MXPA05010222A - Metodos y composiciones para tratar y prevenir condiciones inflamatorias. - Google Patents

Abstract

Se describen metodos para tratar eosinofilia al sub regular eotaxina y al menos otra citoquina relacionada a Th-2 ya que son composiciones inmunogenicas que generan una respuesta inmune activa en un sujeto que comprende autoanticuerpos a eotaxina-1, eotaxina-2, IL-4, IL-5, IL-9, e IL13 y metodos de tratamiento utilizando tales composiciones.

Description

MÉTODOS Y COMPOSICIONES PARA TRATAR Y PREVENIR CONDICIONES INFLAMATORIAS ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las citoquinas son moléculas mensajeras de péptido que se producen por y actúan en las células del sistema inmune. Son paracrinas y autócrinas en carácter y pueden actuar sistémicamente si se escapan de la unión celular y salen a circulación general a través de la linfa o plasma. Aunque las citoquinas juegan un papel crítico como los mensajeros químicos del sistema inmune y son esenciales para la función inmune normal, en ciertos desórdenes del sistema inmune los niveles de citoquinas específicos son anormales y potencian el estado de la enfermedad. En desórdenes del sistema inmune tales como condiciones atópicas, en particular, asma, y en enfermedades autoinmunes, quimoquinas, una clase particular de citoquinas, y su subclase de interleuquinas, juegan un papel importante. La presencia y niveles de estas quimoquinas en tejido inducen cambios fisiológicos, que en individuos que sufren de una enfermedad particular se amplifican y perpetúan para resultar en un fenotipo, que se reconoce como el estado de enfermedad. Las quimoquinas son mediadores del inicio y mantenimiento de inflamación. La interrupción de las interacciones de quimoquina-receptor con anticuerpos anti-quimoquina neutralizantes o con antagonistas del receptor de quimoquina puede disminuir o inhibir la respuesta inflamatoria. Los autoanticuerpos a quimoquinas pueden neutralizar de manera efectiva las quimoquinas y su señalización y efectos moduladores en el sistema inmune y enfermedad. El concepto de una terapia para enfermedades asociadas con niveles anormales de quimoquinas a través de la regulación de los niveles de anticuerpos del paciente a la quimoquina objetivo puede, de hecho, emular la etiología propia del cuerpo y regulación de la enfermedad. El papel modulador importante de las quimoquinas en enfermedad ha resultado en un número de productos en desarrollo cuyo modo de acción es bloquear la unión de las quimoquinas a sus receptores. La mayoría de estos productos, algunos de los cuales se encuentran en pruebas clínicas, se basan en anticuerpos monoclonales humanizados ("mAbs"), antagonistas del receptor no antigénico o moléculas receptoras solubles o análogos; todos de los cuales requieren muchas administraciones de repetición y no conducen idealmente ellos mismos a terapia a largo plazo o tratamiento profiláctico. Por ejemplo, mAbs anti-TNFalfa humanizados para artritis reumatoide y enfermedad intestinal inflamatoria, y varios mAbs anti-IL-4, anti-IL-5, anti-IL-8 y anti-IL-9 para el tratamiento de asma están en desarrollo. Estos tratamientos de mAb humanizados pueden tener potencial para el tratamiento a corto plazo de estados de enfermedad agudos, sin embargo, no se adecúan idealmente para terapia de mantenimiento a largo plazo. Como un resultado, las terapias que resultan en un aprovechamiento efectivo del propio sistema inmune del paciente para montar un control a base del autoanticuerpo policlonal de los niveles de quimoquina objetivo, se han sugerido como un medio para superar muchas de las desventajas de los productos actualmente en pruebas clínicas (ver, por ejemplo, WO 00/65058 y Patente de EE. UU. No. 6,093,405). Neutralización de Citoquina Los métodos más prevalecientes de la neutralización de citoquina bajo desarrollos son por la administración de los antagonistas del receptor de citoquina, por la administración de anticuerpos monoclonales humanizados contra la citoquina o el receptor de citoquina, o por la administración de formas truncadas del receptor, que se unen a la citoquina y la neutralizan. Por ejemplo, las Patentes de EE. UU. Nos. 5,912, 136; 5,914, 1 10; 5,959,085; 6, 168,791 B1 ; y 6, 171 ,590 todas describen tales métodos. Otro método reportado de neutralización de citoquinas es a través del uso de moléculas antisentido complementarias a la secuencia de codificación del gen de citoquina, el objetivo del cual es inhibir la expresión del gen. La neutralización de citoquina con autoanticuerpos generados por inmunización activa se considera ahora un método prometedor para tratar condiciones patológicas (Zagury et al. , "Toward a new generation of vaccines: The anti-cytokine therapeutic vaccines", PNAS, Julio 3,2001 , Vol. 98, No. 14,8024-8029, Svenson et al., Journal of Immunological ethods 236 (2000) 1-8, Richard et al., PNAS, Enero 1 8, 2000, Vol. 97, No. 2,767-772. Dalum et al., Nature Biotechnology, Vol. 17, July 1999, 666-669). Las vacunas útiles para neutralización de citoquina pueden producirse al inactivar la molécula de citoquina y volverla inmunogénica, ver por ejemplo Ciapponi et al., ("Induction of interleukin-6 (IL-6) autoantibodies through vaccination with an engineered IL-6 receptor antagonist. "Nature Biotechnology, Vol. 15, Octubre 1997, pgs. 997-1001 ) quienes demostraron exitosamente la neutralización de IL-6 después de la vacunación con un antagonista del receptor de IL-6 formado, biológicamente no activo, antigénico en ratones transgénicos con altos niveles de circulación de IL-6 humano. Ciapponi et al., especulan en la ventaja de tal tratamiento de vacunación de enfermedades neoplásticas o inmunes sobre terapias con anticuerpos monoclonales (mAbs) o antagonistas del receptor, que requieren suministro parenteral continuo. Alternativamente, la citoquina puede acoplarse a un vehículo inmunogénico para volverla inmunogénica (ver por ejemplo, Richard et al., PNAS, Enero 18, 2000, Vol. 97, No. 2,767-772, Pat. de EE.UU. No. 6,482,403, Pat. de EE. UU. No. 6,471 ,957, Pat. de EE.UU. No. 6,455,504, Pat. de EE.UU. No. 6,420, 141 , WO 01/43771 Y WO 00/64397). El planteamiento de vacuna anti-citoquina se ha propuesto para el tratamiento de asma y enfermedades alérgicas al controlar los niveles de interleuquinas implicadas en estos estados de enfermedad, (ver WO 00/65058, WO 01/62287 y Patente de EE.UU. No. 6,093,405). Condiciones atópicas: asma, alergia y enfermedades alérgicas El asma se está volviendo uno de los problemas médicos más importantes con aproximadamente 15 millones de personas que padecen asma en EE.UU. solamente. El número de personas que padecen asma ha incrementado arriba del 50% en los últimos 10 años con 700,000 víctimas, en su mayoría niños, que surgen en EE.UU. cada año. Aunque todos los humanos producen una respuesta inmune protectora a alérgenos que entran a los pulmones, algunos individuos reaccionan al producir una respuesta insoportable de células que producen el anticuerpo inmune alérgico, IgE, que liberan substancias, incluyendo quimoquinas, que causan ataques de asma. El asma crónico, en el cual los síntomas asmáticos se muestran al menos dos veces una semana, se trata actualmente con dos tipos de medicamentos: (1 ) una medicación que sofoca la inflamación tal como un corticoesteroide y (2) un medicamento de rescate para abrir las vías respiratorias estrechadas y hacer más fácil la respiración cuando ocurren los ataques. Los medicamentos actuales en el mercado solamente ayudan en aliviar los síntomas de asma y no eliminan o suprimen la respuesta inmune que causa la alergia y subsecuentemente el asma. Además, la mayoría de las medicaciones actuales son ya sea pildoras que deben tomarse frecuentemente o deben administrarse frecuentemente o durante un ataque con un inhalador. Como terapias predominantemente a base de esferoides, también pueden dar como resultado efectos