MXPA06000965A - Administracion de fragmentos f(ab??)2 de anticuerpos anti-citocinas. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se orienta a un metodo de tratamiento para reacciones inmunes mediadas por citocinas en pacientes que requieren dicho tratamiento mediante administracion de una cantidad eficaz de fragmentos de anticuerpo F(ab??)2 anticitocina. Los fragmentos de anticuerpo deben estar, de preferencia, libres de albumina y de anticuerpos integros y tambien sustancialmente libres de pirogenos. Los fragmentos de anticuerpo F(ab??)2 anticitocina pueden administrase con una cantidad apropiada de un vehiculo farmaceutico aceptable.

Description

ADMINISTRACIÓN DE FRAGMENTOS F(ab')2 DE ANTICUERPOS ANTI-CITOCINA.

ANTECEDENTES Campo de la invención La presente invención se orienta a encontrar un método para tratamiento de reacciones inmunes mediadas por citocinas en pacientes que requieren dicho tratamiento administrando cantidades eficaces de fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anticitocina. Los fragmentos del anticuerpo son sustancíalmente selectivos, libres de albúmina y de anticuerpos íntegros, además prácticamente libres de pirógenos y pueden administrarse con una cantidad apropiada de un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Información general Las citocinas desempeñan un papel decisivo en muchos procesos biológicos como inducción de la respuesta inmune, reclutamiento de células inflamatorias, citotoxicidad, actividad antiviral, reparación de heridas, angiogénesis, apoptosis, fiebre, y síntesis de proteínas de fase aguda. Las citocínas actúan en una compleja red en la cual pueden inducir la producción y secreción de otras citocinas, modular la expresión de receptores de citocina e incluso mostrar efectos sinérgicos o antagónicos con otras citocinas. También se ha implicado a las citocinas proinflamatorias como mediadores de rechazo de trasplante. Los anticuerpos son proteínas de tipo globulina conocidas como inmunoglobulinas (Ig) que aparecen en la sangre como respuesta del sistema inmunitario a la invasión por algunas sustancias u organismos extraños. Se caracterizan por combinarse de manera específica con sustancias extrañas al organismo para neutralizarlas y precipitarlas a fin de retirarlas de la circulación. Ciertas aplicaciones industriales se desarrollaron utilizando anticuerpos para diagnóstico, vigilancia, prevención y tratamiento de algunos padecimientos. En regiones donde, por las condiciones del clima, abundan los animales ponzoñosos, se da un uso especial a los anticuerpos para neutralizar venenos en el tratamiento de pacientes con picaduras o mordeduras de escorpiones, arañas y serpientes. Otro uso actualmente en desarrollo es el tratamiento de enfermedades autoinmunes como artritis reumatoide, diabetes mellitus de origen inmune, SIDA, anemias hemofílicas, fiebre reumática, esclerosis múltiple, tiroiditis y psoriasis, entre otras. En estos casos, los anticuerpos anticitocina se aplican directamente al paciente o por inmunoabsorción extracorpórea. En condiciones ideales, este tratamiento debe eliminar las citocinas generadas por el organismo en respuesta a una enfermedad, evitando así la muerte o una reacción inmune aguda (véase U.S. Pat. No. 5,888,511 y 4,940,670). El concepto de terapéutica anticitocina para combatir enfermedades humanas se originó con el empleo de esteroides en modelos de septicemia caninos y primates. La septicemia, también conocida como síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SIRS) es la respuesta sistémica del huésped a una superinfección del torrente sanguíneo por bacterias productoras de toxinas. La septicemia grave puede causar choque séptico cuando una superinfección conduce a la hipotensión, disminución del riego sanguíneo y disfunción de órganos. El choque séptico causa más de 100 000 muertes al año en Latinoamérica. La patogenia típica de la septicemia incluye exposición a un elemento nocivo, casi siempre una endotoxina, seguida por dos respuestas del huésped, una inflamatoria y otra inmune antiinflamatoria. Antígenos bacterianos como lipopolisacáridos (LPS), que inducen la producción excesiva de citocinas proinflamatorias como TNF-a desencadenan los mecanismos de lesión durante el proceso séptico. Un choque séptico grave puede provocar insuficiencia de órganos vitales como cerebro, corazón, riñones e hígado. La neutralización completa de TNF-a a menudo da lugar infecciones bacterianas, dosis bajas de anticuerpos anticitocina pueden atenuar la respuesta proinflamatoria temprana, un efecto benéfico para prevenir septicemia y choque séptico. En animales y en el ser humano la infusión intravenosa de endotoxinas (como los venenos de animales) produce liberación cuantificable de citocinas como el factor de necrosis tumoral alfa (TNF-a) y la interleucina-1 beta (IL-1ß). En un paciente séptico la concentración en sangre de TNF-a puede correlacionarse con gravedad y mortalidad. Infusión IV de TNF-a reproduce la taquicardia, hipotensión, leucocitosis, coagulopatía, incremento de la permeabilidad, edema pulmonar e insuficiencia de múltiples órganos que caracterizan a la septicemia. La terapéutica antiTNF-a en forma de anticuerpos específicos íntegros a TNF-a, puede proteger a los animales de la muerte provocada por la infusión IV de endotoxina. La interleucina-1ß también induce todos los signos y síntomas de septicemia, como fiebre, anorexia, e hipotensión. El bloqueo de IL-1ß usando un antagonista soluble del receptor IL-1 (IL-1 Ra) puede atenuar la gravedad y mortalidad de la enfermedad en modelos experimentales animales de choque y septicemia. Por tanto, la neutralización o eliminación de citocinas como IL-ß1 y TNF-a pueden conferir resistencia al choque endotóxico. El tratamiento convencional para mordeduras de serpiente y picaduras de escorpión incluye principalmente uso de antivenenos, esteroides y antibióticos. En general, este tratamiento debe iniciarse antes que transcurran dos horas de la mordedura. Las posibles complicaciones de mordeduras y picaduras de insectos incluyen reacción alérgica, infección, toxicosis y reacción al veneno como reacción tóxica o choque. El efecto local sobre los tejidos varía según las diferentes especies de escorpión (arañas o serpientes). Otros efectos pueden incluir hipertensión o hipotensión, sufrimiento respiratorio o pérdida de reflejos protectores en vías respiratorias, edema pulmonar y varios efectos sobre sistema nervioso autónomo. Muchas complicaciones pueden evitarse o reducirse al mínimo mediante la neutralización inmediata de citocinas. En el pasado, los "antivenenos" a mordedura de serpiente se obtenían por hiperinmunización con veneno de serpiente a equinos cuyo suero se administraba después a individuos mordidos por serpientes venenosas. Los anticuerpos del suero equino neutralizan las toxinas del veneno de serpiente, pero los anticuerpos equinos a veces permanecen en el individuo durante varias semanas. En ocasiones, se presenta un cuadro denominado "enfermedad del suero" en respuesta a la inyección