MXPA04000651A

MXPA04000651A - Vectores resistentes a metilacion.

Info

Publication number: MXPA04000651A
Application number: MXPA04000651A
Authority: MX
Inventors: Persoon Bertil
Original assignee: Geneinvent Bbl Ab
Priority date: 2001-07-27
Filing date: 2002-07-08
Publication date: 2004-10-27
Also published as: SE518759C2; SE0102627L; EP1419257A1; JP2004536616A; CA2453372A1; WO2003012112A1; SE0102627D0

Abstract

La invencion se relaciona con vectores producidos en una celula hospedera donante, que al momento de transferirse a una celula hospedera receptora, mantienen la expresion deseada de las secuencias de nucleotidos que se ubican dentro del vector. El mantenimiento de la expresion deseada se logra debido a que el vector permanece al menos parcialmente desmetilado dentro de la celula hospedera receptora. La celula hospedera donante es diferente en comparacion con la celula hospedera receptora y la celula hospedera receptora es capaz de metilar el ADN. Para prevenir la metilacion, las citosinas de un segmento invariable de la secuencia CpG en una secuencia de nucleotidos se transfieren y se sustituyen con analogos de citosina resistentes a la metilacion. La invencion tambien se relaciona con metodos para la produccion de vectores y con el uso de los vectores en la industria asi como en medicina.

Description

VECTORES RESISTENTES A METILACION Campo de la Invención La invención se relaciona con vectores, que al menos son parcialmente resistentes a la metilación al transferirse en una célula hospedera receptora. La célula hospedera receptora es diferente de la célula hospedera donante. La invención también se relaciona con métodos para la producción de los vectores y el uso de los vectores en la industria así como en la medicina. Antecedentes de la Invención La regulación de la expresión génica se ha convertido en una técnica cada vez más importante para comprender los diversos procesos celulares y sus vías bioquímicas fundamentales. La regulación de la expresión génica es un proceso complejo y aún deben comprenderse varios mecanismos de regulación. La metilación del ADN en organismos eucariotas es un mecanismo importante de la regulación génica. La metilación del ADN es un mecanismo para regular la expresión de genes ubicados dentro del genoma de células eucariotas así como para lentificar la expresión de secuencias de nucleótidos extraños que entran en la célula eucariota. El fenómeno se ha investigado tanto en células animales como vegetales y la metilación ocurre en la posición-5 del anillo de pirimidina de la citosina ubicada en un segmento de CpG.

REF: 153181 La lentificación de un gen o agrupación de genes puede ser el resultado de la metilación de los segmentos invariables de la secuencia de CpG ubicados en la secuencia de nucleótidos del gen o agrupación de genes así como la metilación de las secuencias reguladoras, cómo promotores y elementos respondientes de los factores de la transcripción. El grado de metilación influye sobre el grado de lentificación y en general, un bajo grado de metilación da como resultado una pequeña disminución de la expresión y un mayor grado de metilación da como resultado una completa lentificación de la expresión de un gen. La metilación efectúa la expresión de polipéptidos ubicados dentro de los vectores de expresión. Cuando un tramo de ADN extraño entra al núcleo de una célula, es probable que se metile el tramo del ADN extraño. El grado de metilación del tramo de ADN extraño afecta el nivel de expresión de aquel ADN particular. El ADN introducido también puede integrarse en el ADN cromosómico de una célula en división mediante recombinación. Si el ADN particular se metila antes de integrarse en el ADN cromosómico y división celular, probablemente se metilar durante las divisiones celulares subsecuentes. Si se desea un elevado nivel de expresión, entonces la metilación del ADN en los vectores de expresión se vuelve un problema. También existe un problema similar cuando los vectores se utilizan en medicina para el tratamiento contra trastornos y para la vacunación. Por ejemplo, normalmente la vacuna de ADN está en forma de un vector de expresión de ADN plásmido producido en bacterias y luego se purifica y administra en el músculo o piel . Se ha demostrado que las vacunas de ADN son eficaces contra varios trastornos virales, bacterianos y parasitarios en los modelos experimentales en animales. Sin embargo, el nivel de metilación del ADN afecta el nivel de expresión para las proteínas antigénicas esenciales en la inducción de la respuesta inmunitaria contra el antígeno. El mismo problema también se aplica para el uso de vectores de ADN en la terapia génica. Una forma de resolver el problema de la metilación de las secuencias de nucleótidos al momento de transferirse en un nuevo hospedero es mediante la manipulación de genes a fin de retirar todos los segmentos invariables de la secuencia CpG sin cambiar los polipéptidos codificados. Estos genes modificados no experimentan metilación. Sin embargo., la estrategia de usar estos genes modificados tiene buenas aplicaciones para genes con una secuencia de nucleótidos más corta y no es aplicable para las secuencias de nucleótidos más largas como los vectores o cuando se necesita una variedad de diferentes vectores. Más aún, los promotores usados para la expresión de genes son normalmente ricos en segmentos invariables de la secuencia CpG, que no pueden retirarse sin afectar la función del promotor y con ello, el nivel de expresión. Se necesitan vectores optimizados estables, que no experimenten metilación al momento de transferirse en una célula eucariota para usarse tanto en la industria como en la medicina. Al proveer estos vectores, la industria tendrá menos problemas para obtener una constante y mayor expresión de genes de interés en células eucariotas. Más aún, se deben proporcionar en medicina vectores mejorados que no experimenten metilación al momento de transferirse a una célula hospedera receptora manteniendo la expresión de las secuencias de nucleótidos ubicadas dentro de los vectores, lo cuál es útil tanto en la vacunación como en la terapia génica así como en otros tratamientos donde se utilizan vectores de expresión. Sumario de la Invención La invención se relaciona con vectores que se han modificado de manera tal, que se reduce sustancialmente la metilación del vector al momento de transferir el vector hacia una célula hospedera receptora. Con ello, la expresión de la secuencia de nucleótidos del vector dentro de la célula hospedera receptora se mantiene a niveles aceptables. Ha de ser un nivel que mantenga las funciones esperadas de las secuencias de nucleótidos y/o los polipéptidos codificados por las secuencias de nucleótidos. La invención también se relaciona con métodos para la producción de los vectores y el uso de los vectores en la industria, industria farmacéutica, por ejemplo terapia y/o diagnóstico. En consecuencia, en un primer aspecto, la invención se relaciona con un vector que comprende una secuencia de nucleótidos en donde una o más citosinas en al menos un segmento invariable de la secuencia CpG se ha reemplazado con un análogo de citosina resistente a la metilación. En otro aspecto, la invención se relaciona con una secuencia de nucleótidos que es parte de un vector obtenido de una célula hospedera donante y/o un polipéptido producido por una célula hospedera donante. Aún en otro aspecto, la invención se relaciona con una composición farmacéutica que comprende un vector y/o una célula hospedera donante y/o una secuencia de nucleótidos y/o un polipéptido y un diluyente, portador, adyuvante o excipiente farmacéuticamente aceptable. Aún en otro aspecto, la invención se relaciona con un método para reducir la metilación de los segmentos invariables de la secuencia CpG en un vector en un hospedero receptor, cuyo método comprende reemplazar al menos una citosina en un segmento invariable de la secuencia CpG con análogos de citosina. Aún en otro aspecto, la invención se relaciona con un equipo que comprende un vector y/o una célula hospedera donante . Aún en otro aspecto, la invención se relaciona con un método para transferir un vector, una secuencia de nucleótidos, un polipéptido o una composición farmacéutica en una célula hospedera receptora, el método se selecciona a partir de la lista que comprende: electroporación, bombardeo con microproyectiles y administración mediada por liposomas.

Aún en otro aspecto, la invención se relaciona con un vector, una célula hospedera donante, una secuencia de nucleótidos, un polipéptido o una composición farmacéutica para usarse en la terapia y/o diagnóstico. En un aspecto final, la invención se relaciona con el uso de un vector, una célula hospedera donante, una secuencia de nucleótidos, un polipéptido o una composición farmacéutica para la fabricación de un medicamento para usarse en terapia y/o en diagnóstico. La invención proporciona vectores completamente novedosos en donde la citosina en los segmentos invariables de la secuencia CpG se ha reemplazado con un análogo de citosina. El análogo de citosina es resistente a la metilación. El análogo de citosina reemplaza al menos la posición-5 del anillo pirimidina de citosina en el segmento invariable de la secuencia CpG. Este reemplazo da como resultado un vector mejorado, que al momento de transferirse en una célula hospedera receptora, como una célula eucariota, mantiene la actividad/expresión de la secuencia de nucleótidos del vector. La invención además proporciona métodos para la producción de estos vectores y el uso de los vectores, por ejemplo, en la industria así como en la medicina. Breve Descripción de las Figuras La invención se ilustra haciendo referencia de las Figuras en donde : la Figura 1 muestra la estructura de 5-azadeoxicitidina; la Figura 2 muestra un ejemplo de una estructura general de un derivado ' de citidina. Descripción Detallada de la Invención Definiciones En el contexto de la invención y actuales solicitudes, se aplican las siguientes definiciones: El término "secuencia de nucleótidos" se refiere a una secuencia de dos o más nucleótidos. Los nucleótidos pueden ser de ADN, ADNc, ARN genómico, de origen semisintético o sintético o una mezcla de ambos. El término incluye las formas circulares, lineales, monocatenarias y bicatenarias de ADN o ARN. El ¦ término "vector" significa una secuencia de nucleótidos, normalmente un doble anillo de ADN con la habilidad de multiplicarse independientemente del ADN cromosómico en una variedad de copias dentro de un hospedero, es decir, con un inicio de la replicacion. El vector también puede ser un vector que se integra en el genoma de la célula hospedera receptora. Más aún, el vector se mantiene y/o produce establemente en el hospedero durante la multiplicación o mediante el uso de un marcador seleccionable en el vector. El vector puede ser un bacteriófago, plásmido, fagémido, vector viral, vector de transformación vegetal, vector de insecto o cromosoma artificial de levadura. Además, el vector puede ser una secuencia de nucleótidos útil como antisentido o para formar aptámeros . El término "inicio de la replicacion" significa una secuencia de nucleótidos en donde comienza la síntesis del ADN para la replicacion del vector. El inicio de la replicacion puede ocurrir en uno o más puntos dentro del vector dependiendo del vector que se está utilizando, como sería en un punto de un vector plásmido o en diversos puntos de un adenovector. El inicio de la replicacion generalmente se llama origen de la replicacion (abreviado como sitio ori "orí site por su abreviatura en inglés") en un vector plásmido. El término "marcador seleccionable" significa, por ejemplo, un gen que codifica para un polipéptido que le confiere resistencia a un fármaco, por ejemplo ampicilina, kanamicina, tetraciclina, cloramfenicol , neomicina, higromicina o metotrexato .

