MXPA04000034A - Genes regulatorios de celulas t metodos para utilizar los mismos. - Google Patents

Abstract

SE proporciona un sitio genetico y familia correspondiente de proteinas asociadas con la regulacion de la funcion inmune y subsistencia celular. Estos genes codifican las moleculas de superficie celular con dominios igV y mucina conservados. El sitio que comprende la familia TIM se asocia geneticamente con la disfuncion inmune, que incluye asma. Ademas, la familia de gen TIM se ubica dentro de una region de cromosoma 5 humano que es comunmente eliminado en malignidad y sindrome mielodisplastico. Los polimorfismos en las secuencias de gen se asocian con el desarrollo de la hiperactividad de las vias respiratorias e inflamacion alergica, y produccion de celula T de IL-4 e IL-13. Las proteinas incluyen el receptor celular de hepatitis A humano, hHAVcr-1.

Description

For nvo-letter codes and other abbreviations, refer ¡o the "G id-ance Notes on Codes and Abbreviations" appearing at the begin-ning of each regular issue ofthe PCT Gazette. 1 GENES REGULATORIOS DE CÉLULAS T Y MÉTODOS PARA UTILIZAR LOS MISMOS ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La asombrosa complejidad del sistema inmune es su grandiosa resistencia. Las especificidades de anticuerpo posibles 1012-1014, la frágil interacción entre las diversas células regulatorias y efectoras, la restricción de las respuestas de las células T de acuerdo a los antígenos MHC; todo esto contribuye a la capacidad del huésped para hacerse reaccionar contra agentes infecciosos y otros antigenos percibidos como extraños . Pero esta diversidad tiene sus desventajas. Los errores sucedidos: el objetivo de una respuesta puede resultar ser una proteína auto normal; las respuestas inflamatorias se ajustan mal; y las respuestas normales se dirigen indeseablemente contra injertos y células transplantadas . Bajo estas circunstancias, la complejidad del sistema realiza diagnósticos y terapia extremadamente difíciles . El perfil de citocinas producido por células T CD4+ durante una respuesta inmune determina la naturaleza de las funciones efectoras que desarrollan y regulan el resultado final de una respuesta inmune . La producción de IL-2 e IFN-? durante las respuestas T l-dominadas se asocia con inmunidad mediada por células vigorosas, la inducción de igG2a e 2 inhibición de síntesis igE, y con resistencia a patógenos intracelulares . En contraste, la producción de IL-4, IL-5 e IL-10 durante las respuestas dominadas por Th2 se asocia con la inmunidad humoral y protección de patología autoinmune . La sobreproducción de citocinas Th2 por células T CD4+ especificas de alérgeno puede resultar en el desarrollo de enfermedad alérgica y asma, mientras las células Thl se han asociado con una variedad de enfermedades pro-inflamatorias . Una estrategia para enfermedades asociadas inmunes es inmunoterapia . La inmunoterapia ha probado ser efectiva cuando se utiliza apropiadamente, y se espera que los avances en intervención inmunológica mejorarán adicionalmente la eficacia. Las estrategias alternativas han intentado utilizar citocinas para cambiar la respuesta inmune. IL12. Una citocina heterodimérica producida por macrófagos y células dendríticas, es potente en manejar el desarrollo de síntesis de citocina Thl en células simples y T CD4+ de memoria. Otras citocinas, tales como IL-13 e IL-4, se han asociado con la diferenciación de células T al tipo Th2. La atopia, que incluye asma, rinitis alérgica, y dermatitis atópica, es una característica compleja que se origina como un resultado de las respuestas inmune inducida ambientalmente en individuos genéticamente susceptibles. La prevalencia de todas las enfermedades atópicas se ha incrementado dramáticamente en países industrializados 3 durante las pasadas dos décadas. El asma es la enfermedad crónica más común de la infancia y afecta más de 15 millones de individuos en los Estados Unidos, conduciendo a costos de tratamiento directos que excedente $11 billones por año. Estudios epidemiológicos han sugerido que el incremento en la prevalencia de asma resulta de cambios en higiene y de frecuencia reducida de infecciones (por ejemplo, tuberculosis o hepatitis A) dentro de la sociedad industrializada. Sin embargo, las trayectorias moleculares específicas que resultan en la prevalencia de asma incrementada, y los polimorfismos genéticos que confieren susceptibilidad al asma son escasamente entendidos . La expresión de asma se influencia por múltiples factores ambientales y genéticos que interactúan entre sí en formas no aditivas, complicando la identificación de los genes de susceptibilidad al asma. La susceptibilidad al asma se ha unido a varias regiones cromosomales , pero con resolución no mejor de 5-10 c , en donde existen usualmente cientos de genes candidatos. Además, debido a que los efectos de variación genética en un único gen son probables de tener únicamente efectos modestos en la patogénesis global del asma, y debido que a las interacciones de gen-gen y gen-ambiente confunden los análisis, la ubicación de los genes de susceptibilidad putativa a regiones tratable a clonación posicional han probado ser difíciles de depurar. No obstante, 4 la susceptibilidad al asma se ha unido a cromosomas 5, 6, 11, 14 y 12. De estos, el cromosoma 5q23-35 ha recibido la mayor atención debido a que contiene un número grande de genes candidatos (11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18), incluyendo IL-9, IL-12p40, el receptor ß-adrenérgico, y el grupo de citocina IL-4, que contiene los genes IL-4, IL-5 e IL-13. Sin embargo, el tamaño grande de la región unida de 5q complica su análisis, y un gen para asma a partir de este sitio no se ha identificado aún contundentemente.

Publicaciones Relacionadas La secuencia genética del receptor celular del virus de hepatitis A humano puede encontrarse en Genbank, número de acceso XM_011327. Se proporciona una secuencia relacionada en Genbank, número de acceso BAB55044. Monney et al. (2002) Nature 415:436 describe moléculas de superficie celular expresadas en las células Thl . Las Patentes Norteamericanas nos. 5721351, US 62044371, US 6288218 se relacionan a secuencias que corresponden a un alelo TIM-3 de ratón.

COMPENDIO DE LA INVENCIÓN Se proporcionan secuencias genéticas de una familia genética que codifica polipéptidos que se asocian con la función inmune y supervivencia celular. Estos genes codifican 5 moléculas de superficie celular con dominios de IgV y mucina conservados, mencionados en la presente como dominio de inmunoglobulina de célula T y proteínas de dominio de mucina (TIM) . El sitio que comprende la familia TIM se asocia genéticamente con la disfunción inmune, incluyendo asma. Además, la familia de gen TIM se ubica dentro de una región de cromosoma 5 humano que se elimina comúnmente en malignidades, y síndrome mielodisplástico . Los polimorfismos se identifican en TIM-1, TIM-3 y TIM-4, que pueden asociarse con diferenciación de Thl/Th.2 e hipersensibilidades de vías respiratorias (AHR) . Se utilizan composiciones de ácido nucleico para producir las proteínas codificadas, que pueden emplearse para estudios funcionales, como un terapéutico, y para estudiar trayectorias fisiológicas asociadas. Los agentes de unión específica TIM, incluyendo ácidos nucleicos, anticuerpos, y similares, son útiles como diagnósticos para determinar susceptibilidad genética a atopia y asma y como diagnósticos para evaluar resistencia a tumor a terapia de cáncer. Los agentes de bloqueo de TIM encuentran uso como terapéuticos en el tratamiento de disfunción inmune y trastornos de supervivencia celular, incluyendo malignidades.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Figura la, los ratones HBA producen 6 significativamente menos IL-4 que los ratones BALB/c. Se cultivaron células de nodulo linfoide de ratones inmunizados con 150 yug de KLH, se redujeron células B y se cultivaron en cDME con 10 jMg/ml de KLH. Los sobrenadantes se cosecharon después de 96 horas y se evaluaron para niveles de IL-4 por ELISA. La muestra es un montaje de caja de niveles IL-4 (n=10 en cada grupo) , representando el rango total de datos, con las cajas abarcando los errores posibles superior e inferior, con el medio de los datos establecidos mostrados en el interior de cada caja. Los niveles de IL-4 producidos por células BALB/c y por células Fl (BALB/c x HBA) son significativamente más elevados que los niveles HBA IL-4 P<0.001 (prueba t de Student) . b, los ratones HBA producen significativamente menos IL-13 e IL-10 que los ratones BALB/c. Los datos mostrados son los valores promedio de citocinas producidas por los cultivos celulares de nódulo linfoide a partir de diez ratones individuales en cada grupo experimental, ± S.D. Los niveles de HBA IL-13 e IL-10 fueron más inferiores que cualquiera de los valores Pl BALB/c o (BALB/c x HBA), P<0.0001. HBA IL-5 contra BALB/c, P<0.05. HBA IFN-? contra BALB/c, P<0.001. c, La híperactividad de vías respiratorias inducida por alérgenos es significativamente mayor en BALB/c que en ratones HBA. Se midió obstrucción de flujo de aire pulmonar, y los datos mostrados representan los valores de pausa mejorada pico (Penh) promedio entre los 7 ratones sensibilizados en cada grupo a varias concentraciones de metacolina, ± S.E.M. (BALB x HBA) Fl demuestra fenotipos de BALB/c, mientras los ratones (BALB x DBA) Fl demuestran fenotipos similares a DBA/2. Figura 2. Las regiones del cromosoma 11 de HBA fueron heredados de DBA/2. El cromosoma 11 HBA contiene dos regiones derivadas de DBA entre hba-a2 y es-3, como se delinea por los marcadores SSLP. Las regiones del cromosoma 11 HBA con genotipos DBA/2 se hacen resultar (en azul) en el diagrama a la izquierda. Los marcadores (izquierda) proporcionan 2-5 cm de resolución distal a DllMit230. Donde el cromosoma 11 de ratón tiene regiones de sintonía altamente conservadas con 5q23-35, los marcadores adicionales se identificaron con polimorfismos informativos entre BALB/c y DBA/2, para proporcionar 0.01-2 cm de resolución en esta región (marcadores en la columna derecha) . Los marcadores de polimorfismo de confirmación de una sola hebra (SSCP) se muestran en verde para distinguirlos de los marcadores SSLP, y las posiciones de genes particulares de interés, descritos en rojos, se muestran también. Cuando la disposición de nuestro mapa marcador difiere de los Reportes del Comité de Cromosoma y el mapa de conexión MIT, nuestro mapa coincide con conexión previa y mapas físicos . Figura 3a. producción de JL-4 por ratones N2 es bimodal, con picos que corresponden a fenotipos Fl y HBA. 8 Como un medio para evaluar los fenotipos relativos de ratones N2 recombinantes en experimentos múltiples, se utiliza una función de indexado que permite consolidar los datos a partir de experimentos múltiples. Un histograma muestra una distribución bimodal de los valores de índice IL-4 para ratones N2 con (BALB x HBA) Fl, HBA homocigoso, y aplotipos recombinantes indicados. Las distribuciones asociadas con los haplotipos Fl y HBA son distintas (P<0.0001, prueba t de Student apareada), b. segregados de regulación IL-4 con Kimlsscp. Los haplotipos N2 recombinantes se clasificaron por valores de índice IL-4 en grupos asociados con fenotipos IL-4 elevados (índice < 0.35) y fenotipos IL-4 bajos (índice > 0.65). Cada columna de cajas representa un haplotipo recombinante . Los alelos para estos haplotipos al sitio entre DllMit269 a DllMitl54 se sombrean de acuerdo al genotipo (oscuro = Fl; pálido = HBA). Los segregados de producción IL-4 elevados con cuatro haplotipos (izquierda) y los segregados de producción de IL-4 bajos con cuatro haplotipos (derecho) . El fenotipo IL-4 se une a Kimlsscp. C. AHR de ratones N2 es bimodal, con picos correspondientes a fenotipos Fl y HBA. Se muestran valores de índice calculados de valores Penh. El histograma muestra una distribución bimodal de valores de índice AHR para ratones N2. Se indican (BALB x HBA) Fl, HBA homocigoso, y los haplotipos recombinantes. Las distribuciones asociadas con los haplotipos Fl y Hba son 9 distintas (P<0.0001, prueba t de Student apareados), d. Sitios regulatorios AHR co-segregados con el Sitio Regulatorio IL-4 entre DllMit22 y DllMit271. Los haplotipos N2 recombinantes se clasificaron por valores de índice AHR en grupos asociados con fenotipos AHR elevados (índice <0.35) y fenotipos AHR bajos (índice >0.65). Cada columna de cajas representa un haplotipo recombinante . Los alelos para estos haplotipos en el sitio entre Dll it269 a DllMitl54 se sombrearon de acuerdo al genotipo (oscuro = Fl; pálido = HBA) . Los segregados AHR con cuatro haplotipos (izquierdo) , y segregados de producción IL-4 bajos con tres haplotipos (derecha) . El sitio regulatorio AHR se une a Kimlsscp, entre DllMit271 y DllMit22. Figura 4. El intervalo del cromosoma 11 de ratón que contiene Tapr es altamente homólogo a 5q33. Para construir un mapa compuesto alrededor del sitio Tapr, se integró información disponible a partir de la conexión del ratón, cruce de híbrido y mapas híbridos de radiación e identificar una región de sintenia altamente conservada en mapas actuales del genoma humano (Human Genome Browser v3 , UCSC Marzo 2001) . Los EST ubicados en un mapa físico del cromosoma 11 de ratón (izquierda) se denotan por sus números de acceso y alinean por homología a genes (centro) , que corresponde a las EST en cromosoma 5 humano (derecha) . Todos los genes entre KIAA0171 y Sgd se muestran. 10 Figura 5a, b, c. La nueva identificación de familia del gen TIM y polimorfismos mayores en" TIM-1 y TIM-3. La clonación del TIM-1 de ratón y TIM-2 de ratón. Los miembros de una familia genética. Se muestran las secuencias de la familia del gen TIM de ratón. Las cajas sombreadas ilustran identidad entre dos de los genes TIM de ratón. El ARN total a partir de los esplenocitos estimulados conA se transcribió al revés utilizando Gibco Superscript II. Los productos PCR de longitud total de ADNc Tim-3 se amplificaron, se purificaron con reactivos de Purificación Qiagen AIAquick PCR, y se secuenciaron directamente por Biotech Core (Mountain View, CA) , Los productos PCR para ADNc Tim-1 y Tim-2 se clonaron en células TOP10 electrocompetentes con reactivos de clonación TOPO-XL (Invitrogen) . Los plásmidos se purificaron con protocolo de lisis alcalina estándar. Los plásmidos BALB/c y HBA se secuenciaron, como se describió. La homología de ratón TIM-1, rata KIM-1, y HAVcr-1. La identidad con ratón TIM-1 se denotó por las cajas sombreadas. El sitio de señal aproximado se denota por una abertura, triángulo invertido y límite del dominio Ig/dominio de mucina se muestra con un diamante relleno. Los dominios de transmembrana previstos se subrayan. Las secuencias TIM-1 y TIM-3 con mayor polimorfismo entre BALB/c y HBA TIM-1 y TIM-3 se muestran. Figura 6. Tapr regula Respuestas de célula T CD4 IL-4 e IL-13. La célula T BALB/c DO11.10 de ratones produce 11 niveles elevados de IL-4 e IL-13 en respuesta a antígeno que las células T de ratones HBA DO11.10. Las células CD4+ esplénicas se aislan por selección positiva con perlas magnéticas anti-CD4 y luego se co-cultivan con las DC y OVA derivadas de médula espinal. Después de siete días, se vuelven a estimular las células. Los sobrenadantes se cosecharon después de 18-24 horas de cultivo secundario. Los datos representan niveles de citocina medios detectados a concentraciones elevadas de OVA, +S.D. La detección de la expresión de ARNm TIM-1 en células T CD4 purificadas durante la imprimación y diferenciación. Figura 7. El alineamiento de secuencias de proteína TI de Ratón y Humanas . Figura 8. Polimorfismos en TIM-1 humano. Figura 9. Análisis de polimorfismo SSCP de TIM-1 humano .

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LAS MODALIDADES Se proporcionan secuencias genéticas asociadas con la función inmune, incluyendo susceptibilidad al asma. Las secuencias de Tim-1, Tim-2, Tim-3, y Tim-4 de murino, y las secuencias de contraparte humana se proporcionan en la presente. Las secuencias de polimorfismos mayores se proporcionan también. Las secuencias genómicas demuestran que estos polimorfismos, incluyendo una eliminación, son 12 polimorfismos verdaderos, no variantes de refuerzo. Las variantes de las secuencias TIM-1 y TIM-3 se asocian con la susceptibilidad a hiper-reactividad a vías respiratorias y respuestas de célula T alérgicas, y otras variantes asociadas con protección contra estas respuestas . El dominio extracelular de los miembros de la familia genética TIM contiene dos dominios, un dominio IgV y un dominio de mucina. Esta estructura de Ig/mucina se encuentra también en MAdCAM (molécula de adhesión celular de adresina mucosal) , que contiene dos dominios Ig y un dominio mucina; sin embargo, existe únicamente un nivel inferior de homología entre TIMs y MAdCAM. Un grado similar de homología se presenta también entre TIM-1 y TOSO (NP_005440.1 GI:4885641), una proteína la cual, como TIM-1 se expresa en células T activadas, y que protege células T a partir de apóptosis mediada por Fas . Las células T expresan la familia TIM de genes, que críticamente regulan la diferencia de células T CD4. Las células Thl preferiblemente expresan la proteína TIM-3, mientras que las células Th2 preferiblemente expresan la proteína TIM-1. TIM-1 se ha unido a hiperreactividad de vías respiratorias TIM-3 a enfermedades inmunes, por lo tanto la expresión modelo en diferenciar células linfoides y las cinéticas de expresión de TIM-1 en células linfoides reflejan la función de estas moléculas. 13 En otro aspecto de la invención, se proporcionan métodos para determinar susceptibilidad de un individuo para desarrollar asma y enfermedades atópicas, determinando el genotipo en el sitio Tim. La selección puede analizar, por ejemplo, polimorfismos en cualquiera de los alelos TI -1, TIM-3 o TIM-4 proporcionados en la presente, o de otra manera determinados. Se proporcionan métodos para seleccionar tales polimorfismos, por ejemplo, análisis SSCP, polimorfismos de dimensión, y similares. En otro aspecto de la invención, un método para seleccionar agentes biológicamente activos que modulan el gen Tim o la función polipeptídica se proporcionan, en donde el método comprende combinar un agente biológicamente activo candidato con cualquiera de: (a) un polipéptido Tim; (b) una célula que comprende un acido nucleico que codifica un polipéptido Tim; o (c) un modelo animal transgénico no humano para la función genética Tim que comprende uno de: (i) una expulsión de un gen Tira; (ii) una secuencia de gen Tim exógena y establemente transmitida; o (iii) una secuencia promotora im operablemente unida a un gen reportero; y determinando el efecto de tal agente en la función Tim. La actividad de los polipéptidos TIM puede modularse para dirigir la función inmune. TIM-1 se expresa preferiblemente en células Th2 , y agentes que modular la actividad TIM-1 encuentra uso en el tratamiento de trastornos 14 relacionados con Th2, incluyendo alergias, asma, y similares. TIM-3 se expresa preferiblemente en células Thl, y agentes que modulan actividad TIM-3 que encuentra uso en el tratamiento de enfermedades inmunes pro-inflamatorias, incluyendo enfermedades auto-inmunes, rechazo de injerto y similares .

CONDICIONES DE INTERÉS Las enfermedades atópicas son rasgos genéticos complejos que se desarrollan como un resultado de respuestas inmunes ambientalmente inducidas en individuos predispuestos genéticamente. Tanto los individuos atópicos y no atópicos se exponen a los mismos factores ambientales, pero las diferencias genéticas que distinguen individuos atópicos de no atópicos en enfermedad atópica en algunos individuos, manifestados por inflamación alérgica en el tracto respiratorio, piel o tracto gastrointestinal, así como IgE de suero, eosinofilia y los síntomas de respiración difícil, estornudos o urticaria. Además, las respuestas inflamatorias alérgicas se caracterizan por la presencia de linfocitos Th2 que producen niveles elevados de IL-4, IL-5, IL-9 e IL-13, que mejoran el crecimiento, diferenciación y/o reclutamiento de eosinofilos, células cebadas, basófilos y células B que producen IgE . Alérgenos de interés incluyendo antígenos 15 encontrados en alimentos, tales como fresas, cacahuetes, proteínas de leche, clara de huevo, etc. Otros alérgenos de interés incluyen varios antígenos aerotransportados, tales como polen de césped, caspa de animales, heces de acáridos caseros, etc. Los alérgenos clonados molecularmente incluyendo Dermatop agro des pteryonyssinus (Der Pl) ; Lol pI-V de polen de césped de centeno; un número de insectos venenosos, incluyendo veneno de hormiga saltadora Myrmecia pilosula; Apis mellifera fosfolipasa A2 de veneno de abeja (PLA2 y antígeno 5S; fosfolipasas del avispón de cubierta amarilla Vespula maculif ons y de cara blanca Kdolichovespula maculata; un gran número de proteínas de polen, incluyendo polen de abedul, polen de ambrosía, Parol (el mayor alérgeno de parietarla officinalis) y el alérgeno cros-reactivo Parjl (de par-íetaria judaica) y otros polen atmosféricos que incluyen Olea europaea, Artemisia sp., gramineae, etc. Otros alérgenos de interés son aquellos responsables para determatitis alérgica provocada por artrópodos que succionan sangre, por ejemplo, Díptera, incluyendo mosquitos {Anopheles sp., Aedes sp., Culiseta sp. , Culex sp.); moscas (P ejbotomus sp., Culicoides sp.) particularmente moscas negras, moscas de ciervos y mosquitos mordedores; garrapatas {Dermacenter sp. , Ornithodoros sp. , Otobius sp.) ; pulgas, por ejemplo, la orden Siphonaptera, incluyendo el genero Xenopsylla, Pulex y Ctenocephalides felis felis. El alérgeno específico puede ser 16 un polisacárido, porción de ácido graso, proteina, etc. Los polimorfismos en un número de genes de atopia de interacción/epistático se piensan resultan en susceptibilidd mejorada a trastornos alérgicos. Las exploraciones del ancho genómico se piensa identifican los genes responsables uniendo varios parámetros de alergia y asma con marcadores de ADN polimórficos de genes específicos usualmente secuencias repetidas de ADN (microsatélites que contienen repeticiones de di-, tri- y tetra-nucleótido) . Estos estudios han identificado varias regiones cromosomales tan probables para ser implicadas en la patogénesis de atopia, pero con resolución no mejor de 5-10 cM en donde existen normalmente cientos de genes candidatos. No obstante, la susceptibilidad del asma se ha unido a cromosomas 5q23-31, cromosoma 6p21, cromosoma llql3, y cromosoma 12q (9-13) por dos o más de estos estudios de exploración de genoma amplio. El asma, como se define en la presente, es la limitación de flujo de aire reversible en un individuo durante un periodo de tiempo. El asma se caracteriza por la presencia de células tales como eosinófilos, células cebadas, basófilos, y linfocitos CD25+T en las paredes de las vías respiratorias. Existe una interacción cercana entre estas células, debido a la actividad de citocinas que tienen una variedad de comunicación y propiedades efectoras biológicas . Las quimiocinas atraen células al sitio de inflamación y las 17 citocinas las activan, resultando en inflamación y daño a la mucosa. Con cronicidad del proceso, cambios secundarios ocurren, tal como espesamiento de membranas de basamento y fibrosis. La enfermedad se caracteriza por hipersensibilidad de las vías respiratorias incrementada a una variedad de estímulos, e inflamación de vías respiratorias. Un paciente diagnosticado como asmático generalmente tendrá indicaciones múltiples durante el tiempo, incluyendo respiración difícil, ataques asmáticos, y una respuesta positiva a desafío de metacolina, es decir, un PC20 en desafío de metacolina de menos de aproximadamente 4 mg/ml. Las líneas directivas para diagnóstico pueden encontrarse, por ejemplo, en el National Asthma Education Program Expert Panel Guidelines for Diagnosis and Management of Asthma. National Institutes of Health, 1991, Publ . No. 91-3042. El asma, rinitis alérgica (fiebre de heno) , dermatitis atópica (eczema) y alergia a alimentos son enfermedades que ocurren en las mismas familias, implicando mecanismos genéticos comunes. Estas enfermedades atópicas son extremadamente prevalecientes, afectando 20-40% de la población general y constituye un problema de salud pública mayor. Los costos económicos para estos trastornos son enormes. Para asma únicamente, los costos de cuidado de salud estimados en 1996 fueron $14 billones. Además, la prevalecencia de todas las enfermedades atópicas se ha 18 incrementado dramáticamente en países industrializados durante las pasadas dos décadas por razones que no son aún claras. La prevalecencia del asma en países industrializados, para los cuales los números son los más exactos, se ha duplicado desde 1982, y se proyecta doblarse nuevamente en prevalecencia en el año 2020. Las enfermedades pro-inflamatorias asociadas con células del tipo T Thl incluyen enfermedades autoinmunes tales como esclerosis múltiple, artritis reumatoide, diabetes mellitus del tipo I, etc. (RA) es una sinovitis inflamatoria autoinmune crónica que afecta al 0.8% de la población mundial. La terapia actual para RA utiliza agentes terapéuticos que no suprimen específicamente o por función inmune modulada. Tales terapéuticos, incluyendo el desarrollo reciente de antagonistas TNFa, no son curativos fundamentalmente, y la actividad de enfermedad rápidamente retorna siguiendo discontinuación de terapia. Existe una tremenda necesidad clínica para terapias fundamentalmente curativas que no provocan supresión inmune sistémica o modulación. Un incremento cuantitativo en células T autoreactivos de mielina con la capacidad para secretar IFN-gamma se asocia con la patogénesis de MS y EAE, sugiriendo que los linfocitos T inductores/auxiliadores autoinmunes en la sangre periférica de los pacientes MS pueden iniciar y/o 19 regular el proceso de desmielinación en pacientes con MS . La enfermedad palpable se asocia con debilidad muscular, pérdida de reflejos abdominales, defectos visuales y parestesias. Durante el periodo pre-sintomático existe una infiltración de leucocitos en el fluido cerebroespinal, inflamación y desmielinación. El IDDM es un trastorno autoinmune mediado por célula que conduce a la destrucción de las células beta que secretan insulina e hiperglicemia palpable. Los linfocitos T invaden las isletas de Langerhans, y específicamente destruyen las células ß que producen insulina. La eliminación de células ß resultan en una incapacidad para regular niveles de glucosa en la sangre . La progresión de la enfermedad puede verificarse en individuos diagnosticados por la historia familiar y análisis genético como susceptible. El efecto genético más importante está visto con genes del sitio de histocompatibilidad mayor {IDDM1) , aunque otro sitio, incluyendo la región del gen insulina [IDDM2) también muestra la unión a la enfermedad (véase Davies et al. , supra and Kennedy et al. (1995) Nature Genetics 9:293-298).

