MXPA02006193A

MXPA02006193A - Metodos y materiales relacionados con peptidos y polinucleotidos tipo factor de crecimiento de celulas primordiales.

Info

Publication number: MXPA02006193A
Application number: MXPA02006193A
Authority: MX
Inventors: Ivan Labat
Original assignee: Hyseq Inc
Priority date: 1999-12-23
Filing date: 2000-12-23
Publication date: 2002-12-09
Also published as: EP1683809A1; MX245947B; CA2395443A1; US7317099B2; EP1248848A1; EP1248848B1; ATE355305T1; WO2001053500A8; EP1248848A4; ES2283343T3; DE60033695T2; WO2001053500A1; US20030211987A1; DE60033695D1

Abstract

La invencion proporciona los polinucleotidos y polipeptidos novedosos codificados por polinucleotidos y mutantes de, variantes de estos que corresponden a un polipeptido tipo factor de crecimiento de celulas primordiales, secretado, humano, novedoso. Estos polinucleotidos comprenden secuencias de acidos nucleicos aisladas de bibliotecas de cDNA preparadas a partir de celulas hepaticas esplenicas fetales, de ovario, de cerebro adulto, de tumor de pulmon, de medula espinal, de cervix, ovario, endoteliales, de cordon umbilical, linfocitos, fibroblastos de pulmon, cerebro fetal y testis. Un aspecto de la invencion incluye procesos que contienen vectores para producir polipeptidos tipo factor de crecimiento de celulas primordiales secretados, humanos, novedosos, y anticuerpos especificos para estos polipeptidos.

Description

MÉTODOS Y MATERIALES RELACIONADOS CON PEPTIDOS Y POLINUCLEÓTIDOS TIPO FACTOR DE CRECIMIENTO DE CÉLULAS PRIMORDIALES 1. ANTECEDENTES 1.1 CAMPO TÉCNICO La presente invención proporciona polinucleótidos novedosos y proteinas codificadas por tales polinucleótidos, asi como usos para estos polinucleótidos y proteínas, por ejemplo, en métodos terapéuticos, de diagnóstico y de investigación. En particular, la invención se refiere a un polipéptido novedoso de tipo factor de crecimiento de células madres. 1.2 ANTECEDENTES DE LA TÉCNICA Secuencias identificadas de polinucleó-idos polipéptidos tienen numerosas aplicaciones, por ejemplo, en diagnóstico, ámbito forense, mapeo de genes, identificación de mutaciones responsables de trastornos genéticos y otros rasgos, para evaluar la biodiversidad y para producir muchos otros tipos de datos y productos dependientes de ADN y secuencias de aminoácidos. Se sabe que las proteinas tienen una actividad biológica, por ejemplo, en virtud de su naturaleza secretada en el caso de clonación de secuencia lider, en virtud de su fuente de células o tejidos en el caso de técnicas basadas en reacción en cadena ce polimerasa, o bien en virtud de semejanza estructural con otros genes de actividad biológica conocida. La presen _e invención se enfoca a estos _.t „__, - -_ - , .... C . . i ___-^__ polipéptidos y a los polinucleótidos que los codifica. En particular, esta invención se enfoca a polipéptidos novedosos de tipo factor de crecimiento de células madres y polinucleótidos . Las células madres son definidas como células que tienen una capacidad de autorenovación ilimitada o prolongada, que pueden producir por lo menos un tipo de descendiente altamente diferenciado. Se cree que entre las células madres y su progenie terminalmente diferenciada existe una población intermedia de progenitores dedicados con una capacidad limitada y un potencial de diferenciación limitado (Watt y Hogan, (2000) Science 287, 1427-1430) . La división y diferenciación de células madres embriónicas provoca la formación de todas ias células y órganos diferenciados de un organismo multicelular. Se mantiene una reserva de células madres durante la vida adulta de un organismo con el objeto de renovar las poblaciones de células terminalmente diferenciadas tales como células hematopoyéticas. Se considera generalmente que las células madres adultas son derivadas de las células madres embriónicas y tienen solamente un potencial limitado de diferenciación. Las células madres en general han sido extremadamente dificiles de cultivar y mantener in vi tro, y ha sido todavía más dificil dirigirlas en una ruta de diferenciación predeterminada.

Sin embargo, más recientemente, nuevas investigaciones han mostrado que las células madres adultas poseen un potencial de diferenciación mucho más amplio de lo que se creia previamente. Se mostró que las células madres neurales adultas cuando son transplantadas a un huésped irradiado podian poblar la médula ósea y provocar la formación de células mieloides, linfoides y hematopoyéticas tempranas (Bjornson y colaboradores, (1999) Science. 283.534-537). Asi mismo, por vez primera, investigadores han podido cultivar células madres embriónicas humanas in vitro. Los autores mostraron que células de blastocistos humanos pueden ser cultivadas durante un periodo prolongado de tiempo y pueden ser diferenciadas en varios tipos de células (Thomson y colaboradores, (1998) Science. 282. 1145-1147). Esto ha abierto las puertas para el uso de trasplantes autólogo y regeneración de órganos para el tratamiento de insuficiencia orgánicas y enfermedades degenerativas. Interacciones precisas de múltiples receptores en células madres con factores expresados en células estromales y solubles se requieren para que una célula madre se divida y se dedique a diferenciación. Se ha vuelto aparente que los nichos de tejido y el microentorno que proporcionan los factores son de la mayor importancia. Citocinas de tipo IL-3, IL-6, IL-7, asi como proteinas solubles de tipo flt-3, eritropoyetina, y factores de células madres, actúan conjuntamente para lograr la diferenciación por una ruta especifica. Se piensa que combinaciones precisas de factores de crecimiento, citocinas, y localización de tejido podrian provocar el surgimiento de poblaciones diferentes de células madres diferenciadas. Así, los polipéptidos de tipo factor de crecimiento de células madres y polinucleótidos de la presente invención pueden ser utilizados para inducir la diferenciación de células madres embriónicas y adultas para provocar la formación de diferentes tipos de células. Pueden también utilizarse en el tratamiento de leucemia, hemofilia, así como enfermedades degenerativas tales como enfermedad de Alzheimer. Los polinucleótidos y polipéptidos de la presente invención pueden ser utilizados adicionalmente para generar nuevos tejidos y órganos que pueden ayudar a pacientes que requieren de tejidos trasplantados. 2. COMPENDIO DE LA INVENCIÓN Esta invención se basa en el descubrimiento de polipéptidos novedosos de tipo factor de crecimiento de células madres, polinucleótidos aislados novedosos que codifican tales polipéptidos, incluyendo moléculas de ADN recombinante, genes clonados o variantes degeneradas de los mismos, especialmente variantes que ocurren naturalmente tales como variantes alélicas, moléculas de polmucleótidoe de antisentido, y anticuerpos que reconocen específicarente uno o varios epítopos presentes en tales polipéptidos, así como híbrido as que producen tales anticuerpos. Específicamente, los polinucleótidos de la presente invención se basan en polinucleótidos aislados de bibliotecas de ADNc preparados a partir de hígados fetal, bazo, ovario, cerebro adulto, tumor 5 pulmonar, médula espinal, cervix, ovarios, células endoteliales, cordón umbilical, linfocitos, fibroblasto pulmonar, cerebro fetal, y testículos. Las composiciones de la presente invención incluyen además vectores tales como vectores de expresión que contienen los 10 polinucleótidos de la invención, células genéticamente manipuladas de tal manera que contengan tales polinucleótidos, y células genéticamente manipuladas para expresar tales polinucleótidos. Las composiciones de la presente invención proporcionan 15 polinucleótidos aislados que incluyen, sin limitarse a ellos, un polinucleótido que comprende la secuencia de nucleótidos presentada en SEQ ID NO: 1-22, 24, 26-27, 29, o 33; o bien un fragmento de SEQ ID NO: 1-22, 24, 26-27, 29 o bien 33, un polinucleótido que comprende la secuencia codificadora de 20 proteína de longitud completa de SEQ ID NO: 1-22, 24, 26-27, 29 o 33 (por ejemplo, SEQ ID NO: 23, 25, 0 23); y un polinucleótido que comprende la secuencia de nucleótidos de la secuencia codificadora de proteína madura de cualesquiera de SEQ ID NO: 1-22, 24, 26-27, 29 o 33. Los polm cleótidos 25 de la presente invención incluyen rambién, sin liraitarse a *¿ ______a rfflV?ftfi*^ J- -**_» ± - *- - °- a ^_*•_-_» íi_fe?l k u ellos, un polinucleótido que se híbrida en condiciones de hibridación estrictas con (a) el complemento de cualesquiera de la secuencias de nucleótidos presentadas en SEQ ID NO: 1-22, 24, 26-27, 29, o 33; (b) una secuencia de nucleótidos que codifica cualesquiera de SEQ ID NO: 23, 25, 28, 30-32, 34 o 35; un polinucleótido que es una variante alélica de cualesquiera de los polinucleótidos mencionados arriba que tiene por lo menos una identidad de secuencia de polinucleótidos del 70% con los polinucleótidos; un polinucleótido que codifica un homólogo de especie (por ejemplo, ortólogos) de cualesquiera de los polipéptidos mencionados arriba; o bien un polinucleótido que codifica un polipéptido que comprende un dominio específico o truncamiento de un polipéptido que comprende SEQ ID NO: 23, 25, 28 o 31. Una colección como se emplea en esta solicitud puede ser una colección de solamente un polinucleótido. La colección de información de secuencia o información de identificación única de cada secuencia puede proporcionarse en un grupo de ácidos nucleicos. En una modalidad, segmentos de la información de secuencia se proporcionan en un grupo de ácidos nucleicos con el objeto de detectar el polinucleótido que contiene el segmento. El grupo puede ser designado para detectar correspondencia completa o falta de correspondencia con el polinucleótido que contiene el segmento. La colección *_.__*_ ft_^_ __JjJL< puede también ser proporcionada en formato legible en computadora. Esta invención ofrece además vectores de expresión o clonación que comprenden por lo menos un fragmento de los polinucleótidos presentados arriba y células huéspedes u organismos transformados con estos vectores die expresión. Vectores útiles incluyen plásmidos, cósmidos, derivados de fagos lambda, fagémidos y similares, que son bien conocidos en la técnica. Por consiguiente, la invención proporciona también un vector que incluye un polinucleótido de la presente invención y una célula huésped que contiene el polinucleótido. En general, el vector contiene _n origen de replicación funcional en por lo menos un organismo, sitios de endonucleasa de restricción convenientes, y un marcador seleccionable para la célula huésped. Vectores de conformidad con la presente invención incluyen vectores ce expresión, vectores de replicación, vectores de generación de sondas, y vectores de secuenciamiento. Una célula huésped de conformidad con la presente invención puede ser una célula procariótica o eucariótica, y puede ser _n organismo unicelular o bien una parte de un organismo multi elular. Las composiciones de la presente invención incluyen polipéptidos que comprenden, sin limitarse ellos, un polipéptido aislado seleccionado dentro del grupo que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ IL NO: 23, 25, 28, 30-32, 34 o 35; o bien la pr- teína madura o de longitud completa correspondiente. Los pclipéptidos de la presente invención incluyen también pclipéptidos con actividad biológica que son codificados per (a) cualesquiera de los polinucleótidos que tienen una secuencia de nucleótidos presentada en SEQ ID NO. 1-22, 24 , 26-27, 29 o 33; o (b) polinucleótidos que se hibridan con el complemento de los polinucleótidos de (a) en acondiciones estrictas de hibridación. Variantes biológica 3 inmunológicamente activas de cualesquiera de las secuencias de proteína listadas en SEQ ID NO: 23, 25, 28, 30-32, 34 o 35 y equivalentes sustanciales de las mismas que conservar. la actividad biológica o inmunológica están también conte_?.iadas. Los polipéptidos de la presente invención pueden es_=_r sintetizados químicamente en su totalidad o parcialmente- pero de preferencia son producidos por medios recombir.i_.-es utilizando las células genéticamente manipuladas (por ejemplo, células huéspedes) de la invención. La invención proporciona también composiciones que comprenden un polipéptido de la presente invención. Composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden comprender un polipéptido de la invención y _n vehículo aceptable, por ejemplo, un vehículo hic^rofílico, por ejemplo, farmacéuticamente aceptable. La invención se refiere tambiér- _ métodos para la producción de un polipéptido de la presente invención, que comprende el cultivo de las células huéspedes que comprenden un vector de expresión que contiene por lo menos un fragmento de un polinucleótido que codifica un polipéptido de la presente invención en un medio de cultivo adecuado en condiciones que permiten la expresión del polipéptido deseado, y la purificación de la proteína o polipéptido a partir del cultivo o de las células huéspedes. Modalidades preferidas incluyen las modalidades en las cuales la proteína producida por dicho proceso es una forma madura de la proteína. Polinucleótidos de conformidad con la presente invención tienen numerosas aplicaciones en varias técnicas conocidas por parte del experto en la materia de la biología molecular. Esta técnicas incluyen el uso como sondas de hibridación, el uso como oligómeros, o cebadores, para reacción en cadena de polimerasa, el uso en un conjunto, el uso en medios legibles en computadora, uso para mapeo de genes y cromosomas, el uso en la producción recombinante de proteína, y el uso en la generación de ADN o ARN de antsentido, sus análogos químicos y similares. Por ejemplo, cuando la expresión de un ARNm es limitada en gran medida a un tipo particular de células o tejidos, polinucleótidos de la presente invención pueden utilizarse como sondas de hibridación para detectar la presencia de ARNm particular en célula o tejido en una muestra utilizando, por ejemplo, la hibridación in situ.

En otras modalidades ejemplares, los polinucleótidos son utilizados en diagnóstico como marcadores de secuencias expresados para identificar genes expresados o bien, como se sabe en la técnica y como se presenta en forma de ejemplo por 5 Vollrath y colaboradores, Science 258:52-59 (1992), como marcadores de secuencias expresados para el mapeo físico del genoma humano. • Los polipéptidos de conformidad con la presente invención pueden ser utilizados en varios de los procedimientos y 10 métodos convencionales aplicados hoy en día a otras proteínas. Por ejemplo, un polipéptido de la presente invención puede ser utilizado para generar un anticuerpo que • se une específicamente al polipéptido. Tales anticuerpos, particularmente anticuerpos monoclonales, son útiles para 15 detectar o cuantificar el polipéptido en el tejido. Los polipéptidos de la presente invención pueden ser utilizados como marcadores de pesos moleculares, y como complemento alimenticio. Métodos se proporcionan también para el tratamiento, la 20 prevención o la mejora de una condición médica, los cuales comprenden el paso de administrar a un mamífero una cantidad terapéuticamente efectiva de la composición que comprende un polipéptido de la presente invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable. 25 En particular, los polipéptidos de tipo factor de crecimiento ¡& ~aá # & *& A ^ de células madres y polinucleótidos de la invención pueden también utilizarse para inducir la diferenciación de células madres embriónicas y adultas para provocar el surgimiento de diferentes tipos de células. Pueden también utilizarse en el 5 tratamiento de enfermedades, por ejemplo, leucemia, hemofilia y enfermedades degenerativas tales como enfermedad de Alzheimer. Los polinucleótidos y polipéptidos de la presente • invención pueden también ser utilizados adicionalmente para generar nuevos tejidos y órganos que pueden ayudar a 10 pacientes que requieren de tejidos trasplantados. Los métodos de la presente invención proporcionan también métodos para el tratamiento de trastornos tales como los fc mencionados aquí, que comprenden la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición que 15 comprende un nucleótido o polipéptido de la presente invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable a un sujeto mamífero que presenta síntomas o tendencias relacionadas con trastornos mencionados aquí. Además, la invención abarca métodos para el tratamiento de enfermedades 20 o trastornos de conformidad con lo mencionado aquí, que comprende el paso de administrar una composición que comprende compuestos y otras sustancias que modulan la actividad global de los productos génicos objetivo y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Compuestos y otras 25 sustancias pueden efectuar dicha modulación ya sea a nivel de la expresión del gen/proteína objetivo o bien la actividad de la proteína objetivo. Específicamente, se proporcionan métodos para prevenir, tratar o mejorar una condición médica, incluyendo enfermedades virales, que comprende la 5 administración a un sujeto mamífero, incluyendo sin limitarse a ellos, seres humanos, de una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición que comprende un polipéptido de • la invención o una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición que comprende un socio de enlace de (por ejemplo, 10 anticuerpo específicamente reactivo para) polipéptidos de tipo factor de crecimiento de células madres de la invención. Los mecanismos de la condición particular o patología específica determinaran si los polipéptidos de la presente • invención o socios de enlace (o bien inhibidores) son 15 benéficos para el individuo que requiere de tratamiento. De conformidad con este método, polipéptidos de la presente invención pueden ser administrados para producir una inhibición de la función celular in vitro o in vivo . Un polipéptido de la presente invención puede ser administrado 20 in vivo solo o bien como adjunto a otras terapias. A la inversa, proteína u otros ingredientes activos de la presente invención pueden ser incluidos en formulaciones de un agente particular con el objeto de minimizar los efectos colaterales de dicho agente. 25 La invención proporciona además métodos para preparar fármacos útiles en los métodos descritos arriba. La presente invención proporciona además métodos para detectar la presencia de los polinucleótidos o polipéptidos de la presente invención en una muestra (por ejemplo, tejido o muestra) . Tales métodos pueden ser utilizados, por ejemplo, como parte de evaluación de pronostico y diagnóstico de trastornos según lo comentado aquí y para la identificación de sujetos que presentan una predisposición a estas condiciones. La invención proporciona un método para detectar un polipéptido de la presente invención en una muestra, que comprende la puesta en contacto de la muestra con un compuesto que se une y forma una complejo con el polipép i-do en condiciones y durante un período suficiente para formar el complejo, y la detección de la formación del complejo, de tal manera que si se forma un complejo se detecta el polipéptido. La invención proporciona también kits que comprenden sondas de polinucleótidos y/o anticuerpos monoclonales, y estándares opcionalmente cuantitativos, para llevar a cabo los métodos de la presente invención. Además, la invención proporciona métodos para evaluar la eficacia de fármacos y el monitoreo del progreso de pacientes, involucrados en ensayos clínicos para el tratamiento de trastornos de conformidad con lo indicado arriba. La invención proporciona también métodos para identificar compuestos que modulan (es decir, incrementan o disminuyen) la expresión o actividad de los polinucleótidos y/o polipéptidos de la invención. Tales métodos pueden ser utilizados, por ejemplo, para la identificación de compuestos 5 que pueden mejorar síntomas de trastornos mencionados aquí. Tales métodos pueden incluir, sin limitarse a ellos, ensayos para identificar compuestos y otras sustancias que ^ interactúan (por ejemplo, se unen) con los polipéptidos de la invención. 10 La invención proporciona un método para identificar un compuesto que se une al polipéptido de la presente invención, que comprende la puesta en contacto del compuesto con el polipéptido en condiciones y durante un tiempo suficiente para formar un complejo polipéptido/compuesto y para detectar 15 el complejo, de tal manera que si se detecta el polipéptido/compuesto, se identifica un compuesto que se une con el polipéptido. Se proporciona también un método para identificar un compuesto que se une al polipéptido, que comprende la puesta 20 en contacto del compuesto con el polipéptido en una célula durante un tiempo suficiente para formar un complejo polipéptido/compuesto, en donde el complejo activa la expresión de una secuencia de gen reportero en la célula y la detección del complejo por la expresión de secuencia de gen 25 reportero de tal manera que si se detecta el complejo polipéptido/compuesto, se identifica un compuesto que se une al polipéptido. 3. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La figura 1 muestra el alineamiento esquemático de SEQ ID NO: 5 24 con SEQ ID NO: 1-21. La figura 2 muestra el alineamiento de secuencias de aminoácidos BLASTX entre el polipéptido de tipo factor de • crecimiento de células madres SEQ ID NO: 28 y la proteína precursora de marcador 7 endotelial tumoral SEQ ID NO: 36 (St. 10 Croix y colaboradores, Science, 289, 1197-1201), lo que indica que las dos secuencias comparten una semejanza del 72% en 441 residuos de aminoácidos y una identidad del 57% en los mismos 441 residuos de aminoácidos, en donde A = Alanina, C = Cisteina, D = Ácido aspártico, E = Ácido glutámico, F = 15 Fenilalanina, G = Glicina, H = Histidina, I = Isoleucina, K = Lisina, L = leucina, M = Metionina, N = Asparagina, P = Prolina, Q = Glutamina, R = Arginina, S = Serina, T = Treonina, V = Valina, = Triptófano, Y = Tirosina. Los '' espacios son representados por medio de guiones. 20 4. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN El polipéptido de tipo factor de crecimiento de célula madre de SEQ ID NO: 28 es una proteína de aproximadamente 529 aminoácidos con una masa molecular predicha de aproximadamente 59.2 kDa no glicosilada. Investigaciones en 25 bases de datos de proteína con el algoritmo BLASTP (Altschul ----jaa^^_____g,a^_atll.._._,____._^,at_i_ta_e_.,, .-jtfc.»» .» t_-._.. . ,.,.** .«.wat. <- <¿««___^*^_»a<_«fc_j»e»>«*_t.<_a «_dn_ji S.F. y colaboradores J. Mol. Evol. 36:290-300 (1993) y Altschul y colaboradores J. Mol. Biol.. 21:403-10 (1990), que se incorporan aquí por referencia) indican que SEQ ID NO: 28 es homologa a la proteína precursor de marcador 7 endotelial tumoral . La figura 2 muestra el alineamiento de secuencias de aminoácidos BLASTX entre la proteína codificada por polipéptido de tipo factor de crecimiento de célula madre SEQ ID NO: 28 y proteína precursora de marcador 7 endotelial tumoral SEQ ID NO: 36 (St. Croix y colaboradores, Science. 289. 1197-1201), lo que indica que las dos secuencias comparten una semejanza del 72% en 441 residuos de aminoácidos y una identidad del 57% en los mismos 441 residuos de aminoácidos. El polipéptido de señal predicho de aproximadamente 30 residuos es codificado desde aproximadamente el residuo 1 hasta el residuo 30 de SEQ ID NO: 28 (SEQ ID NO: 30) . La porción extracelular es útil per se.' Esto puede ser confirmado por expresión en células de mamíferos y secuenciamiento del producto disociado. La región de polipéptido de señal fue predicha utilizando el programa Neural Network SignalP VI .1 (Nielsen y colaboradores (1997) Int. J. Neur. Sist. 8,581) (del Center for Biological Sequence Analysis), The Technical University of De ark [Centro de Análisis de secuencias biológicas, la Universidad •_._,_.._..— .*__... técnica de Dinamarca] ) , y análisis de hidrofobicidad utilizando el algoritmo kyte/Doolittle (Kyte y Doolittle (1982) J. Mol. 157, 105) . Un experto en la materia reconoceré que el sitio de disociación puede ser diferente del sitie predicho por el programa de computo. SEQ ID NO: 31 es el polipéptido resultante cuando el péptido de señal es removido de SEQ ID NO: 28. Una región predicha de transmembrana de aproximadamente 28 residuos es codificada a partir de aproximadamente el residuo 452 al residuo 479 de SEQ ID NO: 28 (SEQ ID NO: 32) . Puede ser confirmada por expresión en células en mamíferos. La región de transmembrana fue predicha empleando el programa Neural Networks SignalP VI.1 (Nielsen y colaboradores (1997) Int. J. Neur. Sist. 8,581) (from Center for Biological Sequence Analysis, the Technical University of Den ark [Centro de Análisis de Secuencias Biológicas, Universidad Técnica de Dinamarca] ) , y análisis de hidrofobicidad empleando el algoritmo Kyte/Doolittle (Kyte/Doolittle (1982) J. Mol. Biol. 157, 105). Un experto en la materia reconoceré que la región de transmembrana puede ser diferente de lc predicho por el programa de computo. El polipéptido de tipo factor de crecimiento de células madres de SEQ ID NO: 25 (idéntico a SEQ ID NO: 23) es una proteína de aproximadamente 392 aminoácidos con una masa molecular predicha de aproximadamente 50 kDa no glicosilada. _.;.c-.—e-iC_.i ___él___á_Bi*life_< .. _*an_>__í..«i»—. -_n_<e. «a__»,,c. —Sj^J^J.^^^&___^^^^fe_c_ Investigaciones en base de datos de proteína con el algoritmo BLASTP (Altschul S.F. y colaboradores, J. Mol. Evol. 36:290-300 (1993) y Altschul S.F. J. Mol. Biol. 21:403-10 (1990), que se incorporan aquí por referencia) indican que SEQ ID NO: 25 es homologa a proteína precursora de marcador 7 endotelial tumoral . Una región predicha de transmembrana de aproximadamente 28 residuos es codificada desde aproximadamente el residuo 315 hasta el residuo 342 de SEQ ID NO: 25 (SEQ ID NO: 32) . Se puede confirmar por expresión en células de mamíferos. La región de transmembrana fue predicha empleando el programa Neural Networks SignalP VI .1 (Nielsen y colaboradores (1997) Int. J. Neur. Sist. 8,581) (from Center for Biological Sequence Analysis, the Technical University of Denmark [Centro de Análisis de Secuencias Biológicas, Universidad Técnica de Dinamarca] ) , y análisis de hi rofobicidad utilizando el algoritmo de Kyte/Doolittle (Kyte/Doolittle (1982) J.* Mol. Biol. 157, 105) . Un experto en la materia reconocerá que la región de transmembrana puede ser diferente de lo predicho por el programa de computo. En particular, los polipéptidos de tipo factor de crecimiento de células madres y polinucleótidos de la invención pueden ser utilizados para inducir la diferenciación de células madres embriónicas y adultas para provocar el surgimiento de diferentes tipos de células. Pueden también utilizarse en el tratamiento de leucemia, hemofilia, y enfermedades degenerativas de tipo enfermedad de Alzheimer. Los polinucleótidos y polipéptidos de la presente invención pueden ser utilizados para generar nuevos tejidos y órganos que pueden ayudar a pacientes que requieren de tejidos transplantados . 4.1 DEFINICIONES Se debe observar que como se emplea aquí y en las reivindicaciones adjuntas, la forma singular "un", "una", y "el/la" incluye referencias en plural a menos que el contexto indique claramente lo contrario. El término "activo" se refiere a formas del polipéptido que conservan las actividades biológicas y/o inmunológicas de cualquier polipéptido que ocurre naturalmente. De conformidad con la presente invención, los términos "biológicamente activos" o "actividad biológica" se refiere a una proteína o péptido que tiene funciones estructurales, reguladoras o bioquímicas de una molécula que ocurre naturalmente. De la misma manera, las expresiones biológicamente activos" o "actividad biológica" se refiere a la capacidad del péptido de tipo factor de crecimiento de células madres natural, recombinante o sintético, o cualquier péptido del mismo, para inducir un respuesta biológica específica en animales apropiados o células apropiadas y para unirse con anticuerpos específicos. El término "actividad biológica de tipo factor - * lÉ^tii -f_. i iimm n-r - ?in--ái[.^ de crecimiento de células madres" se refiere a una actividad biológica similar a la actividad biológica de un péptido de tipo factor de crecimiento de células madres. El término "células activadas" como se emplea en esta solicitud se refiere a las células que participan en trafico en membrana extracelular o intracelular, incluyendo la exportación de moléculas secretorias o enzimáticas como parte de un proceso normal o enfermedad. Los términos "complementario" o "complementaridad" se refiere a la unión natural de polinulceótidos por apareamiento de bases. Por ejemplo, las secuencias 5'-AGT-3' se une con la secuencia complementaria 3'-TCA-5'. La complementaridad entre dos moléculas de cadena única puede ser "parcial" de tal manera que solamente una parte de los ácidos nucleicos se una, o bien puede ser "completa" de manera que exista una complementaridad total entre las moléculas de cadena única. El grado de complementaridad entre las cadenas de ácidos nucleicos tiene efectos significativos sobre la eficiencia y la fuerza de la hibridación entre las cadenas de ácido nucleico. El término "células madres embriónicas (ES)" se refiere a una célula que puede provocar el surgimiento de muchos tipos de células diferenciadas en un embrión o en un adulto, incluyendo las células germinales. El término "células germinales de línea germinal (GSCc) " se refiere a células madres derivadas de células madres primordiales que proporcionan una fuente constante y continua de células germinales para la producción de gametos. El término "células germinales primordiales (PGCs)" se refiere a una pequeña 5 población de células apartadas de otros linajes celulares particularmente del saco vitelino, mesentéricos, o crestas gonadales durante la embriogénesis que tienen el potencial de diferenciarse en células germinales y otras células. Las PGCs son la fuente a partir de las cuales se derivan las células 10 GSCs y ES. Las PGCs, las GSCs y las células ES son capaces de autorenovación. Por consiguiente, estas células no solamente poblan la línea germinal y provocan la formación de varias f?¡ células terminalmente diferenciadas que comprenden los órganos especializados adultos sino que pueden regenerarse 15 ellas mismas. El término "totipotentes" se refiere a la capacidad de una célula para diferenciarse en la totalidad de los tipos de células de un organismo adulto. El término "pluripotente" se refiere a la capacidad de una célula para diferenciarse en varios tipos de células diferenciadas 20 presentes en un organismo adulto. Una célula pluripotente es limitada en cuanto a su capacidad de diferenciación en comparación con la célula totipotente. El término "fragmento de modulación de expresión", EMF, se refiere a una serie de nucleótidos que modula la expresión de 25 un ORF enlazado operativamente o bien otro EMF.

Como se emplea aquí, una secuencia "modula la expresión de una secuencia enlazada operativamente" cuando la expresión de la secuencia es alterada por la presencia de EMF. EMFs incluye sin limitarse a ellos, promotores, y secuencias 5 moduladoras de promotores (elementos inducibles) . Una clase de EMFs es fragmentos de ácido nucleico que inducen la expresión de un ORF enlazado operativamente en respuesta a un • factor regulador específico o evento fisiológico específico. Los términos "secuencia de nucleótidos" o "ácido nucleico" o 10 "polinucleótidos" o "oligonucléotidos" se emplean de manera intercambiable y se refieren a un heteropolímero de nucleótidos o a la secuencia de estos nucleótidos. Estas expresiones se refieren también al ADN o ARN de origen • genómico o sintético que pueden ser de cadena única o de 15 cadena dobles y pueden representar la cadena de sentido o la cadena de antisentido, con relación a ácido nucleico (PNA) o bien a cualquier material de tipo ADN o de tipo ARN. En las 'secuencias A es adenina, C es citocina, G es guanina, y T es timina, mientras que N es A, T, G, o C. Se contempla que 20 cuando el polinucleótido es ARN, T (timina) en la secuencia aquí puede ser reemplazado por U (uracilo) . En general, segmentos de ácido nucleico proporcionados por esta invención pueden ser ensamblados a partir de fragmentos del genoma de enlazadores de oligonucléotidos cortos, o bien a partir de 25 una serie de oligonucléotidos, o bien a partir de oligonucléotidos individuales, para proporcionar un ácido nucleico sintético que puede ser expresado en una unidad transcripcional recombinante que comprende elementos reguladores derivados de un operon microbiano o viral, o bien 5 un gen eucariótico. Los términos "fragmento de oligonucléotido" o bien un "fragmento de polinucleótido", "porción", o bien "segmento" o "sondas", o "cebador" se emplean de manera intercambiable y se refieren a una secuencia de residuos de nucleótidos que 10 tiene por lo menos aproximadamente 5 nucleótidos, con mayor preferencia por lo menos aproximadamente 7 nucleótidos, con mayor preferencia por lo menos aproximadamente 9 nucleótidos, con mayor preferencia por lo menos aproximadamente 11 • nucleótidos y con mayor preferencia por lo menos 15 aproximadamente 17 nucleótidos. El fragmento es de preferencia menor que aproximadamente 500 nucleótidos, de preferencia menos que aproximadamente 200 nucleótidos, con mayor preferencia menor que aproximadamente 100 nucleótidos, con mayor preferencia menor que aproximadamente 50 20 nucleótidos y con preferencia muy especial menos que aproximadamente 30 nucleótidos. De preferencia, la sonda es de aproximadamente 6 nucleótidos a aproximadamente 200 nucleótidos, de preferencia de aproximadamente 15 nucleótidos a aproximadamente 50 nucleótidos, con mayor preferencia de 25 aproximadamente 17 nucleótidos a 30 nucleótidos y con mayor i_ __- ü& «>._»_..j>á¿.to¿?a«Ma preferencia de aproximadamente 20 nucleótidos a aproximadamente 25 nucleótidos. De preferencia, los fragmentos pueden ser utilizados en reacción en cadena de polimerasa (PCR) , varios procedimientos de hibridación o 5 procedimientos de microensayo para identificar o amplificar partes idénticas o relacionadas de moléculas de ARNm o ADN. Un fragmento o segmento puede identificar de manera única cada secuencia de polinucleótido de la presente invención. De preferencia, el fragmento comprende una secuencia 10 sustancialmente similar a una porción de SEQ ID NO: 1-22, 24, 26-27, 29, o 33. Sondas pueden ser utilizadas, por ejemplo, para determinar si moléculas específicas ARNm están presentes en la célula o • tejido o bien para aislar secuencias similares de ácido 15 nucleico a partir de ADN cromosómico de conformidad con lo descrito por Walsh y colaboradores (Walsh, P.S. y colaboradores, 1992, PCR Métodos Appl 1:241-250). Pueden ser marcadas por traducción de corte, reacción de llenado Klenow, reacción en cadena de polimerasa, o bien otros métodos bien 20 conocidos en la técnica. Sondas de la presente invención, su preparación y/o marcado son elaboradas en Sambrook, J. y colaboradores, 1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual. [Clonación Molecular: Manual de Laboratorio, Cold Spring Harbor Laboratory, N.Y: o bien Ausbel. F.M. y colaboradores, 25 1989. Current Protocols in Molecular Biology [Protocolos te-¡lÍ_fe_»Íí_lfÍirÍa —JS_-M. e . ....__..|._-:c:j.iefce... ,-...»...J..,^.C.....e<_J.

Actuales en Biología Molecular] John Wiley & Sons, Nueva York N.Y. ambos integrándose aquí por referencia en su totalidad. Las secuencias de ácido nucleico de la presente invención incluyen también la información de secuencia de cualesquiera 5 de las secuencias de ácido nucleico de SEQ ID NO: 1-22, 24, 26-27, 29 o 33. La información de secuencia puede ser un segmento de SEQ ID NO: 1-22, 24, 26, 26-27, 29 o 33 que identifica o representa de manera única la información de secuencia de SEQ ID NO: 1-22, 24, 26-27, 29, o 33. Un 10 segmento de ese tipo puede ser una secuencia de ácido nucleico 20-mero puesto que la probabilidad que un 20-mero corresponda totalmente en el genoma humano es de 1 en 300. En el genoma humano, existen tres mil millones de pares de bases en un grupo de cromosomas. Puesto que existen 420 20- 15 meros posibles, existen 300 veces más 20-meros que pares de bases en un grupo de cromosomas humanos. Utilizando el mismo análisis, la probabilidad de que un 17-mero corresponda totalmente en el genoma humano es de 1 en 5. Cuando estos segmentos se usan en grupos para estudios de expresión, se 20 pueden emplear segmentos de 15-mero. La probabilidad de que el 15-mero corresponda totalmente en las secuencias expresadas es también de 1 en 5 puesto que las secuencias expresadas comprenden menos que aproximadamente 5% de la secuencia entera del genoma. 25 De manera similar, cuando se utiliza información de secuencia par detectar una falta de correspondencia única, un segmento puede ser un 25-mero. La probabilidad que el 25-merc aparezca en el genoma humano con una sola falta de correspondencia se calcula multiplicando la probabilidad de 5 una correspondencia total (l-^425) veces la probabilidad incrementada de falta de correspondencia en cada posición de nucleótido (3X25) . La probabilidad que un 18-mero con una sola falta de correspondencia pueda ser detectado en un grupo para estudios de expresión es de 1 en 5. La probabilidad que 10 un 20-mero con una sola falta de correspondencia pueda ser detectado en un genoma humano es de aproximadamente 1 en 5. El término "marco abierto de lectura", ORF, se refiere a una ^fc serie de tripletes de nucleótidos que codifican aminoácidos sin codones de terminación y es una secuencia que puede 15 traducirse en proteína. El término "enlazado operativamente" o bien "asociado operativamente" se refiere a secuencias de ácido nucleico funcionalmente relacionadas. Por ejemplo1, un promotor es asociado operativamente o bien enlazado operativamente con 20 una secuencia codificadora si el promotor controla la trascripción de la secuencia codificadora. Mientras secuencias de ácido nucleico operativamente enlazadas pueden ser contiguas en el mismo marco de lectura, ciertos elementos genéticos, por ejemplo, genes represores, no están enlazados 25 contiguamente a la secuencia codificadora pero siguen , ?bti t^mJ. controlando la trascripción / traducción de la secuencia codificadora. El término "pluripotencia" se refiere a la capacidad de una célula para diferenciar numerosos tipos de células 5 diferenciadas que están presentes en un organismo adulto. Una célula pluripotente es limitada en su capacidad de diferenciación con una célula totipotente. • Los términos "polipéptidos" "péptidos" "secuencia de aminoácidos" se refieren a un oligopéptido, péptido, 10 polipéptido, o secuencia de proteína o fragmento de la misma y a moléculas sintéticas o moléculas que ocurren naturalmente. Un "fragmento", "porción", o "segmento" de polipéptido es una sección de residuos de aminoácidos de por • lo menos 5 aminoácidos, de preferencia por lo menos 15 aproximadamente 7 aminoácidos, con mayor preferencia por lo menos aproximadamente 9 aminoácidos y con mayor preferencia, por lo menos 17 o más aminoácidos. El péptido de preferencia no es mayor que aproximadamente 200 aminoácidos, con mayor preferencia es menor que 150 aminoácidos y con 20 preferencia especial es menor que 100 aminoácidos. De preferencia especial, el péptido tiene de aproximadamente 5 aproximadamente 200 aminoácidos. Para ser activo, cualquier polipéptido debe tener una longitud suficiente para desplegar una actividad biológica y/o inmunológica. 25 El término e "péptido que ocurre naturalmente" se refiere a polipéptidos producidos por células que no han sido manipuladas genéticamente, y contempla específicamente varios polipéptidos que provienen de modificaciones postraducción del polipéptido incluyendo, sin limitación, acetilación, carboxilación, glicosilación, fosfonilación, lipidación y ascilación. El término "porción codificadora de proteína traducida" se refiere a una secuencia que codifica la proteína de longitud entera que puede incluir cualquier secuencia líder o una secuencia de procesamiento. El término "secuencia codificadora de proteína madura" se refiere a una secuencia que codifica un péptido o una proteína sin secuencia líder / secuencia de señal. La "porción de proteípa madura" se refiere a la porción de la proteína sin la secuencia líder / secuencia de señal. El péptido puede tener las secuencias líderes removidas durante el procesamiento en la célula, o bien la proteína puede haber ' sido producida sintéticamente, o bien utilizando un ; oligonucleótido que codifica solamente la secuencia ' codificadora de proueína madura pueda o no incluir un residuo de metionina inicial. La metionina inicial es frecuentemente removida durante el procesamiento del péptido. El término "derivados" se refiere a polipéptidos modificados químicamente a través de tales técnicas como determinación de ubicuidad marcado (con radionucleótidos o varias encimas, por ejemplo), unión de polímetros covalentes, por ejemplo P dilación (derivatización con polietilenglicol) e inserción o sustitución por síntesis química de aminoácidos tales como ornitina que no ocurre normalmente en proteínas humanas. El término "variante" o bien "análogo" se refiere aun polipéptido que difiere de polipéptidos que ocurren naturalmente por inserciones de lesiones, y sustituciones de aminoácidos, creados utilizando, por ejemplo, técnicas de ADN recombinante. Lineamientos para determinar lo residuos de aminoácidos que pueden ser reemplazados. agregados o removidos sin cancelar las actividades de interés, pueden encontrase comparando la secuencia del polipeptido particular con la secuencia de péptidos homólogos y minimizando el número de cambios de secuencias de aminoácidos efectuados en regiones de alta homología (regiones conservadas) o bien reemplazando aminoácidos con una secuencia de consenso. Alternativamente, variantes recombinantes que codifican les mismos polipéptidos o bien polipéptidos similares pueden ser sintetizadas y seleccionadas haciendo uso de la "redundancia" en el código genético. Varias sustituciones de codones tales como cambios silenciosos que producen varios sitios de restricción pueden ser introducidas para optimizar la clonación en un plásmido o vector viral o expresión en un sistema procariótico o eucariótico particular. Mutaciones en la secuencia de nucleótidos pueden ser reflejadas en el ?JkSo— ta t m*i,««_...-iií t-:¿.y? .¡. *¡r ..._»- j._>f..,_ -.- ... ¡_8——i^»»»t«¡H?__ polipéptido o dominios de otros péptidos agregados al polipéptido con el objeto de modificar las propiedades de cualquier parte del polipéptido, para cambiar características tales como afinidades de enlace de ligando, afinidades entre cadenas o bien régimen de degradación / cambio. De preferencia, las "sustituciones" de aminoácidos son el resultado del reemplazo de una aminoácido por otro aminoácido que tiene propiedades estructurales y/o químicas similares, es decir, reemplazos conservadores de aminoácidos. Sustituciones "conservadores" de aminoácidos pueden efectuarse con base en semejanza de polaridad, carga, solubilidad, hidrofobicidad, hidrofilicidad, y/o la naturaleza antipática de los residuos involucrados. Por ejemplo, aminoácidos no polares (hidrofóbicos) incluyen alanina, leucina, isoleucina, balina, prolina, fenilalalina, criptófano, y metionina; aminoácidos neutrales polares incluyen, glicina, serina, treonina, cisteina, tirosina, asparagina, y glutamina; aminoácidos cargados positivamente (básicos) incluyen arginina, licina, e instidina; y aminoácidos cargados negativamente (ácidos) incluyen ácido aspártico y ácido glutámico. "Inserciones" o "deleciones" se encuentran de preferencia dentro de un rango de 1 a 20 aminoácidos, con mayor preferencia de 1 a 10 aminoácidos. La variación permitida puede ser determinada experimentalmente haciendo sistemáticamente inserciones de lesiones o sustituciones de aminoácidos en una molécula de polipéptido utilizando técnicas de ADN recombinante y ensayando las variantes recombinantes resultantes para determinar su actividad. Alternativamente, cuando se desea alterar la función, se pueden manipular inserciones, deleciones o bien alteraciones no conservadoras para producir polipéptidos alterados. Dichas alteraciones pueden alterar, por ejemplo, una o varias de las funciones biológicas o características bioquímicas de los polipéptidos de la invención. Por ejemplo, tales alteraciones pueden cambiar las características de los polipéptidos tales como afinidades de enlace de ligando, afinidades entre cadenas o bien régimen de degradación / cambio además tales alteraciones pueden ser seleccionadas con el objeto de generar polipéptidos más adecuados para expresión, incremento, y similares en las células huéspedes seleccionadas para expresión. Por ejemplo, residuos de cisteina pueden ser removidos o sustituidos por otro residuo de aminoácido con el objeto de eliminar fuentes disulfuro. Los términos "purificados" o bien "sustancialmente purificados" como se utiliza aquí se refieren al hecho que el ácido nucleico indicado o polipéptido indicado está presente en ausencia sustancial de otras macromoléculas biológicas, por ejemplo, polinucleótidos, proteínas, y similares. En un modalidad, el polinucleótido o polipéptido es purificado de ,,^^-#fift_j_^sA.__*fa_-J__-i-tal manera que constituya por lo menos 95% en peso, con mayor preferencia por lo menos 99% en peso, de las macromoléculas biológicas indicadas presentes (pero agua, amortiguadores, y otras pequeñas moléculas, especialmente moléculas que tienen un peso molecular inferior a 1000 Daltones, pueden estar presentes) . El término "Aislado" como se emplea aquí se refiere a un ácido nucleico o polipéptido separado de por lo menos otro componente (por ejemplo, ácido nucleico o polipéptido) presente con el ácido nucleico en su fuente natural. En una modalidad el ácido nucleico o polipéptido se encuentra en presencia (eventualmente) solamente de un solvente amortiguador, ion, o bien otros componentes normalmente presentes en una solución del mismo. Los términos "Aislado" y "purificado" no abarcan ácidos nucleicos o polipéptidos presentes en su fuente natural. El término "recombinante", cuando se emplea aquí para referirse a un polipéptido o proteína significa que un polipéptido o proteína es derivado de sistemas de expresión recombinantes (Por ejemplo, microbianos de insectos, o de mamíferos) . El término "microbianos" se refiere a polipéptidos recombinantes o proteínas elaborados en sistemas de expresión bacterianos o fúgales (por ejemplo, levaduras) . Como producto, "microbiano recombinante" define un polipéptido o una proteína esencialmente libre de sustancias Íj_-_-A_-«c4_ lJM__ endógenas nativas y no acompañado por glicosidación nativa asociada. Polipéptidos o proteínas expresados en la mayoría de los cultivos bacterianos, por ejemplo, E. colli , estarán libres e modificaciones por glicosidación; polipéptidos o proteínas expresadas en levadura tendrán un patrón de glicosilación en general diferente de los patrones de glicosídación expresados en células de mamíferos. El término "vehículo de expresión recombinante o vector" se refiere a un plásmido o fagos o virus o vector, para expresar un polipéptido a partir de una secuencia de ADN (ARN) un vehículo de expresión puede comprender una unidad de transcripción que comprende un ensamble de (1) un elemento genético o elementos genéticos que tienen una función reguladora en la expresión génica, por ejemplo, promotores o realzadores, (2) una secuencia estructural o codificadora transcrita en ARNm y traducida en proteína y (3) secuencias de inicio y término de transcripción apropiadas. Unidades estructurales contempladas para su uso en sistemas de expresión eucarióticos o en levadura incluyen de preferencia una secuencia líder que permite la secreción extracelular de proteína traducida por una célula huésped. Alternativamente, cuando una proteína recombinante es expresada sin secuencia de transporte o secuencia líder, puede incluir un residuo de metionina en terminal amino. Este residuo puede o no ser subsecuentemente disociado de la proteína recombinante con el objeto de proporcionar un producto final. El término "sistema de expresión recombinante" significa células huéspedes que tienen una unidad de trascripción recombinante integrada establemente en ADN cromosómico o bien que llevan la unidad de trascripción recombinante fuera del cromosoma. Sistemas de expresión recombinante de conformidad con lo definido aquí expresan proteínas o polipéptidos heterólogos al efectuarse la inducción de los elementos reguladores enlazados al ADN o gen sintético a expresar. Este término significa también células huéspedes que han integrado de manera estable un elemento genético recombinante o bien elementos que tienen una función reguladora en la expresión del gen, por ejemplo, promotores o realzadores. Sistemas de expresión recombinante, tales como los definidos aquí expresan polipéptidos o proteínas endógenos a la célula al efectuarse la inducción de los elementos reguladores enlazados al segmento ADN endógeno o gen a expresar. Las células pueden ser procarióticas o eucarióticas. El término "secretado" incluye una proteína transportada a través de una membrana, incluyendo el transporte como resultado de secuencias de señal en su secuencia de aminoácidos cuando es expresada en una célula huésped adecuada. Proteínas "secretadas" incluyen sin limitación, proteínas secretadas en su totalidad (por ejemplo, proteínas solubles) o bien parcialmente (receptores) a partir en la „____..__. _____¿__ célula en la cual se expresan. Las proteínas "secretadas" incluyen también sin limitación, proteínas transportadas a través de la membrana del retículo endoplásmico. Las proteínas secretadas incluyen también proteínas que contienen secuencias de señal no típicas (por ejemplo, interleucina-1 beta, véase Krasney, P. A. y Young. P.R. 1992 Cytokine 4 (2) : 134-143) y factores liberados de células dañadas (ejemplo, Interleukin-1 Receptor Antagonist, [Antagonista de receptor de interleucina-1] Arend, W.P. y colaboradores (1998)Annu. rev. Immunol. 16:27-55). Cuando se desea, un vector de expresión puede ser diseñado el cual contiene una secuencia líder o señal que dirigen el polipéptido a través de la membrana de una célula, dicha secuencia puede estar presente naturalmente en los polipéptidos de la presente invención o bien puede ser proporcionada a partir de fuentes de proteínas heterólogas por técnicas de ADN recombinante, El término "estrictas" se utiliza para referirse a condiciones que se entienden normalmente en la técnica como estrictas. Condiciones estrictas pueden incluir condiciones altamente estrictas es decir, hibridación ADN unido a filtro en NaHPO. 0.5 M, dodecil sulfato sódico al 7% (SDS), EDTA 1 mM a una temperatura de 65°C y lavado en 0.1 SSC/0.1% SDSa una temperatura de 68°C y condiciones moderadamente estrictas (es decir lavado en 0.2X SSC/0.1% SDSa 42°C) . Otras !--_.__ *?.-__- ____i-t-fc---h- t -.. condiciones ejemplares de hibridación se describen aquí en los ejemplos. En casos de hibridación de desoxioligonucleótidos, condiciones ejemplares adicionales de hibridación estricta incluyen el lavado en 6X SSC/0.05% pirofosfato sódico a una temperatura de 37°C (para oligonucleótidos de 14 bases) , 48°C (para oligonucleótidos de 17 bases), 55°C (para oligonucleótidos de 20-bases) y 60° para oligonucleótidos de 23-bases) . Como se emplea aquí, la expresión "sustancialmente equivalente" puede referirse tanto a secuencias de aminoácidos y nucleótidos, por ejemplo, una secuencia mutante que varia de una secuencia de referencia por una o varias sustituciones, de lesiones, o adiciones, cuyo efecto neto no resulta en una falta de semejanza funcional adversa entre la secuencia de referencia y la secuencia sujeto. Típicamente, una secuencia sustancialmente equivalente de este tipo varia de una de las secuencias listadas ahí en no más que aproximadamente 35% (es decir el número de sustituciones, adiciones, y/o de lesiones de residuos individuales en una secuencia sustancialmente equivalente en comparación con la secuencia de referencia correspondiente, dividido entre el número total de residuos en la secuencia sustancialmente equivalente es de 0.35 o menos). Dicha secuencia tiene una identidad de secuencia del 65% con la secuencia listada. En una modalidad, una secuencia sustancialmente equivalente, por ejemplo, mutante, de la presente invención varia de una secuencia listada en no más que 30% (identidad de secuencia del 70%) ; en una variación de esta modalidad, una secuencia sustancialmente equivalente varia en no mas del 25% (identidad de secuencia del 75%); y en una variación adicional de esta modalidad, una secuencia sustancialmente equivalente varia en no mas que el 20% (identidad de secuencia del 80%) y en una variación adicional de dicha modalidad, una secuencia sustancialmente equivalente varia en no más que el 10% (identidad de secuencias del 90%) y en una variación adicional de dicha modalidad, una secuencia sustancialmente equivalente varia en no más que el 5% (identidad de secuencia del 95%) . Secuencias de aminoácidos sustancialmente equivalentes, por ejemplo mutantes, de conformidad con la presente invención tienen de preferencia una identidad de secuencia de por lo menos el 80% con una secuencia de aminoácidos listada con mayor preferencia por lo menos un 90% de identidad de secuencia. Una secuencia de nucleótidos sustancialmente equivalente de la presente invención puede tener identidades de secuencia porcentuales inferiores, tomando en cuenta, por ejemplo, la redundancia o degeneración del código genético. De preferencia, una secuencia de nucleótidos tiene una identidad de por lo menos aproximadamente el 65%, con mayor preferencia por lo menos A;¿.fl__iAi .... , __,_ aproximadamente una identidad del 75%, y especialmente una identidad de por lo menos el 95%. Para los propósitos de la presente invención, secuencias que tienen una actividad biológica sustancialmente equivalente y características de expresión sustancialmente equivalentes se consideran sustancialmente equivalentes. Para los propósitos de determinar la equivalencia, el truncamiento de la secuencia madura (por ejemplo, a través de una mutación que crea un codon de terminación espurio) no debe tomarse en cuenta. La identidad de secuencia puede ser determinada, por ejemplo, empleando el método de Jotun Hein (Hein. J. 1990 Methods Enzymol. 183: 626-645). La identidad entre secuencias puede también se determinada por otros métodos conocidos en la técnica, por ejemplo, variando las condiciones de hibridación. El término "totipotente" se refiere a la capacidad de una célula para diferenciarse en todos los tipos de células de un organismo adulto. El término "transformación" se refiere a la introducción de ADN en una célula huésped adecuada de tal manera que el ADN pueda ser replicado, ya sea como elemento extracromosómico, o bien mediante integración cromosómica. El término "transfección" se refiere a la absorción de un vector de expresión por una célula huésped adecuada, qué secuencias codificadoras sean expresadas de hecho o no. El término "infección se refiere a la introducción de ácidos .__,_,_._.á...á____*.____„_......_._ .,,___a_—__ ,.iaa_-.—«_>i¡M8a_t«?_?at. ?^._nt^_—fe-"??r-fff':i;f--*r- - nucleicos en una célula huésped adecuada mediante le uso de un virus o vector viral. Como siempre aquí, la expresión "fragmento modulador de absorción" UMF se refiere a una serie de nucleótidos que median la absorción de un fragmento de ADN enlazado en una célula. Los UMFs pueden ser fácilmente identificados empleando UMFs conocidos como una secuencia objetivo o motivo objetivo con los sistemas basados en computadora descritos abajo. La presencia y actividad de un UMF pueden ser confirmadas mediante la fijación de una secuencia marcadora sobre el UMF sospechado. La molécula de ácido nucleico resultante es después incubada con un huésped apropiado en condiciones apropiadas y la absorción de la secuencia marcadora es determinada. Como se describió arriba, un UMF incrementará la frecuencia de absorción de una secuencia marcadora enlazada. Cada uno de los términos antes mencionados abarca todo lo descrito para cada uno de ellos a menos que el contexto indique lo contrario. 4.2 ÁCIDOS NUCLEICOS DE LA INVENCIÓN La invención se basa en el descubrimiento de un polipéptido novedoso de tipo factor de crecimiento de células madres, los polinucleótidos que codifican el polipéptido de tipo factor de crecimiento de células madres y el uso de estas composiciones para el diagnóstico, tratamiento o prevención de cánceres y otros trastornos inmunológicos. Los polinucleótidos aislados de la presente invención incluyen, sin limitarse a ellos, un polinucleótido que comprende cualesquiera de las secuencias de nucleótidos de SEQ ID NO: 1-22, 24, 26-27, 29, o 33; un fragmento de SEQ ID NO: 1-22, 24, 26-27, 29 o bien 33; un polinucleótido que comprende la secuencia codificadora de proteína de longitud completa SEQ ID NO: 1-22,24, 26-27, 29, o 33 (por ejemplo, que codifica para SEQ ID NO: 23, 25, o 28); y un polinucleótido que comprende la secuencia de nucleótidos que codifica la secuencia codificadora de proteína madura de los polinucleótidos de cualesquiera SEQ ID NO: 1-22, 24, 26-27, 29, o 33. Los polinucleótidos de la presente invención incluyen también sin limitarse a ellos, un polinucleótido que se híbrida en condiciones estrictas con (a) el complemento de cualesquiera de las secuencias de nucleótidos SEQ ID NO: 1-22, 24, 26-27, 29, o 33; (b) un polinucleótido que codifica cualesquiera de los polipéptidos de SEQ ID NO: 23, 25, 28, 30-32, 34 o 35; (c) un polinucleótido que es una variante alélica de cualesquiera de los polinucleótidos mencionados arriba; (d) un polinucleótido que codifica un homólogo de especie de cualesquiera de las proteínas mencionadas arriba; o bien (e) un polinucleótido que codifica un polipéptido que comprende un dominio específico o truncamiento de los polipéptidos de SEQ ID NO: 23, 25, 28, 30-32, 34 o 35.