El término "secuencia reguladora" o "secuencias reguladoras" significa las secuencias de nucleótidos involucradas en la regulación de la respuesta de una acción. Esto incluye secuencias de nucleótidos y/o proteínas involucradas en la regulación, control o que afectan la expresión de genes estructurales o la replicación, selección o mantenimiento de un vector viral o plásmido. Los ejemplos incluyen atenuadores, lentificadotes , intensificadores, operadores, terminadores y promotores. El término "segmento invariable de la secuencia CpG" significa una secuencia de nucleótidos bicatenaria que tiene una citosina seguida por una guanina ligada por un enlace fosfato, es decir, el segmento invariable de la secuencia CpG tiene dos citosinas, una ubicada en cada cadena de la secuencia bicatenaria de nucleótidos. El término "metilación" o "segmento invariable de la secuencia de CpG metilado" pretende dar a entender que la citosina está metilada en el anillo pirimidina, lo que normalmente ocurre en la posición-5 del anillo pirimidina. Uno o más segmentos invariables de la secuencia de CpG metilado, en una secuencia de nucleótidos, puede resultar en una lentificación completa de la expresión de la secuencia de nucleótidos. Si los segmentos invariables de la secuencia CpG metilados están ubicados dentro de una secuencia de nucleótidos que codifica para un polipéptido o dentro de otras secuencias de nucleótidos involucradas en la expresión de una secuencia de nucleótidos específica, por ejemplo, una secuencia reguladora como se define anteriormente, se obtiene una reducción completa o sustancial de la expresión para esa secuencia de nucleótidos. El término "resistente a la metilación" significa la ausencia de metilación en una o ambas posiciones-5 de los anillos pirimidina ubicados dentro del segmento invariable de la secuencia CpG. Uno o más segmentos invariables de la secuencia CpG pueden desmetilarse dentro de un vector resistente a la metilación. La resistencia a la metilación se logra mediante el reemplazo de una citosina existente, con un análogo de citosina. El término "célula hospedera receptora" significa una célula diferente en comparación con la célula hospedera donante. Dentro de una célula hospedera receptora, un vector se metila en los segmentos invariables de la secuencia CpG ya que la célula hospedera receptora inicia la metilación de los segmentos invariables de la secuencia CpG de las secuencias de nucleótidos que son diferentes en comparación con la secuencia de nucleótidos de la célula hospedera receptora. Esto puede ocurrir cuando la célula hospedera receptora recibe un vector que se ha producido/multiplicado en una célula hospedera donante. La metilación del vector resulta en una lentificación reducida o completa del vector.

El término "reemplazado con un análogo de citosina" significa una citosina existente en un segmento invariable de la secuencia CpG como se define anteriormente que se reemplaza por un análogo de citosina. El análogo de citosina reemplaza al menos la posición- 5 del anillo pirimidina de la citosina. El análogo de la citosina es resistente a la metilación. Sin embargo, el análogo de citosina puede reemplazar en parte o completamente a la citosina. La citosina se reemplaza con un análogo de citosina durante la replicación del vector. El término "derivado de citidina" significa un derivado de citidina capaz de reemplazar la citosina en un segmento invariable de la secuencia CpG sin influir sobre la actividad de la secuencia de nucleótidos que alberga el derivado de citidina reemplazada, por ejemplo, la actividad de la secuencia de nucleótidos es la' misma que antes del reemplazo de citosina con un derivado de citidina. Por ejemplo, una secuencia de nucleótidos que codifica para un polipéptido aún será activa antes del reemplazo con una o más citosinas con derivados de citidina y expresará para el polipéptido. El derivado de citidina es un derivado que es incapaz de experimentar metilación en la posición-5 del anillo de pirimidina presente en el derivado de citidina. Los ejemplos de los derivados de citidina se encuentran en la Figura 1 y 2.

El término "mantener la expresión" significa la expresión de las secuencias de nucleótidos que codifican para un polipéptido y que alberga uno o más análogos de citosina, es decir, que mantiene la expresión en al menos un nivel aceptable. El nivel es más elevado que la forma no metilada de la secuencia de nucleótidos. La expresión mantenida puede encontrarse dentro del intervalo, que es mayor que la expresión para la forma metilada de la misma secuencia de nucleótidos o la expresión puede ser tan elevada como la expresión para la forma desmetilada de la misma secuencia de nucleótidos . El término "célula hospedera donante" es una célula utilizada para la producción/multiplicación del vector. Durante el crecimiento o multiplicación de la célula hospedera donante, se incrementa la cantidad de copias del vector y al mismo tiempo la citosina en los segmentos invariables de la secuencia CpG se reemplaza con un análogo de citidina, cuando se agrega el análogo de citosina en cantidad suficiente al medio de crecimiento utilizado para el cultivo de la célula hospedera donante. La célula hospedera donante es diferente en comparación con la célula hospedera receptora, como sería el caso en que la célula donante fuera una célula bacteriana o una partícula viral y la célula hospedera receptora fuera una célula vegetal o animal .

Vector de la Invención El vector según la invención es un vector que comprende una secuencia de nucleótidos en donde una o dos citosinas en al menos un segmento invariable de la secuencia CpG ha sido reemplazado con un análogo de citosina, el análogo de citosina es resistente a la metilación. Al proporcionar este vector, que es resistente a la metilación, se mantiene a cierto nivel la expresión de las secuencias de nucleótidos ubicadas dentro del vector, que es mayor en comparación con la forma metilada del vector. Con ello se mantiene la función del vector. Más aún, el reemplazo de citosina con los análogos de citosina puede utilizarse para regular la expresión de las secuencias de nucleótidos. La reducción o incremento del nivel de metilación da como resultado diferentes niveles de expresión, de manera que un mayor nivel de metilación, resulta en una disminución del nivel de expresión. Al reemplazar la citosina con un análogo de citosina, es posible evitar los problemas de metilación, que se manifiestan cuando el vector se introduce en una célula hospedera receptora. Según una primera modalidad, la citosina se reemplaza con un análogo de citosina el cuál reemplaza la posición-5 del anillo pirimidina de la citosina ubicada en el segmento invariable de la secuencia CpG. El análogo de citosina puede ser N, O ó C-X. X en C-X puede ser un grupo poco electrófilo o no electrófilo, como etilo o metoxilo. Más aún, la citosina puede reemplazarse con un derivado de citidina, como 5-azacitidina y/o 5-azadeoxicitidina. La 5-azadeoxicitidina también puede llamarse s-triazin-2 (1H) -ona, 4-amino-l- (2-deoxi- .beta. -D-eritro-pentofuranosil- (8CI) , 1, 3 , 5-triazin- 2 (1H) -ona, 4-amino-l- (2-deoxi- .beta. -D-eritro-pentofuranosil) - (9CI) , 5-aza-2 ' -deoxicitidina o Decitabina (USAN) . La cantidad y distribución de los análogos de citosina dentro de los segmentos invariables de la secuencia CpG del vector inhibe la metilación de la posición -5 del anillo pirimidina dando como resultado el mantenimiento de la expresión de las secuencias de nucleótidos que codifican para los polipéptidos ubicados dentro del vector. Una mayor cantidad de análogos de citosina integrados dentro de la región de secuencia de nucleótidos que codifica para un polipéptido del vector da como resultado una mayor posibilidad de mantenimiento de la expresión de las secuencias de nucleótidos presentes en aquella región de las secuencias de nucleótidos. Una mayor cantidad de análogos de citosina integrados dentro de otras regiones del vector puede influir indirectamente en el mantenimiento de la región de la secuencia de nucleótidos que codifica para un polipéptido. Los ejemplos de las regiones de secuencias de nucleótidos, que influyen indirectamente sobre otras regiones de secuencia de nucleótidos son las secuencias reguladoras como promotores . Un segmento invariable de la secuencia CpG incluye dos citosinas que tienen la habilidad de reemplazarse por un análogo de citosina. Ya sea una o ambas pueden reemplazarse, en el caso de que se integren varios análogos de citosina en el vector. Los análogos de citosina pueden integrarse ya sea en una o en la misma cadena o en ambas cadenas . Los análogos de citosina se integran en el vector durante la replicación de ese vector. La cantidad de análogos de citosina y su distribución resultan en la resistencia a la metilación de los análogos de citosina. La presencia de los análogos de citosina mantiene la expresión de las secuencias de nucleótidos incluyendo los análogos de citosina hasta un nivel aceptable.

