MXPA05006853A - Usos de citocinas de mamifero; reactivos relacionados. - Google Patents

Abstract

Se proveen metodos para el tratamiento de trastornos de la piel; en particular, los trastornos de la piel bajo tratamiento son en general trastornos inflamatorios de la piel, que incluyen cicatrizacion inadecuada de heridas; se proveen metodos de uso de una molecula de citocina.

Description

USOS DE CITOC1NAS DE MAMIFERO; REACTIVOS RELACIONADOS CAMPO DE LA INVENCION La presente invención se refiere en general a usos de moléculas tipo citocina de mamífero, y reactivos relacionados. Más específicamente, la invención se refiere a la identificación de proteínas tipo citocina de mamífero e inhibidores de las mismas, que modulan la cicatrización de la piel o heridas, por ejemplo, condiciones inflamatorias de la piel.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION Las citocinas son pequeñas proteínas que median la señalización y comunicación entre las células del sistema inmune, por ejemplo, células T, células B, células dendríticas y macrófagos. Estas proteínas median muchas actividades celulares, que incluyen proliferación, crecimiento, diferenciación, migración, activación celular y respuesta a infección, antígenos extraños y heridas. Una familia particularmente importante de citocinas, es la familia de ¡nterleucina-6 (IL-6). Estas citocinas exhiben una amplia gama de funciones biológicas con frecuencia traslapantes que son transmitidas mediante receptores de superficie celular de cadenas múltiples, los cuales se forman típicamente de cadenas de receptores específicos de citocinas de alta afinidad y cadenas transductoras de señales de afinidad reducida. Subunidades de receptores, son compartidas con frecuencia entre los miembros de esta subfamilia de citocinas. Recientemente, se identificó una citocina helicoidal novedosa que tiene homología estructural con la familia de citocinas de IL-6. Esta proteína fue designada como p19, y se mostró que forma parte de un factor mixto novedoso que consiste de un complejo unido por puentes disulfuro entre la subunidad p19 y la subunidad p40 de IL-12. Este complejo de p19p40 novedoso, conocido también como IL-23, es expresado naturalmente por células dendríticas de ratón y humano activadas, y tiene actividades biológicas que son similares, pero distintas, a las de la IL-12 (véase, por ejemplo, Oppmann et al. (2000) Immunity 13: 715-725). La subunidad p19 de la IL-23 se conoce también como "IL-23p19". La presente invención identifica y provee IL-23, agonistas de IL-23, y variantes y derivados de la misma, como moduladores de trastornos de la piel, por ejemplo, para su uso en el tratamiento o diagnóstico de condiciones y trastornos de la piel o cicatrización de heridas; véase, por ejemplo, Fitzpatrick, et al. (eds.) (1993) Dermatology in General Medicine, 4a. ed., McGraw-Hill, NY; Bos (ed.) (1989) Skin Immune System, CRC Press, Boca Ratón, FL; Callen (1996) General Practice Dermatology, Appleton and Lange, Norwalk, CN; Rook, eí al. (eds.) (1998) Textbook of Dermatology, Blackwell Publ., Malden, MA; Habifor y Habie (1995) Clinical Dermatology: A Color Guide to Diagnosis and Therapy, Mosby, Filadelfia, PA.; Grob (ed.) (1997) Epidemiology, Causes and Prevention of Skin Diseases, Blackwell, Malden, MA; Hess y Salcido (2000) Wound Care, Springhouse Pub. Co., Springhouse, PA; Mani, et al. (1999) Chronic Wound Healing: Clinical Measurement and Basic, Balliere Tindall Ltd., Londres, Reino Unido; Wyngaarden y Smith (eds.) (1985) Cecil's Textbook of Medicine, W.B. Saunders Co., Filadelfia, PA; Berkow (ed.) (1982) The Merck Manual of Diagnosis and Therapy, Merck Sharp & Dohme Research Laboratories, West Point, PA; Braunwald, eí al. (eds.) (1991 ) Harríson's Principies of Internal Medicine, doceava edición, McGraw-Hill, Inc., NY, citas que se incorporan en la presente como referencia. La presente invención provee métodos y reactivos para ei tratamiento, prevención y diagnóstico de heridas y cicatrización de heridas, por ejemplo, quemaduras, heridas de cartílago, nervios y médula espinal, músculo, tejidos blandos, vasos sanguíneos y angiogénesis, úlceras y úlceras por presión, fracturas de huesos y osteoporosis, y para promover el crecimiento de la piel, por ejemplo, en sitios cosechados o de donador usados en injerto de la piel (véase, por ejemplo, Yamaguchi y Yoshikawa (2001) J. Dermatol. 28: 521-534; Caims, et al. (1993) Arch. Surg. 128: 1246-1252; Hom, eí al. (2002) Facial Plast. Surg. 18: 41-52; Hackam y Ford (2002) Surg. Infecí. (Larchmt.) 3 (Supl. 1 ): S23-S35; Oshima, et al. (2002) Hum. Cel!. 15: 118-128; Lal, eí al. (2000) Growth Horm. IGF Res. 10 (Supl. B): S39-S43; Rose y Herndon (1997) Burns 23: S19-S26; Schryvers, et al. (2000) Arch. Phys. Med. Rehabil. 81 : 1556-1562; Hidaka, eí al. (2002) Orthhop. Clin. North Am. 33: 439-446; Dagum (1998) J. Hand Ther. 11 : 111-117; Coutts, et al. (2001 ) Clin. Orthop. 391 (Supl.): S271-S279; Larsson (2002) Scand. J. Surg. 91 : 140-146; Goldstein (2000) Clin. Orthop. 379 (Supl.): S113-119; Lieberman, et al. (2002) Mol. Therapy Q: 141-147; Tuli, et al. (2003) Arthritis Res. Ther. 5: 235-238; L¡, et al. (2003) Microsc. Res. Tech. 60: 107-114; van Hinsbergh, eí al. (2001) 936: 426-437; Conway, et al. (2001) Cardiovasc. Res. 49: 507-521 ). La cicatrización de heridas de la piel incluye muchas fases: inflamación, primer inflamación con neutrófilos y después inflamación con monocitos/macrófagos, nueva formación de tejido, que incluye formación de matriz y diferenciación de un neoepitelio, y por último reconstrucción y maduración. La fase inflamatoria inicial permite la formación del coágulo, controla la infección y promueve la vascularización, y produce factores de crecimiento. Si no se controla adecuadamente, la inflamación puede llevar a cicatrización patológica, por ejemplo, úlceras o cicatrices. Los fibroblastos depositan tejido de granulación o matriz provisional, mientras que la matriz provisional recién formada es degradada después en un proceso de reconstrucción del tejido. La degradación de la matriz extracelular es mediada por proteasas, tales como metaloproteasas de matriz (MMP), gelatinasa y colagenasa, así como inhibidores de proteasa. Un desequilibrio en la formación y degradación de la matriz lleva, en un extremo, a úlceras crónicas y, en el otro extremo, a fibrosis. Por ejemplo, los queloides, una "respuesta de cicatrización excesiva", son excrecencias de tejido fibroso (Michalik, et al. (2001 ) J. Cell Biol. 154: 799-814; Okada, eí al. (1997) J. Cell Biol. 137: 67-77; Fedyk, et al. (2001 ) J. Immunol. 166: 5749-5755; Ravanti y Kahari (2000) Int. J. Mol. Med. 6: 391-407; y Peled et al. (2000) Clin. Past. Surg. 27: 489-500). La formación de matriz y la reepitelización dependen de la angiogénesis (Montesinos, et al. (1997) J. Exp. Med. 186: 1615-1620; Malinda, er a/. (1998) J. Immunol. 160: 001-1006). Los factores de crecimiento usados en la cicatrización de heridas inducen la expresión de factores antimicrobianos, por ejemplo, defensinas, catelicidinas, inhibidor secretorio de proteasa y lipocalina asociada a gelatinasa (de neutrófilos) (Sorensen, eí al. (2003) J. Immunol. 170: 5583-5589). En la cicatrización de heridas, células tales como plaquetas, monocitos/macrófagos, células T y otras células inmunes, infiltran la herida y producen factores que regulan el crecimiento del tejido. Estos factores incluyen TGF, factor de necrosis tumoral (FNT), IL-1 , IL-4, IL-6, oncostatina M, GRO-alfa, varios factores angiogénicos y quimiocinas. A su vez, estos factores estimulan la expresión de, por ejemplo, la matriz extracelular y el inhibidor tisular de metaloproteasa (TIMP) (Ihn y Tamaki (2000) J. Immunol. 165: 2149-2155; Feugate, et al. (2002) J. Cell. Biol. 156: 161-172). Los miofibroblastos, células que son fibrogénicas, son importantes para el cierre y la contracción de la herida. Los estados de enfermedad caracterizados por la acumulación de miofibroblastos, incluyen fibrosis pulmonar y esclerodermia (Feugate, et al. (2002) J. Cell. Biol. 156: 161-172).

La cicatrización de heridas de la piel y otros tejidos, es un proceso complejo que incluye la proliferación y migración de células inmunes, células endoteliales, fibroblastos, células estromáticas, miofibroblastos, células de músculo liso, pericitos y queratinocitos. Los parámetros que se usan para medir la cicatrización incluyen índice de cicatrización, resistencia de heridas cicatrizadas a la ruptura, grado de epitelización, espesor del tejido de granulación y densidad de la matriz extracelular (Matsuda, er a/. (1998) J. Exp. Med. 187: 297-306). La isquemia o isquemia por reperfusión, como ocurre con la lesión traumática y la "descarga muscular" (reposo en cama, crónico), resulta en infiltración de neutrófilos, en donde los neutrófilos producen con frecuencia daño al tejido que excede el daño causado por la isquemia. Consistente con este efecto adverso de los neutrófilos sobre la cicatrización, es que la administración de antagonistas de citocinas, que incluyen antagonistas de IL-1 o FNT, puede mejorar también la cicatrización de heridas bajo ciertas condiciones, aún en donde la citocina es requerida finalmente para reparación normal (véase, por ejemplo, Ley (2003) AM. J. Physiol. Regul. Intergr. Comp. Physiol. 285: R718-R719; Graves, ef al. (2001) J. Immunol. 167: 5316-5320). La presente invención provee métodos que usan un antagonista de IL-23 para inhibir la lesión de tejidos inducida por neutrófilos, por ejemplo, después de trauma, generación de herida o reposo en cama prolongado. La cicatrización de heridas inadecuada, por ejemplo, de heridas cutáneas, puede resultar en molestia crónica o desfiguración, y puede llevar a otras complicaciones, por ejemplo, infecciones o deshidratación. De esta manera, existe la necesidad de un tratamiento efectivo, tanto profiláctico como curativo, que alivie los síntomas de esas condiciones. En forma alternativa, serán útiles métodos de diagnóstico, por ejemplo, de salud anormal o modificada de esos tejidos. La presente invención provee ambos aspectos.

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION La presente invención se basa, en parte, en el descubrimiento de que una proteína de fusión de IL-23, por ejemplo, una proteína de fusión que comprende la subunidad p19 enlazada a la subunidad p40, mejoró la respuesta de cicatrización de heridas en varios modelos en ratones. La invención provee un método para tratar o mejorar la cicatrización, el cual comprende administrar a un sujeto una cantidad efectiva de un agonista o antagonista de IL-23. Se provee también el método anterior, en donde al agonista o antagonista comprende un polipéptido de IL-23, o un derivado o variante del mismo; una composición de unión derivada de un anticuerpo que se une específicamente a IL-23 o a IL-23R; o un ácido nucleico que codifica para un polipéptido de IL-23, o un derivado o variante del mismo. Además, la invención provee el método anterior, en donde el derivado o variante comprende una IL-23 hipercina; en donde el agonista comprende un complejo de una secuencia madura de SEQ ID NO: 10; y una secuencia madura de SEQ ID NO: 12; o el método anterior, en donde el ácido nucleico comprende además un vector de expresión. En otro aspecto, la invención provee un método para tratar o mejorar la cicatrización, el cual comprende administrar a un sujeto una cantidad efectiva de un agonista o antagonista de IL-23, en donde la cicatrización es de una herida de la piel o herida cutánea; de una úlcera o injerto; o es cicatrización inadecuada. Se provee también el método anterior, en donde el tratamiento o mejora aumenta una presión requerida para romper una herida cicatrizada o cicatrizante; una rigidez de una herida cicatrizada o cicatrizante; un índice de cicatrización de una herida; un espesor de capa de granulación de una herida cicatrizada o cicatrizante; reclutamiento de una célula a o hacia una herida; o actividad antimicrobiana. En otro aspecto, la invención provee el método anterior, en donde la célula es una célula CD11b+ clase ? del MHC; un monocito/macrófago; una célula endotelial CD31+; o una célula inmune. Se provee también el método anterior, en donde el reclutamiento es en o hacia un tejido de granulación; en donde la presión incrementada de ruptura de la herida es un incremento de aproximadamente 15% o aproximadamente 20% en la presión de ruptura de la herida; o la rigidez incrementada es un incremento de aproximadamente 15% o aproximadamente 20% en rigidez. En otra modalidad, la presente invención provee el método anterior, en donde el tratamiento o mejora comprende angiogénesis incrementada; o vigilancia inmune; o el método anterior, en donde la angiogénesis incrementada es mediada por ICAM-1 o -2; o la vigilancia inmune incrementada es mediada por células dendríticas.

Otro aspecto de la invención anterior, provee un método para tratar o mejorar la cicatrización, el cual comprende administrar a un sujeto una cantidad efectiva de un agonista o antagonista de IL-23, en donde el tratamiento o mejora comprende expresión incrementada de un ácido nucleico o proteína de una citocina además de IL-23; una molécula de señalización; una molécula antimicrobiana; una proteasa o inhibidor de proteasa; o una molécula de la matriz extracelular; o el método anterior, en donde el ácido nucleico o proteína de la citocina es IL-7, IL-6, IL-19, GRO-alfa o GM-CSF; o en donde el ácido nucleico o proteína es lactoferrina; DEC-205; CD50; óxido nítrico sintasa; o inhibidor secretorio de leucoproteasa; o CD40L. Se provee también el método anterior, en donde el antagonista comprende un ácido nucleico; un anticuerpo de bloqueo de IL-23 o IL-23R; o un receptor soluble derivado de una parte extracelular de IL-23R; o el método anterior, en donde el ácido nucleico comprende un ácido nucleico antisentido; o ARN de interferencia. Otro aspecto de la presente invención provee un agonista de IL-23 derivado del sitio de unión de un anticuerpo que se une específicamente a un receptor de IL-23; el agonista anterior que es un anticuerpo policlonal; un anticuerpo monoclonal; un fragmento Fab, Fv o F(ab')2; humanizado; un péptido mimético; o marcado detectablemente. En otra modalidad, la presente invención provee el agonista anterior, que comprende un complejo de un polipéptido de la secuencia madura de SEQ ID NO: 10 y un polipéptido de la secuencia madura de SEQ ID NO: 12; el agonista anterior comprendiendo un complejo de dos polipéptidos de la secuencia madura de SEQ ID NO: 0 y dos polipéptidos de la secuencia madura de SEQ ID NO: 12. Además, la invención provee el agonista anterior, en donde el contacto del agonista con una célula que expresa hlL-23R e hlL-12beta1 resulta en un incremento en la proliferación de la célula. Se provee también un equipo que comprende el agonista anterior y un compartimento; o instrucciones para uso o disposición. Se provee también un ácido nucleico que codifica para un agonista de IL-23 derivado del sitio de unión de un anticuerpo que se une específicamente a un receptor de IL-23.

DESCRIPCION DETALLADA DE LAS MODALIDADES PREFERIDAS Todas las referencias citadas en la presente se incorporan en la presente como referencia, al mismo grado como si se indicara que cada publicación o solicitud de patente individual fuese específicamente e individualmente incorporada en la presente como referencia. Como se usa en la presente, incluyendo las reivindicaciones anexas, las formas singulares de palabras tales como "un", "una" y "la", incluyen sus referencias plurales correspondientes, a menos que el contexto indique claramente otra cosa.

