MX367136B - Proceso para purificar fragmentos de anticuerpos polivalentes derivados de plasma hiperinmune. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a un método para purificar fragmentos del tipo F(ab´) 2, específicos para neutralizar venenos, obtenidos a partir de inmunoglobulinas IgG provenientes de plasma hiperinmune de caballo, caracterizado porque el método comprende: etapa 1) diluir el plasma hiperinmune en tres volúmenes de solución salina isotónica al 0.85% pretratada con timerosal, seguido de un ajuste de las condiciones de pH de 3.5 a 4.0, a una temperatura de 18°C a 20°C; etapa 2) adicionar una solución ácida de pepsina al plasma acondicionado obtenido en la etapa 1), hasta alcanzar una concentración final de 0.9% a 1.1% de pepsina manteniendo las condiciones de pH y temperatura durante 180 minutos; etapa 3) adicionar una solución acuosa de sulfato de amonio al 50% al plasma digerido de la etapa 2), hasta alcanzar una concentración final de saturación de 35% v/v a una temperatura de 2°C a 8°C; etapa 4) filtrar el sobrenadante de la etapa 3) a través de un módulo de filtración profunda de fibras de celulosa modificada, con un gradiente de filtración nominal final de 100 a 0.8 micras; etapa 4) filtrar el sobrenadante de la etapa 3) a través de un módulo de filtración profunda de fibras de celulosa modificada, con un gradiente de filtración nominal final de 100 a 0.8 micras; etapa 5) almacenar el filtrado de la etapa 4) a una temperatura de 2 a 8°C y p H de 6.8 a 7.0 y someter el filtrado a diafiltración en un equipo de filtración de flujo tangencial, a través de una membrana de polietersulfona de 50 kDa, utilizando buffer de boratos como buffer de diafiltración, de manera continua y manteniendo un shear de diafiltración por debajo de 1000 sec-1 entre la membrana de filtración tangencial y las proteínas; y en donde además se realiza un equilibrio de la isotonicidad de los fragmentos F(ab´) 2 con solución salina isotónica al 0.85%; etapa 6) recuperar el diafiltrado y someterlo a nanofiltración en filtro de 20 nanómetros de tamaño de poro.