En una modalidad, al menos 1% (por ejemplo, 1-5%) , de los segmentos invariables de la secuencia CpG son reemplazados por análogos de citosina, como 5% (por ejemplo, 5-10%), 10% (por ejemplo, 10-20%), 20% (por ejemplo, 20-30%), 30% (por ejemplo, 30-40%), 40% (por ejemplo, 40-50%), 50% (por ejemplo, 50-60%) . Preferiblemente, entre aproximadamente 1 a 100% de las citosinas se reemplazan por los análogos de citosina, como aproximadamente de 1 a 95% o aproximadamente de 5 a 95%. Los análogos de citosina se integran ya sea en una o en ambas cadenas de la secuencia de nucleótidos del vector. El vector puede comprender al menos un gen o parte de un gen. El gen depende de qué vector se utilice para el mismo. Un candidato potencial para el gen puede ser uno que desencadene una respuesta inmunitaria contra la influenza y que sea útil para vacunar seres humanos. Más aún, el vector puede comprender una o más secuencias reguladoras. Las secuencias reguladoras permiten la posibilidad de mantener y multiplicar el vector dentro de un hospedero donante adecuado y/o secuencias reguladoras que permiten la posibilidad de mantener y/o multiplicar el vector dentro de una célula hospedera receptora. Las secuencias reguladoras adicionales pueden estar presentes permitiendo la posibilidad de expresar para un gen y/o parte de un gen, dentro de una célula hospedera receptora, a un nivel adecuado de expresión. La elección de las secuencias reguladoras es dependiente del nivel deseado de expresión del gen o parte del gen y el experto en la técnica será capaz de identificar estas secuencias reguladoras . El vector puede ser una secuencia de nucleótidos como se define anteriormente que también se utilice terapéuticamente como ADN antisentido. Se toman precauciones en la producción de este ADN y si es posible, los dinucleótidos de CpG se omiten en las estructuras. Por ejemplo, el ADN antisentido se utiliza para interferir con el ADN nuclear y se forman segmentos invariables de la secuencia de triple hélice. Estas estructuras de triple hélice se deterioran durante la actividad transcripcional o el ADN que interfiere se puede asociar con las actividades que segmentan la cadena. El ADN antisentido también puede utilizarse para aglutinar el ARNm de manera tal, que la traducción del AR m se deteriora de manera que se induce la actividad del ARNasa H y se degrada la del ARNm. El vector puede ser una secuencia de nucleotidos como se define anteriormente, que puede formar aptámeros . Los aptámeros son ADN cortos y lineales que se aglutinan de manera específica a diferentes moléculas biológicas, como serían los diferentes segmentos invariables de las secuencias de proteínas específicas, carbohidratos y esteroides. Los aptámeros pueden bloquear así la actividad de ciertas moléculas biológicas. El vector puede ser cualquier vector siempre y cuando éste sea capaz de multiplicarse dentro de un hospedero (receptor y/o donante) , es decir, que tenga un inicio de la replicación. Deberá entenderse que no todos los vectores y secuencias reguladoras funcionan igualmente bien para expresar una secuencia de nucleotidos de interés . Tampoco un hospedero funcionará igualmente bien con el mismo sistema de expresión. Sin embargo, el experto en la técnica será capaz de hacer una selección entre estos vectores, secuencias reguladoras y hospederos sin llevar a cabo una experimentación innecesaria. Por ejemplo, en la selección de un vector, deberá considerarse el hospedero debido a que el vector deberá replicarse en la célula hospedera donante y/o receptora o ser capaz de integrarse en el cromosoma de la célula hospedera receptora. También deberá considerarse la cantidad de copias del vector, la habilidad de controlar la cantidad de copias y la expresión para otras proteínas codificadas por el vector, como marcadores seleccionables . En la selección de una secuencia reguladora, deberán considerarse una diversidad de factores. Estos incluyen, por ejemplo, la resistencia relativa de la secuencia, su facilidad de controlarse y su compatibilidad con las secuencias de nucleótidos que codifican para el polipéptido de interés, particularmente con respecto a las estructuras secundarias potenciales . Los hospederos deberán seleccionarse considerando su compatibilidad con el vector seleccionado, la toxicidad del polipéptido codificado por la secuencia de nucleótidos, sus caracteres de secreción, su habilidad para enrollar correctamente el polipéptido, sus requerimientos de cultivo o fermentación y la facilidad de purificación de los productos codificados por la secuencia de nucleótidos. El vector puede ser un vector que se replique de manera autónoma, es decir, un vector que existe como una entidad cromosómica extra, la replicación de la cuál es independiente de la replicacion cromosómica, por ejemplo, un plásmido. Alternativamente, el vector es uno que se integre en el genoma de la célula hospedera receptora y se replique junto con los cromosomas a los cuáles se ha integrado. Puede ser ventajoso de usar un vector que se integre en el genoma de una célula hospedera receptora , cuando cierto gen y/o parte de un gen y/o secuencia reguladora necesitan de protección contra posibles problemas de metilación. La metilación puede ocurrir al momento de la replicacion del genoma al cuál se ha integrado el vector. Otro ejemplo es cuando se necesita retirar cierto gen y/o parte de un gen y/o secuencia reguladora presente en un genoma. La expresión del gen y/o parte del gen y/o secuencia reguladora puede reducirse debido a la metilación y el reemplazo de este gen metilado y/o parte de un gen y/o secuencia reguladora con una forma desmetilada puede incrementar el nivel de expresión preexistente. El reemplazo puede llevarse a cabo utilizando métodos como la recombinación homologa usando ADN lineal . El gen y/o parte del gen y/o secuencia reguladora pueden reemplazarse de manera lentificada o acelerada. Un vector que comprende uno o más análogos de citidina que se integran en un genoma puede, al momento de la replicacion del genoma, dar lugar a nuevas copias del genoma que comprenden el vector sin uno o más análogos de citidina. Sin embargo, la nueva copia del genoma que alberga un vector puede aún así, ser resistente a la metilación incluso si no está presente ningún análogo de citidina dentro de la nueva copia del vector ubicado en la nueva copia del genoma. El vector puede ser un vector de expresión, en donde la secuencia de nucleótidos que codifica para el polipéptido de la invención está ligada de manera operable a segmentos adicionales requeridos para la transcripción de la secuencia de nucleótidos. El vector se deriva típicamente a partir de un plásmido o ADN viral. Se comercializan o se describen en la literatura una gran cantidad de vectores de expresión adecuados para la expresión en células hospederas mencionadas en la presente . Los vectores de expresión útiles para hospederos eucariotas incluyen, por ejemplo, vectores que comprenden secuencias reguladoras de SV40, virus del papiloma bovino, adenovirus y citomegalovirus . Los vectores específicos son, por ejemplo, pCDNA3.1 (+) \Hyg (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA) y pCI-neo (Stratagene, La Jolla, CA, EUA) . Los vectores de expresión útiles para levaduras incluyen el plásmido 2µ y derivados del mismo, el vector POT1 (US 4,931,373), el vector pJS037 descrito en Okkels, Ann. New York Acad. Sci. 782, 202-207, 1996 y pPICZ A, B ó C (Invitrogen) . Los vectores útiles para células de insecto incluyen pVL941, pBG311 (Cate et al., "Isolation of the Bovine and Human Genes for Mullerian Inhibiting Substance and Expresión of the Human Gene in Animal Cells" , Cell, 45, pp. 685-98 (1986), pBluebac 4.5 y pMelbac (ambos disponibles de Invitrogen) . Los vectores de expresión útiles para hospederos bacterianos incluyen los plásmidos bacterianos conocidos como plásmidos de E. coli, incluyendo pBR322, pET3 y pET12a (ambos de Novagen Inc., WI, EUA) , plásmidos con un mayor alcance de hospederos, como el RP , ADN de fago, por ejemplo, los diversos derivados del fago lambda, por ejemplo, NM989 y otros fagos ADN, como el M13 y los fagos filamentosos de ADN monocatenario . Los ejemplos de vectores virales adecuados son los vectores adenovíricos, los vectores virales adeno asociados, vectores retrovíricos, vectores lentivíricos , vectores de herpes y vectores virales de citomegalovirus . Otros vectores para usarse en esta invención incluyen aquellos que permiten que la secuencia de nucleótidos que codifica para el polipéptido se amplifique en cantidad de copias. Estos vectores amplificables se conocen bien en la técnica. Estos incluyen, por ejemplo, vectores capaces de amplificarse mediante amplificación por DHFR (ver, por ejemplo, Kaufman, Patente de EE.UU. No. 4,470,461, Kaufman y Sharp, "Construction Of A Modular Dihydrafoíate Reductase cDNA Gene: Análisis Of Signáis Utilized For Efficient Expresión", Mol. Cell . Biol . , 2, p . 