MXPA02005199A - Metodos para inhibir metastasis. - Google Patents

Abstract

Se proveen metodos para inhibir metastasis o mantenimiento de varios canceres, el metodo comprende bloquear la senalizacion de un receptor de quimiocina sobre la celula; en particular, el metodo hace uso del hecho de que cierto trafico de cancer depende de proteinas identificadas, que sirven como marcadores; tambien se proveen metodos adicionales de evaluacion.

Description

MÉTODOS PARA INHIBIR METÁSTASIS Esta presentación es una solicitud de patente de utilidad de E.U.A. que reclama prioridad para USSN 60/225,562, presentada el 14 de agosto del 2000, y USSN 60/167,519, presentada el 24 de noviembre de 1999, cada una de las cuales se incorpora a la presente como referencia.

CAMPO DE LA INVENCIÓN La invención se refiere de manera general a métodos para inhibir metástasis de varios cánceres. También provee métodos para analizar varias proteínas las cuales presentarán actividad biológica similar.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Aun cuando un cáncer primario es eliminado completamente, un tumor maligno será con frecuencia metastático. La formación de metástasis de tumores malignos, iniciadas a partir de un tumor primario en lugares más o menos remotos del cuerpo, es uno de los efectos más serios de cáncer y uno para el cual no se encuentra actualmente disponible un protocolo de tratamiento satisfactorio. La metástasis de tumor de cáncer es responsable de la mayoría de fallas terapéuticas cuando se trata la enfermedad, ya que los pacientes sucumben al crecimiento de tumores múltiples. Los tumores importantes incluyen, por ejemplo, carcinomas, que incluyen de mama, cabeza y cuello, pulmón, colon, próstata, y melanomas. Véase por ejemplo, Bertino, et al. (eds. 1996) Encvclopedia of Cáncer Academic Press; Devita, et al. (eds. 1997) Cáncer: Principies & Practice of Oncoloqv Lippincott, Williams y Wilkins; Devita (1997) Principies and Practice of Oncoloqv Lippincott Williams y Wilkins; Cavalli, et al. (1996) Textbook of Medical Oncoloqv Dunitz Martin Ltd; Horwich (ed. 1995) Oncoloqv: A Multidisciplinarv Textbook Lippincott-Raven; Peckham, et al. (eds. 1995) Oxford Textbook of Oncology Oxford Univ. Press: Mendelsohn, et al. (1995) The Molecular Basis of Cáncer Saunders, Philadelphia; y McArdle (1990) Surqical Oncoloqv: Current Concepts and Practice Butter orth-Heinemann. El grado en ei que ocurre la metástasis varía con el tipo de tumor individual. Melanoma, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de colon, y cáncer de próstata, están entre los tipos de cáncer que están propensos a extenderse por metástasis. Cuando ocurre la metástasis, las metástasis pueden formarse en una variedad de sitios en el cuerpo, siendo los nudos linfáticos, pulmones, hígado, cerebro y médula ósea los sitios más comunes. Los métodos actualmente disponibles de terapia de cáncer tales como terapia, quirúrgica, radioterapia, quimioterapia, y métodos inmunobiológicos han tenido éxito limitado en la prevención de metástasis o estos métodos dan origen a graves e indeseables efectos secundarios. En muchos tumores sólidos clínicamente diagnosticados (en los cuales el tumor es un crecimiento localizado), la eliminación quirúrgica es considerada el principal medio de tratamiento. Sin embargo, muchas veces después de cirugía y después de algún período de demora, se observa que el tumor original se ha extendido por metástasis, de modo que se han diseminado sitios secundarios de invasión de cáncer a través de todo el cuerpo y el paciente posteriormente muere del crecimiento del cáncer secundario. Los reportes indican que en individuos con tumores resecables, el crecimiento de tumor primario o recurrencia local no es con frecuencia la causa de muerte. En cambio, en la actualidad, casi el 40% de víctimas de cáncer con tumores operables sucumben finalmente a enfermedad metastática después de cirugía. Aunque la quimioterapia se utiliza ampliamente en el tratamiento de cáncer, es un tratamiento sistémico normalmente a base de la prevención de proliferación de células. En consecuencia, la quimioterapia es una modalidad de tratamiento no específico que afecta todas las células proliferantes, incluyendo células normales, lo que conduce a indeseables y con frecuencia graves efectos secundarios, por ejemplo, inmunosupresión, pancitopenia (inhibición de crecimiento de células de médula ósea con anemia, trombocitopenia y leucopenia), diarrea, náusea y alopecia (pérdida de cabello). Con frecuencia, se ha comprobado que los tratamientos sistémicos existentes tienen un efecto reducido en macrometástasis ya residentes en órganos remotos (pulmón, hígado, médula, ósea o cerebro). Los pacientes con frecuencia mueren con cánceres metastáticos provocados por metástasis de células cancerígenas. No se ha establecido un método para suprimir de manera efectiva la metástasis de las células cancerígenas, y aún no se dispone comercialmente de una medicina que tenga un efecto supresor de metástasis de células cancerígenas. De esta manera, existe la necesidad de métodos para inhibir metástasis tumoral. En particular, se desean métodos los cuales inhiban metástasis sin ocasionar graves efectos secundarios.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se basa en la hipótesis que la señalización a través de receptores de quimiocina puede ser un mecanismo atrayente importante para extender por metástasis células cancerígenas. Se han recopilado datos que soportan dicho modelo. De manera alternativa, la expresión específica mediante células tumorales de receptores de quimiocina puede permitir la prevención de progresión de crecimiento, o incluso reducción, por ejemplo, mediante agentes terapéuticos dirigidos al receptor de quimiocina solos o en combinación con otras terapias contra el cáncer. La presente invención provee métodos para inhibir metástasis de una célula, por ejemplo, una célula tumoral, el método comprende bloquear la señalización de un receptor de quimiocina en la célula. Preferiblemente, la metástasis es específica de órgano, por ejemplo, al nudo linfático, médula ósea, o piel, o la célula es una célula de carcinoma, incluyendo una mama, cabeza y cuello, melanoma, o próstata. En otras modalidades, el receptor de quimiocina es CCR7, CXCR4, o CCR10. El bloqueo de señalización puede ser con un anticuerpo contra el receptor de quimiocina, un antagonista de muteína del ligando, o un fármaco que inhiba la señalización del receptor de quimiocina, por ejemplo, toxina de tos ferina. De esta manera, por ejemplo, cuando el receptor de quimiocina es CCR7, el bloqueo puede ser con: un anticuerpo contra FSEC, CKß9, o CKß11 ; o una muteína antagonista de FSEC, CKß9, o CKß11 ; cuando el receptor de quimiocina es CXCR4, el bloqueo puede ser con: un anticuerpo contra SDF-1 ; o una muteína antagonista de SDF-1 ; y cuando el receptor de quimiocina es GPR2, el bloqueo puede ser con: un anticuerpo contra CTACK o Vic; o una muteína antagonista de CTACK o Vic. También se puede hacer uso de conjugados tóxicos para dirigir fármacos al receptor de quimiocina que exprese tumores. Normalmente, el método se combina con otro tratamiento para cáncer, por ejemplo, quimioterapia, terapia de radiación, inmunoterapia, o cirugía. Con frecuencia, el método se aplica después de dicho tratamiento, pero puede ser profiláctico. Y el tratamiento puede ser directamente para afectar la progresión o crecimiento del tumor primario. De manera alternativa, la ¡nvención provee métodos para analizar receptores de quimiocina en células tumorales primarias o metastáticas, que comprende identificar qué receptores de quimiocina son expresados en la célula. La identificación puede ser por medio de por ejemplo marcación de anticuerpo, prueba de ligandos, o análisis de PCR; o puede ser útil para la determinación de estrategia terapéutica. La marcación puede permitir destrucción de células dirigida, por ejemplo, con conjugados tóxicos, o con reactivos de absorción que permiten la absorción de energía o unión de compuestos tóxicos. Incluso, otra modalidad incluye una composición que comprende un agente antitumoral y una marca o antagonista del receptor de quimiocina. En dichas modalidades, el antagonista o marca puede ser un anticuerpo contra FSEC, CKß9, o CKß11 ; una muteína antagonista de FSEC, CKß9, o CKß11 ; un anticuerpo contra SDF-1 ; una muteína antagonista de SDF-1 ; un anticuerpo contra CTACK o Vic; una muteína antagonista de CTACK o Vic; un anticuerpo contra el receptor de quimiocina; o un fármaco que inhiba señalización del receptor de quimiocina incluyendo toxina de tos ferina. Se proveen métodos que utilizan dichas composiciones, por ejemplo, métodos para tratar un cáncer en un animal, que extiende por metástasis o principalmente, que comprende administrar al animal una cantidad efectiva de la composición.