MXPA04000858A - Oligopeptidos de crecimiento osteogenico como estimuladores de la hematopoyesis. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se refiere a una composicion farmaceutica que comprende como un ingrediente efectivo un oligopeptido identico o analogo a la porcion C-terminal de OGP, que tiene actividad estimuladora en la produccion de celulas hematopoyeticas. Los oligopeptidos preferidos que se usan son Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly, Tyr-Gly-Phe-His-Gly, Gly-Phe- Gly-Gly o Met-Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly. De manera mas especifica, estos oligopeptidos mejoran el injerto de transplantes de medula osea, reconstruccion hematopoyetica, re-poblacion de medula osea y movilizacion de celulas madre, perifericas, de manera mas preferente despues de la quimioterapia o irradiacion. La invencion proporciona ademas metodos de tratamiento y de uso de estos oligopeptidos en la preparacion de composiciones farmaceuticas.

Description

OLIGOPÉPTIDOS DE CRECIMIENTO OSTEOGENICO COMO ESTIMULANTES DE LA HEMATOPOYESIS Campo de la Invención La presente invención se refiere al uso de oligopéptidos que corresponden a la porción C-terminal de OGP (oligopéptido de crecimiento osteogénico) , como estimuladores de la hematopoyesis. De manera más específica, estos oligopéptidos mejoran el injerto de transplantes de médula ósea, la reconstrucción hematopoyética, la repoblación de médula ósea y el número de células madre en circulación, particularmente después de quimioterapia o irradiación. La invención proporciona además métodos para usar estos oligopéptidos y composiciones farmacéuticas que los comprenden.

Antecedentes de la Invención Las interacciones biológicas y bioquímicas entre el hueso y la médula ósea están lejos de ser completamente entendidas. Sin embargo, estudios recientes confirman el papel de las células osteogénicas derivadas de la médula ósea en el soporte del desarrollo de las células hematopoyéticas [Teichman, R.S., et al., Hematol . 4:421-426 (2000) ] . Los estudios de transplante de médula ósea confirman las interacciones bi-direccionales entre los dos sistemas. El daño por ablación o irradiación de la médula ósea activa una reacción osteogénica momentánea, local, inicial [Amsel, S., et al., Anat . Rec. 164:101-111 (1969); Patt, H.M., y Maloney, M.A. , Exp. Hematol . 3:135-148 (1975)] . En esta fase ¦ osteogénica , se forman trabéculas en la cavidad de la médula. Las trabéculas son momentáneas y se resorben durante la reconstitución de la médula hematopoyética . Además, en donadores humanos de médula ósea, se registró un incremento en los marcadores séricos de formación de hueso, osteocalcina y fosfatasa alcalina, después de la remoción de una porción sustancial de médula ósea iliaca [Foldes, J., et al., J. Bone Miner. Res. 4:643-646 (1989) ] . La hipótesis que los osteoblastos humanos soportan a las células progenitoras hematopoyéticas humanas es muy intrigante: estas células producen factores que estimulan directamente la formación de colonias hematopoyéticas sin la adición de factores de crecimiento suministrados de forma exógena. En realidad, los osteoblastos segregan varias citocinas incluyendo el factor de estimulación de colonias de granulocitos (G-CSF) , factor de estimulación de colonia de granulocitos -macrófagos (GM-CSF) , factor de necrosis de tumor (TNF) e interleucina 6 (IL-6) . Además, los osteoblastos cultivados soportan el mantenimiento del fenotipo inmaduro en células madre hematopoyéticas [Taichman, et al., Blood 87:518-524 (1996)]. Varios de estos factores de crecimiento mejoran la re-población in vivo de la médula ósea y la movilización de las células madre periféricas después de la quimioterapia de alta dosis. Entre estas, G-CSF, GM-CSF, IL-3 ( Interleucina-3) y SCF (Factor de Células Madre) se han evaluado de manera extensiva [Bungart , B., et al., Br. J. Haematol . 76:174 (1990); Lant, T., et al., Blood 85:275 (1995); Brugger, W., et al., Blood 79:1193 (1992); Molinex, G. , et al., Blood 78:961 (1991)] y muchos otros, tal como FLT-3, están bajo estudio para uso clínico [Ashihara, E.f et al., Europ. J. Haematol. 60:86 (1998)]. Los avances en este campo en años recientes, han permitido un entendimiento de los varios aspectos fisiológicos de la función de la médula ósea. Además, la capacidad para modular la diferenci-ación y proliferación de los precursores hematológícos está en la base de las terapias más innovadoras tal como transplante de células madre de sangre periférica, transfección génica y expansión ex vivo de células madre. A pesar de este progreso impresionante, no se han puesto en claro completamente varios aspectos de la fisiología de las células madre, y se sospecha que varios factores, tal como relacionados a membrana celular o soluble, están comprendidos' en la proliferación/diferenciación fisiológica o patológica de las células de la médula ósea. El número creciente de agentes mostrados como que son capaces de regular la hematopoyesis soportan la cuestión crítica con respecto a la redundancia o sutilidad de los reguladores hematopoyéticos [Metcaff, D., et al., Blood 82:3515 (1993)]. Además del papel de los factores de crecimiento, clásicamente definidos, varios agentes biológicos y tipos de células pueden mejorar o modificar las estrategias terapéuticas In vivo y ex vivo. Las células endoteliales derivadas de médula ósea humana soportan la proliferación y diferenciación a largo plazo de progenitores mieloides y megacariocíticos [Rafi,i, S., et al., Blood 86:3353 (1995)]; las células auxiliares pueden soportar la recuperación hematológica después del transplante de la médula ósea [Bonnet, D. , et al., Bone Marrow Transp. 23:203 (1991)]; y, de manera aun más interesante para los presente propósitos, los osteoblastos pueden mejorar el injerto después del transplante de médula ósea, no relacionado a HLA en ratones [El-Badri, I\T.S. et al., Exp. Hematol . 26:110 (1998)]. Se han investigado muchas estructuras químicas a fin de valorar un posible papel en la fisiología de la médula ósea. Por ejemplo, se han evaluado los efectos de los glicosaminoglicanos tanto en líneas de células derivadas de leucemia [Volpi, N. , et al., Exp. Cell Res. 215:119 (1994)] y en pruebas clonogénicas en células madre derivadas de sangre de cordón humano [Da Prato, I., et al., Leuk. Res. 23: 1015 (1999)]. Se han sintetizado aun péptidos cortos para investigar los efectos hemorreguladores y de muíti-linaje, posiblemente por mejora de la producción de citocina por células estromáticas [King, A.G., et al., Exp. Hematol . 20(4) :531 (1992); Pelus , L.M., et al., Exp. Hematol. 22:239 (1994) ] . La mielofibrosis idiopática (IMF) es la menos común y tiene la peor prognosis de los trastornos mieloproliferativos crónicos. El principal proceso patogénico es un trastorno clonal de células madre hematopoyéticas que da por resultado anemia, hiperplasia atípica de megacariocitos , esplenomegalia y grados variables de hematopoyesis extramedular . En contraste, la proliferación estrómica característica es un fenómeno reactivo, que resulta de la liberación inapropiada de factores de crecimiento derivados de megacariocitos/plaquetas , incluyendo el factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) , factor-beta de crecimiento transformante (TGF-beta) , factor de crecimiento -de fibroblastos, básico (bFGF) , factor de crecimiento epidérmico (EGF) , y calmodulina [Groopman, J. , Ann. Intern. Med. 92:857-858 (1980); Chvapil , M . , Life Sci . 16:1345-1361 (1975)] . La sobrevivencia media de los pacientes con IMF es de aproximadamente 4 años . Las estrategias terapéuticas en la IMF permanecen predominantemente de apoyo y se dirigen al alivio de. los síntomas y mejora de la calidad de vida. Lo más común son transfusiones sanguíneas, andrógenos y agentes citoreductivos tal como hidroxiurea. El transplante de médula ósea se está tomando cada vez más en consideración, pero aun tiene que ser considerado como un planteamiento experimental. El interferón-alfa (IFN-alf ) ha mostrado resultados promisorios en etapas hiperproliferativas tempranas de la IMF pero no tiene efecto o sólo tiene muy poco efecto en las etapas más avanzadas de la enfermedad. Se ha mostrado de forma previa por algunos de los inventores que el péptido de crecimiento osteogénico (OGP, por sus siglas en inglés) , un péptido relacionado a histona H4 , altamente conservado, de 14 aminoácidos, incrementa la celularidad de la médula ósea y sangre y mejora el injerto de los transplantes de médula ósea en ratones [Bab, I.A., Clin. Orthop. 313:64 (1995); Gurevitch 0., et al., Blood 88:4719(1996) y patente de los Estados Unidos No. 5,461,034]. El OGP se ha aislado de la fase osteogénica de la generación de médula ósea post-ablación [Bab, I., et al . , Endocrinology, 128(5); 2638 (1991)] y se presenta de forma fisiológica en alta abundancia en la sangre, principalmente como un complejo con a2-macroglobulina (cc2-M) [Gavish, H. , et al., Biochemistry, 36:14883-14888 (1997)] . Administrado in vivo, mejora la formación de hueso e incrementa la masa ósea trabecular; in vitro, estimula la proliferación de actividad de fosfatasa alcalina en lineas de células osteogénicas; además, es mitogénico a los fibroblastos [Greenberg, Z. , et al., Biochim. Biophys. Acta. 1178:273 (1993)]. Además de la actividad de OGP en la regeneración de hueso, la activación de osteoblastos y la proliferación de fibroblastos, se ha mostrado que induce, in vivo, un incremento balanceado en las cuentas de células sanguíneas blancas ( BC, por sus siglas en inglés) y la celularidad total de médula ósea en ratones que reciben irradiación mieloablativa y transplantes de médula ósea singeneica o semi-alogenéica [Gurevitch, 0., et al . , ibid. (1996) ] . El pentapéptido C-terminal de OGP, designado OGP (10-14) , que parece ser generado por la escisión proteolítica del OGP de longitud completa en la disociación del complejo inactivo con oc2- , está presente en suero de mamífero y cultivos de células osteogénicas a altos niveles [Bab, I., et al., J. Pept . Res. 54:408 (1999)]. El OGP modificado, N-terminal retiene el efecto dependiente de la dosis tipo OGP en la proliferación celular, y se ha sugerido que el pentapéptido carboxi -terminal es responsable de la unión al receptor de OGP putativo [Greenberg, Z., et al., ibid. (1993)] . Adicionalmente, los inventores han mostrado de forma previa que en células MC3T3 El osteogénicas, las dosis mitogénicas de OGP (10-14), pero no de OGP, mejoran la actividad de ???-cinasa de una manera dependiente del tiempo y de la dosis. Estos hallazgos indican que el OGP (10-14) es responsable de la señalización en etapas posteriores [Gabarin, et al., J.. Cell Biol . 81:594-603 (2001)]. Se ha mostrado además que la forma activa de OGP es su pentapéptido carboxi-terminal OGP (10-14) . De manera interesante, el OGP (10-14) no forma un complejo con 2- u otro OGPBP (proteína de unión a OGP) [Bab, I., J. Peptide Res. 54:408-414 (1999)]. Por lo tanto, la posible actividad hematopoyética de oligopéptido sintéticos análogos a la región C-terminal del OGP nativo se evaluó en la presente invención. Algunos de estos péptidos específicos osteogénicamente activos se describen en la patente de los Estados Unidos No. 5,814,610. El sOGP (10-14) se ha descrito como que tiene actividades analgésicas y de opiato [Kharchenko et al., Vepr. Med. Khim. 35 (2) 106-109, (1989) ] . De manera importante, la presente invención muestra que los oligopéptidos osteogénicamente activos, previamente conocidos, pueden actuar como estimulantes del sistema hematopoyético . Por- ejemplo, el pentapéptido derivado de OGP, sintético, designado a OGP (10-14) tiene varias propiedades tal como incremento de la celularidad de la médula ósea y sangre en ratones, y mejora el injerto de los transpl.antes de la médula ósea. Este pentapéptido exhibió actividad significativa en la recuperación de células sanguíneas periféricas después de la aplasia inducida por ciclofosfamida (CFA) , y en la movilización de células madre. Adicionalmente, el efecto ex vivo del OGP (10-14) sintético en muestras de tejido de médula ósea de pacientes con IMF reprobó y demostró un incremento total sustancial en el número de células hematopoyéticas . Además, se relacionó directamente la magnitud del efecto de OGP (10-14) a la severidad de la IMF. Estos resultados indican que el OGP (10-14) puede estimular la formación de células sanguíneas y retomar la hematopoyesis. Por lo tanto, es un objeto de la presente invención usar oligopép idos derivados de OGP como factores de crecimiento hematopoyético . Estos y otros objetos de la invención se elaborarán conforme prosiga la descripción.

