MXPA02000458A - Proceso para la desacilacion de lipodepsipeptidos. - Google Patents

Abstract

Se describe un proceso para la desacilacion de un lipodepsipeptido para producir el nucleo correspondiente. Tambien se describen los productos producidos a partir de este proceso (por ejemplo, un nucleo de seudomicina representado por las estructuras (I) o (II)).

Description

PROCESO PARA LA DESACILACION DE LIPODEPSIPÉPTIDOS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a lipodepsipéptidos, en particular la desacilación de la cadena lateral de N-acilo de productos naturales de seudomicina y siringomicina y los compuestos producidos de estos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las seudomicinas y siringomicinas son productos naturales aislados de cultivos líquidos de Pseudomonas syringae (bacteria asociada a la planta) y se ha mostrado que tienen actividades antifúngicas . (véase por ejemplo, Harrison, L., et al., 'Pseudomycins, a family of novel peptides from Pseudomonas syringae possessing broad-spectrum antifungal activity," J. Gen. Microbiology, 137(12), 2857-65 (1991) y las Patentes Norteamericanas Nos. 5,576,298 y 5,837,685). Diferentes de los antimicóticos descritos previamente de P. syringae (por ejemplo., siringomicinas, siringotoxinas y siringoestatinas) , las pesudomicinas A-C contienen ácido hidroxiaspártico, ácido aspártico, serina, ácido deshidroaminobutírico, lisina y ácido diaminobutírico. REF. 134942 La porción de péptido para las seudomicinas A, A' , B, B' , C, C corresponde a L-Ser-D-Dab-L-Asp-L-Lys-L-Dab-L-aThr-Z-Dhb-L-Asp(3-0H) -L-Thr (4-Cl) con el grupo carboxilo terminal que cierra un anillo macrocíclico en el grupo OH de la Ser N-terminal. Los análogos se distinguen por la cadena lateral de N-acilo, es decir, la seudomicina A es N-acilada por 3, -dihidroxitetradecanoilo, la seudomicina A' por 3,4-dihidroxipentadecanoilo, la seudomicina B por 3-hidroxitetradecanoilo, la seudomicina B' por 3-hidroxidodecanoilo, la seudomicina C por 3,4-dihidroxihexadecanoilo y la seudomicina C por 3-hidroxihexadecanoilo. (véase por ejemplo, Ballio, A., et al., "Novel bioactive lipodepsipeptides from Pseudomonas syringae : the pseudomycins," FEBS Letters, 355(1), 96-100, (1994) y Coiro, V.M., et al., "Solution conformation of the Pseudomonas syringae MSU 16H phytotoxic lipodepsipeptide Pseudomycin A determined by computer simulations using distance geometry and molecular dynamics from NMR data," Eur. J. Biochem., 257(2), 449-456 (1998).) Las seudomicinas y siringomicinas son conocidas por tener ciertos efectos biológicos adversos. Por ejemplo, se ha observado destrucción del endotelio de la vena, destrucción del tejido, inflamación, y toxicidad local a los tejidos del hospedero cuando la seudomicina se administra intravenosamente. Por lo tanto, hay una necesidad para identificar los compuestos dentro de esta clase que son útiles para el tratamiento de infecciones fúngicas sin los efectos laterales adversos observados actualmente.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona un proceso para la desacilación de la cadena lateral de N-acilo de un producto natural de lipodepsipéptido para producir el núcleo correspondiente. La desacilación de los compuestos de seudomicina produce el núcleo amino de seudomicina representado por la siguiente estructura I.

El núcleo es útil como un material de partida para la producción de derivados semi-sintéticos del producto natural correspondiente . El proceso incluye hacer reaccionar un producto natural de seudomicina con una enzima desacilasa seleccionada del grupo que consiste de ECB desacilasa y polimixin acilasa para producir el núcleo correspondiente representado por la estructura I. La amina libre se puede reordenar para producir un núcleo de péptido cíclico que tiene un grupo hidroxi libre representado por la estructura II posterior (también referido como núcleo hidroxi de seudomicina) .

II El compuesto II luego puede servir como material de partida para generar nuevos derivados los cuales pueden ser activos farmacéuticamente. En otra modalidad de la presente invención, el proceso descrito anteriormente se usa para desacilar los compuestos de siringomicina para proporcionar un núcleo amino de siringomicina. Por ejemplo, el núcleo amino de Siringomicina E tiene la siguiente estructura III.

III Igual al núcleo amino de seudomicina, el núcleo amino de siringomicina se puede reordenar para formar el siguiente Compuesto IV (también referido como núcleo hidroxi de siringomicina) .

Aún aunque las formas quirales específicas se describen antes para los Compuestos I, II, III y IV, otras formas quirales están dentro del espíritu de la presente invención. Cada uno de los compuestos también puede existir como sales, hidratos o sólvatos de estos farmacéuticamente aceptables.