secundarios indeseables y eficacia reducida con uso a largo plazo o incrementado. Una medicación tipo vacuna, administrada solamente cada pocos meses, que suprime o elimina la respuesta similar a la alérgica que da como resultado ataques asmáticos, es altamente deseable. Las células auxiliares T realizan una función clave de la respuesta inmune. Generalmente, las células precursoras auxiliares T (Th-p) se diferencian como parte de la respuesta inmune en ya sea las células de efecto auxiliares T 1 (Th-1 ) o auxiliares T 2 (Th-2), cada una de las cuales tienen papeles biológicos importantes. En respuesta a un antígeno, que entra a los pulmones, un individuo puede ya sea desarrollar una respuesta Th-2 alérgica o Th-1 protectora. La respuesta Th-2 resulta en la producción de anticuerpos IgE y síntomas de alergia. Los individuos asmáticos y alérgicos muestran una respuesta Th-2 de manera insoportable a alérgenos inhalados asociados con niveles elevados de IgE. La inflamación de las vías respiratorias en asma se caracteriza por una infiltración de la pared de la vías respiratorias por células Th2, eosinófilos y mastocitos. Cada una de estas células contribuye a los cambios fisiológicos que caracterizan el asma y cada uno de los tipos celulares que produce y son sensibles a un panel limitado de citoquinas. La diferenciación de células Th-p en ya sea células Th-1 o Th-2 se media por diferentes trayectorias de señalización de hormona comprendidas mayormente de diferentes conjuntos de quimoquinas de interleuqina. La trayectoria Th2 se media por citoquinas que comprenden IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10 y IL-13. Estas interleuquinas se producen por Th-2 y otras células del sistema inmune y son críticas para la producción de anticuerpo y la señalización a otras células incluidas en la respuesta inmune alérgica. Las eotaxinas son otra clase de quimoquinas en la cascada de señalización Th-2, que regulan eosinófilos. Las eotaxinas pueden afectar la producción de anticuerpos IgE y juegan un papel importante en la respuesta alérgica. Existe actualmente una búsqueda substancial y esfuerzo en desarrollo en nuevas terapias de asma. Estas incluyen las terapias de neutralización de quimoquina principalmente para eotaxina, IL-4, IL-5 e IL-13, y otras estrategias con el propósito de neutralizar los anticuerpos IgE ya sea por bloqueo directo con mAbs anti-lgE humanizados o posiblemente una vacuna para inmunizar contra IgE. Otras estrategias de vacuna para alergias más convenientes, se centran en la inmunización o desensibilización con alérgenos de péptido específicos, por ejemplo, polen de ambrosía y caspa de gato. La búsqueda también continúa con esfuerzos en nuevos métodos de suministro y aplicación de tecnología de vacuna de ADN a vacunación de alérgeno, sin embargo, las estrategias específicas del alérgeno no proporcionan una terapia general para asma. También existe una esfuerzo de búsqueda considerable para una vacuna de asma general enfocada en ya sea generar una respuesta inmune Th-1 no específica, o cambiar una respuesta Th-2 del paciente a una respuesta Th-1 al inmunizar con antígenos Th-1 conocidos o vacunas de ADN que resultan en una respuesta inmune Th-1 (ver, por ejemplo, Patente de EE.UU. No. 6,086,898). Los planteamientos de inmunización activos que se han sugerido como terapia para alergia y enfermedad autoinmune se han enfocado en niveles de control de las interleuquinas IL-4 e IL-5. La Patente de EE.UU. No. 6,093,405 describe inducir una respuesta inmune contra IL-4 o IL-5 al inmunizar de manera activa con una composición de citoquina IL-4 o IL-5 inmunogénica para tratar la alergia o la enfermedad inmune respectivamente. WO 00/65058 describe la construcción de los inmunógenos anti-IL-5 y su uso en un método para sub-regular IL-5 en un método propuesto para controlar asma y otras enfermedades alérgicas crónicas. El estado actual de la técnica que se refiere al desarrollo de eosinofilia implicada en desórdenes alérgicos, contempla funciones primarias para cada una de las quimoquinas Th-2, que se relacionan de manera intrica e integra con las funciones de las otras quimoquinas en la trayectoria. Por ejemplo, se cree que eotaxina promueve la acumulación de eosinófilo en tejidos, mientras que IL-5 incrementa la inducción de eosinofilia en la sangre. La producción de eotaxina a su vez, puede regularse por IL-13 e IL-13 puede regular la migración de eosinófilo independiente de IL-5. Se ha reportado que en ratones una deficiencia en la producción de IL-5, eotaxina o ambos predisponen a los ratones a un defecto intrínseco en células T, lo que deteriora subsecuentemente la habilidad de las células T CD4+ para producir IL-13 (ver Mattes, et al., J. Exp. Med., Vol. 1 95, No. 1 1 , June 3,2002, 1433-1444).

Eotaxinas Las eotaxinas son quimoquinas específicas de eosinófilo, que estimulan la acumulación de eosinófilo o atraen los eosinofilos. Las eotaxinas inducen la quimiotaxis de eosinofilos pero no inducen significativamente la quimiotaxis de neutrofilos, monocitos o células T. Las eotaxinas son miembros de la subfamilia CC de quimoquinas, una clase que también incluye las proteínas quimotácticas de monocito ( CPs) y proteínas inflamatorias de macrófago (MIPs), ver: Van Coillie et al., Cytokine & Growth Factor Reviews, 10 (1999) 61 -86; Garcia-Zepeda, et al. (1996) Nat. Med. , 2: 449-456. Existen actualmente al menos tres moléculas clasificadas como eotaxinas; la primera a identificarse, Eotaxina-1 y también se refiere como eotaxina, (ver Kitaura, . et al. , J. Biol. Chem., 1996, 271 ; 7725-30 y Ponath et al., J. Clin. Invest. 1996, 97: 604-12) y Eotaxina-2 y Eotaxina-3 descubiertas al último, (ver Conroy et al. Respir Res 2001 , 2: 150-156; Guiterrez-Ramos et al. Immunology Today, November 1999, Vol. 20, No. 1 1 , 500-504). La eotaxina se une a y actúa a través del receptor de quimoquina 3, CCR3, con afinidad relativamente alta para inducir el reclutamiento de eosinófilo. La estructura y secuencia de péptidos y los genes que codifican las eotaxinas se conocen, y la unión del receptor se ha estudiado y caracterizado (ver Garcia-Zepeda et al. Nature Medicine, Vol. 2, No. 4, Abril 1996, 449-456; Ye et al., The Journal of Biological Chemistry, Vol. 275, No. 35, Septiembre 1 , 2000 27250-27257; Mayer and Stone, The Journal of Biological Chemistry, Vol. 276, No. 17, Abril 27 2001 ,1391 1 -13916. Los eosinófilos son uno de los principales componentes de la defensa inmune tipo Th-2 del cuerpo a infecciones parásitas helmíticas y se acumulan en la sangre y tejidos de individuos infectados. Los eosinófilos contienen gránulos de proteínas catiónicas, que en la degranulación se liberan en el ambiente de la célula y dañan el helminto invasor. Las condiciones atópicas tal como asma y enfermedades alérgicas crónicas se caracterizan por una respuesta inmune tipo Th-2 predominante a estímulos no helmíticos alérgicos. La inflamación del pulmón en pacientes con asma y enfermedades alérgicas crónicas se caracteriza por infiltración y acumulación en el pulmón y en particular de la mucosa bronquial de eosinófilos. En estas condiciones en la ausencia de infección helmítica, la liberación de las proteínas catiónicas del eosinófilo en degranulación dala las células circundantes. Como un resultado, la eotaxina se ha reconocido como un objetivo potencial para el tratamiento y prevención de condiciones atópicas y en particular la terapia de asma y enfermedad alérgica. Las Patentes de EE.UU. Nos. 5,993,814 y 6,031 ,080 y publicaciones PCT WO 95/07985, WO 97/00960, WO 97/12914, y WO 99/10534 sugieren el uso en terapia de varios antagonistas y agonistas de eotaxina incluyendo anticuerpos contra eotaxina. WO 01 /66754 describe la producción y uso de anticuerpos humanos antl-eotaxina CAT 212 y 213 y fragmentos de los mismos para el tratamiento de condiciones mediadas por eotaxina en un régimen de inmunización pasivo.

