MXPA06014545A - Compuestos novedosos. - Google Patents

Abstract

Se describen compuestos de formula (I) en donde R1 es 2-indanilo, R2 es 1-metilpropilo, R3 es un grupo seleccionado de 2,6-dimetil-3-piridilo o 4,6-dimetil-3-piridilo, R4 representa metilo y R5 representa hidrogeno o metilo o, R4 y R5 junto con el atomo de nitrogeno al cual estan unidos representan morfolino y derivados farmaceuticamente aceptables de los mismos, asi como procedimientos para su preparacion, composiciones farmaceuticas que las contienen y su uso en medicina, particularmente su uso como antagonistas de oxitocina.

Description

COMPUESTOS NOVEDOSOS MEMORIA DESCRIPTIVA La presente invención se relaciona con derivados novedosos de dicetopiperazina que tienen una acción antagonista potente y selectiva en el receptor de oxitocina, con procedimientos para su preparación, composiciones farmacéuticas que contienen los mismos y su uso en medicina. La hormona oxitocina es un poderoso contractor del útero y se utiliza para la inducción o aumento del trabajo de parto. Asimismo la densidad de los receptores de oxitocina uterinos se incrementa significativamente en más de 100 veces durante el embarazo y alcanzan un máximo en el trabajo de parto (prematuro y normal). Los nacimientos/trabajo de parto prematuros (entre 24 y 37 semanas) ocasiona aproximadamente 60% de mortalidad/patología infantil y por lo tanto un compuesto que inhiba las acciones uterinas de la oxitocina, por ejemplo, antagonistas de oxitocina tendrá que ser útil para prevenir o controlar el trabajo de parto prematuro. La solicitud de patente internacional WO 99/47549 describe derivados de dicetopiperazina incluyendo derivados de 3-bencil-2,5-dicetopiperazina como inhibidores de fructuosa 1 , 6-bisfosfato«(FBPase). La solicitud de patente internacional WO 03/053443 describe una clase de derivados de dicetopiperazina que exhiben un nivel particularmente útil de actividad como antagonistas selectivos en el receptor de oxitocina. Una clase preferida de compuestos descritos en la presente está representada por la fórmula (A): tales compuestos incluyen aquellos en donde entre otros Ri es 2-¡ndanilo, R2 es alquilo de C3/4, R3 es un grupo heteroarilo de 5 ó 6 miembros enlazado al resto de la molécula vía un átomo de carbono en el anillo, R representa al grupo NR5R6 en donde R5 y Re representan cada uno alquilo, por ejemplo, metilo, 0 R5 y Re junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos forman un anillo heterocíclico saturado de 3 a 7 miembros cuyo heterocíclo puede contener un heteroátomo adicional seleccionado del oxigeno. La solicitud de patente adicional WO 2005/000840 describe derivados de dicetopiperazina de la fórmula (B): en donde R-¡ es 2-indanilo, R2 es 1-metilpropilo, R2 es 1-metilpropílo, R3 es 2-metíl-1 ,3-oxazol-4-ilo y R y R5 junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos representan morfolino.

Ahora se ha encontrado un grupo novedoso de antagonistas selectivos receptores de oxitocina que presentan un perfil farmacocinétíco particularmente ventajoso. Por lo tanto la presente invención proporcional al menos un entidad química seleccionada de compuestos de fórmula (I): en donde Ri es 2-indanilo, R2 es 1-metilpropilo, R3 es un grupo seleccionado de 2,6-dimetil-3-piridilo ó 4,6-dimetil-3-piridilo, R4 representa metilo y R5 representa hidrógeno o metilo o R y R5 junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos representan morfolino y derivados de los mismos farmacéuticamente aceptables. Se apreciará que los compuestos de fórmula (I) poseen la estereoquímica absoluta ¡lustrada en los átomos de carbono asimétricos que portan los grupos Ri, R2 y R3, es decir la estereoquímica en estas posiciones siempre es (R). Sin embargo también deberá apreciarse que aunque tales compuestos están substancialmente libres del epímero (S) en cada uno de R-i, R2 y R3, cada epímero puede estar presente en pequeñas cantidades, por ejemplo puede estar presente 1 % ó menos del epímero (S).

También se apreciará que el grupo R2 contiene un átomo de carbono asimétrico y que la invención incluye epímeros tanto (R) como (S), de los mismos. Una modalidad de la invención son los compuestos cuya preparación se describe específicamente en los ejemplo 1 , 2, y 6. Otra modalidad de la invención son los compuestos cuya preparación se describe en los ejemplos 1 , 2 y 3. Una modalidad adicional de la invención son los compuestos cuya preparación se describe específicamente en los ejemplo 3 y 6. Aún una modalidad adicional de la invención es el compuesto cuya preparación se describe específicamente en el ejemplo 3. Otra modalidad de la invención es el compuesto cuya preparación se describe específicamente el ejemplo 1. En un aspecto, las entidades químicas útiles en la presente invención pueden ser al menos una identidad química seleccionada de: (2R)-2-{(3R,6R)-3-(2,3-dihidro-1 H-inden-2-ilo)-6-[(1 S)-1 -metil propil]-2,5-dioxo-1 -piperazinil}-2-(2,6-dimetil-3-piridinil)-N-metiletanamida; (2R)-2-{(3R,6R)-3-(2,3-dihidro-1 H-inden-2-il)-6-[(1 S)-1 -metil propil]-2,5-d¡oxo-1-piperaz¡nil}-2-(2,6-dimetil-3-piridinil)-N,N-dimetiletanamida; (3R,6R)-3-(2,3-dihidro-1 H-inden-2-il)-1-[(1 R)-1-(2,6-dímetil-3-piridinil)-2-(4-morfolinil)-2-oxoetil]-6-[(1 S)-1 -metilpropíl]-2,5-piperazinadiona¡ (2R)-2-{(3R,6R)-3-(2,3-Dihidro-1 H-inden-2-il)-6-[(1 S)-1 -metil propil]-2,5-dioxo-1-piperazinil}-2-(4,6-dimet¡l-3-piridinil)-N,N-dimetiletanamida; (2R)-2-{(3R,6R)-3-(2,3-Dihidro-1 H-inden-2-il)-6-[(1 S)-1 -metil propil]-2,5-dioxo-1 -piperazinil}-2-(4,6-d¡metil-3-piridinil)-N-metiletanamida; (3R,6R)-3-(2,3-dihidro-1 H-inden-2-il)-1 -[(1 R)-1 -(4,6-dimetil-3-piridinil)-2-(4-morfolinil)-2-oxoetil]-6-[(1 S)-1 -metilpropil]-2,5-piperazinadiona; y derivados farmacéuticamente aceptables de los mismos. Tal como aquí se emplea, el término "farmacéuticamente aceptable" significa un compuesto el cual es adecuado para uso farmacéutico. Las sales y los solvatos de los compuestos de la invención que son adecuados para usarse en medicina son aquellos en los que contraion o es solvente asociado es farmacéuticamente aceptable. Sin embargo, las sales y solvatos que no tienen contraiones farmacéuticamente aceptables o solventes asociados están dentro del alcance de la presente invención, por ejemplo para emplearse como intermediarios en la preparación de otros compuestos de la invención y sus sales y solvatos farmacéuticamente aceptables. Tal como aquí se emplea, el termino "derivado farmacéuticamente aceptable", significa cualquier sal, solvato, o profármaco por ejemplo éster, farmacéuticamente aceptable, de un compuesto de la invención el cual al administrarse al receptor es capaz de proporcionar (directa o indirectamente) un compuesto de la invención, o un metabolito activo o residuo del mismo. Tales derivados son reconocibles para aquellos con experiencia en la técnica sin la experimentación debida. No obstante se hace referencia a la enseñanza de Burger en Medicinal Chemistry and Drug Discovery, 5a. edición, volumen 1 : Principios y Práctica, la cual se incorpora aquí como referencia hasta el alcance de la enseñanza de tales derivados. En un aspecto, los derivados farmacéuticamente aceptables son sales, solvatos, esteres, carbamatos y fosfatos esteres. En otros aspectos los derivados farmacéuticamente aceptables son sales, solvatos y esteres. En un aspecto adicional los derivados farmacéuticamente aceptables son sales y solvatos. En otro aspecto, los derivados farmacéuticamente aceptables son sales fisiológicamente aceptables. Las sales fisiológicamente aceptables de compuestos de la presente invención incluyen sales de adición acida formadas con ácidos inorgánicos o ácidos orgánicos fisiológicamente aceptables. Ejemplos de tales ácidos incluyen ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico, ácidos sulfónicos, por ejemplo metanosulfónico, etanosulfónico, bencenosulfónico y p-toluenosulfonico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido láctico, ácido pirúvico, ácido acético, ácido succínico, y ácido maleico. La presente invención también se relaciona con solvatos de los compuestos de fórmula (I), por ejemplo hidratos, o solvatos con solventes farmacéuticamente aceptables incluyendo, pero sin limitarse a, alcoholes, por ejemplo etanol, isopropanol, acetona, éteres, esteres, por ejemplo acetato de etilo. Los compuestos de la invención también pueden usarse en combinación con otros agentes terapéuticos. La invención proporciona por lo tanto, en un aspecto adicional, una combinación que comprende un compuesto de la invención o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo con un agente terapéutico adicional. Cuando se emplea un compuesto de la invención o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo en combinación con un segundo agente terapéutico activo contra el mismo estado de enfermedad la dosis de cada compuesto puede diferir de cuando el compuesto se emplea solo. Las dosis apropiadas las podrán apreciar con facilidad aquellos con experiencia en la técnica. Se apreciará que la cantidad de un compuesto de la invención requerida para su uso en el tratamiento variara con la naturaleza de la condición que tratada y la edad y la condición del paciente y finalmente dependerá de la discreción del médico o veterinario correspondiente. Los compuestos de la presente invención pueden usarse en combinación con o medicinas tocolíticas o profilácticas. Estas pueden influir, pero no se limitan a, beta-agonistas tales como terbutalina o ritodrina, bloqueadores de canales de calcio, por ejemplo nifedepina, fármacos antiinflamatorias no esteroideas, tales como indometacina, sales de magnesio tales como sulfato de magnesio, otros antagonistas de oxitocina, tales como atosibán, y agonistas y formulaciones de progesterona. Además los compuestos de la presente invención se pueden usar en combinación con esteroides antenatales incluyendo betametasona y dexametasona, vitaminas prenatales especialmente suplementos de folato, antibióticos, incluyendo pero sin limitarse a ampicilina, amoxiciclina/clavulanato, metronidazol, clindamicina, y anxioliticos.