I. Generalidades La interleucina-23 (IL-23) es una citocina heterodimérica formada de una subunidad p19 novedosa (conocida también como IL-B30) y la subunidad p40 de IL- 2 (Oppmann, et al., citado anteriormente). Se identificó la subunidad p19 durante una búsqueda computacional de miembros de la familia de citocinas de IL-6 helicoidales caracterizadas por sus cuatro haces de a-hélice únicos. El análisis genético de la familia, de la cual oncostatina- , IL-11 , cardiotrofina-1 y factor inhibidor de leucemia son miembros, revela que el vecino evolutivo más cercano de p19 es la subunidad p35 de IL-12. Al igual que p35, p19 requiere co-expresión de p40 para tener actividad biológica (Wiekowski, et al. (2001) J. Immunol. 166. 7563-7570). El receptor de IL-23 (IL-23R) comprende una subunidad novedosa del receptor (IL-23R), que une p19, e IL-12R i , que une p40 (Parham, et al. (2002) J. Immunol. 168: 5699-5708). Estas dos subunidades del receptor forman el complejo de señalización funcional, y se expresan sobre células T de memoria CD4+ CD45Rb'°, así como macrófagos de médula ósea activados por interferón-gamma (IFNgamma) (Parham, et al., citado anteriormente). La caracterización preliminar de IL-23, sugiere que tiene efectos potentes sobre células T de memoria tanto de humanos como de ratones, medidos mediante proliferación y producción de IFNgamma. Consistente con las propiedades inmunoestimuladoras de IL-23, ratones en los cuales las células hematopoyéticas expresan constitutivamente p19 transgénica, tienen inflamación generalizada de órganos múltiples que resulta en muerte prematura (Wiekowski, eí al., citado anteriormente). La enfermedad inflamatoria se caracteriza por infiltración intensa de macrófagos, neutrofilia y niveles elevados de monocinas proinflamatorias tales como IL-1 y FNT, sugiriendo que IL-23 puede actuar también sobre células mieloides. Estudios recientes que analizan la necesidad de IL-12 en resistencia a enfermedades infecciosas, han dado resultados divergentes, dependiendo de si se usan ratones p35"/_ o p40~/". Los primeros, los cuales carecen específicamente de IL-12 pero expresan IL-23, son resistentes a la infección, mientras que los últimos, incapaces de expresar IL-12 e IL-23, son más susceptibles. Ratones transgénicos deficientes en la subunidad p19 de IL-23 (IL-23p19), fueron resistentes a EAE, una enfermedad autoinmune del SNC mediada por células TH1 y macrófagos inflamatorios, mientras que ratones control de tipo silvestre y heterocigóticos para p19 fueron altamente susceptibles. Los ratones deficientes en la subunidad p40 de IL-12 (ratones deficientes en IL-12p40), fueron también resistentes a EAE, mientras que los ratones deficientes en la subunidad p35 de IL-12 (ratones deficientes en IL-12p35), fueron altamente susceptibles a EAE. Esto es indicativo de una función de IL-23 en la inducción de EAE. Los ratones deficientes en p19 tuvieron una respuesta de cicatrización de heridas notable alterada después de inyección subcutánea de una emulsión de aceite en ratones. Los ratones deficientes en p19 fueron también defectuosos en una variedad de modelos de enfermedad en ratones que requirieron activación de monocitos/macrófagos. Los monocitos/macrófagos son conocidos por estimular la reparación de heridas; véase, por ejemplo, Schaffer y Nanney (1996) Intl. Rev. Cytol. 169: 151 -181. En particular, se muestra más adelante que el suministro de polipéptidos de IL-23 en la piel de ratones, podría atraer poblaciones de monocitos/macrófagos activados por células CD11 b+ clase II+.

II. Definiciones "Agonista de IL-23" abarca un anticuerpo agonista que se une específicamente al receptor de IL-23 (IL-23R), y aumenta las propiedades de señalización de IL-23R. El agonista de IL-23 abarca también un anticuerpo agonista que se une específicamente al complejo de IL-23R e IL-12Rbeta1. Un "anticuerpo de bloqueo" abarca, por ejemplo, un anticuerpo que se une específicamente a IL-23 y previene o deteriora la señalización mediada por IL-23 e IL-23R, Un anticuerpo de bloqueo abarca también un anticuerpo que se une específicamente a IL-23R, y previene o deteriora la señalización mediada por IL-23R, o mediada por IL-23 e IL-23R. La expresión "variantes conservativamente modificadas" se aplica a secuencias de aminoácidos y de ácido nucleico. Con respecto a secuencias de ácido nucleico particulares, las variantes conservativamente modificadas se refieren a aquellos ácidos nucleicos que codifican para secuencias de aminoácidos idénticas o esencialmente idénticas, o en donde el ácido nucleico no codifica para una secuencia de aminoácidos, para secuencias de ácido nucleico esencialmente idénticas. Debido a la degeneración del código genético, un gran número de ácidos nucleicos funcionalmente idénticos puede codificar para cualquier proteína determinada. Como para las secuencias de aminoácidos, el experto en la técnica reconocerá que una sustitución individual a una secuencia de ácido nucleico, péptido, polipéptido o proteína, que sustituye a un aminoácido o un pequeño porcentaje de aminoácidos en la secuencia codificada para un aminoácido conservado, es una "variante conservativamente modificada". Tablas de sustitución conservativa que proveen aminoácidos funcionalmente similares, son bien conocidas en la técnica. Un ejemplo de una sustitución conservativa, es el intercambio de un aminoácido en uno de los siguientes grupos, por otro aminoácido del mismo grupo (véase patente de E.U.A. No. 5,767,063, expedida a Lee, et al:, Kyte y Doolittle ( 982) J. Mol. Biol. 157: 105-132): (1 ) Hidrofóbicos: Norleucina, lie, Val, Leu, Phe, Cys o Met; (2) Hidrofílicos neutros: Cys, Ser, Thr; (3) Acidos: Asp, Glu; (4) Básicos: Asn, Gln, His, Lys, Arg; (5) Residuos que influyen sobre la orientación de la cadena: Gly, Pro; (6) Aromáticos: Trp, Tyr, Phe; (7) Pequeños aminoácidos: Gly, Ala, Ser. La frase "cantidad efectiva" significa una cantidad suficiente para mejorar un síntoma o signo de la condición médica. Mamíferos hospederos típicos incluirán ratones, ratas, perros, gatos y primates, incluyendo humanos. Una cantidad efectiva para un paciente particular puede variar, dependiendo de factores tales como la condición que se está tratando, la salud general del paciente, el método, vía y dosis de administración, y la severidad de los efectos secundarios. Cuando están en combinación, una cantidad efectiva está en relación con una combinación de componentes, y el efecto no se limita a los componentes individuales solos. Un "punto final" para evaluar o diagnosticar cicatrización mejorada, por ejemplo, cicatrización de heridas incluye, sin limitación: presión de ruptura de la herida; rigidez, relajación; vigilancia inmune; angiogénesis; actividad antimicrobiana relacionada a la herida; inflamación, por ejemplo, por neutrófilos; grado de expresión de genes o polipéptidos indicativo de inflamación, angiogénesis, reepitelización, acción antimicrobiana y reconstrucción, por ejemplo, formación de matriz, degradación de matriz o granulización. Según se determina mediante un punto final adecuado, la presente invención provee un método para mejorar la cicatrización en 10% o más, más generalmente en 15% o más, muy generalmente en 20% o más, típicamente 25% o más, más típicamente en 30% o más, muy típicamente en 35% o más, con frecuencia en 40% o más, más frecuentemente en 50% o más, muy frecuentemente en 60% o más, usualmente en 70% o más, más usualmente en 80% o más, muy usualmente en 90% o más, idealmente en 100% (es decir, 2 veces) o más, más idealmente en 4 veces o más, y muy idealmente en 8 veces o más. Según se determina mediante un punto final adecuado, la presente invención provee también un método para mejorar la cicatrización en aproximadamente 10%, más generalmente en aproximadamente 15%, muy generalmente en aproximadamente 20%, típicamente en aproximadamente 25%, más típicamente en aproximadamente 30%, muy típicamente en aproximadamente 35%, con frecuencia en aproximadamente 40%, más frecuentemente en aproximadamente 50%, muy frecuentemente en aproximadamente 60%, usualmente en aproximadamente 70%, más usualmente en aproximadamente 80%, muy usualmente en aproximadamente 90%, idealmente en aproximadamente 100% (es decir, 2 veces), más idealmente en aproximadamente 4 veces, y muy idealmente en aproximadamente 8 veces. La expresión "cicatrización inadecuada de la herida", abarca la ausencia o progresión anormalmente lenta de la cicatrización de una herida, por ejemplo, reepitelización retardada. La cicatrización inadecuada de la herida puede encontrarse, por ejemplo, en úlceras diabéticas y abscesos, úlceras por presión, heridas infectadas, quemaduras, edad avanzada, perfusión inadecuada y obesidad. La cicatrización inadecuada de la herida abarca también lesiones que llevan a cicatrices o a infecciones persistentes; véase, por ejemplo, Singer y Clark (1999) New Engl. J. Med. 341 : 738-746; Calhoun, et al. (2002) Adv. Skin Wound Care 15: 31-45; Rico, et al. (2002) J. Surg. Res. 102: 193-197; Thomas (2001 ) Cleve. Clin. J. Med. 68: 704-722; Ashcroft, ef al. (2002) Biogerontology 3: 337-345; Thomason (1999) Home Care Provid. 4: 156-161 ; Gallagher (1997) Ostomy. Wound Manage. 43: 18-27. Los parámetros y puntos finales que se usan para evaluar la cicatrización de heridas y la respuesta a agentes terapéuticos, farmacológicos y de diagnóstico, incluyen muchos parámetros histológicos, fisiológicos y bioquímicos, por ejemplo, infiltración, activación o diferenciación de neutrófilos, monocitos y macrófagos, por ejemplo, diferenciación de monocitos a macrófagos reconstructivos, y aparición de nuevo estroma, vasos sanguíneos y nervios. Parámetros adecuados incluyen también niveles de expresión de agentes de señalización, por ejemplo, factor de crecimiento transformante, interleucina-1 y factor de crecimiento tipo insulina. Son también parámetros adecuados medidas de epitelización, por ejemplo, índice y espesor, migración de células epidérmicas, espesor de granulación, degradación y maduración de matriz extracelular, por ejemplo, matriz provisional contra matriz colagenosa, resistencia de la herida (resistencia a la ruptura), e índice de proliferación de fibroblastos y fenotipo. El espesor incrementado del tejido de granulación puede dar como resultado heridas cicatrizadas más fuertes (véase, por ejemplo, Singer y Clark, citado anteriormente, Werner y Grase (2002) Physiol. Rev. 83: 835-870; Matsuda, eí al. (1998) J. Exp. Med. 187: 297-306; Wankell, et al. (2001 ) EMBO J. 20: 5361-5372). Una composición que es "marcada" es detectable directamente o indirectamente, por ejemplo, mediante métodos espectroscópicos, fotoquímicos, bioquímicos, meta bol icos, inmunoquímicos, isotópicos o químicos. Por ejemplo, marcas útiles incluyen marcas de epítope, fluorettes, 32P, 33P, 35S, 14C, 3H, 125l, isótopos estables, compuestos fluorescentes, reactivos densos en electrones, substratos o enzimas, por ejemplo, como se usan en inmunoensayos ligados a enzima; véase, por ejemplo, Invitrogen (2002) Catalogue, Carisbad, CA; Molecular Probes (2002) Catalogue, Molecular Probes, Eugene, OR; Rozinov y Nolan (1998) Chem. Biol. 5: 713-728. El incremento en "actividad antimicrobiana", abarca un incremento en expresión, concentración o nivel de un mediador de actividad antimicrobiana, tanto en presencia como en ausencia de reducción demostrada en actividad biológica, concentración, población o número de un microbio en contacto con un hospedero o sujeto humano o animal. El mediador de actividad antimicrobiana puede ser, por ejemplo, una célula inmune sensible a un antígeno de bacteria, virus, hongo, protozoario o parásito, o una molécula antimicrobiana, tal como una defensina. La "actividad antimicrobiana" abarca, por ejemplo, fagocitosis y cualquier actividad que se asocie generalmente o usualmente con fagocitosis, por ejemplo, exposición de un microbio a oxígeno tóxico. La "actividad antimicrobiana" abarca también un cambio en expresión, concentración o nivel de una célula, gen, proteína o pequeña molécula que se asocie generalmente o usualmente con acción antimicrobiana, por ejemplo, un incremento en expresión de un gen de neutrófilos. La "actividad antimicrobiana" no se limita a un incremento en expresión, es decir, abarca también una disminución en expresión, en donde esa disminución promueve actividad antimicrobiana. La "proliferación" o "índice de proliferación" puede medirse, por ejemplo, evaluando el incremento en el número de células durante un período o intervalo predeterminado, o mediante el número o proporción de células en fase S en algún punto de tiempo determinado.

III. Agonistas y antagonistas La presente invención provee métodos para usar agonistas de IL-23 que incluyen la proteína de citocina de longitud completa (SEQ ID NO: 2 ó 4). Se provee también una proteína de fusión, conocida también como "IL-23 hipercina" (SEQ ID NO: 6 u 8), que comprende p19 enlazada a p40 con una secuencia FLAG como se describe para IL-6, por ejemplo, en Oppmann, et al., citado anteriormente; Fischer, eí al. (1997) Nature Bíotechnol. 15: 142-145; Rakemann, ef al. (1999) J. Biol. Chem. 274: 1257-1266; y Peters, eí al. (1998) J. Immunol. 161 : 3575-3581 , de la misma. La invención provee también anticuerpos anti-IL-23R agonistas que son agonistas para el receptor de IL-23, por ejemplo, anticuerpos que estimulan el receptor de IL-23 en ausencia o presencia de IL-23. Péptidos de dichas secuencias, o variantes de los mismos, se usarán para inducir la señalización de receptores. Se contemplan también pequeñas moléculas que inducen también señalización de receptores. Los agonistas de la presente invención serán útiles en el tratamiento de varios trastornos inflamatorios de la piel que incluyen, pero no están limitados a, cicatrización de heridas y trastornos de la piel asociados con reclutamiento deteriorado de células mieloides/monocitos. La invención provee antagonistas de IL-23, por ejemplo, un anticuerpo de bloqueo que se une a IL-23, un anticuerpo de bloqueo que se une a IL-23R, un receptor soluble basado en la porción extracelular de IL-23R, y ácidos nucleicos. Los antagonistas de IL-23 de la presente invención abarcan ácidos nucleicos que son ácidos nucleicos antisentido y ácidos nucleicos de ARN de interferencia (véase, por ejemplo, Arenz y Schepers (2003) Naturwissenschaften 90: 345-359; Sazani y Kole (2003) J. Clin. Invest. 112: 481-486; Pirollo, eí al. (2003) Pharmacol. Therapeutics 99: 55-77; y Wang, et al. (2003) Antisense Nucí. Acid. Drug. Devel. 13: 169-189).

IV. Anticuerpos y reactivos relacionados Se proveen anticuerpos y composiciones de unión derivadas de un sitio de unión a antígeno de un anticuerpo. Estos incluyen anticuerpos humanizados, anticuerpos monoclonales, anticuerpos policlonales y fragmentos de unión, tales como fragmentos Fab, F(ab)2 y Fv, y versiones diseñadas de los mismos. El anticuerpo o composición de unión puede ser agonista o antagonista. Se contemplan anticuerpos que se unen simultáneamente a un ligando y receptor. Los anticuerpos monoclonales se unirán usualmente con por lo menos una KD de aproximadamente 1 mM, más usualmente por lo menos aproximadamente 300 µ?, típicamente por lo menos aproximadamente 100 µ?, más típicamente por lo menos aproximadamente 30 µ?, de preferencia por lo menos aproximadamente 10 µ , y más preferiblemente por lo menos aproximadamente 3 µ?, o mejor. Pueden prepararse anticuerpos monoclonales, policlonales y humanizados. Véase, por ejemplo, Sheperd y Dean (eds.) (2000) Monoclonal Antibodies, Oxford Univ. Press, New York, NY; Kontermann y Dubel (eds.) (2001 ) Antibody Engineering, Springer-Verlag, New York; Harlow y Lañe (1988) lní/iboc /es /4 Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, pp. 139-243; Carpenter, eí al. (2000) J. Immunol. 165: 6205; He, eí al. (1998) J. Immunol. 160: 1029; y Tang, et al. (1999) J. Biol. Chem. 274: 27371-27378). Se describen anticuerpos de cadena sencilla, anticuerpos de dominio individual y anticuerpos biespecíficos; véase, por ejemplo, Malecki, eí al. (2002) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 99: 213-218; Conrath, eí al. (2001) J. Biol. Chem. 276: 7346-7350; Desmyter, eí al. (2001 ) J. Biol. Chem. 276: 26285-26290, Kostelney, eí al. (1992) J. Immunol. 148: 1547-1553; y patentes de E.U.A. Nos. 5,932,448; 5,532,210; 6,129,914; 6,133,426; y 4,946,778. La invención abarca también composiciones de unión desamidadas, por ejemplo, anticuerpos, y métodos para usar composiciones de unión desamidadas (véase, por ejemplo, Zhang y Czupryn (2003) J. Pharm. Biomed. Anal. 30: 1479-1490; Perkins, eí al. (2000) Pharm. Res. 17: 1 110-11 17; y Lehrman, eí al. (1992) J. Protein Chem. 1 : 657-663).

