MXPA06009814A - Inhibidores de proteasa ns3 del virus de la hepatitis c - Google Patents

Abstract

La presente invención describe nuevos compuestos que tienen actividad inhibidora de proteasa de HCV, asícomo también métodos para preparar dichos compuestos. En otra realización, la invención describe composiciones farmacéuticas que comprenden dichos compuestos asícomo también métodos de uso de los mismos para tratar desórdenes asociados con la proteasa de HCV.

Description

INHIBIDORES DE PROTEASA NS3 DEL VIRUS DE LA HEPATITIS C CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a nuevos inhibidores de proteasa del virus de la hepatitis C ("HCV"), a las composiciones farmacéuticas que contienen uno o más de dichos inhibidores, a los métodos de preparación de dichos inhibidores y a los métodos de uso de dichos inhibidores para tratar la hepatitis C y desórdenes relacionados. Esta invención describe adicio almente nuevos compuestos como inhibidores de la serina proteasa NS3/NS4a de HCV. Esta solicitud reivindica prioridad de la solicitud de patente norteamericana provisional Acta Número 60/548.251 presentada el 27 de febrero de 2004.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El virus de la hepatitis C (HCV) es un virus de ARN de un solo filamento de (+)-sentido, que ha sido implicado como agente causante principal de la hepatitis no A, no B (NANBH), particularmente la NANBH asociada a la sangre (BB-NANBH) (ver, Publicación de la Solicitud de Patente Internacional No. WO 89/04669 y Publicación de la Solicitud de Patente Europea No. EP 381.216). Debe distinguirse la NANBH de otros tipos de enfermedades hepáticas inducidas por virus, tales como el virus de la hepatitis A (HAV), el virus de la hepatitis B (HBV), el virus de la hepatitis delta (HDV), citomegalovirus (CMV) y virus de Epstein-Barr (EBV), así como también de otras formas de enfermedades hepáticas, tales como el alcoholismo y la cirrosis biliar primaria. Recientemente, una proteasa de HCV necesaria para el procesamiento de los polipéptidos y para la replicación viral ha sido identificada, clonada y expresada. (Ver, por ejemplo, la Patente Norteamericana No. 5.712.145). Esta poliproteína de aproximadamente 3000 aminoácidos contiene, desde el término amino hasta el término carboxi, una proteína de nucleocápsida (C), proteínas de envoltura (E1 y E2) y varias proteínas no estructurales (NS1 , 2, 3, 4a, 5a y 5b). La NS3 es una proteína de aproximadamente 68 kda, codificada por aproximadamente 1893 nucleótidos del genoma HCV, y tiene dos dominios distintos: (a) un dominio de serina proteasa que consiste en aproximadamente 200 de los aminoácidos N-terminales; y (b) un dominio de ATPasa que depende de ARN en el término C de la proteína. La proteasa NS3 se considera un miembro del anillo de las quimiotripsinas debido a la similitud en la secuencia de la proteína, la estructura tridimensional general y el mecanismo de catálisis. Otras enzimas del tipo de la quimiotripsina son elastasa, factor Xa, trombina, tripsina, plasmina, urokinasa, tPA y PSA. La serina proteasa de HCV NS3 es responsable de la proteólisis del polipéptido (poliproteína) en las uniones NS3/NS4a, NS4a/NS4b, NS4b/NS5a y NS5a/NS5b y por lo tanto es responsable de generar cuatro proteínas virales durante la replicación viral.

Esto ha convertido a la serina proteasa HCV NS3 en un atractivo objetivo para quimioterapia antiviral. Los compuestos de la invención pueden inhibir dicha proteasa. También pueden modular el procesamiento del polipéptido del virus de la hepatitis C (HCV). Se ha determinado que la proteína NS4a, un polipéptido de aproximadamente 6 kda, es un co-factor para la actividad de la serina proteasa de NS3. La autodisociación de la unión NS3/NS4a con la serina proteasa NS3/NS4a ocurre intramolecularmente (es decir, cis) mientras que los otros sitios de disociación son procesados intermolecularmente (es decir, trans). El análisis de los sitios de disociación natural para la proteasa HCV reveló la presencia de cisteína en P1 y serina en P1' y que estos residuos están estrictamente conservados en las uniones NS4a/NS4b, NS4b/NS5a y NS5a/NS5b. La unión NS3/NS4a contiene una treonina en P1 y una resina en P1 '. Se ha postulado que la sustitución Cys? hr en NS3/NS4a es la responsable del requisito del procesamiento cis en vez de trans en esta unión. Ver, por ejemplo, Pizzi et al. (1994) Proc. Nati. Acad. Sci (USA) 91:888-892, Failla et al. (1996) Foldinq & Desiqn 135-42. El sitio de disociación NS3/NS4a es también más tolerante a la mutagénesis que los otros sitios. Ver, por eiemplo, Kollykhalov et al. (1994) J. Virol. 68:7525-7533. Se ha hallado también que se requieren residuos ácidos en la región cadena arriba del sitio de disociación, para una disociación eficiente. Ver, por ejemplo, Komoda et al. (1994) J. Virol. 68:7351-7357.

Los inhibidores de la proteasa HCV que se han mencionado incluyen antioxidant.es (ver, Publicación de la Solicitud de Patente Internacional No. WO 98/14181 ), algunos péptidos y análogos peptídicos (ver, Publicación de la Solicitud de Patente Internacional No. WO 98/17679, Landro et al. (1997) Biochem. 36:9340-9348, Ingallinella et al. (1998) Biochem. 37:8906-8914, Llinás-Brunet et al. (1998) Bioorq. Med. Chem. Lett. 8:1713-1718), inhibidores basados en el polipéptido de 70 aminoácidos eglina c (Martin et al. (1998) Biochem. 37:11459-11468, inhibidores de afinidad seleccionados del inhibidor de la secreción de tripsina pancreática humana (hPSTI-C3) y repertorios de minicuerpos (MBip) (Dimasi et al. (1997) J. Virol. 71 :7461-7469), cV E2 (un fragmento de anticuerpo de dominio variable "camelizado") (Martin et al. (1997) Protein Enq. 10:607-614), y a1-antiquimiotripsina (ACT) (Elzouki et al.) (1997) J. Hepat. 27:42-28). Una ribozima diseñada para destruir selectivamente el ARN del virus de la hepatitis C, ha sido recientemente dada a conocer (ver, BioWorid Today 9(217): 4 (10 de Noviembre de 1998)). También se hace referencia a las publicaciones de PCT, No. WO 98/17679, publicada el 30 de abril de 1998 (Vértex Pharmaceuticals Incorporated); WO 98/22496, publicada el 28 de mayo de 1998 (F. Hoffmann-La Roche AG); y WO 99/07734, publicada el 18 de febrero de 1999 (Boehringer Ingelheim Canadá Ltd.). El HCV ha sido implicado en la cirrosis del hígado y en la inducción del carcinoma hepatocelular. El pronóstico para pacientes que sufren de infección de HCV es corrientemente malo. La infección de HCV es más difícil de tratar que otras formas de hepatitis, debido a la falta de inmunidad o remisión asociadas con la infección de HCV. Los datos corrientes indican una tasa de supervivencia ¡nferior al 50% a los cuatro años post diagnóstico de cirrosis. Pacientes a los cuales se les diagnosticaron un carcinoma hepatocelular resectable localizado, tienen una tasa de supervivencia de 10-30% en cinco años, mientras que aquellos con carcinoma hepatocelular no resectable localizado tienen una tasa de supervivencia de menos del 1 % en cinco años. Se hace referencia a la WO 00/59929 (US 6.608.027, Titular: Boehringer Ingelheim (Canadá) Ltd.; Publicada el 12 de octubre del 2000) que describe derivados peptídicos de la fórmula: Se hace referencia a A. Marchetti eí al, Synlett, S1_, 1000-1002 (1999) que describe la síntesis de análogos bicíclicos de un inhibidor de proteasa NS3 de HCV NS3. Un compuesto allí descrito tiene la fórmula: También se hace referencia a W. Han et al, Bioorganic & Medicinal Chem. Lett, (2000) 10, 711-713, que describe la preparación de ciertas a-cetoamidas, a-cetoésteres y a-dicetonas que contienen funcionalidades alilo y etilo. Se hace referencia también a la WO 00/09558 (Titular: Boehringer Ingeiheim Limited; Publicada el 24 de febrero del 2000) que describe derivados peptídicos de la fórmula: donde los varios elementos se definen aquí. Un compuesto ilustrativo de esta sene es: También se hace referencia a la WO 00/09543 (Titular: Boehringer Ingelheim Limited; Publicada el 24 de febrero del 2000) que describe derivados peptídicos de la fórmula: donde los varios elementos se definen allí. Un compuesto ilustrativo de esta serie es: se hace referencia también a la Patente Norteamericana 6,608,027 (Boehringer Ingelheim, Canadá) que describe inhibidores de proteasa NS3 del tipo: donde las varias porciones se definen allí. Las terapias corrientes para la hepatitis C incluyen interferón-a (INFa) y terapia de combinación con ribavirina e interferón. Ver, por ejemplo, Beremguer et al. (1998) Proc. Assoc. Am. Phvsicians 110(2):98-112. Estas terapias sufren de una tasa de respuesta sostenida baja y de frecuentes efectos secundarios. Ver, por eiemplo, Hoofnagle et al. (1997) N. Engl. J. Med. 336:347. Actualmente, no existe ninguna vacuna disponible para la infección de HCV. Se hace referencia además a la WO 01/74768 (Titular: Vértex Pharmaceuticals Inc.) publicada el 11 de octubre de 2001 , que describe ciertos compuestos de la siguiente fórmula general (R es tal como se define allí), inhibidores de la NS3-serina proteasa del virus de la Hepatitis C: Un compuesto específico descrito en la WO 01/74768 antes mencionado tiene la siguiente fórmula: Las publicaciones de PCT WO 01/77113; WO 01/081325; WO 02/08198; WO 02/08256; WO 02/08187; WO 02/08244; WO 02/48172; WO 02/08251 ; y la solicitud de patente norteamericana pendiente Acta No. 10/052.386, presentada el 18 de enero de 2002, describe varios tipos de péptidos y/u otros compuestos como inhibidores de serina proteasa NS-3 del virus de la hepatitis C. La descripción de dichas solicitudes se incorpora aquí como referencia a las mismas. Son necesarios nuevos tratamientos y terapias para la infección de HCV. Son necesarios compuestos útiles en el tratamiento o prevención o mejoramiento de uno o más síntomas de la hepatitis C. Existe la necesidad de disponer de métodos de tratamiento o prevención o mejoramiento de uno o más síntomas de la hepatitis C. Existe la necesidad de disponer de métodos para modular la actividad de las serina proteasas, particularmente de la serina proteasa NS3/NS4a, usando los compuestos provistos aquí. Existe la necesidad de disponer de métodos para modular el procesamiento del polipéptido HCV usando los compuestos provistos aquí.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN En sus muchas modalidades, la presente ¡nvención provee una nueva clase de inhibidores de la proteasa HCV, de las composiciones farmacéuticas que contienen uno o más de los compuestos, de los métodos de preparación de formulaciones farmacéuticas que comprenden uno o más de dichos compuestos, y de métodos de tratamiento o prevención de HCV o mejoramiento de uno o más de los síntomas de la hepatitis C usando uno o más de dichos compuestos o una o más de dichas formulaciones. Asimismo se proveen métodos para modular la interacción de un polipéptido HCV con proteasa HCV. Entre los compuestos provistos aquí, se prefieren compuestos que inhiben la actividad de serina proteasa NS3/NS4a de HCV. La presente invención describe compuestos o enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros, diastereómeros y racematos de dichos compuestos, o una sal, solvato o éster farmacéuticamente aceptable de dichos compuestos, donde dichos compuestos tienen la estructura general que se muestra en la Fórmula estructural 1 : Fórmula I donde: R1 es H, OR8, NR9R10, o CHR9R10, donde R8, R9 y R10 pueden ser ¡guales o diferentes, y cada uno está independientemente seleccionado del grupo que consiste en H, alquil-, alquenil-, alquinil-, aril-, heteroalquil-, heteroaril-, cicloalquil-, heterociclil-, arilalquil-, y heteroarilalquilo; A y M pueden ser ¡guales o diferentes, cada uno está independientemente seleccionado de R, OR, NHR, NRR', SR, SO2R, y halo; o A y M están conectados entre sí de manera que la porción: que se muestra anteriormente en la Fórmula I forma un cicloalquilo de tres, cuatro, seis, siete u ocho miembros, un heterociclilo de cuatro a ocho miembros, un arilo de seis a diez miembros, o un heteroarilo de cinco a diez miembros; E es C(H) o C(R); L es C(H), C(R), CH2C(R), o C(R)CH2; R, R', R2, y R3 pueden ser iguales o diferentes, cada uno está independientemente seleccionado del grupo que consiste en H, alquil-, alquenil-, alquinil-, cicloalquil-, heteroalquil-, heterociclil-, aril-, heteroaril-, (cicloalquil)alquil-, (heterociclil)alquil-, aril-alquil- y heteroaril-alquil-; o alternativamente R y R' en NRR' están conectados entre sí de manera que NRR' forma un heterocíclilo de cuatro a ocho miembros; e Y está seleccionado entre las siguientes porciones: donde G es NH u O; y R15, R16, R17 y R18 pueden ser iguales o diferentes, y cada uno está independientemente seleccionado del grupo que consiste en H, alquilo, heteroalquilo, alquenilo, heteroalquenilo, alquinilo, heteroalquinilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo y heteroarilalquilo, o alternativamente, R15 y R16 están conectados entre sí para formar una estructura de un cicloalquilo, heteroarilo o heterociclilo de cuatro a ocho miembros, y asimismo, independientemente R17 y R18 están conectados entre sí para formar un cicloalquilo o heterociclilo de tres a ocho miembros; donde cada uno de dichos alquilo, arilo, heteroarilo, cícloalquilo o heterociclilo pueden estar no sustituidos o pueden estar opcionalmente independientemente sustituidos con una o más porciones seleccionadas del grupo que consiste en: hidroxi, alcoxi, ariloxi, tio, alquiltio, ariltio, amino, amido, alquiíamino, arilamino, alquilsulfonilo, ariisulfonilo, sulfonamido, alquilo, arilo, heteroarilo, alquilsulfonamido, arilsulfonamido, ceto, carboxi, carbalcoxi, carboxamido, alcoxicarbonilamino, alcoxicarboniloxi, alquilureido, arilureido, halo, ciano y nitro. La manifestación anterior "A y M están conectados entre sí de manera que la porción: '""' A \ r V mostrada anteriormente en la Fórmula I forma un cicloalquilo de tres, cuatro, seis, siete u ocho miembros, un heterociclilo de cuatro a ocho miembros, un arilo de seis a diez miembros, o un heteroarilo de cinco a diez miembros" puede ilustrarse de manera no limitativa de acuerdo a lo que sigue. Por lo tanto, por ejemplo, en el caso en el cual A y M están conectados de manera que la porción: mostrada anteriormente en la Fórmula I forma un cicloalquilo de seis miembros (ciciohexilo), la Fórmula I puede describirse como: una persona con experiencia en la materia apreciará que puede llegarse a definiciones similares para la Fórmula I cuando A y M tal como se muestran anteriormente en la porción: están conectadas para formar un cicloalquilo de tres, cuatro, siete u ocho miembros, un heterociclilo de cuatro a ocho miembros, un arilo de seis a diez miembros, o un heteroarilo de cinco a diez miembros. La manifestación anterior "alternativamente, R15 y R16 están conectados entre sí para formar una estructura cicloalquilo, heteroarilo o heterociclilo de cuatro a ocho miembros, y asimismo, independientemente R17 y R18 están conectados entre sí para formar un cicloalquilo o heterociclilo de tres a ocho miembros" significa las siguientes posibilidades: (i) que R15 y R16 están conectados para formar una estructura cíclica mientras que R17 y R18 no, y (ii) que R17 y R18 están conectados para formar una estructura cíclica. Las dos posibilidades son independientes una de la otra. En las definiciones previamente mencionadas de R, R', R2, y R3, el alquilo preferido está constituido por uno a diez átomos de carbono, el alquenilo o alquinilo preferidos están constituidos por dos o diez átomos de carbono, el cicloalquilo preferido está constituido por tres a ocho átomos de carbono, y el heteroalquilo, heteroarilo o heterocicloalquilo preferidos tienen de uno a seis átomos de oxígeno, nitrógeno, azufre o fósforo. Los compuestos representados por la Fórmula I, por sí mismos o en combinación con uno o más de otros agentes apropiados descritos aquí, pueden ser útiles para el tratamiento de enfermedades tales como, por ejemplo, HCV, HIV, AIDS (Síndrome de Deficiencia de Inmunidad Adquirida), y desórdenes relacionados, así como también para modular la actividad de la proteasa del virus de la hepatitis C (HCV), prevenir el HCV, o mejorar uno o más síntomas de la hepatitis C. Dicha modulación, tratamiento, prevención o mejoramiento pueden efectuarse con los compuestos de la invención así como también con composiciones o formulaciones farmacéuticas que comprenden dichos compuestos. Sin limitarnos a ninguna teoría, creemos que la proteasa HCV puede ser la proteasa NS3 o NS4a. Los compuestos de la invención pueden inhibir dicha proteasa. También pueden modular el procesamiento del polipéptido del virus déla hepatitis C (HCV).

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN En una modalidad, la presente ¡nvención describe compuestos que están representados por la Fórmula estructural 1 o una sal, solvato o éster de los mismos farmacéuticamente aceptables, donde las varias porciones son tal como se definen anteriormente. En otra modalidad, R1 es NR9R10, y R9 es H, R10 es H, o R14 donde R14 es H, alquilo, arilo, heteroalquilo, heteroarilo, cicloalquilo, alquilarilo, alquil-heteroarilo, aril-alquilo, alquenilo, alquinilo o heteroaril-alquilo. En otra modalidad, R14 está seleccionado del grupo que consiste en: - J OMC ^ OH -OH, -OMe, Í . ^ -3 XX 1,--:3 en otra modalidad, R2 está seleccionado del grupo que consiste en las siguientes porciones: en otra modalidad, R3 está seleccionado del grupo que consiste en: donde R ,31 es OH u O-alquilo; y 33"2 es H, C(O)CH3, C(O)OtBu o C(O)N(H)tBu. En una modalidad adicional, R3 está seleccionado del grupo que consiste en las siguientes porciones: en otra modalidad, Y está seleccionado de las siguientes porciones: en las cuales G es NH u O; y R15, R16, R17 y R18 pueden ser ¡guales o diferentes, y cada uno está independientemente seleccionado del grupo que consiste en H, alquilo, heteroalquilo, alquenilo, heteroalquenilo, alquinilo, heteroalquinilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo y heteroarilalquilo, o alternativamente, R 5 y R16 están conectados entre sí para formar una estructura cicloalquilo, heteroarilo o heterociclilo de cuatro a ocho miembros, y asimismo, independientemente R17 y R18 están conectados entre sí para formar un cicloalquilo o heterociclilo de tres a ocho miembros; donde cada uno de dicho alquilo, arilo, heteroarilo, cicloalquilo o heterociclilo puede estar no sustituido u opcionalmente independientemente sustituido con una o más porciones seleccionadas del grupo que consiste en: hidroxi, alcoxi, ariloxi, tio, alquiltio, ariltio, amino, amido, alquilamino, arilamino, alquilsulfonilo, ariisulfonilo, sulfonamido, alquilo, arilo, heteroarilo, alquilsulfonamido, arilsulfonamido, ceto, carboxi, carbalcoxi, carboxamido, alcoxicarbonilamino, alcoxicarboniloxi, alquilureido, arilureido, halo, ciano y nitro. En una modalidad adicional G es NH. En una modalidad adicional, Y está seleccionado del grupo que consiste en: donde Y31 está seleccionado del grupo que consiste en: x1¿x J Y32 está seleccionado del grupo que consiste en: e Y12 está seleccionado del grupo que consiste en H, CO2H, CO2Me, OMe, F, Cl, Br, NH2, N(H)S(O2)CH3, N(H)C(O)CH3, NO2, NMe2, S(O2)NH2, CF3, Me, OH, OCF3 y C(O)NH2 e Y33 está seleccionado del grupo que consiste en: En otra modalidad, la porción: está seleccionada de las estructuras siguientes: Ío6 En una modalidad adicional, la porción: está seleccionada de las siguientes estructuras: bn una modalidad adicional, la porción: está seleccionada de las siguientes estructuras: En una modalidad adicional, R1 es NHR14, donde R14 está seleccionado del grupo que consiste en: A4 Y OH, -OMe. ¿ -S 'OMe V ^. Av-3°H R2 está seleccionado del grupo que consiste en las siguientes porciones: está seleccionado del grupo que consiste en las siguientes porciones: CHA CH3 Y está seleccionado del grupo que consiste en: donde Y31 está seleccionado del grupo que consiste en: O O AY A YY) V v Yv AAV ^ 0-1 V . Y Vi 1-4 1-4 Y está seleccionado del grupo que consiste en: X o e Y12 está seleccionado del grupo que consiste en H, CO2H, CO2Me, OMe, F, Cl, Br, NH2, N(H)S(O2)CH3, N(H)C(O)CH3, NO2) NMe2, S(O2)NH2, CF3, Me, OH, OCF3, y C(O)NH2 e Y33 está seleccionado del grupo que consiste en: y la porción: es: En otra modalidad adicional, la presente ¡nvención describe compuestos que se muestran en el Cuadro 1, Cuadro 2, Cuadro 3, Cuadro 4, Cuadro 5 y Cuadro 6 posteriormente en esta memoria. Asimismo en los Cuadros se muestran las actividades biológicas de varios compuestos de la invención (como valores Ki*). El intervalo de Ki* en los Cuadros 1-6 se define de la manera siguiente: A: <75 nM (nanomolar); B: 76-250 nM; y C: >250 nM. Una modalidad más de ia ¡nvención describe los compuestos en el Cuadro 7: En una modalidad adicional, esta invención describe los siguientes compuestos: Otra modalidad adicional describe los compuestos en el Cuadro : CUADRO 8 Tal como se usaron anteriormente, y a través de esta descripción, los siguientes términos, a menos que se indique lo contrario, se interpretarán con los siguientes significados: "Paciente" incluye tanto seres humanos como animales.

