MXPA06009809A

MXPA06009809A - Grupos de ciclobutendiona que contienen compuestos como inhibidores de serina proteasa del virus ns3 de hepatitis c

Info

Publication number: MXPA06009809A
Application number: MXPA/A/2006/009809A
Authority: MX
Inventors: F George Njoroge; Weidong Pan; Sumei Ruan; Stephane L Bogen
Original assignee: Stephane L Bogen; F George Njoroge; Weidong Pan; Sumei Ruan; Schering Corporation
Priority date: 2004-02-27
Filing date: 2006-08-28
Publication date: 2007-04-10

Abstract

La presente invención describe novedosos compuestos los cuales tienen actividad inhibitoria de la proteasa de VHC asícomo también métodos para preparar dichos compuestos;en otra modalidad, la invención describe composiciones farmacéuticas que comprenden ese tipo de compuestos asícomo también métodos para su utilización para tratar trastornos asociados con la proteasa de VHC.

Description

GRUPOS DE C1CLOBUTENDIONA QUE CONTIENEN COMPUESTOS COMO INHIBIDORES DE SERINA PROTEASA DEL VIRUS NS3 DE HEPATITIS C CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a novedosos inhibidores de proteasa del virus de hepatitis C ("VHC"), composiciones farmacéuticas que contienen uno o más de tales inhibidores, métodos para preparar ese tipo de inhibidores y métodos para utilizar ese tipo de inhibidores para tratar la hepatitis C y trastornos relacionados. Esta invención describe además novedosos compuestos macrocíclicos como inhibidores de la serina proteasa NS3/NS4a del VHC. Esta solicitud reivindica prioridad con respecto a la solicitud de patente provisoria estadounidense Número de Acta 60/548,823 presentada el 27 de febrero, 2004.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El virus de la hepatitis C (VHC) es un virus de ARN de estructura de cadena individual de sentido (+) que ha sido implicada como el principal agente causante en la hepatitis no A, no B (NANBH), particularmente en NANBH (BB-NANBH) asociada con la sangre (ver, la Publicación de Solicitud de Patente Internacional No. WO 89/04669 y Publicación de Solicitud de Patente Europea EP 381 216). NANBH debe distinguirse de otros tipos de enfermedad del hígado inducida por virus, tales como el virus de la hepatitis A (VHA), virus de hepatitis B (VHB), virus hepatitis delta (VHD), citomegalovirus (CMV) y virus Epstein-Barr (VEB), así como también de otras formas de enfermedad de hígado tales como alcoholismo y cirrosis biliar primaria. Recientemente, se ha identificado, clonado y expresado una proteasa de VHC para el procesamiento polipeptídico y replicación viral. (Ver, por ejemplo, Patente de los Estados Unidos No. 5,712,145). Esta poliproteína de aproximadamente 3000 aminoácidos contiene, desde el término amino al término carboxi, una proteína de nucleocápside (C), proteína de cubierta (E1 y E2) y varias proteínas no estructurales (NS1 , 2, 3, 4a, 5a y 5b). NS3 es una proteína de aproximadamente 68 da, codificada por aproximadamente 1893 nucleótidos del genoma de VHC, y tiene dos dominios distintos: (a) un dominio de serina proteasa que consiste en aproximadamente 200 de los aminoácidos de terminal N; y (b) un dominio de ATPasa ARN-dependiente en el término C de la proteína. La proteasa NS3 es considerada un miembro de la familia de quimotripsina debido a similitudes en la secuencia proteica, estructura tridimensional total y mecanismo de catálisis. Otras enzimas del tipo quimotripsina son elastasa, factor Xa, trombina, tripsina, plasmina, uroquinasa, tPA y PSA. La serina proteasa NS3 de VHC es responsable de la proteólisis del polipéptido (poliproteína) en las uniones NS3/NS4a, NS4a/NS4b, NS4b/NS5a y NS5a/NS5b y es así responsable de generar cuatro proteínas virales durante la replicación viral. Esto ha hecho de la serina proteasa NS3 de VHC un objetivo atractivo para la quimioterapia antiviral. Los compuestos de la invención pueden inhibir ese tipo de proteasa. También pueden modular el procesamiento del polipéptido del virus de la hepatitis C (VHC). Se ha determinado que la proteína NS4a, un polipéptido de aproximadamente 6 kda, es un co-factor para la actividad de serina proteasa de NS3. La autodisociacíón de la unión NS3/NS4a por la serina proteasa NS3/NS4a ocurre intramolecularmente (es decir, cis) mientras que los otros sitios de disociación son procesados ¡ntermolecularmente (es decir, trans). El análisis de los sitios de disociación naturales para la proteasa de VHC reveló la presencia de cisteína en P1 y serina en P1' y que estos residuos son estrictamente conservados en las uniones NS4a/NS4b, NS4b/NS5a y NS5a/NS5b. La unión NS3/NS4a contiene una treonina en P1 y una serina en P1'. Se presume que la sustitución Cys?Thr en NS3/NS4a es responsable del requerimiento de procesamiento de cis más que trans en esta unión. Ver, por ej„ Pizzi et al. (1994) Proc. Nati. Acad. Sci. (USA) £1:888-892, Failla et al. (1996) Foldinq & Desiqn 1 :35-42. El sitio de disociación NS3/NS4a es también más tolerante de la mutagénesis que los otros sitios. Ver, por ejemplo, Kollykhalov et al. (1994) J. Virol. 68:7525-7533. También se ha descubierto que los residuos ácidos en la región corriente arriba del sitio de disociación son necesarios para la disociación eficaz. Ver, por ejemplo, Komoda et al. (1994) J. Virol. 68:7351-7357.

Los inhibidores de la proteasa de VHC que han sido reportados incluyen antioxidantes (ver, la Publicación de la Solicitud de Patente Internacional No. WO 98/14181), ciertos péptidos y análogos peptídicos (ver, la Publicación de Solicitud de Patente Internacional No. WO 98/17679, Landro et al. (1997) Biochem. 36:9340-9348, Ingallinella et al. (1998) Biochem. 37:8906-8914, Llinás-Brunet et al. (1998) Bioorq. Med. Chem. Lett. 8:1713-1718), inhibidores basados en el polipéptido de 70 aminoácidos eglin c (Martin et al. (1998) Biochem. 37:11459-11468, inhibidores de afinidad seleccionados de inhibidor de tripsina secretora pancreática humana (hPSTI-C3) y repertorios de minicuerpos (MBip) (Dimasi et al. (1997) J. Virol. 71:7461-7469), CVHE2 (un fragmento de anticuerpo de dominio variable "camellizado") (Martin et al.(1997) Protein Enq. 10:607-614), y al-antiquimotripsína (ACT) (Elzouki et al.) (1997) J. Hepat. 27:42-28). Una ribozima diseñada para destruir selectivamente ARN del virus de la hepatitis C ha sido descrita recientemente (ver, BioWorld Today 9(217): 4 (10 de Noviembre, 1998)). También se hace referencia a las Publicaciones PCT, No. WO 98/17679, publicadas el 30 de abril, 1998 (Vértex Pharmaceuticals Incorporated); WO 98/22496, publicada el 28 de mayo, 1998 (F. Hoffmann-La Roche AG); y WO 99/07734, publicada el 18 de febrero, 1999 (Boehringer Ingelheim Canadá Ltd.). El VHC ha sido involucrado en la cirrosis hepática y en la inducción de carcinoma hepatocelular. El pronóstico para los pacientes que sufren de la infección por VHC es actualmente pobre. La infección de VHC es más difícil de tratar que otras formas de hepatitis debido a la falta de inmunidad o remisión asociada con la infección del VHC. Los datos actuales indican una tasa de supervivencia ¡nferior al 50% en cuatro años posteriores al diagnóstico de cirrosis. Los pacientes diagnosticados con carcinoma hepatocelular amputable localizado tienen una tasa de supervivencia de cinco años de 10-30%, mientras que aquellos con carcinoma hepatocelular no resecable localizado tienen una tasa de supervivencia de cinco años inferior al 1%. Se hace referencia a WO 00/59929 (Patente de los Estados Unidos 6,608,027, Cesionario: Boehringer Ingelheim (Canadá) Ltd.; Publicada el 12 de Octubre, 2000) la cual describe derivados peptídicos de la fórmula: Se hace referencia a A. Marchetti et al, Synlett, St, 1000-1002 (1999) que describe la síntesis de análogos bicíclicos de un inhibidor de proteasa NS3 de VHC. Un compuesto descrito allí tiene la fórmula: También se hace referencia a W. Han et al, Bioorganic & Medicinal Chem. Lett, (2000) 10, 711-713, la cual describe la preparación de ciertas a-cetoamidas, a-cetoésteres y -dicetonas que contienen funcionalidades alílicas y etílicas. También se hace referencia a WO 00/09558 (Cesionario: Boehringer Ingelheim Limited; Publicado el 24 de febrero, 2000) la cual describe derivados peptídicos de la fórmula: en donde los diversos elementos son definidos allí. Un compuesto ilustrativo de esa serie es: También se hace referencia a WO 00/09543 (Cesionario: Boehringer Ingelheím Limited; Publicada el 24 de febrero, 2000) la cual describe derivados peptídicos de la fórmula: en donde los diversos elementos son definidos en dicho documento. Un compuesto ilustrativo de esa serie es: También se hace referencia a la Patente de los Estados Unidos 6,608,027 (Boehringer Ingelheim, Canadá) la cual describe inhibidores de la proteasa NS3 del tipo: en donde las diversas porciones son definidas en la misma. Las terapias actuales para la hepatitis C incluyen interferón-a (INF„) y terapia de combinación con ribavirina e interferón. Ver, por ejemplo., Beremguer et al. (1998) Proc. Assoc. Am. Phvsicians 110(2):98-112. Estas terapias sufren de un bajo índice de respuesta sostenida y frecuentes efectos colaterales. Ver por ejemplo, Hoofnagle et al. (1997) N. Engl. J. Med. 336:347. Actualmente, no se encuentra disponible ninguna vacuna para la infección por VHC. Se hace referencia adicionalmente a WO 01/74768 (Cesionario: Vértex Pharmaceuticals Inc) publicada el 11 de Octubre, 2001 , la cual describe ciertos compuestos de la siguiente fórmula general (R es definida en la misma) como inhibidores de la serina proteasa NS3 del virus de Hepatitis C: Un compuesto específico descrito en WO 01/74768 antes mencionada tiene la siguiente fórmula: Las Publicaciones PCT WO 01/77113; WO 01/081325; WO 02/08198; WO 02/08256; WO 02/08187; WO 02/08244; WO 02/48172; WO 02/08251; y solicitud de Patente de los Estados Unidos pendiente, Acta No. 10/052,386, presentada el 18 de enero, 2002, describen diversos tipos de péptidos y/u otros compuestos como inhibidores de serina proteasa NS-3 del virus de la hepatitis C. Las descripciones de aquellas solicitudes se incorporan en la presente memoria descriptiva por referencia a las mismas. Existe la necesidad de nuevos tratamientos y terapias para la infección del VHC. Existe la necesidad de compuestos útiles en el tratamiento o prevención o mejora de uno o más síntomas de la hepatitis C. Existe la necesidad de métodos para el tratamiento o prevención o mejora de uno o más síntomas de la hepatitis C. Existe la necesidad de métodos para modular la actividad de serina proteasas, particularmente la serina proteasa NS3/NS4a del VHC, utilizando los compuestos provistos en la presente memoria descriptiva.

Existe la necesidad de métodos para modular el procesamiento del polipéptido del VHC utilizando los compuestos provistos en la presente memoria descriptiva.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN En sus muchas modalidades, la presente ¡nvención proporciona una clase novedosa de inhibidores de la proteasa del VHC, composiciones farmacéuticas que contienen uno o más de los compuestos, métodos para preparar formulaciones farmacéuticas que comprenden uno o más de esos compuestos, y métodos de tratamiento o prevención del VHC o mejora de uno o más de los síntomas de la hepatitis C utilizando uno o más de ese tipo de compuestos o una o más de ese tipo de formulaciones. También se proporcionan métodos para modular la interacción de un polipéptido de VHC con proteasa de VHC. Entre los compuestos proporcionados en la presente memoria descriptiva, los compuestos que inhiben la actividad de la serina proteasa NS3/NS4a del VHC son preferidos. La presente invención describe compuestos, o enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros, diasteteómeros o racematos de dichos compuestos, o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o éster de dicho compuesto, dichos compuestos que tienen la estructura general mostrada en la Fórmula estructural 1 : Fórmula I en donde: R1 es H, OR8, NR9R10, o CHR9R10, en donde R8, R9 y R10 pueden ser iguales o diferentes, siendo cada uno seleccionado independientemente del grupo formado por H, alquil-, alquenil-, alquinil-, aril-, heteroalquil-, heteroaril-, cicloalquil-, heterociclil-, arilalquil-, y heteroarilalquilo; A y M pueden ser ¡guales o diferentes, siendo cada uno seleccionado independientemente entre R, OR, NHR, NRR', SR, SO2R, y halo; o A y M están conectados entre si de modo que la porción: M A \ / que se muestra más arriba en la Fórmula I forma ya sea un cicloalquilo de tres, cuatro, seis, siete u ocho miembros, un heterociclilo de cuatro a ocho miembros, un arilo de seis a diez miembros o un heteroarilo de cinco a diez miembros; E es C(H) o C(R); L es C(H), C(R), CH2C(R), o C(R)CH2; R, R', R2, y R3 pueden ser iguales o diferentes, siendo cada uno seleccionado independientemente del grupo formado por H, alquil-, alquenil-, alquinil-, cicloalquil-, heteroalquil-, heterociclil-, aril-, heteroaril-, (cicloalquil)alquil-, (heterociclil)alquil-, aril-alquil-, y heteroaril-alquíl-; o alternativamente R y R' en NRR' están conectados entre si de modo que NRR' forma un heterociclilo de cuatro a ocho miembros; e Y se selecciona de las siguientes porciones: en donde Y30 se selecciona de: en donde u es un número 0-1 ; X se seleccionade O, NR15, NC(O)R16, S, S(O) y S(O2); en donde G es NH o O, y R15 R16 R17 _ R18 R19j -^ ^ y -^ pueden ser ¡gua|es 0 diferentes, siendo cada uno seleccionado independientemente del grupo formado por H, alquilo, heteroalquilo, alquenilo, heteroalquenilo, alquinilo, heteroalquinilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo y heteroarilalquilo, o alternativamente R17 y R18 pueden estar conectados entre sí para formar un cicloalquilo o heterociclilo de tres a ocho miembros; en cada uno de dicho alquilo, arilo, heteroarilo, cicloalquilo o heterociclilo pueden estar no sustituidos u opcionalmente independientemente sustituidos con una o más porciones seleccionadas del grupo formado por: hidroxi, alcoxi, ariloxi, tio, alquiltio, ariltio, amino, amido, alquilamino, arilamino, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, sulfonamido, alquilsulfonamido, arilsulfonamido, ceto, carboxi, carbalcoxi, carboxamido, alcoxicarbonilamino, alcoxicarboniloxi, alquilureido, arilureido, halo, ciano, y nitro. La indicación antes mencionada "A y M están conectados entre sí de modo que la porción: M A \ / que se muestra anteriormente en la Fórmula I forma ya sea un cicloalquilo de tres, cuatro, seis, siete u ocho miembros, un heterociclilo de cuatro a ocho miembros, un arilo de seis a diez miembros, o un heteroarilo de cinco a diez miembros" puede ser ¡lustrada de manera no limitativa de la siguiente manera. Por lo tanto, por ejemplo, en el caso en que A y M están conectados de modo que la porción: M A \ / que se muestra anteriormente en la Fórmula I forma un cicloalquilo (ciciohexilo) de seis miembros, La Fórmula I puede ser ilustrada como: Un experto en la técnica apreciará que puede arribarse a descripciones similares para la Fórmula I cuando A y M que se muestran más arriba en la porción: M A \ L E / > (M-L-E-A tomados en forma conjunta) están conectados para formar un cicloalquilo de tres, cuatro, siete u ocho miembros, un heterociclilo de cuatro a ocho miembros, un arilo de seis a diez miembros, o un heteroarilo de cinco a diez miembros. En las definiciones antes señaladas de R, R\ R2, y R3 preferido alquilo está hecho de uno a diez átomos de carbono, alquenilo o alquinilo preferido está hecho de dos a diez átomos de carbono, cicloalquilo preferido está hecho de tres a ocho átomos de carbono, u heteroalquilo, heteroarilo o heterocicloalquilo (heterociclilo) preferido tiene uno a seis átomos de oxígeno, nitrógeno, azufre o fósforo. Los compuestos representados por la Fórmula I, por si mismos o en combinación con uno o más agentes adecuados diferentes descritos en la presente memoria descriptiva, pueden ser útiles para el tratamiento de enfermedades tales como, por ejemplo, VHC, HIV, SIDA (Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida), y trastornos relacionados, así como también para modular la actividad de la proteasa del virus de la hepatitis C (VHC), evitando el VHC, o mejorando uno o más síntomas de la hepatitis C. Tal modulación, tratamiento, prevención o mejora puede realizarse con los compuestos de la invención así como también con composiciones o formulaciones farmacéuticas que comprenden tales compuestos. Sin estar limitados por la teoría, se cree que la proteasa del VHC puede ser la proteasa NS3 o NS4a. Los compuestos de la invención pueden inhibir ese tipo de proteasa. También pueden modular el procesamiento del polipéptido del virus de la hepatitis C (VHC).

