MXPA04007807A

MXPA04007807A - Uso de extractos que contienen fitoestrogeno que modulan selectivamente el receptor de estrogeno beta.

Info

Publication number: MXPA04007807A
Application number: MXPA04007807A
Authority: MX
Inventors: Christoffel Volker
Original assignee: Bionorica Ag
Priority date: 2002-02-15
Filing date: 2003-02-10
Publication date: 2004-10-15
Also published as: EP1474119B1; EA200401078A1; DE10206390A1; EA008708B1; WO2003068199A1; SI1474119T1; DE50309950D1; CN1728989A; JP2005526032A; AU2003208827A1; US20050220900A1; EP1474119A1; ATE397443T1; PL374669A1; ES2305443T3; UA87959C2

Abstract

La invencion se refiere al uso de extractos que contienen fitoestrogeno, los cuales exhiben un efecto modulador selectivo del receptor de estrogeno beta sin producir una reaccion uterotropica. En el tratamiento de cuadros clinicos y condiciones patofisiologicas que se seleccionan del grupo que abarca: obesidad y posibles influencias del sindrome metabolico, en particular hipertonia, arteriosclerosis, infartos al corazon, hiperandrogenemia, problemas de incontinencia de la menopausia; bochornos de la menopausia que se asocian al hiperestimulo del generador del pulso hormonal del hipotalamo que libera la gonadotropina; trastorno de la sintesis de la hormona esteroide, en particular la sintesis de progesterona del cuerpo luteo humano como una causa de la insuficiencia luteinica; enfermedad de Alzheimer que se asocia al incremento de la expresion del receptor de estrogeno beta en las neuronas del hipocampo.

Description

USO DE EXTRACTOS QUE CONTIENEN FITOESTROGENO QUE MODULAN SELECTIVAMENTE EL RECEPTOR DE ESTROGENO BETA DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere al uso de extractos que contienen fitoestrógeno, los cuales exhiben un efecto modulador selectivo del receptor de estrógeno beta sin producir una reacción uterotrópica, de conformidad con el preámbulo de la reivindicación 1. Los extractos de Vitex Agnus Castus (sauzgatillo o pimiento loco, agnocasto) se encuentran desde hace tiempo en uso para tratar anomalías del periodo menstrual, la mastodinia (mastalgia) , el síndrome premenstrual, los trastornos del sangrado menstrual (a consecuencia de una insuficiencia primaria o secundaria de cuerpos lúteos) , pero, sin embargo, estos extractos no se han utilizado para la terapia de sustitución de estrógenos. En la menopausia se produce una disminución del nivel de estradiol a consecuencia de la extinción de la función ovárica. Esto resulta en un debilitamiento de los procesos de proliferación y conduce en el hipotálamo a un incremento de la actividad del generador del pulso GnRH. (El generador del pulso hormonal liberador de gonadotropina es una especie de cadenciómetro en el hipotálamo, y proporciona el ritmo de la descarga pulsátil de la LH (hormona REF. : 157981 luteinizante) , - siendo que los esteroides influyen en la amplitud y la frecuencia) . La descarga estimulada de LH resultante conduce en la mujer que se encuentra en el climaterio a oleadas de calor ascendientes que se perciben molestas, lo que se conoce como "bochornos". En la ausencia de niveles de estradiol suficientemente altos en la sangre predomina en el tejido óseo la actividad de los osteoclastos y, por consiguiente, el catabolismo de la masa ósea, al cual se suma un mayor riesgo de fractura del esqueleto. Al mismo tiempo existe a largo plazo el riesgo de la formación de plaqueta en el sistema vascular y, por consiguiente, un mayor riesgo de infartos. Son desfavorables los efectos de tipo estrogénico en el útero, la vagina, el tejido mamario y el hígado. Sin embargo, en este aspecto es indeseable que hasta ahora no existe en el estado de la técnica un fitofármaco que se puede usar para una profilaxis o terapia organoselectiva en el caso de deficiencia de estrógeno. Por lo tanto, a partir de este estado de la técnica es el objeto de la presente invención proporcionar medicamentos de origen vegetal con actividad de tipo estrogénico que tienen un efecto organoselectivo sin o con sólo poco efecto sobre el útero. La solución de este problema tiene lugar mediante un uso de conformidad con la reivindicación 1.