"Mamífero" se refiere a seres humanos y otros animales mamíferos. "Alquilo" significa un grupo hidrocarbonado alifático que puede ser recto o ramificado y que comprende aproximadamente 1 hasta aproximadamente 20 átomos de carbono en la cadena. Los grupos alquilo preferidos contienen aproximadamente 1 hasta aproximadamente 12 átomos de carbono en la cadena. Los grupos alquilo más preferidos contienen aproximadamente 1 hasta aproximadamente 6 átomos de carbono en la cadena. Ramificado significa que uno o más grupos alquilo inferiores tales como metilo, etilo o propilo, están unidos a una cadena alquilo lineal. "Alquilo inferior" significa un grupo que tiene aproximadamente 1 hasta aproximadamente 6 átomos de carbono en la cadena que puede ser recta o ramificada. El término "alquilo sustituido" significa que el grupo alquilo puede estar sustituido con uno o más sustituyentes que pueden ser iguales o diferentes, y que dichos sustituyentes están independientemente seleccionados del grupo que consiste en halo, alquilo, arilo, cicloalquilo, ciano, hidroxi, alcoxi, alquiltio, amino, -NH(alquilo), -NH(cicloalquilo), -N(alquilo)2, -N(alquilo)2, carboxi y -C(O)O-alquilo. Ejemplos no limitativos de grupos alquilo apropiados incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo y t-butilo.

"Alquenilo" significa un grupo hidrocarbonado alifático que contiene por lo menos un doble enlace de carbono a carbono y que puede ser recto o ramificado y comprende aproximadamente 2 hasta aproximadamente 15 átomos de carbono en la cadena. Los grupos alquenilo preferidos tienen aproximadamente 2 hasta aproximadamente 12 átomos de carbono en la cadena; y más preferiblemente aproximadamente 2 hasta aproximadamente 6 átomos de carbono en la cadena. Ramificado significa que uno o más grupos de alquilo inferior tales como metilo, etilo o propilo, están unidos a una cadena alquenilo lineal. "Alquenilo ¡nferior" significa aproximadamente 2 hasta aproximadamente 6 átomos de carbono en la cadena la cual puede ser recta o ramificada. Ei término "alquenilo sustituido" significa que el grupo alqueniio puede estar sustituido con uno o más sustituyentes que pueden ser iguales o diferentes, donde cada sustituyente está independientemente seleccionado del grupo que consiste en halo, alquilo, arilo, cicloalquilo, ciano, alcoxi y -S(alquilo). Ejemplos no limitativos de grupos alquenilo apropiados incluyen etenilo, propenilo, n-butenilo, 3-metilbut-2-enilo, n-pentenilo, octenilo y decenilo.

"Alquinilo" significa un grupo hidrocarbonado alifático que contiene por lo menos un triple enlace de carbono a carbono y que puede ser recto o ramificado y comprenderá aproximadamente 2 hasta aproximadamente 15 átomos de carbono en la cadena. Los grupos alquinilo preferidos tienen aproximadamente 2 hasta aproximadamente 12 átomos de carbono en la cadena; y más preferiblemente aproximadamente 2 hasta aproximadamente 4 átomos de carbono en la cadena. Ramificado significa que uno o más grupos alquilo inferior tales como metilo, etilo o propilo están unidos a una cadena alquinilo lineal. "Alquinilo inferior" significa aproximadamente 2 hasta aproximadamente 6 átomos de carbono en la cadena que puede ser recta o ramificada. Ejemplos no limitativos de dichos grupos alquinilo apropiados incluyen etinilo, propinilo, 2-butinilo y 3-metilbutinilo. El término "alquinílo sustituido" significa que el grupo alquinilo puede estar sustituido con uno o más sustituyentes que pueden ser iguales o diferentes, donde cada sustituyente está independientemente seleccionado del grupo que consiste en alquilo, arilo y cicloalquilo.

"Arilo" significa un sistema de anillo monocíclico o multicíclico aromático que comprende aproximadamente 6 hasta aproximadamente 14 átomos de carbono, preferiblemente aproximadamente 6 hasta aproximadamente 10 átomos de carbono. El grupo arilo puede estar opcionalmente sustituido con uno o más "sustituyentes del sistema de anillo" que puede ser igual o diferente y que es tal como se define aquí. Ejemplos no limitativos de grupos arilo apropiados incluyen fenilo y naftilo.

"Heteroarilo" significa un sistema de anillo monocíclico o multicíclico aromático que comprende aproximadamente 5 hasta aproximadamente 14 átomos en el anillo, preferiblemente aproximadamente 5 hasta aproximadamente 10 átomos en el anillo, donde uno o más de los átomos del anillo consisten en un elemento distinto de carbono, por ejemplo, nitrógeno, oxígeno o azufre, solo o en combinación. Los heteroarilos preferidos contienen aproximadamente 5 hasta aproximadamente 6 átomos en el anillo. El "heteroarilo" puede estar opcionalmente sustituido con uno o más "sustituyentes de sistema de anillo" que pueden ser iguales o diferentes, y que son tal como se definen aquí. El prefijo aza, oxa o tia antes del nombre de raíz heteroarilo significa que por lo menos un átomo de nitrógeno, oxígeno o azufre respectivamente, está presente como átomo del anillo. Un átomo de nitrógeno de un heteroarilo puede estar opcionalmente oxidado al N-óxido correspondiente. Ejemplos no limitativos de heteroarilos apropiados incluyen, piridilo, pirazinilo, furanilo, tienilo, pirimidinilo, piridona (incluyendo piridonas N-sustituidas), isoxazolilo, isotiazolilo, oxazolilo, tiazolilo, pirazolilo, furazanilo, pirrolilo, pirazolilo, triazoiilo, 1 ,2,4-tiadiazolilo, pirazinilo, piridazinilo, quinoxalinilo ftalazinilo, oxindolilo, imidazo[1,2-a]piridinilo, ¡m¡dazo[2,1-bjtiazolilo, benzofurazanilo, indolilo, azaindolilo, bencimidazolilo, benzotienilo, quinolinilo, imidazolilo, tienopiridilo, quinazolinilo, tienopirimidilo, pirrolopiridilo, imidazopiridilo, isoquinolinilo, benzoazaindolilo, 1 ,2,4-triazinilo, benzotiazolilo y similares. El término "heteroarilo" se refiere también a porciones heteroarilo parcialmente saturadas tales como, por ejemplo, tetrahidroisoquinolilo, tetrahidroquinolilo y similares.

"Aralquilo" o "arilalquilo" significa un grupo aril-alquilo en el cual el arilo y el alquilo son tal como se han descripto previamente. Los aralquilos preferidos comprenden un grupo alquilo inferior. Ejemplos no limitativos de grupos aralquilo apropiados incluyen bencílo, 2-fenetilo y naftalenilmetilo. El enlace con la porción principal se efectúa a través del alquilo.

"Alquilarilo" significa un grupo alquil-arilo en el cual el alquilo y el arilo son tal como se han descripto previamente. Los alquilarilos preferidos comprenden un grupo alquilo inferior. Ejemplos no limitativos de un grupo alquilarilo apropiado es tolilo. El enlace con la porción principal se efectúa a través del arilo.

"Cicloalquilo" significa un sistema de anillo mono- o multicíclico no aromático que comprende aproximadamente 3 hasta aproximadamente 10 átomos de carbono, preferiblemente aproximadamente 5 hasta aproximadamente 10 átomos de carbono. Los anillos cicloalquilo preferidos contienen aproximadamente 5 hasta aproximadamente 7 átomos en el anillo. El cicloalquilo puede estar opcionalmente sustituido con uno o más "sustituyentes del sistema de anillo" que pueden ser iguales o diferentes, y que son como se definen aquí. Ejemplos no limitativos de cicloalquilos monocíclicos apropiados incluyen ciclopropilo, ciclopentilo, ciciohexilo, cicioheptilo y similares. Ejemplos no limitativos de cicloalquilos multicíclicos apropiados incluyen 1 -decalinilo, norbornilo, adamantilo y similares, así como también las especies parcialmente saturadas tales como, por ejemplo, indanilo, tetrahidronaftilo y similares.

"Halógeno" o "halo" significa flúor, cloro, bromo o yodo. Se prefiere flúor, cloro y bromo.

"Sustituyentes del sistema de anillo" significa un sustituyente unido a un sistema de anillo aromático o no aromático que, por ejemplo, reemplaza un hidrógeno disponible en el sistema de anillo. Los sustituyentes del sistema de anillo pueden ser ¡guales o diferentes, y cada uno está independientemente seleccionado del grupo que consiste en alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, heteroarilo, aralquilo, alquilarilo, heteroaralquilo, heteroarilalquenilo, heteroarilalquinilo, alquilheteroarilo, hidroxi, hidroxialquilo, alcoxi, ariloxi, aralcoxi, acilo, aroílo, halo, nitro, ciano, carboxi, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, aralcoxicarbonilo, aiquilsulfonilo, ariisulfonilo, heteroariisulfonilo, alquiltio, ariltio, heteroariltio, aralquiltio, heteroaralquiltio, cicloalquilo, heterociclilo, -C(=N-CN)-NH2, -C(=NH)-NH2, -C(=NH)-NH(alquilo), Y1Y2N-, Y1Y2N-alquil-, Y?Y2NC(O)-, Y^NSO;,- y -SO2NY1Y2, donde Y^ e Y2 pueden ser iguales o diferentes y están independientemente seleccionados del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, arilo, cicloalquilo y aralquilo. "Sustituyente del sistema de anillo" puede significar también una porción simple que reemplaza simultáneamente dos hidrógenos disponibles en dos átomos de carbono adyacentes (un H en cada carbono) en un sistema de anillo. Ejemplos de dichas porciones son metilendioxi, etilendioxi, -C(CH3)2- y similares que forman porciones tales como, por ejemplo: "Heterociclilo" significa un sistema de anillo monocíclico o multicíclico no aromático saturado que comprende aproximadamente 3 hasta aproximadamente 10 átomos en el anillo, preferiblemente aproximadamente 5 hasta aproximadamente 10 átomos en el anillo, en los cuales uno o más de los átomos en el sistema de anillo es un elemento distinto de carbono, por ejemplo nitrógeno, oxígeno o azufre, solos o en combinación. No hay ningún átomo de oxígeno y/o azufre adyacente presente en el sistema de anillo. Los heterociclilos preferidos contienen aproximadamente 5 hasta aproximadamente 6 átomos en el anillo. El prefijo aza, oxa o tia antes del nombre de raíz heterociclilo significa que por lo menos un átomo de nitrógeno, oxígeno o azufre respectivamente está presente como átomo del anillo. Cualquier -NH en un anillo heterociclilo puede existir protegido tal como por ejemplo un grupo -N(Boc), -N(CBz), -N(Tos) y similares; dichas protecciones se consideran también partes de esta invención. El heterociclilo puede estar opcionalmente sustituido con uno o más "sustituyentes del sistema de anillo" que pueden ser iguales o diferentes que son tal como se definen aquí. El átomo de nitrógeno o azufre del heterociclilo puede estar opcionalmente oxidado al correspondiente N-óxido, S-óxido o S,S-dióxido. Ejemplos no limitativos de anillos heterociclilo monocíclicos apropiados incluyen piperidilo, pirrolidinilo, piperazinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, tiazolidinilo, 1 ,4-dioxanilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotiofenilo, lactama, lactona y similares.

Cabe observar que en los sistemas de anillo que contienen heteroátomos, de esta invención, no hay grupos hidroxilo en los átomos de carbono adyacentes a N, O o S, ni tampoco a los grupos N o S en el carbono adyacente a otro heteroátomo. Tanto como, por ejemplo, en el anillo: no hay ningún -OH unido directamente a los carbonos marcados 2 y 5. Cabe observar también que las formas tautoméricas tales como, por ejemplo, las porciones: se consideran equivalentes en ciertas modalidades de esta invención. "Alquinilalquilo" significa un grupo alquinil-alquil- en el cual el alquinilo y alquilo son tal como se han descripto previamente. Los alquinilalquilos preferidos contienen un grupo alquinilo inferior y un grupo alquilo inferior. El enlace con la porción principal se efectúa a través del alquilo. Ejemplos no limitativos de los grupos alquinilalquilo apropiados ¡ncluyen propargilmetilo.

"Heteroaralquilo" significa un grupo heteroaril-alquil- en el cual el heteroarilo y el alquilo son tal como se han descripto previamente. Los heteroaralquilos preferidos contienen un grupo alquilo inferior. Ejemplos no limitativos de grupos aralquilo apropiados incluyen piridilmetilo y quinolin-3-ilmetilo. El enlace con la porción principal se efectúa a través del alquilo.

"Hidroxialquilo" significa un grupo HO-alquil- en el cual el alquilo es tal como se ha definido previamente. Los hidroxialquilos preferidos contienen alquilo inferior. Ejemplos no limitativos de grupos hidroxialquilo apropiados incluyen hidroximetilo y 2-hidroxíetilo.

"Acilo" significa un grupo H-C(O)-, alquil-C(O)- o cicloalquil-C(O)- , en el cual los varios grupos son tal como se han descripto previamente. El enlace con la porción principal se efectúa a través del carbonilo. Los acilos preferidos contienen un alquilo inferior. Ejemplos no limitativos de grupos acilo apropiados incluyen formilo, acetilo y propanoílo.

"Aroílo" significa un grupo aril-C(O)- en el cual el grupo arilo es tal como se ha descripto previamente. El enlace con la porción principal se efectúa a través del carbonilo. Ejemplos no limitativos de grupos apropiados incluyen benzoílo y 1-naftoílo.

"Alcoxi" significa un grupo alquil-O- en el cual el grupo alquilo es tal como se ha descripto previamente. Ejemplos no limitativos de grupos alcoxi apropiados incluyen metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi y n-butoxi. El enlace con la porción principal se efectúa a través del oxígeno del éter.

"Ariloxi" significa un grupo aril-O- en el cual el grupo arilo es tal como se ha descripto previamente. Ejemplos no limitativos de grupos ariloxi apropiados incluyen fenoxi y naftoxi. El enlace con la porción principal se efectúa a través del oxígeno del éter.

"Aralquiloxi" significa un grupo aralquil-O- en el cual el grupo aralquilo es tal como se ha descripto previamente. Ejemplos no limitativos de grupos aralquiloxi apropiados incluyen benciloxi y 1- o 2-naftalenmetoxi. El enlace con la porción principal se efectúa a través del oxígeno del éter.

"Alquiltio" significa un grupo alquil-S- en el cual el grupo alquilo es tal como se ha descripto previamente. Ejemplos no limitativos de grupos alquiltio apropiados incluyen metiltio y etiltio. El enlace con la porción principal se efectúa a través del azufre.

"Ariltio" significa un grupo aril-S- en el cual el grupo arilo es tal como se ha descripto previamente. Ejemplos no limitativos de grupos ariltio apropiados incluyen feniltio y naftiltio. El enlace con la porción principal se efectúa a través del azufre.

"Aralquiltio" significa un grupo aralquil-S- en el cual el grupo aralquilo es tal como se ha descripto previamente. Un ejemplo no limitativo de un grupo aralquiltio apropiado es benciltio. El enlace con la porción principal se efectúa a través del azufre.

"Alcoxicarbonilo" significa un grupo alquil-O-CO-. Ejemplos no limitativos de grupos alcoxicarbonilo apropiados incluyen metoxicarbonilo y etoxicarbonilo. El enlace con la porción principal se efectúa a través del carbonilo.

"Ariloxicarbonilo" significa un grupo aril-O-C(O)-. Ejemplos no limitativos de grupos ariloxicarbonilo apropiados incluyen fenoxicarbonilo y naftoxicarbonilo. El enlace con la porción principal se efectúa a través del carbonilo.

"Aralcoxicarbonilo" significa un grupo aralquil-O-C(O)-. Un ejemplo no limitativo de un grupo aralcoxicarbonilo apropiado es benciloxicarbonilo. El enlace con la porción principal se efectúa a través del carbonilo.

"Alquilsulfonilo" significa un grupo alquil-S(O2)-. Grupos preferidos son aquellos en los cuales el grupo alquilo es alquilo inferior. El enlace con la porción principal se efectúa a través del sulfonilo. "Ariisulfonilo" significa un grupo aril-S(O2)-. El enlace con la porción principal se efectúa a través del sulfonilo. El término "sustituido" significa que uno o más hidrógenos en el átomo designado son reemplazados con una selección del grupo indicado, con la condición de no exceder la valencia normal del átomo designado bajo las circunstancias existentes, y con la condición de que la sustitución proporcione un compuesto estable. Las combinaciones de sustituyentes y/o variables son únicamente permisibles si dichas combinaciones proporcionan compuestos estables. Mediante "compuesto estable" o "estructura estable" se indica un compuesto que es suficientemente fuerte para sobrevivir al aislamiento con un grado de pureza útil en la mezcla de reacción, que pueda formularse en un agente terapéutico eficaz.

El término "uno o más" o "por lo menos un", cuando se indica la cantidad de sustituyentes, compuestos, agentes de combinación y similares, se refiere a por lo menos uno, y hasta la cantidad máxima de sustituyentes, compuestos, agentes de combinación y similares química y físicamente permisibles, que están presentes o que se agregan, dependiendo del contexto. Dichas técnicas y conocimientos son bien conocidos por los expertos en la materia.

El término "opcionalmente sustituido" significa una sustitución opcional con los grupos radicales o porciones especificadas.

El término "aislado" o "en forma aislada" para un compuesto se refiere al estado físico de dicho compuesto después de aislarlo a partir de un procedimiento de síntesis o de una fuente natural o combinaciones de los mismos. El término "purificado" o "en forma purificada " para un compuesto se refiere al estado físico de dicho compuesto después de obtenerlo después de un procedimiento o procedimientos de purificación aquí descriptos o que son bien conocidos por los expertos en la materia, con una pureza suficiente para que sea caracterizable mediante técnicas analíticas convencionales tales como las que se describen aquí o que son bien conocidas por los expertos en la materia. Cabe observar también que se asume que cualquier heteroátomo con valencias no satisfechas en el texto, esquemas, ejemplos y cuadros presentes, tienen los átomos de hidrógeno necesarios para satisfacer las valencias. Cuando un grupo funcional en un compuesto se denomina "protegido", significa que el grupo está en forma modificada para excluir reacciones secundarias indeseables en el sitio protegido cuando el compuesto es sometido a una reacción. Los grupos protectores apropiados serán reconocidos por los expertos en la materia así como también con referencia a los textos convencionales tales como por ejemplo, T. W. Greene et al, Protective Groups in organic Synthesis (1991 ), Wiley, New York. Cuando cualquier variable (por ejemplo arilo, heterociclo, R2, etc.) ocurre más de una vez en cualquier constituyente o en la Fórmula 1 , su definición cada vez que ocurre es independiente de su definición cada vez que vuelve a ocurrir. Tal como se usa aquí, el término "composición" abarca un producto que comprende los ingredientes especificados en las cantidades especificadas, así como también cualquier producto que es el resultado, en forma directa o indirecta de la combinación de los ingredientes especificados en las cantidades especificadas. Los profármacos y solvatos de los compuestos de la invención están también contemplados aquí. El témino "profármaco", tal como se emplea aquí, denota un compuesto que es un precursor de un fármaco, el cual cuando es administrado a un sujeto, sufre una conversión química causada por procesos metabólicos o químicos que proporcionan un compuesto de Fórmula 1 o una sal y/o un solvato del mismo. Una discusión de los profármacos ha sido provista en Higuchi and V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems (1987) 14 of the A.C.S. Symposium Series, and in Bioreversible Carriers in Drug Design, (1987) Edward B. Roche, ed., American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, que se incorporan aquí como referencia. "Solvato" se refiere a una asociación física de un compuesto de esta invención con una o más moléculas de solvente. Esta asociación física involucra varios grados de unión iónica y covalente incluyendo unión de hidrógeno. En algunos casos, el solvato será capaz de ser aislado, por ejemplo cuando se incorporan una o más moléculas de solvente en el retículo cristalino del sólido cristalino. "Solvato" abarca solvatos tanto en fase de solución como aislables. Ejemplos no limitativos solvatos apropiados incluyen etanolatos, metanolatos y similares. "Hidratos" es un solvente en el cual la molécula solvente es H2O. "Cantidad eficaz" o "cantidad terapéuticamente eficaz" describe una cantidad de compuesto o una composición de la presente invención que es eficaz para inhibir los CDK(s) y por lo tanto para producir el efecto terapéutico, mejorador, inhibidor o preventivo deseado. Los compuestos de Fórmula 1 pueden formar sales que están también dentro del alcance de esta ¡nvención. La referencia a un compuesto de Fórmula 1 ¡ncluye aquí referencia a las sales del mismo, a menos que se indique lo contrario. El término "sales", tal como se emplean aquí denota sales acidas formadas con ácidos inorgánicos y/o orgánicos, así como también sales básicas formadas con bases inorgánicas y/o orgánicas. Demás, cuando un compuesto de Fórmula 1 una porción básica tal como pero sin limitarla a una piridina o imidazol, y una porción acida, tal como pero sin limitarla a un ácido carboxílico, pueden formarse ("sales internas") y se incluirán dentro del término "sales" tal como se usa aquí. Se prefieren las sales farmacéuticamente aceptables (es decir, no tóxicas, fisiológicamente aceptables), aunque también son útiles otras sales. Las sales de los compuestos de la Fórmula 1 pueden formarse por ejemplo, mediante la reacción de un compuesto de Fórmula 1 con una cantidad de un ácido base, tal como una cantidad equivalente en un medio tal como un medio en el cual la sal precipita o en un medio acuoso seguido de liofilización. Ejemplos de sales de adición de ácido incluyen acetatos, ascorbatos, benzoatos, bencensulfonatos, bisulfatos, boratos, butiratos, citratos, alcanforatos, alcansulfonatos, fumaratos, clorhidratos, bromhidratos, yodhidratos, lactatos, maleatos, metansulfonatos, naftalensulfonatos, nitratos, oxalatos, fosfatos, propionatos, salicilatos, succinatos, sulfatos, tartratos, tiocionatos, toluensulfanatos (conocidos también como tosilatos), y similares. Adicionalmente, los ácidos que se consideran generalmente apropiados para la formación de sales farmacéuticamente útiles a partir de compuestos farmacéuticos básicos fueron discutidos, por ejemplo, por P. Stahl ef al, Camille G. (eds.) Handbook of Pharmaceutical Salts. Properties, Selection and Use. (2002) Zurich: Wiley-VCH; S. Berge et al, Journal of Pharmaceutical Sciences (1977) 66(1 ) 1 -19; P. Gould, International J. of Pharmaceutics (1986) 33 201-217; Anderson et al, The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press, New York; and in The Orange Book (Food & Drug Administration, Washington, D.C. en su sitio de la red). Estas descripciones se incorporan aquí como referencia. Ejemplos de sales básicas incluyen sales de amonio, sales de metales alcalinos tales como sales de sodio, litio y potasio, sales de metales alcalino terreas tales como sales de calcio magnesio, sales con bases orgánicas (por ejemplo aminas orgánicas) tales como dicíclohexilaminas, t-butil aminas, y sales con aminoácidos tales como arginina, lisina y similares. Los grupo que contienen nitrógeno básico pueden cuaternizarse con agentes tales como haluros alquilo ¡nferior (por ejemplo cloruro, bromuro y yoduros de metilo, etilo y butilo), sulfatos de dialquilo (por ejemplo sulfatos de dimetilo, dietilo y dibutilo), haluros de cadena larga (por ejemplo cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo y estearilo), haluros de aralquilo (por ejemplo bromuros de bencilo y fenetilo) y otros. Todas dichas sales, ácidos y sales básicas se consideran sales farmacéuticamente aceptables dentro del alcance de la invención, y todas dichas sales acidas y sales básicas se consideran equivalentes a las formas libres de los compuestos correspondientes para los propósitos de la invención. Los esteres farmacéuticamente aceptables de los presentes compuestos incluyen los grupos siguientes: (1 ) esteres de ácido carboxílico obtenidos por esterificación de los grupos hidroxi, en los cuales la porción no carbonilo de la porción ácido carboxílico de la agrupación éster está seleccionada entre alquilo de cadena recta o ramificada (por ejemplo, acetilo, n-propilo, t-butilo, o n-butilo), alcoxialquilo (por ejemplo, metoximetilo), aralquilo (por ejemplo bencilo), ariloxialquilo (por ejemplo fenoximetilo), arilo (por ejemplo, fenilo opcionalmente sustituido con por ejemplo halógeno, alquilo de C -4, o alcoxi de C1- o amino); (2) esteres de sulfonato tales como alquil- o aralquilsulfonilo (por ejemplo metansulfonilo); (3) esteres de aminoácidos (por ejemplo, L-valilo o L-isoleucilo); (4) esteres de fosfonato y (5) esteres de mono-, di- o trifosfato. Los esteres de fosfato pueden esterificarse adicionalmente, mediante por ejemplo un alcohol de C?-20 o un derivado reactivo del mismo o mediante un 2,3-di (C6-24) acil glicerol. Los compuestos de la Fórmula 1 , y las sales, solvatos, esteres y profármacos de los mismos, pueden existir en su forma tautomérica (por ejemplo en forma de un éter de amida o imino). Todas dichas formas tautoméricas se contemplan aquí como parte de la presente invención. Todos los estereoisómeros (por ejemplo, los isómeros geométricos, los isómeros ópticos y similares) de los presentes compuestos (incluyendo aquellos de las sales, solvatos, esteres y profármacos de los compuestos así como también de las sales, solvatos y esteres de los profármacos), tal como los que pueden existir debido a los carbonos asimétricos en varios sustituyenles, incluyendo las formas enantioméricas (que pueden existir incluso en ausencia de carbonos asimétricos), las formas rotaméricas, los atropisómeros, y las formas diasteroméricas, están contempladas dentro del alcance de esta invención, así como también los isómeros posicionales (tales como por ejemplo, 4-piridilo y 3-piridilo). Los estereoisómeros individuales y los compuestos de la invención pueden estar por ejemplo sustancialmente libres de otros isómeros o pueden mezclarse, por ejemplo como racematos o con todos los otros, o con otros estereoisómeros seleccionados. Los centros quirales de la presente invención pueden tener la configuración S o R tal como ha sido definida por las Recomendaciones IUPAC 1974. El uso de los términos "sal" "solvato" "profármaco" y similares, se aplica igualmente a la sal, solvato o los profármacos de los enantiómeros, esteroisómeros, rotámeros, tautómeros, isómeros posicionales, racematos o profármacos y a los compuestos de la invención. Las formas polimórficas de los compuestos de la Fórmula I, y de las sales, solvatos, esteres y profármacos de los compuestos de la Fórmula I, se incluirán en la presente invención. Puede comprenderse que la utilidad de los compuestos de la Fórmula 1 para las aplicaciones terapéuticas discutidas aquí es aplicable a cada compuesto por sí mismo o a la combinación o combinaciones de uno o más compuestos de la Fórmula 1 según se ilustra por ejemplo, en el párrafo inmediato siguiente. Puede aplicarse lo mismo a las composiciones farmacéuticas que comprenden dicho compuesto o compuestos y métodos de tratamiento que involucran dicho compuesto o compuestos. Los compuestos de acuerdo con la invención pueden tener propiedades farmacológicas; en particular, los compuestos de la Fórmula 1 pueden ser inhibidores de la proteasa de HCV, y cada compuesto por sí mismo o uno o más de los compuestos de la Fórmula 1 pueden combinarse con uno o más compuestos seleccionados de la Fórmula 1. Los compuestos pueden ser útiles para tratar enfermedades tales como por ejemplo HCV, HIV, (SIDA, Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida), y desórdenes relacionados, así como también para modular la actividad de la proteasa del virus de la hepatitis C (HCV), para prevenir el HCV, o para mejorar uno o más síntomas de la hepatitis C. Los compuestos de la Fórmula 1 pueden usarse para la manufactura de un medicamento para tratar desórdenes asociados con la proteasa HCV, por ejemplo el método comprende poner en contacto íntimo un compuesto de la Fórmula 1 , o un portador farmacéuticamente aceptable.