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN En una modalidad, la presente invención describe compuestos los cuales son representados mediante la Fórmula estructural 1 o una sal, solvato o éster de los mismos farmacéuticamente aceptables, en donde las diversas porciones son según lo definido anteriormente. En otra modalidad, R1 es NR9R10, y R9 es H, R10 es H, o R 4 en donde R14 es H, alquilo, arilo, heteroalquilo, heteroarilo, cicloalquilo, alquilarilo, alquil-heteroarilo, aril-alquilo, alquenilo, alquinilo o heteroaril-alquilo. En otra modalidad, R14 se selecciona del grupo formado por: En otra modalidad, R2 se selecciona del grupo formado por las siguientes porciones: En otra modalidad, R3 se selecciona del grupo formado por: en donde R31 es OH o O-alquilo; y R32 es H, C(O)CH3, C(O)OtBu o C(O)N(H)tBu. En una modalidad adicional, R3 se selecciona del grupo formado iguientes porciones: CH, XH3 En aún otra modalidad, G es NH.

En otra modalidad, Y se selecciona del grupo formado por: en donde Y32 se selecciona del grupo que consiste de: Y30 se selecciona de: en donde u es un número de 0-1 ; y R19 se selecciona de H, alquilo, fenilo o bencilo. En aún otra modalidad adicional, O y T2 pueden ser iguales o diferentes, cada uno seleccionada independientemente del grupo que consiste de: o la porción: y T3 se selecciona de: <*r A «AT -AJA; En otra modalidad, la porción: se selecciona de las siguientes estructuras: En una modalidad adicional, la porción: se selecciona de las siguientes estructuras: En una modalidad adicional, la porción: se selecciona de las siguientes estructuras: En una modalidad más adicional, R1 es NHR14, donde R14 se selecciona del grupo formado por: R2 se selecciona del grupo formado por las siguientes porciones: R3 se selecciona del grupo formado por las siguientes porciones: Y /30 se selecciona del grupo formado por: y también en donde se selecciona del grupo que consiste de: y también en donde Y /-30 se selecciona del grupo que consiste de: Y se selecciona del grupo que consiste de: e Y12 se selecciona del grupo que consiste de H, C02H, C02Me, OMe, F, Cl, Br, NH2, N(H)S(O2)CH3, N(H)C(O)CH3, N02, NMe2, S(O2)NH2, CF3, Me, OH, OCF3, y C(O)NH2; Y33 se selecciona del grupo que consiste de: y T3 se selecciona de: - y la porciones: es: Aún otra modalidad de la invención describe compuestos que se muestran en el Cuadro 1 y después en el Cuadro 2. También se muestra en el Cuadro 2 las actividades biológicas de varios compuestos de la invención (como valores Ki*) CUADRO 1 Como se utiliza en lo que antecede, y a lo largo de esta descripción, los siguientes términos, a menos que se indique lo contrario, se entenderán como que tienen los siguientes significados: . "Paciente" incluye tanto ser humano como animales. "Mamífero" significa seres humanos y otros animales mamíferos. "Alquilo" significa un grupo hidrocarburo alifático el cual puede ser recto o ramificado y que comprende aproximadament 1 a aproximadamente 20 átomos de carbono en la cadena. Los grupos alquilo preferidos contienen aproximadamente 1 a aproximadamente 12 átomos de carbono en la cadena. Los grupos alquilo más preferidos contienen de aproximadamente 1 a aproximadamente 6 átomos de carbono en la cadena. Ramificado significa que uno o más grupos alquilo inferior tales como metilo, etilo o propilo, están unidos a una cadena alquilica lineal. "Alquilo inferior" significa un grupo que tiene aproximadamente 1 a aproximadamente 6 átomos de carbono en la cadena la cual puede ser recta o ramificada. Ei término "alquilo sustituido" significa que el grupo alquilo puede estar sustituido con uno o más sustituyentes los cuales pueden ser ¡guales o diferentes, siendo cada sustituyente seleccionado independientemente del grupo formado por halo, alquilo, arilo, cicloalquilo, ciano, hidroxi, alcoxi, alquiltio, amino, -NH(alquilo), -NH(cicloalquilo), -N(alquilo)2, -N(alquilo)2, carboxi y -C(O)O-alquilo. Ejemplos no limitativos de grupos alquilo adecuados incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo y t-butilo. "Alquenilo" significa un grupo hidrocarburo alifático que contiene por lo menos un enlace doble carbono- carbono y el cual puede ser recto o ramificado y que comprende aproximadamente 2 a aproximadamente 15 átomos de carbono en la cadena. Los grupos alquenilo preferidos tienen aproximadamente 2 a aproximadamente 12 átomos de carbono en la cadena; y más preferentemente aproximadamente 2 a aproximadamente 6 átomos de carbono en la cadena. Ramificado significa que uno o más grupos alquilo inferior tales como metilo, etilo o propilo, están unidos a una cadena alquenilo lineal. "Alquenilo inferior" significa aproximadamente 2 a aproximadamente 6 átomos de carbono en la cadena la cual puede ser recta o ramificada. El término "alquenilo sustituido" significa que el grupo alquenilo puede estar sustituido con uno o más sustituyentes los cuales pueden ser iguales o diferentes, estando cada sustituyente seleccionado independientemente del grupo formado por halo, alquilo, arilo, cicloalquilo, ciano, alcoxi y -S(alquilo). Los ejemplos no limitativos de grupos alquenilo adecuados ¡ncluyen etenilo, propenilo, n-butenilo, 3-metilbut-2-enilo, n-pentenilo, octenilo y decenilo. "Alquinilo" significa un grupo hidrocarburo alifático que contiene por lo menos un triple enlace carbono- carbono y el cual puede ser recto o ramificado y que comprende aproximadamente 2 a aproximadamente 15 átomos de carbono en la cadena. Los grupos alquinilo preferidos tienen aproximadamente 2 a aproximadamente 12 átomos de carbono en la cadena; y más preferentemente aproximadamente 2 a aproximadamente 4 átomos de carbono en la cadena. Ramificado significa que uno o más grupos alquilo inferior tales como metilo, etilo o propilo, están unidos a una cadena alquinilo lineal. "Alquinilo inferior" significa aproximadamente 2 a aproximadamente 6 átomos de carbono en la cadena la cual puede ser recta o ramificada. Los ejemplos no limitativos de grupos alquinilo adecuados incluyen etinilo, propinilo, 2-butinilo y 3-metilbutinilo. El término "alquinilo sustituido" significa que el grupo alquinilo puede ser sustituido con uno o más sustituyentes los cuales pueden ser ¡guales o diferentes, cada sustituyente es seleccionado independientemente del grupo formado por alquilo, arilo y cicloalquilo.

"Arilo" significa un sistema de anillos monocíclico o multicíclico aromático que comprende aproximadamente 6 a aproximadamente 14 átomos de carbono, preferentemente aproximadamente 6 a aproximadamente 10 átomos de carbono. El grupo arilo puede estar opcionalmente sustituido con uno o más "sustituyentes en el sistema de anillos" los cuales pueden ser iguales o diferentes, y son según lo definido en la presente. Los ejemplos no limitativos de grupos arilo adecuados incluyen fenilo y naftilo. "Heteroarilo" significa un sistema de anillos monocíclico o multicíclico aromático que comprende aproximadamente 5 a aproximadamente 14 átomos en el anillo, preferentemente aproximadamente 5 a aproximadamente 10 átomos en el anillo, en los cuales uno o más de los átomos en el anillo es un elemento diferente a carbono, por ejemplo, nitrógeno, oxígeno o azufre, solo o en combinación. Los heteroarilos preferidos contienen aproximadamente 5 a aproximadamente 6 átomos en el anillo. El "heteroarllo" puede ser opcionalmente sustituido con uno o más "sustituyentes en el sistema de anillos" los cuales pueden ser iguales o diferentes, y son según lo definido en la presente memoria descriptiva. El prefijo aza, oxa o tia delante de la raíz heteroarilo significa que por lo menos un átomo de nitrógeno, oxígeno o azufre respectivamente, está presente como un átomo en el anillo. Un átomo de nitrógeno de un heteroarilo puede ser opcionalmente oxidado al correspondiente N-óxido. Los ejemplos no limitativos de los heteroarilos adecuados incluyen piridilo, pirazinilo, furanilo, tienilo, pirimidinilo, piridona (incluyendo piridonas N-sustituidas), isoxazolilo, isotiazolilo, oxazolilo, tiazolilo, pirazolilo, fürazanilo, pirrolilo, pirazolilo, triazolilo, 1.2,4-tiadiazolilo, pirazinilo, piridazínilo, quinoxalinilo, ftalazinilo, oxindolilo, ¡midazo[1.2-a]piridinilo, imidazo[2.1-b]tiazolilo, benzofurazanilo, indolilo, azaindolilo, benzimidazolilo, benzotienilo, quinolinilo, imidazolilo, tienopiridilo, quinazolinilo, tienopirimidilo, pirrolopiridilo, imidazopiridilo, isoquinolinilo, benzoazaindolilo, 1.2,4-triazinilo, benzotiazolilo y similares. El término "heteroarilo" también se refiere a porciones heteroarilo parcialmente saturadas tales como, por ejemplo, tetrahidroisoquinolilo, tetrahidroquinolilo y similares. "Aralquilo" o "arilalquilo" significa un grupo aril-alquilo en el cual el arilo y el alquilo son según lo descrito previamente. Los aralquilos preferidos comprenden un grupo alquilo inferior. Los ejemplos no limitativos de grupos aralquilo adecuados incluyen bencilo, 2-fenetilo y naftalenilmetilo. El enlace a la porción madre es a través del alquilo. "Alquilarilo" significa un grupo alquil-aril- en el cual el alquilo y el arilo son como se describió previamente. Los alquilarilos preferidos comprenden un grupo alquilo inferior. El ejemplo no limitativo de un grupo alquilarilo adecuado es tolilo. El enlace a la porción madre es a través del arilo. "Cicloalquilo" significa un sistema de anillos mono- o multicíclico no aromático que comprende aproximadamente 3 a aproximadamente 10 átomos de carbono, preferentemente aproximadamente 5 a aproximadamente 10 átomos de carbono. Los anillos cicloalquilo preferidos contienen entre aproximadamente 5 y aproximadamente 7 átomos en el anillo. El cicloalquilo puede ser opcionalmente sustituido con uno o más "sustituyentes en el sistema de anillos" los cuales pueden ser iguales o diferentes, y son según lo definido anteriormente. Los ejemplos no limitativos de cicloalquilos monocíclicos adecuados incluyen ciclopropilo, ciclopentilo, ciciohexilo, cicioheptilo y similares. Los ejemplos no limitativos de cicloalquilos multicíclicos adecuados incluyen 1-decalinilo, norbornilo, adamantilo y similares, así como también especies parcialmente saturadas tales como, por ejemplo, indanilo, tetrahidronaftilo y similares. "Halógeno" o "halo" significa flúor, cloro, bromo o yodo. Se prefiere el flúor, cloro y bromo. "Sustituyente en el sistema de anillos" significa un sustituyente adherido a un sistema de anillos aromático o no aromático el cual, por ejemplo, reemplaza un hidrógeno disponible en el sistema de anillos. Los sustituyentes en el sistema de anillos pueden ser iguales o diferentes, cada uno se selecciona independientemente del grupo formado por alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, heteroarilo, aralquilo, alquilarilo, heteroaralquilo, heteroarilalquenilo, heteroarilalquinilo, alquilheteroarilo, hidroxi, hidroxialquilo, alcoxi, ariloxi, aralcoxi, acilo, aroílo, halo, nitro, ciano, carboxi, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, aralcoxicarbonilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, alquiltio, ariltio, heteroariltio, aralquiltio, heteroaralquiltio, cicloalquilo, heterociclilo, -C(=N-CN)-NH2, -C(=NH)-NH2, -C(=NH)-NH(alquilo), Y1Y2N-, Y?Y2N-alquil-, ?A2^C(0)-, YOzNSOs- y -SO2NYO2, en donde Y^ e Y2 pueden ser ¡guales o diferentes y se seleccionan independientemente del grupo formado por hidrógeno, alquilo, arilo, cicloalquilo, y aralquilo. "Sustituyente en el sistema de anillos" también puede significar una porción única la cual reemplaza simultáneamente dos hidrógenos disponibles en dos átomos de carbono adyacentes (un H en cada carbono) en un sistema de anillos. Ejemplos de ese tipo de porción son metilendioxi, etilendioxi, -C(CH3)2-y similares los cuales forman porciones tales como, por ejemplo: "Heterociclilo" significa un sistema de anillos monocíclico o multicíclico saturado no aromático que comprende aproximadamente 3 a aproximadamente 10 átomos en el anillo, preferentemente aproximadamente 5 a aproximadamente 10 átomos en el anillo, en el cual uno o más de los átomos en el sistema de anillos es un elemento distinto a carbono, por ejemplo nitrógeno, oxígeno o azufre, solo o en combinación. No hay átomos de oxígeno y/o azufre adyacentes presentes en el sistema de anillos. Los heterociclilos preferidos contienen aproximadamente 5 a aproximadamente 6 átomos en el anillo. El prefijo aza, oxa o tia antes del nombre de raíz heterociclilo significa que al menos un átomo de nitrógeno, oxígeno o azufre respectivamente está presente como un átomo en el anillo. Cualquier -NH en un anillo heterociclilo puede existir protegido tal como, por ejemplo, como un grupo -N(Boc), -N(CBz), -N(Tos) y similares; tales protecciones son también consideradas parte de esta ¡nvención. El heterociclilo puede estar opcionalmente sustituido por uno o más "sustituyentes en el sistema de anillos" los cuales pueden ser iguales o diferentes, y son según lo definido en la presente memoria descriptiva. El átomo de nitrógeno o azufre del heterociclilo puede ser opcionalmente oxidado al correspondiente N-óxido, S-óxido o S,S-dióxido. Los ejemplos no limitativos de anillos heterociclilo monocíclicos adecuados incluyen piperidilo, pirrolidinilo, piperazinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, tiazolidinilo, 1.4-dioxanilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotiofenilo, lactama, lactona, y similares. Debería señalarse que en sistemas de anillos que contienen heteroátomos de esta invención, no hay grupos hidroxilo en átomos de carbono adyacentes a un N, O o S, así como también no hay grupos N o S en carbono adyacente a otro heteroátomo. Por lo tanto, por ejemplo, en el anillo: no hay -OH adherido directamente a carbonos marcados 2 y 5. También debería señalarse que formas tautoméricas tales como, por ejemplo, las porciones: son consideradas equivalentes en ciertas modalidades de esta invención.

"Alquinilalquilo" significa un grupo alquinil-alquil- en el cual el alquinilo y el alquilo son según lo descrito previamente. Los alquinilalquilos preferidos contienen un grupo alquinilo inferior y un alquilo ¡nferior. El enlace a la porción madre es a través del alquilo. Los ejemplos no limitativos de grupos alquinilalquilo adecuados incluyen propargilmetilo. "Heteroaralquilo" significa un grupo heteroaril-alquil- en el cual el heteroarilo y el alquilo son según lo descrito previamente. Los heteroaralquilos preferidos contienen un grupo alquilo inferior. Los ejemplos no limitativos de grupos aralquilo adecuados ¡ncluyen piridilmetilo, y quinolin-3-ilmetilo. El enlace a la porción madre es a través del alquilo. "Hidroxialquilo" significa un grupo HO-alquil- en el cual alquilo es según lo definido previamente. Los hidroxialquilos preferidos contienen alquilo inferior. Los ejemplos no limitativos de grupos hidroxialquilo adecuados incluyen hidroximetilo y 2-hidroxietilo. "Acilo" significa un grupo H-C(O)-, alquil-C(O)- o cicloalquil-C(O)- , en el cual los diversos grupos son según lo descrito previamente. El enlace a la porción madre es a través del carbonilo. Los acilos preferidos contienen un alquilo inferior. Los ejemplos no limitativos de grupos acilo adecuados incluyen formilo, acetilo y propanoilo. "Aroílo" significa un grupo aril-C(O)- en el cual el grupo arilo es según lo descrito previamente. El enlace a la porción madre es a través del carbonilo. Los ejemplos no limitativos de grupos adecuados incluyen benzoilo y 1- naftoilo. "Alcoxi" significa un grupo alquil-O- en el cual el grupo alquilo es según lo descrito previamente. Los ejemplos no limitativos de grupos alcoxi adecuados incluyen metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi y n-butoxi. El enlace a la porción madre es a través del oxígeno de éter. "Ariloxi" significa un grupo aril-O- en el cual el grupo arilo es según lo descrito previamente. Los ejemplos no limitativos de grupos ariloxi adecuados incluyen fenoxi y naftoxi. El enlace a la porción madre es a través del oxígeno de éter. "Aralquiloxi" significa un grupo aralquil-O- en el cual el grupo aralquilo es según lo descrito previamente. Los ejemplos no limitativos de grupos aralquiloxi adecuados incluyen benciloxi y 1- o 2-naftalenmetoxi. El enlace a la porción madre es a través del oxigeno de éter. "Alquiltio" significa un grupo alquil-S- en el cual el grupo alquilo es según lo descrito previamente. Los ejemplos no limitativos de grupos alquiltio adecuados incluyen metiltio y etiltio. El enlace a la porción madre es a través del azufre. "Ariltio" significa un grupo aril-S- en el cual el grupo arilo es según lo descrito previamente. Los ejemplos no limitativos de grupos ariltio adecuados incluyen feniltio y naftiltio. El enlace a la porción madre es a través del azufre.