El receptor en el cual actúa la eotaxlna, receptor CC, CKR3 o CXCR3, se ha caracterizado, (ver WO 97/41 154 y Patente de EE.UU. No. 6, 171 ,590 B1 ) y agonistas y antagonistas de este receptor también se ha sugerido para terapia (ver Patente de EE.UU. 6,271 ,347). La Patente de EE.UU. 6,171 ,590 B1 sugiere que los oligopéptidos inmunogénicos derivados del receptor pueden utilizarse en inmunización activa contra el receptor para un efecto terapéutico. Ninguna de las publicaciones o patentes referidas arriba, sin embargo, sugieren la inmunización activa contra eotaxina por sí misma como un método terapéutico o describen composiciones inmunogénicas útiles para tal inmunoterapia activa. La invención actual proporciona composiciones que son útiles para el tratamiento de condiciones caracterizadas por acumulación de eosinófilo. Estas condiciones atópicas de las cuales el asma y enfermedades alérgicas crónicas son las más prevalecientes incluyen condiciones de la piel atópicas tales como soriasis y otras condiciones tal como colitis ulcerativa eosinofílica. En cada una de estas condiciones los eosinófilos se acumulan en el tejido afectado a un gran grado a través del reclutamiento de eosinófilo inducido por eotaxina. La presencia crónica de niveles elevados de eosinófilos en los tejidos afectados resulta en daño de tejido significativo que con el tiempo evoluciona y se vuelve irreversible. Las terapias de neutralización de citoquina que se persiguen por otras para la mayor parte se dirigen al bloqueo de la acción de solamente una quimoquina tal como IL-4, 1L-5, IL-9, 1L-13 o eotaxina o de la qulmoquina en su receptor tal como quimoquina, eotaxina en el receptor CCR3. Estas terapias utilizan antagonistas de molécula pequeña, inmunización pasiva con anticuerpos monoclonales humanizados o humanos, inmunización activa contra una citoquina o inmunización activa o pasiva contra el receptor por sí mismo. Los planteamientos de inmunización pasiva y molécula pequeña requieren administración repetitiva y padecimiento desde el punto de vista de la comodidad del paciente. Además, la inducción de anticuerpos neutralizantes a mAbs administrados como un resultado de terapia repetitiva puede comprometer seriamente la efectividad de inmunoterapia pasiva con mAbs para tratamiento a largo plazo de una enfermedad crónica (Adair, F., Drug Discovery World, Verano 2002 pp 53-59). Por el otro lado, la inmunización activa contra el receptor por sí mismo puede interferir con la unión de otras quimoquinas al receptor y puede tener consecuencias biológicas no propuestas y no previstas.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La invención proporciona métodos y composiciones para el tratamiento de desórdenes mediados por citoquina que incluyen trayectorias inmunomoduladoras de más de una citoquina. Tales desórdenes incluyen enfermedades autoinmunes y condiciones atópicas tales como asma y condiciones alérgicas que incluyen las trayectorias de citoquina Th1 y Th2. El método de la invención proporciona el bloqueo de la actividad de dos o más citoquinas cuyas funciones se relacionan en la trayectoria. El efecto total del bloqueo de citoquina es sub regular los niveles totales de citoquinas y la respuesta inmune asociada y de esta manera mejorar la condición que se trata. Los métodos de la invención contemplan la inmunización de un sujeto para generar una respuesta inmune en un sujeto de autoanticuerpos contra dos o más citoquinas en la trayectoria de citoquina de interés. Las composiciones inmunogénicas de la invención pueden utilizarse para generar una respuesta inmune efectiva en el sujeto inmunizado específico para las citoquinas objetivo. Los métodos pueden comprender administración separada de inmunógenos cada uno de los cuales se dirige a la generación de una respuesta inmune contra solamente una citoquina objetivo o la administración de un inmunógeno multivalente capaz de generar una respuesta inmune a dos o más citoquinas objetivo. De acuerdo a la invención, los desórdenes relacionados con la respuesta inmune Th2 pueden tratarse o prevenirse al regular los niveles de quimoquina Th-2 y bloquear el efecto en el sujeto de las quimoquinas. Esto puede lograrse en un método al inmunizar activamente al sujeto contra una o más de las quimoquinas Th-2 que pueden tener un efecto en el desorden. Por ejemplo, el sujeto puede inmunizarse de manera activa contra eotaxina, mientras que al mismo tiempo bloquea al menos otra citoquina en la trayectoria de Th-2 tales como IL-4, IL-5, IL-9 o IL-13. El bloque concurrente puede lograrse por cualquier método incluyendo: inmunización activa contra las citoquinas objetivo: inmunización pasiva utilizando anticuerpos; la administración de antagonistas que previenen la unión de las citoquinas objetivo a sus receptores; la administración de trampas de citoquina, agentes tales como fragmentos del receptor que se unen a citoquinas que circulan libremente y neutralizan su actividad; o por una combinación de cualquiera de estos métodos o composiciones. Por ejemplo, el tratamiento de eosinofilia puede lograrse al bloquear concurrentemente: eotaxina e IL-5, eotaxina e IL-13, eotaxina, IL-5, e IL-13, eotaxina e IL-9, o eotaxina e IL-4. En otras modalidades de la invención además del bloqueo de eotaxina, eotaxina 2 y/o eotaxina 3 también pueden bloquearse. Las diversas citoquinas objetivo pueden bloquearse efectivamente por inmunización activa de sujetos animales, incluyendo humanos, con inmunógenos anti-citoquina. En una modalidad particular de la invención el bloqueo de eotaxina se logra por la inmunización activa contra eotaxina. El bloqueo de la citoquina adicional o citoquinas puede lograrse por cualquier medio que incluye inmunización activa. La inmunización activa puede lograrse a través de la administración de productos de vacuna terapéuticos separados cada uno dirigido en una de las citoquinas objetivo o alternativamente a través de la administración de un producto de vacuna terapéutico multivalente capaz de inducir una respuesta inmune activa a todas las citoquinas objetivo. La inmunización activa puede lograrse por cualquier método de vacunación incluyendo conjugados de proteína inmunogénicos de péptido o vacunas de ADN.

Las modalidades específicas de la invención se refieren a productos de vacuna multivalente que tienen como objetivo más de una citoquina incluida en la respuesta inmune Th-2. Por ejemplo, en una modalidad la invención proporciona un método para tratar desórdenes alérgicos y asma al inmunizar de manera activa un paciente contra dos de las citoquinas incluidas en la trayectoria Th-2, IL-5 y eotaxina. En una modalidad relacionada la invención proporciona un inmunógeno multivalente capaz de producir autoanticuerpos en un sujeto a las citoquinas IL-5 y eotaxina y el uso de tales inmunógenos multivalentes para tratar condiciones inflamatorias que incluyen acumulación de eosinófilo tal como asma y enfermedades alérgicas y otras condiciones atópicas. La vacuna multivalente o productos inmunogénicos pueden emplear diferentes formas de inmunógeno y métodos de suministro conocidos en la materia y pueden utilizarse solos o en combinación con otros agentes terapéuticos. Las composiciones inmunogénicas pueden utilizarse para generar una respuesta de autoanticuerpo en el paciente a IL-5 y eotaxina en niveles a los cuales son suficientes para inmunomodular o inmunoneutralizar y de esta manera sub regular la actividad de estas citoquinas y dar como resultado una reducción de acumulación de eosinófilo para mejorar la condición inflamatoria. Los inmunógenos pueden incluir: inmunógenos de péptido de combinación que comprenden porciones de la eotaxina y secuencias de IL-5 o imitaciones acopladas a un vehículo inmunogénico o vacunas de ADN que codifican tales inmunógenos de péptido de combinación. La invención también se refiere a métodos para el tratamiento de condiciones asociadas con acumulación de eosinofilo o eosinófilos que comprende la inmunización activa de un sujeto contra eotaxina e IL-5 con las composiciones inmunogénicas de la invención. Los métodos de tratamiento inventivos incluyen terapias que incluyen el tratamiento del sujeto con otros agentes farmacéuticos además de la inmunización activa utilizando la anti-eotaxina multivalente y vacuna anti-IL-5. Ciertas modalidades de la invención se refieren a composiciones de vacuna que sub regulan las citoquinas Th2 en sujetos animales, incluyendo humanos. Estas composiciones de vacuna se utilizan para generar una respuesta inmune activa en el sujeto que comprende autoanticuerpos a dos o más quimoquinas Th2 tales como Eotaxina-1 , Eotaxina-2, Eotaxina-3, IL-5, IL-9, IL-13 e IL-4. Los productos de vacuna multivalente pueden utilizarse en el tratamiento de condiciones inflamatorias que resultan de acumulación de eosinofilo mediada por eotaxina tales como asma y enfermedades alérgicas y otras condiciones atópicas. La vacuna o productos inmunogénicos emplean diferentes tipos de inmunógeno y métodos de suministro y pueden utilizarse solos o en combinación con otros agentes terapéuticos. Además, los inmunógenos multivalentes pueden comprender múltiples epítopos de péptido diferentes para cada una de las diferentes quimoquinas objetivo. Los productos a base de péptido antigénico pueden formularse utilizando una quimoq uina modificada que se vuelve inactiva e inmunogénica. En ciertas modalidades los inmunógenos comprenden al menos un agonista o antagonista del receptor de quimoquina, o un epítopo derivado de quimoquina conjugado con un vehículo inmunogénico. Los inmunógenos derivados de las quimoq uinas objetivo o imitaciones de quimoquina pueden construirse utilizando métodos bien conocidos en la materia y utilizados para producir una respuesta inmune en animales de laboratorio tales como ratones o conejos. Anticuerpos resultantes pueden seleccionarse por su habilidad para neutralizar la unión de la quimoquina objetivo a su receptor in vitro y/o in vivo como un preludio para seleccionar el epítopo más apropiado para desarrollo clínico. Los productos a base de ADN comprenden productos de vacuna de ADN que codifican y resultan en la producción en el sujeto tratado de los productos de péptido antigénicos, que producirán una respuesta inmune contra las quimoquinas objetivo en el sujeto inmunizado. El diseño de cualquier producto particular depende del tejido objetivo en el cual la respuesta inmune primaria se busca y el tipo de respuesta inmune que se generará principalmente. Para construir los inmunógenos de la invención una secuencia de epítopos de péptido específica se acopla a un vehículo inmunogénico. El inm unógeno resultante cuando se administra a un sujeto animal producirá una respuesta inm une humoral que producirá autoanticuerpos en el sujeto, q ue puede unirse a y neutralizar el efecto biológico de la quimoquina objetivo, por ejemplo, I L-5 o eotaxina. La respuesta inmune puede mantenerse por un periodo sostenido por administraciones estimuladoras del inmunógeno. Los vehículos inmunogénicos adecuados pueden incluir proteínas o toxoides de proteína tales como toxoide de Difteria (DT) o toxoide de Tétano (TT), hemocianina de lapa (KLH), hemaglutinina de virus de Influenza, etc. Una secuencia de péptidos específica se acopla al vehículo inmunogénico a través de la conjugación con agentes degradadores bifuncionales. Alternativamente, el péptido específico puede acoplarse a una partícula de metal coloidal para volverla ¡nmunogénica o puede sintetizarse en tándem con una(s) secuencia(s) de epítopos de célula T adecuada(s) como un péptido inmunogénico heterofuncional sintético que lleva el epítopo de célula B y epítopos de célula T específicos para producir una respuesta ¡nmunogénica sostenida a la quimoquina deseada, por ejemplo, eotaxina e IL-5, fragmentos objetivo. La invención también se refiere a métodos para el tratamiento de condiciones asociadas con acumulación de eosinófilo mediada por eotaxina que comprende la inmunización activa de un sujeto contra quimoquinas Th-2 con las composiciones inmunogénicas de la invención. Los métodos del tratamiento inventivo incluyen terapias, que incluyen el tratamiento del sujeto con otros agentes farmacéuticos además de la inmunización activa utilizando las vacunas anti-quimoquina.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La invención proporciona métodos y composiciones para tratar desórdenes mediados por citoquina en sujetos animales incluyendo mamíferos y humanos. Un enfoque particular de la invención es el tratamiento de desórdenes que incluyen trayectorias inmunomoduladoras hechas de múltiples citoquinas tales como las trayectorias de la célula T, Th-1 y Th-2. De acuerdo a la invención, el sujeto en necesidad de terapia se inmuniza de manera activa contra dos o más de las citoquinas en la trayectoria implicada en el desorden que se trata. El sujeto puede inmunizarse con una pluralidad de composiciones univalentes separadas cada una dirigida contra una citoquina única o alternativamente con una composición ¡nmunogénica multivalente capaz de producir una respuesta inmune en un sujeto que comprende autoanticuerpos contra dos o más citoquinas. Una modalidad específica de la invención proporciona métodos y composiciones para el tratamiento de desórdenes que incluyen la trayectoria imunomoduladora Th-2 y en particular desórdenes alérgicos y asma. Algunos de estos desórdenes se caracterizan por reclutamiento de eosinófilo a tejidos particulares tales como aquellos del pulmón y dando como resultado inflamación del tejido. Los métodos de la invención proporcionan la inmunización activa de un sujeto contra múltiples citoquinas incluidas en la respuesta inmune Th-2 y en una modalidad particular contra dos de las citoquinas incluidas en la respuesta inmune Th-2, IL-5 y eotaxina, para controlar la producción de eosinófilo y reclutamiento, y para dar como resultado una reducción en inflamación del tejido.