Las combinaciones a las que se hace referencia líneas arriba pueden presentarse convenientemente para usarse en forma de una formulación farmacéutica y por lo tanto formulaciones farmacéuticas que comprenden una combinación como se definió líneas arriba junto con un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable forman parte de un aspecto adicional de la invención. Los componentes individuales de tales formulaciones pueden administrarse secuencialmente o simultáneamente en formulaciones farmacéuticas separadas o combinadas por cualquier ruta conveniente. Cuando la administración es secuencial, se puede administrar primero el compuesto de la invención o el segundo agente terapéutico. Cuando la administración es simultanea, la combinación puede administrarse ya sea en la misma o en una composición farmacéutica diferente. Cuando están combinados en la misma formulación se apreciará que los dos compuestos deben de ser estables y compatibles uno con el otro y con los otros componentes de la formulación. Cuando se formulan por separado se pueden proporcionar en cualquier formulación conveniente, convenientemente en la forma en que se conoce para tales compuestos en la técnica. Los compuestos de fórmula (I) tienen una alta afinidad para los receptores de oxitocina los úteros de ratas y humanos y esto puede determinarse empleando procedimientos convencionales. Por ejemplo la afinidad para los receptores de oxitocina en el útero de la rata se puede determinar por medio del procedimiento de Pettibone et al., Drug Development Research 30. 129-142 (1993). Los compuestos de la invención también presentan una alta afinidad en el receptor de oxitocina recombinantemente humano en células CHO y esto puede demostrarse convenientemente utilizando el procedimiento descrito por Wyatt et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2001 (11 ) paginas 1301-1305. Los compuestos de la invención presentan un perfil farmacocinético ventajoso incluyendo buena bíodísponibilidad asociada con una buena solubilidad acuosa. En un aspecto, los compuestos de la invención presentan un buen potencial y baja eliminación intrínseca. En otro aspecto, los compuestos de la invención presentan baja eliminación intrínseca. Los compuestos de la invención son por lo tanto útiles en el tratamiento o prevención de enfermedades y/o condiciones mediadas a través de la acción de la oxitocina. Ejemplos e tales enfermedades y/o condiciones incluyen trabajo de parto prematuro, dismenorrea, endometriosis e hiperplasia prostática benigna. Los compuestos también pueden ser útiles para retrasar el trabajo de parto para la sección de cesárea electiva o transferencia del paciente a un tercer centro de cuidados, tratamiento de disfunción sexual (macho y hembra), particularmente eyaculación precoz, obesidad, trastornos alimenticios, fallo congestivo del corazón, hipertensión arterial, cirrosis hepática, hipertensión nefrítica u ocular, trastornos obsesivos-compulsivo y trastornos neurosiquiátricos. Los compuestos de la invención pueden ser útiles para mejorar las tasas de fertilidad en animales, por ejemplo animales de granja. Por lo tanto la invención proporciona al menos una entidad química seleccionada de un compuesto de fórmula (I) y/o derivados farmacéuticamente aceptables del mismo para uso en terapia, particularmente para uso en terapia humana y veterinaria, y en particular para uso como medicina para antagonizar los efectos de la oxitocina sobre el receptor de oxitocina. La invención también prevé el uso de al menos una entidad química seleccionada de un compuesto de fórmula (I) y/o derivados farmacéuticamente aceptables para la manufactura de un medicamento para antagonizar los efectos de la oxitocina en el receptor de oxitocina. De conformidad con un aspecto adicional, la invención también proporciona un método para antagonizar los efectos de la oxitocina en el receptor de oxitocina, incluyendo administrar a un paciente en necesidad del mismo una cantidad antagónica de al menos una entidad química seleccionada de un compuesto de fórmula (I) y/o derivados farmacéuticamente aceptables del mismo. Aquellos con experiencia en la técnica apreciarán que la referencia que se hace aquí al tratamiento se extiende a la profilaxis así como al tratamiento de enfermedades establecidas o síntomas. Se apreciará además que la cantidad de un compuesto de la invención requerida para uso en el tratamiento variara con la naturaleza de la condición que está siendo tratada, la ruta de administración y la edad y la condición del paciente y finalmente estará bajo la discreción del médico correspondiente. Sin embargo, en general las dosis empleadas para el tratamiento de un humano adulto estarán en el rango de 2 a 1000 mg por día dependiendo de la ruta de administración. Por lo tanto para la administración parenteral de una dosis diaria estará típicamente en el rango de 2 a 50 mg, preferentemente de 5 a 25 mg por día. Para la administración oral una dosis diaria estará típicamente en el rango de 10 a 1000 mg, por ejemplo 50 a 500 mg por día. La dosis deseada puede estar presente convenientemente en una sola dosis o como dosis divididas administradas a intervalos apropiados, por ejemplo como dos, tres, cuatro o más subdosis por día. Aunque es posible que para el uso en terapia, un compuesto de la invención puede administrarse como el químico crudo, es preferible que presente el ingrediente activo como una formulación farmacéutica. Por lo tanto la invención proporciona además una formulación farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) y/o derivados farmacéuticamente aceptables del mismo junto con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables del mismo y opcíonalmente, otros ingredientes terapéuticos y/o ingredientes profilácticos. El o los vehículos deben ser "aceptables" en el sentido de ser compatibles con los otros ingredientes de la formulación y no perjudiciales para el receptor de los mismos.