"Aralquiltio" significa un grupo aralquil-S- en el cual el grupo aralquilo es según lo descrito previamente. Un ejemplo no limitativo de un grupo aralquiltio adecuado es benciltio. El enlace a la porción madre es a través del azufre. "Alcoxicarbonilo" significa un grupo alquil-O-CO-. Los ejemplos no limitativos de grupos alcoxicarbonilo adecuados incluyen metoxicarbonilo y etoxicarbonilo. El enlace a la porción madre es a través del carbonilo. "Ariloxicarbonilo" significa un grupo aril-O-C(O)-. Los ejemplos no limitativos de grupos ariloxicarbonilo adecuados incluyen fenoxicarbonilo y naftoxicarbonilo. El enlace a la porción madre es a través del carbonilo. "Aralcoxicarbonilo" significa un grupo aralquil-O-C(O)-. Un ejemplo no limitativo de un grupo aralcoxicarbonilo adecuado es benciloxicarbonilo. El enlace a la porción madre es a través del carbonilo. "Alquilsulfonilo" significa un grupo alquil-S(O2)-. Los grupos preferidos son aquellos en los cuales el grupo alquilo es alquilo inferior. El enlace a la porción madre es a través del sulfonilo. "Arilsulfonilo" significa un grupo aril-S(O2)-. El enlace a la porción madre es a través del sulfonilo. El término "sustituido" significa que uno o más hidrógenos en el átomo designado es reemplazado con una selección del grupo indicado, siempre que la valencia normal del átomo designado bajo las circunstancias existentes no sea excedida, y que la sustitución de como resultado un compuesto estable. Las combinaciones de sustituyentes y/o variables son permisibles solamente si tales combinaciones dan como resultado compuestos estables. Por "compuesto estable" o "estructura estable" se quiere decir un compuesto que es suficientemente fuerte como para sobrevivir al aislamiento hasta un grado útil de pureza de una mezcla de reacción, y formulación en un agente terapéutico eficaz. El término "uno o más" o "al menos uno", cuando indica la cantidad de sustituyentes, compuestos, agentes de combinación y similares, se refiere a por lo menos uno, y hasta el número máximo de sustituyentes, compuestos, agentes de combinación y similares, químicamente y físicamente permisibles, que están presentes o que son agregados, dependiendo del contexto. Tales técnicas y conocimiento son bien conocidos por el experto en la técnica. El término "opcionalmente sustituido" significa sustitución opcional con los grupos, radicales o porciones especificados. El término "aislado" o "en forma aislada" para un compuesto se refieren al estado físico de dicho compuesto después de ser aislado de un procedimiento sintético o fuente natural o su combinación. El término "purificado" o "en forma purificada" para un compuesto se refiere al estado físico de dicho compuesto después de ser obtenido de un procedimiento o procedimientos de purificación descritos en la presente memoria descriptiva o bien conocidos por el experto en la técnica, en suficiente pureza para ser caracterizable por técnicas analíticas estándares descritas en la presente memoria descriptiva o bien conocidas por el experto en la técnica.

También debería señalarse que cualquier carbono o heteroátomo con valencias no satisfactorias en el texto, esquemas, ejemplos y Cuadros de la presente invención se presume que tiene el o los átomos de hidrógeno para satisfacer las valencias. Cuando un grupo funcional en un compuesto es descrito como "protegido", esto quiere decir que el grupo está en forma modificada para evitar reacciones colaterales no deseadas en el sitio protegido cuando el ¡ compuesto es sometido a una reacción. Los grupos protectores adecuados serán reconocidos por aquellos expertos en la técnica así como también por referencia a libros de texto estándares tales como, por ejemplo, T. W. Greene et al, Protective Groups in organic Synthesis (1991 ), Wiley, Nueva York. Cuando cualquier variable (por ejemplo, arilo, heterociclo, R2, etc.) aparece más de una vez en cualquier constituyente o en la Fórmula 1 , su definición en cada aparición es independiente de su definición en cada otra aparición. Como se utiliza en la presente memoria descriptiva, el término "composición" tiene el propósito de abarcar un producto que comprende los ingredientes especificados en las cantidades especificadas, así como también cualquier producto el cual es el resultado, directa o indirectamente, de la combinación de los ingredientes especificados en las cantidades especificadas. Los profármacos y solvatos de los compuestos de la invención son también contemplados en la presente memoria descriptiva. El término "profármaco", como se emplea en la presente memoria descriptiva, denota un compuesto que es un precursor de un fármaco el cual, luego de la administración a un sujeto, sufre la conversión química mediante procedimientos metabólicos o químicos para dar un compuesto de Fórmula 1 o su sal y/o solvato. Una descripción de profármacos es provista en T. Higuchi y V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems (1987) 14 de la Serie de Simposios A. C. S. (A.C.S. Symposium Series), y en Bioreversible Carriers in Drug Design, (1987) Edward B. Roche, ed., American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, ambos son incorporados en la presente memoria descriptiva como referencia. "Solvato" significa una asociación física de un compuesto de esta ¡nvención con una o más moléculas solventes. Esta asociación física involucra grados variables de unión iónica y covalente, incluyendo unión con hidrógeno. En ciertos casos, el sólvato será capaz de aislamiento, por ejemplo, cuando una o más moléculas solventes son incorporadas en la red cristalina del sólido cristalino. "Solvato" abarca tanto los solvatos de fase en solución y los solvatos aislables. Los ejemplos no limitativos de solvatos adecuados incluyen etanolatos, metanolatos y similares. "Hidrato" es un solvato en el cual la molécula solvente es H2O. "Cantidad eficaz" o "cantidad terapéuticamente eficaz" tiene el propósito de describir una cantidad de compuesto o una composición de la presente invención eficaz para inhibir el CDK(s) y así producir el efecto terapéutico, aliviador, inhibitorio o preventivo deseado.

Los compuestos de Fórmula 1 pueden formar sales las cuales también se encuentran dentro del alcance de esta ¡nvención. La referencia a un compuesto de Fórmula 1 en la presente memoria descriptiva se entiende que incluye las referencias a sus sales, a menos que se indique lo contrario. El (los) término "sal(es)", como se emplea(n) en la presente memoria descriptiva, denota sales acidas formadas con ácidos inorgánicos y/u orgánicos, así como también sales básicas formadas con bases inorgánicas y/u orgánicas. Adicionalmente, cuando un compuesto de la Fórmula 1 contiene tanto una porción básica, tal como, aunque sin limitarse a una piridina o imidazol, y una porción acida, tal como, aunque sin limitarse a un ácido carboxílíco, zwiteríones ("sales internas") pueden formarse y son incluidas dentro del (los) término(s) "sal(es)" como se utiliza en la presente memoria descriptiva. Las sales farmacéuticamente aceptables (es decir, no tóxicas, fisiológicamente aceptables) son preferidas, si bien también son útiles otras sales. Pueden formarse sales de los compuestos de la Fórmula 1 , por ejemplo, haciendo reaccionar un compuesto de Fórmula 1 con una cantidad de ácido o base, tal como una cantidad equivalente, en un medio tal como uno en el cual la sal precipita o en un medio acuoso seguido por liofilización. Las sales de adición de ácido ejemplares incluyen acetatos, ascorbatos, benzoatos, bencensulfonatos, bisulfatos, boratos, butiratos, citratos, canforatos, canforsulfonatos, fumaratos, clorhidratos, bromhidratos, yodhidratos, lactatos, maleatos, metansulfonatos, naftalensulfonatos, nitratos, oxalatos, fosfatos, propionatos, salicilatos, succinatos, sulfatos, tartaratos, tiocianatos, toluensulfonatos (también conocidos como tosilatos,) y similares. Adicionalmente, los ácidos los cuales son generalmente considerados adecuados para la formación de sales farmacéuticamente útiles de compuestos farmacéuticos básicos son descritos, por ejemplo, por P. Stahl ef al, Camille G. (eds.) Handbook of Pharmaceutical Salts. Properties, Selection and Use. (2002) Zurich: Wiley-VCH; S. Berge et al, Journal of Pharmaceutical Sciences (1977) 66(1 ) 1-19; P. Gould, International J. of Pharmaceutics (1986) 33 201-217; Anderson et al, The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press, Nueva York; y en The Orange Book (Food & Drug Administration, Washington, D.C. en su sitio en la web). Estas descripciones son incorporadas a la presente ¡nvención por referencia a las mismas. Las sales básicas ejemplares ¡ncluyen sales de amonio, sales de metales alcalinos, tales como, sales de sodio, litio y potasio, sales de metales alcalinotérreos tales como sales de calcio y magnesio, sales con bases orgánicas (por ejemplo, aminas orgánicas) tales como diciclohexilaminas, t-butilaminas, y sales con aminoácidos tales como arginina, lisina y similares. Los grupos que contienen nitrógeno básicos pueden ser cuaternizados con agentes tales como haluros de alquilo inferior (por ejemplo, metilo, etilo, y cloruros, bromuros y yoduros butílicos), dialquilsulfatos (por ejemplo, dimetilo, dietilo, y dibutilsulfatos), haluros de cadena larga (por ejemplo, cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo y estearilo), haluros de aralquilo (por ejemplo, bromuros de bencilo y fenetilo), y otros.

Todas las sales de ácidos de ese tipo y las sales de bases tienen el propósito de ser sales farmacéuticamente aceptables dentro del alcance de la invención y todas las sales de ácido y de base son consideradas equivalentes a las formas libres de los compuestos correspondientes para los propósitos de la invención. Los esteres farmacéuticamente aceptables de los presentes compuestos ¡ncluyen a los siguientes grupos: (1 ) esteres de ácido carboxílico obtenidos mediante esterificación de los grupos hidroxi, en los cuales la porción no carbonilo de la porción ácido carboxílico del grupo éster se selecciona de alquilo de cadena recta o ramificada (por ejemplo, acetilo, n-propilo, t-butilo, o n-butilo), alcoxialquilo (por ejemplo, metoximetilo), aralquilo (por ejemplo, bencilo), ariloxialquilo (por ejemplo, fenoximetilo), arilo (por ejemplo, feniío opcionalmente sustituido con, por ejemplo, halógeno, alquilo C1-4, o alcoxi C-?.4 o amino); (2) esteres de sulfonato, tales como alquil- o aralquilsulfonilo (por ejemplo, metansulfonilo); (3) esteres de aminoácidos (por ejemplo, L-valilo o L-isoleucilo); (4) esteres de fosfonato y (5) esteres de mono-, di- o trifosfato. Los esteres de fosfato pueden ser adicionalmente esterificados por, por ejemplo, un alcohol C1- o o su derivado reactivo, o mediante un 2.3-di acil- glicerol de C6-24- Los compuestos de Fórmula 1 , y sus sales, solvatos, esteres y profármacos, pueden existir en su forma tautomérica (por ejemplo, como una amida o imino éter). Todas las formas tautoméricas de ese tipo son contempladas en la presente memoria descriptiva como parte de la presente invención. Todos los estereoisómeros (por ejemplo, isómeros geométricos, isómeros ópticos y similares) de los presentes compuestos (incluyendo aquellos de las sales, solvatos, esteres y profármacos de los compuestos así como también las sales y solvatos de los profármacos), tales como aquellas que pueden existir debido a carbonos asimétricos en diversos sustituyentes, incluyendo las formas enantioméricas (las cuales pueden existir aun en ausencia de carbonos asimétricos), formas rotaméricas, atropisómeros, y formas diastereoméricas, son contempladas dentro del alcance de esta ¡nvención, como son los isómeros posicionales (tales como, por ejemplo, 4-piridilo y 3-piridilo). Los estereoisómeros individuales de los compuestos de la ¡nvención pueden estar, por ejemplo, sustancialmente libres de otros isómeros, o pueden estar mezclados, por ejemplo, como racematos o con todos los otros estereoisómeros, u otros estereoisómeros seleccionados. Los centros quirales de la presente invención pueden tener la configuración S o R según lo definido mediante las Recomendaciones de IUPAC 1974. El uso de los términos "sal", "solvato", "profármaco" y similares, se entiende que son igualmente aplicables a la sal, solvato y profármaco de enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros, isómeros posicionales, racematos o profármacos de los compuestos de la invención.

Las formas polimórficas de los compuestos de Fórmula I, y de las sales, solvatos, esteres y profármacos de los compuestos de Fórmula I, tienen el propósitos de estar incluidas en la presente invención. Debe entenderse que la utilidad de los compuestos de Fórmula 1 para las aplicaciones terapéuticas descritas en la presente memoria descriptiva es aplicable a cada compuesto por si mismo o a la combinación o combinaciones de uno o más compuestos de Fórmula 1 según lo ilustrado, por ejemplo, en el párrafo próximo inmediato. El mismo criterio es también aplicable a composicion(es) farmacéutica(s) que comprende(n) ese tipo de compuesto o compuestos y método(s) de tratamiento que involucra(n) ese tipo de compuesto o compuestos. Los compuestos de acuerdo con la invención pueden tener propiedades farmacológicas; en particular, los compuestos de Fórmula 1 pueden ser inhibidores de la proteasa de VHC, cada compuesto por si mismo o uno o más compuestos de Fórmula 1 pueden combinarse con uno o más compuestos seleccionados de la Fórmula 1. El o los compuestos pueden ser útiles para el tratamiento de enfermedades tales como, por ejemplo, VHC, HIV, (SIDA, Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida), y trastornos relacionados, así como también para modular la actividad de la proteasa del virus de la hepatitis C (VHC), previniendo el VHC, o aliviando uno o más síntomas de la hepatitis C. Los compuestos de la Fórmula 1 pueden utilizarse para la manufactura de un medicamento para tratar trastornos asociados con la proteasa de VHC, por ejemplo, el método comprende poner en contacto íntimo un compuesto de Fórmula 1 y un portador farmacéuticamente aceptable.

En otra modalidad, esta invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden el compuesto o compuestos de la invención como un ingrediente activo. Las composiciones farmacéuticas generalmente comprenden además al menos un diluyente portador, excipiente o portador farmacéuticamente aceptable (denominados colectivamente en la presente memoria descriptiva materiales portadores). Debido a su actividad inhibitoria del VHC, tales composiciones farmacéuticas poseen utilidad en el tratamiento de la hepatitis C y trastornos relacionados. En aun otra modalidad, la presente invención describe métodos para preparar composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos de la ¡nvención como un ingrediente activo. En las composiciones farmacéuticas y métodos de la presente invención, los ingredientes activos típicamente serán administrados en mezcla con materiales portadores adecuados seleccionados adecuadamente con respecto a la forma pretendida de administración, es decir, tabletas orales, cápsulas (ya sea cargadas con sólido, cargadas con semisólido o cargadas con líquido), polvos para constitución, geles orales, elíxires, granulos dispersables, jarabes, suspensiones y similares, y consistentes con las prácticas farmacéuticas convencionales. Por ejemplo, para la administración oral en la forma de tabletas o cápsulas, el componente farmacológico activo puede ser combinado con cualquier portador inerte farmacéuticamente aceptable, no tóxico, oral, tal como lactosa, almidón, sacarosa, celulosa, estearato de magnesio, fosfato dicálcico, sulfato de calcio, talco, manitol, alcohol etílico (formas líquidas) y similares. Asimismo, cuando se desee o sea necesario, también pueden incorporarse en la mezcla aglutinantes, lubricantes, agentes desintegrantes y agentes colorantes adecuados. Los polvos y tabletas pueden comprender entre aproximadamente 5 y aproximadamente 95 por ciento de la composición de la invención. Los aglutinantes adecuados ¡ncluyen almidón, gelatina, azúcares naturales, edulcorantes de maíz, gomas naturales y sintéticas tales como acacia, alginato de sodio, carboximetilcelulosa, polietilenglicol y ceras. Entre los lubricantes pueden mencionarse para utilizarse en estas formas de dosificación, el ácido bórico, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio y similares. Los desintegrantes incluyen almidón, metilcelulosa, goma de guar y similares. También pueden incluirse agentes edulcorantes y saborizantes y conservantes cuando fuese apropiado. Algunos de los términos antes señalados, básicamente desintegrantes, diluyentes, lubricantes, algutinantes y similares, son descritos con más detalle más adelante. Adicionalmente, las composiciones de la presente invención pueden ser formuladas en forma de liberación sostenida para proporcionar el índice de liberación controlada de cualquiera de uno o más de los componentes o ingredientes activos para optimizar los efectos terapéuticos, es decir, la actividad inhibitoria de VHC y similares. Las formas de dosificación adecuadas para la liberación sostenida incluyen tabletas estratificadas que contienen capas de índices de desintegración variables o matrices poliméricas de liberación controlada impregnadas con las componentes activos y conformadas en forma de tableta o cápsulas que contienen tales matrices poliméricas porosas impregnadas o encapsuladas. Las preparaciones en forma líquida incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones. Como un ejemplo puede mencionarse soluciones acuosas o de agua- propilenglicol para inyecciones parenterales o adición de edulcorantes y pacificadores para soluciones orales, suspensiones y emulsiones. Las preparaciones en forma líquida también pueden incluir soluciones para administración intranasal. Las preparaciones en aerosol adecuadas para inhalación pueden incluir soluciones y sólidos en forma de polvo, las cuales pueden estar en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable tal como un gas comprimido inerte, por ejemplo, nitrógeno. Para la preparación de supositorios, una cera de bajo punto de fusión tal como una mezcla de glicéridos de ácidos grasos tal como manteca de cacao es primero fundida, y el ingrediente activo es dispersado de manera homogénea en la misma agitando o mezclando similarmente. Luego, la mezcla homogénea fundida es vertida en moldes de tamaño conveniente, se deja enfriar y así solidificar.