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN I. General La ¡nvención se basa, en parte, en el sorprendente descubrimiento de una correlación que sugiere que las quimiocinas pueden ser mediadores importantes de metástasis de cáncer. En particular, se han analizado tumores metastáticos para expresión de receptor de quimiocina. También se han evaluado varios tumores primarios para expresión de receptor de quimiocina, y la identificación de los receptores como marcadores puede tener valor terapéutico. Los tumores metastáticos de órgano específico parecen expresar receptores de quimiocina específicos. Estos receptores de quimiocina parecen corresponder a la expresión de ligando de los órganos objetivo metastáticos comunes de los diferentes cánceres evaluados. Además, en la evaluación de los tumores primarios, los patrones de expresión del receptor de quimiocina también coinciden con los ligandos expresados mediante los órganos objetivo metastáticos. De esta forma, probablemente esas células tumorales metastátícas fueron dirigidas al órgano objetivo, en parte, por las quimiocinas expresadas por esos órganos objetivo. Si es así, entonces la metástasis responderá al bloqueo de tráfico y localización de órganos mediados por quimiocina. Además, la identificación de varios receptores de quimiocina como marcadores para tipos específicos de tumor proveen la posibilidad de utilizarlos como marcadores para dirigir terapias adecuadas. Serán de utilidad conjugados tóxicos, locaiización específica de radiación o absorbentes de energía, o medios para atraer fármacos contra el cáncer a los sitios de los tumores principales. Las quimiocinas son una subfamilia de citocinas quimioatrayentes que tradicionalmente estaban caracterizadas por su capacidad para mediar tráfico o migración de leucocitos al unirse a siete receptores de expansión transmembranal enlazados a la proteína G específica, o GPCR. Las quimiocinas se dividen en cuatro grupos con base a la secuencia primaria de las dos primeras cisteínas: las familias CXC, CC, C, y CX3C. Los receptores de quimiocina son típicamente miembros de la super familia de receptores (GPCR, o GPLR). acoplados (o enlazados) a la proteína G. Como una clase, estos receptores son proteínas de membrana integrales caracterizadas por secuencias de aminoácidos que contienen ciertos dominios hidrófobos. Véase por ejemplo, Ruffolo y Hollinger (eds. 1995) G-Protein Coupled Transmembrane Siqnalinq Mechanisms CRC Press, Boca Ratón, FL; Watson y Arkinstall (1994) The G-Protein Linked Receptor FactsBook Academic Press, San Diego, CA; Peroutka (ed. 1994) G Protein-Coupled Receptors CRC Press, Boca Ratón, FL; Houslay y Milligan (1990) G Proteine as Mediators of Cellular Siqnalinq Processes Wiley y Sons, New York, NY; y Dohlman, et al. (1991) Ann. Rev. Riochem. 60:653-688. Estos dominios hidrófobos están pronosticados para representar regiones de expansión transmembranal de las proteínas. Estos GPCR se encuentran en una amplia gama de organismos y típicamente están involucrados en la transmisión de señales hacia el interior de la célula, por ejemplo, a través de interacción, por ejemplo, con proteínas G heterotriméricas. Responden a una amplia y diversa escala de agentes que incluyen análogos de lípidos, derivados de aminoácidos, pequeños péptidos y otras moléculas. Los ligandos de quimiocina para los receptores inician normalmente un flujo de calcio al unirse al receptor, y el flujo de calcio normalmente es sensible a la toxina de tos ferina. Además de propiedades quimioatrayentes, las quimiocinas han mostrado inducir otras respuestas biológicas, por ejemplo, modulación de segundos niveles de mensajero tales como Ca++; cambios de combinación de fosfato de inositol (véase por ejemplo, Berridge (1993) Nature 361 :315-325 o Billah y Anthes (1990) Biochem. J. 269:281-291); respuestas de modificación de morfología celular; recambio de lípidos de fosfonoinositida; posibles respuestas antivirales; y otras. Las mejores funciones biológicas conocidas de moléculas de quimiocina se refieren a quimioatracción de leucocitos. No sería peculiar que el tráfico de otros tipos de células por ejemplo, células tumorales primarias que expresan estos receptores de quimiocina, fuera asimismo dirigido por quimiocina a órganos específicos. Véase por ejemplo, Youngs, et al. (1997) Int. J. Cáncer 71 :257-266; y Kleeff, et al. (1999) Int. J. Cáncer 81 :650-657. Se recolectó un panel significativo de líneas de células tumorales de diferentes tipos, principalmente disponibles de ATCC. Estas incluyeron líneas de células de carcinoma de mama, cabeza y cuello, melanoma, y de cáncer de próstata. Las líneas de células se analizaron para expresión de un número de receptores de quimiocina mediante técnicas de PCR cuantitativas. A través de este análisis, la expresión del receptor de quimiocina generalmente fue muy baja, con excepción de los receptores CCR7 (vea GenBank L31581 , CXCR4 (vea GenBank X71635), y GPR2 (vea GenBank U13667). Las líneas de cáncer de mama generalmente expresaron los receptores CCR7, CXCR4, y GPR2. Las líneas de tumor en cabeza y cuello generalmente expresaron el receptor CCR7. Las líneas de células de melanoma generalmente expresaron los receptores CCR7 y GPR2. En resumen, el receptor CCR7 se expresó por las líneas de células de cáncer de mama, cabeza y cuello, y melanoma; el receptor CXCR4 se expresó por las líneas de cáncer de mama; y el receptor GPR2 se expresó por líneas de células de cáncer de mama y melanoma. Las líneas de carcinoma de próstata expresaron CCR7, CXCR4, CCR8, y STRL33; las líneas de células de cáncer de mama también expresaron CCR8 y STRL33. Cada uno de estos receptores ha sido apareado con iigandos de quimiocina. Las quimiocinas MIP-3ß, (GenBank U77180; vea Coleman, et al. WO 9622374AI (FSEC) y CKß9 W17274; vea Adams y Li WO9606169AI) son los ligandos para el receptor CCR7. Ambas quimiocinas están expresadas por nudos linfáticos, lo cual probablemente es la razón por la que los tres tipos de células tumorales con frecuencia se extienden por metástasis al nudo linfático. La quimiocina SDF-1 (factor 1 derivado de células estromáticas); GenBank L12030 y AA620142; vea Lacey, et al. (1997) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 94:9842-9847,y Aiuti, et al. (1997) J. Exp. Med. 185:111-120) es el ligando para el receptor CXCR4. Esta quimiocina está expresada por células de la médula ósea, lo cual probablemente es la razón por la que los cánceres de mama con frecuencia se extienden por metástasis a la médula ósea. El CXCR4 también ha sido implicado en metástasis de hígado, pulmón y nudo linfático. Las quimiocinas CTACK (CCL27, GenBank U13667; vea Hedrick, et al. WO9823750A2) y Vic (CCL28; GenBank R38459; véase Hedrick, et al. WO9823750A2) son los ligandos para el receptor GPR2. Estas quimiocinas son expresadas en la piel, lo que probablemente explica por qué los melanomas se extienden por metástasis a la piel. Además de efectos metastáticos, los SDF-1 y CTACK pueden tener importantes contribuciones a formación o progresión de crecimiento de tumor primario. Esto ocurre con otros ciertos tumores, y existe razón para creer que esto puede aplicar a melanomas. De manera similar para otros tipos de cánceres, parece generalmente que ios receptores de quimiocina los cuales son expresados por tumores primarios, tienen ligandos los cuales están expresados en los órganos objetivo para metástasis frecuente. Este método se puede utilizar para confirmar la hipótesis en otros tipos de células tumorales. Al observar los tumores primarios, el análisis de receptores de quimiocina indicará qué quimiocinas son probable que sean quimioatraídas por esas células. De esta manera, el bloqueo de metástasis de esos tumores primarios se puede mediar a través de bloqueo de dicha quimioatracción. El bloqueo se puede realizar mediante antagonistas de ligando o antagonistas de receptor. Pueden ser antagonistas de muteína de ligando, antagonistas de anticuerpo a ligando o receptor, o fármacos, por ejemplo, pequeñas moléculas, las cuales bloquean quimioatracción. Los otros tipos de tumores primarios más comunes incluyen por ejemplo, cáncer de próstata, cáncer gastrointestinal (incluyendo colon), y cáncer de pulmón. Los cánceres de próstata tienden a extenderse por metástasis a nudos linfáticos y médula ósea, sugiriendo que están involucrados los receptores CCR7 y CXCR4, mediados por sus ligandos respectivos. Los cánceres gastrointestinales tienden a extenderse por metástasis a nudos linfáticos e hígado, sugiriendo que ios receptores CCR7 y CCR6 están involucrados. El ligando para el receptor CCR6 es la quimiocina MIP-3a. Los cánceres de pulmón tienden a extenderse por metástasis a los nudos linfáticos, médula ósea, y cerebro, sugiriendo que los receptores de quimiocina CCR7, CXCR4, y V28 están involucrados, mediados por sus respectivos ligandos de quimiocina. El ligando para el receptor V28 es la quimiocina CX3C (neurotactina). La presente invención enseña qué antagonistas tendrán efectos en ciertos tipos de metástasis o progresión de tumores primarios. De manera contraria, las quimiocinas expresadas por tejidos objetivo para metástasis son probablemente mediadores de quimioatracción. De esta manera, la metástasis se puede bloquear al inhibir la quimioatracción o se puede dirigir la progresión del tumor, por ejemplo, en los receptores de quimiocina como marcadores. Es probable que la metástasis a nudos linfáticos sea mediada por el receptor CCR7, a la médula ósea por el receptor CXCR4, a la piel por el receptor GPR2, ai hígado por el receptor CCR6, al cerebro por el receptor V28, y al pulmón por un receptor para una quimiocina todavía no identificada expresada en el pulmón. Asimismo, la presente invención enseña qué antagonistas tendrán efectos en metástasis a órganos específicos o marcadores para tumores primarios. Y la expresión específica de receptores de quimiocina en tumores primarios permite la localización específica de agentes terapéuticos para estos sitios. En cualquier caso, los modelos de ratón serán útiles en la confirmación de las enseñanzas. La prueba de otros tipos de tumores primarios u órganos objetivo para apareamiento de receptor/quimiocina responsables de la metástasis o progresión de tumor primario, por ejemplo crecimiento, continuará, por ejemplo otros tipos de calcinoma, sarcomas, etc. También se puede dirigir la progresión de tumor primario.

II . Agonistas y antagonistas de quimiocina Se han descrito ligandos de quimiciona para los receptores. Se pueden producir varios agonistas y antagonistas de los ligandos naturales o receptores. Se pueden desarrollar análisis de unión a receptores. Véase por ejemplo, Bieri, et al. (1999) Nature Biotechnology 17:1105-1108, y la nota anexa en la página 1060. Se pueden desarrollar pruebas de flujo de calcio para analizar compuestos que poseen actividad antagonista. Las pruebas de migración pueden tomar ventaja del movimiento de células a través de poros en membranas, las cuales pueden formar la base de pruebas de antagonistas. La quimiotaxis se puede medir a través de las mismas. Alternativamente, se pueden desarrollar pruebas quimiocinéticas, las cuales miden la inducción de movimiento cinético, no necesariamente relativo a un gradiente, per se.

