MXPA06009811A - Compuestos como inhibidores de ns3 serina proteasa del virus de hepatitis c - Google Patents

Abstract

La presente invención describe compuestos novedosos los cuales tienen actividad inhibitoria de la proteasa del VHC asícomo también métodos para preparar dichos compuestos;en otra modalidad, la invención describe composiciones farmacéuticas que comprenden ese tipo de compuestos asícomo también métodos para su utilización para tratar trastornos asociados con la proteasa del VHC.

Description

COMPUESTOS COMO INHIBIDORES DE NS3 SERINA PROTEASA DEL VIRUS DE HEPATITIS C CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente ¡nvención se refiere a novedosos inhibidores de proteasa del virus de hepatitis C ("VHC"), composiciones farmacéuticas que contienen uno o más de tales inhibidores, métodos para preparar ese tipo de inhibidores y métodos para utilizar ese tipo de inhibidores para tratar la hepatitis C y trastornos relacionados. Esta ¡nvención describe además novedosos compuestos como inhibidores de la serina proteasa NS3/NS4a del VHC. Esta solicitud reivindica prioridad con respecto a la solicitud de patente provisional estadounidense Número de Acta 60/548,507 presentada el 27 de febrero, 2004.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El virus de la hepatitis C (VHC) es un virus de ARN de estructura de cadena individual (+) que ha sido implicado como el principal agente causante en la hepatitis no A, no B (NANBH), particularmente en NANBH asociada con la sangre (BB-NANBH) (ver, la Publicación de Solicitud de Patente Internacional No. WO 89/04669 y Publicación de Solicitud de Patente Europea No. EP 381 216). NANBH debe distinguirse de otros tipos de enfermedad del hígado inducida por virus, tales como el virus de la hepatitis A (VHA), virus de hepatitis B (VHB), virus hepatitis delta (VHD), citomegalovirus (CMV) y virus Epstein-Barr (VEB), así como también de otras formas de enfermedad de hígado tales como alcoholismo y cirrosis biliar primaria. Recientemente, se ha identificado, clonado y expresado una proteasa de VHC necesaria para el procesamiento polipeptídico y replicación viral. (Ver, por ejemplo^ Patente de los Estados Unidos No. 5,712,145). Esta poliproteína de aproximadamente 3000 aminoácidos contiene, desde el término amino al término carboxi, una proteína de nucleocapsida (C), proteína de cubierta (E1 y E2) y varias proteínas no estructurales (NS1 , 2, 3, 4a, 5a y 5b). NS3 es una proteína de aproximadamente 68 kda, codificada por aproximadamente 1893 nucleótidos del genoma de VHC, y tiene dos dominios distintos: (a) un dominio de serina proteasa que consiste en aproximadamente 200 de los aminoácidos de terminal N; y (b) un dominio de ATPasa ARN-dependiente en el término C de la proteína. La proteasa NS3 es considerada un miembro de la familia de quimotripsina debido a similitudes en la secuencia proteica, estructura tridimensional total y mecanismo de catálisis. Otras enzimas del tipo quimotripsina son elastasa, factor Xa, trombina, tripsina, plasmina, uroquinasa, tPA y PSA. La serina proteasa NS3 de VHC es responsable de la proteólisis del polipéptido (poliproteína) en las uniones NS3/NS4a, NS4a/NS4b, NS4b/NS5a y NS5a/NS5b y es así responsable de generar cuatro proteínas virales durante la replicación viral. Esto ha hecho de la serina proteasa NS3 de VHC un objetivo atractivo para la quimioterapia antiviral. Los compuestos de la invención pueden inhibir ese tipo de proteasa. También pueden modular el procesamiento del polipéptido del virus de la hepatitis C (VHC). Se ha determinado que la proteína NS4a, un polipéptido de aproximadamente 6 kda, es un co-factor para la actividad de serina proteasa de NS3. La autodisociación de la unión NS3/NS4a por la serina proteasa NS3/NS4a ocurre ¡ntramolecularmente (es decir, cis) mientras que los otros sitios de disociación son procesados intermolecularmente (es decirx trans). El análisis de los sitios de disociación naturales para la proteasa de VHC reveló la presencia de cisteína en P1 y serina en P1' y que estos residuos son estrictamente conservados en las uniones NS4a/NS4b, NS4b/NS5a y NS5a/NS5b. La unión NS3/NS4a contiene una treonina en P1 y una serina en P1S Se presume que la sustitución Cys- Thr en NS3/NS4a es responsable del requerimiento de procesamiento de cis más que trans en esta unión. Ver, por ej,, Pizzi et al. (1994) Proc. Nati. Acad. Sci. (USA) 91 :888-892, Failla et al. (1996) Folding & Design 1_:35-42. El sitio de disociación NS3/NS4a es también más tolerante de la mutagénesis que los otros sitios. Ver, por ejemplo, Kollykhalov et al. (1994) J. Virol. 68:7525-7533. También se ha descubierto que los residuos ácidos en la región corriente arriba del sitio de disociación son necesarios para la disociación eficaz. Ver, por ejemplo, Komoda et al. (1994) J. Virol. 68:7351-7357. Los inhibidores de la proteasa de VHC que han sido reportados incluyen antioxidantes (Ver, la Publicación de la Solicitud de Patente Internacional No. WO 98/14181 ), ciertos péptidos y análogos peptídicos (Ver, la Publicación de Solicitud de Patente Internacional No. WO 98/17679, Landro et al. (1997) Biochem. 36:9340-9348, Ingallinella et al. (1998) Biochem. 37:8906-8914, Llinás-Brunet et al. (1998) Bioorg. Med. Chem. Lett. 8:1713-1718), inhibidores basados en el polipéptido de 70 aminoácidos eglín c (Martin et al. (1998) Biochem. 37:11459-11468, inhibidores de afinidad seleccionados de inhibidor de tripsina secretora pancreática humana (hPSTI-C3) y repertorios de minicuerpos (MBip) (Dimasi et al. (1997) J. Virol. 71 :7461-7469), CVHE2 (un fragmento de anticuerpo de dominio variable "camellizado") (Martin et al.d 997) Protein Enq. 10:607-614), y a1-ant¡qu¡motripsina (ACT) (Elzouki et al.) (1997) J. Hepat. 27:42-28). Una ribozima diseñada para destruir selectivamente ARN del virus de la hepatitis C ha sido descrita recientemente (Ver, BioWorld Today 9(217): 4 (10 de Noviembre, 1998)). También se hace referencia a las Publicaciones PCT, No. WO 98/17679, publicadas el 30 de abril, 1998 (Vértex Pharmaceuticals Incorporated); WO 98/22496, publicada el 28 de mayo, 1998 (F. Hoffmann-La Roche AG); y WO 99/07734, publicada el 18 de febrero, 1999 (Boehringer Ingelheim Canadá Ltd.). El VHC ha sido involucrado en la cirrosis hepática y en la inducción de carcinoma hepatocelular. El pronóstico para los pacientes que sufren de la infección por VHC es actualmente pobre. La infección de VHC es más difícil de tratar que otras formas de hepatitis debido a la falta de inmunidad o remisión asociada con la infección del VHC. Los datos actuales indican una tasa de supervivencia inferior al 50% en cuatro años posteriores al diagnóstico de cirrosis. Los pacientes diagnosticados con carcinoma hepatocelular operable localizado tienen una tasa de supervivencia de cinco años de 10-30%, mientras que aquellos con carcinoma hepatocelular no operable localizado tienen una tasa de supervivencia de cinco años inferior al 1 %. Se hace referencia a WO 00/59929 (Patente de los Estados Unidos 6,608,027, Cesionario: Boehringer Ingelheim (Canadá) Ltd.; Publicada el 12 de Octubre, 2000) la cual describe derivados peptídicos de la fórmula: Se hace referencia a A. Marchetti et al, Synlett, S1_, 1000-1002 (1999) que describe la síntesis de análogos bicíclicos de un inhibidor de proteasa NS3 de VHC. Un compuesto descrito ahí tiene la fórmula: También se hace referencia a W. Han et al, Bioorganic & Medicinal Chem. Lett, (2000) 10, 711-713, la cual describe la preparación de ciertas a-cetoamidas, a-cetoésteres y a-dicetonas que contienen funcionalidades alílicas y etílicas. También se hace referencia a WO 00/09558 (Cesionario: Boehringer Ingelheim Limited; Publicado el 24 de febrero, 2000) la cual describe derivados peptídicos de la fórmula: o V donde los diversos elementos son definidos ahí. Un compuesto ilustrativo de esa se e es: también se hace referencia a WO 00/09543 (Cesionario: Boehringer Ingelheim Limited; Publicada el 24 de febrero, 2000) la cual describe derivados peptídicos de la fórmula: donde los diversos elementos son definidos en dicho documento. Un compuesto ilustrativo de esa serie es: También se hace referencia a la Patente de los Estados Unidos 6.608.027 (Boehringer Ingelheim, Canadá) la cual describe inhibidores de la proteasa NS3 del tipo: en donde las diversas porciones son definidas en la misma. Las terapias actuales para la hepatitis C incluyen interferón-a (INFfi) y terapia de combinación con ribavirina e interferón. Ver, por ejemplo^ Beremguer et al. (1998) Proc. Assoc. Am. Phvsicians 11O(2):98-112. Estas terapias sufren de un bajo índice de respuesta sostenida y frecuentes efectos colaterales. Ver por ejemplo, Hoofnagle et al. (1997) N. Engl. J. Med. 336:347. Actualmente, no se encuentra disponible ninguna vacuna para la infección por VHC. Se hace referencia adicionalmente a WO 01/74768 (Cesionario: Vértex Pharmaceuticals Inc) publicada el 11 de Octubre, 2001 , la cual describe ciertos compuestos de la siguiente fórmula general (R es definida en la misma) como inhibidores de la serina proteasa NS3 del virus de Hepatitis C: Un compuesto específico descrito en WO 01/74768 antes mencionada tiene la siguiente fórmula: Las Publicaciones PCT WO 01/77113; WO 01/081325; WO 02/08198; WO 02/08256; WO 02/08187; WO 02/08244; WO 02/48172; WO 02/08251 ; y solicitud de Patente de los Estados Unidos pendiente, Acta No. 10/052.386, presentada el 18 de enero, 2002, describen diversos tipos de péptidos y/u otros compuestos como inhibidores de serina proteasa NS-3 del virus de la hepatitis C. Las descripciones de aquellas solicitudes se incorporan en la presente memoria descriptiva por referencia a las mismas. Existe la necesidad de nuevos tratamientos y terapias para la infección del VHC. Existe la necesidad de compuestos útiles en el tratamiento o prevención o mejora de uno o más síntomas de la hepatitis C. Existe la necesidad de métodos para el tratamiento o prevención o mejora de uno o más síntomas de la hepatitis C. Existe la necesidad de métodos para modular la actividad de serina proteasas, particularmente la serina proteasa NS3/NS4a del VHC, utilizando los compuestos provistos en la presente memoria descriptiva.

Existe la necesidad de métodos para modular el procesamiento del polipéptido del VHC utilizando los compuestos provistos en la presente memoria descriptiva.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN En sus muchas modalidades, la presente invención proporciona una clase novedosa de inhibidores de la proteasa del VHC, composiciones farmacéuticas que contienen uno o más de los compuestos, métodos para preparar formulaciones farmacéuticas que comprenden uno o más de esos compuestos, y métodos de tratamiento o prevención del VHC o mejora de uno o más de los síntomas de la hepatitis C utilizando uno o más de ese tipo de compuestos o una o más de ese tipo de formulaciones. También se proporcionan métodos para modular la interacción de un polipéptido de VHC con proteasa de VHC. Entre los compuestos proporcionados en la presente memoria descriptiva, los compuestos que inhiben la actividad de la serina proteasa NS3/NS4a del VHC son preferidos. La presente ¡nvención describe compuestos, o enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros, diaestereómeros y racematos de dichos compuestos, o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o éster de dichos compuestos, teniendo dichos compuestos la estructura general mostrada en la Fórmula estructural 1 : Fórmula I en la cual: R1 es H, OR8, NR9R10, o CHR9R10, en la cual R8, R9 y R10 pueden ser iguales o diferentes, siendo cada uno seleccionado independientemente del grupo formado por H, alquil-, alquenil-, alquinil-, aril-, heteroalquil-, heteroarii-, cicloalquil-, heterociclil-, arilaiquil-, y heteroarilalquilo; A y M pueden ser iguales o diferentes, siendo cada uno seleccionado independientemente entre R, NR9R10, SR, SO2R, y halógeno; o A y M están conectados entre si de modo que la porción: que se muestra más arriba en la Fórmula I (es decir, M-L-E-A tomados juntos) forma ya sea un cicloalquilo de tres, cuatro, seis, siete u ocho miembros, un heterociclilo de cuatro a ocho miembros, un arilo de seis a diez miembros o un heteroarilo de cinco a diez miembros; E es C(H) o C(R); L es C(H), C(R), CH2C(R), o C(R)CH2; R, RS R2, y R3 pueden ser iguales o diferentes, siendo cada uno seleccionado independientemente del grupo formado por H, alquil-, alquenil-, alquinil-, cicloalquil-, heteroalquil-, heterociclil-, aril-, heteroaril-, (cicloalquil)alquil-, (heterociclil)alquil-, aril-alquil-, y heteroaril-alquil-; o alternativamente R y R' en NRR' están conectados entre si de modo que NR9R10 forma un heterociclilo de cuatro a ocho miembros; Y se selecciona de las siguientes porciones: donde Y30 e Y31 se seleccionan entre X se selecciona entre O, NR15, NC(O)R16, S, S(O) y SO2; G es NH o O; y R15, R16, R17 , R 8, R19, T f T2, T3 y T4 pueden ser iguales o diferentes, siendo cada uno seleccionado independientemente del grupo formado por H, alquilo, heteroalquilo, alquenilo, heteroalquenilo, alquinilo, heteroalquinilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, y heteroarilalquilo, o alternativamente, R17 y R18 están conectados entre si para formar un cicloalquilo o heterociclilo de tres a ocho miembros; donde cada uno de dicho alquilo, arilo, heteroarilo, cicloalquilo o heterociclílo puede estar no sustituido u opcionalmente independientemente sustituidos con una o más porciones seleccionadas del grupo formado por: hidroxi, alcoxi, ariloxi, tio, alquiltio, ariltio, amino, amido, alquilamino, arilamino, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, sulfonamido, alquilo, arilo, heteroarilo, alquilsulfonamido, arilsulfonamido, ceto, carboxi, carbalcoxi, carboxamido, alcoxicarbonilamino, alcoxicarboniloxi, alquilureido, arilureido, halógeno, ciano, y nitro. La indicación antes mencionada "A y M están conectados entre sí de modo que la porción: A \ / L— — E F \ o„ i A que se muestra anteriormente en la Fórmula I forma ya sea un cicloalquilo de tres, cuatro, seis, siete u ocho miembros, un heterociclilo de cuatro a ocho miembros, un arilo de seis a diez miembros, o un heteroarilo de cinco a diez miembros" puede ser ilustrada de manera no limitativa de la siguiente manera. Por lo tanto, por ejemplo, en el caso en que A y M están conectados de modo que la porción: \ l — / \ y X que se muestra anteriormente en la Fórmula I forma un cicloalquilo (ciciohexilo) de seis miembros, La Fórmula I puede ser ilustrada como: Un experto en la técnica apreciará que puede arribarse a descripciones similares para la Fórmula I cuando A y M que se muestran más arriba en la porción: A X L — — E X \ . / (M-L-E-A tomados en forma conjunta) están conectados para formar un cicloalquilo de tres, cuatro, siete u ocho miembros, un heterociclilo de cuatro a ocho miembros, un arilo de seis a diez miembros, o un heteroarilo de cinco a diez miembros. En las definiciones antes señaladas de R, R', R2, y R3 alquilo preferido está hecho de uno a diez átomos de carbono, alquenilo o alquinilo preferido está hecho de dos a diez átomos de carbono, cicloalquilo preferido está hecho de tres a ocho átomos de carbono, y heteroalquilo, heteroarilo o heterocicloalquilo (heterociclilo) preferido tiene uno a seis átomos de oxígeno, nitrógeno, azufre o fósforo.

Los compuestos representados por la Fórmula I, por si mismos o en combinación con uno o más agentes adecuados diferentes descritos en la presente memoria descriptiva, pueden ser útiles para el tratamiento de enfermedades tales como, por ejemplo, VHC, HIV, SIDA (Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida), y trastornos relacionados, así como también para modular la actividad de la proteasa del virus de la hepatitis C (VHC), para prevenir el VHC, o aliviar uno o más síntomas de la hepatitis C. Tal modulación, tratamiento, prevención o alivio puede realizarse con los compuestos de la invención así como también con composiciones o formulaciones farmacéuticas que comprenden tales compuestos. Sin estar limitados por la teoría, se cree que la proteasa del VHC puede ser la proteasa NS3 o NS4a. Los compuestos de la invención pueden inhibir ese tipo de proteasa. También pueden modular el procesamiento del polipéptido del virus de la hepatitis C (VHC).

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN En una modalidad, la presente invención describe compuestos los cuales son representados mediante la Fórmula estructural 1 o una sal, solvato o éster de los mismos farmacéuticamente aceptables, en donde las diversas porciones son según lo definido anteriormente.

En otra modalidad, R1 es NR9R10, y R9 es H, R10 es H, o R14 donde R14 es H, alquilo, arilo, heteroalquilo, heteroarilo, cicloalquilo, alquilarilo, alquil-heteroarilo, aril-alquilo, alquenilo, alquinilo o heteroaril-alquilo. En otra modalidad, R14 se selecciona del grupo formado por: en otra modalidad, R se selecciona del grupo formado por las siguientes porciones: >3 En otra modalidad, R se selecciona del grupo formado por: en donde R -.31 es OH o O-alquilo; y R32 es H, C(O)CH3, C(O)OtBu o C(O)N(H)tBu. En una modalidad adicional, R3 se selecciona del grupo formado por las siguientes porciones: CH3-" "AH3 CH3" cA En otra modalidad, G es NH.

En otra modalidad, Y se selecciona de las siguientes porciones donde Y32 se selecciona entre el grupo que consiste en: ? /3o0u e „ \ ?/3j1i se se|ecc¡ona entre ÍÍ5-* (J i r - "J->5 y R19 se selecciona entre H, alquilo, fenilo o bencilo. En otra modalidad, T-i y T2 pueden ser ¡guales o diferentes, siendo cada uno seleccionado en forma independiente entre el grupo que consiste en: x TTNJA/ ' «A ' w w en la cual T5 y T6 pueden ser iguales o diferentes, siendo cada uno seleccionado en forma independiente entre el grupo que consiste en alquilo, arilo, cicloalquilo, heteroarilo y heterociclilo; o la porción: * T3 y T4 pueden ser iguales o diferentes, cada uno se selecciona independientemente entre: o T3 y T tomados en forma conjunta pueden formar parte de un anillo heterocíclico de cuatro a siete miembros; en otras palabras, la porción T3-N-C-T4 puede formar parte de un anillo heterocíclico de cuatro a siete miembros.

En otra modalidad, la porción: se selecciona de las siguientes estructuras: En una modalidad adicional, la porción: se selecciona de las siguientes estructuras: En aún una modalidad adicional, la porción: se selecciona de las siguientes estructuras: En una modalidad adicional, R es NHR14, donde R14 se selecciona entre el grupo que consiste en: F O00 -X X L <" *f A 1-4 »-3 1-3 ^ V " r" N A v AA On=1-3-. SMe AA OH X r / R2 se selecciona del grupo que consiste en las siguientes - X- R3 se selecciona entre el grupo que consiste en las siguientes porciones: CHo' "CHí Y se selecciona entre el grupo que consiste en: y la porción: Aún otra modalidad de la invención describe compuestos mostrados en el Cuadro 1 , Cuadro 2, Cuadro 3, Cuadro 4 y Cuadro 5 más adelante en esta Descripción. También se muestra en los Cuadros las actividades biológicas de diversos compuestos de la invención (como valores Ki* en nanoMolar). En aún otra modalidad, esta invención describe los siguientes compuestos en el Cuadro 6: CUADRO 6 Como se utiliza en lo que antecede, y a lo largo de esta descripción, los siguientes términos, a menos que se indique lo contrario, se entenderán como que tienen los siguientes significados: "Paciente" incluye tanto seres humanos como animales. "Mamífero" significa seres humanos y otros animales mamíferos.