U¿ÉS^MM»M^-^^II^^^^^?____i a_^§|__ Dominios de interés pueden depender de la naturaleza del polipéptido codificado; por ejemplo, dominios en polipéptidos de tipo receptor incluyen dominios de enlace con ligando, extracelulares, de transmembrana, o citoplásmicos, o bien 5 combinaciones de los mismos; dominios en proteínas de tipo inmunoglobulina incluyen los dominios variables de tipo inmunoglobulina; dominios en polipéptidos de tipo encima incluyen dominios catalíticos y de enlace con sustrato; y dominios en polipéptidos de ligando incluyen dominios de 10 enlace como receptor. Los polinucleótidos de la presente invención incluyen ADN que ocurre naturalmente, o bien total o parcialmente sintético, por ejemplo, ADNc y ADN geonómico, y ARNm. Los polinucleótidos pueden incluir la totalidad de la región 15 codificadora del ADNc o bien pueden representar una porción de la región codificadora del ADNc. La presente invención ofrece genes que corresponden a las secuencias de ADNc divulgadas aquí. Los genes correspondientes pueden ser aislados de conformidad con métodos conocidos utilizando la 20 información de secuencia divulgada aquí. Tales métodos incluyen la preparación de sondas o cebadores a partir de la información de secuencia divulgada para identifica y/o amplificar genes en bibliotecas geonómicas apropiadas o bien otras fuentes de materiales geonómicos . Secuencias 5' y 3' 25 adicionales pueden ser obtenidas empleando métodos conocidos i____l___—_í¿c- .J_t _L>_..,_.J«M_-».- ,.__..,«__-.______¿fcJJ_l_ >.„.. „ „._. ^,S_.._C_cft___...}.,,_____—. en la técnica. Por ejemplo, ANDc de longitud completa o ADN genómico que corresponde a cualesquiera de los nucleótidos SEQ ID NO: 1-22,24,26-27,29 o 33 puede ser obtenido mediante el tamizado de ADNc apropiado o de bibliotecas geonómicas bajo condiciones de hibridación adecuada empleando cualesquiera de los polinucleótidos de SEQ ID NO: 1-22,24,26-27, 29, o 33 o una porción de los mismos como sonda. Alternativamente los polinucleótidos SEQ ID NO: 1-22,24,26-27,29 o 33 pueden se utilizados como base para cebador (e) adecuado (e) que permite (n) la identificación y/o amplificación de genes en bibliotecas apropiadas de ADNc o ADN genómico. las secuencias de ácido nucleico de la presente invención pueden ser ensambladas a partir de ETSs y secuencias (incluyendo secuencias geonómicas y ADNc) obtenidas de una o varias bases de datos públicas, como por ejemplo dbEST, gbpri,y UniGene. La secuencia EST puede proporcionar información de identificación de secuencias, fragmento representativo o información de segmento, o bien información de segmento novedosa para el gen de -longitud completa los polinucleótidos de la presente invención proporcionan también polinucleótidos que incluyen la secuencia de nucleótidos sustancialmente equivalentes a los polinucleótidos mencionados arriba. Polinculeótidos de conformidad con la presente invención pueden tener, por ejemplo, una identidad de secuencia de por lo menos aproximadamente 65%, por lo menos aproximadamente 70%, por lo menos aproximadamente 75%, por lo menos aproximadamente 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88% u 89% más típicamente por lo menos aproximadamente 90%, 91%, 92%, 93% o 94% y de manera aún más típica, por lo menos aproximadamente 95%, 96%, 97%, 98% o 99% con un polinucleótido mencionado arriba. Dentro del alcance de las secuencias de ácido nucleico de la presente invención se encuentran fragmentos de secuencias de ácido nucleico que se hibridan en condiciones estrictas con cualesquiera de las secuencias de nucleótidos de SEQ ID NO: 1-22,24,26-27,29, o 33 o bien complementos de las mismas, dicho fragmento es mayor que aproximadamente 5 nucleótidos de preferencia 7 nucleótidos, con mayor preferencia mayor que 9 nucleótidos y muy especialmente mayor que 17 nucleótidos. Fragmentos, por ejemplo, de 15, 17 o 20 nucleótidos o más selectivos (es decir, que se hibridan específicamente con cualesquiera de los polinucleótidos de la presente invención) se contemplan. Sondas capaces de híbridarse específicamente con un polinucleótido pueden diferenciar secuencias de polinucleótidos de la presente invención de otras secuencias de polinucleótidos en la misma familia de genes o bien pueden diferenciar genes humanos de genes de otras especies, y de preferencia se basan en secuencias de nucleótidos únicas. Las secuencias que caen dentro del alcance de la siguiente invención no son limitadas a estas secuencias específicas, sino que incluyen también variaciones alélicas y variaciones de especie de las mismas. Las variaciones alélicas y variaciones de especies pueden ser determinadas de manera rutinaria mediante la comparación de la secuencia proporcionada en SEQ ID NO: 1-22,24,26-27,29, o 33, un fragmento representativo de la misma, o una secuencia de nucleótidos que tiene un nivel de identidad de por lo menos el 90%, de preferencia un nivel de identidad del 95% con SEQ ID NO: 1-22,24,26-27,29 o 33 con una secuencia de otro aislado de la misma especie. Además, para permitir variabilidad de codon, la invención incluye moléculas de ácido nucleico que codifican las mismas secuencias de ácidos que los ORF específicos divulgados aquí. En otras palabras, en la región codificadora de un ORF, la sustitución de un codon por otro codon que codifica el mismo aminoácido se contempla expresamente. El resultado más cercano para los ácidos nucleicos de la presente invención incluyendo SEQ ID NO: 1-22,24,26-27,29 o 33, puede obtenerse mediante la búsqueda de una base de datos utilizando un algoritmo de un programa. De preferencia, un Blast que significa Basic Local Alignment Serch Tool [Herramienta de Búsqueda de Alineamiento Local Básico] se utiliza para buscar alineamientos locales de secuencia Altshul, S..f. J.Mol.Evol. 36 290-300 (1993) y Altschul S. F. «, _ ___>_____,....._-_e__, Afafe_, J ? .......j?s,tf^y i?Mt?jt,?a?d .. y colaboradores J. Mol. Biol.: 21:403-410(1990)). Homólogos de especie (ortólogos) de los polinucleótidos divulgados y proteínas son también proporcionados por la presente invención. Homólogos de especie pueden ser aislados e identificados mediante la elaboración de sondas adecuadas o cebadores a partir de las secuencias proporcionadas aquí y mediante el tamizado de una fuente de ácido nucleico adecuada para a partir de la especie deseada. La invención abarca también variantes alélicas de los polinucleótidos divulgados o proteínas; es decir, formas alternativas que ocurren naturalmente del polinucleótido aislado que codifican también proteínas que son idénticas homologas o relacionadas con las proteínas codificadas por los polinucleótidos. Las secuencias de ácido nucleico de la presente invención se enfoca además a secuencias que codifican variantes de los ácidos nucleicos descritos. Estas variantes de secuencias de aminoácidos pueden ser preparadas por métodos conocidos en la técnica mediante al introducción de cambios de nucleótidos apropiados en un nucleótido nativo o variante. Existen 2 variables en la construcción de variantes de secuencias de aminoácidos: la ubicación de la mutación y la naturaleza de la mutación. Ácidos nucleicos que codifican las variantes de secuencias de aminoácidos se construyen de preferencia mediante la mutación del polinucleótidos para codificar una secuencia de aminoácidos que no ocurre en la naturaleza. Estas alteraciones de ácido nucleico pueden efectuarse en sitios que difieren en los ácidos nucleicos de especies diferentes (Posiciones variables) o bien en regiones 5 altamente conservadas (regiones constantes) sitios en tales ubicaciones serán típicamente modificados en serie, por ejemplo, mediante sustitución primero con elecciones • conservadoras (por ejemplo, aminoácido hidrofóbico con un aminoácido hidrofóbico diferente) después con elecciones más 10 distantes (aminoácido hidrofóbico por un aminoácido cargado) y después deleciones o inserciones pueden efectuarse en el sitio objetivo. Deleciones de secuencias de aminoácidos se ubican generalmente de un rango de 1 a 30 residuos, de • preferencia de aproximadamente de 1 a 10 residuos y son 15 típicamente contiguas. Inserciones de aminoácidos incluyen fusiones en terminal amino o terminal carboxilo dentro de un rango de longitud de 1 a 100 residuos o más, así como inserciones intrasecuencia de un residuo de aminoácido o múltiples residuos de aminoácidos. Inserciones intrasecuencia 20 pueden encontrarse generalmente dentro de un rango de 1 a 10 residuos de aminoácidos, de preferencia de 1 a 5 residuos. Ejemplos de inserciones en terminal incluyen las secuencias de señal heterólogas necesarias para la secreción para el enfoque intracelular para células huéspedes diferentes y 25 secuencias tales como FLAG o secuencias de poli-histidina, útiles para purificar la proteína expresada. En un método preferido, polinucleótidos se codifican las secuencias novedosas de aminoácidos son cambiados a través de mutagénesis dirigidas hacia sitio. Este método utiliza secuencias de oligonucleótidos para alterar un polinucleótido para codificar la variante deseada de aminoácidos, así como nucleótidos adyacentes suficientes en ambos lados del aminoácido cambiado para formar un dúplex estable en ambos lados del sitio cambiado. En general, las técnicas de mutagénesis dirigida hacia sitio son bien conocidas por parte de los expertos en la materia y ésta técnica es ejemplificada en publicaciones tales como, por ejemplo, Edelman y colaboradores DNA 2: 183 (1983) . Un método versátil y eficiente para la producción de cambios específicos para sitio en una secuencia de polinucleótidos fue publicado por Zoller y Smith. Nucl eic Acids Res. 10:6487-6500 (1982). Se puede utilizar también un reacción en cadena de polimerasa para crear variantes de secuencias de aminoácidos de los ácidos nucleicos novedosos. Cuando pequeñas cantidades de ADN de templados son utilizadas como material inicial, cebador (ES) que difieren entre (n) ligeramente en cuanto a secuencia de al región correspondiente en el ADN de templado puede (n) generar la variante de aminoácido deseada. Una amplificación por reacción en cadena de polimerasa resulta en una población de ADN de producto que difieren del templado del polinucleótido que codifica el polipéptido en la posición especificada por el cebador. Los fragmentos de ADN de producto reemplazan la región correspondiente en el plásmido y esto proporciona un polinucleótido que codifica la variante deseada de aminoácidos. Una técnica adicional para generar variantes de aminoácidos es la técnica de mutagénesis de cásete descrita en Wells y colaboradores, Gene 34 :315 (1985) ; otras técnicas de s tagénesis bien conocidas en la técnica, por ejemplo las técnicas presentadas en Sambrook y colaboradores Supra, and Current Protocols in Molecular Biology, [Protocolos Actuales en Biología Molecul ar] Ausubel y colaboradores. Debido a la degeneración inherente del código genético, otras secuencias de ADN que codifican sustancialmente la misma secuencia de aminoácidos o una secuencia de aminoácidos funcionalmente equivalente pueden emplearse en la práctica de la presente invención para la clonación y expresión de estos ácidos nucleicos novedosos. Tales secuencias de ADN incluyen las secuencias que son capaces de híbridarse con la secuencia apropiada de ácido nucleico novedosa bajo condiciones estrictas. Polinucleótidos que codifican truncamientos preferidos de polipéptidos de la presente invención pueden ser utilizados para generar polmucleótidos que codifican proteínas de fusión o proteínas quiméricas que comprenden uno o varios ._ 1I » ^í ^?Í¡>^ít^^k?t*Má í ^^tí dominios de la invención y secuencias de proteínas heterólogas. Los polinucleótidos de la presente invención incluyen adicionalmente el complemento de cualesquiera de los polinucleótidos mencionados arriba. El polinucleótido puede ser ADN (genómico, ADNc, amplificado, o sintético) o ARN. Métodos y algoritmos para obtener tales polinucleótidos son bien conocidos por parte de expertos en la materia y pueden incluir, por ejemplo, métodos para determinar las condiciones de hibridación que pueden aislar de manera rutinaria los polinucleótidos de las identidades de secuencia deseadas. De conformidad con la presente invención, secuencias de polinucleótidos que comprenden las secuencias codificadores de proteína maduras que codifican cualesquiera de SEQ ID NO: 23, 25, 28,30-32, 34, 35, o equivalentes funcionales de los mismos, pueden emplearse para generar moléculas de ADN recombinante que dirigen la expresión de es e ácido nucleico, o un equivalente funcional del mismo, en células huéspedes apropiadas. Se incluyen también los insertos de ADNc de cualesquiera de los clones identificados aquí. Un polinucleótido de conformidad con la presente invención puede estar unido a cualesquiera de varias otras secuencias de nucleótidos a través de técnicas bien establecidas de ADN recombinante (véase Sambrook J y colaboradores (19891 Melecular Cloning: Laboratory Manual. [Clonación Molecular: Un Manual de Laboratorio] Cold Spring Harbor Laboratory, NY) . Secuencias de nucleótidos útiles para unirse con polinucleótidos incluyen un conjunto de vectores, por ejemplo, plásmidos, cósmidos, derivados de fagos lambda, fagénidos, y similares que son bien conocidos en la técnica. Por consiguiente, la invención proporciona también un vector que incluye un polinucleótido de la invención y una célula huésped que contiene el polinucleótido. En general, el vector contiene un origen de replicación funcional en por lo menos un organismo, sitios convenientes de endonucleasa de restricción, y un marcador seleccionable para la célula huésped. Vectores de conformidad con la presente invención incluyen vectores de expresión, vectores de replicación, vectores de generación de sondas, y vectores de secuenciamiento. Una célula huésped de conformidad con la presente invención puede ser una célula procariótica o eucariótica y puede ser un organismo unicelular o parte de un organismo multicelular. La presente invención ofrece además constructos recombinantes que comprenden un ácido nucleico que tiene cualesquiera de las secuencias de los nucleótidos SEQ ID NO: 1-22, 24, 26-27, 29, 33 o un fragmento de las mismas o cualquier otro polinucleótido de la invención. En una modalidad, los constructos recombinantes de la presente invención comprenden un vector, por ejemplo un vector viral o plásmido en el cual ^__-._L_-_--..^------ -»,_-___«_ > . ... ..-_. __—a A__-_—_»-__»-__-_—« está insertado un ácido nucleico que tiene cualesquiera de las secuencias de nucleótidos de SEQ ID NO: 1-22, 24, 26-27, 29, 33 o un fragmento de las misma, en una orientación directa o reversa. En el caso de un vector que comprende uno de los ORFs de la presente invención, el vector puede comprender además secuencias reguladoras, incluyendo por ejemplo un promotor enlazado operativamente al ORF. Grandes números de vectores adecuados y promotores son conocidos por parte de los expertos en la materia y están disponibles en el comercio para generar los constructos recombinantes de la presente invención. Los siguientes vectores se proporcionan a título de ejemplo. Vectores bacterianos: pBs . Phagescript. PSÍX174. 'Bluescsript SK.pBs KS. PNH8a. pNH16a. pl8a. pNH 6a (Strategene) ; pTrc99A, pKK223-3. pKK233-3. pDR540. pRIT5 (Pharmacia). Vectores Eucarióticos: pWLneo, p'SV2cat. POG44, PXTI. PSG (Stratagene) pSVK3, pBPV. PMSG. Y pSVL (Pharmacia). El polinucleótido aislado de la presente invención puede estar unido de manera operativa a una secuencia de control de expresión tales como los vectores de expresión pMT2 o pED divulgados en Kaufman y colegas, Nucl eic Acids Res . 19, 4485-4490 (1991) para producir la proteína de manera recombinante. Muchas secuencias de control de expresión adecuadas son conocidas en la técnica. Métodos generales de expresión de proteínas recombinantes son también conocidos y son ejemplificados en R. Kaufman. Methods in Enzymology [ Métodos iif it'ii _„i- ??. ?¡ .liírir íiii . en Ensimología] f 185.537-566 (1990). De conformidad con lo definido aquí, "unido operativamente" significa que el polinucleótido de la presente invención y una secuencia de control de expresión se encuentran dentro de un vector o célula de tal manera que la proteína es expresada por una célula huésped que ha sido transformada (transfectada) con el polinucleótido ligado/secuencia de control de expresión. Regiones promotoras pueden ser seleccionadas a partir de cualquier gen deseado empleando vectores CAT (clorafenicol transferasa) o bien otros vectores que son marcadores seleccionables. Dos vectores apropiados son pKK232-8 y pCM7. Promotores bacterianos particularmente mencionados incluyen lacl. lacZ. T3. T7. gpt. Lambda PR y trc. Promotores eucarióticos incluyen CMV inmediato temprano, HSV timidina kinasa, SV40 temprano y tardío, LTRs de retrovirus, y metalosioneina-I de ratón. La selección del vector apropiado y del promotor adecuado se encuentra dentro de la capacidad de una persona con conocimientos normales en la materia. En general, vectores de expresión recombinantes que incluyen orígenes de replicación y marcadores seleccionables que permiten la transformación de la célula huésped, por ejemplo, el gen de resistencia a la ampicilina en E. coli y S. cerevisiae gen TRP1 y un promotor derivado de un gen altamente expresado para dirigir la transcripción de una secuencia estructural corriente abajo. Tales promotores >_c_._-.____?__-«_._?>d|tt_, j _a.i_. pueden ser derivados de operones que codifican enzimas glicolíticas, por ejemplo 3-fosfoglicerato quinasa (PGK), factor a, fosfatasa acida o bien proteína de choque térmico, entre otros promotores. La secuencia estructural heteróloga es ensamblada en fase apropiada con secuencias de inicio y terminación de traducción, y de preferencia, una secuencia líder que puede dirigir la producción de proteína traducida en el espacio periplásmico o en el medio extracelular. Opcionalmente, la secuencia heteróloga puede codificar una proteína de fusión que incluye un péptido de identificación de terminal amino que proporciona características deseadas, por ejemplo, estabilización o purificación simplificada de producto recombinante expresado. Vectores de expresión útiles para uso bacteriano son construidos mediante ia inserción de una secuencia de ADN estructural que codifica una proteína deseada junto señales de inicio y terminación de traducción adecuadas en fase de lectura operativa con un promotor funcional. El vector comprende uno o varios marcadores seleccionables fenotípicos y un origen de replicación para asegurar el mantenimiento del vector y para proporcionar, si se desea, amplificación en el huésped. Huéspedes procarióticos adecuados para transformación incluyen E. coli Bacillus subtilis . Salmonella typhimuri um y varias especies dentro de los géneros Pseudomonas . Streptomyces . Y Staphylococcus , aún cuando se pueden emplear también otros .__a_a____a_—__i según la elección. Como ejemplo representativo pero no limitativo, vectores de expresión útiles para uso bacteriano pueden comprender un marcador seleccionable y un origen bacteriano de predicación que se deriva de plásmidos comercialmente disponibles que comprenden elementos genéticos del vector de clonación bien conocido pBR322 (ATCC 37017) . Tales vectores comerciales incluyen, por ejemplo, pKK223-3 (Pharmacia Fine Chemicals. Uppsala, Suecia) y GEM 1 (Promega Biotech. Madison, Wl. Estados Unidos de América) . Estas secciones de "estructura" de pBR322 se combinan con un promotor apropiado y la secuencia estructural a expresar. Después de la transformación de una cepa huésped adecuada y del cultivo de la cepa huésped hasta lograr una densidad apropiada de células, el promotor selecciona es inducido o bien reprimido por medios apropiados (por ejemplo, inducción química o por cambio de temperatura) y células son cultivadas por un periodo adicional. Las células son típicamente cosechadas por centrifugación, trastornadas por medios físicos o químicos, y el extracto crudo resultante retenido para purificación adicional. Polinucleótidos de la presente invención pueden también ser utilizados para inducir respuestas inmunes. Por ejemplo, de conformidad con lo descrito en Fan y colaboradores Nat . Biotech . 17:870-872 (1999), que se incorpora aquí por referencia, secuencias de ácido nucleico que codifican un polipéptido pueden ser utilizadas para generar anticuerpos contra el polipéptido codificado siguiendo la administración tópica de ADN de plásmido desnudo o después de inyección, y preferentemente de inyección intramuscular de ADN. Las secuencias de ácido nucleico son de preferencia insertadas en un vector de expresión recombinante y pueden tener la forma de ADN desnudo. 4.2.1 ÁCIDOS NUCLEICOS DE ANTISENTIDO Otro aspecto de la presente invención se refiere a moléculas aisladas de ácido nucleico de antisentido que pueden híbpdarse o bien complementar la molécula de ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de tipo factor de crecimiento de células madres, o fragmentos, análogos o derivados de la misma. Un ácido nucleico de "antisentido" abarca una secuencia de nucleótidos que es complementaria de un ácido nucleico de "sentido" que codifica una proteína (por ejemplo, complementaria de la cadena codificadora de una molécula de ADNc de cadena doble o bien complementaria de una secuencia de ARNm) . En aspectos específicos, se proporcionan moléculas de ácido nucleico de antisentido que comprenden una secuencia complementaria de por lo menos aproximadamente 10, 25, 50, 100, 250 ó 500 nucleótidos o una cadena codificadora de tipo factor de crecimiento de célula madre entera, o bien una porción de la misma. Se porporcionan además moléculas de ¡r________^.__?_-_.__.-__-__». ácido nucleico que codifican fragmentos, homólogos, derivados y análogos de un ácido nucleico de antisentido o de tipo factor de crecimiento de células madres complementario de una secuencia de ácidos nucleicos de tipo factor de crecimiento de células madres. En una modalidad, una molécula de ácido nucleico de antisentido es de antisentido con relación a una "región codificadora" de la cadena codificadora de una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína de tipo factor de crecimiento de células madres. El término "región codificadora" se refiere a la región de la secuencia de nucleótidos que comprende codones que son traducidos en residuos de aminoácidos. En otra modalidad, la molécula de ácido nucleico de antisentido es de antisentido con relación a una "región concedente" de la cadena codificadora de una secuencia de nucleótidos que codifica la proteína de tipo factor de crecimiento de células madres. El término "región concedente" se refiere a las secuencias 5' y 3' que flanquean la región codificadora que no son traducidas en aminoácidos (es decir, se conocen también como regiones 5' y 3' no traducidas) . Dadas las secuencias de cadena codificadora que codifican la proteína de tipo factor de crecimiento de células madres divulgada aquí, ácidos nucleicos de antisentido de la presente invención pueden ser diseñados según las reglas de apareamiento de bases de Watson y Crick o bien Hoogsteen. La molécula de ácido nucleico de antisentido puede ser complementaria de toda la región codificadora de ARNm de tipo factor de crecimiento de células madres, pero con mayor 5 preferencia es un oligonucleótido que es de antisentido con relación solamente a una porción de la región codificadora o no codificadora de ARNm de tipo factor de crecimiento de fl células madres. Por ejemplo, el oligonucleótido de antisentido puede ser complementario con relación a la región 10 que rodea el sitio de inicio de traducción del ARNm de tipo factor de crecimiento de células madres. Un oligonucleótido de antisentido puede tener, por ejemplo, aproximadamente 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 ó 50 nucleótidos de longitud. Un ácido nucleico de antisentido de la presente invención 15 puede ser construido empleando reacciones de ligación enzimática o síntesis química utilizando procedimientos conocidos en la técnica. Por ejemplo, un ácido nucleico de antisentido (por ejemplo, un oligonucleótido de antisentido) puede ser sintetizado químicamente utilizando nucleótidos que 20 ocurren naturalmente, o bien nucleótidos modificados de varias maneras diseñados para incrementar la estabilidad biológica de las moléculas o para incrementar la estabilidad física del dúplex formado entre los ácidos nucleicos de antisentido y de sentido (por ejemplo, derivados de 25 fosforotiato y nucleótidos sustituidos por acrídina pueden -«-.¿Je-ci-Kil-. í_8?_l.p?ri?-f-__»frg __St—_8 emplearse) . Ejemplos de nucleótidos modificados que pueden ser utilizados para generar el ácido nucleico de antisentido incluyen 5-fluorouracilo, 5-bromouracilo, 5-clorouracilo, 5-iodouracílo, hipoxantina, xantina, 4-acerilcitocina, 5- (carboxidroxilmentil) uracilo, 5-carboximetilaminometil-2-tiouridina, 5-carbozximetilaminometiluracilo, dihidrouracilo, beta-D-galactosilqueosina, inosina, N6-isopenteniladenina, 1-metilguanina, 1-metilinosina, 2, 2-dimetilguanine, 2-metiladenina, 2-metilguanina, 3-metilcitocina, 5-metilcitocina, N6-adenina, 7-metilguanina, 5- etilaminometiluracilo, 5-metoxiaminometil-2-tiouraciío, beta-D-manosilqueosina, 5' -metolxicarboximetiluracilo, 5-metoxiuracilo, 2-metiltio-N6-isopentenyladenina, ácido uracil-5-oxiacético (v) , wibutoxosina, pseudouracilo, queosina, 2-thiocitocina, 5-metil-2-tiouracilo, 2-tiouracilo, 4-tiouracilo, 5-metiluracilo, metiléster de ácido uracil-5-oxiacético, ácido uracil-5-oxiacético (v) , 5-metil-2-tiuracilo, 3- (3-amino-3-N-2-carboxipropil) uracilo, (acp3) , y 2, 6-diaminopurina. Alternativamente, el ácido nucleico de antisentido puede ser producido biológicamente utilizando un vector de expresión en el cual un ácido nucleico ha sido subclonado en una orientación de antisentido (es decir, ARN transcrito del ácido nucleico insertado será de una orientación de antisentido con relación a un ácido nucleico _J___ci__iil«-_ ...-„-_-t«-_-.-- blanco de interés, descrito adicionalmente en la sección siguiente) . Las moléculas de ácido nucleico de antisentido de la presente invención se administran típicamente a un sujeto o se generan in si tu de tal manera que se híbriden o se unan con ARNm celular y/o ADN genómico que codifica una proteína de tipo factor de crecimiento de células madres con el objeto de inhibir de esta forma la expresión de la proteína (por ejemplo, mediante la inhibición de la transcripción y/o traducción) . La hibridación puede efectuarse por complementaridad de nucleótido convencional para formar un dúplex estable, o bien, por ejemplo, en el caso de una molécula de ácido nucleico de antisentido que se une a dúplexes de ADN, a través de interacciones específicas en la hendidura mayor de la doble hélice. Un ejemplo de una vía de administración de moléculas de ácido nucleico de antisentido de la presente invención incluye la inyección directa en un sitio tisular. Alternativamente, las moléculas de ácido nucleico de antisentido pueden ser modificadas para enfocarse hacia células seleccionadas y después administrarse sistémicamente. Por ejemplo, para administración sistémica, moléculas de antisentido pueden ser modificadas de tal manera que se unan específicamente a receptores o antígenos expresados en una superficie celular seleccionada, (por ejemplo, mediante el enlace de las moléculas de ácido nucleico de antisentido con péptidos o anticuerpos que se Unen con receptores o antígenos en superficie celular) . Las moléculas de ácido nucleico pueden ser también suministradas a células utilizando los vectores descritos aquí. Para lograr 5 suficientes moléculas de ácido nucleico, constructos de vector en el cual la molécula de ácido nucleico de antisentido se coloca bajo el control de un promotor de pol fl II o pol III fuerte se prefieren. En otra modalidad, la molécula de ácido nucleico de 10 antisentido de la presente invención es una molécula de ácido nucleico alfa-anomérica. Una molécula de ácido nucleico alfa- anomérica forma híbridos específicos de cadena doble con ARN complementario, en donde a diferencia de las alfa-unidades • habituales, las cadenas son paralelas entre ellas. Véase, por 15 ejemplo, Gaultier y colaboradores 1987 Nucí. Acids Res. 15:6625-6641. La molécula de ácido nucleico de antisentido puede comprender también 2' -o-metilribonucléotido (véase, por ejemplo Inoue y colaboradores 1987. Nucí. Acids Res. 15:6131- 6148) o bien un análogo de ARN-ADN quimérico (véase, por 20 ejemplo, Inoue y colaboradores 1987. FEBS Lett. 215:327-330). 4.2.2. RIBOZIMAS Y PORCIONES DE PNA Modificaciones de ácido nucleico incluyen, a título de ejemplo no limitativo, bases modificadas y ácidos nucleicos cuyas estructuras de fosfato de azúcar son modificadas o 25 derivadas. Estas modificaciones se efectúan por lo menos parcialmente para incrementar la estabilidad química del ácido nucleico modificado de tal manera que puedan utilizarse, por ejemplo, como ácidos nucleicos de enlace de antisentido en aplicaciones terapéuticas en un sujeto. En una modalidad, el ácido nucleico de antisentido de la presente invención es una ribozima. Las ribozimas son moléculas de ARN catalíticas con actividad ribonucleasa que pueden disociar un ácido nucleico de cadena única, por ejemplo un ARNm, con el cual tienen una región complementaria, así ribozimas (por ejemplo, ribozimas de cabeza de martillo de conformidad con lo descrito en Haselhoff y Gerlach 1988. Mature 334:585-591) pueden ser utilizadas para disociar catalíticamente transcritos de ARNm de tipo factor de crecimiento de células madres con el objeto de inhibir de esta forma la traducción del ARNm de tipo factor de crecimiento de células madres. Una ribozima que tiene especificidad para un ácido nucleico codificador de tipo factor de crecimiento de células madres puede ser diseñada con base en la secuencia de nucleótidos de un ADNc de tipo de factor de crecimiento de células madres divulgado aquí. Por ejemplo, un derivado de ARN de Tetrahymena L-19 IVS ARN puede ser construido en el cual la secuencia de nucleótidos del sitio activo es complementaria con la secuencia de nucleótidos a disociar en un ARNm codificador de tipo factor de crecimiento de células madres. Véase, por ejemplo, patente norteamericana número 4,987,071 de Cech y colaboradores y patente norteamericana número 5,116,742 de Cech y colaboradores. ARNm de tipo factor de crecimiento de células madres puede también utilizarse para seleccionar un ARN catalítico que tiene una actividad ribonucleasa específica a partir de un grupo de proteínas de ARN. Véase, por ejemplo, Bartel y colaboradores (1993) Science 261.1411-1418. Alternativamente, la expresión de gen de tipo factor de crecimiento de células madres puede ser inhibida mediante el enfoque de secuencias de nucleótidos complementarias hacia la región reguladora del ácido nucleico de tipo factor de crecimiento de células r.adres (por ejemplo, el promotor de tipo factor de crecimiento de células madres y/o realzadores) para formar estructuras de hélice triple que impiden la transcripción del gen de tipo factor de crecimiento de células madres en células objetivo. Véase, por ejemplo, Helene, 1991 Anticancer Drug Des. 6:569-84; Helene, y colaboradores 1992 Ann. N. Y. Acad. Sci. 660:27-36; Maher 1992 Bioassays 14:807-15. En varias modalidades, los ácidos nucleicos de tipo factor de crecimiento de células madres pueden ser modificados en la porción de base, porción de azúcar o en la estructura de fosfato para mejorar, por ejemplo, la estabilidad, hibridización, o solubilidad de la molécula. Por ejemplo, la ít-.J_j88¿_____J_Afa »_*__. _t_ estructura de fosfato de desoxiribosa de ácidos nucleicos puede ser modificada para generar ácidos nucleicos de péptido. Véase, por ejemplo, Hyrup y colaboradores 1996 Bioorg Med Chem 4:5-23. Como se emplea aquí, los términos "ácidos nucleicos péptidos" o "PNAs" se refieren a mímicos de ácido nucleico (por ejemplo, mímicos de ADN) en donde la estructura de fosfato de deoxiribosa es reemplazada por una estructura de pseudopéptidos y se conserva solamente las cuatro nucleobases naturales. La estructura neutral de PNAs permite la hibridación específica de ADN en ARN en condiciones de baja fuerza iónica. La síntesis de oligómeros de PNA puede efectuarse utilizando protocolos estándares de síntesis de péptidos de base sólida. De conformidad con lo descrito en Hyrup y colaboradores 1996, supra; Perry-O'Keefe y colaboradores 1996 Proc. Natl. Acad. Sci. de los Estados Unidos de América 93: 14670-14675. PNAs de tipo factor de crecimiento pueden utilizarse en aplicaciones para propósitos terapéuticos y de diagnóstico. Por ejemplo PNAs pueden utilizarse como agentes de antisentido o antígenos para modulación específica para secuencia de la expresión de genes, por ejemplo mediante la inducción de la terminación de traducción o transcripción o para inhibir la replicación. PNAs de tipo factor de crecimiento de células madres pueden también utilizarse, por ejemplo, en el análisis de mutaciones individuales de pares de bases en un gen (por ejemplo, fijación por reacción en cadena de polimerasa dirigida por PNA; como enzimas de restricción artificial cuando se utilizan en combinación con otras enzimas, por ejemplo, SI nucleasas (véase, por ejemplo, Hyrup y colaboradores 1996, supra) ; o bien como sondas o cebadores para secuencia de ADN e hibridación (véase, Hyrup y colaboradores 1996, supra; Perry-O'Keefe y colaboradores 1996, supra) . En otra modalidad, PNAs de tipo factor de crecimiento de células madres pueden ser modificados, por ejemplo para incrementar su estabilidad o absorción celular, mediante la fijación de grupos lipofílicos o bien otros grupos auxiliares sobre PNA, mediante la formación de quimeras PNA-ADN, o bien mediante el uso de liposomas o bien otras técnicas de administración de fármaco conocidas. Por ejemplo, quimeras de PNA-ADN de tipo factor de crecimiento de células madres pueden ser generadas las cuales combinan las propiedades provechosas de PNA y ADN. Tales1 quimeras permiten que enzimas de reconocimiento de ADN (por ejemplo, RNasa H y ADN polimerasa) interactúen con la porción de ADN mientras la porción de PNA proporciona alta afinidad de enlace y especificidad. Quimeras de PNA-ADN pueden estar enlazadas empleando enlazadores de longitudes apropiadas seleccionados en términos de apilamiento de bases, número de envases entre las nucleobases y orientación (véase Hyrup y colaboradores, _.WM_fa_»«_--.---t„_J_..- ,__*-__i__É-___ 1996, supra) . La síntesis de quimera de PNA-ADN puede efectuarse de conformidad con lo descrito en Hyrop y colaboradores 1996. Supra, Nucí Acids Res 24:3357-3363. Por ejemplo, una cadena de ADN puede ser sintetizada en un 5 soporte sólido empleando la química de acoplamiento de fosforamidita estándar y análogos de nucleótidos modificados por ejemplo, 5' - (4-metoxitritil) amino-5'deoxi-timidina fl fosforamidita, pueden utilizarse entre el PNA y el extremo 5' de ADN. Véase, por ejemplo, Mag y colaboradores 1989 Nucí 10 Acid Res 17:5973-5988. Monoméros PNA son después acoplados de manera escalonada para producir una molécula quimérica con un segmento 5' PNA y un segmento 3'ADN. Véase, por ejemplo, Finn y colaboradores 1996, supra. Alternativamente, moléculas quiméricas pueden ser sintetizadas con un segmento 5'ADN y un 15 segmento 3' PNA. Véase, por ejemplo, Petersen y colaboradores 1995 Bioorg. Med. Chem. Lett. 5:1119-11124. En otras modalidades, el oligonucléotido puede incluir otros grupos adjuntados tales como péptidos (por ejemplo, para enfocar a receptores de células huéspedes in vivo) , o bien 20 agentes que facilitan el transporte a través de la membrana celular (véase, por ejemplo, Letsinger y colaboradores, 1989, Proc. Natl. Acad Sci. de los Estados Unidos de América 86:6553-6556; Le aitre y colaboradores, 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. 84:648-652; PCT Publicación No. WO88/09810) o bien 25 la barrera hematoencefálica (véase, por ejemplo, Publicación PCT No. WO89/10134) . Además, oligonucleótidos pueden ser modificados con agentes de disociación activados por hibridación (véase, por ejemplo, Krol y colaboradores, 1988, Bio Techniques 6:958-976) o bien agentes de intercalación (véase, por ejemplo, Zon 1988, Pharm. Res. 5:539-549) . Para este propósito el oligonucléotido puede ser conjugado con otra molécula, por ejemplo, un péptido, un agente de reticulación activado por hibridación, un agente de transporte, un agente de disociación activado por irrigación, y similares. 4.3 HUÉSPEDES La presente invención proporciona además células huéspedes genéticamente manipuladas para contener los polinucleótidos de la invención. Por ejemplo, tales células huéspedes pueden contener ácidos nucleicos de la invención introducidos en la célula huésped utilizando métodos conocidos de transformación, transfección o infección. La presente invención proporciona además células huéspedes manipuladas genéticamente para expresar lo polinucleótidos de la invención, en donde tales polinucleótidos se encuentran en asociación operativa con una secuencia reguladora heteróloga con relación a la célula huésped que impulsa la expresión de los polinucleótidos en la célula. La célula huésped puede ser una célula huésped eucariótica, por ejemplo, célula de mamífero, célula huésped eucariótica t __-__ a_____-*Ak_-, «*_->»-»»>-inferior, como por ejemplo, célula de levadura, o bien la célula huésped puede ser una célula procariótica, por ejemplo una célula bacteriana. La introducción del constructo recombinante en la célula huésped puede ser efectuada a través de transfección de fosfato de calcio, DEAE, transfección mediada por dextrano, o bien electroporación (Davis L. y colaboradores, Basic Methods in Molecular Biology [Métodos Básicos de Biología Molecular] (1986) . Las células huéspedes que contienen uno de los polinucleótidos de la invención pueden ser utilizadas en forma convencional para producir el producto génico codificado por el fragmento aislado (en el caso de un ORF) o bien puede utilizarse para producir una proteína heteróloga bajo el control del EMF. Cualquier sistema de huésped/vector puede ser utilizado para expresar uno o varios de los ORFs de la presente invención. Estos incluyen, sin limitación, huéspedes eucarióticos tales como células HeLa, células Cv-1, células COS, y células Sf9, así como huéspedes procarióticos tales como E. coli y B. Subtilis. Las células más preferidas son las células que no expresan normalmente el polipéptido particular o proteína particular o que expresan el polipéptido o la proteína a un nivel natural bajo. Proteínas maduras pueden ser expresadas en células de mamífero, levadura, bacterias, o bien otras células bajo el control de promotores apropiados. Sistemas de traducción sin células pueden también ser empleados para t?_,_.c_a_„ -._. producir dichas proteínas empleando ARNs derivados de los constructo ADN de la presente invención. Vectores apropiados de clonación y expresión para su uso con huéspedes procarióticos y eucarióticos son descritos por Sambrook y colaboradores, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, [Clonación Molecular: Un Manual de Laboratorio, Segunda Edición]: Cold Spring Harbor, Nueva York (1989), una divulgación se incorpora por referencia. Varios sistemas de cultivo de células de mamíferos pueden también emplearse para expresar proteína recombinante. Ejemplos de sistemas de expresión de mamíferos incluye las líneas COS-7 de fibroblastos de riñon de mono, descritos por Gluz an, Cell 23:175 (1981), y otras líneas de células capaces de expresar un vector compatible, por ejemplo, las líneas de células C127, 3T3, CHO, HeLa y BHK. Vectores de expresión de mamíferos comprenden el origen de replicación, un promotor adecuado, y también los sitios de enlace de ribosoma necesarios, sitios de poliadenilación, sitios donadores y aceptadores de empalme, secuencias de terminación de transcripción, y secuencias no transcritas de flanco 5' . Secuencias de ADN derivadas del genoma viral, por ejemplo, sitios de origen SV40, promotor temprano, realzador, empalme y poliadenilación, pueden utilizarse para proporcionar los elementos genéticos no transcritos recibidos. Polipéptidos recombinantes y proteínas producidas en cultivo bacteriano son aislados habitualmente a través de la extracción inicial a partir de las pellas de células, seguido per una o varias formaciones de sal, intercambio acuoso de iones, o bien pasos de cromatografía de exclusión de tamaño. Los pasos de repliegue de proteína puede emplearse, según necesario, para terminar la configuración de la proteína madura. Finalmente, se puede emplear cromatografía de líquido de alto desempeño (HPLC) para los pasos de purificación finales. Células microbianas empleadas en la expresión de proteínas pueden ser trastornadas por cualquier método conveniente, incluyendo ciclos de congelación-descongelación, sonicación, trastorno mecánico, o bien uso de agentes de lisado de células. Numerosos tipos de células pueden actuar como células huéspedes adecuadas para la expresión de la proteína. Células huéspedes de mamífero incluyen, por ejemplo, células COS de mono, células de Ovario de Hámster Chino (CHO) , células 293 de riñon de ser humano, células A431 epidérmicas de ser humano, células Colo2'5 de ser humano, células 373, células CV-1, otras líneas de células de primates transformadas, células diploides normales, cepas de células derivadas de cultivo in vitro de tejido primario, explantes primarios, células HeLa, células L de ratón, células BHK, HL-60, U937, células HaK o células de Jurkat. Alternativamente, puede ser posible producir la proteína en eucarióticas inferiores tales como levadura o bien procarióticas tales como bacterias. Cepas de levadura potencialmente adecuadas incluyen Saccharomyces cerevisiae, , Schizosaccharomyces, cepas de Kluyveromyces, candida, o bien, cualquier cepa de levadura que puede expresar proteínas heterólogas. Cepas bacterianas potencialmente adecuadas incluyen Escherichia coli, Bacillus subtili, Salmonella typhimurium, o bien cualquier cepa bacteriana que puede expresar proteínas heterólogas. Si la proteína es elaborada en levadura o bacteria, puede ser necesario modificar la proteína producida, por ejemplo, por fosforidación o glicosilación de los sitios apropiados con el objeto de obtener la proteína funcional. Tales fijaciones, lentes pueden lograrse a través del uso de métodos químicos o enzimáticos conocidos. En otra modalidad de la presente invención, células y tejidos pueden ser manipulados para expresar un gen endógeno que comprende los polinucleótidos de la invención bajo el control de elementos reguladores inducibles, en dicho caso las secuencias reguladoras del gen endógeno pueden ser reemplazadas por recombinación homologa. De conformidad con lo descrito aquí, el enfoque génico puede ser utilizado para reemplazar la región reguladora existente del gen con una secuencia reguladora aislada de un gen diferente o una secuencia reguladora novedosa sintetizada por métodos de manipulación genética. Tales secuencias reguladoras pueden __. consistir de promotores, realzadores, regiones de fijación de andamios, elementos reguladores negativos, sitios de inicio de transcripción, sitios de enlace de proteína reguladora o bien combinaciones de dichas secuencias. Alternativamente, secuencias que afectan la estructura o estabilidad del ARN o proteína producida pueden ser reemplazadas, removidas, agregadas, o bien modificadas de otra forma a través del direccionamiento, incluyendo señales de poliadenilación, elementos de estabilidad de ARNm, sitios de empalme, secuencias libres para incrementar o modificar las propiedades de transporte o secreción de la proteína, o bien otras secuencias que alteran o mejoran la función o estabilidad de moléculas de ARN o proteína. El direccionamiento puede ser una simple inserción de la secuencia reguladora, la colocación del gen bajo el control de la nueva secuencia reguladora, por ejemplo, la inserción de un nuevo promotor o realzador o ambos corriente arriba de un gen. Alternativamente, el evento de direccionamiento puede ser una simple deleción de un elemento regulador, por ejemplo, la deleción de un elemento regulador negativo específico para tejido. Alternativamente, el evento de direccionamiento puede reemplazar un elemento existente: por ejemplo, un realzador específico para tejido puede ser reemplazo por un realzador que tiene una especificidad de tipo celular más amplia o diferente que la especificidad de ._*___-_-__--..s-__aa los elementos que ocurren naturalmente. Aquí, las secuencias que ocurren naturalmente, son removidas y se agregan nuevas secuencias. En todos los casos, la identificación del evento de direccionamiento puecs= ser facilitada por el curso de uno o varios genes marcadorr-es seleccionables que son contiguos con el ADN de dirección-amiento, lo que permite la selección de células en las cuales el ADN exógeno sea integrado en el genoma de la célula huésped. La identificación del evento de direccionamiento puede También ser facilitada a través del uso de uno o varios mar_:adores que presentan la propiedad de selección negativa de tal manera que el marcador negativamente seleccicr-=__le esté enlazado al ADN exógeno, pero configurado de tal manera que el marcador seleccionable negativamente flanquee la secuencia de direccionamiento de tal manera que un evento de recombinación homologa correcto por una secuencia er. el genoma de la célula huésped no resulte en la integración estable del marcador negativamente seleccionable. Marcadores útiles para este propósito incluyen el gen de thimidine kin__sa de virus Herpes Simples (TK) o el gen bacteriano de xar.oina-guanina fosforibosil-transferase (gpt) . Las técnicas de direccionamiento de gen o activación de gen que pueden ser utilizadas de conformidad con este aspecto de la invención son descritas más particularmente en la patente norteamericana número 5,272,071 de Chappel; en la patente b..__...,»__.-!...,''-,,_aaMHAajfe» . _*.a.-é;-.a¡i__ i»m- norteamericana número 5,578,461 de Sherwin y colaboradores; en la solicitud internacional número PCT/US92/09627 (WO93/09222) por Selden y colaboradores; en la solicitud internacional número PCT/US90/06436 (WO91/06667) de Skoultchí 5 y colaboradores; todas ellas incorporándose por referencia aquí en su totalidad. 4.3.1. PROTEÍNAS QUIMÉRICAS Y DE FUSIÓN ^ La invención ofrece también proteínas de fusión o quiméricas de tipo factor de crecimiento de células madres. Como se 10 emplea aquí, una "proteína quimérica" o "proteína de fusión" de tipo factor de crecimiento de células madres comprende un polipéptido de tipo factor de crecimiento de células madres enlazado operativamente a un polipéptido de tipo factor de • crecimiento no de células madres. Un "polipéptido de tipo 15 factor de crecimiento de células madres" se refiere a un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos que corresponde a una proteína de tipo factor de crecimiento de células madres mientras que un "polipéptido de tipo factor de crecimiento no de células madres" se refiere a un polipéptido 20 que tiene la secuencia de aminoácidos que corresponde a una proteína que no es sustancialmente homologa con la proteína de tipo factor de crecimiento de células madres, por ejemplo, una proteína que es diferente de la proteína de tipo factor de crecimiento de células madres y que se deriva del mismo 25 organismo o de un organismo diferente. Dentro de la proteína M___M»_»,__-_-iii-¡r - >_____-.._«_>laag¿|a¡ de fusión de tipo factor de crecimiento de células madres, el polipéptido de tipo factor de crecimiento de células madres puede corresponder a la totalidad o una parte de una proteína de tipo factor de crecimiento de células madres. En una modalidad, una proteína de fusión de tipo factor de crecimiento de células madres comprende por lo menos una porción biológicamente activa de una proteína de tipo factor de crecimiento de células madres. En otra modalidad, una proteína de fusión de tipo factor de crecimiento de células madres comprende por lo menos dos porciones biológicamente activas de una proteína de tipo factor de crecimiento de células madres. En otra modalidad, una proteína de fusión de tipo factor de crecimiento de células madres comprende por lo menos tres porciones biológicamente activas de una proteína de tipo factor de crecimiento de células madres. Dentro de la proteína de fusión, el término "enlazado operativamente" tiene el propósito de indicar que el polipéptido de tipo factor de crecimiento de células madres y el polipéptido de tipo factor de crecimiento no de células no madres están fusionados en marco entre ellos. El polipéptido de tipo factor de crecimiento no de células madres puede estar fusionado en la terminal N o en la terminal C del polipéptido de tipo factor de crecimiento de células madres. En una modalidad, la proteína de fusión es una proteína de tipo factor de crecimiento de células madres GST en donde las 1Ü secuencias de tipo factor de crecimiento de células madres están fusionadas en la terminal C de las secuencias GST (glutatione S-transferasa) . Tales proteínas de fusión pueden facilitar la purificación de polipéptidos de tipo factor de 5 crecimiento de células madres recombinantes . En otra modalidad, la proteína de fusión es una proteína de tipo factor de crecimiento de células madres que contiene una '^ secuencia de señal heteróloga en su extremo N. En ciertas células huéspedes (por ejemplo, células huéspedes de 10 mamíferos) la expresión y/o secreción de tipo factor de crecimiento de células madres puede ser incrementada a través del uso de una secuencia de señal heteróloga. En otra modalidad, la proteína de fusión es una proteína de fusión de inmunogiobulina de tipo factor de crecimiento de 15 células madres en donde las secuencias de tipo factor de crecimiento de células madres están fusionadas con secuencias derivadas de un miembro de la familia de proteína de inmunoglobulina. Las proteínas de fusión de inmunoglobulina de tipo factor de crecimiento de células madres de la 20 presente invención pueden ser incorporadas en composiciones farmacéuticas y administradas a un sujeto con el objeto de inhibir una interacción entre un ligando de tipo factor de crecimiento de células madres y una proteína de tipo factor de crecimiento de células madres en la superficie de una 25 célula para suprimir de esta forma la transducción de señal «_¿_.___________Mlfal„'>ll<h'""| ,,;,;,, J.C.C- _,__,,-; mediada de tipo factor de crecimiento de células madres in vivo. Las proteínas de fusión de inmunoglobulina de tipo factor de crecimiento de células madres pueden ser utilizadas para afectar la biodisponibilidad de un ligando homólogo de tipo factor de crecimiento de células madres. La inhibición de la interacción entre ligando de tipo factor de crecimiento de células madres / tipo factor de crecimiento de células madres puede ser útil terapéuticamente tanto para el tratamiento de trastornos proliferativos como de la diferenciación, así como para modular la supervivencia de células (por ejemplo, promover o inhibir) . Además, las proteínas de fusión de inmunoglobulina de tipo factor de crecimiento de células madres de la presente invención pueden emplearse como inmunógenos para producir anticuerpos de tipo factor de crecimiento de células madres en un sujeto, para purificar ligandos de tipo factor de crecimiento de células madres, y en ensayos de tamizado para identificar moléculas que inhiben la interacción de tipo factor de crecimiento de células madres con un ligando de tipo factor de crecimiento de células madres. Una proteína de fusión o proteína quimérica de tipo factor de crecimiento de células madres de la presente invención puede ser producida a través de técnicas de ADN recombinante estándares. Por ejemplo, fragmentos de ADN que codifican las diferentes secuencias de polipéptidos están ligados conjuntamente en marco de conformidad con técnicas convencionales, por ejemplo, mediante el empleo de terminales de extremo plano o de extremo escalonado para ligación, digestión con enzimas de restricción para proporcionar las terminales apropiadas, relleno de extremos cohesivos según lo apropiado tratamiento con fosfatase alcalina para evitar una unión indeseable, y ligación enzimática. En otra modalidad, el gen de fusión puede ser sintetizado por técnicas convencionales que incluyen sintetizadores automatizados de ADN. Alternativamente, la amplificación por reacción en cadena de polimerasa de fragmentos de genes puede efectuarse utilizando cebadores anclas que proporcionan salientes complementarias entre dos fragmentos de gen consecutivos que pueden ser subsecuentemente fusionadas y reamplificadas para generar una secuencia de gen quimérica (véase, por ejemplo, Ausubel y colaboradores (eds) CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, [PROTOCOLOS ACTUALES EN BIOLOGÍA MOLECULAR] John Wiley & Sons. 1992). Además, se pueden conseguir muchos vectores de expresión en el comercio los cuales codifican ya una porción de fusión (por ejemplo un polipéptido GST) . Un ácido nucleico codificador de tipo factor de crecimiento de células madres puede ser clonado en un vector de expresión de ese tipc de tal manera que la porción de fusión esté enlazada en maree con la proteína factor de crecimiento de células madres . ._.,....a^-^_>„,_^^^_____^_|__-ii_ 4.4 POLIPÉPTIDOS DE LA INVENCIÓN Los polipéptidos aislados de la presente invención incluyen, sin limitarse a ellos, un polipéptido que comprende: la secuencia de aminoácidos presentada como cualquiera de SEQ ID NO: 23, 25, 28, 30-32, 34, ó 35 o una secuencia de aminoácidos codificada por cualesquiera de las secuencias de nucleótidos de la secuencia SEQ ID NO: 1-22, 24, 26-27, 29 ó 33 o bien la proteína madura o de longitud completa correspondiente. Polipéptidos de la presente invención incluyen también polipéptidos de preferencia con actividad biológica o inmunológica que están codificados por: (a) un polinucleótido que tiene cualesquiera de las secuencias de nucleótidos presentada en SEQ ID NO: 1-22, 24, 26-27, 29, ó 33 o (b) polinucleótidos que codifican cualesquiera de las secuencias de aminoácidos presentadas en SEQ ID NO: 23, 25, 28, 30-32, 34 ó 35 o bien (c) polinucleótidos que se hibridan con el complemento de los polinucleótidos ya sea de (a) o (b) bajo condiciones estrictas de hibridación. La invención proporciona también variantes biológicamente activas o inmunológicamente activas de las cualesquiera de las secuencias de aminoácidos presentadas, SEQ ID NO: 23, 25, 28, 30-32, 34, ó 35, o la proteína madura o de longitud completa correspondiente; y "equivalente sustanciales" de las mismas (por ejemplo, con una identidad de aminoácidos de por lo menos aproximadamente 65%, por lo menos aproximadamente 70%, ^ ^ _i__i__l________ por lo menos aproximadamente 75%, por lo menos aproximadamente 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88% o bien 89%, más típicamente al menos aproximadamente 90%, 91% , 92%, 93% o bien 94%, y de manera todavía más típica, por lo menos aproximadamente 95%, 96%, 97%, 98% o bien 99%, más típicamente por lo menos aproximadamente 99%) que conservan actividad biológica . Polipéptidos codificados por variantes alélicas pueden tener una actividad similar, incrementada, o disminuida en comparación con los polipéptidos que conforman SEQ ID NO: 23, 25, 28, 30-32, 34 ó 35. Fragmentos de proteínas de la presente invención que pueden presentar actividad biológica están también abarcados dentro del marco de la presente invención. Fragmentos de la proteína pueden estar en forma lineal o bien pueden estar en forma de ciclos utilizando métodos conocidos, por ejemplo, de conformidad con lo descrito en H. U. Saragovi y colaboradores, Bio/Technology 10.773-778 (1992) y en R. S. McDowell y colaboradores, J. Amer. Chem- Soc. 114.9245-9253 (1992), ambos incorporándose aquí por referencia. Tales fragmentos pueden estar fusionados sobre moléculas vehículos tales como inmunoglobulinas para muchos propósitos, incluyendo el incremento de la valencia de los sitios de enlace de proteína. La presente invención ofrece también formas de longitud completa y maduras (por ejemplo, sin una secuencia de señal y secuencia precursora) de las proteínas divulgadas. La secuencia codificadora de proteína es identificada en la lista de secuencias por traducción de las secuencias de nucleótidos divulgadas. La forma madura de dicha proteína puede obtenerse mediante expresión de un polinucleótido de longitud completa en una célula de mamífero adecuada o bien en otra célula huésped. La secuencia de la forma madura de la proteína puede también ser determinada a partir de la secuencia de aminoácidos de la forma de longitud completa. Cuando las proteínas de la presente invención están unidas a membrana, formas solubles de las proteínas se proporcionan también. En formas de este tipo, una parte o la totalidad de las regiones que provocan que las proteínas estén unidas a membrana son removidas de tal manera que las proteínas estén totalmente secretadas a partir de la célula en donde es expresada. Composiciones de proteína de la presente invención pueden comprender además un vehículo aceptable, como por ejemplo un vehículo hidrofílico, por ejemplo, farmacéuticamente aceptable. La presente invención ofrece además polipéptidos aislados codificados por los fragmentos de ácido nucleico de la presente invención o bien por variantes degeneradas de los fragmentos de ácidos nucleicos de la presente invención. Por "variante degenerada" se entienden fragmentos de nucleótidos É-———_£—_-——6_»c»-.- C_-»Cie»_»—>._-,_ BHj¡_jfc_J_«*>*,*_-Í<_M>—Ífe_i».-. que difieren de un fragmento de ácido nucleico de la presente invención (por ejemplo, un ORF) por secuencia de nucleótidos pero, debido a la degeneración del código genético, codifican vina secuencia de polipéptidos idéntica. Fragmentos preferidos de ácido nucleico de la presente invención son los ORFs que codifican proteínas. Varias metodologías conocidas en la técnica pueden emplearse para obtener cualesquiera de los polipéptidos aislados o proteínas de la presente invención. A nivel más sencillo, la secuencia de aminoácidos puede ser sintetizada empleando sintetizadores de péptido comercialmente disponibles. Las secuencias de proteína construidas sintéticamente, en virtud de compartir características estructurales y/o de conformación primarias, secundarias o terciarias con proteínas pueden poseer propiedades biológicas en común con ellas, incluyendo actividad de proteína. Esta técnica es particularmente útil en la producción pequeños péptidos y fragmentos de polipéptidos más grandes. Fragmentos son útiles, por ejemplo, para generar anticuerpos contra el polipéptido nativo. Así, pueden ser empleados como sustitutos biológicamente activos o inmunológicos para proteínas naturales, purificadas en el tamizado de compuestos terapéuticos y en procesos inmunológicos para el desarrollo de anticuerpos. Los polipéptidos y proteínas de la presente invención pueden ser purificados alternativamente a partir de células que han sido alteradas para expresar el polipéptido deseado o la proteína deseada. Como se emplea aquí, una célula es alterada para expresar un polipéptido deseado o una proteína deseada cuando la célula, a través de manipulación genética, produce un polipéptido o proteína que normalmente no produce o bien que la célula produce normalmente a un nivel inferior. Un experto en la materia puede adaptar fácilmente procedimientos para introducir y expresar secuencias ya sea recombinantes o sintéticas en células eucarióticas o procarióticas con el objeto de generar una célula que produzca uno de los polipéptidos o proteínas de la presente invención. La invención se refiere también a métodos para producir un polipéptido que comprende un cultivo de células huéspedes de la presente invención en un medio de cultivo adecuado, y la purificación de la proteína a partir de las células o del cultivo en donde se cultivan las células. Por ejemplo, los métodos de la presente invención incluyen un proceso para producir un polipéptido en el cual una célula huésped que contiene un vector de expresión adecuado que incluye un polinucleótido de la invención es cultivada en condiciones que permiten la expresión del polipéptido codificado. El polipéptido puede ser recuperado del cultivo, convenientemente a partir del medio de cultivo, o bien a partir de un lisado preparado a partir de las células huéspedes y purificado adicionalmente. Modalidades preferidas incluyen las modalidades en las cuales la proteína producida por dicho proceso es una forma madura o de longitud completa de la proteína. In un método alternativo, el polipéptido o proteína es purificado a partir de células bacterianas que producen naturalmente el polipéptido o la proteína. Un experto en la materia puede seguir fácilmente métodos para aislar polipéptidos y proteínas con el objeto de obtener uno de los polipéptidos aislados o una de las proteínas aisladas de la presente invención. Incluyen, sin limitarse a ellas, inmunocromatografías, HPLC, cromatografía por exclusión de tamaño, cromatografía de intercambio de iones, así como cromatografía de inmuno-afinidad. Véase, por ejemplo, Scopes, Protein Purfication : Principies and Practice [ Purificación de Proteína : Principios y Práctica] , Springer-Verlag (1994) ; Sambrook y colaboradores en Molecular Cloning; A Laboratory Manual [Clonación Molecular: Manual de Laboratorio] ; Ausubel y colaboradores Current Procois in Molecular Biology [Protocolos Actuales en Biología Molecular] . Fragmentos de polipéptidos que conservan actividad biológica/inmunológica, incluyen fragmentos que comprenden más que aproximadamente 100 aminoácidos, o bien más que aproximadamente 200 aminoácidos, y fragmentos que codifican dominios específicos de proteína.