A. Ligandos y variantes de quimiocina Los agonistas de quimiocina presentarán algunas o todas las funciones de señalización de la quimiocina, por ejemplo, unión, inducción de un flujo de Ca++, y quimioatracción de células portadoras de receptores adecuadas. De manera contraria, los antagonistas bloquearán la señalización o biología efectora. Se pueden evaluar varias secuencias de quimiocina de mamíferos para determinar qué residuos se conservan a través de especies, sugiriendo qué residuos se pueden cambiar sin efectos drásticos en actividad biológica. De manera alternativa, las sustituciones de conservación en ciertas regiones de la molécula son un poco más probables de mantener actividad de unión a receptor, mientras que otras regiones tendrán más probabilidad de afectar la traducción de señal. Los métodos estándares para analizar polipéptidos de quimiocina variantes o mutantes determinará qué secuencias serán antagonistas terapéuticos útiles. Además, se pueden aplicar ciertos métodos de expresión de ácidos nucleicos. Por ejemplo, en ciertos contextos, puede ser útil transfectar células con diferentes ácidos nucleicos los cuales serán expresados, según sea adecuado. Varios promotores pueden estar operablemente enlazados al gen, permitiendo así expresión regulada, por ejemplo, supresión. La actividad antagonista puede ser sometida a prueba o analizada utilizando métodos reconocidos. Se pueden desarrollar pruebas para capacidad de antagonizar unión a quimiocina, flujo de calcio, o actividad quimioatrayente. Se pueden crear diferentes homólogos de ligando los cuales retienen capacidad de unión a receptor, pero que carecen de capacidad de señalización, sirviendo así como moléculas de unión competitivas. También se pueden analizar pequeñas moléculas para determinar capacidad de antagonizar la función de quimiocina, por ejemplo, quimioatracción, unión a receptor, flujo de Ca++, y otros efectos mediados por quimiocina. Véase de manera general Gilman, et al. (eds. 1990) Goodman v Gilman's: The Pharmacological Bases of Therapeutics, 8th Ed., Pergamon Press; Remington's Pharmaceutical Sciences. 17th ed. (1990), Mack Publishing Co., Easton, Penn, cada una de las cuales se incorpora a la presente como referencia. Los agonistas o anticuerpos pueden funcionar como medios para dirigir, por ejemplo, para marcación o localización específica, tipos de tumores primarios.

B. Anticuerpos La presente invención provee el uso de un anticuerpo o composición de unión que específicamente se une a quimiocina o receptor, de preferencia mamífero, por ejemplo, primate, humano, gato, perro, rata, o ratón y neutraliza la capacidad de la quimiocina para mediar su señal. Los anticuerpos no neutralizadores pueden ser útiles para marcación o localización. Se pueden elevar anticuerpos a varias proteínas receptoras de quimiocina o ligandos de quimiocina, incluyendo variantes individuales, polimórficas, alélicas, de cepa, o de especies, y fragmentos de las mismas, ya sea en sus formas naturales (de longitud completa) o en sus formas recombinantes. Además, se pueden elevar anticuerpos a ligandos de quimiocina o polipéptidos, ya sea en sus formas puras (o activas) o en sus formas inactivas, por ejemplo, desnaturalizadas, lo cual puede neutralizar la capacidad de ligando para mediar su señal. Los anticuerpos pueden bloquear la interacción de ligando con su receptor, por ejemplo, mediante impedimento estérico, o pueden servir como reactivos que permiten marcación o localización específicamente a donde se expresa el antígeno cognado. En particular, se pueden producir antagonistas de receptor mediante elaboración de anticuerpos que se unen al receptor y bloquean la unión a ligando. Con la identificación de un receptor para la citocina, se pueden seleccionar anticuerpos para el receptor, por ejemplo, para aquellos que bloquean la unión, o señalización inducida por ligando. También se pueden producir reactivos de localización. Se puede seleccionar un número de inmunógenos para producir anticuerpos específicamente reactivos, o selectivos para unión, con proteínas de ligando o receptor. La proteína recombinante es un inmunógeno preferido para la producción de anticuerpos monoclonales o policlonales. La proteína natural, derivada de fuentes adecuadas, por ejemplo, primate, roedor, etc., también se puede utilizar ya sea en forma pura o impura. Los péptidos sintéticos, elaborados utilizando las secuencias de proteína de ligando o receptor, también se pueden utilizar como un inmunógeno para la producción de anticuerpos. La proteína recombinante puede ser expresada y purificada en células eucarióticas o procarióticas como se describe, por ejemplo en Coligan, et al. (eds. 1995 y suplementos periódicos) Current Protocols in Protein Science John Wiley & Sons, New York, NY; y Ausbel, et al. (eds. 1987 y suplementos periódicos) Current Protocols in Molecular Bioloqy, Greene Wiley, New York, NY. Se puede utilizar material naturalmente plegado o desnaturalizado, tal vez expresado en superficies celulares, según sea adecuado, para producir anticuerpos. Se pueden generar anticuerpos ya sea monoclonales o policlonales, por ejemplo, para uso posterior en inmunoensayos para medir la proteína, para métodos de inmunopurificación, o para métodos de localización. Los métodos para producir anticuerpos policlonales son reconocidos para los expertos en la técnica. Normalmente, un inmunógeno, de preferencia una proteína purificada, se mezcla con un adyuvante y se inmunizan animales con la mezcla. La respuesta inmune del animal a la preparación de inmunógeno se monitorea al tomar flujos de prueba y determinar el título de reactividad por ejemplo, al ligando o receptor, proteína o polipéptido de interés. Por ejemplo, cuando se obtengan títulos de anticuerpo al inmunógeno adecuadamente altos, normalmente después de inmunizaciones repetidas, se recolecta sangre del animal y se preparan antisueros. Si se desea, se puede realizar fragmentación adicional de los antisueros para enriquecer anticuerpos reactivos a la proteína. Véase por ejemplo, Harlow y Lañe Antibodies, A Laboratory Manual; o Coligan (ed.) Current Protocols in Immunoloqy. También se puede realizar inmunización a través de otros métodos, por ejemplo, inmunización del vector de ADN. Véase por ejemplo Wang, et al. (1997) Viroloqy 228:278-284. Se puede utilizar purificación de afinidad, o absorciones, para seleccionar la especificidad deseada de unión. Se pueden obtener anticuerpos monoclonales a través de varias técnicas familiares para los expertos en la técnica. Normalmente, se inmortalizan células del bazo de un animal inmunizado con un antígeno deseado, comúnmente mediante fusión con una célula de mieloma. Véase, Kohier y Milstein (1976) Eur. J. Immunol. 6:511-519. Métodos alternativos de inmortalización incluyen transformación con virus de Epstein Barr, oncógenos, o retrovirus, u otros métodos conocidos en la técnica. Véase por ejemplo, Doyle, et al. (eds. 1994 y suplementos periódicos) Cell and Tissue Culture: Laboratorv Procedures, John Wiley and Sons, New York, NY. Colonias que surgen de células sencillas inmortalizadas se analizan para producción de anticuerpos de la especificidad deseada y afinidad para el antígeno, y se puede incrementar el rendimiento de los anticuerpos monoclonales producidos por dichas células a través de varias técnicas, que incluyen inyección en la cavidad peritoneal de un hospedero vertebrado. Alternativamente, se pueden aislar secuencias de ADN que codifican para un anticuerpo monoclonal o un fragmento de unión del mismo al analizar una genoteca ADN a partir de células B humanas de acuerdo, por ejemplo con el protocolo general señalado por Huse, et al. (1989) Science 246:1275-1281. Anticuerpos o composiciones de unión, que incluyen fragmentos de unión o versiones de cadena sencilla, contra fragmentos predeterminados de receptor o polipéptidos de ligando se pueden elevar mediante inmunización de animales con conjugados de los fragmentos con proteínas portadoras como se describió anteriormente. Los anticuerpos monoclonales se preparan a partir de células que secretan el anticuerpo deseado. Estos anticuerpos pueden ser analizados para unión a proteína de ligando normal o defectuosa, o pueden ser analizados para capacidad de bloquear flujo mediado por ligando de célula, quimioatracción o actividad quimiocinética. Estos anticuerpos monoclonales normalmente se unirán por lo menos con un KD de aproximadamente 1 mM, normalmente por lo menos de aproximadamente 300 µM, típicamente por lo menos aproximadamente 10 µM, normalmente por lo menos aproximadamente 30 µM, preferiblemente por lo menos aproximadamente 10 µM, y de preferencia por los menos aproximadamente 3 µM o más. En algunos casos, es aconsejable preparar anticuerpos monoclonales (mAb) a partir de varios hospederos mamíferos, tales como ratones, roedores, primates, humanos, etc. La descripción de técnicas para preparar dichos anticuerpos monoclonales se puede encontrar, por ejemplo en Stites, et al. (eds.) Basic and Clinical Immunology (4a ed.) Lange Medical Publications, Los Altos, CA, y las referencias ahí citadas; Harlow y Lañe (1988) Antibodies : A Laboratorv Manual CHS press; Goding (1986) Monoclonal Antibodies: Principies and Practice (2a ed.) Academic Press, New York, NY; y particularmente en Kohier y Milstein (1975) Nature 256:495-497, que trata sobre un método para generar anticuerpos monoclonales. En resumen, este método involucra inyectar un animal con un inmunógeno. El animal es entonces sacrificado y se toman las células de su bazo, las cuales son luego fusionadas con células de mieloma. El resultado es una célula híbrida o "hibridoma" que es capaz de reproducirse in vitro. La población de hibridomas es entonces analizada para aislar clones individuales, cada uno de los cuales secretan una sola especie de anticuerpo al inmunógeno. De esta manera, las especies de anticuerpos individuales obtenidas son los productos de células B sencillas inmortalizadas y clonadas a partir del animal inmune generado en respuesta a un sitio específico reconocido en la sustancia inmunogénica. Otras técnicas adecuadas incluyen la selección de genotecas de anticuerpos en fagos o vectores similares. Véase por ejemplo, Huse, et al. (1989) "Generation of a Large Combinatorial Library of the Immunoglobulin Repertoire ¡n Phage Lambda", Science 246:1275-1281 ; y Ward, et al. (1989) Nature 341 :544-546. Los polipéptidos y anticuerpos de la presente invención se pueden utilizar con o sin modificación, incluyendo anticuerpos quiméricos o humanizados. Con frecuencia, los polipéptidos y anticuerpos serán marcados al unir, ya sea covalente o no covalentemente, una sustancia que provee una señal detectable. Se conoce una amplia variedad de marcas y técnicas de conjugación y se reportan de manera extensa tanto en literatura científica como de patente. Las marcas adecuadas incluyen radionúclidos, enzimas, substratos, cofactores, inhibidores, porciones fluorescentes, porciones quimioluminiscentes, partículas magnéticas, y similares. Las patentes que enseñan el uso de dichas marcas incluyen las patentes de E.U.A. Nos. 3,817.837; 3,850,752; 3.939,350; 3,996,345; 4,277,437; 4,275,149; y 4,366,241. También se pueden producir inmunoglobulinas recombinantes, véase, Cabilly, patente de E.U.A. No. 4,816,567; y Queen, et al. (1989) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033; o se pueden elaborar en ratones transgénicos, véase Méndez, et al. (1997) Nature Genetics 15:146-156. Los compuestos de unión a anticuerpo, incluyendo fragmentos de unión, de esta ¡nvención pueden tener valor de diagnóstico o terapéutico significativo. Pueden ser útiles como compuestos de unión no neutralizadores y se pueden acoplar a toxinas o radionúclidos, de modo que cuando el compuesto de unión se une al antígeno, una célula que lo expresa, por ejemplo en su superficie, es destruida. Además, estos compuestos de unión se pueden conjugar con fármacos u otros agentes terapéuticos, ya sea directa o indirectamente por medio de un enlazador, y pueden efectuar localización de fármaco.