Breve Descripción de la Invención En un primer aspecto, la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende como un ingrediente efectivo al menos un oligopéptido que tiene actividad estimuladora en la producción de células hematopoyéticas. El oligopéptido usado de acuerdo con - la invención tiene un- peso molecular de 200 a 1,000 Da y puede ser un oligopéptido que comprende cualquiera de las secuencias de aminoácido Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly , Tyr-Gly-Phe-His-Gly, Gl -Phe-Gly-Gl y Met-Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly . Las composiciones farmacéuticas de la invención comprenden de manera opcional un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. En una modalidad preferida del presente aspecto, la composición farmacéutica de la invención comprende un oligopéptido que es un péptido que tiene la fórmula: Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly (designado OGP (10-14)) y un portador farmacéuticamente aceptable. En otra modalidad, la composición farmacéutica de la invención comprende un oligopéptido que es un pentapéptido que tiene la fórmula: Tyr-Gly-Phe-His-Gly. En aun otra modalidad, la composición farmacéutica de la invención comprende un oligopéptido - que es un tetrapéptido que tiene la fórmula: Gly-Phe-Gly-Gly y un portador farmacéuticamente aceptable. Y en una modalidad adicional, la composición farmacéutica de la invención comprende un oligopéptido que comprende la secuencia de aminoácidos Met-Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly y un portador farmacéuticamente aceptable, en el cual el residuo de metionina esté preferentemente acilado, específicamente un oligopéptido que tiene la fórmula: Ac-Met-Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly . La composición farmacéutica de la invención se refiere para la mejora del injerto que los transplantes de médula ósea, reconstrucción hematopoy tica, repoblación de médula ósea y el número de células madre en circulación. En otra modalidad, la composición farmacéutica de la invención se propone para la mejora del injerto de los transplantes de médula ósea, reconstrucción hematopoyética, repoblación de médula ósea y el número de células madre en circulación, particularmente en pacientes que reciben quimioterapia o irradiación. El oligopéptido usado en la composición farmacéutica de la invención incrementa el porcentaje de células progenitoras , de muíti-linaj e , en circulación. Estas células progenitoras de multi-linaje son las células positivas CD34, precursoras, tempranas, en circulación. Además, el oligopéptido usado como un ingrediente efectivo en la composición farmacéutica de la invención y mejora la recuperación de monocitos y células inmaduras e incrementa de forma selectiva cualquiera de las unidades de formación de colonia BFU-E y GEMM. La composición farmacéutica de la invención por lo tanto se propone para incrementar el número de células sanguíneas blancas (WBC) , células madre hematopoyéticas en circulación así como la celularidad total de la médula ósea y sangre . En una modalidad específicamente preferida, · la composición de la invención se propone para soportar este transplante de médula ósea. Este efecto es debido a la actividad de los oligopéptidos en el incremento del número de células madre hematopoyéticas, acelerando la reconstrucción hematopoyética en el transplante de médula ósea y mejorando la celularidad total de la médula osea. De acuerdo a otra modalidad específicamente preferida, la composición farmacéutica de la invención se propone para el uso en el tratamiento de sujetos con transplante de médula ósea que padecen de trastornos hematológicos , tumores sólidos, trastornos inmunológicos y/o anemia aplástica. De manera más específica, los trastornos hematológicos pueden ser linfornas, leucemias, enfermedades de Hodgkin y trastornos mieloproliferativos . De manera particular, el trastorno mieloproliferativo puede ser mielofibrosis idiopática (IMF) . En un segundo aspecto, la presente invención se refiere al uso de un oligonucleótido que comprende cualquiera de las secuencias de aminoácido Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly, Tyr-Gly-Phe-His-Gly, Gly-Phe-Gly-Gly. y Met-Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly. En la preparación de una composición farmacéutica propuesta para la mejora del injerto de un trasplante de médula ósea, reconstrucción hematopoyética, repoblación de médula ósea y estimulación del número de células madre en circulación._ En una modalidad específica, los oligonucleótidos de la invención se usan en la preparación de una composición farmacéutica propuesta para la mejora del injerto de un transplante de médula ósea, reconstrucción hematopoyética , repoblación de médula ósea y el número de células madre en circulación, particularmente en ¦ pacientes que reciben irradiación o quimioterapia. De acuerdo a una modalidad preferida, los oligopéptidos específicos anteriores se usan en la preparación de una composición farmacéutica para incrementar el número de células progenitoras de multilinaje en circulación. Estas células progenitoras de multilinaje son las células positivas CD34, precursoras, tempranas, en circulación. Adicionalmente , los oligopéptidos usados en la preparación de la composición farmacéutica de la invención mejoran la recuperación de monocitos, células inmaduras e incrementan de manera selectiva cualquiera de las unidades de formación de colonias BFU-E, GEMM (CFU) . Por consiguiente, estos oligopéptidos se pueden usar en la preparación de una composición farmacéutica propuesta para incrementar el número de células sanguíneas blancas ( BC) , células madre hematopoyéticas en circulación, y/o celularidad total de médula ósea. De manera más específica, la invención proporciona el uso de estos oligopéptidos en la preparación de una composición farmacéutica para soportar el transplante de médula ósea. Este efecto es debido a la actividad de los oligopéptidos en el incremento del número de células madre, acelerando la reconstrucción hematopoyética en el transplante de médula ósea e incrementando la celularidad de la médula ósea. De acuerdo a otra modalidad específicamente preferida, la presente invención se refiere al uso de oligopéptidos en la preparación de una composición farmacéutica que se propone para tratar sujetos que padecen de trastornos hematológicos , tumores sólidos, trastornos inmunológicos y/o anemia aplástica. De manera más específica, los trastornos hematológicos pueden ser linfornas, leucemias, enfermedades de Hodgkin o trastornos mieloproliferativos, particularmente, mielofibrosis idiopática (IMF) . En un tercer aspecto, la presente invención proporciona un método para la mejora del injerto de un transplante de médula ósea, reconstrucción hematopoyética, repoblación de médula ósea y el número de células madre en circulación. Este método comprende el paso de administrar a un sujeto en necesidad del mismo, una cantidad efectiva de ^.un oligopéptido que tiene actividad estimuladora en la producción de células hematopoyéticas como se describe anteriormente, o de la composición de la invención. Este método de la invención se puede usar de acuerdo a una modalidad preferida para la mejora del injerto de un transplante de médula ósea, reconstrucción hematopoy tica , repoblación de médula ósea y el número de células madre en circulación en un paciente que recibe irradiación o quimioterapia . De acuerdo a una modalidad específica de este aspecto, la invención se refiere a un método para tratax a un sujeto que sufre de un trastorno hematológico , tumor sólido, trastorno inmunologico o anemia aplástica. El método de la invención comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un oligopéptido que tiene actividad estimuladora en la producción de células hematopoyéticas como se describe anteriormente, o de una composición que comprende el mismo. En otra modalidad específica, este método se puede usar en el soporte de tratamiento del sujeto por transplante de médula ósea. De manera más específica, los trastornos hematológicos pueden ser linfornas, leucemias, enfermedad de Hodgkin o trastornos neuroproliferativos , particularmente mielofibrosis idiopática (IMF) . Una modalidad preferida se refiere al método para mejorar el número de células madre/progenitoras hematopoyéticas. De acuerdo a la invención, este método comprende los pasos de exponer estas células a una cantidad efectiva de un oligopéptido que tiene actividad estimuladora en la producción de células hematopoyéticas como se describe anteriormente, o a una composición que comprende el mismo. En una modalidad específicamente preferida, el método de la invención se propone para mejorar la proliferación de células positivas CD34. En una modalidad específicamente preferida, las células están en cultivo de célula y el método se puede usar ex vivo o in vi tro. De manera alternativa, el método de la invención se puede usar como un método de tratamiento in vivo, de manera preferente en mamíferos, particularmente humanos. El sujeto tratado es uno que padece de, o es susceptible a, niveles disminuidos de células sanguíneas, que se puede provocar por quimioterapia, terapia de irradiación, o terapia de trasplante de médula ósea. En aún otra modalidad preferida, la invención se refiere a un método para el mantenimiento in vi tro o ex vivo y/o expansión de células madre hematopoyéticas presentes en una muestra sanguínea. Este método comprende aislar células sanguíneas periféricas de la muestra sanguínea, enriquecer las células progenitoras sanguíneas que expresan el antígeno CD34, desordenar las células progenitoras sanguíneas enriquecidas bajo condiciones adecuadas, y tratar estas células con un oligopéptido que tiene actividad estimuladora en la producción de células hematopoyéticas como se describe anteriormente o con una composición que comprende el mismo. El tratamiento in vivo de acuerdo con la invención, se refiere a un método para re-poblar células sanguíneas en un mamífero. Este método comprende los pasos de administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente efectiva de un oligopéptido que tiene actividad estimuladora en las células hematopoyéticas como se describe anteriormente, o de una composición que comprende el mismo. Estas células hematopoyéticas pueden ser células eritroides, mieloides o linfoides.

Breve Descripción de las Figuras Figura 1.- Un efecto dependiente de la dosis del pre- ratamiento con sOGP (10-14) en el número total de células de médula femoral en ratones después de radioterapia ablativa/BMT combinadas. El OG (10-14) a la dosis indicada se inyectó diariamente de forma subcutánea durante 12 días a ratones C57 BL hembras. En el día 8 después del comienzo del tratamiento con OGP (10-14) los ratones se sometieron a irradiación con rayos X de 900 ad, seguido por administración intravenosa de 105 células de médula ósea, no seleccionadas, singeneicas. En el día 14 después del comienzo del tratamiento, los ratones se sacrificaron y la médula ósea femoral se lavó en solución salina amortiguada con fosfato. Se preparó una suspensión individual de células al extraer la preparación varias veces a través de agujas de jeringa, ' graduadas. Se llevaron a cabo las cuentas de células en un hemocitómetro . C- Ratones de control que se les dio únicamente solución salina amortiguada con fosfato. Los datos son ± SE obtenidos en al menos siete ratones por condición. Abreviaciones: Fem (femoral), Marr C (células de médula) , D (día) , mou (ratón) , premed (premedicamento) , stimu (estimulación) y cellu (celularidad) . Figuras 2A-C- OGP (10-14) estimula cuentas de células sanguíneas de una manera dependiente de la dosis y del tiempo en ratones que se someten a quimioablación de tejidos hematopoyéticos . Ratones ICR machos que pesan 25 g cada uno se sometieron a quimioablación usando ciclofosfamida (CFA) , 5 mg/ratón, inyectada de manera intraperitoneal en los días 0 y 1, una inyección cada día. Se disolvió OGP (10-14) en "agua estéril para inyección" y se administró 0.1 mi de la dosis indicada o sólo agua (vehículo) de forma subcutánea en la nuca diariamente desde el día -7 al día -1 y desde el día +2 al día +8. Los datos son + SD obtenidos en 20 animales por condición. *: signif cativo con respecto a CFA+vehículo, p<0.05; **: significativo con respecto a grupo de OGP (10-14) 1 nmol, p<0.05 La Figura 2A muestra las cuentas totales de células sanguíneas blancas . La Figura 2B muestra las cuentas totales de monocitos . La Figura 2C muestra las cuentas totales de células inmaduras. Abreviaciones: cont (control, no tratado), veh (vehículo), ce (células) , T (tiempo-día) . Figura 3.- OGP (10-14) estimula el número de CD34+/Sca-1+ positivas dobles en circulación en ratones que se someten a quimioablación de tejidos hematopoyéticos . Ratones ICR macho que pesan 25 gm se sometieron cada uno a quimioablación usando ciclofosfamida (CFA) , 5 mg/ratón, inyectada intraperitonealmente en los días 0 y 1, una inyección por día. Se disolvió OGP (10-14) en "agua estéril para inyección" a 100 nmol/ml de concentración y 0.1 mi de esta solución o agua únicamente (vehículo) inyectado de manera subcutánea en la nuca diariamente desde el día -7 al día -1 y desde el día +2 al día +8. Los ratones tratados por ablación con CFA se trataron con 10s UI/0.1 mi de G-CSF desde el día +2 a +8 sirvieron como referencia positiva. Los datos son + SD (barra de error también fueron demasiado pequeñas para ser exhibidas) obtenidas en 33 animales por condición . Abreviaciones: veh (vehículo), T (tiempo-día), *: significativo con respecto a CFA+vehículo, p<0.01. Figuras 4A-C- Efecto de régimen de tratamiento de OGP (10-14) en unidades formadoras de colonias ex vivo derivadas de médula ósea de ratones sometidos a quimioablación de tejidos hematopoyéticos . Ratones ICR machos que pesan 25 g cada uno s.e sometieron a quimioablación usando ciclofosfamida (CFA) , 5 mg/ratón, inyectada intraperitonealmente en los días 0 y 1, una inyección por día. El OGP (10-14) se disolvió en "agua estéril para inyección" a una concentración de 100 nmol/ml y 0.1 mi de esta solución o agua únicamente (vehículo) se administró de manera subcutánea en la nuca diariamente para el (los) periodo (s) indicado (s). Se recolectó la médula ósea en el día 9 y se analizó para la unidad de formación de colonias. Los datos son media + SD obtenidos en 10 animales por condición. La Figura 4A muestra CFU-GM. La Figura 4B muestra CFU-GEMM, La Figura 4C muestra BFU-E. Abreviaciones: Colo/di (colonias/caja), Veh (vehículo). Figuras 5A-B.- Microfotografía de ¦ biopsia de médula ósea.