Las composiciones de la invención incluyen aquellas en una forma especialmente formulada para administración oral, bucal, parenteral, inhalación o insuflación, implante vaginal o rectal. Las tabletas y cápsulas para administración oral pueden contener excipientes convencionales tales como agentes aglutinantes, por ejemplo, jarabe, acacia, gelatina, sorbítol, tragacanto, mucílago de almidón o polivinil pirrolidona; rellenos, por ejemplo, lactosa, azúcar, celulosa microcristalina, almidón de maíz, fosfato de calcio o sorbitol; lubricantes, por ejemplo, estearato de magnesio, ácido esteárico, talco, polietilénglicol o sílice; desintegradores, por ejemplo, almidón de papa o glicolato de almidón sódico, o agentes humectantes tales como lauril sulfato de sodio. Las tabletas pueden estar recubiertas de acuerdo con métodos conocidos en la técnica. Las preparaciones líquidas orales pueden estar en forma de, por ejemplo, suspensiones acuosas o aceitosas, emulsiones en soluciones, jarabes o elíxires, o pueden estar presentes como un producto seco para su constitución con agua u otro vehículo adecuado antes de su uso. Tales preparaciones líquidas pueden contener aditivos convencionales tales como agentes de suspensión, por ejemplo, jarabe de sorbitol, metil celulosa, gel de estearato de aluminio o grasas comestibles hidrogenadas; agentes emulsionantes, por ejemplo, lecitina, monooleato de sorbitan o acacia; vehículos no acuosos (los cuales pueden incluir aceites comestibles) por ejemplo, aceite de almendras, aceite coco fraccionado, esteres aceitosos, propilénglícol o alcohol etílico; solubilizadores tales como surfactantes por ejemplo polisorbatos u otros agentes tales como cíclodextrinas; y conservadores, por ejemplo p-hidroxibenzoatos de metilo o propilo, ácido ascórbico. Las composiciones también pueden formularse como supositorios, por ejemplo conteniendo bases convencionales de supositorios tales como manteca de cocoa u otros glicéridos. Para la administración bucal la composición puede adoptar la forma de tabletas o pastillas formuladas en la forma convencional. La composición de conformidad con la invención puede formularse para administración parenteral por inyección o infusión continua. Las formulaciones para inyección pueden presentarse en forma de dosis unitaria, en ampolletas, o en dosis múltiples como suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos aceitosos o acuosos, y pueden contener agentes formulatorios tales como agentes de suspensión, estabilización y/o dispersión. Alternativamente el ingrediente activo puede estar en forma de polvo para constitución con un vehículo adecuado, por ejemplo agua estéril libre de pirógeno, antes de su uso. Las composiciones de conformidad con la invención pueden contener entre 0.1-99% del ingrediente activo, convenientemente de 1 -50% para tabletas y cápsulas y de 3-50% para preparaciones líquidas. El perfil farmacocinético ventajoso de los compuestos de la invención se demuestra fácilmente empleando procedimientos convencionales para medir las propiedades farmacocinéticas de compuestos biológicamente activos.

Los compuestos de la invención y los derivados farmacéuticamente aceptables de los mismos pueden prepararse mediante los procedimientos de escritos de aquí en adelante, constituyendo dichos procedimientos un aspecto adicional de la invención. En la siguiente descripción, los grupos son como se definió líneas arriba para los compuestos de la invención a menos que se establezca otra cosa. Los compuestos de fórmula (I) pueden prepararse por la reacción del ácido carboxílico (II), en donde R-i, R2 y R3 tienen los significados definidos en la fórmula (I), y la quiralidad en R3 es R o S, o una mezcla de los mismos, o un derivado activado del mismo con una amina HNR4R5, en donde R4 y R5 tienen el significado definido en la fórmula (I), bajo condiciones estándar para preparar amidas a partir de un ácido carboxílico o un derivado activado de los mismos y una amina. Se apreciará que la mezcla de diaestereómeros de los compuestos de la fórmula (I) obtenida de la reacción anterior se puede separar empleando técnicas de resolución estándar bien conocidas en la técnica, por ejemplo cromatografía de columna.

Por lo tanto la amida de fórmula (I) puede prepararse por tratamiento del ácido carboxílico de fórmula (II) con un agente de activación tal como BOP (hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxi-tris(dimetilamino)fosfonio), TBTU (tetrafluoroborato de 2-(1 H-bonzotriazol-1-il)-1 ,1 ,3,3-tetrametiluronio), BOP-CI (cloruro de bis(2-oxo-3-oxazolidinil)fosfíníco), cloruro de oxalilo o 1 ,1 '-carbonildiimidazol en un solvente aprótico tal como diclorometano opcionalmente en presencia de una amina terciaria tal como trietilamina y reacción subsiguiente del producto así formado, es decir el derivado activado del compuesto de fórmula (II), con la amina HNR4R5. Alternativamente la amida de fórmula (I) puede prepararse por la reacción de un derivado anhidro del ácido carboxílico (II) mezclado, en donde Ri, R2 y R3 tienen los significados definidos en la fórmula (I) con la amina HNR R5 en un solvente aprótico tal como tatrah id rofu rano. Convenientemente la reacción se lleva a cabo a bajas temperaturas, por ejemplo 25°C a -90°C, convenientemente a aproximadamente -78°C. El anhídrido mezclado es preparado convenientemente por la reacción ácido carboxílico (II) con un cloruro ácido adecuado, por ejemplo cloruro de pivalolilo en un solvente aprótico tal como acetato de etilo en presencia de una base orgánica terciaria tal como trialquilamina, por ejemplo trietílamina y a bajas temperaturas, por ejemplo 25°C a -90°C, convenientemente a aproximadamente -78°C. Los compuestos de la fórmula (I) también pueden prepararse por la reacción de un compuesto de fórmula (lll) en donde Ri, R2 y R3 tienen los significados definidos en la fórmula (I) y R6 es 2-hidroxifenilo, con 1 ,1 '-carbonildiimidazol o 1 ,1 '-tiocarbonildiimidazol en un solvente adecuado tal como diclorometano y reacción subsiguiente de los productos así formados con la amina HNR4R5. Los compuestos de fórmula (II) pueden prepararse a partir de un compuesto de fórmula (lll) en donde R6 es 2-hidroxifenilo por la reacción con 1 ,1 '-carbonildiimidazol o 1 ,1 '-tiocarbonildiimidazole en un solvente adecuado tal como diclorometano y reacción subsiguiente del producto así formado con acetona acuosa. Los compuestos de la fórmula (lll) en donde R6 es 2-hidroxifenilo pueden prepararse a partir de los compuestos correspondientes de fórmula (lll) en donde R6 es un grupo 2-benziloxifenilo por hidrogenólisis usando hidrógeno y un catalizador de paladio. Alternativamente se pueden preparar compuestos de fórmula (lll) en donde R5 es un 2-hidroxifenilo a partir del compuesto de fórmula (IV) (IV) en donde R-i, R2 y R3 tienen los mismos significados definidos en la fórmula (I), R6 es 2-benziloxifenilo, R7 es benciloxicarbonilo y R8 es alquilo de C-i-ß, por la reacción con hidrógeno en presencia de un catalizador de paladío sobre carbón mineral y ácido acético. Esta reacción se lleva a cabo convenientemente en un solvente tal como etanol, trifluoroetanol o mezclas de los mismos. Los compuestos de fórmula (IV) pueden prepararse por reacción del hidrocloruro de amino éster (V) en donde Ry tiene el significado definido en la fórmula (I) y R8 es alquilo de Ci. 6, con un aldehido R3CHO (VI) en donde R3 tiene el significado definido en la fórmula (I), en presencia de trietilamina y en un solvente tal como trifluoroetanol y después reaccionando el producto resultante con un compuesto de fórmula (Vil) en donde R1 tiene el significado definido en la fórmula (I) y R es t-butiloxicarbonilo o benciloxicarbonilo y el isocianuro CNR6 (VIII) en donde R6 es un grupo 2-benciloxífenilo, en un solvente tal como trifluoroetanol.

