MXPA03005142A

MXPA03005142A - Nuevos factores de crecimiento de fibroblastos.

Info

Publication number: MXPA03005142A
Application number: MXPA03005142A
Authority: MX
Inventors: Onuffer James
Original assignee: Schering Ag
Priority date: 2000-12-08
Filing date: 2001-12-10
Publication date: 2004-10-15
Also published as: EE200300269A; BG107888A; RU2003119657A; IL156259A0; US20080057076A1; WO2002046424A2; WO2002046424A3; NO20032573L; CN1518597A; HUP0400657A1; AU2002226034A2; CA2431374A1; ZA200305236B; PL366158A1; CZ20031570A3; KR20040052442A; US20020151496A1; SK7012003A3; RU2329058C2; SI21372A

Abstract

Se han identificado nuevos acidos nucleicos, secuencias de polipeptido, y reguladores de acido nucleico de los mismos que codifican para un factor de crecimiento de fibroblastos (FGF), de manera preferente FGF-20 o FGF-23, una clase de polipeptidos comprendidos en el desarrollo, diferenciacion y morfogenesis, por ejemplo, en la senalizacion celula-celula y en la proliferaci6n celular. Un FGF de la presente invencion fragmentos del mismo, y derivados del mismo, tiene una o mas de las siguientes propiedades biologicas, por ejemplo, promover la curacion de heridas, promover la supervivencia neuronal; estimular la proliferacion celular, por ejemplo, proliferacion de celulas madre, fibroblastos, neuronas, glia, oligodendrocitos, celulas de Schwann o progenitores de los mismos; modular la diferenciacion de las celulas; inducir desarrollo embri6nico; estimular la excrecencia de neuritas; mejorar la recuperacion de dano neuronal o nervios; estimular la mielinacion; estimular la angiogenesis, para la actividad de union al receptor; para modular la tumorigenesis, etc.

Description

NUEVOS FACTORES DE CRECIMIENTO DE FIBROBLASTOS Esta solicitud reclama la prioridad de la solicitud provisional No. de serie 60/251,837, presentada el 8 de diciembre de 2000, que se incorpora por referencia en la presente en su totalidad.

Antecedentes de la Invención Los factores de crecimiento de fibroblastos juegan un papel importante en una variedad de funciones biológicas, incluyendo, por ejemplo, proliferación y diferenciación, y desarrollo celular.

Descripción de_la Invenc ion Se han identificado nuevos ácidos nucleicos, secuencias de polipéptido y reguladores de ácido nucleico de los mismos, que codifican para un factor de crecimiento de fibroblastos (FGF) , de manera preferente el FGF-20 (llamado FGF-21 en la solicitud provisional que corresponde a esta solicitud) o el FGF-23 (que es el mismo como el FGF-22 publicado) , una nueva clase de polipéptidos comprendidos en el desarrollo, diferenciación y morfogénesis, por ejemplo, en la señalización célula-célula y la proliferación celular. Un FGF de la presente invención, fragmentos del mismo, y derivados del mismo, tienen una o más de las siguientes actividades biológicas, incluyendo de manera enunciativa y sin limitación: actividad de FGF; y una actividad inmunogénica específica a FGF. De acuerdo con la presente invención, se han identificado al menos dos nuevas clases de FGF, por ejemplo, FGF-20 y FGF-23. Una "actividad de FGF" significa, por ejemplo, promover la curación de heridas, promover la supervivencia neuronal; estimular la proliferación celular, por ejemplo, proliferación de células madre, ibroblastos, neuronas, glia, oligodendrocitos , células de Schwann, o progenitores de las mismas; modular la diferenciación de células; inducir el desarrollo embriónico; estimular la excrecencia de neuritas; mejorar la recuperación del daño neuronal o de nervios; estimular la mielinación; estimular la angiogénesis ; actividad de unión al receptor; modular la tumorogénesis ; etc. Una "actividad inmunogénica específica de FGF" significa, por ejemplo, que un polipéptido de FGF produce una respuesta inmunitaria que es selectiva para FGF, por ejemplo, una respuesta inmunológica que es selectiva para FGF-20 de mamífero. De esta manera, la estimulación de anticuerpos, células T, macrófagos, células B, células dendríticas, etc., puede ser una secuencia de aminoácidos seleccionada de un FGF de mamífero, por ejemplo, un FGF en las Figuras 1 y 2 , es una actividad inmunogénica especifica. Estas respuestas se pueden mendir por rutina. El FGF tal como el FGF-20 ó -23, es un polipéptido de longitud completa de mamífero que tiene una secuencia de aminoácidos que se puede obtener de una fuente natural y que tiene una o más de las actividades mencionadas con anterioridad. Puede tener las secuencias como se muestra en las Figuras 1 y 2, que tienen un cuadro de lectura abierto que empieza con un codón de inicio y termina con un codón finalizador. Incluye secuencias normales que se presentan de forma natural, secuencias mutantes que se presentan de forma natural, y secuencias polimórficas que se presentan de forma natural, incluyendo polimorfismos individuales de nucleótido (SNP) , etc. Las fuentes naturales incluyen, por ejemplo, células vivas, por ejemplo, obtenidas de tejido u organismos enteros, líneas celulares cultivadas, incluyendo líneas celulares primarias e inmortalizadas, tejidos de biopsia, etc. La presente invención también se refiere a fragmentos de un FGF de mamífero. Los fragmentos son de manera pre erente "biológicamente activos" . Por "biológicamente activo" se quiere decir que el fragmento de polipéptido posee una actividad en el sistema vivo o con los componentes de un sistema vivo. Las actividades biológicas incluyen aquellas mencionadas, por ejemplo, actividad de FGF , tal como la actividad de unión al receptor de FGF, y la actividad inmunogénica de FGF. Se. pueden preparar fragmentos de acuerdo con cualquier método deseado, incluyendo, síntesis química, ingeniería genética, productos de escisión, etc. Un fragmento biológico de un FGF incluye polipéptidos que ha tenido secuencias de aminoácidos removidas o modificadas en ya sea el término carboxi o amino de la proteína. Cualquier fragmento de ácido nucleico, públicamente disponible, y los fragmentos de polipéptido de FGF-20 y FGF-23, o fragmentos homólogos del mismo, se excluyen de la presente invención, por ejemplo, g5762262 que es una secuencia similar identificada de Xenopus leavís. Las secuencias de nucleótidos y de aminoácidos de los ácidos nucleicos públicamente disponibles se pueden identificar al buscar en bases de datos públicamente di sponibles . La presente invención también se refiere a un FGF-20- que tiene una secuencia reducida de los aminoácidos 1 a 211 como se muestra en la Figura 1, y un FGF-23 que tiene una secuencia reducida de los aminoácidos 1 a 169 como se muestra en la Figura 2. El FGF-20 tiene un peso molecular previsto de aproximadamente 23.5 Kdal y un pl previsto de aproximadamente 9.25. El FGF-23 tiene un peso molecular provisto de aproximadamente 19.6 kdal y un pl provisto de aproximadamente 12.32. Para las proteínas, el grado de identidad significa el número de aminoácidos idénticos/número total de residuos de aminoácido en la proteína. El grado de similitud significa (número de residuos idénticos-- de aminoácidos más número de aminoácidos sustituidos de manera conservadora (tal como V para L, etc .) /número total de residuos de aminoácido. Para el ADN, la identidad es la misma como la similitud y significa el número de nucleótidos idénticos/longitud total. Un polipéptido de FGF de la invención, por ejemplo, que tiene una secuencia de aminoácidos como se muestra en las Figuras 1 y 2, se puede analizar por cualquier otro método adecuado para identificar otros dominios estructurales y/o funcionales en el polipéptido, incluyendo regiones que abarcan la membrana, regiones hidrófobas. Por ejemplo, un polipéptido de FGF se puede analizar por los métodos descritos en por ejemplo, Kyte y Doolittle, J. Mol.' Bio., 157: 105,1982; EMBL Protein Predict; Rost y Sander, Proteins, 19: 55-72,1994. Se puede obtener otros homólogos de las FGF de la presente invención a partir de fuentes de mamífero y no de mamífero de acuerdo a varios métodos. Por ejemplo, la irrigación con oligonucleotidos derivados de las Figuras 1 y 2 se puede emplear para seleccionar homólogos, por ejemplo, como se describe en Sambrook et al., Molecular Cloning, Chapter 11,1989. Estos homólogos pueden tener cantidades variables de identidad y similitud de la secuencia de nucleótidos y de aminoácidos al GEN. Los organismos mamíferos incluyen, por ejemplo, roedores, ratón, ratas, hámster, monos, cerdos, vacas, etc. Los organismos no mamíferos, incluyen, por ejemplo, vertebrados, invertebrados, cebra, pollos, Drosophila, C. elegans, Xenopus , levadura tal como S. pombe, S. cerevisiae, ascárides, procariotas, plantas, Arabidopsis, virus, artemia, etc. La invención también se refiere a secuencias de aminoácidos específicas de FGF, por ejemplo, una secuencia definida de aminoácidos que se encuentra en las secuencias particulares de las Figuras 1 y 2, las porciones conservadas de aminoácidos encontradas en los FGF de la presente invención. Las comparaciones entre las proteínas relacionadas, tal como otros FGF relacionadas (ver, por ejemplo, Venkataraman et al., Proc . Nati. Acad. Sci., 96: 3658-3663, 1999), se pueden usar para seleccionar secuencias específicas para los FGF. Por ejemplo, las secuencias de proteínas de FGF-20 y -23 se alinearon, y las porciones de aminoácidos que se generaron en base a las áreas conservadas de homología como se muestra en las Figuras 1 y 2. La presente invención se refiere a cualquier ácido nucleico o secuencias de polipéptidos del mismo, por ejemplo, polipéptidos que comprenden tres o más residuos homólogos o conservados, tal como por ejemplo, LYGS , HFLP, VQGTR, RIEENGHNTY, QFEENWYNTY, AGTPSA, AAERSA, etc. Se pueden encontrar por rutina otras secuencias específicas y/o conservadas de aminoácidos, por ejemplo, al buscar en una base de datos de gen/proteínas usando el conjunto BLAST de programa de computadora. Una secuencia de aminoácidos específica de FGF o una porción, puede ser útil para producir péptidos, antígenos para generar una respuesta inmunitaria específica para el mismo. Los anticuerpos obtenidos por esta inmunización se pueden utilizar como una sonda específica para una proteína de FGF de mamífero para propósitos de diagnóstico o de investigación . Como se mencionó, los polipéptidos de la presente invención pueden comprender varias secuencias de aminoácidos a un FGF (por ejemplo, una secuencia de longitud completa, es decir, que tiene un codón de inicio y un fmalizador como se muestra en las Figuras 1 y 2, una secuencia madura de aminoácidos (es decir, donde el polipéptido de FGF se produce como un precursor que se procesa en un polipéptido maduro o fragmentos del mismo) . Los fragmentos útiles incluyen, por ejemplo, fragmentos que comprenden o que consisten micialmente de, cualquiera de los dominios mencionados con anterioridad y las secuencias específicas y conservadas de aminoácidos. Se puede seleccionar un fragmento de un polipéptido de FGF de la presente invención para que tenga una actividad biológica específica, por ejemplo, una actividad de unión al receptor de FGF o una actividad mmunogénica . La medición de estas actividades se describe posteriormente y en los ejemplos. Estos péptidos también se pueden identificar y preparar como se describe en la EP 496, 162. Un fragmento útil puede comprender, o consistir esencialmente de, aproximadamente 9 aminoácidos contiguos, de manera preferente aproximadamente 10, 15, 20, 30, 40, etc. , aminoácidos contiguos de las Figuras 1 y 2. Un polipéptido de la presente invención también puede tener 100 % o menos de identidad de secuencia de aminoácidos a la secuencia de aminoácidos expuesta en las Figuras 1 y 2. Para los propósitos del siguiente análisis: identidad de secuencia significa que el mismo nucleótido o aminoácido que se encuentra en la secuencia expuesta en las Figuras 1 y 2 se encuentra en la posición correspondiente de la(s) secuencia (s) comparada ( s ) . Un polipéptido que tiene menos de 100 % de identidad de secuencia a las secuencias de aminoácidos expuestas en las Figuras 1 y 2 puede contener varias sustituciones de la secuencia que se presenta de manera natural, incluyendo sus ituciones homologas y no homologas de aminoácidos . Ver posteriormente para ejemplos de la sustitución homologa de aminoácidos. La suma de los residuos idénticos y homólogos dividida por el número total de residuos en la secuencia sobre la cual se compara el polipéptido de FGF es igual al por ciento de similitud de secuencia. Para propósitos de calcular la identidad de similitud de secuencias, las secuencias preparadas se pueden alinear y calcular de acuerdo a cualquier método deseado, algoritmo, programa de computadora, etc., incluyendo, por ejemplo, FASTA, BLAST. Un polipéptido que tiene menos de 100 % de identidad de secuencia de aminoácidos a la secuencia de aminoácidos de las Figuras 1 y 2 puede tener aproximadamente 99 %, 98 %, 97 %, 95 %, 90.5 %, 90 %, 85 %, 70 , o tan bajo como aproximadamente 60 % de identidad de secuencia. La presente invención también se refiere a mutaínas de polipéptido del FGF-21 y -23, es decir, cualquier polipéptido que tenga una secuencia de aminoácidos que difiera en la secuencia de aminoácido de una secuencia de aminoácidos obtenible de una fuente natural (un fragmento de un FGF de mamífero no difiere en la secuencia de aminoácidos de un FGF que se presenta de manera natural o que difiere en el número de aminoácidos) . De esta manera, las mutaínas de polipéptido de FGF comprenden sustituciones, inserciones y supresiones de aminoácidos, incluyendo aminoácidos que no se presentan de forma natural . Las mutaínas a una secuencia de aminoácidos de FGF de la invención también se pueden preparar en base a la homología buscando a partir de los bancos de datos de " genes, por ejemplo, Genbank, EMBL . La búsqueda de homología de secuencia - se puede lograr usando varios métodos, incluyendo algoritmos descritos en la familia BLAST de programas de computadora, el algoritmo de Smith- aterman, etc. Se puede introducir una(s) mutaína(s) en una secuencia al identificar y alinear los aminoácidos dentro de un dominio que son idénticos y/o homólogos entre polipéptidos y luego al modificar un aminoácido en base a esta alineación. Por ejemplo, los FGF de la presente invención comparten identidad de secuencia con varios FGF conocidos, por ejemplo, Venkataraman et al., Proc . Nati. Acad . Sci., 96:3658- 3663, 1999. Las alineaciones entre estos polipéptidos, especialmente en los residuos conservados de aminoácidos identificados en la Tabla 1 de Venkataraman et al . , las sustituciones de aminoácidos, pueden identificar residuos cuya modificación se esperará que reduzca, disminuya o elimine una actividad biológica de un FGF, tal como la actividad desviada de receptor, etc. Por ejemplo, donde la alineación revela aminoácidos idénticos conservados entre dos o más dominios, se esperará que la eliminación o sustitución del (los) aminoácidos ( s ) afecte de manera adversa su actividad biológica. La sustitución de aminoácido se pude hacer al reemplazar un aminoácido homólogo por otro. Los aminoácidos homólogos se pueden definir en base al tamaño de la cadena lateral y el grado de polarización incluyendo, no polares pequeños, cisterna, prolina, alanina, treonina, polares pequeños: serina, glicina, aspartato, asparagina, polares grandes: glutamato, glutamina, lisina, arginina, polaridad intermedia: tirosina, histidina, triptofano; no polares grandes: fenilalanina , metionma, leucina, isolecma, valina. Los ácidos homólogos también se pueden agrupar como sigue: grupos R polares sin carga, glicina, serina, treonina, cisteína, tirosina, asparagina, glutamina; aminoácidos ácidos (negativamente cargados), ácido aspártico y ácido glutámico; aminoácidos básicos (positivamente cargados), lisina, arginina, histidina. Los aminoácidos homólogos también incluyen aquellos descritos por Dayhoff en the Atlas of Protein Sequence y Structure 5, 1978, y por Argos en EMBO J., 8, 779-785, 1989. La invención se refiere a polipéptidos de proteína y ácidos nucleicos de muteína que codifican para estos pol ipéptidos . De esta manera, la presente invención se refiere a secuencias de nucleótidos de las Figuras 1 y 2, en donde los ácidos nucleicos codifican para un polipéptido y se sustituyen o suprimen, o ambos, una o más posiciones de aminoácidos, y el polipéptido codificado por el ácido nucleico tiene actividad biológica, tal como mejora de la recuperación de daño neuronal o de nervios. Una muteína de polipéptido, y su nucleótido correspondiente que codifica para la secuencia, puede tener una secuencia de aminoácidos como se expone en las Figuras 1 y 2 excepto donde una o más posiciones se sustituyen por los aminoácidos homólogos, por ejemplo, donde hay 1, 5, 10, 15 ó 20 sustituciones. Puesto que una modificación afecta las actividades mencionadas, se puede medir de acuerdo a los métodos descritos anteriormente, posteriormente y como se conozca por el experto en la técnica. Por ejemplo, varios métodos para analizar la actividad de FGF se conocen en la técnica, por ejemplo, ensayos que miden la supervivencia neuronal y otras actividades neurotrópicas , tal como aquellas descritas en los ejemplos y en anda et al., Int. J. Devl . Neuroso ience , 12(3) : 191-200,1999, y los ensayos de unión al receptor de FGF. Como se mencionó, también se pueden hacer sustituciones de aminoácidos en base a la homología a los otros FGF relacionados. Se pueden seleccionar otras mutaciones por rutina al modificar o mutar una secuencia de nucleótidos de las Figuras 1 y 2, y al seleccionar para estas mutaciones lo que afecta a una o más de sus actividades, por ejemplo, al medir la actividad de acuerdo a los métodos y ejemplos descritos posteriormente . Un FGF de mamífero de la presente invención, fragmentos o polipéptidos sustituidos del mismo, también puede comprende varias modificaciones, donde estas modificaciones incluyen modificación de lípidos, metilación, fosforilación, glicosilación, modificaciones covalentea (por ejemplo, de un grupo R de un aminoácido) , sustitución de aminoácidos, supresión de aminoácidos o adición de aminoácidos. Las modificaciones al polipéptido se pueden lograr de acuerdo a varios métodos, incluyendo métodos recombinantes , sintéticos, químicos, etc. Los polipéptidos de la presente invención (por ejemplo, fragmentos de longitud completa de los mismos, mutaciones de los mismos) se pueden usar de varias maneras, por ejemplo, en ensayos, como inmunógenos para anticuerpos como se describe posteriormente, como agentes biológicamente activos (por ejemplo, que tienen una o más de las actividades asociadas con un FGF de la presente invención) . Un polipéptido que codifica para un FGF de la presente invención, un derivado del mismo, o un fragmento del mismo, se puede combinar con uno o más dominios estructurales, de dominios funcionales, dominios detectables, dominios antigénicos, y/o un polipéptido deseado de interés, en un arreglo que no se presenta en la naturaleza, por ejemplo, que no se presenta de forma natural. Un polipéptido que comprende estas características es un polipéptido quimérico o de fusión. Este polipéptido quimérico se puede preparar de acuerdo a varios métodos, incluyendo métodos químicos, sintéticos, casi sintéticos y/o recombmantes . Un ácido nucleico quimérico que codifica para un polipéptido quimérico puede contener los varios dominios o polipéptidos deseados en un cuadro de lectura abierto continuo (por ejemplo con múltiples dominios N- terminales para estabilizar o mejorar o intensificar la actividad) o interrumpidos, por ejemplo, que contienen intrones, sitios de empalme, intensificadores , etc. El ácido nucleico quimérico se puede producir de acuerdo a varios métodos. Tal, por ejemplo, patente de los Estados Unidos No. 5,439,819. Un domino o polipéptido deseado puede poseer cualquier propiedad deseada, incluyendo, una función biológica tal como señalización, promoción de crecimiento, selección celular de objetivo (por ejemplo, secuencia de señal, secuencia de selección de objetivo, tal como la selección de objetivo del retículo o núcleo endoplasmático) , etc., función estructural tal como función hidrófoba, hidrófila, que abarca la membrana, etc., de ligando-receptor, y/o funciones detectables, por ejemplo, combinadas por la enzima, polipéptidos fluorescentes, proteína fluorescente verde (Chalfie et al., Science, 263 : 802, 1994; Cheng et al., Nature, Biotechnology) ; 14:606, 1996; Levy et al., Nature Biotechnology, 14:610, 1996), etc. Además, se puede usar un polipéptido o una parte del mismo como un marcador seleccionable cuando se introduce en una célula hospedadora. Por ejemplo, se puede fusionar un ácido nucleico que codifica para una secuencia de aminoácidos de acuerdo a la presente invención, en cuadro a una secuencia deseada de codificación y actuar como una marca para propósitos de purificación, selección o marcado. La región de fusión puede codificar para un tipo de escisión para facilitar la expresión, aislamiento, purificación, etc.