Con los extractos que contienen fitoestrógeno de la presente invención, en particular de Vitex Agnus castus, preferiblemente de sus frutas, resulta por primera vez posible obtener - sin efecto urotrópico - un efecto ER-beta selectivo. Mediante los extractos de Vitex Agnus castus utilizados es posible, mediante la modulación del ER-beta (receptor de estradiol beta) , tratar los siguientes cuadros clínicos y estados patofisiológicos : * gordura y, debido a ella, la posible influencia del síndrome metabólico, en particular hipertono, arteriosclerosis , infarto al corazón, hiperandrogenemia ; * trastornos de la continencia en la menopausia; * oleadas de calor en la menopausia, que se asocian con el hiperestímulo del generador del pulso hormonal liberador de gonadotropina; * trastorno de la síntesis de hormona esteroide, en particular la síntesis de progesterona del cuerpo lúteo humano como consecuencia de una insuficiencia lútea; * enfermedad de Alzheimer que se asocia con un incremento de la expresión del receptor de estrógeno beta en las neuronas del hipocampo. Los extractos para el uso de conformidad con la invención se pueden utilizar en la forma farmacéutica convencional, por ejemplo, en forma de gotas, comprimidos, tabletas con película, cápsulas, granulados, grageas, supositorios, pomadas, cremas o lo similar. Para el uso de conformidad con la invención se prefiere producir y aplicar extractos de Vitex Agnus castus, en particular de sus frutas y/u hojas que se obtienen de la planta o de las partes de la planta mediante la extracción etanólica o mediante extracción con C02. Para mostrar la presencia de fitoestrógenos en Vitex Agnus castus (VAC) , los inventores utilizaron un ensayo del receptor de estrógeno competitivo en el cual el estradiol radiactivamente marcado es desbancado de los receptores mediante ligandos que también enlazan al receptor, los cuales a continuación se denominan moduladores del receptor. Como moduladores de receptor se usaron por una parte estradiol no radiactivo y por otra parte el extracto a "ser investigado. La preparación receptora estaba constituida por una fracción citosólica de ubres de cerdo, las cuales contienen ambos subtipos de receptores de estrógeno, específicamente ER-alfa y ER-beta. Los resultados de un experimento típico se muestran en la Fig. 1. La figura 1 muestra las curvas de desplazamiento del estradiol (E2, símbolos abiertos) y de extractos de VAC (símbolos oscuros) . La ordenada indica la proporción porcentual de enlace (todavía restante) del estradiol radiactivamente marcado al receptor de estrógeno. La abscisa superior indica la concentración de E2, en tanto que la abscisa inferior reproduce la concentración de VAC. Se define como el 100% aquel desplazamiento que se obtiene con la concentración más baja de las sustancias de prueba. Los valores medios ± SEM (desviación estándar de la media) se obtuvieron a partir de una determinación triple. El CE50 de Como se puede apreciar por la Fig. 1, los compuestos en los extractos de VAC concurren en función de la dosis con el estradiol radiactivamente marcado alrededor de los sitios de enlace de los receptores de estrógeno. Los datos obtenidos demuestran de manera impresionante que los extractos investigados contienen fitoestrógenos . Para corroborar el descubrimiento con mayor vehemencia se llevó a cabo el mismo ensayo con un preparado receptor de endometrio humano. Nuevamente se encuentran ambos subtipos de ER (receptor de estrógeno) en la solución. Los resultados de estas investigaciones se muestran en la Fig. 2. La figura 2 muestra las curvas del desplazamiento del estradiol radiactivamente marcado del ER de endometrio humano por estradiol (E2, símbolos abiertos) y extractos de VAC (símbolos oscuros) . La ordenada indica la proporción porcentual de enlace (todavía restante) del estradiol radiactivamente marcado al receptor de estrógeno. La abscisa superior indica la concentración de E2 (estradiol beta) , en tanto que la abscisa inferior reproduce la concentración de VAC. Se define como el 100% aquel desplazamiento que se obtiene con la concentración más baja de las sustancias de prueba. Los valores medios ± SEM se obtuvieron a partir de una determinación triple. La CE50 de VAC es de 12.7 µ9/:?1. Los resultados demuestran claramente que los fitoestrógenos de los extractos de VAC enlazan con los receptores de estrógeno humanos, lo cual es un evento molecular inicial en un efecto de tipo estrogénico de los compuestos de VAC en el ser humano. En virtud de la disponibilidad de las proteínas receptoras recombinantes es posible llevar a cabo ensayos de ER específicos para los subtipos (ER-alfa o ER-beta) . En la Fig. 3 se muestra el resultado en forma de una curva típica del desplazamiento de ER-alfa. La figura 3 muestra las curvas de dosis/efecto de estradiol (E2, símbolos abiertos) y de los extractos de VAC de la solicitante (símbolos oscuros) en un ensayo con ER-alfa humano recombinante . La abscisa superior indica la concentración de E2, en tanto que la inferior indica la concentración de VAC. Se define como el 100% aquel desplazamiento que se obtiene con la concentración más baja de las sustancias de prueba. Los valores medios ± SEM se obtuvieron a partir de determinaciones triples por valor de concentración. En tanto que E2 muestra una competencia en función de la dosis con respecto al ligando radiactivo del receptor, los fitoestrógenos del extracto de VAC no se ligan al ER-alfa. Por consiguiente no fue posible calcular una CE50. Con los mismos compuestos de prueba que en el ensayo ER-alfa se llevaron ahora a cabo ensayos ER-beta. Los datos y la gráfica de un experimento representativo se muestran en la Fig. 4. La figura 4 muestra las curvas de dosis/efecto de estradiol (E2, símbolos abiertos) y de los extractos de VAC de la solicitante (símbolos oscuros) en un ensayo con ER-beta humano recombinante . La abscisa superior indica la concentración de E2, en tanto que la inferior indica la concentración de VAC. Se define como el 100% aquel desplazamiento que se obtiene con la concentración más baja de las sustancias de prueba. Los valores medios ± SEM se obtuvieron a partir de determinaciones triples por valor de concentración. La CE50 de VAC es de 9.9 µg/ml . Contrariamente al ensayo ER-alfa, los fitoestrógenos de los extractos de VAC del solicitante ligan en función de la dosis al ER-beta. Estos datos confirman sin ninguna duda la selectividad ER-beta de los extractos de Vitex Agnus castus de la solicitante. A continuación se demostrará el efecto estrogénico de Vitex Agnus castus sobre las células de la granulosa y luteínicas humanas y las células luteínicas porcinas.