FAMILIA DEL GEN TIM Los genes y fragmentos de la familia TIM proporcionados de los mismos, codifican proteínas, regiones regulatorias genómicas y anticuerpos específicos son útiles 20 en la identificación de individuos predispuestos a desarrollar o resistencia a asma, y para la modulación de la actividad genética in vivo para propósitos profilácticos y terapéuticos. Las proteínas codificadas son útiles como un inmunogen que origina anticuerpos específicos, para seleccionar fármacos para composiciones que imitan o modulan la actividad o expresión, incluyendo formas alteradas de las proteínas, y como un terapéutico. Los genes de la familia TIM son inmediatamente adyacentes entre sí en el cromosoma 5 humano, en el orden de TIM-4, TIM-1, TIM-3, sin genes interpuestos. Este segmento del cromosoma 5 humano se elimina comúnmente en malignidades y poblaciones de células displásticas, como un síndrome mielodisplástico (véase Boultwood, et al, (1997) Genomics 45:88-96). Existen pseudogenes TIM en cromosomas 5, 12 y 19. Cada proteína TIM, excepto TIM-4, contiene un motivo de señalamiento de tirosina previsto distinto. La región citoplásmica de TIM-1 contiene dos residuos de tirosina e incluye un motivo de fosforilación de tirosina cinasa altamente conservado, RAEDNIY. La región expandida, S AEDNIYIVEDRP, contiene un sitio predxcho para fosforilación Itk y para la fosforilación del receptor EGF. El gen Timl de ratón codifica una proteína de membrana de 305 aminoácidos. La región citoplásmica de TIM-1 contiene dos residuos de tirosina e incluye un motivo de 21 fosforilación de tirosina cinasa altamente conservada, RAEDNIY. El dominio de mucina de TIM-1 tiene sitios múltiples para glicosilación O-unida, y se encuentran ahí dos sitios para glicosilación unida a N en el dominio de inmunoglobulina . El ratón TIM-2, una proteína de membrana de 305 aminoácidos similar, tiene 64% de identidad al ratón TIM-1, 60% de identidad a rata IM-1, y 32% de identidad a hHAVcr-1. Como TIM-1, TIM-2 tiene dos sitios de glicosilación N unidos extracelulares y una serina, treonina, dominio rico en mucina con muchos sitios de glicosilación O unidos. TIM-2 también tiene un motivo de fosforilación de tirosina cinasa intracelular, TRCEDQVY . Tim3 codifica una proteína de membrana de 281 aminoácidos en ratones, y una proteína de 301 aminoácidos en humanos, que tiene una estructura de glicoprotelna de membrana integral, similar, con sitios de glicosilación extracelular múltiple y un motivo de fosforilación de tirosina intracelular. Aunque el dominio de mucina no es tan prominente en TIM-3 como es en TIM-1 y TIM-2, TIM-3 expresado en las células T interactúa con un ligando en las APC y altera la activación de APC. TIM-3 tiene cuatro sitios para N unida y cinco sitios para glicosilación 0 unida, sugiriendo que TIM-3, como TIM-1 y TIM-2, glicosilada en exceso y podría interactuar con un ligando presente en otras células, tales 22 como células que presentan antígeno. Timé codifica una proteína de 344 aminoácidos en ratones, y proteína de 378 aminoácidos en humanos. La TIM-4 prevista también comparte los motivos estructurales de glicoproteína de membrana general de las otras proteínas TIM, con un dominio como IgV con residuos de cisteína altamente conservados, un dominio como mucina rica en treonina, y una extremidad intracelular corta. Los polimorfismos en las secuencias de murino se proporcionan en la secuencia que lista para cepas BALB/c y HBA/DBA. En TIM-1, estos polimorfismos codifican tres diferencias de aminoácido y una eliminación de quince aminoácidos en HBA/DBA. Siete diferencias de aminoácido previstas se identificaron en TIM-3. Los polimorfismos en TIM-1 y TIM-4 se ubican en la señal y dominios como mucina, mientras que los polimorfismos identificados en TIM-3 se agrupan en el dominio Ig . Las variantes en las regiones de codificación de Timl humano se proporcionan en la lista de secuencia y la Figura 8. Las variaciones incluyen una inserción (polimorfismo 1 marcado) , 157ínsMTTTVP, observado en 65% de los cromosomas, y una eliminación (polimorfismo 5), 187ÁThr, observado en 65% de los cromosomas. Otros polimorfismos son T140A (polimorfismo 7) ; V161A; (polimorfismo 2) ; V167I (polimorfismo 3) , T172A (polimorfismo 4) ; N258D (polimorfismo 23 6) . Se observó el polimorfismo 4 en 40% de los cromosomas, y los otros polimorfismos se observaron cada uno en 5% de los cromosomas. La mayoría de estas variaciones (2-6) se ubican dentro del exón 3, el primer exón que codifica mucina, y todas las otras variantes ocurren en el nivel genómico y no son variantes de refuerzo. La asociación entre Timl y la susceptibilidad del asma se apoya además por reportes de la unión significativa del asma de niños sensible a acáridos a D5S820 (clasificación LOD media = 4.8), un marcador el cual es aproximadamente 0.5 megabases de Timl. En tejidos humanos, un AR m de 4.4 kb TIM-1 se presenta en casi todas los tejidos, aunque es débil en la mayoría. Una banda de 5.5 kb se observó en el colon y el hígado. Se observó una banda de 7.5 kb en el bazo, timo y leucocitos de sangre periférica, y bandas más pequeñas que 4.4 kb se observaron en algunos órganos . Se expresa ARNm TIM-1 con regiones no traducidas 5' , en poblaciones celulares diferentes. La hipoxia e isquemia inducen la expresión TIM-1 en células epiteliales, y la radiación induce la expresión del ARNm de la familia del gen TIM. Se expresan los genes TIM en especímenes de tumor. Se expresa el ARNm TIM4 humano en tejido de gliobastoma, y se detecta también en monocitos de sangre periférica irradiada o estimulada de mitógeno. En un aspecto, la invención proporciona una molécula de ácido nucleico aislada diferente de un cromosoma 24 de origen natural que comprende una secuencia que codifica una proteína TIM-1, TIM-2, TIM-3 o TIM-4, o un homólogo o variante de la misma, cuya variante puede asociarse con la susceptibilidad a la hiper-reactividad de las vías respiratorias y respuestas de célula T alérgicas . El ácido nucleico puede unirse operablemente a un vector y/o secuencias control para expresión en una célula huésped homologa o heteróloga. Tal célula huésped puede encontrar uso en la producción de la proteína codificada. En otro aspecto de la invención, se proporciona un polipéptido purificado de la proteína TIM-1, TIM-2, TIM-3 o TIM-4, o un homologo o variante de la misma, cuya variante puede asociarse con susceptibilidad a hiper-reactividad de las vías respiratorias y respuestas de célula T alérgica. En otro aspecto, un anticuerpo u otro miembro de unión específico que se une a un polipéptido TIM-1, TIM-2, TIM-3 o TIM-4 se proporciona. Las secuencias de secuencias de TIM humano y murino se proporcionan en la lista de secuencia, como sigue: 25 La secuencia de ADN que codifica polipéptidos Tim puede ser ADNc o ADN genomico o un fragmento de la misma. Los fragmentos de interés de sondas, que producen polipéptidos, etc., pueden comprender uno o más residuos polimórficos . El gen Tim de término pretenderá significar el cuadro de lectura abierto que codifica cualesquiera de los polipéptidos Tim específicos, intrones, así como secuencias de nucleótido sin codificación 5' y 3' adyacentes implicados en la regulación 26 de expresión, hasta aproximadamente 1 kb más allá de la región de codificación, pero posiblemente además en cualquier dirección. El gen puede introducirse en un vector apropiado para mantenimiento extracromosomal o para integración en el huésped. En algunas modalidades, la secuencia del gen Tim es diferente que el alelo TI -1 humano, como se establece en la lista de secuencia; y/o diferente del alelo TIM-3 DBA de ratón. El término "ADNc" como se utiliza en la presente pretende incluir todos los ácidos nucleicos que comparten la disposición de los elementos de secuencia encontrados en las especies de ARNm maduros nativos, en donde los elementos de secuencia son exones y regiones no codificantes 3' y 5'. Especies de ARNm normalmente tienen exones contiguos, con los intrones intervenidos por el refuerzo de ARN nuclear, para crear un cuadro de lectura abierto continuo que codifica una proteína Tim. Una secuencia genómica de interés comprende el ácido nucleico presente entre el codón de iniciación y el codón de detección, como se define en las secuencias listadas, incluyendo todos los intrones que se presentan normalmente en un cromosoma nativo. Puede incluir además las regiones no traducidas 3' y 5' encontradas en el ARNm maduro. Puede incluir además secuencias reguladoras transcripcionales 27 y translaczonales , tales como promotores, mejoradores, etc., incluyendo aproximadamente 1 kb, pero posiblemente más, o ADN genómico de flanqueo en cualquier extremo 5' o 3' de la región transcrita. El ADN genómico puede aislarse como un fragmento de 100 kbp o más pequeño; y sustancialmente libre de la secuencia cromosomal de flanqueo. La secuencia de la región 5' , y las secuencias corriente arriba 5' y secuencias corriente abajo 3', puede utilizarse para elementos promotores, incluyendo sitios de unión mejoradores, que se proporcionan para la expresión en tejidos en donde se expresan genes Tim. La expresión específica de tejido es útil para determinar el patrón de expresión, y para proporcionar promotores que imitan el patrón nativo de expresión. Los polimorfismos de origen natural en la región promotora son útiles para determinar variaciones naturales en expresión, particularmente aquellos que pueden asociarse con la enfermedad. Alternativamente, las mutaciones pueden introducirse en la región promotora para determinar el efecto para alterar5 la expresión en sistemas experimentalmente definidos. Los métodos para la identificación de motivos de ADN específicos implicados en la unión de los factores transcripcionales se conocen en la técnica, por ejemplo, similaridad de secuencia a motivos de unión conocidos, estudios de retraso de gel, etc. Para ejemplos, véase Blackwell et al. (1995) Mol Med 1:194-205; 28 Mortlock et al. (1996) Genome Res . 6:327-33; y Joulin and Richard-Foy (1995) Eur J Bioc em 232:620-626. Las secuencias regulatorias pueden utilizarse para identificar secuencias de actuación cis requeridas para regulación transcripcional o translacional de la expresión TIM, especialmente en diferentes tejidos o etapas de desarrollo, y para identificar secuencias de actuación cis y factores de actuación trans que regulan o median la expresión TIM. Tales regiones de control transcripcionales o translacionales pueden unirse operablemente a un gen TIM para promover la expresión de tipo silvestre o TIM alterado u otras proteínas de interés en células de cultivo, o en tejidos embriónicos, fetal o de adulto, y para terapia de gen . Las composiciones del ácido nucleico de la invención objeto puede codificar todo o parte de los polipéptidos objeto. Los fragmentos pueden obtenerse de la secuencia del ADN por olígonucleótidos químicamente sintetizados de acuerdo con métodos convencionales, para digestión de enzima de restricción, por amplificación PCR, etc. Para la mayor parte, los fragmentos de ADN serán de al menos 15 nt, usualmente al menos 18 nt, más usualmente al menos aproximadamente 50 nt . Tales fragmentos de ADN pequeños son útiles como cebadores para PCR, selección de hibridización, etc. Los fragmentos de ADN más grandes, es 29 decir, mayores de 100 nt son útiles para la producción del polipéptido codificado. Para uso en reacciones de amplificación, tales como PCR, un par de cebadores se utilizará. La composición exacta de las secuencias cebadoras no es crítica a la invención, pero para la mayoría de aplicaciones los cebadores hibridizarán la secuencia objeto bajo condiciones rigurosas, como se sabe en la técnica. Es preferible elegir un par de cebadores que generará un producto de amplificación de al menos aproximadamente 50 nt, preferiblemente al menos aproximadamente 100 nt . Los algoritmos para la selección de las secuencias cebadoras se conocen generalmente, y están disponibles en paquetes de software comerciales. Los cebadores de amplificación hibridizan hebras complementarias de ADN, y los imprimarán entre sí . Los genes TIM se aislan y obtienen en pureza sustancial, generalmente como otros diferentes de cromosoma mamífero intacto. Usualmente, el ADN se obtendrá sustancialmente libre de otras secuencias de ácido nucleico que no incluyen una secuencia TIM o fragmento del mismo, generalmente siendo al menos aproximadamente 50%, usualmente al menos aproximadamente 90% puro y son normalmente "recombinantes" , es decir, flanqueados por uno o más nucleótidos con lo cual no se asocia normalmente en un cromosoma de origen natural . 30 Las secuencias de ADN se utilizan en una variedad de formas. Estas pueden utilizarse como sondas para identificar genes relacionados con TIM. Los homólogos mamíferos tienen similaridad de secuencia sustancial a las secuencias objeto, es decir, al menos 75%, usualmente al menos 90%, más usualmente al menos 95% de identidad de secuencia con la secuencia de nucleótido de la secuencia de ADN objeto. La similaridad de secuencia se calcula con base en una secuencia de referencia, que puede ser un subconjunto o una secuencia más grande, tal como un motivo conservado, región de codificación, región de flanqueo, etc. Una secuencia de referencia usualmente será al menos aproximadamente 18 nt de largo, más usualmente al menos aproximadamente 30 nt de largo, y puede extenderse a la secuencia completa que está siendo comparada. Los algoritmos para análisis de secuencia se conocen en la técnica, tales como BLAST, descritos en Altschul eü al. (1990) J. Mol Biol 215 :403-10. Los ácidos nucleicos que tienen similaridad de secuencia se detectan por la hibridización bajo condiciones rigurosas bajas, por ejemplo, a 50 °C y 10XSSC (0.9 M salina/0.09 M de citrato de sodio) y permanece unido cuando se somete al lavado a 55°C en 1XSSC. La identidad de secuencia puede determinarse por hibridización bajo condiciones rigurosas, por ejemplo, a 50°C o más elevado y 31 0.1XSSC (9 mM de solución salina/0.9 mM de citrato de sodio). Utilizando las sondas, particularmente sondas marcadas de secuencias de ADN, uno puede aislar genes homólogos o relacionados . La fuente de los genes homólogos pueden ser cualesquiera especies, por ejemplo, especies de primate, particularmente humanos; roedores, tales como ratas y ratones, caninos, felinos, bovinos, ovinos, equinos, levadura, Drosophila, Caenhorabditis, etc. El ADN puede también utilizarse para identificar la expresión del gen en un espécimen biológico. La manera en la cual se examinan células para la presencia de secuencias de nucleótido particular, como ADN o ARN genómico, está bien establecido en la literatura y no requiere elaboración en la presente. El ARNm se aisla de una muestra celular. El ARNm puede amplificarse por RT-PCR, utilizando transcriptasa inversa para formar una hebra de ADN complementaria, seguida por amplificación de reacción de cadena de polimerasa utilizando cebadores específicos para las secuencias de ADN objeto. Alternativamente, la muestra de ARNm se separa por electroforesis en gel, transferida a un apoyo adecuado, por ejemplo, nitrocelulosa, nylon, etc., y luego se examinaron con un fragmento del ADN obj eto como una · sonda . Otras técnicas, tales como ensayos de ligación de oligonucleótido , hibridizaciones in situ, e hibridización a sondas de ADN dispuestas en un trozo sólido puede también encontrar uso. La 32 detección del ARNm que hibridiza la secuencia objeto es indicativa de la expresión del gen TIM en la muestra. Las secuencias del ácido nucleico objeto puede modificarse por un número de propósitos, particularmente donde se utilizarán intracelularmente, por ejemplo, al unirse a un agente de desdoblamiento de ácido nucleico, por ejemplo, un ion metálico quelado, tal como hierro o cromo para desdoblamiento del gen; o similares. La secuencia del sitio TIM, incluyendo las regiones promotoras de flanqueo y regiones de codificación, pueden mutarse en varias maneras conocidas en la técnica para generar cambios objetivos en resistencia promotora, secuencia de la proteína codificada, etc. La secuencia de ADN o producto de tal mutación será sustancialmente similar a las secuencias proporcionadas en la presente, es decir, diferirá al menos un nucleótido o aminoácido, respectivamente, y pueden diferirse por al menos dos, pero no más de aproximadamente diez nucleótidos o aminoácidos. Los cambios de secuencia pueden ser sustituciones, inserciones o eliminaciones. Las eliminaciones pueden incluir además cambios más grandes, tal como eliminaciones de un dominio o exón. Otras modificaciones de interés incluyen una etiqueta epitope, por ejemplo, con el sistema FLAG, HA, etc. Para estudios de localización subcelular, las proteínas de fusión, con proteínas fluorescentes verdes (GFP) pueden utilizarse. 33 Tales genes mutados puede utilizarse para estudiar relaciones de estructura-función de polipéptidos TIM, o para alterar propiedades de la proteína que afectan su función o regulación. Por ejemplo, los factores de transcripción constitutivamente activos, o una proteína dominante negativamente activa que se une al sitio objetivo de ADN TIM sin activar la transcripción, puede crearse en esta manera. Se conocen técnicas para mutagénesis in vitro de los genes clonados. Ejemplos de protocolos para explorar mutaciones puede encontrarse en Gustin et al., Bíotechniques 14:22 (1993); Barany, Gene 37:111-23 (1985); Colicelli et al., Mol Gen Genet 199:537-9 (1985); y Prentki et al., Gene 29:303-13 (1984) . Los métodos para mutagénesis sitio específica pueden encontrarse en Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, CSH Press 1989, pp. 15.3-15.108; Weiner et al., 126:35-41 (1993); Sayers et al., Biotechnigues 13:592-6 (1992); Jones and inistorfer, Biofcechnigrues 12:528-30 (1992); Barton et al., Nucleic Acids Res 18:7349-55 (1990); Marotti and Tomich, Gene Anal Tech 6:67-70 (1989); y Zhu Anal Biochem 177:120-4 (1989). Las disposiciones proporcionan una técnica completamente elevada que puede analizar un gran número de polinucleótidos en una muestra. En un aspecto de la invención, se construye una disposición que comprende uno o más de los. genes TIM, proteínas o anticuerpos, 34 preferiblemente comprende todas de estas secuencias, cuya disposición puede comprender además otras secuencias conocidas para ser sobre o desreguladas en células T, monocitos, y similares. Esta tecnología puede utilizarse como una herramienta para probar expresión diferencial, o para genotipificar . Pueden crearse disposiciones ubicando sondas de polinucleótido en un sustrato (por ejemplo, vidrio, nitrocelulosa, etc.) en una matriz de dos dimensiones o disposición que tienen sondas de unión. Las sondas pueden unirse al sustrato ya sea por uniones covalentes o por interacciones no específicas, tales como interacciones hidrofóbicas . Las técnicas para construir disposiciones y métodos para utilizar estas disposiciones se describen en, por ejemplo, Schena et al. (1996) Proc Nati Acad Sci U S A, 93 (20) .10614-9; Schena et al. (1995) Science 270 (5235) : 467-70; Shalon et al. (1996) Genome Res . 6(7):639-45, USPN 5,807,522 EP 799 897; WO 97/29212; WO 97/27317; EP 785 280; WO 97/02357; USPN 5,593,839; USPN 5,578,832; EP 728 520; USPN 5,599,695; EP 721 016; USPN 5,556,752; WO 95/22058; y USPN 5,631,734. Las sondas utilizadas en las disposiciones pueden ser de tipos variables y pueden incluir, por ejemplo, sondas sintetizadas de longitud relativamente corta (por ejemplo, un 20-mer o un 25-mer) , ADNc (longitud completa o fragmentos del gen) , ADN amplificado, fragmentos de ADN (generados por 35 enzimas de restricción, por ejemplo) y ADN transcrito inverso. Tanto las disposiciones genéricas como de costumbre pueden utilizarse para detectar niveles de expresión diferencial . Las disposiciones de costumbre pueden prepararse utilizando sondas que hibridizan a subsecuencias pre-seleccionadas particulares de secuencias del gen ANm o productos de amplificación preparados de los mismos. Las disposiciones pueden utilizarse para, por ejemplo, examinar la expresión diferencial de genes y puede utilizarse para determinar la función genética. Por ejemplo, las disposiciones pueden utilizarse para detectar la expresión diferencial, o expresión de secuencias polimórficas , en genes TIM. Los usos ejemplares de disposiciones se describen además en, por ejemplo, Pappalarado et al. (1998) Sem. adiation Oncol . 8:217; y Ramsay. (1998) Nature Biotechnol . 16:40. Además, muchas variaciones en los métodos de detección que utilizan disposiciones están bien dentro de la experiencia de la técnica y dentro del alcance de la presente invención. Por ejemplo, en lugar de inmovilizar las sondas a un apoyo sólido, la muestra de prueba puede inmovilizarse en un apoyo sólido que se pone en contacto entonces con la sonda. La discusión adicional respecto al uso de microdisposiciones en análisis de expresión pueden encontrarse, por ejemplo en Duggan, et al., Nature Genetics Supplement 21:10-14 (1999]; 36 Bowtell, Nature Genetics Supplement 21:25-32 (1999); Brown and Botstein, Nature Genetics Supplement 21:33-37 (1999); Colé et al., Nature Genetics Supplement 21:38-41 (1999), Debouck and Goodfellow, Nature Genetics Supplement 21:48-50 (1999); Bassett, Jr . , et al., Nature Genetics Supplement 21:51-55 (1999); y Chakravarti, Nature Genetics Supplement 21 :56-60 (1999) . Los farmacogenéticos es la unión entre un genotipo del individuo y esa capacidad del individuo para metabolizar o hacer reaccionar a un agente terapéutico. Las diferencias en el metabolismo o sensibilidad objetivo pueden conducir a toxicidad severa o falla terapéutica alterando la relación entre la dosis bioactiva y la concentración sanguínea del fármaco. A lo largo de unos cuantos años, numerosos estudios han establecidos buenas relaciones entre los polimorfismos en enzimas metabólicas u objetivos de fármaco, y tanto en respuesta como toxicidad. Estas relaciones pueden utilizarse para individualizar administración de dosis terapéutica. Al genotipicar los alelos se utilizan para evaluar si un individuo responderá bien a un régimen terapéutico particular. Las secuencias polimórficas se utilizan también en ensayos de selección de fármaco, para determinar la dosis y especificidad de un agente terapéutico candidato. Un polimorfismo TIM candidato se selecciona con una terapia objetivo para determinar si existe una influencia en la 37 efectividad en tratamiento de asma. Los ensayos de selección de fármaco se realizan como se describió anteriormente. Normalmente dos o más diferentes polimorfismos de secuencia se prueban para responder a una terapia. El gen objeto puede emplearse para síntesis de una proteí a TIM completa, o fragmentos de polipéptido de los mismos, particularmente fragmentos que corresponden a dominios funcionales; sitios de unión; etc.; e incluyendo fusiones de los polipéptidos objeto a otras proteínas o partes de los mismos. Para expresión, un cásete de expresión puede emplearse, proporcionando una región de iniciación transcripcional o translacional , que puede ser inducible o constitutiva, en donde la región de codificación se une operablemente bajo el control transcripcional de la región de iniciación transcripcional, y una terminación de región transcripcional y translacional. Varias regiones de iniciación transcripcional pueden emplearse las cuales son funcionales en el huésped de expresión. Los polipéptidos de interés particular que son fragmentos de los polipéptidos TIM incluyen dominios específicos de los polipéptidos TIM, en donde un dominio puede comprender, por ejemplo, el dominio extracelular, o los dominios dentro del dominio extracelular: el dominio de mucina y/o el dominio Ig. Los dominios pueden también comprender el dominio cítoplásmico, por ejemplo, un fragmento 38 que abarca el motivo de fosforilación de tirosina cinasa, RAEDNIY, o la región expandida, SRAEDNIYIVEDRP. Los polipéptidos codificados por las variantes de refuerzo solubles son también de interés. La secuencia de los dominios Ig son como siguen: dominio Ig de TIM-1 humano, SEC. DE IDENT. NOS: 17, 19, 21, 23, 25, 27, residuos 21-126; dominio Ig de TIM-3 humano, SEC. DE IDENT. NOS: 29 y 31, residuos 22-131; dominio Ig de TIM-4 humano, SEC. DE IDENT. NOS: 33 y 35, residuos 25-133; dominio Ig de TIM-1 de ratón, SEC. DE IDENT. NOS: 1 y 3; residuos 21-129; dominio Ig de TIM-2 de ratón; SEC. DE IDENT. NO: 7, residuos 22-128; dominio Ig de TIM-3 de ratón; alelo BALB/c, SEC. DE IDENT. NO: 9, residuos 22-132; dominio Ig de TIM-3 de ratón; DBA/2 alelo, SEC. DE IDENT. NO: 11, residuos 22-132; dominio Ig de TIM-4 de ratón, SEC. DE IDENT. NOS: 13 y 15, residuos 25-135. Los polipéptidos funcionalmente equivalentes pueden encontrar uso, cuando el polipéptido equivalente puede contener eliminaciones, adiciones o sustituciones de residuos aminoácido que resultan en un cambio silencioso, produciendo así un equivalente funcional y diferencialmente expresada en el producto de trayectoria genética. Las sustituciones de aminoácido pueden hacerse en la base de similaridad en polaridad, carga, solubilidad, hidrofobicidad, hidrofilicidad, y/o la naturaleza anfipática de los residuos implicados. "Funcionalmente equivalente" como se utiliza en 39 la presente, se refiere a una proteína capaz de exhibir una actividad in vivo sustancialmente similar como el polipéptido codificado por un gen TIM. Los polipeptidos pueden expresarse en procariotes o eucariotes de acuerdo con las formas convencionales, dependiendo del propósito para expresión. Por producción a gran escala de la proteína, un organismo unicelular, tal como E. coli, B. subtilis, S. cexevisiae, o células de un organismo más elevado tal como vertebrados, particularmente mamíferos, por ejemplo, células COS 7, pueden utilizarse como las células huéspedes de expresión. En muchas situaciones, puede ser deseable expresar el gen TIM en células de mamífero, en donde el gen TIM se beneficiará a partir del plegamiento nativo y modificaciones post-translacionales . Pueden también sintetizarse péptidos pequeños en el laboratorio, incluyendo epítopes de péptido específico, dominios, y similares, en donde los péptidos usualmente serán al menos de aproximadamente 8 aminoácidos de largo, más usualmente al menos aproximadamente 20 aminoácidos de longitud, hasta completar los dominios, y la proteína de longitud completa. Los péptidos pueden comprender regiones polimórficas de la proteína. También incluidos son las proteínas de fusión, en donde todos o un fragmento de la proteína TIM se fusiona a un polipéptido heterólogo, por ejemplo, proteína fluorescente verde, regiones Fe de 40 anticuerpo, poli-histidina, y similares. En células huésped de mamífero, un número de sistemas de expresión de base viral pueden utilizarse, incluyendo retrovirus, lentivirus, adenovirus, virus asociados con adeno, y similares. En casos en donde un adenovirus se utiliza como un vector de expresión, la secuencia de codificación de interés puede ligarse a un complejo de control de transcripción/traducción de adenovirus, por ejemplo, el promotor final y la secuencia líder tripartita. Este gen quimérico puede entonces insertarse en el genoma de adenovirus por recombinación in vivo o in vitro. La inserción en una región no esencial del genoma viral (por ejemplo, la región El o E3) resultará en un virus recombinante que es viable y capaz de expresar una proteína genética diferencialmente expresada o de trayectoria en huéspedes infectados . Las señales de iniciación específicas pueden también requerirse para traducción eficiente de los genes. Estas señales incluyen el codón de iniciación ATG y secuencias adyacentes. En casos en donde un gen completo, que incluye su propio codón de iniciación y secuencias adyacentes, se inserta en el vector de expresión apropiado, ningunas señales de control traslacionales adicionales pueden necesitarse. Sin embargo, en casos en donde únicamente una porción de la secuencia que codifica el gen se inserta, las 41 señales de control traslacional exógena debe proporcionarse. Estas señales de control translacional exogenas y codones de iniciación pueden ser de una variedad de orígenes, tanto naturales como sintéticos. La eficiencia de expresión puede mejorarse por la inclusión de elementos mejoradores de transcripción apropiada, terminadores de transcripción, etc. Con la disponibilidad de los polipéptidos en grandes cantidades, empleando un huésped de expresión, los polipéptidos pueden aislarse y purificarse de acuerdo con formas convencionales. Un lisato puede prepararse del huésped de expresión y el lisato purificado utilizando HPLC, la cromatografía de exclusión, electroforesis en gel, cromatografía de afinidad, u otra técnica de purificación. El polipéptido purificado generalmente será de al menos aproximadamente 80% puro, preferiblemente al menos aproximadamente 90% puro, y puede ser de hasta e incluyendo 100% puro. Puro se pretende decir libre de otras proteínas, así como restos celulares. El polipéptido puede marcarse, ya sea directa o indirectamente. Cualquiera de una variedad de sistemas de marcado etiquetado adecuados puede utilizarse, incluyendo pero limitándose a, radioisótopos tales como 125I; sistemas de etiquetado de enzima que genera una señal colorimétrica detectable o luz cuando se expone al sustrato; y marcas de fluorescencia. La marca indirecta implica el uso de una 42 proteína, tal como un anticuerpo marcado, que específicamente se une al polipéptido de interés. Tales anticuerpos incluyen, pero no se limitan a cadena policlonal, monoclonal, quimérica, única, fragmentos Fab y fragmentos producidos por una colección de expresión Fab.

