TIENO-(1,3)-OXAZIN-4-ONAS CON ACTIVIDAD INHIBIDORA DE LIPASA
Campo de la Invención La presente invención proporciona compuestos de tieno-oxazinona, su uso en la medicina, y particularmente en la prevención y/o tratamiento de la obesidad o un trastorno relacionado con la obesidad, como la diabetes, y su uso en la inhibición de una enzima cuyo modo preferido de acción es para catalizar la hidrólisis de una funcionalidad éster. También se proporcionan métodos para la prevención y/o tratamiento de la obesidad o un trastorno relacionado con la obesidad y para promover/ayudar a la pérdida de peso sin medicina y el uso de los compuestos en la elaboración de un medicamento para las indicaciones mencionadas anteriormente. La invención también proporciona procesos para la elaboración de los compuestos, composiciones que las contienen y métodos para la elaboración de tales composiciones. Antecedentes de la Invención En los últimos 20 años, ha existido una tendencia que aumenta en la obesidad en las poblaciones del mundo en desarrollo. La incidencia aumentada de la obesidad es debido en parte a la disponibilidad dispuesta de alimentos en numerosos puntos de venta y dietas que hacen los occidentales que tienen contenidos de grasa altos y fibras inferiores, de tal manera que el alimento es denso en energía. El estilo de vida de las poblaciones del mundo en desarrollo también han llegado a ser más sedentarios con la mecanización aumentada de la sociedad y la reducción constante de industrias intensivas de trabajos manuales. Existe actualmente un desequilibrio de energía entre el consumo de energía de los alimentos densos en calorías y el gasto de energía reducida requerido para un estilo de vida sedentaria. Algo del exceso de consumo de energía es almacenado como grasa en el tejido adiposo, la acumulación de la cual durante un período de tiempo resulta en la obesidad y puede ser un factor contribuyente significativo para otras enfermedades y trastornos. La obesidad es reconocida actualmente por la profesión médica como una enfermedad metabólica. En los Estados Unidos, se estima que el 25% de la población adulta es considerada clínicamente obesa (índice de Masa Corporal >30). La obesidad puede ser una condición debilitante que reduce la calidad de vida y aumenta el riesgo de enfermedades relacionadas como la diabetes, enfermedad cardiovascular e hipertensión. Se ha estimado que costos para la asistencia médica por $45 mil millones de dólares, o el 8% de gasto al año para la asistencia médica total, es como resultado directo de la obesidad. Las aproximaciones tradicionales para el control de peso a largo plazo como la dieta y el ejercicio han resultado ineficaces solo para el control de la extensión de la obesidad. En la actualidad, más que nunca, existe interés considerable en desarrollar seguro, drogas efectivas para el tratamiento de la obesidad. Las aproximaciones farmacológicas para el tratamiento de la obesidad se han enfocado en ya sea desarrollar drogas que aumenten el gasto de energía o drogas que reduzcan el consumo de energía. Una aproximación para la reducción del consumo de energía es reducir la capacidad del cuerpo para digerir y' absorber alimento, en particular grasa. Las enzimas clave implicadas en la digestión de gasa son enzimas hidrolíticas. Los más trascendente de las enzimas que degradan la grasa son lipasas, principalmente, pero no exclusivamente la lipasa pancreática que es secretada por el páncreas en el lumen del intestino. La tetrahidrolipstatina del inhibidor de lipasa tiene formada la base de la droga antiobesidad, orlistat. La Solicitud de Patente Europea No. EP129748 se relaciona con orlistat y compuestos relacionados y su uso en la inhibición de la lipas pancreática y tratamiento de hiperlipemia y obesidad. Aunque orlistat proporciona un método efectivo- para tratar la obesidad, permanece una necesidad para proporcionar drogas alternativas y métodos para uso en el control y tratamiento de la obesidad y trastornos relacionados con la obesidad y en promover o ayudar a la pérdida de peso sin medicina. Los inhibidores de enzimas implicados en la degradación de grasa se proporcionan aquí y muestran que son efectivas en la prevención y/o tratamiento de la obesidad, enfermedad relacionada con la obesidad y/o en promover la. pérdida de peso, cosmética. La US 4,760,063 (Hallenbach et al) describe la síntesis de 2-amino-tieno-oxazinas de la fórmula
El uso de estos compuestos como promotores del crecimiento para animales no humanos es discutido. Player et al (J. Heterocyclic Chem., 32, 1537-1540, (1995) discute seis compuestos de oxazinona. Estos compuestos se basan en una serie de indol-, tiofen- y pirrol-fusionada 2-dimetilamino-1 ,3-oxazin-4-ona. Este papel se relaciona con la preparación de estos compuestos y su evaluación como agentes anti-tumor. La EP-A-0985670 y la EP-A-0908457 (American Cyanamid Company) describen la síntesis de compuestos de 1-(3-heterociclilfenil)isotiourea, isourea, guanidina y amidina y su uso como herbicidas.
La síntesis de estos compuestos implica al intermediario de oxazinona ilustrado anteriormente en donde R1 y R2 pueden ser un anillo de 4 a 7 miembros opcionalmente interrumpido con nitrógeno, azufre u oxígeno y sustituido con 1 a 3 grupos metilo o uno o más átomos de halógeno. Los números de solicitud internacional PCT/GB00/00031 ,
PCT/GB00/00032, y PCT/GB01100171 se relacionan con compuestos de 2-amino, 2-oxi y 2-tio-benzoxazinona. Estas solicitudes se relacionan con el uso de aquellos compuestos en el control y tratamiento de la obesidad y trastornos relacionados con la obesidad. Sumario de la Invención Se ha encontrado ahora que una clase particular de compuestos de tieno-oxazinona tiene actividad como inhibidores de lipasa. Por consiguiente, en un primer aspecto, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I):
o su sal, éster, amida o profármaco farmacéuticamente aceptable; en la elaboración de un medicamento para la prevención o tratamiento de la obesidad o un trastorno relacionado con la obesidad; en donde en la fórmula (I): A es una porción tienilo opcionalmente sustituida, Y es O, S, o NR2, y R1 es un alquilo ramificado o sin ramificar (opcionalmente interrumpido por uno o más átomos de oxígeno), alquenilo, alquiniio, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, arilalquilo, arilalquilo reducido, ¦> arialquenilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, heteroarilalquenilo, arilo reducido, heteroarilo reducido, heteroarilalquilo reducido o un derivado sustituido de cualquiera de los grupos anteriores, en donde los sustituyentes son uno o más independientemente de halógeno, alquilo, alquilo halosustituido, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilo reducido, heteroarilalquilo reducido, arilalcoxi, ciano, nitro, -C(0)R4, -C02R5, -SOR4, -S02R4, -NR6R7, -OR6, -SRS, -C(0)CX1X2NR6R7, -C(0)N(OR5)Rs, -C(0)NR5R4, -NR6C(0)R4, -CR6(NH2)C02R6, -NHCX X2C02R6, -N(OH)C(0)NR6R7, -N(OH)C(0)R4, -NHC(0)NR6R7, -C(0)NHNR6R7, -C(0)N(OR5)R6, o un lípido o esteroide (natural o sintético) con la condición de que cualquier sustituyente heteroátomo en R1 debe ser separado del heteroátomo exocíclico por al menos dos átomos de carbono (de preferencia saturados); y en donde:- R2 es hidrógeno o un grupo como se definió anteriormente para R1 R4 es hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquiniio, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, heteroarilo · reducido, heteroarilalquilo reducido, -OR6, NHCX1X2C02R6 o -NR6R7 o un derivado sustituido de cualquiera de los grupos anteriores; R5 es hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, heteroarilo reducido o heteroarilalquilo reducido; y R6 y R7 son independientemente hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilo reducido, heteroarilalquilo reducido o -(CH2)n(OR5)m en donde n es 1 a 12, de preferencia 2 a 10, en donde m es 1-3 o un derivado sustituido de cualquiera de los grupos anteriores; y R5 es de mayor preferencia alquilo de C2-C10; y X1 y X2 son independientemente hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo, heteroarilo, arilalquilo, heteroarilalquilo, heteroarilo reducido o heteroarilalquilo reducido, en donde para los grupos R1, R2, R4, R5, R6, R7, X1 y X2, de preferencia los grupos alquilo tienen de 1 a 30 átomos de carbono, los grupos alquenilo tienen de 2 a 30 átomos de carbono, los grupos alquinilo ti nen de 2 a 30 átomos de carbono, los grupos cicloalquilo tienen de 3 a 30 átomos de carbono, los grupos cicloalquenilo tienen de 3 a 30 átomos de carbono, los grupos arilo tienen de 6 a 12 átomos de carbono y los grupos heteroarilo tienen de 5 a 12 átomos de carbono. La porción tienilo se fusiona con el anillo de oxazinona en la posición 2,3, en la posición 3,4 o en la posición 3,2 como se ¡lustra a continuación;
ti en o [2, 3-d] [1 ,3]oxazin-4-ona tieno[3,2-d][1 , 3]oxazin-4-ona