Los polipéptidos purificados pueden ser utilizados en ensayos de enlace in vi tro que son bien conocidos en la técnica para identificar moléculas que se unen a los polipéptidos. Estas moléculas incluyen, sin limitarse a ellas, por ejemplo, pequeñas moléculas, moléculas provenientes de bibliotecas combinatorias, anticuerpos u otras proteínas. Las moléculas identificadas en el ensayo de enlace son después probadas para actividad antagonista o agonista del gen cultivo tisular in vivo o modelos de animales que son bien conocidos en la técnica. En resumen, las moléculas son tituladas en varios cultivos celulares o animales y después probadas ya sea para muerte celular del animal o bien supervivencia prolongada del animal/de las células. Además, los péptidos de la presente invención o moléculas capaces de enlazarse con los péptidos pueden formar complejos con toxinas, como por ejemplo, ricina o cólera, o bien con otros compuestos que son tóxicos para las células. El complejo de molécula de enlace con toxina es después dirigido hacia un tumor o bien hacia otra célula mediante la especificidad de la molécula de enlace para SEQ ID NO: 23, 25, 28, 30-32, 34 Ó 35. La proteína de la presente invención puede también ser expresada como producto de animales transgénicos, por ejemplo, como componente de la leche de vacas, cabras, cerdas, u ovejas transgénicas que se caracterizan por células somáticas o germinales que contienen una secuencia de nucleótidos que codifican la proteína. Las proteínas proporcionadas aquí incluyen también proteínas caracterizadas por secuencias de aminoácidos similares a las secuencias de proteínas purificadas pero en donde modificaciones se proporcionan de manera natural o bien se manipulan deliberadamente. Por ejemplo, modificaciones en la secuencia de ADN o péptido pueden ser efectuadas por expertos en la materia empleando técnicas conocidas. Modificaciones de interés en las secuencias de proteína pueden incluir la alteración, sustitución, reemplazo, inserción o deleción de un residuo de aminoácido seleccionado en la secuencia codificadora. Por ejemplo, uno o varios de los residuos de cisteina pueden ser removidos o reemplazados con otro aminoácido para alterar la conformación de la molécula. Técnicas para dicha alteración, sustitución, reemplazo, inserción o deleción son bien conocidas por parte de los expertos en la materia (véase, por ejemplo, patente norteamericana número 4,5 18,584). De preferencia, dicha alteración, sustitución, reemplazo, inserción o deleción conservan la actividad deseada de la proteína. Regiones de la proteína que son importantes para la función de la proteína pueden ser determinadas por varios métodos conocidos en la técnica incluyendo el método de exploración de alanina que involucra la sustitución sistemática de aminoácidos - in teü—-••__——--ja*c¿_» individuales o cadenas de aminoácidos por alanina, seguido por la prueba de la variante que contiene alanina resultante para determinar su actividad biológica. Este tipo de análisis determina la importancia de aminoácido (s) sustituido (s) en actividad biológica. Regiones de la proteína que son importantes para la función de proteína pueden ser determinadas por el programa eMatrix. Otros fragmentos y derivados de las secuencias de proteínas de las cuales se podría esperar que conserven una actividad de proteína en su totalidad o en parte y son útiles para tamizar o bien para otras metodologías inmunológicas pueden también ser elaborados fácilmente por los expertos en la materia to ando en cuenta las divulgaciones aquí . Tales modificaciones están abarcadas por la presente invención. La proteína puede también ser producida mediante el enlace operativo del polinucleótido aislado de la invención para secuencias de control adecuadas en uno o varios vectores de expresión de insectos, y mediante el empleo de un sistema de expresión de insecto. Materiales y métodos para sistemas de expresión de baculovirus/células de insecto están comercialmente disponibles en forma de kit en, por ejemplo, Invitrogen, San Diego, Calif., Estados Unidos de América (el I kit MaxBatMR) , y tales métodos son bien conocidos en la técnica, de conformidad con lo descrito en Summers and Smith, Texas Agricultural Experiment Station Bulletin No. 1555 [ -_._,.__- «._ _J___i_____._____.j_«L-....

Boletín de Estación Experimental Agrícola Texana No. 1555] (1987), que se incorpora aquí por referencia. Como se utiliza aquí, una célula de insecto que puede expresar un polinucleótido de la presente invención es una célula 5 "transformada". La próteína de la presente invención puede ser preparada mediante el cultivo de células huéspedes transformadas en condiciones de cultivo adecuadas para expresar la proteína recombinante. La proteína expresada resultante puede ser 10 purificada de dicho cultivo (es decir, de medio de cultivo o extractos de célula) empleando proceso de purificación conocidos por ejemplo, cromatografía de intercambio de iones f y filtración en gel. La purificación de la proteína puede también incluir una columna de afinidad que contiene agentes 15 que se unen con la proteína; uno o varios pasos de columna en tales resinas de afinidad como concanavalin A-agarose, heparintoyopearlMR o bien Azul Cibacron 3GA SepharoseR; uno o varios pasos que involucra cromatografía de interacción hidrofóbica utilizando resinas tales como fenil éter, butil 20 éter, o propil éter; o bien cromatografía por inmunoafinidad. f Alternativamente, la proteína de la presente invención puede ser expresada también en una forma que facilite la purificación. Por ejemplo, puede ser expresada como proteína de fusión, por ejemplo las de proteína de enlace de matosa 25 (MBP), glutathione-S-transferase (GST) o thioredoxin (TRX) . O t-icjüli. bien como marcador His. Kits para expresión y purificación de tales proteínas de fusión están comercialmente disponibles en New England BioLab (Beverly, Mass.), Pharmacia (Piscataway, N. J. e Invitrogen, respectivamente. La proteína puede 5 también ser marcada con un epítopo y subsecuentemente purificada mediante la utilización de un anticuerpo específico dirigido hacia dicho epítopo. Un epítopo de este F tipo ("FLAG"1*") se puede conseguir en el comercio en Kodak en Haven, Conn. ) . 10 Finalmente, uno o más pasos de cromatografía de líquido de alto desempeño de fase reversa que emplean medios (RP-HPLC) hidrofóbicos, por ejemplo, gel de sílice que tiene un pendiente metilo y otros grupos aliféticos, puede emplearse para purificar adicionalmente la proteína. Algunos o la 15 totalidad de los pasos de purificación mencionados arriba, en varias combinaciones, pueden también emplearse para proporcionar una proteína recombinante sustancialmente homogéneamente aislada. La proteína purificada de esta manera es sustancialmente libre de otras proteínas de mamífero y se 20 definen de conformidad con la presente invención como una"proteína aislada". Los polipéptidos de la presente invención incluyen análogos (variantes) . Los polipéptidos de la presente invención incluyen análogos de tipo factor de crecimiento de células 25 madres. Esto abarca fragmentos de polipéptido de tipo factor .«-I_j-_-_-__*--w-_d-.a«__-fc i(JáMal^^^^^^y^y-j^^«^^f^^tM de crecimiento de células madres de la invención, así como polipéptidos de tipo factor de crecimiento de células madres que comprenden uno o varios aminoácidos removidos, insertados o sustituidos. Así mismo, análogos del polipéptido de tipo factor de crecimiento de células madres de la presente invención abarcan fusiones de los polipéptidos de tipo factor de crecimiento de células madres o modificaciones de los polipéptidos de tipo factor de crecimiento de células madres en donde el polipéptido de tipo factor de crecimiento de células madres o su análogo se encuentra fusionado con otra porción o con otras porciones, por ejemplo, porción de direccionamiento o bien otro agente terapéutico. Tales análogos pueden presentar propiedades mejoradas tales como actividad/estabilidad. Ejemplos de porciones pueden ser fusionadas sobre el polipéptido de tipo factor de crecimiento de células madres o un análogo incluyen, por ejemplo, porciones de direccionamiento que proporcionan el suministro de polipéptido a neuronas, por ejemplo, anticuerpos para el sistema nervioso central o bien anticuerpos para receptor y ligandos expresados en células neuronales. Otras porciones que pueden ser fusionadas sobre polipéptido de tipo factor de crecimiento de células madres incluyen agentes terapéuticos que son utilizados para el tratamiento, por ejemplo, fármacos antidepresivos o bien otras medicaciones para trastornos neurológicos. Así mismo, polipéptidos de tipo factor de crecimiento de células madres pueden ser fusionados sobre moduladores de crecimiento de neuronas o bien otras quimiocinas para administración dirigida. 4.4.1 DETERMINACIÓN DE IDENTIDAD Y SEMEJANZA DE POLIPÉPTIDOS Y POLINUCLEÓTIDOS La identidad y/o semejanza preferidas son diseñadas para proporcionar la mayor correspondencia entre las secuencias probadas. Métodos para determinar la identidad y semejanza son codificados en programas de cómputo los cuales incluyen, sin limitarse a ellos, el paquete de programa GCG, que incluye GAP (Devereux, J. y colaboradores Nucleic Acids Research 12(1) :387 (1984); Genetics Computer Group University of Wisconsin, Madison, Wl), BLASTP, BLASTN, BLASTX, FASTA (Altschul, S. F, y colaboradores; J. Molec Biol. 215:403-410 (1990); PSI-BLAST (Altschul S. F. y colaboradores, Nucleic Acids Res. Volumen 25 páginas 3389-3402, se incorpora aquí por referencia) , la programática eMatrix (Wu y colaboradores, J. Comp.. Biol. Volumen 6, páginas 219-235 1999), Se incorpora aquí por referencia) , programática eMotif (Nevill-Manning y colaboradores ISMB-97, volumen 4, páginas 202-209, se incorpora aquí por referencia) , la programática Gene Atlas (Molecular Simulations Inc. (MSI), San Diego, CA) (Sánchez y Salí (1998) Proc. Natl Acad. Sci., 95, 13597-13602; Kitson DHG y colaboradores (2000) "Remote Homology detection using structural modeling - an evaluation" [Detección de homología JrkiMuí _t?_t_a***', ifc *""** remota empleando modelado estructural - una evaluación], presentado en: Fischer y Eisenberg (1996) Protein Sci. 5,947-955) y el algoritmo de predicción de hidrofobicidad Kyte-Doolittle (J. Mol Biol. 157 páginas 105-31 (1982) que se incorporan aquí por referencia) . Los programas BLAST están disponibles públicamente a partir de National Center for Biotechnology Information (NCBI) [Centrio Nacionald e Información en Materia de Biotecnología] y otras fuentes (BLAST Manual, Altschul, S., y colaboradores NCB NLM NIH Bethesda, MD 20894; Altschul, S., y colaboradores J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990). 4.5 TEPAPIA GÉNICA Mutaciones en los polinucleótidos de la invención pueden resultar en pérdida de función normal de la proteína codificada. La invención proporciona por consiguiente terapia génica para restaurar una actividad normal de los polipéptidos de la invención; o bien para gratar estados de enfermedad que involucran polipéptidos de ' la invención. La administración de un gen funcional que codifica polipéptidos de la invención a células apropiadas se efectúa ex vivo, in sistu, o in. vivo mediante el uso de vectores, más particularmente vectores virales (por ejemplo, adenovirus, virus asociado con adeno, o bien retrovirus) , o bien ex vivo mediante el uso de métodos físicos de transferencia ADN (por ejemplo, liposomas o bien tratamientos químicos) . Véase, por ejemplo, Anderson, Nature, complemento al volumen 392, número €679, páginas 25-20 (1998) . Para reseñas adicionales de tecnología de genética ver Friedmann, Science, 244: 1275-1281 (1989); Ver a, Scientific American: 68-84 (1990); y Miller, Mature 357: 455-460 (1992). La introducción de cualesquiera de los nucleótidos de la presente invención o un gen que codifica los polipéptidos de la presente invención puede estar acompañada de sustratos extracromosómicos (expresión transiente) o bien cromosomas artificiales (expresión estable) . Las células pueden también ser cultivadas ex vivo en presencia de proteínas de la presente invención con el objeto de proliferar o producir un efecto deseado en la actividad de dichas células. Células tratadas pueden ser después introducidas in vivo para propósitos terapéuticos. Alternativamente, se contempla que en otros estados de enfermedad del ser humano, la prevención de la expresión o la inhibición de la actividad de polipéptidos de la invención será útil para el tratamiento de estado de enfermedad. Se contempla que una terapia de antisentido o una terapia génica podría ser aplicada para regular negativamente la expresión de polipéptidos de la invención. Otros métodos que inhiben la expresión de una proteína incluyen la inducción de moléculas de antisentido a los ácidos nucleicos de la presente invención, sus complementos o bien sus secuencias de ARN traducidas, a través de métodos conocidos en la técnica. Además, los polipéptidos de la presente invención pueden ser inhibidos mediante el uso de métodos dirigidos de deleción, o bien mediante la inserción de un elemento regulador negativo, por ejemplo, un silenciador, que es específico para tejido. La presente invención proporciona además células genéticamente manipuladas in vi vo para expresar los polinucleótidos de la invención, en donde tales polinucleótidos se encuentran en asociación operativa con una secuencia reguladora heteróloga para la célula huésped que impulsa la expresión de los polinucleótidos en la célula. Estos métodos pueden ser utilizados para incrementar o disminuir la expresión de los polinucleótidos de la presente invención. Conocimiento de las secuencias de ADN proporcionado por la invención permite modificación de células para permitir, incrementar o disminuir la expresión de polipéptido endógeno. Células pueden ser modificadas (por ejemplo, por recombinación homologa) para proporcionar una expresión incrementada del polipéptido mediante el reemplazo, en su totalidad o en parte del promotor que ocurre naturalmente con la totalidad o una parte de un promotor heterólogo de tal manera que las células expresen la proteína a niveles más altos. El promotor heterólogo es insertado de tal manera que este unido operativamente a las secuencias codificadoras de —a».».——*—naaam_fa t. » ._^<___B.*lA*citt-a_c¿<.ác-.,e- proteína deseadas. Véase, por ejemplo, publicación internacional PCT No. Wo 94/12650, publicación internacional PCT NO. WO 92/20808, y publicación internacional PCT No. WO 91/09955. Se contempla también que, además del ADN de 5 promotor heterólogo, ADN de marcador amplificable (por ejemplo, ada, dhfr, y el gen de CAD multifuncional que codifica carbamil fosfato cintaza, aspartato ßj transcarbamilasa, y dihidroorotasa) y/o ADN de intron puedan ser insertados junto con el ADN de promotor heterólogo. Si 10 esta enlazado a la secuencia codificadora de proteína deseada, la amplificación del ADN de marcador por métodos estándares de selección resulta en la coamplificación ee las secuencias codificadoras de proteínas deseadas en las células. 15 En otra modalidad de la presente invención, células y tejidos pueden ser manipulados para expresar un gen endógeno que comprende los polinucleótidos de la presente invención bajo el control de elementos reguladores inducibles, en dicho caso las secuencias reguladoras del gen endógeno pueden ser 20 reemplazadas por recombinación homologa. De conformidad con • lo descrito aquí, el direccionamiento hacia genes puede ser utilizado para reemplazar una región reguladora existente de gen con una secuencia reguladora aislada de un gen diferente o una secuencia reguladora novedosa sintetizada por métodos 25 de manipulación genética. Tales secuencias reguladoras pueden comprender promotores, realzadores, regiones de fijación de andamios, elementos reguladores negativos, sitios de inicio de transcripción, sitios de enlace de proteína reguladora o bien combinaciones de dichas secuencias. Alternativamente, secuencias que afectan la estructura o estabilidad del ARN o proteína producida pueden ser reemplazadas, removidas, agregadas o bien modificadas de otra manera mediante el direccionamiento. Estas secuencias incluyen señales de poliadenilación, elementos de estabilidad de ARNm, sitios de empalme, secuencias líderes para realzar o modificar las propiedades de transporte o secreción de la proteína, o bien otras secuencias que alteran o mejoran la función o estabilidad de la proteína o moléculas de ARN. El evento de direccionamiento puede ser una simple inserción de la secuencia reguladora, la colocación del gen bajo el control de la nueva secuencia reguladora, por ejemplo, inserción de un nuevo promotor o realzador o ambos corriente arriba de un gen. Alternativamente, el evento de direccionamiento puede ser una simple deleción de un elemento regulador, por ejemplo, la deleción de un elemento regulador negativo específico para tejido. Alternativamente, el evento de direccionamiento puede reemplazar un elemento existente; por ejemplo, un realzador específico para tejido puede ser reemplazado por un realzador que tiene una especificidad de tipo celular diferente o más amplia que elementos que ocurren naturalmente. Aquí, las secuencias que ocurren naturalmente son removidas y nuevas secuencias son agregadas. En todos los casos, la identificación del evento de direccionamiento puede ser facilitada por el uso de uno o varios genes marcadores seleccionables que son contiguos con el ADN de direccionamiento permitiendo la selección de células en las cuales el ADN exógeno ha integrado el genoma celular. La identificación del evento de direccionamiento puede también ser facilitada por el uso de uno o varios genes de marcador que presentan la propiedad de selección negativa, de tal manera que el marcador negativamente seleccionable este unido al ADN exógeno, pero configurado de tal manera que el marcador negativamente seleccionable flanquee la secuencia de díreccionamiento, de tal manera que un evento de recombinación homologa correcto con secuencias en el genoma de la célula huésped no resulte en la integración estable del marcador negativamente seleccionable. Marcadores útiles para este propósito incluyen el gen de timidin quinasa (TK). de virus de Herpes Simples o bien del gen de bacterial de xantina-guanina fosforibosil transferasa (gpt) . Las técnicas de direccionamiento génico o activación de gen que pueden emplearse de conformidad con este aspecto de la invención son descritas más particularmente en la patente norteamericana No. 5,272,071 de Chappel: patente norteamericana No. 5,578,461 de Sherwin y colaboradores; f. ,c- r-?^r--r-?-t?t?'.w-ai- ^e_t_—._e»,—-.a__i-.É solicitud internacional no. PCT/US92/09627 (WO93/09222) de Selden y colaboradores; y solicitud internacional No. PCT/US90/06436 (WO91/06667) por Skoultchi y colaboradores, todas ellas incorporándose aquí por referencia en su totalidad. 4,6 ANIMALES TRANSGÉNICOS En métodos preferidos para determinar las < funciones biológicas de los polipéptidos de la presente invención in vivo, uno o varios genes proporcionados por la invención ya sea son sobreexpresados o bien desactivados en la línea germinal de animales usando recombinación homologa [Capechi. Science 244:1288-1292) (1989)]. Animales en los cuales el gen es sobreexpresado, bajo el control regulador de elementos promotores exógenos o endógenos, son conocidos como animales transgénicos. Animales en los cuales un gen endógeno ha sido desactivado por recombinación homologa se conocen como animales "noqueados". Animales noqueadqs, de preferencia mamíferos no humanos pueden ser preparados de conformidad con lo descrito en la patente norteamericana' No. 5,557,032, que se incorpora aquí por referencia. Animales transgénicos son útiles para determinar qué funciones los polipépt'idos de la presente invención desempeñan en procesos biológicos, y de preferencia en estados de enfermedad. Animales transgénicos son útiles como sistemas de modelo para identificar compuestos que modulan el metabolismo de lípidos. Animales transgénicos, de preferencia mamíferos no humanos son producidos empleando métodos de conformidad con lo descrito en la patente norteamericana No. 5,489,743 y publicación PCT No. W094/28122, que se incorporan aquí por referencia. Animales transgénicos pueden ser preparados en los cuales la totalidad o una parte de un promotor de los polinucleótidos de la presente invención es ya sea activada o desactivada para alterar el nivel de expresión de los polipéptidos de la invención. La desactivación puede ser efectuada mediante métodos de recombinación homólogos descritos arriba. La activación puede lograrse mediante la complementación o el reemplazo del promotor homólogo para proporcionar una expresión incrementada de proteína. El promotor homólogo puede ser complementado mediante la inserción de uno o varios elementos realzadores heterólogos conocidos por conferir una activación de promotor en un tejido particular. Los polinucleótidos de la presente invención hacen también posible el desarrollo, por ejemplo a través de recombinación homologa o bien estrategias de noqueado, de animales que no expresan polipéptido de tipo factor de crecimiento de células madres funcional o bien que expresan una variante del polipéptido de tipo factor de crecimiento de células madres. Tales animales son útiles como modelos para estudiar las actividades in vivo de polipéptido de tipo factor de crecimiento de células madres así como para estudiar moduladores del polipéptido de tipo factor de crecimiento de células madres. En métodos preferidos para determinar funciones biológicas de los polipéptidos de la presente invención in vivo, uno o varios genes proporcionados por la invención son ya sea sobreexpresados o bien desactivados en la línea germinal de animales utilizando recombinación homologa [Capechi. Science 244:1288-1292 (1989)]. Animales en los cuales el gen es sobreexpresado, bajo el control regulador de elementos promotores exógenos o endógenos, son conocidos como animales transgénicos. Animales en los cuales un gen endógeno ha sido desactivado por recombinacíón homologa se conocen como animales "noqueados". Animales noqueados, de preferencia mamíferos no humanos, pueden ser preparados de conformidad con lo descrito en la patente norteamericana No. 5,557,032, que se incorpora aquí por referencia. Animales transgénicos son útiles para determinar las funciones que polipéptidos de la presente invención desempeñan en procesos biológicos, y de preferencia en estados de enfermedad. Animales transgénicos son útiles como sistemas de modelo para identificar compuestos que modulan el metabolismo de lípidos. Animales transgénicos, de preferencia mamíferos no humanos son producidos utilizando métodos de conformidad con lo descrito en la patente norteamericana No. 5,489,743 y en la publicación PCT No. W094/28122, que se incorporan aquí por l__ii__„__ ____ _-á «¡tai-referencia. Se pueden preparara animales transgénicos en donde la totalidad o una parte de los polinucleótidos del promotor de la presente invención es ya sea activada o desactivada para alterar el nivel de expresión de los polipéptidos de la invención. La desactivación puede efectuarse utilizando métodos de recombinación homólogos descritos arriba. La I activación puede efectuarse mediante la complementación o el reemplazo de promotor homólogo para proporcionar una expresión incrementada de proteína. El promotor homólogo puede ser complementado por inserción de uno o varios elementos realzadores heterólogos conocidos por proporcionar la activación de promotor en un tejido particular. 4.7 USOS Y ACTIVIDAD BIOLÓGICA DE POLIPÉPTIDO DE TIPO FACTOR DE CRECIMIENTO DE CÉLULAS MADRES DE SER HUMANO Los polinucleótidos y proteínas de la presente invención presentan uno o varios de los usos o actividades biológicas (incluyendo las actividades asociadas con los ensayos mencionados aquí) identificados aquí. Usos o actividades descritas para proteínas de la presente invención pueden proporcionarse mediante la administración o uso de tales proteínas o de polinucleótidos que codifican tales proteínas (pr ejemplo, en terapias génicas o vectores adecuados para introducción de ADN) . En mecanismos subyacentes de la condición o patología particular dictará si los polipéptidos |___i_.¿..4—i-eS- -_. ____M,_.¡(tM.1-a(¡|-i_J..l._---i-..-..-. -e" _afct-__--- de la presente invención, los polmucleótidos de la presente invención o moduladores (activadores o inhibidores) de los mismos podrían ser benéficos para el sujeto que requiere de tratamiento. Así, las "composiciones terapéuticas de la 5 presente invención" incluyen composiciones que comprenden polinucleótidos aislados (incluyendo moléculas de ADN recombinante, genes clonados, y variantes degeneradas de los mismos) o bien polipéptidos de la invención (incluyendo proteínas de longitud entera, proteína madura y truncamientos 10 o dominios de los mismos) , o bien compuestos y otras sustancias que modulan la actividad global de los productos génicos objetivo, ya sea a nivel de expresión de gel/proteína objetivo o bien a nivel de la actividad de proteína objetivo. Tales moduladores incluyen polipéptido, análogos (.variantes) , 15 incluyendo fragmentos y proteínas de fusión, anticuerpos y otras proteínas de enlace; compuestos químicos que activan o inhiben directa o indirectamente los polipéptidos de la presente invención (identificados por ejemplo a través de ensayos de tamizado de fármacos de conformidad con lo 20 descrito aquí) ; polinucleótidos de antisentido y polinucleótidos adecuados para formación de triple hélice; y en particular anticuerpos y otros socios de enlace que reconocen específicamente uno o varios epítopos de los polipéptidos de la invención. 25 Los polipéptidos de la presente invención pueden estar involucrados también en activación celular o bien en una de las demás vías fisiológicas descritas aquí. 4.7.1 USOS Y UTILIDADES PARA INVESTIGACIÓN Los polinucleótidos proporcionados por la presente invención 5 pueden ser utilizados por la comunidad investigadora para varios propósitos. Los polinucleótidos pueden ser utilizados para expresar una proteína recombinante para análisis, fl caracterización o bien uso terapéutico; como marcadores APRA tejidos en los cuales la proteína correspondiente es 10 expresada de manera preferencial (ya sea constitutivamente o bien en una etapa particular de diferenciación tisular o desarrollo en estados de enfermedad) ; como marcadores de pesos moleculares en geles; come marcadores o etiquetas (cuando están etiquetados) de cromosoma para identificar 15 cromosomas o bien para mapear posiciones de genes relacionados; para comparar con secuencias de ADN endógeno en pacientes para identificar trastornos genéticos potenciales; como sondas para híbridar y por consiguiente descubrir secuencias novedosas de ADN relacionadas, como fuente de 20 información para derivar cebadores para reacción en cadena de polimerasa para determinación de huella digital genética, como sonda para "restar" secuencias conocidas en el proceso de descubrir otros polinucleótidos novedosos; para seleccionar y preparar oligómeros para fijación sobre un 25 "chip génico" o bien otro soporte, incluyendo para examen de c..---«__.,..,„,___l__,__ «ri__-patrones de expresión; para preparar anticuerpos anti-proteína utilizando técnicas de inmunización de ADN; y como antígeno para incrementar anticuerpos anti-ADN o para provocar otra respuesta inmune. Cuando el polinucleótido codifica una proteína que se une o se unen potencialmfente a otra proteína (por ejemplo, en la interacción receptor-ligando) , el polinucleótido puede también utilizarse en ensayos de trampa de interacción (por ejemplo lo descrito en Gyuris y colaboradores, Cell 75:791-803 (1993)) para identificar polinucleótidos que codifican la otra proteína con la cual ocurre la unión o bien para identificar inhibidores de la interacción de enlace. Los polipéptidos proporcionados por la presente invención pueden ser utilizados de manera similar en ensayos para de terminar la actividad biológica, incluyendo en un panel de proteínas múltiples para tamizado de alta producción, para elevar anticuerpos o para provocar otra respuesta inmune; como reactivo (incluyendo el reactivo marcado) en ensayos diseñados para determinar cuantitativamente niveles de la proteína (o bien su receptor) en fluidos biológicos; como marcadores para tejidos en los cuales el polipeptido correspondiente esta expresado de manera preferente (ya sea constitutivamente o bien en una etapa particular de diferenciación tisular o bien desarrollo o bien en un estado de enfermedad) ; y, evidentemente para aislar receptores o Enzymology: Guide to Molecular Cloning Techniques" [Métodos en enzimología: guía para técnicas de clonación molecular], Academic Press, Berger, S.L. y A. R. Kimmel eds., 1987. 4.7.2 USOS NUTRICIONALES Los polinucleótidos y polipéptidos de la presente invención pueden también utilizarse como fuentes o complementos nutricionales. Tales usos incluyen, sin limitación su uso como complemento de proteína o aminoácidos, su uso como fuente de carbono, su uso como fuente de nitrógeno y su uso como fuente de carbohidratos. En tales casos, el polipéptido o el polinucleótido de la presente invención puede ser agregado a la alimentación de un organismo particular o bien puede ser administrado como preparación sólida o líquida separada, por ejemplo en forma de polvo, pildora, soluciones, suspensiones o cápsulas, En el caso de microorganismos, el polipéptido o polinucleótido de la presente invención puede ser agregado al medio en el cual o sobre el cual se cultiva el microorganismo. Además, los polipéptidos de la presente invención pueden ser utilizados como marcadores, y como complemento alimenticio. Un polipéptido que consiste de SEQ ID NO: 34, por ejemplo, tiene una masa molecular de aproximadamente 50.2 kDa en su estado no procesado y no glicosilado. Complementos de alimentos de proteína son bien conocidos y la formulación de suplementos alimenticios adecuados que incluyen polipéptidos * i ¡__aJit__t_*'____¡--- -___.„- »...._.-—-_..—..-_..^^efcg,^^^ de la presente invención se encuentra dentro del nivel de habilidad de la técnica de preparación de alimentos. 4.7.3 ACTIVIDAD DE PROLIFERACIÓN/DIFERENCIACIÓN DE CÉLULAS Y ClTOCINAS Un polipéptido de la presente invención puede presentar una actividad relacionada con citocina, actividad de proliferación de células (ya sea inducción o inhibición) o bien actividad de diferenciación de células (ya sea inducción o inhibición) , o bien puede inducir la producción de otras citocinas en ciertas poblaciones de células. Un polinucleótido de la presente invención puede codificar un polipéptido que presenta tales atributos. Muchos factores de proteína descubiertos a la fecha, incluyendo todas las citocinas conocidas, han presentado actividad en uno o varios ensayos de proliferación de células dependientes de factor, y por consiguiente los ensayos sirven como confirmación conveniente de actividad de citocina. La actividad de ¡ composiciones terapéuticas de la presente invención es , evidenciada por cualesquiera de numerosos ensayos de proliferación de células dependientes de factores rutinarios para líneas de células, incluyendo, sin limitación, 32D, DA2, DAIG, TÍO, B9, B9/11, BaF3, MC9/G, M+ (pret M+), 2E8, RB5, DAl, 123, T1165, HT2, CTLL2, TF-1, Mo7e, CMK, HUVEC y Caco. Composiciones terapéuticas de la presente invención pueden ser utilizadas en los siguientes ensayos. Í„._.A*_ i--l_..,_- -_-^^ Ensayos para proliferación de células T o timocitos que incluyen sin limitación, los ensayos descritos en: Current Protocols in Immunology [protocolos actuales en Inmunología], Ed por J.E. Coligan, A.M. Kruisbeek. D.H. Margulies, E. M. Shevach. W. Strober. Pub. Greene Publishing Associates and Wiley-Interscience (Capítulo 3, Jn Vitro assays for Mouse Lymphocyte Function [Ensayos in vitro para función linfocitos de ratón] 3.1-3.19; Capítulo 7, I munologic studies in Humans [Estudios inmunológicos en seres humanos] ) ; Takai y colaboradores, J. Immunol. 137:3494-3500, 1986; Bertagnolli y colaboradores, J. Immunol. 145:1706-1712, 1990; Bertagnolli y colaboradores, Cellular Immunology [Inmunolgía celular] 133:327-341, 1991; Bertagnolli, y coiboradores, J. Im unol . 149:3778-3783, 1992; Bowman y colaboradores J. Immunol 152:1756-1761, 1994. Ensayos para la producción de citocinas y/o proliferación de células de bazo, células de nodos limfaticos o bien timocitos incluyen, sin limitación, los ensayos descritos en: Polyclonal T cell stimulation [Estimulación de células T policlonales], Kruisbeek. A. M. y Shevach. E. M. In Current Protocols in Immunology [Protocolos actuales en Inmunología], J. E. e.a. Coligan eds. Vol. 1 pp. 3,12,1-3,12,14 John Wiley and Sons, Toronto, 1994; and Measurement of mouse and human interleukin-? [Medición de interleucina-? de ratón y de ser humano] . Schreiber, R.D. In Current Protocols in Immunology (Protocolos actuales en Inmunología] J.E. e.a. Coligan eds. Vol. 1 pp 6.8.1-6.8.8. John Wiley and Sons, Toronto, 1994. Ensayos para determinar la proliferación y diferenciación de células hematopoyéticas y linfopoyéticas incluyen, sin limitación, los ensayos descritos en: Measurement of Human and Murine Interleukin 2 and Interleukin 4 [Medición de interleucina-2 e interleucina-4 de ser humano y murino] , Bottomly, K. Davis, L. S. y Lipsky, P.E. In Current Protocols in Immunology [Protocolos actuales en Inmunología], J. E. e.a. Coligan eds. Vol. 1 pp. 6.3.1-6.3.12 John Wiley and Sons, Toronto, 1991; deVries y colaboradores J. Exp. Med. 173:1205-1211, 1991; Moreau y colaboradores, Nature 336:690-692, 1988; Greenberger y colaboradores, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 80:2931-2938; Measurement of mouse and human interleukin 6-Nordan. [Medición de interleucina 6 de ratón y ser humano] R. In current protocols in Immunology [Protocolos actuales en Inmunología] J.E. Coligan eds. Vol. 1 pp. 6.6.1-6.6.5. John Wiley and Sons, Toronto, 1991; Smith y colaboradores, Proc. Natl. Aced. Sci. U.S.A. 83:1857-1861, 1986; Measurement of human Interleukin 11 [Medición de interleucina 11 humana], -Bennett, F. Giannotti, J. clark, S.C. y Turner K.J. In Current Protocols in Immunolgy (Protocolos actuales en Inmunología] J.E. Coligan eds. Vol. 1 pp. 6.15.1 John Wiley and Sons, Toronto, 1991; Measurement of mouse and human Interleukin 9 [Medición de inerleucina 9 en ia_j_.-__4J-._tcfK_A.a___. _a__fc_—Mfe-á_.t___?a ratónese y serese humanos] Ciarletta, A. Giannotti, J. Clark, S.C. y Turner, K.J. In Current Protocols in Immunolgy (Protocolos actuales en Inmunología] J. E. Coligan eds. Vol. 1 pp. 6.13.1 John Wiley and Sons, Toronto, 1991. Ensayos para respuestas de clon de células T a antígenos (que identifican, entre otras cosas proteínas que afectan interacciones APC células T así como efectos directos de células T mediante la medición de la proliferación y producción de citocinas) incluyen, sin limitación, los ensayos descritos en: Current Protocols in Immunology [Protocolos actuales en Inmunología] Ed por J. E. Coligan A.