En otra modalidad, esta ¡nvención provee composiciones farmacéuticas que comprenden el compuesto o los compuestos de la ¡nvención como ingrediente activo. Las composiciones farmacéuticas comprenden generalmente adicionalmente por lo menos un diluyente excipiente portador farmacéuticamente aceptable (denominados aquí colectivamente materiales portadores). Debido a su actividad inhibidora de HCV, dichas composiciones farmacéuticas poseen utilidad para el tratamiento de la hepatitis C y desórdenes relacionados. En otra modalidad, la presente invención describe métodos para preparar composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos de la invención como ingrediente activo. En las composiciones farmacéuticas y métodos de la presente ¡nvención, el ingrediente activo se administra típicamente mezclado con materiales portadores apropiados, convenientemente seleccionados con respecto a la forma de administración deseada es decir tabletas orales, cápsulas (de relleno sólido, de relleno semisólido o de relleno líquido), polvos para su reconstitución, geles orales, elixires, granulos dispersable, jarabes, suspensiones y similares, y coherentes con las prácticas farmacéuticas convencionales. Por ejemplo, para administración oral en forma de tabletas o cápsulas, el componente farmacológicamente activo puede combinarse con cualquier portador inerte oral no tóxico farmacéuticamente aceptable, tal como lactosa, almidón, sucrosa, celulosa, estearato de magnesio, fosfato dicálcico, sulfato de calcio, talco, manitol, alcohol etílico (forma diluida) y similares. Además, cuando se desea o es necesario, pueden incorporarse también a la mezcla aglutinantes, lubricantes, agentes desintegrantes y agentes colorantes apropiados. Los polvos y tabletas pueden comprender desde aproximadamente 5 hasta aproximadamente 95% en peso de la composición de la ¡nvención. Los aglutinantes apropiados incluyen almidón, gelatina, azúcares naturales, edulcorantes de maíz, gomas naturales y sintéticas tales goma acacia, alíñate de socio, carboximetilcelulosa, polietilengicol y ceras. Entre los lubricantes pueden mencionarse, para ser usados en estas formas de dosificación, el ácido bórico, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio, y similares. Los desintegrantes incluyen almidón, metilcelulosa, goma guar y similares. Pueden incluirse también presen/adores y agentes edulcorantes y saborizantes cuando es apropiado. Algunos de los términos indicados anteriormente, es decir desintegrantes, diluyentes lubricantes, aglutinantes y similares, se discutirán en forma más detallada a continuación. Adicionalmente las composiciones de la presente invención pueden formularse en forma de una irrigación sostenida para proporcionar el régimen de liberación controlada de uno o más de los componente o ingredientes activos para optimizar los efectos terapéuticos es decir actividad inhibidora de HCV y similares. Las formas de dosificación apropiadas para la liberación sostenida incluyen tabletas en capas que contienen capas de varios regímenes de desintegración o matrices poliméricas de liberación controlada impregnadas con los componentes activos, y configuradas en forma de tabletas o cápsulas que contienen dichas matrices poliméricas porosas impregnadas encapsuladas. Las preparaciones de forma líquida incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones. Como ejemplo pueden mencionarse soluciones de agua o agua-propilenglicol para inyecciones parenterales o la adición de edulcorantes y pacificantes para soluciones, suspensiones y emulsiones orales. Las preparaciones de forma líquida pueden incluir también soluciones para administración intranasal. Las preparaciones en aerosol apropiadas para inhalación pueden incluir soluciones y sólidos en forma de polvos, que pueden estar en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable tal como gas comprimido inerte por ejemplo nitrógeno.

Para preparar supositorios, se funde primero una cera de bajo punto de fusión tal como una mezcla de glicéridos de ácido graso tales como manteca de cacao, y se dispersa homogéneamente el ingrediente activo mediante agitación y mezcla similar. La mezcla homogénea fundida se vierte luego en moldes del tamaño conveniente, se deja enfriar y a continuación se solidifica. Asimismo se incluyen preparaciones de forma sólida que se convertirán poco tiempo antes de su uso a preparaciones de forma líquida para administración oral o parenteral. Dichas formas líquidas incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones. Los compuestos de la invención pueden liberarse también por vía transdérmica. Las composiciones transdérmicas pueden tener las formas de cremas, lociones y aerosoles y/o emulsiones y pueden incluirse en un parche transdérmico del tipo de matriz o reservorio, que son convencionales en el arte para este propósito. Los compuestos de la ¡nvención pueden administrarse también por vía oral, intravenosa, intranasai o subcutánea. Los compuestos de la invención pueden comprender también preparaciones que están en forma de dosificación unitaria. En tal forma la preparación está subdivida en dosis unitarias del tamaño apropiado que contiene las cantidades apropiadas de los componentes activos como por ejemplo una cantidad eficaz para lograr el propósito deseado. La cantidad de composición activa de la invención en una preparación de dosis unitaria puede variar generalmente o puede ajustarse a desde aproximadamente 1 ,0 miligramos hasta aproximadamente 1.000 miligramos, preferiblemente desde aproximadamente 1 ,0 hasta aproximadamente 950 miligramos, más preferiblemente desde aproximadamente hasta aproximadamente 500 miligramos, y típicamente desde aproximadamente 1 hasta aproximadamente 250 miligramos, de acuerdo con la aplicación particular. La dosis real empleada puede variar dependiendo de la edad, el sexo, el peso del paciente y la gravedad de la enfermedad que se está tratando. Dichas técnicas también conocidas por los expertos en la materia. En general, la forma de dosificación oral humana que contiene los ingredientes activos puede administrarse 1 o 2 veces por día. La cantidad y frecuencia de la administración se regularán de acuerdo con la opinión del médico de cabecera. Un régimen de dosificación diario generalmente recomendado para administración oral puede estar en un intervalo de desde aproximadamente 1 ,0 miligramos hasta aproximadamente 1.000 miligramos por día en dosis únicas y divididas. Algunos términos útiles se describen a continuación: Cápsula - se refiere a un recipiente o envoltura especiales preparados con metil celulosa, alcoholes polivinílicos, o gelatinas desnaturalizadas o almidón para sostener o contener composiciones que comprenden los ingredientes activos. Las cápsulas de cascara dura se preparan típicamente con mezcla de gelatinas de hueso y piel de cerdo de resistencia de gel relativamente elevada. La cápsula en sí misma puede contener pequeñas cantidades de colorantes, agentes opacantes, plastificantes y preservadores. Tableta - se refiere a una forma de dosificación sólida comprimida moldeada que contiene los ingredientes activos con diluyentes apropiados. La tableta puede prepararse por compresión de mezclas o granulaciones obtenidas por granulación en húmedo, granulación en seco o por compactación. Gel oral - se refiere a los ingredientes activos dispersados o solubilizados en una matriz semisólida hidrofílica. Polvo para ser reconstituido se refiere a mezclas de polvo que contienen los ingredientes activos y diluyentes apropiados que pueden suspenderse en agua o en jugo. Diluyente - se refiere a sustancias que usualmente constituyen la porción principal de la composición o de la forma de dosificación. Los diluyentes apropiados incluyen azúcares tales como lactosa, sucrosa, manitol y sorbitol; almidones derivados de trigo, maíz, arroz y papa; y celulosas tales como celulosa mícrocristalina. La cantidad de diluyente en la composición puede estar comprendido entre desde aproximadamente 10 hasta aproximadamente 90% en peso de la composición total, preferiblemente desde aproximadamente 25 hasta aproximadamente 75%, más preferiblemente desde aproximadamente 30 hasta aproximadamente 60% en peso, y aún más preferiblemente desde aproximadamente 12 hasta aproximadamente 60%.

Desintegrante - se refiere a materiales agregados a la composición para ayudar a descomponer (desintegrar) y liberar los medicamentos. Los desintegrantes apropiados incluyen almidones; almidones modificados "solubles en agua fría" tales como almidón de carboximetilo de sodio; gomas naturales y sintéticas tales como de harina de algarrobo, de karaya, guar, tragacanto y agar; derivados de celulosa tales como metilcelulosa y carboximetilcelulosa de sodio; celulosa microcristalina y celulosa microcristalina entrecruzada tales como croscamelosa de sodio; alginatos tales como ácido algínico y alginato de sodio; arcillas tales como bentonitas; y mezclas efervescentes. La cantidad de desintegrante en la composición puede estar en un intervalo de desde aproximadamente 2 hasta aproximadamente 15% en peso de la composición más preferiblemente desde aproximadamente 4 hasta aproximadamente 10% en peso. Aglutinante - se refiere a sustancias que aglutinan o "pegan" polvos entre sí y que los tornan cohesivos formando granulos, que sirven como adhesivos en la formulación. Los aglutinantes agregan resistencia cohesiva que ya estaba disponible en el diluyente o en el agente dador de masa. Los aglutinantes apropiados incluyen azúcares tales como sucrosa; almidones derivados de trigo, arroz y papa; gomas naturales tales como acacia, gelatina y tragacan; derivados de algas tales como ácido algínico, alginato de sodio y alginato de calcio amonio; materiales celulósicos tales como metilcelulosa y carboximetilcelulosa de sodio e hidroxipropilmetilcelulosa; polivinilpirrolidona; e inorgánicos tales como silicato de magnesio aluminio. La cantidad de aglutinante en la composición puede estar comprendida entre desde aproximadamente 2 hasta aproximadamente 20% de la composición, más preferiblemente desde aproximadamente 3 hasta aproximadamente 10% en peso, y aún más preferiblemente desde aproximamdamente 3 hasta aproximadamente 6% en peso. Lubricante - se refiere a una sustancia agregada a la forma de dosificación para permitir que la tableta, los granulos, etc. después de haber sido comprimidos, se liberen del molde o matriz o reducción de la fricción o desgaste. Entre los lubricantes apropiados se incluyen estearatos metálicos tales como estereato de magnesio, estereato de calcio, estereato de potasio; ácido esteárico; ceras de alto punto de fusión; y lubricantes solubles en agua tales como cloruro de sodio, benzoato de sodio, acetato de sodio, oleato de sodio, polietilenglicoles y d'l-leucina. Los lubricantes se agregan usualmente en la etapa final antes de la compresión, debido a que deben estar presentes sobre la superficie de los granulos y entre los mismos y en la partes del prensa tabletas. La cantidad de lubricante en la composición puede estar en un intervalo de desde aproximadamente 0,2 hasta aproximadamente 5% en peso de la composición, preferiblemente desde aproximadamente 0,5 hasta aproximadamente 2%, más preferiblemente desde aproximadamente 0,3 hasta aproximadamente 1 ,5% en peso. Deslizante - material que evita aterronamiento y que mejora las características de flujo de las granulaciones, para que tengan una fluidez suave y uniforme. Los deslizantes apropiados incluyen dióxido de silicio y talco. La cantidad de deslizante en la composición puede estar en un intervalo de desde aproximadamente 0,1 % hasta aproximadamente 5% en peso de la composición total, preferiblemente desde aproximadamente 0,5 hasta aproximadamente 2% en peso. Agentes colorantes - excipientes que proveen a la composición o a la forma de dosificación. Dichos excipientes pueden incluir colorantes de calidad alimenticia y colorantes de calidad alimenticia absorbidos sobre un absorbente apropiado tal como arcilla o óxido de aluminio. La cantidad de agente colorante puede varias desde aproximadamente 0,1 % hasta aproximadamente 5% en peso de la composición, preferiblemente desde aproximadamente 0,1% hasta aproximadamente 1%. Biodisponibilidad - se refiere a régimen y grado hasta el cual es absorbido el ingrediente farmacológicamente activo o la porción terapéutica dentro de la circulación sistémica a partir de una forma de dosificación administrada en comparación con una forma convencional o de control. Los métodos convencionales para preparar las tabletas son conocidos. Tales métodos incluyen métodos en seco tales como por compresión directa y por compresión de granulación producida por compactación, o métodos en húmedo u otros procedimientos especiales. Los métodos convencionales para preparar otras formas de administración tales como por ejemplo cápsulas, supositorios y similares son bien conocidos. Otra modalidad de la invención describe el uso e los compuestos de la ¡nvención o de las composiciones farmacéuticas descritas anteriormente para el tratamiento de enfermedades tales como por ejemplo hepatitis C y similares. El método comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto o composición farmacéutica de la invención a un paciente que tiene dicha enfermedad o enfermedades y que necesita dicho tratamiento. En otra modalidad los compuestos de la invención pueden usarse para el tratamiento de HCV en seres humanos en modo de monoterapia o en una terapia de combinación (por ejemplo, combinación dual, combinación triple, etc) por ejemplo en combinación con agentes antivirales y/o inmunomoduladores. Ejemplos de dichos agentes antivirales y/o inmunomoduladores incluyen Ribavirina (de Schering-Plough Corporation, Madison, New Jersey) y Levovirin™ (de ICN Pharmaceuticals, Costa Mesa, California), VP 50406™ (de Viropharma, Incorporated, Exton, Pennsylvania), ISIS 14803™ (de ISIS Pharmaceutícals, Carisbad, California), Heptazyme™ (de Ribozyme Pharmaceuticals, Boulder, Colorado), VX 497™ (de Vértex Pharmaceuticals, Cambridge, Massachusetts), Thymosin™ (de SciClone Pharmaceuticals, San Mateo, California), Maxamine™ (Maxim Pharmaceuticals, San Diego, California), micofenolato mofetil (de Hoffman-LaRoche, Nutley, New Jersey), interferon (tales como por ejemplo, interferon-alfa, conjugados de PEG-interferon alfa) y similares. "Conjugados de PEG-interferon alfa" son moléculas ¡nterferon alfa unidas covalentemente a una molécula PEG. Los conjugados ilustrativos PEG-interferon alfa incluyen interferon alfa-2a (Roferon™, de Hoffman La-Roche, Nutley, New Jersey) en forma de interferon alfa-2a pegilado (por ejemplo vendido bajo la denominación Pegasys™), interferon alfa-2b (Intron™, de Schering-Plough Corporation) en forma de interferon alfa-2b pegilado (por ejemplo, vendido bajo la denominación comercial PEG-Intron™), interferon alfa-2c (Berofor Alpha™, de Boehringer Ingelheim, Ingelheim, Alemania) o interferon de consenso tal como el que se define por determinación de una secuencia de consenso de interferon alfas que ocurren en forma natural (Infergen™, de Amgen, Thousand Oaks, California). Tal como se manifestó anteriormente, la invención incluye tautómeros, rotámeros, enantiómeros y otros estereoisómeros de los compuestos de la invención. Por lo tanto, tal como puede apreciar un experto en la materia, algunos de los compuestos de la invención pueden existir en forma isoméricas apropiadas. Dichas variaciones están contempladas dentro del alcance de la ¡nvención. Otra modalidad de la invención describe un método para preparar los compuestos descritos aquí. Los compuestos pueden prepararse mediante varias técnicas conocidas en el arte. Procedimientos ilustrativos son los que se señalan en los siguientes esquemas de reacción. Las ilustraciones no deben considerarse limitativas del alcance de la invención que se definen en las reivindicaciones anexas. Las vías mecánicas alternativas de las estructuras análogas resultarán aparentes para los expertos en la materia.

Debe entenderse que aunque los siguientes esquemas ilustrativos describen la preparación de unos pocos compuestos representativos de la invención, la sustitución apropiada de cualquiera o ambos aminoácidos naturales y no naturales dará como resultado la formación de los compuestos deseados en base a dicha sustitución. Dichas variaciones están contempladas dentro del alcance de la invención. Para los procedimientos descritos a continuación, se usan las siguientes abreviaturas: THF: Tetrahidrofurano DMF: N,N-Dimetilformamida EtOAc: Acetato de Etilo AcOH: Ácido acético HOOBt: 3-Hidroxi-1 ,2,3-benzotriazin-4(3H)-ona EDCl: Clorihidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida NMM: N-Metilmorfolina ADDP: 1 , 1 '-(Azodicarboxil)dipiperidina DEAD: Dietilazodicarboxilato MeOH: Metanol EtOH: Etanol Et2O: Éter dietílico DMSO: Sulfóxido de dimetilo HOBt: N-Hidroxibenzotriazol PyBrOP: Hexafluorfosfato de bromo-tris-pirrolidinofosfonio DCM: Dichlorometano DCC: 1 ,3-Diciclohexilcarbodiimida TEMPO: 2,2,6,6-Tetrametii-1 -piperidiniloxi Phg: Fenilglicina Chg: Ciclohexilglicina Bn: Bencilo Bzl: Bencilo Et: Etilo Ph: Fenilo iBoc: isobutoxicarbonilo ¡Pr: isopropilo lBu o Bu1: ter-Butilo Boc: ter-Butiloxicarbonilo Cbz: Benciloxicarbonilo Cp: Ciclopentildienilo Ts: p-toluensulfonilo Me: Metilo HATU: Hexafluorfosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1 , 1 ,3,3-tetrametiluronio DMAP: 4-N,N-Dimetlaminopiridina BOP : Hexafluorofosfato de benzotriazol-1-il-oxi-tris(dimetilamino) PCC: clorocromato de piridino KHMDS: Hexametildisilazida de potasio o bis(trimetilsililamida) de potasio NaHMDS: Hexametildisilazida de sodio o bis(trimetlsililamida) de sodio LiHMDS: Hexametildisilazida de litio o bis(trimetilsililamida) de litio 10% Pd/C: 10% Paladío sobre carbono (en peso). TG: Tioglicerol Esquemas generales para la preparación de los compuestos objetivo Los compuestos de la presente invención se sintetizaron usando los esquemas generales (Métodos A-E) descritos a continuación.