La secreción de esteroide del folículo ovárico y del cuerpo lúteo se regula de manera endocrina mediante las hormonas de la hipófisis LH y FSH. Adicionalmente tiene lugar un control local mediante estradiol, el cual se designa como regulación paracrina. Este control local presupone la expresión del receptor de estrógeno. Los nuevos descubrimientos biológicos moleculares confirman que las células de la granulosa expresan preponderantemente mucho mejor el subtipo ER-beta en comparación con el ER-alfa. En cambio, las celdas luteínicas expresan exclusivamente el ER-beta . Un sistema de prueba establecido para el estudio de los efectos paracrinos de esteroides son los cultivos de células luteínicas. Estas células no se pueden obtener del ser humano en virtud de que todas las intervenciones quirúrgicas en las cuales se podrían llevar a cabo biopsias siempre se llevan a cabo en la fase folicular con el fin de evitar el riesgo de un embarazo no detectado. Sin embargo, dentro del marco de los programas de fertilización in vitro se dispone de las denominadas células de la granulosa y luteínicas, que conservadas en cultivo se comportan en gran medida como las células luteínicas en lo referente a la ocupación del receptor y al comportamiento de secreción. Con este sistema de prueba in vitro humano se probó un efecto estrógeno de Vitex Agnus castus.

