MÉTODO PARA TRATAR TRASTORNOS VASCULARES MEDIADOS POR EL FACTOR DE CRECIMIENTO ENDOTELIAL VASCULAR
Esta invención se relaciona al uso de ácido 2- amino-3-benzoilbencenacético (amfenac) para tratar o evitar trastornos vasculares mediados por el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) .
Antecedentes de la Invención Se ha mostrado previamente que ciertos fármacos anti-inflamatorios no esteroidales (los NSAID) pueden inhibir la formación de nuevos vasos sanguíneos (angiogénesis) en condiciones patológicas, así como filtración vascular en ciertos modelos de inflamación. La capacidad de la mayoría de los NSAID para afectar permeabilidad vascular y angiogénesis parecen asociarse con su capacidad para bloquear las enzimas ciclo-oxigenasa (COX-1 y 2) . El bloqueo de COX-1 y 2 se asocia con una disminución en mediadores inflamatorios, tales como PGE2. Además, parece que la inhibición de PGE2 resulta en expresión y producción disminuida del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) . VEGF se conoce que produce filtración vascular y angiogénesis en el ojo de modelos pre-clínicos. También, los niveles incrementados de VEGF han sido encontrados en tejidos neovasculares y fluido extracelular a partir de los ojos de pacientes con retinopatía diabética y degeneración macular relacionada con la edad. De este modo, los NSAID pueden inhibir filtración vascular y angiogénesis modulando niveles de PGE2 y sus efectos en expresión y actividad de VEGF. Esta teoría se soporta por trabajo implicando modelos de tumor animal que demuestran que la administración sistémica de inhibidores de COX-2 disminuye el PGE2 y los niveles de tejido de VEGF por lo que evita la angiogénesis inducida por tumor. En estos modelos, la actividad de VEGF y angiogénesis se restaura agregando PGE2 exógeno, durante el bloqueo de COX-2 continuo. Sin embargo, los NSAID parecen tener actividad variable en modelos de animal de neovascularización ocular (NV) , en que los inhibidores COX selectivos no parecen inhibir la neovascularización coroidal . De hecho, estos estudios han requerido en cuestión el papel de COX-1 y/o COX-2 en el desarrollo de CNV. El ácido 3 -benzoilfenilacético y ciertos de sus derivados se conoce que poseen actividad anti-inflamatoria. Las Patentes Norteamericanas Nos. 4,254,146, 4,045,576, 4,126,635, y 4,503,073, y las Solicitudes de Patente del Reino Unido Nos. 2,071,086A, 2,093,027A describen varios ácidos 3 -benzoilfenilaceticos, sales y ésteres, e hidratos de los mismos, que tienen actividad anti-inflamatoria . La Patente Norteamericana No. 4,568,695 describe alcoholes 2-amino-3 -benzoilfeniletílicos que tienen actividad anti- inflamatoria. La Patente Norteamericana No. 4,313,949 describe 2 -amino-3 -benzoilfenilacetamidas que tienen actividad anti-inflamatoria . Ciertos derivados de ácido 2 -amino-3 -benzoilbencenacético (amfenac) y ácido 2-amino-3- (4-cloro-benzoil) benzenacético han sido también evaluados por Walsh et al., J. Med Chem. , 33:2296-2304 (1990), en un intento para descubrir profármacos anti-inflamatorios no esteroidales con mínimo o ningún efecto secundario gastrointestinal en la administración oral. La Patente Norteamericana No. 4,683,242 enseña la administración transdérmica de ácidos 2-amino-3-benzoilfenilacéticos, sales y ásteres e hidratos y alcoholatos de los mismos para controlar inflamación y aliviar dolor. La Patente Norteamericana No. 4,910,225 enseña ciertos ácidos benzoilfenilacéticos para administración local para controlar inflamación oftálmica, nasal u ótica del oído. Únicamente los ácidos acéticos se describen en la patente '225; no se mencionan o enseñan esteres o amidas como agentes anti-inflamatorios para administración local a los ojos, nariz y oídos. La Patente Norteamericana No. 5,475,034 describe composiciones tópicamente administrables que contienen ciertos derivados de amida y éster del ácido 3- benzoilfenilacético , incluyendo nepafenac, útil para tratar trastornos inflamatorios oftálmicos y dolor ocular. De acuerdo a la patente 034 en la columna 15, líneas 35-39, "tal o tales trastornos incluyen, pero no se limitan a esclerosis por uveítis, episcleritis , queratitis, inflamación inducida quirúrgicamente y endoftálmitis" . La Patente Norteamericana No. 6,066,671 describe el uso tópico de ciertos derivados de amida y éster del ácido 3-benzoilfenilacético, incluyendo nepafenac, para tratar glaucoma GLC1A. En la solicitud Norteamericana No de Serie 09/929,381 comúnmente poseída, se encontró que ciertos ácidos 3-benzoilfenilacéticos y derivados son útiles para tratar trastornos relacionados con angiogenesis.