MIEMBROS DE UNIÓN ESPECÍFICOS El término "miembro de unión específico" o "miembro de unión" como se utiliza en la presente se refiere a un miembro de un par de unión específicos, es decir, dos moléculas, usualmente dos moléculas diferentes, en donde una de las moléculas (es decir, el primer miembro de unión específico) a través de medios físicos o químicos se une específicamente a la otra molécula (es decir, segundo miembro de unión específico) . Los miembros complementarios de un par de unión específicos son algunas veces mencionados como un ligando y receptor; o receptor y receptor-contador. Para los propósitos de la presente invención, los dos miembros de unión pueden conocerse por asociarse entre sí, por ejemplo, cuando un ensayo se dirige a compuestos de detección que interfieren con la asociación de un par de unión conocido. Alternativamente, los compuestos candidatos sospechosos de ser una pareja de unión a un compuesto de interés pueden utilizarse . Los pares de unión específicos de interés incluyen 43 carbohidratos y lectinas; secuencias de nucleótido complementarias; ligandos y receptor peptídicos; moléculas efectoras y receptoras; hormonas y proteína de unión de hormona; co-factores de enzima y enzimas; inhibidores de enzima y enzimas; lípidos y proteína de unión de lípido; etc. Los pares de unión específicos pueden incluir análogos, derivados y fragmentos del miembro dé unión específico original. Por ejemplo, un par de receptor y ligando puede incluir fragmentos peptídicos, peptidomimeticos químicamente sintetizados, proteína etiquetada, proteína derivatizada, etc. En una modalidad preferida, el miembro de unión específico es un anticuerpo. El término "anticuerpo" o "porción de anticuerpo" pretende incluir cualquier estructura molecular que contiene una cadena polipeptídica con una forma específica que se adapta a y reconoce un epítope, en donde una o más interacciones de unión no covalentes estabilizan el complejo entre la estructura molecular y el epítope. Los anticuerpos que se unen específicamente a una de las proteínas se refieren como anti-TIM. La molécula de anticuerpo arquetipal es la inmunoglobulina, y todos los tipos de inmunoglobulinas, IgG, IgM, IgA, IgE, IgD, etc., a partir de todas las fuentes, por ejemplo, humano, roedor, conejo, vaca, oveja, puerco, perro, otro mamífero, pollo, otras aves, etc., se consideran ser "anticuerpos". Los 44 anticuerpos utilizados en la presente invención pueden ser anticuerpos policlonales , aunque los anticuerpos policlonales se prefieren debido a que pueden reproducirse por cultivo celular o recombinantemente, y pueden modificarse para reducir su antigenicidad. Los anticuerpos policlonales pueden originarse por un protocolo estándar inyectando a un animal de producción con una composición antigénica, que puede ser un polipéptido o un ADNc expresado in vivo. Véase, por ejemplo, Harlow and Lañe, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988. Cuando se utiliza una proteína completa, o una sección más grande de la proteína, los anticuerpos pueden originarse inmunizando la producción animal con la proteína y un adyuvante adecuado (por ejemplo, Fruends, Fruends completo, emulsiones aceite en agua, etc.) Cuando se utiliza un péptido más pequeño, es ventajoso conjugar el péptído con una molécula más grande para realizar un conjugado inmunoestímulatorio. Las proteínas conjugadas comúnmente utilizadas que están comercialmente disponibles para tal uso incluyen albúmina de suero de bovino (BSA) y hemocianina de lapa íntima (KLH) . Para originar anticuerpos a epítopes particulares, tales como residuos polimórficos , los péptidos derivados de la secuencia completa pueden utilizarse. El inmunógeno se inyecta en el huésped animal, preferiblemente de acuerdo a un horario predeterminado que incorpora una o 45 más inmunizaciones impulsoras, y los animales se desangran periódicamente. Los anticuerpos policlonales pueden entonces purificarse a partir de tal antisuero por ejemplo, cromatografía por afinidad utilizando el polipeptido acoplado a un apoyo sólido adecuado. Alternativamente, para anticuerpos monoclonales, los hibridomas pueden formarse aislando las células inmunes estimuladas, tales como aquellas del bazo del animal inoculado. Estas células se fusionan entonces a células inmor alizadas, tales como células de mieloma o células transformadas, que son capaces de replicarse indefinidamente en cultivo celular, por lo que producen una línea celular que secreta inmunoglobulina, imperecedera. La linea celular inmortal utilizada se selecciona preferiblemente para ser deficiente en enzimas necesarias para la utilización de ciertos nutrientes. Muchas de tales líneas celulares (tales como mielomas) se conocen por aquellos expertos en la técnica, e incluyen, por ejemplo; timidina cinasa (TK) o hipoxantina-guanina fosforiboxil transferasa (HGPRT) . Estas deficiencias permiten la selección para fusionar células de acuerdo a su capacidad para acrecentarse en por ejemplo, medios de hipoxantina aminopterintimidina (HAT) . Preferiblemente, las parejas de fusión inmortal utilizados se derivan de una línea que no secreta inmunoglobulina. Las células fusionadas resultantes, o 46 hibridomas se cultivan bajo condiciones que permiten la sobrevivencia de células fusionadas, pero no sin fusionar, y las colonias resultantes seleccionadas para la producción de los anticuerpos monoclonales deseados. Las colonias que producen tales anticuerpos se clonan, expanden, y acrecentan para producir grandes cantidades de anticuerpo, véase Kohler and Milstein, 1975 Nature 256:495 (las descripciones de las cuales se incorporan en la presente para referencia) . Grandes cantidades de anticuerpos monoclonales de hibridomas secretados pueden producirse inyectando los clones en la cavidad peritoneal de ratones y cosechando el fluido de ascitis de los mismos. Los ratones, preferiblemente cebados con pristano, o algún otro promotor de tumor, e inmunosuprimidos químicamente o por irradiación, pueden ser cualesquiera de las diversas cepas adecuadas conocidas por aquellos en la técnica. El fluido de ascitis se cosecha de los ratones y el anticuerpo monoclonal purificado de los mismos, por ejemplo, por columna de C Sepharose u otros medios cromatográficos . Alternativamente, los hibridomas pueden cultivarse in vitro o como cultivos de suspensión. Los lotes, cultivo continuo, u otros procesos de cultivo adecuados pueden utilizarse. Los anticuerpos monoclonales se recuperan entonces a partir del medio de cultivo o sobrenadante . Además, los anticuerpos o fragmentos de unión de 47 antígeno pueden producirse por ingeniería genética. En esta técnica, como con el procedimiento de hibridoma estándar, las células que producen anticuerpo se sensibilizan al antígeno deseado o inmunógeno. El ARN mensajero aislado de las células de bazo inmune o hibridomas se utiliza como una plantilla para realizar el ADNc utilizando amplificación de PCR. Una colección de vectores, cada una conteniendo un gen de cadena pesado y un gen de cadena ligero que retienen la especificidad de antígeno inicial, se produce por inserción de secciones apropiadas del ADNc de inmunoglobulina amplificado en los vectores de expresión. Una colección combinatoria se construye combinando la colección de gen de cadena pesada con la colección de gen de cadena ligera. Esto resulta en una colección de clones que s?-expresan una cadena ligera y pesada (asemejándose al fragmento Fab o fragmento de unión de antígeno de una molécula de anticuerpo) . Los vectores que portan estos genes se co-transfectan en un huésped (por ejemplo, bacteria, células de insecto, células de mamífero, u otras células huéspedes de producción de proteína adecuadas) . Cuando la síntesis de gen de anticuerpo se induce en el huésped transfectado, las proteínas de cadena pesada y ligera auto-ensambladas para producir anticuerpos activos que pueden detectarse por selección con el antígeno o inmunógeno . Los anticuerpos quiméricos pueden hacerse por 48 medios recombinantes combinando las regiones de cadena ligera y pesada variable de murino (V y VH) , obtenidas de un clon de hibridoma de murino (u otro derivado de animal) con las regiones de cadena ligera y pesada constante humana, para producir un anticuerpo con predominantemente dominios humanos . La producción de tales anticuerpos quiméricos es bien conocida en la técnica, y puede lograrse por medios estándares (como se describe por e emplo, en la Patente Norteamericana No. 5,624,659, incorporada completamente en la presente para referencia) . Los anticuerpos humanizados se diseñan para contener aún más dominios de inmunoglobulina similares a humano, e incorporan únicamente las regiones que determinan complementariedad del anticuerpo derivado del animal . Esto se logra examinando cuidadosamente la secuencia de los lazos hiper-variables de las regiones variables del anticuerpo monoclonal, y ajustándolas a la estructura de las cadenas de anticuerpo humano. Aunque facialmente complejo, el proceso es directo en la práctica, véase por ejemplo, Patente Norteamericana No. 6,187,287, incorporada en la presente totalmente para referencia. Alternativamente, los anticuerpos policlonales o monoclonales pueden producirse de animales que se han alterado genéticamente para producir inmunoglobulinas . Las técnicas para generar tales animales, y derivar anticuerpos de los mismos, se describen en las Patentes Norteamericanas 49 Nos. 6,162,963 y 6,150,584, incorporadas completamente en la presente para referencia. Alternativamente, los anticuerpos de una sola cadena (Fv, como se describe posteriormente) pueden producirse de colecciones fago que contienen regiones variables humanas. Véase la Patente Norteamericana No. 6,174,708. La administración intratecal de inmunotoxina de una sola cadena, L B-7 [B3 (Fv) -PE38] , se ha mostrado que cura la meningitis carcinomatosa en un modelo de rata. Proc. Nati. Acad. Sci ü S A 92,2765-9, todas de las cuales se incorporan en la presente totalmente para referencia . Además de las inmunoglobulinas completas (o sus contrapartes recombinantes) , los fragmentos de inmunoglobulina que comprenden el sitio de unión epítope (por ejemplo, Fab' , F(ab' )2 u otros fragmentos) son útiles como porciones de anticuerpo en la presente invención. Tales fragmentos de anticuerpo pueden generarse de inmunoglobulinas completas de pepsina, papaína u otro desdoblamiento de proteasa. "Fragmento" o inmunoglobulinas mínimas pueden diseñarse utilizando técnicas de inmunoglobulina recombinantes. Por ejemplo, inmunoglobulinas wFv" para usarse en la presente invención pueden producirse uniendo una región de cadena ligera variable a una región de cadena pesada a través de un enlazador peptídico (por ejemplo, poli-glicina u otra secuencia que no forma una espiral alfa o motivo de hoja 50 beta) . Los fragmentos Fv son heterodímeros del dominio de cadena pesada variable (VH) y el dominio de cadena ligera variable (VL) · Los heterodímeros de los dominios de cadena pesada y ligera que ocurren en IgG completo, por ejemplo, se conectan por una unión de disulfuro. Los Fvs recombinantes en donde VH y VL se conectan por un enlazador peptídico son normalmente estables. Estos son Fvs de una sola cadena que se han encontrado para retener especificidad y afinidad y se ha mostrado que son útiles para la formación de imágenes de tumores y para realizar inmunotoxinas recombinantes para terapia de tumor. Sin embargo, los investigadores han ligado que algunos de los Fvs de una sola cadena tienen una afinidad reducida para antígeno y el enlazador peptidico puede interferir con la unión. Los Fvs mejorados han sido también hechos los cuales comprenden uniones de disulfuro estabilizantes entre las regiones VH y VL, como se describe en la Patente Norteamericana No. 6,147,203, incorporada completamente en la presente para referencia. Cualquiera de estos anticuerpos mínimos puede utilizarse en la presente invención, y aquellos los cuales se humanizan para evitar reacciones ???? se prefieren para utilizarse en modalidades de la invención. Además, las inmunoglobulinas derivadas con enlazadores químicos agregados, porciones detectables, tales 51 como tintes fluorescentes, enzimas, sustratos, porciones quimioluminiscentes y similares, o porciones de unión específicas, tales como estreptatividina, avidina, o biotina, y similares pueden utilizarse en los métodos y composiciones de la presente invención. Por conveniencia, el término "anticuerpo" o "porción de anticuerpo" será utilizado completamente para referirse generalmente a moléculas que se unen específicamente a un epítope de los objetivos de proteína de tumor del cerebro, aunque el término abarcará todas las inmunoglobulinas, derivados, fragmentos, inmunoglobulinas recombinantes o diseñadas, e inmunoglobulinas modificadas como se describió anteriormente. Los anticuerpos candidatos pueden probarse para actividad por cualquier medio estándar adecuado. Como una primera selección, los anticuerpos pueden probarse para unión contra el inmunógeno. Como una segunda selección, los anticuerpos pueden seleccionarse para cros-reactividad entre los alelos y entre los miembros de la familia TIM, y probarse para actividad en inhibición de la función TIM. Para estos tamices, el anticuerpo candidato puede etiquetarse para detección. Los anticuerpos que alteran la actividad biológica de una proteína TIM pueden analizarse en formatos funcionales . DIAGNÓSTICO El diagnóstico de asma o atopía asociada con 52 polimorfismo Tim se realiza por la proteína, ADN o ARN, secuencia y/o análisis de hibridización de cualquier muestra conveniente a partir de un paciente, por ejemplo material de biopsia, muestra sanguínea, raspaduras de mejilla, etc. Una muestra de ácido nucleico de un paciente que tiene asma que puede asociarse con TIM, se analiza por la presencia de un polimorfismo predispuesto en TIM. Un genotipo de paciente típico tendría al menos una mutación predispuesta en al menos un cromosoma. La presencia de una secuencia TIM polimórfica que afecta la actividad o expresión del producto genético, y confiere una susceptibilidad incrementada al asma se considera un polimorfismo predispuesto. Se seleccionan individuos analizando su ADN o ARNm por la presencia de un polimorfismo predispuesto, cuando se compara a una secuencia neutral de asma. Las secuencias específicas de interés incluyen cualquier polimorfismo que conduce a hiperreactividad bronquial clínica o de otra manera se asocia con asma, incluyendo, pero no limitado a, inserciones, sustituciones y eliminaciones en la secuencia de región de codificación, secuencias intrón que afectan el refuerzo, o secuencias promotoras o mejoradoras que afectan la actividad y expresión de la proteína. Ejemplos de polimorfismos TIM específicos se proporcionan en los Ejemplos. La selección puede también basarse en las características funcionales o antigenicas de la proteína. Los 53 inmunoensayos diseñados para detectar polimorfismos predispuestos en proteínas TIM pueden utilizarse en selección. Cuando muchas mutaciones diversas conducen a un fenotipo de enfermedad particular, los ensayos de proteína funcional han probado ser herramientas de ' selección efectivas . Estudios bioquímicos pueden realizarse para determinar si un polimorfismo de secuencia candidato en la región de codificación TIM o regiones control se asocia con la enfermedad. Por ejemplo, un cambio en la secuencia promotora o mej oradora que afecta la expresión de TIM puede resultar en predisposición al asma. Los niveles de expresión de un alelo variante candidato se comparan a los niveles de expresión del alelo normal por varios métodos conocidos en la técnica. Los métodos para determinar la resistencia promotora o mej oradora incluye cuantificación de la proteína natural expresada; inserción del elemento control variante en un vector con un gen reportero tal como ß-galactosidasa, luciferasa, cloranfenicol acetiltransferasa, etc., que proporciona cuantificación conveniente; y similares. La actividad de la proteína TIM codificada puede determinarse en comparación con la proteína de tipo silvestre. Un número de métodos están disponibles para analizar ácidos nucleicos por la presencia de una secuencia específica. Cuando grandes cantidades de ADN están 54 disponibles, el ADN genómico se utiliza directamente. Alternativamente, la región de interés se clona en un vector adecuado y crece en cantidad suficiente para análisis. Las células que expresan genes TJM, tales como células de traquea, pueden utilizarse como una fuente de ARNm, que pueden analizarse directamente o por transcripción inversa en ADNc para análisis. El ácido nucleico puede amplificarse por técnicas convencionales, tales como la reacción de cadena de polimerasa (PC ) , para proporcionar cantidades suficientes para análisis. El uso de la reacción de cadena de polimerasa se describe en Saiki, et al. (1985) Science 239:487, y una revisión de técnicas actuales pueden encontrarse en Sambrook, et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, CSH Press 1989, pp. 14.2-14.33. La amplificación puede utilizarse para determinar si se presenta un polimorfismo, utilizando un cebador que es específico para el polimorfismo. Alternativamente, varios métodos se conocen en la técnica que utilizan ligación de oligonucleótido como un medio para detectar polimorfismos, por ejemplo véase Riley et al. (1990) N.A.R. 18:2887-2890; y Delahunty et al. (1996) Am. J. Hum. Genet.58; 1239-1246. Una marca detectable puede incluirse en una reacción de amplificación. Las marcas adecuadas incluyen fluorocromos , por ejemplo, isotiocianato de fluoresceina (FITC) , rodamina, Rojo Texas, ficoeritrina aloficocianina, 6- 55 carboxifluoresceína (6-FAM) , 2 ' , 7 ' -dimetoxi-4 ' , 5 ' -dicloro-6-carboxifluoresceína (JOE) , 6-carboxi-X-rodamina (ROX) , 6-carboxi-2' ,4' , 7' ,4, 7-hexaclorofluoresceina (HEX) , 5-carboxifluoresceína (5-FAM) , o ?,?,?' ,?' -tetrametil-6-carboxirhodamina (TAMRA) , marcas radioactivas, por ejemplo 32P, 35S, 3H; etc. La marca puede ser un sistema de dos etapas, en donde el ADN amplificado se conjuga a biotina, haptenos, etc., que tienen una pareja de unión de alta afinidad, por ejemplo, avidina, anticuerpos específicos, etc., en donde la pareja de unión se conjuga a una marca detectable. La marca puede conjugarse a uno o ambos de los cebadores. Alternativamente, el grupo de nucleótidos utilizados en la amplificación está marcado, para incorporar la marca en el producto de amplificación. El ácido nucleico muestra, por ejemplo un fragmento amplificado o clonado, se analiza por uno de un número de métodos conocidos en la técnica. El ácido nucleico puede secuenciarse por didesoxi u otros métodos, y la secuencia de bases comparada a una secuencia TIM neutra. La hibridización con la secuencia variante puede también utilizarse para determinar su presencia, por transferencia Southern, transferencia de punto, etc. El patrón de hibridización de una secuencia control y variante a una disposición de sondas de oligonucleótido inmovilizado en un apoyo sólido, como se describe en la US 5,445,934 o en WO95/35505, puede también 56 utilizarse como un medio para detectar la presencia de secuencias variantes. El análisis de polimorfismo conformacional de una sola hebra (SSCP) , electroforesis de gel de gradiente desnaturalizado (DGGE) , detección de desdoblamiento mal emparejado, y análisis heterodúplex en matrices de gel se utilizan para detectar cambios conformacionales creados por la variación de secuencia de ADN como alteraciones en movilidad electroforática . Alternativamente, donde un polimorfismo crea o destruye un sitio de reconocimiento para una endonucleasa de restricción (polimorfismo de longitud de fragmento de restricción, RFLP) , la muestra se digiere con esa endonucleasa, y el tamaño de los productos se fraccionan para determinar si el fragmento se digirió. La fraccionación se realiza por electroforesis en gel o capilar, particularmente geles de arilamida o agarosa. El patrón de hibridización de una secuencia control y variante a una disposición de sondas de oligonucleótido inmovilizadas en un apoyo sólido, como se describe en la US 5,445,934, o en la WO95/35505, pueden utilizarse como un medio para detectar la presencia de secuencias variantes. En una modalidad de la invención, una disposición de oligonucleótidos se proporciona, donde las posiciones discretas en la disposición son complementarias a al menos una porción de ARNm o ADN genómico del sitio TIM. Tal disposición puede comprender una serie de oligonucleótidos, 57 cada uno de los cuales puede hibridizarse específicamente a un ácido nucleico, por ejemplo, ARNm, ADNc, ADN genómico, etc. , a partir del sitio TIM. Los anticuerpos específicos para polimorfismos TIM pueden utilizarse en seleccionar i munoensayos . Una reducción o incremento en el TIM neutral y/o presencia de polimorfismo asociados con asma es indicativo que el asma se asocia con TIM. Se toma una muestra de un paciente sospechoso de tener asma asociado con TIM. Las muestras como se utilizan en la presente, incluyen fluidos biológicos tales como lavado traqueal, sangre, fluido cerebroespinal, lágrimas, saliva, linfa, fluido de diálisis y similares; fluidos derivados de cultivo de órgano o tejido; y fluidos extraídos de tejidos fisiológicos. También incluidos en el término son derivados y fracciones de tales fluidos. Las muestras de biopsia son de particular interés, por ejemplo raspaduras de traquea, etc. El número de células en una muestra generalmente será al menos aproximadamente 103, usualmente al menos 104 más usualmente al menos aproximadamente 105. Las células pueden disociarse, en el caso de tejidos sólidos, o secciones de tejido pueden analizarse. Alternativamente puede prepararse un lisato de las células . El diagnóstico puede realizarse por un número de métodos. Los diferentes métodos determinan todos, la ausencia o presencia o cantidades alternativas de TIM normales o 58 anormales en células de paciente sospechosas de tener un polimorfismo predispuesto en TI . Por ejemplo, la detección puede utilizar tinción de células o secciones histológicas, realizadas de acuerdo con métodos convencionales. Los anticuerpos de interés se agregan a la muestra celular, e incuban durante un periodo de tiempo suficiente para permitir la unión al epítope, usualmente al menos aproximadamente 10 minutos. El anticuerpo puede etiquetarse con radioisótopos, enzimas, fluorescentes, quimioluminiscentes, u otras etiquetas para detección directa. Alternativamente, un anticuerpo de segunda etapa o reactivo se utiliza para amplificar la señal. Tales reactivos se conocen bien en la técnica. Por ejemplo, el anticuerpo principal puede conjugarse a biotina, con avidina conjugada con peroxidasa de rábano picante agregado como un segundo reactivo de etapa. La detección final utiliza un sustrato que experimenta un cambio de color en la presencia de la peroxidasa. La ausencia o presencia de la unión del anticuerpo puede determinarse por varios métodos, incluyendo citometría de flujo de células disociadas, microscopio, radiografía, conteo por centelleo, etc. Un método alternativo para diagnostico depende de la detección in vitro de la unió entre anticuerpos y TIM en un lisato . Medir la concentración de la unión de TIM en una muestra o fracción de la misma puede lograrse por una 59 variedad de ensayos específicos. Un ensayo de tipo emparedado convencional puede utilizarse. Por ejemplo, un ensayo de emparedado puede primero unirse a anticuerpos específicos de TIM a una superficie o apoyo insoluble. La manera particular de unión no es crucial siempre que sea compatible con los reactivos y métodos globales de la invención. Pueden unirse a las placas covalente o no covalentemente, preferiblemente no covalentemente . Otros inmunoensayos se conocen en la técnica y pueden encontrar uso como diagnósticos. Las placas Ouchterlony proporcionan una determinación simple de unión de anticuerpo. Las transferencias Western pueden realizarse en geles de proteína o puntos de proteína o filtros, utilizando un sistema de detección específico para TIM como se desea, convenientemente utilizando un método de etiquetado como se describe por el ensayo de emparedado. Los genes TIM son útiles para análisis de expresión TIM, por ejemplo, determinando el desarrollo y patrones específicos de tejido de expresión, y para modular la expresión in vi tro e in vivo. Los vectores útiles para introducción del gen incluyen plásmidos y vectores virales. De interés particular son los vectores basados en retrovirales, por ejemplo, virus de leucemia murina Moloney y virus de inmunodeficiencia humana modificado; vectores de adenovirus, etc., que se mantienen temporal o establemente en 60 células de mamífero. Una variedad amplia de vectores puede emplearse para la transfección y/o integración del gen en el genoma de las células. Alternativamente, la microinyección puede emplearse, fusión, o similares para la introducción de genes en una célula huésped adecuada. Véase por ejemplo, Dha an et al. (1991) Science 254:1509-1512 y Smith et al. (1990) Molecular and Cellular Biology 3268-3271. El vector de expresión tendrá una región de iniciación transcripcional orientada para producir el ARNm funcional. La región de iniciación transcripcional nativa o una región de iniciación transcripcional exógena pueden emplearse . El promotor puede introducirse por métodos reco binantes in vi tro, o como el resultado de integración homologa de la secuencia en un cromosoma. Muchos promotores fuertes se conocen en la técnica, incluyendo el promotor de ß-actina, promotores tempranos y tardíos de SV40, promotor de citomegalovirus humano, LTRs retrovirales, elemento de respuesta a la metalotioneina (MRE) , construcciones del promotor de inducible a tetraciclina, etc. Los vectores de expresión generalmente tienen sitios de restricción convenientes ubicados cerca de la secuencia promotora para proporcionar la inserción de secuencias de ácido nucleico. Pueden prepararse casetes de transcripción los cuales comprenden una región de iniciación de transcripción, el gen objetivo o fragmento de los mismos, 61 y una región de terminación transcripcional . Los casetes de transcripción pueden introducirse en una variedad de vectores, por ejemplo, plásmido retrovirus, por ejemplo, lentivirus adenovirus; y similares; en donde los vectores son capaces de mantenerse temporal o establemente en las células, usualmente durante un periodo de al menos aproximadamente un día, más usualmente durante un periodo de al menos aproximadamente varios días a varias semanas. Las moléculas antisentido se utilizan para desregular la expresión de TIM en células. El reactivo antisentido puede ser oligonucleótidos ántisentido (ODN) , particularmente ODN sintético que tiene modificaciones químicas a partir de ácidos nucleicos nativos, o construcciones de ácido nucleico que expresan tales moléculas anti-sentido como ARN. La secuencia antisentido es complementaria al AR m del gen objetivo, e inhibe la expresión de los productos genéticos objetivo. Las moléculas antisentido inhiben la expresión genética a través de varios mecanismos, por ejemplo reduciendo la cantidad de ARNm disponible para la traducción, a través de la activación de RNasa H, o barrera estérica. Una combinación de moléculas antisentido pueden administrarse cuando una combinación puede comprender diferentes secuencias múltiples . Las moléculas antisentido pueden producirse por la expresión de todo o parte de la secuencia genética objetivo 62 en un vector apropiado, en donde la iniciación transcripcional se orienta de manera que una hebra antisentido se produzca como una molécula de AR . Alternativamente, la molécula antisentido es un oligonucleótido sintético. Los oligonucleótidos antisentido generalmente serán al menos aproximadamente 7, usualmente al menos aproximadamente 12, más usualmente al menos aproximadamente 20 nucleótidos de largo, y no más de aproximadamente 500, usualmente no más de aproximadamente 50, más usualmente no más de aproximadamente 35 nucleótidos de largo, en donde la longitud se controla por la eficiencia de la inhibición, especificidad, incluyendo ausencia de cros-reactividad, y similares. Se ha encontrado que los oligonucleótidos cortos, de 7 a 8 bases de largo, pueden ser inhibidores fuertes y selectivos de la expresión genética (véase Wagner et al. (1996) Nature Biotechnology 14:840-844).

ANIMALES TRANSGÉNICOS Los ácidos nucleicos objeto pueden utilizarse para generar animales, no humanos genéticamente modificados o modificaciones en gen sitio específico en líneas celulares. El término "transg nico" pretende abarcar animales genéticamente modificados que tienen una eliminación de otra supresión de la actividad genética de TIM, que tiene un gen TIM exógeno que se transmite establemente en las células 63 huéspedes, o que tiene un promotor TIM exogeno operablemente unido a un gen reportero. Los animales transgénicos pueden hacerse a través de recombinación homologa, en donde el sitio TIM se altera. Alternativamente, una construcción de ácido nucleico se integra aleatoriamente en el genoma. Los vectores para integración estable incluyen plásmidos, retrovirus y otros virus de animales, YACs, y similares. De interés son los mamíferos transgénicos, por ejemplo, vacas, puercos, cabras, caballos, etc., y particularmente roedores, por ejemplo ratas, ratones, etc. Un animal "suprimido" se manipula genéticamente para reducir sustancialmente, o eliminar la función TIM endógena. Diferentes enfoques pueden utilizarse para lograr la "supresión" . Una eliminación cromosomal de todo o parte del homólogo TIM nativo puede inducirse. Las eliminaciones de las regiones no codificadas, particularmente la región promotora, secuencias reguladoras 3', mej oradores, o eliminaciones del gen que activa la expresión de los genes TIM. Una supresión funcional puede también lograrse por la introducción de una construcción anti-sentido que bloquea la expresión de los genes TIM nativos (por ejemplo, véase Li and Cohén (1996) Cell 85:319-329). Los animales transgénicos pueden hacerse teniendo genes TIM exógenos . El gen exogeno es usualmente ya sea de una especie diferente que el animal huésped, o de otra manera 64 se altera en su secuencia de codificación o sin codificación. El gen introducido puede ser un gen de tipo silvestre, polimorfismo de origen natural, o secuencia manipulada genéticamente, por ejemplo, aquellos descritos previamente con eliminaciones, sustituciones o inserciones en las regiones de codificación o sin codificación. La secuencia introducida puede codificar un polipéptido TIM, o puede utilizar el promotor TIM operablemente unido al gen reportero. Donde el gen introducido es una secuencia de codificación, usualmente se une operablemente a un promotor, el cual puede ser constitutivo o inducible, y otras secuencias reguladoras requeridas para expresión en el animal huésped. Las construcciones específicas de interés, pero no limitadas a, incluyen TIM anti-sentido, que bloquearán la expresión TIM, expresión de mutaciones TIM negativas dominantes, y sobreexpresión de un gen TIM. Un marcador detectable, tal como lac Z puede introducirse en el sitio TIM, en donde la sobrerregulación de la expresión TIM resultará en un cambio fácilmente detectable en fenotipo. Las células modificadas o animales se utilizan en el estudio de la función TIM y regulación. Los animales pueden utilizarse en estudios funcionales, selección de fármaco, etc., por ejemplo, para determinar el efecto de un fármaco candidato en asma. Una serie de pequeñas 65 eliminaciones y/o sustituciones pueden hacerse en el gen TIM para determinar el papel de diferentes exones en la unión de ADN, regulación transcripcional, etc. Al proporcionar la expresión de la proteína TIM en células en donde de otra manera no se producen normalmente, se puede inducir cambios en el comportamiento celular. Estos animales son también útiles para explorar modelos de herencia de asma, por ejemplo, v. recessive; efectos relativos de diferentes alelos y efectos sinergísticos entre TIM y otros genes de asma en algún otro sitio en el genoma. Las construcciones de ADN para recombinación homologa comprenderá al menos una porción del gen TIM con la modificación genética deseada, e incluirá regiones de homología al sitio objetivo. Las construcciones de ADN para integración aleatoria no necesitan incluir regiones de homología para mediar la recombinación. Convenientemente, los marcadores para selección positiva y negativa se incluyen. Los métodos para generar células que tienen modificaciones de gen objetivo a través de recombinación homologa se conocen en la técnica. Para varias técnicas para transfectar células de mamífero, véase Keown et al. (1990) Methods in Enzymology 185:527-537. La selección de fármaco puede realizarse en combinación con los modelos de animal objeto. Muchos genes de mamífero tienen homólogos en levadura y animales inferiores. 66 El estudio de tal papel fisiológico homólogo e interacciones con otras proteínas puede facilitar el entendimiento de la función biológica. Además de los sistemas modelo basados en complementación genética, la levadura se ha mostrado que es una herramienta poderosa para estudiar interacciones de proteína-proteína a través de dos sistemas híbridos descritos en Chien et al. (1991) P.N.A.S. 88:9578-9582. El análisis del sistema de dos híbridos es de particular interés para explorar activación transcripcional por proteínas TIM.

SELECCIÓN DE COMPUESTO Uno puede identificar ligandos o sustratos que se unen a, modular o imitar la acción de TIM. Las áreas de investigación son el desarrollo de tratamientos para trastornos inmunes, asma, cáncer, daño por reperfusión isquémica, y otras enfermedades que se asocian con respuestas celulares a tensión. La selección de fármaco identifica agentes que proporcionan una inhibición, reemplazo, o mejoramiento para función TIM en células afectadas. Por ejemplo, agentes que invierten o inhiben la función TIM pueden reducir reactividad bronquial en asma reduciendo niveles de citocinas Th2, e inhibidores TIM puede mejorar sensibilidad de tumor a terapia de cáncer, potencializando los efectos de tratamientos de radiación y quimioterapéuticos que inducen apoptosis. De particular interés son ensayos de 67 selección para agentes que tienen una baja toxicidad para células humanas. Una amplia variedad de ensayos pueden utilizarse para este propósito, incluyendo ensayos de unión de proteína-proteína in vi tro etiquetados, ensayos de unión de ADN-proteína, movilidad electroforética, inmunoensayos para unión de proteína, y similares. La proteina purificada puede también utilizarse para la determinación de estructura de cristal tridimensional, que puede utilizarse para modelar interacciones intermoleculares, regulación transcripcional, etc. El término "agente" como se utiliza en la presente describe cualquier molécula, por ejemplo, proteína o farmacéutica, con la capacidad de alterar o imitar la función fisiológica del TIM, tal como un inhibidor de señal de tirosina cinasa, o un inhibidor de péptido de un sitio de unión de integrina. Generalmente, una pluralidad de mezclas de ensayo se operan en un paralelo con diferentes concentraciones de agente para obtener una respuesta diferencial a varias concentraciones. Normalmente, una de estas concentraciones sirve como un control negativo, es decir, a concentración cero o por debajo del nivel de detección. Los agentes candidatos abarcan numerosas clases químicas, aunque normalmente son moléculas orgánicas, preferiblemente pequeños compuestos orgánicos que tienen un 68 peso molecular de más de 50 y menos de aproximadamente 2,500 daltons . Los agentes candidatos comprenden grupos funcionales necesarios para interacción estructural con proteínas, particularmente unión de hidrógeno, y normalmente incluyen al menos un grupo amina, carbonilo, hidroxilo o carboxilo, preferiblemente al menos dos de los grupos funcionales químicos . Los agentes candidatos con frecuencia comprenden carbono cíclico o estructuras heterocíclicas y/o estructuras aromáticas o poliaromáticas sustituidos con uno o más de los grupos funcionales anteriores. Los agentes candidatos son también encontrados entre biomoléculas incluyendo, pero no limitados a: péptidos, sacáridos, ácidos grasos, esteroides, purinas, pirimidinas, derivados, análogos estructurales o combinaciones de los mismos. Los candidatos agentes se obtienen a partir de una variedad amplia de fuentes incluyendo colecciones de compuestos sintéticos o naturales. Por ejemplo, numerosos medios están disponibles para síntesis aleatoria y dirigida de una variedad amplia de compuestos orgánicos y biomoléculas, incluyendo expresión de oligonucleótidos y oligopéptidos aleatorizados . Alternativamente, las colecciones de compuestos naturales en la forma de bacterias, hongos, plantas y extractos animales están disponibles o se producen fácilmente. Adicionalmente, las colecciones naturales o sintéticamente producidas y compuestos son 69 fácilmente modificadas a través de medios químicos convencionales, físicos o bioquímicos, y pueden utilizarse para producir colecciones combinatorias. Los agentes farmacológicos conocidos pueden someterse a modificaciones químicas aleatorias o dirigidas, tales como acilación, alquilación, esterificación, amidificación, etc., para producir análogos estructurales. Cuando el ensayo de selección es un ensayo de unión, una o más de las moléculas puede unirse a una etiqueta, donde la marca pueda proporcionar directa o indirectamente una señal detectable. Varias marcas incluyen radioisótopos, fluorescentes, quimioluminiscentes , enzimas, moléculas de unión específicas, partículas, por ejemplo, partículas magnéticas, y similares. Las moléculas de unión especificas incluyen pares, tales como biotina y estreptavidina, digoxina y antidigoxina etc. Para los miembros de unión específicos, el miembro complementario normalmente sería marcado con una molécula que se proporciona para detección, de acuerdo con procedimientos conocidos. Una variedad de otros reactivos pueden incluirse en el ensayo de selección. Estos incluyen reactivos como sales, proteínas neutras, por ejemplo, albúmina, detergentes, etc, que se utilizan para facilitar la unión de proteína-proteína óptima y/o reduce interacciones no específicas o antecedentes. Los reactivos que mejoran la eficiencia del 70 ensayo, tal como inhibidores de proteasa, inhibidores de nucleasa, agentes antimicrobianos , etc., pueden utilizarse. La mezcla de componentes se agrega en cualquier orden que proporciona la unión necesaria. Las incubaciones se realizan en cualquier temperatura adecuada, normalmente entre 4 y 40°C. Los periodos de incubación se seleccionan para actividad óptima, pero también pueden optimizarse para facilitar la selección completamente elevada. Normalmente entre 0.1 y 1 horas será suficiente . Otros ensayos de interés detectan agentes que imitan la función TIM. Por ejemplo, los agentes candidatos se agregan a una célula que carece de TIM funcional , y se seleccionan por la capacidad par reproducir TIM en un ensayo funcional .

MÉTODOS TERAPÉUTICOS Los agentes que modulan la actividad de los genes TIM de proteínas proporcionan un punto de intervención terapéutica o profiláctica, particularmente agentes que inhiben o sobre-regulan actividad del polipéptido, o expresión del gen. Son útiles numerosos agentes en modular esta actividad, incluyendo agentes que modulan directamente la expresión, por ejemplo, vectores de expresión, antisentido específico para el polipéptido objetivo; y agentes que actúan en la proteína, por ejemplo, anticuerpos específicos y 71 análogos de los mismos, pequeñas moléculas orgánicas que bloquean la actividad catalítica, etc. Pueden diseñarse métodos para ácidos nucleicos selectivamente de suministro para ciertas células. Ejemplos de tales células incluyen células T, etc. Ciertos métodos de tratamiento se diseñan para expresar selectivamente un vector de expresión a células de interés. Una técnica para lograr la expresión selectiva en células nerviosas es para unir operablemente la secuencia de codificación a un promotor que es principalmente activa en células del sistema inmune, por ejemplo, promotor IL-2, el promotor-receptor del antígeno de célula T, y similares. Alternativamente, o en adición, el ácido nucleico puede administrarse con un agente que lleva a cabo el ácido nucleico a las células de interés. Por ejemplo, el ácido nucleico puede administrarse con un anticuerpo que se une específicamente a un antígeno de superficie celular. Cuando se utilizan los liposomas, los ¦ sustratos que se unen a una proteína de membrana de superficie celular asociados con endocitos pueden unirse al liposoma para dirigir el liposoma a células nerviosas y para facilitar la incorporación. Las moléculas antisentido pueden utilizarse para des-regular la expresión en células. El reactivo antisentido puede ser oligonucleótidos antisentido (ODN) , particularmente ODN sintético que tiene modificaciones químicas a partir de ácidos nucleicos nativos, o construcciones de ácido nucleico 72 que expresan tales moléculas antisentido como ARN. La secuencia antisentido es complementaria al ARNm del gen objetivo, e inhibe la expresión de los productos de gen objetivo. Las moléculas antisentido inhiben la expresión genética a través de varios mecanismos, por ejemplo, reduciendo la cantidad de ARMm disponible para traducción, a través de la activación de RNasa H, o barrera estérica. Uno, o una combinación de moléculas antisentido pueden administrarse, donde una combinación puede comprender diferentes secuencias múltiples. Las moléculas antisentido pueden producirse por la expresión de todo o una parte de la secuencia de gen objetivo en un vector apropiado, en donde la iniciación transcripcional se orienta de manera que una hebra antisentido se produce como una molécula ARN. Alternativamente, la molécula antisentido es un oligonucleótido sintético. Los oligónucleótidos antisentido generalmente serán al menos aproximadamente 7, usualmente al menos aproximadamente 12 , más usualmente al menos aproximadamente 20 nucleótidos en longitud, y no más de aproximadamente 500, usualmente no más de aproximadamente 50, más usualmente no más de aproximadamente 35 nucleótidos de longitud, en donde la longitud se controla por eficiencia de inhibición, especificidad, incluyendo ausencia de cros-reactividad, y similares. Se ha encontrado que los 73 oligonucleótidos cortos, de 7 a 8 bases de longitud, pueden ser inhibidores fuertes y selectivos de expresión genética (véase Wagner et al. (1996) Nature Biotechnology 14:840-844). Una región o regiones especificas de la secuencia de ARNm de hebra sentido endógena se elige para complementarse por la secuencia antisentido. La selección de una secuencia especifica para el oligonucleótido puede utilizar un método empírico, en donde varias secuencias candidatos se analizan para inhibición de expresión del gen objetivo in vit.ro o en un modelo animal. Una combinación de secuencias pueden también utilizarse, en donde varias regiones de la secuencia de ARNm se seleccionan para complementación antisentido. Los oligonucleótidos antisentido pueden sintetizarse químicamente por métodos conocidos en la técnica (véase Wagner et al. (1993) supra, and Milligan et al. supra) . Los oligonucleótidos preferidos se modifican químicamente a partir de la estructura de fosfodíéster nativo, para incrementar su estabilidad intracelular y afinidad de unión. Un número de tales modificaciones se han descrito en la literatura, que alteran la química de la columna vertebral, azúcares o bases heterocíclicas . Entre cambios útiles en la química de columna vertebral son fosforotioatos ; fosforoditioatos, en donde ambos de los oxígenos no puenteados se sustituyen con azufre; 74 fosforoamiditas ; alquil- fosfotriésteres y boranofosfatos . Los derivados de fosfato aquirales incluyen 3'-0'-5'-S-fosforotioato, 3' -S-5' -O-fosforotiato, 3 ' -CH2 -5 ' -0-fosfonato y 3' -NH-5' -0-fosforoamidato . Los ácidos nucleicos peptídicos reemplazan la estructura principal del fosfodiéster de ribosa entero con una conexión de péptido. Las modificaciones de azúcar se utilizan también para mejorar la estabilidad y afinidad. Puede utilizarse alfa-anómero de desoxirobosa, en donde la base se invierte con respecto al .beta . -anómero natural. La 2 '-Oh del azúcar de ribosa puede alterarse para formar azúcares de 2 ' -O-metilo o 2'-0-alilo, que proporciona resistencia a degradación sin comprenden afinidad. La modificación de las bases heterociclicas debe mantener pares de base apropiados . Algunas sustituciones útiles incluyen desoxiuridina para desoxitimida; 5-metil-2 ' -desoxicitidina y 5-bromo-2 ' -desoxicitidina para desoxicitidina. Los 5-propinil-2 ' -desoxiuridina y 5-propinil-2 ' -desoxicitidina se han mostrado para incrementar la afinidad y actividad biológica cuando se sustituye para desoxitimida y desoxicitidina, respectivamente. Los compuestos que tienen la actividad farmacológica deseada pueden administrarse en un portador fisiológicamente aceptable a un huésped para tratamiento de asma atribuible a un defecto en una función TI . Los compuestos pueden también utilizarse para mejorar la función 75 de IM. Los agentes terapéuticos pueden administrarse en una variedad de formas, oral, tópica, parenteralmente, por ejemplo, subcutánea, intraperitonéalmente, por infección viral, intravascularmente, etc. Los tratamientos inhalados son de particular interés. Dependiendo de la manera de introducción, los compuestos pueden formularse en una variedad de formas . La concentración del compuesto terapéuticamente activo en la formulación puede variar de aproximadamente 0.1-100% en peso. Las composiciones farmacéuticas pueden prepararse en varias formas, tales como granulos, tabletas, pildoras, supositorios, cápsulas, suspensiones, ungüentos, lociones y similares . Los portadores orgánicos o inorgánicos de grado farmacéutico y/o diluyentes adecuados para uso oral y tópico pueden utilizarse para realizar composiciones que contienen los compuestos terapéuticamente activos . Los diluyentes conocidos en la técnica incluyen medios acuosos, aceites y grasas vegetales y animales. Los agentes estabilizantes, agentes humectantes y emulsificantes, sales para variar la presión osmótica o reguladores para asegurar un valor de pH adecuado, y me oradores de penetración de piel pueden utilizarse como agentes auxiliares. Se entenderá que esta invención no se limita a la metodología particular, protocolos, líneas celulares, especies animales o género, y reactivos descritos, como tales 76 pueden variar. Se entenderá también que la terminología utilizada en la presente es para el propósito de describir modalidades particulares únicamente, y no se pretende limitar el alcance de la presente invención que será limitado únicamente por las reivindicaciones anexas . Como se utiliza en la presente, las formas singulares "un", "una", y "el" incluyen referencias plurales a menos que el contexto claramente lo estipule de otra manera. Así, por ejemplo, la referencia a "una célula" incluye una pluralidad de tales células y referencias a "la disposición" incluye referencias a una o más disposiciones y equivalentes de las mismas conocidas por aquellos expertos en la técnica, y así sucesivamente. Todos los términos técnicos y científicos utilizados en la presente tienen el mismo significado como se entiende comúnmente por alguien con experiencia común en la técnica a la cual está invención pertenece a menos que se indique claramente de otra manera. Todas las publicaciones mencionadas en la presente se incorporan en la presente para referencia para el propósito de descripción y divulgación, por ejemplo, las líneas celulares, construcciones y metodologías que se describen en las publicaciones que podrían utilizarse junto con la invención actualmente descrita. Las publicaciones discutidas anteriormente y a través de todo el texto se proporcionan únicamente para su descripción anterior a la 77 fecha de archivado de la presente solicitud. Nada en la presente va a interpretarse como una admisión de que los inventores no están facultados para preceder tal descripción en virtud de la invención anterior. Los siguientes ejemplos se proponen para proporcionar aquellos con experiencia común en la técnica con una descripción y divulgación completa de cómo realizar el uso de la invención objeto, y no se pretende limitar el alcance de lo que se estima como la invención. Se han hecho esfuerzos para asegurar la exactitud con respecto a los números utilizados (por ejemplo, cantidades, temperaturas, concentraciones, etc.), pero algunos errores experimentales y desviaciones deben permitirse. A menos que se indique de otra manera, las partes son partes en peso, el peso molecular es peso molecular promedio, la temperatura está en grados centígrados; y la presión está en o cerca de la atmosférica.