1304-19 (1982)) y amplificación de glutamin-sintasa ("GS") (ver, por ejemplo, US 5,122,464 y EP 338,841) . El vector recombinante puede además comprender una secuencia de ADN que permite que el vector se replique en la célula hospedera en cuestión. Un ejemplo de esta secuencia (cuando la célula hospedera es una célula de mamífero) es el inicio de replicación SV40. Cuando la célula hospedera es una levadura, las secuencias adecuadas que permiten que el vector se replique son los genes de replicación REP 1-3 del plásmido de levadura 2µ y el inicio de replicación. El vector también puede comprender un marcador seleccionable, por ejemplo, un gen del producto del cuál se complementa con una deficiencia relacionada con toxina en la célula hospedera, como el gen que codifica para la dihidrofolato reductasa (DHFR) o el gen TP1 de ¦ Schizosaccharo yces pombe (descrito por P.R. Russell, Gene 40, 1985, pp. 125-130), o uno que confiera resistencia a un fármaco, por ejemplo, ampicilina, kanamicina, tetraciclina, cloramfenicol , neomicina higromicina o metotrexato. Para Saccharomyces cerevisiae, los marcadores seleccionables incluyen ura3 y leu2. Para los hongos filamentosos, los marcadores seleccionables incluyen amdS, pyrG, arcB, niaD y sC. El término "secuencias reguladoras" se define en la presente para incluir todos los componentes, que son necesarios o ventajosos para la expresión de un polipéptido de la invención. Cada secuencia reguladora puede ser natural o ajena a la secuencia de ácidos nucleicos que codifican para el polipéptido. Estas secuencias reguladoras incluyen entre otras, una secuencia líder, secuencia de poliadenilación, secuencia de propéptido, promotor (inducible o constitutivo) , secuencia activadora o intensificadora o en dirección 5', secuencia de péptido de señal y terminador de la transcripción. Como mínimo, las secuencias reguladoras incluyen un promotor. Se pueden utilizar una amplia variedad de secuencias reguladoras en la presente invención. Estas secuencias reguladoras útiles incluyen las secuencias reguladoras asociadas con genes estructurales de los vectores de expresión anteriores así como cualquier secuencia conocida para regular la expresión de genes de células procariotas o eucariotas o sus virus, y diversas combinaciones de las mismas. Los ej emplos de secuencias reguladoras adecuadas para dirigir la transcripción en células de mamífero incluyen los promotores tempranos y tardíos de SV40 y adenovirus, por ejemplo el promotor tardío principal de adenovirus 2, el promotor MT-1 (gen de metalotioneína) , el promotor inmediato-tardío del gen de citomegalovirus de roedor o humano (CMV) , el promotor del factor la de elongación de humano (EF-la) , el promotor de proteína 70 de choque térmico mínimo de Drosophila, el promotor del virus de sarcoma de ous (RSV) , el promotor de ubiquitina C de humano (UbC) , el terminador de la hormona humana de crecimiento, las señales de poliadenilación de la región Elb o SV40 y la secuencia de consenso de Kozak (Kozak, M. J Mol Biol 20 de agosto de 1987; 196 (4) : 947-50) . A fin de mejorar la expresión en células de mamífero se puede insertar un intrón sintético en la región 5' no traducida de la secuencia de nucleótidos que codifica para el polipéptido. Un ejemplo de un intrón sintético es el intrón sintético del plásmido pCI-Neo o del gen /3-globin (disponible de Promega Corporation, WI, EUA) . Más aún, se puede incluir un elemento IRES . Los ejemplos de secuencias reguladoras adecuadas para dirigir la transcripción en células de insecto incluyen el promotor de polihedrina, el promotor PIO, el promotor de proteina básica del virus de polihedrosis de Autographa californica, el promotor del gen 1 inmediatamente temprano del baculovirus y el promotor del gen temprano retardado 39K del baculovirus y la secuencia de poliadenilación SV40. Los ejemplos de las secuencias reguladoras adecuadas para usarse en células hospederas de levadura incluyen los promotores del sistema de copulación-a de levadura, el promotor de triosa-fosfato-isomerasa de levadura (TPI) , promotores de genes glicoliticos de levadura o genes de alcohol deshidrogenasa, el promotor ADH2-4C y el promotor inducible GAL. Los ejemplos de secuencias reguladoras adecuadas para usarse en células hospederas de hongos filamentosos incluyen el terminador y promotor ADH3 , un promotor derivado de los genes que codifican para proteasa alcalina o triosa-fosfato-isomerasa de ??? amilasa en Aspergillus oryzae, una a-amilasa de A. niger, glucoamilasa de A. Níger ó A. nidulans, acetamidasa de A. nidulans, lipasa o proteinasa aspártica de Rhizomucor miehei, el terminador TPI1 y el terminador ADH3. Los ejemplos de secuencias reguladoras adecuadas para usarse en células hospederas bacterianas incluyen promotores del sistema lac, el sistema trp, el sistema TAC ó TRC y las regiones del promotor principal del fago lambda. La presencia o ausencia de un péptido de señal dependerán, por ejemplo, de la célula hospedera de expresión usada para la producción del polipéptido a ser expresado (si es un polipéptido intracelular o extracelular) y si se desea obtener una secreción. Para usarse en hongos filamentosos, el péptido de señal puede derivarse convenientemente a partir de un gen que codifica para una amilasa o glucoamilasa de Aspergillus sp., un gen que codifica para una proteasa o lipasa de Rhizomucor miehei o una lipasa de Humicola lanuginosa. El péptido de señal se deriva preferiblemente a partir de un gen que codifica para TAKA amilasa de A. oryzae, a-amilasa neutra de A. níger, amilasa estable al ácido de A. niger, o glucoamilasa de A. niger. Para usarse en células de insecto, el péptido de señal puede derivarse convenientemente a partir de un gen de insecto (ver WO 90/05783) como el precursor de hormona adipocinética de Lepidopteron manduca sexta (ver US 5,023,328), la melitina de miel de abeja (Invitrogen) , UDP glucosiltransferasa de edicteroide (egt) (Murphy et al., Protein Expresión and Purification 4, 349-357 (1993) o lipasa pancreática humana (hpl) (Methods in Enzymology 284, pp. 262-272, 1997) . Un péptido de señal preferido para usarse en células de mamífero es el hG-CSF o el péptido de señal de murino de cadena ligera kappa de Ig (Coloma, M (1992) J. Imm. Methods 152: 89-104). Para usarse en células de levadura, los péptidos de señal adecuados son el péptido de señal de factor-a de S. cerevisiae (ver US 4,870,008), un péptido de señal de carboxipeptidasa modificada (ver L.A. Valls et al., Cell 48, 1987, pp. 887-897) , el péptido de señal BARI de levadura (ver WO 87/02670) , el péptido de señal de proteasa 3 aspártica de levadura (YAP3) (ver M. Egel-Mitani et al., Yeast 6, 1990, pp. 127-137) y la secuencia líder sintética TA57 ( 098/32867) . Se puede utilizar cualquier célula hospedera donante adecuada para el mantenimiento y producción del vector de la invención, como una célula eucariota y procariota, por ejemplo bacterias, hongos (incluyendo levaduras), vegetales, insectos, mamíferos u otras células o líneas celulares animales apropiadas así como plantas o animales transgénicos . La célula hospedera donante puede ser una célula hospedera donante que pertenezca a una línea celular certificada por GMP (Buena Práctica de Fabricación) , como una línea celular de mamífero. Los ejemplos de células hospederas donantes de bacterias incluyen bacterias grampositivas como cepas de Bacillus, por ejemplo B. brevis ó B. subtilis, Pseudomonas ó Streptomyces, o bacterias gramnegativas como cepas de E. coli. Los ejemplos de células hospederas donantes de hongos filamentosos adecuados incluyen cepas de Aspergillus, por ejemplo A. oryzae, A. niger, ó A. nidulans, Fusariu ó Trichodexma. Los ejemplos de células hospederas donantes de levaduras adecuadas incluyen cepas de Saccharomyces, por ejemplo, S. cerevisiae, Schizosaccharomyces, Klyveromyces, Pichia como por ejemplo P. pastoris ó P. methanolica, Hansenula, como por ejemplo H. Polymorpha 6 Yarrowia. Los ejemplos de células hospederas donantes de insectos adecuados incluyen una línea celular de Lepidoptora, como Spodoptera frugiperda (Sf9 ó Sf21) o células (High Five) de Trichoplusioa ni (US 5,077,214). Los ejemplos de células hospederas donantes de mamífero adecuadas incluyen líneas celulares de ovarios de hámster chino (CHO) , (por ejemplo, CHO-K1, ATCC CCL-61) , líneas celulares de mono verde (COS) (por ejemplo, COS 1 (ATCC CRL-1650) , COS 7 (ATCC CRL-1651) ) ; células de ratón (por ejemplo NS/O) , líneas celulares de riñon de hámster prematuro (BHK) (por ejemplo, ATCC CRL-1632 ó ATCC CCL-10) y células de humano (por ejemplo, HEK 293 )ATCC CRL-1573)), así como células vegetales en cultivo tisular. Se conocen en la técnica otras líneas celulares donantes adecuadas y están disponibles de los depósitos públicos como la Colección Americana de Tipos de Cultivo, "American Type Culture Collection, Rockville, Maryland" . En una modalidad específica, la invención se relaciona con una secuencia de nucleótidos obtenida de un hospedero donante que alberga la secuencia de nucleótidos que es parte del vector. El vector y el hospedero donante son un vector y un hospedero donante como se describen anteriormente. La secuencia de nucleótidos puede ser una unidad transcripcional que comprende una secuencia de nucleótidos y promotor, como un gen o parte de un gen y un sitio de poliadenilación. La secuencia de nucleótidos puede ser un gen y/o parte de un gen y/o una o más secuencias reguladoras como se menciona anteriormente. Un ejemplo de gen o genes de interés son los genes que codifican para proteínas nucleares como la proteína nuclear de influenza que codifica para genes que pueden usarse para la vacunación. Otro ejemplo es el gen que codifica para la tirosina hidroxilasa, que puede ser útil para el tratamiento contra enfermedad de Parkinson. Un tercer ejemplo son los genes que codifican para el factor X ó VIII involucrado en el complejo de coagulación sanguínea o interferón gamma. Además, todos los tipos de genes útiles en la terapia génica como el tratamiento contra el cáncer son candidatos de genes útiles para usarse según la invención, como timidita cinasa del virus Herpes Simplex (HSV) . La secuencia de nucleótidos puede utilizarse como antisentido. Por ejemplo, el ADN antisentido se utiliza para interferir con el ADN nuclear para que se formen los segmentos invariables de la secuencia de la triple hélice. Estas estructuras de triple hélice se deterioran en la actividad transcripcional o el ADN que interfiere puede asociarse con actividades que segmentan la cadena. El ADN antisentido también puede utilizarse para aglutinar al ARNm de manera tal que la traducción del ARNm se deteriora y para que la actividad de ARNasa H se induzca y se degrade el ARNm. Además, la secuencia de nucleótidos puede utilizarse como aptámeros, que son cortos tramos de secuencias de nucleótidos que se unen de manera especifica a diferentes moléculas biológicas como serían esferoides, carbohidratos y segmentos específicos invariables de la secuencia de proteínas, etc. El uso de un análogo basado en citosina, como la aza-deoxicitidina, que no puede metilarse, puede disminuir la inmunogenicidad del ADN desmetilado y con ello reducir los efectos inmunoestimulantes secundarios . La secuencia de nucleótidos y/o vector como las unidades transcripcionales amplificadas mediante PCR puede utilizarse para transfectar células. El vector puede linearizarse y, por ejemplo, las partes procariotas pueden separarse mediante digestión con enzimas de restricción. Por ejemplo, este ADN producido in vi tro puede utilizarse para la inmunización o