t¡eno[3,4-d][1 ,3]oxaz¡n-4-ona De preferencia la porción tienilo se fusiona con el anillo de oxazinona en la posición 2,3 o en la posición 3,2. La porción tienilo A puede opcionalmente ser sustituida con uno o' más de hidrógeno, hidroxi, halógeno, oxo, amino, nitro, ciano, alquilo, arilo, alquilarilo, haloalquilo, alcoxi, ariloxi, alquiltio, alquilamino, ariltio o arilamino en donde ariltio, arilamino y ariloxi pueden ser sustituidos por uno o más de halo, alquilo, haloalquilo, alcoxi, tioalquilo, o aminoalquilo; la porción tienilo A puede ser opcionalmente sustituida por un grupo R12Q en donde Q es O, CO, CONH, NHCO, S, SO, S02 o S02NH2 y R12 es hidrógeno o un grupo R1 como se definió anteriormente; o un grupo R1R14N en donde R1 es como se definió anteriormente y R14 es H o R1, con la condición de que cualquier sustituyente heteroátomo en R1 y/o R14 deba ser separado del sustituyente heteroátomo aromático por al menos dos átomos de carbono (de preferencia saturados); en donde para los sustituyentes de la porción tienilo A, de preferencia los grupos alquilo tienen de 1 a 30 átomos de carbono, los grupos alquenilo tienen de 2 a 30 átomos de carbono, los grupos alquinilo tienen de 2 a 30 átomos de carbono, los grupos crcloalquilo tienen de 3 a 30 átomos de carbono, los grupos cicloalquenilo tienen de 3 a 30 átomos de carbono, los grupos arilo tienen de 6 a 12 átomos de carbono y los grupos heteroarilo tienen de 5 a 12 átomos de carbono. Además, el grupo tienilo puede ser fusionado además con uno o más anillos de arilo, heterocíclico o cicloalquilo de cinco, seis o siete miembros. Ejemplos de grupos heterocíclicos que contienen tales anillos fusionados incluyen benzotiofeno. El anillo fusionado puede opcionalmente ser saturado. De preferencia, el grupo tienilo A'es opcionalmente sustituido con uno o más de alquilo, arilo, halo, alcoxi, haloalquilo, ariloxi, amino, heteroarilo, o arilalquilo. De más preferencia, la porción tienilo A es opcionalmente sustituida con uno o más de hidrógeno, alquilo ramificado o sin ramificar que tiene de 1 a 20 átomos de carbono, alquilo cíclico que tiene de 3 a 10 átomos de carbono, arilo, haloalquilo o un halógeno; Y es de preferencia O, S o NR2; R1 es de preferencia alquilo, o arilo, opcionalmente sustituido con alquilo, haloalquilo, halo, ciano, nitro, OR6, SR6, COR6, C02R6, NR6, R7, o arilo opcionalmente sustituido con ariloxi, ariltio, SO- arilo, S02-ar¡lalquílarilo, CO-ar¡lo, C02-arilo, CONR6-arilo, NR6CO-arilo o NR6-arilo o un derivado sustituido de cualquiera de los grupos anteriores; R2 es de preferencia hidrógeno o alquilo. Con respecto a los grupos R1, R2, R4, R5, R6, R 2, X1 y X2, cualquiera de los grupos y porciones alquilo, alquenilo y alquinilo pueden ser de cadena lineal (no ramificada) o de cadena ramificada. Los grupos o porciones alquilo, alquenilo y alquinilo de cadena lineal pueden contener de 1 a 30 átomos de carbono, por ejemplo de 1 a 25 átomos de carbono, de preferencia de 1 a 20 átomos de carbono. Los grupos o porciones alquilo, alquenilo y alquinilo de cadena ramificada puede contener de 1 a 50 átomos de carbono, de preferencia de 1 a 30 átomos de carbono. De preferencia, en donde R1 es un grupo alquilo, el grupo alquilo de preferencia tiene de 4 a 30 átomos de carbono, de más preferencia de 4 a 20 átomos de carbono. En particular, R1 es un alquilo sin ramificar con 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ó 20 átomos de carbono. Donde uno más de R2, R4, R5, R6, R 2, X1 y X2 es un grupo alquilo, el grupo alquilo puede ser una cadena lineal (no ramificada) o ramificada. Los grupos o porciones alquilo de cadena lineal o ramificada pueden contener de 1 a 10 átomos de carbono, por ejemplo, de 1 a 8 átomos de carbono, de preferencia de 1 a 5 átomos de carbono. Ejemplos de tales grupos alquilo incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, ¡sobutilo, sec-butilo, t- butilo, n-pentilo. Los grupos arilo incluyen, por ejemplo anillos insaturados monocíclicos o bicíclicos opcionalmente sustituidos de hasta 12 átomos de carbono, tal como fenilo y naftilo, y anillos bicíclicos parcialmente saturados tal como tetrahidro-naftilo. De preferencia, el grupo arilo es fenilo. Ejemplos de sustituyentes que pueden estar presentes en un grupo arilo incluyen uno o más de halógeno, amino, nitro, alquilo, haloalquilo, alcoxi, fenoxi y fenoxi sustituido por uno o más de halo, alquilo o alcoxi. Grupos preferidos incluyen alquilo tal como metilo, etilo o propilo, grupos halo y haloalquilo tales como trifluorometilo o dicloroetilo. Un grupo o porción heteroarilo puede ser por ejemplo un anillo aromático heterocíclico de 5 ó 6 miembros opcionalmente sustituido que puede contener de 1 a 4 heteroátomos seleccionados de O, N o S. El anillo heterocíclico puede opcionalmente ser fusionado a un anillo fenilo. Ejemplos de grupos heteroarilo incluyen de esta forma furilo, tienilo, pirrolilo, oxazolilo, oxazinilo, tiazolilo, imidazolilo, oxadiazolilo, tiadiazolilo, piridilo, triazolilo, triazinilo, piridazilo, pirimidinilo, pirazolilo, · indolilo, indazolilo, isoxazolilo, benzofuranilo, benzotienilo, benzimidazolilo, benzoxazolilo, benzoxazinilo, quinoxalinilo, quinolinilo, quinazolinilo, cinolinilo, benzotiazolilo y piridopirrolilo. De preferencia el grupo heteroarilo es piridilo, tienilo, furilo o pirrolilo. Los sustituyentes adecuados incluyen uno o más de halógeno, amino, nitro, alquilo, haloalquilo, alcoxi o ariloxi. Los sustituyentes preferidos son grupos alcoxi tales como hidroxi, metoxi o etoxí, de mayor preferencia hidroxi. El grupo o porción heteroarilo puede estar total o parcialmente reducido. Para los propósitos de esta invención los términos "reducido" o "reducción" se relacionan con la adición de uno o más electrones a un átomo o la adición de hidrógeno a una porción. Ejemplos de tales grupos o porciones heteroarilo reducidos incluyen cualquier derivado total o parcialmente saturado de los grupos heteroarilo mencionados anteriormente e incluyen grupos pirrolidinilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotienilo y piperidinilo. Un grupo halo o halógeno es uno o más de fluoruro, cloruro, bromuro o yoduro. Un grupo amino es uno o más de NH2, NHR21, NR21R22 o una sal del mismo por ejemplo NH3CI. R2 y R22 se seleccionan independientemente de alquilo de Ci-3o, de preferencia de alquilo de C -2o o arilo de C6-12- Los grupos haloalquilo son grupos alquilo de cadena lineal o ramificada como se definió previamente sustituido con uno o más grupos halógeno, en donde un grupo halógeno es fluoruro, cloruro, bromuro o yoduro. Ejemplos del grupo haloalquilo incluyen trifluorometilo y dicloroetilo. Los grupos alcoxilo son grupos alquilo de cadena lineal o ramificada como se definió previamente, en donde la cadena alquilo es interrumpida con uno o más átomos de oxígeno. Ejemplos de grupos alcoxi incluyen grupos metoxi y etoxi. Los grupos ariloxi son grupos arilo como se definió previamente, en donde el grupo arilo es sustituido con uno o más átomos de oxígeno. Ejemplos de grupos ariloxi incluyen grupos fenoxi y fenilfenoxi. En una característica más preferida del primer aspecto, la invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula II
o su sal, éster, amida o profármaco farmacéuticamente aceptable, en la elaboración de un medicamento para la prevención o tratamiento de la obesidad o un trastorno relacionado con la obesidad; en donde el grupo A es como se definió en la fórmula (I); de preferencia, el grupo tienilo A es opcionalmente sustituido con uno o más de alquilo, arilo, halo, alcoxi, haloalquilo, ariloxi, amino, heteroarilo, o arilalquilo. De más preferencia la porción tienilo A es opcionalmente sustituida con uno. o más de hidrógeno, alquilo ramificado o sin ramificar que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, alquilo cíclico que tiene de 3 a 10 átomos de carbono, arilo que tiene de 6 a 12 átomos de carbono, haloalquilo que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, o un halógeno; Y es como se definió en la fórmula (I); de preferencia O, S o NR2, en donde R2 es de preferencia hidrógeno, metilo, etilo o propilo, de mayor preferencia hidrógeno; R20 de preferencia representa un grupo seleccionado de OR13, SR13, SOR13, -COR13, C02R13, S02R13, CONR13R14, NR14C(0)NR13, alquilo de C1- 0, alcoxi de C -10, halo-alquilo de Ci-10, ciano, halo, arilo, aril-alquilo de C-i. 0, heteroarilo o heteroaril-alquilo de Ci.i0; en donde R13 y R14 cada uno independientemente representa hidrógeno, alquilo de C - 0, alquenilo de C2-io, alquinilo de C - 0, cicloalquilo de C3.6, cicloalquenilo de C3-6, arilo, aril-alquilo de d. 0, heteroarilo, heteroaril-alquilo de Ci-10, heteroarilo reducido o heteroaril-alquilo de Ci-i0 reducido; en donde el alquilo, arilo, heteroarilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo o cicloalquenilo puede ser opcionalmente sustituido con uno o más de halo, alquilo de C- O, haloalquilo de C- O, alcoxi de Ci.io, arilo de C6.12, alquilo de C-i.-io-arilo de C6-12, ariloxi de C6- 12, amino, hidroxi, nitro, heteroariloxi de Cs-12 o heteroarilo de C5- 12- De más preferencia R20 representa feniloxi, feniltio, SO-fenilo, S02-fenilo, alqu'ilfen'ilo, CO-fenilo, C02-fenilo, CONR14-fenilo, NR14CO-fenilo o NR14-fenilo opcionalmente sustituido con uno o más de halo, alquilo de Ci_io, haloalquilo de C1-10, alcoxi de C - 0, arilo de C6-i2, alquilo de Ci.i0-arilo de C6-12, ariloxi de C6-12> amino, hidroxi, nitro, heteroariloxi de C5_ 2 o heteroarilo de C5_i2. De mayor preferencia R20 es feniloxi, feniltio, CH2-fenilo o CO-fenilo, opcionalmente sustituido con uno o más de halo, alquilo de C-i-10, haloalquilo de C io, alcoxi de C1- 0, arilo de C6-i2, alquilo de Ci-10-arilo de C6-12, ariloxi de C6-12, amino, hidroxi, nitro, heteroariloxi de C5.12 o heteroarilo de C5--|2. De preferencia el sustituyente es uno o más de alquilo, por ejemplo metilo, etilo, n-propilo o iso-propilo, halógeno o haloalquilo, por ejemplo trifluorometilo o dicloroetilo. El grupo R20 puede estar colocado en la posición orto, meta o para en el anillo fenilo al grupo Y. De preferencia, el grupo R20 está en la posición para al grupo Y. La invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I) o (II) como se definió en la presente anteriormente, o su sal, éster, amida o profármaco farmacéuticamente aceptable, en la elaboración de un medicamento para el control, prevención o tratamiento de la obesidad, o un trastorno