Un polipéptido de acuerdo a la presente invención se puede producir en un sistema de expresión, por ejemplo, in vivo, in vitro, libre de células, recombinante , fusión celular, etc., de acuerdo a la presente invención. Las modificaciones al polipéptido impartidas por estos sistemas incluyen glicosilación, sustitución de aminoácidos (por ejemplo, por uso de diferentes codones) , procesamiento de polipéptidos tal como digestión, escisión, actividad de endopeptidasa o exopept idas , unión de porciones químicas, incluyendo lípidos y fosfatos, etc. Un polipéptido de acuerdo con la presente invención se puede recuperar de agentes naturales, células hospedadoras transformadas (medio de cultivo o células) de acuerdo a los métodos usuales, incluyendo extracción con detergente (por ejemplo, detergente no iónioco, Tritón X-100, CHAPS, octilglucósido, Igepal CA-630) ,' sulfato de amino o precipitación con etanol, extracción con ácido, cromatografía de intercambio aniónico o catiónico, cromatografía con fosfocelulos , cromatografí de interacción hidrófoba, cromatografía con hidroxiapatita , cromatografí con lectina, electroforesís en gel . Se pueden usar pasos de replegado de proteína, conforme sea necesario en la conclusión de la configuración de la proteína más dura. Finalmente, se puede emplear cromatografía líquida de alto desempeño (HPLC) para los pasos de purificación. También se puede aislar un polipéptido de FGF como se describe para otras proteínas de FGF como el experto en la técnica lo conocerá, por ejemplo, como se describe en lo siguiente que describe el aislamiento de varios FGF, patentes de los Estados Unidos Nos. 5,604,293, 5,395,756, 5,155,214,4,902,782, y Santos -Ocampo et al., J. Biol . Chem., 271:1726-1731, 1996 (purificar FGF de un hospedador bacteriano, tal como E. coli) . Otro planteamiento es expresar de manera recombinante el FGF con una marca de afinidad (epítope de marca, epítope-HA, epítope myc , 6xHis, proteína de unión a maltosa, quitinasa, etc.) y se luego purificar por cromatografía de afinidad conjugada con anticuerpo anti-marca. La presente invención también se refiere a ácidos nucleicos, tal como ADN y ARN que codifican para los polipéptidos de FGF y fragmentos de los mismos, de la presente invención. Un ácido nucleico de FGF (tal como FGF-20 ó -23) ó fragmentos del mismo, es un ácido nucleico que tiene una secuencia de nucleótidos que se puede obtener de un agente natural. Por ejemplo, incluye alelos normales que se presentan de manera natural, alelos mutantes que se presentan de forma natural y alelos polimórficos que se presentan de manera natural (por ejemplo SNP) , etc. Las fuentes naturales incluyen por ejemplo células vivas obtenidas de tejidos y organismos enteros, tumores, líneas celulares cultivadas, incluyendo líneas celulares primarias e inmortalizadas. Una secuencia de ácido nucleico de la invención puede contener la secuencia completa de codificación como se muestra en las Figuras 1 y 2, secuencias degeneradas de las mismas, y fragmentos de las mismas. Un ácido nucleico de acuerdo con la presente invención también puede comprender una secuencia de aminoácidos que es 100 % complementaria, por ejemplo, una secuencia anti-sentido, o cualquier secuencia de nucleótidos mencionada con anterioridad y de forma posterior. Un ácido nucleico de acuerdo a la presente invención se puede obtener de una variedad de fuentes diferentes. Se puede obtener de ADN ó ARN, tal como ARNm poliadenilado, por ejemplo, aislado de tejidos, células u organismos enteros. El ácido nucleico se puede obtener directamente del ADN o ARN, o de una biblioteca de ADN. El ácido nucleico se puede obtener de una célula o te ido por ejemplo, de células esqueléticas o cardiacas embriónicas o adultas o de tejido) en una ventaja particular de desarrollo, que tiene un genotipo deseado, un genotipo, etc. Como se describe para el polipéptido de FGF descrito con anterioridad, un ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica para un polipéptido de acuerdo a la presente invención puede incluir sólo la secuencia de codificación; una secuencia de codificación y una secuencia de codificación adicional (por ejemplo, secuencia que codifican para péptidos guía, secretorios, de selección de objetivo, enzimáticos, fluorescentes u otros péptido de diagnósticos) , secuencias de codificación y secuencias de no codificación, por ejemplo, secuencias no traducidas ya sea en el extremo 5' y 3, o dispersadas en la secuencia de codificación, por ejemplo, mtrones. Un ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica sin interrupción para un polipéptido significa que la secuencia de nucleótidos contiene una secuencia de codificación de aminoácidos para un FGF, con ningún nucleótido de no codificación que interviene la secuencia de codificación, por ejemplo, nitro (es) ausente (es) . Está secuencia de nucleótidos también se puede describir como contiguo. Un ADN genómico que codifica para un gen de FGF de humano, ratón u otro mamífero, etc., se puede obtener por rutina. Un ácido nucleico de acuerdo a la presente invención también puede comprender una secuencia de control de expresión enlazada de. manera operable a un ácido nucleico como se describe anteriormente. La frase "secuencia de control de expresión" significa una secuencia de ácido nucleico que regula la expresión de un i polipéptido codificado por un ácido nucleico al cual está 'i enlazado de manera operable. La expresión se puede regular al nivel del ARNm o polipéptido. De esta manera, la secuencia de control de expresión incluye filamentos relacionados al ARNm y elementos relacionados a la proteína. Estos elementos incluyen promotores, intensificadores (virales o celulares) , secuencias de unión a ribosoma, terminadores transcripcionales , etc. Una secuencia de control de expresión se enlaza de manera operable a una secuencia de codificación de nucleótidos cuando la secuencia de control de expresión se coloca de una manera tal para efectuar o lograr la expresión de la secuencia de codi icación. Por ejemplo, cuando está enlazado de manera operable 5', un promotor, o una secuencia de codificación, se puede activar por el promotor de expresión y la secuencia de codificación. La secuencia de control de expresión puede ser heterólogas o endógenas al gen normal . Un ácido nucleico de acuerdo con la presente invención se puede seleccionar en base a la hibridación de ácido nucleico. La capacidad de dos preparaciones de ácido nucleico de hebra individual para hib idizarse conjuntamente es una medida de su complementariedad de secuencia de nucleótidos, por ejemplo, la formación de pares de base entre nucleótidos, tal como A-T, G-C etc. De esta manera, la invención también se refiere a ácidos nucleicos, y sus complementos, que hibridizan a un ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos como se expone en las Figuras 1 y 2. La secuencia de nucleótidos que hibridiza a esta última secuencia tendrá una hebra complementaria de ácido nucleico, o actúa como una plantilla para una en la presencia de una polimerasa (es decir, una enzima apropiada de síntesis de ácido nucleico) . La presente invención incluye tanto hebras de ácido nucleico, por ejemplo, una hebra homosentido y una hebra antisentido. Se pueden elegir condiciones de hibridación para seleccionar ácidos nucleicos que tiene una cantidad deseada de complementariedad de nucleótidos con la secuencia de nucleótidos expuesta en las Figuras 1 y 2. El ácido nucleico capaz de hibridizar a esta secuencia, de manera preferente, posee por ejemplo cerca de 85 %, de manera más preferente, cerca de 90 %, 92 % y de manera aun más preferente, cerca de 95 %, 97 % ó 100 % de complementariedad, entre las secuencias. La presente invención se refiere de manera particular a secuencias de ácido nucleico que hibridizan a la secuencia de nucleótidos expuesta a las Figuras 1 y 2 bajo condiciones de baja o alta severidad. Los ácidos nucleicos que hibridizan a las secuencias de FGF se pueden seleccionar de varias maneras. Por ejemplo, transferencias (es decir, matrices que contienen ácido nucleico), arreglos de trozos, y otras matrices que comprenden ácidos nucleicos de interés, se pueden incubar en una solución de pre-hioridación (6X SSC. SDS al 0.5 %, 100 de ADN de esperma de salmón desnaturalizado, solución Denhardt 5X y 50 % de formamida) , 30 QC, durante la noche, y luego se hibridizó con una sonda detectable de oligonucleótidos , (ver posteriormente) en una solución de hibridación (por ejemplo, 6X SSC, SDS de 0.5%, 100 µ9/p?1 de ADN esperma de salmón desnaturalizado y 50 % de formamida) , a 42°C durante la noche de acuerdo con procedimientos conocidos. Las transferencias se pueden lavar a condiciones de alta severidad que permiten, por ejemplo, menos de 5 % de malapareamiento de pb (por ejemplo, lavado dos veces en SSC al 0.1 % y SSC al 0.1 % durante 30 minutos a 65°C) , es decir, secuencias de selección que tienen 95 % ó más de identidad de secuencia. Otros ejemplos no limitantes de las condiciones de alta severidad incluyen un lavado final a 65 °C en un amortiguador acuoso que contiene NaCl 30 mM y SDS al 0.5 %. Otro ejemplo de condiciones de alta severidad es de hibridación en SDS al 7 %, NaP04 0.5 M, pH 7, EDTA 1 mM a 50 °C, por ejemplo, durante la noche, por uno o más lavados con solución de SDS al 1 % a 42 °C. En tanto que los lavados de alta severidad pueden permitir menos de 5 % de malapareamiento , condiciones relajadas o de baja severidad de lavado (por ejemplo, lavado dos veces en SSC al 0.2 % y SDS al 0.5 % durante 30 minutos a 37°C) pueden permitir hasta 20 % de malapareamiento. Otro ejemplo no limitante de condiciones de baja severidad incluye un lavado final a 42°C en un amortiguador que contiene NaCl 30 mM y SDS al 0.5 %. El lavado de hibridación también se puede realizar como se describe en Sambrook et al., Molecular Cloning, 1989, Capitulo 9. La hibridación también se puede basar en un cálculo de la temperatura de fusión (Tm) del híbrido formado entre la sonda y su objetivo, como se describe er. Sambrook et al. En general, la temperatura Tm a la cual se fundirá un oligonucleótido corto (que contiene 18 nucleótidos o menos) de su secuencia objetivo se da por la siguiente ecuación. Tm = (número de A y T) x 2°C + (número de C y G) x 4°C. Para moléculas más grandes, Tm 31. 5 + 16.61ogl0 [Na+] + 0.41 (%GC) -6C0/N donde [Na+] es la concentración molar de iones de sodio, % de GC es el porcentaje de pares de base de GC en la sonda, y N es la longitud. La hibridación se puede llevar a cabo a varios grados por deba o de su temperatura para asegurar que pueda hibridizar la sonda y el objetivo. Se pueden permitir malapareamientos al disminuir la temperatura aun más . Se pueden seleccionar condiciones severas para estas secuencias, y sus complementos, que tienen, por ejemplo, al menos aproximadamente 95 %, de manera preferente 97 %, de complementariedad de nucleótidos entre la sonda (por ejemplo un oligonucleo ido de un FGF y ácido nucleico objetivo) . De acuerdo a la presente invención, un ácido nucleico o polipéptido puede comprender una o más diferencias en el nucleótido o secuencia de aminoácidos expuesta en la secuencia 1 y 2. Se pueden lograr cambios o modificaciones a la secuencia de nucleótidos y/o aminoácidos por cualquier método disponible, incluyendo mutagénesis directa o aleatoria. Un ácido nucleico que codifica para un FGF de mamífero, tal como FGF-20 ó -23, de acuerdo con la invención puede comprender nucleótidos que se presentan en el gen de forma natural, por ejemplo, polimorfismos que se presentan de forma natural, alelos normales o mutantes (nucleótido o aminoácidos), mutaciones que se descubren en una población natural de mamíferos, tal como humanos, monos, cerdos, ratones, ratas o conejos. Por ejemplo, un ácido nucleico o polipéptido de FGF humano comprende nucleótidos o aminoácidos que se presentan en una formación humana que se presenta en forma natural . Por el término que se presenta de forma natural, se quiere decir que el ácido nucleico se puede obtener de una fuente natural, por ejemplo, tejido y células de animal, fluidos corporales, células de cultivo de tejido, muestras forenses. Las mutaciones que se presentan de manera natural pueden incluir supresiones (por ejemplo, u aniño- o carboxi -término truncado), sustituciones, inversiones o adiciones de la secuencia de nucleótidos. Estos genes se pueden detectar y aislar por la hibridación de ácido nucleico de acuerdo a métodos que conoce un experto en la técnica. Una secuencia de nucleótidos que codifica para un FGF de mamífero de la invención puede contener codones encontrados en un gen que se presenta de forma natural, un trascripto o un ADNc, por ejemplo, como se expone en las Figuras 1 y 2, o puede contener codones degenerados que codifican para las mismas secuencias de aminoácidos. Por ejemplo, puede ser deseable cambiar los codones en la secuencia para optimizar la secuencia para la expresión en un hospedador deseado . Un ácido nucleico de acuerdo a la presente invención puede comprender, por ejemplo, ADN, A N, ácido nucleico sintético, ácido nucleico peptídico, nucleótidos modificados, o mezclas. Un ADN puede ser de doble hebra o de hebra individual. Los nucleótidos que comprenden un ácido nucleico se pueden unir vía varios enlaces conocidos, por ejemplo, éster, sulfamato, sulfamida, fosforo ioato, fosforamidato , metilfosfonato, carbamato, etc., dependiendo del propósito deseado, por ejemplo, resistencia, a nucleasas, tal como ARNasa H, estabilidad mejorada in vivo, etc. Ver, por ejemplo, patente de los Estados Unidos No. 5,378,825. Se pueden hacer varias modificaciones a los ácidos nucleicos, tal como unir marcadores detectables (avidita, biotina, elementos radioactivos)," porciones que mejoran la hibridación, supresión o estabilidad. Los ácidos nucleicos también se pueden unir a soportes sólidos, por ejemplo, microcelulos , microesferas magnéticas y para -magnét icas (por ejemplo como se describe en las patentes de los Estados Unidos Nos. 5,411,863; 5,543,289; Por ejemplo, que comprende material ferromagnético , supermagnético , paramagné ico , superparamagnét ico , óxido de hierro y pol isacárido) , nailon, agarosa, celulosa diazotizada, microesferas sólidas de látex, poliacrilamidas , etc., de acuerdo a un método deseado. Ver, por ejemplo, patentes de los Estados Unidos Nos. 5,470,967; 5,476,925; 5,478,893. Otro aspecto de la presente invención se refiere a oligonucleótídos o sondas de ácido nucleico. Estos oligonucleótídos o sondas de ácido nucleico se pueden usar, por ejemplo, para detectar, cuantificar o aislar un ácido nucleico de FGF de mamífero en una muestra de prueba, o para identificar homólogos de FGF. En una modalidad preferida, les ácidos nucleicos se pueden utilizar como sondas de oligonucleótídos, por ejemplo en PCR, exhibición diferencial, trozos gémeos (por ejemplo, Affymetrix GeneChips; patente de los Estados Unidos No. 5,143,854, patente de los Estados Unidos No. 5,424,186; patente de los Estados Unidos No. 5,874,219; PCT WO 92/10092; PCT O 90/1507C), y otros métodos disponibles. Puede ser deseable la detección para una variedad de diferentes propósitos, incluyendo propósitos de investigación, de diagnóstico y forense. Para propósitos de diagnóstico, puede ser deseable identificar la presencia o cantidad de una secuencia de ácido nucleico en una muestra, donde la muestra se obtiene de tejido, células, fluidos corporales, etc. En un método preferido, la presente invención se refiere a un método para detectar un ácido nucleico que comprende, poner en contacto un ácido nucleico objetivo en una muestra de prueba en un ol igonucleótido bajo condiciones efectivas para lograr la hibridación entre el objetivo y el ol igonucleó ido y detectar la hibridación. Un oligonucleótido de acuerdo con la invención también se puede usar en amplificación de ácido nucleico sintético tal como PCR (por ejemplo, Saiki et al., Science, 241; 53, 1988; patente de los Estados Unidos No. 4,683,202; PCR Protocols: A Guide to Methods and Applica ions, Innis et al., eds . , Academic Press, New York, 1990); exhibición diferencial (ver, por ejemplo Liang et al., Nucí. Acid. Res., 21:3269-3275, 1993; Patente de los Estados Unidos No. 5,599,672; W097/18454) . Se puede lograr la detección en combinación con oligonucleótidos para otros genes, por ejemplo, genes comprendidos en la transducción de señal, crecimiento, cáncer, apoptosis, o cualquiera de los genes mencionados anteriormente o de forma posterior, etc. También se pueden usar oligonucleótidos para probar las mutaciones, por ejemplo, usando tecnología de reparación de ADN de malapareamiento como se describe en las patentes de los Estados Unidos Nos'. 5,683,877 ; 5,655,430 ; u et al., Proc. Nati. Acad. Sci., 89:8779-8783, 1992. Los oligonucleótidos de la presente invención pueden comprender cualquier secuencia continua de nucleótido de las Figuras 1 y 2 o un complemento de las mismas, o cualquiera de las secuencias, o complementos de las mismas. Estos ol igonucleótidos ( cide nucleico) de acuerdo a la presente invención puede ser de cualquier tamaño deseado, por ejemplo, aproximadamente 10-200 nucleótidos, 12-100, de manera preferente 12-50, 12-25, 14-16, al menos aproximadamente 15, al menos aproximadamente 20, al menos aproximadamente 25, etc. Los ol igonucleot idos pueden tener oligonucleótidos que no se presentan de forma natural, por ejemplo, inopina, AZT, 3TC, etc. Los oligonucleótidos pueden tener 100 % de identidad o complementariedad a una secuencia de las Figuras 1 y 2, o pueden tener malapareamiento o sustituciones de nucleótidos, por ejemplo, 1, 2, 3, 4 ó 5 sustituciones. Por ejemplo, los oligonucleótidos pueden tener 70-99 % de identidad, por ejemplo, 90-95 ó 97 % de identidad, a una secuencia de la Figura 1 ó 2. De acuerdo con la presente invención, el oligonucleótido puede comprender un equipo, donde el equipo incluye un amortiguador deseado (por ejemplo, fosfato, Tris, etc.), composiciones de detección, etc. El oligonucleótido se puede marcar o no estar marcado, con marcas radioactivas o no radioactivas como se conoce en la técnica. Otro aspecto de la presente invención es una secuencia de nucleótidos que es única a un FGF de mamífero. Por una secuencia única a un FGF, se quiere decir un orden definido de nucleótidos que se presentan en FGF , por ejemplo, en las secuencias de nucleótidos de las Figuras 1 y 2, pero que raramente de manera infrecuente se presentan otros ácidos nucleicos, especialmente no en un ácido nucleico de animal, de manera preferente de mamífero, tal como un humano, rata, ratón, etc. Las secuencias únicas de nucleótidos incluyen las secuencias, o complementos de las mismas, que codifican para los aminoácidos como se muestran en 1 y 2 y la Figura 1 y 2. Estas secuencias se pueden usar como sondas en cualquiera de los métodos descritos en la presente o incorporados como referencia. Se incluyen las secuencias de nucleótidos tanto homosentido como antisentido. Un ácido nucleico único de acuerdo a la presente invención se puede determinar por rutina. Un ácido nucleico que comprende esta secuencia única se puede usar como una sonda de hibridación para identificar la presencia de por ejemplo FGF humano o de ratón, en una muestra que comprende una mezcla de ácidos nucleicos, por ejemplo, en una transferencia Northern. La hibridación se puede realizar bajo condiciones de alta severidad (ver, anteriormente) para seleccionar ácidos nucleicos (y sus complementos que pueden contener la secuencia de codificación) que tiene al menos 95 % de identidad (es decir, complementariedad) a la sonda, pero también se pueden usar condiciones menos severas. En la secuencia única de nucleótidos de FGF también se puede fusionar en cuadro, ya sea en su extremo 5' o 3' , a varias secuencias de nucleótidos como se mencionan a todo lo largo de la patente, incluyendo secuencias de codificación para otras partes de FGF, enzimas, GFP, etc. , secuencias de control de expresión, etc. Como ya se analiza, la hibridación se puede realizar bajo condiciones diferentes, dependiendo de la selectividad deseada, por ejemplo, como se describe en Sambrook et al., Molecular Cloning, 1989. Por ejemplo, ¦ para detectar de manera específica el FGF de la presente invención, se puede hibridizar el oligonucleotido a un ácido nucleico objetivo bajo condiciones en las cuales el oligonucleotido sólo lo hibridiza, por ejemplo, donde el oligonucleotido es 100 % complementario al objetivo. Se pueden usar diferentes condiciones, si se desea para seleccionar ácidos nucleicos objetivo que tienen menos de 100 % de complementariedad de nucleótidos, al menos aproximadamente, por ejemplo, 99 %, 97 %, 95 %, 90 %, 86.4 %, 85%, 70%, 67%. El ácido nucleico de acuerdo con la presente invención se puede marcar de acuerdo a cualquier método deseado. ?1 ácido nucleico se puede marcar usando trazadores radioactivos tal como 32P, 5S, 125I , 3H, ó 14C, por mencionar algunos trazadores comúnmente usados. El marcado radioactivo ae puede llevar a cabo de acuerdo a cualquier método tal como por ejemplo un marcado terminal en el extremo 3' ó 5' usando un nucleótido radiomarcado , polinucleótido-cinasa (con o sin desfosforilación con una fosfatasa) o una lígasa (dependiendo del extremo que se va a marcar) . Un marcado no radioactivo también se puede usar, combinando un ácido nucleico en la presente invención con residuos que tienen propiedades mmunológicas (antígenos, haptenos) , una afinidad específica para ciertos reactivos (ligandos) , propiedades que permiten que se terminen las reacciones de enzimas detectables (enzimas o co-enzimas, sustratos enzimáticos u otras sustancias comprendidas en una reacción enzimática) o propiedades físicas características, tal como luorescencia o la emisión o absorción de luz a una longitud de onda deseada, etc. Un ácido nucleico de acuerdo con la presente invención incluyendo oligonucleótidos , ácido nucleico antisentido, etc., se puede usar para detectar la expresión de FGF en órganos enteros, tejidos, células, etc., .por varias técnicas, incluyendo transferencia Northern, PCR, hibridación ín sítu, exhibición diferencial, arreglos de ácido nucleico, transferencias de punto, etc. Estos ácidos nucleicos pueden ser particularmente útiles para detectar la expresión perturbada, por ejemplo, las alteraciones específicas de las células y/o alteraciones sub-celulares , del FGF . Los niveles del FGF se pueden determinar solos o en combinación con otros productos génicos, especialmente otros productos génicos comprendidos en la fisiología neuronal . Un ácido nucleico de acuerdo a la presente invención se puede expresar en una variedad de diferentes sistemas, ín vitro e in vivo, de acuerdo al propósito deseado. Por ejemplo, se puede insertar un ácido nucleico en un vector de expresión, introducido en un hospedador deseado, y cultivado bajo condiciones efectivas para ¦lograr la expresión de un polipéptido codificado por el ácido nucleico. Las condiciones efectivas incluyen cualquier condición de cultivo que sea adecuada para lograr la producción del polipéptido por las célula hospedadora, incluyendo temperaturas efectivas, pH, medio, aditivos a los medios en los cuales se cultiva la célula hospedadora (por ejemplo, aditivos que amplifican o inducen la expresión tal como butirato o metotrexato, si el ácido nucleico de codificación está adyacente al ger. dhfr) , cicloheximida , densidades celulares, datos de cultivo, etc. Se puede introducir un ácido nucleico en la célula por cualquier método efectivo incluyendo, por e]emplo, ADN desnudo, precipitación con fosfato de calcio, electroporación, inyección, transfección mediada con DEAE-Dextrano , fusión con liposomas, asociación con agentes que mejoran su captación en términos, transfección viral. Una célula en la cual se ha introducido un ácido nucleico de la presente invención es una célula hospedadora, transformada. El ácido nucleico puede ser extracromosómico o estar integrado en un(s) cromosom (s) de la célula hospedadora. Puede ser estable o transitorio. Se selecciona un vector de expresión para su compatibilidad con la célula hospedadora. Las células hospedadoras incluyen células de mamífero, por ejemplo, células COS, CV1 , BHK, CHO, HeLa, LTK, NIH 3T3 , 293, PAE , humanas, de fibroblasto humanas, células de tumor primario, humanos, testículos, glia, neuronas, ol igodendrocitos , glia, neuroblastom , glioma, etc., células de insecto tal como S 9 (?. frugipeda) y Drosophila, bacterias, tal como E. coli, Streptococcus , bacillus, levadura, tal como Sacharomyces , S. cerevisiae, células fúngales, células vegetales, células madre embriónicas (por ejemplo, de mamífero, tal como de ratón, humano), células madre neuronales, fibroblastos, células musculares, células cardiacas y células T. De manera similar, se seleccionan secuencias de control de expresión para la compatibilidad del hospedador y para un propósito deseado, por ejemplo, alto número de copia, altas cantidades, inducción, amplificación, expresión controlada. Otras secuencias que se pueden emplear incluyen intensif icadores tal como SV40, CMV, RSV, promotores inducibles, elementos específicos tipo célula o secuencias que permiten la expresión celular específica o selectiva. Los promotores que se pueden usar para activar su expresión, incluyen, por ejemplo, el promotor endógeno, promotores de otros genes en la ruta de transducción de señales regulares, promotores MMTV, SV40, trp, lac, tac o T7 hospedadores bacterianos; factor alfa, alcohol - oxidasa , o promotores de PGH para levadura. También se pueden usar promotores de ARN para producir transcriptos de ARN, tal como T7 ó SP6. Ver, por ejemplo, Melton et al., Nucleic Acid Res., 12 ( 18 ) : 7035-7056 , 1984 ; Dunn y Studier. J. Mol. Bío. , 166:447-435, 1984; patente de los Estados Unidos No. 5,891,636; Studier et al., Gene Expression Technology, Methods in Enzymology, 85:60-89, 1987. Un ácido nucleico o polipéptido de la presente invención se puede usar como un marcador de tamaño en la electroforesis de proteína de ácido nucleico, cromatografía, etc. Los fragmentos de restricción definidos se pueden determinar al explorar la secuencia para los sitios de restricción al calcular el tamaño y al usar la digestión de restricción, correspondiente.