en terapia génica, ex vivo o in vivo. En otra modalidad, la invención se relaciona con un polipéptido producido mediante la célula hospedera donante, el polipéptido es codificado por una secuencia de nucleótidos que es parte del vector de conformidad con la invención y descrito anteriormente . En otra modalidad, la invención se relaciona con una composición farmacéutica que comprende el vector y/o el hospedero donante y/o una secuencia de nucleótidos descritas anteriormente obtenidos de un vector y/o un polipéptido y un diluyente, portador, adyuvante o excipiente farmacéuticamente aceptable . El vector, la secuencia de nucleótidos, el polipéptido o una composición farmacéutica como se describen anteriormente pueden transferirse a una célula hospedera receptora mediante el uso de un método de transformación adecuado como electroporación, bombardeo mediante microproyectiles o suministro mediado por liposoma. El vector, la secuencia de nucleótidos, el polipéptido o una composición farmacéutica como se describe anteriormente pueden utilizarse en la terapia y/o en el diagnóstico. El vector, la secuencia de nucleótidos o una composición farmacéutica como la descrita anteriormente pueden utilizarse para la fabricación de un medicamento para usarse en terapia y/o en diagnóstico. Método para la producción del vector de la invención Una modalidad de la invención se relaciona con un método, que reduce la metilación de los segmentos invariables de la secuencia CpG en un vector en un hospedero receptor, cuyo método comprende reemplazar al menos una citosina en un segmento invariable de la secuencia CpG con un análogo de citosina, el vector se describe anteriormente. El método puede ser un método de cultivo o un método, que amplifica el vector, mediante PCR. Según otra modalidad de conformidad con la invención, el método comprende los pasos de: proporcionar un vector; transferir el vector a una célula hospedera donante; cultivar la célula hospedera donante que alberga el vector en un medio de cultivo que consiste de una cantidad adecuada de análogos de citosina y aislar el vector multiplicado que comprende análogos de citosina incorporados en una o dos citosinas en al menos uno de los segmentos invariables de la secuencia CpG. El vector es un vector como se describe anteriormente y la célula hospedera donante es un hospedero donante como se describe anteriormente . El vector y el hospedero donante se seleccionan dependiendo del propósito para crear el vector específico con análogos de citosina incorporados y la persona diestra en la técnica puede llevar a cabo esta selección. El vector se transfiere (introduce) en el hospedero donante utilizando un método adecuado dependiendo de cuál hospedero donante se haya seleccionado. La introducción de un vector en una célula hospedera donante bacteriana puede, por ejemplo, efectuarse ' mediante transformación de protoplasto (ver, por ejemplo, Chang y Cohén, 1979, Molecular General Genetics 168: 111- 115) , usando células competentes (ver, por ejemplo, Young y Spizizin, 1961, Journal of Bacteríology 81: 823-829, ó Dubnau y Davidoff-Abelson, 1971, Journal of Molecular Biology 56: 209-221) , electroporación (ver, por ejemplo, Shigekawa y Dower, 1988, Biotechniques 6: 742-751) , o conjugación (ver, por ejemplo, Koehler y Thorne, 1987, Journal of Bacteríology 169: 5771-5278). Las células fúngicas pueden transformarse mediante un proceso que involucra la formación de protoplasto, transformación de los protoplastos y regeneración de la pared celular en una forma conocida per se. Los procedimientos adecuados para la transformación de las células hospederas de Aspergillus se describen en EP 238 023 y US 5,679,543. Los métodos adecuados para transformar especies de Fusarium se describen por Malardier et al., 1989, Gene 78: 147-156 y O 96/00787. Las levaduras pueden transformarse utilizando los procedimientos descritos por Becker y Guarente, en Abelson, J. N. y Simón, M. I., editores, Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology, Methods in Enzymology, Volumen 194, p. 182-187, Academia Press, Inc., Nueva York; Ito et al., 1983, Journal of Bacteriology 153: 163; Hinnen et al., 1978, Proceedings of the National Academy of Sciences USA 75: 1920; y como se describe en Clontech Laboratories, Inc, Palo Alto, CA, EUA (en el protocolo de productos para el Sistema de Equipo para la Transformación de Levadura Yeastmaker™) . La transformación de células de insecto y la producción de polipéptidos heterólogos en ellas puede llevarse a cabo como se describe por Invitrogen. Los métodos para introducir ADN exógeno en células hospederas donantes de mamífero incluyen la transfección mediada por fosfato de calcio, electroporación, transfección mediada por DEAE-dextrán, transfección mediada por liposoma, vectores virales y el método de transfección descrito por Life Technologies Ltd, Paisley, U usando Lipofectamin 2000. Estos métodos se conocen bien en la técnica y se describen, por ejemplo por Ausubel et al., (editores), 1996, Current Protocola in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Nueva York, EUA. En los métodos de producción de la presente invención, las células se cultivan en un medio de crecimiento adecuado para el mantenimiento y/o producción del vector utilizando métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, la célula puede cultivarse mediante un cultivo en matraz de agitación, fermentación a gran escala o a menor escala (incluyendo fermentaciones continuas, por lotes, alimentación por lotes o en estado sólido) en fermentadores de laboratorio o industriales que se llevan a cabo en un medio adecuado y en condiciones que permitan que el vector, secuencia de nucleótidos o el polipéptido puedan expresarse y/o aislarse. El vector, secuencia de nucleótidos o el polipéptido pueden utilizarse en la industria química o farmacéutica. El cultivo tiene lugar en un medio de crecimiento adecuado que comprende fuentes de carbono y nitrógeno y sales inorgánicas, usando procedimientos que se conocen en la técnica. El medio adecuado está disponible de distribuidores comerciales o puede prepararse según las composiciones publicadas (por ejemplo, en catálogos de la Colección Americana de Tipos de Cultivo "American Type Culture Collection" ) · El cultivo de células donantes de mamífero se lleva a cabo según los métodos establecidos, por ejemplo como se describe en (Animal Cell Biotechnology, Methods and Protocols, Editado por Nigel Jenkins, 1999, Human Press Inc, Toto a, Nueva Jersey, EUA y Harrison MA y Rae IF, General Techniques of Cell Culture, Cambridge University Press 1997) . El análogo de citosina como se describe anteriormente se agrega al medio de cultivo en una cantidad adecuada, que es suficiente para obtener un vector que tiene una cantidad suficiente de análogos de citosina incorporadas en la secuencia de nucleótidos para producir una expresión deseada de las secuencias de nucleótidos que codifican para los polipéptidos . La cantidad de análogos de citosina es dependiente de varios factores incluyendo el tamaño del vector, la cantidad de segmentos invariables de la secuencia CpG y la célula hospedera. Por ejemplo, en células eucariotas normalmente se utilizan 10 µ? de 5-azacitidina y/o 5-azadeoxicitidin . El análogo de citosina puede agregarse ya sea antes del cultivo o durante el paso de cultivo. Después del cultivo del hospedero donante éste se aisla por ejemplo mediante centrifugación y el vector se retira mediante métodos conocidos en la técnica. Los ejemplos de métodos son aquellos mencionados en aniatis et al . , Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbour Press) (1989) y Qiagen Inc. La cantidad y distribución de los análogos de citosina presentes en el vector después de la producción en un hospedero donante adecuado puede determinarse por ejemplo mediante el uso de HPLC, GC ó TC 5-azadeoxicitidina y/o 5-azacitidina marcada. Además, el vector como se define anteriormente puede producirse mediante amplificación, como mediante el uso de PCR. Un ejemplo es la amplificación de la unidad transcripcional mediante PCR y el uso de estas unidades para transfectar las células directamente. Otra posibilidad es usar el vector de la invención, como un vector plásmido para la transfección. El vector puede linearizarse y, por ejemplo, las partes procariotas pueden descartarse mediante digestión con enzimas de restricción. Mediante el uso de PCR todos los sitios, que pueden reemplazarse mediante un análogo de citosina, pueden reemplazarse debido a la ausencia de dCTP durante la reacción de amplificación. El vector amplificado puede utilizarse para la inmunización o en terapia génica, ex vivo o in vivo. Un ejemplo de una transfección de una línea de células de mamífero con una unidad transcripcional , incluyendo un promotor, un ADNc y un sitio de poliadenilación, que puede llevarse a cabo para producir una proteína codificada por el ADNc que se ha de secretar de las células en un fermentador. Equipo de la invención En consecuencia, la invención se relaciona con un equipo que comprende un vector como se describe anteriormente y/o una célula hospedera donante como se describe anteriormente que incluye una descripción de cómo utilizar el vector y/o el vector y la célula hospedera donante. El equipo puede además comprender un medio de crecimiento adecuado para que la célula hospedera donante pueda cultivar (multiplicar) el vector. El equipo puede utilizarse para la producción de polipéptido en la industria o en un método para el tratamiento de un mamífero que sufre de un trastorno o que se encuentra en necesidad de vacunarse. Los ejemplos de los trastornos son influenza y cáncer. Uso farmacéutico y formulaciones Según una modalidad de la invención, el vector, hospedero donante, secuencia de nucleótidos, polipéptido o la composición farmacéutica según la invención pueden utilizarse para diversas aplicaciones incluyendo la vacunación y terapia génica. Sin embargo, cuando el vector y/u hospedero donante se utiliza para el tratamiento contra un trastorno o vacunación, es importante que las secuencias de nucleótidos que forman el vector sean secuencias de nucleótidos (por ejemplo, inicio de la replicación y secuencias reguladoras) que mantengan su actividad como la expresión de un polipéptido