La presente invención proporciona composiciones inmunogénicas que son útiles para inmunización activa y que se diseñan para inducir una respuesta inmune sostenida contra múltiples citoquinas incluidas en una trayectoria inmunomoduiadora implicada en un desorden. En una modalidad, la invención proporciona un inmunógeno diseñado para inducir una respuesta inmune específica contra eotaxina e IL-5 que se incluyen en la trayectoria Th-2 y acumulación de eosinófilo implicada en desórdenes alérgicos y asma en animales y humanos. Varios inmunógenos de acuerdo a la invención pueden producirse y analizarse en el modelo animal apropiado para la enfermedad o condición inflamatoria de interés para seleccionar el inmunógeno específico que es óptimo para el tratamiento de la condición particular. Los modelos animales adecuados para asma y otros desórdenes alérgicos se conocen bien en la materia (ver Humbles et al., J. Exp. Med. , Vol. 186, No. 4, Agosto 18, 1997,601 -612, Corry et al., J. Exp. Med., Vol. 1 83, Enero 1996,109-1 17, Foster et al., J. Exp. Med., Vol. 183, Enero 1996, 195-201 , Lukacs, et al., Am. J. Respir. Cell Mol. Bio., Vol. 10,526-532, 1994). Los inmunógenos inventivos deben inducir una respuesta inmune en el sujeto que comprende anticuerpos de una especificidad suficientemente alta y afinidad de unión a las citoquinas objetivo para ser capaz de neutralizar o modular la actividad biológica de las citoquinas objetivo. En las composiciones terapéuticas utilizadas para tratar desórdenes relacionados a niveles elevados de eosinófilos la concentración de anticuerpos anti-citoquina inducidos debe ser suficiente para dar como resultado la disminución de niveles elevados de eotaxina en el sujeto y una reducción en el reclutamiento de eosinófilos a los tejidos que se afectan por la condición atópica. Al inmunizar activamente el sujeto o paciente con las composiciones inmunogénicas de la invención, un nivel total de diferentes autoanticuerpos, que reaccionan con eotaxina y al menos otra citoquina que afecta los niveles de eotaxina o la respuesta alérgica mediada por Th-2 tal como IL-5, IL-13 o IL-4, se mantienen en el sujeto, para prevenir o mejorar reclutamiento de eosinófilo durante una reacción alérgica. Este nivel de autoanticuerpo anti-citoquina puede mantenerse con administración estimuladora de las composiciones inmunogénicas inventivas y de esta manera proporcionaría protección superior para manejo del estado de la enfermedad crónica en comparación con aquel proporcionado por antagonistas de quimoquina de molécula pequeña o inmunización anti-quimoquina que mostrará fluctuación considerable en niveles del agente terapéutico, y sufre de menor comodidad favorable del paciente. Además, la inmunización pasiva de mAbs está sujeta a desarrollo de anticuerpos neutralizantes a mAbs objetivo en la dosificación de repetición que limita su efectividad para tratamiento a largo plazo. La quimoquina normalmente no inmunogénica tal como eotaxina o fragmentos de la misma también puede volverse inmunogénica o de otra manera biológicamente inactiva al acoplar el péptido o fragmento a una proteína portadora inmunogénica o toxoide de proteína tal como toxoide de Difteria (DT) o toxoide de Tétano (TT), hemocianina de lapa (KLH), BCG, OVA u otros, por métodos bien conocidos (ver, por ejemplo Patentes de EE. UU. Nos. 6,217,881 ; 6, 132,720; 5,891 ,992; 5,609,870; 5,607,676; 5,468,494; 5,023,077; y 4,201 ,770 y Richard et al. , PNAS, Enero 18, 2000, Vol. 97, No. 2, 767-772; Svenson et al. , Journal of Immunological Methods, 236 (2000), 1 -8; Dalum et al. , Nature Biotechnology, Vol. 17, Julio 1999, 666-669; González et al., Annals of Oncology, 9: 431 -435, 1998; y Dalum et al. , The Journal of Immunology, 1996, 157:4796-4804). Alternativamente, las quimoquinas pueden conjugarse con metales coloidales para volverlos inmunogénicos, ver Patentes de EE.UU. Nos. 5, 1 12,606, 6,274,552, y 6,528,051 , o variantes de quimoquina modificados o formas que son inactivas pero inmunogénicas pueden producirse al introducir los epítopos auxiliares T en tándem a la secuencia de eotaxinas al utilizar los métodos descritos en WO 00/65058 y WO 95/05849. Un número de tratamientos químicos, físicos e inmunológicos se conocen, los cuales pueden ser útiles para producir formas inactivas pero inmunogénicas de la quimoquina objetivo o fragmentos de la misma, (ver por ejemplo, Pat. de EE.UU. 6,093,405; Zagury et al., PNAS, Julio 3, 2001 , Vol. 98, No. 14, 8024-8029; Gringeri et al., Journal of Acquired Immune Deficiency Syndrome and Human Retrovirology, Vol. 20, No. 4, Abril 1 , 1999; Ciapponi et al., Nature Biotechnology, Octubre 1997, Vol. 15, 997-1001 ; Raaberg et al., Pediatric Research, Vol. 37, No. 2, 1995, 169-174; Raaberg et al., Pediatric Research, Vol. 37, No. 2, 1995, 175-181 ; Gringeri et al., Journal of Acquired Immune Deficiency Syndromes, Vol. 7, No. 7, 1994, 978-988; Zagury et al. , Journal of Acquired Immune Deficiency Syndromes, Vol. 5, No. 7, 1992, 676-681 ). Una modalidad de la invención se refiere a inmunógenos conjugados que comprenden una pluralidad de diferentes fragmentos de péptido de la misma quimoquina objetivo que corresponde a epítopos deseados en la molécula de quimoquina que se conjugan con un vehículo de proteína imunogénico tal como DT o TT, proporcionado así epítopos de célula T promiscuos y permitiendo la memoria inmune para respuesta prolongada del anticuerpo. Tales inmunógenos pueden administrarse a sujetos animales o humanos para desarrollar una respuesta inmune humoral, activa a la quimoquina. Una modalidad de la invención comprende la quimoquina total tal como molécula de eotaxina humana conjugada con una proteína portadora inmunogénica tal como DT para volverla inmunogénica. Otras modalidades de la invención comprenden varios fragmentos de péptido de quimoquina más cortos conjugados con una proteína portadora inmunogénica. Los conjugados pueden construirse utilizando péptidos de aproximadamente entre 4 y 50 residuos aminoácidos que comprenden un epítopo o epítopos, que inducirán anticuerpos en el sujeto que reaccionarán con epítopos presentes en las moléculas de quimoquina existentes en el sujeto. El péptido o péptidos comprendiendo los epítopos se conjugan entonces con el vehículo de proteína en un rango de proporciones molares de péptido a proteína de vehículo. El péptido puede conjugarse directamente con la proteína inmunogénica o puede incorporar una secuencia espadadora de péptidos para extender el epítopo deseado de la molécula portadora para aumentar su presentación a las células que presentan antígeno y así la inmunogenicidad del epítopo deseado. El separador de péptido puede unirse a ya sea un extremo, la termina amino o carboxilo, del fragmento del péptido y el separador se conjuga, a su vez, con el vehículo inmunogénico. La conjugación del péptido con el vehículo se realiza utilizando agentes de degradación, ya sea homobifuncional o heterobifuncional, para unir el péptido que contiene epítopo deseado con la proteína portadora. La elección del agente de degradación