C. Otras moléculas Los anticuerpos son simplemente una forma de composiciones de unión específica. Otras composiciones de unión, las cuales con frecuencia tendrán usos similares, incluyen moléculas que se unen con especificidad al receptor, por ejemplo, CCR7, CXCR4, o GPR2 en una manera de miembro de unión a miembro de unión, una interacción de anticuerpo-antígeno, una interacción de ligando:receptor con o sin señalización, o en una interacción de proteína-proteína natural fisiológicamente relevante, ya sea covalente o no covalente, por ejemplo, proteínas que se asocian específicamente con proteínas de receptor de quimiocina; la molécula puede ser un polímero, o reactivo químico. Un análogo funcional puede ser una proteína con modificaciones estructurales, o puede ser una molécula estructuralmente no relacionada, por ejemplo, que tenga una configuración molecular que interactúa con las determinantes de unión adecuadas. La aplicación de métodos, por ejemplo, de tecnología de Evolución Sistémica de Ligando mediante Enriquecimiento Exponencial (SELEX), están disponibles para seleccionar construcciones de unión específica para objetivos deseados. Véase por ejemplo, Colas, et al. (1996) Nature 380:548-550; Cohén, et al. (1998) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:14272-14277; Kolonin, et al. (1998) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:14266-14271 ; Famulok, et al. (1998) Curr. Qpin. Chem. Biol. 2:320-327; e Eaton, et al. (1997) Bioorq. Med. Chem. 5:1087-1096.

El análisis de fármaco se puede realizar para identificar compuestos que tienen capacidad de unirse al receptor, y/o de bloquear quimioatracción a quimiocina, flujo de Ca++, o la interacción natural con ligando. Se pueden utilizar pruebas biológicas posteriores para determinar si el compuesto tiene actividad de bloqueo o de unión intrínseca, por ejemplo, un antagonista. La toxina de tos ferina es un compuesto conocido para bloquear ciertas funciones de la señalización del receptor de quimiocina de una manera distinta a la interacción del ligando/receptor. Se pueden desarrollar antagonistas de muteína los cuales mantienen unión a receptor, pero carecen de señalización. Los estudios estructurales de los ligandos conducirán al diseño de nuevas variantes, particularmente análogos que presentan propiedades antagonistas en el receptor. Esto se puede combinar con métodos de análisis previamente descritos para aislar muteínas que presentan espectros deseados de actividades. O se pueden utilizar ligandos para dirigir o marcar células portadoras de receptor, por ejemplo, tumores primarios. Ya que se proveen moléculas de unión específica a receptor, también se incluyen pequeñas moléculas identificadas mediante procedimientos de análisis. En particular, se conoce en la técnica cómo analizar pequeñas moléculas las cuales interfieren, por ejemplo, con unión de ligando al receptor, con frecuencia mediante unión específica al receptor y bloqueo de unión mediante ligando natural. Véase por ejemplo, juntas sobre High Throughput Screening, International Business Communications, Southborough, MA 01772-1749. Dichas moléculas pueden competir con ligandos naturales, y unirse de manera selectiva a las quimiocinas respectivas o receptores CCR7, CXCR4, o GPR2. Igualmente, se pueden desarrollar pruebas las cuales analizan bloqueo de vías de señalización corriente abajo de las vías de señalización de quimiocina. lll. Inmunoensavos Los inmunoensayos son valiosos para diagnosticar aquellos cánceres los cuales responderán o no responderán a tratamientos, como se describió. La medición cualitativa o cuantitativa de una proteína particular se puede realizar a través de una variedad de métodos de inmunoensayo. Para una revisión de procedimientos inmunológicos y de inmunoensayo en general, véase Stites y Terr (eds. 1991) Basic and Clinical Immunoloqy (7th ed.). Además, los inmunoensayos de la presente invención se pueden realizar en muchas configuraciones, las cuales se revisan de manera extensa, por ejemplo en Maggio (ed. 1980) Enzvme Immunoassav CRC Pres, Boca Ratón, Florida; Tijan (1985) "Practice and Theory of Enzyme Immunoassays," Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, Elsevier Science Publishers B.V., Amsterdam; Harlow y Lañe Antibodies: A Laboratorv Manual, supra; Chan (ed. 1987) Immunoassav: A Practical Guide Academic Press, Orlando, FL; Price y Newman (eds. 1991 ) Principies and Practice of Immunoassavs Stockton Press, NY; y Ngo (ed. 1988) Non-isotopíc Immunoassavs Plenum Press, NY.