Primeramente se representará el efecto de 17-beta-estradiol (el estradiol de origen natural) frente al isómero de 17-alfa-estradiol sobre la secreción de progesterona de las células de la granulosa y luteínicas humanas. Estos datos se reproducen de manera gráfica en la Fig. 5. Fig. 5: una incubación de 5 horas de estas células con 17-beta-estradiol (1 µ ) conduce a una inhibición importante de la secreción de progesterona, en tanto que el isómero de 17 -alfa-estradiol (asimismo 1 µ?) no produce efectos. El * significa una desviación importante del medio de control (cultivado) . Esto significa: 1. La inhibición in vitro de la secreción de progesterona es un efecto del estrógeno. 2. El efecto del 17-beta-estradiol es altamente específico en virtud de que el 17-alfa-estradiol no puede desencadenar el efecto. La Fig. 6 resume el efecto de los extractos de Vitex Agnus castus en este sistema de prueba sobre la secreción de progesterona después de una incubación de 5 horas . Como se puede apreciar por la Fig. 6, también el extracto de Vitex Agnus castus inhibe - al igual como el 17-beta-estradiol de origen natural - la secreción de progesterona de las células de la granulosa y luteínicas humanas. Esto- se debe valorar farmacológicamente como un efecto estrogénico. El * significa una desviación importante del control (= medio de cultivo) . Las indicaciones de las concentraciones en la abscisa significan la respectiva concentración del extracto de VAC en la preparación de prueba . En virtud de que ciertamente las células de la granulosa y luteínicas humanas expresan preponderantemente mucho mejor, pero no exclusivamente el ER-beta, el experimento se repitió con células luteínicas porcinas, es decir, células que exclusivamente expresan ER-beta. Los resultados correspondientes se muestran en la Fig . 7. De conformidad con la Fig. 7 también con éstas células queda demostrado el inequívoco efecto estrogénico de Vitex Agnus castus, en virtud de que la secreción de progesterona (parte izquierda de la gráfica, las primeras tres columnas después del primer control con medio) se inhibe de manera importante. Se excluyó un efecto citotóxico no específico mediante la medición de la vitalidad de las células (formación del colorante MTT de acuerdo a métodos conocidos) (parte derecha, las últimas tres columnas después del segundo control con medio) . La vitalidad de las células no se ve afectada por el extracto de Vitex Agnus castus, es decir, la secreción disminuida de progesterona es un efecto estrogénico específico.