relacionado con la obesidad. Para los propósitos de esta invención, los trastornos relacionados con la obesidad incluyen hiperlipemia, hiperlipidemia, hiperglicemia (diabetes tipo II), hipertensión, enfermedad cardiovascular, apoplejía, enfermedad gastrointestinal y condiciones gastrointestinales. El trastorno relacionado con la obesidad puede asociarse con el estado obeso del paciente. Alternativamente, el trastorno relacionado con la obesidad puede presentarse debido a la disposición genética del paciente, a las condiciones ambientales u otros factores. Sin estar limitado por la teoría científica, se propone que para tal trastorno no asociado con el estado obeso del paciente, el uso de los compuestos de la presente" solicitud prevendrá o tratará estas enfermedades provocando a los a perder peso. Tal pérdida de peso puede resultar en el mejoramiento o disminución de los síntomas de los trastornos anteriores. Los compuestos de la presente invención son particularmente útiles para el tratamiento de la hiperglicemia (diabetes tipo II). La hiperglicemia es debido a combinaciones variables de resistencia a insulina y deterioro de la célula B insular. Aunque los niveles circulatorios de insulina pueden no ser muy reducidos y pueden aún estar arriba del intervalo no diabético, son inadecuados para superar la resistencia a la insulina tisular. La hiperglicemia es implícita por tener varias causas posibles. Una de las más importancias de estas causas se relaciona con la obesidad. La combinación de un alto consumo de alimentos ricos en grasa-energía y la inactividad física ha conducido. a un aumento en la obesidad con un correspondiente aumento en resistencia a la insulina e hiperglicemia, particularmente en países que tienen un estilo de vida "occidentalizado". Al reducir el peso de un sujeto, la resistencia a la insulina puede superarse, permitiendo una reducción o tratamiento de los síntomas de hiperglicemia. Una característica preferida.de la presente invención es por lo tanto el uso de un compuesto de fórmula (I) o (II) como se definió en la presente anteriormente, o su sal, éster, amida o profármaco farmacéuticamente aceptable, en la elaboración de un medicamento para la prevención o tratamiento de la hiperglicemia (diabetes tipo II). Por todo este texto, la prevención y/o tratamiento de cualquier trastorno significa cualquier efecto que mitiga cualquier daño o cualquier trastorno médico, a cualquier extensión, e incluye la prevención y tratamiento mismos así como el control de la enfermedad. El término "tratamiento" significa cualquier mejoramiento de trastorno, enfermedad, síndrome, condición, dolor o una combinación de dos o más de los mismos. El término "control" significa prevenir la condición de desmejoramiento o volverse a empeorar, por ejemplo parando el progreso de la enfermedad sin mejoramiento necesario de la condición. La invención además proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I) o (II), como se define en la presente anteriormente, o su sal, éster-, amida o profármaco farmacéuticamente aceptable en la elaboración de un medicamento para la inhibición de una enzima implicada en el metabolismo o degradación de una grasa (incluyendo un lípido o lípidos), por ejemplo una lipasa, una fosfatasa o una esterasa. De preferencia la invención proporciona un compuesto de fórmula (I) y/o (II) como se define en la presente anteriormente, su sal, éster, amida o profármaco farmacéuticamente aceptable en la elaboración de un medicamento para la inhibición de una enzima lipasa, de más preferencia en donde la enzima lipasa está implicada en el metabolismo o degradación de una grasa. El primer aspecto de la invención proporciona además el uso de un compuesto de fórmula (I) o (II), como se define en la presente anteriormente, o su sal, éster, amida o. profármaco farmacéuticamente aceptable en la elaboración de un medicamento para la inhibición de una enzima cuya modo preferido de acción es catalizar la hidrólisis de una funcionalidad éster. En un segundo aspecto, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula (la)
o su sal, éster, amida o profármaco farmacéuticamente aceptable; en donde en la fórmula (la), A es una porción tienilo opcionalmente sustituida, con la porción tienilo fusionada al anillo oxazinona en la posición 2,3, posición 3,4 o en la posición 3,2 como se ilustra a continuación;
tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-ona tieno[3,2-d][1 , 3]oxazin-4-ona
tieno[3,4-d][1 ,3]oxazin-4-ona de. preferencia la porción tienllo se fusiona con el anillo de oxazinona en la posición 2,3 o en la posición 3,2. Y es O, S, o NR2, en donde R2 es hidrógeno o alquilo; y R1 es alquilo, o arilo sustituido con uno o más de halógeno, · amino, nitro, ciano, arilo, alquilarilo, alquilo, haloalquilo, alcoxi, o con uno o más de ariloxi, ariltio, SO-arilo, S02-arilalquilarilo, CO- arilo, C02-arilo, CONR6-arilo, NR6CO-arilo o NR6-arilo opcionalmente sustituido; en donde para los grupos-R1, R2 y R6, de preferencia los grupos alquilo tienen de 1 a 30 átomos de carbono, los grupos alquenilo tienen de 2 a 30 átomos de carbono, los grupos alquinilo tienen de 2 a 30 átomos de carbono, los grupos cicloalquilo tienen de 3 a 30 átomos de carbono, los grupos cicloalquenilo tienen de 3 a 30 átomos de carbono, los grupos arilo tienen de 6 a 12 átomos de carbono y los grupos heteroarilo tienen de 5 a 12 átomos de carbono. En una característica preferida del segundo aspecto, el grupo tienilo A es opcionalmente sustituido con uno o más de alquilo, arilo, halo, alcoxi, haloalquilo, ariloxi, amino, heteroarilo, o arilalquilo. De más preferencia la porción tienilo A es opcionalmente sustituido con uno o más de hidrógeno, alquilo ramificado o sin ramificar que tiene de 1 a 20 átomos de carbono, de preferencia de 1 a 15 átomos de carbono, alquilo cíclico que tiene de 3 a 10 átomos de carbono, arilo que tiene de 6 a 12 átomos de carbono, de preferencia fenilo, alquilarilo, haloalquilo, o un halógeno. De mayor preferencia, el grupo tienilo es sustituido con uno o más de halógeno, alquilo o arilo. El grupo tienilo fusionado en la posición 2,3 o en la posición 3,2 puede sustituirse en la posición 5 y/o 6. De preferencia, el grupo tienilo es sustituido en la posición 6. El grupo tienilo puede alternativamente fusionarse a un anillo arilo, heterociclilo, o cicloalquilo de seis miembros, de preferencia a un anillo fenilo, ciclohexilo o piridilo. Y es O, S o NR2; en donde R2 es de preferencia hidrógeno o un alquilo que tiene de 1 a 6 átomos de carbono, de más preferencia metilo, etilo o propilo; R1 e.s de preferencia a) un grupo alquilo sin ramificar que tiene de 4 a 25 átomos de carbono, un grupo alquilo ramificado que tiene de 4 a 25 átomos de carbono o un grupo arilalquilo en donde la porción alquilo tiene de 2 a 25 átomos de carbono; en particular, R1 es un alquilo sin ramificar con 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ó 20 átomos de carbono, un grupo alquilo ramificado con 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ó 20 átomos de carbono o un grupo arilalquilo en donde el grupo alquiló tiene 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ó 12 átomos de carbono y el grupo arilo es de preferencia fenilo. El grupo alquilo puede ser sustituido con uno o más de arilo, halo, C02R21, alquilo, alquinilo, alquenilo, haloalquilo, heteroarilo, ciano, nitro, en donde R21 es hidrógeno, alquilo, arilo o NR6. b) un grupo fenilo sustituido con uno o más grupos feniloxi, feniltio, SO-fenilo, S02-fenilo, alquilfenilo, CO-fenilo, C02-fenilQ, CONR16-fen¡lo, NR1sCO-fen¡lo o NR 6-fenilo; en donde el grupo alquilo es de preferencia un grupo alquilo sin ramificar que tiene de 1 a 4 átomos de carbono y R es de preferencia hidrógeno, o un grupo alquilo tal como metilo, etilo, n-propilo o ¡-propilo; en donde los, grupos feniloxi, feniltio, SO-fenilo, S02-fenilo, alquilfenilo, CO-fenilo, C02-fenilo, NR16CO-fenilo, CONR 6-fenilo, o NR 6-fenilo son opcionalmente sustituidos con uno o más de halo, ciano, nitro, alquilo, haloalquilo, alcoxi, arilo, alquilarilo, ariloxi, armiño, hidroxi o heteroarüo. c) un grupo fenilo sustituido con uno o más de halo, NR6R7, OR6, SR6, COR6, C02R6, nitro, ciano, arilo, heteroarüo, alquilarilo, alquilo, haloalquilo, o alcoxi. El grupo fenilo puede ser sustituido en la posición orto, meta o para. De preferencia, el grupo fenilo es sustituido en la posición meta o para. Las opciones preferidas para R1 incluyen fenilo cianosustituido, fenilo alcoxisustituido y fenilo halosustituido. En una característica más preferida del segundo aspecto, la invención proporciona un compuesto de fórmula lia
o su sal, éster, amida o profármaco farmacéuticamente aceptable; en donde el grupo A es como se definió para la fórmula (la), de preferencia una porción tienilo opcionalmente sustituida con uno o más de halógeno, alquilo o arilo de cadena ramificada o lineal de C-i-io! Y es como se definió para ia fórmula (la), de preferencia O, S o NH; y R20 es feniloxi, feniltio, SO-fenilo, S02-fenilo, alquilfenilo, CO-fenilo, C02-fenilo, CONR16-fenilo, NR6CO-fenilo, o NR6-fenilo opcionalmente sustituidos, de preferencia R20 es feniloxi, feniltio, CH2-fenilo o CO-fenilo opcionalmente sustituido con uno o más de halo, ciano, alquilo, haloalquilo, alcoxi, arilo, alquilarilo, ariloxi, amino, hidroxi o heteroarilo. De preferencia el sustituyente es uno o más de alquilo pór ejemplo metilo, etilo, n-propilo o iso-propilo, halógeno por ejemplo cloro o bromo o haloalquilo por ejemplo trifluorometilo o dicloroetilo. El grupo R20 puede estar ubicado en la posición orto, meta o para en el anillo fenilo al grupo Y. De preferencia, el grupo R20 es para al grupo Y. El grupo fenilo que comprende el grupo R20 puede ser sustituido en la posición orto, meta o para, de preferencia el grupo fenilo está sustituido en las posiciones meta o para; Compuestos representativos de acuerdo con el primero y/o segundo. aspectos de la invención son aquellos que incluyen:
Tabla 1
28 2-(4-Cianofenil)amino-6- propil-4H-tieno[2,3- d][1 ,3]oxazin-4-ona
29 2-(4-Cia n of e ni I) a m i n 0-6- metil-4H-tieno[2,3- d][1 ,3]oxazin-4-ona
6-Fenilmetil-2-(4- 10 p cianofenil)amino-4H- tieno[2,3-d][1 ,3]oxazin-4-ona
31 2-(4-Cianofenil)amino-6- 15 dodecil-4H-tieno[2,3- d][1 ,3]oxazin-4-ona
32 0 6-Metil-2-(4-fenilbutil) amino-4H-tieno[2,3-d][1 ,3] oxazin-4-ona 20 H
33 2-(2-Cloroetil)amino-6- metil-4H-tieno[2,3-d][1 ,3] oxazin-4-ona
61 2-(4-Fenoxicarbonil)- fenilam¡no-4H-tieno[2,3- d][1 ,3]oxazin-4-ona
62 2-(4-(4-Metoxifenoxi)- fenilamino)-4H-tieno[2,3- d][1 ,3]oxazin-4-ona
63 2(4-(4- Dimetilaminofenoxi)- fenilamino)-4H-tieno[2,3- d][1 ,3]oxazin-4-ona 64 2 (4-(4-H id roxif e n oxi)- fenilamino)-4H-t¡eno[2,3- 15 d][1 ,3]oxaz¡n-4-ona ?
65 2(3-Fenoxi)-fenilamino- 4H-tieno[2,3-d][1 ,3]oxaz¡n- 4-ona
66 2(2-Fenoxi)-fenilamino- 4H-t¡eno[2,3-d][1 ,3]oxazin- 4-ona
74 ? 2-N-(4-Fenoxi)fenil-N-1- metiletilamino-4H- tieno[2,3-d][1 ,3]oxazin-4-ona
75 2-(4-Fenoxi)feniltio-4H- tieno[2,3-d][1 ,3]oxazin-4-ona
76 6-Ciclopropil-2-(4- fenoxi)fenilamino-4H- tieno[2,3-d][1 ,3]oxazin-4-ona
77 2-(4-Fenoxi)fenilamino-6- trifluorometil-4H-tieno[2,3- d][1 ,3]oxazin-4-ona
78 6-Metoxi-2-(4- fenoxi)fenilamino-4H- . tieno[2,3-d][1 ,3]oxazin-4-ona
79 6-Fenoxi-2-(4- fenoxi)fenilamino-4H- tieno[2,3-d][1 ,3]oxazin-4-ona 80 8 6-Metil-2-(4- m etoxif e ni l)-a m in o-4 H- tieno[2,3-d][1 ,3]oxazin-4-ona
81 2-(4-Fenoxi)feniIamino-6- propil-4H-tieno[2,3- ? d][1 ,3]oxazin-4-ona
82 6-Ciano-2-(4- fenox¡)fen¡lamino-4H- tieno[2,3-d][1 ,3]oxazin-4-ona
83 6-Cloro-2-(4- fenoxi)fenilamino-4H- tieno[2,3-d][1 ,3]oxaz¡n-4-ona
4 6-Metil-2-(4- fenox¡)fen¡lt¡o-4H- t¡eno[2,3-d][1 ,3]oxazin-4-ona
6-Metil-2-(4- fenoxi)fenoxi-4H- t¡eno[2,3-d][1 ,3]oxazin-4-ona
6 6- et¡l-2-(4- fenoxi)fenoxi-4H- tieno[3,2-d][1 ,3]oxazin-4-ona
Los compuestos preferidos de la invención listados anteriormente se extienden a los tautómeros de los mismos, así como también (pero no limitados a) sus sales, ásteres, amidas o profármacos farmacéuticamente aceptables o un derivado opcionalmente con uno o más grupos de lípidos unidos (naturales o sintéticos). La invención se extiende a profármacos de los compuestos mencionados . anteriormente. Un profármaco es cualquier compuesto que pueda ser convertido bajo condiciones fisiológicas o por solvolisis a cualquiera de los compuestos de la invención o a una sal farmacéuticamente aceptable de los compuestos de la invención. Un profármaco puede ser inactivo cuando se administra a un sujeto pero se convierte ¡n vivo a un compuesto activo de la invención. Los compuestos de la invención pueden contener uno o más átomos de carbono estereogénicos (asimétricos) y pueden existir en formas racémicas y opcionalmente activas (enantiómeros). El primer aspecto de la invención incluye todos los enantiómeros y mezclas de los mismos, incluyendo mezclas racémicas. Ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de las fórmulas (I), (la), (II) y (lia) incluyen aquellos derivados de ácidos orgánicos tales como ácido metansulfónico, ácido bencensulfónico y ácido p-toluensulfónico, ácidos minerales como ácido clorhídrico y sulfúrico y similares, dando metansulfonato, bencensulfonato, p-toluensulfonato, clorhidrato y sulfato, y similares, respectivamente o aquellos derivados de bases como bases orgánicas e inorgánicas. Ejemplos de bases inorgánicas adecuadas para la formación de sales de compuestos para esta invención incluyen los hidróxidos, carbonatos y bicarbonatos de amonio, litio, sodio, calcio, potasio, aluminio, hierro, magnesio, cinc y similares. Las sales pueden también estar formadas con base orgánicas adecuadas. Tales bases adecuadas para la formación de sales de adición de base farmacéuticamente aceptables con compuestos de la presente invención incluyen bases que son no tóxicas y bastante fuertes para formar sales. Tales bases orgánicas son ya bien conocidas en la técnica y pueden incluir aminoácidos como arginina y lisina, mono-, di- o trihidroxialquilaminas como mono-, di- y trietanolamina, colina, mono-, di- y trialquilaminas, como metilamina, dimetilamina y trimetilamina, guanidina; N-metilg!ucosamina; N-metilpiperazina; morfolina; etilendiamina; N-bencilfenetilamina; tr¡s(hidroximetil)aminometano; y similares. Las sales pueden prepararse en una forma convencional utilizando métodos bien conocidos en la técnica. Las sales de adición de ácido de los compuestos básicos pueden prepararse disolviendo los compuestos de base libre de acuerdo con los aspectos primero y segundo de la invención en solución acuosa o alcohol acuoso u otros solventes adecuados que contienen el ácido requerido. Cuando un compuesto de fórmula (I), (la), (II) y (lia) contienen una función ácida de una sal base del compuesto puede prepararse haciendo reaccionar el compuesto con una base adecuada. La sal de ácido o de base puede separarse directamente o puede obtenerse al concentrar la solución por ejemplo, por evaporación.- Los compuestos de esta invención pueden también existir en formas solvatadas o hidratadas. Todas las características preferidas del segundo aspecto también se aplican al primer aspecto de la presente invención. Un tercer aspecto de ia invención proporciona un proceso para la elaboración de cualesquiera uno o más de los compuestos o derivados novedosos de acuerdo con los aspectos primero y segundo de la invención. De esta forma, la presente invención proporciona un proceso para la preparación de un compuesto novedoso de Fórmula (I), (la), (II) y/o (lia) cuyo proceso comprende: Proceso (A) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (IV):
con un compuesto de fórmula (V):
C1CY-R' (V)
Proceso (B) ciclizar un compuesto de fórmula (VI)
en donde R es como se definió en lo anterior y R es hidrógeno alquilo de C -6, o: Proceso (C) hacer reaccionar un compuesto de fórmula (VII)
en donde Hai es un haluro, por ejemplo F, Cl, Br o l, con un compuesto de fórmula (VIH):
o. Rl-YH (VID)
Proceso (D): hacer reaccionar un compuesto de fórmula (IX):
en donde X es O, S o NH con un compuesto de fórmula (X):
ICHzR1 (X)
Proceso (E) convertir un compuesto de fórmula (I), (la), (II), y/o (lia) en un compuesto diferente, de fórmula (I), (la), (II), y/o (lia), mediante, por ejemplo, (i) reducción de un compuesto de fórmula (I), (la), (II), y/o (lia) en donde R1 o R2 o cualquier sustituyente en el grupo heterocíclico A contiene un grupo o porción alquenilo o alquinilo, al correspondiente grupo o porción alquilo o alquenilo; o (ii) alquilación de un compuesto de fórmula (l), (la), (II), y/o (lia) donde uno o más sustituyentes en el grupo heterocíclico A representa un átomo de halógeno. El Proceso (A) puede efectuarse haciendo reaccionar un compuesto de fórmula (IV) con un compuesto de fórmula (V) en donde el compuesto de fórmula (V) puede ser un clorotiolformato, un cloroformato o un cloruro de carbamoilo. Además el compuesto de fórmula (V) puede reemplazarse con un isocianato. El proceso se lleva a cabo de preferencia bajo condiciones básicas, por ejemplo utilizando piridina. Se emplea un exceso (más de dos equivalentes) del compuesto de fórmula (V), de modo que él carbamato intermediario formado inicialmente se cicliza mediante reacción con el compuesto en exceso de fórmula (V). Compuestos de fórmula (V) para uso en el proceso (A) pueden prepararse por métodos estándar bien conocidos en la técnica, por ejemplo por la reacción del correspondiente tiol R1SH, alcohol R1OH o amina R1R2NH con fosgeno. El proceso (B) puede efectuarse por ia reacción de un compuesto (VI) en donde R18 es hidrógeno, en presencia de un reactivo de ciclización, por ejemplo un cloroformato de alquilo, por ejemplo como se describe para el proceso (A). Alternativamente un compuesto (VI) puede ser ciclizado mediante el tratamiento con un agente deshidratante tal como ácido sulfúrico concentrado. Alternativamente, pueden prepararse compuestos (VI) en donde R18 es un grupo alquilo, haciendo reaccionar un éster correspondiente a la fórmula (IV) con por ejemplo fosgeno y una base tal como piridina para producir el correspondiente isocianato, seguido por el tratamiento con un alcohol, tiol o amina. Si se desea el éster (es decir donde R18 es alquilo) puede hidrolizarse al correspondiente ácido (R18 = H) utilizando por ejemplo hidróxido de litio en, por ejemplo tetrahidrofurano acuoso o dioxano acuoso. Se apreciará que el proceso (A) también procede por medio de un intermediario de fórmula (VI) y es por lo tanto una variante del proceso (B). El proceso (C) puede efectuarse haciendo reaccionar un compuesto de fórmula (VII) con un tiol, alcohol o amina de fórmula (VIII) en presencia de una base como trietilamina. El proceso (D) puede efectuarse haciendo reaccionar un compuesto de fórmula (IX) con un yoduro de alquilo y carbonato de potasio en un solvente como acetona. Un compuesto de fórmula (IX) puede prepararse mediante ciclización de un compuesto de fórmula (IV), con un fosgeno, tiofosgeno o bromuro de cianógeno. (Véase Krantz et al., J. Med. Chem. 1990, 33(2):464-479). En el proceso (E), la reducción de un grupo alquenilo o alquinilo puede efectuarse por ejemplo mediante hidrogenación catalítica utilizando por ejemplo paladio sobre carbón al 10% en un solvente alcohólico, como etanol, bajo 1 atmósfera de gas hidrógeno. La alquilación de acuerdo con el proceso (E)(ii) puede efectuarse