Pueden unirse fragmentos de antígeno a otros materiales, tales como polipéptidos fusionados o unidos covalentemente, que se usarán como inmunógenos. Un antígeno y sus fragmentos pueden ser fusionados o enlazados covalentemente a una variedad de inmunógenos, tales como hemocianina de la lapa Fissurella, albúmina de suero de bovino u ovoalbúmina (Coligan, ef al. (1994) Current Protocols in Immunol., Vol. 2, 9.3-9.4, John Wiley and Sons, New York, NY). Pueden seleccionarse péptidos de antigenicidad adecuada a partir del polipéptido objetivo usando un algoritmo, tal como los algoritmos de Parker, et al. (1986) Biochemistry 25: 5425-5432; Welling, ef al. (1985) FEBS Letí. 188: 215-218; Jameson y Wolf (1988) Cabios 4: 181-186; o Hopp y Woods (1983) Mol. Immunol. 20: 483-489. La purificación del antígeno no es necesaria para la generación de anticuerpos. La inmunización puede llevarse a cabo mediante inmunización con vectores de ADN. Véase, por ejemplo, Wang, ef al. (1997) Virology 228: 278-284. En forma alternativa, puede inmunizarse a animales con células que posean el antígeno de interés. Pueden aislarse entonces esplenocitos de los animales inmunizados, y los esplenocitos pueden fusionarse con una línea de células de mieloma para producir un hibridoma. Pueden seleccionarse hibridomas resultantes para la producción del anticuerpo deseado mediante pruebas funcionales o pruebas biológicas, es decir, pruebas no dependientes de la posesión del antígeno purificado. La inmunización con células puede demostrar ser superior para la generación de anticuerpos, que la inmunización con antígeno purificado (véase Meyaard, et al. (1997) Immunity 7: 283-290; Wright, eí al. (2000) Immunity 13: 233-242; Preston, eí al. (1997) Eur. J. Immunol. 27: 1911-1918; y Kaithamana, et al. (1999) J. Immunol. 163: 5157-5164). Puede medirse la afinidad del anticuerpo, es decir, las propiedades de unión del anticuerpo al antígeno, por ejemplo, mediante resonancia de plasmones de superficie o prueba de inmunoensayo ligado a enzima (ELISA) (véase, por ejemplo, Maynard y Georgiou (2000) Annu. Rev. Biomed. Eng. 2: 339-376; Karlsson, eí al. (1991 ) J. Immunol. Methods 145: 229-240; Neri, eí al. (1997) Nal Biotechnol. 15: 1271-1275; Johnsson, et al. ( 991 ) Biotechniques 11 : 620-627; Friguet, et al. (1985) J. Immunol. Methods 77: 305-3 9; y Hubble (1997) Immunol. Today 18: 305-306). Los anticuerpos de la presente invención se unirán usualmente con por lo menos una KD de aproximadamente 10-3 M, más usualmente por lo menos 10-6 M, típicamente por lo menos 10-7 M, más típicamente por lo menos 10-8 M, de preferencia por lo menos aproximadamente 10-9 M, y más preferiblemente por lo menos 10-10 M, y muy preferiblemente por lo menos 10-11 M (véase, por ejemplo, Presta, et al. (2000) Thromb. Haemost. 85: 379-389; Yang eí al. (2001 ) Crit. Rev. Oncol. Hematol. 38: 17-23; Carnahan, eí al. (2003) Clin. Cáncer. Res. (Supl.) 9: 3982s-3990s; y Wilchek, eí al. (1984) Meth. Enzymol. 104: 3-55). Los anticuerpos para IL-23R, en donde el anticuerpo anti-IL-23R tiene sustancialmente la misma secuencia de aminoácidos y de ácido nucleico que se describen en la presente, pero que poseen sustituciones que no afectan sustancialmente los aspectos funcionales de las secuencias de ácido nucleico o de aminoácidos, están dentro de la definición de la invención contemplada. Las variantes con truncamientos, deleciones, adiciones y sustituciones de regiones que no cambian sustancialmente las funciones biológicas de estos ácidos nucleicos y polipéptidos, están también dentro de la definición de la invención contemplada. Un anticuerpo humanizado abarca un anticuerpo humano, fragmento de anticuerpo, anticuerpo de cadena sencilla, y similares, que tiene uno o más residuos de aminoácido introducidos en el mismo de una fuente que es no humana (anticuerpo introducido). Los aminoácidos usados para injerto pueden comprender el dominio variable completo de la fuente, una o más de las regiones determinantes de complementariedad (CDRs) de la fuente, o las seis CDRs del anticuerpo de origen. Mediante el injerto de las regiones importantes de aminoácidos o polipéptidos en el anticuerpo del hospedero, se remueven en general los aminoácidos o regiones correspondientes del anticuerpo del hospedero. Un anticuerpo humanizado comprenderá sustancialmente la totalidad de por lo menos un dominio variable, y típicamente dos dominios variables (Fab, Fab', F(ab')2, Fabc, Fv), en los cuales todas o sustancialmente todas las regiones determinantes de complementariedad corresponden a aquellas de una inmunoglobulina no humana, y todas o sustancialmente todas las regiones de estructura son aquellas de una secuencia consenso de inmunoglobulina humana. Las regiones de estructura y las CDRs están altamente conservadas en secuencia y conformación, y pueden predecirse exactamente, por ejemplo, para su uso en el injerto de CDRs en una estructura aceptara de anticuerpo humano. Pueden injertarse regiones determinantes de complementariedad en una estructura de aceptar de humano de ocurrencia natural, o en una estructura consenso derivada de muchos anticuerpos humanos. Se han identificado muchas secuencias consenso de cadena ligera variable (VL) y cadena pesada variable (VH) de humano. Para humanización, una cadena del anticuerpo de ratón puede compararse con las cadenas de la estructura de humano disponibles, en donde la cadena de humano de homología más estrecha se selecciona para injerto (véase, por ejemplo, Maynard y Georgiou, citado anteriormente, Li, et al. (2002) Immunol. Revs. 190: 53-68; Co, et al. (1991 ) Proc. Nati. Acad. Sel. USA 88: 2869-2873; Sims, et al. (1993) J. Immunol. 151 : 2296-2308; Sato, et al. (1994) Mol. Immunol. 31 : 371-381 ; Morea, et al. (2000) Methods 20: 267-279; Kabat et al. (1991 ) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a. ed., vol. 4, U. S. Department of Health Human Services, NIH, USA; patente de E.U.A. No. 6,538,11 1 , expedida a Koike, et al.; y patente de E.U.A. No. 6,329,51 1 , expedida a Vásquez, et al.). El anticuerpo humanizado de la presente invención abarca también sustituciones, deleciones y/o inserciones, usando técnicas estándar de mutagénesis dirigida a sitio, por ejemplo, las usadas para exploración de alanina; véase, por ejemplo, Jin y Wells (1994) Protein Sci. 3: 2351-2357; Cunningham y Wells (1997) Curr. Opin. Struct. Biol. 7: 457-462; Jones, et al. (1998) J. Biol. Chem. 273: 11667-11674; y patente de E.U.A. No. 4,816,567, expedida a Cabilly, et al. Las modalidades de la presente invención abarcan proteínas de fusión, marcas de purificación y marcas de epítope, en un extremo amino, extremo carboxilo, o posiciones dentro del polipéptido, por ejemplo, marca FLAG y proteína de fusión GSH-S transferasa. Los cambios de aminoácidos pueden alterar, añadir o eliminar procesos de post-traducción del anticuerpo anti-IL-23R agonista, por ejemplo, sitios para O- y N-glucosilación, y posiciones de residuos de cisteína usados para la formación de enlaces disulfuro; véase, por ejemplo, Wright y Morrison (1997) Trends Biotechnol. 15: 26-32; y Kunkel, et al. (2000) Biotechnol. Prog. 16: 462-470. Las propiedades de unión del anticuerpo humanizado pueden mejorarse mediante el siguiente procedimiento, por ejemplo, que incluye mutagénesis dirigida a sitio. La elaboración de modelos en computadora permite la visualización de qué residuos de aminoácido de la estructura de ratón es probable que interactúen con las CDRs de ratón. Estos aminoácidos de la estructura "de contacto" de ratón, son sobrepuestos entonces sobre la estructura homologa de humano. En donde la sobreposición indica que el aminoácido de la estructura "de contacto" de ratón es diferente del aminoácido de la estructura de humano correspondiente, el aminoácido de humano es cambiado al aminoácido de la estructura de ratón correspondiente. "Contacto" significa contacto ¡ntercadena entre una cadena ligera y cadena pesada en donde, por ejemplo, se predice que los aminoácidos están dentro de aproximadamente 3 Angstroms entre sí.

La mutagénesis dirigida a sitio puede ser deseable también en donde el aminoácido de la estructura de humano es raro para esa posición, y el aminoácido correspondiente en la inmunogiobulina de ratón es común para esa posición en las secuencias de inmunogiobulina humana. En este caso, el aminoácido de la estructura de humano puede ser mutado al aminoácido de la estructura de donador correspondiente; véase, por ejemplo, la patente de E.U.A. No. 6,407,213, expedida a Cárter et al.; patente de E.U.A. No. 6,180,370, expedida a Queen, et al.; y Jung, et al. (2001) J. Mol. Biol. 309: 701-716. El anticuerpo humanizado puede comprender por lo menos una porción de una región constante de inmunogiobulina (Fe), por ejemplo, de una inmunogiobulina humana. El anticuerpo puede incluir opcionalmente las regiones CH1 , de gozne, CH2, CH3 y CH4 de la cadena pesada. El anticuerpo humanizado puede seleccionarse de cualquier clase de inmunoglobuíinas, que incluyen IgM, IgG, IgD, IgA e IgE, y cualquier isotipo, que incluyen lgG1 , lgG2, lgG3 e lgG4. Pueden usarse métodos estándar para mejorar, o remover, la función efectora. La función efectora incluye unión a FcRn, FcgammaR y complemento. Puede mejorarse la vida media, por ejemplo, usando subclases de lgG2 o lgG4 humanas, o alterando residuos en la región de gozne (véase, por ejemplo, Clark (2000) Immunol. Today 21 : 397-402; Presta, et al. (2002) Biochem. Soc. Trans. 30: 487-490; y Morea, et al. (2000) Methods 20: 267-279). No es necesario que la CDR y las regiones de estructura del anticuerpo humanizado correspondan precisamente a las secuencias introducida o del hospedero, por ejemplo, estas secuencias pueden ser mutagenizadas mediante sustitución, inserción o deleción de por lo menos un residuo, de modo que el residuo en ese sitio no corresponda al anticuerpo consenso o anticuerpo introducido. Sin embargo, dichas mutaciones no serán extensivas. Usualmente, por lo menos 75% de los residuos del anticuerpo humanizado corresponderán a aquellos de las secuencias de FR y CDR precursoras, más con frecuencia 90%, y muy preferiblemente más de 95%. A menudo, las variantes de la secuencia de aminoácidos del anticuerpo anti-IL-23R humanizado tendrán una secuencia de aminoácidos que tiene por lo menos 75% de identidad de secuencias de aminoácidos con las secuencias de aminoácidos del anticuerpo humanizado original de la cadena pesada o la cadena ligera (por ejemplo, como en SEQ ID NOs: 2 y 4), más preferiblemente por lo menos 80%, más preferiblemente por lo menos 85%, más preferiblemente por lo menos 90%, y muy preferiblemente por lo menos 95%. La identidad u homología con respecto a esta secuencia, se define en la presente como el porcentaje de residuos de aminoácido en la secuencia candidata que son idénticos con los residuos anti-IL-23R humanizados, después de alinear las secuencias e introducir espacios, si es necesario, para lograr el máximo por ciento de identidad de secuencias, y no considerando sustitución conservativa alguna como parte de la identidad de secuencias. Ninguno del extremo amino, extremo carboxilo o extensiones, deleciones o inserciones internas en la secuencia del anticuerpo, deberá considerarse que afecta la identidad u homología de secuencias. Una alternativa a la humanización, es el uso de colecciones de anticuerpos humanos presentados visualmente en colecciones de fagos o de anticuerpos de humano contenidos en ratones transgénicos (véase, por ejemplo, Vaughan, et al. (1996) Nat. Biotechnol. 14: 309-314; Barbas (1995) Nature Med. 1 : 837-839; de Haard, ef al. (1999) J. Bio/. Chem. 27 : 18218-18230; McCafferty et al. (1990) Nature 348: 552-554; Clackson ef al. (1991 ) Nature 352: 624-628; Marks et al. (1991 ) J. Mol. Biol. 222: 581-597; Méndez, eí al. (1991 ) Nature Genet. 15: 146-156; Hoogenboom y Chames (2000) Immunol. Today 21 : 371-377; Barbas, ef al.. (2001 ) Phage Display: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York; Kay, et al. (1996) Phage Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual, Academic Press, San Diego, CA; y de Bruin, et al. (1999) Nat. Biotechnol. 17: 397-399).

V. Purificación de ácidos nucleicos, vectores y proteínas Un "vector de expresión" es una construcción de ácido nucleico, generada en forma recombinante o sintética, con uno o más elementos de ácido nucleico predeterminados que permiten la transcripción de un ácido nucleico particular. Típicamente, el vector de expresión incluye un ácido nucleico que será transcrito operablemente, enlazado a un promotor. La cadena ligera y la cadena pesada del anticuerpo anti-IL-23R agonista puede ser codificada por un ácido nucleico, en donde la expresión de la cadena ligera es enlazada operablemente a un primer promotor, y en donde la expresión de la cadena pesada es enlazada operablemente a un segundo promotor. En forma alternativa, las cadenas ligera y pesada pueden ser codificadas por un ácido nucleico, en donde la expresión de ambas cadenas es enlazada operablemente a un promotor. El ácido nucleico o los ácidos nucleicos que codifican para la cadena ligera y la cadena pesada, pueden proveerse como un vector o como dos vectores. Los métodos de la presente invención abarcan la incorporación de los uno o dos vectores en el genoma de una célula hospedera (véase, por ejemplo, Chadd y Chamow (2001) Curr. Opin. Biotechnol. 12: 188-194; Houdebine (2000) Transgenic Res. 9: 305-320; y Stoger, et al. (2002) Curr. Opin. Biotechnol. 13: 161-166). El ácido nucleico que codifica para la cadena ligera puede comprender además un primer vector, mientras que el ácido nucleico que codifica para la cadena pesada puede comprender además un segundo vector. En forma alternativa, un vector puede comprender los ácidos nucleicos que codifican para la cadena ligera y la cadena pesada. Para la expresión aumentada en proporción o a largo plazo del anticuerpo anti-IL-23R agonista, puede incorporarse un vector que contenga los ácidos nucleicos que codifican para la cadena ligera y la cadena pesada en el genoma del hospedero, por ejemplo, en donde la incorporación es en un punto o una pluralidad de puntos en el genoma del hospedero. La coexpresión de la cadena ligera y la cadena pesada en una célula hospedera, produce un anticuerpo soluble. La célula hospedera puede ser, por ejemplo, una célula de mamífero, transformada o inmortalizada, de insecto, planta, levadura o bacteria. La célula hospedera puede comprender además un animal transgénico. Se contemplan combinaciones de las modalidades anteriores en donde, por ejemplo, la cadena ligera es expresada simultáneamente por un vector que se incorpora en el genoma de la célula hospedera, o por un vector que no es incorporado en el genoma. La purificación de un anticuerpo, o fragmentos del mismo, puede incluir cromatografía de intercambio iónico, inmunoprecipitación, marcas de epítope, cromatografía de afinidad, cromatografía de líquidos de alta presión, y el uso de agentes de estabilización, detergentes o emulsificadores (Dennison y Lovrien (1997) Protem Expression Purif. 1 1 : 149-161 ; Murby, eí al. (1996) Protein Expression Purif. 7: 129-136; Ausube!, eí al. (2001 ) Curr. Protocols Mol. Biol., Vol. 3, John Wiley and Sons, New York, NY, pp. 17.0.1-17.23.8; Rajan, er al. (1998) Protein Expression Purif. 13: 67-72; Amersham-Pharmacia (2001 ) Catalogue, Amersham-Pharmacia Biotech, Inc., pp. 543-567, 605-654; y Gooding y Regnier (2002) HPLC of Biológica! Molecules, 2a. ed., Marcel Dekker, NY).