También se incluyen las preparaciones en forma sólida las cuales tienen el propósito de ser convertidas, brevemente antes de su utilización, en preparaciones en forma líquida para la administración oral o parenteral. Tales formas líquidas incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones. Los compuestos de la invención también pueden ser administrados por vía transdérmica. Las composiciones transdérmicas pueden adoptar la forma de cremas, lociones, aerosoles y/o emulsiones y pueden ser incluidas en un parche transdérmico del tipo matriz o depósito de acuerdo con los convencionales en la técnica para este propósito. Los compuestos de la invención también pueden ser administrados oralmente, intravenosamente, intranasalmente o subcutáneamente. Los compuestos de la invención también pueden comprender preparaciones cuyas preparaciones están en forma de dosificación unitaria.

En tal forma, la preparación es subdividida en dosis unitarias con tamaño adecuado que contienen cantidades apropiadas de los componentes activos, por ejemplo, una cantidad eficaz para lograr el propósito deseado. La cantidad de la composición activa de la invención en una dosis unitaria de preparación puede variar generalmente o ajustarse entre aproximadamente 1.0 miligramo y aproximadamente 1 ,000 miligramos, preferentemente entre aproximadamente 1.0 y aproximadamente 950 miligramos, más preferentemente entre aproximadamente 1.0 y aproximadamente 500 miligramos, y típicamente entre aproximadamente 1 y aproximadamente 250 miligramos, de acuerdo con la aplicación en particular. La dosis real empleada puede variar dependiendo de la edad, sexo, peso del paciente y de la gravedad de la afección que se está tratando. Tales técnicas son bien conocidas por los expertos en la técnica. Generalmente, la forma de dosificación oral humana que contiene los ingredientes activos puede ser administrada 1 o 2 veces por día. La cantidad y frecuencia de la administración serán reguladas de acuerdo con el criterio del médico que interviene. Un régimen de dosificación diaria generalmente recomendado para la administración oral puede oscilar entre aproximadamente 1.0 miligramo y aproximadamente 1 ,000 miligramos por día, en dosis única o en dosis divididas. A continuación se describen algunos términos útiles: Cápsula - se refiere a un envase o encerramiento especial hecho de metilcelulosa, alcoholes polivinílicos, o gelatinas desnaturalizadas o almidón para sostener o contener composiciones que comprenden los ingredientes activos. Las cápsulas de coraza dura están típicamente preparadas de mezclas de gelatinas de piel porcina y hueso con resistencia al gel relativamente elevada. La cápsula misma puede contener pequeñas cantidades de tintes, agentes opacantes, plastificantes y conservantes. Tableta - se refiere a una forma de dosificación sólida comprimida o moldeada que contiene los ingredientes activos con diluyentes adecuados. La tableta puede ser preparada mediante compresión de mezclas o granulaciones obtenidas por granulación en húmedo, granulación en seco o por compactación. Gel oral - se refiere a los ingredientes activos dispersados o solubilizados en una matriz semisólida hidrofílica. Polvo para constitución se refiere a mezclas en polvo que contienen los ingredientes activos y diluyentes adecuados los cuales pueden ser suspendidos en agua o jugos. Diluyente - se refiere a sustancias que generalmente forman la porción principal de la composición o forma de dosificación. Los diluyentes adecuados incluyen azúcares tales como lactosa, sacarosa, manitol y sorbitol; almidones derivados de trigo, maíz, arroz y papa; y celulosas tales como celulosa microcristalina. La cantidad de diluyente en la composición puede oscilar entre aproximadamente 10 y aproximadamente 90% en peso de la composición total, preferentemente entre aproximadamente 25 y aproximadamente 75%, más preferentemente entre aproximadamente 30 y aproximadamente 60% en peso, aun más preferentemente entre aproximadamente 12 y aproximadamente 60%. Desintegrante - se refiere a materiales agregados a la composición para ayudarla a desintegrarse y liberar los medicamentos. Los desintegrantes adecuados incluyen almidones; almidones modificados "solubles en agua fría" tales como almidón de carboximetilo de sodio; gomas naturales y sintéticas tales como algarrobilla, goma karaya, guar, tragacanto y agar; derivados de celulosa tales como metilcelulosa y carboximetilcelulosa de sodio; celulosas microcristalínas y celulosas microcristalinas entrecruzadas tales como croscarmelosa sódica; alginatos tales como ácido algínico y alginato de sodio; arcillas tales como bentonitas; y mezclas efervescentes. La cantidad de desintegrante en la composición puede oscilar entre aproximadamente 2 y aproximadamente 15% en peso de la composición, más preferentemente entre aproximadamente 4 y aproximadamente 10% en peso. Aglutinante - se refiere a sustancias que unen o "pegan" polvos entre si y los hacen cohesivos mediante la formación de granulos, sirviendo de ese modo como el "adhesivo" en la formulación. Los aglutinantes agregan fuerza cohesiva ya disponible en el diluyente o agente de volumen. Los aglutinantes adecuados incluyen azúcares tales como sacarosa; almidones derivados de trigo, maíz, arroz y papa; gomas naturales tales como goma de acacia, gelatina y tragacanto; derivados de algas marinas tales como ácido algínico, alginato de sodio y alginato de calcio y amonio; materiales celulósicos tales como metilcelulosa y carboximetílcelulosa de sodio e hidroxipropilmetilcelulosa; polivinilpirrolidona; y materiales inorgánicos tales como silicato de magnesio aluminio. La cantidad de aglutinante en la composición puede oscilar entre aproximadamente 2 y aproximadamente 20% en peso de la composición, más preferentemente entre aproximadamente 3 y aproximadamente 10% en peso, aun más preferentemente entre aproximadamente 3 y aproximadamente 6% en peso. Lubricante - se refiere a una sustancia agregada a la forma de dosificación para permitir que la tableta, granulos, etc. después de haberse comprimido, se libere del molde o matriz reduciendo la fricción o el desgaste. Los lubricantes adecuados incluyen estearatos metálicos tales como estearato de magnesio, estearato de calcio o estearato de potasio; ácido esteárico; ceras de alto punto de fusión; y lubricantes hidrosolubles tales como cloruro de sodio, benzoato, de sodio, acetato de sodio, oleato de sodio, polietilenglicoles y d'l-leucina. Los lubricantes son generalmente agregados en el último paso antes de la compresión, puesto que deben estar presentes sobre las superficies de los granulos y entre medio de los mismos y las partes de la prensa de tableteado. La cantidad de lubricante en la composición puede oscilar entre aproximadamente 0.2 y aproximadamente 5% en peso de la composición, preferentemente entre aproximadamente 0.5 y aproximadamente 2%, más preferentemente entre aproximadamente 0.3 y aproximadamente 1.5% en peso. Agente del deslizamiento - material que evita la aglomeración y mejora las características de fluidez de las granulaciones, de modo que el flujo sea suave y uniforme. Los agentes del deslizamiento adecuados incluyen dióxido de silicio y talco. La cantidad de agente de deslizamiento en la composición puede oscilar entre aproximadamente 0.1 % y aproximadamente 5% en peso de la composición total, preferentemente entre aproximadamente 0.5 y aproximadamente 2% en peso. Agentes colorantes - excipientes que proporcionan coloración a la composición o a la forma de dosificación. Tales excipientes pueden incluir tintes para alimento y tintes para alimento adsorbidos sobre un adsorbente adecuado tal como arcilla u óxido de aluminio. La cantidad del agente colorante puede variar entre aproximadamente 0.1 y aproximadamente 5% en peso de la composición, preferentemente entre aproximadamente 0.1 y aproximadamente 1 %. Biodisponibilidad - se refiere al índice y grado en el cual el ingrediente farmacológico activo o porción terapéutica es absorbida en la circulación sistémica desde una forma de dosificación administrada en comparación con un patrón o control. Los métodos convencionales para preparar tabletas son conocidos. Tales métodos incluyen métodos secos tales como compresión directa y compresión de granulación producida por compactación, o métodos húmedos u otros procedimientos especiales. Los métodos convencionales para preparar otras formas para administración tales como, por ejemplo, cápsulas, supositorios y similares son también bien conocidos. Otra modalidad de la invención describe el uso de los compuestos de la invención o composiciones farmacéuticas descritas anteriormente para el tratamiento de enfermedades tales como, por ejemplo, hepatitis C y similares. El método comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de la invención o composición farmacéutica a un paciente que tiene ese tipo de enfermedad o enfermedades y que necesita ese tipo de tratamiento. En aun otra modalidad, los compuestos de la invención pueden utilizarse para el tratamiento del VHC en seres humanos en modalidad de monoterapia o en una modalidad de terapia de combinación (por ejemplo, combinación dual, combinación triple etc.) tal como, por ejemplo, en combinación con agentes antivirales y/o inmunomoduladores. Ejemplos de tales agentes antivirales y/o inmunomoduladores incluyen Ribavirina (de Schering-Plough Corporation, Madison, Nueva Jersey) y Levovirin™ (de ICN Pharmaceuticals, Costa Mesa, California), VP 50406™ (de Viropharma, Incorporated, Exton, Pensilvania), ISIS 14803™ (de ISIS Pharmaceuticals, Carlsbad, California), Heptazyme™ (de Ribozyme Pharmaceuticals, Boulder, Colorado), VX 497™ (de Vértex Pharmaceuticals, Cambridge, Masachusets), Thymosin™ (de SciClone Pharmaceuticals, San Mateo, California), Maxamine™ (Maxim Pharmaceuticals, San Diego, California), micofenolato mofetilo (de Hoffman-LaRoche, Nutley, Nueva Jersey), interferón (tal como, por ejemplo, interferón-alfa, conjugados de PEG-alfa interferón) y similares. Los "conjugados de PEG- alfa interferón" son moléculas de alfa interferón covalentemente unidas a una molécula de PEG. Los ejemplos de conjugados de PEG-alfa interferón incluyen interferón alfa-2a (Roferon™, de Hoffman La-Roche, Nutley, Nueva Jersey) en la forma de interferón alfa-2a pegilado (por ejemplo, como es comercializado bajo la denominación comercial Pegasys™), interferón alfa-2b (Intron™, de Schering-Plough Corporation) en la forma de interferón alfa-2b pegilado (por ejemplo, según es comercializado bajo la denominación comercial PEG-Intron™), interferón alfa-2c (Berofor Alpha™, de Boehringer Ingelheim, Ingelheím, Alemania) o interferón de consenso según lo definido por determinación de una secuencia de consenso de interferón alfas naturales (Infergen™, de Amgen, Thousand Oaks, California). Como se indicó anteriormente, la invención también incluye a los tautómeros, rotámeros, diastereómeros, enantiómeros y otros estereoisómeros de los compuestos de la invención. Por lo tanto, como podrá apreciar un experto en la técnica, algunos de los compuestos de la ¡nvención pueden existir en formas isoméricas adecuadas. Tales variaciones son contempladas como estando dentro del alcance de la ¡nvención. Otra modalidad de la invención describe un método para preparar los compuestos descritos en la presente memoria descriptiva. Los compuestos pueden ser preparados mediante diversas técnicas conocidas en la técnica. Los procedimientos ilustrativos son descritos en los siguientes esquemas de reacción. Las ilustraciones no deberían ser interpretadas como limitando el alcance de la invención la cual es definida en las reivindicaciones adjuntas. Las rutas mecánicas y estructuras análogas alternativas serán evidentes para los expertos en la técnica. Debe entenderse que si bien los siguientes esquemas ilustrativos describen la preparación de unos pocos compuestos de la invención representativos, la sustitución adecuada de cualquiera de los dos aminoácidos naturales y no naturales dará como resultado la formación de los compuestos deseados en base a tal sustitución. Se contemplan tales variaciones como estando dentro del alcance de la invención.

Abreviaturas Las abreviaturas que se utilizan en las descripciones de los esquemas, preparaciones y en los ejemplos que siguen son: THF: Tetrahidrofurano DMF: N,N-Dimetilformamida EtOAc: acetato de etilo AcOH: ácido acético HOOBt: 3-Hidroxi-1.2,3-benzotriazin-4(3H)-ona EDCI: Clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbod¡imida NMM: N-Metilmorfolina ADDP: 1.1 '-(Azodicarbonil)dipiperidina DEAD: Dietilazodicarboxilato MeOH: Metanol EtOH: Etanol Et2O: éter dietílico DMSO: Dimetilsulfóxido HOBt: N-Hidroxibenzotriazol PyBrOP: Hexafluorfosfato de bromo-tris-pirrolidinofosfonio DCM: Diclorometano DCC: 1 .3-Diciclohexilcarbodiimida TEMPO: 2.2,6.6-Tetrametil-1 -piperidiniloxi Phg: Fenilglicina Chg: Ciclohexilglicina Bn: Bencilo Bzl: Bencilo Et: Etilo Ph: Fenilo ¡Boc: ¡sobutoxicarbonilo ¡Pr: isopropilo lBu or Bu1: ter-Butilo Boc: ter-Butiloxicarbonilo Cbz: Benciloxicarbonilo Cp: Ciclopentildienilo Ts: p-toluensulfonilo Me: Metilo HATU: hexafluorfosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1.1 ,3.3-tetrametiluronio DMAP: 4-N,N-Dimetilaminopiridina BOP: Benzotriazol-1 -il-oxi-tris(dimetilamino)hexafluorfosfato PCC: clorocromato de piridinio KHMDS: Hexametildisilazida de potasio o bis(trimerilsililamida) de potasio NaHMDS: Hexametildisilazida de sodio o bis(trimetilsililamida) de sodio LiHMDS: Hexametildisilazida de litio o bis(trímetilsililamida) de litio 10% Pd/C: 10% de Paladio sobre carbón (en peso) TG: Tioglicerol Esquemas Generales para la Preparación de Compuestos Objetivos Los compuestos de la presente invención fueron sintetizados utilizando los esquemas generales (Métodos A-E) descritos a continuación.

Método A: La desprotección de la funcionalidad N-Boc de 1.01 bajo condiciones acidas proporcionó la sal clorhidrato 1.02 la cual fue posteriormente acoplada con N-Boc-ter-leucina bajo metodología de acoplamiento peptídico para dar 1.03. La desprotección de N-Boc seguida por tratamiento con isocíanato apropiado dio la urea 1.05. La hidrólisis del éster metílico proporcionó el ácido 1.06. El acoplamiento peptídíco del ácido 1.06 con la porción amida primaria P-i-P' apropiada dio la hidroxilamida 1.07. La oxidación (oxidación Moffatt o proceso relacionado - ver, T.T.Tidwell, Synthesis, 1990, 857: o peryodinano de Dess-Martin (J. Org. Chem., 1983, 48, 4155) dio como resultado el compuesto objetivo 1.08. 1.04 1.05 1.08 Método B El acoplamiento peptídico del ácido 1.06 con la porción amida secundaria P-i-P' apropiada dio la hidroxilamida 1.09. La oxidación (Moffatt o Dess-Martin's) dio como resultado el compuesto objetivo 1.10.

Método C En otra variación, el acoplamiento peptídico del N-Boc-P2-P3-ácido 1.17 con la porción amida P P' apropiada dio la hidroxilamida 1.11. La oxidación (Moffatt o Periodinano Dess-Martin) dio como resultado la cetoamida 1.12. La desprotección de la funcionalidad N-Boc dio la sal clorhidrato 1.13. El tratamiento con un isocianato adecuado (o equivalente de isocianato) dio como resultado el compuesto objetivo 1.14.