El *- significa una desviación importante del medio (de cultivo) de control. Las indicaciones de las concentraciones en la abscisa significan la concentración respectiva del extracto de VAC. Para corroborar esta conclusión se incubaron las células con extracto de Vitex Agnus castus junto con el anti-estrógeno Tamoxifen. Los resultados se muestran en el diagrama de columnas de la Fig. 8. En la Fig. 8, el * significa una desviación importante del medio (de cultivo) de control. Las designaciones en la abscisa significan: TAM = Tamoxifen, las indicaciones de las concentraciones la respectiva concentración del extracto de VAC y VAC+TAM la combinación del extracto de VAC de concentración específica de la última columna con extracto de VAC puro más Tamoxifen. De acuerdo a la Fig. 8 el anti -estrógeno Tamoxifen mismo no ejerce efecto alguno sobre la secreción de progesterona . Mediante la liga del Tamoxifen al ER están a disposición menos sitios de liga para las sustancias que contiene el VAC, y se reduce el efecto desencadenado, la inhibición de la secreción de progesterona. Este descubrimiento demuestra de manera inequívoca que el efecto de VAC sobre la síntesis de progesterona se transmite de manera específica a través del receptor de estrógeno. Para comprobar el efecto uterotrópico se llevó a cabo el siguiente experimento, cuyos datos se muestran de manera gráfica en la Fig. 9. Durante tres meses se adicionaron diversas concentraciones de extractos de VAC (100 mg/kg = VAC 100, y 400 mg/kg de peso corporal = VAC 400) a la mezcla alimenticia de ratas ovariectomizadas (con los ovarios extirpados) y de ratas macho orquidiectomizadas (con los testículos extirpados) . A diferencia del estradiol, el VAC no tuvo una influencia uterotrópica, y tampoco hubo influencia sobre el epitelio vaginal. Ambos efectos proliferantes del estradiol son indeseables dentro del cuadro de la terapia de sustitución de estrógeno peri o pos-climatérica, o de una terapia de sustitución de hormonas en las mujeres, en virtud de que con la administración constante de estrógenos y la falta de una regulación contraria no es posible excluir una hiperplasia del endometrio debido al constante efecto proliferante del estradiol. En la Fig. 9 se indican sobre la ordenada los pesos del útero de las ratas. Las columnas individuales se refieren al grupo de control (solo ovariectomizadas) , un control positivo con estradiol, así como los efectos con dos concentraciones diferentes de extractos de VAC. De acuerdo con la Fig. 9 no fue posible determinar un efecto uterotrópico como el del estradiol en los animales tratados con VAC, lo que significa que el VAC no tiene un efecto prolife-rante sobre el tejido del útero. Sin embargo, durante las investigaciones posteriores se descubrió inesperadamente que el VAC puede ejercer efectos estrogénicos sobre otros sistemas de órganos. Con tomografía asistida por computadora se determinó el tejido graso abdominal y paratibial en las hembras y los machos de las ratas. Con E2 y la elevada dosis de Vitex Agnus castus se observó una reducción de ambas porciones de tejido. Simultáneamente disminuyeron los niveles de seroleptina de los animales tratados con VAC. Los resultados de esta investigación se registran en las figuras 10 y 11. La Fig. 10 muestra el efecto del estradiol- y de dos diferentes concentraciones de VAC sobre el tejido graso paratibial, que se representa como proporción porcentual de la superficie del tejido graso de imagen de CT (tomografía asistida por computadora) en la región de la tibia en comparación con el control . La Fig. 11 muestra el efecto del estradiol y dos diferentes concentraciones de VAC sobre el contenido de seroleptina, que se registra sobre la ordenada en ng/ml. Como se puede apreciar por las figuras 10 y 11, con la administración de VAC se demuestra una disminución del contenido graso paratibial y una disminución de la concentración de seroleptina.

Asimismo mediante tomografía asistida por computadora se observó la variación de la densidad ósea (menor desarrollo de osteoporosis) en la metafisis de la tibia en las hembras y los machos de la rata. Se demostró que con VAC es notablemente menor la disminución de la densidad ósea que en el caso de los animales no tratados. La instilación de 1 mi por minuto de solución salina fisiológica con un catéter en la vejiga de las ratas hembra ovariectomizadas produce un incremento de la presión interna de la vejiga. En los animales sustituidos durante tres meses con E2 (17-beta-estradiol) el incremento de la presión resulta aproximadamente tres veces mayor que en el caso de los animales de control tratados con placebo, y es ligeramente más débil pero significativo que en el caso de los animales tratados con estradiol si los animales fueron tratados con VAC. Los resultados de esta investigación se muestran en las figuras 12 y 13. En la Fig. 12 se indica en la ordenada, en mmHg, la máxima presión interna de la vejiga que se midió para un control, estradiol como control positivo y dos diferentes concentraciones de VAC. En cambio, la Fig. 13 muestra sobre la ordenada la superficie debajo de la curva de medición de presión (AUC) en mmHg x seg. para un control, estradiol como control positivo y dos diferentes concentraciones de VAC.