M. Coligan, A. M. Kruisbeek, D. H. Margulies, E. M. Shevach, W. Strober, Pub. Greene Publishing Associates y Wiley- Interscience (Capítulo 3, In Vi tro assays for Mouse Lymphocyte Function [Ensayos in vi tro para función de linfocitos en ratones] ; Capítulo 6, Cytokines and their cellular receptors [Citocinas y sus receptores celulares]; Capítulo 7. Immunologic studies in Humans [Estudios inmunológicos en seres humanos]); Weinberger y colaboradores, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:6091-6095, 1980; Weinberger y colaboradores Eur. J. Immun. 11:405-411, 1981; Takai y colaboradores J. Immunol 137:3494-3500, 1986; Takai y colaboradores J. Immunol. 140:508-512, 1988. 4.7.4 ACTIVIDAD DE FACTOR DE CRECIMIENTO DE CÉLULAS MADRES Un polipéptido de la presente invención puede presentar actividad de factor de crecimiento de células madres y están involucrado en la proliferación, diferenciación y supervivencia de células madres pluripotentes y totipotentes incluyendo células germinales primordiales, células madres embriónicas, células madres hamatopoyéticas y/ células madres de línea germinal. La administración del polípéptido de la I presente invención a células madres in vi tro ? ex vivo puede mantener y ampliar poblaciones de células en un estado totipotencial o pluripotencial lo que sería útil para la reingeniería de tejidos dañados o enfermos, trasplantes, fabricación de biofármacos y el desarrollo de biosensores. La capacidad de producir grandes cantidades de células humanas tiene aplicación de trabajo importantes para la producción de proteínas humanas que deben ser obtenidas actualmente de fuentes no humanas o donadores, implantación de células para tratar enfermedades, por ejemplo, enfermedad de parkinson, enfermedad de Alzheimer y otras enfermedades neurodegenerativas; tejidos para injerto, por ejemplo médula ósea, piel, cartílago, tendones, hueso, músculo (incluyendo el músculo cardiaco), vasos sanguíneos, cornea, células neurales, células gastroinstestinales y otras células; y órganos para trasplante tales como riñon, hígado, páncreas incluyendo células de isletas), corazón y pulmón. Se contempla que múltiples factores de crecimiento exógeno diferentes y/o citocinas pueden ser administrados en aj____._--,É|r_Hl ________ combinación con el polipéptido de la presente invención para lograr el efecto deseado, incluyendo todos los factores de crecimiento listados aquí, otros factores de mantenimiento de células madres, y específicamente incluyendo factor de 5 células madres (SCF), factor inhibidor de leucemia (LIF) , ligando Flt-3 (Flt-3L) , cualesquiera de las interleucinas, receptor de IL-6 soluble recombinante fusionado con IL-6, proteína inflamatoria de macrófagos 1-alfa (MIP-1-alfa) , G- CSF, GM-CSF, trombopoyetina (TPO) , factor plaquetario 4 (PF- 10 4), factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDF), factores de crecimiento neurales así como factor de crecimiento de fibroblasto básico (bFGF) . Puesto que células madres totipotentes pueden proporcionar la • formación de virtualmente cualquier tipo de células maduras, 15 la expansión de estas células en cultivo facilitará la producción de grandes cantidades de células maduras. Técnicas para cultivar células madres son conocidas en la técnica y administración de polipéptidos de la presente invención, opcionalmente con otros factores de crecimiento y/o 20 citocinas, incrementará según se espera la supervivencia y • proliferación de poblaciones de células madres. Esto puede lograrse mediante administración directa del polipéptido de la invención al medio de cultivo. Alternativamente, células estromales transfectadas con un polinucleótido que codifica 25 el polipéptido de la presente invención pueden emplearse como ,.<» «tt__..^_-_^,_— __:-,¿_^ac.. capa de alimentador para las poblaciones de células madres en cultivo o in vivo. Células de soporte estromales para capas de alimentador pueden incluir fibroblastos de médula ósea embriónicos, células estromales de médula ósea, células fetales de hígado, o bien fibroblastos embriónicos cultivados (véase patente norteamericana No. 5,690,926) . Células madres mismas pueden ser transfectadas con un polinucleótido de la invención para inducir la expresión autocrina del polipéptido de la invención. Esto permitirá la generación de líneas de células madres totipotenciales/pluripotenciales no diferenciadas que son útiles per se o bien que pueden ser diferenciadas en los tipos deseados de células maduras. Estas líneas de células estables pueden también servir como fuente de ARNm totipotencial/pluripotencial no diferenciado para crear bibliotecas de ADNc y templados para experimentos de reacción en cadena de polimerasa. Estos estudios permiten el aislamiento y _a identificación de genes expresados de manera diferencial en poblaciones de células madres que regulan la proliferación y/o mantenimiento de células madres. La expansión y mantenimiento de poblaciones de células madres totipotentes será útil en el tratamiento de muchas condiciones patológicas. Por ejemplo, polipéptidos de la presente invención pueden ser pueden ser utilizados para manipular células madres en cultivo para provocar la ._._. »_-iBf-i . _*, ^--.^^jSteaMalii_______._.^_^MMfca formación de células neuroepiteliales que pueden ser utilizadas para incrementar o reemplazar células dañadas por enfermedad, enfermedad autoinmune, daño accidental o trastornos genéticos. El polipéptido de la presente ' invención puede ser útil para inducir la proliferación de ; células neurales y para la regeneración de tejido nervioso y I cerebral, es decir, para el tratamiento de enfermedades del I sistema nervioso central y del sistema nervioso periférico así como neuropatías, y trastornos mecánicos y traumáticos que involucran la degeneración, muerte o trauma de células neurales o tejido nervioso. Además éstas células pueden ser cultivadas in vi tro para formar otras células diferenciadas, como por ejemplo tejido cutáneo que pueden emplearse para trasplante. Las poblaciones ampliadas de células madre pueden también ser genéticamente modificadas para propósitos de terapia génica y para disminuir el rechazo por parte del huésped de tejidos de : reemplazo después de injerto o implante. La expresión del polipéptido de la presente invención y su efecto sobre las células madres pueden ser manipulados con el ' objeto de lograr una diferenciación controlada de las células , madres en tipos de células más diferenciadas. Un método i aplicable ampliamente para obtener poblaciones puras de un tipo de células específicas diferenciadas a partir de poblaciones de células madres no diferenciadas incluye el uso . _.„ A. ______ ÍÍ..-I ?.HfltftjBfl?.1 de un promotor específico para tipo celular que impulsa un marcador seleccionable. El marcador seleccionable permite la supervivencia solamente de las células del tipo deseado. Por ejemplo, células madres pueden ser inducidas para 5 diferenciarse en cardiomiocitos (Wobus y colaboradores, Diferentiation [Diferenciación] 48:173-182 (1991); Klug y colaboradores, J. Clin. Invest. 98 (1) :216-224, (1998)) o bien FF células de músculo esqueletal (Browder, L. W. en: Principies of Tissue Engineering eds. [Principios de Ingeniería Tisular] 10 Lanza y colaboradores, Academic Press (1997)). Alternativamente, una diferenciación dirigida de células madres puede lograrse mediante el cultivo de las células madres en presencia de un factor de diferenciación como por • ejemplo ácido retinoico y un antagonista del polipéptido de 15 la invención que inhibiría los efectos de actividad endógena de factor de células madres y permitiría el avance de la diferenciación. Cultivos in vi tro de células madres pueden emplearse para determinar si el polipéptido de la presente invención 20 presenta una actividad de factor de crecimiento de células madres. Células madres son aisladas de cualesquiera de varias fuentes de células (incluyendo células madre hematopoyéticas y células madre embriónicas y cultivadas en una capa de alimentador de conformidad con lo descrito por 25 Thompson y colaboradores, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. ,92: I ?..á.i eeHiryi _ J____L......... 7844-7848 (1995) . En presencia del polipéptido de la presente invención solo o en combinación con otros factores de crecimiento o citocinas. La capacidad del polipéptido de la presente invención para inducir la proliferación de células madres es determinada por la formación de colonias en soporte semisólido, por ejemplo, de conformidad con lo descrito por Berntein y colaboradores, Blood [Sangre] 77:2316-2321 (1991). 4.7.5 ACTIVIDAD REGULADORA DE LA HEMATOPOYESIS Un polipéptido de la presente invención puede estar involucrado en la regulación de la hematopoyesis y. por consiguiente en el tratamiento de trastornos de células mieloides o linfoides. Una actividad biológica aún marginal en soporte de células formadoras de colonias o de líneas de pendientes de factor maica participación en la hematopoyesis reguladora, por ejemplo, en el soporte del crecimiento y de la proliferación de células progenitoras heptroides solas o en combinación con otras citocinas, indicando de esta forma utilidad en el tratamiento de varias anemias o bien para su uso en combinación con irradiación / quimioterapia para estimular la producción de precursores de heritroides y/o células heritroides; en el soporte del crecimiento y prolifreración de células mieloides tales como granulositos y monocitos / macrófagos (es decir actividad de factor de estimulación de colonias tradicional) útiles, por ejemplo, en combinación con quimioterapia para prevenir o tratar una i«___.a.i-t *4»f-»... ___._- ________________ ..^^.^ _.__,!_...,_.,.»_;_i__.^ mielosupresión consiguiente; en el soporte del crecimiento y de la proliferación de megacariocitos y por consiguiente de plaquetas permitiendo así la prevención o el tratamiento de varios trastornos plaquetarios tales como trombocitopenia y en general para su uso en lugar de transfusiones de plaquetas o como complemento a la transfusión de plaquetas; y/o para soportar el crecimiento y la proliferación de células madres hematopoyéticas que son capaces de madurar en todas y cada una de las células hemtopoyéticas mencionadas arriba y por consiguiente encontrar utilidad terapéutica en varios trastornos de células madres (tales como los trastornos habitualmente tratados con transplante, incluyendo, sin limitación, anemia aplásica y hemoglobinuria nocturna paroxismal), así como en la repoblación del compartimiento de células madre después de irradiación/quimioterapia, ya sea In vivo o ex vivo (es decir, en combinación con transplante de médula ósea o con transplate de células progenitoras periféricas (homologas o heterólogas) ) así como células normales o genéticamente manipuladas para terapia génica. Composiciones terapéuticas de la presente invención pueden emplearse en los siguientes ensayos. Ensayos adecuados para la proliferación y diferenciación de varias líneas hematopoyéticas se mencionan arriba. Ensayos para diferenciación de células madres embriónicas (que identifican, entre otras, proteínas que influencian la ._,.___.__¿_j__-_f--_-»--.- _^a_---_&<_-<^-^^-'» hematopoyesis de diferenciación embriónica) incluyen, sin limitación, los descritos en: Johansson y colaboradores, Cellular Biology [Biología Celular] 15: 141-151, 1995: Kéller y colaboradores, Molecular and Cellular Biology [Biología Molecular y Celular] 13: 473-486, 1993; McClanahan y colaboradores, Blood [Sangre] 81: 2903-2915 1993. Ensayos para supervivencia diferenciación de células madres (que identifican, entre otras proteínas que regulan la linfohematopoyesis) incluyen sin limitación los descritos en: Methyl Cellulose colony forming esasays, [Ensayos de formación de colonias en Metilcelulosa] Freshney, M.G. In Culture of Hematopoietic Cells. [Cultivo de células hematopoyéticas], R. I. Freshney, y colaboradores Vol pp. 265-268, Wiley-liss. Inc. New York, N.Y. 1994; Hiraya a y colaboradores, Proc. Natl. Acad. Sci USA 89: 5907-5911 1992; Primitive hematopoietic Colony forming Cells with high proliferative potencial, [Células formadoras de colonias hematopoyéticas primitivas con alto potencial de proliferación] McNice I.K. y Bridell, R. A. In Culture of Hematopoietic Cells. [Cultivo de Células Hematopoyéticas] . I. Freshney y colaboradores Vol pp 23-39, 1994; Wiley-Liss, Inc, Nueva York, N.Y. 1994; Neben y colaboradores Experimental Hematology [Hematología Experimental] 22:353-359, 1994; Cobblestone área froming cell assay. [Ensayo de células formadoras de áreas Coblestone] Ploemacher, R.E. In Culture of Hematopoietic Cells. [Cultivo de Células Hematopoyéticas]R. I. Freshney y colaboradores vol pp. 1-21, Wiley-Liss, Inc. Nueva York, N.Y. 1994; Long therm bone marrow cultures in the presence of stromal cells, [Cultivos de médula ósea de largo plazo en presencia de células estromales], Spoonser. E. Dsexter. M. y Alien T. In Culture of Hematopoietic Cells [Cultivo de Células Hematopoyéticas] R.I. Freshney y colaboradores Vol pp. 163-179. Wiley-Liss, Inc, Nueva York, N.Y. 1994; Long term culture initiating cell assay, [Ensayo de células iniciadoras de cultivo de largo plazo], Sutherland, H. J. In Culture of Hematopoietic Cells. [Cultivo de células hematopoyéticas] R.I. Fresheny, y colaboradores eds. Vol pp, 139-162. Wiley-Liss, Inc, Nueva York, N.Y. 1994. 4.7.6 ACTIVIDAD DE CRECIMIENTO TISULAR Un polipéptido de la presente invención puede también estar involucrado en el crecimiento o regeneración de hueso, cartílago, tendón, ligamento y/o tejido nervioso así como en curado de heridas y reparación y reemplazo de tejido y en el curado de quemaduras, cortes y úlceras. Un polipéptido de la presente invención que induce el crecimiento de cartílago y/o hueso en circunstancias en las cuales el hueso normalmente no se forma, tiene aplicación en el curado de fracturas óseas y daño al cartílago o defectos en seres humanos y otros animales. Composiciones de un polipéptido, anticuerpo, socio de enlace o bien otros moduladores de la presente invención pueden tener un uso profiláctico en la reducción de fractura cerrada así como en la reducción de fractura abierta y también en la fijación mejorada de articulaciones artificiales. La formación de nuevos de hueso inducido por un agente osteogénico contribuye a la reparación de resección congenital inducida por trauma o bien oncológica de defectos craneofaciales inducidos, y también es útil en cirugía plástica cosmética. Un polipéptido de esta invención puede también estar involucrado en atraer células formadoras de huesos, estimulación del crecimiento de las células formadoras de hueso o bien inducción de la diferenciación de progenitores de células formadoras de huesos. El tratamiento de la osteoporosis, osteoartritis, trastornos degenerativos de los huesos, o bien enfermedad periodontal, por ejemplo a través de la estimulación de la reparación de hueso y/o cartílago o mediante el bloqueo de la inflamación o de procesos de destrucción de tejido (actividad colagenasa, actividad de osteoplasto, etc.) mediada por procesos inflamatorios pueden también ser posibles utilizando la composición de la presente invención. Otra categoría de actividad de regeneración tisular que puede involucrar el polipéptido de la presente invención es la formación de tendón llamado ligamento. La inducción de tejido de tipo tendón llamado ligamento o bien la formación de otros tejidos en circunstancias en las cuales dicho tejido no es normalmente formado, tiene aplicación en la curación de rupturas de tendón o ligamento, malformaciones o bien otros 5 defectos de tendón o ligamento en seres humano y otros animales. Dicha preparación requiere emplear una proteína que induce tejido de tipo tendón / ligamento o puede tener uso .áF. profiláctico para prevenir daño a tejido de tendón o ligamento, así como uso en la fijación mejorada de tendón o 10 ligamento sobre hueso o bien otros tejidos, y en la reparación de defectos tejido de tendón o ligamento. La formación de nuevos de tejido de tipo tendón / ligamento inducido por una composición de la presente invención contribuye a la reparación de defectos congenítales, 15 inducidos por trauma o bien otros defectos de tendón o ligamento de otro origen y es también útil en cirugía plástica cosmética para la fijación o reparación de tendones o ligamentos. Las composiciones de la presente invención pueden proporcionar entorno para atraer células formadoras de 20 tendón o ligamento, estimular el crecimiento de células • formadoras de tendón o ligamento, inducir la diferenciación de progenitores de células formadoras de tendón o ligamento, o bien inducir el crecimiento de células de tendón / ligamento o progenitores ex vivo para retorno In vivo para 25 efectuar reparación de tejido. Las composiciones de la presente invención pueden también ser útiles en eí tratamiento de la tendinitis, síndrome de túnel de Carpió y otros defectos de tendón o ligamento. Las composiciones pueden también incluir una matriz apropiada y/o agente de 5 secuestro como vehículo como se sabe en la técnica. Las composiciones de la presente invención pueden también ser útiles para la proliferación de células neurales y para la A) regeneración de tejido nervioso y cerebral, es decir, para el tratamiento de enfermedades del sistema nervioso central y 10 del sistema nervioso periférico y neuropatías, así como trastornos mecánicos y traumáticos que involucran la degeneración, muerte o trauma de células neurales o tejido nervios. Más específicamente, una composición puede ser utilizada en el tratamiento de enfermedades del sistema 15 nervioso periférico, como por ejemplo lesiones anerviosperiféricos, neuropatía periférica y neuropatías localizadas, y enfermedades del sistema nervioso central, por ejemplo la enfermedad de Alz Heimer, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, esclerosis lateral amiotrófica y 20 síndrome de Shy-Drager. Condiciones adicionales que pueden • ser tratadas con la presente invención incluyen trastornos mecánicos y traumáticos, por ejemplo trastornos de la médula ósea, enfermedades cerebro musculares tales como apoplejía y trauma en la cabeza. 25 Neuropatías periféricas que resultan de quimioterapia o bien te_-s» _a__-_-aÉ-a-a-i_-_-i-lfc-„_i_aiÉ__u-_r-i *_«?_f"iíi"i- -,- «-.-fr_t...r„ _._•_--____-__-__---____-_-_ de otras terapias médicas pueden ser también tratables utilizando una composición de la invención. Composiciones de la presente invención pueden también ser útiles para promover un cierre mejor y rápido de heridas que 5 no sanan incluyendo sin imitación ulceras de presión, úlceras asociadas con insuficiencia bascular, heridas quirúrgicas traumáticas, y similares. ff Composiciones de la presente invención pueden también estar involucradas en la generación o regeneración de otros tejidos 10 tales como órganos (incluyendo, por ejemplo páncreas, hígado, intestino, riñon, piel, endotelios) , músculo, (liso, esqueletal o cardiaco) y tejido bascular (incluyendo endotelio bascular) , o bien para la promoción del crecimiento de células que comprenden tales tejidos. Parte de los efectos 15 deseados pueden ser por inhibición o por modulación de cicatriz fibrótica, puede permitir la regeneración de tejido normal. Un polipéptido de la presente invención puede también presentar una actividad angiogénica. Una composición de la presente invención puede también ser 20 útil para protección o regeneración intestinal y para el tratamiento de fibrosis pulmonar o hepático, lesión de repercusión en varios tejidos, y condiciones que resultan de un daño a citocinas sistémicas. Una composición de la presente invención puede también ser 25 útil para promover o inhibir la diferenciación de tejidos de ..._^.__-.e.t_...e_ _.,ic._Í;^., ___. -«-f-jBjJTÍ___?__> _j___i_r_f_¡ conformidad con lo descrito arriba a partir de tejidos precursores o células precursoras; o bien para inhibir el crecimiento de tejidos de conformidad con lo descrito arriba. Composiciones terapéuticas de la presente invención pueden 5. ser utilizadas en los siguientes ensayos. Ensayos para actividad de generación de tejido incluyen, sin limitación, los ensayos descritos en: publicación Internacional de patente No. WO95/16035 (hueso, cartílago, • tendón) Publicación internacional de Patentes No. W095/15846 10 (nervio, neuronas) ; Publicación de Patente Internacional No. WO91/07491 (piel, endotelio) . Ensayos para la actividad de curación de heridas incluyen, sin limitación, los ensayos descritos en: Winter. Epidemial • Wound Kealing. [Curación de Heridas Epidérmicas] pp71-102 15 (Maibach. H.I. y Rovee, D.T., eds) Year Book Medical Publishers, Inc. Chicago, de conformidad con lo modificado por Eaglestein y Mertz J. Invest. Dermatol. 741: 382-384 (1978). 4.7.7.ACTIVIDAD ESTIMULADORA 0 SUPRESORA DE LA FUNCIÓN INMUNE 20 Un polipéptido de la presente invención puede también presentar una actividad de estimulación o supresión de la función inmune, incluyendo sin limitación, las actividades para las cuales se describen ensayos aquí. Un polinucléotido de la presente invención puedes codificar un polipéptido que 25 muestra dichas actividades. Una proteína puede ser útil en i ?fr tjr.frÍT frea** ___-_.-_-fc--'.»^^itr--c-_--^gg ¡ tl_i el tratamiento de varias insuficiencias o trastornos inmunes (incluyendo) inmunodeficiencia combinada severa (SCID) ) , por ejemplo, en la regulación (ascendente o descendente del crecimiento y proliferación de linfocitos T y/o B así como 5 para efectuar la actividad citolítica de células NK y otras poblaciones de células. Estas deficiencias inmunes pueden I ser genéticas o provocadas por infecciones Virales como VIH (sida), así como infecciones bacterianas o fúngales, o bien • pueden resultar de trastornos autoinmunes. Más e 10 específicamente, enfermedades infecciosas provocadas por infección viral, bacteriana, o fungal o de otro tipo pueden ser tratadas empleando una proteína de la presente invención, incluyendo infecciones el VIH, Virus de Hepatitis, Virus de • herpes, micobacterias, Leishmania spp, malaria spp, y varias 15 infecciones fúngales tales como candidiasis. Evidentemente, en cuanto a este aspecto proteínas de la presente invención pueden ser útiles cuando puede ser deseable un refuerzo del sistema inmune, en general, por ejemplo en el tratamiento d del cáncer. 20 Trastornos autoinmunes que pueden ser tratados empleando una proteína de la presente invención, incluyen, por ejemplo: enfermedad de tejido conectivo, esclerosis múltiple, lupus eritematosos sistémico, artritis reumatoide, inflamación pulmonar autoinmune, síndrome de Guillanin-Barre, tiroiditis 25 autoinmune, diabetes mielitis dependiente de insulina, ____i_______i_i--^j-^-*4-*^- •**A*C-_.„,_.„__.-_---_____6'- ..-_.. -._^..,«.».-.-- -----_- c ...._»_^<i¡1*4ie}..i miastenia gravis, enfermedad de injerto, versus huésped, así como enfermedad ocular inflamatoria autoinmune. Dicha proteína (o bien antagonistas de la misma, incluyendo anticuerpos) de la presente invención puede también ser útil en el tratamiento de reacciones alérgicas y condiciones alérgicas (por ejemplo, anafilaxis, enfermedad sérica, reacciones farmacológicas, alergias a los alimentos, alergias a veneno de insecto, mastositosis, rinitis alérgica, neumonitis de hipersensibilidad, urticaria, angioedema, exe a, dermatitis atópica, dermatitis de contacto alérgica, eritema multiforme, síndrome de Stevens-Jhonson, conjuntivitis alérgica, queratoconjuntivitis alérgica, queratoconjuntivitis atópica, quertoconjuntivitis venérea, conjuntivitis papilar gigante así como alergias de contacto) , por ejemplo asma (particularmente asma alérgico) o bien otros problemas respiratorios. Otras condiciones en las cuales se desea una supresión inmune (incluyendo por ejemplo, trasplante de órganos), pueden también ser tratadas empleando una proteína (o bien antagonistas de la misma) de la presente invención. Los efectos terapéuticos de los polipéptidos o antagonistas de los mismos sobre reacciones alérgicas pueden ser evaluados por modelos de animales in vivo tales como la prueba de incremento de contacto acumulado ( Lastbom y colaboradores, Toxicology [toxicología] 125: 59-66, 1998) prueba de pinchazo de la piel (Hoffman y colaboradores Allegy [Alergia] 54:446-54, 1999), prueba de sensibilización de piel de conejillo de la india (Vohr y colaboradores Are. Toxocol. 73: 501-9), y ensayo de nodo linfático local de murino (Kimber y colaboradores J. toxicol. Enviroment Health 53: 563-79) . Empleando las proteínas de la presente invención puede ser posible también modula respuestas inmunes de varias maneras. La regulación descendente puede tener la forma de la inhibición o del bloqueo de una respuesta inmune ya en i progreso o bien podría involucrar la prevención de la inducción de una respuesta inmune. Las funciones de células T activadas pueden ser inhibidas por la supresión de respuestas de célula T o bien por la inducción de tolerancia específica en células T o bien ambas cosas. La inmunosupresión de respuestas de célula T es generalmente un proceso activo no específico para antígeno qu | requiere de una exposición continua de las células T al I agente supresor. La tolerancia, que incluye la inducción de ausencia de respuesta o energía en células T se distingue de la inmuno supresión en la medida en que es generalmente específica para antígenos y persiste después de la suspensión , de la exposición al agente de fomento de la tolerancia.

I Opcionalmente, la tolerancia puede ser demostrada por la falta de una respuesta de células T al efectuarse una reexposición a antígeno específico en ausencia del agente de t_4._c._- * fcjj?tff?• *- fe*c__ »-.t__,^.,J__t»____^)______t^,..,.._,_____.___«•«--*...*M_-^MtA--——__—Mt_a.__É—B*?tJ fomento de tolerancia. La regulación descendente o la prevención de uno o varios de antígeno (incluyendo sin limitación funciones de antígeno de linfocito B (por ejemplo B7)), por ejemplo, la prevención de alto nivel de síntesis de lifocitas por células T activadas, es útil en situaciones de transplante de tejido, piel y órgano y en enfermedad de injerto de sus huésped (GVHD) . Por ejemplo, el bloqueo de la función de células T puede resultar en una destrucción reducida de tejido en trasplante de tejido. Típicamente, en transplantes de tejido, el rechazo es iniciado a través de su reconocimiento como foráneo por células T, seguido por una reacción inmune que destruye el transplante. La administración de una composición terapéutica de al presente invención puede prevenir la síntesis de citocina por células inmunes, por ejemplo células T y por consiguiente actúa como un inmunosupresor. Además, una falta de coestimulación puede también ser suficiente para energizar las células T induciendo por consiguiente tolerancia en un sujeto. La inducción de tolerancia a largo plazo por reactivos que bloquean antígenos de linfocitos B puede evitar la necesidad de una administración repetida de estos reactivos de bloqueo. Para lograr una inmunosupresi?n suficiente o una tolerancia suficiente en un sujeto, puede ser también necesario bloquear la función de una combinación de antígenos de sus linfocitos B. . _-_.-,.___.aM ___MÍ»e '^--*'*--"- -"•--La eficacia de composiciones terapéuticos particulares para prevenir le rechazo de transplante de órgano o GVHD puede ser evaluada empleando modelos de animales que son predictivos de la eficacia en seres humanos. Ejemplos de sistemas apropiados que pueden ser utilizados incluyen injertos cardiacos alogeneícos en ratas e injertos de células de isletas pancreáticas senogeneicas en ratones, ambos han sido utilizados para examinar los efectos inmunosupresores de proteínas de fusión CTLA4Ig in vivo de conformidad con lo descrito en Lenschow y colaboradores, Sience 257: 789-792(1992) y Turka y colaboradores, Proc. Natl. Acad. Sci Usa. 89:11102-11105 (1992) Además, modeles de Murino de GVHD (véase Paul ed, Fundamental I ianology [Inmunología Fundamental] Raven Press, Nueva York, N.Y. 1989. pp 846-847) pueden utilizarse para determinar el efecto de composiciones terapéuticas de la presente invención sobre el desarrollo de esta enfermedad. El bloqueo de la función de antígeno puede también ser terapéuticamente útil para el tratamiento de enfermedades autoinmunes. Muchos trastornos autoinmunes son el resultado' de una activación inapropiada de células T que reaccionan contra el tejido mismo y que promueven la producción de citocinas y autoanticuerpos involucrados en la patología de las enfermedades. La prevención de la activación de células T autoreactivas puede reducir o eliminar síntomas de l_____._.____^.*-_----_- -V-enfermedad. La administración de reactivos que bloquean la activación de células T puede emplearse para prevenir la producción de autoanticuerpos o citocinas derivadas de células T qµe pueden estar involucradas en el proceso de enfermedad. Además reactivos de bloqueo pueden inducir tolerancia específica para antígeno de células T autoreactivas lo que podría provocar un alivio de largo plazo de la enfermedad. La eficacia de reactivos de bloqueo para prevenir o mitigar trastornos autoinmunes puede ser determinada utilizando numerosos modelos de animales bien caracterizados de enfermedades autoinmunes humanas. Ejemplos incluyen encefalitis autoinmune experimental de Murino, lupus eritematoso sistémico en ratones MRL/lpr/lpr o bien ratones híbridos NZB, artritis de colágena autoinmune de murino, diabetes melitus en ratones NOD y ratas BB y miastenia gravis experimental en Murinos (véase Paul ed. Fundamental Im unology [Inmunología Fundamental], Raven Press Nueva York, N.Y.pp 84-856) . La regulación ascendente de una función de antígeno (por ejemplo, una función de antígeno de linfocito B) como medio para regular de manera ascendente respuestas inmunes, puede ser útil también en terapia. La regulación ascendente de respuestas inmunes puede tomar la forma del incremento de una respuesta inmune existente o provocar una respuesta inmune inicial. Por ejemplo, el incremento de una respuesta inmune tá- -fe ,--^,.^ puede ser util en casos infección viral, incluyendo enfermedades virales sistémicas tales como influenza, resfriado común y encefalitis. Alternativamente, respuestas inmunes antivirales pueden ser realzadas en un paciente infectado mediante la remoción de células T del paciente, mediante la coestimulación de las células T in vi tro con APC pulsadas por antígeno viral que expresan ya sea un péptido de la presente invención o bien junto con la forma estimuladora de un péptido soluble de la presente invención y reintroduciendo las células T activadas y in vi tro en el paciente. Otro método para incrementar respuestas inmunes antivirales sería aislar células infectadas de un paciente, transfectarlas con un ácido nucleico que codifique la proteína de la presente invención de conformidad con lo descrito aquí de tal manera que las células expresen la totalidad o una parte de la proteína en su superficie, y reintroducir las células transfectadas en el paciente. Las células infectadas podrían entonces suministrar una señal coestimuladora a délulas in vivo y de ésta forma activarlas. Un polipéptido de la presente invención puede proporcionar la señal de estimulación necesaria a las células T para inducir un respuesta inmune mediada por células T contra las células tumorales transfectadas. Además, células tumorales que no tienen moléculas MHC clase I o MHC clase II, o bien que no i_—._,,_-*» .-¿_t_?,^____. reexpresan cantidades suficientes de moléculas de MHC clase I o MHC clase II, pueden ser transfectadas con ácido nucleico que codifique la totalidad o una parte (por ejemplo, una porción truncada del dominio citoplásmico) de una proteína de cadena a de MHC clase I y proteína de Microglobulina ß2 o bien una proteína de cadena a de MHC clase II y una proteína de cadena ß de MHC clase II para expresar de esta forma proteínas de MHC clase I o MHC clase II en la superficie de la célula. La expresión de MHC clase I o clase II apropiada en combinación con un péptido que tiene la actividad de un antígeno de lifosito B (por ejemplo B7-l,B7-2,B7-3) induce una respuesta inmune mediada por células T contra las célula tumoral transfectada. Opcionalmente un gen que codifica un constructo de anitsentido que bloquea la expresión de una proteína asociada con MHC clase II, como por ejemplo la cadena invariante, puede tener cotransfectado con un ADN que codifique un péptido que tiene la actividad de un antígeno de linfocito B par promover la presentación de antígenos asociados con tumor y para inducir inmunidad específica contra tumor. Así, la inducción de una respuesta inmune mediada por células T en un sujeto humano puede ser suficiente par superar la tolerancia específica para tumor en el sujeto. La actividad de una proteína de la presente invención puede, entre otros medios medirse a través de los siguientes métodos. f.i¿i_•_. _k_t^A*t_fe.______. ,__,.__,,_.A__._c^.____._,_ .___^¿„_..-,_t.ccJ^»._.>.._^.l««c.,^cl^-p..-.

Ensayos adecuados para citotoxisidad de timosito o estenocito en incluyen, sin limitación los ensayos descritos en Current Protocols in I munolgy [Protocolos Actuales en Inmunología], Ed. por J.E. Coligan, A.M. Kruisbeek. D. H. Margulies. E. M Shevach, W. ¡Stober. Pub. Greene Publishing Associates y Wiley-Interscience (Capítulo 3, In vitro assays for Mouse Lympocyte Function [Ensayos in vi tro para función de linfocitos de ratón] 3.1-3.19; Capítulo 7. Immunologic studies in Humans [Estudios inmunológicos en Humanos] ) : Herrmann y colaboradores, Proc. Natl. Acad. Sci USA 78: 2488-2492. 1981: Herrmann y colaboradores, J. Immunol. 128: 1968-1974, 1982; Handa y colaboradores, J Im unol. 135: 1564-15"?2. 1985; Takai y colaboradores, I. Im unol. 137: 3494-3500, 1986; Takai y colaboradores, J. Im unol. 140: 508-512. 1988; Bowman y colaboradores, J. Virology 61: 1992-1998; Bertagnolli y colaboradores, Cellular Immunology [Inmunología Celular] 133: 327-341, 1991; Brown y colaboradores, J. Immunol. 153: 3079-3092. 1994. Ensayos para respuestas de inmunoglobina dependiente de células T y cambio de isotipos (que identifican entre otras cosas, proteínas que modulan respuestas de anticuerpo que dependen de células T y que afectan perfiles Thl/Th2 incluyen, sin limitación los ensayos descritos en: Maliszewski. J. Immunol. 144: 3028-3033, 1990; y ensayos para función de células B: I in vi tro antibody production .._...„,__...,._,,v._,._^..c ,^._?.__._^ -ttfrj [Producción de anticuerpos in vi tro] , Mond. J.J. y Brunswick. M. In Currents Protocols in Immunology. [Protocolos Actuales en Inmunología] J.E. e.a Coligan eds. vol 1 pp.3.8.1-3.8.16. John Wiley e hijos, Toronto.1994. 5 Ensayos de reacción de linfocitos mixtos (MLR) (que identifican entre otras cosas proteínas que generan predominantemente respuestas Thl y CTL) incluyen sin 4fc limitación los ensayos descritos en: Current Protocols in Immunology, [Protocolos Actuales en Inmunología] ed por J. E. 10 Coligan, A. M Druisbeek, D. Hmargulies, E. M. Shevach, W. Strober, Pub. Greene Publishing Associates y Wiley- Interscience (Capítulo 3, Jn Vi tro Assays for Mouse Lymphocyte Function [Ensayos in vi tro para función de • linfocitos de ratón] 3.1-3.19; Capítulo 7, Immunologic 15 studies in Humans [Estudios inmunológicos en Humanos]); Takai y colaboradores, J. Immunol. 137: 3494-3500. 1986; Takai y colaboradores, J. Immunol. 140: 508-512. 1988; Bertagnolli y colaboradores, J. Immunol. 149: 3778-3783. 1992. Ensayos dependientes de células dendríticas (que identifican, 20 entre otras cosas, proteínas expresadas por células • dendríticas que activan células T naive) incluyen, sin limitarse a ellos, los ensayos descritos en: Guery y colaboradores, J. Immunol 134: 536-544, 1995; Inaba y colaboradores, Journal of Experimental Medicine 173: 549- 25 559.1991; Macatonia y colaboradores, Journal of Immunology 154: 5071-5079, 1995; Porgadore y colaboradores, Journal of Experimental Medicine 182: 255-260; Nair y colaboradores, Journal of Virology 67: 4062-4069, 1993;; Huang y colaboradores, Science 264: 961-965. 1994: Macatonia y colaboradores, Journal of Experimental Medicine 169: 1255- 1264, 1989; Bhardwaj y colaboradores, Journal of Clinical Investigation 94: 797-807. 1994; e Inaba y colabordores. Journal of Experimental Medicine 172: 631-640. 1990. Ensayos para supervivencia/apóptosis de la imfocitos (que identifican entre otros elementos, proteínas que previenen la apóptosis después de inducción de superantígeno y proteínas que regulan la homeostasis de linfocitos) incluyen sin limitación los ensayos descritos en: Darzynkiewicz y colaboradores, Cytometry 13: 795-808. 1992; Gorczyca y colaboradores, Leukemia 7: 659-670. 1993; Groczyca y colaboradores, Cáncer Research. 53: 1945-1951. 1993; Itho y colaboradores, Cell 66: 233-243. 1991: Zacharchuk, Journal of Immunology 145: 4037-4045, 1990 Zamai y colabordores Cytometry 14:14:891-897, 1993: Gorczyca y colaboradores, International Jorunal of Oncology 1: 639-648, 1992. Ensayos para proteínas que influencian pasos iniciales de de dedicación y desarrollo de células T incluyen, sin limitación, los ensayos descritos en: Antinca y colaboradores, Blood 84: 111-117, 1994; Fine y colaboradores Cellular Immunology 155: 111-122, 1994; Galy y colaboradores, Blood 85: 2770-2778. 1995; Toki y colaboradores, Proc. Nat. Acad. Sci USA 88: 7548-7551. 1991. 4.7.8 ACTIVIDAD QUIMIOTÁCTICA/QUIMIOCINÉTICA Un polipéptido de la presente invención puede estar involucrado en actividad quimiotáctica o quimiocinética para células de mamíferos, incluyendo, por ejemplo monocítos, fibroblastos, neutrófilos, células T, Mastocitos, eosinófílos, células epiteliales y/o endoteliales. Un polinucleótido de la presente invención puede codificar un polipéptido que presenta tales atributos. La activación quimiotactica y quimiocinética de receptores pueden utilizarse para movilizar o atraer una población deseada de células a una sitio de acción deseado. Composiciones quimiotácticas y quimiocinética (por ejemplo, proteínas, anticuerpos, socios de enlace o bien moduladores de la invención) proporcionan ventajas particulares en el tratamiento de heridas y otros traumas a tejidos, así como en el tratamiento de infecciones localizadas. Por ejemplo, la atracción de linfocitos o monocitos o neutrófilos hacia tumores o sitios de infección puede resultar en respuestas inmunes mejoradas contra el tumor o contra el agente infeccioso. Una proteína o péptido tiene actividad quimiotáctica para una población de células particular si puede estimular directa o indirectamente la orientación dirigida o el movimiento de tal ,___p*___ „_—.. población de células. De preferencia, la proteína o el péptido tiene la capacidad de estimular directamente el movimiento dirigido de células. Si una proteína particular tiene una actividad qui iotacitica para una población de células puede ser determinado fácilmente mediante el empleo de dicha proteína o péptido en cualquier ensayo conocido para quimiotaxis celular. Composiciones terapéuticas de la presente invención pueden ser utilizadas en los siguientes ensayos. Ensayos para la actividad quimiotáctica (que identifican proteínas que induce o previenen la quimiotaxis) consisten de ensayos que miden la capacidad de una proteína para inducir la migración de células a través de una membrana celular así como la capacidad de la proteína para inducir la adhesión de una población de células sobre otra población de células. Ensayos adecuados para movimiento y adhesión incluyen, sin limitación los ensayos descritos en: Curte Protocols in Immunology. [Protocolos Actuales en Inmunología], Ed. por J.E. Coligan. A. M Kruisbeek. D.H. Marguiles. E. M Shevac. W. Strober. Pub. Greene Publishig Associates y Wiley-Interscience (Capítulo 6.12. Measurement of alpha and beta Chemokines [Medición de alfa y beta Quimiocinas] 6.12.1-6.12.28; Taub y colaboradores, J. Clin. Invest. 95: 1370-1376, 1995; Lind y colaboradores APMIS 103:140-146, 1995; Muller y colaboradores Eur. J. Inmuno1. 25: 1744-1748: Gruber H "tt-*H-rtfff" __i___l__g_____________ y colaboradores, J de Immunol. 152:5860-5867, 1994: Johnston y colaboradores, J. de Immunol. 153: 1762-1768. 1994. 4.7.9 ACTIVIDAD HEMOSTÁTICA Y TROBOLÍTICA Un polipéptido de la presente invención puede estar también estar involucrado en hemostasis o trombolisis o trombosis. Un polinucleótido de la presente invención puede codificar un polipéptido que muestra dichos atributos. Composiciones pueden ser útiles en el tratamiento de varios trastornos de la coagulación (incluyendo trastornos hereditarios, por ejemplo, hemofilias) o bien para incrementar la coagulación y otros eventos hemostáticos en el tratamiento de heridos que resultan de trauma, intervención quirúrgica o bien otras causas. Una composición de la invención puede también ser útil para disolver o inhibir la formación de trombosis y para el tratamiento y la prevención de condiciones que resultan de ellas (por ejemplo infarto de vasos cardiacos y del sistema be la presente invención pueden ser utilizadas en los siguientes ensayos. Ensayo de actividad hemostática y trombolítica incluyendo, sin limitación los ensayos descritos en Linet y colaboradores J. Clin. Pharmacol. 26:131-140, 1986; Burdick y colaboradores Trombosis Res. 45:413-419, 1987; Humphrey y colaboradores Fibrinolysis 5:71-79 (1991); Schaub, Prostaglandins 35:467-474, 1988. 4.7.10 DIAGNÓSTICO Y TERAPIA DEL CÁNCER polipéptidos de la presente invención pueden estar involucrados en generación, proliferación o metástasis de células cancerosas. La detección de la presencia o cantidad de polinucleótidos o polipéptido de la presente invención puede ser útil' para el diagnóstico y/o pronóstico de uno o varios tipos de cáncer. Por ejemplo, la presencia o la expresión incrementada de un polinucleótido/polipéptido de la presente invención puede indicar un riesgo hereditario de cáncer, una condición precancerosa, o bien una malignidad en curso. A la inversa, un defecto en el gen o la ausencia del polipéptido puede estar asociado con una condición cancerosa. La identificación de polimorfismos de nucleótidos individuales asociados con cáncer o con una predisposición al cáncer puede también ser útil para diagnóstico o pronostico. Los tratamientos del cáncer promueven la regresión del tumor mediante la inhibición de la proliferación de las células tumorales, la inhibición de la angiogénesis (crecimiento de nuevos vasos sanguíneos necesarios para soportar el crecimiento del tumor) y/o prohibiendo metástasis mediante la reducción de la movilidad o capacidad de invasión de las células tumorales. Composiciones terapéuticas de la presente invención pueden ser efectivas en oncología en adultos y niños, incluyendo tumores/malignidades de fases sólida, tumores localmente avanzados, sarcomas de tejidos blandos fr?_ -._.--T f"» --* humanos, cáncer metastásico, incluyendo metástasis linfáticas, malignidades de células sanguíneas incluyendo mieloma múltiple, leucemias agudas y crónicas, y linfomas, cánceres de cabeza y cuello incluyendo cáncer de la boca, 5' cáncer de la laringe y cáncer de las tiroides, cánceres I pulmonares incluyendo carcinoma de células pequeñas y j cánceres de células no pequeñas, cánceres mamarios incluyendo carcinoma de células pequeñas y carcinoma ductal, cánceres gastrointestinales, incluyendo cáncer esofágico, cáncer de 10 estomago, cáncer de colon, cáncer colorectal y pólipos asociados con nreoplasia colorectal, cánceres pancreáticos, cánceres hepáticos, cánceres urológicos, incluyendo cáncer de vejiga y cáncer de próstata, malignidades del tracto general • de la mujer incluyendo carcinoma de ovarios, cánceres 15 uterinos (incluyendo endometrial), y tumor sólido en los folículos ovarianos, cánceres de riñon incluyendo carcinoma de células renales, cánceres cerebrales incluyendo tumores cerebrales intrínsecas, neuroblastoma, tumores cerebrales astrocíticos, gliomas, invasión por células tumorales 20 metástasicas en el sistema nervioso central, cánceres óseos, • incluyendo osteomas, cánceres de la piel incluyendo melanoma maligno, progresión de tumor de queratinocitos cutáneos humanos, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células básales, hemangiopericitoma y sarcoma de Karposi . 25 Polipéptidos, polinucleótidos o moduladores de polipéptidos de la presente invención (incluyendo inhibidores y estimuladores de la actividad biológica del polipéptido de la presente invención) pueden ser administrados para tratar cáncer. Composiciones terapéuticas pueden ser administradas en dosificaciones terapéuticamente efectivas solas o en combinación con terapia contra cáncer adyuvante, por ejemplo, intervención quirúrgica, quimioterapia, radioterapia, termoterapia, y terapia láser y pueden proporcionar un efecto benéfico, por ejemplo, reducción del tamaño del tumor, velocidad más lenta del crecimiento del tumor, inhibición de metástasis, o bien mejora de otra forma de la condición clínica global, sin erradicar necesariamente el cáncer. La composición puede también ser administrada en cantidades terapéuticamente efectivas como porción de un cocktail anticáncer. Un cocktail anticáncer es una mezcla del polipéptido o modulador de la presente invención con uno o variso fármacos anticáncer además de un vehículo farmacéuticamente aceptable para administración. El uso de cocktails anticáncer como tratamiento del cáncer es de rutina. Fármacos anticáncer bien conocidos en la técnica y que pueden utilizarse como tratamiento en combinación con el polipéptido o modulador de la invención incluyen: actinomicina D, Aminoglutetimida, Asparaginasa, Bleomicina, Busulfan, Carboplatina, Carmustina, Clorambucilo, Cisplatina (cis-DDP) , Ciclofosfamida, Citarabina HCL (Citocina tJc»i_.,l .ta^ arabinosido) , Dacarbazina, Dactinomicina, Daunorubícina HCL, Doxorubicina HCL, Estramustina fosfato sodio, Etoposido (V16-213), Fluxoridina, 5-Fluorouracilo (5-Fu), Flutamida, Hídroxiurea (hidroxicarbamida) , Ifosfa ida, Interferon Alfa-2a, Interferon Alfa-2b, acetato de leuprolido (análogo de factor de liberación de LHRH) , Lomustina, Mecloretamina HCL (nitrógeno mostasa) , Melfalano, Mercaptopurina, Mesna, Metrotexato (MTX) , Mitomicina, Mitoxantrono HCL, Octreotído, Plicamicina, procarbazina HCL, Estreptozocina, citrato de tamoxifeno, Tioguanina, Tiotepa, sulfato de Vinblastina, Sulfato de Vincristina, Amsacrina, Azacitidlna, Hexametilamina, Interleucina-2, Mitoguazona, pentostatina, Semustina, Teniposido y sulfato de Vindesina. Además, composiciones terapéuticas de la presente invención pueden ser utilizadas para el tratamiento profiláctico del cáncer. Existen condiciones hereditarias y/o citaciones ambientales (por ejemplo exposición a carcinógenos) conocidas en la técnica que predisponen a un individuo a desarrollar cánceres. En estas circunstancias, puede ser benéfico tratar estos individuos con dosis terapéuticamente efectivas del polipéptido de la invención con el objeto de reducir el riesgo de desarrollar cánceres. Modelos in vi tro pueden ser utilizados para determinar las dosis efectivas del polipéptido de la presente invención como tratamiento potencial contra el cáncer. Estos modelos in vi tro incluyen ensayos de proliferación de células tumorales cultivadas, crecimiento de células tumorales cultivadas en agar suave (véase Freshney, (1987) Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique [Cultivo de células animales: Un 5 Manual de Técnica Básica] . Wily-Liss, Nueva York, NY capítulo 18 y capítulo 21), sistemas tumorales en ratones desnudos de conformidad con lo descrito en Giovanella y colaboradores J. f Natl. Can. Inst. 52:921-30 (1974), movilidad y potencial invasor de células tumorales en ensayos de Boyden Chamber de 10 conformidad con lo descrito en Pilkington y colaboradores Anticancer Res., 17:4107-9 (1997), así como ensayos de angiogénesis tales como la inducción de la bascularización de la membrana corioalantoíca de pollo o la inducción de migración de células endoteliales vasculares de conformidad 15 con lo descrito en Ribatta y colaboradores J. Dev. Biol. 40: 1189-97 (1997) y Ll y colaboradores Clin Exp. Metástasis, 17:423-9 (1999), respectivamente. Líneas de células tumorales están disponibles, por ejemplo, en catálogos del American Type Tissue Collection. 20 4.7.11 ACTIVIDAD RECEPTOR/LIGANDO Un polipéptido de la presente invención puede también demostrar la actividad como receptor, ligando de receptor o inhibidor o agonista de las interacciones receptor/ligando. Un polinucleótido de la presente invención puede codificar un 25 polipéptido que muestra tales características. Ejemplos de ..f" p-frTHt*Mtff "* tales receptores y ligandos incluyen, sin limitación, receptores de citocmas y sus ligandos, receptores de quinasa y sus ligandos, receptores de fosfatasas y sus ligandos, receptores involucrados en interacciones célula-célula y sus 5 ligandos incluyendo, sin limitación, moléculas de adhesión celular (por ejemplo selectinas, integrinas y sus ligandos) y pares rceptor/ligando involucrados en presentación de é í antígenos, reconocimiento de antígenos y desarrollo de respuestas inmune celulares y humorales. Receptores y 10 ligandos son también útiles para tamizar inhibidores potenciales de pequeñas moléculas o polipéptidos de la interacción receptor/ligando relevante. Una proteína de la presente invención (incluyendo, sin limitación, fragmentos de receptores y ligando) puede ser útil como inhibidor de 15 interacciones receptor/ligando. La actividad de un polipéptido de la presente invención puede, entre otros medios, medirse a través de los siguiente métodos. Ensayos adecuados para actividad receptor/ligando incluyen 20 sin limitación, los ensayos descritos en: Current Protocols in Immunology [Protocolos actuales en Inmunología] Ed por J. E. Coligan, A. M. Kruisbeek D.H. Margulies, E. M. Shevach. W. Strober, Pub. Greene Publishing Associates y Wiley- Interscience (Capítulo 7.28 Measurement of Cellular Adhesión 25 under static conditions [Medición de adhesión cellular en condiciones estáticas], 7.28.1-7.28.22), Takai y colaboradores Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:6864-6868, 1987, Bierer y colaboradores J. Exp. Med. 168:1145-1156. 1988; Rosenstein y colaboradores J. Exp. Med. 169:149-160, 1989; Stoltenborg y colaboradores J. Immunol. Methods 175:59-68, 1994, Stitt y colaboradores Cell 80:661-670, 1995. A título de ejemplo, los polipéptidos de la presente invención pueden ser utilizados como receptor para ligando (s), transmitiendo de esta forma la actividad biológica de dicho(s) ligando(s). Ligandos pueden ser identificados a través de ensayos de enlace, cromatografía por afinidad, ensayos de tamizado dihibiro, ensayos BIAcore, ensayos de revestimiento en gel, o bien otros métodos conocidos en la técnica. Estudios que caracterizan fármacos o proteínas o agonistas o antagonistas o agonistas parciales o antagonistas parciales requieren el uso de otras proteínas como ligandos que compiten. Los polipéptidos de la presente invención o ligando (s) de los mismos pueden ser marcados mediante acoplamiento a radioisótopos, moléculas calorimétricas o una molécula de toxina por métodos convencionales ("Guide to Proteina Purification" [Guía de purificación de proteína], P. Deutscher (ed) Methods in Enzymology [Métodos en enzimología] Volumen 182 (1990) Academic Press Inc. San Diego) . Ejemplos de radioisótopos incluyen, sin limitarse a ellos, tritio y carbono 14. Ejemplos de moléculas calorimétricas incluyen sin limitarse a ellas, moléculas fluorescentes tales como fluorescamina, o bien rodamina o bien otras moléculas calorimétricas. Ejemplos de toxinas incluyen, sin limitarse a 5 este ejemplo ricina. 4.7.12 TAMIZADO DE FÁRMACO Esta invención es especialmente útil para tamizar compuestos químicos mediante la utilización de los polipéptidos novedosos o fragmentos de enlace de los mismos en 10 cualesquiera de varias técnicas de tamizado de fármaco. Los polipéptidos o fragmentos empleado en una prueba de este tipo pueden ya sea estar libres en solución, fijados sobre un soporte sólido, portados en una superficie celular o bien • localizados de manera intracelular. Un método de tamizado de 15 fármaco utiliza células huéspedes eucarióticas o procarióticas que son transformadas de manera estable con ácidos nucleicos recombinantes que expresan el polipéptido o un fragmento del mismo. Fármacos son tamizados contra tales células transformadas en ensayos de enlace competitivo. Tales 20 células ya sea en forma viable o fija, pueden ser utilizadas • para ensayos de enlace estándares. Se puede medir, por ejemplo, la formación de complejos entre polipéptidos de la presente invención o fragmentos del agente que se esta probando o bien examinar la disminución de la formación de 25 complejos entre los polipéptidos novedosos y una línea de l't?4-?-_-f'Ja* t*et -« -*-_-_.—......__—___,-_—_...______,¿_<ct^tBj_<_c_».___-_, células apropiada, que son bien conocidos en la técnica. Fuentes para compuestos de prueba que pueden ser tamizados para determinar su capacidad de enlazarse o modular (es decir, incrementar o disminuir) la actividad de polipéptidos 5 de la invención incluyen (1) bibliotecas químicas orgánicas e inorgánicas, (2) bibliotecas de productos naturales, y (3) bibliotecas de combinación que comprenden péptidos ya sea aleatorios o miméticos, oligonucléotidos o bien moléculas • orgánicas. 10 Bibliotecas químicas pueden ser fácilmente sintetizadas o adquiridas en varias fuentes comerciales y pueden incluir análogos estructurales de compuestos conocidos o compuestos identificados como "descubrimientos" o "líderes" a través de • tamizado de productos naturales. 15 Las fuentes de bibliotecas de productos naturales son microorganismos (incluyendo bacterias y hongos), animales, plantas u otra vegetación, o bien organismos marinos y bibliotecas de 'mezclas de tamizado pueden ser creadas por: (1) fermentación y extracción de microorganismos del suelo, 20 plantas o marinos o bien (2) extracción de los organismos mismos. Bibliotecas de productos naturales incluyen poliquetidos, péptidos no ribosomales, y variantes (no naturales) de los mismos. Para una reseña, véase Science 282:63-68 (1998) 25 Bibliotecas de combinación consisten de grandes números de _-_-iLj_-__-rffc_.______ péptidos, oligonucléotidos compuestos orgánicos y pueden ser preparadas fácilmente por métodos tradicionales de síntesis automatizada, reacción en cadena de polimerasa, clonación bien métodos sintéticos propios. Bibliotecas de combinación 5 de péptidos y oligonucléotidos son de particular interés. Otras bibliotecas de interés incluyen colección sintética ultipaíalela de péptidos, proteínas, péptido miméticos, bibliotecas recombinatorias, y bibliotecas de polipéptidos.

• Para una reseña de la química de combinación y de las 10 bibliotecas creadas a partir de ella, véase Myers. Curr. Opin Biotechnol . 8:701-707 (1997) . Para reseñas y ejemplos de bibliotecas de péptidos miméticos, véase Al Obeidi y colaboradores Mol . Biotechnol . 9(3):205-23 (1998); Hru y y colaboradores Curr Opin Chem Biol . 1(1):114-19 (1997); Dorner 15 y colaboradores Bioorg Med Chem. 4(5):709-15 (1996) (depéptidos alquilatados) . La identificación de moduladores a través del uso de las varias bibliotecas descritas aquí permite la modificación del "hallazgo" (o bien "líder") candidato para optimizar la 20 ; capacidad del "hallazgo" para unirse a un polipéptido de la '^ invención. Las moléculas identificadas en el ensayo de enlaces son después probadas para actividad antagonista o agonista en cultivo tisular in vivo o modelos de animales que son bien conocidos en la técnica. En resumen, las moléculas 25 son tituladas en varios cultivos de células o animales y después probadas ya sea para la muerte de células/animales o bien la supervivencia prolongada de los animales/células. Las moléculas de enlace identificadas de esta forma pueden ser formadas con complejos con toxinas, por ejemplo, ricina o 5 cólera, o bien con otros compuestos que son tóxicos para células tales como radioisótopos. El complejo toxina/molécula de enlace es después dirigido hacia un tumor o bien otra célula por la especificidad de la molécula de enlace para un • polipéptido de la invención. Alternativamente, las moléculas 10 de enlace pueden formar complejos con agentes formadores de imágenes para propósitos de direccionamiento y formación de imagen. 4.7.13 ENSAYO PARA ACTIVIDAD DE RECEPTOR • La invención proporciona también métodos para detectar el 15 enlace específico de un polipéptido, por ejemplo, un ligando o un receptor. La técnica proporciona numerosos ensayos particularmente útiles para identificar socios de enlace previamente desconocidos para polipéptidos de receptor de la invención. Por ejemplo, la clonación de expresión utilizando 20 células bacterianas o de mamíferos, o bien ensayos de tamizado de dihíbridos pueden también utilizarse para identificar polinucléotidos que codifican socios de enlace. Como ejemplo adicional, se puede emplear cromatografía por afinidad con el polipéptido inmovilizado apropiado de la 25 invención para aislar polipéptidos que reconocen y se unen , .... .«ef-criHHiiiiiit ft.._.._ __.c|ai_____a¡Ma«Aej con polipéptidos de la invención. Existen numerosas bibliotecas diferentes utilizadas para la identificación de los compuestos, y en particular pequeñas moléculas, que Modulan (es decir, incrementan o disminuyen) la actividad biológica de un polipéptido de la invención. Ligandos para polipéptidos de receptores de la invención pueden también ser identificados mediante la adición de ligandos exógenos, o cocktails de ligandos a dos poblaciones de células genéticamente idénticas excepto en cuanto a la expresión del receptor de la invención: una población de células expresa el receptor de la invención mientras que la otra población no lo nace. La respuesta de las dos poblaciones de células a la adición de ligando (s) se compara después. Alternativamente, una biblioteca de expresión puede ser coexpresada con el polipéptido de la presente invención en células y ensayada para una respuesta autocrina ccr. el objeto de identificar ligando (s) potencial (es) . Como otro ejemplo, ensayos BIAcore, ensayos de recubrimiento de gel, o bien otros métodos conocidos en la técnica pueden ser utilizados con el objeto de identificar polipéptidos de socio de enlace, incluyendo, fl) bibliotecas químicas orgánicas e inorgánicas (2) bibliotecas de productos naturales y (3) bibliotecas de combinación que comprenden péptidos aleatorios, cligonucléotidos o moléculas orgánicas. 1.a función de moléculas de señalización intracelulares !______«-•-jflc *t-~-»«^ _—._____._.._.._.—...___.._.f, .. corriente abajo en la cascada de señalización del polipéptido de la presente invención puede ser determinadas, Por ejemplo, una proteína quimérica en la cual el dominio citoplásmico del polipéptido de la invención es fusionado con la porción extracelular de una proteína, cuyo ligando ha sido identificado, es producida en una célula huésped. La célula es después incubada con el ligando específico para la porción extracelular de la proteína quimérica, activando de esta forma el receptor quimérico. Proteínas corriente abajo conocidas involucradas en la señalización intracelular pueden ser después ensayadas para modificaciones esperadas, es decir, fosforilación. Otros métodos conocidos por parte de los expertos en la materia pueden también utilizarse con el objeto de identificar moléculas de señalización involucradas en actividad de receptor. 4.7.14 LEUCEMIAS Leucemias y trastornos relacionados pueden ser tratados o prevenidos mediante la administración de un agente terapéutico que promueve o inhibe la función de los polinucléotidos y/o polipéptidos de la invención. ' Tales leucemias y trastornos relacionados incluyen, sin limitarse a ellos, leucemia agua, leucemia linfocítica aguda, leucemia mielocítica, leucemia mieloblástica, promielocítica, mielomonocítica, monocítica, eritroleucemia, leucemia crónica, leucemia mielocítica crónica (granulocítica) y leucemia linfocítica crónica (para una reseña de tales trastornos, véase fishman y colaboradores 1985. Medicine [Medicina], Segunda edición. J. B. Lippincott Co., Filadelfia) . 5 4.7.15 TRASTORNOS DEL SISTEMA NERVIOSO Trastornos del sistema nervioso, incluyendo tirios de células que pueden ser probadas para eficacia de intervención con compuestos que modulan la actividad de los polinucléotidos • y/o polipéptidos de la invención, y que pueden ser tratados 10 observando así una indicación de utilidad terapéutica, incluyen sin limitarse a ellos, lesiones al sistema nervioso y enfermedades o trastornos que resultan ya sea en una desconexión de axones, una disminución o degeneración de • neuronas o desmielinación. Lesiones al sistema nervioso que 15 pueden ser tratadas en un paciente (incluyendo pacientes humanos y mamíferos no humanos) de conformidad con la presente invención incluyen, sin limitarse a ellas, las siguientes lesiones ya sea del sistema nervioso central (incluyendo médula espinal y cerebro) o bien del sistema 20 nervioso periférico: • (i) lesiones traumáticas, incluyendo lesiones provocadas por accidente físico o bien asociadas con intervenciones quirúrgicas, por ejemplo lesiones que cortan una porción del sistema 25 nervioso, o bien lesiones de tipo compresión; (ii) lesiones isquémicas, en donde una falta de oxigeno en una porción del sistema nervioso resulta en daño o muerte de neuronas, incluyendo infarto cerebral o isquemia o bien infarto de médula espinal o 5 isquemia; (iii) lesiones infecciosas, en donde una porción del sistema nervioso es > I destruida o dañada como resultado de una infección, por ejemplo, por un • absceso, o bien asociada con infección por virus de 10 inmunodeficiencia humana, herpes zoster, o bien virus de herpes simplex, o bien con enfermedad de Lyme, tuberculosis, sífilis; (iv) lesiones degenerativas, en donde una porción del sistema nervioso es destruida o dañada como 15 resultado de un proceso degenerativo incluyendo, sin limitarse a estos casos, degeneración asociada con enfermedad de I Parkmson, enfermedad de Alzheimer, corea de Huntington, o bien esclerosis lateral amiotrófica. 20 (v) Lesiones asociadas con enfermedades o trastornos de • la nutrición, en donde una porción del sistema nervioso es destruida o dañada por un trastorno de la nutrición o un trastorno del metabolismo, incluyendo, sin limitarse a estos casos, 25 deficiencia en vitamina B12, deficiencia en ácido fólico, enfermedad de Wernicke, ambliopia de tabaco-alcohol, enfermedad de archiafava-Bignami (degeneración primaria del cuerpo calloso) , y degeneración cereberal alcohólica; 5 (vi) Lesiones neurológicas asociadas con enfermedades sistémicas, incluyendo, sin limitarse a ellos, diabetes (neuropatía diabética, parálisis de Bell), lupus eritomatosa sistémico, carcinoma, o sarcoidosis; 10 (vii) Lesiones provocadas por sustancias tóxica incluyendo alcohol, plomo, o bien neurotóxinas particulares; y (viii) Lesiones desmielinadas en donde una porción del • sistema nervioso es destruida o dañada por una 15 enfermedad desmielinante, incluyendo sin limitarse a estos casos, esclerosis múltiple, mielopatía asociada con el virus de la inmunodeficíencia humana, m, ielopatía transversa o varias etiologías, leucoencefalopatía multifocal progresiva, y 20 mielinolisis pontina central. • Agentes terapéuticos que son útiles de conformidad con la presente invención para el tratamiento de un trastorno del sistema nervioso central pueden ser seleccionados mediante prueba de actividad biológica para promover la supervivencia 25 o diferenciación de neuronas. Por ejemplo y no de manera limitativa, agentes terapéuticos que provocan cualesquiera de los siguientes efectos pueden ser útiles según la presente invención: (i) tiempo incrementado de supervivencia de neuronas en 5 cultivo; (ii) surgimiento incrementado de neuronas en cultivo o ' in vivo; (iii) producción incrementada de moléculas asociadas con • neuronas en cultivo o in vivo, por ejemplo colina 10 acetiltransferasa o acetilcolinesterasa con relación a neuronas motrices; o bien (iv) síntomas disminuidos de disfunción neuronal ín vivo. Tales efectos pueden ser medidos por cualquier método 15 conocido en la técnica. En modalidades no limitativas preferidas, una supervivencia incrementada de neuronas puede ser medida por el método presentado en Arakaw y colaboradores '(1990 J. Neurosci. 10:3507-3515); surgimiento incrementado de neuronas puede ser detectado por métodos presentados en 20 Pestronk y colaboradores (1980. Exp. Neurol. 70:65-80) o • Brown y colaboradores (1981. Ann Rev. Neurosci 4:17-42); una producción incrementada de moléculas asociadas con neuronas puede ser medida por bioensayo, ensayo enzimático, enlace de anticuerpo, ensayo Northern blot, etc., según la molécula a 25 medir; y disfunción neuronal motriz puede ser medida mediante la evaluación de la manifestación física de trastorno neuronal motriz, debilidad, velocidad de conducción neuronal motriz, o bien incapacidad funcional. En modalidades específicas, trastornos de neuronas motrices 5 que pueden ser tratados de conformidad con la presente invención, incluyen, sin limitarse a estos casos, trastornos tales como infarto, infección, exposición a toxina, trauma, daño quirúrgico, enfermedad degenerativa o malignidad que • pueden afectar las neuronas motrices así como otros 10 componentes del sistema nervioso, así como trastornos que afectan selectivamente neuronas tales como esclerosis lateral amiotrófica y que incluyen, sin limitarse a ellos, atrofia muscular espinal progresiva, parálisis bulbar progresiva, • esclerosis lateral primaria, atrofia muscular infantil y 15 juvenil, parálisis bulbar progresiva de la niñez (síndrome de Fazio-Londe) , poliomielitis y el síndrome post polio, y neuropatía motosensorial hereditaria (enfermedad de Charcot- Marie-Tooth) . 4.7.16 OTRAS ACTIVIDADES 20 Un polipéptido de la presente invención puede también ^^ presentar uno o varios de los siguientes efectos o actividades adicionales: inhibición del crecimiento, infección o función, o muerte de agentes infecciosos, incluyendo, sin limitación, bacterias, virus, hongos y otros 25 parásitos; tener un efecto sobre características corporales ttfffff**--- f rf- f^*'-'--fffii - -rff (suprimir o incrementar tales características) , incluyendo, sin limitación, estatura, peso, color de cabello, color de ojos, piel, proporción de grasa corporal o bien pigmentación tisular, o bien tamaño o forma de órgano o cuerpo (por 5 ejemplo, incremento o disminución del tamaño de mamas, cambio de forma de huesos) ; producir un efecto sobre biorritmos o ciclos circadianos o ritmos circadianos; tener un efecto sobre la fertilidad de los sujetos machos o hembras; tener un • efecto sobre el metabolismo, catabolismo, anabolismo, 10 procesamiento, utilización, almacenamiento o eliminación de grasa, lípidos, proteínas, carbohidratos, vitaminas, minerales, cofactores o bien otros factores nutrimentales o componente (s) nutrimental (es) , tener un efecto sobre características de comportamiento, incluyendo, sin 15 limitación, apetito, libido, stress, conocimiento (incluyendo trastornos del conocimiento) , depresión (incluyendo trastornos depresivos) y comportamientos violentos; proporcionar efectos analgésicos o bien otros efectos reductores del dolor; promover la diferenciación y 20 crecimiento de células madres embriónicas en linajes otros • que linajes hemaopoyéticos; actividad normal o endocrina; en el caso de enzimas, corregir las deficiencias de la enzima y tratar enfermedades relacionadas con dicha deficiencia; tratamiento de trastornos hiperproliferativos (por ejemplo, 25 psoriasis); actividad de tipo inmunoglobulina (por ejemplo, c¡—_.___.--..»*_..- *. -- -^».J-^l-----~__^^.»iáfefc- _u_L ¡ la capacidad de enlazarse con antígenos o complemento) ; y la capacidad de actuar como un antígeno en una composición de vacuna para provocar una respuesta inmune contra dicha proteína o bien otro material o entidad que reacciona de manera cruzada con dicha proteína. 4.7.17 IDENTIFICACIÓN DE POLIMORFISMOS La demostración de los polimorfismos hace posible la identificación de tales polimorfismos en sujetos humanos y el uso farmacogenético de esta información para diagnóstico y tratamiento. Tales polimorfismos pueden estar asociados, por ejemplo con predisposición diferencial o susceptibilidad a varios estados de enfermedad (tales como trastornos que involucran inflamación o respuesta inmune) , o bien una respuesta diferencial a la administración de fármaco, y esta información genética puede ser utilizada para adecuar apropiadamente un tratamiento preventivo o terapéutico. Por ejemplo, la existencia de polimorfismo asociado con una predisposición a una enfermedad de inflamación o autoinmune hace posible el diagnóstico de esta condición en seres humanos mediante la identificación de la presencia del polimorfismo. Polimorfismos pueden ser identificados en varias formas conocidas en la técnica que involucran en general todas la obtención de una muestra de un paciente, el análisis de ADN de la muestra, que involucra opcionalmente el aislamiento o -_-___ .i..^j-s___.-a-.__--J-.------*-._-___f^ amplificación del ADN, y la identificación de la presencia del polimorfismo en el ADN. Por ejemplo, se puede utilizar reacción en cadena de polimerasa para amplificar un fragmento apropiado de ADN genómico que puede ser después secuenciado. Alternativamente, el ADN puede ser sometido a una hibridación de oligonucléotidos específica para alelos (en donde oligonucléotidos apropiados son hibridados con el ADN en condiciones que permiten la detección de una falta de correspondencia de base individual) o bien a un ensayo de extensión de nucleótido individual (en donde un oligonucléotido que se híbrida inmediatamente adyacente a la posición del polimorfismo es extendido con uno o varios nucleótidos etiquetados) . Además, un análisis de polimorfismo de longitud de fragmento de restricción tradicional (usando enzimas de restricción que proporcionan digestión diferencial del ADN genómico según la presencia o ausencia del polimorfismo) puede efectuarse. Conjuntos con secuencias de nucleótidos de la presente invención pueden ser utilizados para detectar polimorfismos. El conjunto puede comprender secuencias de nucleótidos modificadas de la presente invención con el objeto de detectar las secuencias de nucleótidos de la presente invención. En la alternativa, cualesquiera de las secuencias de nucleótidos de la presente invención puede colocarse en el conjunto con el objeto de detectar cambios en estas secuencias. ^__>-.J-Jn__JdL_.=___.<tff_fcl--._..__,__.>..... .__.-_ Alternativamente, un polimorfismo que resulta en un cambio en la secuencia de aminoácidos puede también ser detectado mediante la detección de un cambio correspondiente en la secuencia de aminoácidos de la proteína, por ejemplo, por 'un 5 anticuerpo específico para la secuencia vcariante. 4.7.18 ARTRITIS E INFLAMACIÓN Los efectos inmunosupresores de las composiciones de la invención contra artritis reumatoide son determinados en un • sistema de modelo de animales experimental. El sistema de 10 modelo experimental es artritis inducida por adyuvante en ratas, y el protocolo es descrito por J. Holoshitz y colaboradores, 1983, Science, 219:56, o bien B. Waksman y colaboradores 1963, Int. Arch. Allergy Appl. Immunol . , • 23:129. La inducción de la enfermedad puede ser provocada por 15 una inyección única, generalmente intradérmica, de una suspensión de Mycobacterium tuberculosis muerto en una adyuvante completo de Freund (CFA) . La vía de inyección puede variar pero después de inyectada a las ratas en la base de la cola con una mezcla de adyuvante. El polipéptido es 20 administrado en una solución amortiguada con fosfato (PBS) en una dosis de aproximadamente 1-5 mg/kg. El control consiste de la administración de PBS sola. El procedimiento para probar los efectos del compuesto de prueba consiste de la inyección intradérmica de Mycobacteríum 25 tuberculosis muerto en CFA, seguido por la administración inmediata del compuesto de prueba y el tratamiento subsecuente cada tercer día hasta el día 24. Los días 14, 15, 18, 20, 22 y 24 después de la inyección de Mycobacterium CFA, se puede obtener una calificación de artritis global de 5 conformidad con lo descrito por J. Holskitz arriba. Un análisis de los datos muestra que el compuesto de prueba tiene un efecto dramático sobre la hinchazón de las articulaciones según lo medido por una disminución de la • calificación de artritis. 10 4.8 MÉTODOS TERAPÉUTICOS Las composiciones (incluyendo fragmentos de polipéptido, análogos, variantes, y anticuerpos u otros socios de enlace o moduladores incluyendo polinucléotidos de antisentido) de la • invención tienen numerosas aplicaciones en varios métodos 15 terapéuticos. Ejemplos de aplicaciones terapéuticas incluyen, sin limitarse a estas aplicaciones, ias presentadas como ejemplo aquí. , 4.8.1 EJEMPLO Una modalidad de la presente invención es la administración 20' de una cantidad efectiva de los polipéptidos de tipo factor • de crecimiento de células madres u otra composición de la invención a individuos afectados por una enfermedad o trastorno que puede ser modulado por la regulación de los péptidos de la invención. Mientras el modo de administración 25 no es particularmente importante, se prefiere la -"•*"•-•" -***¿±L?*-administración parenteral. Un modo ejemplar de administración es la administración en forma de bolo intravenoso. La dosificación de polipéptidos de tipo factor de crecimiento de células madres u otra composición de la invención será determinada normalmente por el medico tratante. Se debe esperar que la dosificación varié según la edad, peso, condición y respuesta del paciente individual . Típicamente, la cantidad de polipéptido administrada por dosis se encontrará dentro de un rango de aproximadamente 0.01 µg/kg a 100 mg/kg de peso corporal, prefiriéndose una dosis de aproximadamente 0.1 µg/kg a 10 mg/kg de peso corporal del paciente. En el caso de administración parenteral, polipéptidos de tipo factor de crecimiento de células madres de la invención serán formulados en una forma inyectable combinada con un vehículo parenteral farmacéuticamente aceptable. Tales vehículos son bien conocidos en la técnica y ejemplos incluyen agua, solución salina, solución de Ringer, solución de dextrosa, y soluciones que consisten de pequeñas cantidades de la albúmina sérica humana. El vehículo puede contener cantidades menores de aditivos que mantienen la isotonicidad y la estabilidad del polipéptido o de otro ingrediente activo. La preparación de tales soluciones se encuentra dentro de la capacidad del experto en la materia. 4.9 FORMULACIONES FARMAÉUTICAS Y VÍAS DE ADMINISTRACIÓN Una proteína u otra composición de la presente invención (que ._,.,-_______??p¡j--~?ffiy.f.-p^j sea derivada de cualquier fuente, incluyendo, sin limitación, de fuentes recombinantes y no recombmantes y que incluye anticuerpos y otros socios de enlace de los polipéptidos de la invención) puede ser administrada a un paciente que la requiere, en si, o bien en composiciones farmacéuticas en donde se mezcla con vehículos adecuados o excipiente (s) adecuado (s) en dosis para tratar o mejorar varios trastornos. Dicha composición puede contener opcionalmente (además de proteína u otro ingrediente activo y un vehículo) , diluyentes, rellenadores, sales, amortiguadores, estabilizadores, solubilizadores, y otros materiales bien conocidos en la técnica. El término "farmacéuticamente aceptable" se refiere a un material no tóxico que no interfiere con la efectividad de la actividad biológica del (de los) ingrediente (s) activo (s). Las características del vehículo dependerán de la vía de administración. La composición farmacéutica de la invención puede contener también citocinas, linfocinas, o bien otros factores hematopoyéticos tales como M-CSF, GM-CSF, TNF-IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IFN, TNFO, TNF1, TNF2, G-CSF, Meg-CSF, trombopoyetina, factor de células madres, y eritropoyetinas. En composiciones adicionales, proteínas de la presente invención pueden ser combinadas con otros agentes benéficos para el tratamiento de la enfermedad o trastorno en cuestión.