bifuncional dependerá de la disponibilidad de las porciones funcionales en los péptidos. La química de estos métodos de acoplamiento se conocen bien en la materia y se establece en la descripción de las Patentes de EE.UU. Nos. 6, 132,720; 5,609,870; y 5,468,494, y Chemistry of Protein Conjugation and Cross- linking, S. S. Wong (1991 ) CRC Press, Inc. Alternativamente, los péptidos de quimoquina inmunogénicos pueden construirse por química de péptido sintético para producir en tándem el fragmento de epítopo de quimoquina seleccionado con un epítopo o epítopos de célula T, presentando así el epítopo de célula B seleccionado (derivado de la quimoquina) con un epítopo de célula T promiscuo para proporcionar una respuesta inmune sostenida en el sujeto inmunizado. Los inmunógenos conjugados de la invención pueden formularse con adyuvantes u otros agentes inmunoestimuladores en un vehículo farmacéuticamente aceptable con componentes y utilizando métodos bien conocidos en la materia, (ver: Vaccine Design, The Subunit and Adjuvant Approach, (1 995) Powell and Newman Eds. , Plenum Press (New York), Aucouturier et al . , Vaccine 19 (2001 ) 2666-2672). Los péptidos de q uimoquina inmunogénicos también pueden construirse por tecnolog ía de ADN recombinante para producir un vector de plásmido en el cual la(s) secuencia(s) de ADN deseada(s) para el fragmento o múltiples fragmentos de q uimoquina de las m ismas quimoquinas o diferentes, se codifica en tándem con la secuencia de ADN requisito para epítopo(s) de célula T, produciendo así una proteína de fusión que comprende el epítopo de célula B seleccionado (derivado de la quimoquina) con un(os) epítopo(s) de célula T. La proteína de fusión puede expresarse in vitro utilizando técnicas de cultivo celular/fermentación y puede purificarse del cultivo, o puede mostrarse en la superficie del plásmido, o la construcción de ADN del plásmido puede utilizarse como una vacuna de ADN. Cualquiera de estos métodos pueden proporcionar una preparación adecuada para producir una respuesta inmune sostenida y específica de quimoquina en el sujeto inmunizado con la preparación respectiva. Ejemplo 1 : I nmunógenos anti-eotaxina Eotaxina-1 humana madura se deriva de una proteína precursora de 97 aminoácidos que contiene una secuencia de terminal amino hidrofílica de 23 aminoácidos que se separa para dejar la proteína madura de 74 aminoácidos y peso molecular aproximado de 8.4 kDa (ver, Pat. de EE. U. No. 6,403,782, WO 99/10534; WO 97/00960; Ye et al., Journal of Bíological Chemistry, Vol. 275, No. 35, Sept. 1 , 2000, 27250-27257; García- Zepeda ét al. , Nature Medicine, Vol. 2, NO. 4, Abril 1996, 449-45; Ponath et al., J. Clin. Invest., Vol. 97, No. 3, Febrero 1996,604-612; Mayer et al., Journal Bíological Chemistry, Vol. 278, No. 17, Abril 27,2001 , 1391 1 -13916). La secuencia de aminoácidos de eotaxina humana madura (SEQ ID NO 1 ) es como sigue (utilizando el código de una letra para cada residuo aminoácido): GPASVPTTCCI10 FNLANRKIPL20 QRLESYRRIT30 SGKCPQKAVI40 FKTKLAKDIC50 ADPKKKWVQD60 SMKYLDQKSP70 TPKP74 Eotaxina es normalmente no inmunogénica. El péptido por si mismos o fragmentos del péptido correspondientes a epítopos de interés pueden volverse inmunogénicos por métodos bien conocidos en la materia. Un método que puede utilizarse para producir eotaxínas inactivas o fragmentos de eotaxina inactiva que puede haber perdido la actividad biológica pero que se encuentran en una forma inmunogénica y pueden producir anticuerpos antí-neutralizantes anti-eotaxina en un animal o sujeto humano. Un número de tratamientos químicos, físicos e inmunológicos se conocen, los cuales pueden ser útiles para producir eotaxina o fragmento de la misma inactiva pero inmunogénica, (ver por ejemplo: Pat. de EE.UU. No. 6,093,405; Zagury et al. , PNAS, Julio 3, 2001 , Vol. 98, No. 14, 8024-8029; Gringeri et al., Journal of Acquired Immune Deficiency Syndrome and Human Retrovirology, Vol. 20, No. 4, Abril 1 , 1999; Ciapponi et al., Nature Biotechnology, Octubre 1997, Vol. 15, 997-1001 ; Raaberg et al. , Pediatric Research, Vol. 37, No. 2, 1995, 169-174; Raaberg et al., Pediatric Research, Vol. 37, No. 2, 1 995, 175-181 ; Gringeri et al., Journal of Acquired Immune Deficiency Syndromes, Vol. 7, No. 7, 1994, 978-988; Zagury et al., Journal of Acquired Immune Deficiency Syndromes, Vol. 5, No. 7,1992, 676-681 ). Refiriéndose a la secuencia de eotaxinas humanas maduras, en ciertas modalidades de los fragmentos de péptido de la invención de los residuos aminoácidos 1 -45 del extremo terminal amino de la molécula y fragmentos de residuo 54 a 74, que constituyen el extremo terminal carboxilo son útiles para construir los conjugados inmunógenos de la invención. El conjugado inmunogénico puede comprender uno o más diferentes epítopos de eotaxina que pueden estar presentes en el mismo fragmento de péptido o en diferentes fragmentos de péptido útiles en la construcción de los inmunógenos de la invención son como sigue: GPASVP (SEQ ID NO 2); GPASVPT (SEQ ID NO 3); GPASVPTT (SEQ ID NO 4); GPASVPTTC (SEQ ID NO 5); GPASVPTTCC (SEQ ID NO 6); GPASVPTTCCF (SEQ ID NO 7); GPASVPTTCCFN (SEQ ID NO 8); GPASVPTTCCFNL (SEQ ID NO 9); GPASVPTTCCFN LA (SEQ ID NO 10); GPASVPTTCCFN LAN (SEQ ID NO 1 1 ) ; GPASVPTTCCFN LAN R (SEQ ID NO 12); GPASVPTTCCFNLANRK (SEQ ID NO 13); GPASVPTTCCFNLANRKI (SEQ I D NO 14); GPASVPTTCCFNLANRKIP (SEQ ID NO 15); GPASVPTTCCFNLANRKIPL (SEQ ID NO 16); GPASVPTTCCFNLANRKIPLQ (SEQ ID NO 17); FNLANR (SEQ ID NO 18); FNLANRK (SEQ ID NO 19); . FNLANRKI (SEQ ID NO 20); FNLANRKIP (SEQ ID NO 21 ) ; FNLANRKIPL (SEQ ID NO 22); KKKW VQDSMKYLDQKSPTPKP (SEQ ID NO 23); KKWVQDSMKYLDQKSPTPKP (SEQ ID NO 24); KWVQDSMKYLDQKSPTPKP (SEQ ID NO 25); WVQDSMKYLDQKSPTPKP (SEQ ID NO 26); VQDSMKYLDQKSPTPKP (SEQ ID NO 27); QDSMKYLDQKSPTPKP (SEQ ID NO 28) ; DSMKYLDQKSPTPKP (SEQ ID NO 29); SMKYLDQKSPTPKP (SEQ ID NO 30); MKYLDQKSPTPKP (SEQ ID NO 31 ) ; KYLDQKSPTPKP (SEQ ID NO 32); YLDQKSPTPKP (SEQ ID NO 33); LDQKSPTPKP (SEQ ID NO 34); DQKSPTPKP (SEQ ID NO 35); QKSPTPKP (SEQ ID NO 36); KSPTPKTP (SEQ ID NO 37); SPTPKP (SEQ ID NO 38); ASVPTTSSFN (SEQ ID NO 1 17); ANRKIPLQRL (SEQ ID NO 1 18); y ASVPTTCCFN (SEQ ID NO 1 19). Los péptidos pueden producirse por medios recombinantes o sintéticos, que se conocen bien en la materia. Un experto en la materia también entenderá que la secuencia de aminoácidos de cualquier fragmento de péptido puede modificarse para incrementar su inmunogenicidad o para impartir o aumentar alguna otra propiedad del fragmento, tal como por ejemplo carga, densidad de carga, hidrofobicidad, para alterar la solubilidad o para reducir el potencial para oligomerización y agregación, incluyendo la substitución de residuos de cisteína para eliminar la oligomerización a través de disulfuros, mientras se mantienen su habilidad para contribuir a la inducción de una respuesta inmune a eotaxina en el sujeto. Tales modificaciones podrían hacerse por ejemplo, al derivar un residuo aminoácido o por substitución de un aminoácido particular por otro o por algún otro método conocido en la materia. Las peptidoimitaciones