Método A La desprotección de la funcionalidad N-Boc de 1.01 bajo condiciones acidas proporcionar la sal de clorhidrato 1.02 la cual se acopló subsiguientemente con la N-Boc-ter-leucina bajo metodología de acoplamiento de péptido para proporcionar 1.03. La desprotección N-Boc seguida de tratamiento con el isocianato apropiado proporcionó la urea 1.05. La hidrólisis del éster metílico proporcionó el ácido 1.06. El acoplamiento peptídico del ácido 1.06 con la porción de amida primaria apropiada P ' proporcionó la hidroxil amida 1.07. La oxidación (oxidación de Moffatt o procesos relacionados - ver, T. T. Tidwell, Synthesis, 1990, 857), or Dess-Martin Periodinano - J. Org. Chem., (1983) 48, 4155) dieron como resultado el c 1.08 Método B El acoplamiento peptídico del ácido 1.06 con la porción amida secundaria P-pP' proporcionó la hidroxil amida 1.09. La oxidación (Moffatt o Dess-Martin) dio como resultado el compuesto objetivo 1.10.

Método C En otra variación, el acoplamiento peptídico del N-Boc-P2-P3-ácido 1.17 con la porción P-i-P' amida apropiada proporcionó la hidroxil amida 1.11. La oxidación (Moffatt o Dess-Martin Periodinano) proporcionó la ceto amida 1.12. La desprotección de la funcionalidad N-Boc proporcionó la sal de clorhidrato 1.13. El tratamiento con un isociano apropiado (o isocianato evalente) dio como resultado el compuesto objetivo 1.14. "cap-NCO" o equivalente Método D En otra variación, la sal de clorhidrato 1.13 se convirtió al carbamato de 4-nitrofenilo 1.15 por reacción con cloroformato de 4-nitrofenilo. El tratamiento subsiguiente con una amina (o sal de clorhidrato de amina) de elección proporcionó el compuesto objetivo 1.14.

Método E En otra variación, la sal del clorhidrato dipeptídico 1.03 se convirtió al carbamato de 4-nitrofenilo descrito anteriormente. El tratamiento con una amina (o sal de clorhidrato de amina) de elección proporcionó el derivado urea 1.05. La hidrólisis y la elaboración adicional que se describen en los métodos A/B proporcionan los compuestos de objetivo 1.14.

Preparación de las porciones P1-P' Preparación de los intermediarios 10.11 y 10.12 Etapa 1. _oa Una solución agitada de cetimina 10.01 (50 g, 187.1 mmoles) bajo N2 en THF seco (400 mL) se enfrió a -78°C y se trató con una solución 1 M de K-'BuO (220 mL, 1.15 equiv.) en THF. La mezcla de reacción se calentó a 0°C y se agitó durante una hora y se trató con bromometil ciclobutano (28 mL, 249 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 48 horas y se concentró al vacío. El residuo se disolvió en Et2O (300 mL) y se trató con HCl acuoso (2 M, 300 mL). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas y se extrajo con Et2O (1 L). La capa acuosa se hizo básica a pH -12-14 con NaOH (50 % ac.) y se extrajo con CH2CI2 (3x300 mL). Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO ), se filtraron, y se concentraron para proporcionar la amina pura (10.02, 18 g) en forma de un aceite incoloro.

Etapa 2. .02 10.03 Una solución de la amina 10.02 (18 g, 105.2 mmoles) a 0°C en CH2CI2 (350 mL) se trató con dicarbonato de di-fer-butilo (23 g, 105.4 mmoles) y se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas. Después de completar la reacción (TLC), la mezcla de reacción se concentró al vacío y el residuo se disolvió en THF/H2O (200 ml, 1 :1 ) y se trató con L¡OH»H2O (6.5 g, 158.5 mmoles) y se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla de 1 2 reacción se concentró y la capa acuosa básica se extrajo con Et2O. La capa acuosa se acidificó con HCl concentrado a pH~1-2 y se extrajo con CH2CI2. Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO4), se filtraron, y se concentraron al vacío para proporcionar 10.03 en forma de un aceite viscoso incoloro que se usó para la etapa siguiente sin ninguna purificación adicional.

Etapa 3.

Una solución del ácido 10.03 (15.0 g, 62 mmoles) en CH2CI2 (250 mL) se trató con reactivo BOP (41.1 g, 93 mmoles), N-metil morfolina (27 mL), clorhidrato de N,O-dimetil hidroxilamina (9.07 g, 93 mmoles) y se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con HCl acuoso 1 N (250 mL), y las tapas se separaron y la capa acuosa se extrajo con CH2CI2 (3x300 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío y se purificaron por cromatografía (S¡O2, EtOAc/Hex 2:3) para proporcionar la amida 10.04 (15.0 g) en forma de un sólido incoloro.

Etapa 4.

.Q4 113.05 Una solución de la amida 10.04 (15 g, 52.1 mmoles) THF seco (200 mL) se trató por goteo con una solución de LiAIH4 (1 M, 93 mL, 93 mmoles) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y se apagó cuidadosamente a 0°C con una solución de KHSO (10% ac.) y se agitó durante 0,5 horas. La mezcla de reacción se diluyó con HCl acuoso (1 M, 150 mL) y se extrajo con CH2CI2 (3x200 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con HCl acuoso (1 M), con NaHCO3 saturado, con salmuera, y se secaron (MgSO4). La mezcla se filtró y se concentró al vacío para proporcionar 10.05 en forma de un aceite viscoso incoloro (14 g).

Etapa 5: 1ft05 1G.ÜS Una solución del aldheído 10.05 (14 g, 61.6 mmoles) en CH2CI2 (50 mL), se trató con Et3N (10.73 mL, 74.4 mmoles), y cianohidrina de acetona (10.86 g, 127.57 mmoles) y se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. La mezcla de reacción se concentró al vacío y se diluyó con HCl acuoso (1 M, 200 mL) y se extrajo con CH2CI2 (3x200 mL). La capa orgánica combinada se lavó con H2O, salmuera, se secó (MgSO4), se filtró, se concentró al vacío y se purificó por cromatografía (SíO2, EtOAc/Hex 1 :4) para proporcionar 10.06 (10.3 g) en forma de un líquido incoloro Etapa 6. 10J5S 10.07 Metanol saturado con HCI*, preparado mediante burbujeo de gas HCl a través de CH3OH (700 ml) a 0°C, se trató con la cianohidrina 10.06 y se calentó a reflujo durante 24 horas. La reacción se concentró al vacío para proporcionar 10.07, que se usó para la etapa siguiente sin purificación. * Alternativamente, puede usarse también HCl 6M preparado por adición de AcCI en metanol seco.

Etapa 7. .07 1CL01 Se trató una solución del clorhidrato de amina 10.07 en CH2CI2 (200 mL) con Et3N (45.0 mL, 315 mmol) y Boc2O (45.7g, 209 mmoles) a -78°C. La mezcla de reacción se agitó luego a temperatura ambiente durante la noche y se diluyó con HCl (2 M, 200 mL) y se extrajo en CH2CI2. Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO ), se filtraron, se concentraron al vacío y se purificaron por cromatografía (EtOAc/Hex 1 :4) para proporcionar el hidroxi éster 10.08.

Etapa 8.

. OH 10.03 Una solución del éster metílico 10.08 (3 g, 10.5 mmoles) en THF/H2O (1 :1 ) se trató con LiOH«H2O (645 mg, 15.75 mmoles) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se acidificó con HCl acuoso (1 M, 15 mL) y se concentró al vacío. El residuo se secó al vacío para proporcionar 10.09 con un rendimiento cuantitativo.

Etapa 9 BüCrl N 1Q.0S 10,15 Una solución del ácido 10.09 (anterior) en CH2CI2 (50 mL) y DMF (25 mL) se trató con NH4CI (2.94 g, 55.5 mmoles), EDCl (3.15 g, 16.5 mmoles), HOOBt (2.69 g, 16.5 mmoles), y NMM (4.4 g, 44 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 días. Los solventes se extrajeron al vacío y el residuo se diluyó con HCl acuoso (250 mL) y se extrajo con CH2CI2. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHCO3 saturado acuoso, se secaron (MgSO ), se filtraron y se concentraron al vacío para obtener 10.10, que se usó tal cual en las etapas siguientes. (Alternativamente puede obtenerse 10.10 directamente por reacción de 10.06 (4.5 g, 17.7 mmoles) con H2O2 acuoso (10 mL), LiOH«H2O (820 mg, 20.8 mmoles) a 0°C en 50 mL de CH3OH durante 0.5 h.).

Etapa 10. .10 10.11 Una solución de 10.10 obtenida en la etapa previa se disolvió en HCl 4 N en dioxano y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reacción se concentró al vacío para proporcionar el intermediario 10.11 en forma de un sólido, que se usó sin purificación adicional.

Etapa 11.

BocHt YY 10.09 10.12 El intermediario requerido 10.12 se obtuvo a partir del compuesto .09 usando esencialmente los procedimientos descritos anteriormente en las Etapas 9, 10 con reactivos apropiados.

Preparación del intermediario 11.01 Etapa 1 A una solución de 4-pentin-1-ol, 11.02 (4.15g; Aldrich) se le agregó Dess-Martin Periodinano (30.25g; Aldrich) y la mezcla resultante se agitó durante 45 minutos. Antes de la adición de (ter- Butoxicarbonilmetilen)trifenilfosforano (26.75g; Aldrich). La reacción oscura resultante se agitó durante la noche, se diluyó con EtOAc, se lavó con sulfito de sodio acuoso, con NaHCO3 acuoso saturado, con agua, salmuera y se secó. Se extrajeron los volátiles bajo presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice. Usando 1% de EtOAc en hexanos como eluyentes para proporcionar el compuesto deseado, 11.03 (3.92g). Se obtuvieron también algunas fracciones impuras pero en ese momento se separaron.

Etapa 2 Usando el alqueno 11.03 (1.9 g) en n-propanol (20 ml; Aldrich)), carbamato de bencilo (4.95 g; Aldrich) en n-propanol (40 ml), NaOH (1.29 g) en agua (79 ml), hipoclorito de ter-butilo (3.7 ml), (DHQ)2PHAL (0.423 g; Aldrich)) en n-propanol (37.5 ml), y osmato de potasío:deshidrato (0.1544 g; Aldrich) y el procedimiento indicado en Angew. Chem. Int. Ed. Eng (1998), 35^ (23/24), pp. 2813-7. se obtuvo un producto crudo que se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice usando EtOAc:Hexanos (1 :5) para obtener el amino alcohol deseado 11.04 (1.37 g, 37%) en forma de un sólido blanco.

Etapa 3 Al éster 11.04 (0.700 g) se le agregó HCl 4M en dioxano (20 ml; Aldrich) y la mezcla resultante se dejó en reposo a temperatura ambiente durante la noche. Se extrajeron los volátiles bajo presión reducida para proporcionar el ácido 11.05 (0.621 g) en forma de un sólido blanco.

Etapa 4 Se agregaron reactivo BOP (3.65 g; Sigma) seguido de trietilamina (3.45 ml) a una solución de diclorometano (20 ml) del ácido carboxílico 11.05 (2.00 g) y alil amina (0.616 ml) a temperatura ambiente y la mezcla resultante se agitó durante la noche. La mezcla de reacción se dividió entre EtOAc y HCl acuoso al 10%. La fase orgánica se separó, se lavó con bicarbonato de sodio acuoso saturado, agua, se secó (sulfato de magnesio). El producto de reacción crudo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice usando (EtOAc: HexanOs; 70:30) como eluyente para proporcionar la amida deseada 11.01 (1.73 g) en forma de un aceite viscoso de color amarillo.

Preparación de los intermediarios 12.03 y 12.04 Etapa 1 ß?oo?cHttN H *** 12.01 TWJ2 Se convirtió el compuesto 12.01 al material 12.02 requerido usando esencialmente los procedimientos descritos para el intermediario 10.11 , Etapas 3-8.

Etapa 2 BocHN 1?.02 12.03 El compuesto 12.02 se convirtió al intermediario requerido 12.03 usando esencialmente los procedimientos descritos para los intermediarios 10.11 , Etapas 9, 10.

Etapa 3 12.02 12,04 El compuesto 12.02 se convirtió al intermediario 12.03 requerido usando esencialmente los procedimientos descritos para el intermediario 10.12, Etapa 11.

Preparación del Intermediario 13.01 Etapa 1 13.03 A una solución agitada de 1-nitrobutano, 13.02 (16.5 g, 0.16 mol) y ácido glioxílico en H2O (28.1 g, 0.305 mol) y MeOH (122 mL) a 0°C-5°C, se le agregó por goteo trietilamina (93 mL, 0.667 mol) durante 2 horas. La solución se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante la noche y se concentró hasta sequedad para proporcionar un aceite. El aceite se disolvió luego en H2O y se acidificó a pH= 1 con HCl al 10%, seguido de extracción con EtOAc. La solución orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S?4, se filtró y se concentró hasta sequedad para proporcionar el producto 13.03 (28.1 g, 99% de rendimiento).

Etapa 2 aM 13.03 13.04 A una solución agitada del compuesto 13.03 (240 g, 1.35 mol) en ácido acético (1.25 L) se agregó Pd/C al 10% (37 g). La solución resultante se hidrogenó a 406.61 kPa (59 psi) durante 3 horas y luego a 415 kPa (60 psi) durante la noche. Ei ácido acético se evaporó luego y se sometió a azeotropía 3 veces con tolueno, luego se trituró con MeOH y éter. Luego se filtró la solución se sometió a azeotropía dos veces con tolueno para proporcionar 13.04 en forma de un sólido blancuzco (131 g, 0.891 mol, 66%).

Etapa 3 OH OH 13.04 13.05 A una solución agitada del amino ácido 13.04 (2.0 g, 13.6 mmoles) en dioxano (10 mL) y H2O (5 mL) a 0°C, se le agregó una solución de NaOH 1 N (4.3 mL; 14.0 mmoles). La solución resultante se agitó durante 10 minutos, seguida de adición de carbonato de di-í-butilo (0.110 g, 14.0 mmoles) y se agitó a 0°C durante 15 minutos. Luego se calentó la solución a temperatura ambiente, se agitó durante 45 minutos y se mantuvo durante la noche en el refrigerador y se concentró hasta sequedad para proporcionar un material crudo. A la solución de este material crudo en EtOAc (100 mL) y hielo, se le agregó KHSO4 (3.36 g) y H2O (32 mL) y se agitó durante 4-6 minutos. Luego se separó la capa orgánica y la capa acuosa se extrajo dos veces con EtOAc y la capa orgánica combinada se lavó con agua, salmuera, se secó sobre Na2S04, se filtró y se concentró hasta sequedad para proporcionar el producto 13.05 en forma de un goma clara (3.0 g, 89% de rendimiento).

Etapa 4: 13.0S 13.01 Se convirtió el compuesto 13.05 al intermediario requerido 13.01 usando esencialmente los procedimientos descritos para el intermediario 10.12, Etapa 11.

Preparación del Intermediario 14.01 Etapa 1 El compuesto 14.02 convirtió a un material 14.03 requerido usando esencialmente los procedimientos descritos para el intermediario 13.01 , Etapas 1-3.

Etapa 2 14 3 14.01 El compuesto 14.03 se convirtió al intermediario requerido 14.01 usando esencialmente los procedimientos descritos para el intermediario 10.12, Etapa 1 1 .

Preparación el Intermediario 15.01 Etapa 1 .01 15.03 A una suspensión del nitrito de plata (9 g, 58.5 mmoles) en éter dietílico (25 mL) a 0°C se le agregó una solución de 4-iodo-1 ,1 ,1-trifluorbutano, 15.02 (10 g, 42.0 mmoles) en éter dietílico (25 mL) lentamente, a través de un embudo de adición (aproximadamente 15 min.). La mezcla resultante se agitó vigorosamente a 0°C y se calentó a temperatura ambiente. Después de 50 horas, el material sólido se filtró a través de una almohadilla de celite. La solución de éter dietílico resultante se concentró al vacío para proporcionar 15.03 en forma de un aceite incoloro, que se usó sin purificación adicional.

Etapa 2 El compuesto 15.03 se convirtió al material 15.04 requerido usando esencialmente los procedimientos descritos para el intermediario 13.01 , Etapas 1-3.

Etapa 3 .04 15.01 El compuesto 15.04 se convirtió al intermediario requerido 15.01 usando esencialmente los procedimientos descritos para el intermediario .12, Etapa 11.

Preparación del Intermediario 16.01 nM 1S.01 Se procesó el ácido 16.02 (Winkler, D.; Burger, K., Synthesis, 1996, 1419) tal como se describió anteriormente (preparación del intermediario de 10.12) para proporcionar el intermediario esperado 16.01.

Preparación de las porciones P2 / P3-P2 Preparación del Intermediario 20.01 ,01 Se preparó el amino éster 20.01 siguiendo el método de R.

Zhang y J. S. Madalengoitia (J. Org. Chem. 1999, 64, 330), con excepción de que el grupo Boc se disoció por reacción del amino ácido Boc-protegido con HCl metanólico. (Nota: En una variación de la síntesis mencionada, el iluro de sulfonio se reemplazó con el correspondiente iluro de fosfonio).

Preparación del Intermediario 20.04 Etapa 1 Una solución del amino ácido comercial Boc-Chg-OH, 20.02 (Senn chemicals, 6.64 g, 24.1 mmoles) y el clorhidrato de amina 20.01 (4.5 g, 22 mmoles) en CH2CI2 (100 mL) a 0 °C se trató con el reactivo BOP y se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas. La mezcla de reacción se concentró al vacío, luego se diluyó con HCl 1 M acuoso y se extrajo en EtOAc (3x200 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHC03 saturado (200 mL), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío, y se cromatografiaron (SiO2, EtOAc/Hex 3:7) para obtener 20.03 (6.0 g) en forma de un sólido incoloro.

Etapa 2: .03 0.04 Una solución de éster metílico 20.03 (4.0 g, 9.79 mmoles) en THF/H2O (1 :1 ) se trató con LiOH»H2O (401 mg, 9.79 mmoles) y se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla de reacción se acidificó con HCl acuoso, y se concentró al vacío para obtener el intermediario requerido, el ácido libre 20.04.

Preparación del Intermediario 20.07 Etapa 1 BocH Una solución de Boc-ter-Leu 20.05 (Fluka, 5.0 g 21.6 mmoles) en CH2CI2/DMF seco (50 mL, 1 :1 ) se enfrió a 0 °C y se trató con la sal de amina 20.01 (5.3 g, 25.7 mmoles), NMM (6.5 g, 64.8 mmoles) y reactivo BOP (1 1.6 g, 25.7 mmoles). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas, se diluyó con HCl acuoso (1 M) y se extrajo con CH2CI2. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con HCl (acuoso, 1 M), NaHCO3 saturado, salmuera, se secaron (MgSO4), se filtraron y concentraron al vacío y se purificaron por cromatografía (SiO2, Acetona/Hexano 1 :5) para proporcionar 20.06 en forma de un sólido incoloro.

Etapa 2 CH- 20.06 20.07 Se disolvió una solución de éster metílico 20.06 (4.0 g, 10.46 mmoles) en HCl 4M en dioxano y se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla de reacción se concentró al vacío para obtener la sal de clorhidrato de amina 20.07, que se usó sin purificación.

Preparación del Intermediario 21.01 : Etapa 1 : 21,02 21 03 A una solución agitada de ?/-Boc-3,4-dehidroprolina 21.02 (5.0 g, 23.5 mmoles), dicarbonato de di-ter-butilo (7.5 g, 34.4 mmoles), y 4-N,N-dimetilaminopiridina (0.40 g, 3.33 mmoles) en acetonitrilo (100 mL) a temperatura ambiente se le agregó trietilamina (5.0 mL, 35.6 mmoles). La solución resultante se agitó a esta temperatura durante 18 horas antes de concentrarla al vacío. El residuo de color castaño oscuro se purificó por cromatografía en columna evaporativa fluyendo con 10-25% EtOAc/hexano para proporcionar el producto 21.03 en forma de un aceite de color amarillo pálido (5.29 g, 84%).

Etapa 2: 11.03 21.04 A una solución agitada del derivado de hidroprolina 21.03 (10.1 g, 37.4 mmoles), cloruro de benciltrietilamonio (1.60 g, 7.02 mmoles) en cloroformo (120 mL) a temperatura ambiente se le agregó hidróxido de sodio acuoso al 50% (120 g). Después de agitar vigorosamente a esta temperatura durante 24 horas, se diluyó la mezcla oscura con CH2CI2 (200 mL) y éter dietílico (600 mL). Después de separar las capas, se extrajo la solución acuosa con CH2CI2/Et2O (1 :2, 3x600 mL). La solución orgánica se secó (MgS?4) y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía en columna evaporativa usando 5-20% de EtOAc/hexano para proporcionar 9.34 g (71 %) de 21.04 en forma de un sólido blancuzco.

Etapa 3: c 21 w 21.05 La solución de 21.04 (9.34 g, 26.5 mmoles) en CH2CI2 (25 mL) y CF3CO2H (50 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 4.5 horas antes de concentrarla al vacío para proporcionar un residuo de color castaño, 21.05 el cual se usó en la Etapa 4 sin purificación.

Etapa 4 21.05 21.01 El ácido clorhídrico concentrado (4.5 mL) se agregó a una solución del residuo 21.05 de la Etapa 3 en metanol (70 mL) y la mezcla resultante se calentó a 65°C en un baño de aceite. Después de 18 horas, la mezcla se concentró al vacío para proporcionar un aceite de color castaño 21.01 , que se usó sin purificación adicional.

Preparación del Intermediario 22.01 Etapa 1 22.02 2?$& Bis bis(trimetilsilil)amida de potasio (158 ml de una solución 0.5 M en tolueno; 79 mmoles) a una suspensión agitada de bromuro de ciclopropiltrifenilfosfonio (33.12 g; 86.4 mmoles) en tetrahidrofurano anhidro (130 ml) y la mezcla de color naranja resultante se agitó bajo una atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente durante un período de 1 hora, antes de agregar el aldehido 22.02 (9.68 g; 42.2 mmoles) en THF (8 ml). La reacción se reflujo luego bajo una atmósfera de nitrógeno por un período de 2 horas. 5 Después de enfriar, se agregaron metanol, éter dietílico, y sal Rochelles. La fase orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó y se concentró bajo presión reducida. El producto de reacción crudo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice usando EtOAc-hexano (1 :99) a EtOAc-hexano (5:95) para proporcionar el alqueno 22.03 (8.47 g) en forma de un aceite 10 amarillo.