EXPERIMENTAL Para analizar la región 5q23-35 humana para genes de susceptibilidad de asma, se utilizó un modelo de ratón, que ofrece varias ventajas potenciales. La variación ambiental puede controlarse, fenotipos múltiples pueden probarse simult neamente, y cepas innatas pueden sensibilizarse con alérgeno para desarrollar hiper-reactividad de las vías respiratorias (AHR) , una 78 característica cardinal de asma humano. Se utilizaron cepas de ratón innatos congénicos que difieren únicamente por una región cromosomal pequeña homologa al cromosoma humano 5q, por lo que se permite esta región para revelan una familia de gen novedoso que codifica las proteínas de membrana de célula T {Tim) , TIM-1, TIM-2, TIM-3, TIM-4, TIM-5, TIM-6 y ?G?-7, en la cual las variantes de secuencia mayor de TI -1, TIM-3, y TIM-4, son completamente co-segregadas con Tapr. La producción de IL-4 y la hiper-reactividad de vías respiratorias se reducen en ratones HBA. Se examinaron ratones congénicos producidos en un antecedente genómico EALB/c con intervalos genómicos discretos heredados a partir de cromosomas DBA/2 individuales. El Th2 desarrollado de ratones BALB/c predispuesto, respuestas inmunes que reensamblan atopí con AHR mejorado, mientras que el desarrollo de ratones DBA/2 reduce las respuestas de IL-4 que protegen contra el desarrollo de AHR. Protegiendo algunos de estas cepas congénicas para sensibilidad de Th2 reducida, se identifica una línea congénica, C.D2 Es-Hba (HBA) , que contiene un segmento de cromosoma 11 heredado de ratones DBA/2, homólogos a 5q23-35 humano. La Figura la muestra que las células de nodulo linfático a partir de ratones BALB/c de control inmunizados, como se espera, producen niveles elevados de IL-4, confirmando la proclividad de ratones BALB/c para desarrollar respuestas inmunes predispuestas a 79 Th2. En contraste, las células de nodulo linfático de ratones HBA producen significativamente niveles bajos de IL-4, similares a aquellos observados en ratones DBA/2. Además, los ratones HBA producen significativamente menos IL-13 e IL-10, y algo más de niveles inferiores de IL-5 comparados a ratones BALB/c, mientas que la producción de IFN-? se incrementó, como se muestra en la Figura Ib. Estos resultados indican que la región derivada de DBA/2 del cromosoma 11 de HA, que tiene regiones grandes de sintenia conservada con 5q23-35 humana, contiene un gen que reduce la producción de IL-4, IL-13 e IL-10 especifica antigénica, mejora la producción de IFN-?, y convierte el fenotipo de citocina BALB/c en un fenotipo de citocina DBA/2. Los ratones HBA se examinaron para la capacidad para desarrollar hiper-reactividad de vías respiratorias inducidas por antígeno (AHR) , que se asocia con respuestas inmunes predispuesta por Th2. Bajo la sensibilización y estimulación con alérgeno, los ratones BALB/c control desarrollaron AHR elevado, mientras que los ratones congénicos HBA inmunizados similarmente, como ratones DBA/2 , expresaron reactividad de las vías respiratorias normales ' en respuesta a metacolina (Figura le) . Colectivamente estos resultados sugirieron fuertemente que la variación, genética en un sitio único en el cromosoma 11 regula tanto la producción de citocina T 2 como AHR; por lo tanto, se refiere 80 tentativamen e a la o las determinantes genéticas relevantes en ratones HBA como un sitio único, T cell and Airway Phenotype Regulator (Tapr) . Se examinaron ratones Fl (BALB/c x HBA), que como los ratones BALB/c, producen niveles elevados de IL-4, IL-12 e IL-10 (Figura la y Ib) y desarrollan AHR que inducen antígeno elevado desarrollado (Figura 1c) . Estos resultados indican que un alelo DBA/2 en cromosoma 11, en aislamiento de otros genes que regulan síntesis IL-4, producción IL-4 reducida y AHR en una manera recesiva . En contraste, los ratones Fl (BALB/c x DBA/2) produjo niveles elevados de IL-4 y tuvo sensibilidades a las vías respiratorias normales en inmunización (Figura 1) , indicando que el sitio a partir de otras regiones del genoma DBA también modula la producción IL-4 y AHR inducida con antígeno y que los alelos de DBA/2, en agregado, funciono en una manera dominante para limitar la producción de IL-4 y AHR. Estos resultados acentúan la naturaleza multigénica, compleja de atributos atópícos y demuestran las ventajas potenciales de utilizar una cepa congénica para aislar y caracterizar un sitio único sin interferencia a partir de los genes epistaticos múltiples que también influyen en el fenotipo asmático. Mapeo Genético de Tapr, el sitio que controla AHR y sensibilidad de IL-4. Previamente, la región congénica en los ratones HBA se delineo con 36 marcadores de genoma amplio, 81 incluyendo dos marcadores de cromosoma 11, hemoglobina-a2 {hab-a2) y sitio esterasa-3 (es-3) . El genoma HBA, fuera del cromosoma 11, se heredó de BALB/c. Un análisis más preciso con 25 marcadores de polimorfismo de longitud de secuencia simple (SSLP) conocidos por ser polimórficos entre ratones DBA/2 y BALB/c mostró que los ratones HBA heredaron dos segmentos del cromosoma 11 a partir de DBA/2 (Figura 2, columna izquierda) . La región próxima contuvo un segmento de 20 cm con homología a cromosoma 5q23-35, que produjo la posibilidad que un sitio genético implicado en estudios de unión de asma humano podría identificarse en un modelo de ratón de asma . Para trazar una resolución más elevada de sitios que controlan TH2-AHR, Tapr, los ratones Fl (BALB/c x HBA) se cruzaron con ratones HBA para producir animales N2. Con este enfoque de cruce, el conjunto de alelos aportado por el padre HBA se pre-determina y el conjunto de alelos aportados por el padre Fl puede evaluarse por el genotipo. Así, los acontecimientos de recombinación que producen haplotipos informativos dentro de la región congenica pueden detectarse en los ratones N2 y utilizarse para evaluar la unión de Tapr al sitio en el intervalo congénico. Debido a la naturaleza recesiva de Tapr, se probaron los ratones N2 a partir de estos cruces para identificar la región homocigosa mínima de genes derivados de HBA suficientes para conferir el fenotipo 82 HBA Tapr. Más de 2,000 animales N2 se generaron y genotiparon. Utilizando los marcadores SSLP, se seleccionaron aquellos ratones N2 con eventos de recombinación informativa, y los ratones N2 se fenotiparon por la capacidad para producir IL-4 en respuesta a inmunización con emocianina de lapa íntima (KLH) . En este primer análisis, se determinó que el sitio relevante residió dentro de la región congénica próxima, entre DllMitl35 y OllM.it.260. Para trazar Tapr a resolución elevada, 22 marcadores adicionales se identificaron y utilizaron para proporcionar 0.1-1 cm de resolución en el área de interés. Para comparar exactamente los resultados de los análisis de citocina IL-4 realizados durante varias veces al mes, un índice IL-4 para cada experimento se generó para cada ratón N2, B - x B - H , en donde la producción de B=IL-4 por células de ratones BALB/c, producción H=IL-4 por células de ratones HBA, y producción x=IL-4 por células de ratón N2 que se evaluó. Concentraciones elevadas de IL-4 (como-BALB/c) se representan por valores índice cerca de 0, y bajo concentraciones de IL-4 (como HBA) se representan por valores de índice cerca de 1.0. Los valores de WB" y "H" se establecieron con ratones de control 3-5 para cada grupo de 3-6 ratones de N2 que portan recombinaciones informativas que 83 se probaron. Los valores de índice caen dentro de una distribución bimodal (Figura 3a) , en donde el índice de fenotipo se asocia con ratones N2 que tuvieron genotipos HBA no recombinantes fue significativamente mayor (P<0.001, en una prueba t de Student) que el índice de fenotipo asociado con ratones N2 que tuvieron genotipos Fl no recombinantes (BALB/c x HBA) . Para los ratones con genotipos únicos, se utilizan varios métodos para asegurar la adecuación de mediciones únicas de producción citocina y AHR, ya que esto es crítico en análisis de conexión. Primero, al mismo tiempo que se probó cada uno de los ratones ?G2 que transportan recombinaciones de interés, también se probaron los hermanos "no recombinantes" de cada ,??2 recombinante" que fueron estrictamente HBA o Fl (BALB x HBA) en genotipo. Además, se proliferan ratones N3 adicionales cruzando algunos de los ratones N2 que portan recombinaciones de interés de regreso a los ratones HBA, para tener más ratones individuales con ese genotipo N2 particular. Todos los valores fueron el promedio de los valores para los ratones individuales probados con un genotipo dado. En esta forma, se creyó de las mediciones de la producción de citocina y AHR, y que se han superado las variaciones de ensayo debido a variables inherentes en sistemas biológicos. Debido a que los valores IL-4 asociados con los 84 ratones N2 que heredaron haplotipos .recombinantes segregados en una distribución bimodal (Figura 3a) fueron capaces de demostrar que el sitio genético que controla respuestas IL-4 elevadas se ubica entre marcadores DllMit271 y DllMit22 (Figura 3b) . Además, niveles elevados de producción IL-4 se observaron en todos los ratones con alelo BALB/c presentes en Kimlsscp, y niveles bajos de producción de IL-4 se observaron en todos los ratones con genotipos HBA homocigosos en Kimlsscp. Así, Tapr no fue recombinante con Kimlsscp, un marcador intrónico dentro de un homólogo de ratón de molécula dañada de riñon de Rattus norvegícus {Kim-1) . En contraste, Tapr se segregó de todos los otros marcadores con al menos una recombinación. El hecho que Tapr y Kimlsscp segregados juntos, indicaron que el sitio Tapr se ubica muy cercano a, o es indistinguible de Kimlsscp. Basado en la frecuencia de haplotipos recombinantes entre DllMit271 y DllMit22, se calculó una frecuencia de recombinación, 0.0039, que indica que ese sitio Tapr traza a una pequeña región de 0.3-0.5 cm. Se calculó también una frecuencia de recombinación de 0.08 entre Tapr e IL-4. Por lo tanto, Tapr se ubica 5-10 cm fuera del grupo de la citocina IL-4 pero está dentro de una región del genoma de ratón que tiene sintenia conservada elevadamente con la región 5q23-35 que se ha unido a atopía humana y asma . Utilizando un enfoque análogo, se examina la 85 segregación de fenotipos AHR inducidos por alérgeno en ratones con haplotipos recombinantes informativos. Con valores AHR indexados, los ratones N2 exhiben claramente fenotipos parenterales , que producen una distribución bimodal en un histograma de valores de índice AHR en un grupo de ratones N2 sensibilizados (Figura 3c) . Al analizar la segregación de fenotipos AHR asociados con más de 1,000 ratones N2, se demostró que el sitio genético que controla las respuestas AHR se ubica también entre marcadores DllMit271 y DllMit22 (Figura 3d) y que el fenotipo AHR no fue recombinante con Kimlsscp. Así, se demuestra que tanto la sensibilidad IL-4 como AHR co-segregado con el sitio Tapr, que sugiere que el mismo sitio regule tanto la expresión IL-4 y AHR (Figura 3) . Estos hallazgos demuestran además que el sitio Tapr es más de 5 cm de centrómerico al grupo de citocina IL-4 y los genes de citocina en el grupo previamente pensado para ser genes de susceptibilidad de atopía o asma "candidato" . Los resultados de mapeo también establecen que Tapr es genéticamente separable a partir del gen IL-12p40 y la región del cromosoma 11 de ratón que incluye el sitio regulatorio TH1-IL12 Tpm. Afirmación de Homólogos de ratón y humano Tapr a humano 5q33. Para construir un mapa compuesto alrededor del sitio Tapr, se integró información disponible de la unión de 86 la Base de Datos del Genoma de Ratón (MGD) , cruces, y mapas híbridos de radiación e identificaron una región de sintenia conservada en mapas de genoma humano. Los mapas híbridos de radiación actual colocan los marcadores que están cerca de DllMit271 y DllMit22, incluyendo varias etiquetas de secuencia expresadas (las EST) que tienen homología extensiva para conocer genes o grupos de un gen, en un mapa físico del genoma de ratón. Se examinaron también estos marcadores y sus EST asociadas para similaridad no identificada previamente para conocer los grupos genéticos. Se ensamblaron marcadores en un patíbulo para comparación al genoma humano. Utilizando este enfoque, se encontró similaridad significativa entre marcadores híbridos de radiación particular y los siguientes genes humanos; KIAA0171, Adam-19, Sox-30, Pir-121, Crsp9 (Crsp33) y hHAVcr-1 (hHAVcr-1) . La Figura 4 demuestra que una vez que se anclan estos genes a un mapa físico del genoma de ratón entre los marcadores de flanqueo, es capaz de ubicar aquellos genes en el Buscador de Genoma Humano . El grado elevado de conservación entre los genomas de ratón y humano en esta región indica la unión del sitio Tapr a 5q33.2 humano. Como se muestra en la Figura 4, se identifican todos los genes conocidos y las EST en esta región del mapa humano. Los genes de particular interés cerca del hHAV-cr humano y el homólogo de ratón de Kim-l, incluyen kinasa de célula T inducible con IL-2 [Itk) y un co-regulador 87 del factor de transcripción SP-1 {Crsp9) , ambos conocidos por estar implicados en la diferenciación de célula T. Se secuenciaron regiones de codificación a partir de estos genes candidatos y no se encontraron polimorfismos en cualquier ITK o CRSP-9. Ubicación de una Familia de Proteínas de Superficie de célula T Novedosas a la Región Tapr. Debido a que el homólogo de ratón de Kiml de rata se ubica dentro de la región 0.4 cM y se une estrechamente con Tapr, se examinaron bases de datos públicamente disponibles y encontraron agrupamientos de las EST con alguna similaridad de secuencia que proporciona únicamente cubierta parcial y contiene grandes segmentos de variación. El homólogo humano más cercano de Kim-1 es el receptor celular del virus de la hepatitis A, hHAV-cr y búsquedas tBLAST del genoma humano sugiere que dos homólogos adicionales de Kim-1, quizás miembros de una familia genética, también se ubican en el cromosoma 5 humano y cromosoma 11 de ratón. Utilizando ADNc de esplenocitos estimulados con conA, se identificaron y clonaron dos ortólogos de ratón de Kim-1 que se llaman Timl y Tim2, del mapa a la región Tapr, como se muestra en la Figura 5A. El TIM-3 es un tercer ortólogo relacionado más distantemente de KIM-1. Todos los tres miembros de esta familia genética se expresan por células T estimuladas, y todas las tres formas 88 trazan la región Tapr del cromosoma 11 de ratón/cromosoma 5 humano en donde codifican las glicoproteínas de superficie celular con motivos estructurales comunes, incluyendo un dominio de inmunoglobulina (Ig) , dominio de mucina, y terminación intracelular con sitios de fosforilación. Debido a que las funciones celulares de estas proteínas se desconocen, se refieren a los genes como miembros de una familia genética de célula. T, dominio de Inmunoglobulina, dominio de mucina (Tím) . El Timl de ratón es el homólogo de ratón de Kim-1 de rata y el HAVcr-1 identificado en los monos verdes de África y los seres humanos . Tim2 es un gen desconocido previamente que no ha sido identificado en ningún organismo antes de este estudio. El gen Timl de ratón codifica una proteína de membrana de 305 aminoácidos que tienen 78% de identidad global con KIM-1 de rata y 35% de identidad con HAVcr-1 humano. Una alineación de secuencia múltiple de abertura con TIM-1 de ratón, KIM-1 de rata, HAVcr-1 de humano y HA.Vcr-1 de mono verde africano, mostrado en la Figura 5b, demuestra el grado de homología entre las proteínas TIM-l/KIM-l/HAVcr-1 en estas especies. La región citoplásmica de TIM-1 contiene dos residuos de tirosina e incluyen un motivo de fosforilación de tirosina cinasa altamente conservado, RAEDNIY, que es integral al Itk previsto y sitio de EGFR cinasa de TIM-1, SRAEDNIYIVEDRP . El dominio de mucina de TIM-1 tiene sitios 89 múltiples para glicosilacion de O-unida y dos sitios para glicosilacion N unida encontrados en el dominio de inmunoglobulina . TIM-2, una proteína de membrana de 305 aminoácidos .similares, tiene 64% de identidad a TIM-1 de ratón, 60% de identidad a KIM-1 de rata y 32% de identidad a hHAVcr-1 (Figura 5a, B) . Como TIM-1, TIM-2 tiene dos sitios de glicosilacion N unidos extracelulares y una serina, dominio de mucina rico en treonina con muchos sitios de glicosilacion O unidos. TIM-2 también tiene un motivo de fosforilación de tirosina cinasa intracelular, RTRCEDQVY. Tim3 codifica una proteína de membrana de 281 aminoácidos que tiene una estructura de glicoproteína de membrana integral similar, con sitios de glicosilacion extracelular múltiples y un motivo de fosforilación de tirosina intracelular. Aunque el dominio de mucina no es tan prominente en TIM-3 como es en TIM-1 y TIM-2 (Figura 5A) , TIM-3 expresado en células T interactúa probablemente con un ligando en las APC y altera la activación de APC. TIM-3 tiene cuatro sitios para glicosilacion N unida y cinco sitios para O unida, sugiriendo que TIM-3, como TIM-1 y TIM-2 es pesadamente glicosilado y podría interactuar con un ligando presente en otras células, tales como células que presentan antígeno . Timé codifica una proteína de 344 aminoácidos en 90 ratones, y una proteína de 378 aminoácidos en humanos. El TIM-4 previsto también comparte los motivos estructurales de glicoproteína de membrana general de las otras proteínas TIM, con un dominio similar a IgV( con residuos de cisteína altamente conservados, un dominio similar a mucina, rico en treonina, y una terminación intracelular corta. Sin embargo, TIM-4 carece del motivo de fosfotirosina presente en las otras proteínas TIM, y por lo tanto puede modular la función de las otras proteínas TIM. Cada uno de los dominios de Ig TIM comparte un motivo de unión-integrina previsto que es similar al motivo SWYGLR encontrado en osteopontina, una proteína de transmembrana como los TIMs que está implicada en la regulación de la adhesión celular, sobrevivencia y oncogénesis, así como en la regulación de diferenciación de célula T auxiliadora. Este motivo de unión de integrina demuestra especificidad alfa (9) y alfa (4). La comparación de las secuencias de las regiones de codificación BALB/c y HBA/DBA para los tres genes Tim revelan mayores polimorfismos en TIM-1, TIM-3 y TIM-4, pero no en TIM-2. En TIM-1, estos polimorfismos codifican tres diferencias de aminoácido y una eliminación de quince aminoácidos en HBA/DBA. Siete diferencias de aminoácidos previstas se identificaron en TIM-3 (Figura 5c) . Las secuencias genómicas confirman que estos polimorfismos, 91 incluyendo la eliminación, son polimorfismos ciertos, no variantes de refuerzo . Para los segmentos genómicos de secuenciación adicional de TIM-1 y TIM-3 en otras cepas de ratón, se encontró que C57/BL6, una cepa similar a DBA/2 con respecto a su tendencia para desarrollar respuestas ¾2 y AHR reducidas, también tiene el alelo HBA/DBA de Timl y Tim3. Los polimorfismos en Tim-1 y TIM-4 se ubican en los dominios similares a mucina y de señal, mientras los polimorfismos identificados en TIM-3 se agrupan en el dominio Ig (Figura 5c) . En glicoproteinas con Ig y dominios de mucina, las variantes en cualquier dominio pueden afectar las interacciones de ligando receptor, como se muestra para MAdCAM-l. Aunque los sitios de desdoblamiento previstos de TIM-1 y TIM-4 no se alteran por el polimorfismo en la secuencia de señal, es posible que el polimorfismo afecte la eficiencia de desdoblamiento y/o tráfico del receptor de la superficie celular. Estas secuencias y polimorfismos Tim son importantes para respuestas inmunes, y para patogénesis viral HAV en humanos . El análisis de las muestras de ADN genómico a partir de los cruces N2 (Figura 3) demuestran que los polimorfismos TIM-1 y TIM-3 co-segregan completamente con Tapr. Mientras estas observaciones no distinguen la extensión a la cual cambios en TIM-1, TIM-3 o ambos, son responsables para cambios en AHR e inflamación mediada por TH2 , se sugiere 92 que los polimorfismos en TIM-1 ( HAVcr-1) humano y/o ???-3 subrayen la fuerte asociación entre la susceptibilidad de asma y cromosoma 5q humano. Esta idea se apoya por el hecho que las variantes mayores en regiones de codificación de Timl humano son evidentes en la examinación de genoma humano y bases de datos EST. La comparación de estas variantes de ADNc humanas con la variantes descritas previamente de HAVcr-l de mono y las variantes de ratón identificadas aqui demuestran que existe variación extensa en las secuencias de proteína previstas de TI -1 (Figura 5b, c) . Este grado elevado de variación distingue TIM-1 y sus miembros familiares de muchos otros genes candidatos, tales como las citocinas y los receptores de citocina que han sido más cercanamente estudiados como genes candidatos de susceptibilidad al asma. Además, la asociación entre Timl y susceptibilidad de asma se apoya además por reportes de unión significativa de asma de niños sensibles a acáridos a D5S820 (clasificación LOD promedio = 4.8), un marcador el cual es aproximadamente 0.5 megabases de Timl y Tim3 (Figura 4) . En adición a los polimorfismos genéticos anteriores, existen varios polimorfismos de expresión en los genes TI que se originan debido al refuerzo alternado. El refuerzo alternado de AR m de TIM-1, TIM-2 y TIM-4 produce varias variantes de TIM, algunas de las cuales son secretadas en formas solubles de los receptores TIM. Estas variantes de 93 refuerzo junto con las variantes de refuerzo TIM que tienen regiones no traducidas 5' pueden contribuir a los patrones de expresión específicos de condición y especxficos de célula de las proteínas TIM. Las células T confieren el efecto de Tapr. Para entender mejor la función del sitio Tapr se determina si la variación alélica de Tapr afecta la función de células T o de células que presentan antígeno (APC) . Para estos experimentos, se generan ratones transgénicos (Tg) del receptor de célula T específico de ovalbúmina (OVA) con el antecedente HBA (HBA DO11.10), que se comparó a ratones TCR-Tg con el antecedente BALB/c (BALB/c DO11.10). Las células T CD4+ purificadas a partir de estas cepas se co-cultivaron con OVA y células dendríticas (las DC) derivadas ya sea de médula espinal de BALB/c o HBA, y se evaluaron las citocinas producidas. Las células de bazo irradiadas no se utilizaron como las APC para este experimento, debido a que se encontró que las células de bazo irradiadas y otros tejidos expresan niveles elevados de los genes TIM. Las células T BALB/c DO11.10 produjeron elevados niveles de IL-4 y IL-13 que lo hicieron las células T HBA DO11.10, en una manera en que fue independiente de la fuente de las células que presentan antígeno (Figura 6A) . Además, la fuente de las células T CD4 determinaron la cantidad de IL-4/IL-13 produjeron en cada concentración de antígeno, 94 independientemente de la fuente de la APC durante ya sea la estimulación primaria o secundaria. Los niveles equivalentes de IL-12 se detectaron en sobrenadantes de cultivo para cada combinación de tipos celulares, demostrando además que la función de BALB/c y HBA DC fueron comparables. Además, las células T BALB DO11.10 y HAB DO11.10 produjeron niveles equivalentes de IL-2 y demostraron niveles comparables de proliferación en respuesta a OVA durante los cultivos secundarios, indicando que las células HBA y BALB/c se activaron similarmente, aunque los niveles de citocinas Th2 producidas son bastante distintas. Se mostró en la Figura 6B que dentro de las primeras doce horas del cultivo primario en el sistema DO11.10/DC, se encontró que ARNm para TIM-l se expresa tanto para células T BALB/c y HBA CD4+ . Dentro de cuatro días de estimulación primaria, se encontraron niveles significativos de IL-13 en sobrenadantes de BALB/c DO11.10 y no se detectó ninguno en sobrenadantes HBA DO11.10. Esta diferenciación es detectable en niveles de ARNm a 36 horas (Figura 6B) . Entre doce y treinta y seis horas, la expresión de ARNm IL-13 se reduce en células T CD4 HBA, mientras que la expresión de IL-13 se mantiene en las células T BALB/c CD4. Así, durante la respuesta primaria al antígeno, las células T de BALB/c CD4 desarrollan una respuesta de Th2 más fuerte que la que hacen las células T HBA CD . Los hallazgos demuestran que Tapr 95 regula la diferenciación de células T auxiliadoras durante las respuestas especificas de antigeno primario y se detecta la expresión de TIM-1 en células T CD4 durante las etapas más tempranas de estas respuestas . Siguiendo la diferenciación en subconjuntos Thl y Th2 maduros, las células T auxiliadoras demuestran expresión TIM comprometidas por RT-PCR, de manera que las células Thl expresan TIM-3, mientras las células Th2 expresan preferiblemente TIM-1. Todas las poblaciones celulares T demuestran expresión de TIM- débil. Aunque la señal Itk a través de TIM-1 es probable que promueva la diferenciación de Th2 , la señal de EGFR a través de las proteínas TIM es probable que mejore la supervivencia celular en las poblaciones de célula T de memoria especialmente y efectora. Ya que Itk se expresa únicamente en células T y células cebadas, la actividad de la cinasa Itk en TIM-1 se restringe a células inmunes, particularmente aquellas implicadas en asma y alergia. Sin embargo, otras tirosinas cinasas de proteína, tales como EGFR, están implicadas en la función de proteínas TIM expresadas por otros te idos, incluyendo células epiteliales isquémicas, células de bazo irradiadas, y células tumorales. En estos estudios, se trazó Tapr, un sitio que regula el desarrollo de la producción de citocina Th2 y AHR inducido por antígeno, una característica cardinal de asma. 96 Se ubicó Tapr utilizando un ratón congénico específico de intervalo (HBA) que porta un homólogo de segmento cromosomal al cromosoma 5q humano, una región del genoraa humano que ha sido unido repetidamente a atopía y asma. Esta región ha sido unida repetidamente también al síndrome 5q asociado con anormalidades citogénicas neoplásticas y de mielodisplasia . Utilizando esta estrategia de ratón congénico que convierte un rasgo complejo en uno más simple, posiblemente un rasgo de un gen, se estrechó el intervalo de Tapr a 0.4 cm de intervalo, varios genes candidatos secuenciados en esta región, y clonar posicionalmente la familia del gen TIM. La familia del gen TIM no se ha descrito previamente. Se identificó y clonó la secuencia de ADNc completa y descubrieron polimorfismos significativos en las proteínas TIM-1 de BALB/c comparado a ratones HBA. Se encontró que las secuencias BALB/c para TIM-1 y TIM-3 se asocian con la susceptibilidad a AHR y respuestas de células T alérgicas, mientras que las secuencias HBA se asocian con la protección contra estas respuestas. TIM-3 se expresa preferiblemente por TH1 diferenciada. La asociación de variantes Tím3 polimórficas con Tapr sugiere que TIM-3 podría regular la función celular de TH1 y TH2. Sin embargo, las variaciones en Tim3 podrían ser atribuidas también a haplotipo estrechamente unido a Timé o Timl. Se cree que TIM-1 juega un papel muy importante en 97 la regulación del sistema inmune (particularmente con respecto al asma y enfermedades alérgicas) y en la regulación de supervivencia celular epitelial y hematopoyética en respuesta a tensión (hipoxia, deficiencia nutricional, irradiación, quimioterapia, etc.) por varias razones. Primero, Timl, como Tim3, se expresan en células T CD4 durante la estimulación de antígeno primaria, cuando es más probablemente que ocurran los efectos Tapr. Las células T juegan un papel crítico en el desarrollo de AHR y en la patogénesis de asma, los resultados sugieren que Tapr afecta el asma mejorando el compromiso de CD4 temprano a respuestas Th2 controlando la producción de IL-13 y diferenciación de células T subsecuentes. Segundo, la infección HAV en humanos durante la infancia o niñez se asocia inversamente con el desarrollo de asma y alergia. Se sugiere que la interacción de HAV con TIM-l/HA.Vcr-1 puede alterar la producción de citocina de célula T puede ser apto para invertir o evitar el equilibrio de Thl/Th2 predispuestos en individuos de otra manera propensos a atopía y asma. SLAM, un receptor de virus de sarampión, es un ejemplo de otra glicoproteína de superficie de célula T que regula el equilibrio Thl/Th2 en una manera que puede alterarse por interacción viral . Debido a que algunos receptores virales, tales como SLAM para el virus del sarampión o CD4, CCR5 y CXCR4 para VIH, son receptores del sistema inmune propio del huésped, aún cuando 98 una infección no suceda, la transducción de señal mediada por el receptor de virus puede conducir a la liberación de citocinas y el desarrollo de enfermedades. Tercero, los polimorfismos en TIM-1 se asocian con los diferentes tipos de respuestas de células T auxiliadoras que se observan. Por lo tanto, las variantes de TIM-1 pueden contribuir por sí mismas a la predisposición de Thl/Th2 genética que ocurre en la ausencia de cualquier causa ambiental conocida de desviación inmune. El receptor HAV en primates se conoce ser altamente variable, y se propone que los alelos polimórficos de TIM-1/hHAVcr-1 humanos, como aquellos identificados en ratones, pueden asociarse con variaciones en Th2 predispuesto y susceptibilidad al asma. Las mutaciones en los genes para las moléculas de superficie celular que sirven como receptores virales y que alteran la susceptibilidad a infección no son raros, y por lo tanto la variación genética significativa en TIM-1 y otros miembros de la familia del gen TIM es mucho más probable de observarse que la variación en otros genes tales como aquellos para citocinas. Es poco claro por qué los alelos con susceptibilidad a asma podrían ser prevalecentes en los grupos de gen humano, pero la asociación de Tapr con HAVcr proporciona una explicación de interés para la persistencia de alelos con susceptibilidad al asma. Durante la evolución humana ciertos alelos de la familia del gen Tim pueden haber 99 conferido resistencia a enfermedades atópicas y otros trastornos inmunes, pero la selección de aquellos 'alelos resistentes pueden haber sido contrabalanceada por la selección de alelos alternados que confieren resistencia a patogénesis viral . En resumen estos estudios representan la primera utilización exitosa de una estrategia de ratón congénico para ubicar un gen de susceptibilidad al asma candidato fuerte y supera las dificultades inherentes en la examinación de este rasgo genético complejo. Se identificó una familia genética previamente desconocida que existe en una región homologa al cromosoma 5q humano, y que juegan un papel principal en el desarrollo de la célula Th y en susceptibilidad al asma. Mientras estudios anteriores en humanos identificaron varios genes candidatos en cromosoma 5q humano, el producto de gen Timl identificado en el estudio también proporciona una explicación para las relaciones inversas entre la infección HAV y la susceptibilidad de asma reducida. Las subpoblaciones de células T CD4+ (Th) producen patrones distintos de citocinas, y esto ha conducido al concepto de heterogeneidad funcional entre las células Th. Las células Th de tipo 1 (Thl) producen interleucina 2 (IL-2) y/o interferón ?, respuestas de hipersensibilidad del tipo retardado provocado (DTH) y macrófagos activados. Las células Th del tipo 2 (Tli2) por otro lado, producen IL-4, IL-5 e IL- 100 10 y son especialmente importantes para producción de IgE e inflamación eosinofílica, y pueden suprimir inmunidad mediada celular. Las células Th2 se creen juegan un papel pivotal en la patogénesis de atopía. Varios factores determinan si una célula auxiliadora T diferenciará en Thl contra Th2 durante una respuesta inmune particular. Estas incluyen, pero no se restringen necesariamente al medio ambiente de citocina, la resistencia de la señal de TCR y/o densidad antigénica, y las trayectorias co-estimulatorias . La diferenciación de célula auxiliadora T CD4+ en subconjuntos Thl o Th2 tiene efectos profundos en el resultado de atopía, enfermedades inmunes, enfermedades infecciosas y recha2o de injerto. Las características específicas de respuestas inmunes que protegen individuos no atópicos a partir del desarrollo de enfermedades alérgicas y que podrían inhibir respuestas alérgicas en individuos atópicos son pobremente entendidas. Debido a que las células Thl cruzan las células Th2 regulares en algunos sistemas, células Thl específicas de alérgeno han sido asumidas para regular enfermedad alérgica y asma. Las células de Thl inhiben el desarrollo y la profilación de células Th2, y la producción de IgE es regulada recíprocamente por IL-4 e IFN-?. Esto sugiere que la protección de alergia se debe al desarrollo de células Thl específicas de alérgeno inhibidoras. Los clones de célula T específicos de alérgeno derivados de la sangre periférica de 101 individuos no alérgicos se ha mostrado producir citocinas Thl . Estas observaciones han también apoyado la hipótesis de higiene de asma, que sugiere que la prevalecencia de infecciones, particularmente aquellas que inducen respuestas Thl, se reducen en sociedades occidentalizadas por medidas de salud pública mejoradas y el uso de vacunas y antibióticos. Como resultado, las respuestas de Th2 y atopía se desarrollan más intensa y rápidamente en la ausencia de respuestas mediadas por Thl . Los genes TIM identificados en la presente son también oncogenes candidatos. La transfección de líneas celulares con los genes TIM confiere resistencia a muerte celular, y el motivo de cinasa EGFR previsto descrito en TIM-1 proporciona un mecanismo probable el cual esta supervivencia celular se controla. Además, TIM-1 demuestra un grado significativo de identidad de secuencia (aproximadamente 20%) y similaridad estructural (una glicoproteína de transmembrna con un dominio IgV, dominio de mucina/sindecano, dominio de transmembrana, y dominio intracelular con motivos de fosfotirosina similar) con TOSO, una proteína que protege las células a partir de apoptosis mediada por Fas. Como los genes TIM, TOSO es un oncogen probable, el cual traza una región del genoma con cambios frecuentes en malignidades hematologicas y tumores sólidos. 102 MÉTODOS Animales : Las líneas congénicas, incluyendo C.D2 Es-HBA se generaron por cruce de híbrido introgresivamente DBA/2N en un antecedente BALB/cAnPt. Se obtuvieron ratones Fl BALB/cBy, DBA/2J, y (BALB/c x DBA/2) (CByD2Fl/J) a partir de Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME) , mientras se obtuvieron BALB/cAn y DBA/2N a partir de Taconic Labs. Los ratones Fl (BALB/c x HBA) se produjeron con un cruce entre BALB/cByJ y HBA. Los ratones U2 se generaron por cruce híbrido (BALB/c x HBA) Fl a HBA. En el análisis de animales N2 reco binantes , ratones recombinantes se probaron junto con hermanos no recombinantes, cuando es posible. Para examinar genotipos N2 individuales en ensayos múltiples, se conservan los haplotipos recombinantes seleccionados por cruce híbrido de ratones N2 seleccionados a HBA a ratones N3 generados, se formaron en genotipos para elegir ratones que portan los haplotipos N2 recombinantes. Los ratones D011.10, que son transgénicos para péptido OVA de reconocimiento TCR 323-339 (pOVA323-339) y cruce híbrido a BALB/c (43) , se proporcionaron amablemente por el Dr. Dennis Loh y se engendraron en las instalaciones. Se produjeron ratones HBDA DO11.10 por cruce híbrido DO11.10 a HBA. Los ratones DO11.10 se seleccionaron por análisis FACS por el TCR-Tg y se formaron por genotipo para la selección de alelos HBA entre DllMitl35 y DllMitl68. El Comité de la Universidad de Stanford en bienestar de 103 animales aprobó todos los protocolos de animales . Formación en Genotipo. Los marcadores adicionales alrededor del sitio Tapr se identificaron probando todos los marcadores "DllMit-" disponibles presentes entre DllMitl40 y DllMit269 y todos los marcadores híbridos de radiación cerca de OllM.it.211 y OllM.it.22 para cualesquiera polimorfismos entre DBA/2 y BALB/c. Los cebadores IT MapPair se obtuvieron de Research Genetics (Huntsville, AL) , y todos los otros cebadores se sintetizaron en the Protein and Nucleic Acid Facility (Stanford, CA) . El PCR se realizó como se describió previamente, y los polimorfismos de SSLP se resolvieron con 4-5% de Metaphor agarose (BioWhittaker, Walkersville, MD) . Los productos analizados para SSGP se amplificaron con 33P-dCTP y separaron en geles de acrilamida desnaturalizados a 40W y 4°C, con un Sistema Sequi-Gen GT (Bio-Rad, Hercules, CA) . Protocolos de Inmunización. Los ratones estudiados en los ensayos de producción de citocina se cebaron con LH (Calbiochem, La Jolla, CA) en adyuvante Freund completo (CFA) (DaKruyff et al. J. Im unol 149, 3648-76 (1992)). Para medición de hiper-reactividad de vías respiratorias, los ratones se inmunizaron con OVA intraperitonealmente (i.p., 50 g) complejados con sulfato de potasio de aluminio (alum) en el día 0, e intranasalmente (i.n. 50 g de OVA en 50 µ? de PBS) después de anestesia ligera en los días 7, 8 y 9. Los 104 ratones control recibieron inyecciones i.p. de alum solo y PBS intranasal . La hiper-reactividad de vías respiratorias para metacolina inhalada se midió 24 horas después de la última dosis intranasal de OVA (día 10) . Medición de Sensibilidad de Vía Respiratoria. Las respuestas de las vías respiratorias se evaluaron por obstrucción de flujo de aire inducido por metacolina a partir de ratones conscientes colocados en un pletismógrafo de cuerpo completo (Buxco Electronics Inc. Troy, NY) , como se describió previamente (Hansen et al. J. Clin Invest 103, 175-83 (1999) ) . Cultivo de Células. Las células de nodulo linfático de ratones cebados con KLH se prepararon como se describe previamente (Yeung et al. J". I munol 161, 4146-52 (1998)). Las células T CD4 transgénicas DOll.lO se seleccionaron positivamente utilizando columnas ACS siguiendo la incubación con perlas magnéticas anti-CD4 (Miltenyl Biotech, Germany) . Las células/pozos de 2 x 104 se co-cultivaron en placas de fondo redondo de 96 pozos con 250 µg/ml de OVA y 1 x 104 de células/pozos dendríticos derivados de médula espinal. Después de siete días, las células T DOll.lO se lavaron y reestimularon con antígeno fresco presentando antígeno y células en la concentración indicada. La concentración antigénica para los cultivos DOll.lO primarios se titularon durante la re-estimulación. Las células 105 dendríticas derivadas de médula espinal se generaron como se describen previamente con algunas modificaciones; las células de médula espinal de 5 x 10e se cultivaron en platos de cultivo de tejido de 9 era de diámetro con 10 mi de medio de cultivo conteniendo 20-25 U/ml de GM-CSF. Las células holgadamente adherentes se transfirieron en un segundo plato en el sexto día del cultivo; dentro de cuatro días, estas células transfectadas se utilizaron como una fuente de células dendríticas. ELISA de Citocina. Se realizaron las ELISAS como se describió previamente en Macaulay et al. J Immunol 160, 1694-700 (1998); y Macaulay et al. J. Immunol 158, 4171-9 (1997). Anticuerpos Monoclonales . Los anticuerpos monoclonales para ELISA y análisis FACS se purificaron a partir de fluido de ascitis por precipitación de sulfato de amonio y cromatografía de intercambio de ion. El anticuerpo anti-clonotípico KJ1-26.1, se proporcionó generosamente por el Dr. Philippa Marrack, National Jewish Medical Center, y el anticuerpo se conjugó con FITC de acuerdo a los protocolos estándares anteriores a FACS.