o inmunoimitaciones, que no muestran actividad biológica de eotaxina en el sujeto animal particular, también pueden utilizarse para construir los inmunógenos conjugados. Las peptidoimitaciones pueden no ser ellas mismas inmunogénicas pero pueden volverse inmunogénicas al acoplar a un péptido inmunogénico. En ciertas modalidades las peptidoimitaciones pueden derivarse de otras moléculas de eotaxina de mamífero tal como eotaxina de conejillo de Indias o ratón (ver Patentes de EE.UU. Nos. 6,031 ,080 y 5,993, 814). Los fragmentos de péptido de eotaxina o inmunoimitaciones pueden conjugarse directamente en vehículo de proteína inmunogénico o alternativamente pueden incorporar una secuencia separadora de péptidos para extender el epítopo deseado de la molécula portadora para aumentar su presentación a células que presentan antígeno y así la inmunogenicidad del epítopo deseado. Una variedad de separadores de péptido pueden utilizarse. Patentes de EE.UU. Nos. 5,609,870 y 5,468,494 describen los separadores de péptido y métodos para conjugar los separadores en péptidos de interés y a su vez en vehículos de proteína inmunogénicos tales como DT o TT que pueden ser útiles para construir los inmunógenos conjugados de la invención. Los separadores de péptido: SSPPPPC (SEQ ID NO 39), RPPPPC (SEQ ID NO 40) y LPPPPC (SEQ ID NO 41 ) pueden utilizarse para los fragmentos de péptido de eotaxina de la invención. Los péptidos separadores pueden incorporarse en ya sea la terminal amino o el extremo de terminal carboxilo del fragmento de péptido de eotaxina para producir los péptidos que se acoplan a la proteína inmunogénica tales como, por ejemplo: SSPPPPCKKKWVQDSMKYLDQKSPTPKP (SEQ ID NO 42), KKKWVQDSMKYLDQKSPTPKPSSPPPPC (SEQ ID NO 43), CPPPPSSKKKWVQDSMKYLDQKSPTPKP (SEQ ID NO 44), KKKWVQDSMKYLDQKSPTPKPCPPPPSS (SEQ ID NO 45), GPASVPTTCCFNLANRKIPLSSPPPPC (SEQ ID NO 46), SSPPPPCGPASVPTTCCFNLANRKIPL (SEQ ID NO 47), CPPPPSSGPASVPTTCCFNLANRKIPL (SEQ ID NO 48), y GPASVPTTCCFNLANRKIPLSSPPPPC (SEQ ID NO 49). Típicamente, las secuencias separadoras se incorporan en secuencias de eotaxinas específicas por química de péptido sintético durante la preparación de los fragmentos de péptido que contienen epítopo. En particular, los fragmentos de eotaxina que contienen secuencias con secuencias hidrofílicas numéricas y que más probablemente se presentan en la superficie de la molécula son particularmente útiles para la invención. Estos incluyen por ejemplo: SGKCPQKAVISSPPPPC (SEQ ID NO 50), CPPPPSSSGKCPQKAVI (SEQ ID NO 51 ), FKTKLAKDICSSPPPPC (SEQ ID NO 52), CPPPPSS FKTKLAKDIC (SEQ ID NO 53), ADPKKKWVQDSSPPPPC (SEQ ID NO 54), y CPPPPSSADPKKKWVQD (SEQ ID NO 55). En una modalidad, para facilitar la conjugación de los fragmentos de eotaxina específicos a proteínas portadoras tales como DT y TT utilizando agentes de degradación es deseable para eliminar los residuos de cisteína, de la secuencia natural por substitución con residuos de treonina, serina o alanina. Esta substitución de aminoácidos para eliminar cisteína en los fragmentos de péptido se aplican a cualquiera de los inmunógenos de la invención y para cualquier quimoquina objetivo. Así, la calidad hidrodinámica del fragmento de péptido se retiene mientras se eliminan las reacciones secundarias potencialmente dañinas durante la etapa de degradación. Ejemplos incluyen: SGKTPQKAVISSPPPPC (SEQ ID NO 56), CPPPPSSSGKTPQKAVI (SEQ ID NO 57), FKTKLAKDITSSPPPPC (SEQ ID NO 58), CPPPPSSFKTKLAKDIT (SEQ ID NO 59), ADPKKKWVQDSSPPPPC (SEQ ID NO 60), CPPPPSSADPKKKWVQD (SEQ ID NO 61 ), ASVPTTAAFN (SEQ ID NO 120), ASVPTTSAFN (SEQ ID NO 121 ), SYRRITSGKSPQ (SEQ ID NO 130), SYRRITSGKAPQ (SEQ ID NO 131 ) y SYRRITSGKTPQ (SEQ ID NO 132). Los inmunógenos anti-eotaxina pueden comprender un fragmento de péptido conjugado con el vehículo inmunogénico, por ejemplo una o más copias de un fragmento de péptido de la secuencia GPASVPTTCCFNLANRKIPL (SEQ ID NO 16) conjugada con DT. En otras modalidades, dos o más diferentes fragmentos de péptido pueden conjugarse con el mismo vehículo inmunogénico para incluir una respuesta inmune activa en el sujeto con anticuerpos dirigidos a dos o más epítopos en eotaxina. Tal inmunógeno puede, por ejemplo, comprender múltiples copias de cada una de las secuencias de péptidos GPASVPTTCCFNLANRK1PL (SEQ ID NO 16) y KKKWVQDS KYLDQKSPTPKP (SEQ ID NO 23) conjugadas con DT. En otra modalidad una formulación puede prepararse utilizando dos o más diferentes conjugados portadores inmunogénicos de péptido, para inducir una respuesta inmune activa en el sujeto con anticuerpos dirigidos a dos o más epítopos en eotaxina. Por ejemplo, la composición administrada será una mezcla co-formulada de dos diferentes construcciones de inmunógeno, la primera comprendiendo un epítopo conjugado con el vehículo con la segunda construcción que comprende un segundo epítopo distinto conjugado con otras moléculas del vehículo. Tal formulación de inmunógeno puede, por ejemplo, comprender múltiples copias de cada uno de los conjugados DT de secuencia de péptido GPASVPTTCCFNLANRKIPL (SEQ ID NO 16) conjugada con DT; y KKKWVQDSMKYLDQKSPTPKP (SEQ ID NO 23) conjugada con DT. Los conjugados de eotaxina-toxoide pueden prepararse como entidades únicas adecuadas para formulación de manera individual o para mezclarse para proporcionar dos o más conjugados específicos de epítopo en una formulación final. Alternativamente, el acoplamiento de dos o más péptidos específicos de eotaxina pueden acoplarse a través de sus grupos sulfhidrilo terminales a una preparación de maleimidil-toxoide única. Esto se realiza al reaccionar maleimidil-toxoide con una mezcla 1 : 1 de los péptidos específicos de eotaxina a un exceso molar 1.1 combinado de los péptidos combinados sobre las porciones de maleimidilo disponibles del toxoide activado. Así, un conjugado de toxoide único que lleva múltiples epítopos específicos de eotaxina se realiza. En ciertas modalidades una respuesta inmune a múltiples epítopos en eotaxina puede inducirse en el sujeto inmunizado para resultar en una unión potencialmente sinergística y neutralización de la eotaxina objetivo. Las secuencias de epítopo apropiadas se seleccionan de aquellas secuencias suficientemente removidas entre sí en la molécula objetivo para reducir la probabilidad de interferencia entre la unión de anticuerpos a sus epítopos de eotaxina específicos. Una modalidad de tal combinación de epítopos de eotaxina incluye la siguiente eotaxina y secuencias análogas de eotaxina: SG TPQKAVISSPPPPC (SEQ ID NO 56) o CPPPPSSSGKTPQKAVI (SEQ ID NO 57) en combinación con ADPKKKWVQDSSPPPPC (SEQ ID NO 60) o CPPPPSSADPKKKWVQD (SEQ ID NO 61 ). Ejemplo 2: Inmunógenos anti-IL-5 Los inmunógenos para originar una respuesta inmune activa contra IL-5 en mamíferos y humanos se conocen en la materia. WO 00/65058 describe composiciones ¡nmunogénicas anti IL-5 y métodos para hacerlas y administrarlas. Los inmunógenos anti-IL-5 descritos en WO 00/65058 son útiles en los métodos de la presente invención y la descripción de WO 00/65058 se incorpora en la presente para referencia en su totalidad.