Un polipéptido de FGF y ácido nucleico de la presente invención se puede "aislar" , por el término "aislar" se quiere decir que está en una forma en la cual no se encuentra en su ambiente original por la naturaleza, por ejemplo, más concentrado, más purificado, separado de componentes, presentes en un Usado de una célula en la cual se expresa un gen de FGF heterólogo. Cuando se expresa el FGF con un gen heterólogo en una línea celular transfectada , se introduce un gen de acuerdo con la presente invención en una célula como se ¦ describe anteriormente, bajo condiciones en las cuales se expresa al gen. El término "heterólogo" significa que el gen se ha introducido en la línea celular por "la mano del hombre" la introducción del gen en una línea celular se analiza anteriormente. La célula transfectada (o trans ormada) que expresa el gen de FGF se puede lisar como se describe en los ejemplos y se usa en el método como un lisado (es decir "aislado") o la línea celular se puede usar intacta. En general, el término "condiciones efectivas" significa, por ejemplo, un ambiente en el cual se logra el efecto deseado. Este ambiente, incluye, por ejemplo, amortiguadores, agentes oxidantes, agentes reductores, pH, co-factores, temperatura, concentraciones iónicas, edad y/o etapa adecuada de la célula (tal como en particular parte en el ciclo celular, o en particular una etapa particular donde se estén expresando los genes particulares) donde las células estén siendo usadas, las condiciones de cultivo (incluyendo sustrato, oxígeno, dióxido de carbono, etc.) . Para mejorar la estabilidad, el ácido nucleico administrado se puede modificar, por ejemplo, para hacerlo resistente a las enzimas celulares, oxidación, reducción, nucleasas, etc., y para mejorar su captación en células. Se puede usar cualquier modificación adecuada, incluyendo, por ejemplo, fos forot ioatos , met i 1 fos fonatos , fosfodiéster-oligonucleótido enlazado a un agente de intercalación de acridina y/o una extremidad hidrófoba, derivados de psoralen, modificaciones con 2'-ribosa, derivados de azúcar de pentosa, derivados con base en el nitrógeno, etc. Ver, por ejemplo las Patentes de los Estados Unidos Nos. 5,576,208 y 5,744,362. Ver, anteriormente, para otros derivados, modificaciones, etc., que pueden ser útiles en la invención. En general, un ácido nucleico antisentido de la presente invención puede comprender monómeros de nucleótidos que se presentan en la forma natural, nucleótidos que no se presenten de forma natural y combinaciones de los mismos para intensificar la captación y/o estabilidad celular, Se puede administrar anti-sentido como ácido nucleico desnudo, vuelto complejo o encapsulado con y por otros agentes que facilite su captación en una célula, inyectado en células, y cualquier medio adecuado de dis ribución . La presente invención también se refiere a métodos para usar un FGF de la presente invención, tal como un FGF-20 y un FGF-23. Estos métodos comprenden administrar una cantidad efectiva de un FGF o un ácido nucleico que codifica para el FGF de la presente invención a un mezclador para uno o más de los siguientes propósitos. Promover la supervi encia y/o prolif ración de, por ejemplo, neuronas, oligodendrocitos , células de , Schwann, células madre, especialmente células madre neurales, células endoteliales , queratinocitos , y cualquier tipo celular que es capaz de responder a un FGF-20 y un FGF-23, por ejemplo, células que expresan el receptor congénito (tal como FGF 1-4) en su superficie celular, o progenitores de los mismos, para promover la curación de heridas, para modular la diferenciación de células; para inducir desarrollo embriónico, para estimular la excrecencia de neuritas; para mejorar la recuperación del daño neurona 1 o de nervios; para estimular la mielinacíón, para estimular la angiogénesis , para la actividad de unión al receptor. La presente invención también se refiere a indicaciones y métodos para usar el FGF de la presente invención, tal como FGF-20 y FGF-23, o un ácido nucleico que codifica para el FGF. Estos métodos comprenden administrar una cantidad efectiva del FGF de la presente invención a un hospedador para uno o más de los siguientes propósitos: mejorar la recuperación del daño axonal y de nervios; estimular la mielinación, angiogénesis , curación de heridas, curación de úlceras, inducir la reparación de un defecto óseo, promover la supervivencia del injerto e inducir el desarrollo embriónico. Las aplicaciones mencionadas con anterioridad serán el resultado de una actividad de FGF potencial que promueve la supervivencia y/o proliferación celular, que inhibe y/o estimula la diferenciación de ciertos tipos de células. El FGF puede inducir la supervivencia/proliferación celular en las células madre, progenitores, precursores y células maduras del siguiente origen: neuronas, ol igodendroci os , células de Schwann, células endoteliales , queratinocitos y otros tipos celulares que expresan cualquiera de los receptores de FGF. Además, los FGF pueden inducir diferenciación de los progenitores neuronales al inducir la excrecencia/extensión de las neuritas. Se pueden realizar los siguientes ensayos in vitro e in vivo a fin de medir la actividad e los FGF en las funciones celulares descritas con anterioridad: Ensayos In litro: Inducción de proliferación de oligodendrocitos in vitro: Los oligodendrocitos usados para medir los efectos de GF en la proliferación celular son ya sea líneas celulares establecidas tal como N 20.1 o oligodendrocitos primarios de roedor. Los oligodendrocitos primarios de roedor (rata) y los progenitores de oligodendrocitos se pueden aislar y purificar ya sea por cualquiera de las siguientes técnicas: técnica de adhesión diferencial (Mitrovic et al., 1994); centrifugación en gradiente Percol (Mattera et al., Neurochem. Int. 1984, 6(1) 41-50 and Kim et al., J. Neurol Sci 1983 Dec : 62 ( 1 - 3 ) : 295 - 301 ) e inmunoseparación . A pesar de la fuente de las células de oligodendrocitos (células primarias o línea celular) o su método de aislamiento o purificación, el ensayo de proliferación de oligodendrocitos se puede llevar a cabo durante periodos de tiempo de 3 , 5 y 7 días. Los controles positivos son otros miembros de la familia de FGF tal como FGF-2 ó FGF-9. La proliferación celular se mide como el ensayo de MTT y el ensayo de incorporación de 3H-Timidína. Ver también los ensayos para la proliferación de oligodendrocitos en Danilenko, et al., Arch Biochem Biophys. 1999 Jan 1 : 36 ( 1) : 34 - 46. - Inducción de excrecencia de neuritas: Ensayos PC 12. Se pueden probar nuevos miembros de la familia de FGF para la inducción de la diferenciación y excrecencia de neuritas en la línea de células PC-12 (derivadas de un tumor de feocromocitoma de rata) (Rydel, 1987 Greene, 1976) . Adicionalmente , puesto que una porción de la respuesta inducida por NGF se ha mostrado que es debida a la producción autócrina inducida por NGF del FGF-2, se pueden examinar los efectos de los nuevos FGF en la ¦ regulación ascendente de la producción de NGF por las células PC12 (Chevet et al., J. Biol . Chem. 1999 Jul 23:274 (3) : 20901-8) . - Excrecencia de neuritas en cambios de raíz dorsal (DRG) : los DRG se aislaron al diseccionar los DRG de rata fetal y al cultivarlos en medio neurobasal; el grado de excrecencia de neuritas en los DRG se valora y usualmente ae cuantifica al determinar el número y la longitud de las neuritas en comparación con los controles no tratados. Se pueden realizar ensayos en las células de origen endotelial y fibroblasto. Para los f ibrablastos , se puede usar una modificación del ensayo de proliferación de NIH 3T3. Para determinar los efectos de las FGF en la inducción de la proliferación de células endotel iales , se pueden usar la siguiente célula: células HUVEC, celdas endoteliales microvasculares y células endoteliales aórticas. Un ensayo in vitro pertinente para determinar el potencial terapéutico de los FGF como un agente terapéutico potencial para el tratamiento de heridas, ulceras o daños óseos se puede analizar como se describe en la literatura. Otros ensayos que se correlacionan con la regeneración del CNS incluyen ensayos de activación en la expresión génica relacionada al crecimiento o supervivencia ( einers, et al., Dev Biol . 1993 Dec . 160(2) : 480-93) , o de la modulación de otros factores de crecimiento in vivo (Yoshida, 1992) de la modulación de electrofisiología neural (Terlau, 1999) , de la actividad como un mitógeno o factores de diferenciación para oligodendrocitos , células de Sch an o astrositos (Genburger, 1987; Sternple, 1988; kalchei ., Dev Biol. 1989 jul: 134(1) :1-10; urphy, 1990), en la promoción de la supervivencia in vitro de neuronas corticales, hipocampales , motoras, sensorias, simpatéticas o parasimpáteticas (Eckstein, 1994; Unsicker, et al., Ann N. Y. Acad Se i. 1991:638:300-5 ; Grothe, et al., Int J Dev Biol. 1996 Feb: 40 ( 1 ) : 403 - 10 ) , de la promoción de la supervivencia de neuronas motoras in vitro, o similares.