La Figura 5A presenta fotomicrografías de dos partes de espécimen de médula ósea de paciente con mielofibrosis idiopática (IMF) cultivado ex vivo durante 14 días en la ausencia de OGP (10-14) . La Figura 5B presenta fotomicrografías de dos partes del espécimen de médula ósea de paciente con mielofibrosis idiopática (IMF) , cultivado ex vivo durante 14 días en la presencia de OGP (10-14) 10"8M. Se señala densidad celular incrementada en espécimen cultivado con OGP(10-14). Figuras 6A-B.- Microfotografía de biopsia de médula ósea. La Figura 6A presenta fotomicrografías de secciones teñidas de retículo de dos partes del espécimen de médula ósea de un paciente con mielosis idiopática (IMF) , cultivado ex vivo durante 14 días en la ausencia de OGP (10-14) . La Figura 6B presenta fotomicrografías de secciones teñidas de retículo de dos partes del espécimen de médula ósea de paciente con mielofibrosis idiopática (IMF) , cultivado ex vivo durante 14 días en la presencia de OGP (10-14) 108M. Se señala apariencia normal de tejido tratado con OGP (10-14) . Figura 7.- Análisis de regresión en IMF Análisis de regresión en pacientes con mielofibrosis idiopática (IMF) entre el nivel de hemoglobina y la relación ex vivo del número de células hematopoyéticas en el espécimen tratado con OGP (10-14) con respecto al no tratado (relación T/C) que sugiere una relación directa entre la severidad de IMF y el efecto de OGP (10-14) . Abreviaciones: Hem (hemoglobina), Hemato (hematopoyé ico) , rat (relación) , cell (celularidad) .

Descripción Detallada de la Invención Varios métodos de la técnica de biología celular y química de péptidos no se detallan en la presente, puesto que son bien conocidos por las personas expertas en la técnica. Estos métodos incluyen la síntesis y análisis estructural de péptidos, cuentas diferenciales de células, análisis de clasificación de células, ensayos de formación de colonias, y similares. Los libros de texto que describen estos métodos son, por ejemplo: Current Protocols in Immunology, Coligan et al., (eds) , John Wiley & Sons, Inc., New York, NY y Ste art , J.M. y Young J.D., In: Solid Phase Peptide Synthesis, Pierce Chemical Co . , Rockford, IL, pp. 1-175 (1984) . Estas publicaciones se incorporan en la presente en su totalidad como referencia. Además, varias técnicas inmunológicas no se describen en .cada caso en la presente en detalle puesto que son bien conocidas por la persona experta en la técnica. Se usan en la presente las siguientes abreviaciones : OGP(s).- polipéptido (s) de crecimiento osteogénico . OGPBP(s).- Proteína (s) de unión a polipéptido de crecimiento osteogénico. sOGP.- OGP sintético. WBC.- (células sanguíneas blancas). PBL.- (sangre periférica). CFA . - (ciclofosfamida) . BM . - (transplante de médula ósea). IMF.- (mielofibrosis idiopática) . Varios agentes celulares o solubles pueden ser responsables de la interacción entre el hueso y las células de la médula ósea. Esta interacción parece ser esencial para la regulación de la reclusión, proliferación y diferenciación de células madre y progen'itoras , hematopoyéticas . El OGP incrementa la osteogénesis y la celularidad de la médula ósea [Greenberg, Z., et al., ibid. (1993); Gurevitch, 0., et al., ibid. (1996)]. Además, el OGP es un potente mitógeno para células osteoblásticas y fibroblásticas y células estromáticas de médula ósea [Greenberg, Z., et al., J. Cellular Biochem, 65:359-367 (1997); Robinson, D . , et al., J. Bone Min. Res., 10:690-696 (1995) ] .

En una línea^ de células osteoblásticas , se ha informado recientemente que el OGP activa la proteína-cinasa activada con mitógeno vía una G-proteína sensible a toxina de tos ferina. Estas actividades parecen estar restringidas al pentapéptido C-terminal OGP (10-14) y por lo tanto, se ha sugerido que el OGP (10-14) es la forma bioactiva del OGP [Bab, I., et al., ibid. (1999)]. El OGP (10-14) puede ser extremadamente interesante en vista de una posible utilización in vivo, considerando la ausencia de inmunogenicidad y toxicidad y la simplicidad relativa de la producción y el manejo del péptido. Estudios previos han demostrado que después de inyecciones s.c. 'diarias de OGP 0.1 a 10 nmol durante 2 semanas en ratones normales, el péptido indujo un incremento de más de 50% en las cuentas de WBC y aproximadamente una mejora de 40% de la celularidad total de la médula ósea [Gurevitch, O., et al., ibid., (1996)]. La proporción de diferentes tipos celulares no se alteró por el tratamiento, lo que sugiere una actividad de multi-linaje en la hematopoyesis. De manera interesante, en el experimento descrito en la presente, después de la aplasia reversible inducida por la administración de CFA (ciclofosfamida) , los ratones tratados por OGP (10-14) se recuperaron más rápido que aquellos inyectados con placebo y sin ninguna toxicidad apreciable a las dosis empleadas.

De esta manera, en un primer aspecto, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende como un ingrediente activo al menos un oligopéptido que tiene actividad estimuladora en la producción de células hematopoyéticas, que tiene de manera preferente las secuencias de aminoácidos Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly, Tyr-Gly-Phe-His-Gly, Gly-Phe-Gly-Gly o Met-Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly, también denotadas por SEQ ID Nos. 1, 2, 3 y 4, respectivamente, y un portador farmacéuticamente aceptable. El proceso de formación de células sanguíneas por el cual se reemplazan células sanguíneas rojas y blancas a través de la división de las células localizadas en la médula sanguínea se llama hematopoyesis. Para una revisión de la hematopoyesis ver Dexter y Spooncer [Ann. Rev. Cell . Biol., 3:423-441 (1987)]. Existen muchos tipos diferentes de células sanguíneas, que corresponden a distintos linajes celulares. A lo largo de cada linaje, hay células en diferentes etapas de maduración. Las células sanguíneas maduras se especializan para diferentes funciones. Por ejemplo, los eritrocitos están comprendidos en el transporte de 02 y C02; los linfocitos T y B están comprendidos en las respuestas inmunitarias mediadas por células y anticuerpos, respectivamente; se- requieren plaquetas para la coagulación sanguínea; y los granulocitos y macrófagos actúan como eliminadores generales y células auxiliares. Los granulocitos se pueden dividir adicionalmente en basófilos, eosinófilos, neutrófilos y células cebadas. En una modalidad específicamente preferida del presente aspecto, la composición farmacéutica de la invención comprende un oligopéptido que es un pentapéptido que tiene la fórmula: Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly como se denota por SEQ ID No. 1. Este pentapéptido se designa OGP (10-14) a todo lo largo de la presente solicitud. En otra modalidad, la composición farmacéutica de la invención comprende un oligopéptido que es un pentapéptido que tiene la fórmula: Tyr-Gly-Phe-His-Gly, como se denota- or SEQ ID No. 2. En aún otra modalidad, la composición farmacéutica de la invención comprende un oligopéptido que es un tetrapéptido que tiene la fórmula: Gly-Phe-Gly-Gly, como se denota por SEQ ID No. 3. En otra modalidad, la composición farmacéutica de la invención comprende un oligopéptido que es un hexapéptido que tiene la fórmula Met-Tyr-Gly-Phe-Gly-Gl , como se denota por SEQ ID No. 4, en la cual el residuo de metionina se puede acilar. Los péptidos usados como el ingrediente efectivo en las composiciones farmacéuticas de la invención se producen de manera sintética por métodos conocidos de química orgánica. Esta síntesis, se describe, por ejemplo en la patente de los Estados Unidos No. 5,814,610. De acuerdo a una modalidad preferida del presente aspecto, la composición farmacéutica de la invención se propone para la mejora del injerto del transplante de médula ósea, reconstrucción hematopoyética, repoblación de médula ósea y el número de células madre hematopoyéticas en circulación . De acuerdo a otra modalidad, la composición farmacéutica de la invención se propone para la mejora del injerto de trasplantes de médula ósea, reconstrucción hematopoyética, repoblación de médula ósea y el número de células madre hematopoyéticas en circulación de un paciente que recibe quimioterapia o irradiación. La capacidad de las células madre hematopoyéticas para proporcionar la producción de siempre de todos los linajes sanguíneos se logra por un equilibrio entre la plasticidad de las células madre, que es la producción de células progenitoras recluidas que genera linajes sanguíneos específicos, y la replicación de células madre en el estado no diferenciado (auto-renovación) . El mecanismo que regula la plasticidad de las células madre hematopoyéticas y la auto-renovación in vivo ha sido difícil de definir. Sin embargo, los. principales factores contribuyentes representan una combinación de influencias intrínsecas celulares y ambientales [Morrison, et al., Proc. Na i. Acad. Sci . USA 92:10302-10306 (1995)]. La importancia del microambiente hematopoyético se _ha establecido mediante el uso de sistemas de cultivo de médula ósea a largo plazo donde las células hematopoyeticas cultivadas en estroma permite el mantenimiento de HSC, si bien a bajas frecuencias [Fraser, et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 89 (1992); Wineman, et al., Blood 81:365-372 (1993)]. La demostración del mantenimiento de células hematopoyeticas en cultivo ha conducida a esfuerzos para identificar factores candidatos de "células madre" . El papel de las citocinas hematopoyeticas en el mantenimiento de las células madre se ha estudiado mediante la adición directa de factores purificados a cultivos in vitro de poblaciones de células madre, seguido por trasplante de las células cultivadas [Meunch, et al., Blood 81:3463-3473 (1993); Wineman et al., ibid. (1993); Rebel , et al., Blood 83:128-136 (1994)]. La mayoría de las citocinas conocidas de "acción temprana" tal como IL-3, IL-6 y KL se ha mostrado que estimula la proliferación de células progenitoras más recluidas en tanto que concurrentemente permite el mantenimiento pero no la expansión, de células capaces de la red población de multi-linaje a largo plazo [revisado en William, Blood 81 (12 ) : 3169-3172 (1993); uller-Sieburg y Deryugina, Stem Cells; 13:477-486 (1995)] . En tanto que estos datos indican que la plasticidad de las células y la función de re-población se pueden conservar por el tratamiento con citocinas, las moléculas que promueven la auto-renovación de estas células pluripotentes permanecen desconocidas . El polipéptido usado en la composición farmacéutica de la invención se ha mostrado que incrementa el porcentaje de las células progenitoras de multi-linaje en circulación. Estas células progenitoras de muíti-linaje son las células positivas CD34 precursoras, tempranas, en circulación. En el humano y ratón, las células progenitoras, hematopoyéticas , maduras, primitivas, se pueden identificar como que corresponden a una clase de células definidas por su expresión de un antígeno de superficie celular designado CD34. Estas células se pueden referir como células positivas a CD34. En el ratón, una clase temprana de células hematopoyéticas positivas a CD34 son las células CDE34+/Sca± positivas, dobles. El antígeno de superficie celular Sca-1 análogo en el humano es Flk.2. Por lo tanto, las células doblemente positivas a CD34/Flk2 humanas se consideran equivalentes a las células CD34/Sca-1 doblemente positivas, de ratón. Las células progenitoras hematopoyéticas, humanas expresan el antígeno CD34 y/o el receptor Flk2 se refieren en la presente como "células progenitoras primitivas" . En contraste, las células hematopoyéticas que no expresan ni el antígeno CD34 ni el receptor flk2 se refieren como "células progenitoras maduras" . Por lo tanto, como la modalidad preferida, las. células progenitoras de multi-linaje son las células doblemente positivas a CD34/Flk2, precursoras, tempranas, en circulación. Como se usa en la presente, "célula progenitora" se refiere a cualquier célula somática, que tenga la capacidad de generar progenie funcional completamente diferenciada por diferenciación y proliferación. Las células progenitoras incluyen progenitores de cualquier sistema de órgano o tejido, incluyendo de manera enunciativa y sin limitación, sangre, nervio, músculo, piel, intestino, hueso, riñon, hígado, páncreas, timo y similares. Las células progenitoras se distinguen de las "células diferenciadas" que se definen como aquellas que pueden tener, o no, la capacidad para proliferar, es decir, auto-replicarse, pero que son incapaces de sufrir una diferenciación adicional a un diferente tipo celular bajo condiciones fisiológicas normales. Además, las células progenitoras se distinguen adicionalmente de las células anormales tal como células de cáncer, especialmente células de leucemia, que proliferan (auto-replican) pero que en general no se diferencian adicionalmente, a pesar de parecer ser inmaduras o no diferenciadas . Se definen progenitores por su progenie, por ejemplo, células progenitoras que forman colonias de granulocitos/macrófagos (GM-CFU) se diferencian en granulocitos o macrófagos; unidades de formación de explosión, eritroides, primitivas (BFU-E) se diferencian en unidades de formación de colonias de eritrocitos (CFU-E) que dan eritrocitos maduros. De manera similar, los progenitores Meg-CFU, GE M-CFU, Eos-CFU y Bas-CFU son capaces de diferenciarse en megacariocitos , granulocitos, macrófagos, eosinófilos y basófilos, respectivamente. Se han caracterizado varios progenitores hematopoyéticos diferentes. Por ejemplo, las células progenitoras hematopoyéticas incluyen aquellas células, que son capaces de ciclos sucesivos de diferenciación y proliferación para producir hasta ocho diferentes linajes de células hematopoyéticas maduras. En el extremo más primitivo o no diferenciado del espectro hematopoyético, las células progenitoras hematopoyéticas incluyen las "células madre" hematopoyéticas. Estas células raras que representan 1 en 10,000 a 1 en 100,000 de células en la médula ósea, tienen cada una la capacidad de generar >1013 células sanguíneas maduras de todos los linajes y son responsables de la sustentación, de la producción de las células sanguíneas durante la vida de un organismo. Residen en la médula ósea principalmente en un estado quiescente y pueden formar células hija idénticas a través de un proceso llamado auto-renovación. Por consiguiente, este progenitor no recluido se puede describir como que es "omnipotente" es decir, tanto necesario como suficiente para generar todos los tipos de células sanguíneas maduras. Las células progenitoras que retienen una capacidad para generar todos los linajes de células sanguíneas, pero que no se pueden auto-renovar se llaman "pluripotentes" . Las .células que .pueden producir algunos, pero no todos los linajes sanguíneos y no pueden auto-renovarse se llaman "multipotentes" . Los oligopéptidos usados en la invención son útiles en la conservación de cualquiera de estas células progenitoras, incluyendo células progenitoras unipotentes, células progenitoras pluripotentes, y/o células progenitoras omnipotentes. Los oligopéptidos, y particularmente OGP(10-14) , demuestran eficiencia particular en la conservación de células progenitoras hematopoyéticas . · En una modalidad preferida, adicional, el oligopéptido usado como un ingrediente efectivo en la composición farmacéutica de la invención mejora la recuperación de monocitos celulares inmaduros e incrementa de manera selectiva cualquiera de las unidades de formación de colonias de BFU y GEMM (CFU) . El Ejemplo 3 posterior describe la valoración ex vivo de la formación de colonias hematopoyéticas , derivada de ratones tratados con de OGP (10-14) y tratados con control. Los resultados indican un incremento de GEMM-CFU y BFU-E en cultivos derivados de ratones tratados con OGP (10-14) en comparación al grupo de control con sólo vehículo, en tanto que un control de G-CSF positivo induce un incremento significativo de GM-CFU. El incremento en la formación de colonias en cultivos derivados de ratones tratados con OGP (10-14), donde es aparente sólo cuando el tratamiento comienza siete días antes de la quimioablación . Los resultados tanto in vivo como ex vivo alcanzados por OGP (10-14) confirman la actividad de multi-linaje previamente reportada del OGP de longitud completa en comparación a diferentes citocinas. Diferente de otros factores de crecimiento y movilización [Fleming, W. , et al . , Proc . Nati. Acad. Sci. USA 90:3760 (1993)], el sOGP(10-14) incrementa el número de células madre hematopoyéticas en la sangre periférica sin reducir el compartimiento de células madre de la médula ósea. La composición farmacéutica de la invención por lo tanto se puede proponer para incrementar el número de células sanguíneas blancas (WBC) , células madre hematopoyéticas en circulación y celularidad total de médula ósea. En una modalidad especialmente preferida, la composición de la invención se propone para soportar el trasplante de médula ósea. Esté efecto es debido a la actividad de los ol gopéptidos que incrementa el número de células madre, acelera la reconstrucción hematopoyética en el trasplante de médula ósea e incrementa la celularidad de la médula ósea. Como se describe en el Ejemplo 1, los oligopéptidos de la invención se han encontrado que mejoran el injerto de los trasplantes de médula ósea y estimulan la reconstrucción hematopoyética. El trasplante de médula ósea (BMT) está llegando a ser de manera progresiva y rápida el tratamiento de elección en los casos de malignidades hematológicas tal como uniformas, enfermedad de Hodgkin y leucemia aguda así como canceres sólidos, en particular melanoma y cáncer de mama. Recientemente, el BMT se está tomando cada vez más en consideración en el tratamiento de trastornos mieloproliferativos tal como IMF (mielofibrosis idiopática) . De manera preferencial , con métodos mejorados, el BMT también se puede usar para tratar otras enfermedades catastróficas.- SIDA, anemia aplástica y trastornos auto-inmunitarios . La finalidad de todo el BMT es reemplazar las células madre hematopoyéticas del hospedador, omnipotentes y pluripotentes , lesionadas por la quimioterapia, radiación o enfermedad. Estas células madre pueden replicarse de manera repetitiva y diferenciarse para dar la variedad completa de células presentes en la sangre, específicamente eritrocitos, plaquetas y WBC que incluye, linfocitos, monocitos y neutrófilos . También se derivan macrófagos y osteoclastos residentes a partir de células madre omnipotentes, hematopoyéticas . Conforme se diferencian las células madre, se recluyen por sí mismas máximas a un linaje particular .. hasta que pueden formar sólo una clase de las células anteriores . Por consiguiente, de acuerdo a otra modalidad especialmente preferida, la composición farmacéutica de la invención se puede usar en el tratamiento de sujetos con trasplante de médula ósea que padecen de un trastorno hematológico, tumor sólido, trastorno inmunológico o anemia plástica. De manera más específica, el trastorno hematológico puede ser un linfoma, enfermedad de Hodgkin o leucemia aguda y trastorno mieloproliferativo, particularmente mielofibrosis idiopática (IMF) . En la IMF, la eritropoyesis ósea evoluciona a una falla progresiva, en tanto que la hemopoyesis ectópica se desarrolla e incrementa. La calcificación patológica de la fibrosis y las alteraciones estructurales del hueso trabecular pueden ser responsables de un déficit absoluto o relativo de factores segregados por osteoblastos y de esta manera, al .menos parcialmente responsables de la función dañada de la médula ósea.