Los fragmentos del péptido I L-5 útiles para construir los inmunógenos de la invención son: KCGEERRRV (SEQ ID NO 122) y EERRRVNQF (SEQ ID NO 123). Ejemplo 3: Inmunógenos anti-IL-9 Los inmunógenos para originar una respuesta inmune activa contra IL-9 en mamíferos y humanos se conocen en la materia. Richard et al , PNAS, Enero 18,2000, Vol. 97, No. 2,767-772 describe composiciones inmunogénicas anti IL-9 y métodos para hacerlas y administrarlas (ver también Patente de EE.UU. No. 6,645,486). Los inmunógenos anti-IL-9 descritos en Richard et al., PNAS, Enero 18,2000, Vol. 97, No. 2,767- 772, son útiles en los métodos de la presente invención y la descripción de Richard et al., PNAS, Enero 18,2000, Vol. 97, No. 2,767-772, se incorpora en la presente para referencia en su totalidad. Ejemplo 4: Inmunógenos anti-IL-13 Los inmunógenos para originar una respuesta inmune activa contra IL- 3 en mamíferos y humanos se conocen en la materia. WO 02/07071 1 describe composiciones inmunogénicas anti IL-13 y métodos para hacerlas y administrarlas. Los inmunógenos anti-IL-13 descritos en WO 02/07071 1 son útiles en los métodos de la presente invención y la descripción de WO 02/07071 1 se incorpora en la presente para referencia en su totalidad. Ejemplo 5: Inmunógenos anti-IL-4 Inmunógenos para originar una respuesta inmune activa contra IL-4 en mamíferos y humanos se conocen en la materia. WO 02/07071 1 describe composiciones inmunogénicas anti IL-4 y métodos para hacerlas y administrarlas. Los inmunógenos anti-IL-4 descritos en WO 02/07071 1 son útiles en los métodos de la presente invención y la descripción de WO 02/07071 1 se incorpora en la presente para referencia en su totalidad. Ejemplo 6: Inmunógenos anti-eotaxina La secuencia de aminoácidos de Eotaxina-2 es conocida, ver Grzegorewski et al., (2001 ) Cytokine 13; 209-219: y Mayer and Stone (2000) Blochemistry, 39, 8382-8395. Los fragmentos de péptido VVIPSPSS F (SEQ ID NO 124), MFFVSKRIPE, VSKRIPENRV (SEQ ID NO 126), SYQLSSRSTSLK (SEQ ID NO 133), SYQLSSRSTTLK (SEQ ID NO 134) y SYQLSSRSTALK (SEQ ID NO 135) pueden utilizarse para construir Inmunógenos anti-Eotaxlna-2 de acuerdo a la invención. Ejemplo 7: Inmunógenos anti-Eotaxina-3 La secuencia de aminoácidos de Eotaxina-3 se describen en Mayer and Stone, (2003) Proteins 50: 84-191 . Los fragmentos de péptido SDISKTSSFQ (SEQ ID NO 127), FQYSHKPLPW (SEQ ID NO 128), SHKPLPWTWV (SEQ ID NO 129), SYEFTSNSSSQE (SEQ ID NO 136), SYEFTSNSTSQE (SEQ ID NO 137) y SYEFTSNSASQE (SEQ ID NO 138) pueden utilizarse para construir inmunógenos anti-eotaxina 3 de acuerdo a la invención, Ejemplo 8: Inmunógenos anti-IL-5 y anti-eotaxina Los inmunógenos para originar una respuesta inmune activa a tanto eotaxina como IL-5 pueden construirse de acuerdo a los métodos de la invención y utilizarse para tratar las condiciones de eosinofilia a través de la administración de una composición de vacuna terapéutica inmunogénica. En una modalidad particular de la invención esta composición imunogénica bivalente contiene determinantes del péptido antigénico específicos para epítopos de eotaxina y epítopos IL-5 como haptenos conjugados con la misma molécula portadora de proteína inmunogénica. Los determinantes del péptido antigénico para utilizarse como los epítopos específicos de eotaxina pueden seleccionarse de cualquiera de los péptidos en SEQ ID NOs. 1 -38, 1 17-1 19 y42-61 o cualquier combinación de las mismas. Los determinantes del péptido antigénico que pueden ser útiles como haptenos de epítopo IL-5 incluyen: IPTEIPT (SEQ ID NO 62); IPTEIPTS (SEQ ID NO 63); IPTEIPTSA (SEQ ID NO 64); IPTEIPTSAL (SEQ ID NO 65); IPTEIPTSALV (SEQ ID NO 66); IPTEIPTSALVK (SEQ ID NO 67); IPTEIPTSALVKE (SEQ ID NO 68); IPTEIPTSALVKET (SEQ ID NO 69); IPTEIPTSALVKETL (SEQ ID NO 70); IPTEIPTSALVKETLA (SEQ ID NO 71 ); IPTEIPTSALVKETLAL (SEQ ID NO 72); IPTEIPTSALVKETLALL (SEQ ID NO 73); IPTEIPTSALVKETLALLS (SEQ ID NO 74); IPTEIPTSALVKETLALLST (SEQ ID NO 75); IPTEIPTSALVKETLALLSTH (SEQ ID NO 76); IPTEIPTSALVKETLALLSTHR (SEQ ID NO 77); IPTEIPTSALVKETLALLSTHRT (SEQ ID NO 78); IPTEIPTSALVKETLALLSTHRTL (SEQ ID NO 79); IPTEIPTSALVKETLALLSTHRTLL (SEQ ID NO 80) IPTEIPTSALVKETLALLSTHRTLLI (SEQ ID NO 81 ) IPTEIPTSALVKETLALLSTHRTLLIA (SEQ ID NO 82); IPTEIPTSALVKETLALLSTHRTLLIAN (SEQ ID NO 83); IPTEIPTSALVKETLALLSTHRTLLIANE (SEQ 1 D NO 84); IPTEIPTSALVKETLALLSTHRTLLIANET (SEQ ID NO 85); IPTEIPTSALVKETLALLSTHRTLLIANETL (SEQ ID NO 86); IPTEIPTSALVKETLALLSTHRTLLIANETLR (SEQ ID NO 87); IPTEIPTSALVKETLALLSTHRTLL1ANETLRI (SEQ ID NO 88); IPTEIPTSALVKETLALLSTHRTLLIANETLRIP (SEQ ID NO 89); IPTEIPTSALVKETLALLSTHRTLLIANETLRIPV (SEQ ID NO 90) ; QLCTEEIFQGIGTLESQTV (SEQ ID NO 91 ); LCTEEIFQGIGTLESQTV (SEQ ID NO 92); CTEEIFQGIGTLESQTV (SEQ ID NO 93); CTEEIFQGIGTLESQT (SEQ ID NO 94); CTEEIFQGIGTLESQ (SEQ ID NO 95): CTEEIFQGIGTLES (SEQ ID NO 96) ; TVERLFKNLSLIKKYIDGQKKK (SEQ ID NO 97) ; VERLFKNLSLI KKYIDGQKKK (SEQ ID NO 98); VERLFKNLSLIKKYIDGQKK (SEQ ID NO 99); RVNQFLDYLQEFLGV NTEWIIES (SEQ ID NO 100); VNQFLDYLQEFLGVMNTEWIIES (SEQ ID NO 101 ) ; PVHKNHQLCTEEIFQGIGTLESQTVQGGTV (SEQ ID NO 102); ERLFKNLSLIKKYIDGQKKKCGEERRRVNQ (SEQ ID NO 103) ; FLDYLQEFLGVMNTEWIIES (SEQ ID NO 104); RIPVPVHKNHQLC (SEQ ID NO 105); QTVQGGT (SEQ ID NO 106); KCGEERRR (SEQ ID NO 107); TEEI FQG (SEQ ID NO 108), EWI IES (SEQ ID NO 109) y SEQ ID NOs 122-123.

Los determinantes antigénicos de SEQ ID NOs 62-109 pueden acopiarse a una secuencia de péptidos separadora tales como aquellas de SEQ ID NOs: 39-41 en ya sea su extremo con terminal de carboxi o terminal amino como acoplados al vehículo inmunogénico tal como DT o TT a través del enlazador de péptido separador. La secuencia nativa del fragmento IL-5 correspondiente a la determinante de péptido antigénico también pueden modificarse o alterarse para crear una inmunoimitación útil en la construcción de epítopos inmunogénicos anti-IL-5. En una modalidad específica de la invención los residuos de cisteína se convierten en treonina, aunque la substitución por cisteína por serina o alanina en lugar de treonina también podría utilizarse). Ejemplos de tales secuencias de péptidos modificadas son: PVHKNHQLT (SEQ ID NO 1 10); KKYIDGQ KKT (SEQ ID NO 1 1 1 ); KKKTGEER (SEQ ID NO 1 12); TGEERRRVNQ (SEQ ID NO 1 13); PVHKNHQLTLPPPPC (SEQ ID NO 1 14); KKYIDGQKKKTSSPPPPC (SEQ ID NO 1 15); y CPPPPLKKKTGEER (SEQ ID NO 1 16). Los inmunógenos bivalentes pueden contener una pluralidad de determinantes de péptido antigénico en cualquier combinación de eotaxina y epítopos IL-5 conjugados con un vehículo inmunogénico tal como un péptido de toxoide. Por ejemplo, un inmunógeno bivalente útil para originar una respuesta inmune activa en un sujeto humano contra eotaxina e IL-5 puede construirse al conjugar una pluralidad de determinantes de péptido antigénico de SEQ ID NOs 56-61 y 1 14-1 16, 1 18, 1 1 9, 122 y 123 en un vehículo inmunogénico tal como DT. Ejemplo 9: Conjugación de Determinantes Antigénico de Péptidos para vehículos inmunogénicos Los métodos para conjugar el péptido con el vehículo de proteína inmunogénico se conocen en la materia (ver por ejemplo, WO 02/066056). Por ejemplo, los fragmentos de epítopo de eotaxina substituidos por treonina: SGKTPQKAVISSPPPPC (SEQ ID NO 56), FKTKLAKDITSSPPPPC (SEQ ID NO 58), ADPKKKWVQDSSPPPPC (SEQ ID NO 60), pueden conjugarse con proteínas portadoras DT o TT a través de agentes de degradación heterobifuncionales. Uno o más de estos fragmentos de eotaxina se degrada con DT o TT por reacción con un agente de degradación heterobifuncional tal como N-(epsilon-Maleimidocaproiloxi)-succinimida éster (E CS) o su sulfo-E CS análogo soluble en agua. En esta modalidad, DT o TT se reaccionan primero con el agente de degradación heterobifuncional a través del éster de succinimidilo en grupos amino en el toxoide. Esta reacción se realiza preferentemente a pH 6.5+0.3 durante aproximadamente 1 a 3 horas a temperatura ambiente. Una proporción de grupos maleimidilo a proteína portadora de, por ejemplo 5: 1 , 10:1 , 15: 1 se logra al reaccionar el toxoide (DT u otra proteína portadora) con un exceso apropiado del agente de degradación. El exceso molar real del degradador se determina por concentración. Los moles de maleimida incorporados por mol de toxoide durante concentración pueden determinarse por reacción subsiguiente de maleimidil-toxoide con un compuesto suifhidrilo tal como cisteína o beta-mercaptoetanol. La cantidad de compuesto sulfhidrilo reaccionado con el maleimidil-toxoide se determina más fácilmente de manera indirecta por reacción del compuesto sulfhidrilo residual con bis-ditio-nitrobenzoato. Después del retiro de agente de degradación en exceso por ya sea diafiltracion o cromatografía de permeación de gel, el maleimidil-toxoide se reacciona a través de su grupo sulfhidrilo terminal con un exceso molar 1 : 1 de péptido separador de eotaxina sobre porciones de maleimidilo del toxoide activado. Esta conjugación del péptido con el toxoide se realiza preferentemente a pH 6.0+0.3 durante aproximadamente 3 a 6 horas a temperatura ambiente. Alternativamente, esta reacción de conjugación del péptido al maleimidil-toxoide puede realizarse por reacción durante