Ensayos In vivo: Se puede examinar el potencial de remielinación de los nuevos FGF, por ejemplo, en los siguientes modelos: a) modelos de animales deficientes en mielina tal como transplante de células SVZ de animales ligadores tratados con FGF, en ratones deficientes de mielina y la medición de la expansión de ol igodendrocitos in vivo b) modelos de animal de desmiel inación tal como CR-EAR inducida por PLT y CR-EAE por ansferencia adoptiva de MBP . Ver también ensayos descritos en Gumpel, 1992 y Hinks, et al., Mol Cell Neurosci. 1999 Aug:14(2) : 153-68. Los FGF se pueden pobrar para su capacidad para inducir la neuroprotección y neuroregenearación en los siguientes modelos in vivo: daño/lesión mecánica (transacción de la ruta de fimbria fornix, nervio esciático, médula espinal, nervio óptico y corte trransversal de DRG) ; modelos de daño neuronal debido a agravio cerebral y tóxico-hisquémico ; y en la neurodegeneración químicamente inducida debido a lesiones inducidas por MPTP o ataques inducidos por KA. Los ensayos típicos in vivo incluyen, por ejemplo, la medición de la reducción de la pérdida neuronal después de la isquemia hipocampal, (sasaki, MacMillan, et al., Can J. Neurol Sci 1993 Feb:20(l) : 37-40, promoción de la supervivencia de neuronas corticales después de lesiones de ruta perforante (Gómez - Pinil l , 1992 ; Peterson, et al., J. Neurosci. 1996 Feb 1:26(3) : 886-98) protección de neuronas colinérgicas del cerebro anterior basal de la degeneración inducida por daño y reducción de la pérdida inducida por lesión o inducida por MPTP de las neuronas de la sustancia nigra (Anderson, et al., Nature 1998 Mar 24: 332 (6162) : 360-1; Otto, 1989; Gomez-Pinilla , 1992; Otto, 1990); y crecimiento a largo plazo de células progenitoras neurales in vitro, "neuroesferas" (revisado en Svendsen, et al., Trends Neurosci. 1999 Aug : 22(8) : 357-64. Ver también el uso de modelos de agravio traumático, tal como corte transversal de nervio óptico (Sievers, 1987) ; corte transversal del nervio ciático Cordeirop. Et al., Plast Reconstr Surg . 1989 June:83(6) : 1013-9; Khou i , et al., Microsurgery 1989: 10(3) : 206-9), de DRG cortados (Aebischer, et al., J. Neurosci Res. 1989 Jul . 23 (3) :282-9), corte transversal de la médula espinal (Cheng, et al., Science 1996 Jul 26: 273 (5274): 510-3 1996) y aplastamiento de nervio facial (Kuzis 1990) ; el uso de modelos para agravio cerebrovascular, tal como agravio cerebral hipoxémico (MacMillen, 1993) y oclusión de MCA ( a amata, et al., Proc Nati Acad Sci U. S. A. 1997 Jul 22: 94 (15) : 8179-84; Schabitz, 1999); y otros modelos neurodegenerativos, tal como tratamiento con ácido ciánico (KA) (Liu, et al., Brain Res 1993 Oct 29:629(1-2): 335-8) ó MND en ratón con temblores (Ikeda, et . , al., Meurol Res. 1995 Dec : 17 ( 6 ) : 445 - 8 ) . Por el término "administrar" se quiere decir que el FGF, ácido nucleico que codifica para el FGF u otro agente activo, se distribuya al objetivo, por ejemplo, la lesión el tejido dañado, etc. El FGF se puede administrar a cualquier objetivo (por ejemplo, in vivo, in vitro o in situ) , incluyendo células en cultivo y hospedadores que tienen una lesión, condición o en general que se va a tratar, por una ruta efectiva adecuada para lograr un efecto como se describe anteriormente, por ejemplo, se puede administrar una formulación de FGF por inyección directamente en, o cerca de, el sitio objetivo. También se puede administrar de manera tópica, parenteral, intravenosa, intramuscular, subcutánea, oral, nasal, intracerebral , intraventricular , intracisternal , intracraneal, implantado en la ubicación deseada, por ejemplo, en una espuma de gel, vía el nervio relleno con colágeno, etc., por ejemplo, dependiendo de la ubicación del sitio objetivo que se va a tratar. El FGF también se puede administrar de manera continua usando una bomba osmótica. También se puede administrar un FGF como un ácido nucleico para la captación por las células. Los métodos para administrar ácido nucleico incluyen aquellos descritos con anterioridad, y otras técnicas convencionales del estado de la técnica. Una cantidad efectiva de un FGF se administra al objetivo. Las cantidades efectivas son cantidades que son útiles para lograr el efecto deseado, de manera preferente un efecto benéfico o terapéutico. Esta cantidad se puede determinar por rutina, por ejemplo, al realizar un experimento de respuesta a la dosis en el cual se administran células variables a células objetivo ¦ para determinar una cantidad efectiva en el logro del prepósito deseado, por ejemplo, la estimulación de la excrecencia de neuritas o la promoción de la supervivencia neuronal . Las cantidades se direccional en base a varios factores, incluyendo el ambiente al cual se administra el FGF (por ejemplo, un paciente con daño cerebral, modelo de animal, células de cultivo de tejido, etc.) , el sitio de la célula que se va- a tratar, la edad, salud, género y peso del paciente o animal que se trate, etc. En un aspecto, la presente invención se refiere a métodos para tratar lesiones neuronales, tal como daño de nervios y trauma, daño y trauma de la médula espinal, daño al tejido neuronal producido, por ejemplo, por ataques isquémicos, infarto, hemorragia y aneurisma; tratamiento de una enfermedad neurona!, por ejemplo, enfermedades de degeneración neuronal, tal como enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, esclerosis múltiple, mielopatia, mielitis y siringomiel ia , etc., que comprende administrar una cantidad efectiva de un FGF de la presente invención. Los FGF de esta invención se pueden usar para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas y de desmiel inación del CNS y PNS , caracterizado por la destrucción de neuronas y los ol igodendrocitos . El FGF se puede usar como un producto terapéutico de remiel inación para el tratamiento de la esclerosis múltiple y otras enfermedades de las desmiel inación primarias y/o secundarias del CNS o PNS. Las enfermedades primarias de desmiel inación del CNS incluyen adrenoleucodistrofias , leucoencefalopatías (tal como leucoencefalopat ía multifocal progresiva), encefalomielitis (encef lomielitis perivenosa, diseminada, aguda) . La desmiel inación secundaria en el CNS se representa como una formación de lesiones de desmiel mac ión en el trauma del CNS, toxicidad (cianuro, hexaclorf no) o isquemia (ataque) . Las enfermedades de desmielinación del PNS incluyen trastornos primarios tipo Síndrome de Guillian-Barre (GBS), paraproteinemias , Pol íneuropat i Desmiel inante , Inflamatoria, Crónica (CIDP) . Además, el FGF se usará para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas del CNS y (sistema nervioso central) y PNS (sistema nervioso periférico) donde el daño neuronal es debido a lesión/trauma (agravio mecánico, químico, cerebrovascular e inflamación debido a infección y respuesta autoinmunitaria) y para el tratamiento de otras enfermedades neurodegenerativas. Los FGF de la invención también se pueden usar para promover la supervivencia del injerto. Por ejemplo, se puede usar FGF para promover la supervivencia de injerto (por ejemplo, alogénicos, isogénicos o antólogos) de una variedad de células, tejidos u órganos, tal como piel, fascículos, tendones, hueso, riñon, corneas o similar. Los transplantes de células en el CNS ó PNS de origen neuronal, glial o de células madre también se contempla por la invención. El material injertado se puede preparar de agentes naturales o por expansión ín vitro de células o tejido que se va a injertar al usar células madre diferenciadas o no diferenciadas. Por el término "promover" se quiere decir en la presente intensificar la supervivencia y/o proliferación de células injertadas, tejidos u órganos que se han tratado con un FGF en comparación a células, tejidos u órganos que no se han tratado. Son convencionales los métodos para valorar la supervivencia de los injertos. Los ensayos para medir la supervivencia de los injertos son de rutina y bien conocidos en la técnica. Los ensayos convencionales in vitro incluyen, por ejemplo, TT, MTS , incorporación de Thy, ensayo de células vivas/muertas (por ejemplo, doble tensión con calceina AM y homodímero de etidio-EthD-1 ) , medición del número total de células, por ejemplo, al usar evaluación microscópica o por métodos físicos de conteo de células, tal como al usar contadores de células sanguíneas. Los métodos convencionales in vivo incluyen, por ejemplo indicaciones del CNS , la detección de la función neurológica mejorada, la técnica con formación de imágenes tal como MTR, MRS , CT ó M I con o sin una mejora de Gd. Otras condiciones que se pueden tratar de acuerdo con la presente invención incluyen, prevención contra el daño al miocardio debido a MI, inducción a la angiogénesis , curación de heridas, curación de úlcera, prevención de la destrucción ósea e inducción de la formación de un nuevo hueso, promover la supervivencia del injerto e inducir el desarrollo embriónico. Las actividades del FGF que serán útiles en el tratamiento de las enfermedades/condiciones descritas con anterioridad incluyen: promoción- de la supervivencia y/o proliferación celular, inhibición y/o estimulación de la diferenciación de los siguientes tipos de células. Inducción de la supervivencia/proliferación celular de células madre, progenitoras , precursoras y células maduras del siguiente origen: neuronas, oligodendrocitos , células de Schwann células endoteliales , queratmocitos, osteoblastos y otros tipos celulares que expresan cualquiera de los receptores de FGF . Además, el FGG efectúa la inducción de la diferenciación de progenitores neuronales al inducir la excrecencia/extensión de las ¦neuritas, que se consideran útiles en el tratamiento de cualquier clase de lesión/daño neuronal. Por el término "tratar" se quiere decir cualquier efecto que de por resultado la mejora de la lesión o en general tal como la promoción de la supervivencia de las neuronas, glia, oligodendrocitos, astrositos, células de Schwann, etc., la estimulación de la presencia de neuritas, la estimulación de la mielinación, estimulación de la proliferación de células, etc., como se menciona con anterioridad. Para tratar estas lesiones y enfermedades, el FGF se puede formular como una composición, o ácido nucleico, y se aplica al área lesionada o mórbida, por ejemplo, usando técnicas quirúrgicas . Los FGF de la invención también se pueden administrar por cualquiera de los métodos de tratamiento descritos en la presente por la administración de ácido nucleico, por ejemplo, el método de terapia génica. El vehículo de disfuncion génica puede ser de origen viral o no viral (ver en general Jolly, Cáncer Gene Therapy 1:51-64 (1994) Kimura, Human Gene Therapy 5:845-852 (1994); Connelly, Human Gene Therapy 1:185-193 (1995); y Kaplitt, Nature Genética 6: 148-153 (1994) . Los vehículos de terapia génica para la distribución de construcciones que incluyen una secuencia de codificación de un producto terapéutico de la invención se puede administrar ya sea de manera local o sistérnica. Estas construcciones pueden utilizar planteamientos de vectores virales o no virales. La expresión de esta secuencia de codificación se puede inducir usando promotores endógenos de mamífero o heterólogos . La expresión de la secuencia de codificación es ya sea constitutiva o regulada. La presente invención puede emplear electrovirus recombínante que se construyen para llevar o expresar una molécula seleccionada de ácido nucleico de interés. Los vectores de retrovirus que se pueden emplear incluyen aquellos descritos en patente de los Estados Unidos No. 0,415,731; WO 90/07936; WO 94/03622; WO 93/25698; WO 93/25234; patente de los Estados Unidos No. 5,219,740; WO 93/11230; WO 93/10218; Vile y Har , Cáncer Res. 53:3860-3864(1993); Vile and Hart, Cáncer Res. 53:962-967 (1993); Ram et al., Cáncer Res 53:83-88 (1993); Takamiya et al., J. Neuroscí. Res. 33 :493 -503 (1992) ; Baba et al., J. Neurosurg. 79: 729-735 (1993); patente de los Estados Unidos No. 4,777,127; Patente de GB No. 2,200,651; y EP 0 345 242. Los retrovirus recombinantes preferidos incluyen aquellos descritos en la WO 91/02805. Las líneas de células de empaque adecuadas para el uso con las construcciones de vector retroviral descrito anteriormente se pueden preparar fácilmente (ver, publicaciones de PCT WO 95/30763 y WO 92/05266) , y usar para crear líneas de células productoras (también llamadas líneas de células de vector) , para la producción de partículas de vector recombinante . Dentro de modalidades particularmente preferidas de la invención, las líneas de células de empaque se elaboran de líneas de células de origen de hombre (tal como células HT1080) o visón, permitiendo de este modo la producción de retrovirus recombinantes que pueden sobrevivir a la inactivación en el suero humano. La presente invención también emplea vectores basados en alfavirus que pueden funcionar como vehículos de distribución génica. Estos vectores se pueden construir de una amplia variedad de alfavirus, incluyendo, por ejemplo, vectores del virus de Sidbis, virus de bosque de Semliki (ATCC VR-67; ATCC VR-1247), virus de Río Ross (ATCC VR-373; ATCC VR-1246) y virus de encefalitis equina venezolana (ATCC VR-923; ATCC VR-1250 ATCC VR-1249; ATCC VR-532) . Los ejemplos representativos de estos sistemas de vector incluyen aquellos descritos en las patentes de los Estados Unidos números 5,091,309; 5,217, 579; y 5,185,440; y las Publicaciones de PCT números WO 92/10578; WO 94/21792; WO 95/27069; WO 95/27044; y WO 95/07994. Los vehículos de distribución génica de la presente invención también pueden emplear parvovirus tal como vectores de virus adeno -asociados (AAV) . Los ejemplos representativos incluyen los vectores de AAV descritos por Srivastava en la WO 93/09239, Samulski et al., J. VIR. 63:3822-3S28 (1989); Mendelson et al., Tirol. 166:154-165 (1988); y Flotte et al., P. N. A. S. 9C : 10613-10617 (1993) . Los ejemplos representativos de vectores adenovirales incluyen aquellos descritos por Berkner, biotechniques] 6:616-627 (1988) ; Rosenfeld et al., Science 252:431-434 (1991); WO 93/19191; [Kolls et al., P. N. A. ?. 915-219 (1994); ass-Eisler et al., P. N. A. S. 90:11498-11502 (1993); Guzman et al., Circulation 88:2838-2848 (1993); Guzman et al., Cir. Res. 73:1202-1207 (1993) ; Zabner et al., Cell 75 :207-216 (1993); Li et al . , Hum. Gene Ther. 4:403-409 (1993); Cailaud et al . , Eur. J Neuroaci . 5:1287-1291 (1993); Vincent et AL . , Nat . Genet 5:130-134 (1993); Jaffe et al , Nat . Genet . 1:372-378 (1992); y Levrero et al . , Gene 101: 195-202 (1992). Los vectores de terapia génica, adenovirales , de ejemplo, que se pueden emplear en esta invención también incluyen aquellos descritos en WO 94/12649, WO 93/03769; WO 93/19191; WO 94/28938; WO 95/11984 y WO-95/00655. La administración de ADN enlazado a adenovirus aniquilado como se describe en Curiel, Hum . Gene Ther. 3:147-154 (1992), se puede emplear. Se pueden emplear otros vehículos y métodos de distribución génica, incluyendo ADN condensado, pcl icat iónico , enlazado o no enlazado a adenovirus aniquilidao solo, por ejemplo, Curiel, Hum. Gene Ther. 3:147-154 (1992); ADN enlazado a ligando, por ejemplo, ver Wu, J. Biol. Chem. 264:16985-16987 (1989); células de vehículos de distribución de células eucariót icas , ver por ejemplo, la solicitud número de Serie 08/240,030 presentada el 09 de mayo de 1994 y la Solicitud número de Serie 08/404,796; depósito de materiales de hidrogel fotopol ímeri zados ; pistola portátil de partículas de transferencia génica, como se describe en la patente de los Estado Unidos número 5,149,655; radiación ionizante corno se describe en la patente de los Estado Unidos número 5,206,152; y en la WO 92/11033; neutralización de cargas nucleica o fusión con membranas celulares. Se describen planteamientos adicionales en Philip, Mol. Cell Biol. 14:2411-2418 (1994) y en Woffendm, Proc . Nati. Acad. Sci. 91:1581-1585 (1994) . También se puede emplear el ADN desnudo. Se describen métodos de introducción de ADN desnudo de ejemplo en la WO 90/11092 y en la patente de los Estado Unidos número 5, 580,859. Se puede mejorar la eficiencia -de captación usando cuentas biodegradables de látex. Las cuentas de látex revestidas con ADN se transportan de manera eficiente hacia las células después del inicio de la endocitosis por las cuentas. El método se puede mejorar adicionalmente por el tratamiento de las cuentas para incrementar la hidrofobicidad y facilitar de este modo la interrupción del endosoma y la liberación del ADN er el citoplasma. Los liposomas que pueden actuar como vehículos de distribución génica se describen en la patente de los Estado Unidos número 5,422,120. Publicaciones de patente de PCT números WO 95/13796, WO 94/23697 y WO 91/14445, y EF No. 0 524 968. Los sistemas adicionales de distribución no virales adecuados para el uso incluyen sistemas de distribución mecánica tal como el planteamiento descrito en Woffendin et al., Proc . Nati. Acad. Sci. USA 91 (24) : 11581 -11585 (1994) . Además, la secuencia de codificación y el producto de expresión de esto se puede distribuir a través del depósito de materiales de hidrogel fotopolimerizados . Otros métodos convencionales para la distribución génica que se pueden usar para la distribución de la secuencia de codificación incluyen, por ejemplo, el uso de una pistola portátil de partículas de transferencia génica, como se describe en la patente de los Estados Unidos número 5,149,655; el uso de radiación ionizante para activar el gen transferido, como se describe en la patente de los Estados Unidos número 5,206,152; y la Publicación de patente de PCT número WO La presente invención también se refiere a un método para estimular la proliferación celular, que comprende administrar una cantidad efectiva de FGF-9 (por ejemplo, Kanda et al., supra . ) FGF-20 ó FGF-23, o un. fragmento biológicamente activo de los mismos. Por la frase "estimular la proliferación celular", se quiere decir que el FGF administrado da por resultado la división o mitosis celular. El FGF se puede administrar en cualquier forma efectiva (ácido nucleico o polipéptido) a cualquier hospedador adecuado. Por ejemplo, en una modalidad, el método es útil para identificar agonistas y antagonistas de FGF. En estos casos, puede ser útil para administrar el FGF a líneas de células, incluyendo células primarias y establecidas, tal como motoneuronas . Las líneas establecidas incluyen, por ejemplo, cualquiera de las líneas celulares almacenadas en la Colección Americana de Cultivo de Especies (American Tissue Culture Collection) (atece, org) incluyendo, por e emplo, DBT G-05MG, PFSK-1, MST0-211H, NCI-H378, NCI-N417, NCI-H526, HCN-1A, HCN-2, CATH.a, NG108-15, NCI-H446, NCI-H209, NCI-H146, NCI-H82, NCI-H345, NCI-H510A, D283 Med, D341 Med, C6 , IMR-32, Neuro-2a, NB41A3, BC3H1 , A172 , Mpf, T98G [T98-G], SCP, .CCF-STTG1, DI TNC1, CTX TNA2 , PG-4 (S+L-), G355-5, SW 598 [SW-598; S 598] , C6/LacZ, 9L/LacZ, N1E-115, SH-SY5Y, BE(2)-M17, BE(2)-C, MC-1XC, S -N-BE(2), CHP-212, C6/LacZ7, M059K, M059J, F98, RG2[D74], NCI-H250, NCI-H1915, 0A1, TE615.T, SVG pL2 , TE671 sublínea No. 2, MBr Cl 1, SK-N-MC, SW 1088 [SW- 1088; SW1088], 5W 1783 [SW-1783 ; SW1783], U-87 MG, U-118 MG , U-138 MG, MDA-MB-361, DU 145, Hs 683, H4 , 293, PC-12, P19, NTERA- 2 cl . D1[NT2/D1, BCE C/D-lb, SK-N-AS, [SK-N-FI, SK-N-DZ, ??-?-SH, Daoy, de manera preferente, células N20.1. Los agonistas putativos y los antagonistas de FGF se pueden administrar in vitro a células a las cuales se ha administrado el FGF, tal como las lineas celulares descritas anteriormente, o los agentes putativos se pueden administrar m vitro o in vivo a células que producen de forma natural FGF . El efecto agonista o antagonista de estos agentes se pueden medir con cualquiera de una variedad de ensayos reconocidos en la técnica, tal como aquellos descritos más adelante en la presente . Las células madre neurales también se pueden estimular para proliferarse por un FGF de la presente invención. Las células resultantes se pueden usar como una fuente de células neurales para el transplante de regreso al mismo paciente del cual se derivaron (es decir, autólogos) , eliminando cualquiera de los problemas clásicos asociados con el transplante alogeneico, tal como rechazo. De esta manera, un método de la presente invención se refiere a la administración de una cantidad de FGF efectiva para estimular la proliferación y diferenciación de células madre neurales, y transplantar de regreso las células madre. La presente invención también se refiere a anticuerpos que reconocen de manera específica un FGF de la presente invención. Un anticuerpo específico para FGF significa que el anticuerpo reconoce una secuencia definida de aminoácidos dentro de o que incluye un FGF, per ejemplo, la secuencia de las Figuras 1 y 2. De esta manera, un anticuerpo específico se unirá en general con mayor afinidad a una secuencia de aminoácidos, es decir, un epítope, encontrado en las Figuras 1 y 2 que a un epítope(s) diferente, por ejemplo, como se detecta y/o mide por un ensayo de inmunotransferencia u otro inmunoensayo convencional. De esta manera, un anticuerpo que es específico para un epítope del FGF-21 humano es útil para detectar la presencia del epítope en una muestra por e emplo una muestra de tejido que contiene el producto géníco de FGF-21 humano, que lo distingue de las muestras en las cuales está ausente el epítope. Estos anticuerpos son útiles como se describe en Santa Cruz Biotechnology, Inc., Research Product Catalog, y se pueden formular por consiguiente. Los anticuerpos, por ejemplo, policlonales , monoclonales , recornbinantes , quiméricos, humanizados, se pueden preparar de acuerdo a cualquier método deseado. Ver también, biblioteca de inmunoglobul ina recombinante de detección (por ejemplo, Orlandi et al., Proc . Nati. Acad. Sci., 86:3833-3837, 1989; Huse et al., Science, 256:1275-1281, 1989); estimulación in vi tro de poblaciones de lmfocitos; inter y Milstein, Nature, 349:293-299, 1991. por ejemplo, para la producción de anticuerpos monoclonales , se puede administrar a un polipéptido de acuerdo a las Figuras 1 y 2 a ratones, cabras, conejos de manera subcutánea y/o íntraperitoneal , con o sin adyuvante, en una cantidad efectiva para producir una respuesta mmunitaria. Los anticuerpos también pueden ser fragmentos de cadena individual o de FAb . Los anticuerpos pueden ser Ig , igG, sub- ipos, IgG2a, IgGl, etc. También se pueden generar anticuerpos y respuestas inmunitarias al administrar ADN desnudo. Ver, por ejemplo, las patentes de los Estados Unidos números 5,703,055; 5,589,466; 5,580,859. El FGF o fragmentos del mismo, para el uso en ¦la inducción de anticuerpos no necesitan tener actividad biológica; sin embargo, debe tener actividad mmunogénica , ya sea sólo o en combinación con un portador. Los péptidos para el uso en la inducción de anticuerpos específicos de FGF pueden tener una secuencia amino que consiste de al menos cinco aminoácidos, de manera preferente 10 aminoácidos. Tramos cortos de los aminoácidos de FGF, por ejemplo, cinco aminoácidos, se pueden enfocar con aquellos de otra proteína tal como hemocianina de lapa, u otro portador útil, y la molécula quimérica se usa para reproducción de anticuerpos. Las regiones del FGF útiles en la elaboración de anticuerpos se pueden seleccionar de manera empírica o, por ejemplo, una secuencia de aminoácidos del GEN, como se deduce del ADNc , se puede analizar para determinar las regiones de alta inmunogenicidad . El análisis para seleccionar los epítopes asociados se describe, por ejemplo por Ausubel FM et al (1989, Current Protocols in Molecular Biology, Vol 2. John Wiley & Sons) . Las secuencias útiles para generar anticuerpos, incluyen, las secuencias alineadas mostradas en las Figuras 1 y 2. Los anticuerpos a estas secuencias pueden ser útiles para dis inguirlas en los diferentes transcriptos de FGF . Ver, anteriormente. Los anticuerpos de FGF particulares son útiles para la diagnosis de condiciones pre -patológicas , enfermedades crónicas o agudas que se caracterizan por diferencias en la cantidad o distribución de FGF. Las pruebas de diagnóstico para FGF incluyen métodos que utilizan el anticuerpo y una marca para detectar FGF en fluidos corporales humanos (y de ratón, por ejemplo, si se usa un ratón, etc) , tejidos o extractos de estos te] idos . Los polipéptidos y anticuerpos de la presente invención se pueden usar con o sin modificación. De manera frecuente, los polipéptidos o anticuerpos se pueden marcar al unirlos, ya sea de manera covalente o no covalente, con una sustancia que proporciona una señal detectable. Se conoce una amplia variedad de marcas y técnicas de conjugación y se han informado de manera extensiva tanto en la literatura científica como de patentes . Las marcas o marbetes adecuados incluyen radionúcl idos , enzimas, sustratos, co-factores, inhibidores, agentes fluorescentes, agentes quimioluminiscentes , partículas magnéticas y similares. Las patentes que ensayan el uso de estas marcas incluyen las patentes de los Estados Unidos números 3,817,837; 3,850,752; 3,939,350; 3,996,345; 4,277,437; 4,275,149; yd 4 , 366, 241. Se pueden usar anticuerpos y otros ligandos que se unen a FGF de varias maneras, incluyendo como herramientas terapéuticas, de diagnóstico y comerciales de investigación, por ejemplo, para cuantificar los niveles del polipéptído de FGF en animales, tejidos, células, etc, para identificar la localización y/o distribución celular del mismo, para purificarlo, o un polipéptído que comprende una parte del mismo, para modular la función del mismo, en transferencias Western, ELISA, inmunoprecipítacíón , RIA, etc. La presente invención se refiere a estos ensayos, composiciones y equipos para realizarlos, etc. Utilizando estos y otros métodos, un anticuerpo de acuerdo a la presente invención se puede usar para detectar el polipéptído de FGF o fragmentos del mismo, en varias muestras, incluyendo tejido, células, fluido corporal, sangre, orina, fluido 53 cerebroespinal . Además, los ligandos que se unen a un polipéptido de FGF de acuerdo a la presente invención, o un derivado del mismo, también se pueden preparar, por ejemplo, usando bibliotecas de péptidos sintéticos y aptámeros (por ejemplo, Pitrung et al., patente de los Estados Unidos número 5,143,854; Geysen et al., J. Immunol . Methods, 102: 259-274, 1987; Scott et al., Science, 249:386, 1990 ; Blackwell et al., Science, 250:1104,1990; Tuerk et al., 1990, Science, 249:505) . La presente invención también se refiere a un polipéptido de FGF, preparado de acuerdo a un método deseado, por ejemplo, como se describe en la patente de los Estados Unidos número 5,434,050. Se puede usar un polipéptido marcado, por ejemplo, en los ensayos de unión, tal como para indicar sustancias que se unen o peguen al FGF, para seguir el movimiento de FGF en una célula en un sistema in vitro, in vivo o in situ, etc. Se puede aislar un ácido nucleico, polipéptido, anticuerpo, ligando, etc, de acuerdo a la presente invención. El término "aislado" significa que el material está en una forma en la cual no se encuentra en su ambiente natural o en la naturaleza, por ejemplo, más concentrado, más purificado, separado de los componentes, etc. Un ácido nucleico aislado incluye, por ejemplo, un ácido nucleico que tiene la secuencia de FGF separa del ADN cromosómico encontrado en un animal vivo, por ejemplo, como el gen completo, un trascripto, o un ADNc . Este ácido nucleico puede ser parte de un vector o estar insertado en un cromosoma (por selección específica del gen objetivo o por integración aleatoria en una posición diferente de su posición normal) y aún estar aislado en este no se encuentra en una forma que se encuentra en su ambiente natural. Un ácido nucleico o polipéptido de la presente invención también se puede purificar de manera sustancial. Por sustancialmente purificado, se quiere decir que el ácido nucleico o polipéptido se separa y está esencialmente libre de otros ácidos nucleicos o pol ipéptidos , es decir, el ácido nucleico o polipéptido es el constituyente primario y activo. La presente invención también se refiere a un animal transgénico, por ejemplo, un mamífero no humano, tal como un ratón, que comprende un FGF. El animal transgénico se puede preparar de acuerdo a métodos conocidos, incluyendo, por ejemplo, por inyección pronuclear y genes recombinantes en los pronúcleos de los embriones 1 -celulares, que incorporan un cromosoma artificial de levadura en las células madre embriómcas, métodos de selección de objetivo de genes, metodología de células madre embriónicas, Ver por ejemplo, patentes de los Estados Unidos números 4,736,366; 4,873,191; 4,873,316; 5,082,779; 5, 304,489; 5,174,986; 5,175,384; 5,175, 385; 5, 221,778; Gordon et al., Proc . Nati. Acad. Sci . , 77:7380-7384, 1980; Palmiter et al., Cell, 41:343- 345,1985; Palmiter et al., Ann. Re . Genet . , 20:465-499, 1986; Askew et al., Mol. Cell. Bio., 13:4115-4124, 1993; Games et al. Nature, 373:523-527, 1995; Valancíus y Smithies, Mol. Cell. Bio., 11:1402-1408, 1991; Stacey et al., Mol. Cell. Bio., 14:1009-1016, 1994; Hasty et al., Nature, 350:243 -246, 1995; Rubinstem et al., Nucí. Acid ¦Res. , 21:2613-2617, 1993. Un ácido nucleico de acuerdo a la presente invención se puede introducir en cualquier mamífero no humano, incluyendo un ratón (Hogan et al., Manipulat ing the Mouse Embryo : A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 1986) , cerdo (Hammer et al., Nature, 315:343- 45,1985) , ove a (Hammer et al., Nature, 315:343-345,1985) , ganado vacuno, rata o primate. Ver también, por ejemplo Church, 1987, Trends in Biotech. 5:13-19; Clark et al., Trends in Biotech. 5:20-24, 1987) ; y DePamphilis et al., BioTechniques , 6: 662-680,1988) . Además, por ejemplo, está comercialmente disponible producción de ratones y ratas transgénicos , habituales. Estos animales transgénicos pueden ser modelos de animales útiles para probar la función del GEN, como comida para una serpiente, como un marcador genético para detectar el origen de la cepa (es decir, donde un FGF-21 -- 23, o fragmento del mismo se haya insertado), etc. Estos animales transgénicos pueden comprender adic ionaltnence otros transgenes. Los animales transgénicos se pueden preparar y usar de acuerdo a cualquier método adecuado. Para otros aspectos de los ácidos nucleicos, se hace referencia a los libros de texto normales de biología molecular, ver, por ejemplo Davis et al., Basic ethods in Molecular Biology, Elsevir Sciences Publishing, Inc., New York, 1986; Hames et al., Nucleic Acid Hybridization, IL Press, 1985; Sambrook et al., Molecular Cloning, CSH Press, 1989 ; Howe , Gene Cloning and Manipulation, Cambridge University Press, 1995.

