las células se cultivaron en medio RP I-1640 suplementado con 10% de suero fetal bovino, L-glutamina 100 M y 50 g/ml de gentamicina a 37°C en 5% de C02. Las células se sembraron en placas de 24 cavidades a una 52/70 densidad de 50,000 células/cavidad y se cultivaron hasta cerca de confluencia, aproximadamente 2 días, después se transfirieron a placas de 96 cavidades a la misma densidad. Las líneas celulares transformadas se incubaron por 18 horas con clorhidrato de dimetilaminoarglabina, en concentraciones que variaron entre 1.5 µg/ml y 100 µg/ml . La viabilidad de las células se determinó por exclusión con azul trypan. Como se muestra en la Figura 5, se observó una doble disminución en viabilidad a 6 µg/ml para las células X-653 y K-562 y a 12 µg/ml para células P-815. Aproximadamente 25% de células K-562 y X-653 sobrevivieron a la concentración de 12 µg/ml y la misma proporción de células P-815 sobrevivieron a una concentración de aproximadamente 25 µg ml . Concentraciones mayores de clorhidrato de dimetilaminoarglabina disminuyeron más la viabilidad de todas las células transformadas. La proliferación de las células transformadas se evaluó mediante incubación de timidina 3H-marcada en el medio por 18 horas. Al final del período de tiempo especificado, la proliferación se midió contando la cantidad de timidina 3H-incorporada . La incorporación de timidina proporciona una medida cuantitativa de la velocidad de la síntesis de ADN, que normalmente es directamente proporcional a la velocidad de la división 52/70 celular. La Figura 6 muestra que la proliferación de células X-653 y P-815 fue bloqueada eficazmente a concentraciones de 6 µg/ml y 12 µg/ml, respectivamente. Se incubaron cultivos primarios de células normales por 18 horas con una concentración de clorhidrato de dimetilaminoarglabina que varió entre 10 g/ml y 2560 µg ml . La viabilidad se midió mediante exclusión con azul trypan. La Figura 7 muestra que un aumento en la concentración del clorhidrato de dimetilaminoarglabina disminuye la viabilidad de las células normales, pero a concentraciones mucho mayores fue necesario exterminar las células normales, comparadas con las células transformadas. A una concentración de 320 µg/ml, el número de esplenocitos viables se redujo en 50% en comparación con el control. A concentraciones de 640 µg/ml y 1280 µg/ml, 40% y 10%, respectivamente, de los esplenocitos fueron viables todavía. A las mismas concentraciones, aproximadamente 50% y 25% de hepatocitos fueron viables aún. Las células de médula ósea fueron más sensibles al clorhidrato de dimetilaminoarglabina. A una concentración de 160 µg ml, sólo aproximadamente 50% de las células de médula fueron viables todavía. Aumentando la concentración a 320 µg/ml se redujo la viabilidad a aproximadamente 25%.
Prenilación de Proteína - Las células Pai de mieloma de 52/70 ratón se cultivaron en presencia de 60 µ? de clorhidrato de dimetilaminoarglabina . Las células se recolectaron por centrifugación a 600 x g por .10 minutos y después se lavaron dos veces en PBS . Las células de control se cultivaron en ausencia del fármaco. Las células se solubilizaron en amortiguador de lisis (Tris 50mM, pH 7.4, EDTA 25mM, Tween 0.05%, NaCl 0.01 M) por 30 minutos en hielo. Los Usados se hicieron mediante homogeneización durante 5 minutos a 4°C y se precipitaron por centrifugación a 12,000 x g por 10 minutos. El sobrenadante se recolectó. Las proteínas se precipitaron con ácido tricloroacético y después se lavaron sucesivamente con etanol y éter etílico. Se realizó un desdoblamiento selectivo con naftol del enlace entre isoprenoides y proteínas tal como lo describe Epstein, W.W et al., (1991) Proc. Nati. Acad. Sci . USA 88:9668-9670. En general, se añadieron 5 mg de una mezcla 4:1 de naftóxido de potasio y naftol a aproximadamente 10 mg de proteína precipitada. Después de la adición de 50 µ? de dimetilformamida, los tubos se gasearon con argón, se taparon y se calentaron a 100°C entre ocho y 15 horas. Los productos de reacción se extrajeron con hexano y se analizaron por HPLC (Waters System) utilizando una columna Nova-Pac C18 de fase inversa de 0.4 x 15 cm. La columna se eluyó con agua al 20% en acetonitrilo a un flujo de 1.0 ml/minuto. Los productos de 52/70 desdoblamiento con naftol se detectaron a 360 nm (Figura 8) con una desviación de toda la escala de 0.01 unidad A. En el control (Figura 8A) , el derivado de la farnesilcisteína eluyó en 4.5 minutos y el derivado de geranilgeranilcisteína en 6 minutos. La proporción molar de geranilgeranilo a farnesilcisteína fue 6. La influencia del clorhidrato de dimetilaminoarglabina en la prenilación celular se muestra en la Figura 8B. Utilizando 60 µ? de clorhidrato de dimetilaminoarglabina, el pico correspondiente al derivado de farnesilcisteína no aparece en el cromatograma , mientras que el pico de geranilgeranilo aparece como en el control. Esto indica que el clorhidrato de dimetilaminoarglabina puede impedir la farnesilación de proteínas sin efectos significativos sobre la geranilgeranilacion.