Los resultados descritos en el Ejemplo 4, sugieren fuertemente que el OGP (10-14) puede incrementar la densidad de células hematopoyéticas de la médula ósea en fragmentos óseos cultivados de pacientes con IMF sin modificar, en un corto tiempo, la fibrosis. El incremento celular parece estar equilibrado y no da cuenta de la expansión de células atipicas. No se puede excluir, por supuesto, que el OGP (10-14) preserve simplemente en cultivo la estructura de la médula ósea y la celularidad de las muestras de IMF en comparación a aquellas encontradas en muestras cultivadas sin el pentapéptido . Sin embargo, la celularidad conservada o aún incrementada en algunas muestras cultivadas con OGP (10-14) en comparación a aquella encontrada en las nativas, sugiere una actividad proliferativa del péptido. En la actualidad no es claro, si el OGP actúa en precursores sanguíneos directamente o vía células estromáticas o diferentes poblaciones celulares sino, al menos al nivel morfológico, su actividad parece ser independiente de un remodelado significativo del microambiente . Una implicación de esta observación es que OGP (10- 14) es capaz en realidad de mejorar in vitro, la expansión de tres linajes de células hematopoyéticas humanas. Las composiciones farmacéuticas de la invención comprenden como ingrediente activo un oligopéptido como se describe anteriormente, o una mezclas de estos oligopéptidos , en un portador, excipiente o estabilizador farmacéuticamente aceptable, y opcionalmente otros constituyentes terapéuticos. Los portadores, excipientes o estabilizadores aceptables son no tóxicos a los receptores a las dosis y concentraciones empleadas, e incluyen amortiguadores, tal como solución salina amortiguada con fosfato y amortiguadores fisiológicamente aceptables, similares, y de manera más general , todos los portadores, excipientes y estabilizadores adecuados conocidos en la técnica, por ejemplo, para los propósitos de adicionar sabores, colores, lubricación, o similares a la composición farmacéutica . Los portadores pueden incluir almidón y derivados del mismo, celulosa y derivados de la misma, por ejemplo, celulosa microcristalina, goma de Xantano, y similares. Los lubricantes pueden incluir aceite de ricino hidrogenado y similares. Un agente amortiguador preferido es solución salina amortiguada con fosfato (PBS) , solución que también se ajusta para osmolaridad. Una formulación farmacéutica preferida es una que carece de un portador. Estas formulaciones se usan de manera preferente para la administración por inyección, incluyendo inyección intravenosa. La preparación de composiciones farmacéuticas es bien conocida en la técnica y se ha descrito en muchos artículos y libros de texto, ver, por ejemplo Remington's Pharmaceutical Sciences, Gennaro A. R. ed. , Mack Publishing Company, Easton Pennsylvania, 1990, y especialmente páginas 1521-1712 en el mismo. Las composiciones farmacéuticas de la invención se pueden preparar en formas de dosis unitarias . Las formas de dosis también pueden incluir dispositivos de liberación sostenida. Las composiciones se pueden preparar por cualquiera de los métodos bien conocidos en la técnica de farmacia. Estas formas de dosis abarcan portadores fisiológicamente aceptables que son inherentemente no tóxicos y no terapéuticos. Los ejemplos de estos portadores incluyen intercambiadores iónicos, alúmina, estearato de aluminio, lecitina, proteínas céricas, tal como albúmina de suero humano, sustancias amortiguadoras tal como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potasio, mezclas de glicéridos parciales de ácidos grasos vegetales saturados, agua, sales o electrolitos tal como sulfato de protamina, fosfato ácido de disodio, fosfato ácido de potasio, cloruro de sodio, sales de zinc, sílice coloidal, trisilicato de magnesio, polivinil-pirrolidona, sustancias basadas en celulosa, y PEG. Los portadores para formas basadas en gel o tópicas de .estos polipéptidos incluyen polisacáridos tal como carboximetilcelulosa sódica o metilcelulosa, polivinilpirrolidona, poliacrilastos , copolímeros de bloque de polioxietileno, PEG y alcoholes de madera. Para todas las administraciones, se usan de manera adecuada las formas convencionales de depósito. Estas formas incluyen, por ejemplo, microcápsulas , nano-cápsulas , liposomas, emplastos, formas de inhalación, inhalaciones para nariz, tabletas sublinguales y preparaciones de liberación sostenida. Los ejemplos adecuados de preparaciones de liberación sostenida incluyen matrices semipermeables de polímeros hidrófobos sólidos que contienen los oligopéptidos-de acuerdo con la invención, matrices que están en la forma de artículos formados, por ejemplo, películas o microcápsulas. Los ejemplos de matrices de liberación sostenida incluyen poliésteres, hidrogeles, poliláctidos como se describe por ejemplo por, (patente de los Estados Unidos No. 3,377,919), copolímeros de ácido L-glutámico y ?~ etil-L-glutamato , etileno-acetato de vinilo no degradable, co-polímeros de ácido láctico-ácido glicólico degradables tal como Lupron DepotsMR (microesferas inyectables compuestas de copolímero de ácido láctico-ácido glicólico y acitato de leuprolida) , y ácido poli-D ( - ) 3 -hidroxibutírico . En tanto que los polímeros tal como etileno-acetato de vinilo y ácido láctico-ácido glicólico permiten la liberación de moléculas durante más de 100 días, ciertos hidrogeles liberan proteínas durante periodos de tiempo más cortos. Cuando se encapsulan, los péptidos permanecen en el cuerpo durante un largo tiempo, pueden desnaturalizarse o agregarse como resultado de la exposición a la humedad de 37 °C, dando por resultado una pérdida de actividad biológica y posibles cambios en la inmunogenicidad. Se pueden contemplar estrategias racionales para la estabilización dependiendo del mecanismo comprendido. Por ejemplo, si se descubre que el mecanismo de agregación es una formación de enlace S-S intermolecular a través del intercambio de tio-disulfuro, la estabilización se puede lograr al modificar los residuos de sulfhidrilo, liofilizando a partir de soluciones acidas, controlando el contenido de humedad, usando aditivos apropiados, y desarrollado composiciones específicas de matriz polimérica. Los oligopéptidos de liberación sostenida, y particularmente, las composiciones de sOGPl-14 también incluyen polipéptidos atrapados de forma lipsomal . Los lipsomas que contienen estos polipéptidos se preparan por métodos conocidos en la técnica, tal como se describe en Eppstein, et a., Proc . Nati. Acad. Sci . USA 82:3688-3692 (1985); Hwang, et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 77:4030 (1980); patentes de los Estados Unidos Nos. 4,485,045 y 4,544,545. De manera ordinaria, los lipsomas son el tipo unilamelar pequeño (aproximadamente 200-800 Ángstrom) en los cuales el contenido de lípido es mayor de aproximadamente 30 % en mol de colesterol, una proporción seleccionada que se ajusta para la terapia óptima con polipéptidos. Los liposomas con un tiempo de circulación mejorado se describen en la patente de los Estados Unidos No'. 5,013,556. Las formulaciones terapéuticas de los oligopéptidos se preparan para el almacenamiento al mezclar estos polipéptidos que tienen el grado deseado de pureza con portadores, excipientes o estabilizadores fisiológicamente aceptables, opcionales [Remington's Pharmaceutical Sciences-, 16h edition, Osol, A., Ed. , (1980)], en la forma de una torta liofilizada o soluciones acuosas. Los portadores, excipientes o estabilizadores aceptables son no tóxico a los receptores a las dosis y concentraciones empleadas, e incluyen amortiguadores tal como fosfato, citrato, y otos ácidos orgánicos; antioxidantes que incluyen ácido ascórbico; polipéptidos de bajo peso molecular (menos de aproximadamente 10 residuos) ; proteínas, tal como albúmina sérica, gelatina o inmunoglobulinas , polímeros hidrófilos tal como polivinilpirrolidona; aminoácidos tal como glicina, glutamina, asparagina, arginina o lisina,- monosacáridos , disacáridos y otros carbohidratos que incluyen glucosa, mannosa o dextrinas; agentes quelantes tal como EDTA; alcoholes de azúcar tal como mannitol y sorbitol ; 'contra-iones de formación de sal tal como sodio; y/o agentes tensioactivos no iónicos tal como Tween, PluronicsMR o polietilenglicol (PEG) . Los oligopéptidos también se pueden atrapar en microcápsulas preparadas, por ejemplo, por técnicas de coacumulación o por polimerización interfacial (por ejemplo, hidroximetilcelulosa o microcápsulas de gelatina y microcápsulas de poli- (metilmetacrilato) , respectivamente) , en un sistema de distribución de fármacos coloidales (por ejemplo, liposomas, microesferas de albúmina, microemulsiones , nanopartículas y nanocápsulas) o en microemulsiones. Estas técnicas se describen en Remington's Pharmaceutical Sciences, ibid. La composición farmacéutica es de manera preferente para un uso diario una vez al día por un sujeto en necesidad, y de manera preferente, comprende una dosis de ingrediente activo de aproximadamente 0.001 a aproximadamente 50 nmol, de manera más preferente aproximadamente 0.05 a 25 nmol, de manera más preferente aproximadamente 0.1 a aproximadamente 10 nmol. Se va a apreciar que además de los oligopéptidos descritos, la composición de soporte de transplante, de la presente invención, puede comprender además de forma opcional otros constituyentes terapéuticos. Estos constituyentes pueden ser una o más citocinas conocidas, por ejemplo, IL-3, IL-4, IL-5, G-CSF, GM-CSF (factor de estimulación de colonia de granulocito-macrof gos) , y M-CSF (factor de estimulación de colonia de macrófagos) . Cuando este componente adicional se incorpora en la composición, el efecto de la composición en el soporte de transplante de médula ósea puede incrementarse de forma sinérgica. Como un segundo aspecto, la presente invención se refiere al uso de cualquiera de los oligopéptidos descritos anteriormente, particularmente Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly, Tyr-Gly-Phe-His-Gly, Gly-Phe-Gly-Gly y Met-Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly, como se denota por SEQ ID NOs : 1, 2, 3 y 4, respectivamente, en la preparación de una composición farmacéutica para la mejora del injerto de transplante de médula ósea, de construcción hematopoyética, repoblación de médula ósea y el número de células madre en circulación. Además, los oligopéptidos descritos en la presente se pueden usar en la preparación de composiciones farmacéuticas para acelerar el injerto de transplante de médula ósea, mejorar la proliferación de células madre transplantadas e incrementar de este modo la disponibilidad de todos los tipos de células hematopoyéticas ' incluyendo eritrocitos ¦ y obteniendo de este modo la necesidad de soportar al hospedador con estas células durante al menos varias semanas; mejorar el microambiente hematopoyético estromático al incrementar el número de células estromáticas y/o la expresión de factores derivados de células estromáticas que soporta la hematopoyesis,- mejorar la expresión de células madre hematopoyéticas de receptores a factores que soportan la hemopoyesis ; mejorar el "retorno a casa" de los transplantes de médula ósea, intravenosamente administrados, a la médula ósea del hospedador; mejorar la restauración de la celularidad sanguínea después del BMT; permitir el transplante exitoso usando un número reducido de células, disminuyendo de esta manera el número de (múltiples) extracciones de médula de · donadores y permitiendo el uso de transplantes tan pequeños como 10-15 mi (en lugar de 1000 mi) ; incrementar el número de células madre omnipotentes y/o pluripotentes , hematopoyéticas, en la sangre periférica del donador, mejorando de este modo la factibilidad del transplante de células madre de la sangre periférica; incrementar el número de células madre hematopoyéticas in vitro en cultivos de médula ósea a largo plazo para el uso como transplantes y también proporcionar un método para inhibir el crecimiento de células de tumor en aloinjertos de pacientes con leucemia; mejorar la restauración endógena de la celularidad sanguínea y de médula después de la quimio y/o radio-terapia ; y mejorar la restauración de la población de macrófagos residentes después de BMT o después de la quimio- y/o radio-terapia. La magnitud de una dosis terapéutica de los oligopéptidos o la composición de la invención por supuesto, variará con el grupo de pacientes (edad, sexo, etc.), la naturaleza de la condición que se trate y con el oligopéptido particular empleado y su grupo de administración. En cualquier caso, la dosis terapéutica se determinará por el facultativo que atiende . Se puede emplear cualquier ruta adecuada de administración para proporcionar a un mamífero, especialmente un humano, una dosis efectiva de un polipéptido de esta invención. Se puede preferir la administración intravenosa, subcutánea y oral. Como una modalidad preferida, estos oligopéptidos se usan para la preparación de una composición farmacéutica para incrementar el porcentaje de células progenitoras de multi-linaje en circulación. Estas células progenitoras de multi-linaje son las células positivas a CD34, precursoras, tempranas, en circulación y de manera preferente, células doblemente positivas a CD34/Flk2. Una "célula madre/progenitora hematopoyética" o "célula hematopoyética primitiva" como se describe anteriormente, es una célula que es capaz de diferenciarse para formar un tipo de célula sanguínea más recluida o madura. Una "célula madre hematopoyética" o "célula madre" es una que es específicamente capaz del injerto a largo plazo de un hospedador irradiado de forma letal . Una "población de células CD34+" se enriquece por células madre hematopoyétícas . Una población de células CD34+ se puede obtener de sangre umbilical o médula ósea, a manera de ejemplo. Las células CD34+ sanguíneas de cordón umbilical, humanas se pueden seleccionar para el uso de cuentas inmunomagnéticas vendidas por Miltenyi (California) , siguiendo las instrucciones del fabricante. Además, los oligopéptidos usados para la preparación de la composición farmacéutica de la invención mejoran la célula inmadura y la recuperación de monocitos e incrementan de forma selectiva cualquiera de las unidades de formación de colonias BFU-E y GEMM (CFU) . Por consiguiente, estos oligopéptidos se usan en la preparación de la composición farmacéutica para incrementar el número de células sanguíneas blancas (WBC) , células madre hematopoyéticas en circulación, y la celularidad completa de la médula ósea. De manera más específica, la invención proporciona el uso de estos oligopéptidos en la preparación de una composición farmacéutica para soportar el transplante de médula ósea. Este efecto es debido a la actividad de los oligopéptidos al incrementar el número de células madre, acelerando la reconstrucción hematológica en el transplante de médula ósea e incrementando la celularidad de la médula ósea . De- acuerdo a otra modalidad específicamente preferida, la presente invención se refiere al uso de oligopéptidos en la preparación de una composición farmacéutica para tratar un sujeto que padece de trastornos hematológicos , tumores sólidos, trastornos inmunológicos y anemia aplástica. De manera más específica, el trastorno hematológico puede ser un linfoma, leucemias, enfermedad de Hodgkin y trastornos mieloproliferativos, particularmente mielofibrosis idiop tica (IMF) . En un tercer aspecto, la presente invención proporciona un método para la mejora del injerto de transplante de médula ósea, reconstrucción hematopoyética, repoblación de médula ósea y el número de células madre en circulación. Este método comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo, una. cantidad efectiva de un oligopéptido que tiene actividad estimuladora en las células hematopoyéticas como se describe anteriormente, o de una composición de la invención. De acuerdo a otra modalidad, la invención proporciona un método para la mejora del injerto del transplante de médula ósea, reconstrucción hematopoyética, repoblación de médula ósea y el número de células madre en circulación en pacientes · que reciben quimioterapia o irradiación. En aun otra modalidad, se puede usar una cantidad efectiva de los oligopéptidos o la composición de la invención para mejorar el injerto- en el transplante de médula ósea o para estimular la movilización y/o expansión de células madre hematopoyéticas en un mamífero antes de la recolección de progenitores hematopoyéticos de la sangre periférica de los mismos. De acuerdo a una modalidad específica de este aspecto, la invención se refiere a un método para tratar un sujeto que padece de un trastorno hematológico , tumor sólido, trastorno inmunológico o anemia aplástica, para administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un oligopéptido que tiene actividad estimuladora en la producción de células hematopoyéticas, o de una composición que comprende el mismo de acuerdo con la invención. En otra modalidad específica, este método se puede usar en el soporte del tratamiento del sujeto por transplante de médula ósea. Para aplicaciones terapéuticas, los oligopéptidos o la composición farmacéutica útil de acuerdo con la invención, se administran a un mamífero, de manera preferente un humano, en una dosis fisiológicamente aceptable de, incluyendo aquellas que se pueden administrar a un humano, intravenosamente como un bolo o por infusión continua durante un periodo de tiempo. Las rutas alternativas de administración incluyen rutas intramuscular, intraperitoneal , intra-cerebroespinal , subcutánea, intra-articular, intrasinovial , intratecal, oral o tópica. Los oligopéptidos o las composiciones de la invención también se administran de manera adecuada por rutas intratumoral , peritumoral, intralesional o perilesional o a la limfa, para ejercer efectos terapéuticos locales así como sistémicos. Los oligopéptidos o las composiciones farmacéuticas que se van a usar para la administración in vivo deben ser estériles. Esto se logra fácilmente por filtración a través de membranas estériles de filtración, antes o después de la líofilización y reconstitución. Los oligopéptidos se pueden almacenar en solución. Las composiciones terapéuticas de oligopéptidos se colocan en general en un recipiente que tiene un orificio de acceso estéril, por ejemplo, una bolsa o frasco de solución intravenosa que tiene un tapón perforable por una aguja de inyección hipodérmica. Una "cantidad efectiva" de cualquiera de los oligopéptidos o composiciones de la invención que se va a emplear terapéuticamente, dependerá, por ejemplo, de los ¦ objetivos terapéuticos, la ruta de administración, y la condición del paciente. Por consiguiente, será necesario que el terapeuta titule la dosis y modifique la ruta de administración como se requiere para obtener el efecto terapéutico óptimo.. Típicamente, el clínico administrará el oligopéptido hasta que se alcance una dosis que logra el efecto deseado. Una dosis diaria típica para el tratamiento sistémico puede variar de aproximadamente 0.001 nmol/ g hasta 50 nmol/Kg o más, dependiendo de los factores mencionados anteriormente . Otra modalidad específica se refiere al tratamiento de un sujeto que tiene un transplante, donde se puede adoptar un método ex vivo. En este método, las células propuestas para el transplante se, exponen a la cantidad efectiva de los oligopéptidos o composiciones de , la invención, antes de su transplante. La manera más común actualmente disponible para adquirir una cantidad suficiente de células madre hematopoyéticas para el transplante es extraer un litro o más de tejido de médula de múltiples sitios de los huesos del donador con aguja y jeringa, un proceso comprendido que usualmente requiere anestesia general. Los donadores BMT alogeneico usualmente son hermanos cuyos tipos de tej ido son compatibles y algunas veces donadores no relacionados quienes corresponden al receptor por tipificación de HLA. Los transplantes autólogos, que eliminan la necesidad de la correspondencia por HLA, se pueden usar en pacientes que se someten a quimioradioterapia ablativa para la erradicación de tumores sólidos.' Las células madre autólogas también se pueden obtener de la sangre de cordón umbilical . en el nacimiento y se almacenan para la administración futura. Después del transplante y antes del establecimiento de una médula funcional derivada del donador, los pacientes que alojan el BMT se presentan con una pancitopenia marcada momentánea que los expone a infecciones . La incidencia de infecciones bacterianas y fúngales con relación a tanto con la severidad como con la duración de la pancitopenia [Slavin, S. y Nagler, A., Transplantation (1992)] . Por una razón similar, el CSF falla en soportar la eritropoyesis y- la .formación de plaquetas. Los oligopéptidos que soporta la hematopoyesis pueden probar ser útiles de otras maneras también. Algunos investigadores han encontrado que es un procedimiento complicado la adición de células madre a partir de la sangre periférica, a aquellos de la médula ósea que incrementa significativamente la velocidad de injerto extrayendo suficientes números de células madre de la sangre periférica. La administración de estos oligopéptidos a donadores para incrementar el número de células madre en la sangre mejorará la factibilidad de transplante de células madre a partir de la sangre periférica [Golde, D. . , Sci . Am. 36 Diciembre (1991)]. El prerrequisito para la hematopoyesis, y por lo tanto, el BT exitoso, es la presencia de células estromáticas funcionales y tejido que comprometan el microambiente hematopoyético, determinen el retorno a casa de las células madre inyectadas a partir de la circulación a la médula ósea y soporten la hematopoyesis [Watson, J.D. y McKenna, H. J. Int. J. Cell Cloning 10:144 (1992)]. El tejido estromático derivado de médula ósea también proporciona las condiciones para sostener las células madre en cultivos de médula ósea a largo plazo in vitro. En la actualidad esta tecnología satisface el mantenimiento en vivo de células madre. La adición de los oligopéptidos hemopoyéticos apropiados a estos cultivos puede ayudar a expandir la población de células madre in vitro, esto que proporciona números incrementados de estas células para el transplante . Un planteamiento in vitro/in vivo combinado puede proporcionar la base para una estrategia avanzada para (i) obtener pequeñas preparaciones de células madre de la sangre o médula del donador y (ii) los individuos saludables tienen sus células madre almacenadas durante un tiempo cuando las células pueden ser necesarias para tratar una enfermedad seria, derivando de este modo la complejidad asociada con el uso del BMT alogeneico. Por lo canto, sería de importancia terapéutica usar péptidos pequeños tal como los oligopéptidos descritos en la presente solicitud, que estimulen la reconstrucción hematopoyética pos-B T al mejorar in vivo, ex vivo ?/? in vitro el . microambiente hematopoyético del cual son componentes importantes el tejido fibroso, hueso y células óseas. Estos péptidos también pueden soportar la hematopoyesis en una condición de mielosupresión inducida' o que se presenta de forma espontánea, que no necesariamente comprendió el BMT. Los oligopéptidos descritos en la presente solicitud, y de manera preferente, el pentapéptido OGP(10-14) , parece actuar directamente al nivel del precursor hematopoyé co temprano (es decir, células madre/progenitoras hematopoyéticas) . Esta población expandidas de células madre pueden servir como la fuente de células para la mielopoyesis , eritropoyesis (por ejemplo eritropoyesis esplénica) y limfopoyesis . Por consiguiente, estos oligopéptidos se pueden usar para estimular la proliferación y/o el mantenimiento de células madre/progenitoras hematopoyéticas, ya sea in vi tro o in vivo (por ejemplo, para tratar enfermedades o trastornos hematopoyéticos) . Por lo tanto, una modalidad preferida se refiere a un método para mejorar la proliferación de células madre/progenitoras hematopoyéticas. De acuerdo con la invención, este método comprende los pasos de exponer estas células a una cantidad efectiva de un oligopéptido que tiene actividad estimuladora en las células hematopoyéticas, o a una cantidad efectiva de una composición que comprende el mismo, como se describe anter ormente. De acuerdo con la invención, esta exposición es efectiva en la mejora de la proliferación de estas células. El término "mejora de la proliferación de una célula" abarca el paso de incrementar el grado de crecimiento y/o reproducción de la célula con relación a una célula no tratada ya sea in vi tro o in vivo. Un incremento en la proliferación celular en el cultivo celular se puede detectar al contar el número de células antes y después de la exposdción a una molécula de interés . El grado de proliferación se puede cuantificar vía examen microscópico del grado de confluencia. La proliferación celular también se puede cuantificar usando un ensayo de incorporación de BrdU o timidina. En una modalidad específicamente preferida, el método de invención se propone para mejorar la proliferación de células positivas a CD34, preferentemente- células positivas a Flk2. Los oligopéptidos o las composiciones de la invención son útiles en la mejora in vivo o ex vivo del número y/o proliferación y/o diferenciación y/o mantenimiento de células madre/progenitoras hematopoyéticas , para expandir la población de estas células y para mejorar la repoblación de estas células y células sanguíneas de múltiples linajes en un mamífero. En una modalidad específicamente preferida, estas células están en un cultivo celular y por lo tanto, esto será un método ex vivo/in vitro. De manera alternativa, el método de la invención se puede usar como un método de tratamiento in vivo, en casó que las células tratadas se presenten en un mamífero. "Tratamiento" se refiere tanto al tratamiento terapéutico como a una medida profiláctica o preventiva. Aquellos en necesidad de tratamiento incluyen aquellos ya con la enfermedad o trastorno así como aquellos en los cuales se va a prevenir la enfermedad o trastorno. "Mamífero" para los propósitos de tratamiento se refiere a cualquier animal calcificado como un mamífero incluyendo, humanos, animales domésticos y de granja, y animales de zoológico, deportivos o de mascota, tal como perros, caballos, gatos, vacas, etc. De manera preferente, el mamífero es un humano . En una modalidad específica, el mamífero tratado por el método de la invención está padeciendo de, .o es susceptible a, niveles disminuidos de células sanguíneas, que se puede provocar por quimioterapia, terapia de radiación, terapia de transplante de médula ósea o cualquier otra causa iatrogénica o natural . Las quimio-terapias y las terapias de radiación provocan reducciones dramáticas en la población de células sanguíneas en pacientes con cáncer. Al menos 500,000 pacientes con cáncer se someten a quimioterapia y terapia de radiación en los Estados Unidos y Europa cada año y otros 200,000 en Japón. La terapia de transplante de médula ósea de valor en anemia aplástica, inmunodeficiencia primaria, leucemia aguda y tumores sólidos (después de irradiación total del cuerpo) está llegando a ser más ampliamente practicada por la comunidad médica. Se realizan cada año al menos 15,000 transplantes de médula ósea en los americanos. Otras enfermedades pueden provocar una reducción en los linajes de células sanguíneas, completos o seleccionados. Los ejemplos de estas condiciones incluyen anemia (incluyendo anemia macrocítica y aplástica) ; trombocitopenia; hipoplasia; púrpura trombocitopénica inmunitaria (autoinmunitaria) (ITP) ; ITP inducida por VIH. Se necesitan productos farmacéuticos que sean capaces de mejorar la reconstitución de las poblaciones de células sanguíneas de estos pacientes. Por consiguiente, es un objeto de la presente invención proporcionar un método para mejorar la proliferación y/o diferenciación y/o mantenimiento de células hematopoyéticas primitivas. Este método puede ser útil para mejorar la repoblación de células madre hematopoyéticas y de esta manera los linajes de células sanguíneas maduras. Esto es deseable donde un mamífero ha sufrido una disminución en las células sanguíneas maduras o hematopoyéticas como una consecuencia de enfermedad, radiación o quimioterapia. Este método también es útil para generar poblaciones expandidas de estas células madre y linajes de células sanguíneas maduras a partir de estas células hematopoyéticas ex vivo. En aun otra modalidad preferida, la invención se refiere a un método para el mantenimiento in vitro/ex vivo y/o para ex andir- células madre. Este método comprende aislar las células sanguíneas periféricas a partir de una muestra sanguínea, enriquecer las células progenitoras sanguíneas que expresan el antígeno CD34, desordenar las células progenitoras sanguíneas enriquecidas bajo condiciones adecuadas, y tratar estas células con un oligopéptido que tiene actividad estimuladora en las células hematopoyéticas, o con una composición que comprende como un ingrediente activo un oligopéptido que tiene una actividad estimuladora de las células hematopoyéticas, de acuerdo con la invención. En una modalidad específica, el método de la invención puede incluir un paso adicional de exponer las células tratadas a una citocina. Como un ejemplo no limitante, esta citocina se puede seleccionar del grupo que consiste de TPO (Trombopoyetina) , EPO (Eritropoyetina) , M-CSF (Factor de estimulación de colonia de macrófagos) , GM-CSF (CSF de granulocito-macrófago) , G-CSF (GSF de granulocito) , IL-1 (Iiiterleucina-1) , IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, LIF (factor inhibitorio de Leucemia) y KL (ligando de Equipo) . Como una modalidad a un tratamiento in vivo, la invención se refiere a un método para la repoblación de células sanguíneas en un mamífero. Este método comprende los pasos de administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente efectiva de un oligopéptido que tiene actividad estimuladora en las células hematopoyéticas, o de una cantidad efectiva de la composición de la invención. Estas células hematopoyéticas pueden ser cualquiera de las células eritroides, mieloides y linfoides . "Linajes de células sanguíneas linfoides" son aquellas células precursoras hematopoyéticas .que pueden diferenciarse para formar linfocitos (células B ó células T) . Igualmente, "linfopoyesis" es la formación de linfocitos . "Linajes de células sanguíneas eritroides" son aquellas células precursoras hemaptopoyéticas que pueden diferenciarse para formar eritrocitos (células sanguíneas rojas) y "eritropoyesis" es la formación de eritrocitos. La frase "linajes de células sanguíneas mieloides" para los propósitos en la presente, abarca todas las células precursoras .hematopoyéticas, diferente de los linajes de células sanguíneas linfoides y eritroides como se define anteriormente, y "mielopoyesis" comprende la formación de células sanguíneas (diferentes de linfocitos y eritrocitos) . Revelada y descrita, se va a entender que esta invención no se limita a los ejemplos particulares, pasos de proceso, y materiales descritos en la presente puesto que estos pasos de proceso y materiales pueden variar algo. También se va a entender que la terminología usada en la presente se usa para el propósito de describir modalidades particulares únicamente y no se propone para que sea limitante puesto que el alcance de la presente invención se limitará solo por las reivindicaciones anexas equivalentes de los mismos. Se debe señalar que, como se usa en esta especificación y las reivindicaciones anexas, las formas singulares "un" , "una" y "el" incluyen referencias plurales a menos que el contenido dicte claramente lo contrario. A todo lo largo de esta especificación y las reivindicaciones que siguen, a menos que el contexto requiera otra cosa, la palabra "comprende" y variaciones tal como "comprenden" y "que comprenden" se entenderá para implicar la inclusión de un número entero señalado, o paso o grupo de números enteros, o pasos, pero no la exclusión de ningún otro número entero o paso o grupo de números enteros o pasos . Los siguientes ejemplos son representativos de las técnicas empleadas por los inventores al llevar a cabo los aspectos de la presente invención. Se debe apreciar que en tanto que estas técnicas son de ejemplo de las modalidades preferidas para la práctica de la invención, aquellos expertos en la técnica, en vista de la presente descripción, reconocerán que se pueden hacer numerosas modificaciones sin que se aparten del espíritu y el alcance propuesto de la invención.