Estos agentes incluyen varios factores de crecimiento tales como factor de crecimiento epidérmico (EGF) , factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF), factores de crecimiento transformantes (TGF-a y TGF-ß) , factor de crecimiento de tipo insulina (IGF), así como citocinas descritas aquí. La composición farmacéutica puede contener además otros agentes que o bien incrementan la actividad de la proteína o bien de otro ingrediente activo, o bien complementan su actividad o uso en tratamiento. Tales factores adicionales y/o agentes pueden estar incluidos en la composición farmacéutica para producir un efecto sinergético con proteína u otro ingrediente activo de la invención, o bien para minimizar efectos colaterales. A la inversa, proteína u otros ingredientes activos de la presente invención pueden estar incluidos en formulaciones del factor de coagulación particular, citocina, linfocina, otros factores( hematopoyéticos, factores trombolíticos o anti-trombóticos, o bien agente anti-inflamatorio con el objeto de minimizar los efectos colaterales del factor de coagulación, citocina, linfocina, otros factores hematopoyéticos, factores trombolíticos o anti-trombóticos, o bien agente, antiinflamatorio (por ejemplo, IL-IRa, 11-1 Hyl, IL-1 Hy2, anti-TNF, cortocosteroides, agentes inmunosupresores. Una proteína de la presente invención puede ser activa en multímeros (por ejemplo, heterodímeros, o bien homodímeros) o bien complejos consigo mismo o con otras proteínas. Como resultado, composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden comprender una proteína de la invención en dicha forma multi érica o en forma de complejos. Como alternativa a la inclusión en una composición farmacéutica de la invención que incluye una primera proteína, una segunda proteína o un agente terapéutico puede ser administrado concurrentemente con la primera proteína (por ejemplo, al mismo tiempo, o bien en tiempos diferentes a condición que las concentraciones terapéuticas de la combinación de agentes se logren en el sitio de tratamiento. Técnicas para la formulación y administración de compuestos de ia presente solicitud pueden encontrarse en "Remington's Pharmaceutical Sciences" Mack Publishing Co., Easton, PA última edición. Una dosis terapéuticamente efectiva se refiere además a la cantidad del compuesto que es suficiente para resultar en una mejora de los síntomas, por ejemplo, tratamiento, curación, prevención o mejora de la condición medical relevante, o bien un incremento de la velocidad del tratamiento, curación, prevención o mejora de dichas condiciones. Cuando se aplica a un ingrediente activo individual, administrado solo, una dosis terapéuticamente efectiva se refiere a este ingrediente solo. Cuando se aplica a una combinación, una dosis terapéuticamente efectiva se refiere a cantidades combinadas de los ingredientes activos que resultan en el efecto terapéutico, ya sea administrados en combinación, en serie o de manera simultanea. En la práctica del método de tratamiento o uso de la presente 5 invención, una cantidad terapéuticamente efectiva de proteina u otro ingrediente activo de la presente invención se administra a un mamífero que tiene una condición a tratar. Proteínas u otro ingrediente activo de la presente invención puede administrarse de conformidad con el método de la 10 invención sólo o en combinación con otras terapias tales como tratamientos que emplean citocinas, linfocinas, u otros factores hematopoyéticos. Cuando se coadministran con una o varias citocinas, linfocinas u otros factores hematopoyéticos la proteína u otro ingrediente activo de la presente 15 invención puede administrarse ya sea simultáneamente con la(s) citocina (s), linfocinas (s) , otro(s) factor (es) hematopoyético (s) , factores trombóticos o antitrombóticos, o secuencialmente. Si se administra secuencialmente, el médico tratante decidirá la secuencia adecuada de administración de 20 proteína u otro ingrediente activo de la presente invención en combinación con citocina (s), linfocina (s) otro(s) factor (es) hematopoyético (s) „ factores trombolítico (s) o antitrombótico (s) . 4.9.1 VÍAS DE ADMINISTRACIÓN 25 Vías adecuadas de administración pueden incluir, por ejemplo, **-_> administración oral, rectal, transmucosal, o intestinal; administración paraenteral, incluyendo inyecciones intramusculares, subcutáneas, intra édular, así como inyecciones intratecales, intraventricular directa, intravenosa, intraperitoneal, intranasal, o intraocular. La administración de Proteína u otro ingrediente activo de la presente invención utilizado en la composición farmacéutica o para practicar el método de la presente invención puede efectuarse de varias maneras convencionales, por ejemplo ingestión oral, inhalación, aplicación tópica, o inyección cutánea, subcutánea, intraperitoneal, paraenteral o intravenosa. Se prefiere la administración intravenosa al paciente. Alternativamente se puede administrar el compuesto en forma local y no sistémica, por ejemplo, a través de inyección del compuesto directamente en la articulación artrítica o en el tejido fibrotico frecuentemente en formulación de liberación sostenida o de tipo depósito. Con el objeto de evitar el proceso de cicatrización que ocurre frecuentemente como complicación de cirugía de glaucoma, los compuestos pueden ser tópicamente, por ejemplo, como gotas para los ojos. Además, se puede administrar el fármaco en un sistema de administración de fármaco dirigido en un liposoma revestido con un anticuerpo específico, enfocando, por ejemplo, el tejido artrítico o fibrótico. Los liposomas serán dirigidos .___-_-__.___- -Í T f ;-(. Bir?i tpríiri¡ÉtÍifl__Í-HÉ? \ !>-?»_.« selectivamente hacia el tejido afectado y absorbidos selectivamente por dicho tejido. Los Polipéptidos de la presente invención son administrados a través de una vía que suministra una dosificación efectiva en el sitio de acción deseado. La determinación de una vía adecuada de administración y una dosis efectiva para una indicación particular se encuentra dentro del nivel de una persona experta en la materia. De preferencia para el tratamiento de heridas se administra el compuesto terapéutico directamente al sitio. Rangos de dosificación adecuados para los polipéptidos de la presente invención pueden ser extrapolados a partir de estas dosificaciones o bien a partir de estudios similares en modelos de animales apropiados. Dosificaciones pueden ser ajustadas después según lo necesario por el médico con el objeto de proporcionar un beneficio terapéutico máximo. 4.9.2 COMPOSICIONES/FORMULACIONES Composiciones farmacéuticas para su uso de conformidad con la presente invención pueden por consiguiente ser formuladas de manera convencional utilizando uno o varios vehículos fisiológicamente aceptables que comprenden excipientes y auxiliares que facilitan el procesamiento de los compuestos activos en preparaciones que pueden ser utilizadas farmacéuticamente. Estas composiciones farmacéuticas pueden ser fabricadas de una manera conocida per se, por ejemplo, a __-__._.-^..-.,_^__^^^ través de mezclado convencional, disolución, granulación, elaboración de grageas, ledigación, emulsificación, encapsulación, atrapamiento o liofilisación. Una formulación apropiada depende de la vía de administración seleccionada. Cuando una cantidad terapéuticamente efectiva de proteína u otro ingrediente activo de la presente invención se administra oralmente la proteína o el otro ingrediente activo de la presente invención estará en forma de tableta, cápsula, polvo, solución o elixir. Cuando se administra en forma de tableta, la composición farmacéutica de la presente invención puede contener además un vehículo sólido, como por ejemplo una gelatina o un adyuvante. La tableta, cápsula, y polvo contienen de aproximadamente 25 a 90% de proteína o de otro ingrediente activo de la presente invención. Cuando se administra en forma líquida un vehículo líquido como por ejemplo agua, petróleo, aceites de origen animal o vegetal, por ejemplo aceite de cacahuate, aceite mineral, aceite de soya, o aceite de ajonjolí, o bien aceites sintéticos pueden agregarse. La forma líquida de la composición farmacéutica puede contener además una solución salina fisiológica dextrosa o bien otra solución de sacáridos, o bien glicoles, como el etilenglicol, propilenglicol o polietilenglicol. Cuando se administra en forma líquida la composición farmacéutica contiene de aproximadamente 0.5 a aproximadamente 90% en peso de proteína u otro ingrediente activo de la presente invención y de preferencia de aproximadamente 1 a 50% de proteína u otro ingrediente activo de la presente invención, y de preferencia de aproximadamente 1 a 50% de proteína u otro ingrediente activo de la presente invención. Cuando una cantidad terapéuticamente efectiva de proteína u Otro ingrediente activo de la presente invención se administra por inyección intravenosa, cutánea o subcutánea, la proteína u otro ingrediente activo de la presente invención estará en forma de una solución acuosa paraenteral ente aceptable libre de pirógenos. La preparación de dicha proteína paraenteralmente aceptable u otras soluciones de ingredientes activos, tomando en cuenta el PH, isotonicidad estabilidad y similares, se encuentra dentro de la capacidad del experto en la materia. Una composición farmacéutica preferida para inyección intravenosa, cutánea o subcutánea debe contener además de la proteína u otro ingrediente activo de la presente invención un vehículo isotónico, por ejemplo, inyección de cloruro de sodio inyección de Ringer, inyección de dextrosa y cloruro de sodio, inyección de Ringer lactada, o bien otro vehículo como se sabe en la técnica. La composición farmacéutica de la presente invención puede contener estabilizadores, conservadores, amortiguadores, antioxidantes, o bien otros aditivos conocidos por parte de los expertos en la materia. _^M____________________Í_| ^jl^ Para inyección, los agentes de la presente invención pueden ser formulados en soluciones acuosas, de preferencia en amortiguadores fisiológicamente compatibles tales como solución de Hanks o bien un amortiguador de solución salina fisiológica. Para administración transmucosal, agentes de penetración apropiados para la barrera a permear se utilizan en la formulación. Tales agentes de penetración son generalmente conocidos en la técnica. Para administración oral, los compuestos pueden ser formulados fácilmente mediante la combinación de los compuestos activos con vehículos farmacéuticamente aceptables bien conocidos en la técnica. Tale vehículos permiten que ios compuestos de la invención sean formulados como tabletas, pildoras, grageas, cápsulas, líquidos, geles, jarabes, pastas, suspensiones, y similares, para ingestión oral por un paciente a tratar. Preparaciones farmacéuticas para uso oral pueden ser obtenidas utilizando excipientes sólidos, moliendo opcionalmente una mezcla resultante, y procesando Ib mezcla de granulos después de adición de auxiliares adecuados, si se desea, para obtener tabletas o núcl os de grajeas. Excipientes adecuados son, en particular rellenadores tales como azúcares, incluyendo lactosa, sucrosa, manitol, ozorbitol; preparaciones de celulosa, por ejemplo almindon de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz, almidón de papa, gelatina, goma tragacanto, metilcelulosa, hidroxipropilmetil .^.- -,-^..-^^ celulosa, carboximetilcelulosa sódica y/o polivínil pirrolidona (PVP) . Si se desea, se pueden agregar agentes de desintegración, por ejemplo la polivinil pirrolidona reticulada, agar, o bien ácido alginico o una sal de los mismos, por ejemplo alginato de sodio. Núcleos de grageas se proporcionan con revestimientos adecuados . Para este propósito, se pueden emplear soluciones de azÚGar concentradas que pueden contener opcionalmente goma arábiga, talco, polívínilpirrolidona, gel carbopol, polietílenglicol, y /o dióxido de titanio, soluciones de laca y solventes orgánicos adecuados o mezclas de solventes. Colorantes o pigmentos pueden ser agregados a las tabletas o revestimientos de grageas para identificación o para caracterizar combinaciones diferentes de dosis de compuestos activos. Preparaciones farmacéuticas que pueden utilizarse oralmente incluyen cápsulas de ajuste a presión elaboradas a partir de gelatina, así como cápsulas blandas, selladas elaboradas de gelatina y un plastificante, por ejemplo el glicerol o sorbitol. Las cápsulas de ajuste a presión pueden contener los ingredientes activos en mezcla con rellenador, por ejemplo lactosa, aglomerantes tales como almidones tales como talco o estearato de magnesio y opcionalmente, estbilizadores. En cápsulas blandas, los compuestos activos pueden estar disueltos o suspendidos en líquidos adecuados, por ejemplo aceites, grasas, parafina líquida, o bien polietilenglicoles líquidos. Además, se pueden agregar estabilizadores. Todas las formulaciones para administración oral deben estar en dosificaciones adecuadas para dicha administración. Para administración bucal las composiciones pueden tomar la forma de tabletas o pastillas formuladas de manera convencional. Para su administración por inhalación, los compuestos para su uso de conformidad de la presente invención se administran de manera conveniente en forma de una presentación de rocío de tipo aerosol a partir de empaques bajo presión o atomizador, con el uso de un agente inpelante adecuado, por ejemplo, diclrodifluorometano, triclorofluorometano diclorotetrafluoro etano, dióxido de Carbono o bien otro gas adecuado. En el caso de un aerosol bajo presión, la unidad de dosificación puede ser determinada proporcionando una válvula para suministrar una cantidad medida. Cápsulas y cartuchos de gelatina para su uso en un inhalador o insuflador pueden ser formuladas, las cuales contienen una mezcla de polvo de 1 compuesto y: una base de polvo adecuada, por ejemplo lactosa o almidón. Los compuestos pueden ser formulados para administración paraenteral por inyección, por ejemplo, por inyección de bolo o infusión continua. Formulaciones para inyección pueden ser presentadas en forma de dosificación unitaria, por ejemplo, en ampolletas o en recipientes que __MI_1M__________Í___?É____É___l_te contienen dosis múltiples, con un conservador agregado. Las composiciones pueden tomar formas de suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos aceitosos o acuosos, y pueden contener agentes de formulación tales como agentes de 5 formulación tales como agentes suspensión, estabilización y/o dispersión. Formulaciones farmacéuticas para administración paraenteral incluyen soluciones acuosas de los compuestos activos en forma soluble en agua. Además, suspensiones de los 10 compuestos activos pueden ser preparadas como suspensiones apropiadas de inyección aceitosa. Solventes lipofídicos adecuados o vehículos incluyen también aceites grasos tales como aceite de ajonjolí o bien esteres de ácidos grasos sintéticos, por ejemplo oleato de metilo o triglicéridos, o 15 liposomas. Suspensiones acuosas para inyección pueden contener sustancias que incrementan la viscosidad de la suspensión tales como carboximetilcelulosa sódica, sorbítol, o dextrano. Opcionalmente la suspensión puede contener también estabilizadores adecuados o agentes que incrementan '20 la solubilidad de los compuestos para permitir la preparación de soluciones altamente concentradas. Alternativamente, el ingrediente activo puede estar en forma de polvo para constitución con un vehículo adecuado, por ejemplo, agua estéril sin pirógenos, antes de su uso. 25 Los compuestos pueden también ser formulados en composiciones "ifft*t''_i*f-t_~_; 1f ~ift | fititr TiiUfÉfi _.-.,.__-_-____--__. -.-i. i i fagÍj rectales tales como supositorios o enemas de retención, por ejemplo, que contienen bases de supositorio convencionales, por ejemplo manteca de cocoa y otros glicéridos. Además de las formulaciones descritas previamente, los compuestos pueden también ser formulados como preparación de tipo depósito. Tales formulaciones de acción prolongada pueden ser administradas por implantación (por ejemplo, subcutánea o intramuscularmente) o bien por inyección intramuscular. Así, por ejemplo, los compuestos pueden ser formulados con materiales poliméricos o hidrofóbicos adecuados (por ejemplo, como emulsión en un aceite aceptable) o bien resinas de intercambio de iones o bien como derivados poco solubles, por ejemplo, como sal poco soluble. Un vehículo farmacéutico para los compuestos hidrofóbicos de la presente invención es un sistema de co-solvente que comprende al comprende alcohol bencílico, un sulfatante no polar, un polímero orgánico miscible y una fase acuosa. El sistema de co-solvente puede ser un sistema de co-solvente VPD. VPD es una solución de 3% peso/volumen de alcohol bencílico, 8% peso/volumen de sulfactante no polar Polisorbate 80, y 65% peso/volumen de polietilenglicol 300 llegando al volumen deseado en etanol absoluto. El sistema VPD co-solvente (VPD:5W) consiste de VPD diluido 1:1 con dextrosa al 5% en una solución acuosa. Este sistema de co- solvente disuelve bien los compuestos hidrofóbicos, y produce en si poca toxicidad al administrase de manera sistémica. Naturalmente, las proporciones de un sistema de cosolvente pueden variar considerablemente sin destruir sus características de solubilidad y toxicidad. Además, la identidad de los componentes de cosolvente puede variar: por ejemplo, otros sulfactantes no polares de baja toxicidad pueden ser utilizados en lugar de Polisorbate 80; el tamaño de fracción de polietilenglicol puede variar; otros polímeros biocompatibles pueden reemplazar el polietilenglicol como por ejemplo, polivinilpirrolidona y otros azúcares o polisacaridos pueden sustituir la dextrosa. Alternativamente otros sistemas de administración para compuestos farmacéuticos hidrofóbicos pueden emplearse. liposomas y emulsiones son ejemplos bien conocidos de vehículos de administración para fármacos hidrofóbicos. Ciertos solventes orgánicos tales como sulfoxido de dimetilo pueden también emplearse, aún cuando habitualmente a un costo de una mayor toxicidad. Además lo compuestos pueden ser administrados empleando sistemas de liberación sostenida, por ejemplo, matrices permeables de polímeros hidrofóbicos sólidos que ' contienen el agente terapéutico. Varios tipos de materiales de liberación prolongada han sido establecidos y son bien conocidos por parte de los expertos en la materia. Cápsulas de liberación prolongada pueden según su naturaleza química, liberar los compuestos durante algunas semanas hasta un __,_,.>__,__. ___.< ¿¿gj^tejljl ^j^l periodo de mas de 100 días según la naturaleza química y según la estabilidad biológica del reactivo terapéutico, se pueden emplear otras estrategias para la estabilización de proteínas u otros ingredientes activos. Las composiciones farmacéuticas pueden también comprender vehículos o excipientes adecuados en fase de sólido o én fase de gel. Ejemplo de tales vehículos excipientes se incluyen sin limitarse a ellos, carbonato de calcio, fosfato de calcio, varios azúcares, almidones, derivados de celulosa, gelatina, y polímeros, tales como polietilenglicoles. Muchos de los ingredientes activos de la invención pueden ser proporcionados como sales contraiones farmacéuticamente compatibles. Tales sales de adición de bases farmacéuticamente aceptables son las sales que conserva la efectividad biológica y las propiedades de los ácidos libre y que se obtienen por reacción con bases inorgánicas u orgánicas tales como hidróxido de sodio, hidróx^do de I magnesio, amoniaco, trialquilamina, dialqui?amina, monoalquilamina, aminoácidos dibásicos, acetato de sodio, benzoato de potasio, trietanolamina y similares. La composición farmacéutica de la presente invención puede estar en forma de un complejo de la(s) u otro ingrediente activo de la presente invención junto con antígeno (s) de proteína o péptido. El antígeno de proteína y/o péptido suministrará una señal estimuladora tanto lmfocitos B como a linfocitos T. Linfocitos B responderán al antígeno a través de su receptor de inmunoglobulina superficial. Linfocitos T responderán al antígeno a través del receptor de células T (TCR) después de S la presentación del antígeno por proteínas de MHC. MHC y proteínas estructuralmente relacionadas incluyendo las codificadas por genes MHC clase I y clase II en células huéspedes servirán para presentar el (los) antígeno (s) de péptido a linfocitos T. Los componentes de antígeno pueden 10 también ser suministradas como complejos MHC-péptido purificados solos o bien con moléculas coestimuladoras que pueden señalar directamente células T. Alternativamente, anticuerpos capaces de unir la inmunoglobulina superficial u • otras moléculas en células B así como anticuerpos capaces de 15 unir la TCR y otras moléculas en células T pueden combinarse con la composición farmacéutica de la presente invención. La composición farmacéutica de la presente invención puede tener la forma de un liposoma en donde la proteína de la presente invención se encuentra combinada además de otros 20 vehículos farmacéuticamente aceptables, con agentes f antipáticos tales como lípidos que existen en forma agregada como micelas, monocapas insolubles, cristales líquidos o capas lamelares en solución acuosa. Lípidos adecuados para formulación liposomal incluyen, sin limitación, 25 monogliceridos, digliceridos, sulfatidos lisolecitmas _w__-._- *«¿^a___-c. fosfolíticas, fosfolípidos, saponina, ácidos biliares y si ilare. La preparación de tales formulaciones liposomales se encuentra dentro de la capacidad del experto en la materia, de conformidad con lo divulgado, por ejemplo, en las 5 patentes norteamericanas No.4, 235, 871;4, 501, 728;4, 837, 028; y 4,737,323 y todas las cuales se incorporan aquí por referencia. La cantidad de proteína u otro ingrediente activo de la presente invención en la composición farmacéutica de la 10 presente invención dependerá de la naturaleza y severidad de la condición tratada, y de la naturaleza de tratamientos previos a los cuales el paciente ha sido sometido. Finalmente, el médico tratante decidirá la cantidad de • proteína y otro ingrediente activo de la presente invención 15 con el cual tratar cada paciente individual. Igualmente, el médico tratante administrará dosis bajas de proteína u otro ingrediente activo de la presente invención y observará la respuesta del paciente. Dosis más grandes de proteína u otro ingrediente activo de la presente invención pueden ser 20 administradas hasta lograr el efecto terapéutico óptimo para • el paciente, y en este punto la dosificación no es incrementada adicionalmente. Se contempla que las varias composiciones farmacéuticas utilizadas para practicar el método de la invención deben contener aproximadamente O.Olµg 25 a aproximadamente lOOmg, (de preferencia de aproximadamente -—--,-—-_.m_fc*_-__y,f,.J¿¡?__..l.? __-^c 0.1 µg a aproximadamente 10 mg con mayor preferencia de aproximadamente 0.1 µg a aproximadamente lmg) de proteína u otro ingrediente activo de la presente invención por Kg de peso corporal. Para composiciones de la presente invención que son útiles para regeneración de hueso, cartílago, tendón o ligamento, el método terapéutico incluye la administración de composición de manera tópica, sistemática o local en forma de implante o dispositivo. Cuando se administra la composición terapéutica para su uso de conformidad con la presente invención se encuentre evidentemente en una forma fisiológicamente aceptable, sin pirógeno. Además, la composición puede, según se desea, estar encapsulada o inyectada en una forma viscosa para administración al sitio del daño al hueso, cartílago o tejido. Puede ser adecuada para la curación de heridas y reparación de tejido. Agentes terapéuticamente útiles otros que una proteína o bien otros ingredientes activos de la presente invención que pueden también opcionalmente estar incluidos en la composición de conformidad con lo descrito arriba, pueden alternativa o ! adicionalmente, ser administrados simultáneamente o secuencialmente con la composición en los métodos de la invención. De preferencia para la formación de hueso y/o cartílago, la composición incluye una matriz capaz de administrar la composición que contiene proteína o bien la composición que contiene otro ingrediente activo al sitio del daño al hueso y/o cartílago proporcionando una estructura para el desarrollo de hueso y cartílago, óptimamente capaz de resorción en el cuerpo. Tales matrices pueden ser formadas de materiales actualmente en uso para otras aplicaciones médicas implantadas . La elección de material se basa en biocompatibilidad, bíodegradabilidad, propiedades mecánicas, apariencia cosmética y propiedades de interfaz. La aplicación particular de las composiciones define la formulación apropiada. Matrices potenciales para las composiciones pueden ser polianhídridos, ácido poliglicólico, ácido poliláctico, hidroxiapatita, fosfato tricálcico, sulfato de calcio biodegradables y químicamente definidos. Otros materiales potenciales son biodegradables y biológicamente bien definidos como por ejemplo colágena dérmica o bien ósea. Matrices adicionales consisten de proteína pura o bien componentes de matriz extracelular. Otras matrices potenciales no son biodegradables y químicamente definidas como por ejemplo hidroxiapatita sinterizada, biovidrio, aluminatos u otras cerámicas. Matrices pueden ser formadas de combinaciones de cualesquiera de los tipos de materiales mencionadas arriba como por ejemplo ácido poliláctico e hidroapatita o colágena y fosfato tricálcico. Las biocerámicas pueden ser alteradas en composición, como por ejemplo en calcio-aluminato-fosfato y procesamiento para ...... -.¿-p^-.^ ..___..-_._^_^__as6_„ ^.__j-_<_?_?ff^_y ^a '* alterar tamaño de poros, tamaño de partículas, forma de partículas y biodegradabilidad. Actualmente se prefiere un copolímero 50:50 (peso molar) de ácido láctico y ácido glicólico en forma de partículas porosas que tienen un 5 diámetros dentro de un rango de 150 a 800 mieras. En algunas aplicaciones, será útil utilizar un agente de secuestro, como por ejemplo carboximetilcelulosa o bien coagulo sanguíneo j^k autólogo para evitar que las composiciones de proteína se separan de la matriz. 10 Una familia preferida de agentes de secuestro es materiales celulósicos como por ejemplo alquilcelulosas (incluyendo hidroxialquilcelulosa) , incluyendo metilcelulosa, ^_ etilcelulosa, hidroxietilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, 9 hidropropil-metilcelulosa, y carboxiiceluiosa, los más 15 preferidos siendo sales catiónicas de carboxilmetilcelulosa (CMS) otros agentes de secuestro preferidos incluyen ácido ialurónico, alginato de sodio poli (etilenglicol) , óxido de polioxietileno, poli (etilenglicol) , óxido de polioxietileno, polímero de carboxivinilo, poli (alcohol vinílico). La 20 cantidad de agente de secuestro útil aquí es de 0.5 a 20% en peso, de preferencia de 1 a 10% en peso, con base en el peso total de la formulación, que representa la cantidad necesaria para prevenir la resorción de la proteína de la matriz de polímeros y para proporcionar un manejo apropiado de la 25 composición, pero no tanto que las células progenitoras no puedan infiltrarse en la matriz, proporcionando por consiguiente a la proteína la oportunidad de ayudar en la actividad osteogénica de las células progenitoras. En composiciones adicionales, proteínas o bien otros 5 ingredientes activos de la invención pueden combinarse con otros agentes benéficos para el tratamiento del defecto, herida o tejido óseo y/o de cartílago en cuestión. Estos factores incluyen varios factores de crecimiento tales como factor de crecimiento epidérmico (EGF) , factor de crecimiento 10 derivado de plaquetas (PDGF) , factores de crecimiento transformantes (TGF-alfa y TGF-beta) , así como factor de crecimiento de tipo insulina (IGF) . Las composiciones terapéuticas son también actualmente • valiosas para aplicaciones veterinarias. Animales domésticos 15 particularmente y especialmente caballos de pura sangre además de seres humanos, son pacientes contemplados para dicho tratamiento con proteínas u otros ingredientes de la presente invención. El régimen de dosificación de una composición farmacéutica que contiene proteína a emplear en 20 la regeneración de tejido será determinado por el médico tratante considerando varios factores que modifican la acción de las proteínas, por ejemplo, cantidad de peso tisular que se desea formar, sitio del daño, condición del tejido dañado, tamaño de una herida, tipo de tejido dañado (por ejemplo 25 hueso) , edad del paciente, sexo y dieta de dicho paciente, ___.„__„__«j__ .._-_^.pi«*_-.- severidad de la infección, hora de acfcnínístración y otros factores clínicos, la dosificación puede variar con el tipo de matriz que se emplea en la reconstitución y con inclusión de otras proteínas en la composición farmacéutica. Por ejemplo, la adición de otros factores de crecimiento conocidos como por ejemplo IGF I (factor de crecimiento de tipo insulina I) , a la composición final, puede también tener un efecto sobre la dosificación. El progreso puede ser monitoreado por evaluación periódica de crecimiento tisular/óseo y/o reparación, por ejemplo rayos X determinaciones histomorfemétricas y marcado de tetraciclina. Polinucleótidos de la presente invención pueden también ser utilizados para terapia génica. Tales polinucleótidos pueden ser introducidos ya sea in vivo o ex vivo en células para expresión en un sujeto mamífero. Pclinucleótidos de la presente invención pueden también ser administrados por otros métodos para la introducción de acide nucleótido en una célula u organismo (incluyendo sin limitación, en forma de vectores virales o ADN desnudos) . Células pueden ser también cultivadas ex vivo en la presencia de proteínas de la presente invención con el objeto de proliferar o para producir un efecto deseado sobre la actividad en tales células. Células tratadas pueden ser reproducidas in vivo para propósitos terapéuticos. 4.9.3. DOSIFICACIÓN EFECTIVA Composiciones farmacéuticas adecuadas para su uso en la presente invención incluyen composiciones en donde los ingredientes activos se encuentran en una cantidad efectiva para lograr su propósito contemplado. Más específicamente, una cantidad terapéuticamente efectiva significa una cantidad efectiva para prevenir el desarrollo o para mitigar síntomas existentes del sujeto tratado. La determinación de la cantidad efectiva es dentro de la capacidad de las personas expertas en la materia, especialmente tomando en cuenta la divulgación detallada proporcionada aquí. Para un compuesto utilizado en el método de esta invención, la dosis terapéuticamente efectiva puede ser estimada inicialmente a partir de ensayos in vi tro apropiados. Por ejemplo, una dosis puede ser formulada en modelos de anímales para lograr un rango de concentración circulante que puede emplearse para determinar con mayor precisión dosis útiles en seres humanos. Por ejemplo, una dosis puede ser formulada en modelos de animales para lograr un rango de concentración circulante que incluye la IC50 de conformidad con lo determinado en cultivo celular (es decir, la concentración de compuesto de prueba que logra una inhibición semimáxima de la actividad biológica de la proteína. Dicha información puede ser utilizada para determinar con mayor precisión dosis útiles en seres humanos. Una dosis terapéuticamente se refiere a la cantidad del compuesto que resulta en una mejora de los síntomas o una prolongación de la supervivencia en un paciente. La toxicidad y la eficacia terapéutica de tales compuestos pueden determinase por procedimientos farmacéuticos estándares en cultivos celulares o animales de experimento, por ejemplo, para determinar la LD50 (la dosis letal para el 50% de la población) y la ED50 (la dosis terapéuticamente efectiva en el 50% de la población) . La proporción de dosis entre los efectos tóxicos y los efectos terapéuticos es lo que se conoce como el índice terapéutico y puede expresarse como la proporción entre LD50 y ED50. Compuestos que presentan altos índices terapéuticos son compuestos preferidos. Los datos obtenidos de estos ensayos de cultivo celular y estudios en animales pueden utilizarse para formular un rango de dosificación para uso en seres humanos. La dosificación de los compuestos se encuentra de preferencia dentro de un rango de concentración de circulantes que incluyen la ED50 con poca o ninguna toxicidad. La dosificación puede variar dentro de este rango según la forma de dosificación empleada y la vía de administración utilizada. La formulación exacta, vía de administración y dosificación pueden ser seleccionadas por el médico tomando en cuenta la condición del paciente. Véase, por ejemplo, Fingí et al., 1975, en "The Pharmacological Basis of Therapeutics" (Las Bases Farmacológicas de los Agentes Terapéuticos), capítulo 1, página. Cantidad de dosificación e intervalo pueden ser ajustados individualmente para proporcionar niveles plasmáticos de la porción activa que son suficientes para mantener los efectos deseados, o bien concentración efectiva mínima (MEC) . La MEC varía con cada compuesto pero puede ser estimada a partir de datos in vitro. Dosificaciones necesarias para lograr la MEC dependerán de características individuales y vía y de administración. Sin embargo, ensayos HPLC o bien bioensayos pueden ser utilizados para determinar las concentraciones plasmáticas. Intervalos de dosificación pueden también ser empleando valor MEC. Compuestos deben ser administrados utilizando un régimen que mantiene los niveles plasmáticos arriba de la MEC durante 10-90% del tiempo, de preferencia entre 30-90% y con mayor preferencia entre 50 y 90% del tiempo. En casos de administración local o de absorción selectiva, la concentración local efectiva del fármaco puede no ser relacionado con la concentración plasmática. ' Un régimen de dosificación ejemplar para polipéptidos o bien otras composiciones de la invención se encontrará dentro de un rango de aproximadamente 0.01 micro g/kg a 100 mg/kg de 1 peso corporal diariamente, con la dosis preferida siendo de aproximadamente 0.1 µg/kg a 25 mg/kg de peso corporal i diariamente, variando en adultos y niños. La dosificación puede ser una vez al día o bien dosis equivalente pueden ser administradas a intervalos mayores o menores. __A^-________-_*.....-___ta__^ La cantidad de composición administrada dependerá evidentemente del sujeto tratado, de la edad del sujeto y de su peso, de la severidad del padecimiento, de la forma de administración y del oficio del médico tratante. 4.9.4. EMPAQUE Las composiciones pueden, si se desea, presentarse en un empaque o dispositivo surtidor que puede contener una o varias formas de dosificación unitarias que contienen el ingrediente activo. El paquete puede comprender, por ejemplo, hoja de metal o de plástico, como por ejemplo el empaque de tipo blister. El paquete o dispositivo surtidor puede estar acompañado por instrucciones de administrados, composiciones que comprenden un compuesto de la presente invención formulado en un vehículo farmacéutico compatible pueden también ser preparadas, colocadas en un recipiente apropiado, y marcadas para tratamiento de una condición indicada. 4.10. ANTICUERPOS 4.10.1. ANTICUERPOS HUMANOS Anticuerpos totalmente humanos se refieren a moléculas de anticuerpo en donde esencialmente todas las secuencias tanto de la cadena ligera como de la cadena pesada, incluyendo las CDRs provienen de genes humanos. Tales anticuerpos se conocen como "anticuerpos humanos" o bien "anticuerpos totalmente humanos" aquí, anticuerpos monoclonales humanos pueden ser preparados por la técnica de trioma: la técnica de hibridoma de células B humana (Véase Ckozbor, y colaboradores 1983 Immunol Today 4:72) y la técnica de híbridoma EVB para producir anticuerpos monoclonales humanos (véase Colé y colaboradores 1985 en: Monoclonal Antibodies and Cáncer Therapy (Anticuerpos Monoclonales y Terapia contra el Cáncer), Alan R. Liss Inc. pp. 77-96). Anticuerpos monoclonales humanos pueden ser utilizados en la práctica de la presente invención y pueden ser producidos mediante el uso de híbrido as humanos (véase Cote y colaboradores 1983. Proc. Natl Acad Sci USA 80:2026-2030) o bien mediante la transformación de células B humanas con el virus de Epstein Barr (véase Colé y colaboradores 1985 en: Monoclonal Antibodies and Cáncer Therapy (Anticuerpos Monoclonales y Terapia contra el Cáncer) Alan R. Liss. Inc. pp.77-96) . Además, anticuerpos humanos pueden también ser producidos empleando técnicas adicionales incluyendo bibliotecas de despliegue de fagos (hoogenboom and Winter. J. Mol. Biol., 227:381(1991); Marks y colaboradores J. Mol. Biol 222:581 (1991) ) . De manera similar, anticuerpos humanos pueden ser elaborados mediante la introducción de loci de inmunoglobulina humana en animales transgénicos por ejemplo ratones en los cuales los genes de inmunoglobulina endógena han sido parcial o totalmente desactivados. Al ocurrir un reto, se observa la producción de anticuerpos humanos que se parece cercanamente a lo observado en seres humanos en todos los aspectos incluyendo reacomodación de genes, ensamblaje, y repertorio de anticuerpos . Este enfoque se describe, por ejemplo, en las patentes norteamericanas números 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 5,661,016, y en 5 Marks y colaboradores (Bio/Technology 10, 779-783 ' (1992) ) ; Lonberg y colaboradores (nature 368 856-859 (1994)); Morrison I .Nature 368, 812-13 (1994)); Fishwild y colaboradores (Nature Biotechnology 14, 845-51 (1996)); Neuberger (Nature • Biotechnology 14, 826 (1996); y Lonberg y Huszar (Intern. 10 Rev. Immunol. 13 65-93 (1995)). Anticuerpos humanos pueden ser producidos adicionalmente utilizando animales no humanos transgénicos que son modificados con el objeto de construir anticuerpos totalmente humanos en vez de los anticuerpos endógenos de animales en 15 respuesta a reto por un antígeno (véase publicación PCT WO94/02602) . Los genes endógenos que codifican las cadenas pesadas y ligeras de inmunoglobulina en el huésped no humano han sido incapacitados, y los activos que codifican en la cadena pesada y la cadena ligera de inmunoglobulina se 20 insertan en el genoma del huésped. Los genes humanos son ^P^ incorporados, por ejemplo empleando cromosomas individuales de levadura que contienen los segmentos de ADN humanos requeridos. Un animal que proporciona todas las modificaciones deseadas es obtenido por consiguiente como 25 progenie por cruzamiento intermedio de animales transgénicos que contienen menos que el complemento entero de las modificaciones. La modalidad preferida de dicho animal no humano es un ratón y se conoce como Xenomouse® de conformidad con lo divulgado en las publicaciones PCT W096/33735 y WO 96/34096. Este animal produce células B que secretan inmunoglobulinas humanas enteras. Los anticuerpos pueden ser obtenidos directamente del animal después de inmunización con un inmunógeno de interés, como por ejemplo una preparación de un anticuerpo policlonal o bien alternativamente a partir de células B inmortalizadas derivadas del animal, tales como híbridomas que producen anticuerpos monoclonales. Además, los genes que codifican las inmunoglobulinas con regiones variables humanas pueden ser recuperados y expresados para obtener los anticuerpos directamente, o bien pueden ser modificados adicionalmente para obtener análogos de anticuerpos como por ejemplo moléculas de Fv de cadena única. Un ejemplo de un método para producir un huésped no humano, ejemplificado en forma de un ratón, que no tiene expresión de una cadena pesada de inmunoglobulina endógena es divulgado en la patente norteamericana número 5,939,598. puede ser obtenido por un método que incluye la remoción de genes de segmento J de por lo menos un locus de cadena pesada endógena en una célula madre embriónica para prevenir el reacomodo del locus para evitar la formación de un transcripto de un locus de cadena pesada de inmunoglobulina de reacomodado, la ____. ....^.^.«fr.- __._*.. rf_í?f ?ft___-fi. deleción lográndose a través de un vector de direccionamiento que contiene un gen que codifica un marcador seleccionabie; y la producción, a partir de la célula madre embriónica de un ratón transgénico cuyas células somáticas y germinales contienen el gen que codifica el marcador seleccionable. Un método para la producción de un anticuerpo de interés, como por ejemplo anticuerpo humano, es divulgado en la patente norteamericana número 5,916,771. incluye la introducción de un vector de expresión que contiene una secuencia de nucleótidos que codifica una cadena pesada en una célula huésped de mamífero en cultivo, la introducción de un vector de expresión que contiene una secuencia de nucleótidos que codifica una cadena ligera en otra célula huésped de mamífero, y la fusión de las dos células para formar una célula híbrida. La célula híbrida expresa un anticuerpo que contiene la cadena pesada y la cadena ligera. En una mejora adicional de este procedimiento, un método para identificar un epítopo clínicamente relevante en un inmunógeno, y un método correlativo para seleccionar un anticuerpo que se une inmunoespecíficamente sobre el epítopo relevante con alta afinidad, se describen en la publicación PCT WO99/53049. 4.10.2. FRAGMENTOS FAB Y ANTICUERPOS DE CADENA ÚNICA De conformidad con la presente invención, técnicas pueden ser adaptadas para la producción de anticuerpos de cadena única específicos para una proteína antigénica de la invención (véase, por ejemplo, patente norteamericana número 4,946,778). Además, métodos pueden ser adaptados para la construcción de bibliotecas de expresión de Fab (véase, por ejemplo Huse y colaboradores, 1989 Science 246: 1275-1281) para permitir una identificación rápida y efectiva de fragmentos Fab monoclonales con la especificidad deseada para una proteína o derivados, fragmentos, análogos u homólogos de la misma. Fragmentos de anticuerpos que contienen los ideotipos para un antígeno de proteína pueden ser producidos por técnicas conocidas, incluyendo, sin limitarse a ellos: (i) un fragmento f(ab'2) producido por digestión de pepsina de una molécula de anticuerpo; (ii) un fragmento F(ar) generado mediante la reducción de los puentes disulfuro de un fragmento F(ab'2); (iii) un fragmento Fíab) generado por el tratamiento de la molécula de anticuerpo con papaina y un agente reductor y (iv) fragmentos F(b) . 4.10.3 ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS Anticuerpos biespecíficos son anticuerpos monoclonales, de preferencia humanos o humanizados que tienen especificidades de enlace para por lo menos dos antígenos diferentes. En el presente caso, una de las especificidades de enlace es para una proteína antigénica de la invención. El segundo blanco de enlace es otro antígeno, y de manera provechosa, es una proteína de superficie celular o receptor o subunidad de t^--^^^ ^ ^ receptor. Métodos para elaborar anticuerpos biespecíficos son conocidos en la técnica. Tradicionalmente, la producción recombinante de anticuerpos biespecíficos se basa en la coexpresión de dos pares de cadenas pesada/cadena ligera de inmunoglobulina, en donde las dos cadenas pesadas tienen especificidades diferentes (Milstein and Cuello. Nature. 305:537-539 (1983(). Debido a la clasificación aleatoria de cadenas pesadas y ligera de inmunoglobulina, estos híbridomas (cuadromas) producen una mezcla potencial de 10 moléculas de anticuerpo diferentes, de las cuales solamente una tiene la estructura biespecífica correcta. La purificación de la molécula correcta es lograda habitualmente por pasos de cromatografía de afinidad. Procedimientos similares son divulgados en el documento W093/8829, publicado el día 13 de mayo de 1993 y en Traunecker y colaboradores, 1991 EMBO J., 10:3655-3659. Dominios variables de anticuerpos con las especificidades de enlace deseadas (sitios de combinación anticuerpos-antígenos) . Dominios variables de anticuerpos con las especificidades de enlace deseadas (sitios de combinación anticuerpo-antígeno) pueden ser fusionados sobre secuencias de dominio constante de inmunoglobulina. La fusión de preferencia es con un dominio constante de cadena pesada de inmunoglobulina, que comprende por lo menos parte de las regiones de bisagra CH2 y CH3. es preferible que la primera «ijtiijjjW^ii?? jti i región constante de cadena pesada (CH1) que contiene el sitio necesario para el enlace de cadena ligera este presente en por lo menos una de las fusiones. Los ADNs que codifican las fusiones de cadena pesada de inmunoglobulina, y, si se desea la cadena ligera de inmunoglobulina, están insertados en vectores de expresión separados, y son cotransfectados en un organismo huésped adecuado. Para detalles adicionales de la generación de anticuerpos biespecíficos, véase, por ejemplo, Suresh y colaboradores Methods in Enzymology (Métodos en Encimología) 121:210 (1986). De conformidad con otro enfoque descrito en el documento WO96/27011, la interfaz entre en un par de moléculas de anticuerpo puede ser manipulada con el objeto de manipular el porcentaje de heterodímeros recuperaaos de cultivo de células recombinantes. La interfaz preferida comprende por lo menos una parte de la región CH3 de un dominio constante de anticuerpo. En este método, una o varias cadenas laterales "de aminoácidos a partir de la interfaz de la primera molécula de anticuerpo son reemplazadas con cadenas laterales más grandes (por ejemplo tirosina o triptofano) . Cavidades compensatorias de tamaño idéntico o similar a la(s) cadena (s) lateral grande se crean en la Interfaz de la segunda molécula de anticuerpo mediante el reemplazo de grandes cadenas laterales de aminoácidos por pequeñas cadenas (por ejemplo, alanína o trionina) . Esto proporciona un mecanismo para incrementar la iü producción del heterodímero con relación a otros productos finales no deseados tales como homodímeros. Anticuerpos biespecíficos pueden ser preparados como anticuerpos de longitud completa o fragmentos de anticuerpos (por ejemplo anticuerpos biespecífico Fíab-2) • Técnicas para generar anticuerpos biespecíficos a partir de fragmentos ele I anticuerpos han sido descritos en la literatura. Por ejempljo, I anticuerpos biespecíficos pueden ser preparados empleando enlace químico. Brennan y colaboradores, Science 229:Si (1985) describen un procedimiento en donde anticuerpos intactos son proteolíticamente disociados para generar fragmentos F.a_ 2- estos fragmentos son reducidos en presencia del agente de formación de complejo ditiol arcenita sódica para estabilizar ditioles vecinales y evitar la formación de dísulfuro intermolecular. Los fragmentos Fab' generados son después convertidos en derivados de trionitrobenzoato (TNV . Uno de los derivados de Fab'T?B es después convertido en el Fab'- tilo mediante la reducción con mercaptoetila ina y be mezcla con la cantidad etimolar de otro derivado de Fab'-T?B para formar el anticuerpo biespecífico. Los anticuerpps biespecíficos producidos pueden ser utilizados como agente para la inmovilización selectiva de enzimas. I Además, fragmentos Fab' pueden ser recuperados directamente a partir de E. coli, y acoplados químicamente para formar anticuerpos biespecíficos. Shalaby y colaboradores J. Exp. t¡M^....,__.-__rtl|__-rt--.a--, _____ Med. 175:217-225 (1992) describen la producción de moléculas de anticuerpos biespecíficos totalmente humanizado F(ab')_. cada fragmento de Fab' fue secretado separadamente a partir de E. coli y sometido a acoplamiento químico dirigido in 5 vitro para formar el anticuerpo biespecífico. El anticuerpo biespecífico formado de esta manera pudo unirse a células que sobreexpresan el receptor ErB2 y células T humanas normales así como desencadenar la actividad lítica de linfocitos citotóxicos humanos contra tumores mamarios humanos 10 objetivos. Varias técnicas para elaborar y aislar fragmentos de anticuerpo biespecíficos directamente a partir del cultivo de células recombinante han sido descritas también. Por ejemplo, • anticuerpos biespecíficos han sido producidos empleando 15 cierres de leucina. Kostelny y colaboradores J. Immunol. 148(5): 1547-1553 (1992). Los péptidos de cierre de leucina a partir de las proteínas Fos y Jun fueron enlazados a las porciones Fab'de dos anticuerpos diferentes por fusión de genes. Los homodímeros de anticuerpo fueron reducidos en la 20 región de bisagra para formar monómeros y después reoxidados • para formar los heterodímeros de anticuerpo. Este método puede también ser utilizados para la producción de homodímeros de anticuerpo. La tecnología "diabody" descrita por Hollinger y colaboradores Proc. Natl. Acad. Scí. USA 25 90:64444-6448 (1993) ha proporcionado un mecanismo |j i-__^..é-_-. ,_.,__^^^ alternativo para preparar fragmentos de anticuerpos específicos. Los fragmentos comprenden un dominio variable de cadena pesada (VH) conectado a un dominio variable de cadena ligera (VL) por un enlazador que es demasiado corto para permitir el apareamiento entre los dos dominios de la misma cadena. Por consiguiente, los dominios VH y VL de un fragmento deben forzosamente deben aparearse con los dominios complementarios VL y VH de otro fragmento, formando de esta manera dos sitios de enlace de antígeno. Otra estrategia para preparar fragmentos de anticuerpo biespecíficos mediante el uso de dímeros Fv de cadena única (sFv) ha sido reportada también. Véase también Gruber y colaboradores J. Immunol, 152:5368 (1994). Anticuerpos con más que dos valencias se contemplan dentro del marco de la presente invención. Por ejemplo, se pueden preparar anticuerpos triespecífieos. Tutt y colaboradores J. I munol. 147:60 (1991) . Anticuerpos biespecíficos ejemplares pueden unirse a dos epítopos diferentes, por lo menos, uno de los cuales se origina en el antígeno de proteína de la invención. Alternativamente un brazo anti-antigénico de una molécula de inmunoglobulina puede ser combinada con un brazo que se une a una molécula activadora en un leucocito como por ejemplo molécula receptora de células T (por ejemplo CD2, CD3, CD28, o B7) , o bien receptores Fe para IgG (Fe R) , como por ejemplo Í-_-_-_¿j_-- _a jgm-jft, ..._--_----_ .*_-_-.-_-Fe Rl (CD64), Fe Rll (CD32) y Fe RUI (CD16) con el objeto de enfocar mecanismos de defensa celular hacia la células que expresa el antígeno particular. Anticuerpos biespecíficos pueden también ser utilizados para dirigir agente citotóxicos hacia células que expresan un antígeno particular. Estos anticuerpos poseen un brazo de enlace con antígeno y un brazo que se une con un agente citotóxico o un quelador de radionúclido, como por ejemplo EOTUBE, DPTA, DOTA o TETA. Otro anticuerpo biespecífico de interés une el antígeno de proteína descrito aquí y une adicionalmente factor tisular (TF) . 4.10.4. ANTICUERPOS HETEROCONJUGADOS Anticuerpos heteroconjugados se encuentran también dentro del alcance de la presente invención. Anticuerpos heteroconjugados consiste de dos anticuerpos unidos covalentemente. Tales anticuerpos han sido propuestos, por ejemplo, para enfocar células del sistema inmune hacia células no deseadas (patente norteamericana número 4,676,980) y para el tratamiento de infección por VIH (Wo 91/00360; WO 92/200373: EP 03089). Se contempla que los anticuerpos pueden ser preparados in vi tro empleando métodos conocidos en la química de proteína sintética, incluyendo los que involucran agentes de reticulación. Por ejemplo, inmunotoxinas pueden ser construidas empleando una reacción de intercambio de disulfuro o bien mediante la formación de un enlace tioéter. .^k MM ^y.^Lá?.*.iíBÍ^?,?t í,^y?t £^. ^.^bJ Ejemplos de reactivos adecuados para este propósito incluyen íminotiolato y metil-4-mercaptobutirimidato y los divulgados, por ejemplo, en la patente norteamericana número 4,676,980. 4.10.5 MANIPULACIÓN DE LA FUNCIÓN EFECTORA 5 Puede ser deseable modificar el anticuerpo de la invención con relación a la función efectora con el objeto de t incrementar por ejemplo la efectividad del anticuerpo en el tratamiento del cáncer. Por ejemplo, residuo (s) de cisteina puede (n) ser introducido (s) en la región Fe permitiendo así 10 la formación de un enlace disulfuro entre cadena en esta región. El anticuerpo homodimérico generado de esta manera puede tener una capacidad de internalización mejorada y/o una capacidad de matar células mediada por complemento incrementada así como una mayor citotoxidad celular 15 dependiente de anticuerpos (ADCC) . Véase Carón y colaboradores J. Exp. Med. 176:1191-1195(1992) y Shopes. J. Immunol. 148:2918-2922 (1992) . Anticuerpos homodiméricos con actividad antitumor incrementada pueden también ser preparados utilizados reticuladores heterobifuncionales de 20 conformidad con lo descrito en Wolf y colaboradores, Cáncer Research. 53:2260-2565 (1993) . Alternativamente, un anticuerpo puede ser manipulado el cual tiene dos regiones Fe y por consiguiente puede tener capacidades de DAC y lisis de complemento incrementadas. Véase Stevenson y colaboradores 25 Anti-Cancer Drug Design (diseño de fármaco anticáncer) 3:2119-230 (1989) . 4.10.6 INMUNOCONJUGADOS La invención se refiere también a inmunoconjugados qué comprenden un anticuerpo conjugado con un agente citotó ico 5 como por ejemplo agente quimioterapéutico, toxina, (por ejemplo una toxina enzimáticamente activa de origen bacteriano, fungal, vegetal, o animal o fragmentos de la misma) , o bien un isótopo radioactivo (es decir un radioconjugado) . 10 Agentes quimioterapéuticos útiles en la generación de tales inmunoconjugados han sido descritos arriba. Toxinas enzimáticamente activas y fragmentos de las mismas que pueden ser utilizadas incluyen cadena A de disteria, fragmentos # activos no de enlace de toxinas de difteria, cadena de 15 exotoxina A (de Pseudomonas aeruginosa) , cadena A de rícína, cadena A de ricina, cadena de abrina, cadena A de modecina, alfa-sarcina, proteínas de Aleurites fordii, y proteínas de diantina. Proteínas de Phytolaca americna (PAPI, PAPII, y PAP-S) , inhibidor de momordica charantia, curcina, crotina, 20 inhibidor de sapaonaria officinalis, gelonina, mitogelina, # restrictocina, fenomicina, enomicina y los tricotecenos. Varios radionúclidos están disponibles para la producción de anticuerpos radioconjungados. Ejemplos incluyen 21Bi, 131I, 131?„. 90Y, y 186Re. 25 Conjugados del anticuerpo y agente citóxico se elaboran utilizando varios agentes de acoplamiento de proteína bifuncional como por ejemplo propionato de N-succinimídil-3- (2-piridilditiol) (SPDP) , iminiotolano (IT), derivados bifuncionales de imidoésteres (tales como adipimidato de , 5 dimetilo HCL), esteres activos (como por ejemplo suberato de disuccini idilo) , aldehidos (como por ejemplo gluteraldehido. compuestos bis-azido (como por ejemplo p-azidobei?zoil. j^k hexandiamina) , derivados de bis-adiazonio (como por ejemplo bis (p-diazonibenzoil) -etilendiamina) , diisocianatos (como ._>©_• 10 ejemplo 2, 6-diisocianato de tolueno), compuestos de fl or bis-activos (como por ejemplo 1, 5-difluoro-2#4- dinitrobenceno) . Por ejemplo, una inmunotoxina de ricina puede ser preparada de conformidad con lo descrito con Vítetta y colaboradores Science, 238:1098(1987). Ácido 1- 15 isotiocianatobencil-3-metildietilentriaminpentaacético marcado con carbono 14 (MX-DTPA) es un agente de quelación ejemplar para conjugación de radionucleótido con el anticuerpo. Véase WO94/11026. In otra modalidad, el anticuerpo puede ser conjugado aún 20 "receptor" (como por ejemplo estreptavidina) para su utilización en el preenfoque de tumor en donde el conjugado anticuerpo-receptor es administrado al paciente, seguido por la remoción del conjugado no unido de la circulación empleando un agente de depuración y después la administración 25 de un "ligando" (por ejemplo avidina) de tal manera que se conjugue a su vez en un agente citotóxico. 4.11. SECUENCIAS LEGIBLES EN COMPUTADORA En una aplicación de esta modalidad, una secuencia de nucleótidos de la presente invención puede ser registrada en medio legible en computadora. Como se emplea aquí, la expresión "medio legible en computadora" se refiere a cualquier medio que puede ser leído y accesado directameaté por una computadora. Tales medios incluyen, sin limitarse a ellos, medios de almacenamiento magnéticos, por ejemplo discos blandos, medio de almacenamiento en disco duro, y cinta magnética; medios de almacenamiento ópticos tales como CD-ROM; medios de almacenamiento eléctricos tales como RAM y ROM, así como híbridos de estas categorías tales como medios de almacenamiento magnéticos/ópticos. Un experto en la materia observará fácilmente que cualesquiera de los medios legibles en computadora actualmente conocidos pueden ser utilizados para crear una manufactura que comprende un medio legible en computadora que tiene registrado allí una secuencia de nucleótidos de la presente invención. Como se emplea aquí, el término "registrado" se refiere a un proceso para almacenar información en medio legible en computadora. Un experto en la materia adoptará fácilmente cualesquiera de los métodos conocidos actualmente para registrar información en medio legible en computadora con el objeto de generar manufacturas que comprenden la información de secuencia de nucleótidos de la presente invención. Varias estructuras de almacenamiento de datos están disponibles a un experto en la materia para crear un medio legible en computadora que tiene registrado allí una $ secuencia de nucleótidos de la presente invención. La elección de la estructura de almacenamiento de datos se basará generalmente en los medios seleccionados para tener acceso a la información almacenada. Además, varios programas de procesador de datos y formatos pueden ser utilizados para 10 almacenar la información de secuencia de nucleótidos de la presente invención en medio legible en computadora. La información de secuencias puede ser representada en un archivo de texto de procesador de palabras, formateada en • programática disponible en el comercio como por ejemplo 15 WordPerfect y Microsoft Word, o bien representada en forma de un archivo ASCII, almacenada en una aplicación de base de datos como por ejemplo DB2. Sybase, Oracle o similar. Un experto en la materia puede adaptar fácilmente cualquier número de formatos de estructuración de procesador de datos 20 (por ejemplo, archivo de textos o base de datos) con el • objeto de obtener un medio legible en computadora que tiene registrado así la información de secuencia de nucleótidos de la presente invención. Proporcionando cualesquiera de las secuencias de nucleótidos 25 SEQ ID No: 1-22, 24, 26-27, 29, o 33 o bien un fragmento _____ -_____«---_--_-----.„__-__--^_-^J^-_-_-------to-^¿ representativo de la misma, o bien una secuencia de nucleótidos que tiene una identidad de por lo menos el 95% con cualesquiera de las secuencias de nucleótidos SEQ ID No: 1-22, 24, 26-27, 29 o 33 en formato legible en computadora, un experto en la materia puede accesar de manera rutinaria la información de secuencia ¡para varios propósitos. Una I programática de computadora ^stá disponible públicamente la cual permite a un experto en la materia accesar la información de secuencia proporcionada en un medio legible en computadora. Los ejemplos que siguen demuestran cómo la programática que implementa los algoritmos de búsqueda BLAST (Altschul y colaboradores J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990)) y BLAZE (Brutlag y colaboradores comp. Chem 17:203-207 (1993)) en un sistema Sybase se utiliza para identificar marcos de lectura abiertos ORFs dentro de una secuencia de ácido nucleico. Tales ORFs pueden ser fragmentos codificadores de proteína y pueden ser útiles para la producción de proteína comercialmente importantes talles como encimas utilizadas en reacciones de fermentación y en la producción de metabolitos comercialmente útiles. Como se emplea aquí, la 'expresión "sistema basado en computadora" se refiere a un dispositivo de equipo, dispositivo de programática, y dispositivo de almacenamiento de datos que se emplean para analizar la información de secuencia de nucleótidos de la presente invención. El equipo t_.-_-.J-_-_M-- ---t-___------_-- !_Lii ^^^jg mínimo se refiere a los sistemas basados en computadora de la presente invención que comprenden una unidad central de procesamiento (CPU) , un dispositivo de entrada, un dispositivo de salida, un dispositivo de almacenamiento de datos. Un experto en la materia podrá observar fácilmente que cualesquiera de los sistemas basados en computadora actualmente disponibles es adecuado para su uso en la presente invención. Como se estableció arriba, los sistemas basados en computadora de la presente invención comprenden un dispositivo de almacenamiento de datos que tiene almacenado allí una secuencia de nucleótidos de la presente invención y los dispositivos de equipo necesarios y los dispositivos de programática suficientes para soportar e implementar un dispositivo de búsqueda. Como se emplea aquí, la expresión "dispositivo de almacenamiento de datos" se refiere a una memoria que puede almacenar información de secuencias de nucleótidos de la presente invención, o bien un dispositivo de acceso a memoria que puede accesar manufacturas que tienen registradas allí la información de secuencias de nucleótidos de la presente invención. Como se emplea aquí, la expresión "dispositivo de búsqueda" se refiere a uno o varios programas implementados en el sistema basado en computadora para comparar la secuencia objetiva o el motivo estructural objetivo con la información de secuencia almacenada dentro del dispositivo de almacenamiento de datos. Dichos medios de búsqueda son utilizados para identificar fragmentos y regiones de una secuencia conocida que corresponden con una secuencia objetivo particular o un motivo objetivo particular. Varios algoritmos conocidos son divulgados públicamente y varias j programáticas y están disponibles en el comercio para llevar a cabo búsquedas y pueden utilizarse en los sistemas basados en computadora de la presente invención. Ejemplos de tales programáticas incluyen, sin limitarse a ellos, S ith- Katerman, MacPattern (EMBL) , BLASTN y BLAST (NPOLYPEPTI EI ) .