Ejemplo 6: Actividad in vivo de la Arglabina y Derivados. En general, los compuestos en esta familia tienen baja toxicidad y son tolerados en dosis que exceden la dosis terapéutica. Se emplearon métodos de toxicología convencionales para determinar el LD50 para una inyección intraperitoneal de una solución al 2% de clorhidrato de dimetilaminoarglabina en sulfóxido de dimetilo (DMSO) en ratones (peso 20-22 g) y ratas (120-130 g) . El LD50 fue 190-220 mg/kg en ratones y 280-310 mg/kg en ratas. Una autopsia / 52/70 de los animales reveló órganos internos pletóricos, vasodilatación del mesenterio e intestinos. Dosis simples tolerantes en ratas y conejos no alteraron la función de hígado, ríñones, sistema cardiovascular, respiración o sistema nervioso periférico. La presión sanguínea se mantuvo. Además, no se observaron efectos pirogénicos, alergénicos, teratogénicos o embriotóxicos en animales. Las dosis máximas tolerables (MTD) de arglabina y derivados se determinaron mediante administración intraperitoneal diaria a ratas, cobayos o ratones y administración intravenosa diaria a conejos en un período de cinco a 20 días. En general, la MTD varió entre aproximadamente 20 mg/kg y 50 mg/kg para todos los compuestos probados. Por ejemplo, la dosis máxima de clorhidrato de dimetilaminoarglabina en una solución de DMSO varió entre 20 mg/kg en conejos, 30 mg/kg en ratones, 45 mg/kg en cobayos y 50 mg/kg en ratas. Se observaron cambios reversibles en glicólisis y respiración tisular en suero sanguíneo y tejido hepático, se observaron cambios de balance hormonal y elevación de proteína en orina después de administración intraperitoneal diaria prolongada de una solución acuosa al 2% de clorhidrato de dimetilaminoarglabina . 52/70 Inhibición de Crecimiento Tumoral en Ratas - Se implantaron tumores humanos en ratones y ratas (sarcoma M-1; Linfosarcoma de Pliss; carcinosarcoma de worker; carcinoma de Geren; Sarcoma 45; Sarcoma 180; Sarcoma 37; Cáncer Alveolar de hígado PC-1; adenocarcinoma sólido de Erlich; cáncer de mama (PMK) ; Leucemia linfocítica P-388; leucemia linfoide L-1210; variantes de linfosarcoma de Pliss resistente a rubidomicina, prospidina y leucoefdina; y variantes de sarcoma 45 resistentes a sarcolisina, 5-fluorouracilo, prospidina y rubidomicina) . El tratamiento empezó 24 horas después de la implantación en ratones y a partir del tiempo medible se detectaron nodos tumorales en ratas . Los animales para los controles se formaron en grupos de 10 a 15. Para estimar la actividad antitumoral del compuesto, el por ciento de inhibición de crecimiento tumoral se determinó después del final del tratamiento. Los resultados se analizaron estadísticamente empleando la prueba T. Histológicamente, la regresión de los tumores estuvo acompañada por distrofia, necrosis de células tumorales, alteración de suministro sanguíneo a tejido tumoral y sustitución con tejido conectivo. Las Cuadros III y IV resumen el por ciento de actividades de inhibición de crecimiento tumoral de la arglabina y de diversos derivados contra tumores tanto resistentes a fármacos como no resistentes. Para comparar, 52/70 la Cuadro III también contiene el por ciento de inhibición de crecimiento tumoral para colquicina, un compuesto con actividad antitumoral conocida. La introducción de halógenos como la bromo y cloro parece aumentar la actividad anti-tumoral . La epoxidación de la arglabina en el doble enlace C,-C, también aumenta la actividad antitumoral. La dimetilaminoarglabina y el clorhidrato de dimetilaminoarglabina fueron eficaces contra una amplia gama de tumores. Una ventaja del clorhidrato de dimet laminoarglabina es que es soluble en agua. 2/70 Cuadro III Actividad Antitumoral de la Arglabina y sus Derivados Nombre de la Dosis Inhibición de Crecimiento tumoral, % Lactona Ses- mg/kg quiterpénica Linfo- Carcinosar Carcino- Sarco- Sarco- SarcoCáncer Cáncer Leucemia PC-1 L-1210 sarcoma coma de sarcoma ma-45 ma-37 ma M-l de mama alveolar P-388 PALT Pliss Worker de Geren RMC-1 de hígado Arglabin ( 1 ) 30 57.6 41.1 48.0 23.0 55.6 32.1 +43.0% en 32.1 +34.1% superv en superv 11, 13-dihidro- 30 68.0 46.4 84.4 64.1 65.5 68.7 arglabina (16) Epoxiarglabina 30 72.1 36.4 88.8 78.4 59.6 70.4 (2) Dimetilamino- 50 56.0 30.0 85.1 79.0 42.0 80.1 arglabina (14b) 30 78.2 30.0 85.1 79.9 62.1 Dimetilamino- 50 64.6 43.1 31.4 58.1 38.0 51.0 epoxiarglabina (15b) Dibromoargla- 50 51.0 17.1 90.0 74.2 69.0 46.9 bina (5) Arglabina 50 49.1 38.4 43.1 21.0 31.0 20.4 clorhidrina (6) Dicloro 50 29.0 63.2 71.4 70.9 51.0 92.1 dihidroxi arglabina (3) Cuadro III continuación * p< 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0.001 Cuadro IV Actividad Antitumoral y Toxicidad de la Arglabina y sus Derivado *** p < 0.001 Terapia de Combinación - Los resultados de las pruebas en animales permiten el diseño del esquema más racional de tratamiento con la dimetilaminoarglabina y otros fármacos antitumorales . Se observó una desaparición completa de tumores resistentes a prospidina y rubidomicina en 60% de ratas tratadas con la combinación de clorhidrato de dimetilaminoarglabina, cisplatino y metotrexato. Además, esta combinación superó la resistencia cruzada del sarcoma-45 al metotrexato, sarcoma-45 al 5-flurouracilo y del linfosarcoma de Pliss a la rubidomicina. No se observaron muertes de animales con este tratamiento. La sensibilidad colateral del linfosarcoma de Pliss resistente a leucofedina después de la administración de sarcolisina estuvo acompañada por la completa desaparición del tumor en 60% de las ratas. La combinación del clorhidrato de la dimetilaminoarglabina y la sarcolisina, a la mitad de la MTD, causó un bloqueo en la síntesis de ADN (índice de inhibición de síntesis 94.1-97.1%) . Esta combinación no disminuyó el nivel celular sanguíneo . La combinación del clorhidrato de la dimetilaminoarglabina y la metilnitrosourea se administró en intervalos de 2, 4 ó 24 horas entre dos grupos. Se determinó que fue óptimo administrar el clorhidrato de 52/70 dimetilaminoarglabina dos horas antes de la administración de metilnitrosourea . La resistencia cruzada del sarcoma-45 a la prospidina y sarcoma-45 al 5-fluorouracilo, linfosarcoma de Pliss a la rubidomicina y linfosarcoma de Pliss a la prospidina fue superada con la combinación de clorhidrato de dimetilaminoarglabina y metilnitrosourea. Aproximadamente 60% de los tumores desaparecieron en las ratas sin reacciones adversas al fármaco. La administración de metilnitrosourea antes de la administración del clorhidrato de dimetilaminoarglabina disminuyó la actividad antitumoral y aumentó la toxicidad. Histológicamente, se observaron menos células polimórficas picnóticas pequeñas sin estructura clara después del tratamiento con la combinación de clorhidrato de dimetilaminoarglabina y metilnitrosourea en comparación con el grupo de control. Se encontró que el clorhidrato de dimetilaminoarglabina administrado 2 horas antes de la metilnitrosourea redujo la toxicidad. Se observaron los mismos resultados cuando el clorhidrato de dimetilaminoarglabina se administró dos horas antes de una mezcla de vincristina y vinblastina para el carcinoma de Geren y carcinosarcoma de Worker. El clorhidrato de dimetilaminoarglabina aumentó en forma moderada la duración de vida en los animales con tumores resistentes y no resistentes a fármacos. La 52/70 combinación de clorhidrato de dimetilaminoarglabina y otros fármacos antitumorales prolongaron más la duración de la vida. Por ejemplo, la combinación de clorhidrato de dimetilaminoarglabina y vincristina prolongó la vida 114% en animales con tumores resistentes a la metilnitrosourea . La combinación de clorhidrato de dimetilaminoarglabina y cisplatino, a la mitad de la MTD, prolongó la vida 117% en animales con L1210 resistente al metotrexato. Un buen efecto terapéutico se observó a partir de la combinación triple del clorhidrato de dimetilaminoarglabina, vincristina y ciclofosfamida a la mitad de la MTD comparada con la combinación doble de clorhidrato de dimetilaminoarglabina y vincristina o clorhidrato de dimetilaminoarglabina y ciclofosf mida . La combinación triple prolongó la duración de la vida en 209%. La combinación cuádruple de clorhidrato de dimetilaminoarglabina, vincristina, ciclofosfamida y cisplatino fue menos eficaz que la combinación triple. Esto puede deberse a la toxicidad aumentada de los fármacos