utilizando un proceso de acoplamiento transversal catalizado con un equipo Stille u otro paladio, utilizando por ejemplo tetra-alquilestaño como tetrametilestaño y PhCH2Pd(PPh3)2CI en HMPA a temperatura elevada por ejemplo 50-100°C. Otros haluros o pseudohaluros por ejemplo triflatos pueden emplearse como materiales de partida. Todas las características preferidas de los aspectos primero y segundo también se aplican al tercer aspecto de la presente invención. Un cuarto aspecto de la invención es un compuesto de acuerdo con el primero y/o segundo aspecto de la invención (es decir, compuestos de fórmulas (I), (la), (II), y/o (lia)), para uso en la medicina. De más preferencia, el cuarto aspecto se relaciona con un compuesto del segundo aspecto (es decir, compuestos de fórmulas (la) y/o (lia)) para uso en la medicina. Las características preferidas de los aspectos primero y/o segundo de la invención también se aplican al cuarto aspecto. Detalles adicionales del cuarto aspecto de la invención se establecen en el texto que sigue. Los compuestos de acuerdo con la invención, para uso en la medicina, son principalmente para uso en relación con la prevención y/o tratamiento de una condición médica tal como la obesidad o una enfermedad relacionada con la obesidad tal como hiperlipemia, hiperlipidemia, hiperglicemia (diabetes tipo II), hipertensión, enfermedad cardiovascular, apoplejía, una enfermedad gastrointestinal o una condición gastrointestinal. La invención también se relaciona con la pérdida de peso sin medicina, tal como pérdida de peso cosmética e incluye el mejoramiento de la apariencia corporal en general. Los compuestos de acuerdo con el primero y segundo aspectos de la invención son útiles en estas y otras condiciones debido a su capacidad para inhibir una enzima cuyo modo de acción preferido es catalizar la hidrólisis de una funcionalidad áster (in vivo, como la enzima que se presenta en forma natural). Por lo tanto el cuarto aspecto proporciona un compuesto como se define en el primero y/o segundo aspectos para la prevención o tratamiento de una condición que requiere la inhibición de una enzima cuyo modo de acción preferido es catalizar la hidrólisis de una funcionalidad éster. De preferencia el cuarto aspecto proporciona un compuesto como se define en el primero y/o segundo aspectos de la invención para la prevención o tratamiento de una condición que requiere la inhibición de una enzima implicada en el metabolismo o degradación de una grasa. Claramente, una aplicación importante de la invención es en relación con la pérdida de peso (de todas clases como se describió anteriormente) en humanos. Sin embargo, la invención también se aplica a la pérdida de peso con medicina o sin medicina en cualquier animal. En particular la invención se aplica a cualquier animal cuyo metabolismo de gasa y derivados de grasa implican una enzima cuyo modo de acción preferido es catalizar la hidrólisis de una funcionalidad éster (in vivo, como la enzima que se presenta en forma natural). De esta forma, la invención tiene aplicación veterinaria y es particularmente útil en relación con la pérdida de peso sin medicina o con medicina en animales compañeros tales como gatos y perros domésticos así como también en animales que proporcionan carne para el consumo humano. « La pérdida de peso proporcionará varios beneficios fisiológicos y sicológicos a un sujeto que incluye pero no limitado a la función cardiovascular mejorada, imagen del cuero mejorada, niveles de colesterol reducidos y aumento percibido o actual en energía. Además, la pérdida de peso proporcionar un beneficio en las condiciones que son provocadas por o exacerbadas por la obesidad. Tales condiciones incluyen hiperlipemia, hiperlipidemia, hiperglicemia (diabetes tipo II), hipertensión, enfermedad cardiovascular, apoplejía, enfermedad gastrointestinal y condiciones gastrointestinales. También se cree que los compuestos pueden ser útiles para reducir los niveles de toxinas (por ejemplo dioxinas y PCBs) almacenadas en la grasa corporal. Sin desear limitarse por la teoría, se cree que incrementando la cantidad de grasa no digerida pasando a través del cuerpo mejora la difusión de toxinas de la grasa almacenada en el cuerpo en las grasas en la sangre, y por lo tanto en el intestino. El cuarto aspecto de la invención proporciona además el uso de compuestos como se define en el primero y segundo aspectos de la invención en la elaboración de un medicamento para la prevención o tratamiento de la obesidad o un trastorno relacionado con la obesidad. De preferencia el cuarto aspecto proporciona el uso de compuestos como se definió en el segundo aspecto para este uso. Todas las características preferidas del primero, segundo y tercero aspectos también se aplican al cuarto aspecto de la presente invención. Un quinto aspecto de la invención se relaciona con un compuesto de acuerdo con el primero y/o segundo aspectos de la invención para uso en la inhibición de una enzima cuyo modo de acción preferido es catalizar la hidrólisis de una funcionalidad éster. Esto incluye tanto los usos ¡n vivo como in vitro y otros usos como usos industriales. Tal enzima es una que cataliza la falla de un substrato que contiene una funcionalidad éster por la adición de agua, resultando en el desdoblamiento de un enlace químico. Tales enzimas son implicadas en procesos clave en el cuerpo. Las enzimas de acuerdo con esta invención incluyen lipasas (ésteres de ácido graso hidrolizados), estearasas (ésteres hidrolizados) y fosfatasas (fosfato ésteres hidrolizados). La enzima es de preferencia una lipasa. Las lipasas incluyen lipasa pancreática, lipasa gástrica, lipasa lipoproteínica, lipasa lingual, lipasa tisular adiposa, lipasa de hormona sensible, fosfolipasa A1, A2, B, C, D etc., lipasa hepática y otras lipasas de triacilo, diacilo y monoacilglicerol en el cuerpo de mamíferos. Muchas de tales lipasas similares son también conocidas en las plantas, hongos y microorganismos. También son cubiertas enzimas estearasa y enzimas fosfatasa. Las enzimas estearasa incluyen estearasa de hígado de cerdo, estearasa de colesterilo, estearasa de retinilo, estearasa de alquil-2-acetilglicerofosfocolina, hidrolasas de éster carboxílico, y estearasa de coiesterol. Las enzimas fosfatasa incluyen fosfatasas de serina/treonina PP1, PP2 y PP3, fosfatasa de fosfoproteína, fosfatasa de miosina de cadena ligera, fosfoproteína 2C proteínica, y fosfatasa de tirosina proteínica. El quinto aspecto de la invención tiene aplicaciones importantes. Incluye pruebas y métodos de diagnóstico y el control e inhibición de las enzimas no deseadas, de preferencia las lipasas, en cualquier proceso o en cualquier producto. Los procesos o productos, que de preferencia implican una lipasa, incluyen: procesamiento de productos de la agricultura (por ejemplo semillas oleaginosas), recuperación y aislamiento de enzimas a partir de procesos biotecnológicos (por ejemplo que implican lisis de microorganismos), la elaboración y extracción de petróleo crudo (especialmente aceite y plásticos), la elaboración industrial de triglicéridos u otras grasas, elaboración de géneros para asistencia médica que comprenden surfactantes, jabón o detergente (por ejemplo,' aceites para baño, cremas), la elaboración y procesamiento de Iiposomas (por ejémplo productos para la asistencia médica, diagnósticos, genoterapia), el tratamiento de desechos industriales (por ejemplo tratamiento de papel efluente) y prevenir la degradación de productos alimenticios que comprenden un grasa (por ejemplo procesamiento de chocolate). De esta forma, la invención también se relaciona con esos productos y procesos, por ejemplo un producto alimenticio que comprende un compuesto de acuerdo con el primer aspecto de la invención, en particular productos alimenticios que tienen un alto contenido de grasa tales como pasteles, biscochos, productos de pastelería y similares y productos de chocolate. Las características preferidas del quinto aspecto de la invención, incluyendo una enzima cuyo modo de acción preferido es catalizar la hidrólisis de una funcionalidad éster (in vivo, como la enzima que se presenta en forma natural) son como se discutieron para los aspectos previos de la invención. Todas las características del primero, segundo, tercero y cuarto aspectos también se aplican al quinto aspecto de la presente invención. Un sexto aspecto de la invención proporciona una composición que comprende un compuesto novedoso de acuerdo con el primero y segundo aspectos de la invención, en combinación con un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable. Los portadores y/o diluyentes adecuados son bien conocidos en la técnica e incluyen almidón, manitol, lactosa, estearato de magnesio, sacarina sódica, talco, celulosa, glucosa, sucrosa, (u otra azúcar), carbonato de magnesio, gelatina, aceite, alcohol, detergentes, emulsionantes o agua (de preferencia estéril) de grado farmacéutico. La composición puede ser una preparación mezclada de una composición o puede ser una preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencia! (incluyendo la administración). Los compuestos de acuerdo con la invención para utilizarse en las indicaciones mencionadas anteriormente pueden administrarse por cualquier método conveniente, por ejemplo por administración oral (incluyendo por inhalación), parenteral, mucosal (por ejemplo, bucal, sublingual, nasal), rectal o transdérmica y por consiguiente las composiciones adaptadas. Para la administración oral, los compuestos pueden formularse como líquidos o sólidos, por ejemplo soluciones, jarabes, suspensiones o emulsiones, tabletas, cápsulas y pastillas.