Breve descripción de los Dibuj os La Figura 1 muestra la secuencia de nucleótidos y aminoácidos de FGF-20 (SEQ ID NOS 1 y 2) . La Figura 2 muestra la secuencia de nucleótidos y aminoácidos de FGF-23 (SEQ ID NOS 3 y 4) . La Figura 3 muestra la secuencia alineada de aminoácidos de la proteína de FGF-20 con miembros conocidos de la familia de FGF . Xfgf-20 es de Xenopus laevi s . La Figura 4 muestra la proliferación de los oligodendrocitos . La Figura 4A muestra la proliferación de los oligodendrocitos. La Figura 4B muestra que la actividad se abolió al hervir la proteína. LA Figura 5 muestra el efecto de FGF-20 en la proliferación de oligodendrocitos N20.1. La Figura 6 muestra el efecto de los FGF en la proliferación de los oligodendrocitos primarios de rata (PRO) . La Figura 6A muestra células tratadas con FGF-2. La Figura 6B muestra células tratadas con FGF-20. La Figura .7 muestra el efecto de los FGF en la supervivencia/proliferación de una línea celular de origen neuronal . La Figura 7A muestra el efecto de FGF-20. La Figura 7B muestra el efecto.de FG-2, FGF - 9 y FGF-20. La Figura 8 muestra la excrecencia de neuritas. Se trataron células PC12 cultivadas durante 6 días con FGF-20 recombinante más heparina (panel izquierdo) y hepanna sola (panel derecho), las células se fijan y tifien para ß? 11 - tubul ina , se forma en imagen los núcleos con 7-AAD. No se observa excrecencia de neuritas en las células tratadas con hepanna sola. La Figura 9 muestra que el FGF-20 es un potente factor de supervivencia para neuronas corticales.