Etapa 2 J 5 22.05 22.04 Se preparó una solución de HCl 1 M en MeOH/MeOAc mediante agregado de 14.2 ml de cloruro de acetilo por goteo en metanol frío y la solución resultante se diluyó hasta 200 ml a temperatura ambiente. 0 Se disolvió el carbamato 22.03 (9.49 g; 37.5 mmoles) en metanol (12 ml) y se agregó a HCl 1 M en MeOH/MeOAc (150 ml) mientras se enfriaba en un baño de hielo. La mezcla resultante se mantuvo a esta temperatura durante 1 hora, y luego se extrajo el baño de hielo y se continuó la agitación durante la noche a temperatura ambiente. Se extrajeron los volátiles bajo presión reducida para proporcionar un aceite de color amarillo que se usó para la etapa siguiente sin purificación. El aceite amarillo se disolvió en una mezcla de THF (30 ml) y MeOH (20 ml) y se trató con trietilamina (15 ml; 108 mmoles) hasta que la solución fue de pH= 9-10. Después de colocarla en un baño de hielo, la mezcla se trató con N-Boc-Gly-OSu (11.22 g; 41 mmoles). El baño de hielo se extrajo y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se extrajeron los volátiles bajo presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice usando metanol (1-3%) en diclorometano lo cual proporcionó la amida deseada 22.04 (9.09 g).

Etapa 3 22.04 22.05 El alcohol 22.04 (9.09 g; 33.6 mmoles) se disolvió en acetona (118.5 ml) y se trató con 2,2-dimetoxipropano (37.4 ml; 304 mmoles) y BF3:Et2O (0.32 ml; 2.6 mmoles) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente por un período de 5.5 horas. La solución de reacción se trató con unas pocas gotas de trietilamina y se extrajeron los volátiles bajo presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice usando 5-25% EtOAc en hexanos para obtener N,O-acetal 22.05 (8.85 g).

Etapa 4 22.05 22J?6' n.orr Se disolvió el carbamato 22.05 (8.81 g; 28.4 mmoles) en acetonitrilo (45 ml) y la solución se enfrió a -40°C bajo atmósfera de nitrógeno. Se agregaron piridina (6.9 ml; 85.3 mmoles) seguido de tetrafluorborato de nitrosio (6.63 g; 56.8 mmoles) y la mezcla de reacción resultante se mantuvo por debajo de 0°C hasta que la TLC indicó que no quedaba material de partida (aproximadamente 2.25 horas). Se agregó pirrolidina (20 ml; 240 mmoles) y el baño refrigerante se extrajo y se continuó la agitación a temperatura ambiente durante una hora y luego se extrajeron los volátiles bajo presión reducida. El residuo se pasó rápidamente a través de una almohadilla de gel de sílice para proporcionar un aceite de color amarillo. El aceite de color amarillo se disolvió en benceno anhidro (220 ml) y se agregó acetato de paladio (0.317 g; 1.41 mmoles) antes de calentar la mezcla resultante a reflujo, bajo atmósfera de nitrógeno por un período de 1.5 horas. Después de enfriar, se extrajeron los volátiles bajo presión reducida y se purificó el residuo oscuro por cromatografía en columna de gel de sílice usando EtOAc-hexano (1 :4) para proporcionar I) la trans- pirrolidinona 22.06 (1.94 g) seguida de ii) la cis-pirrolidinona 22.07 (1.97 g).

Etapa 5 ?L06 22.08 Se agregó HCl 1 M recientemente preparado en MeOAc/MeOH (10 ml; tal como se describió anteriormente) al N,O-acetal 22.06 y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. El solvente se extrajo bajo presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice usando 0-4% de MeOH en diclorometano como eluyente para proporcionar el alcohol 22.08 deseado (1.42 g), en forma de un aceite amarillo.

Etapa 6 22J3S 22Ü© A una solución de lactama 22.08 (1.29 g; 8.44 mmoles) en tetrahidrofurano anhidro (55 ml) se le agregó hidruro de litio aluminio (2.40 g; 63.2 mmoles) y la mezcla resultante se reflujo durante 8 horas. Después de enfriamiento, se agregaron agua seguida de NaOH acuoso al 15% y la mezcla resultante se filtró a través de celite y el sólido se lavó cuidadosamente con THF y MeOH. El solvente se extrajo bajo presión reducida y el residuo se redisolvió en diclorometano, se secó y se concentró bajo presión reducida para proporcionar la pirrolidina, que se usó sin purificación. Se agregó Hunigs (4.5 ml; 25.8 mmoles) a una mezcla de N-Boc-L-ter-Leu-OH (1.76 g; 7.6 mmoles). Se agregó pirrolidina cruda y HATU (2.89 g; 7.6 mmoles) en diclorometano anhidro (50 ml) a -60°C, bajo atmósfera de nitrógeno. La reacción resultante se dejó llegar hasta temperatura ambiente lentamente, durante la noche. Se agregaron EtOAc y la solución de color amarillo se lavó con HCl acuosa dilatado, bicarbonato de sodio acuoso saturado, agua, y salmuera. La capa orgánica se secó y se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice usando EtOAc:hexanos (1 :3) para proporcionar la amida deseada 22.09 (2.00 g).

Etapa 7 11.W 2101 Se disolvió el alcohol 22.09 (2.00 g; 5.67 mmoles) en acetona (116 ml) y se enfrió en un baño de hielo durante 10 minutos. Esta solución se agregó luego a un reactivo Jones enfriado (14.2 ml; aproximadamente 2 mmoles/ml) y la mezcla resultante se agitó a 5°C durante 0.5 horas y se extrajo el baño refrigerante. La reacción se agitó durante 2 horas más a temperatura ambiente, antes de agregarle sulfato de sodio (28.54 g), celite (15 g) en EtOAc (100 ml). Después de 1 minuto se agregó isopropanol (15 ml) y luego se agitó durante 10 minutos más, y se filtró. El filtrado se concentró bajo presión reducida, lo cual proporcionó un aceite de color castaño que se disolvió en EtOAc. Esta solución se calentó con agua, con ácido cítrico acuoso al 3%, salmuera, se secó y se concentró para proporcionar el ácido carboxílico deseado 22.01 (1.64 g) en forma de un sólido blanco.

Preparación del Intermediario 23.01 Etapa 1 : A la mezcla de ester 23.02 (6.0 g) y tamices moleculares (5.2 g) en cloruro de metileno anhidro (35 mL) se le agregó pirrolidina (5.7 mL, 66.36 mmoles). La suspensión de color castaño resultante se agitó a temperatura ambiente bajo N2 durante 24 horas, se filtró y se lavó con CH3CN anhidro. El filtrado combinado se filtró para proporcionar el producto deseado, 23.03.

Etapa 2: A una solución del producto 23.03 de la etapa de procesamiento en CH3CN (35 mL) se le agregó K2CO3 anhidro, cloruro de metalilo (2.77g, 30.5 mmoles), Nal (1.07g, 6.7 mmoles). La suspensión resultante se agitó a temperatura ambiente bajo N2 durante 24 horas. Se agregaron 50 mL de agua enfriada con hielo seguido de una solución de KHSO4 2N hasta que el pH fue de 1. Se agregó EtOAc (100 mL) y la mezcla se agitó durante 0.75 horas. Se recogió la capa orgánica combinada y se lavó con salmuera, se secó sobre gSO4, y se evaporó para proporcionar el producto deseado, 23.04.

Etapa 3: El producto 23.04 de la etapa precedente (2.7 g, 8.16 mmoles) se disolvió en dioxano (20 mL) y se trató con LiOH 1 N (9 mL) recientemente preparado. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente bajo N2 durante 20 horas. La mezcla de reacción se recogió en EtOAc y se lavó con H2O. La fase acuosa combinada se enfrió a 0°C y se acidificó a pH 1.65 usando HCl 1 N. La mezcla turbia se extrajo con EtOAc (2 x 100 mL). A capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre MgS0 , y se concentró para proporcionar el ácido deseado, 23.05 (3.40 g).

Etapa 4: A una suspensión de NaBH(OAc)3 (3.93g, 18.5 mmoles) en CH2CI2 (55 mL) se le agregó una solución del producto 23.05 de la etapa precedente en CH CI2 anhidro (20 mL) y ácido acético (2 mL). La suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas. Se agregó agua helada (100 mL) a la suspensión y se agitó durante 1/2 hora. Se separó la capa orgánica, se filtró, se secó, y se evaporó para proporcionar el producto deseado, 23.06.

Etapa 5: Una solución del producto 23.06 de la etapa precedente (1.9 g) en MeOH (40 mL) se trató con un exceso de una solución de CH2N2 / Et2O y se agitó durante la noche. La mezcla de reacción se concentró para proporcionar un residuo crudo. El residuo se cromatografió sobre gel de sílice fluyendo con un gradiente de EtOAc / hexano para proporcionar 1.07 g del producto puro deseado, 23.07.

Etapa 6 Una solución del producto 23.07 de la etapa precedente (1.36 g) en CH2CI2 anhidro (40 mL) se trató con BF3. Me2O (0.7 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas y se apagó con NaHCO3 saturado (30 mL) y se agitó durante 1/2 hora. La capa orgánica se separó y la capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO , se concentró para proporcionar un residuo crudo. El residuo se cromatografió sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de EtOAc / hexano para proporcionar 0.88 g del compuesto deseado, 23.08.

Etapa 7: A una solución del producto 23.08 (0.92 g) de la etapa precedente en MeOH (30 mL) se le agregó Pd/C al 10% (0.16 g) a temperatura ambiente y se hidrogenó a temperatura ambiente bajo una atmósfera de presión. La mezcla de reacción se agitó durante 4 horas y se concentró hasta sequedad para proporcionar el compuesto deseado, 23.01.

Preparación de las porciones P3 Preparación del Intermediario 50.01 Etapa 1 50.02 SÚ.03 A una solución de 50.02 (15 g) en MeOH (150 mL) se le agregó HCl concentrado (3-4 mL) y la mezcla se reflujo durante 16 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se concentró. El residuo se recogió en éter dietílico (250 mL) y se lavó con una solución saturada fría de bicarbonato de sodio, y salmuera. La capa orgánica se secó (Na2SO ) y se concentró para proporcionar el éster metílico 50.03 (12.98 g) que se efectuó sin purificación adicional.

Etapa 2 50.03 50.04 El éster metílico 50.03 anterior se disolvió en cloruro de metileno (100 mL) y se enfrió a -78°C, bajo atmósfera de nitrógeno. Se agregó por goteo en un período de 2 horas DIBAL (solución 1.0 M en cloruro de metileno, 200 mL) durante un período de 2 horas. La mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla de reacción se enfrió a 0°C y se agregó MeOH (5-8 mL) por goteo. Se agregó lentamente una solución de tartrato de potasio de sodio acuoso al 10% (200 mL) con agitación. Se diluyó con cloruro de metileno (100 mL) y se separó la capa orgánica (junto con un poco de precipitado blanco). La capa orgánica se lavo con HCl 1 N (250 mL), salmuera (200 mL), se secó (Na2SO4) y se concentró para proporcionar el alcohol 50.04 (11.00 g) en forma de un aceite claro.

Etapa 3 50.04 50.05 El alcohol 50.04 anterior se disolvió en cloruro de metileno (400 mL) y se enfrió a 0°C bajo atmósfera de nitrógeno. Se agregó PCC (22.2 g) en porciones y la mezcla de reacción se calentó lentamente a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla de reacción se diluyó con éter dietílico (500 mL) y se filtró a través de una almohadilla de celite. El filtrado se concentró y el residuo se recogió en éter dietílico (500 mL). Esto se hizo pasar a través de una almohadilla de gel de sílice y el filtrado se concentró para proporcionar el aldehido 50.05 que se llevó a cabo sin purificación adicional.

Etapa 4 50,01 El aldehido 50.05 anterior se convirtió al material 50.01 deseado usando esencialmente el método de Chakraborty et. al (Tetrahedron, 1995, 51 (33), 9179-90).

Preparación de los ejemplos especificos del cuadro 1 EJEMPLO I Preparación del Compuesto de la Fórmula 4010 Parte I: Preparación del Intermediario 4010.06 Etapa 1 : A una solución de amina 4010.01 (10 g, 72 mmoles) a -20°C, preparada siguiendo el método de R. Zhang y J. S. Madalengoitia (J. Org. Chem. 1999, 64, 330) en DCM (200 mL) se le agregó HATU (1.05 equivalentes, 28.8 g), Boc-L-Ter Leucina (Aldrich Chemical Co., Milwaukee, Wisconsin, 1.1 equiv, 79.2 mmol, 18.3 g) y DIPEA (0.2 mol, 40 mL). La reacción se agitó durante 24 horas y luego se diluyó con EtOAc y se lavó con NaHCO3. La capa orgánica se lavó con ácido cítrico y luego con salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró al vacío. El residuo 4010.03 (72 mmoles) se disolvió en Acetona (1.2 L) a 0°C. Luego, se agregaron 5 equivalentes de reactivo de Jones (138 mL, 360 mmoles, preparado por disolución de 91 g de trióxido de Cromo en 70 mL de H2SO4 concentrado, y diluido hasta 300 mL). Después de 45 minutos, no se detectó ningún material de partida por medio de TLC. Se agregó isopropanol (40 mL) y 500 mL de EtOAc. La solución verde se separó por filtración a través de una almohadilla de celite y el filtrado se concentró hasta sequedad. El residuo se diluyó con 10% de carbonato de sodio y se extrajo con Et2O. La capa acuosa se acidificó luego a pH=2 con HCl 3.0 N y se extrajo con EtOAc (3 veces, 200 mL). La capa orgánica se secó sobre MgSO , se filtró y se concentró al vacío para proporcionar 21.55 g del intermediario 4010.04.

Etapa 2: 4010.05 A una solución 4010.04 a -20°C (10.4 g, 28 mmoles) en DCM (300 mL) se le agregó HATU (1.05 equivalentes, 29.4 mmoles, 11.2 g), sal de amina 12.03 (1.0 equivalentes, 28 mmoles, 5.48 g, preparada tal como se describió en la Preparación de los intermediarios, preparación de porciones P1-P'). Después de 10 minutos a -20°C, se agregó DIPEA (3.6 equivalentes, 100 mmoles, 17.4 mL). La reacción se agitó a esta temperatura durante 16 horas. Después de 16 horas, la reacción se diluyó con EtOAc y se lavó sucesivamente NaHCO3, ácido cítrico (10% p/p) y salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró al vacío para proporcionar: 14 g del intermediario 4010.05.

Etapa 3: Se agregó Et3N (3 equivalentes, 5.2 mmoles, 0.72 mL) a una mezcla de 4010.05 crudo (1.06 g, 1.73 mmoles teórico) y EDCl (4 equivalentes, 6.92 mmoles, 1.33 g) en EtOAc (12 mL) a temperatura ambiente. Después de adición, se cargó lentamente DMSO (4.5 mL). Esto fue seguido de adición de ácido metansulfónico (3.6 equivalentes, 6.22 mmoles, 0.4 mL) con una temperatura comprendida entre 20 y 30°C. La reacción se agitó durante 1 hora, Al cabo de 1 hora, la reacción de TLC mostró que se había completado. A 0°C se agregaron una mezcla enfriada de EtOAc (12 mL) y agua helada (2 mL). Después de 2 minutos, la mezcla bifásica se depositó y las capas se separaron. La capa orgánica superior se lavó con H2O y salmuera. La capa orgánica se secó con MgSO , se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por HPFC, 25+M, 15% a 60% (EtOAc) en Hexanos. La purificación proporcionó (0.6 g) de cetoamida. A una solución de cetoamida (0.6 g) a temperatura ambiente, se le agregaron 25 mL de una solución de HCl 4.0 N en Dioxano. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora para observar el completamiento y luego se concentró hasta aproximadamente 5 mL y se diluyó con Heptanos y éter (10 mL cada uno). El precipitado blanco resultante se separó por filtración y se secó bajo un flujo de N2 para proporcionar 0.49 g (rendimiento 81 %) del intermediario 4010.06.

Parte II: Preparación del Intermediario 4010.10 4010.10 Etapa 1 : 4010,07 4010.08 Se agregó PhMgBr (2.5 equivalentes, 40 mL) a -78°C a una solución de Et2O (200 mL) de la amida comercialmente obtenible Weinreb 4010.07 (Aldrich Chemical Co., Milwaukee, Wisconsin, USA, 12 g, 46 mmoles). Al cabo de 2 horas, la reacción se apagó por adición de HCl 1.0 N, se diluyó con EtOAc y se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por HPFC Biotage 75+S, 2% de (EtOAc) a 8% (EtOAc) en Hexano. Se obtuvieron 3.76g de 4010.08.

Etapa 2: 401M8 401G.09 A 4010.08 (1.93 g, 6.9 mmoles) se le agregaron 5 mL de 4M HCl (en Dioxano). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 50 minutos y se concentró hasta sequedad para proporcionar 1.29 g del producto 4010.09.

Etapa 3: 4010.09 4010.10 A una solución a 0°C de fosgeno (6.3 mL) en CH2CI2 (50 mL) y NaHCO3 (sat.) (50 mL) se le agregó 4010.09 (1.29 g, 6 mmoles). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2,5 horas y luego se separó. La capa orgánica se secó sobre Na2SO (anhidro) y se concentró al vacío hasta mitad de volumen con un baño refrigerante. Se diluyó hasta 20 mL con CH2CI2 para proporcionar 4010.10 en forma de una solución 0.3 M en CH2CI2.

Parte III: Preparación del Compuesto de la Fórmula 4010 del Cuadro 1 Siguiendo el Método General C: A una solución a 0°C de la amina 4010.06 (20 mg, 0.045 mmoles) en CH2CI2 (2 mL) se le agregó el isocianato 4010.10 (2 equivalentes, 0.3 mL) y luego DIPEA (0.035 mmoles, 0.06 mL). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1.2 horas y luego se diluyó con EtOAc y se lavó con NH4CI saturado y salmuera. Se secó la capa orgánica sobre MgSO , se filtró y se concentró hasta sequedad. El residuo se purificó por plata con 40% de acetona en hexano para proporcionar 12.7 mg del producto 4010 (rendimiento 46%); LCMS: (610.1 : M+1 ), (632: M+Na).

Se prepararon los inhibidores HCV 4028, 4031, 4062, 4082, 4102, 4109, 4110, 4119, 4120, 4151, 4152, 4153, 4154, 4163, 4165, 4176, 4184 y 4201 descritos en el Cuadro 1 usando el intermediario 4010.10.

EJEMPLO II Preparación del Intermediario de Fórmula 4035.01, 4044.01, 4048.01, 4052.01, 4055.01, y 4076.01 : 4055.01 4076.01 Se prepararon los isocianatos 4035.01, 4044.01, 4055.01, 4048.01 y 4076.01 de acuerdo con el procedimiento señalado en el ejemplo preparativo I por reemplazo en la etapa 1 de la (L)-Valina N,O-Dimetilhidroxil amida comercialmente obtenible, con la correspondiente ter-Leucina, ciclohexilglicina, espirociclohexilglicina, ciclobutilglicina, homovalina, ciclopentilglicina respectivamente. Se prepararon N,O-Dimetilhidroxil amida a partir de los amino ácidos N-Boc comercialmente obtenible siguiendo el procedimiento indicado en la etapa 1 del ejemplo preparativo del compuesto de la fórmula 4032. Se prepararon los inhibidores de HCV 4035, 4042, 4044, 4048, 4051, 4052, 4055, 4076, 4126, 4141 y 4147 descritos en el Cuadro 1 usando los Intermediarios 4005.01 , 4035.01 , 4048.01 , 4052.01 , 4055.01 , y 4076.01 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente.

EJEMPLO lll Preparación del Intermediario de la Fórmula 4011.01, 4079.01 y 4097.01 4011.01 4079.01 4097.01 Se prepararon los isocianatos 4011.01, 4079.01 y 4097.01 de acuerdo con el procedimiento señalado en el ejemplo preparativo I reemplazando en la etapa 1 el bromuro de fenilmagnesio con el cloruro de bencilmagnesio comercialmente obtenible y el cloruro de fenetilmagnesio con la (L)-Valina N,O-Dimetilhidroxil amida o (L)-Homovalina N,O-Dimetilh¡droxil amida o fer-Leucina N,O-Dimetilhidroxil amida. Se prepararon los inhibidores de 4011, 4068, 4079 y 4097 descritos en el Cuadro 1 usando los intermediarios 4011.01 , 4079,01 y 4097.01 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente.

EJEMPLO IV Preparación de los Intermediarios de la Fórmula 4012.01 - « Cl, Br, CF3. OMe. OPh, OCH2Ph, Me, N e . SMe jaon orto, me5a y para -= ÍL)-Val¡na, (L)-tef-Leuana (Lj-€itíohexilglic?na 4012.01 Se prepararon los isocianatos de tipo 4012.01_de acuerdo con el procedimiento señalado en el ejemplo preparativo I reemplazando en la etapa 1 el bromuro de Fenilmagnesio con los correspondientes reactivos Grignard de Fenilo orto, meta o para-sustituidos comerciaimente obtenibles (como ejemplo, pero sin limitarlo a: X= F, Cl, Br, CF3, OMe, OPh, OCH2Ph, Me, NMe2, SMe) con (L)-Valina N,O-Dimetilhidroxil amida o con la correspondiente fer-Leucina y ciclohexilglicina N,O-Dimetilhidroxil amida. Se prepararon los inhibidores de HCV 4012, 4027, 4029, 4045, 4064, 4071, 4075, 4083, 4088, 4090, 4094, 4100, 4104, 4113, 4121, 4122, 4130, 4136, 4140, 4157, 4160 y 4177 descritos en el Cuadro 1 usando los intermediarios 4012.01 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente.

EJEMPLO V Preparación del Intermediario de la Fórmula 4017.01, 4078.01, 4095.01 , 4041.01, 4175.01 y 4190.01 HCI.H 4017.01 4078.01 4095.01 4190.01 4041.01 4175.01 Se prepararon las sales de las Aminas 4017.01, 4041.01, 4078.01, 4095.01 y 4175.01 de acuerdo con el procedimiento señalado en el ejemplo preparativo I etapa 1 y etapa 2 reemplazando en la etapa 1 el bromuro de Fenilmagnesio con el correspondiente bromuro de Piridina que se hizo reaccionar con la correspondiente (L)-Valina N,O-Dimetilhidroxil amida o (L)-Homovalina N,O-Dimetilhidroxil amida o (L)-fer-Leucina N,O-Dimetilhidroxil amida o (L)-Ciclohexilglicina N,O-Dimetilhidroxil amida. Se prepararon las correspondientes Piridinas de Bromuro de Magnesio 2, 3 y 4 de acuerdo con Queguiner y otro, Tetrahedron, 2000, 56, 1349-1360. Para la sal de amina 4190.01 , se hizo reaccionar piridina de bromuro de magnesio 2 con el aldehido 4190.02 y el alcohol 4190.03 se oxidó a la piridina cetona 4190.04 de acuerdo con el esquema 4190.01.