"Alquilo" significa un grupo hidrocarburo alifático el cual puede ser recto o ramificado y que comprende aproximadamente 1 a aproximadamente 20 átomos de carbono en la cadena. Los grupos alquilo preferidos contienen aproximadamente 1 a aproximadamente 12 átomos de carbono en la cadena. Los grupos alquilo más preferidos contienen de aproximadamente 1 a aproximadamente 6 átomos de carbono en la cadena. Ramificado significa que uno o más grupos alquilo inferior tales como metilo, etilo o propilo, están unidos a una cadena alquílica lineal. "Alquilo inferior" significa un grupo que tiene aproximadamente 1 a aproximadamente 6 átomos de carbono en la cadena la cual puede ser recta o ramificada. El término "alquilo sustituido" significa que ei grupo alquilo puede estar sustituido con uno o más sustituyentes los cuales pueden ser ¡guales o diferentes, siendo cada sustituyente seleccionado independientemente del grupo formado por halógeno, alquilo, arilo, cicloalquilo, ciano, hídroxi, alcoxl, alquiltio, amino, -NH(alquilo), -NH(cicloalquilo), -N(alquilo)2, -N(alquilo)2, carboxi y -C(O)O-alquilo. Ejemplos no limitativos de grupos alquilo adecuados incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo y t-butilo. "Alquenilo" significa un grupo hidrocarburo alifático que contiene por lo menos un enlace doble carbono- carbono y el cual puede ser recto o ramificado y que comprende aproximadamente 2 a aproximadamente 15 átomos de carbono en la cadena. Los grupos alquenilo preferidos tienen aproximadamente 2 a aproximadamente 12 átomos de carbono en la cadena; y más preferentemente aproximadamente 2 a aproximadamente 6 átomos de carbono en la cadena. Ramificado significa que uno o más grupos alquilo inferior tales como metilo, etilo o propilo, están unidos a una cadena alquenilo lineal. "Alquenilo inferior" significa aproximadamente 2 a aproximadamente 6 átomos de carbono en la cadena la cual puede ser recta o ramificada. El término "alquenilo sustituido" significa que el grupo alquenilo puede estar sustituido con uno o más sustituyentes los cuales pueden ser iguales o diferentes, estando cada sustituyente seleccionado independientemente del grupo formado por halógeno, alquilo, arilo, cicloalquilo, ciano, alcoxi y -S(alquilo). Los ejemplos no limitativos de grupos alquenilo adecuados incluyen etenilo, propenilo, n-butenilo, 3-metilbut-2-enilo, n-pentenilo, octenilo y decenilo. "Alquinilo" significa un grupo hidrocarburo alífático que contiene por lo menos un triple enlace carbono-carbono y el cual puede ser recto o ramificado y que comprende aproximadamente 2 a aproximadamente 15 átomos de carbono en la cadena. Los grupos alquinilo preferidos tienen aproximadamente 2 a aproximadamente 12 átomos de carbono en la cadena; y más preferentemente aproximadamente 2 a aproximadamente 4 átomos de carbono en la cadena. Ramificado significa que uno o más grupos alquilo inferior tales como metilo, etilo o propilo, están unidos a una cadena alquinilo lineal. "Alquinilo inferior" significa aproximadamente 2 a aproximadamente 6 átomos de carbono en la cadena la cual puede ser recta o ramificada. Los ejemplos no limitativos de grupos alquinilo adecuados incluyen etinilo, propinilo, 2-butinilo y 3-metilbutinilo. El término "alquinilo sustituido" significa que el grupo alquinilo puede ser sustituido con uno o más sustituyentes los cuales pueden ser iguales o diferentes, cada sustituyente es seleccionado independientemente del grupo formado por alquilo, arilo y cicloalquilo. "Arilo" significa un sistema de anillos monocíclico o multicíclico aromático que comprende aproximadamente de 6 a aproximadamente 14 átomos de carbono, preferentemente de aproximadamente 6 a aproximadamente 10 átomos de carbono. El grupo arilo puede estar opcionalmente sustituido con uno o más "sustituyentes en el sistema de anillos" los cuales pueden ser ¡guales o diferentes, y son según lo definido en la presente. Los ejemplos no limitativos de grupos arilo adecuados ¡ncluyen fenilo y naftilo. "Heteroarilo" significa un sistema de anillos monocíclico o multicíclico aromático que comprende aproximadamente de 5 a aproximadamente 14 átomos en el anillo, preferentemente aproximadamente de 5 a aproximadamente 10 átomos en el anillo, en los cuales uno o más de los átomos en el anillo es un elemento diferente a carbono, por ejemplo, nitrógeno, oxígeno o azufre, solo o en combinación. Los heteroarilos preferidos contienen aproximadamente de 5 a aproximadamente 6 átomos en el anillo. El "heteroarilo" puede ser opcionalmente sustituido con uno o más "sustituyentes en el sistema de anillos" los cuales pueden ser iguales o diferentes, y son según lo definido en la presente memoria descriptiva. El prefijo aza, oxa o tia delante del nombre de raíz heteroarilo significa que por lo menos un átomo de nitrógeno, oxígeno o azufre respectivamente, está presente como un átomo en el anillo. Un átomo de nitrógeno de un heteroarilo puede ser opcionalmente oxidado al correspondiente N-óxido. Los ejemplos no limitativos de los heteroarilos adecuados incluyen piridilo, pirazinilo, furanilo, tienilo, pirimidinilo, piridona (incluyendo piridonas N-sustituidas), isoxazolilo, isotiazolilo, oxazolilo, tiazolilo, pirazolilo, furazanilo, pirrolilo, pirazolilo, triazolilo, 1 ,2,4-tiadiazolilo, pirazinilo, piridazinilo, quinoxalinilo, ftalazinilo, oxindolilo, imidazo[1 ,2-a]piridinilo, imidazo[2,1-b]tiazolilo, benzofurazanilo, indolilo, azaindolilo, bencimidazolilo, benzotienilo, quinolinilo, imidazolilo, tienopiridilo, quinazolinilo, tienopirimidilo, pirrolopiridilo, imidazopiridilo, isoquinolinilo, benzoazaindolilo, 1 ,2,4-triazinilo, benzotiazolilo y similares. El término "heteroarilo" también se refiere a porciones heteroarilo parcialmente saturadas tales como, por ejemplo, tetrahidroisoquinolilo, tetrahidroquinolilo y similares. "Aralquilo" o "arilalquilo" significa un grupo aril-alquil- en el cual el arilo y el alquilo son según lo descrito previamente. Los aralquilos preferidos comprenden un grupo alquilo inferior. Los ejemplos no limitativos de grupos aralquilo adecuados incluyen bencilo, 2-fenetilo y naftalenilmetilo. El enlace a la porción madre es a través del alquilo. "Alquilarilo" significa un grupo alquil-aril- en el cual el alquilo y el arilo son como se describió previamente. Los alquilarilos preferidos comprenden un grupo alquilo inferior. El ejemplo no limitativo de un grupo alquilarilo adecuado es tolilo. El enlace a la porción madre es a través del arilo.

"Cicloalquilo" significa un sistema de anillos mono- o multicíclico no aromático que comprende aproximadamente de 3 a aproximadamente 10 átomos de carbono, preferentemente aproximadamente de 5 a aproximadamente 10 átomos de carbono. Los anillos cicloalquilo preferidos contienen entre aproximadamente 5 y aproximadamente 7 átomos en el anillo. El cicloalquilo puede ser opcionalmente sustituido con uno o más "sustituyentes en el sistema de anillos" los cuales pueden ser iguales o diferentes, y son según lo definido anteriormente. Los ejemplos no limitativos de cicloalquilos monocíclicos adecuados incluyen ciclopropilo, ciclopentilo, ciciohexilo, cicioheptilo y similares. Los ejemplos no limitativos de cicloalquilos multicíclicos adecuados incluyen 1-decalinilo, norbornilo, adamantilo y similares, así como también especies parcialmente saturadas tales como, por ejemplo, indanilo, tetrahidronaftilo y similares. "Halógeno" o "halógeno" significa flúor, cloro, bromo o yodo. Se prefiere el flúor, cloro y bromo. "Sustituyente en el sistema de anillos" significa un sustituyente adherido a un sistema de anillos aromático o no aromático el cual, por ejemplo, reemplaza un hidrógeno disponible en el sistema de anillos. Los sustituyentes en el sistema de anillos pueden ser iguales o diferentes, cada uno se selecciona independientemente del grupo formado por alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, heteroarilo, aralquilo, alquilarilo, heteroaralquilo, heteroarilalquenilo, heteroarilalquinilo, alquilheteroarilo, hidroxi, hidroxialquilo, alcoxi, ariloxi, aralcoxi, acilo, aroilo, halógeno, nitro, ciano, carboxi, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, aralcoxicarbonilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, alquiltio, ariltio, heteroariltio, aralquiltio, heteroaralquiltio, cicloalquilo, heterocíclilo, -C(=N-CN)-NH2, -C(=NH)-NH2, -C(=NH)-NH(alquilo), Y?Y2N-, Y1Y2N-alquil-, YAzNCÍO)-, Y^NSOz- y -SO2NY-,Y2, en donde YT e Y2 pueden ser iguales o diferentes y se seleccionan independientemente del grupo formado por hidrógeno, alquilo, arilo, cicloalquilo, y aralquilo. "Sustituyente en el sistema de anillos" también puede significar una porción única la cual reemplaza simultáneamente dos hidrógenos disponibles en dos átomos de carbono adyacentes (un H en cada carbono) en un sistema de anillos. Ejemplos de ese tipo de porción son metilendioxi, etilendioxi, -C(CH3)2-y similares los cuales forman porciones tales como, por ejemplo: "Heterociclilo" significa un sistema de anillos monocíclico o multicíclico saturado no aromático que comprende aproximadamente de 3 a aproximadamente 10 átomos en el anillo, preferentemente de aproximadamente 5 a aproximadamente 10 átomos en el anillo, en el cual uno o más de los átomos en el sistema de anillos es un elemento distinto a carbono, por ejemplo nitrógeno, oxígeno o azufre, solo o en combinación. No hay átomos de oxígeno y/o azufre adyacentes presentes en el sistema de anillos. Los heterociclilos preferidos contienen aproximadamente 5 a aproximadamente 6 átomos en el anillo. El prefijo aza, oxa o tia antes del nombre de raíz heterociclilo significa que al menos un átomo de nitrógeno, oxígeno o azufre respectivamente está presente como un átomo en el anillo. Cualquier -NH en un anillo heterociclilo puede existir protegido tal como, por ejemplo, como un grupo -N(Boc), -N(CBz), -N(Tos) y similares; tales protecciones son también consideradas parte de esta invención. El heterociclilo puede estar opcionalmente sustituido por uno o más "sustituyentes en el sistema de anillos" los cuales pueden ser iguales o diferentes, y son según lo definido en la presente memoria descriptiva. El átomo de nitrógeno o azufre del heterociclilo puede ser opcionalmente oxidado al correspondiente N-óxido, S-óxido o S,S-dióxido. Los ejemplos no limitativos de anillos heterociclilo monocíclicos adecuados incluyen piperidilo, pirrolidinilo, piperazinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, tiazolidinilo, 1 ,4-dioxanilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotiofenilo, lactama, lactona, y similares. Debería señalarse que en sistemas de anillos que contienen heteroátomos de esta invención, no hay grupos hidroxilo en átomos de carbono adyacentes a un N, O o S, así como también no hay grupos N o S en carbono adyacente a otro heteroátomo. Por lo tanto, por ejemplo, en el anillo: 4A \2 X > X H no hay -OH adherido directamente a carbonos marcados 2 y 5.

También debería señalarse que formas tautoméricas tales como, por ejemplo, las porciones: son consideradas equivalentes en ciertas modalidades de esta invención. "Alquinilalquilo" significa un grupo alquinil-alquil- en el cual el alquinilo y el alquilo son según lo descrito previamente. Los alquinilalquilos preferidos contienen un grupo alquinilo inferior y un alquilo ¡nferior. El enlace a la porción madre es a través del alquilo. Los ejemplos no limitativos de grupos alquinilalquilo adecuados incluyen propargilmetilo. "Heteroaralquilo" significa un grupo heteroarii-alquil- en el cual ei heteroarilo y el alquilo son según lo descrito previamente. Los heteroaralquilos preferidos contienen un grupo alquilo ¡nferior. Los ejemplos no limitativos de grupos aralquilo adecuados incluyen piridilmetilo, y quinolin-3-ilmetilo. El enlace a la porción madre es a través del alquilo. "Hidroxialquilo" significa un grupo HO-alquil- en el cual alquilo es según lo definido previamente. Los hidroxialquilos preferidos contienen alquilo inferior. Los ejemplos no limitativos de grupos hidroxialquilo adecuados incluyen hidroximetilo y 2-hidroxietilo. "Acilo" significa un grupo H-C(O)-, alquil-C(O)- o cicloalquil-C(O)-, en el cual los diversos grupos son según lo descrito previamente. El enlace a la porción madre es a través del carbonilo. Los acilos preferidos contienen un alquilo inferior. Los ejemplos no limitativos de grupos acilo adecuados incluyen formilo, acetilo y propanoilo. "Aroilo" significa un grupo aril-C(O)- en el cual el grupo arilo es según lo descrito previamente. El enlace a la porción madre es a través del carbonilo. Los ejemplos no limitativos de grupos adecuados ¡ncluyen benzoilo y 1- naftoílo. "Alcoxi" significa un grupo alquil-O- en el cual el grupo alquilo es según lo descrito previamente. Los ejemplos no limitativos de grupos alcoxi adecuados ¡ncluyen metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi y n-butoxi. El enlace a la porción madre es a través del oxígeno de éter. "Ariloxi" significa un grupo aril-O- en el cual el grupo arilo es según lo descrito previamente. Los ejemplos no limitativos de grupos ariloxi adecuados ¡ncluyen fenoxi y naftoxi. El enlace a la porción madre es a través del oxígeno de éter. "Aralquiloxi" significa un grupo aralquil-O- en el cual el grupo aralquilo es según lo descrito previamente. Los ejemplos no limitativos de grupos aralquiloxi adecuados incluyen benciloxi y 1- o 2-naftalenmetox¡. El enlace a la porción madre es a través del oxigeno de éter. "Alquiltio" significa un grupo alquil-S- en el cual el grupo alquilo es según lo descrito previamente. Los ejemplos no limitativos de grupos alquiltio adecuados incluyen metiltio y etiltio. El enlace a la porción madre es a través del azufre.

"Ariltio" significa un grupo aril-S- en el cual el grupo arilo es según lo descrito previamente. Los ejemplos no limitativos de grupos ariltio adecuados incluyen feniltio y naftiltio. El enlace a la porción madre es a través del azufre. "Aralquiltio" significa un grupo aralquil-S- en el cual el grupo aralquilo es según lo descrito previamente. Un ejemplo no limitativo de un grupo aralquiltio adecuado es benciltio. El enlace a la porción madre es a través del azufre. "Alcoxicarbonilo" significa un grupo alquil-O-CO-. Los ejemplos no limitativos de grupos alcoxicarbonilo adecuados incluyen metoxicarbonilo y etoxicarbonilo. El enlace a la porción madre es a través del carbonilo. "Ariloxicarbonilo" significa un grupo aril-O-C(O)-. Los ejemplos no limitativos de grupos ariloxicarbonilo adecuados incluyen fenoxicarbonilo y naftoxicarbonilo. El enlace a la porción madre es a través del carbonilo. "Aralcoxicarbonilo" significa un grupo aralquil-O-C(O)-. Un ejemplo no limitativo de un grupo aralcoxicarbonilo adecuado es benciloxicarbonilo. El enlace a la porción madre es a través del carbonilo. "Alquilsulfonílo" significa un grupo alquil-S(O2)-. Los grupos preferidos son aquellos en los cuales el grupo alquilo es alquilo inferior. El enlace a la porción madre es a través del sulfonilo. "Arilsulfonilo" significa un grupo aril-S(O2)-. El enlace a la porción madre es a través del sulfonilo.