de suero de animales de especies diferentes a la humana (que contiene anticuerpos íntegros) a pacientes que deben tratarse con inyecciones de ese tipo. Diferencias en la secuencia primaria de aminoácidos de la inmunoglobulina equina y la inmunoglobulina humana constituyen el estímulo para producir anticuerpos contra la inmunoglobulina equina y otras proteínas extrañas presentes en la inyección de suero extraño. Las primeras manifestaciones de la enfermedad del suero aparecen 7 -10 días después de la inyección inicial. En ese momento, el individuo comienza a mostrar síntomas como fiebre, escalofríos y a veces glomerulonefritis. A menudo, los síntomas se resuelven de manera espontánea luego de retirar de la sangre del individuo el antígeno extraño, pero una nueva exposición al mismo antígeno puede provocar síntomas de aparición más rápida y tal vez mayor gravedad (o sea, cinética similar a una respuesta inmune secundaria). Hace poco, se lograron generar anticuerpos con DNA recombinante expresando péptidos de veneno. Esta tecnología se emplea más extensamente contra el grupo de citocinas inflamatorias que incluye TNF-a, IFN-?, IL-1 e I L-6. Psoriasis vulgaris es la enfermedad inflamatoria en humanos mediada por células T. La patogenia de la psoriasis se vincula con activación de diferentes tipos de leucocitos que controlan inmunidad celular y procesos inflamatorios en la piel dependientes de células T encargados de acelerar el crecimiento de células epidérmicas y vasculares en las lesiones psoriásicas. Las etapas críticas en la activación inmunitaria incluyen maduración de células Langerhans, activación de células T, diferenciación y difusión de células T Tipo 1 , tráfico selectivo de células T activadas hacia la piel e inducción de la cascada de citocinas y quimiocinas inflamatorias en lesiones cutáneas. IFN-? y TNF-a se expresan en mayor concentración en lesiones psoriásicas y también se incrementa la expresión de varios genes regulados por el factor nuclear K ß (transductor de señales TNF-a). Puesto que citocinas secretadas por células T activadas gobiernan respuestas inflamatorias y respuestas inmunes en etapa final, una estrategia terapéutica es desactivar de manera selectiva citocinas específicas con anticuerpos íntegros. Una vez más, el tratamiento con anticuerpos íntegros aumenta el riesgo de una reacción inmune separada a los propios anticuerpos extraños. Las citocinas proinflammatorias también desempeñan un papel importante en el proceso biológico que participa en las respuestas inmunes corneal e inflamatoria, a menudo relacionadas con trasplante de córnea. Se ha comunicado que las células corneales pueden sintetizar varias citocinas y factores de crecimiento, entre ellos IL-1 , IL-6 y TNF-a. Cuando se injertan tejidos u órganos, como parches de piel o una córnea de un animal a otro, el receptor puede aceptar el órgano sin reacción inmunitaria alguna. Alternativamente, el receptor puede rechazar el injerto en un lapso variable según los mecanismos efectores subyacentes. Un rechazo hiperagudo se presenta de manera acelerada en pacientes que poseen anticuerpos contra injerto y puede evitarse por compatibilización ABO y mediante prueba de compatibilidad cruzada en la cual se ensaya el suero de un candidato a receptor a fin de detectar la presencia de anticuerpos citotóxicos antidonador. Una reacción aguda toma días o semanas para manifestarse y se debe principalmente a la activación de células T que desencadena mecanismos efectores diferentes, entre ellos producción de citocinas. El factor alfa de necrosis tumoral (TNF-a) desempeña un papel activo en el rechazo agudo de injerto, esto indica que la neutralización o minimización de TNF-a ayudará a prevenir el rechazo agudo. También se implica a la ¡nterleucina-1a en la respuesta aloinmune temprana al trasplante de córnea, por tanto la neutralización o minimización de IL-1a también puede ayudar a prevenir el rechazo de trasplante de córnea. (Véase Zhu, et al., J. Ifn. & Cytokine Rsrch., 19:661-669 (1999)). Rechazo crónico se atribuye principalmente a disparidad genética entre donador y receptor del injerto y con mayor frecuencia el tratamiento se basa en fármacos inmunosupresivos. Hoy día están en curso investigaciones sobre el tratamiento de enfermedades autoinmunes, incluso SIDA, bloqueando, inhibiendo, neutralizando o retirando interferones nocivos, factores de necrosis tumoral y otros inmunógenos o factores patológicos, pero sus aciertos no se han difundido con amplitud debido a complicaciones a menudo relacionadas con inmunoterapia. (Véase U.S. Patent No. 5 888 511). Un método terapéutico descrito consiste en administrar a un paciente una dosis eficaz de anticuerpos anti-IFN-y, receptor o ambos para tratar una enfermedad autoinmune mediada por IFN-?. Este tratamiento con anticuerpos o receptores íntegros puede despertar su propia reacción inmune si el sistema inmunitario del paciente reconoce los anticuerpos como extraños y esto sería contraproducente en la estrategia terapéutica total para la enfermedad autoinmune subyacente. Artritis Reumatoide (AR) es una enfermedad inflamatoria crónica común, a menudo grave. Las citocinas participan en casi todos los aspectos de la AR, en la inflamación sinovial y destrucción de tejidos articulares, el factor de necrosis tumoral (TNF) desempeña un papel de particular importancia. La neutralización de TNF en pacientes con AR mediante infusión intravenosa de receptores TNF solubles o anticuerpos anti-TNF parece prometedora, pero con frecuencia induce una respuesta inmune separada. (Véase Fox, D., Arch. Intern. Med. 160: 437-444 (2000)). Por tanto, aunque estos tratamientos pueden, en teoria, neutralizar algunas de las citocinas que participan en AR, la posibilidad de causar una reacción inmune separada impide la difusión más amplia del éxito de tales tratamientos. La administración de una mezcla que comprende fragmentos de anticuerpo F(ab')2 permite neutralizar eficazmente citocinas relacionadas con AR en tanto se disminuye sustancialmente la posibilidad de una reacción inmune separada como la descrita anteriormente. También la septicemia ha derrotado todos los enfoques terapéuticos no obstante el esfuerzo invertido en los ensayos clínicos realizados en los últimos veinte años. Esteroides como los corticosteroides se ensayaron en varias etapas de la septicemia, pero fracasaron sin mostrar beneficio significativo alguno en el tratamiento. (Véase Martin, Greg S., CHEST, Current Management Strategies for Severe Sepsis and Septic Shock (2001)). Antibioticoterapia combinada con control y eliminación de las fuentes de infección (si es posible) es el tratamiento habitual con mínimos beneficios cuando se aplican en la etapa inicial de la septicemia. (Id.). Técnicas inmunoterapéuticas que van desde administración de glucocorticoides hasta preparaciones con anticuerpos monoclonales también se relacionan con efectos adversos como trastornos de la reacción inmune y por tanto no se utilizan con gran amplitud. (Véase Zeni ef al., Crit. Care Med. 25:1095-1100 (1997)).