antitumorales. El efecto del clorhidrato de dimetilaminoarglabina solo y en combinación con otros fármacos se estudió en el modelo de metástasis de linfosarcoma de Pliss resistente a fármacos. La metástasis en los nodos linfoides inguinales fueron los más sensibles 52/70 entre los nodos iniciales y resistentes a fármacos. Estos no se desarrollaron en 10% de los casos. La duración de vida para el clorhidrato de dimetilaminoarglabina solo, fue de 128% en comparación con el grupo de control. La combinación del clorhidrato de dimetilaminoarglabina y vincristina provocó la inhibición de crecimiento tumoral, con disolución del tumor, en 30% de las ratas. La duración de la vida se aumentó en 174% con la ausencia de cualquier metástasis nueva en los nodos linfoides inguinales. La combinación de clorhidrato de dimetilaminoarglabina y metotrexato prolongaron la duración de la vida 300% en animales con linfosarcoma de Pliss resistente a prospidina. La combinación lleva a una disminución de ocho veces en la frecuencia de la metástasis . Para revelar los posibles mecanismos de acción del clorhidrato de dimetilaminoarglabina contra los tumores iniciales y resistentes a fármacos y su metástasis, se utilizaron clorhidrato de dimetilaminoarglabina y sarcolisina, solo y en combinación, para el tratamiento de sarcoma 45 para investigar la alteración de la síntesis de ADN. Se observaron resultados ventajosos con sarcolisina y con la combinación de sarcolisina y clorhidrato de dimetilaminoarglabina en el caso del sarcoma 45 no resistente a fármacos. En el caso del sarcoma 45 resistente 52/70 a fármacos, el clorhidrato de dimetilaminoarglabina solo fue muy eficaz (índice de inhibición de ADN 99%) . Además, la inhibición de ADN aumentó después de 24 horas con la administración diaria en los 5 y 10 días subsiguientes. Esto indicó que la administración repetida de clorhidrato de dimetilaminoarglabina, más que una administración simple de la MTD, tuvo un efecto antitumoral acumulativo. La inmunidad de ratas con tumores iniciales y resistentes a prospidina con metástasis se estudiaron después del tratamiento con el clorhidrato de dimetilaminoarglabina "solo y en combinación con otros citostáticos . Se observó una mejora a la inmunodepresión encontrada después del tratamiento con sarcolisina y cisplatino, después del tratamiento de los tumores animales con el clorhidrato de dimetilaminoarglabina. La combinación de clorhidrato de dimetilaminoarglabina y sarcolisina o cisplatino aumentó los índices inmunológicos , particularmente si el clorhidrato de dimetilaminoarglabina se administró dos horas antes de los fármacos citostáticos. Estos resultados sugieren que el clorhidrato de dimetilaminoarglabina debilitó el efecto inmunodepresor de los citostáticos y normalizó el equilibrio inmune del cuerpo. Estos datos muestran que el clorhidrato de dimetilaminoarglabina disminuyó la citotoxicidad y aumentó la eficacia contra tumores resistentes a fármacos solo y en combinación . Modulación del Sistema Inmunológico - El efecto del clorhidrato de dimetilaminoarglabina se determinó en ratones intactos e inmunodeprimidos . Los ratones se inmunodeprimieron mediante la administración de 200 mg/kg de ciclofosfamida . La inyección de ciclofosfamida condujo a leucopenia considerable relacionada principalmente con linfopenia. La inmunidad humoral de los animales fue suprimida en considerablemente, así como la inmunidad mediada por células aunque en menor grado. Dos dosis de solución de clorhidrato de dimetilaminoarglabina al 2%, 50 y 100 mg/kg se inyectaron IP (vía intraperitoneal) en ratones híbridos blancos . La prueba de hemaglutinacion y la de sensibilidad de tipo retardado se determinaron antes y después de la administración del fármaco. Se determinó que una dosis simple de 50 mg/kg de clorhidrato de dimetilaminoarglabina no modificó el título de hemaglutinacion o de la reacción de hipersensibilidad de tipo retardado. Dosis de 100 mg/kg condujeron a una ligera disminución en el título de hemaglutinacion. Inyecciones IP repetidas de 10 a 50 mg/kg de clorhidrato de dimetilaminoarglabina se administraron durante 5 a 10 días para determinar el efecto de la administración prolongada. Se encontró que las dosis menores como de 10 y 20 mg/kg, aumentaron los títulos de hemaglutinacion por los días 5 y 10. La administración de dosis mayores, como 30 mg/kg, dieron por resultado un índice de la prueba de hemaglutinacion disminuido en el día 10. No se observó efecto sobre la reacción de hipersensibilidad de tipo retardado en el día 5, pero aumentó en el día 10. En ratones intactos, la inyección de 10 mg/kg aumentó el número total de leucocitos a través de un aumento en el número absoluto de linfocitos. El número relativo de neutrófilos se redujo ligeramente. Aumentar la dosis a 20 mg/kg no condujo a un aumento global en el número de leucocitos. La prueba de nitroazul tetrazolio se utilizó para evaluar la función de los neutrófilos. Se encontró que mientras que el número de neutrófilos disminuyó, la actividad de los neutrófilos no se alteró a 10 mg/kg. Con dosis mayores, 20 mg/kg, se observó una disminución en neutrófilos positivos al nitroazul tetrazolio, indicando una disminución en la función. La administración intraperitoneal diaria (IP) de 10 y 20 mg/kg de clorhidrato de dimetilaminoarglabina por 10 días a ratones intactos condujo a un cambio dramático en linfocitos T, linfocitos B y células exterminadoras naturales. A 10 mg/kg, la cuenta total de leucocitos aumentó a través de un incremento en las células exterminadoras naturales y los linfocitos T mientras que los linfocitos B permanecieron estables. Se encontró que el aumento en el número de linfocitos T fue consecuencia de un aumento en el nivel de subpoblacion de los auxiliares T. No se alteró el nivel de subpoblacion de supresores T. A una dosis mayor (20 mg/kg) , no se alteró el número global de leucocitos, aunque el número de linfocitos B disminuyó y el de linfocitos T disminuyó en menor grado. La prueba de nitroazul tetrazolio también disminuyó. En general, el efecto del clorhidrato de dimetilaminoarglabina en el sistema inmunológico depende de la dosis administrada. A dosis bajas (10 mg/kg), el clorhidrato de dimetilaminoarglabina aumentó los niveles de linfocitos T y B y de células exterminadoras naturales. El aumento en linfocitos T estuvo acompañado por un aumento en el nivel de la subpoblacion de auxiliares T de linfocitos T. Dosis mayores de clorhidrato de dimetilaminoarglabina (20 mg/kg) disminuyeron el número de linfocitos T y B, pero aumentaron otras poblaciones celulares, por ejemplo, las células exterminadoras naturales. La inyección de 10 mg/kg de clorhidrato de dimetilaminoarglabina a ratones inmunodeprimidos durante 10 días redujo la leucopenia y la linfopenia observada en los ratones. Por el décimo día de tratamiento, el número total de linfocitos en animales inmunodeprimidos no fue distinto de los valores obtenidos a partir de los animales intactos. 52/70 El número aumentado de linfocitos T estuvo acompañado por una elevación en la subpoblación de auxiliares T así como en la subpoblación de supresores T, aunque en menor grado. Los números de linfocitos B no se restablecieron completamente a los valores normales. Se obtuvieron datos inmunológicos adicionales a partir de una línea de ratas "Agosto", con peso entre 140 y 160 g, con y sin linfosarcoma de Pliss. Se examinaron cuatro índices, formación de roseta de eritrocitos espontánea, prueba de nitroazul tetrazolio, hipersensibilidad de tipo retardado y hemaglutinación, antes del tratamiento, durante el tratamiento (5 y 10 días) y 5 días después del tratamiento con clorhidrato de dimetilaminoarglabina . Aproximadamente 50 mg/kg de una solución al 2% de solución en agua de clorhidrato de dimetilaminoarglabina liofilizado se inyectaron IP, diariamente, por 10 días. Los resultados se resumen en la Cuadro V. En general, el clorhidrato de dimetilaminoarglabina liofilizado estimuló la hipersensibilidad tipo retardado, pero redujo los otros índices estudiados en ratas intactas. En ratas con Linfosarcoma de Pliss, se estimuló el sistema inmunológico , ya que aumentaron todos los índices estudiados. Una ventaja del clorhidrato de dimetilaminoarglabina liofilizado es que mejora el efecto inmunodepresor de los citostáticos 52/70 conocidos, como el 5-fluorouracilo y la sarcolisina.