Un experto en la materia puede reconocer fácilmente que cualesquiera de los algoritmos disponibles o la implementación de paquetes de programática para llevar a -cabo búsquedas de homología pueden adaptarse para su uso en los sistemas basados en computadora de la presente invención. Como se emplea aquí "secuencia objetiva" puede ser cualquier secuencia de ácido nucleico o aminoácidos de 6 o más 1 nucleótidos de 2 o más aminoácidos . Un experto en la materia puede reconocer fácilmente que entre más larga una secuencia objetivo, menor es la probabilidad que una secuencia objetivo esté presente en ocurrencia aleatoria en la base de datos. La . longitud de secuencia más preferida de una secuencia objetivo i es de aproximadamente 10 a 100 aminoácidos o de aproximadamente 30 a 300 residuos de nucleótidos. Sin embargo, se sabe que búsquedas de fragmento comercialmente importantes como por ejemplo fragmentos de secuencias involucrados en la expresión génica y procesamiento de proteína, pueden ser de una longitud menor. Como se emplea aquí, las expresiones "un motivo estructura , 5 objetivo* o bien "motivo objetivo" se refieren a cualquier secuencia racionalmente seleccionada o combinación *de .4 ¡ secuencias en donde la.s) secuencia (s) se selecciona(n) on base en una configuración tridimensional que es formada al doblarse el motivo objetivo. Existen numerosos motivos 10 objetivos conocidos en la técnica. Motivos objetivos de proteína incluyen sin limitarse a estos, sitios activos de enzima y secuencias de señal. Motivos objetivo de ácido nucleeco incluye, sin limitarse a ello, secuencias promotoras, estructuras de pasador así como elementos de 15 expresión inducibles (secuencias de enlace de proteínas) . 4.12. FORMACIÓN DE LA TRIPLE HÉLICE Además, los fragmentos de la presente invención, de conformidad con lo descrito con los términos generales, pueden emplearse para controlar la expresión génica a través 20 de la formación de una tripe hélice o bien ADN, o bien ARN de antisentído, ambos métodos se basan en la unión de una secuencia de polinucleótidos con ADN o ARN. Polinucléotidos adecuados para su uso en estos métodos tienen habitualmente una longitud de 20 a 40 bases y son diseñados 25 para ser complementarios de una región del gen involucrada en la transcripción (triple hélice - ver Lee y colaboradores Nucí. Acids Res. 6:3073 (1979); Cooney y colaboradores Science 15241:456 (1988); y Dervan y colaboradores, Science 251:1360 (1990)) o bien del ARNm mismo (antisentido - Olaßio, J. Neuroches.. 56:560 (1991); OligodeoxynucleoticteS as Intisénse Inhibitors of Gene Expaíßs?áott fQligodesoxinucléotidos como inhibidores de antisentido da la expresión de genes], CRC Press. Boca Ratón. FL (1988)). La formación de triple bélice resulta óptimamente en un ci«*3ce de transcripción de ARN a partir de ADN, mientras <_ue la hibridación de ARN de antisentido bloquea la traducción de una molécula de ARNm en polipéptido. Ambas técnicas son efectivas en sistemas de modelo. La información contenida en las secuencias de la presente invención es necesaria paxa el diseño de un oligonucléotido de antisentido o triple hélice» 4.13 ENSAYOS Y KITS DE DIAGNÓSTICO La presente invención ofrece además métodos para identificar la presencia o expresión de uno de los ORFs de la presente invención, o bien homólogo del mismo, en una muestra de prueba, utilizando una sonda de ácido nucleico o anticuerpo-de la presente invención, opcionalmente conjugados 5 bien asociados de otra forma con un marcador adecuado. En general, métodos para detectar un polinucléotido de la presente invención pueden comprender la puesta en contacto de una muestra con un compuesto que se une y forma un complejo con el polinucléotido durante un período de tiempo suficiente para formar el complejo, y la detección del complejo, de tal manera que si se detecta un complejo, se detecta en la Muestra un polinucléotido de la invención. Tales métodos pueden comprender también la puesta en contacto de una ßuestra bajo condiciones estrictas de hibridación con cebadores de ácido nucleico que se fusionan con un olinucléotido de la presente invención en condiciones tales y amplificando los polinucléotidos fusionados de tal manera que si se amplifica un polinucléotido, se detecta en la muestra un polinucléotido de la presente invención. En general, métodos para detectar un polipéptido de la invención pueden comprender la puesta en contacto -de una muestra con un compuesto que se une y forma un complejo con el polipéptido durante un período de tiempo suficiente para formar el complejo, y detectar el complejo, de tal manera que si se detecta un complejo, se detecta en la muestra un polipéptido de la presente invención. Con detalles, tales métodos comprenden la incubación de una muestra de prueba con uno o varios de los anticuerpos o bien con una o varias de las sondas de ácido nucleico de la presente invención y el ensayo para enlace de las sondas de ácido nucleico o anticuerpos con componentes de la muestra de prueba. Las condiciones de incubación de una sonda de ácido nucleico o anticuerpo con una muestra de prueba varían. Las condiciones de incubación dependen del formato empleado en el ensayo de los métodos de detección empleado, y del tipo y naturaleza de las sondas de ácido nucleico o anticuerpo que ' 5 se utiliza en el ensayo. Una persona experta en la materia •reconocerá que cualesquiera de los formatos de ensayos inmunalógicos, amplificación o hibridación comúnmente ^ disponibles puede ser adaptado para emplear las sondas de ácido nucleico o anticuerpos de la presente invención. 10 Ijemplos de tales ensayos pueden encontrarse en Chard, T, An introduction to Radioimmunoassay and Related Techniques [Uiía introducción a radioinmunoensayo y técnicas relacionadas] , Elsevier Science Publishers, Ámsterdam. Los países bajos (1986) ; Bullock, G.R. y colaboradores, Technique in 15 Immunocytochemistry [Técnicas en inmunocitoquímica], Acaderaící <to Press Orlando. Fl. Volumen 1 (1982), Volumen 2 (1983). Volumen 3 (1985); Tijssuen, P. Practice and Theory of immunoassays: Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology [Práctica y teoría de inmunoensayos: 20 Técnicas de laboratorio en Bioquímica y biología molecular], Elsevier Science Publishers, Amsterdam. Los países bajos (1985) . Las muestras de prueba de la presente invención incluyen células, proteína o extractos de membranas de células o bien fluidos biológicos, por ejemplo, sputo, 25 sangre, suero, plasma u orina. La muestra de prueba utilizada en el método descrito arriba variará con base en el formato del ensayo, naturaleza del método de detección y tejidos, células o extractos utilizados como la muestra a ensayar. Métodos para preparar extractos de proteína o extractos de membrana de células son bien conocidos en la técnica y pueden ser fácilmente adaptados con el objeto de obtener una muestra compatible con el sistema utilizado. En otra modalidad de la presente invención, se proporcionan kits que contienen los reactivos necesarios para llevar a cabo los ensayos de la presente invención. Específicamente, la invención proporciona un kit de compartimiento para recibir, en confinamiento cerrado, uno o varios contenedores que comprende: (a) un -primer contenedor que comprende una de las sondas o anticuerpos de la presente invención; y (b) uno o varios otros contenedores que comprenden uno o varios de los siguientes: reactivos de lavado, reactivos capaces de detectar la presencia de una sonda o anticuerpo unido. Con detalles, un kit de compartimiento incluye cualquier kit en donde reactivos se encuentran en recipientes separados. Tales recipientes incluyen pequeños recipientes de Vidrio, recipientes de plástico o bien tiras de plástico o papel. Tales recipientes permiten que se pueda transferir de manera eficiente reactivos de un compartimiento a otro compartimiento de tal manera que las muestras y reactivos no se contaminen de manera cruzada, y de tal manera que los *> » ***>•*-______-___fc^_-É___^_^M¿,.AA.iJL agentes o soluciones de cada contenedor puedan ser agregados en forma cuantitativa de un compartimiento a otro. Tales contenedores incluyen un contenedor que acepta la muestra de prueba, un contenedor que contiene los anticuerpos utilizados en el ensayo, contenedores que contienen reactivos de lavado (por ejemplo solución salina amortiguada con fosfato, tri-amortiguadores, etc.), y contenedores que cojntienen los reactivos utilizados para detectar el anticuerpo o la sonda unida. Tipos de reactivos de detección incluyen sondas de ácido nucleico marcadas, anticuerpos secundarios marcados, o bien de manera alternativa, si el anticuerpo primario es marcado, los reactivos de enlace enzimáticos o de anticuerpo que son capaces de reaccionar con el anticuerpo marcado. Un experto en la materia reconocerá fácilmente que las sondas y anticuerpos divulgados de la presente invención pueden ser fácilmente incorporados en uno de los formatos de kit establecidos que son bien conocidos en la técnica. 4.14 FORMACIÓN DE IMAGEN MÉDICA Los polipéptidos novedosos y socios de enlace de la presente invención son útiles en la formación de imagen médica de sitios que expresan las moléculas de la invención (por ejemplo, cuando el polipéptido de la presente invención participa en la respuesta inmune, para formar imágenes de sitios de información o infección) . Ver, por ejemplo, Kunkel y colaboradores, U.S. Pat. NO. 5,413,778. Tales métodos .t*»fa-_-lfffftfff - *"* involucran la fijación química de un agente marcador o formador de imagen, la administración del polipéptido marcado a un sujeto en un vehículo farmacéuticamente aceptable, y la formación de imagen del polipéptido marcado in vivo en el 5 sitio objetivo. 4.15 ENSAYO DE TAMIZADO Utilizando las proteínas aisladas y los polinucléotidos de la invención, la presente invención proporciona además métodos para obtener e identificar agentes que se unen a un 10 polipéptido codificado por un ORF que corresponde a cualesquiera de la secuencias de nucleótidos presentadas en SEQ ID NO: 1-22, 24, 26-27, 29 o 33, o bien se unen a un dominio específico del polipéptido codificado por el ácido • nucleico. Con detalles, este método comprende los pasos de: 15 (a) poner en contacto un agente con una proteína aislada codificada por ORF de la presente invención, o ácido nucleico de la invención; y (b) determinar si el agente sé une con dicha proteína o dicho ácido nucleico. 20 En general, por consiguiente, tales métodos para identificar • compuestos que se unen a un polinucléotido de la presente invención pueden comprender la puesta en contacto de un compuesto con un polinucléotido de la invención durante un tiempo suficiente para formar un complejo 25 polinucléotido/compuesto, y detectar el complejo de tal ________!_.____;_»^__..__?_-a___ft| manera que si un complejo polinucléotido/compuesto es detectado, se identifica un compuesto que se une a un Polinucléotido de la presente invención. De la misma manera, en general, por consiguiente, tales 5 métodos para identificar compuestos que se unen a un polinucléotido de la invención pueden comprender la puesta en contacto de un compuesto con una polipéptido de la presente Ift invención durante un tiempo suficiente para formar un complejo polipéptido/compuesto, y detectar el complejo, de 10 tal manera que si se detecta un complejo polipéptido/compuesto, se identifica un compuesto que se une a un polinucléotido de la invención. Métodos para identificar compuestos que se unen a un polipéptido de la presente invención pueden también 15 comprender la puesta en contacto de un compuesto con un polipéptido de la invención en una célula durante un tiempo suficiente para formar un complejo polipéptido/compuesto, en donde el complejo activa la expresión de una secuencia de gen de receptor en la célula, y la detección del complejo por la 20 detección de la expresión de secuencia de gen reportero, de tal manera que si se detecta un complejo polipéptido/compuesto, se identifica un compuesto que se une a un polipéptido de la invención. Compuestos identificados a través de tales métodos pueden 25 incluir compuestos que modulan la actividad de un polipéptido tL? ?iímÉ^?^'^^ de la invención (es decir, incrementan o disminuyen su actividad con relación a la actividad observada en ausencia del compuesto) . Alternativamente, compuestos identificados a través de tales métodos pueden incluir compuestos que modulan la expresión de un polinucléotido de la invención (es decir, jdte los métodos de la presente invención, pueden ser probados utilizando ensayos estándares bien conocidos por parte de los expertos en la materia para determinar su capacidad de I modular actividad/expresión. Los agentes tamizados en el ensayo antes mencionado^-pueden- ser, sin limitarse a ellos, péptidos, carbohidratos, derivados de vitamina, o bien otros agentes f rmacéuticos. Los agentes pueden ser seleccionados y tamizados de manera aleatoria o bien pueden ser seleccionados o diseñados racionalmente utilizando técnicas de modelado de proteína. tara el tamizado aleatorio, agentes tales como péptidos, carbohidratos, agentes farmacéuticos y similares se seleccionan de manera aleatoria y son ensayados para ¡determinar su capacidad de unirse a la proteína codificada por el ORF de la presente invención. Alternativamente, agentes pueden ser seleccionados o diseñados racionalmente. Como se emplea aquí, se dice que el agente es "seleccionado o diseñado racionalmente" cuando el agente es seleccionado con base en la configuración de la proteína particular. Por ejemplo, un experto en la materia puede adaptar fácilmente los procedimientos actualmente disponibles para genetat ¿fréptidos, agentes farmacéuticos y similares, capaces de "^wfí^e a* tina secuencia específica de péptido con el objet© de fpa&ra péptidos antipéptidos diseñados racionalmente, por — — ^féfc lo, véase Hurby y colaboradores, Application of Synthetic Peptides: Antisense Peptides [Aplicación de 10 péptldos sintéticos : Péptidos de antisentido] . "In Synthetic ©eptide, A User's Guide [Péptidos sintéticos, una guía de usuario]. W.H. Freeman, Nueva York (1992), páginas 289-30? y Kaspczak y colaboradores Biochemistry {Bioquímica} 28:9230-8 (1989), o agentes farmacéuticos o similares. 15 Además de lo anterior, una clase de agentes de la presente invención, de conformidad con los descrito en términos generales, puede emplearse para controlar la expresión de genes a través del envase con uno de los ORFs o EMFs de la presente invención. De conformidad con lo descrito arriba, 20 tales agentes pueden ser tamizados aleatoriamente o bien diseñados/seleccionados racionalmente. El hecho de enfocar el ORF o EMF permite a un experto en la materia diseñar agentes específicos para secuencias o agente específicos para elementos, modular la expresión de ya sea un ORF individual o 25 bien ORFs múltiples que se basan en el mismo EMF para control de expresión. Una clase de agentes de enlace ADN son agentes que contienen residuos de bases que se hibridan o forman una formación de triple hélice mediante enlace con ADN o ARN. Tales agentes pueden basarse en el fosfodiéster clásico, estructura de ácido- ribonucleico, o bien pueden ser varios derivados poliméricos o sulfidrilo que tienen capacidad de fijación de bases» Agentes adecuados para su uso en estos métodos contienen abitualmente de 20 a 40 pares de bases y son diseñados para ser complementarios de una región del gen involucrada en la transcripción (triple hélice - véase Lee y colaboradores Nucí. Acids Res. 6:3073 (1979); Cooney y colaboradores, Science 241:456 (1988); y Dervan y colaboradores, Science 251:1360 (1991)) o bien el ARNm mismo (antisentido - Okano. J. Neurochem. 56:560 (1991); Oligodeoxyncucleotids as Antisense Inhibitors of Gene Expression [Oligodesoxinucleótidos como inhibidores de antisentido de expresión de gen] CRC Press. Boca Ratón. FL (1988)). La formación de triple hélice resulta óptimamente en un cierre de la transcripción de ARN de ADN, mientras que la hibridación de ARN de antisentido bloquea la traducción de una molécula de ARNm en polipéptido. Ambas técnicas han demostrado ser efectivas en sistemas de modelo. La información contenida en las secuencias de la presente invención es necesaria para el diseño de un oligonucléotido de antisentido o de triple hélice y otros agentes de enlace de ADN. Agentes que se unen a una proteína codificada por uno de los ORFs de la presente invención pueden ser utilizados como agente de diagnóstico. Agentes que se unen a una proteína codificada por uno de los ORFs de la presente invención pueden ser formulados empleando técnicas conocidas para generar una composición farmacéutica. 4.16 USO DE ÁCIDOS NUCLEICOS COMO SONDAS Otro aspecto de la presente invención es proporcionar sondas de hibridación de ácido nucleido específicas para polipéptidos capaces de hibridarse con secuencias de nucleótidos que ocurren naturalmente. Las sondas de hibridación de la presente invención pueden ser derivadas de cualesquiera de las secuencias SEQ ID NO: 1-22, 24, 26-27, 29 o 33. Puesto que el gen correspondiente es expresado solamente un número limitado de tejidos, una sonda de hibridación derivada de cualesquiera de las secuencias de nucleótidos SEQ ID NO: 1-22, 24, 26-27, 29 0 33 puede ser empleada como indicador de la presencia de ARN de tipo de células de dicho tejido en una muestra. Cualquier técnica de hibridación adecuada puede ser empleada, por ejemplo hibridación in situ. La reacción de cadena de polimerasa de conformidad con lo descrito en las patentes norteamericanas Nos. 4,683,195 y 4,965,188 proporcionan usos ¿^g^áy^^ __i i m^ fl**** .-***^ ^^^. adicionales para oligonucléotidos basados en las secuencias de nucleótidos. Tales sondas utilizadas en reacción en cadena de polimerasa pueden ser de origen recombinante, pueden ser sintetizadas químicamente, o bien pueden ser una mezcla de ambas. La sonda comprende una secuencia de I nucleótidos discreta para la detección de secuencias idénticas o un grupo degenerado de ¡secuencias posibles para i identificación de secuencias genómicas estrechamente relacionadas . Otros medios para producir sondas de hibridación específica para ácidos nucleicos incluyen la clonación de secuencias de ácido nucleico en vectores para la producción de sondas de ARNm. Tales vectores son conocidos en la técnica y están comercialmente disponibles y pueden ser utilizados para sintetizar sondas de ARN in vitro a través de la adición de la ARN polimerasa apropiada como T7 o SP6 ARN polimerasa y los nucleótidos apropiados marcados radioactivamente. Las secuencias de nucleótidos pueden ser utilizadas para construir sondas de hibridación para mapear sus secuencias genómicas respectivas. La secuencia de nucleótidos proporcionada aquí puede ser mapeada a un cromosoma o regiones específicas de un cromosoma utilizando técnicas genéticas y/o cromosómicas de mapeo bien conocidas. Estas técnicas incluyen la hibridación in situ, análisis de enlace contra marcadores cromosómicos conocidos, tamizado de hibridación con bibliotecas o preparaciones cromosómicas clasificadas por flujo específicos para cromosomas conocidos, y similares. La técnica de la hibridación fluorescente in situ de extensiones de cromosoma ha sido descrita, entre 5 otras partes, en Verma y colaboradores (1988) Human Chromosomes : A Manual of Basic Techniques [Cromosomas I I Humanos: Un manual de técnicas básicas], Pergamon Press. i Nueva York NY. • La hibridación fluorescente in situ de preparaciones 10 cromosómicas y otras técnicas físicas de mapeo de cromosoma pueden ser correlacionadas con datos adicionales del mapa genético. Ejemplos de datos de mapa genético pueden encontrarse en 1994 Genome Issue of Science (265:1981f). La • correlación entre la ubicación de un ácido nucleico en un 15 mapa cromosómico físico y una enfermedad específica (o bien predisposición a una enfermedad específica) puede ayudar a delimitar la región de ADN asociada con esta enfermedad genética. Las secuencias de nucleótidos de la presente invención puede emplearse para detectar diferencias en 20 secuencias de genes entre individuos normales, portadores o afectados. 4.17 PREPARACIÓN DE OLIGONUCLEÓTIDOS UNIDOS A SOPORTE Oligonucléotidos, es decir, pequeños segmentos de ácido nucleico, pueden ser preparados fácilmente, por ejemplo, 25 mediante la síntesis directa del oligonucléotido por medios químicos, como se practica habitualmente utilizando un sintetizador automático de oligonucléotidos. Oligonucléotidos unidos a soporte pueden ser preparados por cualesquiera de los métodos conocidos de los expertos en la $ materia utilizando cualquier soporte adecuado, por ejemplo, iridjio, poliestireno o teflón. Una estrategia es fijar I preqísaaente los oligonucléotidos sintetizados por I sintetizadores estándares. La inmovilización puede lograrse empleando adsobrción pasiva (Inouye & Hondo, 1990 J. Clin 0 Mícrobiol 28(6) 1462-72); utilizando luz UV (Nagata y colaboradores, 1985; Dahlen y colaboradores, 1987; Morríssey & Collins. Mol. Cell Probes 1989 3(2) 189-207) o bien mediante unión covalente de ADN modificado en cuanto a ases (Séller y colaboradores, 1988: 1989); todas estas referencias 5 se incorporan específicamente aquí. Otra estrategia que puede ser empleada es el uso de la interacción fuerte biotina-estreptavidma como enlazador. Por ejemplo, Broude y colaboradores (1994) Proc. Natl. Acad. Sci OSA 91(8)3072-6 describen el uso de sondas biotiníladas, aún 0 cuando se trata de sondas dúplex, que son inmovilizadas en perlas magnéticas revestidas con estreptavidma. Las perlas revestidas con estreptavidina pueden ser compradas en Dynal, I Oslo. Evidentemente, esta misma química de enlace es aplicable ala revestimiento de cualquier superficie con 5 estreptavidina. Sondas biotiniladas pueden ser adquiridas en a__ varias fuentes, por ejemplo Operon Technologies (Alameda, CA) . ífunc Laboratories (Naperville, IL) gesta vendiendo también un material adecuado que podría ser utilizado. Nunc Laboratories h n desarrollado a través del cual el; AUN puede ser €üvalßntemente unido a la superficie de micropozos qpe ae ©onoce coaio CovaLink NH. CovaLink NH es una superficie de poiiestíreno injertada con grupos amino secundario (>NH) que si en como cabezas de puente para acoplamiento covalente adicional. Se pueden comprar los módulos CovaLink en üunc Laboratories. Moléculas de ADN pueden ser unidas a CovaLink exclusivamente en el extremo 5' a través de un enlace fosforamidato, lo que permite la inmovilización de más de 1 pmol de ADN (Rasmussen y colaboradores, (1991) Anal Biochem 198(1) 138-42. El uso de tiras de CovaLink NH para enlace covalente < de moléculas de ADN en un extremo 5' ha sido descrita (Rasmussen y colaboradores, 1991) . En esta tecnología, se emplea un enlace de fosforamidato (Chu y colaboradores, 1983 Nucleic Acids 11 (18) 6513-29) . Esto es benéfico puesto que se prefiere la inmovilización utilizando solamente un enlace covalente único. El enlace de fosforamidato une el ADN a los grupos amino secundario de CovaLink NH colocados en el extremo de los brazos del espaciador covalentemente injertado en la superficie de poliestireno a través de un brazo de espaciador de dos nm de largo. Para enlazar un oligonucléotido con CovaLink NH a través de un enlace fosforamidato, la terminal de oligonucléotido debe tener un grupo fosfato de extremo 5' . Es posible tal vez que la biotina sea unida covalentemente a CovaLink y después utilizar la estreptavidina para unir las sondas. Más específicamente, el método de enlace incluye la disolución de ADN en agua (7.5 ng/ul) y la desnaturalización durante 10 minutos a una temperatura de 95° C y enfriamiento en hielo durante 10 minutos. 1-metilimidazol 0.1 M, a temperatura de hielo, pH 7.0 (1-Melm7), se agrega después a una concentración final de 1-MeIm-- 10 mM. Una solución de ADN ss es después surtida en tiras CovaLmk NH (75 ul/pozo) en hielo. Carbodiimida 0.2 M l-etil-3- (3-dimetilam?nopropil) -carbodiimida (EDC) , disuelta en 10 M l-melitw, se prepara fresca y se agrega 25 ul por pozo. Las tiras son incubadas durante 5 horas a una temperatura de 50° C. Después de la incubación, las tiras son lavadas utilizando por ejemplo, Nunc-Immuno Wash; primero, los pozos son lavados 3 veces, después son enjuagados con la solución de lavado durante 5 minutos y finalmente son lavados 3 veces (en donde la solución de lavado es NaOH 0.4 N, SDS al 0.25% calentado a una temperatura de 50° C) . Se contempla que un método adecuado adicional para su uso dentro del marco de la presente invención es el método descrito en la Solicitud de Patente PCT WO 90/03382 (Southern & Maskos), que se incorpora aquí por referencia. Este método para la preparación de un oligonucléotido unido a un soporté incluye la fijación de un reactivo nucleosido 3* a través del grupo fosfato mediante un enlace covalente fosfodiéster grupos hidroxilo alifaticos portados por el soporte. E oligonucléotido es después sintetizado en el nucleosido soportado y grupos de protección son removidos de la cadena I de oligonucléotidos sintética bajo condiciones estándares que no disocian el oligonucléotido del soporte. Reactivos adecuados incluyen fosforamidita de nucleosido e hidrógeno fosforato de nucleosido. Una estrategia en chip para la preparación de sondas de ADN para la preparación de los conjuntos de sondas de ADN puede emplearse. Por ejemplo, una fotodesprotección activada con láser dirigible puede ser empleada en la síntesis química de oligonucléotidos directamente en una superficie de vidrio, de conformidad con lo descrito por Fodor y colaboradores, (1991) Science 251(4995) 767-73 que se incorpora 'aquí por referencia. Sondas pueden también inmovilizadas en soportes de nylon de conformidad con lo descrito por Van Ness y i colaboradores (1991) Nucleic Acids res. 19(12)3345-50; o bien enlazadas a Teflón utilizando el método de Duncan & Cavalier (1988) Anal Biochem 169(1) 104-8; todas estas referencias se **^^? a^ *^ **~? l* i??lll A?MA.L. incorporan específicamente aquí. Para enlazar un oligonucléotido sobre un soporte de nylon, de conformidad con lo descrito por Van Ness y colaboradores (1991), se requiere de la activación de la superficie! de • 5 nylon a través de alquilación y la activación selectiva d la I amina 5' de los oligonucléotidos con cloruro cianúrico. Una forma particular de preparar oligonucLéotidos unidoß a ^F soporte es utilizar la síntesis generada por luz descrita, por Pease y colaboradores (1994) Proc. Natl. Acad. Sci USA 10 91(11)5022-6. Estos autores emplearon técnicas fotolitográficas actuales para generar grupos de sondas de oligonucléotidos inmovilizadas (chips de ADN) . Estos métodos, en donde la luz ese utilizada para dirigir la síntesis de sondas de oligonucléotidos en grupos miniáturizados de alta 15 densidad utilizan N-acil-desoxinucleosidofosforamidítas protegidas en extremo 5', fotolábiles, química de enlazador superficial así como estrategias de síntesis combinatoria versátil. Una matriz de 256 sondas de' oligonucléotidos definidas espacialmente puede ser generada de esta forma. 20 4.18 PREPARACIÓN DE FRAGMENTOS DE ÁCIDO NUCLEICO • Los ácidos nucleicos pueden ser obtenidos a partir de cualquier fuente apropiada, por ejemplo, ADNc, ADN genómico, ADN cromosómico, bandas de cromosoma microdisecadas, cósmidos o insertos YAC, ARN, incluyendo ARNm sin ningún paso de 25 amplificación. Por ejemplo, Sambrook y colaboradores (1989) ÍM_tfc—6 describen 3 protocolos para el aislamiento de ADN de alto peso molecular a partir de células de mamífero (p. 9.14- 9.23) . Fragmentos de ADN pueden ser preparados como clones en M13, 5 plásmido o vectores lambda* y/o preparados directamente a partir de ADN genómico o ADNc por reacción en cadena de polimerasa o bien por otros métodos de amplificación.

FF Muestras pueden ser preparadas o proporcionadas en placas de pozos múltiples. Muestras de ADN de aproximadamente 100-1000 10 ng pueden ser preparadas en un volumen final de 2-500 ml. Los ácidos nucleicos pueden ser después fragmentados a través de cualesquiera de los métodos conocidos por parte de los expertos en la materia incluyendo, por ejemplo, el uso de enzimas de restricción de conformidad con lo descrito en 15 9.24-9.28 de Sambrook y colaboradores (1989), mediante corte por ultrasonido y tratamiento con NaOH. El corte de baja presión es también apropiado, de conformidad con lo descrito por Schriefér y colaboradores (1990) Nucleic Acids Res. 18(24)7455-6. En este método, muestras de ADN son ! 20 pasadas a través de una pequeña celda de presión French en • varias presiones desde bajas' a intermedias. De preferencia, un ácido nucleico de antisentido es diseñado de tal manera que sea complementario de una región. Un dispositivo de palanca permite la aplicación controlada de 25 presiones bajas a intermedias a la celda. Los resultados de _______-_-^.•__._,, f m*' * 227 estos estudios indican que un corte de baja presión es una alternativa útil a los métodos de fragmentación de ADN sónicos y enzimáticos. ffea forma particularmente adecuada para fragmentar ADN se $ €dn eß la mediante el uso de la endonucleasa con * jPdc aciiiieiito de dos bases, CviJl, descrita por FitzgeraXd y colaboradoras (1992) Nucleic Acids Res. 20(14)3753-62. Esos autores describieron un enfoque para la fragmentación rápida y el fraccionamiento de ADN en tamaño particulares que 0 consideraban adecuados para clonación y secuenciamiento. La endonucleasa de restricción CviJJ normalmente disocia la secuencia de reconocimiento de PuGCPy entre G y C para dejar puntas planas. Condiciones de reacción atípicas, que alteran la especificidad de esta enzima { Cvi Jl**) , proporcionan una 5 distribución casi aleatoria de fragmentos ADN a partir de la molécula pequeña pUC19 (2688 pares de base) Fitzgerald y colaboradores (1992) evaluaron cuantitativamente la aleatoriedad de esta estrategia de fragmentación, empleando un. igesto de CviJI** de pUC19 que fue fraccionado en cuanto ® a tamaño a través de un método de filtración rápida en gel y ligado directamente, sin reparación de puntas, con un método de clonación lac Z menos M13. El análisis de secuencia de 76 clones mostró que CviJJ** restringe pyGCPy y puGCPu, además de sitios PuGCPy, y que nuevos datos de secuencia Son 5 acumulados a un régimen consistente con una fragmentación •-* 228 aleatoria. «.