Método D En aun otra variación, la sal clorhidrato 1.13 fue convertida en el carbamato de 4-nitrofenilo 1.15 medíante reacción con el cloroformiato de 4-nitrofenilo. El tratamiento posterior con una amina (o sal clorhidrato de amina) de elección proporcionó el compuesto objetivo 1.14.

Método E En aun otra variación, la sal clorhidrato dípeptídico 1.03 fue convertida en el carbamato de 4-nitrofenilo según lo descrito anteriormente. El tratamiento con una amina (o sal clorhidrato de amina) de elección proporción el derivado de urea 1.05. La hidrólisis y posterior elaboración según lo descrito en los Métodos A/B proporcionaron los compuestos objetivos 1.14.

Preparación de Porciones P1-P' Preparación de los Intermediarios 10.11 y 10.12: Paso 1 : .01 10-02 Una solución agitada de cetimina 10.01 (50 g, 187.1 mmoles) bajo N2 en THF seco (400 ml) se enfrió hasta -78 °C y se trató con solución 1 M de K-'BuO (220 ml, 1.15 equiv.) en THF. LA mezcla de reacción se calentó hasta 0 °C y se agitó durante 1 h y se trató con bromometilciclobutano (28 ml, 249 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 48 h y se concentró in vacuo. El residuo se disolvió en Et2O (300 ml) y se trató con HCl ac. (2 M, 300 ml) La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 5 h y se extrajo con Et2O (1 L). La capa acuosa se basificó hasta pH -12-14 con NaOH (50 % ac.) y se extrajo con CH2CI2 (3x300 ml).

Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron para dar la amina pura (10.02, 18 g) en forma de un aceite incoloro. .02 10.03 Una solución de la amina 10.02 (18 g, 105.2 mmoles) a 0°C en CH2CI2 (350 ml) se trató con di-íer-butildicarbonato (23 g, 105.4 mmoles) y se agitó a temperatura ambiente durante 12 h. Después de completarse la reacción (TLC), la mezcla de reacción se concentró in vacuo y el residuo se disolvió en THF/H2O (200 ml, 1 :1 ) y se trató con L¡OH»H2O (6.5 g, 158.5 mmoles) y se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de reacción se concentró y la capa acuosa básica se extrajo con Et2?. La capa acuosa se acidificó con HCl concentrada hasta pH~1-2 y se extrajo con CH2CI2. Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO4), se filtraron, y concentraron in vacuo para dar 10.03 en forma de un aceite incoloro viscoso el cual se utilizó para el siguiente paso sin más purificación. .03 10.04 Una solución del ácido 10.03 (15.0 g, 62 mmoles) en CH2CI2 (250 ml) se trató con reactivo BOP (41.1 g, 93 mmoles), N-metilmorfolina (27 ml), clorhidrato de N,O-dimetilhidroxilamina (9.07 g, 93 mmoles) y se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con HCl ac. 1 N (250 ml), y las capas se separaron, y la capa acuosa se extrajo con CH2CI2 (3x300 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO4), se filtraron y concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (SiO2, EtOAc/Hex 2:3) para dar la amida 10.04 (15.0 g) en forma de un sólido incoloro. Paso 4 O BocHN JYV°Me BocHNAkH Me .04 10.05 Una solución de la amida 10.04 (15 g, 52.1 mmoles) en THF seco (200 ml) se trató por goteo con una solución de LiAIH4 (1M, 93 ml, 93 mmoles) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y se templó cuidadosamente a 0°C con una solución de KHSO (10% ac.) y se agitó durante 0.5 h. La mezcla de reacción se diluyó con HCl ac. (1 M, 150 ml) y se extrajo con CH2CI2 (3x200 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con HCl ac. (1 M), NaHCO3 saturado, salmuera y se secaron (MgS04). LA mezcla se filtró y concentró in vacuo para proporcionar 10.05 en forma de un aceite incoloro viscoso (14 g).

N 10.05 10.06 Una solución del aldehido 10.05 (14 g, 61.6 mmoles) en CH2CI2 (50 ml), se trató con Et3N (10.73 ml, 74.4 mmoles), y cianohidrina de acetona (10.86 g, 127.57 mmoles) y se agitó a temperatura ambiente durante 24 hrs. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y se diluyó con HCl ac. (1 M, 200 ml) y se extrajo en CH2CI2 (3x200 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con H2O, salmuera, se secaron (MgSO4), filtraron, concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (SiO2, EtOAc/Hex 1 :4) para proporcionar 10.06 (10.3 g) como un líquido incoloro Paso 6 .06 10.07 Se trató metanol saturado con HCI*, preparado mediante burbujeo de gas de HCl a través de CH3OH (700 ml) a 0°C, con la cianohidrina 10.06 y se calentó hasta reflujo durante 24 h. La reacción se concentró in vacuo para proporcionar 10.07, el cual se utilizó en el siguiente paso sin purificación.

* Alternativamente también puede utilizarse HCl 6M preparado mediante la adición de AcCI para secar el metanol.

Paso 7 .07 10.08 Una solución del clorhidrato de amina 10.07 en CH2CI2 (200 ml) se trató con Et3N (45.0 ml, 315 mmoles) y Boc2O (45.7g, 209 mmoles) a -78°C. Luego, la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche y se diluyó con HCl (2 M, 200 ml) y se extrajo en CH2CI2. Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO ) se filtraron y concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (EtOAc/Hex 1 :4) para proporcionar el hidroxiéster 10.08.

Paso 8. .08 10.09 Una solución del éster metílico 10.08 (3g, 10.5 mmoles) en THF/H2O (1 :1 ) se trató con L¡OH«H2O (645 mg, 15.75 mmoles) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se acidificó con HCl ac. (1 M, 15 ml) y se concentró in vacuo. El residuo se secó al vacío para dar 10.09 con rendimiento cuantitativo.

Paso 9 .09 10.10 Una solución del ácido 10.09 (de lo que antecede) en CH2CI2 (50 ml) y DMF (25 ml) se trató con NH4CI (2.94 g, 55.5 mmoles), EDCI (3.15 g, 16.5 mmoles), HOOBt (2.69 g, 16.5 mmoles), y NMM (4.4 g, 44 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 d. Los solventes se eliminaron bajo vacío y el residuo se diluyó con HCl ac. (250 ml) y se extrajo con CH2CI2. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHCO3 ac. sat., se secaron (MgSO4) se filtraron y se concentraron in vacuo para obtener 10.10, el cual se utilizó como estaba en los siguientes pasos. (Alternativamente 10.10 también puede obtenerse directamente mediante la reacción de 10.06 (4.5 g, 17.7 mmoles) con H2O2 ac. (10 ml), LiOH«H2O (820 mg, 20.8 mmoles) a 0°C en 50 ml de CH3OH durante 0.5 h.) Paso 10 .10 10-11 Una solución de 10.10 obtenido en el paso previo se disolvió en HCl 4 N en dioxano y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se concentró ¡n vacuo para dar el intermediario 10.11 como un sólido, el cual se utilizó sin más purificación. .09 10.12 El intermediario requerido 10.12 fue obtenido a partir del compuesto 10.09 utilizando esencialmente los procedimientos antes descritos en los Pasos 9, 10 con reactivos apropiados.

Preparación del Intermediario 11.01 A una solución de 4-pentin-1-ol, 11.02 (4.15 g; Aldrich) se agregó Periodinano de Dess-Martin (30.25g; Aldrich) y la mezcla resultante se agitó durante 45 min. antes de la adición de (ter-Butoxicarbonilmetilen)trifenilfosforano (26.75g; Aldrich). La reacción oscura resultante se agitó durante la noche, se diluyó con EtOAc), se lavó con sulfito de sodio ac, NaHCO3 ac. sat., agua, salmuera y se secó. Los volátiles fueron eliminados bajo presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando 1 % EtOAc en hexanos como eluyente para dar el compuesto deseado, 11.03 (3.92g). Algunas fracciones impuras también fueron obtenidas aunque dejadas de lado en este momento.

Paso 2 Utilizando el alqueno 1 1 .03 (1 .9 g) en n-propanol (20 ml; Aldrich)), bencil carbamato (4.95 g; Aldrich) en n-propanol (40 ml), NaOH (1 .29 g) en agua (79 ml), hipoclorito de ter-butilo (3.7 ml), (DHQ)2PHAL (0.423 g; Aldrich)) en n-propanol (37.5 ml), y osmato de potasio:deshidrato (0.1544 g; Aldrich) y el procedimiento expuesto en Angew. Chem. Int. Ed. Engl (1998), 35, (23/24), pp. 2813-7. dio un producto crudo el cual se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando EtOAc:Hexanos (1 :5) para dar el aminoalcohol deseado 1 1.04 (1.37g, 37%) en forma de un sólido blanco.

Al éster 11.04 (0.700 g) se agregó HCl 4M en dioxano (20 ml; Aldrich) y la mezcla resultante se dejó reposar a temperatura ambiente durante la noche. Los volátiles fueron eliminados bajo presión reducida para dar el ácido 11.05 (0.621 g) en forma de un sólido blanco.

Paso 4 El reactivo BOP (3.65 g; Sigma) seguido por trietílamina (3.45 ml) fueron agregados hasta una solución de diclorometano (20 ml) del ácido carboxílico 11.05 (2.00 g) y alilamina (0.616 ml) a temperatura ambiente y la mezcla resultante se agitó durante la noche. La mezcla de reacción se repartió entre EtOAc y 10% HCl ac. La fase orgánica se separó, se lavó con bicarbonato de sodio ac. sat., agua, se secaron (sulfato de magnesio). El producto de reacción crudo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando (EtOAcHexanos; 70:30) como eluyente para proporcionar la amida deseada 11.01 (1.73 g) en forma de un aceite amarillo viscoso.

Preparación de los Intermediarios 12.03 y 12.04 Paso 1 12.01 12.02 El compuesto 12.01 fue convertido en el material requerido 12.02 utilizando esencialmente los procedimientos descritos para el Intermediario 10.11 , Pasos 3-8. 12 H 12J03 El compuesto 12.02 fue convertido en el intermediario requerido 12.03 utilizando esencialmente los procedimientos descritos para el Intermediario 10.11 , Pasos 9, 10.

Paso 3 12.02 12.04 El compuesto 12.02 fue convertido en el intermediario requerido 12.03 utilizando esencialmente los procedimientos descritos para el Intermediario 10.12, Paso 11.

Preparación del Intermediario 13.01 13.03 A una solución agitada de 1-nitrobutano, 13.02 (16.5 g, 0.16 moles) y ácido glioxílico en H2O (28.1 g, 0.305 moles) y MeOH (122 ml) a 0°C-5°C, se agregó por goteo trietilamina (93 ml, 0.667 moles) durante 2 hrs. La solución se calentó hasta temperatura ambiente, se agitó durante la noche y se concentró hasta sequedad para dar un aceite. Luego, el aceite se disolvió en H2O y se acidificó hasta pH =1 con 10% HCl, seguido por extracción con EtOAc. La solución orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S04, se filtró y se concentró hasta sequedad para dar el producto 13.03 (28.1 g, rendimiento 99%). 13.03 13.04 A una solución agitada del compuesto 13.03 (240 g, 1.35 moles) en ácido acético (1.25 I) se agregó 10% Pd/C (37 g). La solución resultante se hidrogenó a 401.2 kPa (4.148 kgf/cm22) durante 3 hrs y luego a 408 kPa (4.218 kgf/cm2) durante la noche. Luego, el ácido acético se evaporó y se azeotropizó 3 veces con tolueno, luego se trituró con MeOH y éter. La solución luego se filtró y se azeotropizó dos veces con tolueno para dar 13.04 en forma de un sólido blancuzco (131 g, 0.891 moles, 66%).

Paso 3 13.04 13.05 A una solución agitada del aminoácido 13.04 (2.0 g, 13.6 mmoles) en dioxano (10 ml) y H2O (5 ml) a 0°C, se agregó solución NaOH 1 N (4.3 ml, 14.0 mmoles). La solución resultante se agitó durante 10 minutos, seguido por adición de di-í-butildicarbonato (0.110 g, 14.0 mmoles) y se agitó a 0°C durante 15 minutos. Luego, la solución se calentó hasta temperatura ambiente, se agitó durante 45 minutos y se mantuvo en el refrigerador durante la noche y se concentró hasta sequedad para dar un material crudo. A la solución de este material crudo en EtOAc (100 ml) y hielo, se agregó KHSO4 (3.36 g) y H2O (32 ml) y se agitó durante 4-6 minutos. Luego, la capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo dos veces con EtOAc y la capa orgánica combinada se lavó con agua, salmuera, se secaron sobre Na2S04, se filtraron y concentraron hasta sequedad para dar el producto 13.05 en forma de una goma clara (3.0 g, rendimiento 89%). 13.05 13.01 El compuesto 13.05 fue convertido en el intermediario requerido 13.01 utilizando esencialmente los procedimientos descritos para el Intermediario 10.12, Paso 11.

Preparación del Intermediario 14.01 El compuesto 14.02 fue convertido en el material requerido 14.03 utilizando esencialmente los procedimientos descritos para el Intermediario 13.01 , Pasos 1-3.

Paso 2 El compuesto 14.03 fue convertido en el intermediario requerido 14.01 utilizando esencialmente los procedimientos descritos para el Intermediario 10.12, Paso 11.

Preparación del Intermediario 15.01 Paso 1 15.02 15.03 A una suspensión de nitrito de plata (9 g, 58.5 mmoles) en éter dietílico (25 ml) a 0°C se agregó una solución de 4-yodo-1 ,1 ,1-trifluorbutano, .02 (10 g, 42.0 mmoles) en éter dietílico (25 ml) lentamente a través de un embudo de adición (aprox. 15 min). La mezcla resultante se agitó vigorosamente a 0°C y se calentó hasta temperatura ambiente. Después de 50 h, el material sólido se separó por filtración a través de una almohadilla de celite. La solución de éter dietílico resultante se concentró in vacuo para dar .03 como un aceite incoloro, el cual se utilizó sin más purificación.

Paso 2 El compuesto 15.03 fue convertido en el material requerido 15.04 utilizando esencialmente los procedimientos descritos para el Intermediario 13.01 , Pasos 1-3.

El compuesto 15.04 fue convertido al intermediario requerido .01 utilizando esencialmente los procedimientos descritos para el Intermediario 10.12, Paso 11.

Preparación de Intermediario 16.01 16.02 16.01 El ácido 16.02 (Winkier, D.; Burger, K., Synthesis, 1996, 1419) es procesado según lo antes descrito (Preparación de Intermediario 10.12) para dar el intermediario esperado 16.01.

Preparación de Porciones P2/P3-P2 Preparación de Intermediario 20.01 .01 El aminoéster 20.01 se preparó siguiendo el Método de R. Zhang y J. S. Madalengoitia (J. Org. Chem. 1999, 64, 330), con la excepción de que el grupo Boc fue disociado mediante la reacción del HCl metanólico aminoácido protegido con Boc (HCl 4M en dioxano también se empleó para la desprotección). En una variación de la síntesis reportada, el iluro de sulfonio fue reemplazado con el iluro de fosfonio correspondiente.

Preparación de Intermediario 20.04 Paso 1 BocH Una solución del aminoácido comercial Boc-Chg-OH, 20.02 (Senn chemicals, 6.64 g, 24.1 mmoles) y clorhidrato de amina 20.01 (4.5 g, 22 mmoles) en CH2CI2 (100 ml) a 0 °C se trató con reactivo BOP y se agitó a temperatura ambiente durante 15 h. La mezcla de reacción se concentró in vacuo, luego se diluyó con HCl 1 M ac. y se extrajo en EtOAc (3x200 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHCO3 sat. (200 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y concentraron in vacuo, y se cromatografiaron (SiO2, EtOAc/Hex 3:7) para obtener 20.03 (6.0 g) en forma de un sólido incoloro.

Paso 2 .03 20.04 Una solución del éster metílico 20.03 (4.0 g, 9.79 mmoles) en THF/H2O (1 :1) se trató con LiOH«H20 (401 mg, 9.79 mmoles) y se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de reacción se acidificó con HCl ac. y se concentró ¡n vacuo para obtener el intermediario requerido, ácido libre .04.

Preparación de Intermediario 20.07 Paso 1 Una solución de Boc-ter-Leu 20.05 (Fluka, 5.0 g 21.6 mmoles) en CH2CI2/DMF seco (50 ml, 1 :1 ) se enfrió a 0 °C y se trató con la sal amina 20.01 (5.3 g, 25.7 mmoles), NMM (6.5 g, 64.8 mmoles) y reactivo BOP (11.6 o g, 25.7 mmoles). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 24 h, se diluyó con HCl ac. (1 M) y se extrajo con CH2CI2. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con HCl (ac, 1 M), NaHCO3 sai, salmuera, se secaron (MgSO4), se filtraron y concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (SiO2, Acetona/Hexano 1 :5) para proporcionar 20.06 en forma 5 de un sólido incoloro. .06 20.07 Una solución del éster metílico 20.06 (4.0 g, 10.46 mmoles) se disolvió en HCl 4 M en dioxano y se agitó a temperatura ambiente durante 3 h.