Los compuestos de fórmula (lll) en donde Re es un grupo 2-benciloxifenilo pueden prepararse a partir de un compuesto de fórmula (IV) en donde R^ R2 y R3 tienen los significados definidos en la fórmula (I), R6 es 2-benciloxifenílo y R7 es t-butiloxícarbonilo por la reacción con ácido clorhídrico en dioxano seguido con trietilamina en un solvente tal como diclorometano. El compuesto de fórmula (IV) en donde R7 es t-butiloxícarbonilo puede prepararse por la ruta descrita anteriormente usando un compuesto de fórmula (Vil) en donde R7 es t-butiloxicarbonilo. El sustítuyente R2 es un grupo 1-metilpropilo y el compuesto de fórmula (I) en donde R2 es un grupo 1-metilpropilo que tiene una configuración (S) o (R) puede prepararse comenzando con el hidrocloruro de amino éster (V) en donde los grupos R2 tiene la configuración (S) o (R). El hidrocloruro de aminoéster (V), en donde Ri tiene el significado en la fórmula (I) y R8 es alquilo de C?-6, puede prepararse a partir de los aminoácidos correspondientes comercialmente disponibles, D-aloisoleucina o D-isoleucina, mediante el método de Schmidt, U; Kroner, M; griesser, H. Synthesis (1989), (11 ), 832-5. Los aldehidos R3CHO (VI), en donde R3 tiene el significado definido en la fórmula (I), están comercialmente disponibles o pueden prepararse mediante métodos de la literatura (Comins, Daniel L.; Weglarz, ichael A.; J. Org. Chem.; 53; 19; 1988; 4437-4442). El derivado e aminoácido (Vil) en donde Ri tiene el significado en la fórmula (l) y R7 es t-butiloxicarbonilo está comercialmente disponible; el derivado de aminoácido (Vil) en donde Ri tiene el significado definido en la fórmula (I) y R es benciloxícarbonilo, puede prepararse a partir del correspondiente aminoácido comercialmente disponible (R)-R1CH(NH2)CO2H (IX), en donde Ri tiene el significado definido en la fórmula (I), por tratamiento con N-(benciloxicarboniloxi)succinímida y trietilamina en un solvente tal como dioxano con agua. El isocianuro CNR6 (VIII) puede prepararse de acuerdo con métodos de literatura (Obrecht, Roland; Herrmann, Rudolf; Ugi, Ivar, Synthesis, 1985, 4, 400-402). Las sales de adición acida del compuesto de fórmula (I) pueden prepararse por medios convencionales, por ejemplo, por tratamiento con una solución del compuesto en un solvente adecuado tal como diclorometano o acetona, con una solución adecuada del ácido inorgánico u orgánico apropiado. Los siguientes ejemplos son ilustrativos, pero no limitantes de las modalidades de la presente invención.

Parte experimental Nomenclatura Todos los intermediarios y ejemplos se nombraron utilizando ACD Ñame Pro 6.02 en ISISDraw.

Abreviaturas CV: Volumen de columna. Un volumen de columna se define como el volumen ocupado por el sorbente en la columna empacada. Esto puede calcularse aproximadamente a partir de la masa y densidad del absorbente particular que está siendo utilizado (1 CV = masa dividido por la densidad).

Métodos Generales de purificación analíticos Se llevó a cabo HPLC analítico en una columna de Supelcosil LCABZ+PLUS (3.3 cm x 4.6 mm ID), elución con 0.1 % de HCO2H y 0.01 M de acetato de monio en agua (solvente A), y 0.05% de HCO2H y 5% de agua en acetonitrilo (solvente B), usando el gradiente de elución 1 , 0-0.7 minutos 0%B, 0.7-4.2 minutos 0%-100%B, 4.2-5.3 minutos 100%B, 5.3-5.5 minutos 0%B o el gradiente de elusión 2, 0-0.7 minutos 0%B, 0.7-4.2 minutos 0%-100%B, 4.2-4.6 minutos 100%B, 4.6-4.8 minutos 0%B a una velocidad de flujo de 3 ml/mínutos, los tiempos de retención (Rt) están indicados en minutos. El espectro de masa (MS, por sus siglas en inglés) se registraron en un espectrómetro de masa Waters ZQ 2000 empleando modos electroaspersión positiva [ES-ve para obtener un ion molecular (M-H)]. Los espectros 1H NMR se registraron usando un espectrómetro Bruker DPX 400 MHz usando tetrametilsilano como el estándar externo. La purificación utilizando cartuchos de sílice se refiere a la cromatografía llevada a cabo utilizando un Combiflash (Marca Registrada) Companion (Marca Comercial) con cartuchos Redisep (Marca Registrada) suministrado por Presearch. Los vidrios porosos hidrofóbicos se refieren a tubos de filtración vendidos por Whatman. SPE extracción en fase sólida) se refiere al uso de cartuchos vendidos por International Sorbent Technology Ltd. TCL (cromatografía de capa delgada) se refiere al uso de placas de TLC vendidas por Merck recubiertas con gel de sílice 60 F254.

INTERMEDIARIO 1 N-í(2R)-2-(2,3-dihidro-1H-inden-2-il)-2- r(fenilmetil)oxpcarbonil> amino)acetin-N-ri-(2.6-dimetil-3-piridinil)-2-oxo-2-((2- r(fenilmetil)oxylfenil} amino)etip-D-aloisoleucinato de metilo 2,6-dimetilpíridina-3-carboxaldehído (Aurora Feinchemie GmbH) (2.00 g, 16.1 mmol) e hidrocloruro de (D)-aloisoleucina metil éster (2.93 g, 16.1 mmol) en metanol (50 ml) y 2,2,2-trifluoroetanol (50 ml) se trataron con trietilamina (2.24 ml, 16.1 mol) y la mezcla se agitó bajo nitrógeno a temperatura ambiente durante 20 h.

Se adicionaron ácido (2R)-2,3-dihidro-1 H-inden-2-il({(fenilmetil)oxi]carbonil}amino)etanoico (5.24 g, 16.1 mmol) y 2-benziloxifenilisonitrílo (3.37 g, 16 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente bajo nitrógeno durante 4 días. La mezcla se concentró bajo presión reducida después se dividió entre acetato de etilo (150 ml) y agua (150 ml) más bicarbonato de sodio acuoso saturado (6 ml). La fase acuosa se volvió a extraer con acetato de etilo (50 ml) y los extractos orgánicos combinados se lavaron sucesivamente con soluciones acuosas semisaturadas de bicarbonato de sodio, cloruro de amonio y cloruro de sodio (100 ml cada uno), se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro y se evaporaron bajo presión reducida para obtener el producto crudo (12.01 g). Éste se purificó en una columna de sílice Redisep (330 g) eluída con 20-50% de acetato de etilo en ciciohexano para obtener 7.46 del compuesto principal como un par de diasestereómeros. Rt de HPLC = 3.88 y 3.96 minutos (gradiente 1 ); m/z [M+H]+ = 797.

INTERMEDIARIO 2 2-((3R16R)-3-(2,3-Dihidro-1 H-inden-2-il)-6-r(1S)-1-metilpropin-2,5-dioxo-1- piperazinil}-2-(2,6-dimetil-3-piridinil)-N-(2-hidroxifenil)acetamida El N-[(2R)-2-(2,3-dihidro-1 H-inden-2-il)-2-({[(fenilmetil)oxi] carbonil}aminoacetil]-N-[1-(2,6-dimetil-3-piridinil)-2-oxo-2-({2-[fenilmetil)oxi] fenil}amino)etil]-D-aloisoleucinato de metilo crudo (intermediario 1 ) (7.46 g) se disolvió en etanol (150 ml) y ácido acético (10 ml) y la mezcla se hidrogenó a 1 atmósfera de H2 sobre 10% de paladio sobre carbón (tipo Degusa) (1.8 g humedecido con agua 1 :1 w:w) durante 1 h. La mezcla de reacción se evaporó a presión reducida y el residuo se dividió entre acetato de etilo y agua agregando bicarbonato de sodio acuoso saturado hasta que la fase acuoso se hizo básica (pH 8). La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo y los extractos orgánicos combinados se lavaron con bicarbonato de sodio acuoso:agua 3:1 (100 ml) después con salmuera saturada antes de secarse sobre sulfato de magnesio anhidro y se evaporó bajo presión reducida. El producto crudo se purificó sobre una columna de sílice Redisep (120 g) eluída con 0-10% de metanol en acetato de etilo para obtener el compuesto principal como un par de diaestereómeros (2.94 g). Rt de HPLC = 2.75 y 2.81 minutos (gradiente 2); m/z [M+H]* = 541.