Ejemplo 2 Identificación de Secuencias Tim Humanas La clonación posicional de la familia del gen TIM dentro de un sitio que confiere protección contra el 106 desarrollo de respuestas Th2 e iper-reactividad de vías respiratorias inducidas por al rgeno proporciona una oportunidad para mejorar grandemente el entendimiento de la regulación de Th2 que maneja respuestas y enfermedades atópicas. Además, TIM-3 es específicamente expresado en células Thl de murino y mAv anti-TIM-3 conduce a la severidad incrementada de encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) . Esto enfatiza la importancia de la familia del gen en regulación del subcon unto auxiliador T. Los ADNc humanos, que son los ortólogos de Tim-3 y Tim-4 de murino se clonaron por PCR. El ortólogo humano de TIM-1 se clonó como HAVcr-1, el receptor celular para el virus de la hepatitis A. Los genes de la familia TIM son inmediatamente adyacentes entre sí en cromosoma 5 humano, en el orden de TIM-4, TIM-1, TIM-3, sin la intervención de genes. Existen pseudogenes TIM en cromosomas 12 y 19. Los miembros de la familia genética son sólo moderadamente relacionados . Las secuencias de proteína y relación entre la familia del gen Tim se muestra en la Figura 7. Los dominios citoplásmicos de los miembros de la familia del gen TIM son los dominios más conservados entre ortólogos de ratón y humano, por ejemplo 77% de la identidad entre los dominios citoplásmicos TIM-3 de ratón y humano. En contraste, el TIM-3 completo es únicamente 63% idéntico entre el ratón y el ser humano. Cada gen TIM contiene un motivo de 107 señalización de tirosina previsto distinto. La región citoplasmica de TIM-1 contiene dos residuos de tirosina e incluye un motivo de fosforilación de tirosina cinasa altamente conservado, RAEDNIY. La región expandida, SRAEDNIYIVED P, contiene un sitio previsto para la fosforilación del receptor ItK y EGF. ItK se sabe que fosforila la C-?- (PLC-?) fosfolipasa y por lo que se acciona una cascada de acontecimientos de señalización que están implicados en la activación de la célula T y diferenciación de la célula T auxiliadora. Además, la señalización Itk afecta la diferenciación Thl/Th2, y los ratones Itk+ no desarrollan respuestas de Th2 fuertes. La actividad de la cinasa receptora de EGF se asocia con supervivencia y resistencia celular a muerte celular. Similarmente, TIM-3 contiene distinta fosforilación de tirosina conservada, y motivos de unión SH2 en el dominio citoplásmico. Esto sugiere que la interacción de un TIM con su ligando acoplará una trayectoria de señalización intracelular y que cada TIM será distinto en esta señalización. El dominio IgV extracelular de las proteínas TIM también contiene un motivo de unión de integrina previsto que es similar al motivo SWYGLR de osteopontina que está implicado en la adhesión a través de alfa (9) beta (1) , alf (4) beta (1) , y alfa (4) eta (7) integrinas. Las células pre-B transfectadas TIM-1 de la línea 300.19 demuestran un grado 108 elevado de adhesión en supervivencia incrementada en cultivo celular, cuando se compara con células 300.19 no transfectadas . Las células CHO transfectadas TI -1 y TI -2 también demuestran supervivencia mejorada comparada a células CHO no transfectadas . Estos resultados demuestran que las proteínas TIM regulan la adhesión celular y la muerte. Polimorfismos Genéticos en los genes Timl y Tim3 humanos. Los SNP o polimorfismos de nucleótido y eliminaciones/inserciones presentes en el gen Timl humano se identifican. Debido a que los SNP son extremadamente comunes en el genoma, ocurren cada 300-600 pares de bases, únicamente la región de codificación de Timl se analizó. Además, las variaciones genéticas que son comunes es también probable que se han importantes. Inicialmente, el ADNc de secuencia de las células T tomadas de 30-40 individuos (60-80 cromosomas) . Los cálculos de potencia muestran que las secuencias objetivo supervivientes en región de codificación de 60 cromosomas detectarán fácilmente los SNP con una frecuencia de población de más de 1% y que tiene una oportunidad de más de 90% de detectar alelos con una frecuencia de población de 5% o mayor. Por lo tanto, la selección de 30-40 individuos para variaciones de secuencia captura la mayoría de la variación del ADN, no conservadora, funcionalmente relevante, común presente en una población. Ya que las variantes/SNP de ADN en proximidad 109 física cercana con frecuencia muestra relaciones de dependencia fuertes (es decir, desequilibrio de unión) , se determina si un grupo de variantes de ADM (haplotipos de SNP) se heredan juntos, y se determinan si se clasifican por únicamente una porción de estos SNP será suficiente para identificar el haplotipo. El análisis de grandes regiones de varios cromosomas indican que los bloques de haplotipos discretos (de diez a cientos de kilobases) se presentan generalmente, cada una con diversidad limitada puntualizada por sitios aparentes de recombinación. Para encontrar haplotipos, el ADNc se secuencia y se explora por combinaciones de variaciones de secuencia que se ven repetidamente en múltiples individuos. Las células mononucleares sanguíneas periféricas (PBMC) fueron de 38 donadores, y se estimularon in vitro con PHA (7.5 µg/ml) durante 24 y 72 horas, o con Concavalina A (2 /xg/ml) durante 24 horas. ??? (20 mg/ml) y lonomicin (1 µ?) se agregaron durante las últimas seis horas de estimulación. Las células se cosecharon entonces y el ARN total se extrajo utilizando reactivo Trizol (Invitrogen) . Para obtener plantillas de ADNc para secuenciación, el ARN se transcribió inversamente utilizando transcriptasa inversa Superscript II (Invitrogen) , de acuerdo al protocolo del fabricante. El ADNc se utilizó para amplificar PCR de longitud total de ADNc Tim utilizando polimerasa de alta fidelidad Herculase Hot Starttra 110 (Strategene) . Los cebadores de PCR fueron: (SEC. DE IDENT. NO: 37) GTGTCTGACAGTGGCGTA (hacia delante), (SEC. DE IDENT. NO: 38) TTTGCCCAGGCAGAACCA (hacia delante), CCACCCAAGGTCACGACT (inversa), (SEC. DE IDENT. NO: 39) ATGCCACGGACTAAGACC (inversa) . Los productos PCR se purificaron con reactivos de extracción de gel Qiagen QIAquick, y secuenciaron utilizando cuatro cebadores de secuenciación internos para Timl y dos cebadores de secuenciación internos para Tim3. El producto de longitud completa Timl RT-PCR se clonó en estos individuos tomando el ARN total a partir de las células T activadas y transcribiéndolas con Superscript II y oligo dT. El ADNc Timl se amplificó con polimerasa de alta fidelidad Expandida (Roche) para generar un producto 1 kb que abarca la región de codificación Timl, la cual se purificó con un equipo de Purificación PCR (Invitrogen) . Este producto purificado se clonó entonces en el vector TOPO pEF6 (Invitrogen) , seguido por la transformación de la bacteria competente TOP10. Las colonias bacteriales se cultivaron en placas LB con selección de ampicilina. Las colonias únicas se eligieron y los preps de plásmido generados utilizando equipos mini prep Qiagen. El mapeo de restricción utilizando' digestión Hind III se utilizó para seleccionar plásmidos que contienen insertos en la orientación correcta. Estos plásmidos se secuenciaron entonces con tres diferentes 111 cebadores, hacia delante (T7) , internos e inversos (BGH) , y las secuencias alineadas en el programa SeqMan con secuencia de referencia TIM humana NCBI . Después de secuenciar Timl a partir de los cromosomas de 35 individuos (70 cromosomas) varios polimorfismos en Timl se identificaron, los cuales se muestran en la Figura 8. Estos polimorfismos se numeran 1-7 (columna izquierda) . La secuencia total de TIM-1 humano, que se lista en la base de datos NCBI (NM_012206) ; se proporciona en la Figura 8 como un punto de referencia. Esta secuencia se presenta en menos del 20% de los cromosomas que se secuenciaron, debido a la existencia de polimorfismos de secuencia prevalente, múltiples en la región de codificación. Las 6 variaciones de secuencia adicionales se identificaron, mostradas en la Figura 8, y todos los polimorfismos se observaron en el dominio extracelular de mucina, como fue cierto para los ratones, aunque las variaciones específicas fueron distintas de aquellas vistas en ratones. De manera importante, existe un grado limitado de asociación entre estas variantes, en varias combinaciones. Las variaciones más pronunciadas son el polimorfismo 1 etiquetado de inserción, 157insMTTTVP, el cual se observó en 65% de los cromosomas, y la eliminación en el polimorfismo 5, 187ÁThr, se observó en 65% de los cromosomas. El polimorfismo 4 se observó en 40% de los cromosomas y los otros polimorfismos se observaron cada 112 uno en 5% de los cromosomas. Notablemente, la mayoría de estas variaciones (2-6) se ubican dentro del exón 3, el primer exón que codifica la mucina, y todas las variantes ocurren en el nivel genomico y no son variantes de refuerzo. Basado en este análisis de secuencia del ARNm, un método más rápido para analizar el ADN genomico a partir de un número más grande de pacientes/control se ha desarrollado. Para seleccionar individuos para las variaciones vistas en secuencias mostradas en la Figura 8, el ADN se prueba inicialmente para polimorfismos de longitud de secuencia simple (SSLP) en un producto PC 150, el cual puede detectar la mayor inserción, polimorfismo 1, y la eliminación, polimorfismo 5. Además, el genotipo de otros polimorfismos (2-4, 6 y 7) e identidad de polimorfismos novedosos, un ensayo relativamente simple que utiliza análisis de polimorfismo conformacional de una sola hebra (SSCP) de productos PCR se ha desarrollado. Bajo condiciones bien optimizadas, el análisis SSCP detecta más del 90% de las sustituciones de nucleotido únicas y todos los polimorfismos de longitud. Para este análisis, han sido identificados cebadores PCR que amplifican cada exón de los genes Tim, y las variantes pueden distinguirse utilizando métodos de electroforesis de gel SSCP no desnaturalizados estándares (Figura 9) . La electroforesis de gel de poliacrilamida sin desnaturalizar se utiliza con 113 una secuencia de ADN ABI 377 para análisis SSCP de alta resolución de cada exón. Los cebadores marcados finales luorescentes se sintetizan y purifican. Los patrones SSCP novedosos que se detectan durante el proceso de genotipo completamente elevado identificarán variantes novedosas. Utilizando este método, el genotipo de los pacientes y controles se analiza rápidamente . El gen Ti 3 se analizó utilizando esencialmente las mismas metodologías. El ARNm de las células T activadas se secuencia para identificar polimorfismos Tim3, así como haplotípos de largo rango entre el Timl y el Tim3. Después de secuenciar el ADNc Tim3 que representa 60 cromosomas, se ha encontrado que Tim3 es polamórfico, como está en el genoma de ratón. Sin embargo, únicamente un polimorfismo, Leul40Arg, es prevaleciente, encontrado en aproximadamente 12% de los cromosomas representados.

Ejemplo 3 Expresión de las Secuencias Tim Se expresa la proteína TIM-3 de urino en clones Thl pero no en células T sencillas o células Th2. Utilizando células T transgénicas TCR, la proteína TIM-3 no se expresó en células Thl después de una o dos rondas de diferenciación dirigida a Thl pero se expresó después de la tercera y rondas adicionales de estimulación de Thl. La expresión de ARNm TIM- 114 3 se detectó algunas veces más temprano. Para determinar si la expresión del gen TIM-3 fue la misma en humanos, la expresión de ARNm TIM-3 y TIM-1 en células Thl humanas se examinaron utilizando células T específicas toxoides de tétanos generadas por la estimulación con antigeno en la presencia de IL-12 y anti IL-4 mAb. Dada la asociación de Tim-l con asma, la expresión de ARNm de TIM-1 y TIM-3 en células Th2 humanas se examinó. Las líneas de la célula Th2 se generaron de donadores alérgicos por estimulación in vitro con alérgeno, IL-4 y anti IL-12 mAb. Se analizó el ARN por PCR para expresión de gen TIM. TIM-3 se expresó generalmente después de la diferenciación de Thl mientras que TIM-1 se perdió. Inversamente, TIM-3 no se expresó en ninguno de Th2, pero TIM-1 se expresó en todas las células Th2. Tanto TIM-1 como TIM-3 se expresan en células mononucleares de sangre periférica no estimulada reducidas de monocito a partir de donadores utilizados para derivar las líneas celulares de Thl y Th2, presumiblemente porque esta población mezclada contiene tanto células de memoria Thl como Th2. Estos resultados sugieren una relación recíproca con TIM-1 que se expresa en Th2 y TIM-3 en Thl. Esta relación recíproca entre TIM-1 y TIM-3 se ha observado también en el ratón. En tejidos humanos, un ARNm de 4.4 kb TIM-1 fue muy fuertemente expresado en riñon y testículos. El ARNm 4.4 kb 115 se presentó en casi todos los tejidos, aunque fue débil en la mayoría. Una banda de 5.5 kb se observó en colon e hígado. Una banda de 7.5 kb se observó en bazo, timo, y leucocitos de sangre periférica, y más pequeños que 4.4 kb bandas se observaron en algunos órganos . Estos resultados sugieren que hTIM-1 se expresa en algún nivel en la mayoría de los tejidos humanos y que un mensaje de 7.5 kb puede codificar para hTIM-1 en tejidos de interés inmunológico . Sin embargo, la expresión de Kim-1 (daño de riñon Molécula-1) , el homólogo de rata de TIM-1, incrementa en riñon hasta daño isquémico. Ya que las tinciones MTN utilizadas en el análisis de expresión se prepararon de A m extraído de cadáveres, la expresión incrementada de TIM-1 en riñon se volvió a analizar. TIM-1 no se encontró sobreexpresarse en ARN de riñon obtenido de biopsias de riñon normales. Por lo tanto, es probable que los niveles elevados de expresión de TIM-1 observados en riñon y testículos fueron debidos a una sobreregulación en la expresión de TIM-1 resultante del daño de tejido. El riñon dañado puede expresar proteínas que dirigen las células inflamatorias entrantes hacia una respuesta Th2 más protectora en lugar de una respuesta Thl destructiva.

Ejemplo 4 Ligandos y Anticuerpos TIM Generación de Anticuerpos. generación de 116 anticuerpos monoclonales contra TIM-1 de ratón permite la examinacíón de la expresión de superficie celular de TIM-1 en diferentes tejidos, líneas celulares y cepas de ratón. Ambos alelos de ratón TIM-1 han sido clonados en un vector para expresión de proteína elevada (Invitrogen, pEF6-T0P0) . Las ratas se han inmunizado y aumentado con ambas construcciones de ADNc Timl para generar rápidamente anticuerpos contra moléculas de superficie celular. Este método con vacunación de ADNc favorece la producción de mAb contra epítopes de superficie celular ya que el ADNc Timl se tomará hasta por APC, que expresará TIM-1 como una molécula de superficie celular. Para generar mAb que se uniría igualmente bien al BALB/c y el HBA TIM-1 (uniendo para conservar dominios de TIM-1 tales como el dominio de inmunoglobulina de TIM-1) , tanto el BALB/c como el HBA ADNc Timl (pEF6-mTIMbalb y pEF6-mTIMhba) se inyectaron en cada rata. La amplificación adicional de ratas inmunizadas con ADNc Timl se hizo con células CHO establemente transíectadas con las construcciones de expresión pEF6-mTIM-l-GFP . Las transfectantes CHO que expresan niveles elevados de TIM-1 de ratón fueron clasificados por FACS e inyectado en las ratas. Otra célula que expresa mTIM-1 se generó transfectando establemente la línea celular pre-B 300.19 con las construcciones de expresión pEF6-mTIM-l. Esta línea se utiliza para seleccionar el suero de rata y los hibridomas 117 siguiendo la fusión para anticuerpo anti-TIM-1 por citometrxa de flujo. Las ratas se han generado las cuales tienen títulos policlonales elevados contra anti-TIM-1, como se detecta por la unión del suero de rata (y un Ig anti-rata de cabra-FITC secundario) para establecer células 300.19 pEF6-mTIMl-transfectadas , como se compara con el suero control a partir de ratas inmunizadas. Esta tinción es especifica para TIM-1 ya que no existe reactividad con células no transíectadas o células transfectadas con TIM-2. El bazo de la rata se remueve y los esplenocitos fusionados con una línea celular de mieloma (SP/2) para producir hibridomas . Los sobrenadantes de hibrídoma se seleccionan utilizando las líneas celulares 300.19 TIM-1 transfectadas para identificar los clones de hibridoma que producen anti-TIM-1 monoclonales . La especificidad del mAb para TIM-1 (y no otras proteínas TIM) se confirman utilizando células transfectadas TIM-2 y células transfectadas mTIM-3 o proteína de fusión TIM-3 Ig. Tinción de Anticuerpo. Las líneas celulares Thl y Th2 se generaron de células de bazo BALB/c y HBA D011.10. RT-PCR para la expresión de AR m TIM-1 demuestra que TIM-1 se expresa en líneas Th2, pero no en líneas Thl, siguiendo dos rutas de re-estimulación con antígeno bajo condiciones de polarización estándares. Las células T DO11.10 siguiendo dos rutas de estimulación con antígeno/APC bajo condiciones de 118 polarización Th2 se tiñeron con el antisuero anti-TIM-1 de rata policlonal . Estas células expresan altos niveles de TIM-1. Estos experimentos que muestran la expresión preferencial de TIM-1 en líneas TH2 se cuantifican y confirman utilizando anti-Tim-1 mAbs y transferencias Northern. Las células DO11.10 a partir de BALB y HBA se cultivan con antígeno y APC, y re-estimulan durante 1, 2 y 3 semanas bajo condiciones de polarización estándares (anti-IL-12 más IL-4 o anti-IL-4 más IL-12) . Después de cada semana de estimulación, las células se tiñen con anti-TIM-1 mAb. Al cosechar células estimuladas en varios puntos de tiempo las cinéticas de la expresión de TIM-1 en células T que experimentan diferenciación al subconjunto de Thl o Th2 se determinan. Para determinar si los cambios de expresión de superficie Tim-1 siguen la activación de célula T, se comparó la expresión TIM-l en células T activadas y relajadas una semana después de cada ruta de estimulación de antígeno, estimulando algunas células con PMA y yonomicina. Las células activadas se tiñeron para expresión de citocina intracelular para verificar la diferenciación de subconjunto T en las células T. Alternativamente, R.T-PCR cuantitativo o transferencias northern que utilizan ARNm cosechados de las células T activas con PMA más ionomicina, siguiendo cada ruta de estimulación, se utilizan para determinar niveles 119 relativos de producción de ARNm. Proteínas de fusión de TIM-l-Ig. BALB/c TIM-1-mlgG2a ha sido preparado, el cual es una proteína de fusión entre el polipéptido de TIM-1 y la región Fe de inraunoglobulina de ratón. El vector se ha diseñado para contener una mutación en Pe IgG2a de murino que minimiza la unión a los receptores Fe. La proteina de fusión TIM-1 se utiliza en la caracterización de la función TIM-1. La proteína de fusión TIM-1 Ig se espera que bloque la función de TIM-1 uniendo al ligando TIM-1 e interrumpiendo las interacciones del ligando TIM-l/TIM-1. La proteína de fusión Dlmuc-Fc purificada que contiene el dominio de inmunoglobulina rica en cys y 2/3 de la región similar a mucina de TIM-1 fusionado a la vinculación y fragmento Fe del IgGl humano (IgVmuc-hlg) se operó en un gel . Esta proteina se expresó en células CHO, y la proteína IgVmuc-hlg se purificó de los sobrenadantes CHO con columnas de agarosa de proteína A. La proteína de fusión IgVmuc-hlg purificada neutraliza aproximadamente 2 logs de infectividad HAV. Además, el tratamiento de HAV con IgVmuc-hlg produjo un cambio mayor en la sedimentación de las partículas de HAV, indicando que IgVmuc-hlg induce expulsión de capas del genoma viral, mientras que una proteína de fusión que contiene únicamente la región similar a Ig sin el dominio de mucina (IgV-hlg) no. El sistema de neutralización 120 HAV y la proteína de fusión IgVmuc- lg se utilizará para analizar la función de alelos del receptor TIM-l/HAV. Basado en el efecto in vivo de anti-TIM-3 mAb en expansión y activación de macrófago se hipotetizó que el ligando TIM-3 sería expresado en células del linaje mieloide. Las células dendríticas (DC) se prepararon a partir de monocitos sanguíneos de acuerdo a protocolos establecidos con 1000 U/ml de IL-4 y 800 U/ml de GM-CSF. DC se maduró volviendo a colocar en placas las células durante 2 días en IL-4 (1000 U/ml) y GM-CSF (800 U/ml) suplementado con IL-?ß (10 ng/ml), TNF- (10 ng/ml) , IL-6 (1000 U/ml) y PGE2 (1 /¿g/ml) . Las DC maduras teñidas positivamente con hTIM-3-Ig,-sin embargo estuvieron variablemente entre los donadores, sugiriendo que el DC maduro expresa un ligando para el dominio IgV de TIM-3. Las células endoteliales derivadas de médula espinal teñidas muy débilmente y las líneas celulares B no teñidas con TIM-3 -Ig. Aunque la terminación intracitoplásmica de Timl/huhavcr-1 es relativamente corta, ésta contiene una secuencia que es altamente conservada entre el ratón, rata, ser humano y mono ( AEDNIYI) y que puede fosforilarse, y la señal a través de la interacción con otras moléculas de transducción de señal. La molécula candidata más probable que puede encontrar el motivo de RAEDNIYI en células T es la Itk de tirosina cinasa. La tirosína cinasa inducible de 121 interleucina-2 , Itk es una tirosina cinasa de proteína no receptora de la familia Tec que participa en los acontecimientos de señalización intracelular que conducen a la activación de la célula T. Los miembros de la familia Tec contienen SH3 , SH2 conservado, y dominios catalíticos comunes a muchas familias de cinasa, pero se distinguen por únicas secuencias externas de esta región. Se sabe que la fosfolipasa fosforilato Itk C-? (PLC-?) y acciona una cascada de acontecimientos de señalización que están implicados en la activación de la célula T y diferenciación de células T auxiliadoras. En la ausencia de la señalización de Itk, las células Th2 no se desarrollan. Estos resultados sugieren que TIM-l/huhavcr-l pueden señalarse a través de Itk, por lo que alteran el desarrollo de citocina en células CD4 T.