dentro de un hospedero del receptor, es decir, las células del paciente. Por ejemplo, en el caso cuando un vector se utiliza para la vacunación de un humano, es importante que el promotor se utilice en dirección 5' de las secuencias de nucleótidos que codifican para un polipéptido que produce la respuesta inmunitaria, es decir, que el promotor sea activo en una célula humana. El promotor puede ser inducible y/o constitutivo. En el caso de utilizar un promotor inducible, puede inducirse por un agente que se administre ya sea junto o después del vector y/o el hospedero donante. El promotor puede además ser inducido por un agente producido dentro del paciente ya sea de manera local o sistémica. Por ejemplo, si los plásmidos que codifican para insulina se introducen intramusculármente mediante electroporación, entonces este plásmido expresará para insulina durante un tiempo y después disminuye durante un tiempo. Por otra parte, un plásmido resistente a la metilación probablemente tendrá una expresión constante durante un largo período de tiempo. Si este plásmido tiene un promotor inducible por tetraciclina, la producción de insulina puede controlarse mediante la administración oral de tetraciclina. Este tipo de terapia génica puede ser aplicable para pacientes con diabetes tipo deficiente de insulina o si el gen a ser expresado es un factor de coagulación que falta en pacientes hemofílicos . En una segunda modalidad, el hospedero donante/vector, secuencia de nucleótidos, polipéptido o la composición farmacéutica según la invención se utiliza para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de trastornos o vacunación, como el cáncer. En la actual terapia contra el cáncer, hay un enfoque en terapias diferentes a la quimioterapia y radioterapia clásicas . La terapia antiangiogénica, así como la inmunoterapia contra el cáncer son los dos campos más prometedores. Ambas terapias pueden utilizar la terapia génica para la producción de agentes antiangiogénicos o para la producción de agentes tóxicos o inmunoestimulantes . Estos tipos de terapia pueden optimizarse mediante los vectores resistentes a la metilación, tanto en forma de plásmidos puros o como vectores virales que se hacen resistentes contra la metilación. Por ejemplo, un adenovirus genéticamente modificado que expresa para el gen para la timidita-cinasa de Herpes Simplex (HSV-TK) puede producirse en presencia de un análogo de citosina descrito. Luego, el ADN del adenovirus contiene este análogo y al momento de infección el adenovirus expresará mayores niveles de HSV-TK durante un período de tiempo más largo en comparación a un adenovirus que no tenga el ADN resistente a la metilación. Luego, las células tumorales pueden eliminarse por el fármaco de herpes virus. La eliminación está correlacionada con la producción de HSV-TK, es decir, a mayor concentración de HSV-TK, más sensible será al f rmaco la célula tumoral . En otra modalidad, el hospedero donant /vector, secuencia de nucleótidos, polipéptido o la composición farmacéutica según la invención se utilizan en un método para el tratamiento de un mamífero que tiene un trastorno o necesita de vacunación. La vacunación se ha llevado a cabo tradicionalmente mediante el uso de virus patógenos mutados o muertos. La vacunación por ADN utiliza las proteínas codificadas por el ADN del patógeno. Este gen o genes se clonan en un plásmido u otro vector. Los plásmidos que codifican para las proteínas patógenas pueden inyectarse, por ejemplo, intramuscularmente . El plásmido expresará para las proteínas patógenas que son reconocidas por el sistema inmunitario de la persona. Este tipo de inmunización luego protege contra una infección subsecuente del mismo patógeno. La fuerza de la reacción inmunitaria depende de la producción de la proteína patógena. Una producción demasiado baja de las proteínas patógenas pudiera no ser reconocida por el sistema inmunitario. Por lo tanto, la "inmunización tanto de humano como de animales con vectores resistentes a la metilación ha de mejorar su eficacia. Las formulaciones farmacéuticas del hospedero donante/vector, secuencia de nucleótidos, polipéptido de la invención se administran típicamente en una composición que incluye uno o más portadores o excipientes farmacéuticamente aceptables. Estas composiciones farmacéuticas pueden prepararse de una manera conocida en la técnica que sea lo suficientemente estable durante el almacenamiento y adecuada para su administración en humanos y animales. La composición farmacéutica puede' liofilizarse. El término "composición farmacéuticamente aceptable" significa un portador o excipiente que a la dosis y concentraciones empleadas no cauce efectos indeseados en los pacientes a los cuáles se les administra. Estos portadores o excipientes farmacéuticamente aceptables se conocen bien en la técnica (ver Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a edición, A. . Gennaro, Ed., Mack Publishing Company (1990) y handbook of P armaceutical Excipients, 3a edición, A. Kibbe, Ed., Pharmaceutical Press (2000) . La composición farmacéutica puede mezclarse con adyuvantes como lactosa, sacarosa, almidón en polvo, esteres de celulosa de ácido alcanoico, ácido esteárico, talco, estearato de magnesio, óxido de magnesio, sales de sodio y calcio de ácido fosfórico y sulfúrico, acacia, gelatina, alginato de sodio, polivinilpirrolidina y/o alcohol polivinílico y pueden formarse en tabletas o en cápsulas para su administración convencional. Alternativamente, pueden disolverse en solución salina, agua, polietilenglicol, propilenglicol , etanol, aceites (como aceite de maíz, aceite de cacahuate, aceite de semilla de algodón o aceite de ajonjolí) , goma tragacanto y/o diversos amortiguadores. Otros adyuvantes y modos de administración se conocen bien en la técnica farmacéutica. El portador o diluyente puede incluir un material de liberación prolongada como el monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo junto o con cera u otros materiales que se conocen bien en la técnica. Las composiciones farmacéuticas pueden someterse a operaciones farmacéuticas convencionales como esterilización y/o pueden contener adyuvantes convencionales como conservadores, estabilizadores, agentes humectantes, emulsionantes, amortiguadores, cargas, etc., por ejemplo como - se describe en otra parte de este documento. La composición farmacéutica según la presente invención puede administrarse localmente o sistémicamente como tópicamente, intravenosamente, oralmente, parenteralmente o como implantes e incluso es posible el uso rectal . Las formas de preparación farmacéutica adecuadas en estado sólido o líquido son, por ejemplo, gránulos, polvos, tabletas, tabletas recubiertas, microcápsulas, supositorios, jarabes, emulsiones, suspensiones, cremas, aerosoles, gotas o solución inyectable en ampolleta y también preparaciones con liberación retardada de compuestos activos en cuya preparación se incluyen habitualmente excipientes, diluyentes, adyuvantes o portadores como se describen anteriormente . La composición farmacéutica se administrará a un paciente en una dosis farmacéuticamente efectiva. Mediante el término "dosis farmacéuticamente efectiva" se da a entender una dosis que es suficiente para producir los efectos deseados en relación con el estado para el cuál se está administrando. La dosis exacta es dependiente de la actividad del compuesto, forma de administración, naturaleza y severidad del trastorno, edad y peso corporal del paciente el cuál puede necesitar diferentes dosis. La administración de la dosis puede llevarse a cabo tanto en una sola administración en forma de una unidad de dosis individual o a manera de varias unidades de dosis más pequeña y también mediante administración múltiple de dosis subdividida a intervalos específicos. Por ejemplo vacunación. La composición farmacéutica de la invención puede administrarse sola o en combinación con otros agentes terapéuticos. Estos agentes pueden incorporarse como parte de la misma composición farmacéutica o pueden administrarse por separado . El "paciente" para los propósitos de la presente invención, incluye tanto humanos como otros mamíferos. Por o tanto, los métodos son aplicables tanto para terapia en humanos como aplicaciones en medicina veterinaria. Los siguientes ejemplos pretenden ilustrar pero no limitar la invención en cualquier forma, manera explícita o implícita. EJEMPLOS Ejemplo 1 Producción en bacterias de ADN plásmido resistente a la metilación 1. Inocular 2 mi de medio LB convencional y 50 kilogramos/ml de ampicilina en un tubo de ensayo de 10 mi con E. coli que alberga el plásmido de interés. 2. El cultivo se incuba en un agitador (200 rpm) durante la noche a 37°C. 3. Luego se utiliza el cultivo que se ha dejado durante la noche para inocular 500 mi de medio LB en un matraz de cultivo de 2 litros. El matraz se incuba a 37°C con agitador hasta que el crecimiento de las bacterias alcance OD(650) de 0,5 a 0,8. 4. Se agrega 5 ' -deoxi-azacitidina u otro análogo de deoxicitidina a una concentración de 10 µ? y también se agrega cloramfenicol a una concentración final de 180 /¿g/ml. 5. El cultivo se incuba durante la noche a 37°C en un agitador igual al anterior. 6. La bacteria se sedimenta mediante centrifugación convencional y el ADN plásmido se aisla según el Protocolo Convencional Qiagen Inc. Maxipre . Ej emplo 2 Producción de adenovirus con ADN resistente a la metilación 1. Sembrar en placas células 911 ó 293 dentro de matraces T-75 convencionales para que tengan un 60-90% de confluencia al momento de la infección (aproximadamente 1 x 107 células/T-75) . Normalmente, son suficientes de 15 a 20 matraces T-75 para hacer una reserva de elevada titulación. 2. Infectar células con el sobrenadante de virus a una multiplicidad de infección (MOI) de 5 a 10 PFU (unidades formadoras de placa) por célula. 3. En el día 2, agregar 5 ' -deoxi-azacitidina a una concentración de 10 µ?. 4. Cuando todas las células se han reunido y aproximadamente la mitad de las células se desprenden (normalmente de 3 a 4 días después de la infección) , aislar y combinar todos los matraces . Centrifugar durante 5 minutos en una centrifugadora de mesa (~500g) y retirar el sobrenadante. 5. Resuspender el sedimento en 8.0 mi de PBS estéril .