Ej emplos Reactivos : 1. Pentapéptido C-terminal de Péptido de Crecimiento Osteogénico (10-14) [sOGP (10-14) ] : Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly; .W. 499.7 (SEQ ID N0:1) se suministró por Polypeptides Laboratories Inc. (Torrance, California 90503 USA Lote No. 9712-006) . 2. Se usó CFA - ciclofosfamida (CFA, SIGMA, 5 mg/ratón) , para inducción de ablación de médula. 3. Medio tipo Dexter: Medio de McCoy (Gibco-Life Technologies EUA) con suero bovino fetal al 12.5 (FBS, Hyclone, Holland) , suero de caballo al 12.5 % (HS, Sigma, St Louis, MO) , aminoácidos esenciales al 0.8 % y no esenciales al 0.4 % (Gibco-Life technologies , EUA), glutamina al -1 % (Sigma, St .Louis, MO) , vitaminas al 0.4 % que incluyen colina, ácido fólico, inositol, nicotinamida, HCl-piridoxal , riboflavina, tiamina-HCl, D-Ca-pantotenato (Gibco-Life technologies, EUA) , anfotericina B al 1 % (Fungizone Bristol-Myers Squibb) , gentamicina al 1 %, e hidrocortisona 10"s M en presencia de factor recombinante de células madre humanas (50 ng/mL rhSCF, Calbiochem, EUA) , factor de estimulación de colonias de granulocitos-monocitos , humano, recombinante (rhGM-CSF 10 ng/mL, Sandoz Suiza) , interleucina-3 humana recombinante (rhIL-3 10 ng/mL, Calbiochem, EUA) y eritropoyetina humana recombinante (rhEpo 2 unidades/mL, Sigma, St Louis, MO) con o sin sOGP (10-14) 10~8M (Abiogen Pharma SpA Research Laboratories) . 4. Amortiguador de ácido E.D.T.A (Mielodec, Bio Optica, Milán, Italia) .