VI. Equipos Esta invención contempla un anticuerpo anti-IL23R agonista, fragmentos del mismo, ácidos nucleicos que codifican para un anticuerpo anti-IL-23R agonista, o fragmentos del mismo, en un equipo de diagnóstico. Se contempla el uso de composiciones de unión, que incluyen anticuerpos o fragmentos de anticuerpo, para la detección de IL-23R y metabolitos y productos de degradación de los mismos, y para la detección de actividades dependientes de IL-23R, por ejemplo, actividad bioquímica o celular. Los anticuerpos conjugados son útiles para propósitos de diagnóstico o de equipo, e incluyen anticuerpos acoplados con una marca o polipéptido, por ejemplo, un colorante, isótopos, enzima o metal; véase, por ejemplo, Le Doussal, ef al. (1991 ) J. Immunol. 146: 169-175; Gibellini, et al. (1998). J. Immunol. 160: 3891-3898; Hsing y Bishop (1999) J. Immunol. 162: 2804-281 ; y Everts, et al. (2002) J. Immunol. 168: 883-889. La invención provee un equipo, en donde el equipo comprende un compartimento que contiene un anticuerpo anti-IL-23R agonista, un fragmento antigénico del mismo, o un ácido nucleico que codifica para un anticuerpo anti-IL-23R agonista, o un fragmento de mismo. En otra modalidad, el equipo tiene un compartimento, un ácido nucleico, por ejemplo, una sonda, iniciador o guía molecular; véase, por ejemplo, Zammatteo, et al. (2002) Biotech. Annu. Rev. 8: 85-101 ; y Klein (2002) Trends Mol. Med. 8: 257-260. El equipo puede comprender, por ejemplo, un reactivo y un compartimento, un reactivo e instrucciones de uso, o un reactivo con un compartimento e instrucciones de uso. Un equipo para determinar la unión de un compuesto de prueba, por ejemplo, adquirido de una muestra biológica o de una colección química, puede comprender un compuesto control, un compuesto marcado y un método para separar el compuesto marcado libre del compuesto marcado unido. Pueden usarse pruebas de diagnóstico con matrices biológicas tales como células vivas, extractos y lisados de células, células fijadas, cultivos de células, fluidos corporales o muestras forenses. Existen varios formatos de prueba, tales como radioinmunoensayos (RIA), ELISA y laboratorio intra-chip (véase patentes de E.U.A. No. 6,176,962 y 6,517,234). El método puede comprender además poner en contacto una muestra de un sujeto control, sujeto normal, o tejido o fluido normal del sujeto de prueba, con la composición de unión. Además, el método puede comprender además comparar la unión específica de la composición del sujeto de prueba con la unión específica de la composición del sujeto normal, sujeto control o tejido o fluido normal del sujeto de prueba. La expresión o actividad de una muestra de prueba o sujeto de prueba puede compararse con la de una muestra control o sujeto control. Una muestra control puede comprender, por ejemplo, una muestra de tejido no afectado o no inflamado en un paciente que sufre de un trastorno inmune. La expresión o actividad de un sujeto control o muestra control puede proveerse como un valor predeterminado, por ejemplo, adquirido de un grupo estadísticamente adecuado de sujetos control.

VII. Usos de diagnóstico; composiciones terapéuticas; métodos La presente invención provee métodos para el tratamiento y diagnóstico de cicatrización, cicatrización inadecuada, cicatrización de heridas y cicatrización de heridas inadecuada, por ejemplo, de la piel. Se proveen métodos para mejorar la cicatrización normal de la herida, por ejemplo, mejorando el índice de cicatrización, y para tratar cicatrización inadecuada de la herida, por ejemplo, heridas caracterizadas por úlceras o exceso de fibrosis. Además, la invención provee métodos para tratar y prevenir infecciones relacionadas con heridas. Puede llevarse a cabo terapia génica de trastornos de la piel usando una variedad de métodos. Los vehículos de suministro son bien conocidos en la técnica; véase, por ejemplo, Boulikas (1998) Gene Therapy and Molecular Biology, Vol. 1 , Gene Therapy Press, Palo Alto, CA; Jolly, et al. (1994) Cáncer Gene Therapy 1 : 51-64; Kimura, et al. (1994) Human Gene Therapy 5: 845-852; y Kaplitt, et al. (1994) Nal Genetics 6:148-153. Para preparar composiciones farmacéuticas o estériles que incluyen una citocina o un agonista de pequeña molécula, la entidad se mezcla con un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable el cual es de preferencia inerte. La preparación de dichas composiciones farmacéuticas se conoce en la técnica; véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences y U.S. Pharmacopeia: National Formulary, Mack Publishing Company, Easton, PA (1984). Las citocinas se administran normalmente parenteralmente, de preferencia intravenosamente. Puesto que dichas proteínas o péptidos pueden ser inmunógenos, se prefiere administrarlos lentamente, ya sea mediante un equipo de administración IV convencional o a partir de un depósito subcutáneo, por ejemplo, como es descrito por Tomasi, eí al, patente de E.U.A. No. 4,732,863. Pueden aplicarse medios para reducir al mínimo reacciones inmunológicas. Las entidades de pequeñas moléculas pueden ser oralmente activas. Para el tratamiento de trastornos de la piel, la presente invención puede administrarse también tópicamente; véase, por ejemplo, Gilman, et al. (eds.) (1990) Goodman y GHman's: The Pharmacological Bases of Therapeutics, 8a. ed., Pergamon Press; y Remington's Pharmaceutical Sciences, decimoséptima edición (1990), ack Publishing Co., Easton, Penn. Pueden administrarse ingredientes terapéuticos parenterales en vehículos acuosos tales como agua, solución salina o vehículos regulados en su pH con o sin varios aditivos y/o agentes de dilución. En forma alternativa, puede prepararse una suspensión, tal como una suspensión de zinc, que incluya al péptido. Dicha suspensión puede ser útil para inyección subcutánea (SQ) o intramuscular (IM); véase, por ejemplo, Avis, ef al. (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medlcations 2a. ed., Dekker, NY; Lieberman, ef al. (eds. 1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets 2a. ed., Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds. 1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems Dekker, NY; Fodor, et al. (1991 ) Science 251 : 767-773, Coligan (ed.) Current Protocols in Immunology; Hood, et al. Irnmunology Benjamin/Cummings; Paul (ed.) Fundamental Immunology; Academic Press; Parce, et al. (1989) Science 246: 243-247; Owicki, et al. (1990) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 87: 4007-4011; y Blundell y Johnson (1976) Protein Crystallography, Academic Press, New York. La selección de un régimen de administración para un ingrediente terapéutico depende de varios factores, que incluyen el suero o la tasa de renovación del tejido de la entidad, el nivel de síntomas, la inmunogenicidad de la entidad, y la accesibilidad de las células objetivo, hora de administración, absorción a través de capas epiteliales, etc. De preferencia, un régimen de administración aumenta al máximo la cantidad de ingrediente terapéutico suministrado al paciente consistente con un nivel aceptable de efectos secundarios. Por consiguiente, la cantidad de ingrediente biológico suministrado depende en parte de la entidad particular y la severidad de la condición que se esté tratando. Una guía para seleccionar dosis adecuadas de citocina o pequeñas moléculas, se determina usando metodologías estándar. La determinación de la dosis adecuada es hecha por el médico clínico, por ejemplo, usando parámetros o factores conocidos o que se supone en la técnica afectan el tratamiento o que se predice afectan el tratamiento. En general, la dosis comienza con una cantidad un poco menor que la dosis óptima, y se incrementa después en pequeños incrementos hasta que se logre el efecto deseado u óptimo respecto a algún efecto secundario negativo. Medidas de diagnóstico importantes incluyen aquellas de síntomas, por ejemplo, la inflamación o el nivel de citocinas inflamatorias producidas. De preferencia, un material biológico que se use se derivará de la misma especie que el animal seleccionado para tratamiento, reduciendo al mínimo de esta manera una respuesta humoral al reactivo. Los anticuerpos, fragmentos de anticuerpo y citocinas pueden proveerse mediante infusión continua, o mediante dosis a intervalos de, por ejemplo, un día, una semana, o 1 a 7 veces por semana. Las dosis pueden proveerse intravenosamente, subcutáneamente, tópicamente, oralmente, nasalmente, rectalmente, intramuscularmente, intracerebralmente, o mediante inhalación. Un protocolo de dosis preferido, es uno que incluya la dosis máxima o frecuencia de dosis que evite efectos secundarios no deseables significativos. Una dosis semanal total es en general de por lo menos 0.05 µ9/?¾ de peso corporal, más generalmente de por lo menos 0.2 µ9/? 9, muy generalmente de por lo menos 0.5 µg/kg, típicamente de por lo menos 1 9 ? 9, más típicamente de por lo menos 10 g kg, muy típicamente de por lo menos 100 µ9/?¾, de preferencia de por lo menos 0.2 mg/kg, más preferiblemente de por lo menos 1.0 mg/kg, muy preferiblemente de por lo menos 2.0 mg/kg, óptimamente de por lo menos 10 mg/kg, más óptimamente de por lo menos 25 mg/kg, y muy óptimamente de por lo menos 50 mg/kg; véase, por ejemplo, Yang, et al. (2003) New Engl. J. Med. 349: 427-434; Herold, et al. (2002) New Engl. J. Med. 346: 1692-1698; Liu, et al. (1999) J. Neurol. Neurosurg. Psych. 67: 451-456; y Portieiji, et al. (2003) Cáncer Immunol. Immunother. 521 : 133-144. La dosis deseada de una pequeña molécula terapéutica, por ejemplo, un péptido mimético, producto natural o compuesto químico orgánico, es casi la misma que para un anticuerpo o polipéptido, sobre una base en moles/kg. La presente invención provee también la administración de materiales biológicos en combinación con terapias conocidas, por ejemplo, esteroides, en particular glucocorticoides, los cuales alivian los síntomas, por ejemplo, asociados con inflamación, o antibióticos o antiinfecciosos. Las dosificaciones diarias para glucocorticoides variarán de por lo menos aproximadamente 1 mg, en general por lo menos aproximadamente 2 mg, y de preferencia por lo menos aproximadamente 5 mg por día. En general, la dosificación será menor de aproximadamente 100 mg, típicamente menor de aproximadamente 50 mg, de preferencia menor de aproximadamente 20 mg, y más preferiblemente de por lo menos aproximadamente 10 mg por día. En general, las escalas serán de por lo menos aproximadamente 1 mg a aproximadamente 100 mg, de preferencia de aproximadamente 2 mg a 50 mg por día. Se conocen también combinaciones de dosis adecuadas con antibióticos, antiinfecciosos o antiinflamatorios. La presente invención provee agonistas y antagonistas de IL-23 para modular genes relacionados con cicatrización, por ejemplo, cicatrización de heridas. Se proveen también métodos para el diagnóstico de cicatrización, por ejemplo, que incluyen la detección de la expresión o cambios en la expresión de genes modulados por IL-23 y productos génicos. Estos genes y productos génicos incluyen, por ejemplo, óxido nítrico sintasa 2 (NOS2), lactoferrina, IL-19, DEC-205, CD50 (ICAM-2), IL-25, FNTSF7 (CD27L), proteína básica eosinofílica, y otros. La invención provee un método para modular la expresión de MMP-7, por ejemplo, para el tratamiento de cicatrización de heridas. La proteólisis de la matriz es un distintivo de inflamación. La matrilisina, una metaloproteasa, se usa en la reparación de heridas (véase, por ejemplo, Parks, eí al. (2001 ) Chest 120: 36S-41S; y Wilson, eí al. (1999) Science 286: 13-1 17). La presente invención provee métodos para modular actividades y proteínas relacionadas con neutrófilos, tales como quimioatrayentes de neutrófilos y proteínas y metabolitos expresados por neutrófilos. La IL-23 estimula la expresión de IL-17 que, a su vez, estimula la producción de quimiocinas que atraen a neutrófilos. La expresión o actividad incrementada de respuesta de los neutrófilos, lactoferrina, IL-17, IL-6 y óxido nítrico, se encuentran en muchas condiciones inflamatorias, y puede desempeñar una función en la modulación de la cicatrización de heridas (véase, por ejemplo, Tsokos, et al. (2002) Virchows Aren. 441 : 494-499; Linden (2001 ) Int. Arch. Allergy Immunol. 126: 179-184; Sheppard (2002) Chest 121 : 21S-25S; Redington (2000) Monaldi Arch. Chest Dis. 55: 317-323; y Vignola, eí al. (2001 ) Curr. Allergy Asthma Rep. 1 : 108-1 15). Se proveen métodos para modular la expresión de la lactoferrina, una proteína producida por los neutrófilos (véase, por ejemplo, Boyton, eí al. (2002) Brit. Medical Bul!. 61 : 1-12; Singh, eí al. (2002) Nature 417: 552-555; y Gómez, eí al. (2002) Infecí. Immun. 70: 7050-7053). Se proveen métodos para modular la expresión de elastasa de neutrófilos, por ejemplo, para modular la cicatrización de heridas (véase, por ejemplo, Tkalcevic, eí ai. (2000) Immunity 12: 201-210; Aprikyan, eí al. (2001 ) Curr. Opinión ImmunoÁ 13: 535-538; Tremblay, eí al. (2003) Curr. Opin.

Investig. Drugs 4: 556-565; Lee, eí al. (2001) Curr. Opinión Crit. Care 7: 1-7; y Shapiro (2002) Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 26: 266-268). Se proveen también métodos para modular atrayentes de neutrófilos para promover la cicatrización de heridas, por ejemplo, IL-17, óxido nítrico y GRO-alfa. La IL-17 modula el reclutamiento de neutrófilos (véase, por ejemplo, Ye, eí al. (2001 ) J Exp. Med. 194: 519-527; e Ye, et al. (2001 ) Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 25: 335-340). El óxido nítrico, sintetizado por la óxido nítrico sintasa, puede promover la cicatrización de heridas, por ejemplo, atrayendo monocitos y neutrófilos hacia la herida; véase, por ejemplo, Schwentker, et al. (2002) Nitric Oxide 7: 1-10; y acMicking, eí al. (1997) Annu. Rev. Immunol. 15: 323-350. CXCL-1 (conocida también como GRO-alfa) promueve la cicatrización de heridas, por ejemplo, atrayendo neutrófilos hacia las heridas, y estimulando la proliferación de queratinocitos y la angiogénesis (véase, por ejemplo, Gillitzer, et al. (2001) J. Leukoc. Biol. 69: 513-521; y Li y Thomhill (2000) Cytokine 12: 1409-1413). La IL-6 promueve la cicatrización de lesiones, por ejemplo, heridas de la piel; véase, por ejemplo, Gallucci, et al. (2001 ) J. Interferon Cytokine Res. 21 : 603-609; Sugawara, eí al. (2001 ) Cytokine 15: 328-336; Erdag, eí al. (2002) Ann. Surg. 235: 1 13-124; Nadeau, eí al. (2002) Microbes Infect. 4: 1379-1387; Imanishi, eí al. (2000) Prog. Retín. Eye Res. 19: 113-129; y Gregory, eí al. (1998) J. Immunol. 160: 6056-6061. El ¡nterferón-gamma (IFNgamma) media la cicatrización adecuada de las heridas, por ejemplo, modulando el contenido de actina y colágena, la capacidad contráctil, y la formación de la cicatriz; véase, por ejemplo, Moulin, eí al. (1998) Exp. Cell Res. 238: 283-293; Ahdieh, eí al. (2001 ) Am. J. Physiol. Cell Physiol. 281 : C2029-C2038; Comelissen, et al. (2000) J. Dent. Res. 79: 1782-1788; Shtrichman, eí al. (2001 ) Curr. Opin. Microbiol. 4: 251-259; Ikeda, eí al. (2002) Cytokine Growth Factor Rev. 13: 95-109; y Rottenberg, eí al. (2002) Curr. Opin. Immunol. 14: 444-451). La producción de IFNgamma es estimulada por CD27 (conocido también como FNTRSF7). CD27 estimula también la proliferación celular, y está implicado en la activación y el desarrollo de células T, y en la producción de anticuerpos dependiente de células T, que incluye producción de IgE, por células B (véase, por ejemplo, Takeda, eí al. (2000) J. Immunol. 164: 1741-1745; Nagumo, eí al. (1998) J. Immunol. 161 : 6496-6502; Tomiyama, eí al. (2002) J. Immunol. 168: 5538-5550; y Busse y Lemanske (2001 ) New Engl. J. Med. 344: 350-362). MUC5ac realiza muchas funciones biológicas, que incluyen cicatrización de heridas; véase, por ejemplo, Dohrman, eí al. (1998) Biochim. Biophys. Acta 1406: 251-259; Rose, eí al. (2000) J. Aerosol. Med. 13: 245-261 ; Rogers (2000) Monaldi Arch. Chest Dis. 55: 324-332; y Enss, eí al. (2000) Inflamm. Res. 49:162-169. El amplio alcance de esta invención se entiende mejor con relación a los siguientes ejemplos, los cuales no se pretende que limiten las invenciones a las modalidades específicas.

EJEMPLOS I. Métodos Generales Se describen o se hace referencia a métodos estándar de bioquímica y biología molecular, por ejemplo, en Maniatis, et al. (1982) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Coid Spring Harbor Press, Coid Spring Harbor, NY; Sambrook y Russell (2001) Molecular Cloning, 3a. ed., Coid Spring Harbor Laboratory Press, Coid Spring Harbor, NY; Wu (1993) Recombinant DNA, Vol. 217, Academic Press, San Diego, CA; Innis, ef al. (eds.) ( 990) PCR Protocole: A Guide to Methods and Applications, Academic Press, N.Y.. Métodos estándar se encuentran también en Ausubel, eí al. (2001 ) Current Protocols in Molecular Biology, Vols.1-4, John Wiley and Sons, Inc. New York, NY, que describen la clonación en células bacterianas y mutagénesis de ADN (vol. 1 ), clonación en células de mamífero y levaduras (vol. 2), glucoconjugados y expresión de proteínas (vol. 3), y bioinformática (vol. 4). Se describen métodos para producir proteínas de fusión. Véase, por ejemplo, Invitrogen (2002) Catalogue, Carlsbad, CA; Amersham Pharmacia Biotech (2002) Catalogue, Piscataway, NJ; Liu, et al. (2001) Curr. Protein Pept. Sci. 2: 107-121 ; y Graddis, ef al. (2002) Curr. Pharm. Biotechnol. 3: 285-297. Se describen métodos estándar de histología (Carson (1997) Histotechnology: A Selfl-lnstructional Text, 2a. ed., Am. Soc. Clin. Pathol. Press, Chicago, IL; y Bancroft y Gamble (eds.) (2002) Theory and Practice of Histological Techniques, 5a. ed., W. B. Saunders Co., Filadelfia, PA).