De conformidad con lo reportado en la literatura, ventajas de este enfoque en comparación con la sonicación y et fraccionamiento en gel de agarosa incluyen: se requiere de cantidades menores de ADN (0.2-0.5 ug en vez de 2-5 ug)? y un efímero menor de pasos que están involucrados (ninguna ligación previa, reparación de puntas, extracción químic , ni electroforesis en gel de agarosa y elusión se requiere) . i Independientemente de la forma en la cual los fragmentos de ácido nucleico se obtienen o se preparan, es importante i desnaturalizar el ADN para proporcionar partes de una sola cadena disponibles para hibridación. Esto se logra mediante la incubación de la solución de ADN durante 2-5 minutos a -una 1 temperatura de 80-90°C. Esta solución es enfriada después rápidamente a una temperatura de 2°C para prevenir la renaturalización de los fragmentos de ADN antes que entren en contacto con el chip. Grupos fosfatos deben también ser removidos del ADN genómico a través de métodos conocidos en la técnica. 4.19 PREPARACIÓN DE GRUPOS DE ADN Grupos pueden ser preparados mediante la fijación de muestras de ADN sobre un soporte como por ejemplo una membrana de nylon. La fijación puede efectuarse mediante el uso de grupos de alfileres de metal (cuyas posiciones corresponden a un grupo de pozos en una placa de microtitulación) mediante la transferencia de aproximadamente 20 ni de una solución de ADN a una membrana de nylon. Mediante impresión offset, se logra una densidad de puntos mayor que la densidad de los pozos. De uno a 25 puntos pueden alojarse en un mm2, según el tipo de , S marcador utilizado. Mediante el hecho de evitar la fijación _ - en un cierto número preseleccionado de filas y columnas, subgrupos separados (subconjuntos) pueden formarse. Las muestras en un subgrupo pueden ser el mismo segmento genómico de ADN (o bien el mismo gen) de individuos diferentes o bien 10 pueden ser diferentes clones genómicos empalmados. Cada uno de los subgrupos puede representar fijación replicada de las mismas muestras. En un ejemplo, un segmento de gene seleccionado puede ser amplificado a partir de 64 pacientes. Para cada paciente, el segmento de gen amplificado puede 15 estar en una placa de 96 pozos (todos los 96 pozos conteniendo la misma muestra) . Una placa para cada uno de los 64 pacientes se prepara. Mediante la utilización de un dispositivo de 96 alfileres, todas las muestras pueden ser fijadas en una membrana de 8 x 12 cm. Subgrupos pueden 20 contener 64 muestras, una de cada paciente. Cuando los 96 subgrupos son idénticos, el espacio abarcado por los puntos puede ser 1 mm2 y puede existir un espacio de 1 mm entre los subgrupos . Otro enfoque es utilizar membranas o placas (disponibles en 25 NUNC, ?aperville, Illinois) que pueden ser divididas por espaciadores físicos, por ejemplo, una rejilla de plástico moldeada sobre la membrana, la rejilla siendo similar al tipo de membrana aplicado al fondo de placas de pozos múltiples, o bien tiras hidrofóbicas. Un espaciador físico fijo no se prefiere para formar imágenes mediante exposición a pantallas de almacenamiento de fósforo planas o películas de rayos x. La presente invención es ilustrada a través de los siguientes ejemplos. Tomando en cuenta la presente divulgación, un experto en la materia observará que muchas otras modalidades y variaciones pueden efectuarse dentro del alcance de la presente invención. Por consiguiente, se contempla que los aspectos más amplios de la presente invención no se limiten a la divulgación de los ejemplos siguientes. La presente invención no es limitada en cuanto a su alcance por las modalidades ejemplificadas cuyo propósito es ilustrar aspectos individuales de la invención, y composiciones y métodos funcionalmente equivalentes se encuentran dentro del alcance de la invención. De hecho, numerosas modificaciones y variaciones en la práctica de la invención ocurrirán a las personas expertas en la materia al tomar en cuenta las presentes modalidades preferidas. Por consiguiente, las únicas limitaciones del alcance de la presente invención son las limitaciones que aparecen en las reivindicaciones adjuntas. Todas las referencias mencionadas en el cuerpo de la presente especificación se incorporan por referencia en su totalidad. 5. EJEMPLOS EJEMPLO 1 Aislamiento de SEQ ID NO: 1-21 a partir de una Biblioteca de 5 ADNc de Células Humanas ?arios ácidos nucleicos novedosos fueron obtenidos a partir de una biblioteca de ADNc preparada" a partir de hígado fetal humano, bazo, ovario, cerebro adulto, tumor pulmonar, médula espinal, cervix, ovario, células endoteliales, cordón I 10 umbilical, linfocito, fibroblasto pulmonar, cerebro fetal, y testículos, utilizando reacción en cadena de polimerasa estándar, secuenciamiento por análisis de firma de secuencia de hibridación, y técnicas de secuenciamiento de Sanger. Los # insertos de la biblioteca fueron amplificados con reacción en 15 cadena de polimerasa utilizando iniciadores específicos para secuencias de vectores que flanquean los insertos. Estos ejemplos fueron fijados en membrana de nylon e interrogados I con sondas de oligonucléotidos para proporcionar 'firmas de secuencias. Los clones fueron agrupados en grupos de 20 secuencias similares o idénticas, y clones representativos • individuales fueron seleccionados a partir de cada grupo par secuenciamiento en gel. La secuencia 5' de los insertos amplificados fue después deducida utilizando el iniciador de secuenciamiento M13 reverso en un protocolo de 25 secuenciamiento Sanger típico. Productos de reacción en cadena de polimerasa fueron purificados y sometidos ft. secuenciamiento de ciclo deter inador de colorante fluorescente. Se efectuó secuenciamiento en gel con p saje único utilizando un secuenciador 377 Applied Biosysistems (ABl). Estos insertos fueron identificados como secuencia novedosa no obtenida previamente a partir de esta biblioteca y no reportados previamente en bases de datos públicas. Estas secuencias son designadas como SEQ ID NO: 1-21 en la lista det secuencias adjunta. EJEMPLO 2 ENSAMBLAJE DE SEQ ID NO: 22 Y 24 Los ácidos nucleicos novedosos (SEQ ID NO: 22 y 24) de la invención fueron ensamblados a partir de secuencias que fueron obtenidas a partir de una biblioteca de ADNc por métodos descritos en el Ejemplo 1 arriba. Las secuencias finales fueron ensambladas utilizando las secuencias EST como semilla. Después, se utilizó un algoritmo recursivo para extender la semilla en un ensamblaje extendido, extrayendo secuencias adicionales de la base de datos de Hyseq que contiene secuencias de EST que pertenecen a este ensamblaje. El algoritmo terminó cuando se ensambló un contig completo. La inclusión de secuencias de componentes en el ensamblaje fue basada en un halazgo de BLASTN para el ensamblaje de extensión con un resultado de BLAST mayor que 300 y una identidad porcentual mayor que el 95% . „f_e__|__*_*_.- -.-_ _______f - El resultado más cercano para la secuencia ensamblada (SEQ ID NO. 22 ó 24) fue obtenida a través de una búsqueda con FASTA versión 3 contra Genpept versión 114, utilizando el algoritmo lFástxy. Fastxy es una versión mejorada del porograma de determinación de alineamiento FASTA que permite cambios de -— ?eo en oo én. El Iresultado más cercano mostró el homólogo i más cercano para ensamblaje a partir de Genpept (y contiene la secuencia traducida de aminoácidos para la cual codifica el ensamblaje) . El resultado más cercano se presenta a continuación: NUmero de Acceso: Z35597 I Descripción: Semejanza débil desconocida con proteína de precursor de nidógeno de ascidia (resultado balstp: 71) : ADNc EST EMBL: Resultado de S ith-Waterman: 760 % de Identidad: 36.188 Se predijo que polipéptidos eran codificados por SEQ ID NO: 22 (ó bien 24) de conformidad con lo presentado a continuación. Los polipéptidos fueron predichos utilizando un programa ! llamado FASTY (disponible en I http://fasta.bijoch.virginia.edu) que selecciona un polipéptido basado en una comparación de polinucléotido novedoso traducido con polipéptidos conocidos (W. R. Pearson, Methods in Enzymology [Métodos en Enzimología]. 183:63-98 (1990), que se incorpora aquí por referencia. ?- 234 Ubicación de nucleótido inicial de dicha correspondiente al primer residuo de aminoácido del segmento de aminoácido: 2669 flbicación de nucledtido final predicha correspondiente - ai ultimo residuo de aminoácido de segmento de aminoácidos: 1388 |ÍO-if>osicid?_ de aminoácidos del polipéptido codificado, en P*Asparagina, P=*Prolina, Q=Glutamina, R=Argínina, S-Serina, 10 T=Treonina, V=Valina, W=Triptófano, Y=TirosiJaa. X=DesConocido, *=Codón de Terminación, /=deleción posible de I nucléotido, \=inserción posible de nucléotido) : PRVRPRVRTDHNYYI SRI YGPSDSASRDLWVNIDQMEKDKVKIHGILSNTHRQAARVNLSF - DFPFYGHFLRE I TVATGGFI YTGEWHRMLTATQY I APLMANDPSVSRNSTVRY FDNGTAL 15 WQWDHVHLQDNYNLGSFTFQATLLMDGRI I FGYKE I PVLVTQI SSTNHPVKVGLSDAFW VHRIQpIPNRRRTIYEYHRVELQMSKITNISAVEMTPLPTCLQFNRCGPCVSSQIGFNCSW CSKLQRCSSGFDRHRQDWVDSGCPEESKEKMCENTEPVET\FLEPPQPERQPPDDGS*ÍPP I E/DAVjrSQFPTSLPTEDDTKIALHLKDNGASTDDSAAEKKGGTLASGLIVGILILVLIVAT | AILVTVYMYHHTSAAS I FFIERRPSRWPAMKRRGSGHPAYAEVEPVGEKEGFTVSEQC Í |0 (SEQ tD NO: 35) EJEMP O 3 ENSAMBLAJE DE SEQ ID NO: 27 I El ácido nucleico novedoso (SEQ ID NO: 27) de la presente invención fue ensamblado inicialmente a partir de secuenciafs 25 obtenidas a partir de una biblioteca de ADNc por métodos descritos en el Ejemplo 1 arriba. La secuencia final fue ensamblada utilizando las secuencias EST como semilla. Después, un algoritmo recursivo fue utilizado para extender la' semilla en un ensamblaje extendido, mediante la extracción $ de secuencias adicionales de la base de datos Hyseq que oÉitiene sescuencias EST qae pertenecen a este ensamblaje. El algo itmo terminó cuando se ensambló un contig completo. La -T inclusión de secuencias de componentes en el ensamblaje fue basada en un resultado BLASTN en el ensamblaje en extensión 10 oon un resultado BLAST mayor que 300 y una identidad porcentual mayor que 95% . Utilizando esta secuencia inicial, cebadores adecuados fueron «diseñados para amplificación de ESTs que comprenden la secuencia inicial. Los productos fueron clonados. El ADN fue 15 aislado, cortado con enzimas de restricción apropiadas, ligado, y clonado de nuevo para generar el contig de longitud completo. El producto de longitud completo fue después clonado y secuenciado empleando el secuenciador 377 Applied Biosystems (ABl) . Esta secuencia de nucleótidos es idéntica a 20 SEQ ID NO: 27. Alternativamente, el ADN de tipo factor de célula madre de longitud completa fue amplificado por reacción en cadena de polimerasa empleando cebadores apropiados de la biblioteca __DNc de bazo lista Maratón (Clontech) . El producto primario 25 de reacción en cadena de polimerasa fue amplificado . ___:____ ÍÉ____________i____Í adicionalmente empleando cebadores anidados de reacción en cadena de pollmerasa. El producto de la segunda reacción en cadena de polimerasa fue secuenciado utilizando el secuenciador 377 Applied Biosystems (ABl) . Este producto es idéntico a SEQ ID NO. 27. «&EMPLO C íSMfB k É. SE ^£Q ID NO: 23, 25 y 28 utilizando PHRAP (Universidad de Washington) , secuencias de ADNc de gen de longitud completa y las secuencias correspondientes de proteínas fueron generadas a partir del ensamblaje. Cambios de marco eventuales y codones de terminación incorrectos fueron corregidos mediante edición manual. Durante la edición, la secuencia fue revisada utilizando FASTY y/o BLAST contra Genbank (es decir, Genepept liberación 115) . Otros programas de cómputo que pueden haber sido utilizados en el proceso de edición, fueron phredPhrap y Consed (Universidad de Washington) y ed-^ext y cg-ZÍp-2 (Hyseq. Inc. ) . Un péptido (SEQ ID NO: 28) fue predicho como codificado por SEQ ID NO: 27 como lo presentado abajo. El péptido fue predicho utilizando un protrama conocido como BLASTX que selecciona un polipétido con base en una comparación de polinucleótido numeroso traducido con polinucleótidos conocidos. La metionina inicial empieza en la posición 123 de SEQ ID NO. 3 y el codon de terminación putativo, TAA, empieza ^^.|.^.^_^_._c> ^t._.t^.___^_^ ^^^ g|já^ en la posición 1710 de la secuencia de nucléotidos. El polipéptido de tipo factor de crecimiento de células madres de SEQ ID NO: 28 es una proteína de aproximadamente 529 aminoácidos con una masa molecular predicha de aproximadaaie-ite 59.2-kDa, no glicosilada. Búsquedas en bases de datos de proteína con el algoritmo BLASTP (Altschul S. F. y colaboradores, J. Mol. Evol. 36-290-300 (1993) y Altschul S. F., y colaboradores, J. Mol. Biol. 21:403-10 (1990), que se incorporan aquí por referencia, indican que SEQ ID NO: ¡28 es homólogo a la proteína de precursor de marcador endotelial tumoral 7. La Figura 2 muestra el alineamiento de secuencias de aminoácidos según BLASTX entre la proteína codificada por el polipéptido de tipo factor de crecimiento de células madres de SEQ ID NO: 28 y la proteína de precursor de marcador endotelial tumoral 7 SEQ ID NO: 36 (St. Croix y I colaboradores, Science, 289, 1197-1201), lo que indica que las dos secuencias comparten una semejanza del 72% en 441 residuos de aminoácidos y una identidad de 57% en1 los mismos 441 residuos de aminoácidos. Un péptido de señal de aproximadamente 30 residuos predicho es codificado desde aproximadamente el residuo 1 hasta ,el residuo 30 de SEQ ID NO: 28 (SEQ ID NO: 30). La porción extracelular es útil per se. Esto puede ser confirmado por expresión en células de mamífero y secuenciamiento del lf__-_-_t|ltjMM_J_.,__,__-_«it_ « producto disociado. La región del péptido de señal fue predicha utilizando el programa Neural Network SignalPVI.I I (Nielsen y colaboradores (1997) Int. J. Neur. Sist.. 8,581) (de Center for Biological Seqúense Análisis [Centro jde , $ Análisis de Secuencias Biológicas] . The Technical Univers^ty i ß* : of Denaark ?La universidad Técnica de Dinamarca] , y análisis * . de hidrofobicidad utilizando el algoritmo (Kyte y Doolit?le (1982) J. Mol. Biol. 157, 105). Un experto en la materia I reconocerá que el sitio de disociación puede: ser diferente: de I 10 lo predicho a través del programa de cómputo. SEQ ID NO: 31 es el péptido que resulta cuando el péptido de señal es removido de SEQ ID NO: 28. Una región predicha de transmembrana de aproximadamente 28 residuos es codificada de aproximadamente el residuo 452 15 hasta el residuo 479 de SEQ ID NO: 28 (SEQ ID NO: 32) . Pu de ser confirmado por expresión en células de mamífero. La región de transmembrada fue predicha utilizando el programa Neural Network SignalP VBI:I (Nielsen y colaboradores (1997) Int. J. Neur. Sist.. 8.581) (del Center for Biological 20 Secuence Análisis [Centro de 'Análisis de Secuencias Biológicas] . The Technical University of Denmark [La Universidad Técnica de Dinamarca] ) , y análisis de hidrofobicidad utilizando el algoritmo Kyte/Doolittle (Kyte y Doolittle (1982) J. Mol. Biol. 157, 105). Un experto en la 25 materia reconocerá que la región de transmembrana puede ser diferente de lo predicho por el programa e cómputo. tfo polipéptido (SEQ ID NO: 25) fue predicho como codificado por SEQ ID NO: 24 establecido a continuación. El polipéptido fue predicho utilizando el programa PLASTX que selecciona un l^olipéptido con base en una comparación de polinucléotido ^^-v oso traducido con ípolinucleótidos conocidos. La áetiori&jaa inicial empieza en la posición 107 de SEQ ID NO: 24 y el codon de terminación putativa TAA empieza en la posición 1280 de la secuencia de nucleótidos. i 11 poiipéptido de factor de crecimiento de células madres de SEQ ID NO: 23 (idéntico a SEQ ID NO: 23) es una proteína de I aproximadamente 392 aminoácidos con una masa molecular predicha de aproximadamente 50-kDa no glicocilada. Búsqueda en bases de datos de proteína con el algoritmo BLASTP (Altschul S. F. y colaboradores, J. Mol. Evol. 36:290-300 (1993) y Atschul S. F. y colaboradores, J. Mol. Biol. 21:403- 10 (1990), que se incorporan aquí por referencia, indican que SEQ ID NO: 25 es homólogo a la proteína precursora de marcador endotelial tumoral 7. Una región de tra smembrana de aproximadamente veintiocho residuos predicha es codificada desde aproximadamente el residuo 315 hasta el residuo 342 de SEQ ID NO: 25 (SEQ ID NO: i 32. Puede ser confirmada por expresión en células de mamíferos. La región de transmembrana fue predicha utilizando el programa Neural Network SignalP VI . I (Nielsen y _*«& 240 colaboradores (1997) Int. J. Neur. Sist.. 8,581) (Center for Biological Seqúense Análisis [Centro de Análisis de Secuencias Biológicas]. The Technical University of Denmark) ILa Universidad Técnica de Dinamarca] , y análisis de idrogenicidad utilizando el algoritmo Kyte/Doolittle {Kyte y _t* áÍo_ittle €1982. J- Mo1- Bio1- 157' 105> - ün experto en la materia reconocerá que una región de transmembrana puede ser diferente de lo predicho por el programa de cómputo. S*?EMPLQ 5 j h. CLONACIÓN Y EXPRESIÓN DE POLINUCLÉOTIDQ (SEQ ID NO: 33) Y POLIPEPTIDOi (SEQ ID NO: 34) DE TIPO FACTOR DE CÉLULAS MADRES SOLUBLES Con el objeto de expresar polipéptido de tipo factor de-células mad¡res soluble, el ADN de tipo factor de células madres de longitud completa fue amplificado por reacción en cadena de polimerasa a partir de una biblioteca de ADNc de bazo lista Marathón (Clontech) . El producto primario de reacción en cadena de polimerasa fue amplificado ad|cionalmente utilizando cebadores anidados de reacción en cadena de pplimerasa que generan polipéptido de tipo factor de células madres soluble cuando son expresados en líneas de células adecuadas. El producto de la reacción en cadena de polimerasa secundaria (SEQ ID NO: 33) fue clonado eh pCDNA3.1/Myc-Hís(+) A entre los sitios EcoRI y Xhol. El plásmido que codifica el polipéptido de tipo factor de células madres soluble y vectores de control fueron trasnfectados en células CHO utilizando el reactivo de tranfección FuGENE-6 (Roche) . El medio de cultivo lisado celular y las fracciones insolubles de residuos de células fueron analizados por SDS-PAGE seguido por análisis wertern felot con anticuerpos anti myc. Como se esperaba, m s del 95% -f del polipéptida soluble de tipo factor de células madres {SEQ ID NO: 34) fue encontrado secretado y presente en el medio de cultivo. 10 Utilizando un enfoque similar, se generan también líneas estables de células 293 que expresan SEQ ID NO: 34. Estas líneas fueron clonadas adicionalmente para seleccionar expresores altos, moderados y bajos. B. EXPRESIÓN Y PURIFICACIÓN DE SEQ ID NO: 34 A PARTIR DE 15 CÉLULAS BACTERIANAS Y CÉLULAS DE INSECTO Proteína de tipo factor de células madres fue expresada en células de insecto de la siguiente manera. La versión truncada de dominio de transmembrana de terminal C de gen de tipo factor de células madres (SEQ ID NO: 33) fue 20 clonada por reacción en cadena de polimerasa en vector de clonación de pIB/V5-His TOPO TA (Invitrogen Corporation) . El ADN de tipo factor de células madres en el vector fue generado ya sea con un marcador Myc/His o bien sin ningún marcador. Células de insecto (High Five TM, Invitrogen) 25 fueron transfectadas con el ADN de plásmito de tipo factor de crecimiento de células madres que contiene el marcador mediante la utilización del InsectSelect TM System {Invitrogen) . La expresión de la proteína de tipo factor de crecimiento de células madres fue determinada por expresión $ transiente. El medio que contenia¡ proteína de tipo factor de esada fue separado en S?>S~ PAGE y proteiáa de tipo factor de crecimiento de células madres fue identificada por análisis Western blot. Para una producción a gran escala de proteína de tipo factor de 10 crecimiento de células madres, células resistentes fueron extendidas en frascos que contenían el medio Ultímate Insect TMSerum-Free médium (Invitrogen) . Las células fueron agitadas a 100 mph a una temperatura de 27°c durante 4 días. Los medios acondicionados que contienen ia proteína para 15 purificación fueron recogidos por centrifugación. La proteína de tipo factor de células madres fue expresada en células bacterianas de la siguiente manera: El gen de tipo factor de crecimiento de células madres maduro sin el dominio de transmembrana (SEQ ID NO: 33) fue clonado 20 en un vector de expresión (PCR T7/NT-T0P0) de Invitrogen. El plásmido resultante fue expresado en cepa E. coli BL-21 (DE 3) pLys. Células fueron cultivadas en caldo LB que contenía ampicilina (100 µg/mL) a una temperatura de 37°C. La expresión de proteína de tipo factor de crecimiento de 25 células madres fue después inducida con IPTG (concentración _._» _____.^_,_...__^ final de 1 mM) , y las células fueron cultivadas durante cuatro horas adicionales y cosechadas. El análisis de la producción de tipo factor de crecimiento de células madres por SDS-PAGE y Western blot fue efectuada de conformidad con 5 lo presentado con detalles arriba. * %a purificaci?ti * e la proteína de tipo factor de crecimiento ,de células madres a partir de cultivos de células de insecto j^F fue efectuada de la siguiente manera. El medio Insect Ultímate que contenía la proteína de tipo factor de 10 crecimiento de células madres marcada con His fue ajustada a un pH de 7.5 mediante la adición de una cantidad apropiada de NaOH 1M. La solución fue después complementada con 1 mM PMSF (concentración final) para evitar la disociación proteolítica • durante el proceso de purificación. El medio fue pasado a 15 través de un filtro de 0.2 miera (Unidad de filtro estéril de 1000 mL. Nalgene Surfactant Free Cellulose Acétate [Acetato de Celulosa Libre de Furfactante Nalgene}) para remover el material en forma de partículas. La solución resultante fue concentrada 10 veces y equilibrada simultáneamente con 20 fosfato de sodio 20 mM, pH 7.5 utilizando un cartucho de diafiltración con un tamaño de corte de membrana de 10 kDa. El medio concentrado 10 veces y diafiltrado fue cargado en una columna Ni-NTA equilibrada con fosfato de sodio 20 mM pH 7.5. Componentes no retenidos fueron removidos por lavado de 25 la columna con fosfato de sodio 20 mM, pH 7.5 que contenía a__._-_--__»_ r?i i ¡if i ¡iJÜ^^ *•• *-----nNaCl 300 mM de Idazol 20 mM. La proteína de tipo factor de crecimiento de células madres marcada con His fue eluída con el mismo amortiguador y un gradiente lineal de imidazol {20-300 mM) . La proteína eluída fue identificada de conformidad con lo descrito arriba. Las fracciones combinadas que contenían la proteína de tipo factor de crecimiento de células madres fueron equilibradas con amortiguador PBS utilizando una celda de agitación Amicon con un tamaño de corte de membrana de 10 kDa. Este proceso resultó también en la remoción de imidazol. La proteína fue después concentrada aproximadamente a 10 mg/mL en amortiguador PBS para estudios funcionales. La purificación de proteína de tipo factor de crecimiento de células madres a partir de cultivos bacterianos fue efectuada de la siguiente manera. Células de E. coli que expresan proteína de tipo factor de crecimiento de células madres como cuerpo de inclusión fueron extraídas con 10 volúmenes (peso/volumen) de amortiguador de extracción (NaP04 l50mM pH 7.0) y adicionalmente con amortiguador que contenía hidrocloruro de guanidina 6M en el 'amortiguador de I extracción. La proteína de tipo factor de crecimiento de células madres solubilizada fue fraccionada en una columna I Ni-NTA de conformidad con lo descrito arriba. Se permitió que la versión no plegada de la proteína de tipo factor de crecimiento de células madres obtenida a partir de esta purificación por afinidad lograra una conformación activa por incubación con un amortiguador de repliegue que consiste de DTT y glutationa. Una muestra plegada de nuevo fue equilibrada con Tris 20mM, Tween al 0.1% y concentrada a 100 mL (concentración 10 veces) antes de cromatografía de líquidos de flujo rápido en intercámbiadores de iones Q-sepharose y SP-sepharose. Protocolos adicionales fueron también desarrollados para condiciones apropiadas de repliegue utilizando urea 8M en vez de hidroclsruro de guanidina 6M. EJEMPLO 6 EXPRESIÓN DE SEQ ID NO: 33 EN CÉLULAS HUMANAS PRIMARIAS El producto de la reacción en cadena de polimerasa anidada secundaria de la biblioteca de bazos Marathón o cualquier otro polinucléotido que codifica un polipéptido de tipo factor de crecimiento de células madres se clonan en vector retroviral MSCV (Clontech) en sitios de clonación adecuados utilizando cebadores de reacción en ' cadena de polimerasa directos y reversos apropiados. Este vector retroviral es después transfectado en reactivo de tranfección FUGENE-6 en líneas de células de empaque para producir grandes cantidades adecuadas de retrovirus que tendrán el ADN de tipo factor de crecimiento de células madres clonado ahí. Sobrenadanates que contienen retrovirus son preparados a partir de las líneas de células empacadas y mezclados con células estromales o células madres. Al efectuarse la transducción de retrovirús, estas células transducidas pueden expresar la proteína de tipo factor de crecimiento de células madres, que puede ser analizado de la siguiente manera: 5 A. Ensayo de Cultivo Líquido: Células madres de orígenes hematopoyéticos o de otros orígenes se compran en el comercio. 1 x 104 células madres se colocan en una placa de 96 pozos. 50-200 ng/ml de proteína de tipo • factor de crecimiento de células madres purificada o 10 bien otros factores de crecimiento adecuados en concentraciones apropiadas se agregan a las células madres. IL-3 y IL-6 se agregan después de 5 días de incubación. Se observan microscópicamente los cultivos • y dichos cultivos son contados diariamente. Se efectúa 15 una tinción de citometría de flujo para determinar diferenciación de linajes celulares. B. Ensayo de Cultivo asociado con Estromas: células estromales de tejidos adecuados se obtieneni a partir de vendedores comerciales. 1 x 104 células madres se co- 20 cultivan con 1 x 104 células estromales translúcidas por polinucleótidos de tipo factor de crecimiento de células madres. Los cultivos son observados microscópicamente y contados cada día. Se puede efectuar tinción de citometría de flujo para determinar 25 la diferenciación de linajes celulares.

EJEMPLO 7 Estudio de Expresión Utilizando SEQ ID NO: 1-22, 24, 26-27, 29 ó 33 La expresión de SEQ ID NO: 1-22, 24, 26-27, 29 ó 33 en varios 5 tejidos es analizada empleando una técnica basada en reacción en cadena de polimerasa semi-cuantitativa. Bibliotecas de ADNc; de seres tómanos se emplean como fuentes de genes expresados a partir de tejidos de interés (vejiga adulta, cerebro adulto, corazón adulto, riñon adulto, nodo linfático 10 adulto, hígado adulto, pulmón adulto, ovario adulto, placenta adulta, recto adulto, bazo adulto, testículos adultos, médula ósea, timo, glándula tiroide, riñon fetal, hígado fetal, hígado-bazo fetal, piel fetal, cerebro fetal, leucocito y • macrófago fetales) . Se utilizan cebadores específicos para 15 genes con el objeto de amplificar porciones de secuencias SEQ ID NO: 1-22, 24, 26-27, 29 ó 33 a partir de las muestras. Los productos amplificados son separados en gel de agarosa, transferidos y enlazados químicamente a un filtro de nylon. El filtro es después hibridado con una sonda de cadena doble 20 marcada radioactivamente (33P-dCTP) generada a partir de SEQ • ID NO: 1-22, 24, 26-27, 29 ó 33 empleando una polimerasa de Klenow, un método aleatorio. Se lavan los filtros (en condiciones altamente estrictas) y se utilizan para exponer una pantalla de conversión de imagen de fósforo durante 25 varias horas. Las bandas indican la presencia de ADNc incluyendo secuencias S?Q ID NO: 1-22, 24, 26-27, 29 ó 33 en la biblioteca específica y por consiguiente la expresión de ARNm en el tipo celular o tejido correspondiente. __!___________ ?f r*Ttt tft LI STA DE SECUENCIAS <110> Labat, Ivan Tang, Y. Tom Liu, Cheng ua Childs, John Chao, Cheng-Chi Drmanac, Rado j e T Mize, Nancy Lee, Juhi <120> MÉTODOS Y MATERIALES RELACIONADOS CON PÉPTIDOS Y POLINUCLEÓTIDOS TIPO FACTOR DE CRECIMIENTO DE CÉLULAS PRIMORDIALES <130> 30266/37630 <140> TODAVÍA NO ASIGNADA <141> 2000-12-22 <160> 36 <170> Patentln versión 3 . 0 <210> 1 <211> 366 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 1 ggcacgagct acatctaaaa gataatggag cttctacaga tgatagtgca gctgagaaga 60 aagggggaac cctccacgct ggcctcatcg ttggaatcct ca c ;tggt _tcattgtag 120 ccacagccat tcttgtgaca gtctatatgt atcaccaccc aacatcagca gccagcatct 180 tctttattga gagacgccca agcagatggc ctgcgatgaa gtttagaaga ggctctggac 240 atcctgccta tgctgaagtt gaaccagttg gagagaaaga aggctttatt gtatcagagc 300 agtgctaaaa tttctaggac agaacaacac cagtactggt ttacaggtgt taagactaaa 360 attttg 366 <210> 2 <211> 334 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 2 ggcacgagct acatctaaca gataatggag cttctacaga tgacagggca gctgagaaga 60 aagggggaac cctccacgct ggcctcatcg ttggaatcct catcctggtc ctcattgtag 120 ccacagccat tcttgtgaca gtctatatgt atcaccaccc aacatcagca gccagcatct 180 tctttattga gagacgccca agcagatggc ctgcgatgaa gtttagaaga ggctctggac 240 atcctgccta tgctgaagtt gaaccagttg gagagaaaga aggctttatt gtatcagagc 300 agtgctaaaa tttctaggac agaacaacac cagt 334 <210> 3 <211> 422 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 3 cagaaattca actgtcagat attttgataa tggcacagca cttgtggtcc agtgggacca 60 tgtacatctc caggataatt ataacctggg aagcttcaca ttccaggcaa ccctgctcat 120 ¡ ggatggacga atcatctttg gatacaaaga aatt_ctgtc ttggtcacac agataagttc 180 aaccaatcat ccagtgaaag tcggactgtc cgatgcat t gtcgttg- r acaggatcca 240 acaaattccc agtacgtaga agaagggcag tcgcaatgag tgagcctctg tgggggtaaa 300 tttaaaggag attggtctat ggcagctgta cctgaattaa aaaaaaaata gctaatcgat 360 tagctgatta atgcttaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaag 420 gg 422 <210> 4 <211> 460 <212> ADN <213> Homo sapiens <220> <221> característica_misc <222> (1)..(460) <223> n = A, T, G, or C <400> 4 ggcgggaaac tcgatgacca ntagnaagtt cganngccat tagacagtgc ggaggaattc 60 aaccctttca ctcaaaagag caatgatgaa tgtctcatga tagctaagaa caactagccc 120 atgcaagagt gagaacaaac acaaaataag agattttcta cattttcaaa acagatgtgt 180 ggcaaaagga tgttgttttt ctggtctaga tccatctgta ccaacaagtt catcacttta 240 cagaacgaat ctttttatcc gtacaggagg ttcaaaccat gtctgcctct tcctttgtaa 300 tgaatgacct ttctatgagc tgtgacaaaa tttccgaaca attagctaag gatttgggaa 360 gagggggtgg caaacggggc tttctgtttt cctgcctcag catgaaaaca tctgatttat 420 gctttatgga agccttacct ccaatcccca actgttaaan 460 <210> 5 <211> 447 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 5 cggaacatct cccgtggact tatctgaagt atgacaagat tataatgctt ttggcttaag 60 cgcagggttg caaagggatc acaaaaaaaa aatcataata aagctttagt tcatgaggga 120 tcgaaaaaaa caacaaaaaa aacaaaactg aaataactct ataaaaaaaa aaaaaaagaa 180 aggtaatgac ttacttttga aaggaataac acactgcctg aaaaaagacc acaaagacct 240 ggcccaaatt cagaactgtg ttagtgcgga tctcccccca gtctcaacat taggaggctc 300 ctcattcttt gggagatatg aaaacataaa tggagctgtt aacaagggaa ccgcccagaa 360 aatgtgggtt cacctgcaag accaccccca ccattttgtc tctacgtgcc cttgtggata 420 gtgaatcgct tcattccaac tcccact 447 <210> 6 <211> 484 <212> ADN <213> Homo sapiens <220> <221> característica_misc <222> ( 1 ) . . ( 484 ) <223> n = A, T, G, or C <400> 6 gagggcattg aatgatnacc ctaggccagn gcggnggaat tcgtttacag gtgttaagac 60 taaaattttg cctatacctt taagacaaac aaactaacac tcacacaaac aagctctaag 120 ctgctgtagc ctgaagaaga caagatttct ggacaagctc agcccaggaa acaaagggta 180 aacaaaaaac taaaacttat acaagatacc atttacactg aacatagaat tccctagtgg 240 aatgtcatct atagttcact cggaacatct cccgtggact tatctgaagt atgacaagat 300 tataatgctt ttggcttagg tgcagggttg caaagggatc agaaaaaaaa atcataataa 36 agctttagtt catgagggat cgacaccttt ggttcaaatc rtct tgatg tctcaaagat 2.? i_.-._____-_.-.ta_¡i-- ^ aactgttttc caaagcctga accctttcac tcaaaagagc aatgatgaat gtctcaagat 480 tgct 484 <210> 7 <211> 498 <212> ADN <213> Homo sapiens <220> <221> característica_misc <222> ( 1 ) . . ( 498 ) <223> n = A, T, G, or C <400> 7 gcggggnnat tgaaaccttg gagatcgaga ccctagtcag ngtgcnggaa ttccacagat 60 aagttcaacc aatcatccag tgaaagtcgg actgtccgat gcatttgtcg ttgtccacag 120 gatccaacaa attcccaatg ttcgaagaag aacaatttat gaataccacc gagtagagct 180 acaaatgtca aaaattacca acatttcggc tgtggagatg accccattac ccacatgcct 240 ccagtttaac agatgtggcc cctgtgtatc ttctcagatt ggcttcaact gcagttggtg 300 tagtaaactt caaagatgtt ccagtggatt tgatcgtcat cggcaggact gggtggacag 360 tggatgccct gaagagtcaa aagagaagat gtgtgagaat acagaaccag tggaaacttc 420 ttctcgaacc accacaacca taggagcgac aaccacccag ttcagggtcc taactaccac 480 cagaagagca gtgacttt 498 <210> 8 <211> 405 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 8 ____„¿^ .>--«-t_.----¡ac_, _. _*ftf?f_____ c- ÉÍ___i_tew».i^c_--^_?_-_--.i ggcgaccgac gcgtccgcgg acgcgtgggg aagaggttgt ggcaaacggt tctttctgtt 60 ttcctgcctc agcatgaaaa catctgattt atgctttatg gaagccttac ctccaatccc 120 caactgttaa gtcccatgaa accacagttg ctctgggctg atggaaacaa aaggaaacag 180 tatgaagagt tccttaatca tttttgaaac aaaaatgtta agggatttta aacatatgat 240 tatttttaat tttatgcctt ttcagtacta aacacccatt tcattgctga ttcctggcta 300 agaagccatt cacgtcagca tggcgataga aagaatgaaa aaaccctgct gaatcataca 360 gtaattttct ttaaagcaca tagtagctac ataaatatat atatt 405 <210> 9 <211> 407 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 9 ggggaaaagg ggggggcaaa cggggctttc tgttttcctg gctcagcatg aaaacatctg 60 atttatgctt tatggaagcc ttacctccaa tccccaactg ttaagtccca tgaaaccaca 120 gttgctctgg gctgatggaa acaaaaggaa acagtatgaa gagttcctta atcatttttg 180 aaacaaaaat gttaagggat tttaaacata tgattatttt taattttatg ccttttcagt 240 actaaacacc catttcattg ctgattcctg tctaaaaagc cattcacgtc agcatggcga 300 tagaaagaaa gaaaaaaccc tgctgaatca tacagtaatt ttctttaaag cacatagtag 360 ctacataaat atatatatat aaatatattt ttgtttataa ctaacac 407 <210> 10 <211> 392 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 10 aatacactgg ggccacatct gttaaactgg atgcatgtgg gtaatggggt catciccaca 62 25! gccgaaatgt tggtaatttt tgacatttgt agctctaccc ggtggtattc ataaattgtt 120 cttcttcgaa cattgggaat ttgttggatc ctgtggacaa cgacaaatgc atcggacagt 180 ccgactttca ctggatgatt ggttgaactt atctgtgtga ccaagacagg aatttctttg 240 tatccaaaga tgattcgtcc atccatgagc agggttgccr ggaatgtgaa gcttcccagg 300 ttataattat cctggagatg tacatggtcc cactggacca caagtgctgt gccattatca 360 aaatatctga cagttgaatt tctggataca ct 392 <210> 11 <211> 417 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 11 aatacatggt ggtgatacat atagactgtc acaagaatgg ctgtggctac aatgaggacc 60 aggatgagga ttccaacgat gaggccagcg tggagggttc cccctttctt ctcagctgca 120 ctgtcatctg tagaagctcc attatctttt agatgtagtg ctatcttggt atcatcttct 180 gtagggaggc tggtgggaaa ctgagaagtc actgctcttc tggtggtagt taggaccctg 240 aactgggtgg ttgtcgctcc tatggttgtg gtggttcgag aagaagtttc cactggttct 300 gtattctcac acatcttctc ttttgactct tcagggcatc cactgtccac ccagtcctgc 360 cgatgacgat caaatccact ggaacatctt tgaagtttac tacaccaact gcagttg 417 <210> 12 <211> 415 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 12 cggacgcgtg ggtcgaatgc taacagccac agtacatagc acct aatg gcaaatttcg 60 atcccagtgt atccagaaat tcaactgtca gatattttga taa-gc_aca gcacttgtgg 12C tccagtggga ccatgtacat ctccaggata attataacct gggaagcttc ateattccagg 180 caaccctgct catggatgga cgaatcatct ttggatacaa asaaattcct gtcttggtca 240 cacagataag ttcaaccaat catccagtga aagtcggact gtccgatgca tttgtcgttg 300 tccacaggat ccaacaaatt cccagtacgt aaaagaaggg cagtcgcaat gagtgagcct 360 ctgtgggggt aaatttaaag gagattggtc tatggcagct gtacctgaat taaaa 415 <210> 13 <211> 494 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 13 ccgtcagtgt ggaggaattc gcaagagtga atctgtcctt cgattttcca tattatgggc 60 acttcctacg tgaaatcact gtggcaaccg gcggtttcat atacactgga gaagtcgcac 120 atcgaaggct aacaaccaca cagtacatag cacctttaat aggcaaatat cgatcccagt 180 gtatccagaa attcatctga cagatatttt gataatggca cagcacttgt ggtccagtgg 240 gaccatgtac atcttcagga taattataac ctgggaagct tgacattcca ggcgaccctg 300 ctcatggatg gacgaatcat ctttggatac aaagaaattc ctgtcttggt cacacagatc 360 agttcaacca atcatccagt gaaagtcgga ctgtccgatg catttgtcgt tgtccacagg 420 atccaacaaa ttcccaatgt tcgaagaaga acaatttatg aataccaccg agtagagcta 480 caaatgtcga acat 494 <210> 14 <211> 453 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 14 aagatttcta ggacagaaca acaccagtac tggtttacag gccttaagac raaaa tttg 60 cctatacctt taagacaaac aaacaaacac acacacaaac aagctctaag ctgctjjta c 7A-0 ctgaagaaga caagatttct ggacaagctc agcccaggaa acaaagggta aacaaaaaac 180 taaaacttat acaagatacc atttacactg aacatagaat tccctagtgg aatgtcatct 2 0 atagttcact cggaacatct cccgtggact tatctgaagt atgacaagat tataatgctt 300 ttggcttagg tgcagggttg caaagggatc agaaaaaaaa aatcataata aagctttagt 360 tcatgaggga tcgacacctt tggttcaaat gttctctgat gtctcaaaga taactgtttt 420 ccaaagcctg aaccctttca ctcaaaagag caá 453 <210> 15 <211> 430 <212> ADN <213> Homo sapiens <220> <221> característica_misc <222> ( 1 ) . . ( 430) <223> n = A, T, G, or C <400> 15 ctgcaggaat tcggcacgag cccaacatca gcagccagca tcttctttat tgagagacgc 60 ccaagcagat ggcctgcgat gaagtttaga agaggctctg gacatcctgc ctatgctgaa 120 gttgaaccag ttggagagaa agaaggcttt attgtatcag agcagtgcta aaatttctag 180 gacagaacaa caccagtact ggtttacagg tgttaagact aaaattttgc ctataccttt 240 aagacaaaca aacaaacaca cacacaaaca agctctaagc tgctgtagcc tgaagaagac 300 aagatttctg gacaagctca gcccaggaaa caaagggtaa acaaaaaact aaaacttata 360 caagatacca tttacactga acatagaatt ccctagtgga atgtcatcta tagttcactc 420 ggaacatctn 430 <210> 16 <211> 405 <212> ADN <213> Homo sapiens <220> <221> característica_misc <222> ( 1 ) . . ( 405 ) <223> n = A, T, G, or C <400> 16 agagaaagaa ggctttattg tatcagagca gtgctaaaat ttctaggaca gaacaacacc 60 agtactggtt tacaggtgtt aagactaaaa ttttgcctat acctttaaga caaacaaaca 120 aacacacaca caaacaagct ctaagctgct gtagcctgaa gaagacaaga tttctggaca 180 agctcagccc aggaaacaaa gggtaaacaa aaaactaaaa cttatacaag ataccattta 240 cactgaacat agaattccct agtggaatgt catctatagt tcactcggaa catctcccgt 300 ggacttatct gaagtatgac aagattataa tgcttttggc ttatgtgcag ggttgcaaag 360 ggatcagaan aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaagggggg gcgtt 405 <210> 17 <211> 412 <212> ADN <213> Homo sapiens <220> <221> característica_misc <222> ( 1 ) . . ( 412 ) <223> n = A, T, G, or C <400> 17 cccacgcgtc cgcccacgcg tccgtacaga ccacaattac tarara . . : gaatatatgg 60 tccatctgat tctgccagcc gggatttatg ggtgaacata gaccaaatgg aaaaagataa 120 agtgaagatt catggaatat tgtccaatac tcatcggcaa gctgcaagag tgaatctgtc 180 cttcgatttt ccattttatg gccacttcct acgtgaaatc actgtggcaa ccgggggttt 240 catatacact ggagaagtcg tacatcgaat gctaacagcc acacagtaca tagcaccttt 300 aatggcaaat ttcgatccca gtgtatccag aaattcaact gtcagatatt ttgataatgg 360 cacagcactt gtggtccagt gggaccatgt acatctccag gataattata an 412 <210> 18 <211> 440 <212> ADN <213> Homo sapiens <220> <221> característica_misc <222> ( 1 ) . . ( 440 ) <223> n = A, T, G, or C <400> 18 gaattcggca cgagctctaa gctgctgtag cctgaagaag acaagatttc tggacaagct 60 cagcccagga aacaaagggt aaacaaaaaa ctaaaactta tacaagatac catttacact 120 gaacatagaa ttccctagtg gaatgtcatc tatagttcac tcggaacatc tcccgtggac 180 ttatctgaag tatgacaaga ttataatgct tttggcttag gtgcagggtt gcaaagggat 240 cagaaaaaaa aaatcataat aaagctttag ttcatgaggg aaaaaaaaaa aaaaaaaacc 300 tcgggggggg cccgggcccc catttcccct tatagggggc ggtataacaa tccctgggcc 360 gcggtttaac accgccggga cgggaaaacc cctggggtac cccacttaaa tccctttgga 420 caaaaaaann annagggcgg 440 <210> 19 <211> 416 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 19 gttgccgatg gggaagaatc acagcggccg caatacatgg gtctgtattc tcacacatct 60 5 tttcttttga ctcttcaggg catccactgt ccacggggtc cttgtcgatg acgatcaaat 12C ccactggaac atctttgaag tttactacac caactgcagt tgaagccaat ctgagaagat 180 acacaggggc cacatctgtt aaactggagg catgtgggta atggggtcat ctccacagcc 240 • gaaatgttgg taatttttga catttgtagc tctactcggt ggtattcata aattgttctt 300 ctttcaacat tgggaatttg ctggatcctg gggacaacga caaatgcatt ggacaggccg 360 10 actttcactg gatgaatgga tgaacttatc tgggggagca agacaggaat ttcttg 416 <210> 20 <211> 382 <212> ADN <213> Homo sapiens 15 <400> 20 aatacatggt tctgattctc acacatcttc tcttttgact cttcagggca tccactgtcc 60 acccagtccc gccgatgacg atcaaatcca ctggaacatc tttgaagttt actacaccaa 120 ctgcagttga agccaatctg agaagataca caggggccac atctgttaaa ctggaggcat 180 gtgggtaatg gggtcatctc cacagccgaa atgttggtaa tttttgacat ttgtagctct 240 ^B 20 actcggtggt attcataaat tgttcttctt cgaacattgg gaatttgttg gatcctgtgg 300 acaacgacaa atgcatcgga cagtccgact ttcactggat gattgggtga acttatctgt 360 gggaccaaga caggaatttc tt 382 <210> 21 <211 > 406 25 <212 > ADN __________-' <213> Homo sapiens <400> 21 aatacatgcc tggaatgtga agcttcccag gttataatta tcctggagat gtacatggtc 60 ccactggacc acaagtgctg tgccattatc aaaatatctg acagttgaat ttctggatac 120 actgggatcg aaatttgcca ttaaaggtgc tatgtactgt gtggctgtta gcattcgatg 180 tacgacttct ccagtgtata tgaaaccccc ggttgccaca gtgatttcac gtaggaagtg 240 gccataaaat ggaaaatcga aggacagatt cactcttgca gcttgccgat gagtattgga 300 caatattcca tgaatcttca ctttatcttt ttccatttgg tctatgttca cccataaatc 360 ccggctggca gaatcagatg gaccatatat tcgagatata tagtag 406 <210> 22 <211> 2668 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 22 cccacgcgtc cgcccacgcg tccgtacaga ccacaattac tatatatctc gaatatatgg 60 tccatctgat tctgccagcc gggatttatg ggtgaacata gaccaaatgg aaaaagataa 120 agtgaagatt catggaatat tgtccaatac tcatcggcaa gctgcaagag tgaatctgtc 180 cttcgatttt ccattttatg gccacttcct acgtgaaatc actgtggcaa ccgggggttt 240 catatacact ggagaagtcg tacatcgaat gctaacagcc acacagtaca tagcaccttt 300 aatggcaaat ttcgatccca gtgtatccag aaattcaact gtcagatatt ttgataatgg 360 cacagcactt gtggtccagt gggaccatgt acatctccag gataattata acctgggaag 420 cttcacattc caggcaaccc tgctcatgga tggacgaatc atctttggat acaaagaaat 480 tcctgtcttg gtcacacaga taagttcaac caatcatcca gtgaaagtcg gactgtccga 540 tgcatttgtc gttgtccaca ggatccaaca aattcccaat gttcgaagaa gaacaattta 600 tgaataccac cgagtagagc tacaaatgtc aaaaattacc aacatttcgg ctgcggagat 660 Í-tf:- f___-_ - ^ffll|[ .._-. 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(1282) <400> 24 cccacgcgtc cgcccacgcg tccgtacaga ccacaattac tatatatctc gaatatatgg 60 tccatctgat tctgccagcc gggatttatg ggtgaacata gaccaa ata gaa aaa 115 Xer Glu Lys -_. _.-Jj__i-.___-_--... ^<_*___^ _-.._^.„_-_,.,.,^ gat aaa gtg aag att cat gga ata ttg tec aat act caz cgg caá gct 163 Asp Lys Val Lys He His Gly He Leu Ser Asn Thr Has Arg Gln Ala 5 10 15 5 gca aga gtg aat ctg tec ttc gat ttt cca ttt tat ggc cae ttc cta 211 Ala Arg Val Asn Leu Ser Phe Asp Phe Pro Phe Tyr Gly Has Phe Leu 20 25 30 35 • cgt gaa ate act gtg gca acc ggg ggt ttc ata tac act gga gaa gtc 259 Arg Glu He Thr Val Ala Thr Gly Gly Phe He Tyr Thr Gly Glu Val 10 40 45 50 gta cat cga atg cta acá gcc acá cag tac ata gca ect tta atg gca 307 Val His Arg Met Leu Thr Ala Thr Gln Tyr He Ala Pro Leu Met Ala 55 60 65 aat ttc gat ecc agt gta tec aga aat tea act gtc aga tat ttt gat 355 15 Asn Phe Asp Pro Ser Val Ser Arg Asn Ser Thr Val Arg Tyr Phe Asp 70 75 80 aat ggc acá gca ctt gtg gtc cag tgg gac cat gta cat etc cag gat 403 Asn Gly Thr Ala Leu Val Val Gln Trp Asp Has Val Has Leu Gln Asp 85 90 95 20 aat tat aac ctg gga age ttc acá ttc cag gca acc ctg etc atg gat 451 Asn Tyr Asn Leu Gly Ser Phe Thr Phe Gln Ala Thr Leu Leu Met Asp 100 105 110 115 gga cga ate ate ttt gga tac aaa gaa att ect gtc ttg gtc acá cag 499 Gly Arg He He Phe Gly Tyr Lys Glu He Prc Val Le_ ral _hr Gln 25 120 125 130 . * i ^ _J_____._.t¿ ata agt tea acc aat cat cca gtg aaa gtc gga ctg tec gat gca ttt 547 He Ser Ser Thr Asn His Pro Val Lys Val Gly Leu Ser Asp Ala Phe 135 140 145 gtc gtt gtc cae agg ate caá caá att ecc aat gtt cga aga aga acá 595 Val Val Val His Arg He Gln Gln He Pro Asn Val Arg Arg Arg Thr 150 155 160 att tat gaa tac cae cga gta gag cta caá atg tea aaa att acc aac 643 He Tyr Glu Tyr His Arg Val Glu Leu Gln Met Ser Lys He Thr Asn 165 170 175 att teg gct gtg gag atg acc cca tta ecc acá tgc etc cag ttt aac 691 He Ser Ala Val Glu Met Thr Pro Leu Pro Thr Cys Leu Gln Phe Asn 180 185 190 195 aga tgt ggc ecc tgt gta tet tet cag att ggc ttc aac tgc agt tgg 739 Arg Cys Gly Pro Cys Val Ser Ser Gln He Gly Phe Asn Cys Ser Trp 200 205 210 tgt agt aaa ctt caá aga tgt tec agt gga ttt gat cgt cat cgg cag 787 Cys Ser Lys Leu Gln Arg Cys Ser Ser Gly Phe Asp Arg His Arg Gln 215 220 225 gac tgg gtg gac agt gga tgc ect gaa gag tea aaa gag aag atg tgt 835 Asp Trp Val Asp Ser Gly Cys Pro Glu Glu Ser Lys Glu Lys Met Cys 230 235 240 gag aat acá gaa cca gtg gaa act tet tet cga acc acc acá acc ata 883 Glu Asn Thr Glu Pro Val Glu Thr Ser Ser Arg Thr Thr Thr Thr He 245 250 .DO gga gcg acá acc acc cag ttc agg gtc cta act acc acc aga aga gca 331 Gly Ala Thr Thr Thr Gln Phe Arg Val Leu Thr Thr Thr Arg Arg Ala 260 265 270 275 gtg act tet cag ttt ecc acc age etc ect acá gaa gat gat acc aag 979 Val Thr Ser Gln Phe Pro Thr Ser Leu Pro Thr Glu Asp Asp Thr Lys 5 280 285 290 ata gca cta cat cta aaa gat aat gga gct tet acá gat gac agt gca 1027 He Ala Leu His Leu Lys Asp Asn Gly Ala Ser Thr Asp Asp Ser Ala 295 300 305 : gct gag aag aaa ggg gga acc etc cae gct ggc etc ate gtt gga ate 1075 0 Ala Glu Lys Lys Gly Gly Thr Leu His Ala Gly Leu He Val Gly He 310 315 320 etc ate ctg gtc etc att gta gcc acá gcc att ctt gtg acá gtc tat 1123 Leu He Leu Val Leu He Val Ala Thr Ala He Leu Val Thr Val Tyr 325 330 335 5 atg tat cae cae cca acá tea gca gcc age ate ttc ttt att gag aga 1171 Met Tyr His His Pro Thr Ser Ala Ala Ser He Phe Phe He Glu Arg 340 345 350 355 cgc cca age aga tgg ect gcg atg aag ttt aga aga ggc tet gga cat 1219 Arg Pro Ser Arg Trp Pro Ala Met Lys Phe Arg Arg Gly Ser Gly His 0 360 365 370 ect gcc tat gct gaa gtt gaa cca gtt gga gag aaa gaa ggc ttt att 1267 Pro Ala Tyr Ala Glu Val Glu Pro Val Gly Glu Lys Glu Gly Phe He 375 380 385 gta tea gag cag tgc taaaatttct aggacagaac aacaccagta ctggtttaca 1322 390 ggtgttaaga ctaaaatttt gcctatacct ttaagacaaa caaacaaaca cacacacaaa 1382 caagctctaa gctgctgtag cctgaagaag acaagatttc tggacaagct cagcccagga £442 aacaaagggt aaacaaaaaa ctaaaactta tacaagatac catttacact gaacatagaa 1S02 ttccctagtg gaatgtcatc tatagttcac tcggaacatc tcccgtggac ttatctgaag !$62 tatgacaaga ttataatgct tttggcttag gtgcagggtt gcaaagggat cagaaaaaaa 1622 aaatcataat aaagctttag ttcatgaggg atcgacacct ttggttcaaa tgttctctga 1682 tgtctcaaag ataactgttt tccaaagcct gaaccctttc actcaaaaga gcaatgatga 1742 atgtctcaag attgctaaga aaaacagccc atgcaagagt gagaacaaac acaaaataag 1802 agattttcta cattttcaaa acagatgtgt ggcaaaagga tgttgttttt ctggtctaga 1862 tccatctgta ccaacaagtt catcacttta cagaacgaat ctttttatcc gtacaggagg 1S_2 ttcaaaccat gtctgcctct tcctttgtaa tgaatgacct ttctatgagc tgtgacaaaa 1982 tttccgaaca attagctaag gatttgggaa gagggggtgg caaacggggc tttctgtttt 2042 cctgcctcag catgaaaaca tctgatttat gctttatgga agccttacct ccaatcccca 2102 actgttaagt cccatgaaac cacagttgct ctgggctgat ggaaacaaaa ggaaacagta 2162 tgaagagttc cttaatcatt tttgaaacaa aaatgttaag ggattttaaa catatgatta 2222 tttttaattt tatgcctttt cagtactaaa cacccatttc attgctgatt cctgtctaag 2282 aagccattca cgtcagcatg gcgatagaaa gaatgaaaaa accctgctga atcatacagt 2342 aattttcttt 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Val Leu 115 120 125 Val Thr Gln He Ser Ser Thr Asn His Pro Val Lys Val Gly Leu Ser 130 135 140 Asp Ala Phe Val Val Val His Arg He Gln Gln He Pro Asn Val Arg 145 150 155 160 Arg Arg Thr He Tyr Glu Tyr Has Arg '.'al Glu Leu Glr. 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Ser Lys ..t-..µ ^,-i_,_,_. 165 170 175 He Thr Asn He Ser Ala Val Glu Met Thr Pro Leu Pro Thr Cys Leu 180 185 190 Gln Phe Asn Arg Cys Gly Pro Cys Val Ser Ser Gln He Gly Phe Asn 195 200 205 Cys Ser Trp Cys Ser Lys Leu Gln Arg Cys Ser Ser Gly Phe Asp Arg 210 215 220 His Arg Gln Asp Trp Val Asp Ser Gly Cys Pro Glu Glu Ser Lys Glu 225 230 235 240 Lys Met Cys Glu Asn Thr Glu Pro Val Glu Thr Ser Ser Arg Thr Thr 245 250 255 Thr Thr He Gly Ala Thr Thr Thr Gln Phe Arg Val Leu Thr Thr Thr 260 265 270 Arg Arg Ala Val Thr Ser Gln Phe Pro Thr Ser Leu Pro Thr Glu Asp 275 280 285 Asp Thr Lys He Ala Leu His Leu Lys Asp Asn Gly Ala Ser Thr Asp 290 295 300 Asp Ser Ala Ala Glu Lys Lys Gly Gly Thr Leu His Ala Gly Leu He 305 310 315 320 Val Gly He Leu He Leu Val Leu He Val Ala Thr Ala He Leu Val 325 330 335 Thr Val Tyr Met Tyr His His Pro Thr Ser Ala Ala Ser He Phe Phe 340 345 350 He Glu Arg Arg Pro Ser Arg Trp Pro Ala Met Lys Phe Ar Arg Gly 355 360 2 -25 ,____J¡__t», -J¿,.-ca__-_ __-._.,.,...»^__i___ Ser Gly Has Pro Ala Tyr Ala Glu Val Glu Pro Val Gly Glu Lys Glu 370 375 380 Gly Phe He Val Ser Glu Gln Cys 385 390 <210> 26 <211> 1179 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 26 atggaaaaag ataaagtgaa gattcatgga atattgtcca atactcatcg gcaagctgca 60 agagtgaatc tgtccttcga ttttccattt tatggccact tcctacgtga aatcactgtg 120 gcaaccgggg gtttcatata cactggagaa gtcgtacatc gaatgetaac agccacacag 180 tacatageac ctttaatggc aaatttcgat cccagtgtat ecagaaatte aactgtcaga 240 tattttgata atggcacagc acttgtggtc cagtgggacc atgtacatct ccaggataat 300 tataacctgg gaagcttcac attccaggca accctgctca tggatggacg aatcatcttt 360 ggatacaaag aaattcctgt cttggtcaca cagataagtt caaccaatca tccagtgaaa 420 gtcggactgt cegatgeatt tgtcgttgtc cacaggatcc aacaaattcc caatgttcga 480 agaagaacaa tttatgaata ccaccgagta gagetacaaa tgtcaaaaat taccaacatt 540 tcggctgtgg agatgacccc attacccaca tgcctccagt ttaacagatg tggcccctgt 600 gtatettetc agattggctt caactgcagt tggtgtagta aacttcaaag atgttccagt 660 ggatttgatc gtcateggea ggactgggtg gacagtggat gccctgaaga gtcaaaagag 720 aagatgtgtg agaatacaga accagtggaa acttcttctc gaaccaccac aaccatagga 780 gcgacaacca cccagttcag ggtcctaact accaccagaa gagcagtgac ttctcagttt 840 cccaccagcc tccctacaga agatgatacc aagatagcac tacatetaaa agataatgga 900 gcttctacag atgacagtgc agctgagaag aaagggggaa ccctccacgc tsgcctca c 960 ____ E¿--"-k* **°*^ gttggaatcc tcatcctggt cctcattgta gccacagcca ttcttgtgac agtctatatg 1020 tatcaccacc caacatcagc agccagcatc ttctttattg agagacgccc aagcagatgg 1080 cctgcgatga agtttagaag aggctctgga catcctgcct atgctgaagt tgaaccagtt 1140 ggagagaaag aaggctttat tgtatcagag cagtgctaa 1179 <210> 27 <211> 3095 <212> ADN <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (123) .. (1712) <400> 27 tttcgttccg ggtcctaccg agaccgatcc gcagcgtttg gcccggtcgt gcctattgca 60 tcgggagccc ccgagcaccg gcgaaggact ggcggctggg gtagggaggt ggcggcggcg 120 ge atg gcg agg ttc ccg aag gcc gac ctg gcc gct gca gga gtt atg 167 Met Ala Arg Phe Pro Lys Ala Asp Leu Ala Ala Ala Gly Val Met 1 5 10 15 tta ctt tgc cae ttc ttc acg gac cag ttt cag ttc gcc gat ggg aaa 215 Leu Leu Cys His Phe Phe Thr Asp Gln Phe Gln Phe Ala Asp Gly Lys 20 25 30 ecc gga gac caá ate ctt gat tgg cag tat gga gtt act cag gcc ttc 263 Pro Gly Asp Gln He Leu Asp Trp Gln Tyr Gly Val Thr Gln Ala Phe 35 40 45 ect cae acá gag gag gag gtg gaa gtt gat tea cae gcg tac age cae 31_ Pro His Thr Glu Glu Glu Val Glu Val Asp Ser Has Ala Tyr Ser Has .___. -___flp __t___í_ 50 55 60 agg tgg aaa aga aac ttg gac ttt etc aag gcg gta gac acg aac cga 359 Arg Trp Lys Arg Asn Leu Asp Phe Leu Lys Ala Val Asp Thr Asn Arg 65 70 75 gca age gtc ggc caá gac tet ect gag ecc aga age ttc acá gac ctg 407 Ala Ser Val Gly Gln Asp Ser Pro Glu Pro Arg Ser Phe Thr Asp Leu 80 85 90 95 ctg ctg gat gat ggg cag gac aat aac act cag ate gag gag gat acá 455 Leu Leu Asp Asp Gly Gln Asp Asn Asn Thr Gln He Glu Glu Asp Thr 100 105 110 gac cae aat tac tat ata tet cga ata tat ggt cca tet gat tet gcc 503 Asp His Asn Tyr Tyr He Ser Arg He Tyr Gly Pro Ser Asp Ser Ala 115 120 125 age cgg gat tta tgg gtg aac ata gac caá atg gaa aaa gat aaa gtg 551 Ser Arg Asp Leu Trp Val Asn He Asp Gln Met Glu Lys Asp Lys Val 130 135 140 aag att cat gga ata ttg tec aat act cat cgg caá gct gca aga gtg 599 Lys He His Gly He Leu Ser Asn Thr His Arg Gln Ala Ala Arg Val 145 150 155 aat ctg tec ttc gat ttt cca ttt tat ggc cae ttc cta cgt gaa ate 647 Asn Leu Ser Phe Asp Phe Pro Phe Tyr Gly His Phe Leu Arg Glu He 160 165 170 175 act gtg gca acc ggg ggt ttc ata tac act gga gaa gtc gta cat cga 695 Thr Val Ala Thr Gly Gly Phe He Tyr Thr Gly Glu Val Val Has Arg 180 185 ISO atg cta acá gcc acá cag tac ata gca ect tta atg gca aat ttc gat 743 Met Leu Thr Ala Thr Gln Tyr He Ala Pro Leu Met Ala Asn Phe Asp 195 200 205 ecc agt gta tec aga aat tea act gtc aga tat ttt gat aat ggc acá 791 Pro Ser Val Ser Arg Asn Ser Thr Val Arg Tyr Phe Asp Asn Gly Thr 210 215 220 gca ctt gtg gtc cag tgg gac cat gta cat etc cag gat aat tat aac 839 Ala Leu Val Val Gln Trp Asp His Val Has Leu Gln Asp Asn Tyr Asn 225 230 235 ctg gga age ttc acá ttc cag gca acc ctg etc atg gat gga cga ate 887 Leu Gly Ser Phe Thr Phe Gln Ala Thr Leu Leu Met Asp Gly Arg He 240 245 250 255 ate ttt gga tac aaa gaa att ect gtc ttg gtc acá cag ata agt tea 935 He Phe Gly Tyr Lys Glu He Pro Val Leu Val Thr Gln He Ser Ser 260 265 270 acc aat cat cca gtg aaa gtc gga ctg tec gat gca ttt gtc gtt gtc 983 Thr Asn His Pro Val Lys Val Gly Leu Ser Asp Ala Phe Val Val Val 275 280 285 cae agg ate caá caá att cc aat gtt cga aga aga acá att tat gaa 1031 His Arg He Gln Gln He Pro Asn Val Arg Arg Arg Thr He Tyr Glu 290 295 300 tac cae cga gta gag cta caá atg tea aaa att acc aac att teg gct 1079 Tyr Has Arg Val Glu Leu Gln Met Ser Lys He Thr Asn He Ser Ala 305 310 315 gtg gag atg acc cca tta ecc acá tgc etc cag ttt aac aga tgt g ic 11.