ESQUEMA 4190.01 Preparación del Intermediario 4190.04 4 ^0.02 4190.03 4130.0* Los inhibidores de HCV 4017, 4022, 4041, 4065, 4078, 4095, 4096, 4101, 4168, 4170, 4172, 4176, 4190, 4199 y 4205 descritos en el Cuadro 1 se prepararon usando las sales de amina 4017.01, 4041.01, 4078.01, 4095.01, 4175.01 y 4190.01 y los isocianatos correspondientes o 4- nitrofenil carbamato siguiendo el método D de los Esquemas Generales para la Preparación de los Compuestos Objetivo.

EJEMPLO VI Preparación de los Intermediarios de Fórmula 4021.01, 4026.01, 4069.01 v 4098.01 4021.01 4026.01 4069.01 409R01 R= (U-Vatag. fL'Her-Leucma (D-C Jatexilglicina Se prepararon los isocianatos de tipo 4021.01, 4026.01, 4069.01 y 4098.01 de acuerdo con el procedimiento señalado en el ejemplo preparativo I reemplazando la etapa 1 del bromuro de Fenilmagnesio por el litio-furano, tiazol, tiofeno y oxazol conocidos los cuales se hicieron reaccionar con la correspondiente (L)-Valina N,O-Dimetilhidroxil amida o (L)-Homovalina N,O-Dimetilhidroxil amida o (L)-íer-Leucina N,O-D¡metílhidroxil amida o (L)-Ciclohexilglicina N,O-Dimetilhidroxil amida. Los inhibidores de HCV 4021, 4024, 4026, 4034, 4069, 4073, 4077, 4098, 4106, 4117, 4148, 4158, 4159, 4171, 4174, 4181, 4185, 4189, 4191, 4208 y 4209 descritos en el Cuadro 1 se prepararon utilizando los intermediarios de la fórmula 4021.01, 4026.01, 4069.01 y 4098.01 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente.

EJEMPLO VII Preparación del Compuesto de Fórmula 4019.01, 4013.01, 4037.01, 4057.01, 4060.01 y 4048.01 4019.01 401101 40J7.01 4057.01 .03 4048.01 Etapa 1 : 4013.02 A una solución a -10°C de BocCicIohexilGIicina (10 g, 36 mmoles) en DCM (130 mL) se le agregó clorhidrato de N,O-Dimetilhidroxilamina (3.7 g, 37.8 mmoles), NMM (4.2 mL, 37.8 mmoles) y EDCl (7.3 g, 37.8 mmoles) en porciones en 15 minutos. La reacción se agitó a esta temperatura durante 1 hora, y luego se le agregó HCl (1 N, 55 mL). La reacción se extrajo con DCM (2 veces, 50 mL) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHCO3 saturado y luego con salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró hasta sequedad para proporcionar 4019.02 en forma de un aceite viscoso (10.8 g). .

Etapa 2: 4013.02 4019.03 A 4019.02 (1.1 g, 3.66 mmoles) en éter (40 mL) se le agregó Bromuro de Ciclopropilmagnesio (22 mL, 3 equiv, 0.5 M en THF) a 0°C. La reacción se calentó a temperatura ambiente y después de 5 minutos se agitó a temperatura ambiente y luego dicha reacción se apagó por adición de HCl 1 N. La reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO , se filtró y se concentro hasta sequedad. El residuo se purificó por HPFC Biotage 25+S, 3% (EtOAc) a 13% de EtOAc en Hexano para obtener 4019.03 (0.676 g, 66% de rendimiento).

Etapa 3: Se preparó el isocianato 4019.01 siguiendo las etapas 2 y 3 del ejemplo preparativo I. Se prepararon los isocianatos de la Fórmula 4013.01 , 4037.01, 4057.01, 4060.01 y 4048.01 tal como se describió anteriormente por reemplazo en la etapa 2 de (L)-Ciclohexilglicina N,O-Dimetilhidroxil amida con (L)-Valina N,O-Dimetilhidroxil amida o (L)-Homovalina N,O-Dimetilhidroxil amida o (L)-fer-Leucina N,O-Dímetilhidroxil amida o (L)-Ciclopentilglicina N,O-Dimetilhidroxil amida o (L)-Ciclobutilglícina N,O-Dimetílhidroxil amida, Los inhibidores de HCV 4013, 4016, 4018, 4019, 4023, 4032, 4033, 4037, 4039, 4040, 4048, 4057, 4060, 4066, 4074, 4084, 4086, 4091, 4092, 4093, 4099, 4103, 4105, 4111, 4114, 4123, 4129, 4131, 4132, 4133, 4135, 4138, 4139, 4144, 4149, 4150, 4155, 4156, 4161, 4164, 4167, 4169, 4173, 4186, 4187, 4192, 4193, 4195, 4197, 4200, 4204, 4206 y 4207 descritos en el Cuadro 1 se prepararon usando los intermediarios de la fórmula 4019.01, 4013.01, 4037.01 , 4057.01, 4060.01 y 4048.01 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente.

EJEMPLO VIH Preparación de los Intermediarios de Fórmula 4036.01, 4043.01 v 4112.01 4OT 01 4112.01 Se prepararon los isocianatos de la Fórmula 4036.01, 4043.01 y 4112.01 de acuerdo con el procedimiento señalado en el ejemplo preparativo I con bromuro de Fenilmagnesio, fer-Butil litio y bromuro de Ciclopropilmagnesio reemplazando en la etapa 1 la (L)-Valina N,O-Dimetilhidroxil amida con la homo-espirociclohexilglicina N,O-Dimetilhidroxil amida 4036-02 preparada de la manera siguiente: Etapa 1 : 4036X13 4036.04 4036.05 Se preparó el éter 4036.05 de acuerdo con T. Suzuki, Chem.Pharm. Bull. 46(7) 11 16-1 124 (1998) a partir de metilenciclohexano 4036.03 (3.5 g, 36.4 mmoles) e ¡socianato de clorosulfonilo (1.03 equivalentes, 37.625 mmoles, 3.3 mL) seguido de tratamiento con ácido sulfúrico. Se obtuvieron 4,7 g del aceite incoloro 4036.04.

Etapa 2: 4036.05 403S.0S A una solución a temperatura ambiente de 4036.05 (1 g, 3.71 mmoles) en dioxano (10 mL) se le agregó (Boc)2O (1.1 equivalentes, 4 mmoles, 0.9 g) luego NaHCO3 sat. seguido de K2CO3 un Ph= 9. Después de 18 horas, se extrajo la reacción con Et2O. La capa orgánica se lavó sucesivamente con ácido cítrico (10% p/p) y salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO , se filtró y se concentró al vacío para proporcionar 1 g de 4036.06.

Etapa 3: 4036.06 4036.07 A una solución a temperatura ambiente de 4036.06 (5 g, 18.4 mmoles) en dioxano (30 mL) se le agregaron 30 mL (1.5 equiv) de 1.0 LiOH. Después de 5 horas, la reacción se diluyó con Et2O y se extrajo. La capa de H2O se acidificó a Ph= 1.5 con HCL 1 N y se extrajo con EtOAC. La capa orgánica se lavó con salmuera y se secó sobre MgSO , se filtró y se concentró al vacío para proporcionar 4.75 g de 4036.07.

Etapa 4: 4035.07 4035.02 A una solución a 0°C de 4036.07 (12.6 mmoles, 3.25 g) en DCM mL se le agregó HCl. HN(OMe)Me (1.05 equiv, 13.23 mmoles, 1.27g) y NMM (1.05 equivalentes, 13.23 mmoles, 1.5 mL). Se agregó en porciones EDCl (1.05 equivalentes, 13.23 mmoles, 2.54 g) en un período de 10 minutos.

Una vez completada la reacción, se agregó, HCl 1.5 N (50 mL) y se extrajo la reacción con EtOAc, se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró bajo vacío para proporcionar: 3.5 g de 4036.02. Se prepararon los inhibidores de HCV 4036, 4043, 4061, 4067, 4080, 4112 y 4115 descriptos en el Cuadro 1 usando los intermediarios de la fórmula 4036.01 , 4040.01 y 4112.01 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente.

EJEMPLO IX Preparación del compuesto de Fórmula 4025 ESQUEMA IX „ Boc NaH.TMS. DM -F 4019X12 4025.01 4Q25JJ2 4025.03 A la amida 4019.02 (0.8 g, 2.66 mmoles) en éter (50 mL) se le agregó bromuro de isoprofenilmagnesio (Aldrich Chemical Co., Milwaukee, Wisconsin, USA 19 mL, 9.5 mmoles, 3.6 equivalentes) a 0°C. La reacción se calentó hasta temperatura ambiente después de 5 minutos y se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas y luego se apagó por adición de HCl 1 N. La reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y concentró. El residuo se purificó mediante HPFC con 10% de EtOAc en hexano para obtener 0.304 g del producto 4025.01 (Rendimiento = 40.6%). Se agregó ioduro de trimetilsulfoxonio (237 mg, 1.08 mmoles) en una porción a una suspensión de NaH (43 mg, 1.08 mmoles, 60% en aceite) en DMF a temperatura ambiente y se agitó durante 30 minutos bajo N2. La mezcla de reacción se enfrió a -30°C. Una solución de la cetona 4025.01 (304 mg, 1.08 mmoles) en 1 mL DMF se agregó por goteo a la mezcla y se agitó a -30°C ~ 0°C durante 2 horas y luego se agregaron por goteo a la mezcla de reacción a -20°C 3 mL de H2O. La reacción se diluyó con EtOAc y la capa orgánica se lavó con NH CI acuoso, H2O y salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró. El residuo se purificó mediante HPFC con 0-1% EtOAC en CH2CI2 para proporcionar 176 mg de cetona 4025 (Rendimiento^ 54%). Rotación Óptica: [alfa]=+87.12 (c=7.5 mg/2 mL, 20°C, CHCI3). Se preparó isocianato 4025.03 de acuerdo con el procedimiento descrito en la Etapa 3 del Ejemplo Preparativo Vil (esquema Vil). Se prepararon los inhibidores de HCV 4025, 4053 y 4127 descritos en la el Cuadro 1 usando el intermediario de fórmula 4025.03 de acuerdo con los procedimientos generales descriptos anteriormente.

EJEMPLO X Preparación del compuesto de Fórmula 4179 ESQUEMA X Se prepararon los inhibidores de HCV 4179 descritos en el Cuadro 1 de acuerdo con el Esquema X anterior usando el intermediario de fórmula 4179.01 preparado de acuerdo con el procedimiento que se describe a continuación.

Etapa 1 : 41?9.02 4173 3 A una mezcla de ácido (S)-hidroxiisovalérico (4.4 g, 37 mmoles), clorhidrato de dimetilamina (3.0 g, 37 mmoles), y 1-hidroxi-1 H-benzotriazol (5 g, 37 mmoles) en THF (20 mL) se le agregó diisopropiletílamina (6.4 mL, 37 mmoles) por goteo a -20°C y luego se agregó en una sola vez diciclohexilcarbodiimida (8 g, 39 mmoles), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después de 18 horas, el precipitado formado se separó por filtración y se lavó con EtOAc. Los filtrados combinados se concentraron al vacío y el residuo se purificó por biotage columna 75+S (35% EtOAc/Hex). Para proporcionar 5.3 g de la amida 4179.03.

Etapa 2: 4173.03 4179.04 A 4179.03 (1.5 g, 10 mmoles) en THF seco (30 mL) se agregó bromuro de fenilmagnesio (10 mL, 3.0 M en éter) a 0°C. La reacción se calentó a temperatura ambiente gradualmente, y se agitó a temperatura ambiente durante la noche y luego se apagó para por adición de HCl 1 N, se diluyó con EtOAc y se lavó con salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se purificó por HPFC biotage 25+M con 15-25% EtOAc en Hex. Para proporcionar 1.6 g de 4179.04.

Etapa 3: 4179.04 A ^ 4179.01 Al cloroformiato 4179.05 en CH2CI2 a 0°C se le agregó por goteo una solución de 4179.04 (0.8 g, 4.5 mmoles) y piridina (0.5 mL). La reacción se calentó hasta 40°C con agua caliente y se agitó durante 1.5 horas y luego se diluyó con EtOAc, y se lavó con NaHCO3 saturada, CuSO , y salmuera y se secó sobre MgSO4, se filtró, se concentró y se purificó por columna biotage 25+S (40-60% EtOAc/Hex.) para proporcionar 580 mg de 4179.01. Todos los otros inhibidores de HCV que se dan en el Cuadro 1 pueden prepararse de acuerdo con los procedimientos descritos anteriormente en los ejemplos I a VIH.

CUADRO 1 Cetonas PREPARACIÓN DE LOS EJEMPLOS ESPECÍFICOS DEL CUADRO 2 EJEMPLO XI Preparación del compuesto de Fórmula 4289 y 4294 (2) 428902* Ei y ¿23^ 02 (¿1 Etapa 1 : A una solución a temperatura ambiente de la Cetona 4010.01 preparada en la Etapa 1 del ejemplo preparativo lll (2 mmoles, 554 mg) en Piridina (10 mL) se le agregó clorhidrato de O-metilhidroxilamina (2 equivalentes, 4 mmoles, 334 mg). La mezcla resultante se calentó a 50°C durante 18 horas. Después de 18 horas, la TLC mostró que no había material de partida y un producto ligeramente menos polar y la reacción se concentraron al vacío para remover la piridina. La suspensión blanca resultante se disolvió en DCM y se lavó con HCl 1.0 N (10 mL). Luego la capa de DCM se lavó con CuSO acuoso saturado y salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por HPFC Biotage 25+ M. HPFC, 3% (EtOAc) a 12% (EtOAc) en Hexano, y la Purificación proporciona 2 isómeros 4289.01 y 4294.01 en una relación de 80/20 E/Z.

Etapa 2 A 4294.01 (60 mg) en CH2CI2 (3 mL) bajo N2 se le agregó TFA (1 mL) a temperatura ambiente. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos y se concentró hasta sequedad y se colocó durante la noche bajo alto vacío. Se obtuvieron 40 mg del producto 4294.02. Se aplicó un procedimiento idéntico al del otro isómero 4289.01 para producir la sal de amina 4289.02.

Etapa 3: Se prepararon los inhibidores de HCV 4294 y 4289 en el cuadro 2 usando las sales de amina 4294.02 y 4289.02 y los isocianatos correspondientes o 4-nitrofenil carbamato siguiendo el método D de los Esquemas Generales para la Preparación de los Compuestos Objetivo.

EJEMPLO XII Preparación del compuesto de Fórmula 4291.02. 4297.02 y 4290.02 4231.02 (E Y Z) 4297.02 (E y I) 4290.02(6 Z) Las sales de aminas de Fórmula 4291.02, 4297.02 y 4290.02 se prepararon de acuerdo de la Etapa 1 y 2 del ejemplo preparativo XI mediante reemplazo del clorhidrato O-metilhidroxilamina con clorhidrato de metilhidroxilamina y la cetona 4010.01 mediante la correspondiente (L) Ciclohexilglicina cetona 4019.03 del ejemplo preparativo Vil y la correspondiente (L) Valina cetona. Se prepararon los inhibidores de HCV 4290, 4291 , 4292, 4293, 4295, 4297 y 4298 del cuadro 2 usado las sales de amina 4291,02, 4297,02 y 4290,02 y los ¡socianatos correspondientes o carbamato de 4-nitrofenilo siguiendo el método D de los Esquemas Generales para la Preparación de los Compuestos Objetivo.

CUADRO 2 Oximas PREPARACIÓN DE LOS EJEMPLOS ESPECÍFICOS DEL CUADRO 3 EJEMPLO Xlll Preparación del compuesto de la Fórmula 4488: ' Etapa 1 : B 4488.01 A una solución a temperatura ambiente de ácido Boc-1-amino-ciclohexancarboxílico 4488.01 (3 g, 13.38 mmoles) en CH2CI2 (30 mL) se agregó alcohol bencílico (3 equivalentes, 4 mL), DMAP (1.01 equivalentes, 1.65 g) y DCC (una solución de 1.0 M en DCM, 1.01 equivalentes, 13.5 mL).

La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 48 horas. Se extrajo el material insoluble por filtración, y el crudo se concentró hasta sequedad. El residuo se purificó por cromatografía evaporativa ((5% a 10% de EtOAc en Hexanos, Biotage 40M). La purificación proporcionó 4488.02 (3.64 g). (M+H)= 334, Etapa 2: 44880: A una solución a temperatura ambiente de 4488.02 (3.6 g, 10.8 mmoles) se agregaron 100 mL de una solución de HCl 4.0 N en Dioxano. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y luego durante 18 horas para absorber su completamiento. Después de 18 horas, la reacción se diluyó con Heptanos y Et 2° y el precipitado se preparó por filtra y se enjuagó con Et2O y se secó bajo flujo de N4. La reacción proporcionó 2.6 g de 4488.03 en forma de un polvo blanco.

Etapa 3: 4488.04 A una solución a 0°C de 4488.03 (2.5 mmoles, 666 mg) en CH2CI2 (25 mL) y NaHCO3 saturado (20 mL) se le agregó Fosgeno (2 equivalentes, 20% en PhMe, 2.5 mL). La reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 2 horas. La fase orgánica se separó y luego se secó sobre MgSO4 anhidro y se concentró hasta la mitad de volumen al vacío con un baño refrigerante. La solución se diluyo luego a 25 mL y se usó como una solución 0.1 M de 4488.04.

Etapa 4: A una solución a 0°C de la amina 4488.05 preparada siguiendo el método general C (60 mg, 0.135 mmoles) en CH2CI2 (5 mL) se le agregó DIPEA (8 equiv., 1.08 mmoles, 0.2 mL) y isocianato 4488.04 (3 equiv., 0.406 mmoles, 4 mL). La reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 2 horas. La reacción se diluyó con EtOAc y se lavó sucesivamente con ácido cítrico (10% p/p) y salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO , se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por laca preparativa usando 40% de Acetona en Hexano como eluyente. La purificación proporcionó 32 mg del inhibidor de HCV 4488. (M+H)= 667.

EJEMPLO XIV Preparación del compuesto de ia Fórmula 4303 Todos los esteres de ter-Butilo incluido en el cuadro 3 se prepararon de acuerdo con el procedimiento siguiente. Se hicieron reaccionar clorhidrato de ester fer-Butílico tal como (pero sin limitarlo a ) (L)-ciclohexilglicina, (L)-Valina, clorhidrato de éster ter butílico de (L)-ter-Leucina, con fosgeno tal como se señaló en la Etapa 3 del ejemplo preparativo Xlll para producir el correspondiente isocianato (4303.01 se preparó a partir de clorhidrato de éster ter-butílico de (L)-Valina comercialmente obtenibles). Los isocianatos se hicieron reaccionar con varias aminas tal como 4303.01 preparada siguiendo el método C para producir inhibidores de HCV tal como 4303 enumerado en el cuadro 3. Todos los otros inhibidores de HCV enumerados en el cuadro 3 se prepararon de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo Preparativo XIII por reemplazo en la Etapa 1 del alcohol bencílico con otros alcoholes comercialmente obtenibles (primarios, secundarios y terciarios), y ácido Boc-1-amino-ciclohexancarboxílico 4488.01 con otros amino ácidos tales (pero no limitados a) (L)-ciclohexilglicina, (L)-Valina o (L)-ter-Leucina.

CUADRO 3 Esteres PREPARACIÓN DE EJEMPLOS ESPECÍFICOS DEL CUADRO 4 EJEMPLO XV Preparación del compuesto de la fórmula 4700: A una solución del éster 4488 del cuadro 3 (28 mg, 0.042 mmoles) en etanol (5 mL) se le agregó un catalizador de Pd/C al 10% (20% p/p, 6 mg). La suspensión resultante se hidrogenó hasta que una cromatografía de cada delgada indicó que se había consumido completamente el material de partida (~3 hrs.). Se extrajo el catalizador por filtración a través de una almohadilla de celite y se lavó con EtOAc. El filtrado combinado y las lavazas se evaporaron al vacío hasta sequedad para proporcionar el producto deseado 4700 (25 mg). (M+H)= 576.

EJEMPLO XV» Preparación del compuesto de la Fórmula 4703 A éter 4309 del cuadro 3 (70 mg) se le agregaron 5 mL de HCOOH (98%>). La reacción se agitó a temperatura ambiente hasta que la cromatografía de capa delgada indicó que se habría consumido completamente el material de partida (~2 hrs.). Los volátiles se evaporaron al vacío hasta sequedad para proporcionar el producto deseado 4703 (62 mg). (M+H)= 578. Todos los otros inhibidores de HCV del Cuadro 4 se prepararon de acuerdo con los procedimientos descritos en los Ejemplos preparativos XV y XVI anteriores.

PREPARACIÓN DE EJEMPLOS ESPECÍFICOS DEL CUADRO 5 EJEMPLO XVII Preparación del compuesto de la fórmula 4888 A una solución de 4700 a temperatura ambiente (CUadro 4) del ejemplo preparativo XV (0.02 g, 0.035 mmoles) en CH2CI2 (2 mL) se le agregó Bencilamina, HCl (1.2 equiv, 0.042 mmoles, 6 mg), HATU (1.2 equiv., 0.042 mmoles, 16 mg) y luego DIPEA (5 equiv, 0.175 mmoles, 0.031 mL). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y luego se diluyó con EtOAc y se lavó sucesivamente con ácido cítrico (10% p/p), NaHCO3 y salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por placa preparativa usando 40% de Acetona en Hexano como eluyente. Se obtuvieron 4 mg del producto 4888 deseado. (M+H)=665. Los inhibidores HCV 4801 a 4917 del Cuadro 5 se prepararon usando el procedimiento descrito en el Ejemplo XVII.