INTERMEDIARIO 3 2-(f3R,6R)-3-(2,3-Dihidro-1H-inden-2-il)-6-í(1S)-1-metilpropin-2.5-dioxo-1- piperazinil}-2-(416-dimetil-3-piridinil)-N-{2-r(fenilmetil)oxi]fenil} acetamida 4,6-Dimetil-3-piridínocarbaldehído1 (2.52 g) e hidrocloruro de D-aloisoleucinato de metilo (3.4 g) se disolvieron en 2,2,2-trifluoroetanol (50 ml). A esto se adicionó trietilamína (2.61 ml) y la mezcla de reacción se dejó reposar durante 18 horas. Se adicionaron ácido (2R)-2,3-dihidro-1 H-inden-2-il({[(1 ,1-dimetiletil)oxi]-carbonil}amino)etanoico (5.44 g) y isocianuro de 2-[(fenílmetil)oxi]fenil (4.18 g) con metanol (10 ml) a la mezcla de reacción y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 3 días. El solvente se eliminó al vacío y el residuo se separó entre diclorometano y agua. La fase orgánica se pasó a través de un vidrio poroso hidrofóbico y se evaporó al vacío. El residuo se disolvió en ácido clorhídrico 4N en dioxano (50 ml) y la mezcla de reacción se dejó reposar durante 4 horas. El solvente se removió al vacío y el residuo se disolvió en diclorometano (200 ml). A esto se adicionó trietilamina (20 ml) y la mezcla de reacción se dejó reposar durante 20 horas. La mezcla de reacción se separó entre diclorometano y agua. La fase orgánica se pasó a través de un vidrio poroso hidrofóbico y se evaporó al vacío. El residuo se aplicó a columnas Biotage 4 x 90 g y se eluyó con ciciohexano/acetato de etilo (1 :1 , 1 :2 v/v) y acetato de etilo. Las fracciones requeridas se combinaron y evaporaron al vacío para obtener 2-{(3R,6R)-3-(2,3-Dihidro-1 H-inden-2-il)-6-[(1 S)-1 -metilpropil]-2,5-dioxo-1 -piperazinil}-2-(4,6-dimetil-3-piridin¡l)-N-{2-[(fenilmet¡l)oxi]fen¡l}acetamida (5.55 g, 47%) como una espuma de tonalidad marrón. Rt de HPLC = 3.43 y 3.45 minutos (gradiente 2); m/z [M+H]* = 631.

Referencia: 1. Comins, Daniel L.; Weglarz, Michael A.; J. Org. Chem.; 53; 19; 1988: 4437-4442.

INTERMEDIARIO 4 2-((3R,6R)-3-(2.3-Dihidro-1H-inden-2-il)-6-r(1S)-1-metilpropin-2,5-dioxo-1- piperazinil}-2-(4,6-dimetil-3-piridinil)-N-(2-hidroxifenil)acetamida 2-{(3R,6R)-3-(2,3-Dihidro-1 H-inden-2-il)-6-[(1S)-1-metilpropil]- 2,5-dioxo-1-piperazin¡l}-2-(4,6-dimetil-3-píridinil)-N-{2-[(fenilmetil)oxi]fenil} acetamida (intermediario 3) (3.30 g) se disolvió en etanol (75 ml) y se hidrogenó sobre paladio sobre carbón mineral (húmedo 10% de Paladio, 0.50 g) durante 20 horas. El catalizador se removió por filtración y se lavó con diclorometano. El filtrado combinado y los lavados se evaporaron al vacío. El residuo se aplicó a una columna Biotage 90 g y se eluyó con acetato de etilo. Las fracciones requeridas se combinaron y evaporaron al vacío para obtener 2-{(3R,6R)-3-(2,3-D¡hidro-1 H-inden-2-il)-6-[(1S)-1-metilpropil]-2,5-dioxo-1 -p¡peraz¡nil}-2-(4,6-dimetil-3-piridinil)-N-(2-hidroxifenil}acetam¡da (5.55 g, 47%) como un sólido de color amarillo pálido. Rt de HPLC = 2.86 minutos (gradiente 1 ); m/z [M+H]* = 541.

INTERMEDIARIO 5 Hidrocloruro del ácido f(3R,6R)-3-(2,3-Dihidro-1H-inden-2-il)-6-r(1S)-1- metilpropin-2,5-dioxo-1-piperazinil}(2,6-dimetil-3-piridinil) acético Se disolvieron 2-{(3R,6R)-3-(2,3-Dihidro-1 H-inden-2-íl)-6-[(1 S)-1 -metilpropil]-2,5-dioxo-1 -píperazinil}-2-(2,6-dimetil-3-p¡ridinil)-N-(2-hidroxifen¡l) acetamida (24.25 g, 45 mmol) (intermediario 2) y 1 ,1 '-carbonildiímidazol (11.7 g, 72 mol) en diclorometano seco (200 ml) y se dejaron reposar bajo nitrógeno durante 20 horas. El solvente se removió al vacío y el residuo se disolvió en acetona (200 ml) y ácido clorhídrico 2N (20 ml). Después de agitar durante 20 horas el solvente se removió al vacío y el residuo se disolvió en metanol (50 ml). La solución se aplicó a un cartucho de aminopropilo (2x70 g) y se eluyó con metanol (250 ml) y después 10% de ácido acético en metanol (250 ml).

Las fracciones requeridas se combinaron y se evaporaron al vacío. El residuo se trató con ácido clorhídrico 2N y la solución resultante se evaporó al vacío para obtener el compuesto principal hidrocloruro del ácido {(3R,6R)-3-(2,3- Dihidro-1 H-inden-2-il)-6-[(1S)-1 -metilpropil]-2,5-dioxo-1-piperazinil}(2,6-dimetíl- 3-piridinil) acético como un sólido de tonalidad marrón (12.2 g, 56%).

Rt de HPLC = 2.48 minutos (gradiente 2); m/z [M+H]* = 450.

INTERMEDIARIO 6 Ácido (2R)-213-dihidro-1H-inden-2-il({ffenilmetil)oxilcarbonil}amino) etanoico Ácido (2R)-amino(2,3-dihidro-1 H-inden-2-il)etanoico (1.91 g, 10 mmol) se suspendió en dioxano (10 ml) agua (10 ml). A esto se adicionó trietilamina (1.7 ml) y N-(bencílox¡carbon¡lox¡)-succinimida (2.54 g) y la mezcla de reacción se agitó rápidamente a temperatura ambiente durante 2 días. La mezcla de reacción se vertió en agua (50 ml) y se extrajo con cloroformo (100 ml). La fase orgánica se lavó con ácido clorhídrico 1 N (50 ml). Ésta se secó sobre sulfato de magnesio y se removió el solvente al vacío para obtener el compuesto principal (3.06 g, 94%): 1H NMR (CDCI3) delta 7.40-7.29 (m, 5H), 7.21 -7.11 (m, 4H), 5.28 (d, 1 H, J = 8.6hZ), 5.11 (s, 2H), 4.57 (m, 1 H), 3.14-2.79 (m, 5H); LCMS m/z 326 (MH+), Rt 3.35 min (gradiente 2).