El término "sustituido" significa que uno o más hidrógenos en el átomo designado es reemplazado con una selección del grupo indicado, siempre que la valencia normal del átomo designado bajo las circunstancias existentes no sea excedida, y que la sustitución de como resultado un compuesto estable. Las combinaciones de sustituyentes y/o variables son permisibles solamente si tales combinaciones dan como resultado compuestos estables. Por "compuesto estable" o "estructura estable" se quiere decir un compuesto que es suficientemente fuerte como para sobrevivir al aislamiento hasta un grado útil de pureza de una mezcla de reacción, y formulación en un agente terapéutico eficaz. El término "uno o más" o "al menos uno", cuando indica la cantidad de sustituyentes, compuestos, agentes de combinación y similares, se refiere a por lo menos uno, y hasta el número máximo de sustituyentes, compuestos, agentes de combinación y similares, químicamente y físicamente permisibles, que están presentes o que son agregados, dependiendo del contexto. Tales técnicas y conocimiento son bien conocidos por el experto en la técnica. El término "opcionalmente sustituido" significa sustitución opcional con los grupos, radicales o porciones especificados. El término "aislado" o "en forma aislada" para un compuesto se refieren al estado físico de dicho compuesto después de ser aislado de un proceso sintético o fuente natural o su combinación. El término "purificado" o "en forma purificada" para un compuesto se refiere al estado físico de dicho compuesto después de ser obtenido de un proceso o procesos de purificación descritos en la presente memoria descriptiva o bien conocidos por el experto en la técnica, en suficiente pureza para ser caracterizable por técnicas analíticas estándares descritas en la presente memoria descriptiva o bien conocidas por el experto en la técnica. También debería señalarse que cualquier heteroátomo con valencias no satisfactorias en el texto, esquemas, ejemplos y Cuadros de la presente invención se presume que tiene el o los átomos de hidrógeno para satisfacer las valencias. Cuando un grupo funcional en un compuesto es descrito como "protegido", esto quiere decir que el grupo está en forma modificada para evitar reacciones colaterales no deseadas en el sitio protegido cuando el compuesto es sometido a una reacción. Los grupos protectores adecuados serán reconocidos por aquellos expertos en la técnica así como también por referencia a libros de texto estándares tales como, por ejemplo, T. W. Greene et al, Protective Groups in organic Synthesis (1991), Wiley, Nueva York. Cuando cualquier variable (por ejemplo, arilo, heterociclo, R2, etc.) aparece más de una vez en cualquier constituyente o en la Fórmula 1 , su definición en cada aparición es independiente de su definición en cada otra aparición. Como se utiliza en la presente memoria descriptiva, el término "composición" tiene el propósito de abarcar un producto que comprende los ingredientes especificados en las cantidades especificadas, así como también cualquier producto el cual es el resultado, directa o indirectamente, de la combinación de los ingredientes especificados en las cantidades especificadas. Los profármacos y solvatos de los compuestos de la ¡nvención son también contemplados en la presente memoria descriptiva. El término "profármaco", como se emplea en la presente memoria descriptiva, denota un compuesto que es un precursor de un fármaco el cual, luego de la administración a un sujeto, sufre la conversión química mediante procesos metabólicos o químicos para dar un compuesto de Fórmula 1 o su sal y/o solvato. Una descripción de profármacos es provista en T. Higuchi y V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems (1987) 4 de la Serie de Simposios A. C. S. (A.C.S. Symposium Series), y en Bioreversible Carriers in Drug Design, (1987) Edward B. Roche, ed., American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, ambos son incorporados en la presente memoria descriptiva como referencia. "Solvato" significa una asociación física de un compuesto de esta invención con una o más moléculas solventes. Esta asociación física involucra grados variables de unión iónica y covalente, incluyendo unión con hidrógeno. En ciertos casos, el solvato será capaz de aislamiento, por ejemplo, cuando una o más moléculas solventes son incorporadas en la red cristalina del sólido cristalino. "Solvato" abarca tanto los solvatos de fase en solución y los solvatos aislables. Los ejemplos no limitativos de solvatos adecuados incluyen etanolatos, metanolatos y similares. "Hidrato" es un solvato en el cual la molécula solvente es H2O. "Cantidad eficaz" o "cantidad terapéuticamente eficaz" tienen el propósito de describir una cantidad de compuesto o una composición de la presente invención eficaz para inhibir el CDK(s) y así producir el efecto terapéutico, aliviador, inhibitorio o preventivo deseado. Los compuestos de Fórmula 1 pueden formar sales las cuales también se encuentran dentro del alcance de esta invención. La referencia a un compuesto de Fórmula 1 en la presente memoria descriptiva se entiende que incluye las referencias a sus sales, a menos que se indique lo contrario. El término "sal(es)", como se emplea en la presente memoria descriptiva, denota sales acidas formadas con ácidos inorgánicos y/u orgánicos, así como también sales básicas formadas con bases inorgánicas y/u orgánicas. Adicionalmente, cuando un compuesto de la Fórmula 1 contiene tanto una porción básica, tal como, aunque sin limitarse a una piridina o imidazol, y una porción acida, tal como, aunque sin limitarse a un ácido carboxílico, zwiteriones ("sales internas") pueden formarse y son incluidas dentro del término "sal(es)" como se utiliza en la presente memoria descriptiva. Las sales farmacéuticamente aceptables (es decir, no tóxicas, fisiológicamente aceptables) son preferidas, si bien también son útiles otras sales. Pueden formarse sales de los compuestos de la Fórmula 1 , por ejemplo, haciendo reaccionar un compuesto de Fórmula 1 con una cantidad de ácido o base, tal como una cantidad equivalente, en un medio tal como uno en el cual la sal precipita o en un medio acuoso seguido por liofilización. Las sales de adición de ácido ejemplares incluyen acetatos, ascorbatos, benzoatos, bencensulfonatos, bisulfatos, boratos, butiratos, citratos, alcanforatos, alcanforsulfonatos, fumaratos, clorhidratos, bromhidratos, yodhidratos, lactatos, maleatos, metansulfonatos, naftalensulfonatos, nitratos, oxalatos, fosfatos, propionatos, salicilatos, succinatos, sulfatos, tartaratos, tiocianatos, toluensulfonatos (también conocidos como tosilatos,) y similares. Adicionalmente, los ácidos los cuales son generalmente considerados adecuados para la formación de sales farmacéuticamente útiles de compuestos farmacéuticos básicos son descritos, por ejemplo, por P. Stahl et al, Camille G. (eds.) Handbook of Pharmaceutical Salts. Properties, Selection and Use. (2002) Zurich: Wiley-VCH; S. Berge et al, Journal of Pharmaceutical Sciences (1977) 66(1 ) 1-19; P. Gould, International J. of Pharmaceutics (1986) 33 201-217; Anderson et al, The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press, Nueva York; y en The Orange Book (Food & Drug Administration, Washington, D.C. en su sitio en la web). Estas descripciones son incorporadas a la presente invención por referencia a las mismas. Las sales básicas ejemplares ¡ncluyen sales de amonio, sales de metales alcalinos, tales como, sales de sodio, litio y potasio, sales de metales alcalinotérreos tales como sales de calcio y magnesio, sales con bases orgánicas (por ejemplo, aminas orgánicas) tales como diciclohexilaminas, t- butilaminas, y sales con aminoácidos tales como arginina, lisina y similares. Los grupos que contienen nitrógeno básicos pueden ser cuaternizados con agentes tales como haluros de alquilo ¡nferior (por ejemplo, cloruros, bromuros y yoduros metílicos, etílicos y butílicos), dialquilsulfatos (por ejemplo, dimetil, dietil, y dibutilsulfatos), haluros de cadena larga (por ejemplo, cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo y estearilo), haluros de aralquilo (por ejemplo, bromuros de bencilo y fenetilo), y otros. Todas las sales de ácidos de ese tipo y las sales de bases tienen el propósito de ser sales farmacéuticamente aceptables dentro del alcance de la invención y todas las sales de ácido y de base son consideradas equivalentes a las formas libres de los compuestos correspondientes para los propósitos de la invención. Los esteres farmacéuticamente aceptables de los presentes compuestos incluyen a los siguientes grupos: (1 ) esteres de ácido carboxílico obtenidos mediante esterificación de los grupos hidroxi, en los cuales la porción no carbonilo de la porción ácido carboxílico del grupo éster se selecciona de alquilo de cadena recta o ramificada (por ejemplo, acetilo, n-propilo, t-butilo, o n-butilo), alcoxialquilo (por ejemplo, metoximetilo), aralquilo (por ejemplo, bencilo), ariloxialquilo (por ejemplo, fenoximetilo), arilo (por ejemplo, fenilo opcionalmente sustituido con, por ejemplo, halógeno, alquilo de C?-4, o alcoxi de C1-4 o amino); (2) esteres de sulfonato, tales como alquil- o aralquilsulfonilo (por ejemplo, metansulfonilo); (3) esteres de aminoácidos (por ejemplo, L-valilo o L-isoleucilo); (4) esteres de fosfonato y (5) esteres de mono-, di- o trifosfato. Los esteres de fosfato pueden ser adicionalmente esterificados por, por ejemplo, un alcohol de C-?-20 o su derivado reactivo, o mediante un 2,3-diacil de C6-24 glicerol. Los compuestos de Fórmula 1 , y sus sales, solvatos y profármacos, pueden existir en su forma tautomérica (por ejemplo, como una amida o imino éter). Todas las formas tautoméricas de ese tipo son contempladas en la presente memoria descriptiva como parte de la presente invención. Todos los estereoisómeros (por ejemplo, isómeros geométricos, isómeros ópticos y similares) de los presentes compuestos (incluyendo aquellos de las sales, solvatos, y profármacos de los compuestos así como también las sales y solvatos de los profármacos), tales como aquellas que pueden existir debido a carbonos asimétricos en diversos sustituyentes, incluyendo las formas enantioméricas (las cuales pueden existir aún en ausencia de carbonos asimétricos), formas rotaméricas, atropisómeros, y formas diaestereoméricas, son contempladas dentro del alcance de esta invención, como son los isómeros posicionales (tales como, por ejemplo, 4-piridilo y 3-piridilo). Los estereoisómeros individuales de los compuestos de la invención pueden estar, por ejemplo, sustancialmente libres de otros isómeros, o pueden estar mezclados, por ejemplo, como racematos o con todos los otros estereoisómeros, u otros estereoisómeros seleccionados. Los centros quirales de la presente invención pueden tener la configuración S o R según lo definido mediante las Recomendaciones de IUPAC 1974. El uso de los términos "sal", "solvato", "profármaco" y similares, se entiende que son igualmente aplicables a la sal, solvato y profármaco de enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros, isómeros posicionales, racematos o profármacos de los compuestos de la invención. Las formas polimórficas de los compuestos de Fórmula I, y de las sales, solvatos y profármacos de los compuestos de Fórmula I, tienen el propósitos de estar incluidas en la presente invención. Debe entenderse que la utilidad de los compuestos de Fórmula 1 para las aplicaciones terapéuticas descritas en la presente memoria descriptiva es aplicable a cada compuesto por si mismo o a la combinación o combinaciones de uno o más compuestos de Fórmula 1 según lo ilustrado, por ejemplo, en el párrafo próximo inmediato. El mismo criterio es también aplicable a composición(es) farmacéutica(s) que comprende(n) ese tipo de compuesto o compuestos y método(s) de tratamiento que involucra(n) ese tipo de compuesto o compuestos. Los compuestos de acuerdo con la invención pueden tener propiedades farmacológicas; en particular, los compuestos de Fórmula 1 pueden ser inhibidores de la proteasa de VHC, cada compuesto por si mismo o uno o más compuestos de Fórmula 1 pueden combinarse con uno o más compuestos seleccionados de la Fórmula 1. El o los compuestos pueden ser útiles para el tratamiento de enfermedades tales como, por ejemplo, VHC, HIV, (SIDA, Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida), y trastornos relacionados, así como también para modular la actividad de la proteasa del virus de la hepatitis C (VHC), previniendo el VHC, o aliviando uno o más síntomas de la hepatitis C. Los compuestos de la Fórmula 1 pueden utilizarse para la manufactura de un medicamento para tratar trastornos asociados con la proteasa de VHC, por ejemplo, el método comprende poner en contacto íntimo un compuesto de Fórmula 1 y un portador farmacéuticamente aceptable. En otra modalidad, esta invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden el compuesto o compuestos de la invención como un ingrediente activo. Las composiciones farmacéuticas generalmente comprenden además al menos un diluyente portador, excipiente o portador farmacéuticamente aceptable (denominados colectivamente en la presente memoria descriptiva materiales portadores). Debido a su actividad inhibitoria del VHC, tales composiciones farmacéuticas poseen utilidad en el tratamiento de la hepatitis C y trastornos relacionados. En aún otra modalidad, la presente invención describe métodos para preparar composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos de la ¡nvención como un ingrediente activo. En las composiciones farmacéuticas y métodos de la presente invención, los ingredientes activos típicamente serán administrados en mezcla con materiales portadores adecuados seleccionados adecuadamente con respecto a la forma pretendida de administración, es decir, tabletas orales, cápsulas (ya sea cargadas con sólido, cargadas con semisólido o cargadas con líquido), polvos para geles orales, elíxires, granulos dispersables, jarabes, suspensiones y similares, y consistentes con las prácticas farmacéuticas convencionales. Por ejemplo, para la administración oral en la forma de tabletas o cápsulas, el componente farmacológico activo puede ser combinado con cualquier portador inerte farmacéuticamente aceptable, no tóxico, oral, tal como lactosa, almidón, sacarosa, celulosa, estearato de magnesio, fosfato dicálcico, sulfato de calcio, talco, manitol, alcohol etílico (formas líquidas) y similares. Asimismo, cuando se desee o sea necesario, también pueden incorporarse en la mezcla aglutinantes, lubricantes, agentes desintegrantes y agentes colorantes adecuados. Los polvos y tabletas pueden comprender entre aproximadamente 5 y aproximadamente 95 por ciento de la composición de la invención. Los aglutinantes adecuados incluyen almidón, gelatina, azúcares naturales, edulcorantes de maíz, gomas naturales y sintéticas tales como acacia, alginato de sodio, carboximetilcelulosa, polietilenglicol y ceras. Entre los lubricantes pueden mencionarse para utilizarse en estas formas de dosificación, el ácido bórico, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio y similares. Los desintegrantes incluyen almidón, metilcelulosa, goma de guar y similares. También pueden incluirse agentes edulcorantes y saborizantes y conservantes cuando sea apropiado. Algunos de los términos antes señalados, básicamente desintegrantes, diluyentes, lubricantes, aglutinantes y similares, son descritos con más detalle más adelante.

Adicionalmente. las composiciones de la presente invención pueden ser formuladas en forma de liberación sostenida para proporcionar el índice de liberación controlada de cualquiera de uno o más de los componentes o ingredientes activos para optimizar los efectos terapéuticos, es decir, la actividad inhibitoria de VHC y similares. Las formas de dosificación adecuadas para la liberación sostenida incluyen tabletas estratificadas que contienen capas de índices de desintegración variables o matrices poliméricas de liberación controlada impregnadas con los componentes activos y conformados en forma de tableta o cápsulas que contienen tales matrices poliméricas porosas impregnadas o encapsuladas. Las preparaciones en forma líquida incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones. Como un ejemplo pueden mencionarse soluciones acuosas o de agua-propilenglicol para inyecciones parenterales o adición de edulcorantes y pacificadores para soluciones orales, suspensiones y emulsiones. Las preparaciones en forma líquida también pueden incluir soluciones para administración intranasal. Las preparaciones en aerosol adecuadas para inhalación pueden ¡ncluir soluciones y sólidos en forma de polvo, las cuales pueden estar en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable tal como un gas comprimido inerte, por ejemplo, nitrógeno. Para la preparación de supositorios, una cera de bajo punto de fusión tal como una mezcla de glicéridos de ácidos grasos tal como manteca de cacao es primero fundida, y el ingrediente activo es dispersado de manera homogénea en la misma agitando o mezclando similarmente. Luego, la mezcla homogénea fundida es vertida en moldes de tamaño conveniente, se deja enfriar y así solidificar. También se ¡ncluyen las preparaciones en forma sólida las cuales tienen el propósito de ser convertidas, brevemente antes de su utilización, en preparaciones en forma líquida para la administración oral o parenteral. Tales formas líquidas ¡ncluyen soluciones, suspensiones y emulsiones. Los compuestos de la invención también pueden ser administrados por vía transdérmíca. Las composiciones transdérmicas pueden adoptar la forma de cremas, lociones, aerosoles y/o emulsiones y pueden ser incluidas en un parche transdérmico del tipo matriz o depósito de acuerdo con los convencionales en la técnica para este propósito. Los compuestos de la invención también pueden ser administrados oralmente, intravenosamente, intranasalmente o subcutáneamente. Los compuestos de la ¡nvención también pueden comprender preparaciones las cuales están en forma de dosificación unitaria. En tal forma, la preparación es subdividida en dosis unitarias con tamaño adecuado que contienen cantidades apropiadas de los componentes activos, por ejemplo, una cantidad eficaz para lograr el propósito deseado. La cantidad de la composición activa de la invención en una dosis unitaria de preparación puede variar generalmente o ajustarse entre aproximadamente 1.0 miligramo y aproximadamente 1.000 miligramos, preferentemente entre aproximadamente 1.0 y aproximadamente 950 miligramos, más preferentemente entre aproximadamente 1.0 y aproximadamente 500 miligramos, y típicamente entre aproximadamente 1 y aproximadamente 250 miligramos, de acuerdo con la aplicación en particular. La dosis real empleada puede variar dependiendo de la edad, sexo, peso del paciente y de la gravedad de la afección que se está tratando. Tales técnicas son bien conocidas por los expertos en la técnica. Generalmente, la forma de dosificación oral humana que contiene los ingredientes activos puede ser administrada 1 o 2 veces por día. La cantidad y frecuencia de la administración serán reguladas de acuerdo con el criterio del clínico que interviene. Un régimen de dosificación diaria generalmente recomendado para la administración oral puede oscilar entre aproximadamente 1.0 miligramo y aproximadamente 1.000 miligramos por día, en dosis única o en dosis divididas. A continuación se describen algunos términos útiles: Cápsula - se refiere a un contenedor o envase especial hecho de metilcelulosa, alcoholes polivinílicos, o gelatinas desnaturalizadas o almidón para sostener o contener composiciones que comprenden los ingredientes activos. Las cápsulas de coraza dura están típicamente preparadas de mezclas de gelatinas de piel porcina y hueso con resistencia al gel relativamente elevada. La cápsula misma puede contener pequeñas cantidades de tintes, agentes opacadores, plastificantes y conservantes.

Tableta - se refiere a una forma de dosificación sólida comprimida o moldeada que contiene los ingredientes activos con diluyentes adecuados. La tableta puede ser preparada mediante compresión de mezclas o granulaciones obtenidas por granulación en húmedo, granulación en seco o por compactación. Gel oral - se refiere a los ingredientes activos dispersados o solubilizados en una matriz semisólida hidrófila. Polvo para constitución se refiere a mezclas en polvo que contienen los ingredientes activos y diluyentes adecuados los cuales pueden ser suspendidos en agua o jugos. Diluyente - se refiere a sustancias que generalmente forman la porción principal de la composición o forma de dosificación. Los diluyentes adecuados incluyen azúcares tales como lactosa, sacarosa, manitol y sorbitol; almidones derivados de trigo, maíz, arroz y papa; y celulosas tales como celulosa microcristalina. La cantidad de diluyente en la composición puede oscilar entre aproximadamente 10 y aproximadamente 90% en peso de la composición total, preferentemente entre aproximadamente 25 y aproximadamente 75%, más preferentemente entre aproximadamente 30 y aproximadamente 60% en peso, aún más preferentemente entre aproximadamente 12 y aproximadamente 60%. Desintegrante - se refiere a materiales agregados a la composición para ayudarla a desintegrarse y liberar los medicamentos. Los desintegrantes adecuados incluyen almidones; almidones modificados "solubles en agua fría" tales como almidón de carboximetilo de sodio; gomas naturales y sintéticas tales como algarrobilla, goma carayá, guar, tragacanto y agar; derivados de celulosa tales como metilcelulosa y carboximetilcelulosa de sodio; celulosas microcristalinas y celulosas microcristalinas entrelazadas tales como croscarmelosa sódica; alginatos tales como ácido algínico y alginato de sodio; arcillas tales como bentonitas; y mezclas efervescentes. La cantidad de desintegrante en la composición puede oscilar entre aproximadamente 2 y aproximadamente 15% en peso de la composición, más preferentemente entre aproximadamente 4 y aproximadamente 10% en peso. Aglutinante - se refiere a sustancias que unen o "pegan" polvos entre si y los hacen cohesivos mediante la formación de granulos, sirviendo de ese modo como el "adhesivo" en la formulación. Los aglutinantes agregan fuerza cohesiva ya disponible en el diluyente o agente que otorga densidad ("bulking agent"). Los aglutinantes adecuados incluyen azúcares tales como sacarosa; almidones derivados de trigo, maíz, arroz y papa; gomas naturales tales como goma de acacia, gelatina y tragacanto; derivados de algas marinas tales como ácido algínico, alginato de sodio y alginato de calcio y amonio; materiales celulósicos tales como metilcelulosa y carboximetilcelulosa de sodio e hidroxipropilmetilcelulosa; polivinilpirrolidona; y materiales inorgánicos tales como silicato de magnesio aluminio. La cantidad de aglutinante en la composición puede oscilar entre aproximadamente 2 y aproximadamente 20% en peso de la composición, más preferentemente entre aproximadamente 3 y aproximadamente 10% en peso, aún más preferentemente entre aproximadamente 3 y aproximadamente 6% en peso. Lubricante - se refiere a una sustancia agregada a la forma de dosificación para permitir que la tableta, granulos, etc. después de haberse comprimido, se libere del molde o matriz reduciendo la fricción o el desgaste. Los lubricantes adecuados incluyen estearatos metálicos tales como estearato de magnesio, estearato de calcio o estearato de potasio; ácido esteárico; ceras de alto punto de fusión; y lubricantes hidrosolubles tales como cloruro de sodio, benzoato de sodio, acetato de sodio, oleato de sodio, polietilenglicoles y d'l-leucina. Los lubricantes son generalmente agregados en el último paso antes de la compresión, puesto que deben estar presentes sobre las superficies de los granulos y entre medio de los mismos y las partes de la prensa de tableteado. La cantidad de lubricante en la composición puede oscilar entre aproximadamente 0.2 y aproximadamente 5% en peso de la composición, preferentemente entre aproximadamente 0.5 y aproximadamente 2%, más preferentemente entre aproximadamente 0.3 y aproximadamente 1.5% en peso. Agente del deslizamiento - material que evita la aglomeración y mejora las características de fluidez de las granulaciones, de modo que el flujo sea suave y uniforme. Los agentes del deslizamiento adecuados incluyen dióxido de silicio y talco. La cantidad de agente de deslizamiento en la composición puede oscilar entre aproximadamente 0.1 % y aproximadamente % en peso de la composición total, preferentemente entre aproximadamente 0.5 y aproximadamente 2% en peso. Agentes colorantes - excipientes que proporcionan coloración a la composición o a la forma de dosificación. Tales excipientes pueden incluir tintes para alimento y tintes para alimento adsorbidos sobre un adsorbente adecuado tal como arcilla u óxido de aluminio. La cantidad del agente colorante puede variar entre aproximadamente 0.1 y aproximadamente 5% en peso de la composición, preferentemente entre aproximadamente 0.1 y aproximadamente 1 %. Biodisponibilidad - se refiere al índice y grado en el cual el ingrediente farmacológico activo o porción terapéutica es absorbida en la circulación sistémica desde una forma de dosificación administrada en comparación con un patrón o control. Los métodos convencionales para preparar tabletas son conocidos. Tales métodos incluyen métodos secos tales como compresión directa y compresión de granulación producida por compactación, o métodos húmedos u otros procedimientos especiales. Los métodos convencionales para preparar otras formas para administración tales como, por ejemplo, cápsulas, supositorios y similares son también bien conocidos. Otra modalidad de la invención describe el uso de los compuestos de la invención o composiciones farmacéuticas descritas anteriormente para el tratamiento de enfermedades tales como, por ejemplo, hepatitis C y similares. El método comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de la invención o composición farmacéutica a un paciente que tiene ese tipo de enfermedad o enfermedades y que necesita ese tipo de tratamiento. En aún otra modalidad, los compuestos de la invención pueden utilizarse para el tratamiento del VHC en seres humanos en modalidad de monoterapia o en una modalidad de terapia de combinación (por ejemplo, combinación dual, combinación triple etc.) tal como, por ejemplo, en combinación con agentes antivirales y/o inmunomoduladores. Ejemplos de tales agentes antivirales y/o inmunomoduladores incluyen Ribavirina (de Schering-Plough Corporation, Madison, Nueva Jersey) y Levovirin™ (de ICN Pharmaceuticals, Costa Mesa, California), VP 50406™ (de Viropharma, Incorporated, Exton, Pensilvania), ISIS 14803™ (de ISIS Pharmaceuticals, Carlsbad, California), Heptazyme™ (de Ribozyme Pharmaceuticals, Boulder, Colorado), VX 497™ (de Vértex Pharmaceuticals, Cambridge, Masachusets), Thymosin™ (de SciClone Pharmaceuticals, San Mateo, California), Maxamine™ (Maxim Pharmaceuticals, San Diego, California), micofenolato mofetilo (de Hoffman-LaRoche, Nutley, Nueva Jersey), interferón (tal como, por ejemplo, interferón-alfa, conjugados de PEG-alfa interferón) y similares. Los "conjugados de PEG- alfa interferón" son moléculas de alfa interferón covalentemente unidas a una molécula de PEG. Los ejemplos de conjugados de PEG-alfa interferón incluyen interferón alfa-2a (Roferon™, de Hoffman La-Roche, Nutley, Nueva Jersey) en la forma de interferón alfa-2a pegilado (por ejemplo, como es comercializado bajo la denominación comercial Pegasys™), interferón alfa-2b (Intron™, de Schering-Plough Corporation) en la forma de ¡nterferón alfa-2b pegilado (por ejemplo, según es comercializado bajo la denominación comercial PEG-Intron™), interferón alfa-2c (Berofor Alpha™, de Boehringer Ingelheim, Ingelheim, Alemania) o interferón de consenso según lo definido por determinación de una secuencia de consenso de interferón alfas naturales (Infergen™, de Amgen, Thousand Oaks, California). Como se indicó anteriormente, la ¡nvención también incluye a los tautómeros, rotámeros, enantiómeros y otros estereoisómeros de los compuestos de la invención. Por lo tanto, como podrá apreciar un experto en la técnica, algunos de los compuestos de la invención pueden existir en formas isoméricas adecuadas. Tales variaciones son contempladas como estando dentro del alcance de la invención. Otra modalidad de la ¡nvención describe un método para preparar los compuestos descritos en la presente memoria descriptiva. Los compuestos pueden ser preparados mediante diversas técnicas conocidas en la técnica. Los procedimientos ilustrativos son descritos en los siguientes esquemas de reacción. Las ilustraciones no deberían ser interpretadas como limitando el alcance de la invención la cual es definida en las reivindicaciones adjuntas. Las rutas mecánicas y estructuras análogas alternativas serán evidentes para los expertos en la técnica. Debe entenderse que si bien los siguientes esquemas ilustrativos describen la preparación de unos pocos compuestos de la invención representativos, la sustitución adecuada de cualquiera de los dos aminoácidos naturales y no naturales dará como resultado la formación de los compuestos deseados en base a tal sustitución. Se contemplan tales variaciones como estando dentro del alcance de la invención. Para los procedimientos descritos a continuación, se utilizan las siguientes abreviaturas: Abreviaturas Las abreviaturas que se utilizan en las descripciones de los esquemas, preparaciones y en los ejemplos que siguen son: THF: Tetrahidrofurano DMF: N,N-Dimetilformamida EtOAc: acetato de etilo AcOH: ácido acético HOOBt: 3-Hidroxi-1.2,3-benzotriazin-4(3H)-ona EDCI: Clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida NMM: N-Metilmorfolina ADDP: 1.1 '-(Azodicarbonil)dipiperidina DEAD: Dietilazodicarboxilato MeOH: Metanol EtOH: Etanol Et2O: éter dietílico DMSO: Dimetilsulfóxido HOBt: N-Hidroxibenzotriazol PyBrOP: Hexafluorfosfato de bromo-tris-pirrolidinofosfonio DCM: Diclorometano DCC: 1.3-Diciclohexilcarbodiimida TEMPO: 2.2,6.6-Tetrametil-1 -piperidiniloxi Phg: Fenilglícina Chg: Ciclohexilglicina Bn: Bencilo Bz: Bencilo Et: Etilo Ph: Fenilo ¡Boc: isobutoxicarbonilo iPr: ¡sopropilo 'Bu or Bu1: ter-Butilo Boc: ter-Butiloxicarbonilo Cbz: Benciloxicarbonilo Cp: Ciclopentildienilo Ts: p-toluensulfonilo MCPBA: ácido 3-cloroperbenzoico Me: Metilo HATU: hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1 -il)-1, 1 ,3,3-tetrametiluronio DMAP: 4-N,N-Dimetilaminop¡r¡dina Bop: Benzotriazol-1 -il-oxi-tris(dimetilamino)hexafluorfosfato PCC: clorocromato de piridinio Otras abreviaturas son las abreviaturas comúnmente utilizadas tales como aquellas acorde con las pautas publicadas por Journal of Organic Chemistry.