En particular, la presente invención provee varios cánceres primarios o metastáticos susceptibles a análisis o diagnóstico al evaluar la expresión de receptores de quimiocina seleccionados. Por ejemplo, la probabilidad de metástasis se evaluaría por el número o tipos de células que expresan estos receptores de quimiocina, hacer a la célula susceptible a quimioatracción por el ligando de apareamiento. El tratamiento profiláctico puede ser útil para prevenir el reclutamiento de dichos tumores a objetivos metastáticos remotos, o marcar específicamente esos objetivos mientras todavía son pequeños. De manera alternativa, se puede realizar la localización temprana de tumores primarios con ios reactivos de marcación. Se pueden realizar inmunoensayos para medición de proteínas de receptor o péptidos a través de una variedad de métodos conocidos para los expertos en la técnica. En resumen, los inmunoensayos para medir la proteína pueden ser ya sea pruebas de unión competitiva o no competitivas. En pruebas de unión competitivas, la muestra que será analizada compite con un analito marcado para sitios de unión específicos en un agente de captura unido a una superficie sólida. De preferencia, el agente de captura es un anticuerpo específicamente reactivo con proteínas de receptor producidas como se describió anteriormente. La concentración de analito marcado unido al agente de captura es inversamente proporcional a la cantidad de analito libre presente en la muestra. En un inmunoensayo de unión competitivo, típicamente la proteína de receptor presente en la muestra compite con proteína marcada para unión a un agente de unión específico, por ejemplo, un anticuerpo específicamente reactivo con la proteína de receptor. El agente de unión puede estar unido a un substrato o superficie sólida para efectuar separación de proteína marcada unida de la proteína marcada no unida. De manera alterna, la prueba de unión competitiva se puede realizar en fase líquida y se puede utilizar una variedad de técnicas conocidas para separar la proteína marcada unida de la proteína marcada no unida. Después de separación, se determina la cantidad de proteína marcada unida. La cantidad de proteína presente en la muestra es inversamente proporcional a la cantidad de unión a proteína marcada. Alternativamente, se puede realizar un inmunoensayo homogéneo en el cual no se necesita un paso de separación. En estos ¡nmunoensayos, la marca en la proteína es alterada por la unión de la proteína a su agente de unión específico. Esta alteración en la proteína marcada da como resultado una disminución o incremento en la señal emitida por marca, de modo que la medición de la marca al final del inmunoensayo permite detección o cuantificación de la proteína. También se pueden realizar detección de diagnóstico de proteínas de receptor a través de una variedad de métodos de inmunoensayo no competitivos. Por ejemplo, se puede utilizar un inmunoensayo de inserción de fase sólida de dos sitios. En este tipo de prueba, un agente de unión para la proteína, por ejemplo, un anticuerpo, se une a un soporte sólido. Se marca un segundo agente de unión a proteína, que también puede ser un anticuerpo, y el cual se une a la proteína en un sitio diferente. Después de que ha ocurrido unión en ambos sitios en la proteína, el agente de unión marcado no unido se remueve y se mide la cantidad de agente de unión marcado unido a la fase sólida. La cantidad de agente de unión marcado unido es directamente proporcional a la cantidad de proteína en la muestra. Se puede utilizar el análisis de Western blot para determinar la presencia de proteínas de receptor en una muestra. Se realiza electroforesis, por ejemplo, en una muestra de tejido que se sospecha contiene la proteína. Después de electroforesis para separar las proteínas, y transferencia de las proteínas a un soporte sólido adecuado, por ejemplo, un filtro de nitrocelulosa, se incuba el soporte sólido con un anticuerpo reactivo con la proteína. Este anticuerpo puede ser marcado, o alternativamente puede ser detectado por incubación posterior con un segundo anticuerpo marcado que se une al anticuerpo primario. Los formatos de inmunoensayo antes descritos pueden emplear componentes de prueba marcados. La marca se puede acoplar directa o indirectamente al componente deseado de la prueba de acuerdo con métodos reconocidos en la técnica. Se puede utilizar una amplia variedad de marcas y métodos. Tradicionalmente, se utilizó una marca radioactiva que incorpora 3H, 125l, 35S, 1 C, o 32P. Las marcas no radioactivas incluyen ligandos los cuales se unen a anticuerpos marcados, fluoróforas, agentes quimioluminiscentes, enzimas, y anticuerpos los cuales pueden servir como elementos de par de unión específico para un ligando marcado. La selección de marca depende de ia sensibilidad requerida, facilidad de conjugación con el compuesto, requisitos de estabilidad, e instrumentación disponible. Para una revisión de varios sistemas de producción de señal o marcación los cuales se pueden utilizar, véase la patente de E. U. A. No. 44,391 ,904. Los anticuerpos que reaccionan con una proteína particular también se pueden medir mediante una variedad de métodos de inmunoensayo. Por lo tanto las modificaciones de los procedimientos anteriores se pueden utilizar para determinar las cantidades o afinidades de varios análogos de ligando o preparaciones de anticuerpo de lingando o receptor. Para un resumen de procedimientos inmunoiógicos y de inmunoensayo aplicables a la medición de anticuerpos mediante técnicas de inmunoensayo, consultar, por ejemplo, Stites y Terr (eds.) Basic and Clinical Immunology (7a ed.) supra; Maggio (ed.) Enzvme Immunoassav. supra; y Harlow y Lañe Antibodies. A Laboratorv Manual, supra. Las selecciones para evaluar la unión y actividad de mAbs y las composiciones de unión abarcan una variedad de métodos. La unión se puede analizar marcando de manera detectable el anticuerpo o la composición de unión como se describe anteriormente. Las células que responden a ligando se pueden utilizar para análisis de anticuerpo o de composición de unión. Para evaluar la quimioatracción de ligando o la capacidad quimiocinética, se utilizan preferiblemente animales experimentales, por ejemplo ratones. Los conteos celulares se hacen antes de y a varios puntos de tiempo después de la administración de un bolo del agonista o antagonista candidato. Los niveles se analizan en varias muestras, por ejemplo sangre, suero, lavados nasales o pulmonares, o tinción de biopsia de tejido. Una composición exitosa de agotamiento de mAb o unión por ejemplo, disminuirá significativamente el nivel de quimioatracción de células que portan receptor. Tal puede ser de aproximadamente 10%, preferiblemente al menos de 20%, 30%, 50%, 70%, o más. La evaluación de anticuerpos se puede realizar en otros animales, por ejemplo humanos, utilizando varios métodos. Por ejemplo, muestras de sangre se retiran de pacientes que sufren de una enfermedad o trastorno metastática potencial antes y después de tratamiento con un mAb candidato.

IV. Usos La formación de hogar selectiva de tejido de tumores metastáticos se ha reconocido desde hace mucho. Los avances recientes en el campo soportan un modelo en el cual la formación de hogar celular se logra mediante acoplamiento secuencial de moléculas de adhesión vascular y de leucocito que se expresan de manera diferencial y se regulan de manera independiente, y señalando receptores y sus ligandos. Butcher y Picker (1996) Science 272:60-66. La observación de que las quimiocinas, una super familia de proteínas pequeñas secretadas con receptores acoplados de proteína G (Baggiolini (1998) Nature 392:565-568) pueden atraer leucocitos conduce a la hipótesis que las quimiocinas proveen señales clave que dirigen el reclutamiento de subgrupos de linfocitos T en linfoides y sitios de efector extralinfoides inmunes. De manera análoga, la metástasis de tumor parece que hace uso de muchos procedimientos similares, los cuales se pueden bloquear de manera similar. Un cambio estadísticamente significantemente en los números de tumor primario o células de extensión por metástasis, será típicamente de al menos aproximadamente 10%, preferiblemente 20%, 30%, 50%, 70%, 90%, o más. Los efectos pueden ser específicos en bloqueo de crecimiento de tumor o progresión o quimioatracción a puntos específicos, o pueden ser quimiocinéticos, en la reducción de movimiento general de células, pero no necesariamente en una dirección específica, por ejemplo, de gradiente de concentración. La presente invención será útil en el tratamiento de condiciones médicas o enfermedades asociadas con cánceres. Consultar e.g., Bertino, et al. (eds. 1996) Encvclopedia of Cáncer Academic Press; Devita, et al. (eds. 1997) Cáncer: Principies & Practice of Oncology Lippincott, Williams y Wilkins; Devita (1997) Principies and Practice of Oncology Lippincott, Williams y Wilkins; Cavalli, et al. (1996) Textbook of Medical Oncology Dunitz Martin Ltd; Horwich (ed. 1995) Oncology: A Multidisciplinarv Textbook Lippincott-Raven; Peckham, et al. (eds. 1995) Oxford Textbook of Oncology Oxford Univ. Press; Mendelsohn, et al. (1995) The Molecular Basis of Cáncer Saunders, Philadelphia; y McArdle (1990) Surgical Oncoloqv: Current Concepts and Practice Butterworth-Heinemann. Los reactivos específicos y antagonistas que se describen se pueden combinar con otros tratamientos de las condiciones médicas que se describen en la presente, por ejemplo, una quimioterapia, terapia de radiación, inmunoterapia, o método quirúrgico, incluyendo agentes de alquilación, antimetabolitos, antihormonas, terapéuticos para varios síntomas, por ejemplo, eliminadores de dolor, diuréticos, antivírales, antibióticos, complementos nutricionaies, terapéuticos de anemia, terapéuticos de coagulación sanguínea, terapéuticos de hueso, y terapéuticos siquiátricos y fisiológicos. Para preparar composiciones farmacéuticas o estériles que incluyen, por ejemplo, el antagonista deseado, el material se mezcla con un vehículo o excipiente aceptable farmacéuticamente el cual es preferiblemente inerte. La preparación de tales composiciones farmacéuticas se conoce en la técnica, consultar, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences y U.S. Pharmacopeia: National Formulary, Mack Publishing Company, Easton, PA (1984). Típicamente, las composiciones terapéuticas son estériles. Los reactivos o antagonistas de marcación específica, por ejemplo, muteínas de ligando, anticuerpos, o composiciones de unión, se administran normalmente de manera parenteral, preferiblemente de manera intravenosa. Debido a que tal proteína o antagonista de péptido puede ser de inmunogénico se administran preferiblemente lentamente, ya sea mediante una administración IV convencional o a partir de un depósito subcutáneo, por ejemplo como se enseña por Tomasi, et al., Patente de E.U.A. 4,732,863. Los fármacos de molécula pequeña pueden ser oralmente activos, o administrarse en otros métodos estándar. Cuando se administran de manera parenteral los terapéuticos típicamente se formularán en una forma inyectable de dosis unitaria (solución, suspensión, emulsión) en asociación con un vehículo parenteral aceptable farmacéuticamente. Tales vehículos son inherentemente no tóxicos y no terapéuticos. El antagonista se puede administrar en vehículos acuosos tales como agua, solución salina, o vehículos regulados de pH con o sin varios aditivos y/o agentes diluyentes. De manera alternativa, una suspensión, tal como una suspensión de zinc, se puede preparar para incluir ei péptido. Tal suspensión puede ser útil para inyección subcutánea (SQ), intradérmica (ID), o intramuscular (IM). La proporción de entidad terapéutica y aditivo se puede variar sobre una amplia gama en tanto que ambos estén presentes en cantidades efectivas. El terapéutico se formula preferiblemente en forma purificada sustancialmente libre de agregados, otras proteínas, endotoxinas, y similares, a concentraciones de aproximadamente 5 a 30 mg/ml, preferiblemente de 10 a 20 mg/ml. Preferiblemente los niveles de endotoxina son de menos de 2.5 EU/ml. Consultar, por ejemplo, Avis, et al. (eds. 1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications 2a ed., Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds. 1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets 2a ed., Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds. 1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems Dekker, NY; Fodor, et al. (1991) Science 251 : 767-773; Coligan (ed.) Current Protocols in Immunology; Hod, et al. Immunology Benjamin/Cummings; Paul (ed. 1997) Fundamental Inmunology 4a ed., Academic Press; Parce, et al. (1989) Science 246:243-247; Owicki, et al. (1990) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 87:4007-4011 ; y Blundell y Johnson (1976) Protein Crvstalloqraphv, Academic Press, New York. La selección de un régimen de administración para un agonista o antagonista terapéutico depende de varios factores, incluyendo la velocidad de producción de suero o tejido del terapéutico, la inmunogenicidad del terapéutico, la capacidad de acceso de las células objetivo, y la tolerancia general del paciente a la tensión de la terapia. Preferiblemente, un régimen de administración maximiza la cantidad de terapéutico suministrado al paciente consistente con un nivel aceptable de efectos secundarios. De acuerdo con esto, la cantidad de terapéutico suministrado depende en parte del antagonista particular y la severidad de la condición que se está tratando. La guía para seleccionar dosis adecuadas de anticuerpos se encuentra en la literatura sobre usos terapéuticos, por ejemplo Bach et al., capítulo 22, en Ferrone, et al. (eds. 1985) Handbook of Monoclonal Antibodies Noges Publications, Park Ridge, NJ; y Russell, pgs. 303-357, y Smith et al., pgs. 365-389, en Haber, et al. (eds. 1977) Antibodies in Human Diagnosis and Therapy Raven Press, New York, NY. La determinación de la dosis adecuada se hace por el médico, por ejemplo, utilizando parámetros o factores conocidos en la técnica para afectar el tratamiento o predichos para afectar el tratamiento. En general, la dosis empieza con una cantidad de alguna manera menor que la dosis óptima y se incrementa mediante incrementos pequeños de ahí en adelante hasta que el efecto deseado u óptimo se logra con relación a cualquier efecto secundario negativo. Los números de células que portan receptor en muestras definidas pueden ser indicadores importantes de cuándo se alcanza una dosis efectiva. Preferiblemente, una composición de anticuerpo o de unión del mismo que se utilizará se suministra a partir de la misma especie como el animal objetivo para tratamiento, minimizando por lo tanto la respuesta humoral al reactivo. Las escalas de dosis semanal total para anticuerpos o fragmentos de los mismos, los cuales específicamente se unen a ligando, están generalmente en la escala de aproximadamente 1 ng, más en general de aproximadamente 10 ng, típicamente de aproximadamente 100 ng; más típicamente de aproximadamente 1 µg, más típicamente de aproximadamente 10 µg, preferiblemente de aproximadamente 100 µg, y más preferiblemente de aproximadamente 1 mg por kilogramo de peso corporal. Aunque cantidades más elevadas pueden ser más eficaces, las dosis más bajas típicamente tendrán menos efectos adversos. Generalmente la escala será de menos de 100 mg, preferiblemente menos de aproximadamente 50 mg, y más preferiblemente menos de aproximadamente 25 mg por kilogramo de peso corporal. Las escalas de dosis semanal para antagonistas, por ejemplo, anticuerpos, fragmentos de unión, están en la escala de aproximadamente 10 µg, preferiblemente al menos aproximadamente 50 µg, y más preferiblemente al menos aproximadamente 100 µg por kilogramo de peso corporal. Generalmente, la escala será de menos de aproximadamente 1000 µg, preferiblemente menos de aproximadamente 500 µg, y más preferiblemente menos de aproximadamente 100 µg por kilogramo de peso corporal. Las dosis están en un programa que efectúa el tratamiento deseado y pueden ser periódicas durante un término más corto o más largo. En general, las escalas serán de al menos aproximadamente 10 µg a aproximadamente 50 mg, preferiblemente de aproximadamente 100 µg a aproximadamente 10 mg por kilogramo de peso corporal. Otros antagonistas de los ligandos, por ejemplo, muteínas, también están contempladas. Las escalas de dosificación por hora para muteínas están en la escala de al menos aproximadamente 10 µg, generalmente al menos aproximadamente 50 µg, típicamente al menos aproximadamente 100 µg, y preferiblemente al menos 500 µg por hora. Generalmente la dosis será de menos de aproximadamente 100 mg, típicamente menos de aproximadamente 30 mg, preferiblemente menos de aproximadamente 10 mg, y más preferiblemente menos de aproximadamente 6 mg por hora. En general las escalas serán de al menos aproximadamente 1 µg a aproximadamente 1000 µg, preferiblemente de aproximadamente 10 µg a aproximadamente 500 µg por hora. La frase "cantidad efectiva" quiere decir una cantidad suficiente para efectuar una respuesta deseada, o para aliviar un síntoma o señal, por ejemplo, de metástasis o avance, tamaño, o crecimiento de tumor primario.