Descripción Detallada de la Invención La neovascularización de segmento posterior (NV) es la patología amenazante de visión responsable de las dos causas más comunes de adquirir ceguera en países desarrollados : degeneración macular relacionada con la edad exudativa (AMD) y retinopatía diabética proliferativa . Actualmente los únicos tratamientos aprobados para NV de segmento posterior que ocurre en ADM exudativa es fotocoagulación por láser o terapia fotodinámica con Visudyne; ambas terapias implican oclusión de vasculatura afectada que resulta en daño inducido por láser localizado en la retina. Las intervenciones quirúrgicas con vitrectomía y remoción de membrana son las únicas opciones actualmente disponibles para pacientes con retinopatía diabética prolif rativa . Ningún tratamiento estrictamente farmacológico ha sido aprobado para uso contra NV de segmento posterior. Además a los cambios en la microvasculatura retinal inducida por hiperglicemia en pacientes diabéticos que conducen a edema macular, proliferación de membranas neovasculares se asocia también con filtración vascular y edema de la retina. En donde el edema implica la mácula, empeoramientos de agudeza visual. En retinopatía diabética, el edema macular es la mayor causa de pérdida de visión. Ya que se utiliza la fotocoagulación con láser para trastornos angiogénicos para estabilizar o resolver la condición edematosa. Desafortunadamente, la fotocoagulación con láser es un procedimiento citodestructivo, que aunque evita el edema adicional desarrollarse, alterará el campo visual del ojo afectado. Una terapia farmacológica efectiva para NV de segmento posterior y edema probablemente proporcionará eficacia al paciente, por lo que evitan procedimientos quirúrgicos invasivos o daño por láser. El tratamiento efectivo de NV mejoraría la calidad de vida del paciente y la productividad dentro de la sociedad. También, los costos sociales asociados con el suministro de asistencia y cuidado de la salud al ciego podrían reducirse dramáticamente. Amfenac es un NSAID que se conocen inhibe potencialmente la actividad de enzimas COX-1 y COX-2. Inesperadamente, amfenac se encontró inhibir proliferación celular inducida por VEGF y formación de tubo por capilaridad en una forma de respuesta de dosis utilizando un ensayo celular endotelial microvascular retinal de bovino. Para nuestro conocimiento, este bloqueo en efectos de VEGF por los NSAID ocurre independientemente de la inhibición COX, es decir, la capacidad para bloquear la señal proangiogénica normalmente producida por VEGF, es única con respecto a amfenac contra otros NSAID. Esta única actividad puede ayudar a explicar, en parte los hallazgos previos que el nepafenac tópico (el profármaco de amfenac) inhibe NV coroidal en un modelo de ratón, en donde VOLTAREN® tópico y ACULAR® no tuvieron efecto. Si esta actividad antiangiogénica novedosa ocurre en hombres, amfenac (y nepafenac tópico) podrían utilizarse para tratar más efectivamente enfermedades que implican señalización por VEGF y en estados de enfermedad donde otros NSAID podrían probablemente ser menos efectivos. Los trastornos oftálmicos asociados con la sobre-regulación de VEGF que son indicaciones potenciales para amfenac (nepafenac tópico) incluiría degeneración macular relacionada con la edad exudativa, retinopatía diabética proliferativa, oclusión de vena retinal, vitreoretinopatía proliferativa, glaucoma neovascular, angiogénesis corneal, microvasculopatía retinal y edema retinal (macular) . Nuevamente, debido a que el amfenac es el metabolito activo de nepafenac, que tiene la capacidad para alcanzar el segmento posterior después de la aplicación córnea tópica en modelos pre-clínicos, es posible tratar estos trastornos oculares mediados por VEGF utilizando administración ocular tópica de nepafenac. De acuerdo a la presente invención, una cantidad terapéuticamente efectiva de un nepafenac se administra tópicamente a un ojo mientras la administración local o sistémica de amfenac se utilizará para tratar y/o evitar trastornos vasculares mediados por VEGF. Las dosis de amfenac o nepafenac utilizadas en el tratamiento o prevención de anormalidades vasculares medicadas con VEGF dependerán del tipo de anormalidad que va a evitarse o tratarse, la edad y peso corporal del paciente, y la forma de la preparación/ruta de administración. Las composiciones pretendidas para administración oftálmica normalmente contendrán nepafenac en una cantidad de aproximadamente 0.001 a aproximadamente 4.0% (p/v) , preferiblemente de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 0.5% (p/v), con 1-2 gotas una vez a varias veces al día. Así mismo, las dosis representativas para otras formas de preparaciones son aproximadamente 1 - 100 mg de amfenac/día/adulto para inyecciones o administración local y aproximadamente 10 - 1000 mg de amfenac/adulto para preparaciones orales, cada una administrada una vez a varias veces al día. Los agentes terapéuticos adicionales pueden agregarse para suplementarse el uso de nepafenac o amfenac . Los siguientes ejemplos se presentan para ilustrar varios aspectos de la presente invención, pero no se pretenden para limitar el alcance de la invención en ningún respecto. Los porcentajes se expresan en base de peso/volumen.