Esquemas Generales para la Preparación de Compuestos Objetivo Los compuestos de la presente invención fueron sintetizados utilizando los esquemas generales (Métodos A-E) descritos a continuación.

Método A: La desprotección de la funcionalidad N-Boc de 1.01 bajo condiciones acidas proporcionó la sal clorhidrato 1.02 la cual fue posteriormente acoplada con N-Boc-ter-leucina bajo metodología de acoplamiento peptídico (Louis A Carpino et al. "Preparation of uronium and immonium salts for peptide coupling", WO 2002094822 página 76) para dar 1.03. La desprotección de N-Boc seguida por tratamiento con isocianato apropiado dio la urea 1.05. La hidrólisis del éster metílico proporcionó el ácido 1.06. El acoplamiento peptídico del ácido 1.06 con la porción amida primaria P P' apropiada dio la hidroxilamida 1.07. La oxidación (Moffatt o Dess-Martln's dio como resultado el compuesto objetivo 1.08. 1.03 Método B El acoplamiento peptídico del ácido 1.06 con la porción amida secundaria P-i-P' apropiada dio la hidroxilamida 1.09. La oxidación (Moffatt o Dess-Martin's) dio como resultado el compuesto objetivo 1.10.

Método C En otra variación, el acoplamiento peptídico del N-Boc-P2-P3-ácido 1.17 con la porción amida P P' apropiada dio la hidroxilamida 1.11. La oxidación (Moffatt o Dess-Martin's) dio como resultado la cetoamida 1.12. La desprotección del N-Boc dio utilizando ácido fórmico o HCl 4 M en dioxano dio el formato o sal clorhidrato 1.13. El tratamiento con un isocianato adecuado (o equivalente de isocianato) dio como resultado el compuesto objetivo 1.14. o HCOOH Método D En aún otra variación, la sal clorhidrato 1.13 fue convertida en el carbamato de 4-nitrofenilo 1.15 mediante reacción con el cloroformiato de 4-nitrofenilo. El tratamiento posterior con una amina (o sal clorhidrato de amina) de elección proporcionó el compuesto objetivo 1.14. 1 14 Método E En aún otra variación, la sal clorhidrato dipeptídico 1.03 fue convertida en el carbamato de 4-nitrofeniIo según lo descrito anteriormente. El tratamiento con una amina (o sal clorhidrato de amina) de elección proporción el derivado de urea 1.05. La hidrólisis y posterior elaboración según lo descrito en los Métodos A/B proporcionaron los compuestos objetivos 1.14.

V PREPARACIÓN DE LOS INTERMEDIARIOS Preparación de porciones P1-P' Preparación de los intermediarios 10.11 y 10.12 Paso 1 : Una solución agitada de cetimina 10.01 (50 g, 187.1 mmoles) bajo N2 en THF seco (400 ml) se enfrió hasta -78 °C y se trató con solución 1 M de K-lBuO (220 ml, 1.15 equiv.) en THF. LA mezcla de reacción se calentó hasta 0 °C y se agitó durante 1 h y se trató con bromometilciclobutano (28 ml, 249 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 48 h y se concentró in vacuo. El residuo se disolvió en Et2O (300 ml) y se trató con HCl ac. (2 M, 300 ml) La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 5 h y se extrajo con Et2O (1 I). La capa acuosa se basificó hasta pH -12-14 con NaOH (50 % ac.) y se extrajo con CH2CI2 (3x300 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO ), se filtraron y se concentraron para dar la amina pura (10.02, 18 g) en forma de un aceite incoloro.

Paso 2 o HX c,H5 .02 10 ?3 Una solución de la amina 10.02 (18 g, 105.2 mmoles) a 0 °C en CH2CI2 (350 ml) se trató con di-ter-butildicarbonato (23 g, 105.4 mmoles) y se agitó a ta durante 12 h. Después de completarse la reacción (TLC), la mezcla de reacción se concentró ¡n vacuo y el residuo se disolvió en THF/H20 (200 ml, 1 :1) y se trató con LiOH«H2O (6.5 g, 158.5 mmoles) y se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcia de reacción se concentró y la capa acuosa básica se extrajo con Et O. La capa acuosa se acidificó con HCl conc. hasta pH~1-2 y se extrajo con CH2CI2. Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO ), se filtraron, y concentraron in vacuo para dar 10.03 en forma de un aceite incoloro viscoso el cual se utilizó para el siguiente paso sin más purificación.

Paso 3 -03 10.04 Una solución del ácido 10.03 (15.0 g, 62 mmoles) en CH2CI2 (250 ml) se trató con reactivo BOP (41.1 g, 93 mmoles), N-metilmorfolina (27 ml), clorhidrato de N,O-dimetilhidroxilamina (9.07 g, 93 mmoles) y se agitó durante la noche a ta. La mezcla de reacción se diluyó con HCl ac. 1 N (250 ml), y las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con CH2CI2 (3x300 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgS0 ), se filtraron y concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (SiO2, EtOAc/Hex 2:3) para dar la amida 10.04 (15.0 g) en forma de un sólido incoloro.

Paso 4 10434 10?5 Una solución de la amida 10.04 (15 g, 52.1 mmoles) en THF seco (200 ml) se trató por goteo con una solución de LiAIH4 (1 M, 93 ml, 93 mmoles) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y se extinguió cuidadosamente a 0 °C con una solución de KHSO4 (10% ac.) y se agitó durante 0.5 h. La mezcla de reacción se diluyó con HCl ac. (1 M, 150 ml) y se extrajo con CH2CI2 (3x200 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con HCl ac. (1 M), NaHCO3 saturado, salmuera y se secaron (MgSO4). La mezcla se filtró y concentró in vacuo para proporcionar 10.05 en forma de un aceite incoloro viscoso (14 g).

Paso 5 JOS 10.06 Una solución del aldehido 10.05 (14 g, 61.6 mmoles) en CH2CI2 (50 ml), se trató con Et3N (10.73 ml, 74.4 mmoles), y cianohidrina de acetona (10.86 g, 127.57 mmoles) y se agitó a temperatura ambiente durante 24 hrs. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y se diluyó con HCl ac. (1 M, 200 ml) y se extrajo en CH2CI2 (3x200 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con H2O, salmuera, se secaron (MgSO4), filtraron, concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (SiO2, EtOAc/Hex 1 :4) para proporcionar 10.06 (10.3 g) como un líquido incoloro Paso 6 .06 10.07 Se trató metanol saturado con HCI*, preparado mediante burbujeo de gas de HCl a través de CH3OH (700 ml) a 0°C, con la cianohidrina 10.06 y se calentó hasta reflujo durante 24 h. La reacción se concentró in vacuo para proporcionar 10.07, el cual se utilizó en el siguiente paso sin purificación.

* Alternativamente también puede utilizarse HCl 6M preparado mediante la adición de AcCI al metanol seco.

Paso 7 CIH 3N .07 10,08 Una solución del clorhidrato de amina 10.07 en CH2CI2 (200 ml) se trató con Et3N (45.0 ml, 315 mmoles) y Boc2O (45.7g, 209 mmoles) a -78 °C. Luego, la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche y se diluyó con HCl (2 M, 200 ml) y se extrajo en CH2CI2. Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO4) se filtraron y concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (EtOAc/Hex 1 :4) para proporcionar el hidroxiéster 10.08.

Paso 8. .08 10.09 Una solución del éster metílico 10.08 (3g, 10.5 mmoles) en THF/H2O (1 :1 ) se trató con LiOH«H2O (645 mg, 15.75 mmoles) y se agitó a ta durante 2 h. La mezcla de reacción se acidificó con HCl ac. (1 M, 15 ml) y se concentró in vacuo. El residuo se secó al vacío para dar 10.09 con rendimiento cuantitativo.

Paso 9 .09 10.10 Una solución del ácido 10.09 (anterior) en CH2CI2 (50 ml) y DMF (25 ml) se trató con NH4CI (2.94 g, 55.5 mmoles), EDCI (3.15 g, 16.5 mmoles), HOOBt (2.69 g, 16.5 mmoles), y NMM (4.4 g, 44 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 d. Los solventes se eliminaron bajo vacío y el residuo se diluyó con HCl ac. (250 ml) y se extrajo con CH2CI2. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHCO3 ac. sat., se secaron (MgSO4) se filtraron y se concentraron in vacuo para obtener 10.10, el cual se utilizó como estaba en los siguientes pasos. (Alternativamente 10.10 también puede obtenerse directamente mediante la reacción de 10.06 (4.5 g, 17.7 mmoles) con H2O2 ac. (10 ml), LiOH»H2O (820 mg, 20.8 mmoles) a 0 °C en 50 ml de CH3OH durante 0.5 h.) Paso 10 BOCHN .10 1°-11 Una solución de 10.10 obtenido en el paso previo se disolvió en HCl 4 N en dioxano y se agitó a ta durante 2 h. La mezcla de reacción se concentró in vacuo para dar el intermediario 10.11 como un sólido, el cual se utilizó sin más purificación.

Paso 1 1 .03 1Q.12 El intermediario requerido 10.12 fue obtenido a partir del compuesto 10.09 utilizando esencialmente los procedimientos antes descritos en los Pasos 9, 10 utilizando 2.0 equivalentes de ajilamina en lugar de cloruro de amonio.

Preparación del Intermediario 11.01 Paso 1 A una solución de 4-pentin-1-ol, 11.02 (4.15 g; Aldrich) se agregó Peryodinano de Dess-Martin (30.25g; Aldrich) y la mezcla resultante se agitó durante 45 min. antes de la adición de (ter-Butoxicarbonilmetilen)trifenilfosforano (26.75g; Aldrich). La reacción oscura resultante se agitó durante la noche, se diluyó con EtOAc), se lavó con sulfito de sodio ao, NaHCO3 ac. sat., agua, salmuera y se secó. Los volátiles fueron eliminados bajo presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando 1 % EtOAc en hexanos como eluyente para dar el compuesto deseado, 11.03 (3.92g). Algunas fracciones impuras también fueron obtenidas aunque dejadas de lado en este momento.

Paso 2 Utilizando el alqueno 11.03 (1.9 g) en n-propanol (20 ml; Aldrich)), bencilcarbamato (4.95 g; Aldrich) en n-propanol (40 ml), NaOH (1.29 g) en agua (79 ml), hipoclorito de ter-butilo (3.7 ml), (DHQ)2PHAL (0.423 g; Aldrich)) en n-propanol (37.5 ml), y osmato de potasio:dehidrato (0.1544 g; Aldrich) y el procedimiento expuesto en Angew. Chem. Int. Ed. Engl (1998), 35, (23/24), pp. 2813-7. dio un producto crudo el cual se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando EtOAc:Hexanos (1 :5) para dar el aminoalcohol deseado 11.04 (1.37g, 37%) en forma de un sólido blanco.

Paso 3 Al éster 11.04 (0.700 g) se agregó HCl 4M en dioxano (20 ml; Aldrich) y la mezcla resultante se dejó reposar a temperatura ambiente durante la noche. Los volátiles fueron eliminados bajo presión reducida para dar el ácido 11.05 (0.621 g) en forma de un sólido blanco.

Paso 4 El reactivo BOP (3.65 g; Sigma) seguido por trietilamina (3.45 ml) fueron agregados hasta una solución de diclorometano (20 ml) del ácido carboxílico 11.05 (2.00 g) y alilamina (0.616 ml) a temperatura ambiente y la mezcla resultante se agitó durante la noche. La mezcla de reacción se repartió entre EtOAc y 10% HCl ac. La fase orgánica se separó, se lavó con bicarbonato de sodio ac. sat., agua, se secó (sulfato de magnesio). El producto de reacción crudo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando (EtOAcHexanos; 70:30) como eluyente para proporcionar la amida deseada 11.01 (1.73 g) en forma de un aceite amarillo viscoso.

Preparación de los Intermediarios 12.03 y 12.04 Paso 1 R BnorcHHIWXl 12.0 12.02 El compuesto 12.01 (el Compuesto 12.01 fue obtenido comercialmente o puede ser sintetizado utilizando química similar a la descrita para la síntesis de 10.11 utilizando ciclopropano de bromometilo en lugar de bromometilciclobutano) fue convertido en el material requerido 12.02 utilizando esencialmente los procedimientos descritos para el Intermediario 10.11, Pasos 3-8.

Paso 2 BocHN 12.02 12.03 El compuesto 12.02 fue convertido en el intermediario requerido 12.03 utilizando esencialmente los procedimientos descritos para el Intermediario 10.11 , Pasos 9, 10.

Paso 3 12.02 12.04 El compuesto 12.02 fue convertido en el intermediario requerido 12.03 utilizando esencialmente los procedimientos descritos para el Intermediario 10.12, Paso 11.

Preparación del Intermediario 13.01 Paso 1 13.03 A una solución agitada de 1 -nitrobutano, 13.02 (16.5 g, 0.16 moles) y ácido glioxílico en H2O (28.1 g, 0.305 moles) y MeOH (122 ml) a 0°C-5°C, se agregó por goteo trietilamina (93 ml, 0.667 moles) durante 2 hrs. La solución se calentó hasta temperatura ambiente, se agitó durante la noche y se concentró hasta sequedad para dar un aceite. Luego, el aceite se disolvió en H2O y se acidificó hasta pH =1 con 10% HCl, seguido por extracción con EtOAc. La solución orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2S?4, se filtró y se concentró hasta sequedad para dar el producto 13.03 (28.1 g, rendimiento 99%).

Paso 2 13 ai 13.04 A una solución agitada del compuesto 13.03 (240 g, 1.35 moles) en ácido acético (1.25 L) se agregó 10% Pd/C (37 g). La solución resultante se hidrogenó a 401.2 kPa (41.48 kgf/cm2) durante 3 hrs y luego a 408 kPa (4.218 kgf/cm2) durante la noche. Luego, el ácido acético se evaporó y se azeotropizó 3 veces con tolueno, luego se trituró con MeOH y éter. La solución luego se filtró y se azeotropizó dos veces con tolueno para dar 13.04 en forma de un sólido blancuzco (131 g, 0.891 moles, 66%).

Paso 3 13.04 13.05 A una solución agitada del aminoácido 13.04 (2.0 g, 13.6 mmoles) en dioxano (10 ml) y H2O (5 ml) a 0°C, se agregó solución NaOH 1 N (4.3 ml, 14.0 mmoles). La solución resultante se agitó durante 10 minutos, seguido por adición de di-í-butildicarbonato (0.110 g, 14.0 mmoles) y se agitó a 0°C durante 15 minutos. Luego, la solución se calentó hasta temperatura ambiente, se agitó durante 45 minutos y se mantuvo en el refrigerador durante la noche y se concentró hasta sequedad para dar un material crudo. A la solución de este material crudo en EtOAc (100 ml) y hielo, se agregó KHSO4 (3.36 g) y H2O (32 ml) y se agitó durante 4-6 minutos. Luego, la capa orgánica se separó y la capa acuosa se extrajo dos veces con EtOAc y ia capa orgánica combinada se lavó con agua, salmuera, se secó sobre Na2S?4, se filtró y concentró hasta sequedad para dar el producto 13.05 en forma de una goma clara (3.0 g, rendimiento 89%).

Paso 4 13.05 13.01 El compuesto 13.05 fue convertido en el intermediario requerido 13.01 utilizando esencialmente los procedimientos descritos para el Intermediario 10.12, Paso 11.

Preparación del Intermediario 14.01 Paso 1 El compuesto 14.02 fue convertido en el material requerido 14.03 utilizando esencialmente los procedimientos descritos para el Intermediario 13.01, Pasos 1-3.

Paso 2 14.03 14J01 El compuesto 14.03 fue convertido en el intermediario requerido 14.01 utilizando esencialmente los procedimientos descritos para el Intermediario 10.12, Paso 11.

Preparación del Intermediario 15.01 Paso 1 .02 15.03 A una suspensión de nitrito de plata (9 g, 58.5 mmoles) en éter dietílico (25 ml) a 0°C se agregó una solución de 4-yodo-1 ,1 ,1-trifluorbutano, .02 (10 g, 42.0 mmoles) en éter dietílico (25 ml) lentamente a través de un embudo de adición (aprox. 15 min). La mezcla resultante se agitó vigorosamente a 0°C y se calentó hasta temperatura ambiente. Después de 50 h, el material sólido se separó por filtración a través de una almohadilla de celite. La solución de éter dietílico resultante se concentró in vacuo para dar .03 como un aceite incoloro, el cual se utilizó sin más purificación.

Paso 2 OH OXJ " CF* BocHN ^Y ^OH .03 CF,. 15.04 El compuesto 15.03 fue convertido en el material requerido 15.04 utilizando esencialmente los procedimientos descritos para el Intermediario 13.01 , Pasos 1 -3.