Están disponibles métodos para citometría de flujo, que incluyen distribución de células activada por fluorescencia (FACS); véase, por ejemplo, Owens, et al. (1994) Flow Cytometry Principies for Clínical Laboratory Practice, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ; Givan (2001 ) Flow Cytometry, 2a. ed.; Wiley-Liss, Hoboken, NJ; y Shapiro (2003) Practica! Flow Cytometry, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ. Se describen métodos estándar de histología del sistema inmune; véase, por ejemplo, Muller-Harmelink (ed.) (1986) Human Thymus: Histopatology and Pathology, Springer Verlag, New York, NY; Hiatt, et al. (2000) Color Atlas of Histology, Lippincott, Williams, and Wilkins, Filadelfia, P.A; y Louis, eí al. (2002) Basic Histology: Text and Atlas, McGraw-Hill, New York, NY. Se describen métodos para la producción y modificación de anticuerpos, por ejemplo, en Coligan, eí al. (2001) Current Protocols in Immunology, Vol. 1 , John Wiley and Sons, Inc., New York; Harlow y Lañe (1999) Using Antibodies, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY); Harlow and Lañe (1988) Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; y Einhauer, et al. (2001 ) J. Biochem. Biophys. Methods 49: 455-465. Se describen métodos para diseño y transfección de adenovirus, por ejemplo, en células o mamíferos (véase Hurst, eí al. (2002) New Engl. J. Med. 169: 443-453; Danthinne e Imperiale (2000) Gene Ther. 7: 1707-1714; y Carlisle (2002) Curr. Op. Mol. Ther. 4: 306-312).

Se describen métodos para la purificación de proteínas, tales como inmunoprecipitación, cromatografía de columna, electroforesis, enfoque isoeléctrico, centrifugación y cristalización (véase Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 1 , John Wiley and Sons, Inc., New York). Se describe análisis químico, modificación química, modificación de post-traducción y glucosilación de proteínas. Véase, por ejemplo, Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 2, John Wiley and Sons, Inc., New York; Walker (ed.) (2002) Protein Protocols Handbook, Humana Press, Towota, NJ; y Lundblad (1995) Techniques in Protein Modifícation, CRC Press, Boca Ratón, FL. Se describen técnicas para caracterizar interacciones de unión (véase Coligan, et al. (2001 ) Current Protocols in Immunology, Vol. 4, John Wiley and Sons, Inc., New York; Parker, et al. (2000) J. Biomol. Screen. 5: 77-88; Karlsson, et al. (1991) J. Immuno/. Methods 145: 229-240; Neri, et al. (1997) Nal Biotechnol. 15: 1271-1275; Johnson, eí al. (1991 ) Biotechniques 11 : 620-627; Friguet, eí al. (1985) J. Immunol. Methods 77: 305-319; Hubbie (1997) Immunol. Today 18: 305-306; y Shen, et al. (2001) J. Biol. Chem. 276: 47311-47319). Están disponibles análisis de cómputo que usan programas para determinar, por ejemplo, fragmentos antigénicos, secuencias de señal y guía, plegamiento de proteínas y dominios funcionales; véase, por ejemplo, Vector NTI® Suite (Informax, Inc., Bethesda, MD); GCG Wisconsin Package (Accelrys, Inc., San Diego, CA) y DeCypher® (TimeLogic Corp., Crystal Bay, Nevada); y Menne, eí al. (2000) Bioinformatics 16: 741-742. Se usaron también bases de datos públicas de secuencias, por ejemplo, del GenBank y otros.

II. Generación de heridas en ratones deficientes en p19 Se inyectó en ratones deficientes en la subunidad p19 de IL-23 (ratones con expresión bloqueada de p19; ratones p19KO), 1 mg de Mycobacterium tuberculosis destruido con calor (cepa H37RA) emulsificado en adyuvante incompleto de Freund (IFA) sobre cuatro sitios del flanco dorsal. Después de 14 a 18 días post-exposición al antígeno bacteriano, los ratones p19KO mostraron pérdida de pelo significativa y lesiones en la piel. Estos resultados sugieren que en ausencia de IL-23, los ratones tienen una respuesta inmune anormal al desafío con el antígeno bacteriano que lleva a una respuesta deteriorada en la cicatrización de heridas.

III. Generación de heridas por incisión y evaluación de las respuestas histológicas Se realizó generación de heridas por incisión (5 mm) sobre la piel dorsal de ratones de tipo silvestre (WT) y p19KO, según se describe (véase, por ejemplo, Cohén y Mast (1990) >4c \ ances in Understanding Trauma and Burn Injury 30: S149-S155). Dieciocho horas después de la generación de la herida por incisión lineal, muestras de piel en torno a la incisión se cosecharon y se sometieron a microscopía confocal. Se tiñeron secciones de tejido con anti IA-FITC y anti-CD11 b-APC. Los ratones p19KO mostraron reclutamiento retardado de células positivas CD11 b+ clase II del MHC, es decir, una demora en el reclutamiento de monocitos derivados de médula ósea durante el proceso de cicatrización de heridas. Se encontró que IL-23 induce reclutamiento de monocitos/macrófagos activados. Se inyectó a ratones C57BL/6 con 10 microgramos de IL-23 recombinante (rlL-23) en un sitio intradérmico dorsal. Se tiñeron muestras de piel con anti-IA-FITC y anti-CD11b-APC, y se analizaron mediante microscopía confocal. La IL-23 indujo reclutamiento de monocitos CD1 1 b+ clase II+ del MHC hacia el sitio de inyección de citocinas. Muestras de piel tratadas con PBS fueron negativas para el reclutamiento de estos monocitos. Tomados en conjunto, la respuesta de cicatrización alterada de ratones p19KO a Mycobacterium tuberculosis inyectado, así como el reclutamiento de IL-23 de monocitos/macrófagos activados, sugiere una función para la IL-23 en la respuesta de cicatrización de heridas. La IL-23 indujo también reclutamiento de monocitos/macrófagos en el tejido de granulación del lecho de la herida. Se suministraron intradérmicamente diez microgramos de rlL-23 a ocho sitios en torno a dos heridas por excisión dorsal de 6 mm de espesor total inmediatamente después de la generación de la herida. En el día 3, las dos heridas y la piel circundante fueron extirpadas, congeladas en OCT, seccionadas y teñidas con anti-CD11 b. Se realizó contratinción con hematoxilina (azul). El tejido de la herida tratado con IL-23 exhibió mayor infiltrado de monocitos/macrófagos que el control de regulador de pH 3 días después de la generación de la herida. Se encontraron resultados similares para migración de células endoteliales CD31+. Se encontró que la IL-23 recombinante aumenta la cicatrización de heridas. Se suministraron intradérmicamente diez microgramos de rlL-23 a ocho sitios en torno a heridas por excisión de 6 mm de espesor total sobre los dorsos de ratones Balb/c de tipo silvestre competentes a la cicatrización inmediatamente después de la generación de la herida. En el día 3 después de la generación de la herida, se extirparon las dos heridas por excisión más la piel circundante adicional. Las heridas fueron fijadas en formaldehído, incluidas en parafina y teñidas con hematoxilina y eosina. Se evaluaron los portaobjetos histológicos para la profundidad del tejido de granulación. Los ratones tratados con IL-23 exhibieron un mayor espesor de la capa de tejido de granulación en comparación con ratones tratados con control de regulador de pH. El incremento en la capa de tejido de granulación es imperativo para la cicatrización de heridas de etapa tardía (véase, por ejemplo, Schaffer y Nanney, citado anteriormente). Se obtuvieron resultados similares a 3, 6 y 10 días después de la generación de la herida. Se usó el mismo procedimiento para determinar si la IL-23 aumenta la reepitelización normal que ocurre en la cicatrización de heridas. Los ratones tratados con IL-23 exhibieron capas más gruesas de queratinocitos que los ratones control de regulador de pH.

IV. Cicatrización de heridas por incisión y evaluación de la resistencia a la ruptura Se afeitó la piel de ratones C57B1/6NT machos de doce semanas, y se removió el pelo de la misma del dorso usando un depilatorio (Nair®, Church and Dwight Co., Princeton, NJ). Se crearon dos heridas por incisión de 0.5 cm a aproximadamente 4 cm abajo del cuello y 1 cm lejos de la línea media, usando tijeras quirúrgicas. Cada ratón recibió cuatro inyecciones intradérmicas de 20 microlitros con solución salina o mlL-23 (10 microgramos por ratón) alrededor de la periferia de cada herida, para abarcar la longitud completa de la incisión sobre ambos lados. Cada herida se cerró usando un adhesivo médico (Mastisol®, Ferndale Labs., Ferndale, MI) y aposito transparente (OpSite 3000®, Smith and Nephew, Largo, FL). Tres días después, se anestesió a los ratones con un coctel de cetamina/xilazina, y se analizaron las heridas ¡n vivo usando un caracterizador biomecánico de tejidos (BTC-2000, SRLI Technologies, Nashville, TN), de acuerdo a las instrucciones del fabricante. El BTC-2000 usa un láser objetivo de alta resolución y vacío para medir la deformación de la piel sobre una escala de presión negativa y tiempo. Se aplicó presión negativa a una velocidad de 10 mm de Hg/segundo hasta que ocurriera ruptura de la herida. Se analizaron los datos graficando la deformación de la piel como una función de la presión negativa, para dar: 1 ) la rigidez de la herida cicatrizante (presión negativa en mm de Hg requerida para deformar el tejido), y 2) la resistencia total de la herida cicatrizante (es decir, presión negativa en mm de Hg requerida para romper la herida). Pruebas que comparan controles tratados con solución salina con experimentos tratados con mll_-23, demostraron que se requirió 46% más de presión negativa para romper heridas tratadas con mlL-23 (195.6 mm de Hg), que para romper heridas tratadas con solución salina (134.1 mm de Hg). Además, la herida cicatrizante después de tratamiento con mlL-23 (262.7 mm de Hg/mm), fue más rígida en comparación con controles tratados con solución salina (198.4 mm de Hg/mm). Se contempla que la administración de un agonista de IL-23 resulta en un incremento deseable en rigidez (o reducción en relajación) de la herida cicatrizada, más allá de lo cual ocurre un incremento no deseable en rigidez (o reducción no deseable en relajación). Por consiguiente, se provee un antagonista de IL-23 para reducir cualquier rigidez no deseable (o reducción no deseada en relajación) de una herida naturalmente cicatrizante o una herida tratada con agonista de IL-23. En forma alternativa, por ejemplo, se contempla que un agonista de IL-23 resulta en una disminución en rigidez no deseable, por ejemplo, debida a fibrosis excesiva. Por consiguiente, se provee un agonista de IL-23 para reducir cualquier rigidez no deseable.

V. El tratamiento con IL-23 aumenta el tejido de granulación La respuesta de cicatrización de la herida en el modelo de excisión del dorso de ratón, es mediada por la combinación de formación incrementada de tejido de granulación, reepitelización y contracción de la herida. Una fase de la contracción de la herida en este modelo ocurre muy tempranamente, y favorece en forma significativa el cierre general de la herida. Para confirmar que las actividades de promoción de la cicatrización de la herida por IL-23 se observaron también en un modelo de ratón que no tuvo un aspecto de contracción de la herida temprano prominente a la respuesta de cicatrización, se eligió el modelo de excisión de la cabeza del ratón. Se suministraron intradérmicamente 10 microgramos de IL-23 recombinante a 4 sitios en torno a una herida por excisión de 3 mm de espesor total sobre la corona de la cabeza de ratones Balb/c inmediatamente después de la generación de la herida. En el día 3 después de la generación de la herida, se extirparon la herida y la piel circundante. Las heridas fueron fijadas en formaldehído, incluidas en parafina y teñidas con hematoxilina y eosina (H/E). Se evaluaron los portaobjetos histológicos a partir del centro de la herida para la profundidad del tejido de granulación. Los datos en el día 3 después de la generación de la herida, indican que la actividad incrementada del tejido de granulación que resulta del tratamiento con IL-23, se observó antes del inicio de la contracción de etapa tardía, y por lo tanto es independiente de la contracción de la herida de fase temprana. Nótese que una fase posterior de contracción de la herida ocurre también en este modelo, pero esto ocurre sólo después de 4 a 6 días.

VI. Terapia génica Se suministra IL-23 al sitio de una herida cutánea usando tecnología de terapia génica. El suministro terapéutico a la piel se logra mediante métodos ex vivo o in vivo (véase, por ejemplo, Khavari (1997) Mol. Med. Today 3: 533-538 y Khavari, et al. (2002) J. Int. Med. 252: 1-10). Se hicieron preparaciones adenovirales recombinantes mediante técnicas convencionales; véase, por ejemplo, Srivastava, en el documento WO 93/09239, Samulski ef al. (1989) J. Vlrol. 63: 3822-3828; Mendelson eí al. (1988) Virol. 166: 154-165; y Flotte et al. (1993) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90: 10613-10617). Números crecientes de partículas adenovirales que codifican para IL-23 hipercina de ratón o proteína fluorescente verde (GFP) o diluyente de solución salina, se suministraron intradérmicamente a 8 sitios en torno a dos heridas por excisión de 6 mm de espesor total sobre los dorsos de ratones Balb/c inmediatamente después de la generación de la herida. En el día 3 después de la generación de la herida, se extirparon las dos heridas y la piel circundante. Las heridas fueron fijadas en formaldehído, incluidas en parafina y teñidas con hematoxilina y eosina (H/E). Se evaluaron los portaobjetos histológicos a partir del centro de la herida para la profundidad del tejido de granulación. El suministro de mlL-23 hipercina mediante este método, dio como resultado una respuesta incrementada de cicatrización de la herida en comparación con el vehículo solo.

VIL Expresión génica con tratamiento con mlL-23 hipercina Se crearon heridas por excisión sobre ios dorsos de ratones C57B16/NT. Las heridas fueron tratadas con 10 microgramos de mlL-23 hipercina o control de solución salina mediante inyección intradérmica (i.d.) alrededor de la periferia de la herida. Se cosecharon las heridas en el día 1 y en el día 3 después de la generación de la herida. Se obtuvieron muestras de piel distales al sitio lesionado como controles "no lesionados". Se llevó a cabo análisis mediante PCR de tiempo real Taqman® (Applied Biosystems, Foster City, CA) en las muestras de tejido. Los datos de expresión fueron respecto a expresión de ubiquitina, en donde la expresión de ubiquitina se ajustó a uno (1.0). Los datos de expresión se compararon entonces de acuerdo a los pares indicados de series de datos. Se examinó la expresión con y sin tratamiento con IL-23 hipercina, en ausencia de generación de la herida (cuadro 1 ), y con y sin IL-23 hipercina sin generación de la herida (cuadro 2). Se trataron ratones C57B16/NT con IL-23 hipercina o solución salina, seguido de determinación de la expresión del gen indicado mediante análisis por PCR de tiempo real Taqman® (cuadro 1 ). Se inyectó a cada ratón intradérmicamente, en el dorso, solución salina o 10 microgramos de IL-23 hipercina. Se tomaron muestras de tejido, y se extrajeron 1 , 3 ó 7 días después de la inyección, en donde las muestras de las tres fechas se agruparon y se usaron entonces para análisis Taqman®. Se muestra la relación de la expresión génica con y sin tratamiento con IL-23 hipercina (cuadro 1 ). La IL-23 hipercina provocó un incremento en la expresión, de dos veces o más, de 15 de los 157 genes puestos a prueba. Estas incluyeron IL-6 (33 veces), IL- 9 (32 veces) y CXCL-1 (GRO-alfa) (11 veces) (cuadro 1 ).

CUADRO 1 Relación de fexpresión génica con IL-231/fexpresión génica con solución salina!. Se adquirieron datos del control [solución salina] y datos experimentales (IL-23) sin generación de herida Se muestran datos de expresión del día 1 (1 día después de la generación de la herida) y del día 3 (3 días después de la generación de la herida) (cuadro 2). La IL-23 con generación de herida estimuló incrementos en expresión sobre la encontrada con generación de herida sólo para muchos genes asociados con cicatrización o respuesta a neutrófilos, incluyendo IL-17, óxido nítrico sintasa, lactoferrina y metaloproteasas de matriz (cuadro 2).