EJEMPLO XVIII Preparación del compuesto de la Fórmula 4800 Parte I: Preparación del intermediario de la fórmula 4800.05 4800 03 DC . D1PEA 4800 05 4300 05 A -20°C de Boc-L-Valina 4800.01 (1.1 g, 5 mmoles) en DCM (20 mL) se le agregó HATU (1.2 equiv., 6 mmoles, 2.3 g), DIPEA (5 equiv., 25 mmoles, 4.4 mL) y luego bencen sulfonamida (1.1 equiv, 5.5 mmoles, 0.86 g). La reacción se agitó a esta temperatura durante 48 horas. La reacción se diluyó con EíOAc y se lavó sucesivamente con ácido cítrico (10% p/p), NaHCO3 y salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró al vacío. La recristalización ocurrió con una mezcla en DCM y MeOH. Se obtuvieron 600 mg de cristales blancos (4800.02) con 1.5 g del residuo oleoso. Se usaron 600 mg en la Etapa siguiente. Se agregó HCl dioxano 4.0 N (25 mL) a 4800.02 (600 mg). La reacción se agitó a temperatura ambiente hasta que no se detectó material de partida mediante TLC (2 horas). Luego, se agregó Et2O y el polvo blanco resultante se separó por filtración y se secó bajo flujo de N2 para proporcionan 0.46 g (1.57 mmoles) de 4800.03. A una solución a 0°C de isocianato 4800.04 (preparado tal como se describió en la Etapa 3 del ejemplo preparativo Xlll por reemplazo de ácido Boc-1-amino-ciclohexancarboxílico 4488.01 de la Etapa 1 mediante Boc-L-Ter-Leucina, 0,7 mmoles, 3,5 mL) en CH2CI2 (2 mL) se agregó 4800.03 (180 mg, 0.61 mmoles) y luego DIPEA (1.1 equiv., 0.7 mmoles, 0.122 mL). La reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante el fin de semana. Después de 48 horas, la reacción se concentro hasta sequedad y el residuo oleoso se purificó por HPFC Biotage 25+S, 50%> a 100% EtOAc en Hexano. La purificación proporcionó 110 mg de 4800.05. A una solución de 4800.05 (0.11 g, 0.219 mmoles) en EtOAc (5 mL) se agregó 10% de catalizador de Pd/C (15% p/p, 16 mg). La suspensión resultante se hidrogenó hasta que la cromatografía de capa delgada indicó que se había consumido completamente el material de partida (~3 horas). Se extrajo el catalizador por filtración a través de una almohadilla de celite y se lavó con EtOAc. El filtrado combinado y las lavazas se evaporaron al vacío hasta sequedad para proporcionar el producto 4800.06 deseado (85 mg). Parte II: Preparación del intermediario de la fórmula 4800.08 A una solución a -20°C de ácido 4800.07 (preparado siguiendo el método de R. Zhang y J. S. Madalengoitia (J. Org. Chem. 1999, 64, 330), 5.1 g, 20 mmoles) en DCM (200 mL) se le agregó HATU (1.05 equiv, 21 mmoles, 8 g), sal de amina 12.03 (tal como se describió en la preparación de intermediarios, preparación de las porciones P1-P', 1.0 equiv, 20 mmoles, 3.893 g). Después de 10 minutos a -20°C, se agregó DIPEA (5 equiv, 100 mmoles, 17.4 mL), y la reacción se agitó a esta temperatura durante 16 horas, y luego se diluyó con EtOAc y se lavó sucesivamente con NaHCO3, ácido cítrico (10% p/p) y salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró al vacío. La purificación con Biotage 75+M (3.5 I de 1/1 Hex/EtOAC) y luego con 100% de EtOAc, proporcionó 12 g de un aceite de color castaño claro que se usó directamente en la etapa siguiente. A una solución a temperatura ambiente de este aceite crudo (12 g) se le agregaron 100 mL de una solución de HCl 4.0 N en Dioxano. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora para observar el completamiento luego se diluyó con Heptanos y se concentró hasta sequedad al vacío para proporcionar 10.4 g de un aceite de color castaño oscuro 4800.08 que se usó directamente para la preparación del compuesto de Fórmula 4800.09. Parte lll: Preparación del compuesto de Fórmula 4800: A una solución a -20°C de 4800.06 (85 Mg, 0.2 moles) en DCM (50 ml) se agregaron HATU (1.2 equiv, 0.24 moles, 92 Mg), sal de amina cruda 4800.08 (1.2 equiv, 0.24 mmoles, 80 mg). Después de 10 min a -20°C, se agregó DIPEA (5 equiv, 1 mmoles, 0.22 mL). La reacción se agitó a esta temperatura durante 18 horas, y luego la reacción de diluyó con EtOAc y se lavó sucesivamente con ácido cítrico (10% p/p) y salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró al vacío. Se obtuvieron 250 mg de 4800.09 crudo. (M+H)= 691. A una solución a 0°C de 4800.09 crudo (0.25 g, 0.2 mmoles) en DMSO/PhMe (12 mL) se le agregó EDCl (10 equiv, 1 mmoles, 400 mg) y ácido Dicloroacético (5 equiv, 1 mmoles, 0.08 mL). La reacción se calentó hasta temperatura ambiente gradualmente y se agitó a esta temperatura.

Después de 4 horas se diluyó la reacción con agua y se separaron las dos fases. La capa orgánica se lavó con Na2S2O3 saturado (2 VECES), NaHCO3 y salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por HPFC Biotage 12 S, 2% a 6% de MeOH en DCM. La purificación proporcionó 35 mg del compuesto de fórmula 4800.

EJEMPLO XIX Preparación de los Intermediarios Generales de los Cuadros 6.1 , 6.2 y 6.3 -70* C a rt 17018 Ar= 2-furanilo. 3-furanils. 2-tienilo. 3-tienilo. 2-?iri ilo 3-pip ilo. 4-?iridilo. 5-(dimetila inometil}-2 -furanilo Parte I: Preparación del Intermediario del Cuadro 6.1 Cloruros (heterociclil)metilicos: Se preparó cloruro de 5-(Dimetilaminometil)furfurilo a partir del alcohol 5-(dimetilam¡nometil)furfurilo comercialmente obtenible (Aldrich Chemical Co., Milwaukee, Wisconsin, USA) como se informó en (II Fármaco, Ed. Sci., 1982, 37, 398) .

Se prepararon cloruro de 2-, 3-, y 4-picolilo a partir de las sales de clorhidrato comercialmente obtenibles (Aldrich Chemical Co., Milwaukee, Wisconsin, USA), separándolas con NaOH 2.5 N frío y éter, y secando el extracto de éter con MgSO4, y concentrando la solución en un baño de agua a 15°C, todo inmediatamente antes del uso. Se preparó 2-Clorometilfurano a partir de SOCi2 en Et2? tal como se ha informado (JACS, (1928), 50, 1955). De manera similar se preparó 3-clorometilfurano, excepto que se agregó una solución de alcohol y piridina a una solución de SOCI2 para prevenir la formación excesiva de diéster de sulfonato. En ambos casos fue necesaria la destilación para efectuar el reordenamiento del aislado de clorosulfonato inicial. Ambos haluros destilados fueron inmediatamente almacenados en éter (~1 M) con un poco de K2CO3 sólido a -20°C. Estas soluciones fueron estables durante por lo menos 24 horas. Se preparó 2- y 3-cloromeltiofeno usando los mismos procedimientos que para 2- y 3-clorometilfurano, excepto que no fue necesaria destilación, debido a que los clorosulfonatos se transformaron espontáneamente bajo las condiciones de reacción. Las soluciones del extracto secas fueron rápidamente filtradas por succión a través de almohadillas de gel de sílice para efectuar una purificación suficiente. Los filtrados se almacenaron en frío y se concentraron cuidadosamente inmediatamente antes de su uso. r2-(4-PIRIDILMETIL)CICLOHEXANlCARBOXILATO DE METILO COOCH3 17018 17020 Una solución de 20 mL de LDA 2 M / THF-heptano (Acros Chemical Co.) en 50 mL de THF se enfrió a -70°C, y se agregaron por goteo a < -60°C 6 g de ciciohexancarboxilato de metilo 17018. Después de una agitación adicional de 0.5 horas a -70°C, se agregaron por goteo a < -60°C 5.1 g de cloruro de 4-picolilo en 40 mL éter. La temperatura se dejó elevar luego lentamente a temperatura ambiente durante 2 horas, y se agitó durante 2 horas adicionales. La reacción se apagó en una mezcla fría de 200 mL de KH2PO4 acuoso al 20%o y 5 mL de HCl 12 N, la mezcla se extrajo con EtOAc, se lavó el extracto con salmuera y luego se secó con MgSO4? La mezcla se filtró, el filtrado se evaporó, el residuo se evaporó dos veces a partir de xileno, y el residuo final se cromatografió sobre gel de sílice (1 :4 Et2O-CH2CI2) para obtener 3.0 g de un aceite de color ámbar 17020 (30 %): H1 -RMN (CDCI3) d 8.46 (d, 2H, ?v=6.0), 6.98 (d, 2H, ?v=6.0), 3.62 (s, 3H), 2.79 (s, 2H), 2.05 (m, 2H), 1.7-1.2 (mm, 8H). f2-(heteroarilmetil)ciclohexanjcarboxilatos de metilo Se aplicó el procedimiento del ejemplo precedente a cloruro de aril metilo para obtener los ciclohexancarboxilatos sustituidos correspondiente de acuerdo a lo que se resume en ei siguiente Cuadro 6.1.

Parte II: Preparación de los Intermediarios del Cuadro 6.2: EJEMPLO PREPARATIVO 17035 Preparación del Intermediario de la Fórmula 17035 Acido r2-(4-piridilmetii)ciclohexan1carboxilico Una solución de 3.4 g del éster 17020 del ejemplo previo 20 mL de dioxano se trató con 30 mL de LiOH 1 N acuoso, y la mezcla se agitó a 100°C durante 6 horas. La mezcla de apagó en agua helada, se extrajo con éter, y la fase acuosa fría se acidificó lentamente a pH 4 con HCl 3 N. El precipitado se filtró, se lavó con agua y se secó para dejar 2.8 g (58%>) del producto ácido 17035: H1-RMN (DMSO-d6) d 8.42 (d, 2H), 7.08 (d, 2H), 2.73 (s, 2H), 1.9-1.1 (mm, 10H). Cristalizó una porción a partir de EtOH: pf: 240-242°C; el análisis elemental confirmó: CHN. Se aplicó el mismo procedimiento para la preparación de los intermediarios 17036 y 17037 del cuadro 6.2.

Acidos[1-heteroarilmetil)ciclohexan1carboxilicos Se aplicó el procedimiento del ejemplo precedente a los esteres (17038, 17039, 17040. 17041, 17042 ) del Cuadro 6.2 excepto que el extracto acuoso acidificado (pH 3.5-4.0) se extrajo con EtOAc, después de saturarlo con NaCI en el caso de los dos productos piridilo 17036 y 17037. El extracto se evaporó para obtener los ácidos. Las porciones fueron cristalizadas para un análisis, tal como se resume en el siguiente Cuadro 6.2.

Parte III: Preparación de los Intermediarios del Cuadro 6.3: EJEMPLO PREPARATIVO 17043: Preparación del Intermediario de fórmula 17043 Isocianato de 1-(4-pioridilmetil)ciclohexilo 17035 llflil Una mezcla de 0.5 g del ácido carboxílico 17035 descrito anteriormente, 0.5 mL de difenilfosforil azida, y 25 mL de tolueno se calentaron a 110°C durante 0.75 horas. La mezcla enfriada se colocó en una columna de gei de sílice, y se eluyó rápidamente con EtOAc-hexano (2:3) para proporcionar 0.39 g del compuesto del título en forma de un aceite, el cual se usó poco tiempo después de la preparación. El producto 17043 se almacenó en una solución de CH2CI2 1 M por breves períodos de tiempo. H1-RMN (CDCI3) d 8.3 (br s, 2H), 7,17 (d, J=5.4, 2H), 2.78 (s, 2H), 1.8-1.1 (m, 10H).

EJEMPLO GENERAL DEL CUADRO 6.3 Isocianatos de 1-(heteroarilmetil)ciclohexilo Se aplicó el procedimiento del ejemplo precedente 17043 a los ácidos del Cuadro 6.2 para obtener los isocíanatos 17048, 17049, 17050, 17051, 17052, 17053 y 17054 que se muestran en el Cuadro 6.3.

Los inhibidores de HCV de 4921, 4922, 4923, 4927, 4933, 4938, 4939, 4940, 4941, 4944, 4946, 4947, 4955, 4962, 4965, 4966 del Cuadro 6 se prepararon usando los isocianatos 17043, 17048, 17049, 17050, 17051, 17052, 17053 y 17054 que se muestran en el cuadro 6.3 de acuerdo con el procedimiento general descrito anteriormente.

EJEMPLO XX Preparación de los Intermediarios Generales 4948.01 usados en la preparación del inhibidor de HCV 4948, 49494972, 4973 del cuadro 6 de acuerdo con el procedimiento general descrito anteriormente. 4948X11 Etapa 1 4948.03 4948.02 Etapal : El compuesto 4948.02 (2.5 g, 10 mmoles) se recogió en dioxano (30 mL). Se agregó reactivo de Lawesson (2.23 g, 5.5 mmoles, STENCH) y la mezcla de reacción se calentó a 60°C durante 2 horas bajo atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se dejó enfriar a temperatura ambiente durante un período de 3.5 horas mientras se agitaba. Luego se concentró la mezcla de reacción. Se agregó una solución saturada de bicarbonato de sodio (50 mL) al residuo y se extrajo con cloroformo (2 x). La capa de cloroformo combinada se concentró para proporcionar 2.8 g de 4948.03 que se usó sin ninguna purificación. 4948.03 4948.01 Etapa 2: Preparación del bromoacetaldehído: Se agregó bromoacetaldehído dietilacetal (2 mL) a HCl concentrado (2.4 mL) y se calentó a 60°C durante 30 min. Luego esta mezcla se enfrió a 10°C. Se agregó DMF (30 mL) seguido de tamices moleculares en polvo (con una espátula). La solución se decantó y usó inmediatamente tal como se describirá a continuación. Una solución de bromoacetaldehído en DMF preparada tal como anteriormente, se agregó a 4948.03 (1.4 g, de la Etapa 1 ) y se calentó a 60°C durante 5 horas. En este momento se enfrió la mezcla de reacción a temperatura ambiente, se diluyó con acetato de etilo (50 mL) y se lavó con bicarbonato de sodio saturado (100 mL). La capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo adicionalmente con acetato de etilo (50 mL). La capa orgánica combinada se lavó con agua (100 mL), salmuera (100 mL), se secó (Na2SO ) y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía evaporativa usando 12/88 de EtOAc/hexanos lo cual proporcionó 964 mg del intermediario que se recogió en 33%> de bromuro de hidrógeno en ácido acétido (10 mL). Esta mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se agregó éter dietílico (100 mL) lo cual dio como resultado un precipitado blanco. La filtración seguida de lavado con éter dietílico (2 x) proporcionó 4948.01 en forma de un sólido blanco con un rendimiento cuantitativo.

EJEMPLO XXI Preparación ele los intermediarios Generales 4925,01 usados en la preparación del inhibidor de HCV 4925, 4926, 4928, 4929, 4952, 4959, 4968 del Cuadro 6 de acuerdo con el procedimiento general descrito anteriormente. 4925,01 Etapa 1 4925.04 A una solución de metilciclohexancarboxilato 4925.03 (2.54 mL, 17.68 mmoles) en THF (100 mL) a -78°C se le agregó LDA (2.0M en hexanos/THF/etilbenceno, 17.68 mL, 35.36 mmoles) bajo atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se mantuvo a esa temperatura durante 30 min. Luego se agregó por goteo una solución del aldehido 4925.02 (2.0 g, 17.68 mmoles) en THF (10 mL). La temperatura se llevó lentamente hasta 10°C en el término de 1.5 horas. La TLC indicó que se habían consumido completamente los materiales de partida. La reacción se apagó con una solución de cloruro de amonio saturado/salmuera (200 mL) y se extrajo con éter dietílico (2 x). La capa de éter combinada se secó (Na2SO4) y se concentró. La purificación del residuo por cromatografía evaporativa usando 23/77 de EtOAc/hexanos proporcionó 2.72 g del material requerido, 4925.04.

Etapa 2 A una solución de 4925.04 (1.02 g, 4.0 mmoles) en THF (30 mL) se le agregó tiocarbonil diimidazol (1.78 g, 10.0 mmoles). La mezcla se reflujo bajo atmósfera de nitrógeno durante 5 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con éter dietílico, se lavó con una solución saturada de cloruro de amonio, se secó (Na2S04) y se concentró. La purificación del residuo por cromatografía evaporativa usando 20/80 a 30/70 de EtOAc/diclorometano proporcionó 1.3 g del material requerido, 4925.05.

Etapa 3 El compuesto 4925.05 (1.27 g, 3.48 mmoles) se recogió en tolueno (40 mL). A esto se le agregaron AIBN (2,2'-Azobisisobutironitrilo, 57 mg, 0.348 mmoles) y TBTH (hidruro de tri-n-butilestaño, 1.87 mL, 6.96 mmoles) bajo atmósfera de nitrógeno. La mezcla se reflujo durante la noche (16 horas). En este momento la mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, y se apagó con HCl 1 N acuoso (100 mL). Luego se extrajo con éter dietílico (100 mL). La capa orgánica se lavó con HCl 1N (100 mL), se secó (Na2SO4) y se concentró. La purificación del residuo por cromatografía evaporativa usando 8/92 de EtOAc/diclorometano proporcionó 400 mg del material requerido, 4925.05.

Etapa 4 4925.05 4325.0E A una mezcla del compuesto 4925.05 (478 mg, 2.0 mmoles) en dioxano (5 mL) y y agua (5 mL) se le agregó hidróxido de potasio sólido (336 mg, 6 mmoles). La mezcla de reacción se calentó a 80°C durante 2 horas y a 100°C durante 3 horas. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se concentró y se apagó con HCl 1 N acuoso. La capa acuosa se extrajo con diclorometano, se secó (Na2SO ) y se concentró para proporcionar 390 mg del material requerido, 4925.06 LC-MS: 226 (M+H).

Etapa 5 4925.06 4925.01 El ácido 4925.06 (390 mg, 1.73 mmoles) se recogió en tolueno (10 mL). Luego se agregaron Trietilamina (0.27 mL, 1.9 mmoles) y DPPA (Difenilfosforil azida, 0.42 mL, 1.94 mmoles). La mezcla de reacción se reflujo durante 5 horas y se enfrió a temperatura ambiente. Esto dio como resultado la formación del isocianato 4925.01 que se usa adicionalmente como una solución 0.173 M en tolueno.

EJEMPLO XXII Preparación del isocianato 4953.01 usado en la preparación del inhibidor del HCV 4953 del Cuadro 6.

O O Br, E¡:0 H Boc" I -O. PhMfj .¡A Boc Ph 4953.02 Etapa 1 Se agregó PhMgBr (2.5 equiv, 40 mL) a -78°C a una solución de Et2O (200 mL) de la amida Weinreb comercialmente obtenible (Aldrich Chemical Co., Milwaukee, Wisconsin, USA, 12 g, 46 mmoles). Al cabo de 2 horas, la reacción se apagó por adición de HCl 1.0 N, se diluyó con EtOAc y se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por HPFC Biotage 75+S, Seg1 : 2%B a 2%B, Lineal, 320 mL / Seg2: 2%B a 8%B, Lineal, 3200 mL / Seg3: se mantuvo a 8% durante 5CV (1600 mL). Se obtuvieron 3.76 g de 4953.02.

Etapa 2 4S53.02 495J.Í3 A una solución a 0°C de 4953.02 (1.5 g, 5.4 mmoles) en MeOH (100 mL) se agregó NaBH4 (5 equiv, 27 mmoles, 1.02 g). La reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó hasta que la cromatografía de capa delgada indicó que se había consumido completamente el material de partida (-0.5 hr). La reacción se interrumpió por adición de HCl 1.0 N y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó por HPFC Biotage 25+S, Seg1 : 3%B, Lineal, 120 mL / Seg2: 3%B a 12%B, Lineal, 1200 mL / Seg3: Mantener a 10% para 240 mL. La purificación proporcionó 1.35 g de 4953.03.

A una solución inundada con N2 de 4953.03 (1.35 g, 4.8 mmoles) en MeOH (50 ml) se le agregó un catalizador de Pd/C al 10% (0.5 g). La suspensión resultante se hidrogenó durante 18 horas. El catalizador se extrajo por filtración a través de una almohadilla de celite y se lavó con EtOAc. El filtrado combinado y las lavazas se evaporaron al vacío hasta sequedad para proporcionar después de la purificación el producto deseado 4418 (85 mg) y se recuperó 4953.04.

Etapa 4 4418 4-119 Se trató 4953.04 (28 mg, 0.10 mmol) con una solución de HCl 4.0 N en dioxano descrita previamente para liberar cuantitativamente 4953.05.

Etapa 5 HCl 4953.05 4953.01 Se trató 4953.05 (28 mg, 0.10 mmol) con fosgeno tal como se describió previamente para liberar 4953.01 el cual se usó tal como se describió anteriormente para preparar el inhibidor de HCV 4953 del Cuadro 6.

EJEMPLO XXIII Preparación del isocianato 4950.01 usado en la preparación del inhibidor de HCV 4950 del Cuadro 6. r.c-c Fos .Etapa 1 Hoc 4950.02 A una solución a -25°C de cetona 4953.02 preparada en la etapa 1 del ejemplo preparativo XXII (2.77 g, 10 mmoles) en THF (50 mL) se le agregó TMSCH2MgCI (1.0 M en Et2O, 2 equiv, 20 mmoles, 20 mL). La temperatura se elevó lentamente hasta 0°C y se agitó durante 1 hora, se apagó con H2O (5 mL) y se diluyó con EtOAc. La mezcla de reacción se lavó con NH CI saturado y salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró al vacío. A una solución a 0°C del producto crudo anterior en THF (50 mL) se le agregó KHMDS (2.7 equiv, 0.5M en PhMe, mmol, 54 mL). La mezcla se agitó a 0°C durante 1.5 horas y luego a temperatura ambiente durante 3 horas y luego se apagó con NH CI saturado y se diluyó con EtOAc. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró al vacío. Purificación a través de HPFC, 40+S, Seg1 : Mantener a 2%>B, Lineal, 60 mL / Seg2: 2%B a 8%>B, Lineal, 600 mL / Seg3: Mantener a 8%B, Lineal, 300 mL. Se aislaron 0.5 g de 4950.02.

Etapa 2 4950.03 A una solución a temperatura ambiente de 4950.02 (100 mg, 0.36 mmol) en DCM 3 mL se le agregó 1 mL de TFA. La reacción se convirtió inmediatamente a un color amarillo. Después de 10 minutos, la TLC no mostró ningún material de partida y la reacción se diluyó con hexanos y se concentró hasta sequedad. El aceite de color amarillo resultante se colocó bajo alto 10 vacío durante la noche y se analizó mediante RMN. Se obtuvieron 109 mg de 4950.03.

Etapa 3 4950.01 Una solución de DCM (5 mL) de sal de TFA 4950.03 (109 mg, 0.36 mmol) se agregó a una solución a 0°C de NaHCO3 acuoso saturado (5 mL) y fosgeno (2 equiv, 0.72 mmol, 0.36 mL). Inmediatamente se estableció 0 una rápida agitación y la mezcla de reacción enfriada con hielo se agitó durante 2 horas a alta velocidad. Después de 2 horas, se separó la fase orgánica (inferior) y luego se secó sobre MgSO4 anhidro y se concentró hasta mitad de volumen al vacío con un baño refrigerante. Se diluyó hasta 3,6 mL (solución 0.1 M en DCM de 4950.01) que se usó tal como se describió anteriormente para preparar el inhibidor de HCV 4950 del Cuadro 6.