Los hospederos mamíferos típicos incluirán ratones, ratas, gatos, perros, y primates, incluyendo humanos. Una cantidad efectiva para un paciente particular puede variar dependiendo de factores tales como la condición que se está tratando, la salud total del paciente, el método, ruta, y dosis de administración y la severidad de efectos secundarios. Preferiblemente, el efecto resultará en un cambio en la cuantificación de al menos aproximadamente 10%, preferiblemente al menos 20%, 30%, 50%, 70%, o incluso 90% o más. Cuando en combinación, una cantidad efectiva es una relación a una combinación de componentes y el efecto no está limitado a componentes individuales solos. Una cantidad efectiva de terapéutico modulará los síntomas típicamente por al menos aproximadamente 10%, normalmente por al menos aproximadamente 20%, preferiblemente al menos aproximadamente 30% o más preferiblemente al menos aproximadamente 50%. De manera alternativa, la modulación de migración quiere decir que la migración o tráfico de varios tipos celulares es afectada. Esto resultará en, por ejemplo, cambios estadísticamente significantes y cuantificables en los números de células que están afectadas. Esto puede ser una disminución en los números de células objetivo siendo atraídas dentro de un periodo de tiempo o área objetivo. La velocidad de avance, tamaño o crecimiento de tumor primario también se pueden supervisar. La presente ¡nvención provee reactivos que encontrarán uso en aplicaciones terapéuticas como se describe en otra parte en la presente, por ejemplo, en la descripción general, para el tratamiento de trastornos neoplásticos. Consultar por ejemplo, Berkow (ed.) The Merck Manual of Diagnosis and Therapy, Merck & Co., Rahway, N.J.; Thorn, et al. Harrison's Principies of Interna! Medicine, McGraw-Hill, NY; Gilman, et al. (eds. 1990) Goodman and Gilman's: The Pharmacoloqical Bases of Therapeutics, 8a ed., Pergamon Press; Reminqton's Pharmaceutical Sciences, 17a ed. (1990), Mack Publishing's Pharmaceutical Sciences, 17a ed. (1990), Mack Publishing Co., Easton, Penn; Langer (1990) Science 249:1527-1533; y Merck Index. Merck & Co., Rahway, New Jersey. Más aún, se pueden utilizar los ácidos nucleicos antisentido. Por ejemplo, los polinucleótidos antisentido contra el ligando que codifica ácidos nucleicos pueden funcionar en una manera como antagonistas de ligando, y antisentido contra el receptor puede funcionar como antagonistas de receptor. Por lo tanto, puede ser posible bloquear las señales a través de la trayectoria con ácidos nucleicos antisentido. Por el contrario, los ácidos nucleicos para el receptor pueden servir como antagonistas, incrementando los números de receptor sobre la célula, incrementando por lo tanto la sensibilidad de la célula al ligando. Otros métodos que se basan en estas observaciones se pueden desarrollar. La atracción se puede efectuar a sitios específicos en donde el tratamiento puede ser más efectivo. Se pueden establecer gradientes para atraer las células metastáticas a sitios de tratamiento efectivo, o para atrapar células metastáticas para fácil remoción. Por el contrario, la desensitización de receptor se puede efectuar inundando el sistema con grandes excesos de los ligandos afines en patrones temporales definidos. La formación de objetivo de receptor puede permitir la administración específica de fármacos terapéuticos, por ejemplo, mediante atracción localizada, activación, absorción o activación de eliminación, etc. El amplio alcance de esta invención se entiende mejor con referencia a los siguientes ejemplos, los cuales no están diseñados para limitar las invenciones a las modalidades específicas.

EJEMPLOS I.- Métodos generales Algunos de los métodos estándar se describen o son referidos en Maniatis, et al. (1982) Molecular Cloning. A Laboratorv Manual. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Press; Sambrook, et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratorv Manual, (2a ed.), vols. 1-3, CSH Press, NY; Ausubel, et al., Biology, Greene Publishing Associates, Brookiyn, NY; o Ausubel, et al. (1987 y Suplementos) Current Protocols in Molecular Biology. Greene/Wiley, New York; Innis, et al. (eds.) (1990) PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications Academic Press, N.Y. Los métodos para purificación de proteína incluyen tales métodos como precipitación de sulfato de amonio, cromatografía de columna, electroforesis, centrifugación, recristalización, y otros. Consultar, por ejemplo, Ausubel, et al. (1987) y suplementos periódicos); Deutecher (1990) "Guide to Protein Purification" en Methods in Enzymology. vol. 182, y otros volúmenes en estas series; la literatura de los fabricantes sobre el uso de productos de purificación de proteína, por ejemplo, Pharmacia, Piscataway, N.J., o Bio-Rad, Richmond, CA; y Coligan, et al. (eds.) (1995 y suplementos periódicos) Current Protocols in Protein Science. John Wiley & Sons, New York, NY. La combinación con técnicas recombinantes permite la fusión a segmentos adecuados, por ejemplo, a una secuencia FLAG o una equivalente que se puede fusionar por medio de una secuencia removible mediante proteasa. Consultar, por ejemplo Hochuli (1989) Chemische Industrie 12:69-70; Hochuli (1990) "Purification of Recombinant Proteins with Metal Chelate Absorbent" en Setlow (ed.) Genetic Engineering, Principie and Methods 12:87-98, Plenum Press, N.Y.; y Crowe, et al. (1992) QIAexpress: The High Level Expression & Protein Purification System QUIAGEN, Inc., Chatsworth, CA. Las técnicas inmunológicas estándar se describen, por ejemplo en Hertzenberg, et al. (eds, 1996) Weir's Handbook of Experimental Immunology vols. 1-4, Blackwell Science; Coligan (1991) Current Protocols in Immunology Wiley/Greene, NY; y Methods in Enzvmology volúmenes. 70, 73, 74, 84, 92, 93, 108, 116, 121 , 132, 150, 162 y 163. Los análisis de migración celular se realizan como se describe anteriormente, por ejemplo, en Bacon, et al. (1988) Br. J. Pharmacol. 95:966-974. Otros análisis de tráfico también están disponibles. Consultar, por ejemplo, Quidling-Járbrink, et al. (1995) Eur. J. Immunol. 25:322-327; Koch, et al. (1994) J. Clinical Investigation 93:921-928; y Antony, et al. (1993) J. immunol. 151 :7216-7223. De manera alternativa, se utiliza un análisis de activación o análisis de atracción. Un tipo celular adecuado se selecciona, por ejemplo, células hematopoieticas, mieloide (macrófagos, neutrófilos, células polimorfonucleares etc.) o linfoide (célula T, célula B, o células NK), células neurales (neuronas, neuroglia, oligodentrocitos, astrocitos, etc.), o células de tallo, por ejemplo células originales que se diferencian de otros tipos celulares, por ejemplo células de depresión intestinal y tipos celulares no diferenciados. Las quimiocinas también se pueden analizar para actividad en análisis hemopoieticos como se describe, por ejemplo por N. Broxmeyer. Consultar Bellido, et al. (1995) J. Clinical Investigation 95:2886-2895; y Jilka, et al (1995) Expt'l Hematology 23:500-506. Se pueden analizar para actividades angiogénicas como se describe, por ejemplo por Streiter, et al. (1992) Am. J. Pathol. 141 :1279-1284. O para un papel en inflamación. Consultar, por ejemplo, Wakefield, et al. (1996) J. Sugical Res. 64:26-31 Otros análisis incluirán aquellos que han sido demostrados con otras quimiocinas. Consultar, por ejemplo Schall y Bacon (1994) Current Opinión en Immunoloqy 6:865-873; y Bacon y Schall (1996) Int. Arch. Allergy & Immunol. 109:97-109. El flujo de Ca2+ con la estimulación de quimiocina se mide de acuerdo con el procedimiento publicado que se describe en Bacon, et al. (1995) J. Immunol. 154:3654-3666.