Una formulación líquida consistirá en general de una suspensión o solución del compuesto o sal fisiológicamente aceptable en un portador o portadores líquidos acuosos o no acuosos adecuados, por ejemplo agua, etanol, glicerina, polietilenglicol o un aceite. La formulación puede también contener un agente de suspensión, preservativo, agente saborizante o colorante. Una composición en la forma de una tableta puede prepararse utilizando cualquier portador o portadores farmacéuticos adecuados habitualmente utilizados para preparar formulaciones sólidas. Ejemplos de tales portadores incluyen estearato de magnesio, almidón, lactosa, sucrosa y celulosa microcristalina. Una composición en la forma de una cápsula puede prepararse utilizando procedimientos de encapsulacion habituales.
Por ejemplo, polvos, gránulos o pellets que contienen el ingrediente activo pueden prepararse utilizando portadores estándar y luego se llenan en una cápsula de gelatina dura, alternativamente, una dispersión o suspensión puede prepararse utilizando cualquier portador o portadores farmacéuticos adecuados, por ejemplo gomas acuosas, celulosas, silicatos o aceites y la dispersión o suspensión se llenan luego en una cápsula de gelatina blanda. Las composiciones para la administración oral puede diseñarse para proteger el ingrediente activo contra la degradación como pasar a través del tracto digestivo, por ejemplo por un revestimiento exterior de la formulación en una tableta o cápsula. Las composiciones parenterales típicas consiste de una solución o suspensión del compuesto o sal fisiológicamente aceptable en un portador acuoso o no acuoso estéril o aceite parenteralmente aceptable, por ejemplo polietilenglicol, polivinilpirrolidona, lecitina, aceite de cacahuate o aceite de sésamo. Alternativamente, la solución puede ser liofilizada y luego reconstituida con un solvente adecuado justo antes de la administración. Las composiciones para la administración nasal u oral pueden convenientemente formularse como aerosoles, gotas, geles y polvos. Las formulaciones en aerosol típicamente comprenden una solución o suspensión fina de la sustancia activa en un solvente acuoso o no acuoso fisiológicamente aceptable y son normalmente presentadas en cantidades únicas o de varias dosis en forma estéril en un recipiente sellado, que puede tomar la forma de un cartucho o repuesto para uso con un dispositivo atomizante. Alternativamente el recipiente sellado puede ser un dispositivo surtidor unitario tal como un inhalador nasal de dosis simples o un dispensador en aerosol apropiado con una válvula medidora que es destinada para disponer una vez los contenidos del recipiente que han sido agotados. Cuando la forma de dosificación comprende un dispensador en aerosol, éste contendrá un propelente farmacéuticamente aceptable. Las formas de dosificación en aerosol también pueden tomar la forma de una pulverizador de bomba. Las composiciones adecuadas para la administración bucal o sublingual incluyen tabletas y pastillas, en donde el ingrediente activo es formula con un portador tal como azúcar y acacia, tragacanto o gelatina y glicerina. Las composiciones para la administración rectal o vaginal están convenientemente en la forma de supositorios (que contienen un supositorio base convencional tal como manteca de cacao), pesarios, lengüetas vaginales, espumas o enemas. Las composiciones adecuadas para la administración transdérmica incluyen ungüentos, geles, parches e inyecciones que incluyen inyecciones en polvo. Convenientemente la composición está en forma de dosis unitarias tales como tableta, cápsula o ampolla.
Las composiciones del sexto aspecto de la invención son útiles en la prevención y/o tratamiento de la obesidad, trastorno relacionado con la obesidad, otras pérdidas de peso médico y pérdida de peso relacionado con la medicina. Las características preferidas de este aspecto de la invención son como se descrió anteriormente para los aspectos primero y quinto de la invención. Un séptimo aspecto de ia invención proporciona un proceso para la elaboración de una composición de acuerdo con el sexto aspecto de la invención. La elaboración puede llevarse a cabo por técnicas estándar bien conocidas en la técnica e implica la combinación de un compuesto de acuerdo con el segundo aspecto de la invención y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable. La composición puede estar en cualquier forma incluyendo una tableta, un líquido, una cápsula y un polvo o en la forma de un producto alimenticio, por ejemplo un alimento funcional. En el último caso el producto alimenticio puede actuar por sí mismo como, el portador farmacéuticamente aceptable. Todas las características preferidas del primero, segundo, tercero, cuarto, quinto y sexto aspectos también se aplican al séptimo aspecto de la presente invención. . Un octavo aspecto de la invención proporciona un método para la prevención o tratamiento de la obesidad o un trastorno relacionado con la obesidad, el método comprende la administración de un compuesto de acuerdo con el primer aspecto o el segundo aspecto de la invención, de preferencia en combinación con un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable (como por el sexto aspecto de la invención). Los trastornos relacionados con la obesidad incluyen hiperlipemia, hiperlipidemia, hiperglicemia, hipertensión, enfermedad cardiovascular, apoplejía, enfermedad gastrointestinal y condiciones gastrointestinales. El compuesto o composición es de preferencia administrado a un paciente que necesita del mismo y en una cantidad suficiente para prevenir y/o tratar los síntomas de la condición, trastorno o enfermedad. Para todos los aspectos de la invención, particularmente médicos, la administración de un compuesto o composición tiene un régimen de dosificación que será determinada últimamente por el médico que lo atiende y tomará en consideración tales factores como el compuesto que es empleado, tipo de animal, edad, peso, severidad de los síntomas, método de administración, reacciones adversas y/o otras contraindicaciones. Los intervalos de dosificación definida específica pueden determinarse por pruebas clínicas de diseño estándar con progreso del paciente y recuperación que es controlada completamente. Tales pruebas . pueden utilizar un diseño de dosis en aumento utilizando un bajo porcentaje de la dosis tolerada máxima en animales como la dosis de partida en el hombre. Los compuestos fisiológicamente aceptables de la invención normalmente se administrarán en un régimen de dosis al día (para un paciente adulto) de, por ejemplo, una dosis oral de entre 1 mg y 2000 mg, de preferencia entre 30 mg y 1000 mg, por ejemplo, entre 10 y 250 mg o una dosis intravenosa, subcutánea o intramuscular de entre 0.1 mg y.100 mg, de preferencia entre 0.1 mg y 50 mg, por ejemplo entre 1 y 25 mg del compuesto de la fórmula (I) o su sal fisiológicamente aceptable calculada como la base libre, siendo administrado el compuesto de 1 a 4 veces por día. Adecuadamente los compuestos se administrarán durante un período de terapia continua, por ejemplo durante una semana o más. Todas las características preferidas del primero, segundo, tercero, cuarto, quinto, sexto y séptimo aspectos también se aplican al octavo aspecto de la presente invención. Un noveno aspecto de la invención proporciona un método cosmético (no terapéutico) para mantener un peso dado, o para pérdida de peso cosmético, el método comprende la administración dé un compuesto de acuerdo con el primero y segundo aspectos de la invención, de preferencia en combinación con un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable (como por el sexto aspecto de la invención). El compuesto o composición de preferencia se administra a un sujeto que necesita o desiderátum del mismo y en una cantidad suficiente para mantener un peso dado o para pérdida de peso cosmético. El octavo y noveno aspecto de la invención se relacionan con métodos que son aplicables a seres humanos y otros animales, en particular animales compañeros (tales como perros y gatos) y otros animales que proporcionan carne para consumo humano, tal como ganado, puercos y ovejas (todos de cualquier edad). Todas las características preferidas del primero, segundo, tercero, cuarto, quinto, sexto, séptimo y octavo aspectos también se aplican al noveno aspecto de la presente invención. Descripción Detallada de la Invención La invención será descrita ahora con referencia a los siguientes ejemplos no limitantes. EJEMPLOS Síntesis de compuestos novedosos de acuerdo con la invención La descripción anterior detalla compuestos, composiciones, métodos y usos específicos que pueden emplearse para practicar la presente invención. Sin embargo, aquellos expertos en la técnica sabrán cómo utilizar métodos seguros alternativos para dirigirse a modalidades alternativas de la invención que están abarcadas en la presente. Síntesis de 2-fenilamino-4H-tieno[2,3-d][1 ,3]oxazin-4-ona
2 20% de TFA en C¾Cl2