Ej emplo 5 Ratones Suprimidos de TIM Una construcción suprimida se utiliza en la generación de ratón deficiente de Timl, que permite el análisis de desarrollo de respuestas inmunes en la ausencia de moléculas TIM-1. En otro enfoque, las proteínas de fusión TIM-l-Ig o anticuerpo monoclonal anti-TIM-1 se utilizan para bloquear la función de ratones TIM-1 en Tim-l+^+ (tipo silvestre) . Los ratones suprimidos Timl y los enfoques de anti-TIM-1 mAb son complementarios para la evaluación del 122 papel de TIM-l en diferenciación de células T y en patogénesis de asma. La secuencia genómica de ratón HBA de Timl tiene una eliminación de exón 4, comparada a la secuencia de BALB/c debido a un elemento retroviral Ll integrado en el exón 4. Si el truncamiento de un exón reduce la función TIM-1, entonces la eliminación total de la función de TIM-1 por la generación de ratones suprimidos Timl, debe limitar severamente la capacidad de tales ratones para generar respuestas Th2. Los ratones TIM-1 KO se generan eliminando los exones TIM-1 y 2, utilizando tecnología cre-lox y células BALB/c ES, que deben eliminar la expresión de superficie celular de TIM-1, por lo que demuestran la importancia de la función de TIM-1 en el desarrollo de células Th2 y AHR. Para crear una construcción objetivo apropiada, los BACs específicos que contienen miembros de la familia del gen TIM se identificaron seleccionando una colección C57/BI6 BAC (RPCI-23) utilizando conjuntos de filtro de alta densidad. Estos clones BAC se utilizaron para construir un mapa contiguo y físico de 500 kB que cubre la región genómica de aproximadamente 350 kb que abarca la familia del gen Tim. Un BAC específico, RPCI-23-222F8 , que contiene el gen Timl completo se eligió para generar una construcción objetivo TIM. La construcción objetivo suprime una región de 4 kb que abarca la región promotora, exón de señal, y exón IgV (exones 123 1 y 2) , a través de recombinación homologa con brazos 5' y 3' que flanquean esta región. Este vector objetivo puede utilizarse en cualesquiera células C57BI/6 o BALB/c ES, ya que los brazos homólogos de la construcción objetivo son homólogos a BALB/c y HBA (C57BI/6) ADN. La construcción se introduce en células ES, que se seleccionan para el alelo objetivo por PCR y por transferencias Southern. El vector objetivo, pLOX, contiene tres sitios loxP, y expresando recombinasa ere en las células ES objetivo, la recombinación generará tres formas de la región objetivo, de las cuales dos alelos, A y B se utilizan para crear ratones Timl KO. Los clones de células ES seleccionados se introducen en blastocitos para generar ratones quiméricos y crías para transmisión de línea germinal de la supresión. Los ADN terminales se analizan para la transmisión de la supresión. El alelo ? se utiliza inicialmente, en donde la recombinación cre/lox ha utilizado los sitios loxP más alejados para suprimir el TK y los casetes de selección de neomicina además de los exones 1 y 2 de TIM-1. La remoción del cásete neo y TK entero de la región objetivo genómico de TIM-1 evita confundir artefactos que puedan ser secundarios a la transcripción de neo en proximidad cercana a otros genes de la misma familia. Alternativamente, si el alelo A produce un fenotipo letal o confundido, los ratones se generan con el alelo B objetivo, en el cual el cásete neo y TK se ha 124 suprimido y la región TIM-1 se flanquea por los sitios lox-p. El uso de este enfoque objetivo condicional debe permitir la eliminación específica de la célula T de Tim-1 en ratones que expresan cre-recombinasa bajo el control de un promotor específico de célula T.