RESUMEN El tratamiento con fragmentos de anticuerpo anticitocina F(ab')2 permite neutralizar las citocinas en exceso en tanto se reduce al mínimo el riesgo de una reacción inmune separada a los propios fragmentos. El invención se refiere, en cierto aspecto, a un método terapéutico para la reacción inmune mediada por cítocinas en pacientes que necesitan ese tratamiento e incluye administración tópica de una cantidad eficaz de fragmentos de anticuerpo anticitocina F(ab')2. La citocina relevante puede ser: factor alfa de necrosis tumoral (TNF-a), una interleucina como interleucina-1 (IL-1), interleucina-1 alfa (IL-1a), interleucina-1 beta (IL-1 ß), interleucina-2 (IL-2), interleucina-6 (IL-6), interleucina-12 (IL-12), o un ¡nterferón tipo II (IFN) como el interferón gamma (IFN-?). Otro aspecto de la presente invención se orienta a encontrar un método para tratar reacciones inmunes mediadas por citocina en pacientes que lo requieran, e incluye administración tópica de un compuesto farmacéutico que comprenda fragmentos de anticuerpo anticitocina F(ab')2 en combinación con un vehículo dermatológico aceptable. Un aspecto más de la invención se refiere a métodos de administración de un compuesto farmacéutico que comprenda fragmentos de anticuerpo F(ab')2 para neutralizar una compleja mezcla de moléculas antigénicas, como el veneno de un animal ponzoñoso, a pacientes que lo requieran. Otro aspecto, aún más, de la presente invención se orienta a un método para tratamiento de reacciones inmunes mediadas por citocina, como rechazo de injerto o trasplante, en pacientes que lo requieran, y comprende administración tópica de fragmentos de anticuerpo anticitocina F(ab')2 combinados con un vehículo dermatológico aceptable. Otro aspecto de ia presente invención se orienta a un método para tratamiento de reacciones inmunes mediadas por citocina en pacientes que lo requieran, como quien sufre reacción de rechazo agudo de injerto, y que incluye administración tópica de fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anticitocína combinados con un vehículo dermatológico aceptable. El rechazo de injerto puede relacionarse con trasplantes de tejido como córnea o piel de un donador a un receptor.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA TERMINOLOGÍA INCORPORADA El siguiente glosario es una ayuda para entender ciertos términos empleados. Las explicaciones suministradas en el glosario sirven fines ilustrativos y no limitan el alcance de la invención. Los términos "paciente" e "individuo" se emplean de manera indistinta para referirse a un animal de sangre caliente, como los mamíferos, que ha sufrido mordedura o picadura de un animal venenoso o que padece una enfermedad autoinmune o la enfermedad "injerto contra huésped" o se encuentra en peligro de rechazo de un alotrasplante de tejido u órgano. Se entiende que humanos y animales quedan incluidos en el alcance de los términos "paciente" o "individuo," salvo se especifique otra cosa en contrario. "Inmunógeno" es toda célula o molécula capaz de inducir una respuesta inmune (producción de anticuerpos, sensibilización de células linfoides o ambas cosas) en un individuo inmunológicamente competente. "Reacción inmune mediada por citocina" es la respuesta inmunológica y el consiguiente proceso inflamatorio inducidos por el grupo de proteínas de bajo peso molecular conocidas como citocinas. Puede incluir reacciones causadas por mordedura de animales venenosos, septicemia, choque séptico y además varias enfermedades autoinmunes como artritis reumatoide o psoriasis. Estas reacciones también pueden abarcar rechazo inmediato de tejido trasplantado, injerto o prótesis. "Choque anafiláctico" es una forma grave de anafilaxia generalizada en la que se libera gran cantidad de histamina y otras sustancias vasoactivas causando edema, broncoconstricción, insuficiencia cardiaca, colapso circulatorio y en ocasiones la muerte. "Anafilaxia" es la máxima sensibilidad inmunológica del cuerpo o los tejidos a la reaparición de un antígeno. Es una forma de reacción anamnésica acompañada con alteraciones patológicas en tejidos u órganos causadas por liberación de sustancias farmacológicamente activas como histamina, citocina o ambas. Las "citocinas" son miembros de un grupo de proteínas semejantes a hormonas, producidas y secretadas por células de mamíferos; poseen actividad autocrina o paracrina. Inducen en la célula efectora respuestas que dependen de la citocina y de dicha célula. Por ejemplo, las citocinas desempeñan un papel en la respuesta inmune a la infección o al agente/organismo infeccioso. Las citocinas actúan dentro de una compleja red donde pueden inducir producción y secreción de otras citocinas, modular la expresión de receptores citocina y tienen la capacidad de generar efectos sinérgicos o antagónicos con otras citocinas. Por tanto, las citocinas contribuyen a regular la intensidad y duración de una respuesta inmune. "Antígeno" es una molécula que reacciona con anticuerpos preformados o con fragmentos de anticuerpo (como F(ab')2) y con receptores específicos sobre células T y B. En animales vertebrados "respuesta inmune" se define como una capacidad adquirida y transferible de los linfocitos a reaccionar con especificidad y memoria a sustancias extrañas. "Linfocitos" son leucocitos (células de la serie blanca) de una clase capaz de reconocer antígenos específicos mediante receptores sintetizados por ellos mismos en la superficie celular. Una "inmunoglobulina" (Ig) es cualquier miembro de un grupo de proteínas presentes como componentes principales del sistema inmunitario en animales superiores. Se producen en células de la serie linfocítica y prácticamente todas poseen acción específica a un anticuerpo. Toda inmunoglobulina contiene básicamente cuatro cadenas polipéptido, dos cadenas pesadas idénticas y dos cadenas ligeras idénticas, unidas por uniones disulfuro. Además, todas llevan unida una cantidad diferente de oligosacárido. Existen cinco clases de inmunoglobulinas, IgA, IgD, IgE, IgG, e IgM. La estructura primaria de las cadenas pesadas difiere en las diferentes clases, se designan a, d, e, y, y µ, respectivamente para las clases mencionadas antes. Existen dos tipos de cadenas ligeras, K y ?. Las moléculas IgA e IgM contienen múltiplos de la unidad de cuatro cadenas. "Factor Alfa de Necrosis Tumoral o TNF-a" (antes denominado caquetina) es una citocina producida por macrófagos, monocitos, células endoteliales, neutrófilos, células de músculo liso, linfocitos activados y astrocitos. Es una glucoproteína citotoxiná transmembrana con varias funciones, entre ellas capacidad para mediar la expresión de genes de factores de crecimiento, citocinas, factores de transcripción y receptores. Puede causar citólisis de ciertos linajes de células tumorales y se le implica en la inducción de caquexia. Es un potente pirógeno que causa fiebre por acción directa o estimulando la secreción de interleucina-1. También puede estimular la proliferación de células y en ciertas condiciones inducir diferenciación celular. La molécula es un homotrímero. Una "interleucina" es todo miembro de un grupo heterogéneo de citocinas que pueden actuar como moléculas de señalización en diferentes poblaciones de leucocitos. "lnterleucina-1 o IL-1" (Cuyos nombres anteriores incluyen: factor activador de linfocitos (LAF); proteína mitógena (MP); ayudante-máximo-1 (HP-1); factores ll y m de recolocación de células-T (TRF-lll, TRF-M); y factor de activación/diferenciación de células-B (BAF, BDF)). Los principales productores de IL-1 son macrófagos activados. Carece de capacidad para promover y mantener cultivos in vitro de células T durante tiempo prolongado, pero estimula la proliferación de timocitos induciendo la liberación de interleucina-2. Participa en la respuesta inflamatoria y se identifica como pirógeno endógeno. "lnterleucina-1-alfa o IL-1-a" es una de las dos formas moleculares de interleucina-1. "lnterleucina-1-beta o IL-1-ß" es la segunda de las dos formas moleculares de interleucina-1. "lnterleucina-2 o I L-2" (Otros nombres incluyen: factor timocito-mitógeno (TMF); factor de crecimiento de células-T (TCGF); co-estimulador; factor auxiliar citocida (KHF); factor secundario inductor de células T citotóxicas (SCIF). lnterleucina-2 es una interleucina producida por células T en respuesta a estímulos mitógenos o antigénicos. IL-2 promueve y mantiene cultivos in vitro a largo plazo. IL-1 induce la expresión tanto de IL-2 como del receptor IL-2 para células T. "lnterleucina-6 o I L-6" (Otros nombres incluyen factor 2 estimulador de células-B; interferón ß-2; y factor de crecimiento de hibridoma). IL-6 es una interleucina que induce crecimiento de mieloma y plasmacitoma y también diferenciación de células nerviosas. En hepatocitos induce reactantes de fase aguda. En gran número de respuestas inmunes IL-6 actúa de modo sinérgico con IL-1 y TNF, entre ellas activación de células T. El principal efecto de I L-6 es incrementar la respuesta de células inmunitarias a otras citocinas. "lnterleucina-12 o IL-12" (su nombre alternativo es factor citotóxico de maduración de linfocitos). IL-12 es una interleucina capaz de actuar como factor de crecimiento para células T activadas y células citocidas naturales (NK). Puede incrementar la actividad lítica de NK/células citocidas activadas-Iinfocina y estimula la producción de ¡nterferón-? por inactividad de PMBC. Es un heterodímero unido por subunidades disulfuro de 40 kDa y 35 kDa. Un "interferón o IFN" es todo miembro de un conjunto de proteínas que constituyen un grupo estrechamente relacionado de proteínas no virales producidas y liberadas por células animales después de exposición a varios agentes inductores. Normalmente no están presentes en células no inducidas. Las células humanas producen tres tipos principales de ¡nterferón: interferón alfa (IFN-a), ¡nterferón beta (IFN-ß), e interferón gamma (IFN-?). Los interferones alfa y beta se clasifican como ¡nterferones Tipo I, y el interferón gamma se clasifica como interferón Tipo II. Linfocitos activados por antígenos o mitógenos específicos produce un "interferón Tipo II" (también llamado interferón gamma, o IFN-?). Además de la actividad antiviral posee funciones inmunorreguladoras importantes, como activación de macrófagos. I nterferón gamma es una glucoproteína que existe como heterodímero. El término "sustancialmente libre" se refiere a la ausencia de material pirógeno y proteína extraña a los fragmentos de anticuerpo F(ab')2, como albúmina o anticuerpos completos, según la farmacopea mexicana. El término "condiciones asépticas" se refiere a medidas de precaución o métodos empleados en el manejo de diferentes productos en cada paso del método propio de la presente invención para prevenir contaminación en cultivos o medios estériles e infección por microorganismos extraños o contaminantes. El término "cantidad eficaz" o "cantidad farmacéuticamente eficaz" de un compuesto en dosis unitarias de su formulación depende de algunos factores. Entre ellos se incluye cantidad de algún otro ingrediente utilizado y tolerancia del ingrediente activo del compuesto. La cantidad eficaz del ingrediente activo varía desde 0.1% hasta 50% por peso con base en el peso total del compuesto. La cantidad de la preparación anticitocina F(ab')2 que debe administrarse depende de las especies de las cuales se recolectó el veneno. En compuestos contra escorpiones, la preparación F(ab')2 en cada frasco es la cantidad necesaria para neutralizar alrededor de 135 a 220 dosis letales 50% (LD50) del veneno. En compuestos contra la araña viuda negra, la cantidad necesaria para neutralización es 540 a 880 dosis letales 50% (LD50) del veneno. En compuestos contra serpiente coral, la cantidad necesaria para neutralización es 360 a 660 dosis letales 50% (LD50) del veneno. En compuestos contra i-Bothrops y Crotalus, los frascos contienen la cantidad necesaria para neutralizar 700 a 1100 dosis letales 50% (LD50) del veneno. "Administración tópica" incluye aplicación de sustancias medicinales a la piel o algunos orificios del cuerpo. Los medicamentos pueden aplicarse en varias formas, p. ej., líquida, semisólida o sólida. Con la aplicación tópica de medicamentos se puede suministrar un ingrediente activo localmente y también sistémicamente. "Emolientes" son sustancias blandas, grasas u oleaginosas aplicables localmente, en particular a la piel, y también a membranas mucosas o tejidos con raspaduras. Mediante una capa de emoliente se puede evitar que irritantes hidrosolubles, aire y bacterias de la atmósfera se asienten sobre la piel. Algunos ejemplos de emolientes comunes son aceite de ricino, aceite de ricino sulfatado, manteca de cacao, aceite de coco, cold cream, aceite de maíz, aceite de semillas de algodón, ungüento hidrófilo, aceite de ajonjolí, y aceite de teobroma. "Vehículo farmacéutico aceptable" o "vehículo dermatológico aceptable" es una sustancia inerte sólida o líquida, coadyuvante, aditivo, o excipiente cuyo empleo es seguro en administración tópica. Varios vehículos farmacéuticos aceptables bien conocidos en la industria incluyen líquidos o sólidos inertes, diluyentes, emolientes, hidrotropos, agentes tensoactivos y sustancias encapsulantes. La cantidad del vehículo empleado junto con los fragmentos F(ab')2 son suficientes para suministrar una cantidad práctica de material por dosis unitaria del compuesto.. Vehículos farmacéuticos específicos aceptables para administración tópica incorporables en la composición de la invención incluyen solventes como agua, alcoholes, alquilmetilsulfóxidos, pirrolidonas, laurocapram y diversos solventes como acetona, dimetilacetamida dimetilformamida Algunos posibles componentes de las formulaciones tópica, transdérmica y transmucosa, y los recursos para administrarlas incluyen agentes solubilizantes, suspensores, dispersantes, conservadores; grasas, aceites o ceras animales y vegetales; agentes estabilizantes, espesantes o gelificantes, amortiguadores, adhesivos; coadyuvantes y aditivos, emulsificantes y agentes que incrementan la penetración. Algunos ejemplos de conservadores convencionales son metilparabeno, propil y butil imidazolidinilurea, metilcloroisotiazolinona metilisotiazolinona. Ejemplos de coadyuvantes y aditivos que pueden añadirse a compuestos de administración tópica incluyen bactericidas, fungicidas, viricidas, filtros solares, ingredientes activos con acción refrigerante, antioxidantes, extractos de plantas, antiinflamatorios, cicatrizantes, sustancias tensoactivas, emulsificantes, emolientes, hidratantes, humectantes, grasas, aceites, ceras, alcoholes, polioles, polímeros, antiespumantes, solventes orgánicos, derivados de silicona o agentes quelantes.