CUADRO 2 Relación de rexpresión énica con IL-23, con heridal/rexpresión génica con solución salina, con herida! Las tendencias dependientes de IL-23 en la expresión génica en común con dos cepas de ratones (ratones C57B1/6NT; ratones Balb/c), fueron las siguientes: se seleccionó un panel de 158 genes para determinar cuáles son regulados por el tratamiento con IL-23 durante la cicatrización de heridas. Sólo cinco de estos genes fueron sobrerregulados por cuando menos dos veces (cuadro 3), y sólo tres de los genes fueron subregulados por dos veces o más (cuadro 3). Se ha mostrado que la IL-17 regula genes importantes para reconstrucción en otros sistemas de tejidos. La IL-17 potencia la expresión de MMP-3 y TIMP- y la secreción estimulada por FNT e IL-1 en miofibroblastos subepiteliales colónicos humanos (Bamba, et al., (2003) J Gastroenterol. 38: 548-554). En osteoblastos humanos, la IL-17 sinergiza con FNT-alfa, TGF-beta e IFN-gamma para estimular la producción de MMP-13 (Rifas y Arackal (2003) Arthritis Rheum. 48: 993-1001 ). Dado que la IL-17 sola tiene efectos mínimos en estos modelos, la función principal de la IL-17 puede ser amplificar la respuesta de reconstrucción. La IL-19 se encuentra en la piel, y ha sido asociada con psoriasis (Ghoreschik, ef al. (2003) Nature Meó. 9:40-46; Gallagher, et al., (2000) Genes Immunity 1 : 422-450). La lactoferrina es una proteína de unión a hierro presente en gránulos de neutrófilos maduros con muchas funciones biológicas que incluyen propiedades antimicrobianas, y puede de esta manera brindar protección contra la infección bacteriana en la herida (Masson, ef al., ( 969) J. Exp. Med. 130: 643-658; Farnaud y Evans (2003) Mol Immunol. 40: 395-405). La ICAM-2 es expresada constitutivamente en todas las células endoteliales vasculares, sugiriendo que la IL-23 puede promover la angiogénesis en la herida (Yasuda, eí al., (2002) Am. J. Physiol. 282: C917-C925; Sakurai, eí al. (2003) Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 44: 2743-2749; Moromizato, et al., (2000) ?/t?. J. Pathol. 157: 1277-1281 ). DEC-205 es un marcador de células dendríticas implicado en la maduración de células dendríticas (Anjuere, et al. (1999) Blood 93: 590-598; Bonifax, et al. (2002) J. Exp. Med. 196: 1627-1638). De esta manera, la IL-23 de la presente invención puede promover vigilancia inmune en la piel. Considerado en conjunto, el tratamiento con IL-23 en heridas puede tener efectos pleiotrópicos que aceleran la respuesta de cicatrización de heridas. El tratamiento con IL-23 redujo también la expresión de 3 genes en el ambiente de la herida, es decir, IL-25, TNSF7, y proteína básica eosinofílica. La infusión de IL-25 en ratones, indujo la expresión génica de IL-4, IL-5 e IL-13 asociada con la patología de reconstrucción del pulmón (Fort, et al. (2001) Immunity 15: 985-995). De esta manera, la IL-23 puede modular o reducir el exceso de fibrosis en la cicatrización de heridas. La metodología relevante fue la siguiente: se afeitó y se removió con Nair, pelo del dorso de ratones C57B1/6NT machos de 9 semanas y de ratones Balb/c machos de 8 semanas. Se crearon dos heridas por excisión de 6 mm de diámetro casi 3.5 cm abajo de la nuca, y 0.6 cm a partir de la línea media usando una herramienta de biopsia por trepanación. A cada ratón se le dio mlL-23 hipercina (10 microgramos por ratón) o solución salina en cuatro inyecciones ¡ntradérmicas de 20 microlitros, alrededor de la periferia de cada herida. Se aplicó un aposito transparente, y se dejó que los ratones se recuperaran y sanaran. Un día después, se sacrificó a los ratones, y las heridas se separaron con un margen de aproximadamente 1.5 mm. Además, se obtuvo una muestra de piel no herida de cada ratón. Todas las muestras se congelaron instantáneamente en nitrógeno líquido, y se almacenaron a -80 grados Celsius para más procesamiento. Se extrajo ARN de cada muestra, se reunió en grupos apropiados, y se analizó mediante PCR de tiempo real para expresión de un panel de 158 genes candidatos.

CUADRO 3 Modulación de la expresión qénica, por cuando menos 2 veces, en respuesta a 1L-23 en ratones C57B1/6NT y ratones Balb/c VIII. Anticuerpos anti-IL-23R agonistas Se prepararon anticuerpos anti-IL-23R de ratón contra la IL-23R de humano, usando métodos estándar. Los anticuerpos anti-IL-23R resultantes se seleccionaron para actividad agonista usando células transfectadas con hlL-23R e hlL-12Rbeta1 , en donde la actividad agonista se determinó mediante incrementos en la proliferación celular. La proliferación de células Ba/F3 transfectante se midió mediante métodos colorimétricos usando azul Alamar, un colorante indicador de crecimiento. Se midió la proliferación celular después de cultivo en medio del Roswell Park Memorial Instltute (RPMI)-1640, suero de ternera fetal (10%), 2-mercaptoetanol a 0.05 mM, glutamina, penicilina, estreptomicina e interleucina-3 (mlL-3) de ratón (10 ng/ml). Las células se incubaron en presencia de una concentración de anticuerpos, en donde las concentraciones variaron de 0.01 a 10,000 ng/ml. La proliferación celular de la línea de referencia, fue aquella en ausencia de anticuerpo. La proliferación máxima con los anticuerpos puestos a prueba, ocurrió en la escala de concentración de 1000 a 10,000 ng/ml. La "estimulación detectable", por ejemplo, de actividad celular, proliferación celular o una actividad predeterminada se refiere, por ejemplo, a una comparación de la proliferación en presencia y ausencia, por ejemplo, de un agonista de IL-23. "Detectable" puede ser una función del contexto, por ejemplo, de los reactivos, instrumentación o sistema biológico. Los anticuerpos que estimularon la expresión incluyeron TC48-8B10.D5 (cadena ligera, SEQ ID NOs: 9 y 10; cadena pesada, SEQ ID NOs: 11 y 12), TC48-1H3.G5, TC48-2C9A5 y TC48-5B12.C9. De estos anticuerpos, TC48-8B10.D5 mostró la actividad agonista más grande, en términos de concentración de anticuerpo, provocando la mitad del incremento máximo en proliferación celular. Una proliferación celular de 100% significa incremento máximo en la proliferación celular en respuesta al anticuerpo, en curvas de titulación (cuadro 4). El punto de digestión predicho para la secuencia de señal de la cadena ligera de TC48-8B10.D5, está entre los aminoácidos 22 (Ala) y 23 (Glu) de SEQ ID NO: 10, mientras que el punto de digestión predicho para la cadena pesada está entre los aminoácidos 19 (Ser) y 20 (Gln) de SEQ ID NO: 12.

CUADRO 4 Proliferación de células Ba/F3-2.2lo en respuesta a anticuerpos agonistas La invención provee un anticuerpo de murino agonista que une específicamente la IL-23R de humano, TC48-8B10.D5. Este anticuerpo comprende un ácido nucleico (SEQ ID NO: 9) y polipéptido (SEQ ID NO: 10) de la cadena ligera, y el ácido nucleico (SEQ ID NO: 1 1 ) y polipéptido (SEQ ID NO: 12) de la cadena pesada de TC48-8B10.D5. Se proveen también los ácidos nucleicos y polipéptidos que comprenden las regiones hipervariables de SEQ ID NOs: 9-12. Las regiones hipervariables de la cadena ligera son: ITSTDIDDDMI (aminoácidos 46-56); EGNTLRP (aminoácidos 72-78); y LQSDNMPLT (aminoácidos 111-119), de SEQ ID NO: 10). Las regiones hipervariables de la cadena pesada son: GYTFTSYWMN (aminoácidos 45-54); MIDPLDSETHYNQMFKD (aminoácidos 69-87); y GDNYYA DY (aminoácidos 118-126), de SEQ ID NO: 12.

IX. Anticuerpos de IL-23R anti-ratón de rata, y cicatrización de heridas Anticuerpos contra IL-23R de ratón fueron enfrentados en ratas usando métodos estándar, dando como resultado los anticuerpos denominados 5C10, 29A5 y 10E11 (cuadro 5). Se preparó una IL-23 hipercina que comprendía una subunidad p19 y subunidad p40 enlazadas covalentemente mediante un enlazador elástico (InvivoGen, San Diego, CA), y se denominó como "IL-23 elasticina". Los anticuerpos de IL-23R anti-ratón, IL-23 elasticina (control), anticuerpo 36E10 (control de isotipos) y solución salina (control), se pusieron a prueba en una prueba de cicatrización de heridas. Los resultados demostraron una estimulación de la cicatrización de heridas con la IL-23 elasticina, y menor estimulación con el anticuerpo 5C10 (cuadro 5): CUADRO 5 Cicatrización de heridas; espesor del tejido de granulación (micrómetros) resumen las secuencias en el listado de secuencias (cuadro CUADRO 6 Secuencias en el listado de secuencias SEQ ID NO: Acido nucleico o polipéptido 1 Acido nucleico de IL-19 de ratón 2 Polipéptido de IL-19 de ratón 3 Acido nucleico de IL-19 de humano 4 Polipéptido de IL-19 de humano 5 Acido nucleico de hipercina de ratón 6 Polipéptido de hipercina de ratón 7 Acido nucleico de hipercina de humano 8 Polipéptido de hipercina de humano 9 Acido nucleico de la cadena ligera del anticuerpo agonista anti-humano de ratón 10 Polipéptido de la cadena ligera del anticuerpo agonista anti-humano de ratón 1 1 Acido nucleico de la cadena pesada del anticuerpo agonista anti-humano de ratón 12 Polipéptido de la cadena pesada del anticuerpo agonista anti-humano de ratón Todas las citas de la presente se incorporan en la presente como referencia, al mismo grado como si se indicara que cada publicación o solicitud de patente individual fuese incorporada específicamente e individualmente en la presente como referencia. Muchas modificaciones y variaciones de esta invención pueden hacerse sin apartarse de su espíritu y alcance, como será evidente para los expertos en la técnica. Las modalidades específicas descritas en la presente se ofrecen sólo a manera de ejemplo, y la invención será limitada por los términos de las reivindicaciones anexas, junto con el alcance completo de equivalentes a los cuales dichas reivindicaciones se intitulan; y la invención no será limitada por las modalidades específicas que se han presentado en la presente a manera de ejemplo.