CUADRO V Ratas Intactas Ratas con Linfosarcoma de Pliss Farmacocinébica - Los datos farmacocinéticos experimentales para el clorhidrato de dimetilaminoarglabina se obtuvieron utilizando 30 ratas criadas al azar de ambos sexos. Las ratas pesaron entre 200 y 220 gramos. En el análisis de todos los datos farmacocinéticos se utilizó cromatografía de gases y un programa de modelos FARM. 2 mg/kg de clorhidrato de dimetilaminoarglabina por vía intravenosa mostraron un nivel máximo de 30 µg/ml en suero sanguíneo en el transcurso de una hora. El clorhidrato de dimetilaminoarglabina se difundió rápidamente a través del organismo a partir de la sangre a los tejidos periféricos. 52/70 El volumen obvio de distribución fue grande, indicando que podía pasar a través de las membranas celulares y las barreras tisulares . La concentración más elevada de fármaco se acumuló en los pulmones y el bazo durante la primera hora después de la administración. Las máximas concentraciones en pulmón y bazo fueron 149.4 y 159 µg/g, respectivamente. En las primeras tres horas después de la administración, la concentración en el hígado y el sistema músculo esquelético fue 228.6 y 176.4 g/g, respectivamente. Se encontró que la preparación acumulada en el hígado se mantuvo durante un período más prolongado en comparación con otros tejidos. El clorhidrato de dimetilaminoarglabina tuvo la capacidad de penetrar a través de la barrera hematoencefálica . La concentración en el tejido cerebral fue de 23.9 g/g después de una hora y se estabilizó en 15.6 g/g en 24 horas. El clorhidrato de dimetilaminoarglabina se excretó muy lentamente. La vida media biológica fue de aproximadamente 46.8 horas en ratas, con un tiempo promedio de retención de aproximadamente 67 horas. La excreción renal procedió lentamente. La concentración en el riñon fue máxima después de tres horas. A las 24 horas los ríñones tenían la concentración más alta, 56.6 µg/g. La depuración total fue de 0.05 ml/minuto a una velocidad de transportación baja de la preparación desde los te idos 52/70 periféricos a la sangre.
Datos Clínicos del Clorhidrato de Dimetilaminoarglabina Se realizó una primera prueba clínica del clorhidrato de dimetilaminoarglabina en 51 pacientes con cáncer (III-IV) terminal. En la primera prueba clínica 20.7% de los pacientes tenían cáncer pulmonar, 17% tenían cáncer hepático, 17% cáncer de estómago, 9.4% tenían cáncer rectal, 5.7% tenían cáncer ovárico, 5.7% cáncer esofágico y el resto tenía cáncer de glándula salival, linfosarcoma, de mama o de intestino grueso. La población de pacientes fue 67.9% masculina y 32.1% femenina. Por lo general, a los pacientes se les administró clorhidrato de dimetilaminoarglabina reconstituido en una solución acuosa. En pacientes con ascitis, el clorhidrato de dimetilaminoarglabina se administró por vía intraperitoneal . La administración intrapleural se utilizó para pacientes con pleuresía. Antes de proceder, a los pacientes se les dio una pequeña dosis y se monitorearon para detectar cualquier signo de reacción alérgica. Inicialmente se dieron 80 mg del compuesto por día como una dosis simple, después se aumentó en forma gradual hasta un nivel máximo. Después de 30-35 días, la dosis se aumentó a 480 mg por día. A esta dosis elevada los pacientes se quejaron de náusea y vómito. Se estimó que la dosis diaria 52/70 debería ser entre aproximadamente 240 y 280 mg para los casos normales. La dosis normal durante el curso del tratamiento fue típicamente entre cinco y seis gramos de clorhidrato de dimetilaminoarglabina, pero llegó a ser tan elevada como de 20 gramos. Inmediatamente después de la administración del compuesto, los pacientes reportaron un sabor amargo que se disipó rápidamente. Se administraron series adicionales de tratamiento a algunos pacientes. En la Cuadro VI se muestra un resumen de los datos de la primera prueba clínica. El estado del paciente antes del tratamiento se clasificó en una escala de 1 a 3 , en donde 1 fue postración en cama, 2 fue restricción significativa a la actividad y 3 conservación de actividad total. El resultado terapéutico se midió en una escala de 0 a 3 , en donde 0 fue sin mejoría, 1 mejoría insignificante o mejoría por menos de un mes, 2 fue mejoría considerable (reducción de 25 a 50% en el tamaño del tumor) y 3 fue marcada mejoría (reducción de 50 a 100% en el tamaño del tumor) . 52/70 Cuadro 6 Centro Oncológico Regional Karaganda Datos Clínicos de Pacientes Tratados con Clorhidrato de Dimetilaminoarglabina Durante las Fases I y III de Estudio M Edad Sexo No. Diagnóstico Edo. Gral . i¾dmi- Dosis SimDosis Duración Cantidad Inicial Efectos Resultado Nota(s) M/F de Antes del nis- ple PrevaAcurrula- del Tray M ráira de SecundaTerapéutico ** Caso Tratamiento tra- leciente (mg) tiva Totamiento Leucocitos y rios ObjeSub eción tal (mg) (Días) Trortocitos tivo tivo 1 41 M 631/9 Cáncer de la T-3 3 IV 30-240 6000 31 L-5.6 No 0 0 3 glándula sali-val N-0 SatisfacTr-2.7 sutaraxilar etapa M-0 torio m 2 34 640/9 Linf csarcara de 3 IV 200-240 4200 14 L-4.0 No 0 0 3 los nodos Nivel medio 22 Tr- 2.73 linfáticos etapa de gravedad III 3 M Carcincrra de 1 IP 280 1960 7 L-6.5 No 1 1 estcrrago. Es-tado Tr- 3.4 posterior a la gastrec-tama . Ascitis Etapa IV 4 M Cáncer del pulirán 1 IV 120 1320 25 L-6.3 No 1 1 iz-qui PleuI.Pleu 240 2400 Tr-2.25 resía ral etapa IV N-2309-C 5 61 M 130/9 Carcinore de T-3 2 rv 80-120 2400 30 L-10 No 0 1 2 series 3 estórago etapa N-x (600 mg 1= 18 Tr-1.5 IV. Mstástasis en M-t serie) el hígado. Ascitis 6 37 M 276/9 Linfosaro ta 2 rv 240 7000 7 L-7.3 No 0 0 Poligjrimiote- 3 linf ctiLativo de I .Pleu 400 400 1 Tr-1.9 rapia -ciclo- les nodos ral fosfa. 