Ej_emp^os Ejemplo 1 Proliferación y supervivencia de oligodendrocitos: Los oligodendrocitos usados para medir los efectos de los factores de crecimiento (GF) en la proli eración celular son ya sea líneas celulares establecidas tal cono N20 u oligodendrocitos primarios de roedor. Los oligodendrocitos primarios de roedor (rata) y los progenitores de los oligodendrocitos se aislan y purifican por técnica de adhesión diferencial (Mitrovic, 1994) y la centrifugación por gradiente de Percol (Mattera, et al., Neurochem. Int. 1984, 6(1) 41-50; im, et al., J Neurol Sci 1983 Dec:62 (1 -3) : 295-301) . Se llevaron a cabo ensayos de proliferación de oligodendrocitos al sembrar en placa 2.5 x lO4 células/ml en placas de 96 cavidades. Las células se estimularon con factores de crecimiento durante periodos de tiempo de 3, 5 y 7 días. Los controles positivos son otros miembros de la familia de FGF tal como FGF - 2 Sy FGF-9. se mide la proliferación celular o el ensayo de MTT y el ensayo de incorporación de H-Timídma. Las Figuras 4, 5 y 6 muestran que FGF-20 estimula la proliferación de oligodendrocitos de la línea de células de oligodendrocitos N20.1 de una manera con respuesta a la dosis y tiempo. Las células N20.1 se tratan con muestras de cromatografía de heparina-agarosa, parcialmente purificada de FGF . Se determina la proliferación por tinción con TT . El FGF-20 induce la proliferación de los oligodendrocitos (Figura 4A) y se anula la actividad al hervir la proteína (Figura 4B) . Las observaciones anteriores se confirmaron con preparaciones de material parcialmente purificado de las columnas de heparma y S (Figura 5) . Se tratan células N20.1 con FGF-20 de las columnas de heparina o S. Las células se incuban con el FGF-20 durante 5 días y se determina el incremento de la proliferación con respecto al control no tratado por tinción con MTT. Se usa FGF-9 cono un control positivo y se usan amortiguadores apropiados correspondientes (H y S) como un control negativo. La actividad de un material parcialmente purificado es compatible con FGF-9. Además, el FGF-20 induce la prol iteración de los oligodendrocitos primarios de rata (Figura 6B) . Se tratan oligodendrocitos con FGF -2 (Figura 6A) y FGF-20 (Figura 6B) . Las células se incuban con los GF durante 3 días y se determina el incremento en la proliferación con respecto al control tratado, por tinción con MTT. La actividad de un material parcialmente purificado es comprable a FGF-2. El FGF-20 es un potente inductor de la proliferación de los oligodendrocitos y su actividad es comparable a otros miembros de la familia de FGF tal como FGF-2 y FGF - 9.