la noche a temperatura ambiente. Puede ser preferible conducir las reacciones de conjugación con agentes de degradación que contiene grupos maleimida en un envase. Después de la reacción con péptido, el exceso de péptido se remueve por ya sea diafiltracion o cromatografía de permeación de gel en pH salina regulada de fosfato 7.2+0.2. Ejemplo 10: Inmunógenos anti-quimoquina multivalentes Los inmunógenos de acuerdo a la invención pueden construirse al conjugar cualquier número de diferentes epítopos de péptido como se establece arriba en los Ejemplos 1 -8, SEQ ID NOs. 1 -129 en varias diferentes combinaciones utilizando los métodos de conjugación del Ejemplo 9 o por otros métodos conocidos en la materia. De esta manera, un inmunógeno puede construirse teniendo como objetivo cualquier combinación de quimoquinas objetivo y en particular quimoquinas seleccionadas Th-2 del grupo que consiste de eotaxina-1 , eotaxina-2, eotaxina-3, IL-4, IL-5, IL-9, o IL-13 y combinaciones de las mismas. Por ejemplo, inmunógenos multivalentes pueden construirse en a) eotaxina-1 , eotaxina-2, eotaxina-3 o b) eotaxina, IL-5, IL-13 o cualquier otra combinación de las quimoquinas Th-2. Las quimoquinas objetivo específicas seleccionadas para la construcción del inmunogeno pueden variar con el tipo de desorden inmune que está por tratarse y su perfil de citoquina asociado. Ejemplo 1 1 : Formulación de composiciones de vacuna inmunogénicas Formulaciones adecuadas para presentación inmunogénica del conjugado de toxoide determinante antigénico incluyen, pero no se limitan a, adsorción a aluminio o alhidrogeles, inclusión dentro de liposomas, microsomas o microesferas similares, incluyendo microparticulados y nanoparticulados, emulsiones de aceite en agua o agua en aceite, incluyendo emulsiones multifásicas, y microemulsiones (ver, por ejemplo, WO 02/066056). Otras formulaciones potencialmente adecuadas incluyen preparaciones con copolímeros de bloque teniendo cualidades adyuvantes capaces de estimular la respuesta inmune para antígenos incluidos, en este caso los conjugados de toxoide específica-eotaxina preferidos. Los inmunógenos conjugados de la invención pueden formularse con adyuvantes u otros agentes inmunoestimuladores en un vehículo farmacéuticamente aceptable con componentes y utilizando métodos bien conocidos en la materia, (ver; Vaccine Design, The Subunit and Adjuvant Approach, (1995) Powell and Newman Eds., Plenum Press (New York), Aucouturier et al., Vaccine 19 (2001 ) 2666-2672). Una modalidad específica de la presente invención incluye la formulación de los conjugados de toxoide de péptido determinantes antigénicos en la fase acuosa de emulsiones de agua en aceite. Una solución acuosa filtrada estéril (0.1 a 0.2 µ?t?) de los conjugados de toxoide de péptido se combina con una mezcla de aceite filtrada estéril adecuada (0.2 µ?t?) que contiene emulsionantes suficientes para proporcionar una emulsión de aceite en agua estable en la homogeneización de la mezcla de aceite en agua. El proceso de emulsión se practica como un procedimiento aséptico dentro de una capa de flujo laminar o aislador estéril adecuado útil para la práctica de formulación aséptica y llenado de las formulaciones farmacéuticas, incluyendo emulsiones estériles, que de otra manera no pueden esterilizarse por filtración terminal, esterilización de calor o irradiación. La mezcla de agua en aceite puede variarse en el rango de 50:50 a 10:90, pero más preferentemente en el rango de 40:60 a 20:80 de agua en aceite. Las mezclas de aciete/emulsionantes adecuadas para este propósito para producir la emulsión de aceite en agua preferida puede obtenerse del rango de producto Montanide disponible de SEPPIC, SA, París, Francia. Además, puede ser deseable incorporar además durante el proceso de emulsión un adyuvante soluble en agua en la fase acuosa de la emulsión final Adams, A. Synthetic Adjuvants. 1985 John Wiley & Sons, New York).

Ejemplos de adyuvantes adecuados incluyen, Quill A, QS21 , dipéptido muramil (no MDP). Métodos para tratar condiciones inflamatorias Los inmunógenos de la invención también pueden administrarse en regímenes de tratamiento con otros farmacéuticos o agentes anti-inflamatorios. Por ejemplo, en el caso de asma o desordenes alérgicos crónicos, atópicos, el paciente puede inmunizarse activamente con una vacuna anti-eotaxina de la invención para controlar y sub regular los niveles de eotaxina y la acumulación de eosinófilos en los tejidos afectados mientras al mismo tiempo una medicación de rescate o agente anti-asma o anti-alergia se administra en respuesta a un ataque agudo originado, por ejemplo, por un estímulo alérgico insoportable. Tales agentes adicionales útiles en los tratamientos de combinación pueden incluir corticoesteroides, cromogliato, anti-inflamatorios, inhibidores COX-2, antagonistas de leucotrieno (receptor), xantinas, antihistaminas y broncodilatadores. Vacunas de ADN En una modalidad alternativa de la invención, las construcciones de ADN comprendiendo secuencias de ácido nucleico que codifican los fragmentos de péptido de eotaxina u otros determinantes antigénicos de citoquina descritos arriba y comprendiendo además las secuencias de ácido nucleico que codifican los epítopos de la célula auxiliar T se utilizan como vacunas de ADN. Los métodos para construir, formular y administrar tales vacunas de ADN se conocen en la materia y se adaptan a los epítopos de péptido de quimoquina de la invención, ver WO 00/65058, WO 98/31398, Donnelly et al. , 1997, Annu. Rev. Immunol. 15: 617-648 and Donnelly et al., 1997, Life Sciences 60: 163-172. Incorporación por referencia A través de esta solicitud se hace referencia a varias publicaciones y documentos de patente. Las descripciones de cada una de estas referencias, publicaciones y patentes, se incorpora en la presente para referencia en esta descripción en su totalidad como parte de la descripción de esta solicitud como son las descripciones de las publicaciones y patentes que, a su vez, se citan en la misma.

Claims (1)

1. REIVIND!CACIONES 1 . Un método para tratar a un sujeto con una condición inflamatoria que resulta de la acumulación de eosinófilo, que comprende generar una respuesta inmune activa en el paciente que comprende autoanticuerpos a eotaxina e IL-5. 2. Un método para tratar a un sujeto con una condición que resulta de asma, alergia o enfermedad alérgica que comprende generar una respuesta inmune en el sujeto a eotaxina e IL-5. 3. Una composición inmunogénica que comprende eotaxina o un fragmento de péptido de la misma e IL-5 o un fragmento de péptido de la misma, acoplado a un vehículo de proteína inmunogénico. 4. Una composición inmunogénica que comprende un epítopo de célula T, un epítopo derivado de IL-5 y un epítopo derivado de eotaxina. 5. Una composición inmunogénica para el tratamiento de asma, alergia o enfermedad alérgica que comprende eotaxina o una porción de la misma e IL-5 o una porción de la misma conjugada con un vehículo inmunogénico. 6. Un método para producir la composición de la reivindicación 3, 4 o 5 que comprende conjugar la eotaxina o una porción de la misma e IL-5 o una porción de la misma con el vehículo inmunogénico. 7. Un método para tratar un desorden que incluye una trayectoria inmunomoduladora que comprende múltiples citoquinas, el método comprendiendo inmunizar de manera activa a un sujeto contra dos o más citoquinas en la trayectoria para producir autoanticuerpos en el sujeto que pueden unirse a y modular las actividades de las citoquinas. 8. El método según la reivindicación 7, caracterizado porque la trayectoria es la trayectoria Th-2. 9. El método según la reivindicación 8, caracterizado porque el sujeto se inmuniza activamente contra IL-5 y eotaxina. 10. Un método para tratar un sujeto con una condición mediada por eotaxina, que comprende generar una respuesta inmune activa en el sujeto a eotaxina y al menos una citoquina seleccionada del grupo que consiste de eotaxina-2, eotaxina-3, IL-4, IL- 5, IL-9 o IL-13. 1 1 . El método según la reivindicación 1 0, caracterizado porque la condición mediada por eotaxina es asma, alergia o enfermedad alérgica. 12. La composición inmunogénica según la reivindicación 5, que comprende al menos una secuencia de péptidos seleccionada de la secuencia de péptidos establecida en SEQ ID NOs 1 -38, 42-61 y 1 17-121 y 130-132 y al menos una secuencia de péptidos seleccionada de las secuencias de péptidos establecidas en SEQ ID NOs 62-1 16 y 122-123. 13. Un método para mejorar la eosinofilia en un sujeto humano que comprende subregular eotaxina y sub regular concurrentemente una citoquina seleccionada del grupo que consiste de eotaxina-2, eotaxina-3, IL-4, IL-5, IL-9, o IL-13. 14. Una composición inmunogénica multivalente para inmunizar activamente un sujeto para tratar un desorden inmune Th-2 que comprende un vehículo inmunogénico conjugado con una pluralidad de epítopos de péptido derivados de dos o más citoquinas Th-2. 15. La composición según la reivindicación 14, caracterizada porque las citoquinas Th-2 se seleccionan del grupo que consiste de eotaxina-2, eotaxina-3, IL-4, IL-5, IL-9, o IL-13.