Por consiguiente, de acuerdo con todo esto es posible usar extractos de VAC para producir medicamentos que no producen un efecto uterotropico en el tratamiento de: * gordura y, debido a ella, la posible influencia del síndrome metabólico, en particular hipertono, arteriesclerosis, infarto al corazón, hiperandrogenemia ; * trastornos de la continencia en la menopausia; * oleadas de calor de la menopausia, que se asocian al hiperestimulo del generador del pulso hormonal liberador de gonadotropina ; * trastorno de la síntesis de hormona esteroide, en particular de la síntesis de progesterona del cuerpo lúteo humano a consecuencia de una insuficiencia lútea; * enfermedad de Alzheimer que se asocia con un incremento de la expresión del receptor de estrógeno beta en las neuronas del hipocampo. Literatura 1. ) Hrabovszky E, Shughrue PJ, Merchenthaler I, Hajszan T, Carpenter CD, Liposits Z, Petersen SL. Detection of estrogen receptor-beta messenger ribonucleic acid and 1251-estrogen binding sites in luteinizing hormone-releasing hormone neurons of the rat brain. Endocrinology 2000; Sep;141 (9) :3506-9 2. ) Hosokwa K, Otlander U, Wahlberg P, Ny T, Cajander S, Olofsson 1J.

Dominant expression and distribution of oestrogen receptor beta over oestrogen recepto alpha in the human corpus luteum. Mol Hum Reprod 2001 Feb; 7 (2) :137-45 3. ) Taylor AH, Al-Azzawi F. Immunolocalisation of oestrogen receptor beta in human tissues. J. Mol Endocrinol 2000 Feb; 24(l);145-55 4. ) Kuiper GG, Carlsson B, Grandien K, Enmark E, Haggblad J, Nilsson S, Gustafsson JA, 1997 Cómparison of the ligand binding specificity and transcript tissue distribution of estrogen receptors alpha and beta. Endocrilology 138-863-870 5. ) Saunders PT, Maguire SM, Gaughan J, Millar MR, 1997 Expression of oestrogen receptor beta (ER beta) in múltiple rat tissues visualised by immunohistochemistry . J Endocrinol 15 :R13-R16 6.) Mákel S, Strauss L, Kuiper G, Valve E, Salmi S, Santti R, Gustafsson JA. 2000 Differential expression of estrogen receptors alpha and beta in adult rat accessory sex glands and lower urinary tract. Mol Cell Endocrinol 164:109-116 Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES
Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones: 1. Uso de extractos que contienen fitoestrógeno que exhiben un efecto modulador selectivo del receptor de estrógeno beta sin producir una reacción uterotrópica, para tratar cuadros clínicos y estados patofisiológicos que se seleccionan del grupo que consiste de: * gordura y, debido a ella, la posible influencia del síndrome metabólico, en particular hipertono, arteriosclerosis, infarto al corazón, hiperandrogenemia; * trastornos de la continencia en la menopausia; * oleadas de calor de la menopausia, que se asocian al hiperestimulo del generador del pulso hormonal liberador de gonadotropina; * trastorno de la síntesis de hormona esteroide, en particular de la síntesis de progesterona del cuerpo lúteo humano a consecuencia de una insuficiencia lútea; * enfermedad de Alzheimer que se asocia con un incremento de la expresión del receptor de estrógeno beta en las neuronas del hipocampo. 2. Uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde el extracto se usa en la forma farmacéutica usual.
3. -Uso de conformidad con la reivindicación 2, en donde como formulación farmacéutica se usan gotas, comprimidos, tabletas revestidas, cápsulas, granulados, grageas, supositorios, pomadas, cremas.
4. Uso de conformidad con una de las reivindicaciones 1 a 3, en donde los extractos se producen a partir de Vitex Agnus Castus, en particular de sus frutas y/u hojas mediante la extracción etanólica o con CO2.