E emplo 2 Inducción de supervivencia neuronal : Se llevan a cabo ensayos de supervivencia neuronal al sembrar en placa 2.5 x lO4 células/ml en placas de 96 cavidades en un medio con bajo contenido de suero. Bajo estas condiciones, las células neuronales se someten a apóptosis debido al retiro del factor de crecimiento. Se simulan las células con factores de crecimiento durante diferentes periodos de tiempo que varían desde 3 días a 12 días. Los controles positivos son otros miembros de la familia de FGF tal como FGF-2 o FGF- 9. la supervivencia neuronal se mide por MTT . Las Figuras 7 y 9 muestran que FGF-20 es un potente factor neurotrófico que puede estimular la supervivencia de las células de origen neuronal . Las células P12 se colocan en placa de 96 cavidades en la presencia de medio, concentración de suero (suero de Nu al 1 %) . Se adicionan diferentes factores de crecimiento, incluyendo FGF-20, en concentraciones que varían desde 0.0025-2500 ngs/mi. 7 y 10 días después, se mide la supervisión relativa con el ensayo de MTT y en comparación con el control no tratado.

Los datos para FGF-20 se muestran en la Figura 7A, y para FGF-2, FGF-9 y FGF-20 en la Figura 7B.

Ejemplo 3 Inducción de excrecencia de neurita El FGF-20 exhibe actividad en la excrecencia de las células PC12. Esta actividad no es dependiente del pre -tratamiento con NGF (ver Tablas 1 y 2 y Figura 9) . El comportamiento del FGF-21 parcialmente purificado en este ensayo es similar a aquel observado para FGF-9 al cual es muy similar en secuencia. Además, la actividad de diferentes miembros de la familia de FGF en la inducción de la excrecencia de neurita en células PC12 (FGF- 1 , FGF-2 , FGF-4 , FGF- 6 , FGF - 7 , FGF - 8 , FGF-9, FGF-10, FGF-16, FGF-16, FGF-17, FGF-18 (ver Tabla 2) se comparan. Los FGF más potentes en inducir la excrecencia de neurita en este sistema son FGF-2 y FGF-9 y FGF-20/21. Se encuentran dos FGF, el FGF-7 y FGF-10, que son inactivos en este ensayo a pesar de la presencia o ausencia de heparina. Se aislan neuronas corticales, fetales, primarias de rata de cerebros de rata embriónica (E16) . La corteza se corta bajo el microscopio y se lava seis veces con solución de Hanks y se disocia mecánicamente sin el tratamiento enzimático. Se cultivan neuronas en un medio que consiste de los siguiente: DMEM complementado con suero de caballo al 10 %, FCS al 10 %, L-glutamina 2 m , amortiguador HEPES. Después de 24 horas, se adiciona un cóctel de inhibidores que consiste de FdU 10 µ?? y citosina-arabinosido 1 µ? durante 3 días a fin de vivir la proliferación de todos los otros tipos de células excepto las neuronas. Después de 8 días en cultivo, se recolectan las neuronas y se colocan en placa de 96 cavidades en la presencia de medio de bajo contenido de suero (suero de Nu al 2 %) . Se adicionan diferentes factores de crecimiento, incluyendo FGF-20 en concentraciones que varían desde 0.0025-2500 ngs/ml. Después de 5 días, se mide la supervivencia relativa con el ensayo de TT y se compara al control no tratado.

Tabla 1 FGF-20 es un potente inductor de extensiones de neurita en células PC12 : Las células PC12 se colocan en placa y se tratan como en el experimento mostrado en la Figura 7. Se adicionan FGF-9 y FGF-20 en las concentraciones que varían desde 0.0025-2500 ngs/ml. Siete y doce días después del tratamiento, se determina la extensión de neuritas por tinción de las células con tinte de Wright y el examen microscópico subsiguiente. El % de excrecencia representa el número de estimado de las células con procesos . En resumen de las observaciones para la inducción de la excrecencia de neuritas debido a los tratamientos con FGF-9 y FGF-20/21 se muestran a continuación. La concentración más alta de material parcialmente purificado es tóxica a las células, que afecta tanto los datos de supervivencia (ver Figura 7B) como la excrecencia de neuritas (ver posteriormente) .

Extensión de Neuritas en células PC12 GF concen ación % de excrecencia ngs/ml 7 días 12 días FGF-9 0 0 0 0.025 <5 5 0.25 5 10-20 2.5 5-10 20-30 25 60 60 250 90 100 2500 90-100 100 FGF-21 0 0 0 0.025 <5 5 0.25 10 10 2.5 20-30 30 25 50 60 250 90 80 2500 0 0 Tabla 3 Comparación de excrecencia de neurita de diferentes miembros de la familia de FGF : Se tratan células PC12 cultivadas con los FGF se registra visualmente la excrecencia de muritas. El FGF-20 es uno de los GF neurotróf icos más potentes de lo miembros de la familia de FGF, probados FGF Adicional : Respuesta FGF- 1 (FGF ácido) + + FGF-2 (FGF básico) FGF-4 + FGF - 6 + FGF -7 FGF- 8 - + FGF - 9 + + + FGF- 10 FGF- 16 + FGF-17 + + FGF- 18 + + FGF-21 + + + LISTADO DE SECUENCIAS <110> BRINGMANN, PETER . W. FAULDS , DARYL ITROVIC, BRANISLAVA SRINIVASAN, SUBHA <120> NUEVOS FACTORES DE CRECIMIENTO DE FIBROBLASTOS <130> BERLX 87 cl40> PCT/US 01/47350 <141> 10-12-2001 150> 60/251,837 151> 08-12-2000 160 16 170> Patentln Ver. <210> 1 <211> 636 <212> ADN <213> Organismo desconocido <220> <221> CDS <222> (1) — (633) <220> <223> Descripción de organismo desconocido: secuencia de nucleótidos de FGF-21 <·100> 1 atg gct ccc tta gcc gaa gtc ggg ggc ttt ctg ggc ggc ctg gag ggc 48 Met Ala Pro Leu Ala Glu Val Gly Gly Phe Leu Gly G y Leu Glu Gly 1 5 10 Ib ttg ggc cag cag gtg ggt tcg cat ttc ctg ttg cct cct gcc ggg gag 96 Leu Gly Gln Gln Val Gly Ser Hís Phe Leu Leu Pro Pro Ala Gly Glu 20 25 30 cgg ccg ccg ctg ctg ggc gag cgc agg age gcg gcg gag cgg age gcg Arg Pro Pro Leu Leu Gly Glu Arg Arg Ser Ala Ala Glu Arg Ser Ala 35 40 45 cgc ggc ggg c g ggg gct gcg cag ctg gcg cae ctg cae ggc ate ctg Arg Giy Gly Pro Gly Ala Ala Gln Leu Ala His Leu His Gly lie Leu 50 55 60 cgc cgc cgg cag etc tat tgc cgc acc ggc ttc cae ctg cag ate ctg 240 Arg Arg Arg Gln Leu Tyr Cys Arg Thr Gly Phe His Leu Gln lie Leu 65 70 75 80 ccc gac ggc age gtg cag ggc acc cgg cag gac cae age etc ttc ggt 288 Pro Asp Gly Ser val Gln Gly Thr Arg Gln Asp His Ser Leu Phe Gly 85 90 95 ate ttg gaa r.tc ate agt gtg gca gtg gga ctg gtc agt att aga ggt ? 20 l i e Leu Glu Phe lie Ser Val Ala Val Gly Leu Val Ser lie Arg Gly 100 105 110 gtg gac agt ggt etc tat ctt gga atg aat gac aaa gga gaa etc tat 384 Val Asp Ser Gly Leu Tyr Leu Gly Met Asn Asp Lys Gly Glu Leu Tyr 115 120 125 gga tea gag aaa ctt act tec gaa tgc ate ttt agg gag cag ttt gaa 432 Gly Ser Glu Lys Leu Thr Ser Glu Cys lie Phe Arg Glu Gln Phe Glu 130 135 140 gag aac tgg tat aac acc tat tea tet aac ata tat aaa cat gga gac 480 Glu Asn Trp Tyr Asn Thr Tyr Ser Ser Asn lie Tyr Lys His Gly Asp 145 150 155 160 acu ggc cgc agg tat ttt gtg gca ctt aac aaa gac gga act cca aga 528 Tí'ir Gly Arg Arg Tyr Phe Val Ala Leu Asn Lys Asp Gly Thr Pro Arg 165 170 175 gac ggc gee agg tec aag agg cat cag aaa ttt acá cat ttc tta ect 5'·' 6 Asp Gly Ala Arg Ser Lys Arg His Gln Lys Phe Thr His Phe Leu Pro 180 185 190 aga cca gtg gat cca gaa aga gtt cea gaa ttg tac aag gac cta ctg 624 Arg Pro Val Asp Pro Glu Arg Val Pro Glu Leu Tyr Lys Asp Leu Leu 195 200 205 atg tac act tga 636 Met Tyr Thr 210 <210> 2 <211> 211 <212> PRT <;213> Organismo desconocido <220> <223> Descripción de organismo desconocido: secuencia nucleótidos de FGF-21 <100> 2 Hct Ala Pro Leu Aja Glu Val Gly Gly Phe Leu Gly Gly Leu Glu Gly ] 5 10 1 Leu Gly Gln Gln Val Gly Ser His Phe Leu Leu Pro Pro Ala Gly Glu 20 25 30 Arg Pro Pro Leu Leu Gly Glu Arg Arg Ser Ala Ala Glu Arg Eer Ala 35 40 " 45 Arg Gly Gly Pro Gly Ala Ala Gln Leu Ala His Leu His Gly lie Leu 50 55 60 Arg Arg Arg Gln Leu Tyr Cys Arg Thr Gly Phe His Leu Gln lie Leu 65 70 75 80 Pro Asp Gly Ser Val Gln Gly Thr Arg Gln Asp Hís Ser Leu Phe Gly 85 90 95 lie Leu Glu Phe lie Ser Val Ala Val Gly Leu Val Ser lie Arg Gly 100 105 110 Val Asp 3er Gly Leu Tyr Leu Gly Met Asn Asp Lys Gly Glu Leu Tyr 115 120 125 Gly Ser Glu Lys Leu Thr Ser Glu Cys lie Phe Arg Glu Gln Phe Glu 130 135 140 Glu Asn Trp Tyr Asn Thr Tyr Ser Ser Asn lie Tyr Lys His Gly Asp 145 150 155 160 Thr Gly Arg Arg Tyr Phe Val Ala Leu Asn Lys Asp Gly Thr Pro Arg 165 170 175 Asp Gly Ala Arg Ser Lys Arg His Gln Lys Phe Thr His Phe Leu Pro 180 185 19C Arg Pro Val Asp Pro Glu Arg Val Pro Glu Leu Tyr Lys Asp Leu 19b 200 205 et Tyr Thr 210 <210> 3 <211> 513 <212> ADN <213> Organismo desconocido 220> 221> CDS 222> (1) .. (510) <220> <223> Descripción de organismo desconocido nucleótidos de FGF-23 <400> 3 atg cgc cgc cgc ctg tgg ctg ggc ctg gcc tgg ctg ctg ctg gcg cgg 4B Met Arg Arg Arg Leu Trp Leu Gly Leu Ala Trp Leu Leu Leu Ala Arg 1 5 10 15 gcg ccg gac gcc gcg gga acc ccg age gcg teg cgg gga ceg cgc age 96 Ala Pro Asp Ala Ala Gly Thr Pro Ser Ala Ser Arg Gly Pro Arg Ser 20 25 30 tac ccg cae ctg gag ggc gac gtg cgc tgg cgg cgc r.tc ttc tea tec 144 Tyr Pro His Leu Glu Gly Asp Val Arg Trp Arg Arg Leu Phe Ser 3er 35 40 45 act. cae ttc ttc ctg cgc gtg qat ecc ggc ggc cgc gtg cag cgc acc 19 Thr His Phe Phe Leu Arg Val Asp Pro Gly Gly Arg Val Gln Gly Thr 50 55 60 cgc tgg cgc cae ggc cag gac age ate ctg gag ate cgc tet gta cae 240 Arg Trp Arg His Gly Gln Asp Ser lie Leu Glu lie Arg Ser Val His 65 70 75 80 gtg ggc gtc gtg gtc ate aaa gca gtg tec tea ggc ttc tac gtg gcc 1;·> Val Gly Val Val Val lie Lys Ala Val Ser Ser Gly Phe Tyr Val Ala T5 90 95 atg aac cgc cgg ggc cgc etc tac ggg teg cga etc tac acc gtg gac 336 Met Asn Arg Arg Gly Arg Leu Tyr Gly Ser Ara Leu Tyr Thr Val Asp 100 105 110 tgc agg ttc cgg gag cgc ate gaa gag aac ggc cae aac acc tac gcc 384 Cys Arg Phe Arg Glu Arg lie Glu Glu Asn Gly His Asn Thr Tyr Ala 1 5 120 125 tca cag cgc tgg cgc cgc cgc ggc cag ccc atg ttc ctg gcg ctg gac 432 Ser Gln Arg Trp Arg Arg Arg Gly Gln Pro Met Phe Leu Ala Leu Asp 130 135 140 agg agg ggg ggg ccc cgg cea ggc ggc cgg acg cgg cgg tac ctg Arq Arg Gly Gly Pro Arg Pro Gly Gly Arg Thr Arg Arg Tyr Leu 145 150 155 160 i.cc gcc cae ttc ctg ccc gtc ctg gtc tec tga Ser Ala His Phe Leu Pro Val Leu Val Ser 165 170 <210> 4 <211> 170 <212> PRT <213> Organismo desconocido <22Q> <223> Descripción de organismo desconocido: secuencia nucleótidos de FGF-23 <400 4 Met Arg Arg Arg Leu Trp Leu Gly Leu Ala Trp Leu Leu Leu Ala Arg i 5 10 Ib Ala Pro Asp Ala Ala Gly Thr Pro Ser Ala Ser Arg Gly Pro Arg Ser 20 25 30 Tyr Pro His Leu Glu Gly Asp Val Arg Trp Arg Arg Leu Phe Ser Ser 35 40 45 Thr His Phe Phe Leu Arg Val Asp Pro Gly Gly Arg Val Gln Gly Thr 50 55 60 Arg Trp Arg His Gly Gln Asp Ser lie Leu Glu lie Arg Ser Val His 65 70 75 80 Val Gly Val Val Val lie Lys Ala Val 3er Ser Gly Phe Tyr Val Ala 85 90 95 Met Asn Arg Arg Gly Arq Leu Tyr Gly Ser Arg Leu Tyr Thr Val Asp 100 " 105 110 Cys Arg Phe Arg Glu Are He Glu Glu Asn Gly His Asn Thr Tyr Ala 115 120 125 Ser Gln Arg Trp Arg Arg Arg Gly Gln Prc Met Phe Leu Ala Leu Asp 130 135 140 Arg Arg Gly Gly Pro Arg Pro Gly Gly Arg Thr Arg Arg Tyr His Leu 145 150 155 160 Ser Ala His Phe Leu Pro Val Leu Val Ser 165 170 210> 5 211> 208 212 > PRT 213 > Organismo desconocido <223> Descripción de organismo desconocido: secuencia nucleótidos de FGF-9 <4Ü0> 5 Met Ala Pro Leu Gly Glu Val Gly Asn Tyr Phe Gly Val Glr. Asp Ala i 5 10 15 Val Pro Phe Gly Asn Val Pro Val Leu Pro Val Asp Ser Pro Val Leu 20 25 30 Leu Ser Asp His Leu Gly Gln Ser Glu Ala Gly Gly Leu Pro Arg Gly 35 40 45 Pro Ala Val Thr Asp Leu Asp His Leu Lys Gly He Leu Arg Arg Arg 50 55 60 Gln Leu Tyr Cys Arg Thr Gly Phe His Leu Glu He Phe Pro Asn Gly 65 70 75 80 Thr lie Gln Gly Thr Arg Lys Asp His Ser Arg Phe Gly lie Leu Glu 90 95 Phe lie Ser lie Al Val Gly Leu Val Ser lie Ara Gly Val Asp Ser 100 105 110 Gly Leu Tyr Leu Gly Met Asn Glu Lys Gly Glu Leu Tyr Gly Ser Glu 115 120 125 Lys Leu Thr Gln Glu Cys Val Phe Arg Glu Gln Phe Glu Glu Asn Trp 130 135 140 Tyr Asn Thr Tyr Ser Ser Asn Leu Tyr His Val Asp Thr Gly Arg 145 150 155 160 Arg Tyr Tyr Val Ala Leu Asn Lys Asp Gly Thr Pro Arg Glu Gly Thr 165 170 175 Arg Thr Lys Arg His Gln Lys Phe Thr His Phe Leu Pro Arg Pro Val 180 185 190 Asp Pro Asp Lys Val Prc Glu Leu Tyr Asp lie Leu Ser Gln 195 200 205 <210> 6 <211> 207 <212> PRT <213> Organismo desconocido <220> <223> Descripción de organismo desconocido: secuencia de nucleótidos de FGF-16 <400> 6 Met Ala Glu Val Gly Gly Val Phe Ala Ser Leu Asp Trp Asp Leu His 1 5 10 15 Gly Phe Ser Ser Ser Leu Gly Asn Val Pro Leu Ala Asp Ser Pro Gly 20 25 30 Phe Leu Asn Glu Arg Leu Gly Gln lie Glu Gly Lys Leu Gln Arg Gly 35 40 45 Ser Prc Thr Asp Phe Ala His Leu Lys Gly lie Leu Arg Arg Arg Gln 60 Leu Tyr Cys Arg Th Gly Phe His Leu Glu lie Phe Pro Asn Gly Thr 65 70 75 80 '•Ja: His Gly Thr Ara His Asp His Ser Arg Phe Gly lie Leu Glu Phe 85 90 95 lie Ser Leu Ala Val Gly Leu lie Ser lie Arg Gly Val Asp Ser Gly 100 105 110 Leu Tyr Leu Gly Met Asn Glu Arg Gly Glu Leu Tyr Gly Ser Lys Lys 115 120 125 Leu Thr Arg Glu Cys Val Phe Arg Glu Gln Phe Glu Glu Asn Trp Tyr 130 ~ 135 140 Asn Thr Tyr Ala Ser Thr Leu Tyr Lys His Ser Asp Ser Gl u Arg G] n 145 150 155 Ty: Tyr Val Ala Leu Asn Lys Asp Gly Ser Pro Arg Glu G] y Tyr Arg 165 170 175 Thr Lys Arg His Gln Lys Phe Thr His Phe Leu Pro Arg Pro Val Asp 180 185 1 0 Pro Ser Lys Leu Pro Ser Met Ser Arg Asp Leu Phe His Tyr Arg 195 200 205 <210> 7 <211> 117 <212> PRT <213> Organismo desconocido <220> <223> Descripción de organismo desconocido: FGF-22 <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> cualquier amino ácido <400> 1 Xaa Gly Met Leu Ala Ser Tyr Ser Val Ala Val Ala Met Val Thr Thr 1 5 10 15 Arg Gly Val Ala Ser Arg Leu Tyr Leu Asp Ser Asn His Lys Gly Asp 20 25 30 Leu Tyr Ala Ser Val Arg Leu Ala Gln Glu Ser Val Phe Trp Gly Gln 35 40 45 Ser Glu Glu Asn Trp Ser Tyr Thr His Ser Ser Asn Leu Tyr Lys His 50 55 60 Val Asp Thr Arg Arg Arg Tyr Tyr Val Pro Leu Asn Gln Gly Ala Thr 65 70 75 80 Pro Ser A] a Gly Thr Arg Ser Leu Arg Arg Gln Asn Tyr Thr Kis Val 85 90 9 Leu Pro Arg Pro Val Asp Pro Asp Lys Val Pro Glu Leu Tyr Lys Asp 100 105 110 lie Leu Ser Gln Ser 115 <210 8 <211> 208 <212> PRT <213> Xenopus Laevis <400> 8 Met Ala Pro Leu Ala Asp Val Gly Thr Phe Leu Gly Gly Tyr Asp Ala 1 5 10 15 Leu Gly Gln Val Gly Ser His Phe Leu Leu Pro Pro Ala Lys Asp Ser 20 25 30 Pro Leu Leu Phe Asn Asp Pro Leu Ala Gln Ser Glu Arg Leu Ser Arg 35 40 45 Ser Ala Pro Ser Asp Leu Ser His Leu Gln Gly lie Leu Arg Arg Arg 50 55 60 Gln Leu Tyr Cys Arg Thr Gly Phe His Leu Gln lie Leu Pro Asp Gly 65 70 75 80 Asn Val Gln Gly Thr Arg Gln Asp His Ser Arg Phe Gly lie Leu Glu Phe Ser Val Ala lie Gly Leu Val Ser lie Arg Gly Val Asp Thr 100 105 110 Gly Leu Tyr Leu Gly Met Asn Asp Lys Gly Glu Leu Phe Gly Ser Glu 115 120 125 Lys Leu Thr Ser Uu Cys lie Phe Arg Glu Gln Phe Glu Glu Asn Trp 130 135 140 Tyr Asn Thr Tyr Ser Ser Asn Leu Tyr His Gly Asp Ser Gly Arq 145 150 155 160 Arg Tyr Phe Val Ala Leu Asn Lys Asp Gly Thr Pro Arg Asp Gly Thr 165 170 1 5 Are Ala Lys Arg His Gln Lys Phe Thr Kis Phe Leu Pro Arg Pro Val 180 185 190 Asp Pro Glu Lys val Pro Glu Leu Tyr Asp Leu Met Gly Tyr Ser 195 200 205 <210> 9 <211> 4 c212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Descripción de Secuencia Artificial: Péptido ilustrativo <400> 9 Leu Tyr Gly Ser 1 <210> 10 <211> 4 c212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Descripción de Secuencia Artificial: Péptido ilustrativo <400> 10 His Phe Leu Pro 1 <210> 11 <211> 5 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Descripción de Secuencia Artificial: Péptido ilustrativo <400> 11 Val Gln Gly Thr Arg 1 5 <210> 12 <211> 10 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Descripción de Secuencia Artificial: Péptido ilustrativo 400> 12 Arg lie Glu Glu Asn Gly His Asn Thr Tyr 1 5 10 210> 13 211> 10 212> PRT 213> Secuencia Artificial <220> <223> Descripción de Secuencia Artificial: Péptido ilustrativo <400> 13 Gln Phe Glu Glu Asn Trp Tyr Asn Thr Tyr 1 5 10 <210> 14 <211> 6 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Descripción de Secuencia Artificial: Péptido ilustrativo <400> 14 Ala Gly Thr Pro Ser Ala 1 5 <210> 15 <211> 6 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Descripción de Secuencia Artificial ilustrativo <400> 15 Ala Ala Glu Arg Ser Ala 1 5 <210> 16 <211> 6 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Descripción de Secuencia Artificial: Péptido ilustrativo <400> 16 His His His His His His