3000 + "linfáticos ru-bomicina 86 Cuadro 6 (Continúa) M Edad Sexo Dto. Diagnóstico Edo. Gral. Aómi- Dosis SimDosis Duración Cantidad Inicial Efectos Resultado Nbta(s) M/F de Antes del nis- ple PrevaAcumuladel Tray Mínima de SecundaTerapéutico ** Caso Tratamiento tra- leciente(irrj) tiva Totamiento Leucocitos y rios ObjeSubeción tal (ira) (Días) Tromcocitos tivo tivo 15 70 M 2056/ Cáncer del pulmn T-3 1 I.Pleu 320- 6600 6 L-12.3 No 1 1 93 derecho etapa IV N-2 Gravedad ral 400 20000 31 Tr-3.6 M-1 media 16 F 2235 Carcinoma 2 IV 120-160 4440 (2040 32 L-10.0 No 2 3 2 series primario de Grave irg l1 Tr-1.8 hígado serie) 17 73 M 3671/ Carcincna de T-3 1 IV 240-260 5600 20 L-5.7 No 2 1 93 hígado etapa III. N-x Medio grave IP 400 4400 Tr-2.7 Ascitis M-0 18 54 M 3351/ Carcincna de T-4 2 IV 280 4600 15 L-5.4 No 1 2 93 estómago etapa N-x Tr-2.42 IV. MIS en. nodos M-t linfáticos retroperitorm- les. N448-50 19 72 M 1940/ Cáncer plural de T-3 3 Extern 0.04 40 10 L-7.8 Prurito 0 0 93 piel del cuerpo N-0 a Tr-2.9 alérgico etapa II. N5881-5 M-0 en el recto 20 45 M 3583/ Cáncer del pulnái T-3 1 IV 240 3600 16 L-3.5 N 2 2 2 series 93 izquierdo etapa N-2 Grave medio Tr- 2.28 IV. MIS en nodos M-1 linfáticos del nediastenio. 21 64 M 3131/ Carcincna de T-3 1 IV 240 2400 10 L-5.2 No 0 0 93 estómago. MIS en N-x Grave Tr- 2.0 hígado. Ascitis M-0 Pleuresía 22 18 M 3300/ Cáncer de T-3 1 IV 240 3600 15 L-6.2 No 1 1 Tratamiento 94 rinofaringe etapa N-2 Tr-2.64 con radiación IV. MIS en nodos M-0 linfáticos del cuello. N5133-7/4 23 42 M 3449/ Cáncer de T-4 2 IV 240-400 8000 23 L-4.8 No 1 1 93 páncreas etapa N-x SatisfacTr-2.5 IV. M-t torio Cuadro 6 (Continúa) M Edad Sexo No. Diagnóstico Edo. Gral. Aó - Dosis SimDosis Duración Cantidad Inicial Efectos Resultado Nota(s) M/F de Antes del nis- ple PrevaAcunula- del Tray Müiima de SecundaTerapéutico ** Caso Tratamiento tra- leciente (irg) tiva Totamiento Leucocitos y rios ObjeSubjeción tal (na) (Días) Trorbocitos tivo tivo 24 41 F 3854/ Cáncer de nena T-2 2 I. Pleu 800-1000 5000 (4000 6 L-4.5 No 1 1 Poligjaiitiio- 93 izcjjierda. N-2 ral mg l5 Tr-3.0 terapia- Pleuresía M-0 serie) (Fluorouracilo secundaria del I . Pleural, lado izqjierdo 1000 mg) + etapa IV. arglabina 25 55 F 4984/ Cáncer del pulnm T-2 3 I.Pleu 400 4000 10 L-3.7 No 2 2 2 series 93 derecho caí N-x Satisfacral Tr-2.6 . pleuresía M-x torio exudativa etapa IV. 164-C. 26 38 F 3504/ Cáncer del pulitm T-3 2 IV 240-280 4400 17 L-15.4 No 0 0 93 derecho. is en N-3 Gravedad ?G-2.1 1/n supraclavicu- M-0 media lar etapa IV. N12432-34 27 65 M 2038/ Cáncer rectal . T-3 2 Sup. 2 sup. 180 sup. 25 L-8.8 No 0 1 Poliqjimio- 93 Germinación n N-2 Dábil 3 x día Tr-2.8 terapia- ve iga urinaria M-t fluorouracilo- etapa IV IV, 5000 mg + arglabina 28 68 M 4166/ Cáncer de T-4 3 IV 240 4800 20 L-6.3 No 0 0 Radiación 93 intestino grueso. N-2 Tr-2.3 (rayos-x al MES en retro M-T pulmón peritoneo 1/n. izquierdo) etapa IV. N13471 29 62 4293/ Cáncer del pulnm T-3 2 IV 240 960 4 L-5.6 No 0 0 Radiación 93 izquierdo etapa N-2 Tr-3 .1 aplicada al III M-0 pulmón izquierdo 30 57 M 4319 Cáncer de esófago T-3 3 rv 240 960 4 L-3.7 No 0 0 etapa IV. N1418 N-x Tr-2.6 M-l 31 50 M 1466/ Cáncer de cuerpo T-3 2 IP 360 3240 9 L-5.6 No 0 0 Poliquimio- 93 ventrig.ilar, N-x (720 irg 1» Tr-3 .84 terapia - forma infiltrada M-0 serie) fluorouracilo, etapa III. IV, 1680 mg + Ascitis. Colexia arglabina Cuadro 6 (Continúa) M Bdad Sexo No. Diagnóstico Edo. Gral. AdmL- Dosis SimDosis Duración Cantidad Inicial Efectos Resultado Nota(s) M/F de Antes del nis- ple PrevaAcumuladel TraY Mínima de SecundaTerapéutico ** Caso Tratamiento tra- leciente (irg) tiva Totamiento Leucocitos y rios ObjeSubjecaón tal (im) (Días) Trarfcocitos tivo tivo 32 64 F 1703/ Cáncer de la T-3 2 G? 320 2980 9 L-6.1 1 No 1 1 93 r del N-x Tr-2.3 páncreas. MIS en M-t hígado y pulrrcnes. Ascitis etapa IV. 33 M Cáncer rectal. 3 IV 240-320 10640 38 L-5.1 Nb 2 2 MIS en hígado. Tr-2.11 Etapa IV 34 M Cáncer rectal. 2 IV 240 3120 13 L-7.4 No 0 1 MTS e hígado, Tr-3.4 nodos linfáticos del retrcperitcneo etapa IV. N2203-C 35 M Carcinora de 2 IV 280-320 9040 30 L-5.2 No 0 1 2 series estómago. Etapa Tr-2.7 IV. N9129-40. 36 34 F 2390/ Carcinora de T-3 3 IV 240 480 2 L-4.0 No 1 0 Poliquimio- 93 estómago. MIS de N-l Tr-2.8 terapia - Cruken erg. N687- M-l fluorouracilo 90 IV 4000 irrj, arglabina - IV 480 irg, metotrexato - 60 ntj vía entérica 37 59 M 4605/ MTS en las T-x 2 IV 240 1240 8 L-7.0 No 0 0 Radiación 94 vértebras LV, N-x 1920 Tr-2.4 EKI, hígado sin M-l el foco primario 38 67 M 282/9 Cáncer del pulmón T-3 3 IV 200 600 3 L-5.3 NO 2 2 4 series 4 izquierdo. Etapa N-x 4080 Tr-2.5 l¾liquimio- III M-0 terapia - f luDrouracilo , IV-1000 mg + arglabina Cuadro 6 (Continúa) M Edad Sexo No. Diagnóstico Edo. Gral. /Admi- Dosis SimDosis Duración Cantidad Inicial Efectos Resultado Nota(s) M/F de Antes del nis- ple PrevaAcunula- del Tray ^-írlima de SecundaTerapéutico ** Caso Tratamiento tra- leciente(rng) tiva Totamiento Leucocitos y rlos ObjeSubjeción tal (rrrj) (Días) Trarfcocitos tivo tivo 39 40 M 372/9 Cáncer del lóbulo T-3 3 IV 400 2800 7 L-4.2 No 2 3 Poliquimio- 4 inferror del N-x I.Pleu 3240 Tr-2.7 terapia pulirm izouierdo. M-0 ral Etapa III. Pleuresía exudat a. N2112 40 64 M 695/9 Cáncer del lóbulo T-3 3 IV 240 7200 30 L-6.2 No 2 3 4 superior del N-x Tr-2.6 puliró izquierdo. M-0 Etapa III. 41 62 M 625/9 Cáncer del lóbulo T-3 3 I.Pleu 400 7600 (3600 18 L-4.6 No 2 3 4 inferior del N-x ral rrg Ia Tr-2.8 pulitói derecho. M-x serie) Etapa IV. Pleuresía exudativa. N02 42 50 F 2261/ Cáncer cwárico. T-3 3 IP 240 3360 14 L-5.2 No 2 2 Regresión 93 Etapa III. N7428- N-0 Tr-2.7 parcial 31. M-0 43 53 F 972/9 Cáncer hepático T-3 3 IV 240 5460 (4500 19 L-6.3 No 1 1 2 series 4 priit rio. Etapa N-x mg 2- Tr-3.0 III. i9-c M-0 serie) 44 M 859/9 Cáncer de T-3 3 rv 240 4800 27 L-3.3 No 1 1 Polic¿riira.o- 4 esófago. MIS en N-2 Tr-3.0 terapia - hígado. M-l Metotrexato (150 irg ) , arglabina 45 59 M 1571/ Tumor hepático T-4 3 rv 240 6240 27 L-2.3 No 1 2 94 pritiario N-x Tr-3.0 M-0 46 65 F 1131/ Cáncer hepático T-3 3 IV 240 10000 48 L-4.2 No 1 2 2 