Val Glu Met Thr Pro Leu Pro Thr Cys Leu Gln Phe Asn Arg Cys Gly 320 325 330 335 ecc tgt gta tet tet cag att ggc ttc aac tgc agt tgg tgt agt aaa 1175 Pro Cys Val Ser Ser Gln He Gly Phe Asn Cys Ser Trp Cys Ser Lys 340 345 350 ctt caá aga tgt tec agt gga ttt gat cgt cat cgg cag gac tgg gtg 1223 Leu Gln Arg Cys Ser Ser Gly Phe Asp Arg His Arg Gln Asp Trp Val 355 360 365 gac agt gga tgc ect gaa gag tea aaa gag aag atg tgt gag aat acá 1271 Asp Ser Gly Cys Pro Glu Glu Ser Lys Glu Lys Met Cys Glu Asn Thr 370 375 380 gaa cca gtg gaa act tet tet cga acc acc acá acc ata gga gcg acá 1319 Glu Pro Val Glu Thr Ser Ser Arg Thr Thr Thr Thr He Gly Ala Thr 385 390 395 acc acc cag ttc agg gtc cta act acc acc aga aga gca gtg act tet 1367 Thr Thr Gln Phe Arg Val Leu Thr Thr Thr Arg Arg Ala Val Thr Ser 400 405 410 415 cag ttt ecc acc age etc ect acá gaa gat gat acc aag ata gca cta 1415 Gln Phe Pro Thr Ser Leu Pro Thr Glu Asp Asp Thr Lys He Ala Leu 420 425 430 cat cta aaa gat aat gga gct tet acá gat gac agt gca gct gag aag 1463 His Leu Lys Asp Asn Gly Ala Ser Thr Asp Asp Ser Ala Ala Glu Lys 435 440 445 aaa ggg gga acc etc cae gct ggc etc ate gtt gga ate etc ate ctg isi: Lys Gly Gly Thr Leu His Ala Gly Leu He Val Gly He Leu He Lee, 450 455 460 gtc etc att gta gcc acá gcc att ctt gtg acá gtc tat atg tat cae 1559 Val Leu He Val Ala Thr Ala He Leu Val Thr Val Tyr Met Tyr Has 465 470 475 cae cca acá tea gca gcc age ate ttc ttt att gag aga cgc cca age 1607 His Pro Thr Ser Ala Ala Ser He Phe Phe He Glu Arg Arg Pro Ser 480 485 490 495 aga tgg ect gcg atg aag ttt aga aga ggc tet gga cat ect gcc tat 1655 Arg Trp Pro Ala Met Lys Phe Arg Arg Gly Ser Gly Has Pro Ala Tyr 500 505 510 gct gaa gtt gaa cca gtt gga gag aaa gaa ggc ttt att gta tea gag 1703 Ala Glu Val Glu Pro Val Gly Glu Lys Glu Gly Phe He Val Ser Glu 515 520 525 cag tgc taa aatttctagg acagaacaac accagtactg gtttacaggt 1752 Gln Cys gttaagacta aaattttgcc tatacettta agacaaacaa acaaacacac acacaaacaa 1812 gctctaagct gctgtagcct gaagaagaca agatttctgg acaagetcag cccaggaaac 1872 aaagggtaaa caaaaaacta aaaettatac aagataccat ttacactgaa catagaattc 1932 cctagtggaa tgtcatctat agttcactcg gaacatctcc cgtggactta tctgaagtat 1992 gacaagatta taatgctttt ggcttaggtg cagggttgca aagggatcag aaaaaaaaaa 2052 tcataataaa gctttagttc atgagggatc gacacctttg gttcaaatgt tctctgatgt 2112 ctcaaagata actgttttcc aaagcctgaa ccctttcact caaaagagca atgatgaatg 2172 tetcaagatt gctaagaaaa acagcccatg caagagtgag aacaaacaca aaataagaga 2232 ttttctacat tttcaaaaca gatgtgtggc aaaaggatgt tgtttttctg gtetagatec 2292 atctgtacca acaagttcat cartttacag aac aatct tttatccg a caggaggttc 2352 aaaccatgtc tgcctcttcc tttgtaatga atgacctttc tatgagctgt gacaaaattt 2412 ccgaacaatt agctaaggat ttgggaagag ggggtggcaa acggggcttt ctgttttcct 2472 gcctcagcat gaaaacatct gatttatget ttatggaagc cttacctcca atccccaact 2532 gttaagtccc atgaaaccac agttgctctg ggctgatgga aacaaaagga aacagtatga 2592 agagttcctt aatcattttt gaaacaaaaa tgttaaggga ttttaaacat atgattattt 2652 ttaattttat gccttttcag tactaaacac ecattteatt gctgattcct gtctaagaag 2712 ccattcacgt cagcatggcg atagaaagaa tgaaaaaacc ctgctgaatc atacagtaat 2772 tttctttaaa gcacatagta gttacataaa tatatatata taaatatatt tttgtttata 2832 actaacacaa ggcaggatct tgtgactcta agagtgcgtt ttgtcatcaa gacaaaacag 2892 atgcaagatg catcactgca ttaettecat agagttgtaa aataatcctt aatattagaa 2952 tatttttctg teaettagea aaagtggttc agttcattgc cgcgcccatc atgttcttga 3012 ctatttgatc cactttttcg tttatgtcaa ccccttccct ctctggctaa ataaagtgga 3072 tgcagaaagc tccttaaatg gaa 3095 <210> 28 <211> 529 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 28 Met Ala Arg Phe Pro Lys Ala Asp Leu Ala Ala Ala Gly Val Met Leu 1 5 10 15 Leu Cys His Phe Phe Thr Asp Gln Phe Gln Phe Ala Asp Gly Lys Pro 20 25 30 Gly Asp Gln He Leu Asp Trp Gln Tyr Gly Val Thr Gln Ala Phe Pro 35 40 45 His Thr Glu Glu Glu Val Glu Val Asp Ser Has Ala Tyr Ser Has Arg 50 55 60 Trp Lys Arg Asn Leu Asp Phe Leu Lys Ala Val Asp Thr Asn Arg Ala 65 70 75 80 Ser Val Gly Gln Asp Ser Pro Glu Pro Arg Ser Phe Thr Asp Leu Leu 85 90 95 Leu Asp Asp Gly Gln Asp Asn Asn Thr Gln He Glu Glu Asp Thr Asp 100 105 110 Has Asn Tyr Tyr He Ser Arg He Tyr Gly Pro Ser Asp Ser Ala Ser 115 120 125 Arg Asp Leu Trp Val Asn He Asp Gln Met Glu Lys Asp Lys Val Lys 130 135 140 lie Has Gly He Leu Ser Asn Thr Has Arg Gln Ala Ala Arg Val Asn 145 150 155 160 Leu Ser Phe Asp Phe Pro Phe Tyr Gly Has Phe Leu Arg Glu He Thr 165 170 175 Val Ala Thr Gly Gly Phe He Tyr Thr Gly Glu Val Val Has Arg Met 180 185 190 Leu Thr Ala Thr Gln Tyr He Ala Pro Leu Met Ala Asn Phe Asp Pro 195 200 205 Ser Val Ser Arg Asn Ser Thr Val Arg Tyr Phe Asp Asn Gly Thr Ala 210 215 220 Leu Val Val Gln Trp Asp Has Val Has Leu Gln Asp Asn Tyr Asn Leu 225 230 235 240 Gly Ser Phe Thr Phe Gln Ala Thr Leu Leu Met Ase Gly Arg He He 245 250 255 t _____.a.._ _______rlr f? riWft - ¡jr nffljffii Phe Gly Tyr Lys Glu He Pro Val Leu Val Thr Gln He Ser Ser Thr 260 265 270 Asn His Pro Val Lys Val Gly Leu Ser Asp Ala Phe Val Val Val His 275 280 285 Arg He Gln Gln He Pro Asn Val Arg Arg Arg Thr He Tyr Glu Tyr 290 295 300 His Arg Val Glu Leu Gln Met Ser Lys He Thr Asn He Ser Ala Val 305 310 315 320 Glu Met Thr Pro Leu Pro Thr Cys Leu Gln Phe Asn Arg Cys Gly Pro 325 330 335 Cys Val Ser Ser Gln He Gly Phe Asn Cys Ser Trp Cys Ser Lys Leu 340 345 350 <31n Arg Cys Ser Ser Gly Phe Asp Arg His Arg Gln Asp Trp Val Asp 355 360 365 Ser Gly Cys Pro Glu Glu Ser Lys Glu Lys Met Cys Glu Asn Thr Glu 370 375 380 Pro Val Glu Thr Ser Ser Arg Thr Thr Thr Thr He Gly Ala Thr Thr 385 390 395 400 Thr Gln Phe Arg Val Leu Thr Thr Thr Arg Arg Ala Val Thr Ser Gln 405 410 415 Phe Pro Thr Ser Leu Pro Thr Glu Asp Asp Thr Lys He Ala Leu His 420 425 430 Leu Lys Asp Asn Gly Ala Ser Thr Asp Asp Ser Ala Ala Glu Lys Lys 435 440 445 Gly Gly Thr Leu His Ala Gly Leu He Val Gly He Le_ He Leu Val 450 455 46r Leu He Val Ala Thr Ala He Leu Val Thr Val Tyr Met Tyr His Has 465 470 475 480 Pro Thr Ser Ala Ala Ser He Phe Phe He Glu Arg Arg Pro Ser Arg 485 490 495 Trp Pro Ala Met Lys Phe Arg Arg Gly Ser Gly His Pro Ala Tyr Ala 500 505 510 • Glu Val Glu Pro Val Gly Glu Lys Glu Gly Phe He Val Ser Glu Gln 515 520 525 10 Cys <210> 29 <211> 1590 <212> ADN <213> Homo sapiens 15 <400> 29 atggcgaggt tcccgaaggc cgacctggcc gctgcaggag ttatgttact ttgccacttc 60 ttcacggacc agtttcagtt cgccgatggg aaacccggag accaaatcct tgattggcag 120 tatggagtta ctcaggcctt ccctcacaca gaggaggagg tggaagttga ttcacacgcg 180 tacagccaca ggtggaaaag aaacttggac tttctcaagg cggtagacac gaaccgagca 240 ^w 20 agcgtcggcc aagactctcc tgagcccaga agcttcacag acctgctgct ggatgatggg 300 caggacaata acactcagat cgaggaggat acagaccaca attactatat atctcgaata 360 tatggtccat ctgattctgc cagccgggat ttatgggtga acatagacca aatggaaaaa 420 gataaagtga agattcatgg aatattgtcc aatactcatc ggcaagctgc aagagtgaat 480 ctgtccttcg attttccatt ttatggccac ttcctacgtg aaar-actgt ggcaaccggg 540 25 ggtttcatat acactggaga agtcgtacat cgaatgctaa cac::aca:3 gtaratagca 600 cctttaatgg caaatttcga tcccagtgta tccagaaatt caactgtcag atattttgat 66C aatggcacag cacttgtggt ccagtgggac catgtacatc tccaggataa ttataacctg 72C ggaagcttca cattccaggc aaccctgctc atggatggac gaatcatctt tggatacaaa 780 gaaattcctg tcttggtcac acagataagt tcaaccaatc atccagtgaa agtcggactg 840 tccgatgcat ttgtcgttgt ccacaggatc caacaaattc ccaatgttcg aagaagaaca 900 atttatgaat accaccgagt agagctacaa atgtcaaaaa ttaccaacat ttcggctgtg 960 gagatgaccc cattacccac atgcctccag tttaacagat gtggcccctg tgtatcttct 1020 cagattggct tcaactgcag ttggtgtagt aaacttcaaa gatgttccag tggatttgat 1080 cgtcatcggc aggactgggt ggacagtgga tgccctgaag agtcaaaaga gaagatgtgt 1140 gagaatacag aaccagtgga aacttcttct cgaaccacca caaccatagg agcgacaacc 1200 acccagttca gggtcctaac taccaccaga agagcagtga cttctcagtt tcccaccagc 1260 ctccctacag aagatgatac caagatagca ctacatctaa aagataatgg agcttctaca 1320 gatgacagtg cagctgagaa gaaaggggga accctccacg ctggcctcat cgttggaatc 1380 ctcatcctgg tcctcattgt agccacagcc attcttgtga cagtctatat gtatcaccac 1440 ccaacatcag cagccagcat cttctttatt gagagacgcc caagcagatg gcctgcgatg 1500 aagtttagaa gaggctctgg acatcctgcc tatgctgaag ttgaaccagt tggagagaaa 1560 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Gly Gly Phe He Tyr T_r Gly Gla Val Val Has »_,___._.....____. _„ ,.__ »..c»^^__^^_„„___-_c_^ 145 150 155 160 Arg Met Leu Thr Ala Thr Gln Tyr He Ala Pro Le_ Met Ala Asn Phe 165 170 175 Asp Pro Ser Val Ser Arg Asn Ser Thr Val Arg Tyr Phe Asp Asn Gly 5 180 185 190 Thr Ala Leu Val Val Gln Trp Asp His Val His Leu Gln Asp Asn Tyr 195 200 205 • Asn Leu Gly Ser Phe Thr Phe Gln Ala Thr Leu Leu Met Asp Gly Arg 210 215 22. 10 He He Phe Gly Tyr Lys Glu He Pro Val Leu Val Thr Gln He Ser 225 230 235 240 Ser Thr Asn His Pro Val Lys Val Gly Leu Ser Asp Ala Phe Val Val 245 250 255 Val His Arg He Gln Gln He Pro Asn Val Arg Arg Arg Thr He Tyr 15 260 265 270 Glu Tyr Has Arg Val Glu Leu Gln Met Ser Lys He Thr Asn He Ser 275 280 285 Ala Val Glu Met Thr Pro Leu Pro Thr Cys Leu Gln Phe Asn Arg Cys 290 295 300 ?k 20 Gly Pro Cys Val Ser Ser Gln He Gly Phe Asn Cys Ser Trp Cys Ser 305 310 315 320 Lys Leu Gln Arg Cys Ser Ser Gly Phe Asp Arg Has Arg Gln Asp Trp 325 330 335 Val Asp Ser Gly Cys Pro Glu Glu Ser Lys Gl_ Lys Met C_-s Glu Asn 25 340 345 --50 __ ^.--i j _,--_-^^ Thr Glu Pro Val Glu Thr Ser Ser Arg Thr Thr Thr Thr He Gly Ala 355 360 365 Thr Thr Thr Gln Phe Arg Val Leu Thr Thr Thr Arg Arg Ala Val Thr 370 375 380 Ser Gln Phe Pro Thr Ser Leu Pro Thr Glu Asp Asp Thr Lys He Ala 385 390 395 400 Leu Has Leu Lys Asp Asn Gly Ala Ser Thr Asp Asp Ser Ala Ala Glu 405 410 415 Lys Lys Gly Gly Thr Leu Has Ala Gly Leu He Val Gly He Leu He 420 425 430 Leu Val Leu He Val Ala Thr Ala He Leu Val Thr Val Tyr Met Tyr 435 440 445 Has Has Pro Thr Ser Ala Ala Ser He Phe Phe He Glu Arg Arg Pro 450 455 460 Ser Arg Trp Pro Ala Met Lys Phe Arg Arg Gly Ser Gly Has Pro Ala 465 470 475 480 Tyr Ala Glu Val Glu Pro Val Gly Glu Lys Glu Gly Phe He Val Ser 485 490 495 Glu Gln Cys <210> 32 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 32 Leu Has Ala Gly Leu He Val Gl v He Le _ He Leu Val Leu He '. al ....... ..._s_^__... 1 5 10 15 Ala Thr Ala He Leu Val Thr Val Tyr Met Tyr Ha. 20 25 <210> 33 <211> 1351 <212> ADN <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> ( 5 ) . . ( 1351) <400> 33 cggc atg gcg agg ttc ccg aag gcc gac ctg gcc gct gca gga gtt atg 49 Met Ala Arg Phe Pro Lys Ala Asp Leu Ala Ala Ala Gly Val Met 1 5 10 15 tta ctt tgc cae ttc ttc acg gac cag ttt cag ttc gcc gat ggg aaa 97 Leu Leu Cys His Phe Phe Thr Asp Gln Phe Gln Phe Ala Asp Gly Lys 20 25 30 ecc gga gac caá ate ctt gat tgg cag tat gga gtt act cag gcc ttc 145 Pro Gly Asp Gln He Leu Asp Trp Gln Tyr Gly Val Thr Gln Ala Phe 35 40 45 ect cae acá gag gag gag gtg gaa gtt gat tea cae gcg tac age cae 193 Pro His Thr Glu Glu Glu Val Glu Val Asp Ser His Ala Tyr Ser His 50 55 60 agg tgg aaa aga aac ttg gac ttt etc aag gcg gta gac acg aac cga 241 Arg Trp Lys Arg Asn Leu Asp Phe Leu Lys Ala Val .sp Thr Asn Arg ecc agt gta tec aga aat tea act gtc aga tat ttt gat aat ggc acá 673 Pro Ser Val Ser Arg Asn Ser Thr Val Arg Tyr Phe Asp Asn Gly Thr 210 215 22C gca ctt gtg gtc cag tgg gac cat gta cat etc cag gat aat tat aac 721 5 Ala Leu Val Val Gln Trp Asp His Val His Leu Gln Asp Asn Tyr Asn 225 230 235 ctg gga age ttc acá ttc cag gca acc ctg etc atg gat gga cga ate 769 • Leu Gly Ser Phe Thr Phe Gln Ala Thr Leu Leu Met Asp Gly Arg He 240 245 250 255 10 ate ttt gga tac aaa gaa att ect gtc ttg gtc acá cag ata agt tea 817 He Phe Gly Tyr Lys Glu He Pro Val Leu Val Thr Gln He Ser Ser 260 265 270 acc aat cat cca gtg aaa gtc gga ctg tec gat gca ttt gtc gtt gtc 865 Thr Asn His Pro Val Lys Val Gly Leu Ser Asp Ala Phe Val Val Val 15 275 280 285 cae agg ate caá caá att ecc aat gtt cga aga aga acá att tat gaa 913 His Arg He Gln Gln He Pro Asn Val Arg Arg Arg Thr He Tyr Glu 290 295 300 tac cae cga gta gag cta caá atg tea aaa att acc aac att teg gct 961 JB^ 20 Tyr His Arg Val Glu Leu Gln Met Ser Lys He Thr Asn He Ser Ala 305 310 315 gtg gag atg acc cca tta ecc acá tgc etc cag ttt aac aga tgt ggc 1009 Val Glu Met Thr Pro Leu Pro Thr Cys Leu Gln Phe Asn Arg Cys Gly 320 325 330 335 25 ecc tgt gta tet tet cag att ggc ttc aac tgc agt tgg tgt agt aaa 1057 ?jí Pro Cys Val Ser Ser Gln He Gly Phe Asn Cys Ser Trp Cys Ser Lys 340 345 350 ctt caá aga tgt tec agt gga ttt gat cgt cat cgg cag gac tgg gtg 1105 Leu Gln Arg Cys Ser Ser Gly Phe Asp Arg Has Arg Gln Asp Trp Val 355 360 365 gac agt gga tgc ect gaa gag tea aaa gag aag atg tgt gag aat acá 1153 Asp Ser Gly Cys Pro Glu Glu Ser Lys Glu Lys Met Cys Glu Asn Thr 370 375 380 gaa cca gtg gaa act tet tet cga acc acc acá acc ata gga gcg acá 1201 Glu Pro Val Glu Thr Ser Ser Arg Thr Thr Thr Thr He Gly Ala Thr 385 390 395 acc acc cag ttc agg gtc cta act acc acc aga aga gca gtg act tet 1249 Thr Thr Gln Phe Arg Val Leu Thr Thr Thr Arg Arg Ala Val Thr Ser 400 405 410 415 cag ttt ecc acc age etc ect acá gaa gat gat acc aag ata gca cta 1297 Gln Phe Pro Thr Ser Leu Pro Thr Glu Asp Asp Thr Lys He Ala Leu 420 425 430 cat cta aaa gat aat gga gct tet acá gat gac agt gca gct gag aag 1345 Hís Leu Lys Asp Asn Gly Ala Ser Thr Asp Asp Ser Ala Ala Glu Lys 435 440 445 aaa ggg 1351 lys Gly <210> 34 <211> 449 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 34 Met Ala Arg Phe Pro Lys Ala Asp Leu Ala Ala Ala Gly Val Met Leu 1 5 10 15 Leu Cys His Phe Phe Thr Asp Gln Phe Gln Phe Ala Asp Gly Lys Pro 20 25 30 Gly Asp Gln He Leu Asp Trp Gln Tyr Gly Val Thr Gln Ala Phe Pro 35 40 45 Has Thr Glu Glu Glu Val Glu Val Asp Ser Has Ala Tyr Ser Has Arg 50 55 60 Trp Lys Arg Asn Leu Asp Phe Leu Lys Ala Val Asp Thr Asn Arg Ala 65 70 75 80 Ser Val Gly Gln Asp Ser Pro Glu Pro Arg Ser Phe Thr Asp Leu Leu 85 90 95 Leu Asp Asp Gly Gln Asp Asn Asn Thr Gln He Glu Glu Asp Thr Asp 100 105 110 His Asn Tyr Tyr He Ser Arg He Tyr Gly Pro Ser Asp Ser Ala Ser 115 120 125 Arg Asp Leu Trp Val Asn He Asp Gln Met Glu Lys Asp Lys Val Lys 130 135 140 He His Gly He Leu Ser Asn Thr Has Arg Gln Ala Ala Arg Val Asn 145 150 155 160 Leu Ser Phe Asp Phe Pro Phe Tyr Gly Has Phe Leu Arg Glu He Thr 165 170 175 Val Ala Thr Gly Gly Phe He Tyr Thr Gly Glu Va_ Val -as Arg Met 180 185 190 Leu Thr Ala Thr Gln Tyr He Ala Pro Leu Met Ala Asn Phe Asp Pro 195 200 205 Ser Val Ser Arg Asn Ser Thr Val Arg Tyr Phe Asp Asn Gly Thr Ala 210 215 220 Leu Val Val Gln Trp Asp Has Val Has Leu Gln Asp Asn Tyr Asn Leu 225 230 235 240 Gly Ser Phe Thr Phe Gln Ala Thr Leu Leu Met Asp Gly Arg He He 245 250 255 Phe Gly Tyr Lys Glu He Pro Val Leu Val Thr Gln He Ser Ser Thr 260 265 270 Asn His Pro Val Lys Val Gly Leu Ser Asp Ala Phe Val Val Val Has 2?5 28° 285 Arg He Gln Gln He Pro Asn Val Arg Arg Arg Thr He Tyr Glu Tyr 290 295 300 His Arg Val Glu Leu Gln Met Ser Lys He Thr Asn He Ser Ala Val 305 310 315 320 Glu Met Thr Pro Leu Pro Thr Cys Leu Gln Phe Asn Arg Cys Gly Pro 325 330 335 Cys Val Ser Ser Gln He Gly Phe Asn Cys Ser Trp Cys Ser Lys Leu 340 345 350 Gln Arg Cys Ser Ser Gly Phe Asp Arg Has Arg Gln Asp Trp Val Asp 355 360 365 Ser Gly Cys Pro Glu Glu Ser Lys Glu Lys Met Cys Glu Asn Thr Glu 370 375 38? Mitotea1-t?i—_Éitf_____, Pro Val Glu Thr Ser Ser Arg Thr Thr Thr Thr He Gly Ala Thr Thr 385 390 395 400 Thr Gln Phe Arg Val Leu Thr Thr Thr Arg Arg Ala Val Thr Ser Gln 405 410 415 Phe Pro Thr Ser Leu Pro Thr Glu Asp Asp Thr Lys He Ala Leu Has 420 425 430 Leu Lys Asp Asn Gly Ala Ser Thr Asp Asp Ser Ala Ala Glu Lys Lys 435 440 445 Gly <210> 35 <211> 425 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 35 Pro Arg Val Arg Pro Arg Val Arg Thr Asp Has Asn Tyr Tyr He Ser 1 5 10 15 Arg He Tyr Gly Pro Ser Asp Ser Ala Ser Arg Asp Leu Trp Val Asn 20 25 30 He Asp Gln Met Glu Lys Asp Lys Val Lys He Has Gly He Leu Ser 35 40 45 Asn Thr Has Arg Gln Ala Ala Arg Val Asn Leu Ser Phe Asp Phe Pro 50 55 60 Phe Tyr Gly Has Phe Leu Arg Gla He Thr Val Ala Thr Gly Gly Phe 65 70 75 30 He Tyr Thr Gly Glu Val Val F_= Arg Met Leu Thr Ala T-r Glp T/r _-_^_.-______-__- 85 90 95 He Ala Pro Leu Met Ala Asn Phe Asp Pro Ser Val Ser Arg Asn Ser 100 105 110 Thr Val Arg Tyr Phe Asp Asn Gly Thr Ala Leu Val Val Gln Trp Asp 115 120 125 His Val His Leu Gln Asp Asn Tyr Asn Leu Gly Ser Phe Thr Phe Gln 130 135 140 Ala Thr Leu Leu Met Asp Gly Arg He He Phe Gly Tyr Lys Glu He 145 150 155 160 Pro Val Leu Val Thr Gln He Ser Ser Thr Asn Has Pro Val Lys Val 165 170 175 Gly Leu Ser Asp Ala Phe Val Val Val Has Arg He Gln Gln He Pro 180 185 190 Asn Val Arg Arg Arg Thr He Tyr Glu Tyr Has Arg Val Glu Leu Gln 195 200 205 Met Ser Lys He Thr Asn He Ser Ala Val Glu Met Thr Pro Leu Pro 210 215 220 Thr Cys Leu Gln Phe Asn Arg Cys Gly Pro Cys Val Ser Ser Gln He 225 230 235 240 Gly Phe Asn Cys Ser Trp Cys Ser Lys Leu Gln Arg Cys Ser Ser Gly 245 250 255 Phe Asp Arg Has Arg Gln Asp Trp Val Asp Ser Gly Cys Pro Glu Glu 260 265 270 Ser Lys Glu Lys Met Cys Glu Asn Thr Glu Pro Vai Glu Thr Phe ~y 275 280 285 Glu Pro Pro Gln Pro Glu Arg Gln Pro Pro Ser Ser Gly Ser Leu Pro 290 295 300 Pro Glu Asp Ala Val Thr Ser Gln Phe Pro Thr Ser Leu Pro Thr Glu 305 310 315 320 Asp Asp Thr Lys He Ala Leu Has Leu Lys Asp Asn Gly Ala Ser Thr 325 330 335 Aep Asp Ser Ala Ala Glu Lys Lys Gly Gly Thr Leu His Ala Gly Leu 340 345 350 He Val Gly He Leu He Leu Val Leu He Val Ala Thr Ala He Leu 355 360 365 Val Thr Val Tyr Met Tyr His His Pro Thr Ser Ala Ala Ser He Phe 370 375 380 Phe He Glu Arg Arg Pro Ser Arg Trp Pro Ala Met Lys Phe Arg Arg 385 390 395 400 Gly Ser Gly His Pro Ala Tyr Ala Glu Val Glu Pro Val Gly Glu Lys 405 410 415 Glu Gly Phe He Val Ser Glu Gln Cys 420 425 <210> 36 <211> 431 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 36 Leu Ala Met Asp Thr Leu Pro Asp Asn Arg Thr Arg Val '.al Glu Asp "»***•' 295 1 5 10 15 Asn His Ser Tyr Tyr Val Ser Arg Leu Tyr Gly Pro Ser Glu Pro His 20 25 30 Ser Arg Glu Leu Trp Val Asp Val Ala Glu Ala Asn Arg Ser Gln Val 35 40 45 íiys He His Thr He Leu Ser Asn Thr His Arg Gln Ala Ser Arg Val 50 55 60 Val Leu Ser Phe Asp Phe Pro Phe Tyr Gly His Pro Leu Arg Gln He 65 70 75 80 10 Thr He Ala Thr Gly Gly Phe He Phe Met Gly Asp Val He His Arg 85 90 95 Met Leu Thr Ala Thr Gln Tyr Val Ala Pro Leu Met Ala Asn Phe Asn ? 10° 105 110 Pro Gly Tyr Ser Asp Asn Ser Thr Val Val Tyr Phe Asp Asn Gly Thr 15 115 120 125 Val Phe Val Val Gln Trp Asp His Val Tyr Leu Gln Gly Trp Glu Asp 130 135 140 J.ys Gly Ser Phe Thr Phe Gln Ala Ala Leu His His Asp Gly Arg He 145 150 155 160 JO Val Phe Ala Tyr Lys Glu He Pro Met Ser Val Pro Glu He Ser Ser 165 170 175 Ser Gln His Pro Val Lys Thr Gly Leu Ser Asp Ala Phe Met He Leu 180 185 190 Asn Pro Ser Pro Asp Val Pro Glu Ser Arg Arg Arg Ser He Phe Glu 25 195 200 2 Tyr Has Arg He Glu Leu Asp Pro Ser Lys Val Thr Ser Met Ser Ala 210 215 220 Val Glu Phe Thr Pro Leu Pro Thr Cys Leu Gln Has Arg Ser Cys Asp 225 230 235 240 5 Ala Cys Met Ser Ser Asp Leu Thr Phe Asn Cys Ser Trp Cys Has Val 245 250 255 Leu Gln Arg Cys Ser Ser Gly Phe Asp Arg Tyr Arg Gln Glu Trp Asp 260 265 270 Gly Thr Met Gly Cys Ala Gln Glu Ala Glu Gly Gln Asp Val Arg Gly 10 275 280 285 Leu Pro Gly Met Arg Thr Thr Thr Ser Ala Ser Pro Asp Thr Ser Phe 290 295 300 Ser Pro Tyr Asp Gly Asp Leu Thr Thr Thr Ser Ser Ser Leu Phe He 305 310 315 320 15 Asp Ser Leu Thr Thr Glu Asp Asp Thr Lys Leu Asn Pro Tyr Ala Gly 325 330 335 Gly Asp Gly Leu Gln Asn Asn Leu Ser Pro Lys Thr Lys Gly Thr Pro 340 345 350 Val His Leu Gly Thr He Val Gly He Val Leu Ala Val Leu Leu Val 20 355 360 365 Ala Ala He He Leu Ala Gly He Tyr He Asn Gly Has Pro Thr Ser 370 375 380 Asn Ala Ala Leu Phe Phe He Glu Arg Arg Pro Has Has Trp Pro Ala 385 390 395 400 5 Met Lys Phe Arg Ser Has Pro Asp Has Ser T'-r Tyr Ala Gl_ Val Glu 405 410 415 Pro Ser Gly Has Glu Lys Glu Gly Phe Met Glu Ala Glu Gln Cys 420 425 430 BLASTN: 2.0al9MP- ahU [05-Febrero-1998] [Construir sol2.5- ultra 01:47:25 05 de Febrero de 1998] Referencia: Gish, Warren (1994-1997) . No publicada. Altschul, Stephen F., Warren Gish, Webb Miller, Eugene W. Myers, y David J. Lipman (1990) . Herramiento de búsqueda de alineamiento local. J. Mol. Biol. 215:403-10. Notificación: este programa y sus ajustes de parámetros por omisión son optimizados para encontrar rápidamente secuencias csi idénticas. Para identificar semejanzaes débiles codificadas en el ácido nucleico, utiliza BLASTX, TBLASTN o TBLASTX. Averiguación: secuencia temporal (2668 letras) Base de datos: Temp. /seqfile.64767.4560546875 1 secuencia; 3095 letras totales. Búsqueda realizada Secuencias que producen pares de segmentos de alta calificación: Resultado Probabilidad alto: desuma menor P(N) (N) Secuencia temporal 13220 0.0 1 > longitud de secuencia temporal = 3095 HSPs: de cadena menos; »?iaatfe.i_w__tM-_t-*^__c-__^s__aiw-__-., Resultado: 13220 (1983.5 bits), Esperado = 0.0, P = 0.0 Identidades = 2644/2466 (100%), Positivos = 2644/2644 (100%), Cadena = menos / más Aver. 2644 TACAGAC<^CAATTACTATATATCTCGAATATATGGTCCATCTGATTCTGC AGCCssGA 2S8S 5 sui J * 452 TACAG?CCACAATrACTATATATCrOSAATATATGGTCC?TCTGATTCrGCCAGCCGGGA 511 Aver. 25ß4 TTTATGGGT-MCATAGACCAAATOGAAAAAGATAAAGTGAAsATTCATGGAATATTGTC 2525 iiittiüiüiiiiiiipsiMiüiiiiipiipipiiiiiiiitiiiiiiiiii SUJ . 512 rrrATGGGTGAACATAGACC-J_?TG;AAAAAGATAAAGTGAAGATTCATGsAATAlTGTC S71 Aver. 2S24 <?ATACTCTATCGGC-?GCTGCAAGAGTGAAtCTGTCCTTCGATTtTCCATrTTATsGCC? 2465 Su llillIIIIMIIMimiüllllMIIINIMIIIlilllllilipipiiliii J * 572 O?TACTCATCGGCAAGC*p3CA?.GAGTGAATCTGTCCTTCGATTTTCCATl- ATGGC<_- 631 10 Aver. 2464 CTTCCtACGTGAAATCACTG'rc'??CAACCGsCGGnTCA^^ 2405 liiiiiiiiiiiiiipiipiiiiMiiiiiiiiiiiiiiifiiiiiiiiiiiipiii SUj . 632 CTTCCTACGTGAAATCACTGTGGCAACCGGGGGTTTCATATACACTsGAGAAGTCGTACA 691 Aver. 2404 TCGAATGCTAACAGCC^CACAGTAC?TAGC?CCrrrAATGGCAAATTTCGATCCCAGTGT 2345 Su j . IIMilllllilliÜIIII'Ülllilillü'MiüllllüliüIlItl'üti: 692 TCGAATGCTAACAGCCACACAGTAC_vTAGCAC rrTAATGGa>?AAT*-TCGATCCCAGTGT 75 i Aver. 2344 ATCCAGAAATTCAACTCTCAsATATTTTGATAA-rGGCACAGC^^ 2285 15 SU . 752 ATCCAGAAATTCAACTGTC?GATATTTTGATAATssCACAGCACTTGTsCTCCAGTGGGA 811 2284 CC?TGTACATCTCC?GGATAAtTATAACCTGGGAAGC-TTCACATTCCAGGCAACCCTGCT 222$ -l J * 812 CCATGTACATCTCCAGGATAATTATAACCTCGGAAGCTTCAC?TTCCAsGa-\CCCTC ^ 871 Aver. 222< (^TCGATGGACGAATCATCI?TCGATACAAAsAMTTCCTG^CrrGG -^ 216S ijimiiii.ii iim iiiiiiiim.immiii.imiimim SUJ . 872 CATGGATGGACXiAATCATCT*nOGATACAAAGAMrTCCTGTCTTGGTCACACAGATAAs 931 20 Aver. 6- ^cAACi^?TC-TC-AGTGAAAsTCsGAC^GTCCGATG-TTTGTCaTTGTC-ACAssAT 2?OS Suj. 1 « 1111111111111 ! 1111111 J 111 lß 11111 J | f i 11 , i .11111111 f | f 11 i 11 § J 932 TTCAACCAATCATCCAGTGAAAGTCGGACTGTCCGATGCArTTGTCGTTGTCCACAGGAT 9_i Z_v__ " ' 2044 AATGTCAAAAA .. CCAACATTTCGsCTGTGGAGATGACCCCATTACCCACATGCCTCCA 1985 _c _ . ¿Y> SUJ . 1052 __-_TGTCAAAAATTAC_AACATTTCGGC13TGGAGATGAeCCC^rrACC<-ACATGCCTCCA lili K->cÍí_ÍI_f- Aver. 1984 QT^^^?CAGATQTGGCccCTGTGTATCTTCTCAGA rGaC T -iTGCAGTTGGTGTAs 1925 SU . ?u2 GT^TAACAGATGTGsCCCCTGTGTAT-TTCTCAGATTGGCrrCAACTGCAsTTGGTGTAG 1171 Aver 1924 TAAACTTCAAAGATGTTCCAGTGGATTTGATCGTCATCGGCAsGACTGGGTGGACAGTGG 1865 11 II 11111 i 111111111111111111111111111111 i 11111111111 II 11 II ?? c 1172 TAAACTTCAAAGATGTTCCAGTGGATTTGATCGTCATCGGCAGGACTGsGTGGACAGTGG 1231 oUJ . x 5 Aver. 1864 ATGCCCTGAAGAGTCAAAAGAGAAGATGTsTGAGAATACAGAACC'AGTsGAAACrTCTTC 1805 SUJ . 1232 ATGCCCTGAAGAGTCAAAAGAGAAGATGTGTGAsAATACAsAACCAsTGGAAACrrCTTC 1291 Aver lß04 TCGAAC-ACCACAACCATAGGAGO?ACAACCACCCAGrrCA-GsTCCTAACTACCACCAG 1745 Himp.mimiiiiiimmiiiiimiimimiimmiiiiHi 1292 TCGAACCACCACAACCATAGGAGCGACAACCACCCAGTTCAGGGTCCTAACTACCACCAG 1351 SUJ . ?v(ar 1684 ACTACATCTAAAAGATAATGGAGCTTCTACAGATGACAGTGCAGCGGAGAAGAAAGGGGG 162S 1412 ACTA AT<_TAAAAGATAATGGAGCTTCTA<?GATGAC?GTGC?GCTGAGAAGAAAGGsGG 1471 Suj. Aver* 1624 AACCCTCCA8CTGGCCTCATCGrrGGAATCCTC?TCCTGsTCC CATTGTAGCCACAGC 1565 SUJ. 1472 AACCCrC ?CGCTGGCCTC?T8TTGGAATCCTC?TCCTGGTCCT'ATTGTAGCCA-AGC 1531 15 Aver 1S64 C?TTCTTGTGAC?GTCTATATGTATCACCACCC?ACATCAGCAsCCAGCATCTTCTTTAT 1505 • 1532 C?TTCTTGTGACAGTC.ATATGTATCACCACCC'AACATCAGC^ 1591 - Aver. 1504 TCAGAGACGCCCAAG(y^ATGGCCTGCGA-GAAGTTTAGAAGAGGCTCTGsACATCCTGC 1445 SUJ . 1592 TGAGAGACGCCy-VGCAGATGGCCTGCGATGAAGTTTAGAAGAGGCTCTGGACATCCTGC 16S1 Aver !«*< CTATGCTGAAGTTCAACCAGTTGGAGAGAAAGAAGGCrrTTA^ 1385 «rt . 1652 crATGC-GAAG-TGAACAGTTGsA-AGAAAGAAGGCrr AtTGTATCAGAG-AGTGCTA 1711 Aver. l3ß4 AAArrTCTAGGACA5AAC-ACACCAGTACTG3 TTACA3sTGT7AAGACTAAAATTT:GC 1325 SUj . 1712 AAATTT<_TAGGA?GAACAAC?C(»GTACTGGTTTACAGGTtpTAAGACrAAAATTTTGC 1 71 AVPG 13 4 CTATACCTTTAAGACAAACAAACAAACACACA(^C !?ACAAGCTCTAAsCTGCTGTAGCC 1265 111111111111111111111111111111111111111 MI i 111111111 i 111 H 11 1772 CTATACCTTtAAGACAAAC--_^C__\ACACACA_ACAAACAAG<r CTAA3CTGCTGTAGCC 1831 Suj. 5 Aver " 1264 TGAAGAA3ACAAGA*ITTCTGGA-__^3CT_\GCCCAGGAAAC__^AGG-CTAAACAAAAAACT 120S ___->-_-___ T, «j^.t^«,.^_____?___ Aver, 484 TGAAACAAAAATGTTAAGGGATTn-AAACATATGA'rrAT'I l AATTTTATGCCT'rTT-A 425 _ . U . 2612 TGAAACAAAAATG*TTAAGGGATTTTAAACATATGATTATTTTTAATTrTATGCCTTTTCA 2671 Aver. 424 GTA-TAAACACCCATTTCArrGCrGATTCC GTCTrAAGAAGCC?TTCACGTCAGCATGGC c3Í5 c„ 2672 GTACTAAACACCCATTTC?'rrGCTGATTCCTGTCtAAGAAGCCATTCACGTCAGCATGGC 2731 Aver. 3ß4 CATAGAAAGAATGAAAAAACCCTGCTGAATCATACAGTAATTTTCGGIAAAGCACATAGT 305 3uj . 2732 GATAGAAAGAATCAAAAAACCCTGCTGAATC?TACAGTAATTrfCTTTAAAGCACATAsT ?791 Aver 30* AGTTACATAAATATATATATATAAATATATTTTTGTTTATAACTAACACAAGsCAGGATC 245 _ . 2792 AG-TACATAAATATATATATATAAATATATTTTTGTTTATAACTAACACAAGsCAGGATC 2851 SUJ .

Aver. 244 rrGTGACT TAAGAGTGCGTTrTGTCATCy_GACAAAA?GATGCAAGA*rsCATCAC^^ 185 SUJ . 2852 TTGTGACTCTAAGAGTGCGTT fGTCATCAAGACAAAACAGATéCAAsATGCATCACTGC 2 11 Aver. 18 ATTACTICC?TAGAGTTGTAAAATAATCCGTAATATTAGAATATTGTGCGGTC_\CTTAGC IH . 2912 ATrACTTCCATAGAG*rTGTAAAATAATCCTTAATATTAGAATATrrTTCTGTCACTTAGC 2971 Suj. AVer* 124 AAAAGTCK3*~TCAGTTCATTGCCGCGCCCATC_VTGT-CTlGACTAtTTGATCC?CrrTrrTC dS SUj . 2972 AA_?G.GGTTCAGrrCApGCCGCGCCCATCATGTTC^^ 30-1 Aver. " |||| 1111|| 11111| 11 III 11111111111111111111 M 11 ¡ II II I II 111 II 11 . 3032 GTTTATGTCAACCCCrrcCCrrCTCpXSCTAAATAAAGTGGATG-AGAMGCTCrrTAAAT 3091 Aver. 4 GGAA 1 lili Suj . 302 GGAA 3095 Parámetros: V = 10 B = 5 Ctxfactores = 2.00 E = 10 --Según lo utilizado— Calculado Averiguación Idmat Nombre de Lambda K H Lambda Cadena matriz +1 +5, -4 0.192 0.173 0.357 mismo Q = 10, 0.104 0.0151 0.0600 n/a R = 10 -1 +5, -4 0.192 0.173 0.357 mismo Q = 10, 0.104 0.0151 0.0600 n/a R = 10 K H mismo mismo n/a n/a mismo mismo n/a n/a Averiguación IDmat Longitud Longitud E W Cadena efectiva +1 0 2668 2668 10. 97 11 -1 0 2668 10 Q*7 11 T X E2 S2 73 0.024 82 102 0.43 97 73 0.024 82 102 0.43 97 Estadísticas: Base de datos: . /Temp. /seqfile.64767.4560546875 Título: Temp. /seqfile.64767.4560546875 Fecha de liberación: desconocida Fecha de envío por correo: 4:36 PM PST 21 de Diciembre de 2000 Formato: BLAST Número de letras en base de datos: 3095 Número de secuencias en base de datos: 1 Número de secuencias de base de datos que cumplen E: 1 Número de estados en DFA: 257 (257 KB) Tamaño total de DFA: 318 KB (384 KB) Tiempo para generar vecino: 0.02u O.Ols 0.03t Tiempo transcurrido: 00:00:00 Número de caminos o procesadores utilizados: 1 Tiempo de cpu de búsqueda: 0.02u O.Ols 0.03t Tiempo transcurrido: 00:00:00 Tiempo total de cpu: 0.05u 0.05s O.lOt Tiempo transcurrido: 00:00:00 Inicio: Martes, 21 de Diciembre de 2000 16:36:28 Terminación: ¡.a...-üafa_c Martes, 21 de Diciembre de 2000 116:36:28 10 15 F ^° 25

Claims

REIVINDICACIONES 1. Un polinucleótido aislado que comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada dentro del grupo que consiste de SEQ ID NO: 1-21, 24, 26-27, 29, o 33, la 5 porción codificadora de proteína traducida del mismo, la porción codificadora de proteína madura del mismo, la porción extracelular del mismo, o el dominio activo • del mismo. 2. Un polinucleótido aislado que codifica un polípéptído 10 con actividad biológica, dicho polipéptido polinucleótido se híbrida con el complemento de un polinucleótido de la reivindicación 1 en condiciones • estricrtas de hibridación. 3. Un polinucleótido aislado que codifica un polipéptido 15 con actividad biológica, dicho polinucleótido tiene una identidad de secuencia mayor que aproximadamente 90% con el polinucleótido de la reivindicación 1. 4. El polinucleótido de conformidad con la reivindicación 1, que es una secuencia de ADN. 20 5. Un polinucleótido aislado que comprende el complemento del polinucleótido de la reivindicación 1. 6. Un vector que comprende el polinucleótido de la reivindicación 1. 7. Un vector de expresión que compremde el polinucleótido 25 de la reivindicación 1. ^^ i^ÉÉ___¿__? Wf 306 8. Una célula huésped genéticamente manipulada para expresar el polinucleófeido de la reivindicación 1. 9. La célula huésped de conformidad con la reivindicación 8 en donde el polinucleótido se encuentra en asociaóión 5 operativa con una secuencia reguladora que controla la expresión del polinucleótido en la célula huésped. 10.Un polipéptido aislado que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene una identidad por lo menos del 80% con la secuencia de aminoácidos seleccionada dentro 10 del grupo que consiste de SEQ ID NO: 25, 28, 30-32, 34 o bien 35, la porción codificadora de proteína traducida del mismo, la porción codificadora eje proteína madura del mismo, la porción extracelular del mismo, o el dominio activo del mismo. 15 11.Una composición que comprende el polipéptido de conformidad con la reivindicación 10 y un vehículo. 12.Un polipéptido que tiene una actividad de tipo factor de crecimiento de células madres, que comprende por lo menos 10 aminoácidos consecutivos de las secuencias de fl 20 polipéptidos seleccionadas dentro del grupo que * consiste de SEQ ID NO: 25, 28, 30-32, 34 o 35. 13. El polipéptido de conformidad con la reivindicación 12, que comprende por lo menos cinco aminoácidos consecutivos de las secuencias de polipéptido 25 seleccionadas dentro del grupo q_e consiste de SSQ ir 25 la reivindicación 1 bajo estas condiciones; - --"" ' - ' :,; '- '*" '7,;-'- --'* ": e-'-'S «*_!?» '-fc-'*' b) amplificar un producto que comprende por lo menos una porción del polinucleótido de la reivindicación 1; y c) detectar dicho producto y por consiguiente el polinucleótido de la reivindicación 1 en la muestra. El método de conformidad con la reivindicación 19, en donde el polinucleótido comprende una molécula de ARN y el método comprende además la transcripción reversa de una molécula de ARN fusionada en un polinucleótido de ADNc. Un método para detectar el polipéptido de conformidad con la reivindicación 10 en una muestra, que comprende: a) poner en contacto la muestra con un compuesto que se une y forma un complejo con el polinucleótido en condiciones y durante un período suficiente para formar el complejo; y b) detectar la formación del complejo de tal manera que si se detecta la formación del complejo, se detecta el polipéptido de la reivindicación 10. Un método para identificar un compuesto que se une al polipéptido de la reivindicación 10, que comprende: a) poner en contacto el compuesto con el polipéptido de la reivindicación 10 en condiciones y durante en tiempo suficiente para formar un complejo polipéptido/compuesto; y b) detectar el complejo de tal manera que sí, el complejo polipéptido/compuesto es detectado, se identifica un compuesto que se une al polipéptido de la reivindicación 10. Un método para identificar un compuesto que se une al polipéptido de la reivindicación 10, que comprende: a) poner el contacto el compuesto con el polipéptido de la reivindicación 10, en una célula, durante un tiempo suficiente para formar un complejo polipéptido/compuesto, en donde el complejo impulsa la expresión de una secuencia de gen reportero en la célula; y b) detectar el complejo mediante la detección de la expresión de secuencia de gen reportero de tal manera que si se detecta el complejo polipéptido/compuesto, se identifica un compuesto que se une al polipéptido de la reivindicación 10. Un método para producir un polipéptido de tipo factor de crecimiento de células madres, que comprende: a) cultivar la célula huésped de la reivindicación 8 en condiciones suficientes para expresar el polipéptido en dicha célula; y b) aislar el polipéptido del cultivo celular o de las células del paso (e . 25. Un kit que comprende el polipéptido de la reivindicación 10. 26. Un conjunto de ácido nucleico que comprende el polínucleótido de la reivindicación 1 o bien un segmento único del polinucleótido de la reivindicación 1 fijado sobre una superficie. 27.El conjunto de la reivindicación 26, en donde el conjunto detecta correspondencias completas con el polinucleótido o bien un segmento único del polinucleótido de la reivindicación 1. 28. El conjunto de conformidad con la reivindicación 26, en donde el conjunto detecta faltas de correspondencia con el polinucleótido o un segmento único del polinucleótido de la reivindicación 1. 29. Un método para el tratamiento de un sujeto que requiere de una actividad o expresión incrementada de polípéptido de tipo factor de crecimiento de células madres de la reivindicación 10, que comprende la administración al sujeto de una composición seleccionada dentro del grupo que consiste de: (a) una cantidad terapéutica de un agonista de dicho polipéptido; (b) una cantidad terapéutica del polipéptido; y (c) una cantidad terapéutica de un .--._-_-_-__-_-_-a polinucleótido que codifica el polipéptido en una forma y bajo condiciones tales qije se produzca el polipéptido, y un vehículo farmacéuticamente aceptable. 5 30.Un método para el tratamiento de un sujeto que lo requiere para inhibir la actividad o expresión de polipéptido de tipo factor de crecimiento de células • madres de la reivindicación 10, que comprende la administración al sujeto de una composición 10 seleccionada dentro del grupo que consiste de: (a) una cantidad terapéutica de un antagonista de dicho polipéptido; • (b) una cantidad terapéutica de un polinucleótido que inhibe la expresión de 15 la secuencia de nucleótidos que codifica dicho polipéptido; y (c) una cantidad terapéutica de un polipéptido que compite con el polipéptido de tipo factor de crecimiento de células madres 20 por su ligando y un vehículo farmacéuticamente aceptable. 25 La invención proporciona los polinucleótídos y polipéptidos novedosos codificados por polinucleótidos - mutantes de, i variantes de estos que corresponden a un polipéptido tipó factor de crecimiento de células primordiales, secretado. * humano, novedoso. Estos polinucleótidos comprenden secuencias de ácidos nucleicos aisladas de bibliotecas de cDNA • preparadas a partir de células hepáticas esplénicas fetales, de ovario, de cerebro adulto, de tumor de pulmón, de médula 10 espinal, de cervix, ovario, endotelíales, de cordón umbilical, linfocitos, fibroblastos de pulmón, cerebro fetal y testis. Un aspecto de la invención incluye procesos que contienen vectores para producir polipéptidos tipo factor de crecimiento de células primordiales secretados, humanos, 15 novedosos, y anticuerpos específicos para estos polipéptidos. • 20 25