4 3 Una solución de 2-aminotiofen-3-carboxilato de ter-butilo (1) (0.1 g, 0.5 mmol) en piridina (1 mL) se trató con isocianato de fenilo (65 µ?_, 0.6 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. La mezcla se vertió luego en solución de ácido cítrico al 10% (10 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 10 mL). La fase orgánica combinada se secó (MgS04) y se evaporó para dar un sólido de color crema. Esta se trituró con acetato de etilo y se filtró para eliminar un sólido de color blanco (25 mg) que se enjuagó con acetato de etilo y se desechó. El filtrado se evaporó luego bajo presión reducida y el sólido resultante se trituró con ciclohexano para dar ter-butilurea como un polvo de color gris-blanco (0.13 g). m/z (ES+) 319 (MH+). ' La ter-butilurea cruda (2) (50 mg, asume 0.19 mmol) se agitó en una solución de CF3C02H al 20% (TFA) en diclorometano (10 mL) a temperatura ambiente durante 3 horas. El solvente se evaporó luego para dar un polvo de color blanco que se utilizó sin ninguna purificación adicional, m/z (ES + ) 263 (MH+). La urea de ácido crudo (3) se suspendió en diclorometano (1 mL) y se agregó DMF (3-5 gotas) hasta que se logró la disolución. Se agregó clorhidrato de 1 -(3-dimet¡lam¡no-propil)-3-etilcarbodiimida (EDC, 44 mg, 0.23 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas, se vertió en agua y se extrajo con diclorometano (3 x 10 mL). Los materiales orgánicos combinados se lavaron con 2 porciones de salmuera, se secaron (MgS04) y se evaporó el solvente para dar un polvo de color café. Este se disolvió en THF, se adsorbió en sílice y se purificó por cromatografía para producir el compuesto del título (4) (éter de petróleo:acetato de etilo 85:15 más unas pocas gotas de Et3N). Rendimiento: 15 mg, 32%; Rf 0.34 (éter de petróleo:EtOAc 85:15); H(400 MHz, CDCI3) 6.87 (1H, d, J 5.8, Th-H), 7.00 (1H, s, NH), 7.11 (1H, t, J 7.5, Ph-H), 7.23 (1H, d, J 5.8, Th-H), 7.33 (2H, t, J 7.9, Ph-H), 7.52 (2H, d, J 8.1, Ph-H); m/z (ES+) 244.9 (MH + ). Esquema de reacción para la preparación de 2-(4-FenoxO-fenilamino-4H-tieno|'2,3-dlí1 ,31-oxazin-4-ona IV (compuesto 5)
Ter-butiléster del ácido 2-amino-tiofen-3-carboxíIico I. Una solución de 1 ,4-ditiano-2,5-diol (1.1 g) y cianoacetato de t-butilo (2.2 mi) en tetrahidrofurano seco (20 mi) se calentó a ~45°C, luego se trató lentamente con trietilamina (2 mi). La temperatura aumentó a ~54°C y se desarrolló una coloración amarilla. La mezcla se agitó a ~50°C durante 75 minutos adicionales tiempo durante el cual se oscureció el color gradualmente y se volvió pardusco castaño. Se agregó agua (200 mi), luego se acidificó la mezcla con ácido acético y se extrajo con éter. Los extractos de éter se lavaron con agua, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron in vacuo. Se eliminó ácido acético residual por destilación azeotrópica con tolueno. El líquido de color café resultante se identificó como el producto deseado por RMN. La muestra se utilizó sin otra purificación. RMN (CDCI3) d (ppm): 1.6 (9H, s); 5.85 (2H, s amplio); 6.2 (1H, d); 6.95 (1H, d). Ter-butiléster del ácido 2-[3-(4-fenoxi-fenil)-ureido]-tiofen-3-carboxílico II A una solución de 2-amino~tiofeno-3-carboxilato de t-butilo (0.6 g) en piridina seca (20 mi) se agregó 4-fenoxifenilisocianato (0.84 g). La mezcla se agitó durante 48 horas, luego la solución de color oscuro se vertió en agua (200 mi). La mezcla agitada se acidificó con ácido acético y se solidificó lentamente un precipitado para dar un sólido de color café. Después de aproximadamente 1 hora, el sólido se filtró, se secó in vacuo y se recristalizó a partir de acetonitrilo, dando un sólido blanquecino. P.F.=203-205°C. Rendimiento = 0.6 g (48.8%). Ácido 2-[3-(4-fenoxi-fenil)-ureido]-tiofeno-3-carboxílico III Se disolvió el éster II (0.49 g) en 40 mi de diclorometano seco, y se agregó 0.5 mi de ácido trifluoroacético. Después de 16 horas, la ccf de una muestra de reacción incompleta mostrada. La solución se calentó a reflujo durante 16 horas tiempo por el cual no quedó éster por ccf. La solución se concentró hasta sequedad in vacuo y el sólido restante se recristalizó a partir de acetonitrilo. P.F. = 195-198°C. Rendimiento = 0.32 g (75.6%). 2-(4-Fenoxi-fenilamino)-4H-tieno[2,3-d][1 ,3]oxazin-4-ona IV A una solución del ácido llí (266 mg) en diclorometano seco (40 mi) y ?,?-dimetilformamida seca (5 mi) se agregó clorhidrato de 1 -[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida (0.2 g). La solución se agitó a temperatura ambiente durante la noche, luego se concentró bajo presión reducida. El líquido residual se diluyó con agua (150 mi). Después que se agitó durante 1 hora, el precipitado de color blanco se extrajo en acetato de etilo. Las capas orgánicas se separaron, se lavaron con agua, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron \ñ vacuo, dando un sólido blanquecino. Este se recristalizó a partir de tolueno para dar un sólido de color blanco. P.F. = 206-210°C. Rendimiento = 129 mg (51.2%). Esquema de reacción para la preparación de 2-(4-FenilsulfaniQ-fenilamino-4H-tienor2,3-dl-|'1 ,3Toxazin-4-ona VII (compuesto 161
Ter-butiléster del ácido 2-[3-(4-fenilsulfanilfenil)-ureido]tiofeno-3-carboxílico V Una solución de 4-feniltioanilina (0.21 g) en diclorometano seco (30 mi) se agitó a temperatura ambiente mientras que se agregó trifosgeno (0.1 g) seguido por trietilamina (0.5 mi). La mezcla se llevó a reflujo durante 1 hora, luego se enfrió a temperatura ambiente. El solvente se eliminó por evaporación rotativa y el residuo se disolvió en piridina seca (30 mi). A esta solución se agregó 2-aminot¡ofeno-3-carboxilato de t-butilo (0.2 g). Esta mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 48 horas. La solución se diluyó con agua y se acidificó con ácido acético. Los extractos de acetato de etilo se separaron, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se evaporaron hasta sequedad bajo presión reducida para dar un aceite de color café, viscoso. Este aceite se purificó por cromatografía de columna de evaporación instantánea para dar un sólido de color blanco que se utilizó sin otra purificación. Rendimiento = 0.14 g (32.5%). RMN (CDCI3) d (ppm): 1.6 (9H, s); 6.6 (1H, d); 6.7 (1H, s amplio); 7.1 (1H, d); 7.2 (1H, m); 7.3 (4H, m); 7.4 (4H, m); 10.7 (1H, s amplio). Ácido 2-[3-(4-fenilsulfanilfenilureido]tiofeno-3-carboxíiico VI Una solución del éster V (125 mg) en diclorometano seco (50 mi) se agitó a temperatura ambiente con ácido trifluoroacético (5 mi) durante la noche. La solución se concentró hasta sequedad in vacuo y el residuo de color gris se recristalizó a partir de acetonitrilo. El producto se obtuvo como un sólido de color blanco. Rendimiento = 53 mg (48.6%). RMN (CDCI3, DIVISO) d (ppm): 6.6 (1H, d); 7.2 (5H, m); 7.4 (4H, m); 7.55 (2H, d); 9.85 (1H, s amplio); 10.55 (1H, s amplio). 2-(4-FenilsulfaniIfen¡l)-4H-tieno[2,3-d][1,3]oxazin-4-ona VII A una solución del ácido VI (52 mg) en diclorometano seco (20 mi) y N.N-dimetilformamida seca (2 mi) se agregó clorhidrato de 1 -[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida (0.15 g). La mezcla se agitó durante la noche. Los materiales volátiles se eliminaron por evaporación rotativa, luego se vertieron los residuos en agua y se agitaron durante 0.5 horas antes de ser extraídos en éter. Estas capas orgánicas se separaron, se lavaron bien con agua, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron hasta sequedad. El sólido de color amarillo pálido resultante se recristalizó a partir de tolueno para dar un sólido de color amarillo muy pálido. P.F. = 203-204°C. Rendimiento = 24 mg (49.0%). Esquema de reacción para la preparación de 6-Metil-2-(4-fenoxi)- 4H-fenilamino-tienor2,3-dU1 ,31oxazin-4-ona XI (compuesto 9)
X XI Ter-butiléster del ácido 2-amino-5-metiltiofeno-3-carboxílico VIII A una suspensión de cianoacetato de metilo (1.4 g) y azufre (0.5 g) en ?,?-dimetilformamida seca (3 mi) se agregó trietilamina seca (1.01 g). Se agregó en gotas propionaldehído (1.24 g) a la mezcla de reacción, luego se calentó la mezcla de reacción a 70°C durante 1 hora. La mezcla se vertió en agua y se extrajo con éter. Los extractos.de éter combinados se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron in vacuo. El material crudo se purificó por cromatografía de evaporación instantánea en gel de sílice (éter de petróleo/éter 9/1) para dar el compuesto del título. Rendimiento = 1.54 g (72%). R N (CDCI3): 1.5 (9H, s); 2.25 (3H, s); 5.65 (2H, s amplio); 6.55 (1H, s). Ter-butiléster del ácido 5-metil-2-[3-(4-fenoxifenil)ureido]-tiofeno-3-carboxílico IX A una solución de 2-amino-tiofeno-3-carboxilato de t-butil-5-metilo (0.5 g) en piridina seca (5 mi) se agregó 4-fenoxifenilisocianato (0.31 g). La mezcla se agitó durante la noche, luego se evaporó la solución. El sólido se trituró en diisopropiléter y el precipitado se filtró. P'.F. = 130-132°C. Rendimiento = 0.68 g (71%). Ácido 5-metil-2-[3-(4-fenoxifenil)ureido]tiofeno-3-carboxílico Una solución del éster IX (0.42 g) en diclorometano seco (50 mi) se llevó a reflujo dos horas con ácido trifluoroacético (4 mi).