series 93 etapa IV. N-x 9600 Tr-2.8 M-t 47 57 1236/ Cáncer rectal T-4 3 Sup. 33 L-4.9 Dolor y 1 1 50% de 94 etapa III N-x 2/3 X Tr-2.5 prurito disminución en M-0 día en el el tumor recto 48 66 M 564/9 IVmor hepático T-3 3 rv 240 6720 28 L-4.7 No 1 0 4 etapa IV. Cáncer N-x Tr-2.4 gástrico. M-l Cuadro 6 Continúa * T subclases (Tumor primario) , Tx - el tumor no puede ser evaluado adecuadamente, TO - no hay evidencia de tumor primario, TIS - carcinoma in si tu, Ti, T2 , T3 , T4 - aumento progresivo en el tamaño del tumor y/o implicación N (Nodo linfático regional) , Nx - los nodos linfáticos regionales no pueden ser evaluados clínicamente, NO - no hay evidencia de metástasis de nodo regional, Ni, N2, N3 implicación creciente de nodos linfáticos regionales M subclases (Metástasis distante) , Mx - no evaluada, MO - no hay metástasis distante, Mi - metástasis distante presente, sitio (s) específico ( s ) En general, aproximadamente 30% de los pacientes tuvieron una considerable mejoría. 55.6% de los pacientes con cáncer hepático tuvieron considerable mejoría después del tratamiento con clorhidrato de dimetilaminoarglabina . Los pacientes con cáncer pulmonar y ovárico respondieron particularmente bien al tratamiento con clorhidrato de dimetilaminoarglabina ya que aproximadamente 64% de los pacientes de cáncer pulmonar y 66% de los pacientes con cáncer ovárico tuvieron una mejoría considerable. El clorhidrato de dimetilaminoarglabina tuvo poca toxicidad y no suprimió la hematopoyesis. Durante la prueba, no se registraron respuestas negativas del tracto gastrointestinal o de los folículos pilosos . En pacientes con carcinoma celular hepático primario, el tamaño del hígado se redujo más de 50% en dos pacientes y aproximadamente 50% en otro paciente después del tratamiento con clorhidrato de dimetilaminoarglabina liofilizado. Los pacientes reportaron un estado mental y apetito mejorados. El dolor en el hipocondrio derecho desapareció. El estado inmunológico de los pacientes se evaluó utilizando métodos estándar de formación de rosetas y fagocitosis. Estos índices se estudiaron antes, durante y después del tratamiento. Las muestras sanguíneas se tomaron de un dedo. El análisis de los valores inmunológicos 52/70 promedio para este grupo de pacientes reveló una respuesta positiva al tratamiento. En los días 3 a 5 del tratamiento, el número de linfocitos T se redujo de 57% a 40.1%, el número de linfocitos T auxiliares se redujo de 50% a 37.3% y la adhesividad de neutrofilos disminuyó de 42% a 28.5%. Los linfocitos no diferenciados aumentaron de 21.5% a 42.2%. Un cambio general en la proporción de linfocitos T auxiliares a linfocitos T supresores se debió a un aumento de los linfocitos T supresores. El número de linfocitos B y la actividad fagocí ica permanecieron estables. El número total de leucocitos aumentó hasta 9.4 x 109/L y el número total de linfocitos aumentó también. Los niveles de todos los tipos de inmunoglobulin s aumentaron. Por el día 20 de tratamiento, todos los índices regresaron a la normalidad. En algunos pacientes, los índices regresaron a la normalidad por el día 14. En pacientes que se analizaron 30 días después del tratamiento, se observó un aumento significativo en el número de linfocitos T y de adhesividad de neutrofilos. Un retraso de tres a seis meses en la producción de clorhidrato de dimetilaminoarglabina interrumpió la primera prueba clínica. En una segunda prueba clínica, el clorhidrato de dimetilaminoarglabina se administró a 72 pacientes (61.1% masculinos y 38.9% femeninos) con cáncer en etapa IV de diferentes localizaciones. Entre los 52/70 pacientes, 25% tenían carcinoma de estómago, 16.7% tenían cáncer hepático, 18.1% tenían cáncer pulmonar y el 40.2% restante tenía cáncer esofágico, de mama, ovárico, pancreático, cerebral o linfosarcoma . Los pacientes con estados más delicados tenían metástasis en el hígado (25%) , nodulos linfáticos retroperitoneales (25), ascitis (22.2%) y pleuritis exudativa (11.1%). Algunos de estos pacientes previamente habían sido tratados con clorhidrato de dimetilaminoarglabina en la primera prueba clínica. Los resultados de la segunda prueba clínica se resumen en la Cuadro VII. Cuadro VII El uso del clorhidrato de dimetilaminoarglabina como un citostático antitumoral en tumores sólidos tiene varias ventajas. La preparación no tiene efectos secundarios, no suprime la hematopoyesis, normaliza el estado funcional del sistema inmunologico y no tiene efecto alergénico. Como un citostático, es particularmente eficiente para el cáncer primario del hígado y de otros tumores sólidos complicados con poliserositis . La regresión parcial del tumor se observó en 61.1% de casos; estabilización del proceso - en 31.9% de casos y se observó recurrencia en 7.0%. 88.9% de pacientes (64 de 72) respondieron a la terapia: no se observó respuesta en 11.1% (8 de 72) . Los siguientes son resúmenes del registro de casos de pacientes seleccionados, quienes recibieron monoquimioterapia con clorhidrato de dimetilaminoarglabina . Paciente M, edad 55, número de caso 305, ingresó al hospital con múltiples nodos en la piel de tórax y abdomen, úlcera en el lugar de la mama extirpada y endurecimiento de la mama derecha. En una estancia hospitalaria previa, se había realizado una mastectomía en el Sakhalinsk Oncology Center debido a cáncer de mama. Después de la cirugía, la paciente recibió 6 series de poliquimioterapia con ciclofosfamida y metotrexato. Se recomendó la terapia sintomática a causa de la recurrencia del proceso. Antes del tratamiento, la piel de tórax y abdomen tenía múltiples nodos metastásicos con tamaños que variaban entre 0.5 y 1 cm. En el lado izquierdo del tórax, estaba presente una superficie ulcerosa de aproximadamente 10x12 cm. La mama derecha estaba deforme a causa de metástasis de infiltración. Se presentó edema en las extremidades inferiores.