Llevar a cabo cuatro ciclos de congelamiento/descongelamiento/vórtice. Centrifugar el lisado en un rotor Sorvall HS4 a 6000 rpm (7000 g) a 4°C durante 5 minutos . 6. Pesar 4.4 gramos de CsCl en un tubo cónico de 50 mi, transferir 8.0 mi del sobrenadante transparente de virus al tubo y mezclar bien mediante centrifugación. Transferir la solución de CsCl (aproximadamente 10 mi, densidad de 1.35 g/ml) a un tubo de polialómero de 12 mi para el rotor SW41. Recubrir con 2 mi de aceite mineral . Preparar un tubo de balance. Girar el gradiente en el rotor SW41 a 32,000 rpm, 10 °C, durante 18 a 24 horas. 7. Recolectar la fracción de virus (aproximadamente 0.5 a 1.0 mi) con una jeringa de 3 ce y una aguja calibre 18. Insertar la aguja a través del tubo desde abajo. Mezclar con un volumen igual 2X Amortiguador de Almacenamiento (2X Amortiguador de Almacenamiento = 10 mM Tris; pH 8.0, 100 mM NaCl, 0.1% BSA y 50% glicerol, filtro esterilizado). Almacenar la reserva de virus a -20 °C. 8. Verificar titulación de virus mediante GFP (preferido) o mediante valoraciones en placa (ver a continuación) o mediante tinción inmunohistoquímica o simplemente lectura de OD a 260 nm. Para obtener una lectura de OD, agregar 15 µ? de virus a 15 µ? de solución en blanco (Solución en Blanco = 1.35 g/ml CsCl mezclado con un volumen ' igual de 2X amortiguador de almacenamiento) además de 100 µ? TE/0.1%/SDS; revolver girando durante 30 segundos, centrifugar durante 5 minutos, medir A260. Una unidad de A260 contiene aproximadamente 1 x 1012 partículas virales (la proporción de partículas rpartículas infecciosas deberá ser de aproximadamente 20:1) . Ejemplo 3 Cuantificación del grado de incorporación de 5- azadeoxicitidina en ADN Método 1 Agregar 5 ' -deoxi-azacitidina al medio de las células en crecimiento a una concentración de 10 µ?. También agregar una cantidad traza de desoí-azacitidina marcada con 14C, por ejemplo, 5 /¿Ci . Si la actividad específica de la azacitidina marcada es 500 Ci/mmol esto es equivalente a 10 pmol de azacitidina. Si el volumen utilizado es 100 mi, entonces la concentración del nucleótido radiomarcado es 100 p . La relación entre el nucleótido anterior y el marcado es entonces 100,000:1. La radioactividad del ADN aislado se cuantifica en un contador de centelleos y la incorporación se estima dependiendo de la eficacia del contador de centelleo (1 Ci = 1 x 1010 dps) . Método 2 Agregar 5 ' -deoxi-azacitidina al medio de células en cultivo a una concentración de 10 µ?. La molécula de aza-citidina puede separarse por medio de HPLC de la citidina. El ADN aislado se somete a tratamiento con ADNasa I para que una elevada concentración de nucleótidos libres que pueda generar. Las muestras se inyectan en una columna HPLC adecuada y los nucleótidos se separan en citidina, timidita, guanina, adenina y 5 ' -azacitidina, respectivamente. La concentración de aza-citidina con relación a la citidina se cuantifica. Ej emplo 4 Producción de ADN vector, in vitro, usando PCR Una unidad transcripcional que contiene un promotor CMV, el gen que codifica para la proteína verde fluorescente (GFP) y un sitio de poliadenilación HSV-TK enmarcado por dos aislantes en la dirección opuesta se clona en un plásmido. Las direcciones opuestas de ambos aislantes de la beta globina de pollo se usó para que se ocurra la recombinación, la orientación de la unidad transcripcional solo se invierta y o se pierda. El propósito es el de amplificar la unidad transcripcional con análogos base que la hagan resistente a la metilación e introducir la unidad en las células de glioma de humano. Las diferentes proporciones entre el análogo base de trifosfato de 5 ' -aza-2 ' -deoxi-citidina y trifosfato de 2'-deoxi citidina se utilizan para generar el ADN vector con diferentes niveles de 5'-aza citidina resistente a la metilación. 1. Se mezclan 10 ng de estructura del gen clonado en el vector de transporte pAd-easy en un tubo de reacción que contiene un amortiguador para pfu ADN polimerasa con 5 mM de MgCl2, 100 mM Tris a pH 7.4, mezcla de deoxinucleótido trifosfato que contiene 250 micromolares de dATP, dGTP y dTTP. La mezcla de la reacción también contiene una mezcla entre trifosfato de 5 ' -aza-2 -deoxicitidina y trifosfato de 2 ' -deoxicitidina en las siguientes proporciones: 100:0, 75:25, 50:50, 25:75 y 0:100 para que la concentración final sea 250 micromolares de ambas citidinas juntas. La mezcla de la reacción también contiene dos cebadores, el cebador directo es CAGGACTCTGATGCAACCAGG y el cebador inverso es CCCTACCATTAGATGGATCAG. La mezcla de la reacción contiene 250 ng de cada cebador y el volumen de reacción es de 50 microlitros . 2. A los cinco tubos diferentes, se agregan dos unidades de pfu ADN polimerasa (Stratagene Inc., EUA) y se ejecutan 20 ciclos de PCR con una temperatura de fijado de 56°C durante 1 minuto, a una temperatura de reacción a 72 °C durante 2 minutos y una temperatura de desnaturalización a 95°C durante 40 segundos. 3. Luego del PCR, las cinco reacciones experimentaron una electroforesis en gel de azarosa y bajo los suave ultravioleta, se removieron las cinco bandas diferentes en el gel y se aisló el gel del ADN de los cinco diferentes fragmentos . 4. A los tres diferentes cultivos de células primarias de glioma de humano, un microgramo de cada uno de los cinco diferentes vectores se utilizó para la transfección siguiendo el protocolo de Boehringer & Mannheim usando FUGENE. La cantidad de células que se utilizó para cada transfección fue de 5 x 106 células en diez diferentes matraces de cultivo tisular. 5. Luego de un período de 24 horas, las células se tripsinizaron y transfirieron a 10 nuevos matraces de cultivo celular y se utilizaron 1 x 105 células para el análisis FACS, monitoreando la expresión transitoria de las diez muestras diferentes . 6. Una semana después de la transfección, las células se tripsinizaron nuevamente y las células se clasificaron usando FACS (Becton Dickinson Inc . , EUA) . Las células positivas para GFP se volvieron a colocar en placas de 24 pocilios. Se le dio seguimiento a los cultivos y se monitorizaron usando un microscopio fluorescente invertido (Olympus) . Dos semanas después de expandir los cultivos, nuevamente se sometió a las células a una clasificación celular por FACS. 7. Las células positivas para GFP se diluyeron a 0.5 células por 100 microlitros y 100 microlitros se colocaron en 96 pocilios replicados para cada uno de los diez diferentes cultivos. Se cuantificaron los clones unicelulares que se originaron de esta clonación para la expresión a largo plazo ' de GFP . Ejemplo 5 Elaboración de una planta transgénica Las células competentes de Agrobacterium tumefaciens se sometieron a transfección con el plásmido p TIOl en donde el gen para la proteína verde fluorescente se clona en el sitio Eco RI del plásmido y estuvo bajo el control del promotor del virus del mosaico de la coliflor (CaMV) . Las bacterias se cultivaron en caldo YM (0.04% de extracto de levadura, 1% mannitol, 1.7 mM NaCl, 0.8 M MgS0 · 7H20, 2.2 m K2HP04-3H20, (pH 7.0)) y a un OD de 0.1, el medio se suplemento con 100 micromolares de 5' -aza-2 ' -deoxicitidina . El ADN plásmido se aisló usando la técnica convencional con un equipo de Qiagen Inc . El ADN plásmido aislado se utilizó para la electroporación de células de tejido leñoso cicatrizal de cebada (Hordeum vnlgare) . Como testigo, se utilizó el mismo plásmido que no contiene aza-citidina . La frecuencia de transformación se siguió bajo un microscopio fluorescente invertido y los clones estables tanto de la transfección de plásmido natural así como aquellos transformados con plásmidos que contienen aza- citidina se sometieron a una diferenciación y se desarrollaron plantas de ambas categorías . Se estudió en ambos grupos la expresión para la proteína de medusa (GPP) a ' largo plazo. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el convencional para la manufactura de los objetos a que la misma se refiere.