LISTADO DE SECUENCIAS <110> Mclntire, Jennifer Jones ümetsu, Dale T. Dekruyff, Rosemarie Kuchroo, Vi ay Freeman, Gordon J. <120> GENES REGULATORIOS DE CELULAS T Y METODOS PARA UTILIZAR LOS MISMOS <130> STAN-235WO <140> No asignado <141> 2002-07-01 <150> 60/302,344 <151> 2001-06-29 <160> 36 <170> FastSEQ para Windows Versión <210> 1 <211> 305 <212> PRT <213> M. musculus <220> <221> VARIANTE <222> (1) ... (305) <223> Alelo TIM-1 BALB/c <400> 1 Met Asn Gln lie Gln Val Phe lie Ser Gly Leu lie Leu Leu Leu Pro 1 5 10 15 Gly Thr Val Asp Ser Tyr Val Glu Val Lys Gly Val Val Gly His Pro 20 25 30 Val Thr Leu Pro Cys Thr Tyr Ser Thr Tyr Arg Gly lie Thr Thr Thr 35 40 45 Cys Trp Gly Arg Gly Gln Cys Pro Ser Ser Ala Cys Gln Asn Thr Leu 50 55 60 He Trp Thr Asn Gly His Arg Val Thr Tyr Gln Lys Ser Ser Arg Tyr 65 70 75 80 Asn Leu Lys Gly His lie Ser Glu Gly Asp Val Ser Leu Thr lie Glu 85 90 95 Asn Ser Val Glu Ser Asp Ser Gly Leu Tyr Cys Cys Arg Val Glu lie 100 105 110 Pro Gly Trp Phe Asn Asp Gln Lys Val Thr Phe Ser Leu Gln Val Lys 115 120 125 Pro Glu lie Pro Thr Arg Pro Pro Thr Arg Pro Thr Thr Thr Arg Pro 130 135 140 Thr Ala Thr Gly Arg Pro Thr Thr lie Ser Thr Arg Ser Thr His Val 145 150 155 160 Pro Thr Ser lie Arg Val Ser Thr Ser Thr Pro Pro Thr Ser Thr His 165 170 175 Thr Trp Thr His Lys Pro Glu Pro Thr Thr Phe Cys Pro His Glu Thr 180 185 190 Thr Ala Glu Val Thr Gly lie Pro Ser His Thr Pro Thr Asp Trp Asn 195 200 205 Gly Thr Val Thr Ser Ser Gly Asp Thr Trp Ser Asn His Thr Glu Ala 210 215 220 lie Pro Pro Gly Lys Pro Gln Lys Asn Pro Thr Lys Gly Phe Tyr Val 225 230 235 240 Gly lie Cys lie Ala Ala Leu Leu Leu Leu Leu Leu Val Ser Thr Val 245 250 255 Ala lie Thr Arg Tyr lie Leu Met Lys Arg Lys Ser Ala Ser Leu Ser 260 265 270 Val Val Ala Phe Arg Val Ser Lys lie Glu Ala Leu Gln Asn Ala Ala 275 280 285 Val Val His Ser Arg Ala Glu Asp Asn lie Tyr lie Val Glu Asp Arg 290 295 300 Pro 305 <210> 2 <211> 918 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 2 atgaatcaga ttcaagtctt catttcaggc ctcatactgc ttctcccagg cactgtggat 60 tcttatgtgg aagtaaaggg ggtagtgggt caccctgtca cacttccatg tacttactca 120 acatatcgtg gaatcacaac gacatgttgg ggccgagggc aatgcccatc ttctgcttgt 180 caaaatacac ttatttggac caatggacat cgtgtcacct atcagaagag cagtcggtac 240 aacttaaagg ggcatatttc agaaggagat gtgtccttga cgatagagaa ctctgttgag 300 agtgacagtg gtctgtattg ttgtcgagtg gagattcctg gatggtttaa tgatcagaaa 360 gtgacctttt cattgcaagt taaaccagag attcccacac gtcctccaac aagacccaca 420 actacaaggc ccacagctac aggaagaccc acgactattt caacaagatc cacacatgta 480 ccaacatcaa tcagagtctc tacctccact cctccaacat ctacacacac atggactcac 540 aaaccagaac ccactacatt ttgtccccat gagacaacag ctgaggtgac aggaatccca 600 tcccatactc ctacagactg gaatggcact gtgacatcct caggagatac ctggagtaat 660 cacactgaag caatccctcc agggaagccg cagaaaaacc ctactaaggg cttctatgtt 720 ggcatctgca tcgcagccct gctgctactg ctccttgtga gcaccgtggc tatcaccagg 780 tacatactta tgaaaaggaa gtcagcatct ctaagcgtgg ttgccttccg tgtctctaag 840 attgaagctt tgcagaacgc agcggttgtg cattcccgag ctgaagacaa catctacatt 900 gttgaagata gaccttga 918 <210> 3 <211> 282 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> VARIANTE <222> (1) ... (282) <223> Alelo TIM-1, C.D2 ES-HBA y DBA/2J <400> 3 Met Asn Gln lie Gln Val Phe lie Ser Gly Leu lie Leu Leu Leu Pro 1 . 5 10 15 Gly Ala Val Asp Ser Tyr Val Glu Val Lys Gly Val Val Gly His Pro 20 25 30 Val Thr Leu Pro Cys Thr Tyr Ser Thr Tyr Arg Gly lie Thr Thr Thr 35 40 45 Cys Trp Gly Arg Gly Gln Cys Pro Ser Ser Ala Cys Gln Asn Thr Leu 50 55 60 lie Trp Thr Asn Gly His Arg Val Thr Tyr Gln Lys Ser Ser Arg Tyr 65 70 75 80 Asn Leu Lys Gly His lie Ser Glu Gly Asp Val Ser Leu Thr lie Glu 85 90 95 Asn Ser Val Glu Ser Asp Ser Gly Leu Tyr Cys Cys Arg Val Glu lie 100 105 110 Pro Gly Trp Phe Asn Asp Gln Lys Val Thr Phe Ser Leu Gln Val Lys 115 120 125 Pro Glu lie Pro Thr Arg Pro Pro Arg Arg Pro Thr Thr Thr Arg Pro 130 135 140 Thr Ala Thr Gly Arg Pro Thr Thr lie Ser Thr Arg Ser Thr His Val 145 150 155 160 Pro Thr Ser Thr Arg Val Ser Thr Ser Thr Pro Pro Thr Ser Thr His 165 170 175 Thr Trp Thr Hís Lys Pro Asp Trp Asn Gly Thr Val Thr Ser Ser Gly 180 185 190 Asp Thr Trp Ser Asn His Thr Glu Ala lie Pro Pro Gly Lys Pro Gln 195 200 205 Lys Asn Pro Thr Lys Gly Phe yr Val Gly lie Cys lie Ala Ala Leu 210 215 220 Leu Leu Leu Leu Leu Val Ser Thr Val Ala lie Thr Arg Tyr lie Leu 225 230 235 240 Met Lys Arg Lys Ser Ala Ser Leu Ser Val Val Ala Phe Arg Val Ser 245 250 255 Lys lie Glu Ala Leu Gln Asn Ala Ala Val Val His Ser Arg Ala Glu 260 265 270 Asp Asn lie Tyr lie Val Glu Asp Arg Pro 275 280 <210> 4 <211> 849 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 4 atgaatcaga ttcaagtctt catttcaggc ctcatactgc ttctcccagg cgctgtggat 60 tcttatgtgg aagtaaaggg ggtggtgggt caccctgtca cacttccatg tacttactca 120 acatatcgtg gaatcacaac gacatgttgg ggccgagggc aatgcccatc ttctgcttgt 180 caaaatacac ttatttggac caatggacat cgtgtcacct atcagaagag cagtcggtac 240 aacttaaagg ggcatatttc agaaggagat gtgtccttga cgatagagaa ctctgttgag 300 agtgacagtg gtctgtattg ttgtcgagtg gagattcctg gatggtttaa tgatcagaaa 360 gtgacctttt cattgcaagt taaaccagag attcccacac gtcctccaag aagacccaca 420 actacaaggc ccacagctac aggaagaccc acgactattt caacaagatc cacacatgta 480 ccaacatcaa ccagagtctc tacctccact cctccaacat ctacacacac atggactcac 540 aaaccagact ggaatggcac tgtgacatcc tcaggagata cctggagtaa tcacactgaa 600 gcaatccctc cagggaagcc gcagaaaaac cctactaagg gcttctatgt tggcatctgc 660 atcgcagccc tgctgctact gctccttgtg agcaccgtgg ctatcaccag gtacatactt 720 atgaaaagga agtcagcatc tctaagcgtg gttgccttcc gtgtctctaa gattgaagct 780 ttgcagaacg cagcggttgt gcattcccga gctgaagaca acatctacat tgttgaagat 840 agaccttga 849 <210> 5 <211> 305 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> VARIANTE <222> (1) ... (305) <223> Alelo TIM-2 BALB/c <400> 5 Met Asn Gln lie Gln Val Phe lie Ser Gly Leu lie Leu Leu Leu Pro 1 5 10 15 Gly Ala Val Glu Ser His Thr Ala Val Gln Gly Leu Ala Gly His Pro 20 25 30 Val Thr Leu Pro Cys lie Tyr Ser Thr His Leu Gly Gly lie Val Pro 35 40 45 Met Cys Trp Gly Leu Gly Glu Cys Arg His Ser Tyr Cys lie Arg Ser 50 55 60 Leu lie Trp Thr Asn Gly Tyr Thr Val Thr His Gln Arg Asn Ser Arg 65 70 75 80 Tyr Gln Leu Lys Gly Asn lie Ser Glu Gly Asn Val Ser Leu Thr lie 85 90 95 Glu Asn Thr Val Val Gly Asp Gly Gly Pro Tyr Cys Cys Val Val Glu 100 105 110 lie Pro Gly Ala Phe His Phe Val Asp Tyr Met Leu Glu Val Lys Pro 115 120 125 Glu lie Ser Thr Ser Pro Pro Thr Arg Pro Thr Ala Thr Gly Arg Pro 130 135 140 Thr Thr lie Ser Thr Arg Ser Thr His Val Pro Thr Ser Thr Arg Val 145 150 155 160 Ser Thr Ser Thr Ser Pro Thr Pro Ala His Thr Glu Thr Tyr Lys Pro 165 170 175 Glu Ala Thr Thr Phe Tyr Pro Asp Gln Thr Thr Ala Glu Val Thr Glu 180 185 190 Thr Leu Pro Ser Thr Pro Ala Asp Trp His Asn Thr Val Thr Ser Ser 195 200 205 Asp Asp Pro Trp Asp Asp Asn Thr Glu Val lie Pro Pro Gln Lys Pro 210 215 220 Gln Lys Asn Leu Asn Lys Gly Phe Tyr Val Gly lie Ser lie Ala Ala 225 230 235 240 Leu Leu lie Leu Met Leu Leu Ser Thr Met Val lie Thr Arg Tyr Val 245 250 255 Val Met Lys Arg Lys Ser Glu Ser Leu Ser Phe Val Ala Phe Pro lie 260 265 270 Ser Lys lie Gly Ala Ser Pro Lys Lys Val Val Glu Arg Thr Arg Cys 275 280 285 Glu Asp Gln Val Tyr lie lie Glu Asp Thr Pro Tyr Pro Glu Glu Glu 290 295 300 Ser 305 <210> 6 <211> 958 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 6 aagctacggc tctctcctaa ctggtcgtac catgaatcag attcaagtct tcatttcagg 60 cctcatactg cttctcccag gtgccgtgga gtctcataca gcagtgcagg ggctggcggg 120 tcaccctgtc acacttccat gtatttattc gacacacctt ggtggaatcg ttcctatgtg 180 ttggggccta ggggaatgcc gccattctta ttgtatacgg tcacttatct ggaccaatgg 240 atatacggtc acacatcaga ggaacagtcg ataccagcta aaggggaata tttcagaagg 300 aaatgtgtcc ttgaccatag agaacactgt tgtgggtgat ggtggtccct attgctgtgt 360 agtggagata cctggagcgt tccattttgt ggactatatg ttggaagtta aaccagaaat 420 ttccacgagt ccaccaacaa ggcccacagc tacaggaaga cccacaacta tttcaacaag 480 atccacacat gtaccaacat caaccagagt ctctacctct acttctccaa caccagcaca 540 cacagagacc tacaaaccag aggccactac attttatcca gatcagacta cagctgaggt 600 gacagaaacc ttaccctcta ctcctgcaga ctggcataac actgtgacat cctcagatga 660 cccttgggat gataacactg aagtaatccc tccacagaag ccacagaaaa acctgaataa 720 gggcttctat gttggcatct ccattgcagc cctgctgata ttgatgcttc tgagcaccat 780 ggttatcacc aggtacgtgg ttatgaaaag gaagtcagaa tctctgagct ttgttgcctt 840 ccctatctct aagattggag cttcccccaa aaaagtggtc gaacggacca gatgtgaaga 900 ccaggtctac attattgaag acactcctta ccctgaagaa gagtcctagt gcctctac 958 <210> 7 <211> 305 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> VARIANTE <222> (1) ... (305) <223> Alelo TIM-2, C.D2 ES-HBA y DBA/2J <400> 7 Met Asn Gln lie Gln Val Phe lie Ser Gly Leu lie Leu Leu Leu Pro 1 5 10 15 Gly Ala Val Glu Ser His Thr Ala Val Gln Gly Leu Ala Gly His Pro 20 25 30 Val Thr Leu Pro Cys lie Tyr Ser Thr His Leu Gly Gly lie Val Pro 35 40 45 Met Cys Trp Gly Leu Gly Glu Cys A g His Ser Tyr Cys lie Arg Ser 50 55 60 Leu lie Trp Thr Asn Gly Tyr Thr Val Thr His Gln Arg Asn Ser Arg 65 70 75 80 Tyr Gln Leu Lys Gly Asn lie Ser Glu Gly Asn Val Ser Leu Thr lie 85 90 95 Glu Asn Thr Val Val Gly Asp Gly Gly Pro Tyr Cys Cys Val Val Glu 100 105 110 lie Pro Gly Ala Phe His Phe Val Asp Tyr Met Leu Glu Val Lys Pro 115 120 125 Glu lie Ser Thr Ser Pro Pro Thr Arg Pro Thr Ala Thr Gly Arg Pro 130 135 140 Thr Thr lie Ser Thr Arg Ser Thr His Val Pro Thr Ser Thr Arg Val 145 150 155 160 Ser Thr Ser Thr Ser Pro Thr Pro Ala His Thr Glu Thr Tyr Lys Pro 165 170 175 Glu Ala Thr Thr Phe Tyr Pro Asp Gln Thr Thr Ala Glu Val Thr Glu 180 185 190 Thr Leu Pro Ser Thr Pro Ala Asp Trp His Asn Thr Val Thr Ser Ser 195 200 205 Asp Asp Pro Trp Asp Asp Asn Thr Glu Val lie Pro Pro Gln Lys Pro 210 215 220 Gln Lys Asn Leu Asn Lys Gly Phe Tyr Val Gly lie Ser lie Ala Ala 225 230 235 240 Leu Leu lie Leu Met Leu Leu Ser Thr Met Val lie Thr Arg Tyr Val 245 250 255 Val Met Lys Arg Lys Ser Glu Ser Leu Ser Phe Val Ala Phe Pro lie 260 265 270 Ser Lys lie Gly Ala Ser Pro Lys Lys Val Val Glu Arg Thr Arg Cys 275 280 285 Glu Asp Gln Val Tyr lie lie Glu Asp Thr Pro Tyr Pro Glu Glu Glu 290 295 300 Ser 305 <210> 8 <211> 958 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 8 aagctacggc tctctcctaa ctggtcgtac catgaatcag attcaagtct tcatttcagg 60 cctcatactg cttctcccag gtgccgtgga gtctcataca gcagtgcagg ggctggcggg 120 tcaccctgtc acacttccat gtatttattc gacacacctt ggtggaatcg ttcctatgtg 180 ttggggccta ggggaatgcc gccattctta ttgtatacgg tcacttatct ggaccaatgg 240 atatacggtc acacatcaga ggaacagtcg ataccagcta aaggggaata tttcagaagg 300 aaatgtgtcc ttgaccatag agaacactgt tgtgggtgat ggtggtccct attgctgtgt 360 agtggagata cctggagcgt tccattttgt ggactatatg ttggaagtta aaccagaaat 420 ttccacgagt ccaccaacaa ggcccacagc tacaggaaga cccacaacta tttcaacaag 480 atccacacat gtaccaacat caaccagagt ctctacctct acttctccaa caccagcaca 540 cacagagacc tacaaaccag aggccactac attttatcca gatcagacta cagctgaggt 600 gacagaaacc ttaccctcta ctcctgcaga ctggcataac actgtgacat cctcagatga 660 cccttgggat gataacactg aagtaatccc tccacagaag ccacagaaaa acctgaataa 720 gggcttctat gttggcatct ccattgcagc cctgctgata ttgatgcttc tgagcaccat 780 ggttatcacc aggtacgtgg ttatgaaaag gaagtcagaa tctctgagct tcgttgcctt 840 ccctatctct aagattggag cttcccccaa aaaagtggtc gaacggacca gatgtgaaga 900 ccaggtctac attattgaag acactcctta ccccgaagaa gagtcctagt gcctctac 958 <210> 9 <211> 281 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> VARIANTE <222> (1) ... (281) <223> Alelo TIM-3 BALB/ <400> 9 Met Phe Ser Gly Leu Thr Leu Asn Cys Val Leu Leu Leu Leu Gln Leu 1 5 10 15 Leu Leu Ala Arg Ser Leu Glu Asp Gly Tyr Lys Val Glu Val Gly Lys 20 25 30 Asn Ala Tyr Leu Pro Cys Ser Tyr Thr Leu Pro Thr Ser Gly Thr Leu 35 40 45 Val Pro Met Cys Trp Gly Lys Gly Phe Cys Pro Trp Ser Gln Cys Thr 50 55 60 Asn Glu Leu Leu Arg Thr Asp Glu Arg Asn Val Thr Tyr Gln Lys Ser 65 70 75 80 Ser Arg Tyr Gln Leu Lys Gly Asp Leu Asn Lys Gly Asp Val Ser Leu 85 90 95 lie lie Lys Asn Val Thr Leu Asp Asp His Gly Thr Tyr Cys Cys Arg 100 105 110 lie Gln Phe Pro Gly Leu Met Asn Asp Lys Lys Leu Glu Leu Lys Leu 115 120 125 Asp lie Lys Ala Ala Lys Val Thr Pro Ala Gln Thr Ala His Gly Asp 130 135 140 Ser Thr Thr Ala Ser Pro Arg Thr Leu Thr Thr Glu Arg Asn Gly Ser 145 150 155 160 Glu Thr Gln Thr Leu Val Thr Leu His Asn Asn Asn Gly Thr Lys lie 165 170 175 Ser Thr Trp Ala Asp Glu lie Lys Asp Ser Gly Glu Thr lie Arg Thr 180 185 190 Ala lie His lie Gly Val Gly Val Ser Ala Gly Leu Thr Leu Ala Leu 195 200 205 lie lie Gly Val Leu lie Leu Lys Trp Tyr Ser Cys Lys Lys Lys Lys 210 215 220 Leu Ser Ser Leu Ser Leu lie Thr Leu Ala Asn Leu Pro Pro Gly Gly 225 230 235 240 Leu Ala Asn Ala Gly Ala Val Arg lie Arg Ser Glu Glu Asn lie Tyr 245 250 255 Thr lie Glu Glu Asn Val Tyr Glu Val Glu Asn Ser Asn Glu Tyr Tyr 260 265 270 Cys Tyr Val Asn Ser Gln Gln Pro Ser 275 280 <210> 10 <211> 2725 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 10 ttttaaccga ggagctaaag ctatccctac acagagctgt ccttggattt cccctgccaa 60 gtactcatgt tttcaggtct taccctcaac tgtgtcctgc tgctgctgca actactactt 120 gcaaggtcat tggaagatgg ttataaggtt gaggttggta aaaatgccta tctgccctgc 180 agttacactc tacctacatc tgggacactt gtgcctatgt gctggggcaa gggattctgt 240 ccttggtcac agtgtaccaa tgagttgctc agaactgatg aaagaaatgt gacatatcag 300 aaatccagca gataccagct aaagggcgat ctcaacaaag gagatgtgtc tctgatcata 360 aagaatgtga ctctggatga ccatgggacc tactgctgca ggatacagtt ccctggtctt 420 atgaatgata aaaaattaga actgaaatta gacatcaaag cagccaaggt cactccagct 480 cagactgccc atggggactc tactacagct tctccaagaa ccctaaccac ggagagaaat 540 ggttcagaga cacagacact ggtgaccctc cataataaca atggaacaaa aatttccaca 600 tgggctgatg aaattaagga ctctggagaa acgatcagaa ctgctatcca cattggagtg 660 ggagtctctg ctgggttgac cctggcactt atcattggtg tcttaatcct taaatggtat 720 tcctgtaaga aaaagaagtt atcgagtttg agccttatta cactggccaa cttgcctcca 780 ggagggttgg caaatgcagg agcagtcagg attcgctctg aggaaaatat ctacaccatc 840 gaggagaacg tatatgaagt ggagaattca aatgagtact actgctacgt caacagccag 900 cagccatcct gaccgcctct ggactgccac ttttaaaggc tcgccttcat ttctgacttt 960 ggtatttccc tttttgaaaa ctatgtgata tgtcacttgg caacctcatt ggaggttctg 1020 accacagcca ctgagaaaag agttccagtt ttctggggat aattaactca caaggggatt 1080 cgactgtaac tcatgctaca ttgaaatgct ccattttatc cctgagtttc agggatcgga 1140 tctcccactc cagagacttc aatcatgcgt gttgaagctc actcgtgctt tcatacatta 1200 ggaatggtta gtgtgatgtc tttgagacat agaggtttgt ggtatatccg caaagctcct 1260 gaacaggtag ggggaataaa gggctaagat aggaaggtgc ggttctttgt tgatgttgaa 1320 aatctaaaga agttggtagc ttttctagag atttctgacc ttgaaagatt aagaaaaagc 1380 caggtggcat atgcttaaca cgatataact tgggaacctt aggcaggagg gtgataagtt 1440 caaggtcagc cagggctatg ctggtaagac tgtctcaaaa tccaaagacg aaaataaaca 1500 tagagacagc aggaggctgg agatgaggct cggacagtga ggtgcatttt gtacaagcac 1560 gaggaatcta tatttgatcg tagaccccac atgaaaaagc taggcctggt agagcatgct 1620 tgtagactca agagatggag aggtaaaggc acaacagatc cccggggctt gcgtgcagtc 1680 agcttagcct aggtgctgag ttccaagtcc acaagagtcc ctgtctcaaa gtaagatgga 1740 ctgagtatct ggcgaatgtc catgggggtt gtcctctgct ctcagaagag acatgcacat 1800 gaacctgcac acacacacac acacacacac acacacacac acacacacac acacatgaaa 1860 tgaaggttct ctctgtgcct gctacctctc tataacatgt atctctacag gactctcctc 1920 tgcctctgtt aagacatgag tgggagcatg gcagagcagt ccagtaatta attccagcac 1980 tcagaaggct ggagcagaag cgtggagagt tcaggagcac tgtgcccaac actgccagac 2040 tcttcttaca caagaaaaag gttacccgca agcagcctgc tgtctgtaaa aggaaaccct 2100 gcgaaaggca aactttgact gttgtgtgct caaggggaac tgactcagac aacttctcca 2160 ttcctggagg aaactggagc tgtttctgac agaagaacaa ccggtgactg ggacatacga 2220 aggcagagct cttgcagcaa tctatatagt cagcaaaata ttctttggga ggacagtcgt 2280 caccaaattg atttccaagc cggtggacct cagtttcatc tggcttacag ctgcctgccc 2340 agtgcccttg atctgtgctg gctcccatct ataacagaat caaattaaat agaccccgag 2400 tgaaaatatt aagtgagcag aaaggtagct ttgttcaaag atttttttgc attggggagc 2460 aactgtgtac atcagaggac atctgttagt gaggacacca aaacctgtgg taccgttttt 2520 tcatgtatga attttgttgt ttaggttgct tctagctagc tgtggaggtc ctggctttct 2580 taggtgggta tggaagggag accatctaac aaaatccatt agagataaca gctctcatgc 2640 agaagggaaa actaatctca aatgttttaa agtaataaaa ctgtactggc aaagtacttt 2700 gagcatattt aaaaaaaaaa aaaaa 2725 <210> 11 <211> 281 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> VARIANTE <222> (1) ... (281) <223> Alelo TIM-3, C.D2 ES-HBA y DBA/2J <400> 11 et Phe Ser Gly Leu Thr Leu Asn Cys Val Leu Leu Leu Leu Gln Leu 1 5 10 15 Leu Leu Ala Arg Ser Leu Glu Asn Ala Tyr Val Phe Glu Val Gly Lys 20 25 30 Asn Ala Tyr Leu Pro Cys Ser Tyr Thr Leu Ser Thr Pro Gly Ala Leu 35 40 45 Val Pro Met Cys Trp Gly Lys Gly Phe Cys Pro Trp Ser Gln Cys Thr 50 55 60 Asn Glu Leu Leu Arg Thr Asp Glu Arg Asn Val Thr Tyr Gln Lys Ser 65 70 75 80 Ser Arg Tyr Gln Leu Lys Gly Asp Leu Asn Lys Gly Asp Val Ser Leu 85 90 95 lie lie Lys Asn Val Thr Leu Asp Asp His Gly Thr Tyr Cys Cys Arg 100 105 110 lie Gln Phe Pro Gly Leu Met Asn Asp Lys Lys Leu Glu Leu Lys Leu 115 120 125 Asp lie Lys Ala Ala Lys Val Thr Pro Ala Gln Thr Ala His Gly Asp 130 135 140 Ser Thr Thr Ala Ser Pro Arg Thr Leu Thr Thr Glu Arg Asn Gly Ser 145 150 155 160 Glu Thr Gln Thr Leu Val Thr Leu His Asn Asn Asn Gly Thr Lys lie 165 170 175 Ser Thr Trp Ala Asp Glu lie Lys Asp Ser Gly Glu Thr lie Arg Thr 180 185 190 Ala lie His lie Gly Val Gly Val Ser Ala Gly Leu Thr Leu Ala Leu 195 200 205 lie lie Gly Val Leu lie Leu Lys Trp Tyr Ser Cys Lys Lys Lys Lys 210 215 220 Leu Ser Ser Leu Ser Leu lie Thr Leu Ala Asn Leu Pro Pro Gly Gly 225 230 235 240 Leu Ala Asn Ala Gly Ala Val Arg lie Arg Ser Glu Glu Asn lie Tyr 245 250 255 Thr lie Glu Glu Asn Val Tyr Glu Val Glu Asn Ser Asn Glu Tyr Tyr 260 265 270 Cys Tyr Val Asn Ser Gln Gln Pro Ser 275 280 <210> 12 <211> 862 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 12 cccctcccaa gtactcatgt tttcaggtct taccctcaac tgtgtcctgc tgctgctgca 60 actactactt gcaaggtcat tggaaaatgc ttatgtgttt gaggttggta agaatgccta 120 tctgccctgc agttacactc tatctacacc tggggcactt gtgcctatgt gctggggcaa 180 gggattctgt ccttggtcac agtgtaccaa cgagttgctc agaactgatg aaagaaatgt 240 gacatatcag aaatccagca gataccagct aaagggcgat ctcaacaaag gagacgtgtc 300 tctgatcata aagaatgtga ctctggatga ccatgggacc tactgctgca ggatacagtt 360 ccctggtctt atgaatgata aaaaattaga actgaaatta gacatcaaag cagccaaggt 420 cactccagct cagactgccc atggggactc tactacagct tctccaagaa ccctaaccac 480 ggagagaaat ggttcagaga cacagacact ggtgaccctc cataataaca atggaacaaa 540 aatttccaca tgggctgatg aaattaagga ctctggagaa acgatcagaa ctgctatcca 600 cattggagtg ggagtctctg ctgggttgac cctggcactt atcattggtg tcttaatcct 660 taaatggtat tcctgtaaga aaaagaagtt atcgagtttg agccttatta cactggccaa 720 cttgcctcca ggagggttgg caaatgcagg agcagtcagg attcgctctg aggaaaatat 780 ctacaccatc gaggagaacg tatatgaagt ggagaattca aatgagtact actgctacgt 840 caacagccag cagccatcct ga 862 <210> 13 <211> 345 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> VARIANTE <222> (1) ... (345) <223> Alelo TIM-4, BALB/c <400> 13 Met Ser Lys Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Val Thr Glu Leu Trp Trp 1 5 10 15 Leu Tyr Leu Ser Lys Ser Pro Ala Ala Ser Glu Asp Thr lie lie Gly 25 30 Phe Leu Gly Gln Pro Val Thr Leu Pro Cys His Tyr Leu Ser Trp Ser 35 40 45 Gln Ser Arg Asn Ser Met Cys Trp Gly Lys Gly Ser Cys Pro Asn Ser 50 55 60 Lys Cys Asn Ala Glu Leu Leu Arg Thr Asp Gly Thr Arg lie lie Ser 65 70 75 80 Arg Lys Ser Thr Lys Tyr Thr Leu Leu Gly Lys Val Gln Phe Gly Glu 85 90 95 Val Ser Leu Thr lie Ser Asn Thr Asn Arg Gly Asp Ser Gly Val Tyr 100 105 110 Cys Cys Arg lie Glu Val Pro Gly Trp Phe Asn Asp Val Lys Lys Asn 115 120 125 Val Arg Leu Glu Leu Arg Arg Ala Thr Thr Thr Lys Lys Pro Thr Thr 130 135 140 Thr Thr Arg Pro Thr Thr Thr Pro Tyr Val Thr Thr Thr Thr Pro Glu 145 150 155 160 Leu Leu Pro Thr Thr Val Met Thr Thr Ser Val Leu Pro Thr Thr Thr 165 170 175 Pro Pro Gln Thr Leu Ala Thr Thr Ala Phe Ser Thr Ala Val Thr Thr 180 185 190 Cys Pro Ser Thr Thr Pro Gly Ser Phe Ser Gln Glu Thr Thr Lys Gly 195 200 205 Ser Ala lie Thr Thr Glu Ser Glu Thr Leu Pro Ala Ser Asn His Ser 210 215 220 Gln Arg Ser Met Met Thr lie Ser Thr Asp lie Ala Val Leu Arg Pro 225 230 235 240 Thr Gly Ser Asn Pro Gly lie Leu Pro Ser Thr Ser Gln Leu Thr Thr 245 250 255 Gln Lys Thr Thr Leu Thr Thr Ser Glu Ser Leu Gln Lys Thr Thr Lys 260 265 270 Ser His Gln lie Asn Ser Arg Gln Thr lie Leu lie lie Ala Cys Cys 275 280 285 Val Gly Phe Val Leu Met Val Leu Leu Phe Leu Ala Phe Leu Leu Arg 290 295 300 Gly Lys Val Thr Gly Ala Asn Cys Leu Gln Arg His Lys Arg Pro Asp 305 310 315 320 Asn Thr Glu Val Ser Asp Ser Phe Leu Asn Asp lie Ser His Gly Arg 325 330 335 Asp Asp Glu Asp Gly lie Phe Thr Leu 340 345 <210> 14 <211> 1032 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 14 atgtccaagg ggcttctcct cctctggctg gtgacggagc tctggtggct ttatctgaca 60 ccagctgcct cagaggatac aataataggg tttttgggcc agccggtgac tttgccttgt 120 cattacctct cgtggtccca gagccgcaac agtatgtgct ggggcaaagg ttcatgtccc 180 aattccaagt gcaatgcaga gcttctccgt acagatggaa caagaatcat ctccaggaag 240 tcaacaaaat atacactttt ggggaaggtc cagtttggtg aagtgtcctt gaccatctca 300 aacaccaatc gaggtgacag tggggtgtac tgctgccgta tagaggtgcc tggctggttc 360 aatgatgtca agaagaatgt gcgcttggag ctgaggagag ccacaacaac caaaaaacca 420 acaacaacca cccggccaac caccacccct tatgtaacca ccaccacccc agagctgctt 480 ccaacaacag tcatgaccac atctgttctt ccaaccacca caccacccca gacactagcc 540 accactgcct tcagtacagc agtgaccacg tgcccctcaa caacacctgg ctccttctca 600 caagaaacca caaaagggtc cgccatcact acagaatcag aaactctgcc tgcatccaat 660 cactctcaaa gaagcatgat gaccatatct acagacatag ccgtactcag gcccacaggc 720 tctaaccctg ggattctccc atccacttca cagctgacga cacagaaaac aacattaaca 780 acaagtgagt ctttgcagaa gacaactaaa tcacatcaga tcaacagcag acagaccatc 840 ttgatcattg cctgctgtgt gggatttgtg ctaatggtgt tattgtttct ggcgtttctc 900 cttcgaggga aagtcacagg agccaactgt ttgcagagac acaagaggcc agacaacact 960 gaagatagtg acagcgtcct caatgacatg tcacacggga gggatgatga agacgggatc 1020 ttcactctct ga 1032 <210> 15 <211> 345 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> VARIANTE <222> (1) ... (345) <223> Alelo C.D2 ES-HBA y DBA/2J <400> 15 Met Ser Lys Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Val et Glu Leu Trp Trp 1 5 10 15 Leu Tyr Leu Ser Lys Ser Pro Ala Ala Ser Glu Asp Thr lie lie Gly 20 25 30 Phe Leu Gly Gln Pro Val Thr Leu Pro Cys His Tyr Leu Ser Trp Ser 35 40 45 Gln Ser Arg Asn Ser Met Cys Trp Gly Lys Gly Ser Cys Pro Asn Ser 50 55 60 Lys Cys Asn Ala Glu Leu Leu Arg Thr Asp Gly Thr Arg lie He Ser 65 70 75 80 Arg Lys Ser Thr Lys Tyr Thr Leu Leu Gly Lys Val Gln Phe Gly Glu 85 90 95 Val Ser Leu Thr He Ser Asn Thr Asn Arg Gly Asp Ser Gly Val Tyr 100 105 110 Cys Cys Arg He Glu Val Pro Gly Trp Phe Asn Asp Val Lys Lys Asn 115 120 125 Val Arg Leu Glu Leu Arg Arg Ala Thr Thr Thr Lys Lys Pro Thr Thr 130 135 140 Thr Thr Arg Pro Thr Thr Thr Pro Tyr Val Thr Thr Thr Thr Pro Glu 145 150 155 160 Leu Leu Pro Thr Thr Val Met Thr Thr Ser Val Leu Pro Thr Thr Thr 165 170 175 Pro Pro Gln Thr Leu Ala Thr Thr Ala Phe Ser Thr Ala Val Thr Thr 180 185 190 Cys Pro Ser Thr Thr Pro Gly Ser Phe Ser Gln Glu Thr Thr Lys Gly 195 200 205 Ser Ala Phe Thr Thr Glu Ser Glu Thr Leu Pro Ala Ser Asn His Ser 210 215 220 Gln Arg Ser Met Met Thr He Ser Thr Asp He Ala Val Leu Arg Pro 225 230 235 240 Thr Gly Ser Asn Pro Gly He Leu Pro Ser Thr Ser Gln Leu Thr Thr 245 250 255 Gln Lys Thr Thr Leu Thr Thr Ser Glu Ser Leu Gln Lys Thr Thr Lys 260 265 270 Ser His Gln He Asn Ser Arg Gln Thr He Leu He He Ala Cys Cys 275 280 285 Val Gly Phe Val Leu Met Val Leu Leu Phe Leu Ala Phe Leu Leu Arg 290 295 300 Gly Lys Val Thr Gly Ala Asn Cys Leu Gln Arg His Lys Arg Pro Asp 305 310 315 320 Asn Thr Glu Val Ser Asp Ser Phe Leu Asn Asp lie Ser His Gly Arg 325 330 335 Asp Asp Glu Asp Gly lie Phe Thr Leu 340 345 <210> 16 <211> 1032 <212> ADN <213> Mus musculus <400> 16 atgtccaagg ggcttctcct cctctggctg gtgatggagc tctggtggct ttatctgaca 60 ccagctgcct cagaggatac aataataggg tttttgggcc agccggtgac tttgccttgt 120 cattacctct cgtggtccca gagccgcaac agtatgtgct ggggcaaagg ttcatgtccc 180 aattccaagt gcaatgcaga gcttctccgt acagatggaa caagaatcat ctccaggaag 240 tcaacaaaat atacactttt ggggaaggtc cagtttggtg aagtgtcctt gaccatctca 300 aacaccaatc gaggtgacag tggggtgtac tgctgccgta tagaggtgcc tggctggttc 360 aatgatgtca agaagaatgt gcgcttggag ctgaggagag ccacaacaac caaaaaacca 420 acaacaacca cccggccaac caccacccct tatgtaacca ccaccacccc agagctgctt 480 ccaacaacag tcatgaccac atctgttctt ccaaccacca caccacccca gacactagcc 540 accactgcct tcagtacagc agtgaccacg tgcccctcaa caacacctgg ctccttctca 600 caagaaacca caaaagggtc cgccttcact acagaatcag aaactctgcc tgcatccaat 660 cactctcaaa gaagcatgat gaccatatct acagacatag ccgtactcag gcccacaggc 720 tctaaccctg ggattctccc atccacttca cagctgacga cacagaaaac aacattaaca 780 acaagtgagt ctttgcagaa gacaactaaa tcacatcaga tcaacagcag acagaccatc 840 ttgatcattg cctgctgtgt gggatttgtg ctaatggtgt tattgtttct ggcgtttctc 900 cttcgaggga aagtcacagg agccaactgt ttgcagagac acaagaggcc agacaacact 960 gaagatagtg acagcgtcct caatgacatg tcacacggga gggatgatga agacgggatc 1020 ttcactctct ga 1032 <210> 17 <211> 359 <212> PRT <213> H. sapiens <220> <221> VARIANTE <222> (1) ... (360) <223> TIM-1, alelo 1 <400> 17 Met His Pro Gln Val Val lie Leu Ser Leu lie Leu His Leu Ala Asp 1 5 10 15 Ser Val Ala Gly Ser Val Lys Val Gly Gly Glu Ala Gly Pro Ser Val 20 25 30 Thr Leu Pro Cys His Tyr Ser Gly Ala Val Thr Ser Met Cys Trp Asn 35 40 45 Arg Gly Ser Cys Ser Leu Phe Thr Cys Gln Asn Gly lie Val Trp Thr 50 55 60 Asn Gly Thr His Val Thr Tyr Arg Lys Asp Thr Arg Tyr Lys Leu Leu 65 70 75 80 Gly Asp Leu Ser Arg Arg Asp Val Ser Leu Thr lie Glu Asn Thr Ala 85 90 95 Val Ser Asp Ser Gly Val Tyr Cys Cys Arg Val Glu His Arg Gly Trp 100 105 110 Phe Asn Asp et Lys lie Thr Val Ser Leu Glu lie Val Pro Pro Lys 115 120 125 Val Thr Thr Thr Pro lie Val Thr Thr Val Pro Thr Val Thr Thr Val 130 135 140 Arg Thr Ser Thr Thr Val Pro Thr Thr Thr Thr Val Pro Thr Thr Thr 145 150 155 160 Val Pro Thr Thr Met Ser lie Pro Thr Thr Thr Thr Val Pro Thr Thr 165 170 175 Met Thr Val Ser Thr Thr Thr Ser Val Pro Thr Thr Thr Ser lie Pro 180 185 190 Thr Thr Thr Ser Val Pro Val Thr Thr Thr Val Ser Thr Phe Val Pro 195 200 205 Pro Met Pro Leu Pro Arg Gln Asn His Glu Pro Val Ala Thr Ser Pro 210 215 220 Ser Ser Pro Gln Pro Ala Glu Thr His Pro Thr Thr Leu Gln Gly Ala 225 230 235 240 lie Arg Arg Glu Pro Thr Ser Ser Pro Leu Tyr Ser Tyr Thr Thr Asp 245 250 255 Gly Asn Asp Thr Val Thr Glu Ser Ser Asp Gly Leu Trp Asn Asn Asn 260 265 270 Gln Thr Gln Leu Phe Leu Glu His Ser Leu Leu Thr Ala Asn Thr Thr 275 280 285 Lys Gly lie Tyr Ala Gly Val Cys lie Ser Val Leu Val Leu Leu Ala 290 295 300 Leu Leu Gly Val lie lie Ala Lys Lys Tyr Phe Phe Lys Lys Glu Val 305 310 315 320 Gln Gln Leu Ser Val Ser Phe Ser Ser Leu Gln lie Lys Ala Leu Gln 325 330 335 Asn Ala Val Glu Lys Glu Val Gln Ala Glu Asp Asn lie Tyr lie Glu 340 345 350 Asn Ser Leu Tyr Ala Thr Asp 355 <210> 18 <211> 1080 <212> ADN <213> H. sapiens <400> 18 atgcatcctc aagtggtcat cttaagcctc atcctacatc tggcagattc tgtagctggt 60 tctgtaaagg ttggtggaga ggcaggtcca tctgtcacac taccctgcca ctacagtgga 120 gctgtcacat caatgtgctg gaatagaggc tcatgttctc tattcacatg ccaaaatggc 180 attgtctgga ccaatggaac ccacgtcacc tatcggaagg acacacgcta taagctattg 240 ggggaccttt caagaaggga tgtctctttg accatagaaa atacagctgt gtctgacagt 300 ggcgtatatt gttgccgtgt tgagcaccgt gggtggttca atgacatgaa aatcaccgta 360 tcattggaga ttgtgccacc caaggtcacg actactccaa ttgtcacaac tgttccaacc 420 gtcacgactg ttcgaacgag caccactgtt ccaacgacaa cgactgttcc aacgacaact 480 gttccaacaa caatgagcat tccaacgaca acgactgttc cgacgacaat gactgtttca 540 acgacaacga gcgttccaac gacaacgagc attccaacaa caacaagtgt tccagtgaca 600 acaacggtct ctacctttgt tcctccaatg cctttgccca ggcagaacca tgaaccagta 660 gccacttcac catcttcacc tcagccagca gaaacccacc ctacgacact gcagggagca 720 ataaggagag aacccaccag ctcaccattg tactcttaca caacagatgg gaatgacacc 780 gtgacagagt cttcagatgg cctttggaat aacaatcaaa ctcaactgtt cctagaacat 840 agtctactga cggccaatac cactaaagga atctatgctg gagtctgtat ttctgtcttg 900 gtgcttcttg ctcttttggg tgtcatcatt gccaaaaagt atttcttcaa aaaggaggtt 960 caacaactaa gtgtttcatt tagcagcctt caaattaaag ctttgcaaaa tgcagttgaa 1020 aaggaagtcc aagcagaaga caatatctac attgagaata gtctttatgc cacggactaa 1080 <210> 19 <211> 359 <212> PRT <213> H. sapiens <220> <221> VARIANTE <222> (1) ... (359) <223> TIM-l, alelo 2 <400> 19 Met His Pro Gln Val Val lie Leu Ser Leu lie Leu His Leu Ala Asp 1 5 10 15 Ser Val Ala Gly Ser Val Lys Val Gly Gly Glu Ala Gly Pro Ser Val 20 25 30 Thr Leu Pro Cys His Tyr Ser Gly Ala Val Thr Ser Met Cys Trp Asn 35 40 45 Arg Gly Ser Cys Ser Leu Phe Thr Cys Gln Asn Gly lie Val Trp Thr 50 55 60 Asn Gly Thr His Val Thr Tyr Arg Lys Asp Thr Arg Tyr Lys Leu Leu 65 70 75 80 Gly Asp Leu Ser Arg Arg Asp Val Ser Leu Thr lie Glu Asn Thr Ala 85 90 95 Val Ser Asp Ser Gly Val Tyr Cys Cys Arg Val Glu His Arg Gly Trp 100 105 110 Phe Asn Asp Met Lys lie Thr Val Ser Leu Glu lie Val Pro Pro Lys 115 120 125 Val Thr Thr Thr Pro lie Val Thr Thr Val Pro Thr Val Thr Thr Val 130 135 140 Arg Thr Ser Thr Thr Val Pro Thr Thr Thr Thr Val Pro Thr Thr Thr 145 150 155 160 Val Pro Thr Thr Met Ser lie Pro Thr Thr Thr Thr Val Pro Thr Thr 165 170 175 Met Thr Val Ser Thr Thr Thr Ser Val Pro Thr Thr Thr Ser lie Pro 180 185 190 Thr Thr Thr Ser Val Pro Val Thr Thr Ala Val Ser Thr Phe Val Pro 195 200 205 Pro Met Pro Leu Pro Arg Gln Asn His Glu Pro Val Ala Thr Ser Pro 210 215 220 Ser Ser Pro Gln Pro Ala Glu Thr His Pro Thr Thr Leu Gln Gly Ala 225 230 235 240 lie Arg Arg Glu Pro Thr Ser Ser Pro Leu Tyr Ser Tyr Thr Thr Asp 245 250 255 Gly Asn Asp Thr Val Thr Glu Ser Ser Asp Gly Leu Trp Asn Asn Asn 260 265 270 Gln Thr Gln Leu Phe Leu Glu His Ser Leu Leu Thr Ala Asn Thr Thr 275 280 285 Lys Gly lie Tyr Ala Gly Val Cys lie Ser Val Leu Val Leu Leu Ala 290 295 300 Leu Leu Gly Val lie lie Ala Lys Lys Tyr Phe Phe Lys Lys Glu Val 305 310 315 320 Gln Gln Leu Ser Val Ser Phe Ser Ser Leu Gln lie Lys Ala Leu Gln 325 330 335 Asn Ala Val Glu Lys Glu Val Gln Ala Glu Asp Asn lie Tyr lie Glu 340 345 350 Asn Ser Leu Tyr Ala Thr Asp 355 <210> 20 <211> 1080 <212> ADN <213> H. sapiens <400> 20 atgcatcctc aagtggtcat cttaagcctc atcctacatc tggcagattc tgtagctggt 60 tctgtaaagg ttggtggaga ggcaggtcca tctgtcacac taccctgcca ctacagtgga 120 gctgtcacat caatgtgctg gaatagaggc tcatgttctc tattcacatg ccaaaatggc 180 attgtctgga ccaatggaac ccacgt'cacc tatcggaagg acacacgcta taagctattg 240 ggggaccttt caagaaggga tgtctctttg accatagaaa atacagctgt gtctgacagt 300 ggcgtatatt gttgccgtgt tgagcaccgt gggtggttca atgacatgaa aatcaccgta 360 tcattggaga ttgtgccacc caaggtcacg actactccaa ttgtcacaac tgttccaacc 420 gtcacgactg ttcgaacgag caccactgtt ccaacgacaa cgactgttcc aacgacaact 480 gttccaacaa caatgagcat tccaacgaca acgactgttc cgacgacaat gactgtttca 540 acgacaacga gcgttccaac gacaacgagc attccaacaa caacaagtgt tccagtgaca 600 acagcggtct ctacctttgt tcctccaatg cctttgccca ggcagaacca tgaaccagta 660 gccacttcac catcttcacc tcagccagca gaaacccacc ctacgacact gcagggagca 720 ataaggagag aacccaccag ctcaccattg tactcttaca caacagatgg gaatgacacc 780 gtgacagagt cttcagatgg cctttggaat aacaatcaaa ctcaactgtt cctagaacat 840 agtctactga cggccaatac cactaaagga atctatgctg gagtctgtat ttctgtcttg 900 gtgcttcttg ctcttttggg tgtcatcatt gccaaaaagt atttcttcaa aaaggaggtt 960 caacaactaa gtgtttcatt tagcagcctt caaattaaag ctttgcaaaa tgcagttgaa 1020 aaggaagtcc aagcagaaga caatatctac attgagaata gtctttatgc cacggactaa 1080 <210> 21 <211> 365 <212> PRT <213> H. sapiens <220> <221> VARIANTE <222> (1) ... (365) <223> TIM-1, alelo 3 <400> 21 Met His Pro Gln Val Val lie Leu Ser Leu lie Leu His Leu Ala Asp 1 5 10 15 Ser Val Ala Gly Ser Val Lys Val Gly Gly Glu Ala Gly Pro Ser Val 20 25 30 Thr Leu Pro Cys His Tyr Ser Gly Ala Val Thr Ser Met Cys Trp Asn 35 40 45 Arg Gly Ser Cys Ser Leu Phe Thr Cys Gln Asn Gly lie Val Trp Thr 50 55 60 Asn Gly Thr His Val Thr Tyr Arg Lys Asp Thr Arg Tyr Lys Leu Leu 65 70 75 80 Gly Asp Leu Ser Arg Arg Asp Val Ser Leu Thr lie Glu Asn Thr Ala 85 90 95 Val Ser Asp Ser Gly Val Tyr Cys Cys Arg Val Glu His Arg Gly Trp 100 105 110 Phe Asn Asp et Lys lie Thr Val Ser Leu Glu lie Val Pro Pro Lys 115 120 125 Val Thr Thr Thr Pro lie Val Thr Thr Val Pro Thr Val Thr Thr Val 130 135 140 Arg Thr Ser Thr Thr Val Pro Thr Thr Thr Thr Val Pro Met Thr Thr 145 150 155 160 Thr Val Pro Thr Thr Thr Val Pro Thr Thr Met Ser lie Pro Thr Thr 165 170 175 Thr Thr Val Pro Thr Thr Met Thr Val Ser Thr Thr Thr Ser Val Pro 180 185 190 Thr Thr Thr Ser lie Pro Thr Thr Thr Ser Val Pro Val Thr Thr Ala 195 200 205 Val Ser Thr Phe Val Pro Pro Met Pro Leu Pro Arg Gln Asn His Glu 210 215 220 Pro Val Ala Thr Ser Pro Ser Ser Pro Gln Pro Ala Glu Thr His Pro 225 230 235 240 Thr Thr Leu Gln Gly Ala lie Arg Arg Glu Pro Thr Ser Ser Pro Leu 245 250 255 Tyr Ser Tyr Thr Thr Asp Gly Asn Asp Thr Val Thr Glu Ser Ser Asp 260 265 270 Gly Leu Trp Asn Asn Asn Gln Thr Gln Leu Phe Leu Glu His Ser Leu 275 280 285 Leu Thr Ala Asn Thr Thr Lys Gly lie Tyr Ala Gly Val Cys lie Ser 290 295 300 Val Leu Val Leu Leu Ala Leu Leu Gly Val lie lie Ala Lys Lys Tyr 305 310 315 320 Phe Phe Lys Lys Glu Val Gln Gln Leu Ser Val Ser Phe Ser Ser Leu 325 330 335 Gln lie Lys Ala Leu Gln Asn Ala Val Glu Lys Glu Val Gln Ala Glu 340 345 350 Asp Asn lie Tyr lie Glu Asn Ser Leu Tyr Ala Thr Asp 355 360 365 <210> 22 <211> 1098 <212> ADN <213> H. sapiens <400> 22 atgcatcctc aagtggtcat cttaagcctc atcctacatc tggcagattc tgtagctggt 60 tctgtaaagg ttggtggaga ggcaggtcca tctgtcacac taccctgcca ctacagtgga 120 gctgtcacat caatgtgctg gaatagaggc tcatgttctc tattcacatg ccaaaatggc 180 attgtctgga ccaatggaac ccacgtcacc tatcggaagg acacacgcta taagctattg 240 ggggaccttt caagaaggga tgtctctttg accatagaaa atacagctgt gtctgacagt 300 ggcgtatatt gttgccgtgt tgagcaccgt gggtggttca atgacatgaa aatcaccgta 360 tcattggaga ttgtgccacc caaggtcacg actactccaa ttgtcacaac tgttccaacc 420 gtcacgactg ttcgaacgag caccactgtt ccaacgacaa cgactgttcc aatgacaacg 480 actgttccaa cgacaactgt tccaacaaca atgagcattc caacgacaac gactgttccg 540 acgacaatga ctgtttcaac gacaacgagc gttccaacga caacgagcat tccaacaaca 600 acaagtgttc cagtgacaac arcggtctct acctttgttc ctccaatgcc tttgcccagg 660 cagaaccatg aaccagtagc cacttcacca tcttcacctc agccagcaga aacccaccct 720 acgacactgc agggagcaat aaggagagaa cccaccagct caccattgta ctcttacaca 780 acagatggga atgacaccgt gacagagtct tcagatggcc tttggaataa caatcaaact 840 caactgttcc tagaacatag tctactgacg gccaatacca ctaaaggaat ctatgctgga 900 gtctgtattt ctgtcttggt gcttcttgct cttttgggtg tcatcattgc caaaaagtat 960 ttcttcaaaa aggaggttca acaactaagt gtttcattta gcagccttca aattaaagct 1020 ttgcaaaatg cagttgaaaa ggaagtccaa gcagaagaca atatctacat tgagaatagt 1080 ctttatgcca cggactaa 1098 <210> 23 <211> 359 <212> PRT <213> H. sapiens <220> <221> VARIANTE <222> (1) ... (359) <223> TIM-1, alelo 4 <400> 23 Met His Pro Gln Val Val lie Leu Ser Leu lie Leu His Leu Ala Asp 1 5 10 15 Ser Val Ala Gly Ser Val Lys Val Gly Gly Glu Ala Gly Pro Ser Val 20 25 30 Thr Leu Pro Cys His Tyr Ser Gly Ala Val Thr Ser Met Cys Trp Asn 35 40 45 Arg Gly Ser Cys Ser Leu Phe Thr Cys Gln Asn Gly lie Val Trp Thr 50 55 60 Asn Gly Thr His Val Thr Tyr Arg Lys Asp Thr Arg Tyr Lys Leu Leu 65 70 75 80 Gly Asp Leu Ser Arg Arg Asp Val Ser Leu Thr lie Glu Asn Thr Ala 85 90 95 Val Ser Asp Ser Gly Val Tyr Cys Cys Arg Val Glu His Arg Gly Trp 100 105 110 Phe Asn Asp Met Lys lie Thr Val Ser Leu Glu lie Val Pro Pro Lys 115 120 125 Val Thr Thr Thr Pro lie Val Thr Thr Val Pro Thr Val Thr Thr Val 130 135 140 Arg Thr Ser Thr Thr Val Pro Thr Thr Thr Thr Val Pro Thr Thr Thr 145 150 155 160 Val Pro Thr Thr Met Ser lie Pro Thr Thr Thr Thr Val Pro Thr Thr 165 170 175 Met Thr Val Ser Thr Thr Thr Ser Val Pro Thr Thr Thr Ser lie Pro 180 185 190 Thr Thr Thr Ser Val Pro Val Thr Thr Ser Val Ser Thr Phe Val Pro 195 200 205 Pro Met Pro Leu Pro Arg Gln Asn His Glu Pro Val Ala Thr Ser Pro 210 215 220 Ser Ser Pro Gln Pro Ala Glu Thr His Pro Thr Thr Leu Gln Gly Thr 225 230 235 240 lie Arg Arg Glu Pro Thr Ser Ser Pro Leu Tyr Ser Tyr Thr Thr Asp 245 250 255 Gly Asn Asp Thr Val Thr Glu Ser Ser Asp Gly Leu Trp Ser Asn Asn 260 265 270 Gln Thr Gln Leu Phe Leu Glu His Ser Leu Leu Thr Ala Asn Thr Thr 275 280 285 Lys Gly lie Tyr Ala Gly Val Cys lie Ser Val Leu Val Leu Leu Ala 290 295 300 Leu Leu Gly Val lie lie Ala Lys Lys Tyr Phe Phe Lys Lys Glu Val 305 310 315 320 Gln Gln Leu Ser Val Ser Phe Ser Ser Leu Gln lie Lys Ala Leu Gln 325 330 335 Asn Ala Val Glu Lys Glu Val Gln Ala Glu Asp Asn lie Tyr lie Glu 340 345 350 Asn Ser Leu Tyr Ala Thr Asp 355 <210> 24 <211> 1079 <212> ADN <213> H. sapiens <400> 24 atgcatcctc aagtggtcat cttaagcctc atcctacatc tggcagattc tgtagctggt 60 tctgtaaagg ttggtggaga ggcaggtcca tctgtcacac taccctgcca ctacagtgga 120 gctgtcacat caatgtgctg gaatagaggc tcatgttctc tattcacatg ccaaaatggc 180 attgtctgga ccaatggaac ccacgtcacc tatcggaagg acacacgcta taagctattg 240 ggggaccttt caagaaggga tgtctctttg accatagaaa atacagctgt gtctgacagt 300 ggcgtatatt gttgccgtgt tgagcaccgt gggtggttca atgacatgaa aatcaccgta 360 tcattggaga ttgtgccacc caaggtcacg actactccaa ttgtcacaac tgttccaacc 420 gtcacgactg ttcgaacgag caccactgtt ccaacgacaa cgactgttcc aacgacaact 480 gttccaacaa caatgagcat tccaacgaca acggactgtt ccgacgacaa tgactgtttc 540 aacgacaacg agcgttccaa cgacaacgag cattccaaca acaacaagtg ttccagtgac 600 aacatgtctc tacctttgtt cctccaatgc ctttgcccag gcagaaccat gaaccagtag 660 ccacttcacc atcttcacct cagccagcag aaacccaccc tacgacactg cagggagcaa 720 taaggagaga acccaccagc tcaccattgt actcttacac aacagatggg aatgacaccg 780 tgacagagtc ttcagatggc ctttggarta acaatcaaac tcaactgttc ctagaacata 840 gtctactgac ggccaatacc actaaaggaa tctatgctgg agtctgtatt tctgtcttgg 900 tgcttcttgc tcttttgggt gtcatcattg ccaaaaagta tttcttcaaa aaggaggttc 960 aacaactaag tgtttcattt agcagccttc aaattaaagc tttgcaaaat gcagttgaaa 1020 aggaagtcca agcagaagac aatatctaca ttgagaatag tctttatgcc acggactaa 1079 <210> 25 <211> 364 <212> PRT <213> H. sapiens <220> <221> VARIANTE <222> (1) ... (364) <223> TIM-1, alelo 5 <400> 25 Met His Pro Gln Val Val lie Leu Ser Leu lie Leu His Leu Ala Asp 1 5 10 15 Ser Val Ala Gly Ser Val Lys Val Gly Gly Glu Ala Gly Pro Ser Val 20 25 30 Thr Leu Pro Cys His Tyr Ser Gly Ala Val Thr Ser Met Cys Trp Asn 35 40 45 Arg Gly Ser Cys Ser Leu Phe Thr Cys Gln Asn Gly lie Val Trp Thr 50 55 60 Asn Gly Thr His Val Thr Tyr Arg Lys Asp Thr Arg Tyr Lys Leu Leu 65 70 75 80 Gly Asp Leu Ser Arg Arg Asp Val Ser Leu Thr lie Glu Asn Thr Ala 85 90 95 Val Ser Asp Ser Gly Val Tyr Cys Cys Arg Val Glu His Arg Gly Trp 100 105 110 Phe Asn Asp Met Lys lie Thr Val Ser Leu Glu lie Val Pro Pro Lys 115 120 125 Val Thr Thr Thr Pro lie Val Thr Thr Val Pro Thr Val Thr Thr Val 130 135 140 Arg Thr Ser Thr Thr Val Pro Thr Thr Thr Thr Val Pro Met Thr Thr 145 150 155 160 Thr Val Pro Thr Thr Thr Val Pro Thr Thr Met Ser lie Pro Thr Thr 165 170 175 Thr Thr Val Pro Thr Thr Met Thr Val Ser Thr Thr Thr Ser Val Pro 180 185 190 Thr Thr Thr Ser lie Pro Thr Thr Ser Val Pro Val Thr Thr Thr Val 195 200 205 Ser Thr Phe Val Pro Pro Met Pro Leu Pro Arg Gln Asn His Glu Pro 210 215 220 Val Ala Thr Ser Pro Ser Ser Pro Gln Pro Ala Glu Thr His Pro Thr 225 230 235 240 Thr Leu Gln Gly Ala lie Arg Arg Glu Pro Thr Ser Ser Pro Leu Tyr 245 250 255 Ser Tyr Thr Thr Asp Gly Asn Asp Thr Val Thr Glu Ser Ser Asp Gly 260 265 270 Leu Trp Asn Asn Asn Gln Thr Gln Leu Phe Leu Glu His Ser Leu Leu 275 280 285 Thr Ala Asn Thr Thr Lys Gly lie Tyr Ala Gly Val Cys lie Ser Val 290 295 300 Leu Val Leu Leu Ala Leu Leu Gly Val lie lie Ala Lys Lys Tyr Phe 305 310 315 320 Phe Lys Lys Glu Val Gln Gln Leu Ser Val Ser Phe Ser Ser Leu Gln 325 330 335 lie Lys Ala Leu Gln Asn Ala Val Glu Lys Glu Val Gln Ala Glu Asp 340 345 350 Asn lie Tyr lie Glu Asn Ser Leu Tyr Ala Thr Asp 355 360 <210> 26 <211> 1095 <212> ADN <213> H. sapiens <400> 26 atgcatcctc aagtggtcat cttaagcctc atcctacatc tggcagattc tgtagctggt 60 tctgtaaagg ttggtggaga ggcaggtcca tctgtcacac taccctgcca ctacagtgga 120 gctgtcacat caatgtgctg gaatagaggc tcatgttctc tattcacatg ccaaaatggc 180 attgtctgga ccaatggaac ccacgtcacc tatcggaagg acacacgcta taagctattg 240 ggggaccttt caagaaggga tgtctctttg accatagaaa atacagctgt gtctgacagt 300 ggcgtatatt gttgccgtgt tgagcaccgt gggtggttca atgacatgaa aatcaccgta 360 tcattggaga ttgtgccacc caaggtcacg actactccaa ttgtcacaac tgttccaacc 420 gtcacgactg ttcgaacgag caccactgtt ccaacgacaa cgactgttcc aatgacaacg 480 actgttccaa cgacaactgt tccaacaaca atgagcattc caacgacaac gactgttccg 540 acgacaatga ctgtttcaac gacaacgagc gttccaacga caacgagcat tccaacaaca 600 agtgttccag tgacaacaac ggtctctacc tttgttcctc caatgccttt gcccaggcag 660 aaccatgaac cagtagccac ttcaccatct tcacctcagc cagcagaaac ccaccctacg 720 acactgcagg gagcaataag gagagaaccc accagctcac cattgtactc ttacacaaca 780 gatgggaatg acaccgtgac agagtcttca gatggccttt ggaataacaa tcaaactcaa 840 ctgttcctag aacatagtct actgacggcc aataccacta aaggaatcta tgctggagtc 900 tgtatttctg tcttggtgct tcttgctctt ttgggtgtca tcattgccaa aaagtatttc 960 ttcaaaaagg aggttcaaca actaagtgtt tcatttagca gccttcaaat taaagctttg 1020 caaaatgcag ttgaaaagga agtccaagca gaagacaata tctacattga gaatagtctt 1080 tatgccacgg actaa 1095 <210> 27 <211> 364 <212> PRT <213> H. <220> <221> VARIANTE <222> (1) ... (364) <223> TI -1, alelo <40 0> 27 Met His Pro Gln Val Val lie Leu Ser Leu lie Leu His Leu Ala Asp 1 5 10 15 Ser Val Ala Gly Ser Val Lys Val Gly Gly Glu Ala Gly Pro Ser Val 20 25 30 Thr Leu Pro Cys His Tyr Ser Gly Ala Val Thr Ser Met Cys Trp Asn 35 40 45 Arg Gly Ser Cys Ser Leu Phe Thr Cys Gln Asn Gly lie Val Trp Thr 50 55 60 Asn Gly Thr His Val Thr Tyr Arg Lys Asp Thr Arg Tyr Lys Leu Leu 65 70 75 80 Gly Asp Leu Ser Arg Arg Asp Val Ser Leu Thr lie Glu Asn Thr Ala 85 90 95 Val Ser Asp Ser Gly Val Tyr Cys Cys Arg Val Glu His Arg Gly Trp 100 105 110 Phe Asn Asp Met Lys lie Thr Val Ser Leu Gly lie Val Pro Pro Lys 115 120 125 Val Thr Thr Thr Pro lie Val Thr Thr Val Pro Thr Val Thr Thr Val 130 135 140 Arg Thr Ser Thr Thr Val Pro Thr Thr Thr Thr Val Pro Met Thr Thr 145 150 155 160 Thr Val Pro Thr Thr Thr Val Pro Thr Thr Met Ser lie Pro Thr Thr 165 170 175 Thr Thr Val Pro Thr Thr Met Thr Val Ser Thr Thr Thr Ser Val Pro 180 185 190 Thr Thr Thr Ser lie Pro Thr Thr Ser Val Pro Val Thr Thr Thr Val 195 200 205 Ser Thr Phe Val Pro Pro Met Pro Leu Pro Arg Gln Asn His Glu Pro 210 215 220 Val Ala Thr Ser Pro Ser Ser Pro Gln Pro Ala Glu Thr His Pro Thr 225 230 235 240 Thr Leu Gln Gly Ala lie Arg Arg Glu Pro Thr Ser Ser Pro Leu Tyr 245 250 255 Ser Tyr Thr Thr Asp Gly Asp Asp Thr Val Thr Glu Ser Ser Asp Gly 260 265 270 Leu Trp Asn Asn Asn Gln Thr Gln Leu Phe Leu Glu His Ser Leu Leu 275 280 285 Thr Ala Asn Thr Thr Lys Gly lie Tyr Ala Gly Val Cys lie Ser Val 290 295 300 Leu Val Leu Leu Ala Leu Leu Gly Val lie lie Ala Lys Lys Tyr Phe 305 310 315 320 Phe Lys Lys Glu Val Gln Gln Leu Ser Val Ser Phe Ser Ser Leu Gln 325 330 335 lie Lys Ala Leu Gln Asn Ala Val Glu Lys Glu Val Gln Ala Glu Asp 340 345 350 Asn lie Tyr lie Glu Asn Ser Leu Tyr Ala Thr Asp 355 360 <210> 28 <211> 1099 <212> ADN <213> H." sapiens <400> 28 atgcatcctc aagtggtcat cttaagcctc atcctacatc tggcagattc tgtagctggt 60 tctgtaaagg ttggtggaga ggcaggtcca tctgtcacac taccctgcca ctacagtgga 120 gctgtcacat caatgtgctg gaatagaggc tcatgttctc tattcacatg ccaaaatggc 180 attgtctgga ccaatggaac ccacgtcacc tatcggaagg acacacgcta taagctattg 240 ggggaccttt caagaaggga tgtctctttg accatagaaa atacagctgt gtctgacagt 300 ggcgtatatt gttgccgtgt tgagcaccgt gggtggttca atgacatgaa aatcaccgta 360 tcattggaga ttgtgccacc caaggtcacg actactccaa ttgtcacaac tgttccaacc 420 gtcacgactg ttcgaacgag caccactgtt ccaacgacaa cgactgttcc aatgacaacc 480 gactgttcca acgacaactg ttccaacaac aatgagcatt ccaacgacaa cgactgttcc 540 gacgacaatg actgtttcaa cgacaacgag cgttccaacg acaacgagca ttccaacaac 600 aacaagtgtt ccagtgacaa caacggtctc tacctttgtt cctccaatgc ctttgcccag 660 gcagaaccat gaaccagtag ccacttcacc atcttcacct cagccagcag aaacccaccc 720 tacgacactg cagggagcaa taaggagaga acccaccagc tcaccattgt actcttacac 780 aacagatggg gatgacaccg tgacagagtc ttcagatggc ctttggaata acaatcaaac 840 tcaactgttc ctagaacata gtctactgac ggccaatacc actaaaggaa tctatgctgg 900 agtctgtatt tctgtcttgg tgcttcttgc tcttttgggt gtcatcattg ccaaaaagta 960 tttcttcaaa aaggaggttc aacaactaag tgtttcattt agcagccttc aaattaaagc 1020 tttgcaaaat gcagttgaaa aggaagtcca agcagaagac aatatctaca ttgagaatag 1080 tctttatgcc acggactaa 1099 <210> 29 <211> 301 <212> PRT <213> H. sapiens <220> <221> VARIANTE <222> (1) ... (301) <223> TIM-3, alelo 1 <400> 29 Met Phe Ser His Leu Pro Phe Asp Cys Val Leu Leu Leu Leu Leu Leu 1 5 10 15 Leu Leu Xhr Arg Ser Ser Glu Val Glu Tyr Arg Ala Glu Val Gly Gln 20 25 30 Asn Ala Tyr Leu Pro Cys Phe Tyr Thr Pro Ala Ala Pro Gly Asn Leu 35 40 45 Val Pro Val Cys Trp Gly Lys Gly Ala Cys Pro Val Phe Glu Cys Gly 50 55 60 Asn Val Val Leu Arg Thr Asp Glu Arg Asp Val Asn Tyr Trp Thr Ser 65 70 75 80 Arg Tyr Trp Leu Asn Gly Asp Phe Arg Lys Gly Asp Val Ser Leu Thr 85 90 95 lie Glu Asn Val Thr Leu Ala Asp Ser Gly lie Tyr Cys Cys A g lie 100 105 110 Gln lie Pro Gly lie Met Asn Asp Glu Lys Phe Asn Leu Lys Leu Val 115 120 125 lie Lys Pro Ala Lys Val Thr Pro Ala Pro Thr Arg Gln Arg Asp Phe 130 135 140 Thr Ala Ala Phe Pro Arg Met Leu Thr Thr Arg Gly His Gly Pro Ala 145 150 155 160 Glu Thr Gln Thr Leu Gly Ser Leu Pro Asp lie Asn Leu Thr Gln lie 165 170 175 Ser Thr Leu Ala Asn Glu Leu Arg Asp Ser Arg Leu Ala Asn Asp Leu 180 185 190 Arg Asp Ser Gly Ala Thr lie Arg lie Gly lie Tyr lie Gly Ala- Gly 195 200 205 lie Cys Ala Gly Leu Ala Leu Ala Leu lie Phe Gly Ala Leu lie Phe 210 215 220 Lys Trp Tyr Ser His Ser Lys Glu Lys lie Gln Asn Leu Ser Leu lie 225 230 235 240 Ser Leu Ala Asn Leu Pro Pro Ser Gly Leu Ala Asn Ala Val Ala Glu 245 250 255 Gly lie Arg Ser Glu Glu Asn lie Tyr Thr lie Glu Glu Asn Val Tyr 260 265 270 Glu Val Glu Glu Pro Asn Glu Tyr Tyr Cys Tyr Val Ser Ser Arg Gln 275 280 285 Gln Pro Ser Gln Pro Leu Gly Cys Arg Phe Ala Met Pro 290 295 300 <210> 30 <211> 1116 <212> ADN <213> H. sapiens <400> 30 ggagagttaa aactgtgcct aacagaggtg tcctctgact tttcttctgc aagctccatg 60 ttttcacatc ttccctttga ctgtgtcctg ctgctgctgc tgctactact tacaaggtcc 120 tcagaagtgg aatacagagc ggaggtcggt cagaatgcct atctgccctg cttctacacc 180 ccagccgccc cagggaacct cgtgcccgtc tgctggggca aaggagcctg tcctgtgttt 240 gaatgtggca acgtggtgct caggactgat gaaagggatg tgaattattg gacatccaga 300 tactggctaa atggggattt ccgcaaagga gatgtgtccc tgaccataga gaatgtgact 360 ctagcagaca gtgggatcta ctgctgccgg atccaaatcc caggcataat gaatgatgaa 420 aaatttaacc tgaagttggt catcaaacca gccaaggtca cccctgcacc gactctgcag 480 agagacttca ctgcagcctt tccaaggatg cttaccacca ggggacatgg cccagcagag 540 acacagacac tggggagcct ccctgatata aatctaacac aaatatccac attggccaat 600 gagttacggg actctagatt ggccaatgac ttacgggact ctggagcaac catcagaata 660 ggcatctaca tcggagcagg gatctgtgct gggctggctc tggctcttat cttcggcgct 720 ttaattttca aatggtattc tcatagcaaa gagaagatac agaatttaag cctcatctct 780 ttggccaacc tccctccctc aggattggca aatgcagtag cagagggaat tcgctcagaa 840 gaaaacatct ataccattga agagaacgta tatgaagtgg aggagcccaa tgagtattat 900 tgctatgtca gcagcaggca gcaaccctca caacctttgg gttgtcgctt tgcaatgcca 960 tagatccaac caccttattt ttgagcttgg tgttttgtct ttttcagaaa ctatgagctg 1020 tgtcacctga ctggttttgg aggttctgtc cactgctatg gagcagagtt ttcccatttt 1080 cagaagataa tgactcacat gggaattgaa ctggga 1116 <210> 31 <211> 301 <212> PRT <213> H. <220> <221> VARIANTE <222> (1) ... (301) <223> TIM-3, alelo 2 <400> 31 Met Phe Ser His Leu Pro Phe Asp Cys Val Leu Leu Leu Leu Leu Leu 1 5 10 15 Leu Leu Thr Arg Ser Ser Glu Val Glu Tyr Arg Ala Glu Val Gly Gln 20 25 30 Asn Ala Tyr Leu Pro Cys Phe Tyr Thr Pro Ala Ala Pro Gly Asn Leu 35 40 45 Val Pro Val Cys Trp Gly Lys Gly Ala Cys Pro Val Phe Glu Cys Gly 50 55 60 Asn Val Val Leu Arg Thr Asp Glu Arg Asp Val Asn Tyr Trp Thr Ser 65 70 75 80 Arg Tyr Trp Leu Asn Gly Asp Phe Arg Lys Gly Asp Val Ser Leu Thr 85 90 95 lie Glu Asn Val Thr Leu Ala Asp Ser Gly lie Tyr Cys Cys Arg lie 100 105 110 Gln lie Pro Gly lie Met Asn Asp Glu Lys Phe Asn Leu Lys Leu Val 115 120 125 Ile Lys Pro Ala Lys Val Thr Pro Ala Pro Thr Leu Gln Arg Asp Phe 130 135 140 Thr Ala Ala Phe Pro Arg Met Leu Thr Thr Arg Gly His Gly Pro Ala 145 150 155 160 Glu Thr Gln Thr Leu Gly Ser Leu Pro Asp lie Asn Leu Thr Gln lie 165 170 175 Ser Thr Leu Ala Asn Glu Leu Arg Asp Ser Arg Leu Ala Asn Asp Leu 180 185 190 Arg Asp Ser Gly Ala Thr lie Arg lie Gly lie Tyr lie Gly Ala Gly 195 200 205 lie Cys Ala Gly Leu Ala Leu Ala Leu lie Phe Gly Ala Leu lie Phe 210 215 220 Lys Trp Tyr Ser His Ser Lys Glu Lys lie Gln Asn Leu Ser Leu He 225 230 235 240 Ser Leu Ala Asn Leu Pro Pro Ser Gly Leu Ala Asn Ala Val Ala Glu 245 250 255 Gly lie Arg Ser Glu Glu Asn lie Tyr Thr lie Glu Glu Asn Val Tyr 260 265 270 Glu Val Glu Glu Pro Asn Glu Tyr Tyr Cys Tyr Val Ser Ser Arg Gln 275 280 285 Gln Pro Ser Gln Pro Leu Gly Cys Arg Phe Ala Met Pro 290 295 300 <210> 32 <211> 1116 <212> ADN <213> H. sapiens <400> 32 ggagagttaa aactgtgcct aacagaggtg tcctctgact tttcttctgc aagctccatg 60 ttttcacatc ttccctttga ctgtgtcctg ctgctgctgc tgctactact tacaaggtcc 120 tcagaagtgg aatacagagc ggaggtcggt cagaatgcct atctgccctg cttctacacc 180 ccagccgccc cagggaacct cgtgcccgtc tgctggggca aaggagcctg tcctgtgttt 240 gaatgtggca acgtggtgct caggactgat gaaagggatg tgaattattg gacatccaga 300 tactggctaa atggggattt ccgcaaagga gatgtgtccc tgaccataga gaatgtgact 360 ctagcagaca gtgggatcta ctgctgccgg atccaaatcc caggcataat gaatgatgaa 420 aaatttaacc tgaagttggt catcaaacca gccaaggtca cccctgcacc gactcggcag 480 agagacttca ctgcagcctt tccaaggatg cttaccacca ggggacatgg cccagcagag 540 acacagacac tggggagcct ccctgatata aatctaacac aaatatccac attggccaat 600 gagttacggg actctagatt ggccaatgac ttacgggact ctggagcaac catcagaata 660 ggcatctaca tcggagcagg gatctgtgct gggctggctc tggctcttat cttcggcgct 720 ttaattttca aatggtattc tcatagcaaa gagaagatac agaatttaag cctcatctct 780 ttggccaacc tccctccctc aggattggca aatgcagtag cagagggaat tcgctcagaa 840 gaaaacatct ataccattga agagaacgta tatgaagtgg aggagcccaa tgagtattat 900 tgctatgtca gcagcaggca gcaaccctca caacctttgg gttgtcgctt tgcaatgcca 960 tagatccaac caccttattt ttgagcttgg tgttttgtct ttttcagaaa ctatgagctg 1020 tgtcacctga ctggttttgg aggttctgtc cactgctatg gagcagagtt ttcccatttt 1080 cagaagataa tgactcacat gggaattgaa ctggga 1116 <210> 33 <211> 378 <212> PRT <213> H. sapiens <220> <221> VARIANTE <222> (1) ... (378) <223> TIM-4, alelo <400> 33 Met Ser Lys Glu Pro Leu lie Leu Trp Leu Met lie Glu Phe Trp Trp 1 5 10 15 Leu Tyr Leu Thr Pro Val Thr Ser Glu Thr Val Val Thr Glu Val Leu 20 25 30 Gly His Arg Val Thr Leu Pro Cys Leu Tyr Ser Ser Trp Ser His Asn 35 40 45 Ser Asn Ser Met Cys Trp Gly Lys Asp Gln Cys Pro Tyr Ser Gly Cys 50 55 60 Lys Glu Ala Leu lie Arg Thr Asp Gly Met Arg Val Thr Ser Arg Lys 65 70 75 80 Ser Ala Lys Tyr Arg Leu Gln Gly Thr lie Pro Arg Gly Asp Val Ser 85 90 95 Leu Thr lie Leu Asn Pro Ser Glu Ser Asp Ser Gly Val Tyr Cys Cys 100 105 110 Arg lie Glu Val Pro Gly Trp Phe Asn Asp Val Lys lie Asn Val Arg 115 120 125 Leu Asn Leu Gln Arg Ala Ser Thr Thr Thr His Arg Thr Ala Thr Thr 130 135 140 Thr Thr Arg Arg Thr Thr Thr Thr Ser Pro Thr Thr Thr Arg Gln Met 145 150 155 160 Thr Thr Thr Pro Ala Ala Leu Pro Thr Thr Val Val Thr Thr Pro Asp 165 170 175 Leu Thr Thr Gly Thr Pro Leu Gln Met Thr Thr lie Ala Val Phe Thr 180 185 190 Thr Ala Asn Thr Cys Leu Ser Leu Thr Pro Ser Thr Leu Pro Glu Glu 195 200 205 Ala Thr Gly Leu Leu Thr Pro Glu Pro Ser Lys Glu Gly Pro lie Leu 210 215 220 Thr Ala Glu Ser Glu Thr Val Leu Pro Ser Asp Ser Trp Ser Ser Ala 225 230 235 240 Glu Ser Thr Ser Ala Asp Thr Val Leu Leu Thr Ser Lys Glu Ser Lys 245 250 255 Val Trp Asp Leu Pro Ser Thr Ser His Val Ser Met Trp Lys Thr Ser 260 265 270 Asp Ser Val Ser Ser Pro Gln Pro Gly Ala Ser Asp Thr Ala Val Pro 275 280 285 Glu Gln Asn Lys Thr Thr Lys Thr Gly Gln Met Asp Gly lie Pro Met 290 295 300 Ser Met Lys Asn Glu Met Pro lie Ser Gln Leu Leu Met He lie Ala 305 310 315 320 Pro Ser Leu Gly Phe Val Leu Phe Ala Leu Phe Val Ala Phe Leu Leu 325 330 335 Arg Gly Lys Leu Met Glu Thr Tyr Cys Ser Gln Lys His Thr Arg Leu 340 345 350 Asp Tyr lie Gly Asp Ser Lys Asn Val Leu Asn Asp Val Gln His Gly 355 360 365 Arg Glu Asp Glu Asp Gly Leu Phe Thr Leu 370 375 <210> 34 <211> 1156 <212> ADN <213> H. sapiens <400> 34 atgtccaaag aacctctcat tctctggctg atgattgagt tttggtggct ttacctgaca 60 ccagtcactt cagagactgt tgtgacggag gttttgggtc accgggtgac tttgccctgt 120 ctgtactcat cctggtctca caacagcaac agcatgtgct gggggaaaga ccagtgcccc 180 tactccggtt gcaaggaggc gctcatccgc actgatggaa tgagggtgac ctcaagaaag 240 tcagcaaaat atagacttca ggggactatc ccgagaggtg atgtctcctt gaccatctta 300 aaccccagtg aaagtgacag cggtgtgtac tgctgccgca tagaagtgcc tggctggttc 360 aacgatgtaa agataaacgt gcgcctgaat ctacagagag cctcaacaac cacgcacaga 420 acagcaacca ccaccacacg cagaacaaca acaacaagcc ccaccaccac ccgacaaatg 480 acaacaaccc cagctgcact tccaacaaca gtcgtgacca cacccgatct cacaaccgga 540 acaccactcc agatgacaac cattgccgtc ttcacaacag caaacacgtg cctttcacta 600 accccaagca cccttccgga ggaagccaca ggtcttctga ctcccgagcc ttctaaggaa 660 gggcccatcc tcactgcaga atcagaaact gtcctcccca gtgattcctg gagtagtgct 720 gagtctactt ctgctgacac tgtcctgctg acatccaaag agtccaaagt ttgggatctc 780 ccatcaacat cccacgtgtc aatgtggaaa acgagtgatt ctgtgtcttc tcctcagcct 840 ggagcatctg atacagcagt tcctgagcag aacaaaacaa caaaaacagg acagatggat 900 ggaataccca tgtcaatgaa gaatgaaatg cccatctccc aactactgat gatcatcgcc 960 ccctccttgg gatttgtgct cttcgcattg tttgtggcgt ttctcctgag agggaaactc 1020 atggaaacct attgttcgca gaaacacaca aggctagact acattggaga tagtaaaaat 1080 gtcctcaatg acgtgcagca tggaagggaa gacgaagacg gcctttttac cctctaacaa 1140 cgcagtagca tgttag 1156 <210> 35 <211> 378 <212> PRT <213> H. sapiens <220> <221> VARIANTE <222> (1) ... (378) <223> TIM-4, alelo 2 <400> 35 Met Ser Lys Glu Pro Leu lie Leu Trp Leu Met lie Glu Phe Trp Trp 1 5 10 15 Leu Tyr Leu Thr Pro Val Thr Ser Glu Thr Val Val Thr Glu Val Leu 20 25 30 Gly His Arg Val Thr Leu Pro Cys Leu Tyr Ser Ser Trp Ser His Asn 35 40 45 Ser Asn Ser Met Cys Trp Gly Lys Asp Gln Cys Pro Tyr Ser Gly Cys 50 55 60 Lys Glu Ala Leu lie Arg Thr Asp Gly Met Arg Val Thr Ser Arg Lys 65 70 75 80 Ser Ala Lys Tyr Arg Leu Gln Gly Thr lie Pro Arg Gly Asp Val Ser 85 90 95 Leu Thr lie Leu Asn Pro Ser Glu Ser Asp Ser Gly Val Tyr Cys Cys 100 105 110 Arg lie Glu Val Pro Gly Trp Phe Asn Asp Val Lys lie Asn Val Arg 115 120 125 Leu Asn Leu Gln Arg Ala Ser Thr Thr Thr His Arg Thr Ala Thr Thr 130 135 140 Thr Thr Arg Arg Thr Thr Thr Thr Ser Pro Thr Thr Thr Arg Gln Met 145 150 155 160 Thr Thr Thr Pro Ala Ala Leu Pro Thr Thr Val Val Thr Thr Pro Asp 165 170 175 Leu Thr Thr Gly Thr Pro Leu Gln Met Thr Thr lie Ala Val Phe Thr 180 185 190 Thr Ala Asn Thr Cys Leu Ser Leu Thr Pro Ser Thr Leu Pro Glu Glu 195 200 205 Ala Thr Gly Leu Leu Thr Pro Glu Pro Ser Lys Glu Gly Pro lie Leu 210 215 220 Thr Ala Glu Ser Glu Thr Val Leu Pro Ser Asp Ser Trp Ser Ser Val 225 230 235 240 Glu Ser Thr Ser Ala Asp Thr Val Leu Leu Thr Ser Lys Glu Ser Lys 245 250 255 Val Trp Asp Leu Pro Ser Thr Ser His Val Ser Met Trp Lys Thr Ser 260 265 270 Asp Ser Val Ser Ser Pro Gln Pro Gly Ala Ser Asp Thr Ala Val Pro 275 280 285 Glu Gln Asn Lys Thr Thr Lys Thr Gly Gln Met Asp Gly lie Pro Met 290 295 300 Ser .Met Lys Asn Glu Met Pro lie Ser Gln Leu Leu Met lie lie Ala 305 310 315 320 Pro Ser Leu Gly Phe Val Leu Phe Ala Leu Phe Val Ala Phe Leu Leu 325 330 335 Arg Gly Lys Leu Met Glu Thr Tyr Cys Ser Gln Lys His Thr Arg Leu 340 345 350 Asp Tyr lie Gly Asp Ser Lys Asn Val Leu Asn Asp Val Gln His Gly 355 360 365 Arg Glu Asp Glu Asp Gly Leu Phe Thr Leu 370 375 <210> 36 <211> 1156 <212> ADN <213> H. sapiens <400> 36 atgtccaaag aacctctcat tctctggctg atgattgagt tttggtggct ttacctgaca 60 ccagtcactt cagagactgt tgtgacggag gttttgggtc accgggtgac tttgccctgt 120 ctgtactcat cctggtctca caacagcaac agcatgtgct gggggaaaga ccagtgcccc 180 tactccggtt gcaaggaggc gctcatccgc actgatggaa tgagggtgac ctcaagaaag 240 tcagcaaaat atagacttca ggggactatc ccgagaggtg atgtctcctt gaccatctta 300 aaccccagtg aaagtgacag cggtgtgtac tgctgccgca tagaagtgcc tggctggttc 360 aacgatgtaa agataaacgt gcgcctgaat ctacagagag cctcaacaac cacgcacaga 420 acagcaacca ccaccacacg cagaacaaca acaacaagcc ccaccaccac ccgacaaatg 480 acaacaaocc cagctgcact tccaacaaca gtcgtgacca cacccgatct cacaaccgga 540 acaccactcc agatgacaac cattgccgtc ttcacaacag caaacacgtg cctttcacta 600 accccaagca cccttccgga ggaagccaca ggtcttctga ctcccgagcc ttctaaggaa 660 gggcccatcc tcactgcaga atcagaaact gtcctcccca gtgattcctg gagtagtgtt 720 gagtctactt ctgctgacac tgtcctgctg acatccaaag agtccaaagt ttgggatctc 780 ccatcaacat cccacgtgtc aatgtggaaa acgagtgatt ctgtgtcttc tcctcagcct 840 ggagcatctg atacagcagt tcctgagcag aacaaaacaa caaaaacagg acagatggat 900 ggaataccca tgtcaatgaa gaatgaaatg cccatctccc aactactgat gatcatcgcc 960 ccctccttgg gatttgtgct cttcgcattg tttgtggcgt ttctcctgag agggaaactc 1020 atggaaacct attgttcgca gaaacacaca aggctagact acattggaga tagtaaaaat 1080 gtcctcaatg acgtgcagca tggaagggaa gacgaagacg gcctttttac cctctaacaa 1140 cgcagtagca tgttag 1156