LISTADO DE SECUENCIAS Bowman, Edward P. Chan, Jason R. Moore, Kevin Nguyen, Nhung Churakova, Tatyana Chen, Shi-Juan Cua, Daniel J. Usos de citocinas de mamífero: reactivos relacionados DX01578K 12 Patentln versión 3.2 1 1203 ADN Mus musculus CDS (113)..(700) péptido maduro (176)..(700) 1 cgcttagaag tcggactaca gagttagact cagaaccaaa ggaggtggat agggggtcca 60 caggcctggt gcagatcaca gagccagcca gatctgagaa gcagggaaca ag atg ctg 118 Met Leu -20 gat tgc aga gca gta ata atg cta tgg ctg ttg ccc tgg gtc act cag 166 Asp Cys Arg Ala Val lie Met Leu Trp Leu Leu Pro Trp Val Thr Gln -15 -10 -5 ggc ctg gct gtg cct agg agt age agt ect gac tgg gct cag tgc cag 214 Gly Leu Ala Val Pro Arg Ser Ser Ser Pro Asp Trp Ala Gln Cys Gln -1 1 5 10 cag etc tet cgg aat etc tgc atg cta gee tgg aac gca cat gca cea 262 Gln Leu Ser Arg Asn Leu Cys Met Leu Ala Trp Asn Ala His Ala Pro 15 20 25 gcg gga cat atg aat cta cta aga gaa gaa gag gat gaa gag act aaa 310 Ala Gly His Met Asn Leu Leu Arg Glu Glu Glu Asp Glu Glu Thr Lys 30 35 40 45 aat aat gtg ccc cgt ate cag tgt gaa gat ggt tgt gac cea caá gga 358 Asn Asn Val Pro Arg lie Gln Cys Glu Asp Gly Cys Asp Pro Gln Gly 50 55 60 etc aag gac aac age cag ttc tgc ttg caá agg ate cgc caá ggt ctg 406 Leu Lys Asp Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg lie Arg Gln Gly Leu 65 70 75 gct ttt tat aag cae ctg ctt gac tet gac ate ttc aaa ggg gag ect 454 Ala Phe Tyr Lys His Leu Leu Asp Ser Asp lie Phe Lys Gly Glu Pro 80 85 90 gct cta etc ect gat age ccc atg gag caá ctt cae acc tec cta cta 502 Ala Leu Leu Pro Asp Ser Pro Met Glu Gln Leu His Thr Ser Leu Leu 95 100 105 gga etc age caá etc etc cag cea gag gat cae ccc cgg gag acc caá 550 Gly Leu Ser Gln Leu Leu Gln Pro Glu Asp His Pro Arg Glu Thr Gln 110 115 120 125 cag atg ccc age ctg agt tet agt cag cag tgg cag cgc ccc ctt etc 598 Gln Met Pro Ser Leu Ser Ser Ser Gln Gln Trp Gln Arg Pro Leu Leu 130 135 140 cgt tec aag ate ctt cga age etc cag gee ttt ttg gee ata gct gee 646 Arg Ser Lys lie Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Leu Ala lie Ala Ala 145 150 155 cgg gtc ttt gee cae gga gca gca act ctg act gag ccc tía gtg cea 694 Arg Val Phe Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Thr Glu Pro Leu Val Pro 160 165 170 acá gct taaggatgcc caggttccca tggctaccat gataagacta atetatcage 750 Thr Ala 175 ccagacatct accagttaat taaeccatta ggacttgtgc tgttcttgtt tcgtttgttt 810 tgcgtgaagg gcaaggacac cattattaaa gagaaaagaa acaaacccca gagcaggcag 870 ctggctagag aaaggagctg gagaagaaga ataaagtctc gagcccttgg ccttggaagc 930 gggcaagcag ctgcgtggcc tgaggggaag ggggcggtgg catcgagaaa ctgtgagaaa 990 acccagagca tcagaaaaag tgagcccagg ctttggccat tatctgtaag aaaaacaaga 1050 aaaggggaac attatacttt cctgggtggc tcagggaaat gtgcagatgc acagtactcc 1110 agacagcagc tctgtacctg cctgctctgt ccctcagttc taacagaatc tagtcactaa 1170 gaactaacag gactaccaat acgaactgac aaa 1203 2 196 PRT Mas musculus Met Leu Asp Cys Arg Ala Val lie Met Leu Trp Leu Leu Pro Trp Val -20 -15 -10 Thr Gln Gly Leu Ala Val Pro Arg Ser Ser Ser Pro Asp Trp Ala Gln -5 -1 1 5 10 Cys Gln Gln Leu Ser Arg Asn Leu Cys Met Leu Ala Trp Asn Ala His 15 20 25 Ala Pro Ala Gly His Met Asn Leu Leu Arg Glu Glu Glu Asp Glu Glu 30 35 40 Thr Lys Asn Asn Val Pro Arg lie Gln Cys Glu Asp Gly Cys Asp Pro 45 50 55 Gln Gly Leu Lys Asp Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg lie Arg Gln 60 65 70 75 Gly Leu Ala Phe Tyr Lys His Leu Leu Asp Ser Asp He Phe Lys Gly 80 85 90 Glu Pro Ala Leu Leu Pro Asp Ser Pro Met Glu Gln Leu His Thr Ser 95 100 105 Leu Leu Gly Leu Ser Gln Leu Leu Gln Pro Glu Asp His Pro Arg Glu 110 115 120 Thr Gln Gln Met Pro Ser Leu Ser Ser Ser Gln Gln Trp Gln Arg Pro 125 130 135 Leu Leu Arg Ser Lys lie Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Leu Ala lie 140 145 150 155 Ala Ala Arg Val Phe Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Thr Glu Pro Leu 160 165 170 Val Pro Thr Ala 175 3 570 ADN Homo sapiens CDS (1)..(567) péptido maduro (64)..(567) 3 atg ctg ggg age aga gct gta atg ctg ctg ttg ctg ctg ecc tgg acá 48 Met Leu Gly Ser Arg Ala Val Met Leu Leu Leu Leu Leu Pro Trp Thr -20 -15 -10 gct cag ggc aga gct gtg ect ggg ggc age age ect gee tgg act cag 96 Ala Gln Gly Arg Ala Val Pro Gly Gly Ser Ser Pro Ala Trp Thr Gln -5 -1 1 5 10 tgc cag cag ctt tea cag aag etc tgc acá ctg gee tgg agt gca cat 144 Cys Gln Gln Leu Ser Gln Lys Leu Cys Thr Leu Ala Trp Ser Ala His 15 20 25 cea cta gtg gga cae atg gat cta aga gaa gag gga gat gaa gag act 192 Pro Leu Val Gly His Met Asp Leu Arg Glu Glu Gly Asp Glu Glu Thr 30 35 40 acá aat gat gtt ecc cat ate cag tgt gga gat ggc tgt gac ecc caá 240 Thr Asn Asp Val Pro His lie Gln Cys Gly Asp Gly Cys Asp Pro Gln 45 50 55 gga ctc agg gac aac agt cag ttc tgc ttg caá agg ate cac cag ggt 288 Gly Leu Arg Asp Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg lie His Gln Gly 60 65 70 75 ctg att ttt tat gag aag ctg cta gga tcg gat att ttc acá ggg gag 336 Leu lie Phe Tyr Glu Lys Leu Leu Gly Ser Asp lie Phe Thr Gly Glu 80 85 90 cct tct ctg ctc cct gat age ect gtg gcg cag ctt cat gee tec cta 384 Pro Ser Leu Leu Pro Asp Ser Pro Val Ala Gln Leu His Ala Ser Leu 95 100 105 ctg ggc ctc age caá ctc ctg cag cct gag ggt cac cac tgg gag act 432 Leu Gly Leu Ser Gln Leu Leu Gln Pro Glu Gly His His Trp Glu Thr 110 115 120 cag cag att cea age ctc agt ecc age cag cea tgg cag cgt ctc ctt 480 Gln Gln lie Pro Ser Leu Ser Pro Ser Gln Pro Trp Gln Arg Leu Leu 125 130 135 ctc cgc ttc aaa ate ctt cgc age ctc cag gee ttt gtg gct gta gee 528 Leu Arg Phe Lys lie Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Val Ala Val Ala 140 145 150 155 gee cgg gtc ttt gee cat gga gca gca acc ctg agt ecc taa 570 Ala Arg Val Phe Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Ser Pro 160 165 4 189 PRT Homo sapiens 4 Met Leu Gly Ser Arg Ala Val Met Leu Leu Leu Leu Leu Pro Trp Thr -20 -15 -10 Ala Gln Gly Arg Ala Val Pro Gly Gly Ser Ser Pro Ala Trp Thr Gln -5 -1 1 5 10 Cys Gln Gln Leu Ser Gln Lys Leu Cys Thr Leu Ala Trp Ser Ala His 15 20 25 Pro Leu Val Gly His Met Asp Leu Arg Glu Glu Gly Asp Glu Glu Thr 30 35 40 Thr Asn Asp Val Pro His lie Gln Cys Gly Asp Gly Cys Asp Pro Gln 45 50 55 Gly Leu Arg Asp Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg lie His Gln Gly 60 65 70 75 Leu lie Phe Tyr Glu Lys Leu Leu Gly Ser Asp lie Phe Thr Gly Glu 80 85 90 Pro Ser Leu Leu Pro Asp Ser Pro Val Ala Gln Leu His Ala Ser Leu 95 100 105 Leu Gly Leu Ser Gln Leu Leu Gln Pro Glu Gly His His Trp Glu Thr 110 115 120 Gln Gln lie Pro Ser Leu Ser Pro Ser Gln Pro Trp Gln Arg Leu Leu 125 130 135 Leu Arg Phe Lys lie Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Val Ala Val Ala 140 145 150 155 Ala Arg Val Phe Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Ser Pro 160 165 5 1610 ADN Mus miiscuhis CDS (7)..(1599) 5 agatct atg tct gca ctt ctg ate cía gct ctt gtt gga gct gca gtt 48 Met Ser Ala Leu Leu lie Leu Ala Leu Val Gly Ala Ala Val 1 5 10 gct gac tac aaa gac gat gac gac aag ctt atg tgg gag ctg gag aaa 96 Ala Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Leu Met Trp Glu Leu Glu Lys 15 20 25 30 gac gtt tat gtt gta gag gtg gac tgg act ccc gat gcc cct gga gaa 144 Asp Val Tyr Val Val Glu Val Asp Trp Thr Pro Asp Ala Pro Gly Glu 35 40 45 ac gtg aac ctc acc tgt gac acg cct gaa gaa gat gac ate acc tgg 192 Thr Val Asn Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Asp He Thr Trp 50 55 60 acc tea gac cag aga cat gga gtc ata ggc tet gga aag acc ctg acc 240 Thr Ser Asp Gln Arg His Gly Val lie Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr 65 70 75 ate act gtc aaa gag ttt ctr gat gct ggc cag tac acc tgc cae aaa 288 lie Thr Val Lys Glu Phe Xaa Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys 80 85 90 gga ggc gag act ctg age cae tea cat ctg ctg ctc cae aag aag gaa 336 Gly Gly Glu Thr Leu Ser His Ser His Leu Leu Leu His Lys Lys Glu 95 100 105 110 aat gga att tgg tec act gaa att tta aaa aat ttc aaa aac aag act 384 Asn Gly lie Trp Ser Thr Glu lie Leu Lys Asn Phe Lys Asn Lys Thr 115 120 125 ttc ctg aag tgt gaa gca cea aat tac tec gga cgg ttc acg tgc tea 432 Phe Leu Lys Cys Glu Ala Pro Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Ser 130 135 140 tgg ctg gtg caá aga aac atg gac ttg aag ttc aac ate aag age agt 480 Trp Leu Val Gln Arg Asn Met Asp Leu Lys Phe Asn lie Lys Ser Ser 145 150 155 age agt tec cct gac tet cgg gca gtg acá tgt gga atg gcg tet ctg 528 Ser Ser Ser Pro Asp Ser Arg Ala Val Thr Cys Gly Met Ala Ser Leu 160 165 170 tet gca gag aag gtc acá ctg gac caá agg gac tat gag aag tat tea 576 Ser Ala Glu Lys Val Thr Leu Asp Gln Arg Asp Tyr Glu Lys Tyr Ser 175 180 185 190 gtg tec tgc cag gag gat gtc acc tgc cea act gct gag gag acc ctg 624 Val Ser Cys Gln Glu Asp Val Thr Cys Pro Thr Ala Glu Glu Thr Leu 195 200 205 ccc att gaa ctg gcg ttg gaa gca cgg cag cag aat aaa tat gag aac 672 Pro lie Glu Leu Ala Leu Glu Ala Arg Gln Gln Asn Lys Tyr Glu Asn 210 215 220 tac age acc age ttc ttc ate agg gac ate ate aaa cea gac ceg ccc 720 Tyr Ser Thr Ser Phe Phe lie Arg Asp lie lie Lys Pro Asp Pro Pro 225 230 235 aag aac ttg cag atg aag cct ttg aag aac tea cag gtg gag gtc agc 768 Lys Asn Leu Gln Met Lys Pro Leu Lys Asn Ser Gln Val Glu Val Ser 240 245 250 tgg gag tac cct gac tcc tgg age act ecc cat tec tac ttc tec etc 816 Trp Glu Tyr Pro Asp Ser Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu 255 260 265 270 aag ttc ttt gtt cga ate cag egc aag aaa gaa aag atg aag gag acá 864 Lys Phe Phe Val Arg lie Gln Arg Lys Lys Glu Lys Met Lys Glu Thr 275 280 285 gag gag ggg tgt aac cag aaa ggt gcg ttc etc gta gag aag acá tet 912 Glu Glu Gly Cys Asn Gln Lys Gly Ala Phe Leu Val Glu Lys Thr Ser 290 295 300 acc gaa gtc caá tgc aaa ggc ggg aat gtc tgc gtg caá gct cag gat 960 Thr Glu Val Gln Cys Lys Gly Gly Asn Val Cys Val Gln Ala Gln Asp 305 310 315 egc tat tac aat tcc ter tgc age aag tgg gca tgt gtt ecc tgc agg 1008 Arg Tyr Tyr Asn Ser Xaa Cys Ser Lys Trp Ala Cys Val Pro Cys Arg 320 325 330 gtc cga tcc tet aga ggt gga tea ggc tcc gga ggt agt gga ggt ggg 1056 Val Arg Ser Ser Arg Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly 335 340 345 350 gga tet aag ctt ctg gct gtg cct agg agt age agt cct gac tgg gct 1104 Gly Ser Lys Leu Leu Ala Val Pro Arg Ser Ser Ser Pro Asp Trp Ala 355 360 365 cag tgc cag cag etc tet cgg aat etc tgc atg cta gee tgg aac gca 1152 Gln Cys Gln Gln Leu Ser Arg Asn Leu Cys Met Leu Ala Trp Asn Ala 370 375 380 cat gca cea gcg gga cat atg aat cta cta aga gaa gaa gag gat gaa 1200 His Ala Pro Ala Gly His Met Asn Leu Leu Arg Glu Glu Glu Asp Glu 385 390 395 gag act aaa aat aat gtg ecc cgt ate cag tgt gaa gat ggt tgt gac 1248 Glu Thr Lys Asn Asn Val Pro Arg lie Gln Cys Glu Asp Gly Cys Asp 400 405 410 cea caá gga etc aag gac aac age cag ttc tgc ttg caá agg ate egc 1296 Pro Gln Gly Leu Lys Asp Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg lie Arg 415 420 425 430 caá ggt ctg gtt ttt tat aag cae ctg ctt gac tet gac ate ttc aaa 1344 Gln Gly Leu Val Phe Tyr Lys His Leu Leu Asp Ser Asp lie Phe Lys 435 440 445 ggg gag cct gct cta ctc cct gat age ccc atg gag caa ctt cac acc 1392 Gly Glu Pro Ala Leu Leu Pro Asp Ser Pro Met Glu Gln Leu His Thr 450 455 460 tcc cta cta gga ctc age caa ctc ctc cag cea gag gat cac ccc cgg 1440 Ser Leu Leu Gly Leu Ser Gln Leu Leu Gln Pro Glu Asp His Pro Arg 465 470 475 gag acc caa cag atg ccc age ctg agt tet agt cag cag tgg cag cgc 1488 Glu Thr Gln Gln Met Pro Ser Leu Ser Ser Ser Gln Gln Trp Gln Arg 480 485 490 ccc ctt ctc cgt tcc aag ate ctt cga age ctc cag gee ttt ttg gee 1536 Pro Leu Leu Arg Ser Lys He Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Leu Ala 495 500 505 510 ata gct gee cgg gtc ttt gee cac gga gca gca act ctg act gag ccc 1584 lie Ala Ala Arg Val Phe Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Thr Glu Pro 515 520 525 tta gtg cea acá gct taagcggccg c 1610 Leu Val Pro Thr Ala 530 6 531 PRT Mus muscu is característica diversa (85)..(85) 'Xaa' en la posición 85 representa Leu. característica diversa (324)..(324) 'Xaa' en la posición 324 representa Ser. 6 Met Ser Ala Leu Leu lie Leu Ala Leu Val Gly Ala Ala Val Ala Asp 1 5 10 15 Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Leu Met Trp Glu Leu Glu Lys Asp Val 20 25 30 Tyr Val Val Glu Val Asp Trp Thr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Thr Val 35 40 45 Asn Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Asp lie Thr Trp Thr Ser 50 55 60 Asp Gln Arg His Gly Val lie Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr lie Thr 65 70 75 80 Val Lys Glu Phe Xaa Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly 85 90 95 Glu Thr Leu Ser His Ser His Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asn Gly 100 105 110 lie Trp Ser Thr Glu lie Leu Lys Asn Phe Lys Asn Lys Thr Phe Leu 115 120 125 Lys Cys Glu Ala Pro Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys Ser Trp Leu 130 135 140 Val Gln Arg Asn Met Asp Leu Lys Phe Asn lie Lys Ser Ser Ser Ser 145 150 155 160 Ser Pro Asp Ser Arg Ala Val Thr Cys Gly Met Ala Ser Leu Ser Ala 165 170 175 Glu Lys Val Thr Leu Asp Gln Arg Asp Tyr Glu Lys Tyr Ser Val Ser 180 185 190 Cys Gln Glu Asp Val Thr Cys Pro Thr Ala Glu Glu Thr Leu Pro lie 195 200 205 Glu Leu Ala Leu Glu Ala Arg Gln Gln Asn Lys Tyr Glu Asn Tyr Ser 210 215 220 Thr Ser Phe Phe lie Arg Asp He lie Lys Pro Asp Pro Pro Lys Asn 225 230 235 240 Leu Gln Met Lys Pro Leu Lys Asn Ser Gln Val Glu Val Ser Trp Glu 245 250 255 Tyr Pro Asp Ser Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser Leu Lys Phe 260 265 270 Phe Val Arg lie Gln Arg Lys Lys Glu Lys Met Lys Glu Thr Glu Glu 275 280 285 Gly Cys Asn Gln Lys Gly Ala Phe Leu Val Glu Lys Thr Ser Thr Glu 290 295 300 Val Gln Cys Lys Gly Gly Asn Val Cys Val Gln Ala Gln Asp Arg Tyr 305 310 315 320 Tyr Asn Ser Xaa Cys Ser Lys Trp Ala Cys Val Pro Cys Arg Val Arg 325 330 335 Ser Ser Arg Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 340 345 350 Lys Leu Leu Ala Val Pro Arg Ser Ser Ser Pro Asp Trp Ala Gln Cys 355 360 365 Gln Gln Leu Ser Arg Asn Leu Cys Met Leu Ala Trp Asn Ala His Ala 370 375 380 Pro Ala Gly His Met Asn Leu Leu Arg Glu Glu Glu Asp Glu Glu Thr 385 390 395 400 Lys Asn Asn Val Pro Arg lie Gln Cys Glu Asp Gly Cys Asp Pro Gln 405 410 415 Gly Leu Lys Asp Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg lie Arg Gln Gly 420 425 430 Leu Val Phe Tyr Lys His Leu Leu Asp Ser Asp lie Phe Lys Gly Glu 435 440 445 Pro Ala Leu Leu Pro Asp Ser Pro Met Glu Gln Leu His Thr Ser Leu 450 455 460 Leu Gly Leu Ser Gln Leu Leu Gln Pro Glu Asp His Pro Arg Glu Thr 465 470 475 480 Gln Gln Met Pro Ser Leu Ser Ser Ser Gln Gln Trp Gln Arg Pro Leu 485 490 495 Leu Arg Ser Lys lie Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Leu Ala lie Ala 500 505 510 Ala Arg Val Phe Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Thr Glu Pro Leu Val 515 520 525 Pro Thr Ala 530 7 1580 ADN Homo sapiens CDS (7)..(1569) 7 agatct atg tct gca ctt ctg ate cta gct ctt gtt gga gct gca gtt 48 Met Ser Ala Leu Leu lie Leu Ala Leu Val Gly Ala Ala Val 1 5 10 gct gac tac aaa gac gat gac gac aag ctt ata tgg gaa ctg aag aaa 96 Ala Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Leu lie Trp Glu Leu Lys Lys 15 20 25 30 gat gtt tat gtc gta gaa ttg gat tgg tat ceg gat gee ect gga gaa 144 Asp Val Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu 35 40 45 atg gtg gtc etc acc tgt gac acc ect gaa gaa gat ggt ate acc tgg 192 Met Val Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Gly lie Thr Trp 50 55 60 acc ttg gac cag agc agt gag gtc tta ggc tct ggc aaa acc ctg acc 240 Thr Leu Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr 65 70 75 ate caá gtc aaa gag ttt gga gat gct ggc cag tac acc tgt cae aaa 288 lie Gln Val Lys Glu Phe Gly Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys 80 85 90 gga ggc gag gtt cta age cat teg etc ctg ctg ctt cae aaa aag gaa 336 Gly Gly Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu 95 100 105 110 gat gga att tgg tec act gat att tta aag gac cag aaa gaa ecc aaa 384 Asp Gly lie Trp Ser Thr Asp He Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys 115 120 125 aat aag acc ttt cta aga tgc gag gee aag aat tat tct gga cgt ttc 432 Asn Lys Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe 130 135 140 acc tgc tgg tgg ctg acg acá ate agt act gat ttg acá ttc agt gtc 480 Thr Cys Trp Trp Leu Thr Thr lie Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val 145 150 155 aaa age age aga ggc tct tct gac ecc caá ggg gtg acg tgc gga gct 528 Lys Ser Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala 160 165 170 gct acá etc tct gca gag aga gtc aga ggg gac aac aag gag tat gag 576 Ala Thr Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu 175 180 185 190 tac tea gtg gag tgc cag gag gac agt gee tgc cea gct gct gag gag 624 Tyr Ser Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu 195 200 205 agt ctg ecc att gag gtc atg gtg gat gee gtt cae aag etc aag tat 672 Ser Leu Pro lie Glu Val Met Val Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr 210 215 220 gaa aac tac acc age age ttc ttc ate agg gac ate ate aaa ect gac 720 Glu Asn Tyr Thr Ser Ser Phe Phe lie Arg Asp lie lie Lys Pro Asp 225 230 235 cea ecc aac aac ttg cag ctg aag cea tta aag aat tct cgg cag gtg 768 Pro Pro Asn Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val 240 245 250 gag gtc age tgg gag tac ect gac acc tgg agt act cea cat tec tac 816 Glu Val Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr 255 260 265 270 ttc tcc ctg aca ttc tgc gtt cag gtc cag ggc aag agc aag aga gaa 864 Phe Ser Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu 275 280 285 aag aaa gat aga gtc ttc acc gac aag acc tea gcc acg gtc ate tgc 912 Lys Lys Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val lie Cys 290 295 300 cgc aaa aat gcc age att age gtg cgg gcc cag gac cgc tac tat age 960 Arg Lys Asn Ala Ser lie Ser Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser 305 310 315 tea tet tgg age gaa tgg gca tet gtg ecc tgc agt ggt age ggc tet 1008 Ser Ser Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser Gly Ser Gly Ser 320 325 330 tet aga ggt gga tea ggc tcc gga ggt agt gga ggt ggg gga tet aag 1056 Ser Arg Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Lys 335 340 345 350 ctt aga gct gtg ect ggg ggc age age ect gcc tgg act cag tgc cag 1104 Leu Arg Ala Val Pro Gly Gly Ser Ser Pro Ala Trp Thr Gln Cys Gln 355 360 365 cag ctt tea cag aag etc tgc aca ctg gcc tgg agt gca cat cea cta 1152 Gln Leu Ser Gln Lys Leu Cys Thr Leu Ala Trp Ser Ala His Pro Leu 370 375 380 gtg gga cae atg gat cta aga gaa gag gga gat gaa gag act aca aat 1200 Val Gly His Met Asp Leu Arg Glu Glu Gly Asp Glu Glu Thr Thr Asn 385 390 395 gat gtt ecc cat ate cag tgt gga gat ggc tgt gac ecc caá gga etc 1248 Asp Val Pro His lie Gln Cys Gly Asp Gly Cys Asp Pro Gln Gly Leu 400 405 410 agg gac aac agt cag ttc tgc ttg caá agg ate cae cag ggt ctg att 1296 Arg Asp Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg lie His Gln Gly Leu lie 415 420 425 430 ttt tat gag aag ctg cta gga teg gat att ttc aca ggg gag ect tet 1344 Phe Tyr Glu Lys Leu Leu Gly Ser Asp lie Phe Thr Gly Glu Pro Ser 435 440 445 ctg etc ect gat age ect gtg gcg cag ctt cat gcc tcc cta ctg ggc 1392 Leu Leu Pro Asp Ser Pro Val Ala Gln Leu His Ala Ser Leu Leu Gly 450 455 460 etc age caá etc ctg cag ect gag ggt cae cae tgg gag act cag cag 1440 Leu Ser Gln Leu Leu Gln Pro Glu Gly His His Trp Glu Thr Gln Gln 465 470 475 att cea age etc agt ecc age cag cea tgg cag cgt etc ctt etc cgc 1488 lie Pro Ser Leu Ser Pro Ser Gln Pro Trp Gln Arg Leu Leu Leu Arg 480 485 490 ttc aaa ate ctt cgc age etc cag gee ttt gtg gct gta gee gee cgg 1536 Phe Lys lie Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Val Ala Val Ala Ala Arg 495 500 505 510 gtc ttt gee cat gga gca gca acc ctg agt ecc taagcggccg c 1580 Val Phe Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Ser Pro 515 520 521 PRT Homo sapiens Met Ser Ala Leu Leu lie Leu Ala Leu Val Gly Ala Ala Val Ala Asp 1 5 10 15 Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Leu lie Trp Glu Leu Lys Lys Asp Val 20 25 30 Tyr Val Val Glu Leu Asp Trp Tyr Pro Asp Ala Pro Gly Glu Met Val 35 40 45 Val Leu Thr Cys Asp Thr Pro Glu Glu Asp Gly lie Thr Trp Thr Leu 50 55 60 Asp Gln Ser Ser Glu Val Leu Gly Ser Gly Lys Thr Leu Thr lie Gln 65 70 75 80 Val Lys Glu Phe Gly Asp Ala Gly Gln Tyr Thr Cys His Lys Gly Gly 85 90 95 Glu Val Leu Ser His Ser Leu Leu Leu Leu His Lys Lys Glu Asp Gly 100 105 110 lie Trp Ser Thr Asp lie Leu Lys Asp Gln Lys Glu Pro Lys Asn Lys 115 120 125 Thr Phe Leu Arg Cys Glu Ala Lys Asn Tyr Ser Gly Arg Phe Thr Cys 130 135 140 Trp Trp Leu Thr Thr lie Ser Thr Asp Leu Thr Phe Ser Val Lys Ser 145 150 155 160 Ser Arg Gly Ser Ser Asp Pro Gln Gly Val Thr Cys Gly Ala Ala Thr 165 170 175 Leu Ser Ala Glu Arg Val Arg Gly Asp Asn Lys Glu Tyr Glu Tyr Ser 180 185 190 Val Glu Cys Gln Glu Asp Ser Ala Cys Pro Ala Ala Glu Glu Ser Leu 195 200 205 Pro lie Glu Val Met Val Asp Ala Val His Lys Leu Lys Tyr Glu Asn 210 215 220 Tyr Thr Ser Ser Phe Phe lie Arg Asp lie lie Lys Pro Asp Pro Pro 225 230 235 240 Asn Asn Leu Gln Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ser Arg Gln Val Glu Val 245 250 255 Ser Trp Glu Tyr Pro Asp Thr Trp Ser Thr Pro His Ser Tyr Phe Ser 260 265 270 Leu Thr Phe Cys Val Gln Val Gln Gly Lys Ser Lys Arg Glu Lys Lys 275 280 285 Asp Arg Val Phe Thr Asp Lys Thr Ser Ala Thr Val lie Cys Arg Lys 290 295 300 Asn Ala Ser lie Ser Val Arg Ala Gln Asp Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser 305 310 315 320 Trp Ser Glu Trp Ala Ser Val Pro Cys Ser Gly Ser Gly Ser Ser Arg 325 330 335 Gly Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Lys Leu Arg 340 345 350 Ala Val Pro Gly Gly Ser Ser Pro Ala Trp Thr Gln Cys Gln Gln Leu 355 360 365 Ser Gln Lys Leu Cys Thr Leu Ala Trp Ser Ala His Pro Leu Val Gly 370 375 380 His Met Asp Leu Arg Glu Glu Gly Asp Glu Glu Thr Thr Asn Asp Val 385 390 395 400 Pro His lie Gln Cys Gly Asp Gly Cys Asp Pro Gln Gly Leu Arg Asp 405 410 415 Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg lie His Gln Gly Leu He Phe Tyr 420 425 430 Glu Lys Leu Leu Gly Ser Asp lie Phe Thr Gly Glu Pro Ser Leu Leu 435 440 445 Pro Asp Ser Pro Val Ala Gln Leu His Ala Ser Leu Leu Gly Leu Ser 450 455 460 Gln Leu Leu Gln Pro Glu Gly His His Trp Glu Thr Gln Gln lie Pro 465 470 475 480 Ser Leu Ser Pro Ser Gln Pro Trp Gln Arg Leu Leu Leu Arg Phe Lys 485 490 495 lie Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Val Ala Val Ala Ala Arg Val Phe 500 505 510 Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Ser Pro 515 520 9 711 ADN Mus musculiis 9 atgaccatgc tctcactagc tcctctcctc agccttcttc tcctctgtgt ctctgattct 60 agggcagaaa caactgtgac ccagtctcca gcatccctgt ccgtggctac aggagaaaaa 120 gtcactatca gatgcataac cagcactgat attgatgatg atatgatctg gtaccagcag 180 aagccagggg aacctcctaa gctccttatt tcagaaggca atactcttcg tcctggagtc 240 ccatcccgct tctccagcag tggctatggc acagattttg tttttacaat tgaaaacacg 300 ctctcagaag atgttgcaga ttactactgt ttgcaaagtg ataacatgcc tctcacgttc 360 ggtgctggga ccaaggtgga gctgaaacgg gctgatgctg caccaactgt atccatcttc 420 ccaccatcca tggaacagtt aacatctgga ggtgccacag tcgtgtgctt cgtgaacaac 480 ttctatccca gagacatcag tgtcaagtgg aagattgatg gcagtgaaca acgagatggt 540 gtcctggaca gtgttactga tcaggacagc aaagacagca cgtacagcat gagcagcacc 600 ctctcgttga ccaaggttga atatgaaagg cataacctct atacctgtga ggttgttcat 660 aagacatcat cctcacccgt cgtcaagagc ttcaacagga atgagtgtta g 711 10 236 PRT Mas m sculos 10 Met Thr Met Leu Ser Leu Ala Pro Leu Leu Ser Leu Leu Leu Leu Cys 1 5 10 15 Val Ser Asp Ser Arg Ala Glu Thr Thr Val Thr Gln Ser Pro Ala Ser 20 25 30 Leu Ser Val Ala Thr Gly Glu Lys Val Thr lie Arg Cys lie Thr Ser 35 40 45 Thr Asp lie Asp Asp Asp Met lie Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu 50 55 60 Pro Pro Lys Leu Leu lie Ser Glu Gly Asn Thr Leu Arg Pro Gly Val 65 70 75 80 Pro Ser Arg Phe Ser Ser Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Val Phe Thr 85 90 95 He Glu Asn Thr Leu Ser Glu Asp Val Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln 100 105 110 Ser Asp Asn Met Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Leu 115 120 125 Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser lie Phe Pro Pro Ser Met 130 135 140 Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Thr Val Val Cys Phe Val Asn Asn 145 150 155 160 Phe Tyr Pro Arg Asp lie Ser Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu 165 170 175 Gln Arg Asp Gly Val Leu Asp Ser Val Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp 180 185 190 Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Ser Leu Thr Lys Val Glu Tyr 195 200 205 Glu Arg His Asn Leu Tyr Thr Cys Glu Val Val His Lys Thr Ser Ser 210 215 220 Ser Pro Val Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 225 230 235 11 1406 ADN Mus musculus 11 atgggatgga gctgtatcat cctcttcttg gtagcaacag ctacaggtgt ccactcccag 60 gtccaactgc agcagcctgg ggctgagctg gtgaggcctg gggcttcagg gaagctgtcc 120 tgcaaggctt ctggctacac cttcaccagc tactggatga actgggtgaa gcagaggcct 180 ggacaaggcc ttgaatggat tggtatgatt gatcctttag acagtgaaac tcactataat 240 caaatgttca aggacaaggc cacattgact gtagacaaat cctccagcac agcctacatg 300 cagctcagca gcctgacatc tgaggactat gcggtctatt actgtgcaag aggggataac 360 tactatgcta tggactactg gggtcaagga acctcagtca ccgtctcctc agccaaaacg 420 acacccccat ctgtctatcc actggcccct ggatctgctg cccaaactaa ctccatggtg 480 accctgggat gcctggtcaa gggctatttc cctgagccag tgacagtgac ctggaactct 540 ggatccctgt ccagcggtgt gcacaccttc ccagctgtcc tgcagtctga cctctacact 600 ctgagcagct cagtgactgt cccctccagc acctggccca gcgagaccgt cacctgcaac 660 gttgcccacc cggccagcag caccaaggtg gacaagaaaa ttgtgcccag ggattgtggt 720 tgtaagcctt gcatatgtac agtcccagaa gtatcatctg tcttcatctt ccccccaaag 780 cccaaggatg tgctcaccat tactctgact cctaaggtca cgtgtgttgt ggtagacatc 840 agcaaggatg atcccgaggt ccagttcagc tggtttgtag atgatgtgga ggtgcacaca 900 gctcagacgc aaccccggga ggagcagttc aacagcactt tccgctcagt cagtgaactt 960 cccatcatgc accaggactg gctcaatggc aaggagttca aatgcagggt caacagtgca 1020 gctttccctg cccccatcga gaaaaccatc tccaaaacca aaggcagacc gaaggctcca 1080 caggtgtaca ccattccacc tcccaaggag cagatggcca aggataaagt cagtctgacc 1140 tgcatgataa cagacttctt ccctgaagac attactgtgg agtggcagtg gaatgggcag 1200 ccagcggaga actacaagaa cactcagccc atcatggact cagatggctc ttacttcgtc 1260 tacagcaagc tcaatgtgca gaagagcaac tgggaggcag gaaatacttt cacctgctct 1320 gtgttacatg agggcctgca caaccaccat actgagaaga gcctctccca ctctcctggt aaatgatccc agagtccagt ggcccc 12 467 PRT Mus miiscidus 12 Met Gly Trp Ser Cys lie lie Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 1 5 10 15 Val His Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Gly Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Thr Ser Tyr Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu 50 55 60 Glu Trp lie Gly Met lie Asp Pro Leu Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn 65 70 75 80 Gln Met Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Tyr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Asp Asn Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 115 120 125 Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser 130 135 140 Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val 145 150 155 160 Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 165 170 175 Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 180 185 190 Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro 195 200 205 Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro 210 215 220 Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys lie Val Pro Arg Asp Cys Gly 225 230 235 240 Cys Lys Pro Cys lie Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe lie 245 250 255 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr lie Thr Leu Thr Pro Lys 260 265 270 Val Thr Cys Val Val Val Asp lie Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln 275 280 285 Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln 290 295 300 Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu 305 310 315 320 Pro He Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg 325 330 335 Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys 340 345 350 Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr lie Pro Pro Pro 355 360 365 Lys Glu Gla Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met lie Thr 370 375 380 Asp Phe Phe Pro Glu Asp lie Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln 385 390 395 400 Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro lie Met Asp Ser Asp Gly 405 410 415 Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu 420 425 430 Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn 435 440 445 His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys Ser Gln Ser 450 455 460 Pro Val Ala 465