La mezcla de reacción se concentró in vacuo para obtener la sal clorhidrato de amina, 20.07 el cual se utilizó sin purificación.

Preparación de Intermediario 21.01 21.02 21.03 A una solución agitada de N-Boc-3.4-deshidroprolina 21.02 (5.0 g, 23.5 mmoles), dicarbonato de di-ter-butilo (7.5 g, 34.4 mmoles), y 4-NN-dimetilaminopirídina (0.40 g, 3.33 mmoles) en acetonitrilo (100 ml) a temperatura ambiente se agregó trietilamina (5.0 ml, 35.6 mmoles). La solución resultante se agitó a esta temperatura durante 18 h antes de concentrarla in vacuo. El residuo marrón oscuro se purificó mediante cromatografía en columna flash eluyendo con 10-25% EtOAc/hexano para dar el producto 21.03 en forma de un aceite amarillo pálido (5.29 g, 84%). 21.03 21.04 A una solución agitada del derivado de deshidroprolina 21.03 (10.1 g, 37.4 mmoles), cloruro de benciltrietilamonio (1.60 g, 7.02 mmoles) en cloroformo (120 ml) a temperatura ambiente se agregó hidróxido de sodio acuoso 50% (120 g). Después de agitar vigorosamente a esta temperatura durante 24 h, la mezcla oscura se diluyó con CH2CI2 (200 ml) y éter dietílico (600 ml). Después de que las capas se separaron, la solución acuosa se extrajo con C^C^/Et^O (1 :2, 3x600 ml). Lá solución orgánica se secó (MgS04) y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna flash utilizando 5-20% EtOAc/hexano para dar 9.34 g (71%) de 21.04 en forma de un sólido blancuzco.

Paso 3 21.04 21-05 La solución de 21.04 (9.34 g, 26.5 mmoles) en CH2CI2 (25 ml) y CF3CO2H (50 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 4.5 horas antes de su concentración in vacuo para dar un residuo marrón, 21.05 el cual se utilizó en el Paso 4 sin más purificación.

Paso 4 21.05 21.01 Se agregó ácido clorhídrico concentrado (4.5 ml) a una solución del residuo 21.05 del Paso 3 en metanol (70 ml) y la mezcla resultante se calentó hasta 65°C en un baño de aceite. Después de 18 h, la mezcla se concentró in vacuo para dar un aceite marrón 21.01 , el cual se utilizó sin más purificación.

Preparación del Intermediario 22.01 Paso 1 22.02 22-03 Se agregó bis(trimetilsilil)amida de potasio (158 ml de una solución 0.5M en tolueno; 79 mmoles) a una suspensión agitada de bromuro de ciclopropiltrifenil-fosfonio (33.12 g; 86.4 mmoles) en tetrahidrofurano anhidro (130 ml) y la mezcla naranja resultante se agitó bajo una atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente durante un período de 1h., antes de la adición del aldehido 22.02 (9.68 g; 42.2 mmoles) en THF (8 ml). Luego, la reacción se se llevó a reflujo bajo una atmósfera de nitrógeno durante un período de 2 h. Después de enfriamiento, se agregaron metanol, éter dietílico y sal Rochelles. La fase orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó y concentró bajo presión reducida. El producto de reacción crudo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando EtOAc-hexano (1 :99) a EtOAc-hexano (5:95) para proporcionar el alqueno 22.03 (8.47g) en forma de un aceite amarillo.

Paso 2 22.03 22 M Una solución de HCl 1 M en MeOH/MeOAc se preparó agregando 14.2 ml de cloruro de acetilo por goteo en metanol frío y diluyendo la solución resultante hasta 200 ml a temperatura ambiente. El carbamato 22.03 (9.49 g; 37.5 mmoles) se disolvió en metanol (12 ml) y se agregó hasta HCl 1 M en MeOH/MeOAc (150 ml) mientras se enfriaba en un baño de hielo. La mezcla resultante se mantuvo a esta temperatura durante 1 h, luego el baño de hielo se eliminó y la agitación continuó durante la noche a temperatura ambiente. Los volátiles fueron eliminados bajo presión reducida para proporcionar un aceite amarillo el cual se utilizó en el siguiente paso sin purificación. El aceite amarillo se disolvió en una mezcla de THF (30 ml) y MeOH (20 ml) y se trató con trietilamina (15 ml; 108 mmoles) hasta que la solución era de pH=9-10. Después de colocación en un baño de hielo, la mezcla se trató con N-Boc-Gly-OSu (11.22g; 41 mmoles). El baño de hielo se retiró y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Los volátiles se eliminaron bajo presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando metanol (1-3%) en diclorometano proporcionando la amida deseada 22.04 (9.09 g).

Paso 3 22.04 22?5 El alcohol 22.04 (9.09 g; 33.6 mmoles) se disolvió en acetona (118.5 ml) y se trató con 2.2-dimetoxipropano (37.4 ml; 304 mmoles) y BF3:Et.2? (0.32 ml; 2.6 mmoles) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante un período de 5.5 h. La solución de reacción se trató con unas pocas gotas de trietilamina y los volátiles fueron eliminados bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando 5-25% EtOAc en hexanos para proporcionar el N,0-acetal 22.05 (8.85 g).

Paso 4 22.05 22.06 22.07 El carbamato 22.05 (8.81 g; 28.4 mmoles) se disolvió en acetonitrilo (45 ml) y la solución se enfrió hasta -40°C bajo una atmósfera de nitrógeno. Se agregaron piridina (6.9 ml; 85.3 mmoles) seguido por tetrafluorborato de nitrosio (6.63 g; 56.8 mmoles) y la mezcla de reacción resultante se mantuvo por debajo de 0°C hasta que la TLC indicó que no había más material de partida (aprox. 2.25 h.). Se agregó pirrolidina (20 ml; 240 mmoles) y el baño de enfriamiento se retiró y se continuó la agitación a temperatura ambiente durante 1 h. y luego los volátiles se eliminaron bajo presión reducida. El residuo se pasó rápidamente a través de una almohadilla de gel de sílice para proporcionar un aceite amarillo. El aceite amarillo se disolvió en benceno anhidro (220 ml) y se agregó acetato de paladio (0.317 g; 1.41 mmoles) antes de calentar la mezcla resultante a reflujo, bajo una atmósfera de nitrógeno durante un período de 1 .5 h. Después de enfriamiento, los volátiles fueron eliminados bajo presión reducida y el residuo oscuro se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando EtOAc-hexano (1 :4) para proporcionar el I) la trans-pirrolidinona 22.06 (1 .94g) seguido por ¡i) la cis-pirroiidinona 22.07 (1.97 g).

El HCl 1 M recientemente preparado en MeOAc/MeOH (10 ml; según lo descrito anteriormente) fue agregado al N,0-acetaI 22.06 y se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. El solvente se eliminó bajo presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando 0-4%MeOH en diclorometano como eluyente para proporcionar el alcohol deseado 22.08 (1.42 g), un aceite amarillo.

A una solución de la lactama 22.08 (1.29 g; 8.44 mmoles) en tetrahidrofurano anhidro (55 ml) se agregó hidruro de litio y aluminio (2.40 g; 63.2 mmoles) y la mezcla resultante se llevó a reflujo durante 8 h. Después de enfriamiento, se agregó agua, seguido por NaOH ac. 15% y la mezcla resultante se filtró a través de celite y el sólido se lavó completamente con THF y MeOH. El solvente se eliminó bajo presión reducida y el residuo se redisolvió en díclorometano, se secó y concentró bajo presión reducida para proporcionar la pirrolidina, utilizada sin purificación. Se agregó la base Hunigs (4.5 ml; 25.8 mmoles) a una mezcla de N-Boc-L-ter-Leu-OH (1.76 g; 7.6 mmoles). La pirrolidina cruda y HATU (2.89 g; 7.6 mmoles) en diclorometano anhidro (50 ml) a -60°C, bajo una atmósfera de nitrógeno. La reacción resultante se dejó llegar a temperatura ambiente lentamente, durante la noche. Se agregó EtOAc y la solución amarilla se lavó con HCl ac. dil., bicarbonato de sodio ac. sat., agua y salmuera. La capa orgánica se secó y se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando EtOAc:hexanos (1 :3) para dar la amida deseada 22.09 (2.00 g).

El alcohol 22.09 (2.00 g; 5.67rnmoles) se disolvió en acetona ( 16 ml) y se enfrió en un baño de hielo durante 10 min., esta solución fue luego agregada a un reactivo Jones enfriado (14.2 ml; aproximadamente 2 mmoles/ml) y la mezcla resultante se agitó a 5°C durante 0.5 h y el baño de enfriamiento fue retirado. La reacción se agitó durante 2 horas adicionales, a temperatura ambiente, antes del agregado a sulfato de sodio (28.54 g), celite (15g) en EtOAc (100 ml). Se agregó isopropanol (15 ml) después de 1 min y luego se agitó durante 10 min más y se filtró. El filtrado se concentró bajo presión reducida, proporcionando un aceite marrón el cual se disolvió en EtOAc. Esta solución se lavó con agua, ácido cítrico ac. al 3%, salmuera, se secó y concentró para proporcionar el ácido carboxílico deseado 22.01 (1.64 g) en forma de un sólido blanco.

Preparación de Intermediario 23.01 Paso 1 A la mezcla del éster 23.02 (6.0 g) y tamiz molecular (5.2 g) en cloruro de metileno anhidro (35 ml) se agregó pirrolidina (5.7 ml, 66.36 mmoles). La suspensión marrón resultante se agitó a temperatura ambiente bajo N2 durante 24 h, se filtró y se lavó con CH3CN anhidro. El filtrado combinado se concentró para proporcionar el producto deseado, 23.03.

Paso 2 A una solución del producto 23.03 del Paso precedente en CH3CN (35 ml) se agregó K2C03 anhidro, cloruro de metalilo (2.77 g, 30.5 mmoles), Nal (1.07 g, 6.7 mmoles). La suspensión resultante se agitó a temperatura ambiente bajo N2 durante 24 h. Se agregaron 50 ml de agua enfriada con hielo seguido por una solución KHS0 2N hasta que el pH fue de 1. Se agregó EtOAc (100 ml) y la mezcla se agitó durante 0.75 h. La capa orgánica combinada se recogió y se lavó con salmuera, se secó sobre MgS0 , y se evaporó para proporcionar el producto deseado, 23.04.

El producto 23.04 del Paso precedente (2.7 g, 8.16 mmoles) se disolvió en dioxano (20 ml) y se trató con LiOH 1 N recientemente preparado (9 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente bajo N2 durante 20 h. La mezcla de reacción se absorbió en EtOAc y se lavó con H20. La fase acuosa combinada se enfrió hasta 0°C y se acidificó hasta pH 1.65 utilizando HCl 1 N. La mezcla turbia se extrajo con EtOAc (2 x 100 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04, y se concentró para dar el ácido deseado, 23.05 (3.40 g).

Paso 4 A una suspensión de NaBH(OAc)3 (3.93g, 18.5 mmoles) en CH2CI2 (55 ml) se agregó una solución del producto 23.05 del Paso precedente en CH2CI2 anhidro (20 ml) y ácido acético (2 ml). La suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 20 h. Se agregó agua enfriada con hielo (100 ml) a la suspensión y se agitó durante 1/2 hr. La capa orgánica se separó, se filtró, se secó y se evaporó para proporcionar el producto deseado, 23.06.

Paso 5 A una solución del producto 23.06 del paso precedente (1.9 g) en MeOH (40 ml) se trató con exceso de solución de CH2N2 / Et20 y se agitó durante la noche. La mezcla de reacción se concentró hasta sequedad para proporcionar un residuo crudo. El residuo se cromatografió sobre gel de sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc / hexano para dar 1.07 g del producto deseado puro, 23.07.

Paso 6 A una solución del producto 23.07 del paso precedente (1.36 g) en CH2CI2 anhidro (40 ml) se trató con BF3. Me20 (0.7 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 h y se templó con NaHC03 sat. (30 ml) y se agitó durante 1/2 hr. La capa orgánica se separó y la capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04, se concentró para dar el residuo crudo. El residuo se cromatografió sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de EtOAc / hexano para dar 0.88 g del compuesto deseado, 23.08.

Paso 7 A una solución del producto 23.08 (0.92 g) del paso precedente en MeOH (30 ml) se agregó Pd/C al 10 % (0.16 g) a temperatura ambiente y se hidrogenó a temperatura ambiente bajo presión de 1 atm. La mezcla de reacción se agitó durante 4 h y se concentró hasta sequedad para proporcionar el compuesto deseado, 23.01.

Preparación de Porciones P3 Preparación del Intermediario 50.01 Ü0U2 50JI3 A una solución de 50.02 (15 g) en MeOH (150 ml) se agregó HCl conc. (3-4 ml) y la mezcla se llevó a reflujo durante 16 h. La mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se concentró. El residuo se absorbió en éter dietílico (250 ml) y se lavó con solución de bicarbonato de sodio saturado frío y salmuera. La capa orgánica se secó (Na S04) y se concentró para dar el éster metílico 50.03 (12.98 g) el cual se utilizó más adelante sin más purificación.

Paso 2 50J3 5QJM El éster metílico 50.03 de lo que antecede se disolvió en cloruro de metileno (100 ml) y se enfrió hasta -78°C, bajo atmósfera de nitrógeno. Se agregó por goteo DIBAL (solución 1.0 M en cloruro de metileno, 200 ml) durante un período de 2 h. La mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla de reacción se enfrió hasta 0°C y se agregó por goteo MeOH (5-8 ml). Una solución de tartrato de potasio sódico al 10% acuoso (200 ml) se agregó lentamente con agitación. Se diluyó con cloruro de metileno (100 ml) y la capa orgánica se separó (junto con algo de precipitado blanco). La capa orgánica se lavó con HCl 1 N (250 ml), salmuera (200 ml), se secó (Na2S04) y se concentró para proporcionar el alcohol 50.04 (11.00 g) en forma de un aceite claro.

Paso 3 50IM 50-05 El alcohol 50.04 de lo que antecede se disolvió en cloruro de metileno (400 ml) y se enfrió hasta 0°C bajo atmósfera de nitrógeno. Se agregó PCC (22.2 g) en porciones y la mezcla de reacción se calentó lentamente hasta temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla de reacción se diluyó con éter dietílico (500 ml) y se filtró a través de una almohadilla de celite. El filtrado se concentró y el residuo se absorbió en éter dietílico (500 ml). Esto se hizo pasar a través de una almohadilla de gel de sílice y el filtrado se concentró para proporcionar el aldehido 50.05 el cual se utilizó más adelante sin más purificación.

Paso 4 El aldehido 50.05 de lo que antecede fue convertido en el material deseado 50.01 utilizando esencialmente el método de Chakraborty et. al (Tetrahedron, 1995, 51(33), 9179-90).

EJEMPLO PREPARATIVO 100 Preparación del Compuesto de la Fórmula 100 del Cuadro I Parte I: Preparación de la Amina de la Fórmula 100-1 Paso 1.

A una solución de N-t-BOC-L-CicIohexilglicinol 100-2 comercialmente disponible (Omega Chem, Canadá) (15g, 62 mmoles) en DCM (170 ml) i Piridina (17 ml) se agregó por goteo cloruro de metansulfonilo (5.3 ml, 68 mmoles, 1.1 equiv). Después de la adición, la reacción se calentó hasta temperatura ambiente i se agitó durante 18 horas. La reacción se diluyó con EtOAc i se lavó dos veces con 120 ml de agua helada después salmuera (100 ml). La capa orgánica se secó sobre MgS0 , se filtró i se concentró para proveer 20.9 g del aceite crudo 100-3.

Paso 2: A una solución a TA de 100-3 (3.4 g de crudo) en DMF (7 ml) se agregó NaN3 (9.62 g) i la reacción se calentó hasta 65°C. Después de 5 horas, la reacción se enfrió i se diluyó con EtOAc (100 ml) i agua helada (100 ml). Después de la extracción, la capa orgánica se lavó con agua i salmuera, se secó sobre MgS0 , se filtró i se concentró a un aceite viscoso. El residuo se purificó a través dé HPFC utilizando una columna 40+M i de 2% a 8% de 8% EtOAC en Hexano. La purificación proveyó 1.06 g de azida 100-4.

Paso 3: A una solución a TA de azida 100-4 (1.06 g) en MeOH (35 ml) se agregaron 100 mg de Pd/C (10%) bajo una atmósfera de N2. La reacción se enjuagó con gas H2 i se agitó a TA durante 18 horas, después se filtró a través de una almohadilla de celite i se concentró para proveer 100-1 como un aceite viscoso (0.85 g).

Parte II: Preparación de la Amina de la fórmula 100-5 Paso 1 : A una solución de 3,4 Dietoxi-3-ciclobuten-1 ,2-diona100-6 (15 mmoles, 2.5 g) comercialmente disponible (Sigma-Aldric) en EtOH (50 ml) se agregaron por goteo 10 mmoles de Me2NH (5 ml, ion de THF 2.0 M). La reacción se calentó gradualmente a TA. Después de 2 h, la reacción se concentró i se purificó a través de HPFC utilizando una columna 25+M i de 20% a 60% de EtOAC en Hexano. La purificación proveyó 1.95 g del producto 100-7.