Ejemplo 1: Las siguientes formulaciones son representativas de las composiciones tópicas útiles en la presente invención.
Formulación 1 Nepafenac 0.01-0.5% Polisorbato 80 0.01% Cloruro de Benzalconio 0.01% + 10% en exceso EDTA disódico 0.1% Fosfato de Sodio Monobásico 0.03% Fosfato de Sodio Dibásico 0.1% Cloruro de Sodio c.s. 290-300 mOsm/Kg Ajuste de pH con NaOH y/o HCl pH 4.2-7.4 Agua c.s. 100% Formulación 2 Nepafenac 0.01-0.5% Hidroxipropilmetilcelulosa 0.5% Polisorbato 80 0.01% Cloruro de Benzalconio 0.01% + 5% en exceso EDTA disódico 0.01% Fosfato de Sodio Dibasico 0.2% Cloruro de Sodio es. 290-300 mOsm/Kg Ajuste de pH con NaOH y/o HCl pH 4.2-7.4 Agua c.s. 100%
Formulación 3 Nepafenac 0.1+6% en exceso Carbopol 97 P 0.08% Tiloxapol 0.01% Glicerina 2.4% EDTA disódico 0.01% Cloruro de Benzalconio 0.01% Ajuste de pH con NaOH y/o HCl pH 7.5 ± 0.2 Agua C.S. 100%
Ejemplo 2 Efecto de AL06295A (Amfenac) en Proliferación de BRMEC (Célula Endotelial Microvascular Retinal de Bovino) Se midió la proliferación de BRMEC inducida por VEGF utilizando un ensayo de MTT modificado, se colocaron en placas a 3 x 103 BRMEC en una matriz de fibronectina/ácido hialurónico en placas de 96 pozos (Corning) . El medio de crecimiento se agregó durante dos días, seguido por medio libre de suero (SFM) durante la noche, luego por medio de prueba conteniendo 0 o 25 ng/ml de VEGF, en 100 µ? de SMF. Después de 24 horas a 37°C/5% de C02, 25 µ? de MTT de bromuro de (3- ( , 5-dimetiltiazol-2-il) -2 , 5-difeniltetrazolio) se agregó a cada pozo e incubó durante 4 horas . Se agregaron entonces 100 µ? de regulador de lisis (20% de SDS en 50:50 de D F :H20 + 20% de ácido acético y 0.05% de HC1) a cada pozo, y las placas se incubaron durante la noche a 37°C y leyeron (Dispositivos Moleculares SPECTRAmax 190; Sunnyvale, CA) a 570 nm. Para experimentos que utilizan AL06295, se combinó 25 ng/ml de VEGF con el compuesto a 0.1, 0.3, 1.0 o 3 µ?. Los resultados muestran que 1 y 3 µ? de dosis de amfenac reducen significativamente proliferación de VRMEC inducido por VEGF, véase la Figura 1.
Ejemplo 3 Efecto de AL06295A (Amfenac) en formación de Tubo BRMEC Una mezcla de 8 vol de Vitrogen 100 (Cohesión; Palo Alto, CA) , 1 vol. de 0.2 N de NaOH, y 1 vol. de 10 x de un medio RPMI-1640 conteniendo 5 //g/ml de fibronectina y 5 µg/ml de laminina se preparó y 400 µ? se agregó a cada pozo de una placa de 24 pozos. Después de la incubación durante 3 horas a 37°C para solidificar el gel, se agregaron 104 BRMEC a cada pozo e incubaron en medio de crecimiento durante 3 días . Luego el medio se aspiró cuidadosamente y se colocó en placas 200 µ? de la solución de gel en la parte superior de las células y se incubó a 37°C durante 1 hora. Después de la adición del medio de crecimiento durante 24 horas, se agregaron 2 mi de medio de prueba que contiene un medio libre de suero (SF) más VEGF o medio SF más VEGF y AL06295A a cada pozo. Los geles se evaluaron 24 horas después. Para análisis cuantitativo, seis campos por grupo de tratamiento se eligieron de las áreas que contienen tubos; siete pozos se utilizaron para cada tratamiento. Las longitudes de los tubos se midió en imágenes digitalizadas, y los datos se expresan en la Figura 2 como la longitud total por campo de vista en µp?. Los resultados muestran que todas las dosis de amfenac inhiben significativa y potencialmente la formación de tubo de capilaridad inducida por VEGF en las BRMEC. Esta invención ha sido descrita para referencia a ciertas modalidades preferidas; sin embargo, se debe entender que puede implicarse en otras formas específicas o variaciones de las mismas sin apartarse de sus características especiales o esenciales. Las modalidades descritas anteriormente se consideran por lo tanto ser ilustrativas en todos los aspectos y no restrictivas, al alcance de la invención que se indica por las reivindicaciones anexas en lugar de por la descripción anterior .