Animales ·. * Ratones macho ICR se compraron de Charles River's (Italia) y se mantuvieron bajo condiciones específicas libres de patógenos. *¦ Ratones hembra CV57 Black de la instalación de animales de Hebre University Medical School (Jerusalén, Israel) . Los ratones de cada raza pesaron 25 g a su arribo en el laboratorio de los inventores .

Análisis estadístico: Se hicieron comparaciones entre grupos usando PLSD de Fisher, factorial o para medidas repetidas, análisis de varianza (ANOVA) , se usó la prueba de Mann-Whitney, para ensayos de colonias.

Ej emplo 1 Efecto de OGP (10-14) en injerto de trasplante de médula ósea Materiales y métodos Se usaron ratones hembra CV57 Black para investigar el posible efecto de OGP (10-14) en el injerto de transplante de médula ósea. El OGP (10-14) en solución salina amortiguada con fosfato se administró por inyecciones diarias subcutáneas de 10 µ? durante 12 días. La dosis diaria varió de 0.001 a 10 nmol por ratón. Los ratones de control recibieron únicamente solución salina amortiguada con fosfato. En el día 8 después del comienzo del tratamiento con OG (10-14), los ratones se sometieron a irradiación total del cuerpo con rayos X que consiste de una dosis individual 900 rad usando una fuente de eoCO (Picker C-9, 102.5 rad/min) . Esto se siguió inmediatamente por una inyección intravenosa de 10s células singeneicas no seleccionadas de médula ósea. Los animales se sacrificaron 14 días después del comienzo del tratamiento con OGP(10-14), se diseccionaron ambos fémures y se removieron sus extremos efifiseales. La médula ósea se lavó completamente en solución salina amortiguada con fosfato (PBS) . Se preparó una suspensión individual de células al extraer varias veces la preparación a través de agujas graduadas de jeringa y las células se contaron en un hemocitómetro.