Paso 2: A una solución a TA de amina 100-1 (250 mg, 1.48 mmoles) en EtOH (5 ml) se agregó ciclobutenodiona 100-7 (1.2 equiv, 190 mg) y DIPEA (0.1 ml). La reacción se agitó a TA durante 1 hora después se llevó a reflujo durante la noche. Disputes de 18 horas, se había formado un precipitado. La reacción se detuvo y se enfrió. El precipitado blanco se filtró y se enjuagó con EtOAc, se secó bajo flujo de N2 para producir 445 mg del producto deseado 100-8.

Paso 3: A una solución a 0°C de amina 100-8 (228 mg, 0.67 mmoles) en DMF (10 ml) se agregó Cs2C03 (1.5 equiv, 1 mmoles, 325 mg) seguido por Mei (1.8 equiv, 1.2 mmoles, 0.075 ml). La reacción se agitó TA durante la noche después se diluyó con EtOAc y agua. La capa acuosa se extrajo otra vez con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera y se secaron sobre MgS04, se filtraron y se concentraron. La purificación a través de HPFC utilizando 80% EtOAc en Hexano proveyó 200 mg del 100-9 deseado.

Paso 4: A 30 mg de amina 100-9 (0.1 mmoles) se agregaron 3 ml de HCl 4.0 N en Dioxano. La reacción se agitó a TA hasta que no se detectó ningún material de partida. Después de 1 hora, la reacción se concentró bajo vacío para dar la sal de amina 100-5 como un sólido amarillo claro.

Parte lll: Preparación del isocianato de la fórmula 100-10 Paso 1 : A una solución a 20°C de la Amina 100-11 (10 g, 72 mmoles) preparada siguiendo el método de R. Zhang y J. S. Madalengoitia (J. Org. Chem. 1999,64, 330) en DCM (200 ml) se agregó HATU (1.05 equiv, 28.8 g), Boc-L- TerLeucine 100-12 (Aldric Chemical Co., Milwaukee, Wisconsin, USA, 1.1 equiv, 79.2 mmoles, 18.3 g) y DIPEA (0.2 moles, 40 ml). La reacción se agitó durante 24 h después se diluyó con EtOAc y se lavó con NaHC03. La capa orgánica se lavó con ácido cítrico después salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgS04, se filtró y concentró bajo vacío. El residuo 100-13 (72 mmoles) se disolvió en Acetona (1.2 I) a 0°C. Después se agregaron 5 equiv. del reactivo Jones (138 ml, 360 mmoles, preparado a través de la disolución de 91 g de trióxido de Cromo en 70 ml H2S04 conc., y se diluyó a 300 ml). Después de 45 minutos, no se detectó ningún material de partida a través de TLC. Se agregó Isopropanol (40 ml) y 500 ml de EtOAc. La solución verde se filtró a través de una almohadilla de celite y el filtrado se concentró a sequedad. El residuo se diluyó con carbonato de sodio al 10% y se extrajo con Et20. La capa acuosa después se acidificó a un pH=2 con HCl 3.0 N y se exctrajo con EtOAc (3 veces 200 ml). La capa orgánica se secó sobre MgS04, se filtró y concentró bajo vacío para producir 21.55 g del intermediario 100-14.

Paso 2: 100-15 A una solución de 100-14 a -20°C (10.4 g, 28 mmoles) en DCM (300 ml) se agregó HATU (1.05 equiv, 29.4 mmoles, 11.2 g), sal de amina 12.03(1.0 equiv, 28 mmoles, 5.48 g, preparada como se describe en la Preparación de los Intermediarios, preparación de porciones P1-P'). Después de 10 minutos a -20°C, se agregó DIPEA (3.6 equiv, 100 mmoles, 17.4 ml). La reacción se agitó a esta temperatura durante 16 h. Después de 16, la reacción se diluyó con EtOAc y se lavó sucesivamente con NaHC03, ácido cítrico (10% p/p) y salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró bajo vacío para producir: 14 g del intermediario 100-15.

Paso 3: Se agregó Et3N (3 equiv., 5.2mmoles, 0.72 ml) a una mezcla de 100-15 crudo (1.06 g, 1.73 mmoles teor.) y EDCI (4 equiv., 6.92 mmoles, 1.33g) en EtOAc (12 ml) a TA. Después de la adición, se cargó lentamente DMSO (4.5 ml). Esto fue seguido por la adición de ácido metansulfónico (3.6 equiv, 6.22 mmoles, 0.4 ml) con una temperatura entre 20 y 30°C. La reacción se agitó durante 1 h. Después de 1 h, TLC mostró que se completó la reacción. A 0°C, una mezcla enfriada de EtOAc (12 ml) y agua helada (2 ml) se agregaron. Después de 2 minutos, la mezcla bifásica se dejó asentar y las capas se separaron. La capa orgánica superior se lavó con H20 y salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgS04, se filtró y concentró bajo vacío. El residuo se purificó a través de HPFC, 25+M, 15% a 60% (EtOAc) en Hexanos. La purificación proveyó (0.6 g) de cetoamida. A una solución a TA de la cetoamida (0.6 g) se agregaron 25 ml de una solución de HCl 4.0 N en Dioxano. La reacción se agitó a TA durante 1 h para observar la finalización, después se concentró a aproximadamente 5 ml y se diluyó con Heptanos y Éter (10 ml cada uno). El precipitado blanco resultante se filtró y se secó bajo un flujo de N2 para dar 0.49 g (81% de rendimiento) de la amina como la sal de HCl. A una solución de la sal de amina a 0°C (50 mg, 0.1 mmoles) en CH2CI2 (7 ml) se agregó NaHC03 acuoso sat. (7 ml) y fosgeno (0.053 ml, 1.1 equiv, 0.11 mmoles). La rápida agitación se resumió inmediatamente y la mezcla de reacción helada se agitó durante 30 min. a alta velocidad. La fase orgánica (inferior) se separó y se secó sobre MgS04 y se concentró a la mitad del volumen bajo vacío con un baño de enfriamiento. El isocianato 100-10 después se vació en un cilindro y se diluyó con CH2CI2 a 15 ml y se utilizó fresco en el siguiente paso (Parte IV).

Parte IV: Preparación del Compuesto de la Fórmula 100 del Cuadro I Siguiendo el método general C: A una solución de amina 100-5 a 0°C (33 mg, 0.1 mmoles) en CH2CI2 (5 ml) se agregó isocianato 100-10 (1 equiv., 0.1 mmoles) después DIPEA (0.4 mmoles, 0.07 ml). La reacción se agitó a TA durante 2 horas, después se diluyó con EtOAc y se lavó con NH4CI sat. y Salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró a sequedad. El residuo se purificó mediante una placa con MeOH 5% en EtOAc para obtener 9 mg del producto de la fórmula 100(10% de rendimiento); LCMS :(712.2:M+1). Los inhibidores HCV 110, 113 y 133 descritos en el Cuadro 1 se prepararon utilizando el intermediario de la formula 100-5 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente.

EJEMPLO PREPARATIVO 106 Preparación del Compuesto de la Fórmula 106 del Cuadro 1 Parte I: Preparación de la Amina de la fórmula 106-1 La amina 106-1 se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito en el ejemplo preparativo 100 mediante el reemplazo en el Paso 1 del N-t-BOC-L-Cidohexilglícinol 100-2 comercialmente disponible con el N-t-BOC-L-ter-Butilglicinol correspondiente comercialmente disponible.

Parte II: Preparación de la sal de amina de la fórmula 106-2.

La amina 106-2 se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito en el ejemplo preparativo 100, parcialmente mediante el reemplazo en el Paso 2 de la amina de la fórmula 100-1 por la amina de la fórmula 106-1 descrita anteriormente.

Parte lll: Preparación del compuesto de la fórmula 106 El compuesto de la fórmula 106 se preparó siguiendo el procedimiento descrito en la parte IV del ejemplo preparativo 100 mediante el reemplazo de la amina 100-5 con la sal de amina 106-2. Los inhibidores 115, 121 , 135, 147 y 148 descritos en el Cuadro 1 se prepararon utilizando el intermediario de la fórmula 106-1 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente.

EJEMPLO PREPARATIVO 104 Preparación del Compuesto de la fórmula 104 Parte I: Preparación de la Amina de la fórmula 104-3 Paso 1 : A una solución de escuarato de dietilo 104-1 comercialmente disponible (Aldric Chemical Co., Milwaukee, Wisconsin, EUA, 1 g, 5.88 mmoles) en THF (20 ml) a -78°C se agregó t-BuLi (5.93 mmoles, 3.5 ml) durante un período de 30 segundos. Después de 50 mín., se agregó t-BuLi 0.5 eq. a la reacción y se continuó la agitación durante 60 min. a -40°C. Después se agrego TFAA (1 ml, 7.06 mmoles) a -40°C por goteo. Después de 10 min., se agregó NH4CI al 10% (acuoso) (10 ml). La solución resultante se calentó a TA y se vació en una mezcla de Et20 (50mL) /5% NaHC03 (acuoso) (80 ml). La capa acuosa se extrajo con éter. La capa orgánica concentrada se lavó con salmuera, después se secó sobre MgS04. Después de la concentración a sequedad, el residuo se purificó por HPFC, columna 25+M con EtOAc al 5-20% en hexano como eluyente para dar 0.874 g del producto 104-2.

Paso 2: -2 2} 4.0 N HCl er> Dsoxano El procedimiento para la preparación del intermediario de la fórmula 104-3 es similar al utilizado para la preparación de la amina 100-1 del ejemplo preparativo 100 mediante el reemplazo en el Paso 2 del compuesto de la fórmula 100.7 por el compuesto de la fórmula 104-2. Además, el procedimiento para la preparación de la sal de HCl de amina de la fórmula 104-3 es similar al utilizado para la preparación de la amina 100-9 en el Paso 4 del ejemplo preparativo 100.

Parte II: Preparación del intermediario de la fórmula 104-4 A una solución a temperatura ambiente (10 g) A una solución a temperatura ambiente del intermediario de la fórmula 20.03 preparado en el paso 1 de preparación del intermediario de la fórmula 20.04 (5.4g) se agregaron 50 ml de una solución de HCl 4.0 N en Dioxano. La reacción se agitó a TA por 18 h, después se concentró a aproximadamente 20 ml y se diluyó con Reptaos y Éter (100 ml cada uno). La lechada blanca resultante se filtró para dar la sal de HCl de amina deseada como un polvo blanco (3.32 g). La sal de amina (3 g) se agregó a una solución a 0°C de NaHC03 acuosa saturada (50 ml.), DCM (50 ml) y Fosgeno (2 equiv, 16.8 mmoles, 8.9 ml). Se estableció inmediatamente la rápida agitación y la mezcla de reacción enfriada con hielo se agitó durante 1 hora a alta velocidad. Después de 1 hora, la fase orgánica (inferior) se separó después se secó sobre MgS04 anhidro y se concentró a aproximadamente 20 ml bajo vacío. Se diluyó isocianato a 34 ml (DCM) y se utilize como una solución de 0.25 M.

Parte lll: Preparación del intermediario de la fórmula 104-6 Paso 1 : A una solución de la sal de amina 104-3 a 0°C (1.15 g, 4 mmoles) en DCM (20 ml) se agregó 1.1 equiv de isocianate 104-4 (17.6 ml) seguido por DIPEA (4 equiv, 16 mmoles 2.8 ml). La reacción se calentó a TA y se agitó durante 1 h, después se diluyó con EtOAc, se lavó con HCl 1.0N (50 ml) después salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró. El residuo se purificó por HPFC, 25+M, 15 a 60% de EtOAc en Hexanos para proveer el intermediario de la fórmula 104-5 (2.31 g, 3.85 mmoles. 96% de rendimiento).

Paso 2: Al intermediario de la fórmula 104-5 a 0°C (2.31 mg, 3.85 mmoles) en DMF (50 ml) se agregó CsC03 (1.5 equiv, 5.8 mmoles, 1.9 g) seguido por Mei (1.8 equiv, 7 mmoles, 0.5 ml). La reacción se agitó a TA por 2 h cuando MS mostró el material deseado y no quedó material de partida. La reacción se diluyó en EtOAc y agua. La capa acuosa se extrajo con EtOAc otra vez. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera y se secaron sobre MgS04, se filtraron y se concentraron. La purificación a través de HPFC 40+M, 15% EtOAc a 60% produjo 2.32g (98%) del intermediario N-Metilo. A una solución a 0°C de este intermediario de N-Metilo (2.3 g, 3.7 mmoles) en dioxano (30 ml) se agregaron 3 equiv de LiOH (solución 1.0N, 11.1 ml). Después de 2 h, TLC no mostró material de partida. La reacción se diluyó con Et20 (100 ml) y se agregaron 10 ml de HCl 1.0N. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04 y se filtró. El filtrado se concentró para proveer el intermediario de la fórmula 104-6 como un sólido amarillo claro (2 g, 90% de rendimiento).

Parte IV: Preparación del intermediario de la fórmula 104-7 A una solución del ácido 104.6 a 0°C (0.02 mmoles, 0.013 g) en DCM (3 ml) se agregó HATU (1.1 equiv, 0.023 mmoles, 9 mg), amina 13.01 (del Paso 4 de Preparación del intermediario 13.01 , 1.0 equiv, 0.02 mmoles, 5 mg), seguido por DIPEA (0.02 ml). La reacción se agitó a-20°C por 18 h después se diluyó con EtOAc (10 ml), se lavó con HCl 1.0N (5 ml) después salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró. El residuo se purificó a través de una placa preparativa con 100% de EtOAc para dar 10 mg de hidroxi amida 104.7 (65% de rendimiento).

Parte V: Preparación del compuesto de la fórmula 104 A una solución a TA de 104.7 (10 mg, 0.13 mmoles) en DCM (3 ml) se agregó el Reactivo Dess-Martin (30 mg). Después de 1 h, el análisis MS mostró el material deseado y ningún material de partida restante. La reacción se diluyó con EtOAc y a TA con una mezcla de 1/1 (5 ml) de NaHC03 ac. saturado y Na2S203 durante 5 min. Las fases se separaron y la capa orgánica se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró. El residuo se purificó a través de una placa preparativa utilizando 90% de EtOAc en Hexano como eluyente. La purificación proveyó 4mg del compuesto de la fórmula 104.

EJEMPLO PREPARATIVO 112 Preparación del Compuesto de la fórmula 112 del Cuadro I El compuesto de la fórmula 112 se preparó de acuerdo con el ejemplo preparativo 106 reemplazando en la parte lll la amina de la fórmula 106-2 por la amina de la fórmula104.3. Además, los inhibidores 103, 107, 109, 111 , 114, 117, 119, 123, 128, 137, 140 y 145 descritos en el Cuadro 2 se prepararon utilizando el intermediario de la fórmula 104-3 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. Además, las aminas de la fórmula 101-1 , 116-1 , 129-1 y 132-1 se prepararon en la misma forma que la amina de la fórmula 104- del ejemplo preparativo 104 reemplazando en el Paso 1 , t-BuLi por otros reactivos como (pero no limitándose a) cloruro de clopropil-magnesio, cloruro de isopropil-magnesio, MeLi, cloruro de etil-magnesio para preparar respectivamente el intermediarios de la fórmula 101-1 , 116-1,129-1 y 132-1.

Los inhibidores 101 , 105, 116, 118, 120, 122, 124, 125, 129, 130, 131 , 132, 134, 136, 143, 144 y 146 descritos en el Cuadro 2 se prepararon utilizando el intermediario de la fórmula 101-1 , 116-1 , 129-1 132-1 de acuerdo con los procedimientos generales descritos anteriormente. La escala Ki* mostrada es: Escala A: Ki* < 75 nM; Escala B: Ki*> 75 nM.

La presente invención se refiere a novedosos inhibidores de proteasa de VHC. Esta utilidad puede manifestarse en su capacidad de inhibir a la serina proteasa NS3/NS4a del VHC. Un procedimiento general para tal demostración es ilustrado por el siguiente ensayo in vitro.

Ensayo para Determinar la Actividad Inhibitoria de Proteasa de VHC: Ensayo espectrofotométrico: Puede realizarse un ensayo espectrofotométrico para determinar la serina proteasa de VHC en los compuestos de la invención siguiendo el procedimiento descrito por R. Zhang et al, Analytical Biochemistry, 270 (1999) 268-275, cuya descripción se incorpora en la presente memoria descriptiva como referencia. El ensayo basado en la proteólisis de sustratos de éster cromogénicos es adecuado para el monitoreo continuo de la actividad de proteasa NS3 de VHC. Los sustratos son derivados del lado P de la secuencia de unión de NS3 de VHC (Ac-DTEDWX(Nva), donde X = A o P) cuyos grupos carboxilo de terminal C son esterificados con uno de cuatro alcoholes cromofóricos diferentes (3- o 4-nitrofenol, 7-hidroxi-4-metil-cumarina, o 4-fenilazofenol). Más adelante se ilustra la síntesis, caracterización y aplicación de estos novedosos sustratos de éster espectroforométricos a screening de alto rendimiento y evaluación cinética detallada de los inhibidores de proteasa NS3 de VHC.