Cuando se indicó la ccf sin iniciador restante, ia solución se concentró hasta sequedad in vacuo para dar un residuo sólido. Rendimiento'= 0.4 g (100%) P.F. = 213-215°C. 6-Metil-2-(4-fenoxifenilamino)-4H-tieno[2,3-d][1 ,3]oxazin-4-ona XI A una solución del ácido X (150 mg) en diclorometano seco (10 mi) y ?,?-dimetilformamida seca (15 mi) se agregó clorhidrato de T-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida (82 mg). La solución se agitó a temperatura ambiente durante la noche, luego se concentró bajo presión reducida. Se agregó agua al líquido residual y el precipitado de color blanco formado, se filtró. Este se recristalizó a partir de tolueno para dar un sólido de color blanco. Rendimiento = 26 mg (18%). RMN (DMSO): 2.65 (3H, s); 7.15 (3H, m); 7.32 (3H, m); 7.6 (2H, t); 7.8 (2H, t); 10.85 (1H, s). Métodos y Resultados de Pruebas Biológicas Compuestos de Prueba Los compuestos de tieno-oxazinona utilizados en las siguientes pruebas se identificaron por el número de referencia asignado en la Tabla 1 anteriormente. Medición de la actividad de lipasa utilizando un ensayo de tinta colorimétrica de quinina-diimina La actividad inhibidora de los compuestos seleccionados para la lipasa pancreática se midió en el siguiente ensayo disponible a partir de Sigma Ltd (Lipase-PS™, número de catálogo 805-A):
Lipasa pancreática 1 ,2-dibutirina > 2-monoglicérido
+ ácido graso" Lipasa de monoglicérido 2-monoglicérido — > gücerol + ácido graso Cinasa de gücerol gücerol + ATP -> glicerol-3-fosfato + ADP Fosfato oxidasa de gücerol Glicerol-3-fosfato + 02 > fosfato de dihidroxiacetona + H202 Peroxidasa H202 + 4-AAP + TOOS -" .- > tinta de quinina-diimina + 4H20 El gücerol liberado de la acción de la lipasa pancreática y de monoglicérido se oxidó para liberar H202. La etapa de reacción de peroxidasa produjo luego una tinta de quinina que es rosa en color y absorbe luz a una longitud de onda de 550 nm. Inhibidor Los compuestos de prueba individuales se disolvieron en DMSO (sulfóxido de dimetilo) a 10 mM. Se utilizó DMSO para evitar cualesquier problemas con compuestos que son insolubles en agua. Para compuestos individuales, el IC50 (concentración en cuya actividad lipasa es inhibida a una mitad del máximo) se calculó midiendo la actividad inhibidora a partir de las curvas de respuesta logarítmica-dosis utilizando un intervalo de concentraciones inhibidoras. Medición de la actividad de la enzima lipasa utilizando un método de titulación NaOH La actividad inhibidora del compuesto seleccionado para la lipasa pancreática se midió en el ensayo descrito en Pasquier et al; 1996, Vol. 7, Nutritional Biochemistry, 193-302. Las curvas de respuesta/logarítmica de dosis se construyeron utilizando un intervalo de concentraciones inhibidoras. Medición de la actividad de colesterol esterasa Se disolvió colesterol esterasa pancreática bovino (Sigma Cat. No. C5921) en 1 mg/ml en MOPS 100 mM, CaCI2 2 mM, pH 7.3. Se almacenaron rutinariamente compuestos seleccionados como soluciones madre 5 mM disueltas en DIVISO (sulfóxido de dimetilo) a -20°C. Antes de emplearse, la solución madre se diluyó además en DMSO al 40% (MOPS 100 mM al 60%, CaCI2 2 mM, pH 7.3) para dar una serie de diluciones (x20, x100, x200, x1,000, x2,000, x10,000, x20,000 y x100,000). El sustrato de ensayo contenía butirato de p-nitrofenilo (Sigma Cat. No. N9876) MW 209.2. Densidad 1.2 y ácido taurocólico, sal sódica (Sigma Cat. No. T 4009) MW 537.7. Se preparó el sustrato de ensayo disolviendo 43 mg de ácido taurocólico (concentración final 6 mM) + 87 µ? de butirato de p- nitrofenilo (concentración final 40 µ?) + 50 µ? de Tritón X-100 al 20% (concentración final 0.08%) en 10 mi de MOPS 100 mM, CaCI2 2 mM, pH 7.3. El substrato se agitó para disolver los ingredientes y se centrifugó hasta clarificar. El ensayo se preparó mezclando 10 µ? de enzima, 50 µ? de inhibidor y 190 µ? de substrato en una placa ELISA de 96 pozos por triplicado. Las placas se incubaron a 37°C en. un lector de Microplacas BioRad Benchmark y el régimen de desarrollo de color durante un período de 10 minutos se midió con relación a aquel de la enzima sin inhibidor. Medición de la actividad de tripsina Se disolvió tripsina porcina (Boehringer) .en una concentración de 1 m.g/ml en MOPS 100 mM de (ácido 3-[N-morfolino]propanosulfónico) pH 7.3 que contenía CaCI2 2 mM. Antes de utilizarse, la enzima se diluyó 500 veces para dar una concentración final de 2 pg/ml. Compuestos seleccionados se almacenaron rutinariamente como soluciones madre 5 mM disueltas en DMSO (sulfóxido de dimetilo) a -20°C. Para el ensayo, se descongelaron alícuotas y una serie de diluciones (x100, x200, x1,000, x2,000, x10,000, x20,000 y x100,000) hechos en MOPS 100 mM, pH 7.3 que contenía CaCI2 2 mM. El substrato Bz-Phe-Val-Arg-pNA (Benzoil-fenilalanil-valil-arginina-p-nitroanilida) se disolvió en DMSO para dar una solución 10 mM. Inmediatamente antes de utilizarse, el substrato se diluyó con 0.3 mM (30 µ?/ml) en MOPS 100 mM que contenía CaCI22 M. El ensayo se fijó hasta por triplicado en una placa ELISA de 96 pozos. Se agregaron secuencialmente 10 µ? de tripsina 2 pg/ml, 26 µ? de inhibidor diluido y 190 µ? de substrato. Las placas se incubaron luego a 37°C en un Lector de Microplacas BioRad Benchmark. La velocidad de liberación de p-nitroanilina se midió a 405 nM durante 10 minutos con relación a aquella de la enzima sin inhibidor. Resultados Un intervalo de compuestos estándar se ensayaron en el ensayo de tinta colorimétrica de quinina que proporciona un método rápido para medir la actividad inhibidora de lipasa. Ninguno de los compuestos probados se interfirieron con la reacción colorimétrica es decir, no dieron falsos resultados positivos. Se observó un intervalo de actividades inhibidoras para el compuesto probado, indicando que aquellos compuestos son inhibidores de la lipasa pancreática humana. Los compuestos 1, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 15, 16, 18, 19, 20, 21, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 38, 40, 41, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 y 50 presentaron un IC50 <100 nM. Se probaron compuestos seleccionados de tieno-oxazinona en el ensayo de titulación de NaOH. En este ensayo, se registró la actividad de la lipasa pancreática porcina en un sistema que contenía micelas lípidas. Estas condiciones son por lo tanto similares a aquellas encontradas en el tracto gastrointestinal. Un intervalo de actividad inhibidoras se observaron para los compuestos probados de tieno-oxazinona en este ensayo, indicando que esos compuestos son inhibidores de la lipasa pancreática porcina. Los compuestos 1, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 15, 16, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 y 50 tuvieron un valor IC50 de menos que o igual a 1 µ?. Los resultados demuestran que una variedad de tieno-oxazinonas seleccionadas son inhibidores de la digestión de grasa y que esos compuestos pueden ser particularmente adecuados para el tratamiento de la obesidad. La actividad de varios compuestos seleccionados de tieno-oxazinona contra la tripsina y colesterol esterasa se midió en los ensayos descritos anteriormente. Estos compuestos no tuvieron actividad inhibidora respecto a la tripsina o colesterol esterasa. De esta forma, los compuestos seleccionados de tieno-oxazinona son inhibidores de la lipasa altamente selectivos. Mientras que !a modalidad preferida de la invención ha sido ¡lustrada y descrita, se apreciará que varios cambios pueden hacerse en la presente sin apartarse del espíritu y alcance de la invención.