Resultados La Figura 1 muestra un efecto estimulador del OGP (10-14) en el número de células de médula ósea, femorales, totales, pos-irradiación/pos-trasplante. Este efecto fue dependiente de la dosis mostrando, a las tres dosis más altas, un incremento de 2 veces estadísticamente significativo en las cuentas de células con respecto a los controles con PBS .

Ejemplo 2 Evaluación de la toxicidad de OGP (10-14) Como se muestra anteriormente, el OGP (10-14) se encontró que mejora el injerto de trasplantes de médula ósea. Por lo tanto, antes del análisis detallado adicional de la actividad farmacológica de este péptido, se evaluó a continuación la posible toxicidad del péptido. Se evaluaron cincuenta y cinco ratones para la posible toxicidad relacionada a OGP (10-14) después de 15 días de administración subcutánea, a la dosis de 10 nmol/ratón, y los resultados se compararon a aquellos obtenidos en 30 controles tratados con placebo. No se encontraron diferencias con respecto a la supervivencia, comportamiento, ganancia de peso corporal y examen ordinario. Con respecto a los parámetros hematológicos , la administración de las dosis reportadas de péptido no induce ninguna modificación significativa en el número de células sanguíneas blancas (WBC) , células sanguíneas rojas (RBC) , plaquetas (PLT) o nivel de hemoglobina (Hb) .

Ejemplo 3 OGP (10-14) Estimula ¦ recuperación hematopoyética después de la quimioablación de médula ósea Materiales y Métodos En este conjunto de experimentos, se indujo la ablación de la médula ósea por una inyección intraperitoneal de ciclofosfamida (CFA, SIGMA, 5 mg/ratón en 150 (1 PBS estéril) durante dos días consecutivos (designados "día 0" y "día 1" . Este protocolo se ha demostrado que induce leucopenia reversible severa con L.D. <30 [Spangrude, G.J. et al., Science, 241:58 (1998)]. Las cuentas menores de células de médula ósea se registraron seis días después de la primera inyección. Para evaluar el efecto de OG (10-14) en las cuentas de células diferenciales WBC y determinar la "dosis de elección", de OGP (10-14) que se va a usar en experimentos adicionales, los ratones se trataron diariamente por inyecciones subcutáneas de 0.1 mi de vehículo libre de OGP (10-14) o vehículo - que contiene diferentes dosis de OGP (10-14) como se resume en la Figura 2. Un grupo de controles de línea base de referencia se dejó sin tratar y no recibió ni CFA ni vehículo de agua estéril con o sin OGP (10-14) (Figura 2) . Se recolectó sangre por sangrado retroorbital en los días -12, -4, +3, +7, +14, +17, +21 y +24 (Figura 2C) . Las cuentas de células diferenciales se llevaron a cabo usando un contador Coulter (Sysmex Microcell Counter F-800) . Para probar el efecto del OGP (10-14) en células doblemente positivas a CD34+/Sca-1+ en la sangre comparativamente a aquel de G-CSF, los ratones que se les practicó ablación con CFA, se trataron diariamente con 10 nmol de OGP (10-14) desde el día -7 hasta el día +7 y las muestras sanguíneas obtenidas en los días +5, +7 y +15 se sometieron a citometría de flujo. Se administró G-CSF en los días +2 a +8. Para la citometría de flujo, se mezclaron los grupos de tres muestras sanguíneas de los ratones, y se obtuvieron células mononucleares por centrifugación gradiente y se redispersaron en PBS a una concentración de lxl06/ml. Las células entonces se incubaron en la presencia de anticuerpos monoclonales específicos (dilución final 1:10) durante 30 minutos a 4°C. Para detectar células CD34+, se usó anticuerpo monoclonal anti -ratón de relación, purificado (Pharmingen, RAM34) como una primera capa. Después de tres lavados, las células se redispersaron en PBS y se incubaron con un anticuerpo anti -rata de cabra, policlonal, FITC (Pharmingen) . Para detectar células Sca-1+/CD34+, se lavaron adicionalmente las muestras tres veces en PBS y se incubaron con Sca-1 (Ly.6A.2) PE anti-ratón de relación de Caltag. La sustitución del anticuerpo primario con una inmunoglobulina irrelevante realizó un control específico. Se valoró la adquisición y análisis de datos por el citómetro de flujo FAC-Scan™ (Becton Dickinson) usando el programa Lysis II. (Figura 3) . Para evaluar los diferentes regímenes de dosificación de OGP (10-14), se sometieron ratones con tratamiento de guimioablación a tratamiento diario con OGP (10-14), como se resume en la Figura 4. Los ratones se sacrificaron en el día +15, se lavó la médula ósea femoral y se sometieron a suspensiones individuales de células (preparadas como antes) a los ensayos de células progenitoras (de formación de colonias) ex vivo. El efecto de OGP (10-14) en la formación de CFU-GM, CFU-GEMM y BFU-E se comparó a aquel de G-CSF (Figura 4) Ensayos de células progenitoras Se recuperaron células de médula ósea en el día +10 después de la inyección de CFA de todos los grupos. Las células se diluyeron a 2xl06/ml en el Medio de Dulbecco Modificado de Iscove (IMFM) con FBS al 2% y se adicionó al medio de metilcelulosa de acuerdo a las recomendaciones del fabricante (MethoCult, StemCell Technologies Inc., Vancouver, Canadá) . Se colocaron en placa 2 x 104 células en cada prueba. Se usaron tanto M3434 (GM-CFU murino, y GEMM-CFU) y M3334 para (ensayo con BFU-E murino) . El M3434 se complementó con interleucina-3 murina recombinante (rmIL-3, 10 ng/ml) , interleucina-6 humana recombinante (rhIL-6, 10 ng/ml) , factor de células madre, murino, recombinante (rmSCF, 50 ng/ml) y eritropoyetina humana recombinante (rhEpo, 3 U/ml) . En el M3434, el único factor incluido fue Epo. Se examinaron a ciegas pruebas duplicadas para cada ratón después de 14 días de incubación de acuerdo a los procedimientos del protocolo.

Resultados Las cuentas de WBC totales y diferenciales llevadas a cabo en el día +3 mostraron una disminución marcada en todos los grupos tratados con CFA (Figura 2) . En el día 7 , hubo una recuperación de aproximadamente 2 veces de las cuentas totales de WBC en el grupo con quimioablación tratado con _vehículo, que fue aún considerablemente menor que los valores registrados en los ratones de referencia sin tratar. Por otra parte, los animales con OGP (10714) mostraron valores superiores a todas las dosis probadas, con cuentas pico medidas en ratones que reciben 10 nmol de OGP (10-14) /día . Las cuentas en este grupo alcanzaron cercanamente a aquellas señaladas en el grupo de referencia no tratado (Figura 2?) . Las cuentas de células diferenciales llevadas a cabo en el día 7 también demostraron un incremento inducido por OGP (10-14), dependiente de la dosis, en las cuentas de células inmaduras y monocitos (Figuras 2B, 2C) . Las cuentas de monocitos a la dosis máxima (10 nmol) fueron 6 veces mayores en comparación a la referencia normal (Figura 2B) , aquellas de células inmaduras que son también significativamente mayores que la referencia (Figura 2C) . Las cuentas totales de BC en todos los grupos de animales fueron normales desde el día 10 hacia delante (Figura 2A) . Sin embargo, las cuentas de monocitos presentaron aún la misma tendencia vista en el día 7 con niveles normales que se alcanzan en el día 14 (Figura 2B) . A pesar de la disminución en las cuentas de células inmaduras en todo el grupo de 0.01 nmol, los valores más altos se obtuvieron aún en el grupo de 10 nmol. Las cuentas de células inmaduras estuvieron normales en todos los grupos desde el día 14 hacia delante (Figura 2C) . La cantidad de células doblemente positivas CD34+/Sca-1+ en el día +5 fue 5 veces mayor en los animales con quimio-ablación tratados diariamente con 10 nmol de OGP (10-14) que en ratones tratados con el vehículo solo (Figura 3). El efecto de OGP (10-14) fue similar . a aquel de G-CSF. Las mediciones por citometría de flujo llevadas a cabo en los días +7 y +15 demostraron números comparables de las células CD34+/Sca~l+ . Sin embargo, en el día +15, los ratones tratados _ con OGP (10-14) mostraron un número significativamente mayor que los ratones tratados con vehículo y G-CSF (Figura 3) . Los ensayos con células progenitoras mostraron que el OGP (10-14) estimula de manera significativa CFU-GEMM y BFU-E, pero no CFU-GM. El efecto de OGP fue evidente sólo en casos donde el comienzo del tratamiento presidió a la quimio-ablación por 7 días (Figura 4) . La ausencia de un efecto de OGP (10-14) en el CFU-GM es consistente con su efecto no significativo en las cuentas de células de granulocitos sanguíneos. El G-CSF tiene un efecto sólo en el CFU-GM (Figura 4) .

Ej emplo 4 OGP (10-14) rescata celularidad hematopoyética de médula ósea en muestras ex vivo de pacientes con mielofibrosis idiopática Materiales y. Métodos A fin de valorar la eficacia de OGP (10-14) en humanos, se estudió su actividad hematopoyética en especímenes de médula ósea ex vivo obtenidos de pacientes que padecen de mielofibrosis idiopática (IMF) . Cinco pacientes con IMF, un paciente con escleroderma y dos pacientes con otros síndromes mielodisplásticos (MDS) se enrolaron en el estudio después de firmar un consentimiento informado. Se realizó la diagnosis de IMF en base a los métodos hematológicos y clínicos normales [Barosi, G. , et al., Br. J. Haematol 104:730-737 (1999)]. La biopsia ,de la ' médula ósea que muestra fibrosis fue una característica esencial . La diagnosis de IMF se estableció eventualmente después de excluir otras posibles causas de fibrosis y la presencia de diferentes trastornos mieloproliferativos . En particular, la diagnosis de leucemia mielógena crónica se descartó al excluir la presencia del cromosoma Ph y de el re-arreglo bcr/ bl . Se han tratado previamente tres de los cinco pacientes con IMF mediante dosis pequeñas de busulfan administradas diez días cada mes y 1 (g 1, 25 (OH) 2D3/día. Los datos de los pacientes se resumen en la Tabla 1.

Tabla 1 Datos clínicos de pacientes con IMF (A-E) y MDS *, valores normales: 240-480 U/L **, Medición Ecográfica Se obtuvieron especímenes de médula ósea de tres mm de largo de la espina iliaca superior posterior por una aguja de biopsia desechable calibre 8 equipada con una trampa para asegurar la distorsión mínima del espécimen (TraoSystem MDThech, EUA) . Los especímenes se dividieron en tres porciones de 1 cm de largo. Una porción aleatoriamente seleccionada se usó para la valoración morfológica preliminar. -Los dos fragmentos restantes se cultivaron en cajas de cultivo de tejido de 35 mm y se cubrieron comparativamente por 1 mm de medio tipo Dexter en la presencia de rhSCF (50 ng/mL) , rhGM-CSF [10 ng/mL) , rhIL-3 (10 ng/mL) , y rhEpo (2 unidades/mL) con o sin 10"8M de OGP(10-14), a 37°C, 5% de C02-aire. Se cambió una vez la mitad del medio, después de 7 días, sin alterar su composición, diferente de la restauración de las citocinas y la concentración inicial de OGP(10-14). Después de siete días adicionales en cultivo, los especímenes de médula ósea se procesaron de manera histológica. De manera breve, se fijaron muestras en B5 modificado, se desmineralizaron en amortiguado de ácido EDTA y se tiñeron las secciones con Giemsa' hematoxilina-eosina o impregnación con placa del retículo. Se valoraron los cambios en la médula ósea de manera semicuantitativa a una puntuación, de I a IV. Se usó una puntuación de IV para especímenes de médula ósea con alto contenido de células comparables a los normales; la puntuación III representó celularidad reducida con densidad nuclear reducida; los especímenes con puntuación II exhibieron lagunas extendidas las células hematopoyéticas en los especímenes con puntuación I fueron extremadamente escasas y/o el área de la médula ósea se sustituyó de forma basta por zonas de laguna. Al menos 3 secciones histológicas separadas de manera equidistante, por muestras se examinaron usando el área de sección completa. Además, la densidad celular se evaluó automáticamente usando un microscopio Leica asistido con computadora equipado con el programa de cómputo Leica. QWin, como la relación entre las cuentas de células y el área de médula ósea. Los resultados para cada paciente se expresaron como la relación de la densidad celular media en el grupo tratado con OGP (10-14) con respecto a los especímenes no tratados (relación T/C) .