Un análisis sanguíneo antes del tratamiento reveló los parámetros siguientes: Hb-89, ESR-6 mm/hy, L-3.3, Er-3.8 mi, juv.ne-4, seg. ne-78, mon-1. El paciente recibió 5 series de tratamiento con clorhidrato de dimetila inoarglabina a una dosis total entre 6.0 y 7.3 gramos. Un análisis sanguíneo, repetido después de la quimioterapia, reveló los siguientes parámetros: Hb-122, ESR-20 mm/h, L-10.9, Er-3.8 mi, eos-1, estabilidad ne-3, seg, ne-64, lym-34, mon-2. Durante el tratamiento, la úlcera se epitelizó, los nodos de metástasis se resolvieron y la infiltración de la mama derecha disminuyó 50%. El edema en las extremidades inferiores desapareció. En un paciente de 4 meses de edad, caso número N2225, se observó una recuperación completa del cáncer hepático. El joven paciente fue admitido en el departamento de cirugía del Karaganda Cáncer Treatment Center en estado extremadamente delicado y diagnosticado con carcinoma embrionario de hígado. Los integumentos cutáneos eran de color amarillento. El paciente tenía respiración fatigosa. Los sonidos cardiacos eran claros, rítmicos. Ps-150 por minuto. La lengua estaba húmeda y limpia. El abdomen estaba agrandado . El hígado estaba agrandado y endurecido con una superficie lisa, el borde inferior en la porción acampanada superior del íleon.
La tomografía ultrasónica (UST) del hígado indicó que éste estaba agrandado y ocupaba la cavidad abdominal completa. La estructura era desigual a causa de los focos de estructura desigual con borde hidrofílico hasta de 5-6 cm, indicando un tumor hepático. El análisis sanguíneo antes del tratamiento reveló los parámetros siguientes: Hb-84, ESR-4 mm/h, L-10.9, Er-3.3 mi, eos-1, juv, ne-55, stab, ne-45, seg, ne-14 lym-30, mon-5. La paracentesis del hígado se llevó a cabo bajo control de UST. Se observaron núcleos descubiertos de células tumorales contra un fondo de células hepáticas con cambios degenerativos. El paciente se diagnosticó con cáncer hepático embrionario. Se inició un curso de tratamiento con clorhidrato de dimetilaminoarglabina, a una dosis diaria de 120 mg IV. La dosis total para el curso del tratamiento fue de 2040 mg. Durante el tratamiento, se observó una mejoría significativa. El abdomen se volvió simétrico y más pequeño debido a la disminución en el tamaño del tumor. Una UST indicó que el hígado proyectado desde abajo del arco costal a lo largo de la línea mesoclavicular en 4 cm, los contornos fueron uniformes, la estructura es desigual a causa de los focos de estructura desigual con borde hidrofílico de elevada ecogenidad 2.0 a 2.5 cm de diámetro. Conclusión: Tumor con cambios focales. 52/70 El análisis sanguíneo, repetido después del tratamiento reveló los parámetros siguientes: Hb-177, ESR-4 mm/h, er.-4.0 mi, Z-9.8, eos-3, seg, ne-28, lym-53, mon-6. El niño fue dado de alta en estado satisfactorio. Dos semanas después se dio una serie repetida del tratamiento, que fue bien tolerada por el paciente. A principios de 1997, el estado del bebé es satisfactorio. Su madre no ha reportado ningún signo de recurrencia. La palpación del abdomen demostró que el hígado estaba liso, proyectado desde abajo del borde del arco costal en 2 cm. Se cree que el bebé se va a curar. Paciente A, edad 27, caso número 543 se diagnosticó con tumor cerebral . La neurocirugía excluyó la posibilidad de operación a causa del estado delicado del paciente. El paciente estaba muy débil y había expresado bradiquinesia de tipo síndrome acinético rígido. Se reportó exoftalmia bilateral. Después del primer curso de tratamiento con clorhidrato de dimetilaminoarglabina, su condición se estabilizó y no se reportaron dolores de cabeza. Después del segundo curso, el estado fue estable. No se reportaron dolores de cabeza y el apetito se conservó. Este caso confirmó los hallazgos experimentales con respecto a la capacidad del compuesto para atravesar la barrera hematoencefálica . La eficacia del la monoquimioterapia con 52/70 clorhidrato de dimetilaminoarglabina se estimó según la escala Karnofsky, 1997 (Cuadro VIII) . No se reportaron efectos secundarios de la terapia con clorhidrato de dimetilaminoarglabina. Se muestran índices medios de la sangre periférica en la Cuadro IX.
Cuadro VIII Escala de Karnofsky 52/70 Cuadro IX Los índices del sistema inmunológico se determinaron utilizando los métodos de formación de rosetas y fagocitosis. Se examinaron 57 pacientes que habían recibido el clorhidrato de dimetilaminoarglabina . Se midieron once índices de inmunidad celular y humoral en cada paciente para evaluar el estado inmune. Los índices siguientes se determinaron en 0.05 mi de sangre periférica: cantidad absoluta y relativa de linfocitos T y B, cantidad de células "cero" no diferenciadas, adhesión y actividad fagocítica de neutrófilos, hemograma, nivel de inmunoglobulinas séricas. Los índices se determinaron antes del tratamiento en los días 2, 5 y 14 del tratamiento y después de éste. La Cuadro X resume los resultados antes y después del tratamiento . En los días 2 o a 5 o del tratamiento, el 52/70 porcentaje de linfocitos T y linfocitos T auxiliares se redujo considerablemente. El nivel de células "cero" no diferenciadas aumentó. Esta población de células no diferenciadas consistió tanto de linfocitos B y T envejecidos como de inmaduros y de células exterminadoras naturales. No se notaron cambios significativos en el hemograma. Empezando con los días 6o a 10° del tratamiento, casi todos los índices regresaron a sus valores iniciales . En dos semanas, se registró una proporción aumentada de linfocitos T y su población de auxiliares T, mientras que disminuyó el número de linfocitos B. No se registraron cambios en los niveles de inmunoglobulina sérica en ese momento . Después del tratamiento, se observó una elevación estadísticamente insignificante del porcentaje de linfocitos T. El número absoluto de linfocitos T aumentó así como el número de linfocitos T auxiliares intensificando la actividad fagocítica de los neutrófilos. Hubo un número incrementado de linfocitos B y también una cantidad incrementada de inmunoglobulinas A, M y G. El número de células no diferenciadas se redujo. Se elevó el número total de linfocitos en la sangre periférica. Ya que los tumores pueden causar tanto cambios cualitativos como cuantitativos en las células hemáticas [R3] , estos parámetros se verificaron después del 52/70 tratamiento con clorhidrato de dimetilaminoarglabina . No se identificó cambio en la composición cualitativa (morfológica) de las células hemáticas, aunque se observaron algunos cambios cuantitativos como un número disminuido de neutrófilos y un número incrementado de linfocitos. Esto sugiere una disminución de los efectos linfotóxicos provocados por el tumor. Los índices inmunológicos se correlacionaron con los hallazgos clínicos en la mayoría de los casos .