EJEMPLO 1 (2RH(3R,6R)-3-(2,3-Dihidro-1H-inden-2-il)-6-r(1S)-1-metilprop¡n-2.5-dioxo- 1-piperazinil}-2-(216-dimetil-3-piridinil)-N-metiletanamida 2-{(3R,6R)-3-(2,3-Dihidro-1 H-índen-2-íl)-6-[(1S)-1-metilpropil]- 2,5-dioxo-1-piperazinil}-2-(2,6-dimetil-3-piridinil)-N-(2-hidroxifenil)acetamida (intermediario 2) (0.400 g, 0.74 mmol) y 1 ,1 '-carbonildiimidazol (0.192 g, 1.18 mmol) en diclorometano (10 ml) se agitó a temperatura ambiente bajo N2 durante 7 horas. La mezcla se trató con una solución 2M de metilamina en tretrahidrofurano (1.849 ml, 3.70 mmol) y se dejó reposar durante la noche a temperatura ambiente. Los solventes se soplaron bajo N2 y el residuo se purificó sobre una columna de sílice Redisep (35 g), se eluyó con 0-10% de metanol en acetato de etilo seguido por purificación adicional sobre una columna Kromasil KR100-10-C18 de fase inversa, se eluyó con acetonitrilo acuoso (20-45% de MeCN) conteniendo 0.1 % de ácido fórmico. Esto proporcionó el compuesto principal como un liofiliozado blanco (30%) después de secar por congelación del 1 ,4-dioxano. Rt de HPLC = 2.44 minutos (gradiente 1 ); m/z [M+H]* = 463. 1H NMR (CDCI3) delta 7.63 (d, 1 H), 7.25-7.15 (m, 4H), 7.05 (d, 1 H), 6.79 (d, 1 H), 5.96 (q, 1 H), 5.35 (s, 1 H), 4.07 (dd, 1 H), 3.88 (d, 1 H), 3.19-2.88 (m, 4H), 2.85 (d, 3H), 2.81-2.73 (m, 1 H), 2.56 (s, 3H), 2.55 (s, 3H), 1.82-1.67 (m, 2H), 1.20-1.08 (m, 1 H), 0.99 (d, 3H), 0.90 (t, 3H). Similarmente se preparó a partir del intermediario 2 y dimetilamina (2.0 M en tetrahidrofurano): EJEMPLO 2 (2R)-2-((3R,6R)-3-(2,3-Pihidro-1 H-inden-2-il)-6-r(1 S)-1 -metilpropip-2.5- dioxo-1-piperazinil}-2-(2,6-dimetil-3-piridinil)-N,N-dimetiletamida Como un liofilisato (33%) después de secar por congelación del 1 ,4-dioxano. Rt de HPLC = 2.69 minutos (gradiente 1 ); m/z [M+H]* = 477. 1H NMR (CDCI3) delta 7.49 (d, 1 H), 7.27-7.15 (m, 4H), 7.08 (d, 1 H), 6.66 (s, 1 H), 6.30 (d, 1 H), 6.30 (d, 1 H), 4.10 (dd, 1 H), 4.05 (d, 1 H), 3.22-3.08 (m, 3H), 2.99-2.84 (m, 4H), 2.80t2.70 (m, 4H), 2.63 (s, 3H), 2.58 (s, 3H), 1.65-1.53 (m, 1 H), 0.97-0.78 (m, 2H), 0.71 (t, 3H), 0.46 (d, 3H). Similarmente se preparó a partir del intermediario 2 y morfolina (3.7 M mmol): EJEMPLO 3 (MÉTODO A) (3R.6R)-3-(2,3-dihidro-1H-inden-2-il)-1-r(1 R)-1-f2,6-dimetil-3-piridinil)-2-(4- morfol¡nil)-2-oxoetill-6-r(1S)-1-metilprop¡n-2,5-piperazinadiona Como un liofilisato blanco (88 mg, 23%) después de secar por congelación de 1 ,4-dioxano. Rt de HPLC = 2.70 minutos (gradiente 2); m/z [M+H]* = 519. 1H NMR (CDCI3) delta 7.49 (d, 1 H), 7.27-7.15 (m, 4H), 7.10 (d, 1 H), 6.68 (s, 1 H), 6.40 (d, 1 H), 4.10 (dd, 1 H), 4.01 (d, 1 H), 3.74-3.52 (m, 5H), 3.28-3.07 (m, 5H), 2.97-2.84 (m, 2H), 2.79-2.71 (m, 1 H), 2.62 (s, 3H), 2.59 (s, 3H), 1.65-1.53 (m, 1 H), 0.98-0.80 (m, 2H), 0.70 (t, 3H), 0.45 (d, 3H).

EJEMPLO 3 (MÉTODO B) (3R.6R)-3-(2,3-Dihidro-1 H-inden-2-il)-1-r(1 R)-1-(2,6-dimetil-3-piridinil)-2-(4- morfolinil)-2-oxoetin-6-[(1S)-1-metilprop¡n-2,5-piperazinadiona Se trató una suspensión de hidrocloruro del ácido {(3R,6R)-3- (2,3-dihidro-1 H-inden-2-il)-6-[(1 S)-1 -metílpropil]-2,5-díoxo-1 -piperazinil}(2,6-dimetil-3-piridiníl)acético (5.0 g, 10.3 mmol) intermediario 5) en diclorometano seco (50 ml) con 1 ,1-carbonildiimidazol (2.6 g, 16 mmol) y la mezcla de reacción se agitó bajo nitrógeno durante 18 horas. Se adicionó morfolina (4.8 ml, 55 mmol) y la solución resultante se dejó reposar bajo nitrógeno durante 18 horas. El solvente se removió al vacío y el residuo se separó entre acetato de etilo y agua. La fase orgánica se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. El solvente se removió al vacío y el residuo se disolvió en diclorometano. Esto se aplicó a un cartucho de alúmina básica (240 g) y se eluyó usando un gradiente de 0-7.5% de metanol en éter dietílico (9CV), 7.5-10% de metanol en éter dietílico (1 CV) y 10% de metanol en éter dietílico (1CV). Las fracciones requeridas se combinaron y se evaporaron al vacío para obtener (3R,6R)-3-(2,3-Dihidro-1 H-inden-2-il)-1-[(1 R)-1 -(2,6-dimetil-3-piridinil)-2-(4-morfolinil)-2-oxoetil]-6-[(1 S)-1 -metílpropil]-2,5-píperazinadiona como un sólido blanco (2.4 g, 45%). Rt de HPLC = 2.72 minutos (gradiente 2); m/z [M+H]* = 519.

EJEMPLO 4 dioxo-1-piperazinil}-2-(416-dimetil-3-piridinil)-N,N-dimetiletanamida Se disolvió 2-{(3R,6R)-3-(2,3-Dihidro-1 H-inden-2-il)-6-[(1 S)-1-metilpropil]-2,5-dioxo-1-p¡perazinil}-2-(4,6-dimetil-3-piridinil)-N-(2-hidroxifen¡l} acetamida (intermediario 4) (0.700 g) y 1 ,1'-carbonildiimidazol (0.324 g) en diclorometano seco (20 ml) y se dejó reposar durante 20 horas. A una mitad de esta solución (10 ml) se agregó una solución 2M de dimetilamina en tretrahidrofurano (5 ml) y la mezcla de reacción se dejó en reposo durante 3 días. La mezcla de reacción se separó entre diclorometano y solución de bicarbonato de sodio acuoso saturado. La fase orgánica se pasó a través de un vidrio poroso hidrofóbico y se evaporó al vacío. El residuo se aplicó a un cartucho de sílice (10 g) y se eluyó con acetato de etilo después 5% de metanol en acetato de etilo. Las fracciones requeridas se evaporaron al vacío y el residuo se purificó usando AutoPrep Dirigido a Masa. Esto produjo (2R)-2-{(3R,6R)-3-(2,3-Dihidro-1 H-inden-2-íl)-6-[(1S)-1-metilpropil]-2,5-dioxo-1-piperazinil}-2-(4,6-dimetil-3-pirid¡nil)-N,N-dimet¡letamida (0.10 g, 32%) como una espuma blanca. Rt de HPLC = 2.82 minutos (gradiente 1 ); m/z [M+H]* = 477. 1H NMR (CDCI3) delta 8.32 (d, 1 H), 7.26-7.15 (m, 4H), 7.08 (s, 1 H), 6.71 (s, 1 H), 6.16 (d, 1 H), 4.17 (d, 1 H), 4.10 (dd, 1 H), 3.22-3.06 (m, 3H), 2.98 (s, 3H), 2.91 (m, 1 H), 2.74 (dd, 1 H), 2.67 (s, 3H), 2.57 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 1.56 (m, 1 H), 0.93 (m, 1 H), 0.85 (m, 1 H), 0.68 (t, 3H), 0.45 (d, 3H). Similarmente se preparó a partir del intermediario 4 y metilamina: EJEMPLO 5 (2R)-2-((3R,6R)-3-(2,3-Dihidro-1 H-inden-2-il)-6-r(1S)-1-metilpropin-2,5- dioxo-l-piperazinil^-^ß-dimetil-S-piridiniQ-N-metiletanamida Rt de HPLC = 2.60 minutos (gradiente 1 ); m/z [M+H]* = 463. 1H NMR (CDCI3) delta 8.48 (s, 1 H), 7.25-7.14 (m, 4H), 7.04 (s, 1H), 6.72 (d, 1 H), 6.07 (q, 1 H), 5.45 (s, 1 H), 4.07 (dd, 1 H), 3.17-3.04 (m, 3H), 2.92 (m, 1 H), 2.86 (d, 3H), 2.76 (dd, 1 H), 2.53 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 1.70 (m, 2H), 1.12 (m, 1 H), 0.94 (d, 3H), 0.87 (t, 3H). De manera similar se preparó a partir del intermediario 4 y morfolína: EJEMPLO 6 QR.eR^S-t?.S-dihidro-IH-inden-S-iD-l-rdRM^.e-dimetil-S-piridinil)^^- morfolinil)-2-oxoetill-6-f(1S)-1-metilpropill-2,5-piperazinadiona Rt de HPLC = 2.94 minutos (gradiente 2); m/z [M+H]* = 519. 1H NMR (CDC ) delta 8.34 (s, 1 H), 7.25-7.15 (m, 4H), 7.09 (s, 1 H), 6.71 (s, 1 H), 6.26 (d, 1 H), 4.14-4.07 (m, 2H), 3.73-3.47 (m, 5H), 3.23-3.05 (m, 5H), 2.95-2.83 (m, 2H), 2.74 (dd, 1 H), 2.58 (s, 3H), 2.38 (s, 3H), 1.56 (m, 1 H), 0.94 (m, 1 H), 0.86 (m, 1 H), 0.68 (t, 3H), 0.44 (d, 3H).