Los análisis de FACS se describen en Melamed, et al. (1990) Flow Cvtometv and Sorting Wiley-Liss, Inc., New York, NY; Shapiro (1988) Practical Flow Cvtometrv Liss, New York, NY; y Robinson, et al. (1993) Handbook of Flow Cvtometrv Methods Wiley-Liss, New York, NY.

II.- Cultivo celular y muestras de tejido Las células primarias humanas se obtienen, por ejemplo, a partir de ATCC y colaboradores clínicos. Los cultivos celulares adicionales y las muestras de tumor se recolectan. Están disponibles fuentes clínicas, por ejemplo Cooperative Human Tissue Network, NIH. Los paneles de cáncer de pecho, cabeza y cuello, y líneas celulares de melanoma se recolectan. Las líneas celulares primarias objetivo adicionales para ser recolectadas incluyen, por ejemplo, cáncer de próstata, cáncer gastrointestinal, y líneas celulares de cáncer de pulmón. Las muestras de tejido también se recolectan a partir de tumores primarios. Los primates, por ejemplo humanos, se prefieren, pero en muchas circunstancias se pueden recolectar de ratón u otras especies. Los tumores metastáticos también se evaluarán tanto como para expresión de receptor y para análisis de quimioatracción de quimiocina. Los tumores adicionales que se van a evaluar incluyen, por ejemplo, cáncer de próstata, gastrointestinal, y de pulmón. Además, la expresión de quimiocina se evaluará para nodulo linfático, médula ósea, cerebro, hígado, piel y pulmón. Estas quimiocinas que se expresan a partir de los mismos son quimioatractivos candidatos para cánceres que metastatizan a estos órganos. Los antagonistas del ligando y el receptor se debe probar para bloqueo de metástasis a estos órganos. lll.- Aislamiento de secuencias de codificación Receptor de quimiocina de humano, ratón o rata o secuencias de quimiocina están disponibles fácilmente. Consultar por ejemplo, las bases de datos de secuencia de GenBank y la patente de Derwent. Los iniciadores de PCR adecuados o sondas de hibridización se pueden seleccionar. Las secuencias serán útiles para evaluación de expresión de receptores en células tumorales o quimocinas en órganos objetivo. Las secuencias de ligando aisladas servirán como puntos de partida para esfuerzos de mutágenesis para identificar antagonistas de muteina. Las secuencias de gen pueden ser útiles para producir proteína recombinante para producción de anticuerpo.

IV.- Análisis de distribución Para Southern blotting, 5 µg de cada genoteca de ADNc se digieren con la enzima de restricción adecuada para liberar el inserto, se somete a electroforesis de gel y se transfiere a membrana Hybond-N+. Para Northern blotting, los ARNs se aislan utilizando RNAzol B (TEL-TESt, Inc.) y se analizan mediante electroforesis sobre un gel de formaldehído al 1%-agarosa y se transfieren a membrana Hybond-N+. Los Northern y Southern blots se hibridizan, por ejemplo, durante 16 horas a 65°C con sondas marcadas 32p- obtenidas iniciando de manera aleatoria (Prime-it; Stratagene) los insertos de longitud completa. Después de hibridación, las tinsiones se lavan con alta rigurosidad y se exponen a película. Los métodos de PCR se han aplicado, y la quimiocina o los iniciadores específicos de receptor se pueden diseñar. Los métodos de diagnostico son bien conocidos. Las técnicas cuantitativas también están disponibles, por ejemplo TAQMAN™. Las células de tumor metastático putativo se evaluarán para expresión de receptores de quimiocina, las cuales pueden mediar la atracción metastática a órganos objetivo específicos. Por el contrario, los órganos objetivo a los cuales es común la metástasis pueden expresar quimiocinas que sirven para quimioatraer células metastáticas a ellas. Por lo tanto, la evaluación de los patrones de producción de quimiocina mediante órganos objetivos puede explicar los tumores que son quimioatraídos para establecerse en el sitio secundario. La diagnosis de expresión de receptor mediante un tumor primario puede proveer guías respecto a cuales tumores pueden ser susceptibles a bloqueo de metástasis mediante cuales antagonistas. Esto puede ser útil para determinar las estrategias de tratamiento terapéutico, por ejemplo, cuales tumores se pueden tratar de manera efectiva para bloqueo metastático. Más aún, la expresión específica de receptores particulares puede servir como marcadores para reactivos terapéuticos de formación de objetivo a los diferentes tipos de tumor.

Los análisis de expresión de ácido nucleico, por ejemplo PCR, Taqman, datos de hibridación, y/o protección de ARN, se confirman preferiblemente evaluando la expresión de proteína. Esto puede ser en forma de análisis de proteína, por ejemplo técnicas de Western blotting de proteína, e imunoánalisis, o inmunohistoquímica. Los análisis estadísticos serán útiles para determinar la probabilidad de eficacia del tratamiento antagonista. Los métodos de confirmación adicionales incluyen, por ejemplo, análisis de migración e invasión, análisis de polimerización de F-actina, y evaluación de movilidad celular. Los modelos de transfección se pueden aplicar para conferir tipos celulares de tráfico o inertes de otra manera. Los estudios se pueden basar en modelos de roedores, etc.

V.- Análisis de guimioatracción La quimiocina recombinante se produce, por ejemplo, en E. coli y se purifica. Consultar Hedrock, et al. (1998) Blood 91 :4242-4247. Se utiliza una cámara de Boyden modificada. Las células de tumor humano, por ejemplo, líneas o tumores primario o secundario en DMEM, pH 6.9, 1% de albúmina de suero bovino, se añaden a la cámara superior de un inserto de cultivo de 3 µm de tamaño de poro de policarbonato Transwell (Costar) y se incuban con las concentraciones indicadas de quimiocina purificada en la cámara inferior durante 3 horas. El número de células que emigran de cada subtipo se determina, por ejemplo mediante tinsión y conteo. Consultar por ejemplo Youngs, et al. (1997) Int. J. Cáncer 71 :257-266.

Los análisis de quimiotaxis se realizan con, por ejemplo, células de tumor humano. Las líneas celulares o células de tumor primario se evaluarán para cánceres de pecho, cabeza y cuello, melanoma, próstata, gastrointestinal, y de pulmón. Otros tipos celulares expresan los varios receptores de quimiocina. La quimiocina recombinante debe tener efectos sobre los tipos celulares que expresan receptor.

VI. Producción de anticuerpo Los mamíferos adecuados se inmunizan con cantidades adecuadas, por ejemplo, de células transfectadas con gen de quimiocina, por ejemplo de manera intraperitoneal cada dos semanas durante 8 semanas. Se pueden utilizar métodos similares para producir anticuerpos que se unen a receptor, por ejemplo CCR7, CXCR4, o GPR2, polipéptidos, o se pueden utilizar células transfectadas que expresan el receptor. Típicamente, se utilizan roedores, aunque otras especies se deben acomodar a la producción de anticuerpos selectivos y específicos. La inmunización final se da de manera intravenosa (IV) a través de la vena de cola. Se pueden recolectar anticuerpos policlonales genéricos. De manera alternativa, se pueden producir anticuerpos monoclonales. Por ejemplo, cuatro días después de ia inyección IV, el bazo se remueve y se fusiona a células SP2/0 y NS1. Los hibridomas resistentes a HAT se seleccionan, por ejemplo, utilizando un protocolo diseñado por Stem Cell Technologies (Vancouver, BC). Después de 10 días de selección de HAT, los focos resistentes se transfieren a placas de 96 pozos y se expanden durante 3 días. Los sobre flotantes que contienen anticuerpos se analizan, por ejemplo, mediante FACS para unión a NIH3T3/transfectantes de superficie MIP-3ß. Muchos mAbs MIP-3ß diferentes se producen típicamente. Aquellos anticuerpos se pueden aislar y modificar, por ejemplo, mediante marcación u otros medios como es estándar en la técnica. Consultar por ejemplo Harlow y Lañe (1988) Antibodies: A Laboratorv Manual CSH Press; Goding (1986) Monoclonal Antibodies: Principies and Practice (2d ed). Academic Press, New York, NY. Los métodos para conjugar reactivos magnéticos, entidades tóxicas, marcas, adhesión de anticuerpos a substratos sólidos, a filtro estéril, etc., se conocen en la técnica.