Cuadro X Indices de inmunidad de los pacientes antes y después del tratamiento con arglabxna 52/70 Indices Antes del Tratamiento Después del Tratamiento ( intervalo ) ( intervalo) M 1.36 + 0.03 (1.18-1.84) 1.53 ± 0.03 (1.20-1.84) Leucocitos, 109/1 5.97 + 0.60 (3.40-18.6) 9.14 ± 0.61 (3.40-18.9) Neutrófilos, % 4.72 ± 0.91 (0.0-23.0) 5.45 + 0.79 (0-20) Segmentación de núcleo 61.68 ± 45.0 (23-85) 63.05 ± 1.79 (38-88) Eosinófilos 2.72 ± 0.71 (0-18) 3.35 ± 1.30 (0-33) Monocitos 5.28 ± 2.48 (0-12) 4.45 ± 0.44 (1-12) Linfocitos 25.52 ± 2.02 (6-57) 23.15 ± 1.7 (4.0-47) Los valores medios de los índices inmunológicos se evaluaron con análisis de regresión. Las condiciones funcionales del sistema inmunológico se estimaron empleando índices integrales como una intensidad media (correlación) expresada en unidades relativas. El hecho de que el índice de intensidad del sistema inmunológico aumente durante el tratamiento indica que el sistema inmunológico respondió al tratamiento . El análisis de correlación de estos datos indicó que durante el tratamiento, aumentó la cantidad total de parámetros de vínculos reales (el número de vínculos con r> 0.7 aumentó y el número de vínculos negativos se redujo) . El número de interrelaciones entre los elementos de inmunidad aumentó, a saber entre los elementos de linfocitos y neutrófilos. De este modo, los datos estadísticos analizados con diferentes métodos de análisis estadísticos, indican que el clorhidrato de dimetilaminoarglabina es activo como 52/70 un agente que estimula algunos factores inmunitarios y mejora el estado funcional del sistema inmunológico . Esto indica el efecto inmunoestimulante de la preparación.
Otras Modalidades Se debe entender que mientras la invención ha sido descrita considerando la descripción detallada de la misma, la descripción anteriormente mencionada tiene el propósito de ilustrar y no de limitar el alcance de la invención, que se define por el alcance de las reivindicaciones adjuntas. Otros aspectos, ventajas y modificaciones quedan dentro del alcance de las siguientes reivindicaciones . 52/70 REIVINDICACIONES - 1. Una composición farmacéutica en forma de dosis unitaria adecuada para el tratamiento de un cáncer humano, que consiste básicamente de entre aproximadamente 40 mg y 480 mg de arglabina o de un derivado de la misma. 2. La composición según la reivindicación 1, en donde el cáncer humano se selecciona del grupo que consiste de cáncer de mama, de colon, rectal, de estómago, pancreático, de pulmón, hepático, ovárico, leucemia, linfoma, cáncer pancreático y esofágico. 3. La composición según la reivindicación 2, en donde el cáncer humano se selecciona del grupo que consiste de cáncer pulmonar, hepático y ovárico. 4. La composición según la reivindicación 1, en donde el derivado es la dimetilaminoarglabina o una sal de la misma farmacéuticamente aceptable. 5. La composición según la reivindicación 4, en donde la dimetilaminoarglabina o la sal de la misma farmacéuticamente aceptable está liofilizada. 6. La composición según la reivindicación 1, en donde la forma de dosis unitaria es de aproximadamente entre 175 mg y 315 mg de arglabina o de un derivado de la misma . 7. La composición según la reivindicación 6, en donde la forma de dosis unitaria es de aproximadamente 52/70 entre 240 mg y 280 mg de arglabina o de un derivado de la misma . 8. El uso de la composición farmacéutica según la reivindicación 1 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer. 9. El uso de arglabina o de un derivado de la misma en la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer. 10. Una composición que comprende un primer agente quimioterapéutico que comprende arglabina o un derivado de la misma y un segundo agente quimioterapéutico, la composición es eficaz para suprimir el crecimiento tumoral en humanos. 11. La composición según la reivindicación 10, en donde el segundo agente quimioterapéutico se selecciona del grupo que consiste de agentes alquilantes, antimetabolitos , alcaloides de la vinca, antibióticos y complejos de coordinación del platino. 12. La composición según la reivindicación 11, en donde el agente alquilante es ciclofosfamida, sarcolisina o metilnitrosourea . 13. La composición según la reivindicación 11, en donde el antimetabolito es metotrexato o fluorouracilo . 14. La composición según la reivindicación 11, en donde el alcaloide de la vinca es vinblastina o 52/70

Claims (2)

  1. vincristina . 15. La composición según la reivindicación 14, en donde el agente quimioterapéutico comprende además ciclofosfamida . 16. La composición según la reivindicación 11, en donde el antibiótico es rubidomicina . 17. La composición según la reivindicación 11, en donde el complejo de coordinación del platino es cisplatino . 18. La composición según la reivindicación 10, en donde el derivado es dimetilaminoarglabina o una sal de la misma farmacéuticamente aceptable. 19. El uso de la composición según la reivindicación 10 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer. 20. Un compuesto que suprime el crecimiento tumoral en un mamífero, en donde el compuesto se selecciona del grupo representado por las siguientes Fórmulas I, II, III, IV, V y VI: 52/70 en donde NRRi es NHCH2P o N(CH2CH2)20, NRR2 es NHCH2Ph, N(CH2CH2)20, N(CH3)2 o una sal de los mismos farmacéuticamente aceptable; y X es OH ó Cl . 21. El compuesto según la reivindicación 20, en donde el compuesto comprende dimetilaminoarglabina o una sal de la misma farmacéuticamente aceptable. 22. El compuesto según la reivindicación 20, en donde el compuesto es dibromoarglabina . 23. El compuesto según la reivindicación 20, en donde el compuesto es arglabina clorhidrina. 24. El compuesto según la reivindicación 20, en donde el compuesto es 11,13 dihidroarglabin . 25. El compuesto según la reivindicación 20, en donde el compuesto es bencilaminoarglabina . 26. El compuesto según la reivindicación 20, en 52/70 2 83 donde el compuesto es morfolina-aminoarglabina . 27. El compuesto según la reivindicación 20, en donde el compuesto es bencilaminoepoxiarglabina . 28. El compuesto según la reivindicación 20, en 5 donde el compuesto es morfolina-aminoepoxiarglabina . 29. El compuesto según la reivindicación 20, en donde el compuesto es epoxiarglabinclorhidrina . 52/70 RESUMEN DE LA INVENCIÓN Se describen composiciones farmacéuticas que contienen arglabina y derivados de arglabina. Las composiciones pueden estar en forma de dosis unitaria y son útiles para el tratamiento de cáncer en humanos. También se describen las composiciones y estuches que contienen un primer agente quimioterapéutico que incluye arglabina o un derivado de la misma y un segundo agente quimioterapéutico. Las composiciones y estuches son eficaces para tratar el cáncer en un paciente humano. La invención también proporciona diversos derivados de la arglabina, eficaces para suprimir el crecimiento tumoral en mamíferos.
  2. 2/70 1/8 FIG- 1 2/8 1.10 EPIARGLABI A- 13 FIG.2
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