Claims

REIVINDICACIONES 1. Un método para tratar daño a la médula espinal, trauma a la médula espinal, daño al tejido neuronal producido por un ataque isquémico, infarto, hemorragia, o aneurismo, enfermedad de Huntington, esclerosis múltiple, mielopatía; mielitis; o siringomlielia , que comprende administrar a un paciente en necesidad del mismo una cantidad efectiva de un polipéptido de FGF-20 o un fragmento biológicamente activo del mismo. 2. El método según la reivindicación 1, en donde el polipéptido de FGF-20 es humano. 3. El método según la reivindicación 2, en donde el polipéptido tiene actividad inmunogénica específica de FGF-20. 4. El método según la reivindicación 1, en donde el polipéptido comprende el aminoácido 1 al aminoácido 211 como se expone en la Figura 1. 5. El método según la reivindicación 1, en donde el polipéptido tiene 95 % de identidad de secuencia desde el aminoácido 1 al aminoácido 211 del FGF-20 humano como se expone en la Figura 1 y en donde el polipéptido tiene actividad de FGF . 6. El método según la reivindicación 2, en donde el polipéptido tiene 95 % de identidad de secuencia desde el aminoácido 1 al aminoácido 211 del FGF-20 humano como se expone en al Figura 1 y en donde el polipéptido tiene actividad de FGF. 7. Un método para tratar daño a la médula espinal; trauma a la médula espinal; daño al tejido neuronal producido por un ataque isquémico, infarto, hemorragia, o aneurismo, enfermedad de Huntmgton; esclerosis múltiple, mielopatía; mielitis o siringomlielia , que comprende administrar a un paciente en necesidad del mismos una cantidad efectiva de un ácido nucleico que tiene una secuencia de nucleótidos que codifica para un polipéptido de FGF-20 o un fragmento biológicamente activo del mismo. 8. El método según la reivindicación 7, en donde el polipéptido de FGF-20 es humano. 9. El método según la reivindicación 8, en donde la secuencia de nucleótidos codifica sin interrupción para FGF-20 10. El método según la reivindicación 7, en donde la secuencia de nucleótidos tiene 95 % de identidad de secuencia a la secuencia de nucleótidos expuesta en la Figura 1. 11. El método según la reivindicación 8, en donde la secuencia de nucleótidos tiene 95 % de identidad de secuencia a la secuencia de nucleótidos expuesta en la Figura 1. 12. Un método para tratar una leucodistrofia adrenal , una leucoencefalopatía muí ifocal progresiva, encefalomíelitis , síndrome de Guí llan-barre, paraproteinemia , o una polineuropatía de desmíelinación inflamatoria crónica, que comprende administrar a un paciente en necesidad del mismo una cantidad efectiva de un ácido nucleico que tiene una secuencia de nucleótidos que codifica para un polipéptido de FGF-20 o un fragmento biológicamente activo del mismo. 13. El método según la reivindicación 12, en donde el polipéptido de FGF-20 es humano. 14. El método según la reivindicación 13, en donde el polipéptido de FGF-20 tiene actividad inmunogénica específica de FGF-20. 15. El método según la reivindicación, 12, en donde el polipéptido de FGF-20 comprende el aminoácido 1 al aminoácido 211 como se expone en la Figura 1. 15. El método según la reivindicación 12, en donde el polipéptido tiene 95 % de identidad de secuencia del aminoácido 1 al aminoácido 211 del FGF-20 humano como se expone en la Figura 1 y en donde el FGF tiene actividad de FGF. 17. El método según la reivindicación 13, en donde el polipéptido tiene 95 % de identidad de secuencia desde el aminoácido 1 al aminoácido 211 del FGF-20 humano como se expone en al Figura 1 y en donde el polipéptido tiene actividad de FGF. 18. Un método para tratar una leucodistrofía adrenal, una leucoencefalopatía multifocal progresiva, encefalomielit is , síndrome de Guillan-barre , para proteinemia, o una polineuropatía de desmielinación inflamatoria crónica, que comprende administrar a un paciente en necesidad del mismo una cantidad efectiva de un ácido nucleico que tiene una secuencia de nucleótidos que codifica para un polipéptido de FGF-20 o un fragmento biológicamente activo del mismo. 19. El método según la reivindicación 18, en donde el polipéptido de FGF-20 es humano. 20. El método según la reivindicación 19, en donde la secuencia de nucleótidos codifica sin interrupción para FGF-20. 21. El método según la reivindicación 18, en donde la secuencia de nucleótidos tiene 95 % de identidad de secuencia a la secuencia de nucleótidos expuesta en la Figura 1. 22. El método según la reivindicación 19, en donde la secuencia de nucleótidos tiene 95 % de identidad de secuencia a la secuencia de nucleótidos expuesta en la Figura 1. 0 23. Un método para promover la supervivencia de injerto, que comprende administrar a un paciente en necesidad del mismo una cantidad efectiva de un polipéptido de FGF-20 o un fragmento biológicamente activo del mismo. 24. El método según la reivindicación 23, en donde le polipéptido de FGF-20 es humano. 25. El método según la reivindicación 24, en donde el polipéptido tiene actividad inmunogénica específica de FGF-20. 26. El método según la reivindicación 23, en donde el polipéptido comprende del aminoácido 1 al aminoácido 211 como se expone en la Figura 1. 27. El método según la reivindicación 23, en donde el polipéptido tiene 95 % de identidad de secuencia del aminoácido 1 al aminoácido 211 del FGF-20 humano como se expone en la Figura 1 y en donde el polipéptido tiene actividad de FGF . 28. El método según la reivindicación 24, en donde el polipéptido tiene 95 % de identidad de secuencia del aminoácido 1 al aminoácido 211 del FGF-20 como se expone en la Figura 1 y en donde el polipéptido tiene actividad de FGF. 29. Un método para promover la supervivencia de injerto, que comprende administrar a un paciente en 0 necesidad del mismo una cantidad efectiva de un ácido nucleico que tiene una secuencia de nucleótidos que codifica para un polipéptido de FGF-20 o un fragmento biológicamente activo del mismo. 30. El método según la reivindicación 29, en donde el polipéptido de FGF-20 es humano. 31. El método según la reivindicación 30, en donde la secuencia de nucleótidos codifica sin interrupción para FGF-20. 32. El método según la reivindicación 29, en donde la secuencia de nucleótidos tiene 95 % de identidad de secuencia a la secuencia de nucleótidos expuesta en la Figura 1. 33. El método según la reivindicación 30, en donde la secuencia de nucleótidos tiene 95 % de identidad de secuencia a la secuencia de nucleótidos expuesta en la Figura l . 34. El método de la reivindicación 1, para tratar esclerosis múltiple. 35. El método de la reivindicación 7, para tratar esclerosis múltiple. 0