Aceites y ceras adecuados para uso en compuestos dermatológicos incluyen aceites minerales (petróleo líquido), aceites vegetales (fracción líquida de la mantequilla karite, aceite de girasol), aceites animales (perhidroescualeno), aceites sintéticos (aceite purcellin), aceites silicon o ceras y aceites fluorados. Algunos emulsificantes adecuados para uso en compuestos dermatológicos incluyen estearato de glicerilo, polisorbato 60, y monoestearato sorbitán. Ejemplos de solventes utilizados en compuestos tópicos incluyen alcoholes de bajo peso molecular, como etanol, isopropanol y propilenglicol. Agentes gelificantes hidrófilos que pueden emplearse en compuestos tópicos incluyen polímeros carboxivinilo, copolímeros acrílicos, poliacrilamidas, polisacáridos, gomas y arcillas naturales. Agentes gelificantes lipófilos incluyen arcillas modificadas, sales metálicas de ácidos grasos (como estearatos de amonio) y silica hidrófoba, etilcelulosa o polietileno. "Bloqueadores copolímeros polioxialquileno" son copolímeros no iónicos de óxidos de etileno y propileno. El segmento poli (oxietileno) es hidrófilo y el segmento poli (oxipropileno) es hidrófobo.

Como se describió antes de manera breve, existen cinco clases principales de inmunoglobulinas, designadas como IgM, IgG, IgA, IgE, e IgD. En cada clase de moléculas Ig las cadenas pesadas se designan Y (gamma), µ (mu), a (alfa), e (epsilón), y d (delta) para las clases IgG, IgM, IgA, IgE, e IgD, respectivamente. Una molécula típica de inmunoglobulina (Ig) posee un coeficiente de sedimentación de casi 7S y peso molecular alrededor de 150 000 daltons. El modelo de una molécula Ig completa es la letra Y. Todas las inmunoglobulinas tienen la misma estructura general. Se componen de cuatro cadenas de polipéptidos, dos pesadas (H) y dos ligeras (L). Las dos cadenas pesadas se unen mediante dos puentes disulfuro conocidos como la región bisagra, que se encuentra aproximadamente a la mitad de la cadena. En un punto más próximo a la región terminal amino, cada cadena pesada se encuentra unida a una cadena ligera mediante un puente disulfuro. Cada cadena pesada posee tres regiones constantes, CH?, CH2 y CH3, que son las dos últimas en la región terminal carboxi (antes de la bisagra) y las dos primeras en la región terminal amino (justo después de la bisagra). Cada cadena pesada también posee una región variable (VH) en el extremo' terminal amino. En las clases IgM e IgE existen cuatro de dichas regiones constantes. Las cadenas ligeras sólo tienen una región constante, CL, en el extremo terminal carboxi y una región variable, VL, en el extremo terminal amino. Dentro de una clase de ¡nmunoglobulinas, todas las regiones constantes presentan secuencias homologas de aminoácidos. Las cadenas pesadas µ y e carecen de regiones bisagra y contienen un dominio constante extra en la región central. La digestión enzimática de IgG rinde diferentes fragmentos según la enzima usada. Cuando se emplea papaína, se obtienen tres fragmentos, el fragmento cristalizable (Fc), y dos fragmentos de unión a antígeno (Fab). Si se emplea pepsina, se obtiene un fragmento F(ab')2, en tanto que el fragmento cristalizable se digiere. (Véase U.S. Patent Application Pub. No. 2002/0164327). Esto se debe a que la papaína corta las cadenas pesadas justo después de la bisagra (hacia la región terminal amino), en tanto que la pepsina las corta antes de la bisagra (hacia la región terminal carboxi). Fab y F(ab')2 son fragmentos que conservan su capacidad de unirse de manera específica al antígeno que dio lugar a su formación. F(ab')2 aún precipitará antígenos, en tanto que la fracción anticuerpo Fc actúa normalmente como señal marcadora de macrófagos y en la activación de linfocitos para reconocimiento y fagocitosis del complejo antígeno-anticuerpo. El fragmento Fc comprende los determinantes antigénicos del anticuerpo de modo que cuando se administran a un paciente anticuerpos íntegros generados en un animal de otra especie, el paciente produce una respuesta inmune contra estos determinantes antigénicos. Esto da lugar a varias respuestas adversas secundarias incluso choque anafiláctico. Estos problemas se reducen de modo significativo cuando los anticuerpos se digieren con papaína o pepsina y se administran sólo los fragmentos resultantes purificados Fab o F(ab')2. Esto se debe a que estos fragmentos carecen de determinantes antigénicos los cuales permitirían que el organismo del paciente los reconociera como extraños. El uso de fragmentos Fab o F(ab')2 de anticuerpo tiene otra ventaja respecto a volumen de distribución. Volumen de distribución es el volumen del cuerpo en el cual se disuelve un fármaco determinado. Este volumen puede referirse sólo a sangre circulante, como en el caso de IgG, o a veces incluye una porción mayor del agua corporal, como ocurre con los fragmentos. Puesto que Fab y F(ab')2 ocupan mayor volumen corporal pueden neutralizar toxinas alojadas en varios tejidos y no se limitan a circular en la sangre; también pueden atravesar la barrera hematoencefálica en ambas direcciones y por tanto se pueden emplear para neutralizar o eliminar neurotoxinas. El uso de F(ab')2 tiene una ventaja particular sobre Fab en que permanece más tiempo en el paciente. Esto se debe a que el peso molecular de los fragmentos F(ab')2 es doble respecto al de Fab, conserva su capacidad de precipitar el antígeno en condiciones fisiológicas y mantiene un tamaño que le permite acceder a un volumen de distribución suficiente para fines terapéuticos. Un compuesto farmacéutico con anticuerpos F(ab')2 se prepara inmunizando por separado grupos de animales con veneno de serpientes, escorpiones, arañas u otros animales ponzoñosos, después se sangra a los animales para obtener los anticuerpos producidos en respuesta a la inmunización. Se mezcla entonces el plasma sanguíneo de diferentes animales inmunizados contra el mismo veneno polivalente, y se colectan los fragmentos de anticuerpo F(ab')2 luego de digestión con pepsina y precipitación con sulfato de amonio. F(ab')2 purificado obtenido por cada género de veneno se mezcla en proporciones iguales en frascos antes de formulación, dosificación y/o liofilización. También se pueden producir fragmentos de anticuerpo F(ab')2 específicos a una citocina particular por hiperinmunización con una citocina específica según se describió antes, seguida por digestión con pepsina y precipitación con sulfato de amonio, pero sin mezclar el fragmento de anticuerpo F(ab')2 anticitocina purificado con fragmentos específicos a otras citocinas. Por ejemplo, se puede producir F(ab')2 anti-TNF-a inmunizando un animal con TNF-a, y siguiendo el método ya descrito. F(ab')2 purificado específico a una citocina también puede formularse, dosificarse y/o liofilizarse en frascos para almacenamiento. Un "humano necesitado de este tratamiento" puede ser cualquier persona que tuvo contacto o se le inyectó alguna toxina como el veneno de un animal ponzoñoso. Un humano necesitado de este tratamiento también puede ser una persona que sufra alguna enfermedad inflamatoria mediada por citocina como psoriasis vulgaris o artritis reumatoide. Un "humano necesitado de este tratamiento" también puede incluir una persona que ha recibido injerto o trasplante de órgano y puede experimentar una reacción inmune mediada por citocina como rechazo agudo de trasplante.