Paso 3 .04 15J01 El compuesto 15.04 fue convertido al intermediario requerido .01 utilizando esencialmente los procedimientos descritos para el Intermediario 10.12, Paso 1 1.

Preparación de Intermediario 16.01 1G.02 16.01 El ácido 16.02 (Winkier, D.; Burger, K„ Synthesis, 1996, 1419) es procesado según lo antes descrito (Preparación de Intermediario 10.12) para dar el intermediario esperado 16.01.

PREPARACIÓN DE PORCIONES P2 / P3-P2 Preparación de Intermediario 20.01 - A C hCHt ? H.HC 20J01 El aminoéster 20.01 se preparó siguiendo el Método de R. Zhang y J. S. Madalengoitia (J. Org. Chem. 1999, 64, 330), con la excepción de que el grupo Boc fue disociado mediante la reacción del aminoácido Boc-protegido con HCl metanólico. (Nota: En una variación de la síntesis reportada, el iluro de sulfonio utilizado para la construcción del anillo de 3,4-dimetilciclopropilo fue reemplazado con el iluro de fosfonio correspondiente).

Preparación de Intermediario 21.01 Paso 1 21.02 21.03 A una solución agitada de ?/-Boc-3.4-deshidroprolina 21.02 (5.0 g, 23.5 mmoles), dicarbonato de di-fer-butilo (7.5 g, 34.4 mmoles), y 4-N,N-dimetilaminopiridina (0.40 g, 3.33 mmoles) en acetonitrilo (100 ml) a temperatura ambiente se agregó trietilamina (5.0 ml, 35.6 mmoles). La solución resultante se agitó a esta temperatura durante 18 h antes de concentrarla in vacuo. El residuo marrón oscuro se purificó mediante cromatografía de vaporización instantánea eluyendo con 10-25% EtOAc/hexano para dar el producto 21.03 en forma de un aceite amarillo pálido (5.29 g, 84%).

Paso 2 2103 21.04 A una solución agitada del derivado de deshidroprolína 21.03 (10.1 g, 37.4 mmoles), cloruro de benciltrietilamonio (1.60 g, 7.02 mmoles) en cloroformo (120 ml) a temperatura ambiente se agregó hidróxido de sodio acuoso 50% (120 g). Después de agitar vigorosamente a esta temperatura durante 24 h, la mezcla oscura se diluyó con CH2CI2 (200 ml) y éter dietílico (600 ml). Después de que las capas se separaron, la solución acuosa se extrajo con CH2CI2/Et20 (1 :2, 3x600 ml). La solución orgánica se secó (MgS04) y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de vaporización instantánea utilizando 5-20% EtOAc/hexano para dar 9.34 g (71 %) de 21.04 en forma de un sólido blancuzco.

Paso 3 21.04 21-05 La solución de 21.04 (9.34 g, 26.5 mmoles) en CH2CI2 (25 ml) y CF3CO2H (50 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 4.5 horas antes de su concentración in vacuo para dar un residuo marrón, 21.05 el cual se utilizó en el Paso 4 sin más purificación.

Paso 4 Cl -Cl HCl OO2H «5CO2H ?c0iMe 21.05 21.01 Se agregó ácido clorhídrico concentrado (4.5 ml) a una solución del residuo 21.05 del Paso 3 en metanol (70 ml) y la mezcla resultante se calentó hasta 65°C en un baño de aceite. Después de 18 h, la mezcla se concentró in vacuo para dar un aceite marrón 21.01, el cual se utilizó sin más purificación.

Preparación del Intermediario 22.01 Paso 1 22.02 22.03 Se agregó bis(trimetilsilil)amida de potasio (158 ml de una solución 0.5M en tolueno; 79 mmoles) a una suspensión agitada de bromuro de ciclopropiltrifenil-fosfonio (33.12 g; 86.4 mmoles) en tetrahidrofurano anhidro (130 ml) y la mezcla naranja resultante se agitó bajo una atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente durante un período de 1h., antes de la adición del aldehido 22.02 (9.68 g; 42.2 mmoles) en THF (8 ml). Luego, la reacción se llevó a reflujo bajo una atmósfera de nitrógeno durante un período de 2 h. Después de enfriamiento, se agregaron metanol, éter dietílico y sal Rochelles. La fase orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó y concentró bajo presión reducida. Ei producto de reacción crudo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando EtOAc-hexano (1 :99) a EtOAc-hexano (5:95) para proporcionar el alqueno 22.03 (8.47g) en forma de un aceite amarillo.

Paso 2 22.03 22O Una solución de HCl 1 M en MeOH/MeOAc se preparó agregando 14.2 ml de cloruro de acetilo por goteo en metanol frío y diluyendo la solución resultante hasta 200 ml a temperatura ambiente. El carbamato 22.03 (9.49 g; 37.5 mmoles) se disolvió en metanol (12 ml) y se agregó a HCl 1 M en MeOH/MeOAc (150 ml) mientras se enfriaba en un baño de hielo. La mezcla resultante se mantuvo a esta temperatura durante 1 h, luego el baño de hielo se eliminó y la agitación continuó durante la noche a temperatura ambiente. Los volátiles fueron eliminados bajo presión reducida para proporcionar un aceite amarillo el cual se utilizó en el siguiente paso sin purificación. El aceite amarillo se disolvió en una mezcla de THF (30 ml) y MeOH (20 ml) y se trató con trietilamina (15 ml; 108 mmoles) hasta que la solución era de pH=9-10. Después de colocación en un baño de hielo, la mezcla se trató con N-Boc-Gly-OSu (11.22g; 41 mmoles). El baño de hielo se retiró y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Los volátiles se eliminaron bajo presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando metanol (1-3%) en diclorometano proporcionando la amida deseada 22.04 (9.09 g).

Paso 3 22,04 22D5 El alcohol 22.04 (9.09 g; 33.6 mmoles) se disolvió en acetona (118.5 ml) y se trató con 2.2-dimetoxipropano (37.4 ml;304 mmoles) y BF3:Et2O (0.32 ml; 2.6 mmoles) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante un período de 5.5 h. La solución de reacción se trató con unas pocas gotas de trietilamina y los volátiles fueron eliminados bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando 5-25% EtOAc en hexanos para proporcionar el N,0-acetal 22.05 (8.85 g).

Paso 4 22 05 22.06 22-0? El carbamato 22.05 (8.81 g; 28.4 mmoles) se disolvió en acetonitrilo (45 ml) y la solución se enfrió hasta -40°C bajo una atmósfera de nitrógeno. Se agregaron piridina (6.9 ml; 85.3 mmoles) seguido por tetrafluoroborato de nitrosio (6.63 g; 56.8 mmoles) y la mezcla de reacción resultante se mantuvo por debajo de 0°C hasta que la TLC indicó que no había más material de partida (aprox. 2.25 h.). Se agregó pirrolidina (20 ml; 240 mmoles) y el baño de enfriamiento se retiró y se continuó la agitación a temperatura ambiente durante 1h. y luego los volátiles se eliminaron bajo presión reducida. El residuo se pasó rápidamente a través de una almohadilla de gel de sílice para proporcionar un aceite amarillo. El aceite amarillo se disolvió en benceno anhidro (220 ml) y se agregó acetato de paladio (0.317 g; 1.41 mmoles) antes de calentar la mezcla resultante a reflujo, bajo una atmósfera de nitrógeno durante un periodo de 1.5 h. Después de enfriamiento, los volátiles fueron eliminados bajo presión reducida y el residuo oscuro se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando EtOAc-hexano (1 :4) para proporcionar el I) la trans-pirrolidinona 22.06 (1.94g) seguido por ii) la cis-pirrolidinona 22.07 (1.97 g).

Paso 5 21 O6 22J08 El HCl 1 M recientemente preparado en MeOAc/MeOH (10 ml; según lo descrito anteriormente) fue agregado al N,O-acetal 22.06 y se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. El solvente se eliminó bajo presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando 0-4% de MeOH en diclorometano como eluyente para proporcionar el alcohol deseado 22.08 (1.42 g), un aceite amarillo.

Paso 6 22.08 A una solución de la lactama 22.08 (1.29 g; 8.44 mmoles) en tetrahidrofurano anhidro (55 ml) se agregó hidruro de litio y aluminio (2.40 g; 63.2 mmoles) y la mezcla resultante se llevó a reflujo durante 8 h. Después de enfriamiento, se agregó agua, seguido por NaOH ac. 15% y la mezcla resultante se filtró a través de celite y el sólido se lavó completamente con THF y MeOH. El solvente se eliminó bajo presión reducida y el residuo se volvió a disolver en diclorometano, se secó y concentró bajo presión reducida para proporcionar la pirrolidina, utilizada sin purificación. Se agregó la base Hunigs (4.5 ml; 25.8 mmoles) a una mezcla de N-Boc-L-ter-Leu-OH (1.76 g; 7.6 mmoles). La pirrolidina cruda y HATU (2.89 g; 7.6 mmoles) en diclorometano anhidro (50 ml) a -60°C, bajo una atmósfera de nitrógeno. La reacción resultante se dejó llegar a temperatura ambiente lentamente, durante la noche. Se agregó EtOAc y la solución amarilla se lavó con HCl ac. dil., bicarbonato de sodio ac. sat., agua y salmuera. La capa orgánica se secó y se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando EtOAc:hexanos (1 :3) para dar la amida deseada 22.09 (2.00 g).

Paso 7 22,09 22DI El alcohol 22.09 (2.00 g; 5.67mmoles) se disolvió en acetona (116 ml) y se enfrió en un baño de hielo durante 10 min. Esta solución fue luego agregada a un reactivo Jones enfriado (14.2ml; aprox 2 mmoles/ml) y la mezcla resultante se agitó a 5°C durante 0.5 h y el baño de enfriamiento fue retirado. La reacción se agitó durante 2 horas adicionales, a temperatura ambiente, antes del agregado a sulfato de sodio (28.54 g), celite (15g) en EtOAc (100ml). Se agregó isopropanol (15 ml) después de 1 min y luego se agitó durante 10 min. más y se filtró. El filtrado se concentró bajo presión reducida, proporcionando un aceite marrón el cual se disolvió en EtOAc. Esta solución se lavó con agua, ácido cítrico ac. al 3%, salmuera, se secó y concentró para proporcionar el ácido carboxílico deseado 22.01 (1.64 g) en forma de un sólido blanco.

Preparación de Intermediario 23.01 Paso 1 A la mezcla del éster 23.02 (6.0 g) y tamiz molecular (5.2 g) en cloruro de metileno anhidro (35 ml) se agregó pirrolidina (5.7 ml, 66.36 mmoles). La suspensión marrón resultante se agitó a temperatura ambiente bajo N2 durante 24 h, se filtró y se lavó con CH3CN anhidro. El filtrado combinado se concentró para proporcionar el producto deseado, 23.03.

Paso 2 A una solución del producto 23.03 del paso precedente en CH3CN (35 ml) se agregó K2CO3 anhidro, cloruro de metalilo (2.77 g, 30.5 mmoles), Nal (1.07 g, 6.7 mmoles). La suspensión resultante se agitó a temperatura ambiente bajo N2 durante 24 h. Se agregaron 50 ml de agua enfriada con hielo seguido por una solución KHSO 2N hasta que el pH fue de 1. Se agregó EtOAc (100 ml) y la mezcla se agitó durante 0.75 h. La capa orgánica combinada se recogió y se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4, y se evaporó para proporcionar el producto deseado, 23.04.

Paso 3 El producto 23.04 del paso precedente (2.7 g, 8.16 mmoles) se disolvió en dioxano (20 ml) y se trató con LiOH 1 N recientemente preparado (9 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente bajo N2 durante h. La mezcla de reacción se absorbió en EtOAc y se lavó con H2O. La fase acuosa combinada se enfrió hasta 0°C y se acidificó hasta pH 1.65 utilizando HCl 1 N. La mezcla turbia se extrajo con EtOAc (2 x 100 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4, y se concentró para dar el ácido deseado, 23.05 (3.40 g).

Paso 4 A una suspensión de NaBH(OAc)3 (3.93g, 18.5 mmoles) en CH2CI2 (55 ml) se agregó una solución del producto 23.05 del paso precedente en CH2CI2 anhidro (20 ml) y ácido acético (2 ml). La suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 20 h. Se agregó agua enfriada con hielo (100 ml) a la suspensión y se agitó durante 1/2 hr. La capa orgánica se separó, se filtró, se secó y se evaporó para proporcionar el producto deseado, 23.06.

Paso 5 A una solución del producto 23.06 del paso precedente (1.9 g) en MeOH (40 ml) se trató con exceso de solución de CH2N2 / Et20 y se agitó durante la noche. La mezcla de reacción se concentró hasta sequedad para proporcionar un residuo crudo. El residuo se cromatografió sobre gel de sílice, eluyendo con un gradiente de EtOAc / hexano para dar 1.07 g del producto deseado puro, 23.07.

Paso 6 A una solución del producto 23.07 del paso precedente (1.36 g) en CH2CI2 anhidro (40 ml) se trató con BF3. Me2O (0.7 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 h y se extinguió con NaHCO3 sat. (30 ml) y se agitó durante 1/2 hr. La capa orgánica se separó y la capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04, se concentró para dar el residuo crudo. El residuo se cromatografió sobre gel de sílice eluyendo con un gradiente de EtOAc / hexano para dar 0.88 g del compuesto deseado, 23.08.

Paso 7 A una solución del producto 23.08 (0.92 g) del paso precedente en MeOH (30 ml) se agregó Pd/C al 10 % (0.16 g) a temperatura ambiente y se hidrogenó a temperatura ambiente bajo presión de 1 atm. La mezcla de reacción se agitó durante 4 h y se concentró hasta sequedad para proporcionar el compuesto deseado, 23.01.

PREPARACIÓN DE PORCIONES P3 Preparación del Intermediario 50.01 Paso 1 50 ? 2 50.03 A una solución de 50.02 (15 g) en MeOH (150 ml) se agregó HCl conc. (3-4 ml) y la mezcla se llevó a reflujo durante 16 h. La mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se concentró. El residuo se absorbió en éter dietílico (250 ml) y se lavó con solución de bicarbonato de sodio saturado frío y salmuera. La capa orgánica se secó (Na2S04) y se concentró para dar el éster metílico 50.03 (12.98 g) el cual se utilizó más adelante sin más purificación.

Paso 2 50.03 50.04 El éster metílico 50.03 anterior se disolvió en cloruro de metileno (100 ml) y se enfrió hasta -78°C, bajo atmósfera de nitrógeno. Se agregó por goteo DIBAL (solución 1.0 M en cloruro de metileno, 200 ml) durante un período de 2 h. La mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla de reacción se enfrió hasta 0°C y se agregó por goteo MeOH (5-8 ml). Una solución de tartarato de potasio sódico al 10% acuoso (200 ml) se agregó lentamente con agitación. Se diluyó con cloruro de metileno (100 ml) y la capa orgánica se separó (junto con algo de precipitado blanco). La capa orgánica se lavó con HCl 1 N (250 ml), salmuera (200 ml), se secó (Na2SO4) y se concentró para proporcionar el alcohol 50.04 (11.00 g) en forma de un aceite claro.

Paso 3 50J4 50.05 El alcohol 50.04 anterior se disolvió en cloruro de metileno (400 ml) y se enfrió hasta 0°C bajo atmósfera de nitrógeno. Se agregó PCC (22.2 g) en porciones y la mezcla de reacción se calentó lentamente hasta temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla de reacción se diluyó con éter dietílico (500 ml) y se filtró a través de una almohadilla de celite. El filtrado se concentró y el residuo se absorbió en éter dietílico (500 ml). Esto se hizo pasar a través de una almohadilla de gel de sílice y el filtrado se concentró para proporcionar el aldehido 50.05 el cual se utilizó más adelante sin más purificación.

Paso 4 50.01 El aldehido 50.05 anterior fue convertido en el material deseado 50.01 utilizando esencialmente el método de Chakraborty et. al (Tetrahedron, 1995, 51 (.33), 9179-90).

PREPARACIÓN DE EJEMPLOS ESPECÍFICOS EJEMPLO 1 Síntesis de compuesto de fórmula 10001 10001a 10001b La amina, 10001a, (C. A. Busacca ef al, Tetrahedron: Asymmetry; (2000) 9 1907) (1.5 g, 6.9 mmoles, 1 equiv.) se disolvió en diclorometano seco 20 ml) y se enfrió hasta -78 °C. Se agregaron 3 mi (3 equiv.) de Et3N seguido por la lenta adición de cloruro de dimetilsulfamilo (1.5 eq., Sigma-Aldrich) disuelto en DCM. La temperatura se mantuvo a -78°C hasta completarse la adición y luego se agitó durante la noche permitiéndole subir hasta temperatura ambiente. Se diluyó con cloruro de metileno y se lavó con agua, HCl ac. 1 N y finalmente con salmuera. Las capas orgánicas se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y concentraron in vacuo. El producto crudo aislado fue purificado mediante columna de vaporización instantánea (10 -280 % EtOAc-Hexano) para proporcionar 1.27g (58%) de 10001b. 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) d, 4.6 (d, 1 H), 3.45 (m, 1 H,), 3.25 (d, 1 H), 2.89 (s, 6 H), 1.89 (bs, NH), 1.22 (s, 9H), 0.98 (s, 9 H). EM (ESI), m/z, intensidad relativa 324 [(M+1 ) 85], 268 (100), 224 (50).

Paso B: 10001b 10001c A la sulfonilurea protegida con Boc 10001b (440 mg, 1.25 mmoles, 1 equiv.) en DMF( 10 ml) a 0o C se agregó Cs2CO3 (613 mg, 1.5 equiv, 1.88 mmoles) y Mei (6.36 mmoles, 5 equiv., 0.601 ml) bajo atmósfera inerte. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 90 min y se extinguió con agua. Las capas acuosas fueron extraídas con EtOAc, lavadas 4 veces con agua y salmuera. Las capas orgánicas se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el solvente se separó por evaporación para proporcionar 420 mg (91%) de 10001c el cual se utilizó en la siguiente reacción sin más purificación. 1H RMN (CDCI3, 300 MHz)d, 4.59 (d, 1 H), 3.62-3.58 (m, 1 H,), 3.29-3.22 (m, 1 H), 2.80 (s, 3 H), 2.79 (s, 6H), 1.89 (bs, NH), 1.22 (s, 9 H), 0.98 (s, 9 H). EM (ESI), m/z, intensidad relativa 338 [(M+1 ) 60], 282 (100), 238 (90) Paso C: 10001c 10001d A la sulfonilurea protegida con Boc 10001c (890 mg, 1 equiv.) se agregó solución 4M de HCl en dioxano (25 ml) a temperatura ambiente y se agitó durante 1 hr. Después de la desaparición del material de partida (TLC), la mezcla de reacción se concentró y se azeotropizó con hexanos y éter. El residuo se trituró con éter y el sólido separado se filtró y se secó al vacío para dar un sólido amarillo pálido (720 mg, -100%). Se utilizó en una reacción adicional sin purificación.

Paso D: 10001d 10001e A la sal clorhidrato de amina 10001d (720 mg, 2.63 mmoles) en diclorometano (1 5 ml) se agregaron 15 ml de NaHCO3 saturado ac. y se agitó vigorosamente a 0°C durante 5 min. Se extrajo con jeringa una solución de fosgeno (2 equiv. 20% en tolueno) a la capa inferior y se continuó la agitación vigorosa inmediatamente. Se controló la TLC algunas veces y después de 2 horas, mostró un completo consumo de material de partida. La capa de cloruro de metileno se separó y la capa acuosa se extrajo con diclorometano (30 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y concentraron utilizando un evaporador rotativo bajo presión reducida a temperatura ambiente hasta la mitad del volumen y luego se introdujo N2 durante 15 minutos. Se diluyó la solución hasta 130 ml con diclorometano y se utilizó como una solución 0.02 M en otras reacciones.

Paso E: 10001e 10001f 10001 A la sal clorhidrato de amina, 10001f (sintetizada mediante acoplamiento del intermediario 10.12 y 1.17 utilizando HATU seguido por oxidación Dess-Martin y desprotección Boc siguiendo el método C o el procedimiento descrito para la síntesis de 13001h) (130 mg, 0.261 mmoles, 1 equiv.) en diclorometano (5 ml) se agregó DIPEA (6 equiv.) a 0°C. Una solución de isocianato 10001e (1 equiv, 13 ml de solución 0.02M) bajo atmósfera de N2 y se agitó durante 30 min a temperatura del hielo y 90 min a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se extinguió con ácido cítrico y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y concentró in vacuo. El producto crudo se purificó utilizando cromatografía de vaporización instantánea (SiO2, 10-40% acetona-hexano) para proporcionar 110 mg (59%) de 10001 en forma de un sólido incoloro. EM (ESI), m/z, intensidad relativa 724[(M+1 ) 45], 377 (100).