Resultados Después de 14 días en cultivo, los especímenes de médula ósea tratados con OGP (10-14) parecieron con una mayor concentración de células hematopoyéticas que los especímenes sin GP(10-14) de los mismos pacientes (Figuras 6, 5). La puntuación semicuantitativa se incrementó . de manera significativa en todos los pacientes con IMF (p<0.05). No se detectaron diferencias entre los especímenes tratados con OGP(10-14), y los no tratados de los pacientes sin IMF. La evaluación asistida con computadora de la celularidad mostró una relación T/C > 1 en todos los casos de IMF (p<0.01) indicando fuertemente que se incrementó el número celular en los especímenes tratados con OGP (10-14). Además, la relación T/C fue estadísticamente significativa en cada par de especímenes obtenidos de pacientes individuales (Tabla 2) . La relación T/C mostró una correlación muy alta y significativamente inversa con el nivel de hemoglobulina de los pacientes (Figura 7) . Los niveles disminuidos de hemoglobulina son el indicador serológico más importante para la severidad de IMF. Por lo tanto, esta correlación sugiere fuertemente que el efecto de OGP (10-14) es más alto en los pacientes afectados más severamente .

Tabla 2 Evaluación asistida con computadora de la densidad celul La relación entre las células eritroides y mieloides estuvo aparentemente si cambio después del cultivo con OGP (10-14). Sin embargo, una valoración semicuantitativa sugirió una disminución de 1.5 a 10 veces en el número de megacariocitos en especímenes obtenidos de pacientes con

Claims (46)

1. REIVINDICACIONES 1. Uso de un oligopéptido que tiene un peso molecular de 200 a 1, 000 Da que comprende la secuencia de aminoácidos de cualquiera de los péptidos seleccionados del grupo que consiste de Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly, Tyr-Gly-Phe-His-Gly, Gly-Phe-Gly-Gly y Met-Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly como se denota por SEQ ID Nos.: 1, 2, 3 y 4, respectivamente, en la preparación de una composición farmacéutica para mejorar la movilización de células madre hematopoyéticas de muít -linaje a la sangre periférica.
2. 2. Uso de un oligopéptido que tiene un peso molecular de 200 a 1,000 Da que comprende la secuencia de aminoácidos de cualquiera de los péptidos seleccionados del grupo que consiste de Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly, Tyr-Gly-Phe-His-Gly, Gly-Phe-Gly-Gly y Met-Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly como se denota por SEQ ID Nos.: 1, 2, 3 y 4, respectivamente, en la preparación de una composición farmacéutica para mejorar la movilización de células madre hematopoyéticas, positivas a CD34, tempranas, de muíti-linaje a la sangre periférica.
3. 3. El uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2, en donde la mejora de la movilización a la sangre periférica conduce a un incremento en el número de células madre, hematopoyéticas, positivas a CD34, tempranas, de multi-linaj e , en circulación.
4. 4. El uso de un oligopéptido que tiene un peso molecular de 200 a 1, 000 Da que comprende la secuencia de aminoácidos de cualquiera de los péptidos seleccionados del grupo que consiste de Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly, Tyr-Gly-Phe-His-Gly, Gly-Phe-Gly-Gly y Met-Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly como se denota por SEQ ID Nos.: 1, 2, 3 y 4, respectivamente, en la preparación de un transplante de células madre de sangre periférica para el tratamiento de un sujeto en necesidad del mismo .
5. 5. El uso según la reivindicación 4 , en donde el oligopéptido mejora la movilización de células madre hematopoyéticas de multi-linaje a la sangre periférica.
6. 6. El uso según la reivindicación 5 , en donde las células madre hematopoyéticas son células positivas a CD34.
7. 7. El uso según cualquiera de las reivindicaciones 2, 3 y 4, en donde las células madre de multi-linaje, en circulación son células doblemente positivas de CD34/Flk2.
8. 8. El uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el oligopéptido es un pentapéptido que tiene la fórmula: Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly, como se denota por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID No. 1.
9. 9. El uso según las reivindicaciones 1 a 4, en donde el oligopéptido es un pentapéptido que tiene la fórmula: Tyr-Gly-Phe-His-Gly, como se denota por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID No . 2.
10. 10. El uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el oligopéptido es un hexapéptido que tiene la fórmula: Ac-Met-Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly, como se denota por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID No.4.
11. 11. El uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el oligopéptido es un tetrapéptido que tiene la fórmula: Gly-Phe-Gly-Gly, como se denota por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID No.3.
12. 12. El uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la preparación de una composición farmacéutica para mejorar la recuperación de monocitos y células inmaduras.
13. 13. El uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la preparación de una composición farmacéutica para incrementar de manera selectiva cualquiera de las unidades de formación de colonias de BFU-E y GEMM (CFU) .
14. 14. El uso de un oligopéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de cualquiera de Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly, Tyr-Gl -P e-His-Gly, Gly-Phe-Gly-Gly y Met-Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly como se denota por SEQ ID Nos.: 1, 2, 3 y 4, respectivamente, en la preparación de una composición farmacéutica para mejorar la proliferación selectiva de células madre hematopoyéticas positivas a CD34 en un sujeto en necesidad del mismo.
15. 15. El uso según la reivindicación 14 , en donde las células positivas a CD34 son células doblemente positivas CD34/Flk2.
16. 16. El uso de un oligopéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de cualquiera de Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly, Tyr-Gly-Phe-His-Gly, Gly-Phe-Gly-Gly y et-Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly como se denota por SEQ ID Nos. : 1, 2, 3 y 4, respectivamente, en la preparación de una composición farmacéutica para tratar sujetos que padecen de un trastorno mieloproliferativo .
17. 17. El uso según la reivindicación 16, en donde el trastorno mieloproliferativo es mielofibrosis idiopática IMF.
18. 18. El uso según cualquiera de las reivindicaciones 16 y 17, en donde la composición farmacéutica incrementa el número de la celularidad total de médula ósea en un sujeto que padece de IMF.
19. 19. El uso de un oligopéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de cualquiera de Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly, Tyr-Gly-Phe-His-Gly, Gly-Phe-Gly-Gly y Met-Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly como se denota por SEQ ID Nos.: 1, 2, 3 y 4, respectivamente, para el mantenimiento selectivo in vitro y/o ex vivo y/o para la expansión de la población de células madre positivas a CD34 en una muestra sanguínea.
20. 20. El uso según la reivindicación 19, en donde la muestra sanguínea es una muestra sanguínea de mamífero.
21. 21. El uso según la reivindicación 20, en donde la muestra sanguínea es una muestra sanguínea de humano.
22. 22. El uso según la reivindicación 20, en donde la muestra sanguínea se origina de un mamífero que padece de, o está susceptible a cuentas disminuidas de células sanguíneas .
23. 23. El uso según la reivindicación 22, en donde las cuentas sanguíneas disminuidas se provocan por quimioterapia, terapia de irradiación, o terapia de trasplante de médula ósea.
24. 24. El uso según la reivindicación 23, en donde la composición comprende además al menos una citocina.
25. 25. El uso según la reivindicación 24, en donde la citocina se selecciona del grupo que consiste de TPO (Trombopoyetina) , ??? (Eritropoyetina) , M-CSF (Factor de estimulación de colonia de macrófago) , GM-CSF (CSF de Granulocito-macrófago) , G-CSF (CSF de Granulocito) , IL-1 (Interleucina-1) , IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, LIF (Factor inhibitorio de leucemia) y KL (Ligando de equipo) .
26. 26. Un método para mejorar la movilización de células madre hematopoyéticas de multi-linaje a la sangre periférica, que comprende el paso de administrar a un sujeto en necesidad del mismo, una cantidad efectiva de un oligopéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de cualquiera de Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly, Tyr-Gly-Phe-His-Gly, Gly.-Phe-Gly-Gly y Met-Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly como se denota por SEQ ID Nos.: 1, 2, 3 y 4, respectivamente, o de una composición farmacéutica que comprende el mismo.
27. 27. Un método según la reivindicación 26, en donde las células madre son células madre, positivas a CD34, tempranas, de multi-linaje .
28. 28. Un método para la mejora del número de células madre positivas a CD34, tempranas, de multi- linaj e , en circulación, que comprende el paso de administrar a un sujeto en necesidad del mismo, una cantidad efectiva de un oligopéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de cualquiera de Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly, Tyr-Gly-Phe-His-Gly, Gly-Phe-Gly-Gly y Met-Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly como se denota por SEQ ID Nos.: 1, 2, 3 y 4, respectivamente, o de una composición farmacéutica que comprende el mismo.
29. 29. El método según la reivindicación 28, en donde el sujeto en necesidad del mismo es un paciente que recibe irradiación o quimioterapia.
30. 30. El método según la reivindicación 28, en donde el sujeto sufre de cualquiera de los trastornos hematológicos , tumores sólidos, trastornos inmunológicos y anemia aplástica.
31. 31. El método según la reivindicación 30, en donde el trastorno hematológico se selecciona del grupo que consiste de linfornas, leucemias, enfermedades de Hodgkin y trastornos mieloproliferativos .
32. 32. El método según la reivindicación 28, en donde las células madre de multi-linaje en circulación son células doblemente positivas de CD34/Flk2.
33. 33. Un método para incrementar de manera selectiva el número de cualquiera de las unidades de formación de colonia de BFU-E y GEMM (CFU) que comprende el paso de administrar a un sujeto en necesidad del mismo, una cantidad efectiva de un oligopéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de cualquiera de Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly, Tyr-Gly-Phe-His-Gly, Gly-Phe-Gly-Gly y Met-Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly como se denota por SEQ ID Nos.: 1, 2, 3 y 4, respectivamente, o de una composición farmacéutica que comprende el mismo.
34. 34. El método según la - reivindicación 33, en donde el sujeto en necesidad del mismo es un paciente que recibe irradiación o quimioterapia.
35. 35. El método según la reivindicación 33, en donde el sujeto padece de cualquiera de los trastornos hematológicos , tumores sólidos, trastornos inmunológicos y anemia aplástica.
36. 36. El método según la reivindicación 35, en donde el trastorno hematológico se selecciona del grupo que consiste de linfornas, leucemias, enfermedades de Hodgkin y trastornos mieloproliferativos .
37. 37. Un método para mejorar el número de cualquiera de las unidades de formación de colonia de BFU-E y GEMM (CFU) que comprende exponer las células a una cantidad efectiva de un oligopéptido que comprende la secuencia de aminoácidos Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly, Tyr-Gly-Phe-His-Gly, Gly-Phe-Gly-Gly y Met-Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly como se denota por SEQ ID Nos. : 1, 2, 3 y 4, respectivamente, o de una composición que comprende el oligopéptido como un ingrediente efectivo.
38. 38. Un método para tratar un sujeto que sufre de un trastorno mieloproliferativo, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un oligopéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de cualquiera de Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly, Tyr-Gly-Phe-His-Gly, Gly-Phe-Gly-Gly y Met-Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly como se denota por SEQ ID Nos.: 1, 2, 3 y 4, respectivamente, o de una composición que comprende el oligopéptido como un ingrediente efectivo.
39. 39. El método según la reivindicación 35, en donde el trastorno mieloproliferativo es mielofibrosis idiopática (IMF) .
40. 40. Un método para mejorar la proliferación de células madre positivas a CD34, hematopoyéticas que comprende exponer las células a una cantidad efectiva de un oligopéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de cualquiera de Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly, Tyr-Gly-Phe-His-Gly, Gly-Phe-Gly-Gly y Met -Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly como se denota por SEQ ID Nos.: 1, 2, 3 y 4, respectivamente, o de una composición que comprende el oligopéptido como un ingrediente efectivo.
41. 41. Un método para incrementar de manera selectiva el número de células madre positivas a CD34 hematopoyéticas, que comprende el paso de administrar a un sujeto en necesidad del mismo, una cantidad efectiva de un oligopéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de cualquiera de Tyr-Gly-Phe-Gly-Gl , Tyr-Gly-Phe-His-Gly, Gly-Phe-Gly-Gly y Met-Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly como se denota por SEQ ID Nos.: 1, 2, 3 y 4, respectivamente, o de una composición farmacéutica que comprende el mismo.
42. 42. El método según cualquiera de las reivindicaciones 40 y 41, en donde la célula positiva CD34 es una célula doblemente positiva CD34/Flk2.
43. 43. El método según la reivindicación 41, en donde el sujeto es un paciente que recibe irradiación o quimioterapia.
44. 44. El método según la reivindicación 41, en donde el sujeto sufre de cualquiera de los trastornos hematológicos , tumores sólidos, trastornos inmunológicos y anemia aplástica.
45. 45. El método según la reivindicación 44, en donde el trastorno hematológico se selecciona del grupo que consiste de linfornas, leucemias, enfermedades de Hodgkin y trastornos mieloproliferativos .
46. 46. Un método para el mantenimiento in vi tro y/o ex vivo y/o para expandir la población de células madre en una muestra sanguínea que comprende aislar células de la sangre periférica de la muestra sanguínea, enriquecer las células progenitoras sanguíneas que expresan el antígeno CD34, desordenar las células progenitoras, sanguíneas, enriquecidas bajo condiciones adecuadas, tratar las células con un oligopéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de cualquiera de Tyr-Gly-P e-Gly-Gly, Tyr-Gly-Phe-His-Gl , Gly-Phe-Gly-Gly y Met-Tyr-Gly-Phe-Gly-Gly como se denota por SEQ ID Nos.: 1, 2, 3 y 4, respectivamente, o con una composición que comprende el oligopéptido como un ingrediente efectivo.