Vil Purificación de células Las células que responden a quimiocina se pueden identificar utilizando los reactivos que se describen en la presente. Por ejemplo, células que son quimioatraídas hacia, por ejemplo, SDF-1 , se pueden purificar a partir de otras células recolectando aquellas células que atraviesan hacia SDF-1. Tal quimiotaxis puede ser una fuente de quimiocina, o puede ser a través de una membrana porosa u otro substrato. Consultar lo anterior, en el análisis de microquimiotaxis. De manera alternativa, las células responsivas se pueden identificar mediante expresión del receptor, por ejemplo, CXCR4, como se provee en la presente. Por lo tanto, los anticuerpos que reconocen CXCR4 se pueden utilizar como un marcador positivo para clasificar células propensas a responder a SDF-1 , y por lo tanto ser quimioatraídas a médula ósea. De manera contraria, el marcador se puede utilizar para agotar las células que portan CXCR4, por ejemplo, mediante agotamiento magnético o conjugados tóxicos. El análisis de muestras humanas se puede evaluar en una manera similar. Una muestra biológica, por ejemplo sangre, muestra de biopsia de tejido, lavado de pulmón o nasal, perforación de piel, se obtiene a partir de un individuo que sufre de un trastorno relacionado con neoplástico. Se realiza el análisis de célula que responde a quimiocina, por ejemplo, mediante análisis de FACS, o medios similares. Y aquellas células pueden ser células de tumor primario las cuales se deben formar en objetivo, por ejemplo, mediante conjugados tóxicos.

VIII.- Antagonistas de guimiocina Varios antagonistas de quimiocinas diseñadas están disponibles. Por ejemplo, los anticuerpos contra la quimiocina en sí pueden bloquear la unión de ligando a su receptor, sirviendo por lo tanto como un antagonista de receptor directo. Otros antagonistas pueden funcionar bloqueando la unión de ligando a receptor, por ejemplo, mediante unión al receptor en una manera para evitar la posibilidad de unión a ligando. Otros antagonistas, por ejemplo, antagonistas de muteína o aptámeros, se pueden unir al receptor sin señalización, bloqueando por lo tanto un agonista real contra unión. Muchos de estos pueden servir para bloquear la señal transmitida a células objetivo, por ejemplo, específicamente células que responden a SDF-1 . Los compuestos de molécula pequeña también se pueden identificar que bloquean la interacción de ligando con receptor. La información sobre la criticalidad de residuos particulares se determina, por ejemplo, utilizando procedimientos y análisis estándar. Los análisis de mutagénesis estándar se realizan, por ejemplo, generando muchas variantes diferentes a posiciones determinadas, por ejemplo, en las posiciones propensas a estar implicadas en unión de receptor, y evaluando las actividades biológicas de las variantes. Esto se puede realizar al grado de determinar posiciones que modifican la actividad, o para enfocar sobre posiciones específicas para determinar los residuos que se pueden sustituir para retener, bloquear, o modular la actividad biológica. De manera alternativa, los análisis de variantes naturales pueden indicar cuales posiciones toleran mutaciones naturales. Esto puede resultar a partir de análisis de población de variación entre individuos, o a través de cepas o especies. Las muestras de individuos seleccionados se analizan, por ejemplo, mediante análisis de PCR y formación de secuencias. Esto permite la evaluación de polimorfismos de población.

IX.- Marcación de células Con anticuerpos específicos, no necesariamente de bloqueo de funcionalidad, se puede realizar la marcación de células. Los anticuerpos de especificidad adecuada pueden marcarse, por ejemplo, con una señal detectable. Los anticuerpos fluorescentes son un ejemplo común. Ciertas células se pueden marcar en solución, por ejemplo células individuales que expresan antígenos de superficie. La clasificación de FACs se basa principalmente en esta propiedad. Otras células se pueden marcar en forma de tejido, por ejemplo, inmunoistoquímica. Los medios para obtener anticuerpo en tejidos físicos son conocidos, y se pueden utilizar métodos similares en tejidos no fijos, ex vivo o ¡n vivo. Consultar por ejemplo Young and Heath (eds. 2000) Wheater's Functional Histology: A Text and Colour Atlas (Libro con CD-ROM) Churchill Livingstone; Kerr (1999) Atlas of Functional Histology Mosby; y Ross, et al. (eds. 1995) Histology: A Text and Atlas Lippincott, Williams & Wilkins. La marcación celular in situ de tumores primarios o secundarios mediante anticuerpo se puede utilizar para inducir mecanismos de eliminación natural, por ejemplo citotoxicidad mediada por célula dependiente de antígeno (ADCC), procedimientos líticos de célula mediados por complemento, u opsinización y fagocitosis de macrófago, entre otros. La localización específica de ios marcadores de receptor con anticuerpos puede ser útil en contextos de diagnóstico y terapéuticos. Diagnósticamente, los anticuerpos pueden permitir la localización de células de tumor primario que expresan receptor, por ejemplo, mediante el uso de marcadores radio opacos, para determinar la ubicación y grado de crecimiento de tumor o metástasis. Los anticuerpos se pueden utilizar para localizar un agente de activación, por ejemplo como fosfatasa alcalina se localiza y actúa sobre sustrato, similar a cual mecanismo se utiliza para aplicaciones de inmunoistoquímica. Una estrategia similar se puede utilizar para activar de manera enzimática localmente un procedimiento de eliminación, por ejemplo para activar una toxina de otra manera inerte. Por ejemplo, una lectina inactiva (prolectina) se puede volver proteolíticamente activada mediante un conjugado de enzima de anticuerpo. O, un reactivo que absorbe energía se puede conjugar al anticuerpo, localizando por lo tanto de manera específica el reactivo que absorbe energía para provocar que el tejido en la cercanía se vuelva sujeto a concentración de una fuente de radiación externa. Todas las referencias en la presente están incorporadas a la presente por referencia al mismo grado como si cada publicación individual o solicitud de patente se indicase de manera específica e individual para estar incorporada por referencia. Muchas modificaciones y variaciones de esta ¡nvención se pueden hacer sin apartarse de su espíritu y alcance, como será evidente para los expertos en la técnica. Las modalidades específicas que se describen en la presente se ofrecen únicamente a manera de ejemplo, y la invención está limitada mediante los términos de las reivindicaciones que se anexan, junto con el alcance completo de equivalentes a los cuales tales reivindicaciones están autorizadas; y la invención no debe estar limitada por las modalidades específicas que se han presentado en la presente a manera de ejemplo.

Claims (18)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- El uso de un antagonista que bloquea la señalización de receptor de quimiocina en la fabricación de un medicamento para inhibición de metástasis de una célula.

2.- El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicha metástasis es específica de órgano.

3.- El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicha metástasis es a un nodulo linfático, médula ósea, o piel.

4.- El uso como se reclama en la reivindicación 3, en donde dicha metástasis es al nodulo linfático.

5.- El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicha célula es una célula de carcinoma, incluyendo una célula de carcinoma de pecho, célula de carcinoma de cabeza y cuello, célula de melanoma, o célula de carcinoma de próstata.

6.- El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicha célula es una célula de carcinoma de pecho o una célula de melanoma.

7.- El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicho receptor de quimiocina es CCR7, CXCR4, GPR2 o CCR10.

8.- El uso como se reclama en la reivindicación 7, en donde dicho antagonista es un anticuerpo contra dicho receptor de quimiocina.

9.- El uso como se reclama en la reivindicación 7, en donde dicho receptor de quimiocina es CCR7, y el antagonista es: a) un anticuerpo contra FSEC, CKß9, o CKß11 ; o b) una muteína antagonista de FSEC, CKß9, o CKß11.

10.- El uso como se reclama en la reivindicación 7, en donde dicho receptor de quimiocina es CXCR4 y dicho antagonista es: a) un anticuerpo contra SDF-1 ; o b) una muteína antagonista de SDF-1.

11.- El uso como se reclama en la reivindicación 7, en donde dicho receptor de quimiocina es GPR2, y dicho antagonista es: a) un anticuerpo contra CTACK o Vic; o b) una muteína antagonista de CTACK o Vic.

12.- El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicho antagonista es: a) un anticuerpo contra receptor de quimiocina; o b) un fármaco que inhibe la señalización de dicho receptor de quimiocina incluyendo toxina de pertusis.

13.- El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde dicho antagonista se combina con otra sustancia terapéutica anticáncer.

14.- El uso como se reclama en la reivindicación 13, en donde dicha sustancia terapéutica anticáncer es una sustancia de quimioterapia o una sustancia de inmuno terapia.

15.- Un método para evaluar un receptor de quimiocina sobre un tumor primario o célula metástatica, que comprende identificar si es que un receptor de quimiocina seleccionado de GPR2, CCR7, CXCR4 y CCR10 se expresa sobre dicha célula.

16.- El método como se reclama en la reivindicación 15, en donde dicha identificación: a) es marcación de anticuerpo, prueba de ligando o análisis de PCR; o b) resulta en la determinación de tratamiento terapéutico.

17.- Una composición que comprende un agente antitumor en conjunto con un antagonista de receptor de quimiocina o con un conjugado tóxico que se ha formado como objetivo a un receptor de quimiocina que se selecciona de: a) un anticuerpo contra FSEC o CKß11 ; b) una muteína antagonista de FSEC o CKß11 ; c) un anticuerpo contra SDF-1 ; d) una muteína antagonista de SDF-1 ; e) un anticuerpo contra CTACK o Vic; f) una muteína antagonista de CTACK o Vic; g) un anticuerpo contra GPR2, CCR7, CXCR4 o CCR10; y h) un fármaco que inhibe la señalización de GPR2, CCR7, CXCR4 o CCR10 incluyendo toxina pertusisa.

18.- El uso de una composición como se reclama en la reivindicación 7 en la fabricación de un medicamento para tratamiento de cáncer en un animal.