EJEMPLO 2 Síntesis del compuesto de fórmula 10002 Paso A: 10002a 10002b A una solución de la sal clorhidrato de amina 10002a (500 mg, 1.00 mmoles, 1 equiv.) en diclorometano (15 ml) se agregó una solución de NaHCO3 ac. sat. (15 ml). La mezcla de reacción se agitó vigorosamente a temperatura del hielo durante 5 min. Se separó por jeringa una solución de fosgeno (2 equiv. 20 % en tolueno) a la capa inferior y se continuó la agitación vigorosa inmediatamente. Se controló la TLC algunas veces y después de 2 horas mostró un completo consumo de material de partida y luego se separaron las capas. Se lavó la capa de agua una vez más con DCM (3 ml) y se secó sobre sulfato de sodio. Se filtró y evaporó a alto vacío hasta la mitad del volumen y luego se purgó N2 durante 15 minutos. Se utilizó 10002b como solución base de 0.02M diluyendo con 50 ml de diclorometano.

Paso B: 10001d 10002b 10002 A la sal de amonio 10001d, (80 mg, 0.293 mmoles, 1 equiv.) en diclorometano (10 ml) se agregó DIPEA (6 equiv.) a temperatura del hielo. Se agregó isocianato 10002b (1 equiv, 14.6 ml de solución 0.02M) bajo atm. de N2, y se agitó durante 30 min a temperatura del hielo y 90 min a temperatura ambiente. Se extinguió con ácido cítrico y se extrajo con EtOAc y se lavó con salmuera. Se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se filtró y separó por evaporación el solvente. El producto crudo se purificó utilizando cromatografía flash sobre gel de sílice (10-40% acetona-hexano) para proporcionar 120 mg (57 %) de 10002 en forma de un sólido incoloro. EM (ESI), m/z, intensidad relativa 724 [(M+1 ) 100], 461 (45), 403 (80).

EJEMPLO 3 Síntesis del compuesto de la Fórmula 10003 Paso A: 10003a 10003b Al clorhidrato de amina 10003a, preparado según lo descrito anteriormente, (500 mg, 1.03 mmoles, 1 equiv.) en DCM (15 ml) se agregaron 15 ml de NaHCO3 sat. Se agitó vigorosamente a la temperatura del hielo durante 5 min. Se detuvo la agitación y se separó mediante jeringa el fosgeno (1.11 ml, 2 equiv., 20% en tolueno) a la capa inferior y se continuó la agitación vigorosa inmediatamente. Se controló la TLC algunas veces y después de 2 horas mostró un completo consumo de material de partida y luego se separaron las capas. Se lavó la capa acuosa una vez más con DCM (3 ml) y se secó sobre sulfato de sodio. Se filtró y evaporó a alto vacío hasta la mitad del volumen y luego se purgó con N2 durante 15 minutos. Se utilizó como una solución base de 10003b (0.02M) diluyendo con 50 ml de diclorometano.

Paso B: 10001d 10003b 10003 A una solución de sal de amonio, 10001d, (20 mg, 0.073mmoles, 1 equiv.) en DCM (5 ml) se agregó DIPEA (6 equiv.) a temperatura del hielo, se agregó isocianato 10003b (1 equiv, 0.073 mmoles, 3.66 ml de solución 0.02M) bajo atm. de N2. y se agitó durante 30 min a la temperatura del hielo y 90 min a temperatura ambiente. Se extinguió con ácido cítrico y se extrajo con EtOAc y se lavó con salmuera. Se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se separó por evaporación el solvente. El producto crudo se purificó mediante columna de sílice flash (10-40% acetona-hexano) para proporcionar 28 mg, 55 % de 10003. EM (ESI), m/z, intensidad relativa 724 [(M+1 ) 100], 461 (45), 403 (80).

EJEMPLO 4 Síntesis del compuesto de la Fórmula 10004 Paso A: 10004a 10004b A 0.95mL (11.7mmoles) de cloruro de sulfurilo en 20 ml de éter se agregó por goteo 2.3mL (23.4mmoles) de piperidina a -78° C. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. El sólido insoluble se retiró mediante filtración y el filtrado se lavó con HCl 1 N, NaHCO3 sat y salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgSO , se filtró y el filtrado se concentró hasta sequedad para proporcionar 1.00 g de 10004b. Rendimiento 46%.

Paso B: 10001a 10004c A 0.350g (1.62mmoles) de 10001a en 10mL CH2CI2 se agregaron 0.23 ml (1.62mmoles) de Et3N, luego 0.446g (2.42mmoles) de 10004b en 5 ml CH2CI2 por goteo a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc, se lavó con una solución de NH4CI ac. y salmuera. Las capas orgánicas se secaron sobre MgSO4, se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía con gel de sílice con 6 -X4% EtOAc en Hexano para proporcionar 0.353g de producto. Rendimiento 60%.

Paso C: .H Cl 10004c 10004d A 15mg (0.041 mmoles) de 10004c en un frasco se agregaron 2 ml (8 mmoles) de HCl 4M (en dioxano) y se agitó a temperatura ambiente durante 50 min. La mezcla de reacción se concentró hasta sequedad in vacuo para proporcionar 32 mg de 2004d. Rendimiento 100%.

Nota: La conversión de 10004d a 10004 fue idéntica al paso B. en la Síntesis del Ejemplo 3 preparativa del compuesto de la Fórmula 10003.

EJEMPLO 5 Síntesis del compuesto de la fórmula 10005 Paso A: 10904c 10005B A una solución de 0.275 g (0.76mmoles) de 10004c en DMF se agregó 0.369g (1.13 mmoles) de Cs2CO3 y 0.085 ml (1.37 mmoles) de Mei a 0°C. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó, se concentró in vacuo y el residuo se purificó mediante cromatografía (SiO2 8-32% EtOAc en hexano) para proporcionar 0.256 g de producto 10005a. Rendimiento 89%.

Paso B: 10005a 10005b A una solución de 0.291 g (0.77 mmoles) de 10005a en frasco se agregó 3 ml (12 mmoles) de HCl 4M (en dioxano) y se agitó a temperatura ambiente durante 50 min. Después de completarse la reacción según lo indicado por TLC la mezcla de reacción se concentró in vacuo hasta sequedad para proporcionar 0.241 g de 10005b.

Paso C: 10005b 10005c A 0.241 g (0.77 moles) de 10005c en CH2CI2 a 0°C se agregó 0.81 ml (1.54 mmoles) de solución 1.9 M de tolueno de fosgenina y 10 ml de solución de NaHCO3 acuosa saturada. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1.0 h. La capa orgánica se separó y se secó sobre (Na2SO ), se filtró, se concentró hasta la mitad del volumen. Se diluyó adicionalmente con CH2CI2 para proporcionar una solución 0.07 M. Nota: La conversión de 10005c a 10005 fue idéntica al paso B en la Síntesis del Ejemplo 3 preparativa de los compuestos 10003.

Los compuestos indicados en el siguiente Cuadro 1 fueron sintetizados utilizando reacciones similares a las mostradas en los Ejemplos 1-5. Escala de Ki* indicó: A< 75 nM; 75<B < 250 nM; C>250 nM.

CUADRO 1 EJEMPLO 6 Síntesis del compuesto de la fórmula 11001 11001 Paso A: O C zHM ^? -. ^ CbzHN ^ ^ i H • H X[A XX. 11001a 11001b Una solución de amida 11001a (Obtenida mediante protección con Cbz de fer-butilglicina -N-metilamida obtenida de fuente comercial: TCI- Japón) 18 g, 64.67 mmoles) en tolueno (200 ml) se trató con BH3»DMS (solución 2 M en THF, 65 ml, 130 mmoles) y se calentó a 80°C durante 3 h. La mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se trató cuidadosamente con NaOH ac. (solución 2 M) y se extrajo en CH2CI2 (3x200 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron extraídas con NaHC?3 (3x300 ml), salmuera (300 ml), secadas (MgS?4) y purificadas por cromatografía (Si?2, metanol amoniacal (7M)/CH2CI2 1 :20) para proporcionar 11001b en forma de aceite incoloro.

Paso B: 11001c 11001b Una solución de amina 11001b (900 mg, 3.40 mmoles) en CH2CI2 a 0°C se trató con NMM (511 mg, 5.10 mmoles) y anhídrido tríflíco (585 mg, 5.10 mmoles) y se agitó a 0°C durante 12 h. La mezcla de reacción se diluyó con CH2CI2 (300 ml) y se lavó con HCl ac. en exceso (1 M, 500 ml). La capa orgánica se secó (MgSO ) se filtró y se concentró in vacuo y se purificó mediante cromatografía (SiO2, Hex/EtOAc 1 :9-1 :1 ) para proporcionar sulfonamida de trifluorometano 11001c.

Paso C: 11001c 11001d Una solución de 11001c (1.28 g, 3.22 mmoles) en metanol (30 ml) se trató con hidróxido de paladio (200 mg, 10% p/C) y se hidrogenó a 408 kPa (4.218 kgf/cm2) durante 3 h. La mezcla de reacción se filtró a través de un tapón de celite® y el filtrado se concentró in vacuo. El residuo se utilizó directamente en otra reacción sin purificación.

Una solución de la amina desprotegida (200 mg, 0.763 mmoles ) en DMF (3 ml), CH2CI2 (3 ml) se trató con 4-nitrofenilcarbamato 1.16 (409 mg, 0.915 mmoles), NMM (308 mg, 3.05 mmoles) a 0°C y se agitó a ta durante la noche. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y se diluyó con CH2Cl2 (150 ml) y se lavó con HCl ac. (1 M, 2x125 ml), NaHCO3 saturado ac. (2x125 ml), salmuera (100 ml), se secó (MgSO ), se filtró y purificó mediante cromatografía (SÍO2, CH2CI2/EtOAc 1 :19) para proporcionar 11001d.

Paso D: 11001d 11001e Una solución de éster metílico 11001d (210 mg, 0.368 mmoles) en THF seco (3 ml) se trató con H2O (3 ml), metanol (3 ml) y se trató con LiOH monohidrato (41.9 mg, 1 mmoles) y se agitó durante 3 h a ta. La mezcla de reacción se acidificó hasta pH-2 y se extrajo en CH2CI2 (100 ml). La capa orgánica se lavó con H2O (100 ml), salmuera (100 ml) se secó (MgS?4) se filtró y concentró ¡n vacuo para proporcionar ácido que se utilizó como estaba en la siguiente reacción. Una solución del ácido (50 mg, 0.089 mmoles) en CH2CI2 seco (2 ml) y DMF (2 ml) se enfrió hasta 0°C y se trató con amina 10.11 (20 mg, 0.116 mmoles) HATU (57.03 mg, 0.15 mmoles) y NMM (40.4 mg, 0.40 mmoles). La reacción se agitó a 0°C durante 36h y se concentró in vacuo. El residuo se disolvió en CH2CI2 (100 ml) y se lavó con HCl ac (1 M, 2x 100 ml), NaHC03 saturado ac. (2x100ml) salmuera (100 ml), se secó (MgS?4) se filtró, se concentró in vacuo para proporcionar 11001e el cual se utilizó en la siguiente reacción sin más purificación.

Paso E: 11001e 11001 Una solución de 11001e (50 mg, 0.075 mmoles) en tolueno (3 ml) y DMSO (3 ml) se trató con EDCI (134 mg, 0.703 mmoles), y ácido dicloroacético (45.3 mg, 0.351 mmoles, 30 µl) y se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de reacción se diluyó con CH2CI2 (60 ml) y se lavó con NaHC?3 saturado ac. (30 ml), HCl ac. (1 M, 30 ml), salmuera (30 ml), se secó (MgS?4) se filtró, se concentró in vacuo y se purificó mediante cromatografía (Si?2, acetona/Hexanos 20-50% gradiente linear) para proporcionar 11001.

EJEMPLO 7 Síntesis del compuesto de la fórmula 11002 CH3. CH-, 11002 Paso A: 11001b 11002a Una solución de amina 11001b (4.0 g, 15.14 mmoles) en CH2CI2 (100 ml) se trató con di-íer-butildicarbonato (4.13 g, 18.91 mmoles) y se agitó a temperatura ambiente durante 12 h. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y se purificó mediante cromatografía (SÍO2, EtOAc/Hexanos 1 :5) para proporcionar amina Boc protegida. Una solución del compuesto Boc protegido en metanol se trató con hidróxido de paladio y se hidrogenó a 408 kPa (4.218 kgf/cm2) durante 12 h. La mezcla de reacción se filtró a través de un tapón de celite® y el filtrado se concentró in vacuo. El residuo 11002a se utilizó en pasos subsiguientes sin más purificación.

Paso B: 11002a 11002b Una solución de la amina 11002a (134 mg, 0.58 mmoles) en acetonitrilo (20 ml) se trató con 4-nitrofenilcarbamato 1.16 (260 mg, 0.58 mmoles), NMM (177 mg, 1.74 mmoles) a 0°C y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se concentró in vacuo, se diluyó con CH2CI2 (250 ml) y se lavó con HCl ac. (1 M, 2x125 ml), NaHCO3 saturado ac. (2x125 ml), salmuera (100 ml), se secó (MgSO4) se filtró y se purificó mediante cromatografía (SÍO2, CH2CI2/EtOAc 1 :19) para proporcionar 11002b (279 mg).

Paso C: 11002b 11002c Una solución de 11002b (279 mg, 0.52 mmoles) en HCl dioxano 4 M se agitó a temperatura ambiente durante 2 h y se concentró in vacuo. El residuo se utilizó en otra reacción como estaba.

La sal de amonio (274 mg, 0.58 mmoles) se disolvió en CH2CI2:DMF (1 :1 ) y se enfrió hasta 0°C. La mezcla de reacción se trató con 4 eq de Et3N (233 mg, 2.33 mmoles) y 2 eq de cloruro de 2-piridinsulfonilo (248 mg, 1.2 mmoles) y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se lavó con NaHC?3 saturado, y la capa orgánica se extrajo con CH2CI2. La capa orgánica se secó con MgS04, se filtró, y se concentró in vacuo. El producto crudo se purificó utilizando cromatografía de gel de sílice utilizando un sistema Horizon HPFC (30% -> 90% EtOAc/hexanos) para proporcionar 240 mg de 11002c.

Paso D: 11002c 11002d 11002c (240 mg, 0.41 mmoles) se disolvió en THF y H2O (3:1 ) y se trató con 2.5 eq de LÍOH?2O. La mezcla de reacción se trató con MeOH hasta que la solución se homogeneizó. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante aproximadamente 3 hr. La mezcla de reacción se trató con HCl ac 1 M y se concentró in vacuo. La capa acuosa se extrajo con CH2CI2, se secó con MgS04, se filtró y se concentró in vacuo. El crudo se utilizó en acoplamientos adicionales sin purificación alguna.

El ácido (179 mg, 0.32 mmoles) se disolvió en 1 :1 CH2CI2/DMF y se enfrió hasta OOC. La mezcla de reacción se trató con 1.3 eq de 11.01 desprotegido (11.01 fue desprotegido disolviendo (200 mg, 0.61 mmoles) en 10 ml de TFA y 3 ml de Me2S y reposo durante 3h. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y se utilizó como estaba en posteriores acoplamientos) (238 mg, 0.41 mmoles ) 3.5 eq de NMM (112 mg 1.1 mmoles), y 1.5 eq de HATU (180 mg, 0.47 mmoles), y se almacenó en el refrigerador (~ 0°C ) durante la noche. La mezcla de reacción se concentró bajo alto vacío, y el residuo se trató con NaHC03 saturado. La capa acuosa se extrajo con CH2CI2, se secó con MgS04, se filtró y se concentró in vacuo.

Paso E: 11002d (313 mg, 0.42 mmoles) se disolvió en CH2CI2 y se trató con 3 eq de periodinano Dess-Martin (535 mg, 1.3 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante aproximadamente 2 horas. La mezcla de reacción se diluyó con 2:1 1 M NaHS03/NaHC03 saturado, y la capa acuosa se extrajo con CH2CI2. La capa orgánica se lavó con NaHS03 1 M y NaHC03 saturado, se secó con MgS?4, se filtró y se concentró in vacuo.

El producto crudo se purificó utilizando cromatografía de gel de sílice con un sistema de HPFC Horizon (20%->60% acetona/hexanos) para proporcionar 11002.

EJEMPLO 8 Síntesis del compuesto de la Fórmula 11003 Paso A: 11002c 11003a Una solución de la sal de amonio 11002c (880 mg, 1.86 mmoles) en cloruro de metíleno seco se enfrió hasta 0°C y se trató con trietilamina (0.5 ml, 3.71 mmoles) y cloruro de 2-tiofensulfonilo (678 mg, 3.71 mmoles) y se agitó a 0°C durante 48 h. La mezcla de reacción se absorbió en cloruro de metileno y la capa orgánica se lavó con HCl ac. (solución 1 M), y salmuera. Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO4) se filtraron y concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (SiO2, acetona/Hexanos 1 :4) para proporcionar 978 mg de 11003a en forma de un sólido incoloro.

Paso C: 11003a 11003b Una solución de 11003a (1.2 g, 2.22 mmoles) en THF/H2O se trató con LiOH?2O y se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de reacción se acidificó con HCl ac. 1 M y se extrajo con CH2CI2. Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgS0 ), se filtraron y concentraron in vacuo y se utilizaron como estaban en el siguiente paso. Una solución de ácido (100 mg, 0.175 mmoles) en CH2CI2 seco (4 ml) y DMF (4 ml) se enfrió hasta 0°C y se trató con la amina 12.04 (100 mg, 0.263 mmoles) HATU (100 mg, 0.263 mmoles) y NMM (70.4 mg, 0.704 mmoles). La reacción se agitó a 0°C durante 14 h y se concentró in vacuo. El residuo se disolvió en CH2CI2 (100 ml) y se lavó con HCl ac. (1 M, 2x 100 ml), NaHC03 saturado ac. (2x100ml) salmuera (100 ml), se secó (MgS?4), se filtró, se concentró in vacuo para proporcionar 11003b el cual se utilizó en la siguiente reacción sin más purificación.

Paso D: Una solución del alcohol 11003b (100 mg, 0.133 mmoles) en CH2CI2 seco (4 ml) se trató con reactivo Dess-Martin (Dess, D. B.; Martin, J. C. J. Am. Chem. Soc. 1991 , 113, 7277.) (150 mg, 0.345 mmoles) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con Na2S2?3 ac. (5%, 30 ml) y NaHC03 saturado ac. (30 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 15 min. La mezcla de reacción se extrajo con CH2CI2 (100 ml) y las capas orgánicas combinadas se secaron (MgS04), se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (SÍO2, acetona/Hexanos 20%-55% gradiente linear) para proporcionar 11003.

EJEMPLO 9 Síntesis del compuesto de la fórmula 11004 1 1004 Paso A: 11001a 11004a Una solución de la amina 11001a (150 mg, 0.567 mmoles) en CH2CI2 (5 ml) se enfrió hasta 0o C y se trató con NMM (100 mg, 100 ml). La reacción se trató con ter-butilsulfenilcloruro (Sun, P; Weinreb, S. M.; Shang, M. J. Org. Chem. 1997, 62, 8604) (0.5 ml, solución 1.3 M en CH2CI2) y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se diluyó con HCl ac. (1 M, 30 ml) y se extrajo con CH2CI2 (3x30 ml). La capa orgánica combinada se extrajo con salmuera (30 ml) se secó (MgSO ) se filtró y concentró in vacuo y se purificó mediante cromatografía (SiO2, acetona/Hexanos) para proporcionar 11004a.

Paso B: 11004a 11004b Una solución de sulfenamida 11004a (2.00 g, 5.43 mmoles) en CH2CI2 (60 ml) se trató con MCPBA (2.34 g, 8.145 mmoles, 60%) y se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se diluyó con Na2S2O3 ac. (10%, 50 ml) y NaHCO3 ac. (saturado, 100 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. La mezcla de reacción se extrajo con CH2CI2 (150 ml) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua, salmuera, se secaron (MgSO ) se filtraron y concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía (SiO2, EtOAc/Hex 1 :9- 1 : 1 ) para proporcionar 11004b. 11004b 11004c Una solución del compuesto Cbz-protegido 11004b (1.5 g, 3.90 mmoles) en metanol (25 ml) se trató con hidróxido de paladio (10% sobre C) y se hidrogenó a 408 kPa (4.218 kgf/cm2) durante 1 h. La mezcla de reacción se filtró a través de un tapón de celite y se concentró ¡n vacuo. Se utilizó para la siguiente reacción sin purificación alguna. Una solución de la amina desprotegida (1.00 g, 4.00 mmoles) en acetonitrilo (20 ml) se trató con 4-nitrofenilcarbamato 1.16 (1.879 g, 4.20 mmoles), NMM (1.062 g, 10.5 mmoles) y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se concentró ín vacuo y se diluyó con CH2CI2 (200 ml) y se lavó con HCl ac. (1 M, 2x125 ml), NaHC03 saturado ac. (2x125 ml), salmuera (100 ml), se secó (MgS?4), se filtró, y se purificó mediante cromatografía (SÍO2, CH2Cl2/EtOAc 1 :19) para proporcionar 11004c.