EJEMPLO XXIV Preparación del isocianato 4942.01 usado en la preparación del inhibidor de HCV 4942 del Cuadro 6.

Etapa 1 4942.02 4942.03 A una solución a 0°C de DAST (2 equiv, 40 mL) en DCM ( 290 mL) se le agregó una solución de éster etílico de ácido 4-ciclohexanona carboxílico 4942.02 (25 g, 147 mmoles) en DCM (100 mL) por goteo durante 20 minutos, la mezcla se dejó bajo agitación a temperatura ambiente durante la noche. Luego se agregó cuidadosamente H2O (50 ml) (PRECAUCIÓN: FUERTE EXOTERMA). La mezcla se basificó a pH 5 (toma una gran cantidad de tiempo, precaverse de una violenta reacción de ácido-base) con NaHCO3 saturado. Finalmente, se extrajo la capa acuosa por extracción y se lavó la capa orgánica con NaHCO3 saturado sin ningún problema. La capa acuosa se extrajo nuevamente con EtOAc y ambas capas orgánicas se combinaron y se secaron sobre MgSO , se filtraron y el solvente se extrajo por evaporación bajo presión reducida para proporcionar 4942.03 crudo (29.33 g) en forma de un aceite de color rojo oscuro. 4942.04 A una solución a -78°C del éster etílico 4942.03 (20 mmoles, 3.84 g) en THF (25 mL) se le agregó 1.0 equivalente de LDA (10 mL). La adición de LDA produjo un color amarillo claro. Después de 15 minutos se agregó por goteo bromuro de bencilo (1.1 equiv, 22 mmoles, 2.61 mL). El color de la reacción se convirtió inmediatamente a un color dorado. Luego se calentó gradualmente la reacción hasta temperatura ambiente durante la noche. La reacción se interrumpió por adición de NH4CI acuoso saturado. La reacción se diluyó con EtOAc y se separaron las capas. Se lavó con NaHCO3 y luego con salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró al vacío. Purificación a través de HPFC, 40+S, Seg1: Mantener a 5%B, Lineal, 60 mL / Seg2: 5%B a 20%B, Lineal, 600 mL / Seg3: Mantener a 20%B, Lineal, 300 mL. Se aislaron 0.915 g de 4942.04.

Etapa 3 A una solución de 4942.04 (0.8 g, 2.8 mmoles) en EtOH / H2O (36 mL/ 4 mL) se le agregó KOH (10 equiv, 28 mmoles, 1.57 g). La reacción se llevó a reflujo hasta su completamiento. Fueran necesarias 48 horas a reflujo para observar el completamiento. Se diluyó con Et2O y se basificó a Ph=9 con NaHCO3 saturado. Se descartó la capa de Et2O para eliminar el material que no es ácido carboxílico. La capa acuosa se acidificó a Ph=1 con HCl 1.0 N y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO , se filtró y se concentró al vacío. Se aislaron 535 mg de un sólido de color naranja claro como 4942.05.

Etapa 4 4942.01 Se trató el ácido 4942.05 (335 mg, 1.314 mmoles) en tolueno (10 mL) tal como se describió previamente para proporcionar el isocianato 4942.01 el cual se usó tal como se describió anteriormente para preparar el inhibidor de HCV 4942 del Cuadro 6.

EJEMPLO XXV Preparación del isocianato 4954.01 usado en la preparación del inhibidor de HCV 4954 del Cuadro 6. 4954 02 4954 01 A una solución de 50.2 mg del compuesto 4954.02 (Adam, Waldemar; Baeza, Jaime; Liu, Ju-Chao, Journal of the American Chemical Society (1972), 94(6), 2000-6) en tolueno (4.0 mL) se le agregó DPPA (0.06 L) y Et3N (0.037 mL). La mezcla de reacción se calentó a 110°C durante 40 minutos, se enfrió y se lavó con NaHCO3 saturado, se secó sobre MgSO , se filtró y se concentró para proporcionar el isocianato 4954.01. El crudo obtenido se usó sin purificación para preparar de la manera descrita anteriormente el inhibidor de HCV 4954 del Cuadro 6.

La presente invención se refiere a nuevos inhibidores de proteasa HCV. Esta utilidad puede manifestarse por su capacidad para inhibir la serina proteasa HCV NS2/NS4a. Un procedimiento general para dicha demostración se ¡lustra mediante el siguiente ensayo in vitro.

Ensayo para la Actividad Inhibidora de la Proteasa de HCV Ensayo Espectrofotométrico: El ensayo espectrofotométrico para la serina proteasa de HCV puede llevarse a cabo en los compuestos de la ¡nvención siguiendo el procedimiento descripto por R. Zhang et al, Analytical Biochemistry, 270 (1999) 268-275, cuya descripción se incorpora aquí como referencia. El ensayo basado en la proteólisis de los sustratos cromogénicos de éster es apropiado para el monitoreo continuo de la actividad de la proteasa NS3 del HCV. Los sustratos derivan del lado P de la secuencia de unión NS5A-NS5B (Ac-DTEDWX(Nva), en la cual X = A o P), cuyos grupos carboxilo C-terminales son esterificados con uno de cuatro alcoholes cromofóricos diferentes (3- o 4-nitrofenol, 7-hídroxi-4-metil-cumarina, o 4-fenilazofenol). A continuación se ilustra la síntesis, la caracterización y la aplicación de estos nuevos sustratos de éster espectrofotométricos para un rastreo de alto rendimiento y una evaluación cinética detallada de los inhibidores de proteasa NS3 de HV.

Materiales y Métodos: Materiales: Reactivos químicos para los ensayos de los buffers relacionados se obtuvieron en Sigma Chemical Company (St. Louis, Missouri). Los reactivos para la síntesis de los péptidos se adquirieron en Aldrich Chemicals, Novabiochem (San Diego, California), Applied Biosystems (Foster City, California) y Perseptive Biosystems (Framingham, Massachusetts). Los péptidos se sintetizaron manualmente o con un sintetizador automático ABI modelo 431 A (de Applied Biosystems). El espectrómetro UV/VIS modelo LAMBDA 12 fue adquirido en Perkin Elmer (Norwalk, Connecticut) y las placas UV de 96 receptáculos se obtuvieron en Corning (Corning, New York). El bloque de precalentamiento puede ser de USA Scientific (Ocala, Florida) y la placa de 96 receptáculos del formador de remolino es de Labline Instruments (Melrose Park, Illinois). El lector de placa microevaluadora Spectramax Plus con monocrómetro se obtiene en Molecular Devices (Sunnyvale, California).

Preparación de la Enzima: La proteasa NS3/NS4A de HCV heterodimérica recombinante (cepa 1a) se prepara usando los procedimientos publicados previamente (D. L. Sali eí al, Biochemistry, 37 (1998) 3392-3401 ). Las concentraciones de proteína se determinaron mediante el método de tinción Biorad usando los modelos de proteasa de HCV recombinantes previamente cuantificados por análisis de aminoácido. Antes del inicio del ensayo, el buffer de almacenamiento de enzima (50 mM de fosfato de sodio pH 8,0, 300 mM de NaCI, 10% de glicerol, 0,05% de lauril maltosida y 10 mM DTT) se intercambiaron con el buffer de ensayo (25 mM MOPS pH 6.5, 300 mM de NaCI, 10% de glicerol, 0.05% lauril maltosída, 5 µM de EDTA y 5 µM de DTT) utilizando una columna precargada Biorad Bio-Spin P-6.

Purificación y Síntesis del Sustrato: La síntesis de los sustratos se efectuó tal como ha sido informado por R. Zhang et al, (ibid.) y se inició anclando Fmoc-Nva-OH a la resina de cloruro 2-clorotritilo usando un protocolo convencional (K. Barios eí al, Int. J. Pept. Protein Res., 37 (1991 ), 513-520). Los péptidos fueron subsiguientemente reunidos, usando química de Fmoc, en forma manual o bien en un sintetizador de péptidos automático ABI modelo 431. Los fragmentos peptídicos N-acetilados y totalmente protegidos fueron disociados de la resina o bien con 10% de ácido acético (HOAc) y 10%> de trifluoretanol (TFE) en diclorometano (DCM) durante 30 minutos, o con 2% de ácido trifluoracético (TFA) en DCM durante 10 minutos. El filtrado combinado y las lavazas de DCM se evaporaron azeotrópicamente (o se extrajeron repetidamente con una solución acuosa de Na2C03) para eliminar el ácido usado en la disociación. La fase de DCM se secó sobre Na2S?4 y se evaporó. Los sustratos de éster se reunieron usando procedimientos convencionales de acoplamiento de ácido-alcohol (K. Holmber eí al, Acta Chem. Scand., B33 (1979) 410-412). Los fragmentos peptídicos se disolvieron en piridina anhidra (30-60 mg/ml) a la cual se habían agregado 10 equivalentes molares de cromóforo y una cantidad catalítica (0.1 eq.) de ácido para-toluensulfónico (pTSA). Se agregó diciclohexilcarbodiimida (DCC, 3 eq.) para iniciar las reacciones de acoplamiento. La formación de producto se monitoreó mediante HPLC y puede encontrarse completa después de 12-72 horas de reacción a temperatura ambiente. El solvente piridina se evaporó al vacío y se removió adicionalmente por evaporación azeotrópica con tolueno. El éster peptídico se desprotegió con 95% de TFA en DCM durante dos horas y se extrajo tres veces con éter etílico anhidro para eliminar el exceso de cromóforo. El sustrato desprotegido se purificó por HPLC de fase inversa en una columna C3 o C8 con un gradiente de acetonitrilo al 30% hasta 60% (usando volúmenes de seis columnas). El rendimiento general después de la purificación de HPLC puede ser de aproximadamente 20-30%. La masa molecular puede confirmarse por espectroscopia de masa por ionización de electro-rocío. Los sustratos se almacenaron en forma de polvo seco bajo desecación.

Espectro de Sustratos y Productos: Los espectros de sustratos y los correspondientes productos cromofóricos se obtienen en el buffer de ensayo de pH 6,5. Los coeficientes de extinción se determinaron en la longitud de onda óptima fuera de pico en cubetas de 1-cm (340 nm para 3-Np y HMC, 370 nm para PAP y 400 nm para 4-Np) usando diluciones múltiples. La longitud de onda fuera de pico óptima se define como la longitud de onda que produce la diferencia fraccional máxima de absorbancia entre el sustrato y el producto (producto OD-sustrato OD)/sustrato OD).

Ensayo de Proteasa: Los ensayos de proteasa de HCV se llevaron a cabo a 30°C usando 200 µl de una mezcla de reacción en una placa microevaluadora de 96 receptáculos. Las condiciones del buffer de ensayo (25 mM MOPS pH 6.5, 300 mM de NaCI, 10% de glicerol, 0.05% de lauril maltosida, 5 µM de EDTA y 5 µM de DTT) se optimizaron mediante el heterodímero NS3/NS4A (D. L. Sali et al, ibid.)). Típicamente, mezclas de 150 µl de buffer, sustrato e inhibidor se colocan en receptáculos (concentración final de DMSO = 4% v/v) y se dejan bajo preincubación a 30°C durante aproximadamente 3 minutos. Luego se usan 50 µls de proteasa precalentada (12 nM, 30°C) en el buffer de ensayo, para iniciar la reacción (volumen final 200 µl). Las placas se monitorearon durante todo el período del ensayo (60 minutos) para determinar el cambio de absorbancia a la longitud de onda apropiada (340 nm para 3-Np y HMC, 370 nm para PAP, y 400 nm para 4-Np) usando un lector de placa microevaluadora Spectromax Plus equipado con un monocrómetro (pueden obtenerse resultados aceptables con lectores de placa que utilizan filtros de corte). La disociación proteolítica del enlace éster entre el Nva y el cromóforo se monitoreó a la longitud de onda apropiada contra un blanco sin enzima como control para la hidrólisis no enzimática. La evaluación de los parámetros cinéticos del sustrato se efectuó sobre un rango de concentración de sustrato de 30 veces (-6-200 µM). Las velocidades iniciales se determinaron usando regresión lineal y las constantes cinéticas se obtuvieron mediante ajuste de los datos a la ecuación de Michaelis-Menten usando análisis de regresión no lineal (Mac Curve Fit 1.1 , K. Raner). Los números de cambio (/Vcat) se calcularon asumiendo que la enzima es totalmente activa.

Evaluación de los Inhibidores e Inactivadores: Las constantes de inhibición (K¡) para los inhibidores competitivos Ac-D-(D-Gla)-L-l-(Cha)-C-OH (27), Ac-DTEDWA(Nva)-OH y Ac-DTEDWP(Nva)-OH se determinaron experimentalmente en concentraciones fijas de enzima y sustrato graficando v0/v¡ vs. concentración del inhibidor ([I] o) de acuerdo con la ecuación reordenada de Michaelis-Menten para la cinética de inhibición competitiva: v0/v¡ = 1 + [I] o /(K¡ (1 + [S] o /Km)), donde v0 es la velocidad inicial no inhibida, v¡ es la velocidad inicial en presencia de inhibidor en cualquier concentración de inhibidor determinada ([l]o) y [S]0 es la concentración de sustrato usada. Los datos resultantes se ajustaron usando regresión lineal y la pendiente resultante, 1/(K¡(1+[S] o/Km), se usó para calcular el valor de Kj. Valores de Ki* de algunos de los compuestos de la invención se muestran en el Cuadro 8: CUADRO 8 Mientras la presente invención ha sido descrita conjuntamente con las modalidades específicas establecidas anteriormente, muchas alternativas, modificaciones y otras variaciones de las mismas serán aparentes para los expertos en la materia. Todas dichas modalidades, modificaciones y variaciones entran dentro del espíritu y alcance de la presente invención.

Claims (35)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Un compuesto o enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros, diastereómeros y racematos de dicho compuesto, o una sal, solvato o éster de dicho compuesto farmacéuticamente aceptables, donde dicho compuesto tiene la estructura general que se muestra en la Fórmula estructural 1 : Fórmula en la cual: R1 es H, OR8, NR9R10, o CHR9R10, donde R8, R9 y R10 pueden ser iguales o diferentes, y cada uno está independientemente seleccionado del grupo que consiste en H, alquil-, alquenil-, alquinil-, aril-, heteroalquil-, heteroaril-, cicloalquil-, heterociclil-, arilalquil-, y heteroarilalquilo; A y M pueden ser iguales o diferentes, cada uno está independientemente seleccionado de R, OR, NHR, NRR', SR, SO2R, y halo; o A y M están conectados entre sí de manera que la porción: que se muestra anteriormente en la Fórmula I forma cualquiera de un cicloalquilo de tres, cuatro, seis, siete u ocho miembros, un heterociclilo de cuatro a ocho miembros, un arilo de seis a diez miembros, o un heteroarilo de cinco a diez miembros; E es C(H) o C(R); L es C(H), C(R), CH2C(R), o C(R)CH2; R, R', R2, y R3 pueden ser iguales o diferentes, y cada uno está independientemente seleccionado del grupo que consiste en H, alquil-, alquenil-, alquinil-, cicloalquil-, heteroalquil-, heterociclil-, aril-, heteroaril-, (cicloalquil)alquíl-, (heterociclil)alquil-, aril-alquil- y heteroaril-alquil-; o alternativamente R y R' en NRR' están conectados entre sí de manera que NRR' forma un heterociclilo de cuatro a ocho miembros; e Y está seleccionado entre las siguientes porciones: en las cuales G es NH u O; y R15, R16, R17 y R18 pueden ser iguales o diferentes, y cada uno está independientemente seleccionado del grupo que consiste en H, alquilo, heteroalquilo, alquenilo, heteroalquenilo, alquinilo, heteroalquinilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo y heteroarilalquilo, o alternativamente, R15 y R16 están conectados entre sí para formar una estructura cicloalquilo, heteroarilo o heterociclilo de cuatro a ocho miembros, y asimismo, independientemente R17 y R18 están conectados entre sí para formar un cícloalquilo o heterociclilo de tres a ocho miembros; donde cada uno de dichos alquilo, arilo, heteroarilo, cicloalquilo o heterociclilo pueden estar no sustituidos o pueden estar opcionalmente independientemente sustituidos con una o más porciones seleccionadas del grupo que consiste en: hidroxi, alcoxi, ariloxi, tio, alquiltio, ariltio, amíno, amido, alquilamino, arilamino, alquilsulfonílo, ariisulfonilo, sulfonamido, alquilo, arilo, heteroarilo, alquilsulfonamldo, arilsulfonamido, ceto, carboxi, carbalcoxi, carboxamido, alcoxicarbonilamino, alcoxicarboniloxi, alquilureido, arilureido, halo, ciano y nitro.

2.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R1 es NR9R10, y R9 es H, R10 es H, o R14 donde R14 es H, alquilo, arilo, heteroalquilo, heteroarilo, cicloalquilo, alquil-arilo, alquil-heteroarilo, aril-alquilo, alquenilo, alquinilo o heteroaril-alquilo.

3.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque R14 está seleccionado del grupo que consiste en: l-OH, - OMe, Y "OMe 1-3 ^ ' 1-3

4.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R2 está seleccionado del grupo que consiste en las porciones siguientes: OH

5.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R3 está seleccionado del grupo que consiste en: donde R31 es OH u O-alquilo; y R32 es H, C(O)CH3, C(O)OtBu o C(O)N(H)tBu.

6.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R3 está seleccionado del grupo que consiste en las porciones siguientes:

7.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque Y está seleccionado de las siguientes porciones: donde G es NH; y R15, R16, R17 y R18 son tal como se han definido en la reivindicación 1.

8.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado además porque Y está seleccionado del grupo que consiste en: donde Y31 está seleccionado del grupo que consiste en: Y?32Z está seleccionado del grupo que consiste en: e Yr¿ está seleccionado del grupo que consiste en H, CO2H, CO2Me, OMe, F, Cl, Br, NH2, N(H)S(O2)CH3, N(H)C(O)CH3, NO2, NMe2, S(O2)NH2, CF3, Me, OH, OCF3 y C(O)NH2 e Y33 está seleccionado del grupo que consiste en: A Me' X

9.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque la porción: está seleccionada entre las estructuras siguientes:

10.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado además porque la porción: está seleccionada entre las siguientes estructuras:

11.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado además porque la porción: está seleccionada entre las siguientes estructuras:

12.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R1 es NHR14, donde R14 está seleccionado del O e XOH, j¡— OMe, X- X "OH ^V •' 1-"~: R2 está seleccionado del grupo que consiste en las siguientes porciones: OH R3 está seleccionado del grupo que consiste en las siguientes porciones: Y está seleccionado del grupo que consiste en: donde Y ,31 está seleccionado del grupo que consiste en: Y32 está seleccionado del grupo que consiste en: e Y12 está seleccionado del grupo que consiste en H, CO2H, CO2Me, OMe, F, Cl, Br, NH2, N(H)S(O2)CH3, N(H)C(O)CH3, NO2, NMe2, S(O2)NH2, CF3, Me, OH, OCF3, y C(O)NH2 e Y33 está seleccionado del grupo que consiste en: y la porción: es:

13.- Una composición farmacéutica que comprende como ingrediente activo por lo menos un compuesto de conformidad con la reivindicación 1.

14.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 13, para su uso en el tratamiento de desórdenes asociados con HCV.

15.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada además porque comprende adicionalmente por lo menos un portador farmacéuticamente aceptable.

16.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 15, caracterizada además porque contiene adicionalmente por lo menos un agente antiviral.

17.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 16, caracterizada además porque contiene adicionalmente por lo menos un interferón.

18.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 17, caracterizada además porque dicho por lo menos un agente antiviral es ribavirina y dicho por lo menos un interferon es a-interferón o interferón pergilado.

19.- El uso de por lo menos un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de desórdenes asociados con HCV en un paciente.

20.- El uso que se reclama en la reivindicación 19, en donde el medicamento es administrable de forma oral o subcutánea.

21.- El uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , para la elaboración de un medicamento para tratar desórdenes asociados con el HCV.

22.- Un método para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de desórdenes asociados con el HCV, donde dicho método comprende poner en contacto físico íntimo por lo menos un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 y por lo menos un portador farmacéuticamente aceptable.

23 - Un compuesto que exhibe actividad inhibidora de la proteasa HCV, o enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros, diastereómeros y racematos de dicho compuesto, o una sal, solvato o éster de dicho compuesto farmacéuticamente aceptable, donde dicho compuesto está seleccionado de los compuestos que tienen las estructuras que se enumeran a continuación:

24.- Una composición farmacéutica para el tratamiento de desórdenes asociados con el HCV, donde dicha composición comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más compuestos en la reivindicación 23 y un portador farmacéuticamente aceptable.

25.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 24, caracterizada además porque contiene adicionalmente por lo menos un agente antiviral.

26. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 25, caracterizada además porque contiene adicionalmente por lo menos un interferón o un conjugado de PEG-interferón alfa.

27.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 26, caracterizada además porque dicho por lo menos un agente antiviral es ribavirina y dicho por lo menos un interferon es a-interferon o interferon pergilado.

28.- El uso de uno o más compuestos de conformidad con la reivindicación 23 en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de un desorden asociado con un virus de la hepatitis C en un paciente.

29.- Un método para modular la actividad de la proteasa del virus de la hepatitis C (HCV), que comprende poner en contacto la proteasa HCV con uno o más compuestos de la reivindicación 23.

30.- El uso de uno o más compuestos de conformidad con la reivindicación 23 en la elaboración de un medicamento para el tratamiento, prevención, o mejoramiento de uno o más síntomas de la hepatitis C en un paciente.

31.- El uso que se reclama en la reivindicación 30, en donde la proteasa del HCV es la proteasa NS3/NS4a.

32.- El uso que se reclama en reivindicación 31 , en donde el compuesto o compuestos inhiben la proteasa NS3/NS4a de HCV.

33.- Un método para modular el procesamiento del polipéptido del virus de la hepatitis C (HCV), que comprende poner en contacto una composición que contiene el polipéptido HCV bajo condiciones en las cuales dicho polipéptido es procesado con uno o más compuestos de conformidad con la reivindicación 23.

34.- El uso de por lo menos un compuesto o enantiómeros, estereoísómeros, rotámeros, tautómeros, diastereoméros y racematos de dicho compuesto, o una sal, solvato o éster de dicho compuesto farmacéuticamente aceptables en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de desórdenes asociados con el HCV en un paciente donde dicho compuesto es seleccionado entre los siguientes:

35.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque se encuentra en forma purificada.