Claims (1)

152 R E I V I N D I C A C I O N E S 1. Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia del gen TIM de mamífero. 2. Una molécula de ácido nucleico aislada de acuerdo a la reivindicación 1, en donde la secuencia del gen TIM de mamífero es una secuencia humana seleccionada del grupo que consiste de alelos 2, 3, 4, 5, y 6 de TIM-1, TIM-3 y TIM-4. 3. Un ácido nucleico aislado de acuerdo a la reivindicación 1, en donde la secuencia del gen TIM de mamífero es una secuencia de ratón seleccionada del grupo que consiste de TIM-1, TIM-2, TIM-3 y TIM- . . Un ácido nucleico aislado que comprende al menos 20 nucleótidos de secuencia contigua como se establece en cualquiera de las SEC. DE IDENT. NOS.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34 ó 36. 5. Un ácido nucleico aislado que comprende una secuencia establecida en cualesquiera de las SEC. DE IDENT. NOS.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34 ó 36. 6. Una molécula de ácido nucleico aislada de acuerdo a la reivindicación 1, que comprende una sonda para la detección de un polimorfismo de gen TIM. 7. Una disposición de oligonucleótidos que comprende: 153 dos o más sondas de acuerdo a la reivindicación 6. 8. Una célula que comprende una composición de ácido nucleico de acuerdo a la reivindicación 1. 9. Una composición de polipéptido purificado que comprende al menos 50% en peso de la proteina presente como el producto del ácido nucleico de la reivindicación 1 o un fragmento del mismo. 10. El polipéptido purificado de acuerdo a la reivindicación 9, en donde el polipéptido comprende una secuencia como se establece en las SEC. DE IDENT. NOS.: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33 y 35. 11. Un anticuerpo especifico para un polipéptido TIM de mamífero. 12. Un método para detectar una predisposición a asma en un individuo, el método comprende: analizar al individuo por la presencia de al menos un polimorfismo TIM predispuesto, en donde la presencia de tal polimorfismo predispuesto es indicativo de una susceptibilidad incrementada a asma. 13. El método de acuerdo a la reivindicación 12, en donde la etapa de análisis comprende la detección de unión especifica entre el ADN o ARNm genómico del individuo con una sonda o sondas de acuerdo a la reivindicación 6. 14. El método de acuerdo a la reivindicación 12, en 154 donde la etapa de análisis comprende la unión especifica entre las células o proteínas a partir de individuos y el anticuerpo de acuerdo a la reivindicación 11. 15. Un modelo animal transgénico no humano para la función del gen TIM que comprende un reemplazo de un gen TIM. 16. Un método para seleccionar agentes biológicamente activos que modulan la función TIM, el método comprende : combinar un agente biológicamente activo candidato con cualquiera de: (a) un polipéptido TIM de mamífero; (b) una célula que comprende un ácido nucleico que codifica un polipéptido TIM de mamífero; o (c) un modelo animal transgénico no humano para la función del gen TIM; y determinar el efecto de tal agente en la función TIM. 17. El método de acuerdo a la reivindicación 16, en donde el agente biológicamente activo desregula o sobreregula la expresión TIM. 18. El método de acuerdo a la reivindicación 16, en donde el agente biológicamente activo inhibe o incrementa la actividad del polipéptido TIM. 19. Un método para el diagnóstico o presentación de disfunción inmune en un individuo, el método comprende: 155 analizar al individuo para la presencia de al menos un polimorfismo Tim predispuesto; en donde la presencia del polimorfismo predispuesto es indicativo de una susceptibilidad incrementada a la disfunción inmune. 20. Un método para diagnóstico o presentación de cáncer en un individuo, el método comprende: analizar al individuo por la presencia de al menos un polimorfismo TIM predispuesto; en donde la presencia del polimorfismo predispuesto es indicativo de una resistencia incrementada a terapia de cáncer. 21. Un método para el diagnóstico o presentación de cáncer en un individuo, el método comprende: analizar al individuo por la presencia de al menos un perfil de expresión TIM-1 predispuesto; en donde el perfil de expresión de TIM-1 indicativo de una resistencia incrementada a terapia de cáncer. 22. ün método para el diagnóstico o presentación de cáncer en un individuo, el método comprende: analizar al individuo por la presencia de al menos un perfil de expresión TIM-4 predispuesto; en donde el perfil de expresión de TIM-4 es indicativo de una resistencia incrementada a terapia de cáncer. 23. ün método para el tratamiento de un trastorno inmunológico en un individuo, el método comprende: administrar al individuo un agente que modula la 156 función de un polipéptido TIM. 24. El método de acuerdo a la reivindicación 23, en donde el polipéptido TIM es TIM-1 o TIM- . 25. El método de acuerdo a la reivindicación 24, en donde el agente es un anticuerpo o fragmento de anticuerpo especifico para TIM-1. 26. El método de acuerdo a la reivindicación 24, en donde el agente es un compuesto que inhibe la función de TIM-1. 27. El método de acuerdo a la reivindicación 24, en donde el trastorno inmunológico es asma. 28. El método de acuerdo a la reivindicación 24, en donde el trastorno inmunológico es una alergia. 29. El método de acuerdo a la reivindicación 24, en donde el trastorno inmunológico es eczema. 30. El método de acuerdo a la reivindicación 24, en donde el trastorno inmunológico es una enfermedad autoinmune. 31. El método de acuerdo a la reivindicación 23, en donde el agente es un anticuerpo o fragmento de anticuerpo especifico para TIM-4. 32. El método de acuerdo a la reivindicación 30, en donde el agente es un compuesto que inhibe la función de TIM-4. 33. Un método para el tratamiento de malignidad en un individuo, el método comprende: administrar al individuo 157 un agente que modula la función de un polipéptido TIM. 34. El método de acuerdo a la reivindicación 33, en donde el polipéptido TIM es TIM-1. 35. El método de acuerdo a la reivindicación 34, en done el agente es un anticuerpo o fragmento de anticuerpo especifico para TIM-1. 36. El método de acuerdo a la reivindicación 35, en done el agente es un compuesto que inhibe la función de TIM-1 y potencializa el efecto de agentes quimioterapéuticos o terapia de radiación. 37. El método de acuerdo a la reivindicación 33, en donde el polipéptido TIM es TIM-4. 38. El método de acuerdo a la reivindicación 37, en donde el agente es un anticuerpo o fragmento de anticuerpo especifico para TIM-4. 39. El método de acuerdo a la reivindicación 38, en donde el agente es un compuesto que inhibe la función de TIM-4 y potencializa el efecto de agentes quimioterapéuticos o terapia de radiación.