Claims

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones: 1. Un vector que comprende una secuencia de nucleótidos, caracterizado porque una o dos citosinas en al menos un segmento invariable de la secuencia CpG han sido reemplazadas con un análogo de citosina resistente a la metilación. 2. El vector de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el análogo de citosina reemplaza la posición-5 del anillo pirimidina de la citosina ubicada en el segmento invariable de la secuencia CpG, con N, O ó C-X. 3. El vector de conformidad con la reivindicación 2 , caracterizado porque el análogo de citosina es un derivado de citidina . 4. El vector de conformidad con la reivindicación 3 , caracterizado porque el derivado de citidina es 5-azacitidina y/o 5-azadeoxicitidina . 5. El vector de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque X es un grupo poco electrófilo o no electrófilo . 6. El vector de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque el grupo poco electrófilo o no electrófilo se selecciona a partir del grupo que consiste de etilo y metoxilo. 7. El vector de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque las citosinas o citosina reemplazada (s) están ubicadas en una y la misma cadena de ADN o en ambas cadenas de ADN del vector. 8. El vector de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el vector es un vector monocatenario o bicatenario lineal o circular. 9. El vector de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el vector se selecciona a partir del grupo que consiste de bacteriófagos, plásmidos, fagémidos, vectores virales, vectores vegetales de transformación, vectores de insecto y cromosomas artificiales de levadura. 10. El vector de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque la cantidad de análogos de citosina y la distribución de los análogos de citosina hacen que las secuencias de nucleótidos, incluyendo los análogos de citosina, sean resistentes a la metilación y mantengan la expresión de las secuencias de nucleótidos incluyendo los segmentos invariables de la secuencia CpG que contienen los análogos de citosina. 11. El vector de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque al menos 1% de los segmentos invariables de la secuencia CpG se reemplazan con análogos de citosina. 12. El vector de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque al menos 5% de los segmentos invariables de la secuencia CpG se reemplazan con análogos de citosina. 13. El vector de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque al menos 10% de los segmentos invariables de la secuencia CpG se reemplazan con análogos de citosina . 14. El vector de conformidad con la reivindicación 13 , caracterizado porque al menos aproximadamente 1% a aproximadamente 100% de los segmentos invariables de la secuencia CpG se reemplazan con análogos de citosina. 15. El vector de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el vector comprende al menos un gen o parte de un gen. 16. El vector de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el vector comprende una o más secuencias reguladoras de expresión. 17. Una célula hospedera donante, caracterizada porque comprende un vector de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-16. 18. La célula hospedera donante de conformidad con la reivindicación 17, caracterizada porque la célula donante es una célula eucariota o procariota. 19. La célula hospedera donante de conformidad con la reivindicación 18, caracterizada porque la célula donante se selecciona a partir del grupo que consiste de células aisladas de bacterias, hongos, vegetales, mamíferos u otras líneas celulares o células animales apropiadas, así como animales transgénicos o plantas transgénicas . 20. La célula hospedera donante de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 16-19, caracterizada porque la célula hospedera donante es una célula hospedera que pertenece a la línea celular certificada por GMP. 21. La célula hospedera donante de conformidad con la reivindicación 20, caracterizada porque la línea celular es una línea celular de mamífero. 22. Una secuencia de nucleótidos obtenida a partir de una célula hospedera donante de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 17-21, caracterizada porque la secuencia de nucleótidos es parte de un vector según cualquiera de las reivindicaciones 1-16. 23. La secuencia de nucleótidos de conformidad con' la reivindicación 22, caracterizada porque la secuencia de nucleótidos es uno o más genes y/o es parte de uno o más genes y/o de una o más secuencias reguladoras de expresión y/o de una unidad transcripcional . 2 . Un polipéptido producido por la célula hospedera donante de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 17-21, caracterizado porque la secuencia de nucleótidos que codifican para el polipéptido es parte del vector según cualquiera de las reivindicaciones 1-16. 25. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende el vector de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-16 y/o la célula hospedera donante según cualquiera de las reivindicaciones 17-21 y/o la secuencia de nucleótidos según las reivindicaciones 22-23 y/o el polipéptido según la reivindicación 24 y un diluyente, portador, adyuvante o excipiente farmacéuticamente aceptable. 26. Un método para reducir la metilación de los segmentos invariables de la secuencia CpG en un vector en un hospedero receptor, caracterizado porque el método comprende reemplazar al menos una citosina en un segmento invariable de la secuencia CpG con análogos de citosina de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-16. 27. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque el método comprende los pasos de i) proporcionar un vector; ii) transferir el vector a una célula hospedera donante; iii) cultivar la célula hospedera donante que alberga el vector en un medio de cultivo que consiste de una cantidad adecuada de análogos de citosina y iv) aislar el vector multiplicado que comprende análogos de citosina incorporados en al menos uno de los segmentos invariables de la secuencia CpG. 28. El método de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque el análogo de citosina es un derivado de citidina . 29. El método de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque el derivado de citidina es 5-azacitidina y/o 5-azadeoxicitidina . 30. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 27-29, caracterizado porque el vector que se aisla es un vector según cualquiera de las reivindicaciones 1-16. 31. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 26-30, caracterizado porque la célula hospedera donante es una célula hospedera donante según cualquiera de las reivindicaciones 17-21. 32. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 26-31, caracterizado porque se utiliza en la producción a pequeña o gran escala de una secuencia de nucleótidos y/o un polipéptido en la industria química, como la industria farmacéutica. 33. Un equipo, caracterizado porque comprende un vector de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-16 y/o una célula hospedera donante según cualquiera de las reivindicaciones 17-21. 34. Un método para transferir un vector de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-16, una secuencia de nucleótidos según cualquiera de las reivindicaciones 22-23, un polipéptido según la reivindicación 24 o una composición farmacéutica según la reivindicación 25, a una célula hospedera receptora, caracterizado porque el método se selecciona a partir de la lista que comprende ' electroporación, bombardeo por microproyectiles y administración mediada por liposoma. 35. Un vector de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-16, una célula hospedera donante según las reivindicaciones 17-21, una secuencia de nucleótidos según cualquiera de las reivindicaciones 22-23, un polipéptido según la reivindicación 24 o una composición farmacéutica según la reivindicación 25, caracterizado porque es para usarse en terapia y/o en diagnóstico. 36. El uso de un vector de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-16, una célula hospedera donante de según las reivindicaciones 17-21, una secuencia de nucleótidos según cualquiera de las reivindicaciones 22-23, un polipéptido según la reivindicación 24 o una composición farmacéutica según la reivindicación 25 para la fabricación de un medicamento para usarse en terapia y/o en diagnóstico.