Actividad biológica Los ejemplos 1-6 de la presente invención se probaron en todos los ensayos descritos a continuación. Los resultados para cada uno de los compuestos se muestran en el Cuadro 1 líneas abajo. El cuadro 1 también incluye un compuesto X para comparación.

Ensayo 1 Determinación de la afinidad antagonista en receptores de Oxitocina-1 humano usando FLIPR Cultivo Celular Células de Ovarios de Hámster Chino (CHO, por sus siglas en inglés) Adherentes, expresando con estabilidad el receptor de Oxitocína-1 humano (hOT, por sus siglas en inglés) recombinante, se mantuvieron en cultivo en medio DMEM:F12 (Sigma, cat. no. D6421 ), complementado con 10% de suero de becerro fetal inactivado por calor (Gibco/Invitrogen, no. de cat. 0100-147), 2 mM de L-glutamina (Gibco/Invitrogen, no. de cat. 25030-024) y 0.2 mg/ml G418 (Gíbco/lnvitrogen, no. de cat. 10131-027). Las células se desarrollaron como monocapas bajo 95%:5% de aire:CO2 a 37°C y se pasaron cada 3-4 días usando TrypLE (Marca Comercial) Express (Gibco/lnvítrogen, no. de cat. 12604-013).

Mediciones de [Ca2+1, empleando el FLIPR (Marca Comercial) Se sembraron células de CHO-hOT en placas de 384 receptáculos de base transparente paredes negras (Nunc) a una densidad de 10,000 células por receptáculo en medio de cultivo como se describió líneas arriba y se mantuvieron durante la noche (95%:5% de aire:CO2 a 37°C). Después de remover del medio de cultivo, las células se incubaron durante 1 h a 37°C en medio de Tyrode (NaCI, 145 mM; KCl, 2.5 mM; HEPES, 10 mM; Glucosa, 10 mM; MgCI2, 1.2 mM; CaCI2, 1.5 mM) conteniendo probenacida (0.7 mg/ml), el indicador de calcio citoplásmico, Fluo-4 (4uM; Teflabs, USA) y el agente de apagado Brilliant Black (250 uM; Molecular Devices, UK). Las células se incubaron durante 30 minutos adicionales a 37°C con solución tampón sola o solución tampón conteniendo antagonista OT, antes de colocarse en un FLIPR (Marca Comercial) (Molecular Devices, UK) para monitorear la fluorescencia celular (lambdaex = 488 nm, lambdaE = 540 nm) antes y después de la adición de una concentración submáxima de oxitocína (EC80).

Análisis de Datos Se analizaron las respuestas funcionales usando FLIPR empleando Active Base Versión 5.0.10.

Ensayo 2 Ensayo de enlazamiento de oxitocina Preparaciones Se prepararon membranas de las células CHO con expresión de receptores de oxitocina recombinante humano. La preparación de membranas se congeló en alícuotas a -70°C hasta que se utilizaron.

Protocolo de Ensayo de Enlazamiento Se incubaron membranas (aproximadamente 50 ug) en 200 ul en solución tampón de ensayo (50 mM Tris, 10 mM MgCI2, y 0.1 % de albúmina de suero bovino, pH 7.5) conteniendo aproximadamente 2.4 nM de [3H]-oxitocina en ausencia (enlazamíento total) o presencia (enlazamiento no específico) de 1 uM de Oxitocina sin marcar y concentraciones crecientes de los compuestos en los Ejemplos 1 a 6 o compuestos de comparación. Las incubaciones se realizaron a temperatura ambiente durante 60 minutos. Las reacciones se detuvieron con 3 ml de tampón a punto de hielo y se filtraron a través de papel filtro Whatman GF/C previamente remojados en polietilénimina al 0.3%. Los filtros se lavaron 4 veces con 3 ml de solución tampón usando un cosechador de células Brandel. Los filtros se contaron en 3 ml de fluido de scintilación Ready Safe (Beckman). El enlazamiento específico representó aproximadamente 90% del enlazamiento total.

Análisis de Datos Se determinaron valores IC50 a partir de experimentos de competición usando análisis de regresión lineal (GraphPad) y se convirtieron a Ki usando el método de Cheng y Prusoff, 1974. Los datos se reportaron como valores medios.

Ensayo 3 Determinación de eliminación intrínseca in vitro en microsomas Se preparó solución tampón de regeneración fresca para uso en incubaciones el día del ensayo. Contenía 7.8 mg de glucosa-6-fosfato (sal monosódica), 1.7 mg NADP y 6 unidades de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa por 1 ml de 2% de bicarbonato de sodio. Se prepararon mícrosomas (humano, hembra; macaco cynomolgus, hembra; perro, hembra; rata, hembra) en pH 7.4 de solución tampón de fosfato y contenía 0.625 de proteína/ml. A menos que se establezca otra cosa, todas las etapas subsiguientes se realizaron por medio de Tecan Génesis 150/8 RSP. Se preparó una solución madre de 1.25 mM de los compuestos en Acetonitrilo/agua (1 :1 ). Se adicionaron 25 ul de la solución madre de 1.25 mM a 600 ul de acetonitrilo/agua (1 :1 ) para obtener una solución 50 uM. Para cada una de las especies, las soluciones de 50 uM (10 uL) se adicionaron a los microsomas (790 uL) en una microplaca (Porvair, 96 receptáculos, cuadrado). Se transfirieron 400 uL de la solución microsómica conteniendo el compuesto, a una microplaca (Parvair, 96 receptáculos, redondo) y se precalentó a 37°C durante cinco minutos antes de iniciar las incubaciones. Todas las incubaciones se iniciaron por la adición de 100 uL de sistema de regeneración NADP a los microsomas precalentados. Las mezclas se incubaron a 37°C en un bloque de calentamiento Techne. Después de 0, 3, 6, 12 y 30 minutos de incubación, se tomaron alícuotas de 20 uL y se adicionaron a 100 uL de acetonitrilo conteniendo el estándar interno. Para la determinación de la velocidad del metabolismo, se realizaron incubaciones en una concentración de compuesto de 0.5 uM y una concentración de proteína de 0.5 mg/mL. La concentración de solvente en la incubación fue de 0.5%. Las concentraciones de los compuestos de prueba se determinó por LC/MS/MS; los resultados se reportaron como relación de área de picos de analito:estándar interno.

La velocidad de desaparición se calculó ajustando una reducción exponencial simple a la curva de concentración-tiempo empleando Excel y la eliminación intrínseca se calculó usando la siguiente fórmula: CU = [velocidad (1/min)*52.5 mo proteína / q hipado! 0.5 mg proteína / ml Resultados Se probaron los Ejemplos 1 a 6 de la presente invención y también un comparador X = (2R)-2-[(3R,6R)-3-(2,3-dihidro-1 H-inden-2-íl)-6-¡sobutil-2,5-dioxopiperazin-1-il]-N,N-dimetil-2-(6-metilpiridin-3-il)etanamida (ejemplo 209 en WO 03/053443) en los ensayos descritos líneas arriba. El compuesto comparador X al probarse en los ensayos 1 y 2 mostró una potencia similar a la presentada por los Compuestos 1 a 6 de la presente invención, de echo cada uno de estos compuestos presentó fpKi de entre 8.1 y 9.2 (Ensayo 1 ) y pKi de entre 8.8 y 10.5 (Ensayo 2). Sin embargo, los compuestos de la presente invención presentaron un mejoramiento sorprendente en la eliminación intrínseca in vitro en mícrosomas (Ensayo 3) al comparar con el compuesto comparador X.