La presente invención se orienta hacia un método para tratar reacciones inmunes mediadas por citocina en pacientes necesitados de ese tratamiento, mediante la administración de una cantidad eficaz de fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anticitocina. Los fragmentos de anticuerpo deben estar libres de albúmina y anticuerpos íntegros así como sustancialmente libres de pirógenos y que puedan administrarse con una cantidad aceptable de un vehículo dermatológico. Los fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anticitocina pueden administrarse en varios vehículos, entre ellos, pero no limitados a estos: líquidos, ungüentos, emolientes, cremas, lociones, geles, frotaciones, soluciones, nebulizaciones, polvos, parches transdérmicos, bioadhesivos, vendajes, y pastas. La administración tópica de la presente invención proporciona un medio para suministrar una cantidad farmacológicamente eficaz de fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anticitocina a pacientes que los necesiten. Estos pacientes pueden incluir humanos o animales en contacto con el veneno de un animal ponzoñoso como serpiente, araña o escorpión, o que sufran otra reacción inmune mediada por citocina, aunque no se limitan sólo a estos. En consecuencia, un objetivo de la presente invento es proporcionar un compuesto de administración tópica con un fármaco que favorezca la neutralización o inhibición de citocinas producidas como parte de la respuesta inmune a la introducción de un veneno en el cuerpo humano. Otro objetivo de la presente invención es suministrar dicho tratamiento tópico y al mismo tiempo evitar las reacciones alérgicas que acompañan a otros tratamientos antiveneno, tal vez relacionadas con la presencia de actividad anticomplemento (o sea. Anticuerpos íntegros) o de impurezas. El método correspondiente a esta invención se aplica con preferencia justo después de exposición al veneno de un animal ponzoñoso o en las primeras 24 horas de un trasplante de tejido, para prevenir y neutralizar los efectos de la producción excesiva de citocina.