Materiales y Métodos: Materiales: Los reactivos químicos para los reguladores de pH relacionados con el ensayo son obtenidos de Sigma Chemical Company (St.

Louis, Missouri). Los reactivos para la síntesis peptídica eran de Aldrich Chemicals, Novabiochem (San Diego, California), Applied Biosystems (Foster City, California) y Perseptive Biosystems (Framingham, Massachusetts). Los péptidos son sintetizados manualmente o en un sintetizador ABI modelo 431 A automático (de Applied Biosystems). El espectrómetro UV/VIS modelo LAMBDA 12 era de Perkin Elmer (Norwalk, Connecticut) y las placas de UV de 96 cavidades fueron obtenidas de Corning (Corning, Nueva York). El bloque de precalentarhiento puede ser de USA Scientific (Ocala, Florida) y el aparato para vórtice de placas de 96 cavidades es de Labline Instruments (Melrose Park, Illinois). Un lector de placas de microtítulo Spectramax Plus con medidor monocromático es obtenido de Molecular Devices (Sunnyvale, California).

Preparación Enzimática: La proteasa NS3/NS4A del VHC heterodimérica recombinante (cepa 1a) es preparada utilizando los procedimientos publicados previamente (D. L. Sali ef al, Biochemistry, 37 (1998) 3392-3401 ). Las concentraciones de proteína son determinadas mediante el método de tinte Biorad utilizando patrones de proteasa de VHC recombinante previamente cuantificados por análisis de aminoácidos. Con anterioridad a la iniciación del ensayo, el regulador de pH de almacenamiento de enzima (fosfato de sodio 50 mM, pH 8.0, NaCI 300 mM, 10% glicerol, 0,05% maltosida de laurilo y DTT 10 mM) es intercambiado por el regulador de pH de ensayo (MOPS 25 mM pH 6,5, NaCI 300 mM, 10% glicerol, 0,05% maltosida de laurilo, 5 µM EDTA y 5 µM DTT) utilizando una columna preempaquetada Bio-Spin P-6 de Biorad. Síntesis y Purificación de Sustratos: La síntesis de los sustratos es realizada según lo reportado por R. Zhang ef al, (ibid.) y es iniciada mediante anclaje de Fmoc-Nva-OH a resina de cloruro de 2-clorotritilo utilizando un protocolo estándar (K. Barios et al, Int. J. Pept. Protein Res., 37 (1991), 513-520). Los péptidos son posteriormente ensamblados, utilizando química de Fmoc, ya sea manualmente o en un sintetízador de péptidos ABI modelo 431 automático. Los fragmentos peptídicos N-acetilados y completamente protegidos son disociados de la resina ya sea mediante ácido acético al 10% (HOAc) y trifluoroetanol al 10% (TFE) en diclorometano (DCM) durante 30 min, o mediante ácido trifluoroacético al 2% (TFA) en DCM durante 10 min. El filtrado combinado y el lavado con DCM es evaporado azeotrópicamente (o extraído repetidamente mediante solución de Na2C03 acuoso) para eliminar el ácido utilizado en la disociación. La fase de DCM es secada sobre Na2S?4 y evaporada. Los sustratos de éster son ensamblados utilizando procedimientos de acoplamiento de ácido- alcohol estándares (K. Holmber ef al, Acta Chem. Scand., B33 (1979) 410-412). Los fragmentos peptídicos son disueltos en piridina anhidra (30-60 mg/ml) a la cual se agregaron 10 equivalentes molares de cromóforo y una cantidad catalítica (0.1 eq.) de ácido para-toluensulfónico (pTSA). Se agrega diciclohexilcarbodiimida (DCC, 3 eq.) para iniciar las reacciones de acoplamiento. La formación del producto es monitoreada mediante HPLC y puede encontrarse completa luego de 12-72 horas de reacción a temperatura ambiente. El solvente de piridina es evaporado bajo vacío y luego eliminado adicionalmente por evaporación azeotrópica con tolueno. El éster peptídico es desprotegido con TFA al 95% en DCM durante dos horas y extraído tres veces con éter etílico anhidro para eliminar el cromóforo en exceso. El sustrato desprotegido es purificado mediante HPLC de fase inversa en una columna C3 o C8 con un gradiente 30% a 60% de acetonitrilo (utilizando volúmenes de seis columnas). El rendimiento total luego de la purificación por HPLC puede ser de aproximadamente 20-30%. La masa molecular puede ser confirmada mediante espectroscopia de masas e ionización por electropulverización. Los sustratos son almacenados en forma de polvo seco bajo desecación. Espectros de Sustratos y Productos: Los espectros de sustratos y los productos de cromóforos correspondientes son obtenidos en el regulador de pH de ensayo de pH 6.5. Los coeficientes de extinción son determinados a la longitud de onda fuera de pico óptima en cubetas de 1 cm (340 nm para 3-Np y HMC, 370 nm para PAP y 400 nm para 4-Np) utilizando múltiples diluciones. La longitud de onda fuera de pico óptima es definida como aquella longitud de onda la cual proporciona la diferencia fraccional máxima en absorbancia entre el sustrato y el producto (DO del producto -DO del sustrato )/DO del sustrato).

Ensayo de Proteasa: Se llevan a cabo ensayos de proteasa de VHC a 30°C utilizando una mezcla de reacción de 200 µl en una placa de microtítulo de 96 cavidades. Las condiciones del regulador de pH de ensayo (MOPS 25 mM, pH 6.5, NaCI 300 mM, 10% glicerol, 0.05% laurilmaltosida, 5 µM EDTA y 5 µM DTT) son optimizadas para el heterodímero NS3/NS4A (D. L. Sali et al, ibid.)). Típicamente, se colocan 150 µl de mezclas de regulador de pH, sustrato e inhibidor en cavidades (concentración final de DMSO < 4 % v/v) y se dejan preincubar a 30°C durante aproximadamente 3 minutos. 50 ul de proteasa precalentada (12 nM, 30°C) en regulador de pH de ensayo, se utiliza luego para iniciar la reacción (volumen final 200 µl). Las placas son controladas durante toda la duración del ensayo (60 minutos) para detectar un cambio en la absorbancia en la longitud de onda apropiada (340 nm para 3-Np y HMC, 370 nm para PAP, y 400 nm para 4-Np) utilizando un lector de placas de microtítulo Spectromax Plus equipado con un medidor monocromático (pueden obtenerse resultados aceptables con lectores de placas que utilizan filtros de corte). La disociación proteolítíca de la ligación de éster entre el Nva y el cromóforo es controlada a la longitud de onda apropiada contra un testigo no enzimático como control para la hidrólisis no enzimática. La evaluación de los parámetros cinéticos de los sustratos se lleva a cabo sobre un rango de concentración de sustrato de 30 veces (-6-200 µM). Las velocidades iniciales son determinadas utilizando regresión lineal y las constantes cinéticas son obtenidas mediante ajuste de los datos a la ecuación Michaelis-Menten utilizando análisis de regresión no lineal (Mac Curve Fit 1.1 , K. Raner). Los números de productividad (/fcat) son calculados suponiendo que la enzima es completamente activa. Evaluación de los Inhibidores e Inactivadores: Las constantes de inhibición (K¡) para los inhibidores competitivos Ac-D-(D-Gla)-L-l-(Cha)-C-OH (27), Ac-DTEDWA(Nva)-OH y Ac-DTEDWP(Nva)-OH se determinan experimentalmente a concentraciones fijas de enzima y sustrato trazando v0/v¡ vs. concentración de inhibidor ([I] o) de acuerdo con la ecuación Michaelis-Menten reordenada para la cinética de inhibición competitiva: vo/v¡ = 1 + [I] o /( ¡ (1 + [S] o /Km)), donde v0 es la velocidad inicial no inhibida, v¡ es la velocidad inicial en presencia de inhibidor a cualquier concentración de inhibidor determinada ([l]o) y [S]o es la concentración de sustrato utilizada. Los datos resultantes son ajustados utilizando regresión lineal y la inclinación resultante, 1/(K¡(1 +[S] o/Km), es utilizada para calcular el valor K¡. Los valores Ki* obtenidos (en nanoMolar) para algunos de los compuestos de la invención están en el siguiente Cuadro 3: CUADRO 3 Si bien la presente invención ha sido descrita juntamente con las modalidades específicas expuestas anteriormente, el experto en la técnica podrá vislumbrar muchas alternativas, modificaciones y otras variaciones de las mismas. Todas esas alternativas, modificaciones y variaciones tienen el propósito de caer dentro del espíritu y alcance de la presente invención.

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Un compuesto, o enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros, diastereómeros y racematos de dicho compuesto, o una sal, solvato o éster farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto, que tiene dicho compuesto la estructura general mostrada en la Fórmula I: Fórmula I en la cual: R1 es H, OR8, NR9R10, o CHR9R10, en donde R8, R9 y R10 pueden ser iguales o diferentes, cada uno es seleccionado independientemente del grupo que consiste en H, alquil-, alquenil-, alquinil-, aril-, heteroalquil-, heteroaril-, cicloalquil-, heterociclil-, arilalquil-, y heteroarilalquilo; A y M pueden ser iguales o diferentes, cada uno es seleccionado independientemente de R, OR, NHR, NRR', SR, S02R, y halo; o A y M están conectados entre sí de modo que la porción: mostrada anteriormente en la Fórmula I forma ya sea un cicloalquilo de tres, cuatro, seis, siete u ocho miembros, un heterociclilo de cuatro a ocho miembros, un arilo de seis a diez miembros o un heteroarilo de cinco a diez miembros; E es C(H) o C(R); L es C(H), C(R), CH2C(R), o C(R)CH2; R, R', R2, y R3 pueden ser iguales o diferentes, cada uno se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en H, alquil-, alquenil-, alquinil-, cicloalquil-, heteroalquil-, heterociclil-, aril-, heteroaril-, (cicloalquil)alquil-, (heterociclil)alquii-, aril-alquil-, y heteroaril-alquil-; o alternativamente R y R' en NRR' están conectados entre si de modo que NRR' forma un heterociclilo de cuatro a ocho miembros; Y se selecciona entre las siguientes porciones: R19 en donde Y30 se selecciona de: en donde u es un número de 0-1 ; X se selecciona de O, NR15, NC(0)R16, S, S(O) y S(O2); en donde G es NH o O, y R15, R16, R17 , R18, R19, Ti, T2, y T3 pueden ser iguales o diferentes, siendo cada uno seleccionado independientemente del grupo formado por H, alquilo, heteroalquilo, alquenilo, heteroalquenilo, alquinilo, heteroalquinilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo y heteroarilalquilo, o alternativamente R17 y R18 pueden estar conectados entre sí para formar un cícloalquilo o heterociclilo de tres a ocho miembros; en donde cada uno de dicho alquilo, arilo, heteroarilo, cícloalquilo o heterociclilo pueden estar no sustituidos u opcionalmente independientemente sustituidos con una o más porciones seleccionadas del grupo formado por: hidroxi, alcoxi, ariloxí, tio, alquiltio, ariltio, amino, amido, alquilamino, arilamino, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, sulfonamido, alquilsulfonamido, arilsulfonamido, ceto, carboxi, carbalcoxi, carboxamido, alcoxicarbonilamino, alcoxicarboniloxi, alquilureido, arilureido, halo, ciano, y nitro.

2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R1 es NR9R10, y R9 es H, R10 es H, o R 4 en donde R14 es H, alquilo, arilo, heteroalquilo, heteroarilo, cicloalquilo, alquilarilo, alquil-heteroarilo, aril-alquilo, alquenilo, alquinilo o heteroaril-alquilo.

3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque R14 se selecciona entre el grupo que consiste en:

4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R2 se selecciona entre el grupo que consiste en las siguientes porciones:

5. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R3 se selecciona del grupo que consiste de: en donde R31 es OH u O-alquilo; y R32 es H, C(0)CH3, C(0)OtBu o C(0)N(H)tBu.

6. El compuesto de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado además porque R3 se selecciona entre el grupo que consiste en las siguientes porciones:

7. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque G es NH. 8. El compuesto de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado además porque Y se selecciona de las siguientes porciones en donde Y32 se selecciona del grupo que consiste de:

Y30 se selecciona de: en donde u es un número de 0-1 ; y R19 se selecciona de H, alquilo, fenilo o bencilo.

9. El compuesto de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado además porque T-i y T2 pueden ser ¡guales o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de: o la porción: y T3 se selecciona de:

10. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque la porción: se selecciona entre las siguientes estructuras:

11. El compuesto de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado además porque la porción: se selecciona de las siguientes estructuras:

12. El compuesto de conformidad con la reivindicación 11 , caracterizado además porque la porción: se selecciona entre las siguientes estructuras:

13. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R1 es NHR14, donde R14 se selecciona entre el grupo que consiste en: f-OH, O O Me, oo OMe A o OH 1- ' 1o-3 R se selecciona entre el grupo que consiste en las siguientes porciones: elecciona entre el grupo que consiste en las siguientes porciones: Y30 se selecciona entre el grupo que consiste en: y también en donde Y30 se selecciona del grupo que consiste de: y también en donde Y se selecciona del grupo que consiste de: Y se selecciona del grupo que consiste de: e Y12 se selecciona del grupo que consiste de H, C02H, C02Me, OMe, F, Cl, Br, NH2, N(H)S(02)CH3, N(H)C(0)CH3, N02, NMe2, S(02)NH2, CF3, Me, OH, OCF3, y C(0)NH2; e Y33 se selecciona del grupo que consiste de: y T3 se selecciona de: y la es:

14.- Una composición farmacéutica que comprende como un ingrediente activo al menos un compuesto de conformidad con la reivindicación 1.

15.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 14 para su uso en el tratamiento de trastornos asociados con el VHC.

16.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 15, caracterizada además porque comprende adicionalmente al menos un portador farmacéuticamente aceptable.

17.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 16, caracterizada además porque contiene adicionalmente al menos un agente antiviral.

18.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 17, caracterizada además porque contiene adicionalmente al menos un interferón.

19.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 18, caracterizada además porque dicho por lo menos un agente antiviral es ribavirina y dicho por lo menos un interferón es a-interferón o interferón pegilado.

20.- El uso de por lo menos un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de trastornos asociados con el VHC en un paciente.

21.- El uso que se reclama en la reivindicación 20, en donde dicho medicamento es administrable de forma oral o subcutánea.

22.- Un método para preparar una composición farmacéutica para tratar los trastornos asociados con el VHC, dicho método comprende poner en contacto físico íntimo al menos un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 y por lo menos un portador farmacéuticamente aceptable.

23.- Un compuesto que exhibe actividad inhibitoria de la proteasa del VHC, o enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros, diastereómeros y racematos de dicho compuesto, o una sal, solvato o éster farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto, siendo dicho compuesto seleccionado entre los compuestos de estructuras enlistados a continuación:

24.- Una composición farmacéutica para tratar trastornos asociados con el VHC, dicha composición comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más compuestos en la reivindicación 23 y un portador farmacéuticamente aceptable.

25.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 24, caracterizada además porque contiene adicionalmente al menos un agente antiviral.

26.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 25, caracterizada además porque contiene adicionalmente al menos un interferón o conjugado de PEG-interferón alfa.

27.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 26, caracterizada además porque dicho por lo menos un agente antiviral es ribavirina y dicho por lo menos un interferón es a-interferón o interferón pegilado.

28.- El uso de uno o más compuestos de conformidad con la reivindicación 23 en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de un trastorno asociado con el virus de hepatitis C ("HCV") en un paciente.

29.- Un método para modular la actividad de la proteasa del virus de hepatitis C, con uno o más compuestos de conformidad con la reivindicación 23.

30.- El uso de uno o más compuestos de conformidad con la reivindicación 23 en la elaboración de un medicamento para tratar, prevenir, o aliviar uno o más síntomas de la hepatitis C en un paciente.

31.- El uso que se reclama en la reivindicación 30, en donde la proteasa del VHC es la proteasa NS3/NS4a.

32.- El uso que se reclama en la reivindicación 31 , en donde el compuesto o los compuestos inhiben a la proteasa NS3/NS4a del VHC.

33.- Un método para modular el procesamiento del polipéptido del virus de la hepatitis C (VHC), que comprende poner en contacto una composición que contiene el polipéptido del VHC bajo condiciones en las cuales dicho polipéptido es procesado con uno o más compuestos de conformidad con la reivindicación 23.

34.- El uso de por lo menos un compuesto, o enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros, diastereómeros y racematos de dicho compuesto, o una sal, solvato o éster farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de trastornos asociados con el VHC en un paciente, en donde dicho compuesto es seleccionado entre los siguientes:

35. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque está en forma purificada.