CUADRO 1 Ensayo 3 Cl microsómica (ml/mg/g) Rata Perro Macaco Cynomolgus Humano Comparador X + + ++++ ++ Ejemplo 1 + + + + Ejemplo 2 + + ++, +++ +, + Ejemplo 3 + + + + Ejemplo 4 +, + +, + +++++, +++++ ++, + Ejemplo 5 + + +++ + Ejemplo 6 + + +++ + Claves para el Cuadro 1 + Coresponde a 1-8 ml/min/mg ++ Coresponde a 9-15 ml/min/mg +++ Coresponde a 16-20 ml/min/mg ++++ Coresponde a 21-30 ml/min/mg +++++ Coresponde a > 31 ml/min/mg

Claims (12)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1. Al menos una entidad química seleccionada de compuestos de fórmula (I) en donde Ri es 2-indanilo, R2 es 1-metilpropilo, R3 es un grupo seleccionado de 2,6-dimetil-3-piridilo ó 4,6-dimetíl-3-piridilo, R4 representa metilo y R5 representa hidrogeno o metilo o R y R5 junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos representan morfolino y derivados de los mismos farmacéuticamente aceptables.

2. Al menos una entidad química seleccionada de sales y solvatos de compuestos de fórmula (I) en donde Ry es 2-indanilo, R2 es 1 -metilpropilo, R3 es un grupo seleccionado de 2,6-dimetil-3-piridilo ó 4,6-dimetil-3-piridilo, R4 representa metilo y R5 representa hidrógeno o metilo o R y R5 junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos representan morfolino

3. Al menos una entidad química de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque R2 es (1 S)-1-metilpropilo.

4. Al menos una entidad química de conformidad con la reivindicación 1 ó la reivindicación 3, caracterizada además porque se selecciona de: (2R)-2-{(3R,6R)-3-(2,3-dihidro-1 H-inden-2-¡lo)-6-[(1 S)-1-met¡lpropil]-2,5-dioxo-1-piperaziníl}-2-(2,6-dimetil-3-piridinil)-N-metiletanamida; (2R)-2-{(3R,6R)-3-(2,3-dihidro-1 H-inden-2-il)-6-[(1 S)-1 -met¡lpropil]-2,5-dioxo-1-piperazinil}-2-(2,6-dimetil-3-p¡ridinil)-N,N-dimetiletanamida; (3R,6R)-3-(2,3-dihidro-1 H-inden-2-il)-1 -[(1 R)-1 -(2,6-dimetil-3-piridinil)-2-(4-morfolinil)-2-oxoetil]-6-[(1 S)-1-metilpropíl]-2,5-piperazinadiona; (2R)-2-{(3R,6R)-3-(2,3- Dihidro-1 H-inden-2-il)-6-[(1 S)-1 -metílpropil]-2,5-díoxo-1 -piperazinil}-2-(4,6-dimetil-3-pirídinil)-N,N-d¡met¡letanamida; (2R)-2-{(3R,6R)-3-(2,3-Dihidro-1 H-inden-2-il)-6-[(1S)-1-metilpropil]-2,5-dioxo-1-piperazinil}-2-(4,6-dimetil-3-piridinil)-N-metiletanamida; (3R,6R)-3-(2,3-dihidro-1 H-inden-2-il)-1-[(1 R)-1-(4,6-dimetil-3-p¡ridinil)-2-(4-morfolinil)-2-oxoetil]-6-[(1 S)-1-metilpropil]-2,5-piperazínadiona; y derivados farmacéuticamente aceptables de los mismos.

5. Al menos una entidad química de conformidad con una de las reivindicaciones 1 , 3 y 4, caracterizada además porque se selecciona de: (2R)-2-{(3R,6R)-3-(2,3-dihidro-1 H-inden-2-ilo)-6-[(1 S)-1 -metilpropil]-2,5-dioxo-1 -píperazinil}-2-(2,6-dimetil-3-piridin¡l)-N-metiletanamida; (2R)-2-{(3R,6R)-3-(2,3-dihidro-1 H-inden-2-il)-6-[(1 S)-1 -metilpropil]-2,5-dioxo-1-piperazinil}-2-(2,6- dimetil-3-piridinil)-N,N-dimetiletanam¡da; (3R,6R)-3-(2,3-dihidro-1 H-inden-2-il)-1 -[(1 R)-1 -(2,6-dimetil-3-piridiníl)-2-(4-morfolin¡l)-2-oxoetil]-6-[(1 S)-1 -metilpropil]-2,5-piperazinadiona; (3R,6R)-3-(2,3-dihidro-1 H-inden-2-il)-1 -[(1 R)-1 -(4,6-dimetil-3-piridinil)-2-(4-morfolinil)-2-oxoetil]-6-[(1S)-1-metilprop¡l]-2,5-piperazinadiona; y derivados farmacéuticamente aceptables de los mismos.

6. Al menos una entidad química de conformidad con una de las reivindicaciones 1 , 3 y 4, caracterizada además porque se selecciona de: (2R)-2-{(3R,6R)-3-(2,3-dihidro-1 H-inden-2-ilo)-6-[(1 S)-1-metilpropil]-2,5-dioxo-1 -piperazinil}-2-(2,6-dimetil-3-piridinil)-N-metiletanamida; (2R)-2-{(3R,6R)-3-(2,3-díhidro-1 H-inden-2-íl)-6-[(1 S)-1 -metilpropíl]-2,5-díoxo-1 -piperazinil}-2-(2,6-dimetil-3-piridinil)-N,N-dimetiletanamida; (3R,6R)-3-(2,3-dihidro-1 H-inden-2-il)-1 -[(1 R)-1 -(2,6-dimetil-3-piridinil)-2-(4-morfolinil)-2-oxoetil]-6-[(1 S)-1 -metilpropil]-2,5-piperazinadiona; y derivados farmacéuticamente aceptables de los mismos.

7. Al menos una entidad química de conformidad con una de las reivindicaciones 1 , 3 y 4, caracterizada además porque se selecciona de: (3R,6R)-3-(2,3-dihidro-1 H-inden-2-il)-1 -[(1 R)-1 -(2,6-dimetil-3-piridinil)-2-(4-morfolinil)-2-oxoetil]-6-[(1 S)-1 -metilpropil]-2,5-piperazinadiona; (3R,6R)-3-(2,3-dihidro-1 H-inden-2-il)-1 -[(1 R)-1 -(4,6-dimetil-3-piridinil)-2-(4-morfolinil)-2-oxoetil]-6-[(1 S)-1 -metilpropíl]-2,5-piperazinadiona; y derivados farmacéuticamente aceptables de los mismos.

8. Al menos una entidad química de conformidad con una de las reivindicaciones 1 , 3 y 4, caracterizada además porque se selecciona de: (3R,6R)-3-(2,3-dih¡dro-1 H-inden-2-il)-1-[(1 R)-1 -(2,6-dimetil-3-p¡ridinil)-2-(4-morfolinil)-2-oxoet¡l]-6-[(1 S)-1 -metilpropil]-2,5-píperazinadiona; y derivados farmacéuticamente aceptables del mismo.

9. Una composición farmacéutica que comprende al menos una entidad química de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3-8 junto con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables.

10. El uso de al menos una entidad química de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3-8 para la manufactura de un medicamento para antagonizar los efectos de la oxitocina en el receptor de oxitocina.

11. El uso de al menos una entidad química de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3-8 para la manufactura de un medicamento para el tratamiento de una o más enfermedades o condiciones seleccionadas de un trabajo de parto prematuro, dismenorrea, endometriosis e hiperplasia prostática benigna.

12. Un procedimiento para la preparación de compuestos de fórmula (I) de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque comprende: (a) reacción de un compuesto de fórmula (II) en donde Ri, R2 y R3 tienen los significados definidos en la fórmula (I), y la quiralidad en R3 es R o S, o una mezcla de los mismos, o un derivado activado del mismo con una amina HNR R5, en donde R4 y R5 tienen el significado definido en la reivindicación 1 , bajo condiciones estándar para la preparación de amidas a partir de un ácido carboxílico o un derivado activado de los mismos y una amina; o (b) la reacción de un compuesto de fórmula (lll) en donde R-i, R2 y R3 tienen los significados definidos en la reivindicación 1 y R6 es 2-hidroxifenílo, con 1 ,1 '-carbon¡ldiimidazol ó 1 ,1 '-tiocarbonildiimidazol en un solvente adecuado y reacción subsiguiente de los productos así formados con la amina HNR4R5 en donde R y R5 tienen los significados definidos en la reivindicación 1.