Las reacciones inmunes ya descritas pueden inducirse introduciendo una toxina en la sangre de un humano, por ejemplo por mordedura de un animal venenoso. El método correspondiente a esta invención incluye aplicación al área afectada de un vehículo dermatológico aceptable que contenga una cantidad eficaz de fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anticitocina para neutralizar el exceso de citocinas. Otro objetivo de esta invención es prevenir el desarrollo de septicemia como resultado de un desequilibrio incontrolado de citocina. Además, la aplicación tópica de fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anticitocina puede ser útil para prevenir rechazo inmediato de injerto, común después de trasplante de córnea o de piel. Atacando a una o más citocinas con los fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anticitocina administrados se puede suprimir la enfermedad corneal o incrementar la aceptación del injerto de córnea. De manera similar, también pueden usarse los fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anticitocina para tratar y prevenir rechazo inmediato o crónico de injerto de otros órganos y tejidos. La aplicación tópica de compuestos que contengan una cantidad farmacéuticamente eficaz de fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anticitocina puede provocar efectos epidérmicos, dérmicos, locales y sístémicos por penetración del fármaco en la epidermis y dermis viables, una vez ocurrida la permeación transepidérmica la difusión continua del fármaco al interior de la dermis es probable que transfiera el fármaco a la mícrocirculación de la dermis y de allí a la circulación general. Una contribución de la presente invención comprende un método para tratar reacciones mediadas por citocina en humanos que incluye administración tópica de una cantidad eficaz de fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anticitocina a personas necesitadas de este tratamiento. Las reacciones inmunes susceptibles de tratamiento con las técnicas de esta invención pueden ser inducidas por citocinas como factor alfa de necrosis tumoral (TNF-a), miembros de la familia interleucina (ILs), o interferones (IFNs). Los métodos correspondientes a la presente invención son particularmente adecuados para tratamiento de reacciones mediadas por interleucinas como interleucina-1 (IL-1), interleucina-1a (IL-1a), interleucina-1 ß (IL-1 ß), interleucina-2 (IL-2), interleucina-6 (IL-6), e interleucina-12 (IL-12). Los métodos correspondientes a la presente invención también son particularmente adecuados para tratamiento de reacciones inmunes mediadas por interferón gamma (IFN-?). Otra contribución de la presente invención incluye un método para administración tópica de un vehículo líquido dermatológico aceptable que contiene 0.1%-50% por peso de fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anticitocina. Otra contribución de la presente invención incluye un método para administración tópica de un vehículo líquido dermatológico aceptable que contiene 8%-35% por peso de fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anticitocina. Otra contribución de la presente invención incluye un método para administración tópica de un vehículo líquido dermatológico aceptable que contiene 10%-25% por peso de fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anticitocina. En la contribución prioritaria de la presente invención, el método comprende aplicación tópica de un vehículo líquido dermatológico aceptable que contiene 15%-20% por peso de fragmentos anticuerpo F(ab')2 anticitocina. Otra contribución de la presente invención comprende un método para administración tópica de un vehículo gel dermatológico aceptable que contiene 0.1%-50% por peso de fragmentos anticuerpo F(ab')2 anticitocina. Otra contribución de la presente invención comprende un método para administración tópica de un vehículo gel dermatológico aceptable que contiene 8%-35% por peso de fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anticitocina. Otra contribución de la presente invención incluye un método para administración tópica de un vehículo gel dermatológico aceptable que contiene 10%-25% por peso de fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anticitocina. En la contribución prioritaria de la presente invención el método comprende aplicación tópica de un vehículo gel dermatológico aceptable que comprende 15%-20% por peso de fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anticitocina. Una contribución de la metodología de la presente invención es que se lleva a cabo en las primeras 24 horas de exposición a toxinas como venenos de animales ponzoñosos o en las primeras 24 horas de un transplante o injerto. Otra contribución de la metodología de la presente invención es que se lleva a cabo en las primeras 12 horas de exposición a toxinas como venenos de animales ponzoñosos o en las primeras 12 horas de un transplante o injerto. Otra contribución de la metodología de la presente invención es que se lleva a cabo en las primeras 2 horas de exposición a toxinas como venenos de animales ponzoñosos o en las primeras 2 horas de un trasplante o injerto. La contribución prioritaria de la metodología de la presente invención es que se lleva a cabo en los primeros 30 minutos de exposición a toxinas como venenos de animales ponzoñosos, o en los primeros 30 minutos de un transplante o injerto. Aquellos con experiencia ordinaria en este arte saben que la liberación de un fármaco de su vehículo es función de concentración, solubilidad en el vehículo y en el sitio receptor. La absorción percutánea del fármaco se puede incrementar utilizando técnicas oclusivas o empleando agentes que incrementan la penetración.

EJEMPLOS Para ilustrar mejor la metodología de la presente invención en la administración de fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anticitocina, se proporcionan los siguientes ejemplos específicos que ayudarán al lector en los diferentes aspectos prácticos de la presente invención. Estos ejemplos específicos son meramente ilustrativos, por tanto nada en las siguientes descripciones debe considerarse como limitante de la invención en forma alguna. Los porcentajes de los componentes incluidos en la invención se refieren por su peso en cada compuesto como un todo, salvo se haga notar otra cosa.

EJEMPLO 1 Vehículo líquido. Un compuesto líquido se elabora mezclando los siguientes componentes: (a) bloqueador copolímero polioxialquileno de 26% hasta cerca de 100%; (b) glicol de 0% a casi 70%; (c) agua de 0% hasta alrededor de 50%; y (d) fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anticitocina anti-TNF-a desde 0.1% hasta 50% aproximadamente. Dicha composición se aplica directamente al sitio de la mordedura del animal o insecto venenoso, de preferencia inmediatamente después de la mordedura para máxima neutralización de citocinas.

EJEMPLO 2 Fragmentos F(ab')2 con base farmacéutica tópica. El compuesto administrado en este ejemplo adopta la forma de crema tópica. Antes de las primeras dos horas después de la mordedura por un animal venenoso se aplica la crema descrita más adelante sobre el sitio de inyección o contacto con el veneno. El compuesto comprende: (a) alrededor de 1% hasta 40% de urea por peso; (b) un astringente como acetato de calcio, sulfato de amonio o una mezcla de estos desde 0.01% hasta casi 1 % por peso; (c) un agente anestésico y excipientes dermatológicos aceptables desde alrededor de 0.01% hasta cerca de 1% por peso; y (d) fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anticítocina antí-IFN-? 0.1% a 50% por peso.

EJEMPLO 3 Administración con mayor penetración y menor irritación. El sistema para aumentar la penetración del compuesto que se aplica en este ejemplo incrementa de manera eficaz el suministro transdérmico de fragmentos F(ab')2, anticitocina en tanto reduce la irritación en la piel. Este método también se puede usar para administración en mucosas. Luego de una mordedura por un animal ponzoñoso se aplica liberalmente el siguiente compuesto sobre el área afectada. El compuesto comprende: (a) fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anticitocina (agente activo) con 0.1- 50 por ciento del peso total del compuesto; (b) un sistema para incrementar la penetración que consiste esencialmente de (i) una membrana fluidificadora que contiene ácido oleico; (ii) un alcohol C C4; y (íii) un glicol con pH entre 4 y 8. El compuesto administrado con el método de este ejemplo también se puede preparar con un agente gelificante para incrementar la viscosidad.

EJEMPLO 4 El método empleado en el presente ejemplo permite liberación eficiente y continua de fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anticitocina sobre la piel e incrementa la penetración en la epidermis, tejidos dérmicos y subcutáneos subyacentes. Después de la mordedura de un animal ponzoñoso se aplica una cantidad generosa del compuesto sobre el área afectada. El compuesto administrado con el método del presente ejemplo contiene: (a) alrededor de 1% de laureth-4 (u otro agente reductor de tensión superficial); (b) cerca de 2% de propilenglicol (o un agente alternativo hidratante de la piel); (c) cerca de 0.5% de dimetilsorbato (o un agente alternativo acoplador hidrófilo-lipófilo; (d) 0.1% a 50% de fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anticitocina; y (e) un diluyente farmacéutico aceptable que contenga una mezcla de agua y etanol.