Paso D: 11004c 11004 El intermediario 11004c fue convertido en 11004 mediante acoplamiento al intermediario 12.03 seguido por oxidación Moffett idéntica a los procedimientos descritos en el Ejemplo 6 preparativo de la síntesis de 11001, Paso D y Paso E. Los compuestos mostrados en el siguiente Cuadro 2 fueron sintetizados utilizando reacciones similares a las mostradas en los Ejemplos anteriores. La escala de Ki* Indicó A< 75 nM; 75<B<250 nM; C>250 nM.

CUADRO 2 EJEMPLO 10 Síntesis del compuesto de la fórmula 12001 Paso A: J N I IHHBÜOOC ^ H H2N C - H2, ^' YXNHB0C 12001a 12001b Una solución de 12001a (2.0 g, 9.2 mmoles, productos químicos Indofine) en tolueno (150 ml) se trató con BH3»DMS (~ 10 M, 3 ml) y se calentó a 90°C durante 2 h. La mezcla de reacción se enfrió hasta 0o C y se diluyó con NaOH ac. 2 M. La capa orgánica se extrajo con CH2CI2 y las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO ) se filtraron y concentraron in vacuo para proporcionar 1.1 g de 12001b.

Paso B: 12001b 12001c Una solución de la amina 12001b (500 mg, 2.5 mmoles) en CH2CI2 (10 ml) se trató con cloruro de bencensulfonilo (669 mg, 3.8 mmoles) y Et3N (384 mg, 3.8 mmoles) y se agitó durante la noche a 0°C. La mezcla de reacción se diluyó con HCl ac. 1 M y se extrajo con CH2CI2. La capa orgánica combinada se secó, se filtró y se concentró in vacuo. El residuo se purificó mediante cromatografía (S¡O2, EtOAc/Hexanos 1 :3) para proporcionar 552 mg de compuesto fenilsulfonamida protegida con boc. Una solución del compuesto Boc (552 mg, 1.6 mmoles) en HCl 4 en dioxano a temperatura ambiente se agitó durante 1 h y se concentró in vacuo. El residuo se trituró con éter y el sólido que se separó se aisló mediante decantación de la capa de éter y se secó al vacío para proporcionar 12001c.

Paso C: 12001c 12001d Una solución de la amina desprotegida 12001c (139 mg, 0.5 mmoles) en CH2CI2/DMF (1 :1, 20 ml) se trató con 4-nitrofenilcarbamato 1.16 (1.879 g, 4.20 mmoles), NMM (1.062 g, 10.5 mmoles) y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y se diluyó con CH2CI2 (200 ml) y se lavó con HCl ac. (1 M, 2x125 ml), NaHC?3 saturado ac. (2x125 ml), salmuera (100 ml), se secó (MgS?4), se filtró, y se purificó mediante cromatografía (Si?2, Hexanos/EtOAc 1 :2) para proporcionar 12001d.

Paso D: 12001d 12001 El intermediario 12001d fue convertido en 12001 mediante acoplamiento al intermediario 10.11 seguido por oxidación Moffett idéntica a los procedimientos descritos en el ejemplo preparativo 6 de la síntesis de 11001, Paso D y Paso E.

EJEMPLO 11 Síntesis del Compuesto de la Fórmula 12002 12002 Paso A: 12002a 12002b Una solución 12002a (Gregory, H. ef al.; J. Chem. Soc. 1968; 531 ) (11.62 g, 42.08 mmoles) en tolueno seco se trató con BH3*DMS (soluc. -10 M, 6.3 ml) y se calentó a 70°C durante la noche. La mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se extinguió con NaOH ac. y se extrajo con CH2CI2. Las capas orgánicas combinadas fueron extraídas con salmuera y se concentraron in vacuo para proporcionar 12002b 8.77 g (80%).

Paso B: 12002b 12002c Una solución de 12002b (2 g, 7.24 mmoles) en cloruro de metileno se trató con piridina (7.9 g, 100 mmoles) y cloruro de metansulfonilo (1.24 g, 10.86 mmoles) y se agitó a temperatura ambiente durante 24 h. La mezcla de reacción se lavó con HCl ac, NaHCO3 saturado y salmuera. La capa orgánica se secó (MgSO ) se filtró, se concentró in vacuo y se purificó mediante cromatografía (SiO2, acetona/Hexanos 1 :2) para proporcionar 12002c.

Paso C: Una solución de 12002c (465 mg, 1.37 mmoles) en metanol se trató con paladio sobre carbono y se hidrogenó durante 2 h a 340 kPa (3.515 kgf/cm2,). La mezcla de reacción se filtró a través de un tapón de celite® y se concentró in vacuo para aislar a la amina desprotegida la cual se utilizó en la siguiente reacción sin más purificación.

Una solución de la amina desprotegida en CH2CI2/DMF (1 :1 ) se trató con 4-nitrofenilcarbamato 1.16 (612 mg, 1.37 mmoles), NMM (548 mg, 5.48 mmoles) y se agitó a temperatura ambiente durante 12 h. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y se diluyó con CH2CI2 (200 ml) y se lavó con HCl ac. (1 M, 2x125 ml), NaHCO3 acuoso saturado (2x125 ml), salmuera (100 ml), se secó (MgS04), se filtró y se purificó mediante cromatografía (SÍO2, Hexanos/acetona 1 :4) para proporcionar 12002d (560 mg).

Paso D: El intermediario 12002d fue convertido en 12002 mediante acoplamiento al intermediario 12.04 seguido por oxidación de Dess-Martin idéntica a los procedimientos descritos en el ejemplo preparativo de la síntesis de 11003, Paso C y Paso D. Los compuestos mostrados en la siguiente Cuadro 3 se sintetizaron utilizando reacciones similares como se muestra en los Ejemplos anteriores. La escala de Ki* indicó: A< 75 nM; 75<B<250 nM; C>250 nM.

CUADRO 3 EJEMPLO 12 Síntesis del compuesto de fórmula molecular 13001 Paso A: H 13 13001 b El ácido, 13001a, (5 g, 21.6 mmoles, 1 equiv. Fluka) y clorhidrato de metilamina (1.2 equiv., 25.92 mmoles) se disolvieron en N, N-dimetilformamida seco (20 ml) y se enfrió hasta 0°C. Se agregó HATU (1.2 equiv., 25.92 mmoles) seguido por DIPEA (Sigma-Aldrich), (172.8 mmoles., 8 equiv.) bajo atmósfera de N2. La temperatura se elevó lentamente hasta temperatura ambiente y se agitó otras 4 horas a temperatura ambiente. Se diluyó con EtOAc y se lavó con HCl 1 N, NaHCO3 y finalmente con salmuera. Se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se separó por evaporación el solvente. El producto crudo aislado se purificó mediante columna de vaporización instantánea (10-50% EtOAc-Hexano) para proporcionar 5.27 g de 13001b. Rendimiento, (99%). 1H RMN (CDCI3) 300 MHz) d, 6.0(bs, 1 H), 5.35(d, 1 H,), 3.82 (d, 1 H), 2.8 (s, 3H), 1.4 (s, 9H), 0.98 (s, 9 H).

Paso B: 13001b 13001c A la amida 13001b (3.37g, 13.8 mmoles, 1 equiv.) en tolueno (100 ml) a temperatura ambiente, se le agregó BH3»Me2S (10M, 3 equiv., 41.4 mmoles, 4.14 ml) y se llevó a reflujo a 80°C durante 3 hrs. El solvente se separó por evaporación y el producto crudo se extinguió con hidróxido de sodio ac. 2 M y se extrajo con diclorometano. La capa orgánica se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. El solvente se filtró y evaporó para proporcionar 1.8 g de 13001c. El producto crudo se utilizó para el siguiente paso sin purificación. Rendimiento, (55%).

Paso C: 13001c 13001d Al compuesto amino protegido con Boc 13001c (540 mg, 1 equiv.) en diclorometano (25 ml) a temperatura del hielo se agregó trietilamina (3 equiv.) y cloruro de acetilo (3 equiv.). Se agitó durante 1 hr a temperatura del hielo y luego a temperatura ambiente durante la noche. Se extinguió con bicarbonato de sodio ac. y se extrajo con EtOAc. Se lavó con HCl 1 N y luego con salmuera. Las capas orgánicas se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, el solvente se filtró y evaporó. El producto crudo se purificó mediante columna de vaporización ¡nstantánea (20-40 % EtOAc-Hexano). Rendimiento = 230 mg (38%).

Paso D: o o ??mBK - YN-xO!H3C 13001d 13001e A la amida 13001d (28 mg, 1 equiv.) se le agregó HCl 4M /dioxano (2 ml) a temperatura ambiente. Se agitó durante 1 hr. La TLC no mostró material de partida alguno. El solvente se evaporó y se tornó azeotrópico con hexano y luego con éter. Se lavó el material no polar con éter y se mantuvo bajo alto vac. durante el fin de semana. Se utilizó la sal sin purificación; El producto aislado (sólido amarillo pálido) = 22 mg (100 %).

Paso E: G? OH OH I BocHN _ XOAx ° — BocHN . Y AY 0 ?Y O - xr I 1.17 13001f A una mezcla de ácido, 1.17 (860 mg, 2.33 mmoles, 1 equiv.) y clorhidrato de amina 13.01 (570 mg, 2.56 mmoles, 1.1 equiv.) en DMF (15 ml) a temperatura del hielo se agregó HATU (1.2 equiv., 1.066 g, 2.796 mmoles) y DIPEA (8 equiv., 18.69 mmoles, 3.26 ml) bajo N2 y se agitó a 0°C durante la noche. La temperatura se dejó subir lentamente hasta temperatura ambiente. Se extinguió con HCl 1 N y se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con NaHCO3 ac (sat) y luego con salmuera. Se lavó con agua helada (5 x 20 ml) y nuevamente con salmuera. Se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y evaporó el solvente para proporcionar 1.25 g de 13001f . Rendimiento, 100%.

Paso F: 13001f 13001g A la hidroxiamida cruda, 13001f (2.71 mmoles, 1.45mg, 1 equiv.) en DCM (50 ml) a temperatura ambiente, se agregó periodinano de Dess-Martin (2.30 mg, 5.42 mmoles, 2 equiv.) y se agitó a temperatura ambiente durante 5 hrs. La TLC mostró un completo consumo del material de partida y la aparición del producto. Se extinguió con NaHCO3 sat, solución de tiosulfato ac y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. El solvente se filtró y evaporó. El producto crudo se purificó mediante columna de vaporización instantánea sobre gel de sílice (10-40% acetona-hexano) para proporcionar 860 mg de 13001g; Rendimiento, 62 %.

Paso G: 13001g 13001 h Al compuesto amino con Boc 13001g (860 mg, 1 equiv.) se agregó HCl 4 M en dioxano (25 ml) a temperatura ambiente. Se agitó durante 1 hr. La TLC no mostró material de partida alguno. El solvente se evaporó y se tornó azeotrópico con hexano y luego con éter. El material no polar se lavó con éter y se mantuvo bajo alto vacío durante el fin de semana. Se utilizó la sal sin más purificación; El producto se aisló (sólido amarillo pálido) = 750mg (99%).

Paso H: A la sal de amonio, 13001h, (150 mg, 0.318 mmoles, 1 equiv.) en DCM (5 ml) se le agregaron 5 ml de NaHCO3 ac. sat. Se agitó vigorosamente a la temperatura del hielo durante 5 min. Se detuvo la agitación y se separó con jeringa el fosgeno (2 equiv. 20% en tolueno, 0.318 ml) a la capa inferior y se reanudó la agitación vigorosa de inmediato. Se controló la TLC algunas veces y después de 2 horas mostró un completo consumo de material de partida y luego se separaron las capas. Se lavó la capa acuosa una vez más con DCM (3 ml) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio. La capa orgánica se filtró y se concentró in vacuo hasta la mitad del volumen. Se utilizó 13001 i como solución base de 0.01 M diluyendo hasta 30 ml de diclorometano.

Paso F: 13001Í 13001 A la sal de amonio 13001e (22 mg, 0.102 mmoles, 1.1 equiv.) en DCM (10 ml) se le agregó DIPEA (6 equiv., 135 µl) a temperatura del hielo. Se agregó isocianato 13001Í (1 equiv, 9 ml de soluc. 0.01 M) bajo atmósfera de N2 y se agitó durante 30 min a la temperatura del hielo y 90 min a temperatura ambiente. Se extinguió con ácido cítrico y se extrajo con EtOAc y se lavó con salmuera. Se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y evaporó el solvente. El producto crudo se purificó mediante columna de vaporización instantánea (Si02l 10-50% acetona-hexano) para proporcionar 50 mg de 13001 como un sólido incoloro. Rendimiento, (78%) EM (ESI), m/z, 633 (M+1 ), 312.

EJEMPLO 13 Síntesis del compuesto de fórmula molecular 13002 Paso A: \ y Y 1.03 1.04 Al dipéptido protegido con Boc 1.03 (3.6 g, 9.42 mmoles, 1 equiv.) se agregó HCl 4M/dioxano (60 ml) a temperatura ambiente. Se agitó durante 2 h. La TLC no mostró material de partida alguno. El solvente se evaporó y se tornó azeotrópico con hexano y luego con éter. Se lavó para separar el material no polar con éter y se mantuvo bajo alto vacío durante la noche. Se utilizó la sal, 1.04, sin purificación. Producto aislado = 3g (100%).

Paso B: 1.04 13002a Al clorhidrato de amina 1.04 (3 g, 9.4 mmoles) en diclorometano (50 ml) se agregaron 50 ml de NaHCO3 sat. Se agitó vigorosamente a la temperatura del hielo durante 5 min. Se detuvo la agitación y el fosgeno (2 equiv. 20% en tolueno, 10 ml) se reitró por medio de una jeringa a la capa ¡nferior y se reanudó la agitación vigorosa de inmediato. La TLC se controló en ciertos momentos y después de 2 horas mostró un completo consumo de material de partida y luego se separaron las capas. Se lavó la capa acuosa una vez más con diclorometano (3 ml) y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro. El solvente se filtró y se separó por evaporación utilizando un evaporador rotativo bajo presión reducida hasta la mitad del volumen y luego se introdujo N2 durante 15 minutos. Se diluyó hasta 33.5 ml con diclorometano y se utilizó como solución 0.28 M para posteriores acoplamientos.

Paso C: 13002a 13002b A la sal de amina, 13001e, preparada según lo antes descrito (151 mg, 0.73 mmoles, 1 equiv.) en DCM (10 ml) se le agregó DIPEA (8 equiv., 1.01 ml, 5.84 mmoles) a la temperatura del hielo. Se agregó isocianato 13002a (1 equiv, 13 ml de soluc. 0.02M) bajo atmósfera de N2 y se agitó durante 30 min a la temperatura del hielo y 90 min a temperatura ambiente. Se extinguió con ácido cítrico 10% y se extrajo con EtOAc y se lavó con salmuera. El solvente se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se filtró y se separó por evaporación. El producto crudo se purificó mediante columna de vaporización instantánea (20-80% EtOAC-hexano) para proporcionar 270 mg de 13002b como un sólido blanco. Rendimiento (76%). 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) d, 5.8 (bs, N H), 5.4 (bs, NH), 5.2 ( d, 1 H), 4.4(d, 1 H), 4-4.2(m, 2H), 3.8-4(m, 3H), 3.01 (s, 3H), 2.01 (bs, 6H), 1.6 (m,1 H), 1.4(m, 1 H), 1.02-0.98 (m, 24 H).

Paso D: 13002b 13002c Al éster metílico, 13002b (270 mg, 0.562 inmoles, 1 equiv.) en dioxano (10 ml) se le agregó una solución de LiOH (10 equiv., 6 ml de soluc. 1 N en agua) y se agitó durante la noche. Se extinguió con HCl 1 N y se extrajo con EtOAC. Se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato de sodio anhidro. El solvente se filtró y se separó por evaporación. Rendimiento crudo 260 mg (99%). Paso E: 13002c 13002 A la sal de amonio, 10.11 (16.06 mg, 0.077 mmoles, 1.2 equiv.) en DCM (10 ml) se le agregó 13002 c (30 mg, 0.064 mmoles, 1 equiv.) y se enfrió hasta - 20°C y se le agregó HATU (1.2 equiv., 0.077 mmoles, 29.37 mg) seguido por DIPEA (8 equiv., 89.94 µl, 0.515 mmoles). La mezcla de reacción se agitó durante la noche a esa temperatura. Se extinguió con HCl 1 N y se extrajo con EtOAC. Se lavó la capa orgánica con bicarbonato de sodio ac. saturado y luego con salmuera. Se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y el solvente se separó por evaporación. Se purificó mediante columna de vaporización instantánea (Si02, 10-90% EtOAc-Hexano) para proporcionar 40 mg de hidroxiamida. Rendimiento, (100%). A la hidroxilamida (40 mg, 0.0645 mmoles, 1 equiv.) en 1 :1 de mezcla de DMF/tolueno (6 ml) a la temperatura del hielo se agregó EDCI?CI (123 mg, 10 equiv., 0.645 mmoles) y ácido dicloroacético (27 µl, 5 equiv., 0.322 mmoles) y se agitó durante 5 min. y temperatura ambiente durante 3 h. Se extinguió con salmuera y se lavó con HCl 1 N seguido por NaHC03 ac. sat. y nuevamente con salmuera. Se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y el solvente se separó por evaporación. Se purificó por medio de TLC preparativa sobre gel de sílice (50% acetona-hexano) para proporcionar 30 mg del 13002 . Rendimiento (75%). " EM (ESI), m/z, 619(M+1 ), 312. Los compuestos mostrados en el siguiente Cuadro 4 fueron sintetizados utilizando reacciones similares a las que se muestran en los Ejemplos anteriores. La escala de Ki* indicó A < 75 nM; 75< B <250 nM; C>250 nM.

CUADRO 4 EJEMPLO 14 Síntesis del Compuesto de la Fórmula 14001.

Paso A: 14001a 14001b Una solución de 14001a (10.0 g, 40.0 mmoles químicos Indofine) en tolueno (150 ml) se trató con BH3«DMS (~ 2 M, 40 ml) y se calentó a 90°C durante la noche. La mezcla de reacción se enfrió hasta 0°C y se diluyó con NaOH 2 M ac. La mezcla de reacción se calentó a 90°C durante 15 min. La capa acuosa se extrajo con CH2CI2 y las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO4) se filtraron y concentraron in vacuo para proporcionar 11 g de 14001 b.

Paso B: , , „,--~- -NHCbz -x MH-, H2Ny BocHN Y' ¿ y 14001b 14001c Una solución de la amina 14001b (10 g, 42.0 mmoles) en CH2CI2/DMF (1 :5) se enfrió hasta -78 °C y se trató con di-ter-butildicarbonato (13.8 g, 63 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 48 h y se diluyó con HCl ac. 1 M y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica combinada se lavó con NaHCO3 ac, salmuera, se secó, se filtró y se concentró ¡n vacuo. El residuo se purificó mediante cromatografía (SiO2, EtOAc/Hexanos 1 :3) para proporcionar 4 g del compuesto protegido con Boc. Una solución de compuesto Boc (6 g, 17.8 mmoles) en metanol se trató con Pd(OH)2/C (1.89 g, 20% sobre C) y se hidrogenó durante 1h. La mezcla de reacción se filtró a través de un tapón de celite y se concentró ¡n vacuo. El residuo 14001c se utilizó en otra reacción sin purificación.

Paso C: V Jo occHHNN 14001c 14001d Una solución de la amina desprotegida 14001c (3.6 g, 17.8 mmoles) en CH2CI2/DMF (1 :1 , 20 ml) se trató con 4-nitrofenilcarbamato 1.16 (7.97 g, 17.8 mmoles), NMM (4 g, 14.0 mmoles) y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y se diluyó con EtOAc y se lavó con HCl ac, NaHC?3 saturado ao, salmuera, se secó (MgS?4), se filtró, y se purificó mediante cromatografía (Si?2, Hexanos/EtOAc 3:7) para proporcionar 14001d.

Paso D: 14001d 14001e Una solución de 14001d se disolvió en HCl 4 M en dioxano y se agitó a ta durante 2 h. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y se utilizó en reacciones posteriores sin purificación.