Claims (14)

NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES

1.- El uso de un agonista o antagonista de IL-23, para preparar un medicamento para tratar o mejorar la cicatrización en un sujeto.

2. - El uso que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el agonista o antagonista comprende: a) un polipéptido de IL-23, o un derivado o variante del mismo; b) una composición de unión derivada de un anticuerpo que se une específicamente a IL-23 o a IL-23R; o c) un ácido nucleico que codifica para un polipéptido de IL-23, o un derivado o variante del mismo.

3. - El uso que se reclama en la reivindicación 2, en donde el derivado o variante comprende una IL-23 hipercina.

4. - El uso que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el agonista comprende un complejo de: a) una secuencia madura de SEQ ID NO: 10; y b) una secuencia madura de SEQ ID NO: 12.

5. - El uso que se reclama en la reivindicación 2, en donde el ácido nucleico comprende además un vector de expresión.

6. - El uso que se reclama en la reivindicación 1 , en donde a cicatrización es: a) de una herida cutánea o de la piel; b) de una úlcera o injerto; o c) cicatrización inadecuada.

7. - El uso que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el tratamiento o mejora aumenta: a) una presión requerida para romper una herida cicatrizada o cicatrizante; b) una rigidez de una herida cicatrizada o cicatrizante; c) un índice de cicatrización de una herida; d) un espesor de la capa de granulación de una herida cicatrizada o cicatrizante; e) reclutamiento de una célula a o hacia una herida; o f) actividad antimicrobiana.

8.- El uso que se reclama en la reivindicación 7, en donde la célula es: a) una célula CD11b+ clase II+ del MHC; b) un monocito/macrófago; o c) una célula endotelial CD31 +.

9.- El uso que se reclama en la reivindicación 7, en donde el reclutamiento es en o hacia un tejido de granulación.

10.- El uso que se reclama en la reivindicación 7, en donde: a) la presión incrementada de ruptura de la herida es un incremento de aproximadamente 15% o aproximadamente 20% en la presión de ruptura de la herida; o b) la rigidez incrementada es un incremento en rigidez de aproximadamente 15% o aproximadamente 20%.

11.- El uso que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el tratamiento o mejora comprende: a) angiogénesis incrementada; o b) vigilancia inmune incrementada.

12. - El uso que se reclama en la reivindicación 1 1 , en donde: a) la angiogénesis incrementada es mediada por ICAM-1 ó 2; o b) la vigilancia inmune incrementada es mediada por células dendríticas.

13. - El uso que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el tratamiento o mejora comprende expresión incrementada de un ácido nucleico o proteína de: a) una citocina además de IL-23; b) una molécula de señalización; c) una molécula antimicrobiana; d) una proteasa o inhibidor de proteasa; o e) una molécula de la matriz extracelular.

14.- El uso que se reclama en la reivindicación 13, en donde citocina, ácido nucleico o proteína es IL-17, IL-6, IL- 9, GRO-alfa o GM-CSF. 5.- El uso que se reclama en la reivindicación 13, en donde el gen o proteína es: a) lactoferrina; b) DEC-205; c) CD50; d) óxido nítrico sintasa; o e) inhibidor secretorio de leucoproteasa; o f) CD40L. 16. - El uso que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el antagonista comprende: a) un ácido nucleico; b) un anticuerpo de bloqueo de IL-23 o IL-23R; o c) un receptor soluble derivado de una parte extracelular de IL-23R. 17. - El uso que se reclama en la reivindicación 6, en donde el ácido nucleico comprende: a) un ácido nucleico antisentido; o b) ARN de interferencia. 18.- Un agonista de IL-23 derivado del sitio de unión de un anticuerpo que se une específicamente a un receptor de IL-23. 19. - El agonista de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado además porque es: a) un anticuerpo policlonal; b) un anticuerpo monoclonal; c) un fragmento Fab, Fv o F(ab')2; d) humanizado; e) un péptido mimético; o f) marcado detectablemente. 20. - El agonista de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado además porque comprende un complejo de: a) un polipéptido de la secuencia madura de SEQ ID NO: 10; y b) un polipéptido de la secuencia madura de SEQ ID NO: 12. 21. - El agonista de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado además porque comprende un complejo de: a) dos polipéptidos de la secuencia madura de SEQ ID NO: 10; y b) dos polipéptidos de la secuencia madura de SEQ ID NO: 12. 22. - El agonista de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado además porque el contacto del agonista con una célula que expresa hlL-23R y hlL-12beta1 , da como resultado un incremento en la proliferación de la célula. 23.- Un equipo que comprende el agonista que se reclama en la reivindicación 18, y: a) un compartimento; o b) instrucciones para uso o disposición.