EJEMPLO 5 En este ejemplo se describe un método para administrar un compuesto que contiene fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anticitocina a un paciente con artritis reumatoide que los necesita. Se aplica a la superficie de la piel un compuesto como el descrito en los Ejemplos 2, 3 o 4 en los sitios de dolor, inflamación o ambas cosas que acompañan a la artritis reumatoide para permitir la penetración al interior de la epidermis, dermis subyacente y posiblemente a líquido sinovial. Esta penetración permite suministrar fragmentos anticuerpo F(ab')2 anticitocina para neutralizar citocinas como TNF-a y controlar la actividad de la enfermedad. El compuesto se aplica a la piel una vez al día como mínimo, tal vez con mayor frecuencia si es necesario, durante varios meses para mantener un bloqueo prolongado de citocinas y controlar la inflamación articular crónica. Un compuesto débil puede contener alrededor de 0.1% por peso de fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anticitocina. Un compuesto de mayor concentración puede contener hasta 50% por peso de fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anticitocina. Estos compuestos se aplican con poca frecuencia, p. ej., una vez por semana, pero frecuencia y concentración de los compuestos pueden aumentar según las condiciones del paciente. Para casos más graves lo apropiado son concentraciones más altas.

EJEMPLO 6 Prevención de rechazo de trasplante de tejido. Este ejemplo describe un método para prevenir el rechazo de tejido trasplantado causado por citocinas proinflamatorias que participan en la respuesta aloinmune. Una de dichas citocinas es TNF-a. Por tanto, se aplica tópicamente un compuesto como el descrito en el Ejemplo 2, 3 o 4 que contiene alrededor de 40% por peso de fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anti-TNF-a al receptor de un injerto tres veces al día durante 8 semanas, iniciando 24 horas después del trasplante. Los fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anti-TNF-a se absorben en el tejido que rodea el injerto y en el propio tejido del injerto para neutralizar citocinas TNF-a y promover la cicatrización, con rechazo escaso o nulo del injerto.

EJEMPLO 7 Prevención del rechazo de trasplante de córnea. Este ejemplo describe un método para prevenir el rechazo de tejido trasplantado, en especial tejido corneal, causado por citocinas proinflamatorias que participan en la respuesta aloinmune. Compuestos como los descritos en los Ejemplos 2, 3 o 4 que contienen 20-30 mg/ml de fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anti-TNF-a en suspensión oftálmica se aplican directamente al ojo. La primera dosis del compuesto se aplica en las primeras 24 horas de la intervención para trasplante de córnea. El primer paso es tirar hacia abajo con cuidado el párpado inferior y aplicar una gota del compuesto en el párpado con solución salina amortiguada como vehículo que también puede contener antimicrobianos y agentes estabilizantes. Se libera el párpado y debe evitarse el parpadeo al menos 30 segundos. Este proceso se repite cada 2 a 3 horas durante 8 semanas para prevenir rechazo del injerto corneal.

EJEMPLO 8 Alternativamente, los fragmentos de anticuerpo F(ab')2 pueden suministrarse a través de suspensión o ungüento oftálmicos. Los fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anti-TNF-a se ponen en suspensión en condiciones estériles y se aplican en las primeras 24 horas después de la operación para trasplante corneal. Esta suspensión suele almacenarse en tubo depresible que se emplea para administrar el ungüento directamente al ojo. Para aplicar el ungüento, tirar hacia abajo con cuidado el párpado inferior. En tanto se dirige la mirada hacia arriba (si es posible), comprimir el tubo para dejar salir una pequeña cantidad de ungüento (alrededor de 1.5 a 0.60 cm) (1/2 a 1/4 de pulgada) dentro del fondo de saco del párpado. Cerrar el ojo y girar con cuidado el globo ocular en todas direcciones en tanto se mantiene el ojo cerrado. Puede presentarse visión borrosa transitoria. Se puede frotar cuidadosamente con un dedo el párpado cerrado para distribuir el fármaco por todo el fórnix. Este proceso se repite cada 10 a 12 horas durante 8 semanas para prevenir rechazo corneal. La administración de ungüento oftálmico debe limitarse a instilación a la hora de dormir por la noche puesto que los ungüentos interfieren con la visión. Una vez descrita íntegramente y con cierto detalle la presente invención por medio de ilustración y ejemplo a fin de lograr mayor claridad y conocimiento, para alguien con habilidades ordinarias en este arte tal vez sea evidente que lo mismo puede lograrse modificando o cambiando esta invención dentro una amplia gama de condiciones, formulaciones y otros parámetros equivalentes sin afectar su alcance o alguna contribución específica de la misma y que tales modificaciones o cambios se intentan para incluirlas en los alcances de las proposiciones anexas. Todas las publicaciones, patentes y aplicaciones patentadas que se mencionan en esta descripción/especificación indican el nivel de capacidad de los expertos en este arte a quienes pertenece esta invención, aquí se incorporan según la referencia en igual extensión como si cada publicación, patente o aplicación patentada individual fuera específica e individualmente indicada para incorporar por referencia.

Claims (7)

REIVINDICACIONES:

1. El uso de fragmentos de anticuerpo F(ab')2 anticitocina para preparar un medicamento para el tratamiento de reacciones inmunes en humanos mediadas por citocina, en donde el medicamento es adecuado para su administración por vía tópica.

2. El uso de conformidad con la reivindicación 1 en donde la reacción inmune mediada por citocinas se selecciona del grupo que consiste de: enfermedad inflamatoria crónica o aguda, artritis reumatoide, choque séptico, rechazo de una prótesis o de trasplante de tejido, enfermedades inflamatorias mediadas por células T, rechazo del transplante de córnea, inflamación de tejidos debido a envenenamiento.

3. El uso de conformidad con la reivindicación 1 en donde la reacción inmune mediada por citocínas, es una enfermedad inflamatoria oftálmica crónica o aguda, que se selecciona del grupo que consiste de: keratitis, uveítis, blefaritis, síndrome del ojo seco, inflamaciones debido a infecciones y rechazo a transplante de córnea.

4. El uso de conformidad con una de las reivindicaciones 1 ó 2 en donde el medicamento se encuentra combinado con un vehículo dermatológico aceptable.

5. El uso de conformidad con una de las reivindicaciones 1 ó 3 en donde el medicamento se encuentra combinado con un vehículo oftalmológico aceptable.

6. El uso de conformidad con una de las reivindicaciones 1, 2, ó 3, en donde el medicamento se encuentra sustancialmente libre de albúmina, anticuerpos íntegros, pirógenos y virus.

7. El uso de conformidad con una de las reivindicaciones 1 , 2, ó 3, en donde dice citosina, es una seleccionada del grupo que consiste de: Factor de Necrosis Tumoral alfa (TNF- a), interleucina-1 (IL-1), interleucina-1 beta (IL-lß), interleucina-2 (IL-2), interleucina-1 alpha (IL-1a), interleucina-2 (IL-2), interleucina-6 (IL-6), interleucina-12 (IL-12), ¡nterferón gamma (IFN-?).