La sal de amonio (100 mg, 0.224 mmoles) disuelta en DMF/CH2CI2 (1 :1 ) se trató con isopropilcloroformato (54 mg, 0.448 mmoles) y Et3N (45 mg, 0.448 mmoles) a 0°C y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y la capa orgánica se lavó con HCl ac. 1 M, NaHC03 saturado ac, y salmuera. Se secó (MgS04) se filtró, se concentró in vacuo y se utilizó como estaba en la siguiente reacción.

Paso E: 14001e 14001 El intermediario 14001e se convirtió en 14001 mediante acoplamiento al intermediario 10.11 , seguido por oxidación de Moffett idéntica a los procedimientos descritos en el ejemplo preparativo 6 de síntesis de 11001, Paso D y Paso E.

EJEMPLO 15 Síntesis del Compuesto de la Fórmula 14002 Paso A: 14001d 14002a Una solución de 14001d se disolvió en 4 M HCl en dioxano y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se concentró in vactvo y se usó en reacciones adicionales sin purificación. La sal de amonio (100 mg, 0.224 mmoles) disuelta en DMF/CH2CI2 (1 :1 ) se trató con fenilisocianato (53 mg, 0.448 mmoles) y Et3N (45 mg, 0.448 mmoles) a 0°C y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y la capa orgánica se lavó con HCl 1 M acuoso, NaHCO3 saturado acuoso y salmuera. Se secó (MgS0 ), se filtró, concentró in vacuo y purificó mediante cromatografía (SiO2, EtOAc/Hex 2:3) para proporcionar 14002a.

Paso B: 14002a 14002 El intermediario 14002a se convirtió en 14002 mediante acoplamiento al intermediario 10.11 seguido por oxidación de Moffett idéntica a los procedimientos descritos en el ejemplo preparativo 6 de síntesis de 0 11001 , Paso D y Paso E. Los compuestos que se muestran en el siguiente Cuadro 5 fueron sintetizados utilizando reacciones similares a las mostradas en los Ejemplos anteriores. La escala de Ki* indicó que A< 75 nM; 75<B<250 nM; C>250 nM.

CUADRO 5 En el Cuadro 5A se muestran compuestos adicionales de la presente invención: CUADRO 5A La presente invención se refiere a novedosos inhibidores de proteasa de VHC. Esta utilidad puede manifestarse en su capacidad de inhibir a la serina proteasa NS2/NS4a del VHC. Un procedimiento general para tal demostración es ilustrado por el siguiente ensayo in vitro.

Ensayo para Determinar la Actividad Inhibitoria de Proteasa de VHC Ensayo espectrofotométrico: Puede realizarse un ensayo espectrofotométrico para determinar la serina proteasa de VHC en los compuestos de la invención siguiendo el procedimiento descrito por R. Zhang et al, Analytical Biochemistry, 270 (1999) 268-275, cuya descripción se incorpora en la presente memoria descriptiva como referencia. El ensayo basado en la proteólisis de sustratos de éster cromogénicos es adecuado para el monitoreo continuo de la actividad de proteasa NS3 de VHC. Los sustratos son derivados del lado P de la secuencia de unión NS5A-NS5B (Ac-DTEDVVX(Nva), donde X = A o P) cuyos grupos carboxilo de terminal C son esterificados con uno de cuatro alcoholes cromofóricos diferentes (3- o 4-nitrofenol, 7-hidroxi-4-metil-cumarina, o 4-fenilazofenol). Más adelante se ¡lustran la síntesis, caracterización y aplicación de estos novedosos sustratos de éster espectrofotométricos una clasificación de alto rendimiento y evaluación cinética detallada de los inhibidores de proteasa NS3 de VHC.

Materiales y Métodos Materiales Los reactivos químicos para los reguladores de pH relacionados con el ensayo son obtenidos de Sigma Chemical Company (St. Louis, Missouri). Los reactivos para la síntesis peptídica eran de Aldrich Chemicals, Novabiochem (San Diego, California), Applied Biosystems (Foster City, California) y Perseptive Biosystems (Framingham, Massachusetts). Los péptidos son sintetizados manualmente o en un sintetizador ABl modelo 431A automático (de Applied Biosystems). El espectrómetro UV/VIS modelo LAMBDA 12 era de Perkin Elmer (Norwalk, Connecticut) y las placas de UV de 96 cavidades fueron obtenidas de Corning (Corning, Nueva York). El bloque de precalentamiento puede ser de USA Scientific (Ocala, Florida) y el aparato para vórtice de placas de 96 cavidades es de Labline Instruments (Meirose Park, Illinois). Un lector de placas de microtitulación Spectramax Plus con medidor monocromático es obtenido de Molecular Devices (Sunnyvale, California).

Preparación Enzimática La proteasa NS3/NS4A del VHC heterodimérica recombinante (cepa 1a) es preparada utilizando los procedimientos publicados previamente (D. L. Sali eí al, Biochemistry, 37 (1998) 3392-3401 ). Las concentraciones de proteína son determinadas mediante el método de tinte Biorad utilizando patrones de proteasa de VHC recombinante previamente cuantificados por análisis de aminoácidos. Con anterioridad a la iniciación del ensayo, el regulador de pH de almacenamiento de enzima (fosfato de sodio 50 mM, pH 8.0, NaCI 300 mM, 10% glicerol, 0,05% maltosida de laurilo y DTT 10 mM) es intercambiado por el regulador de pH de ensayo (MOPS 25 mM pH 6,5, NaCI 300 mM, 10% glicerol, 0,05% maltosida de laurilo, 5 µM EDTA y 5 µM DTT) utilizando una columna preempaquetada Bio-Spin P-6 de Biorad.

Síntesis y Purificación de Sustratos La síntesis de los sustratos es realizada según lo reportado por R. Zhang et al, (ibid.) y es iniciada mediante anclaje de Fmoc-Nva-OH a resina de cloruro de 2-clorotritilo utilizando un protocolo estándar (K. Barios ef al, Int. J. Pept. Protein Res., 37 (1991 ), 513-520). Los péptidos son posteriormente ensamblados, utilizando química de Fmoc, ya sea manualmente o en un sintetizador de péptidos ABl modelo 431 automático. Los fragmentos peptídicos N-acetilados y completamente protegidos son disociados de la resina ya sea mediante ácido acético al 10% (HOAc) y trifluoretanol al 10% (TFE) en diclorometano (DCM) durante 30 min, o mediante ácido trífluoracético al 2% (TFA) en DCM durante 10 min. El filtrado combinado y el lavado con DCM es evaporado azeotrópicamente (o extraído repetidamente mediante solución de Na2C03 acuoso) para eliminar el ácido utilizado en la disociación. La fase de DCM es secada sobre Na2S?4 y evaporada.

Los sustratos de éster son ensamblados utilizando procedimientos de acoplamiento de ácido- alcohol estándares (K. Holmber et al, Acta Chem. Scand., B33 (1979) 410-412). Los fragmentos peptídicos son disueltos en piridina anhidra (30-60 mg/ml) a la cual se agregaron 10 equivalentes molares de cromóforo y una cantidad catalítica (0.1 eq.) de ácido para-toluensulfónico (pTSA). Se agrega diciclohexilcarbodiimida (DCC, 3 eq.) para iniciar las reacciones de acoplamiento. La formación del producto es monitoreada mediante HPLC y puede encontrarse completa luego de 12-72 horas de reacción a temperatura ambiente. El solvente de piridina es evaporado bajo vacío y luego eliminado adicionalmente por evaporación azeotrópica con tolueno. El éster peptídico es desprotegido con TFA al 95% en DCM durante dos horas y extraído tres veces con éter etílico anhidro para eliminar el cromóforo en exceso. El sustrato desprotegido es purificado mediante HPLC de fase inversa en una columna C3 o C8 con un gradiente 30% a 60% de acetonitrilo (utilizando volúmenes de seis columnas). El rendimiento total luego de la purificación por HPLC puede ser de aproximadamente 20-30%. La masa molecular puede ser confirmada mediante espectroscopia de masas y ionización por electroaspersión. Los sustratos son almacenados en forma de polvo seco bajo desecación.

Espectros de Sustratos y Productos Los espectros de sustratos y los productos de cromóforos correspondientes son obtenidos en el regulador de pH de ensayo de pH 6,5.

Los coeficientes de extinción son determinados a la longitud de onda fuera de pico óptima en tubos de 1 cm (340 nm para 3-Np y HMC, 370 nm para PAP y 400 nm para 4-Np) utilizando múltiples diluciones. La longitud de onda fuera de pico óptima es definida como aquella longitud de onda la cual proporciona la diferencia fraccional máxima en absorbancia entre el sustrato y el producto (DO del producto -DO del sustrato )/DO del sustrato).

Ensayo de Proteasa Se llevan a cabo ensayos de proteasa de VHC a 30°C utilizando una mezcla de reacción de 200 µl en una placa de microtitulación de 96 cavidades. Las condiciones del regulador de pH de ensayo (MOPS 25 mM, pH 6,5, NaCI 300 mM, 10% glicerol, 0,05% laurilmaltosida, 5 µM EDTA y 5 µM DTT) son optimizadas para el heterodímero NS3/NS4A (D. L. Sali et al, ibid.)). Típicamente, se colocan 150 µl de mezclas de regulador de pH, sustrato e inhibidor en cavidades (concentración final de DMSO < 4 % v/v) y se dejan preincubar a 30°C durante aproximadamente 3 minutos. 50 ul de proteasa precalentada (12 nM, 30°C) en regulador de pH de ensayo, se utilizan luego para iniciar la reacción (volumen final 200 µl). Las placas son controladas durante toda la duración del ensayo (60 minutos) para detectar un cambio en la absorbancia en la longitud de onda apropiada (340 nm para 3-Np y HMC, 370 nm para PAP, y 400 nm para 4-Np) utilizando un lector de placas de microtitulación Spectromax Plus equipado con un medidor monocromático (pueden obtenerse resultados aceptables con lectores de placas que utilizan filtros de corte). La disociación proteolítica de la ligación de éster entre el Nva y el cromóforo es controlada a la longitud de onda apropiada contra un espacio vacío no enzimático como control para la hidrólisis no enzimática. La evaluación de los parámetros cinéticos de los sustratos se lleva a cabo sobre una escala de concentración de sustrato de 30 veces (-6-200 µM). Las velocidades iniciales son determinadas utilizando regresión lineal y las constantes cinéticas son obtenidas mediante ajuste de los datos a la ecuación Michaelis-Menten utilizando análisis de regresión no lineal (Mac Curve Fit 1.1 , K. Raner). Los números de productividad (kCat) son calculados suponiendo que la enzima es completamente activa.

Evaluación de los Inhibidores e Inactivadores Las constantes de inhibición (K¡) para los inhibidores competitivos Ac-D-(D-Gla)-L-l-(Cha)-C-OH (27), Ac-DTEDVVA(Nva)-OH y Ac-DTEDWP(Nva)-OH se determinan experimentalmente a concentraciones fijas de enzima y sustrato trazando v0/v¡ vs. Concentración de inhibidor ([I] 0) de acuerdo con la ecuación Michaelis-Menten reordenada para la cinética de inhibición competitiva: v0/v¡ = 1 + [I] 0 /(K¡ (1 + [S] 0 /Km)), donde v0 es la velocidad inicial no inhibida, v¡ es la velocidad inicial en presencia de inhibidor a cualquier concentración de inhibidor determinada ([l]o) y [S]o es la concentración de sustrato utilizada. Los datos resultantes son ajustados utilizando regresión lineal y la inclinación resultante, 1/(K¡(1+[S] o/Km), es utilizada para calcular el valor K¡. Los valores Ki* para algunos de los compuestos de la ¡nvención fueron proporcionados anteriormente en el Cuadro 6. Si bien la presente invención ha sido descrita juntamente con las modalidades específicas expuestas anteriormente, muchas alternativas, modificaciones y otras variaciones de las mismas serán evidentes para los expertos en la técnica. Todas esas alternativas, modificaciones y variaciones tienen el propósito de caer dentro del espíritu y alcance de la presente invención.

Claims (36)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Un compuesto o enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros, diaestereómeros y racematos de dicho compuesto, o una sal, solvato o éster de dicho compuesto farmacéuticamente aceptable, teniendo dicho compuesto la estructura general mostrada en la Fórmula I: Fórmula I en la cual: R1 es H, OR8, NR9R10, o CHR9R10, en la cual R8, R9 y R10 pueden ser iguales o diferentes, siendo cada uno seleccionado independientemente del grupo formado por H, alquil-, alquenil-, alquinil-, aril-, heteroalquil-, heteroaril-, cicloalquil-, heterociclil-, arilalquil-, y heteroarilalquilo; A y M pueden ser iguales o diferentes, siendo cada uno seleccionado independientemente entre R, NR9R10, SR, S02R, y halógeno; o A y M están conectados entre si (en otras palabras, A-E-L-M tomados en forma conjunta) de modo que la porción: M A \ L E / que se muestra más arriba en la Fórmula I forma ya sea un cicloalquilo de tres, cuatro, seis, siete u ocho miembros, un heterociclilo de cuatro a ocho miembros, un arilo de seis a diez miembros o un heteroarilo de cinco a diez miembros; E es C(H) o C(R); L es C(H), C(R), CH2C(R), o C(R)CH2; R, RS R2, y R3 pueden ser iguales o diferentes, siendo cada uno seleccionado independientemente del grupo formado por H, alquil-, alquenil-, alquinil-, cicloalquil-, heteroalquil-, heterociclil-, aril-, heteroaril-, (cicloalquil)alquii-, (heterociclil)alquil-, aril-alquil-, y heteroaril-alquil-; o alternativamente R y R' en NRR' están conectados entre si de modo que NR9R10 forma un heterociclilo de cuatro a ocho miembros; Y se selecciona de las siguientes porciones: donde Y ,30 e n se seleccionan entre ,!•:- :c li '::. LLL- N" 0 Í X se selecciona entre O, NR15, NC(0)R16, S, S(O) y S02; G es NH o O; y R15, R16, R17 , R18, R19, Ti, T2, T3 y T4 pueden ser iguales o diferentes, siendo cada uno seleccionado independientemente del grupo formado por H, alquilo, heteroalquilo, alquenilo, heteroalquenilo, alquinilo, heteroalquinilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, y heteroarilalquilo, o alternativamente, R17 y R18 están conectados entre si para formar un cicloalquilo o heterociclilo de tres a ocho miembros; donde cada uno de dicho alquilo, arilo, heteroarilo, cicloalquilo o heterociclilo puede estar no sustituido u opcionalmente independientemente sustituidos con una o más porciones seleccionadas del grupo formado por: hidroxi, alcoxi, ariloxi, tio, alquiltio, ariltio, amino, amido, alquilamino, arilamino, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, sulfonamido, alquilo, arilo, heteroarilo, alquilsulfonamido, arilsulfonamido, ceto, carboxi, carbalcoxi, carboxamido, alcoxicarbonilamino, alcoxicarboniloxi, alquilureido, arilureido, halógeno, ciano, y nitro.

2.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R1 es NR9R10, y R9 es H, R 0 es H, o R14 donde R14 es H, alquilo, arilo, heteroalquilo, heteroarilo, cicloalquilo, alquil-arilo, alquil-heteroarilo, aril-alquilo, alquenilo, alquinilo o heteroaril-alquilo.

3.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque R14 se selecciona entre el grupo que consiste en: OH -OH X X' •)1-3 ' |-0H. l-OMe. AfOOMe , Af^0

4.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R2 se selecciona entre el grupo que consiste en las siguientes porciones:

5.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R3 se selecciona del grupo que consiste de: caracterizado además porque R31 es OH o O-alquilo; y R32 es H, C(0)CH3, C(0)OtBu o C(0)N(H)tBu. 6.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado además porque R3 se selecciona entre el grupo que consiste en las siguientes porciones:

C

7.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque G es NH.

8.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado además porque Y se selecciona entre las siguientes porciones: o R1l9a R H H O v X A en donde porque Y /32 se selecciona entre el grupo que consiste en:

Y ,30 , y, \ Y31 se selecciona entre J't '

R19 se selecciona entre H, alquilo, fenilo o bencilo. 9.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado además porque T-i y T2 pueden ser ¡guales o diferentes, siendo cada uno seleccionado independientemente entre el grupo que consiste en: en donde porque T5 y T6 pueden ser iguales o diferentes, siendo cada uno seleccionado en forma independiente entre el grupo que consiste en alquilo, arilo, cicloalquilo, heteroarilo y heterociclilo; o la porción: y T3 y T4 pueden ser iguales o diferentes , siendo cada uno seleccionado en forma independientemente entre: o T3 y T4 tomados en forma conjunta pueden formar parte de un anillo heterocíclíco de cuatro a siete miembros. 10.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque la porción: se selecciona entre las siguientes estructuras :

11.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado además porque la porción: se selecciona entre las siguientes estructuras

12.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 11 , caracterizado además porque la porción: se selecciona entre las siguientes estructuras :

13.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R1 es NHR14, caracterizado además porque R14 se selecciona entre el grupo que consiste en: l-OMe , OH ?-OH, OMe 1-3 1-3 elecciona entre el grupo que consiste en las siguientes porciones: R3 se selecciona entre el grupo que consiste en las siguientes porciones: Y se selecciona entre el grupo que consiste en: y la porción: es:

14.- Una composición farmacéutica que comprende como ingrediente activo por lo menos un compuesto de conformidad con la reivindicación 1.

15.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 14 para uso en el tratamiento de trastornos asociados con el Virus de la Hepatitis C ("VHC").

16.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación cara 15 caracterizada además porque comprende adicionalmente por lo menos un portador farmacéuticamente aceptable.

17.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 16, caracterizada además porque contiene adicionalmente por lo menos un agente antiviral.

18.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 17, caracterizada además porque contiene adicionalmente por lo menos un interferón.

19.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 18, caracterizada además porque dicho por lo menos un agente antiviral es ribavirina y dicho por lo menos un interferón es a-interferón o interferón pegilado.

20.- El uso de por lo menos un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , en la elaboración de un medicamento para tratar trastornos asociados con el VHC en un paciente.

21.- El uso que se reclama en la reivindicación 20, en donde dicha administración es oral o subcutánea.

22.- El uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , para la manufactura de un medicamento para tratar trastornos asociados con el VHC.

23.- Un método para preparar una composición farmacéutica para tratar los trastornos asociados con el VHC, dicho método comprende poner en contacto físico íntimo al menos un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 y por lo menos un portador farmacéuticamente aceptable.

24.- Un compuesto que exhibe actividad inhibitoria de la proteasa de VHC, o enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros, diaestereómeros, y racematos de dicho compuesto, o una sal, solvato o éster de dicho compuesto farmacéuticamente aceptable, siendo dicho compuesto seleccionado entre los compuestos de las estructuras mostradas a continuación:

25.- Una composición farmacéutica para tratar trastornos asociados con el VHC, dicha composición comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más compuestos de la reivindicación 24 y un portador farmacéuticamente aceptable.

26.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 25, caracterizada además porque contiene adicionalmente por lo menos un agente antiviral.

27.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 26, caracterizada además porque contiene adicionalmente por lo menos un interferón o conjugado de PEG-interferón alfa ("interferón pegilado").

28.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado además porque dicho por lo menos un agente antiviral es ribavirina y dicho al menos un ¡nterferón es a-interferón o interferón pegilado.

29.- El uso de uno o más compuestos de conformidad con la reivindicación 24 en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de un trastorno asociados con el virus de hepatitis C en un paciente.

30.- Un método para la modulación de la actividad de la proteasa del virus de la hepatitis C (VHC), que comprende poner en contacto a la proteasa del VHC con uno o más compuestos de conformidad con la reivindicación 24.

31.- El uso de uno o más compuestos de conformidad con la reivindicación 24 en la elaboración de un medicamento para tratar, prevenir o aliviar uno o más síntomas de la hepatitis C en un paciente.

32.- El uso que se reclama en la reivindicación 31 , en donde la proteasa del HCV es la proteasa NS3/NS4a.

33.- El uso que se reclama en la reivindicación 32, en donde el compuesto o los compuestos inhiben la proteasa NS3/NS4a del VHC.

34.- Un método para modular el procesamiento del polipéptído del virus de la hepatitis C (VHC), que comprende poner en contacto una composición que contiene el polipéptido del VHC bajo condiciones en las que dicho polipéptido es procesado con uno o más compuestos de conformidad con la reivindicación 24.

35.- El uso de por lo menos un compuesto, o enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros, tautómeros, diaestereómeros y racematos de dicho compuesto, o una sal, solvato o éster de dicho compuesto farmacéuticamente aceptable, en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de trastornos asociados con el VHC, en un paciente, en donde dicho compuesto seleccionado entre los siguientes:

36.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque está en forma purificada.