Definiciones Como se usa en esta, el término "seudomicina" se refiere a compuestos que tienen la siguiente fórmula: donde R es una porción lipofílica. La porción lipofílica incluye alquilo de 9 a 15 átomos de carbono, hidroxialquilo de . 9 a 15 átomos de carbono, dihidroxialquilo de 9 a 15 átomos de carbono, alquenilo de 9 a 15 átomos de carbono, hidroxialquenilo de 9 a 15 átomos de carbono, o dihidroxialquenilo de 9 a 15 átomos de carbono. Los - compuestos de seudomicina A, A' , B, B C, C se representan por la fórmula I anterior donde R es como se define posteriormente . Seudomicina A R = 3, -dihidroxitetradecanoilo Seudomicina A' R = 3, -dihidroxipentadecanoilo Seudomicina B R = 3-hidroxitetradecanoilo Seudomicina B' R = 3-hidroxidodecanoilo Seudomicina C R = 3, -dihidroxihexadecanoilo Seudomicina C R = 3-hidroxihexadecanoilo DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Los solicitantes han descubierto un proceso para desacilar ezimáticamente la cadena lateral de N-acilo de un amplio espectro de productos naturales de lipodepsipéptido para producir el núcleo correspondiente. Inesperadamente, el núcleo de amina libre se reordena para producir el derivado hidroxi libre tales como los compuestos mostrados anteriormente como las estructuras II y IV. Los Compuestos I y III se pueden convertir a los Compuestos II y IV, respectivamente, exponiendo el Compuesto I ó II a un pH > 6. Si el producto deseado es el Compuesto I ó III, entonces uno podría reducir la velocidad en la cual el producto reordenado se forma de la seudomicina desacilada o siringomicina desacilada con la adición de un ácido, tal como ácido trifluoroacético. Sin embargo, la adición de un ácido podría resultar en rendimientos inferiores del núcleo amina. A pH inferiores, la enzima se puede separar por precipitación de la mezcla de reacción interrumpiendo así la conversión. Por lo tanto, el pH de la mezcla de reacción no se baja preferiblemente menos de 5.5. Uno podría prevenir la precipitación de la enzima separando la enzima de la reacción a través de una membrana de peso molecular (es decir, limitación de peso molecular de 10,000 a 50,000). El efluente a través de la membrana podría contener compuestos que tienen un peso molecular menor de 10,000 a 5,000 (por ejemplo, Compuestos I-IV) y podría excluir la enzima de peso molecular más alto. El efluente luego podría ser de pH ajustado hacia abajo para estabilizar el producto. Diferente de los procesos de desacilación del ácido (por ejemplo, ácido trifluoroacético en un solvente acuoso a temperatura ambiente) , el proceso enzimático de la invención se puede usar para desacilar los análogos de seudomicina o siringomicina con o sin cadenas laterales gamma o delta hidroxi. Por lo tanto, el espectro de los productos naturales de partida se extiende significativamente. Por ejemplo, uno puede desacilar la seudomicina A, A B, B C o C usando el proceso de la invención. Mientras que, el proceso de desacilación del ácido es útil solamente con la seudomicina A, A' y C.

La enzimas adecuadas incluyen ECB desacilasa y Polimixin acilasa (disponible tanto en una forma cruda como pura como 161-16081 Fatty Acylase, Pura y 164-16081 _Fatty_ A-cylase, Cruda, de Wako Puré Chemical Industries, Ltd.) la ECB desacilasa se puede obtener de Actinoplanes utahensis (véase por ejemplo, LaVerne, D, et al, "Deacylation of Echinocandin B by Actinoplanes utahensis, " J. of An tibiotics , 42(3), 382-388 (1989)). La enzima ECB desacilasa Actinoplanes u tahensis se puede purificar por el proceso descrito en la Patente Norteamericana No. 5,573,936, incorporada en esta por referencia. También uno puede usar una enzima que se ha clonado y expresado en Streptomyces lividans . Los intentos para desacilar la seudomicina A con Pen G Amidasa y Ftalil Amidasa no fueron exitosos. La desacilación enzimática se puede realizar usando procedimientos de desacilación estándares bien conocidos por aquellos expertos en la técnica. Por ejemplo, los procedimientos generales para el uso de Polimixin acilasa se pueden encontrar en Yasuda, N., et al, Agrie. Biol . Chem . , 53, 3245 (1989) y Kimura, Y., et al., Agrie. Biol . Chem . , 53, 497 (1989) . El proceso de desacilación generalmente se conduce a temperaturas entre alrededor de 20°C y alrededor de 60°C, preferiblemente entre alrededor de temperatura ambiente (25°C) y alrededor de 40°C. Las temperaturas más altas pueden promover la formación del producto reordenado (Compuesto II) . La enzima es óptimamente activa a pH 8.0 y a una temperatura entre alrededor de 50°C y 60°C. Aunque la reacción es más rápida al pH más alto y temperatura más alta, se puede observar más producto reordenado en el pH más alto. Por lo tanto, el pH de la reacción generalmente se mantiene entre alrededor de 5.5 y alrededor de 8.0. El tiempo de reacción variará dependiendo del pH y la temperatura. Sin embargo, con la limitación de la concentración de enzima y la concentración del substrato saturado a temperaturas y pH altos, la reacción es lineal a través de 10 minutos. Puesto que la Seudomicina A es inestable a pH más altos, la desacilación de la Seudomicina A generalmente se conduce a un pH (entre alrededor de 5.0 y 6.0) y temperatura (alrededor de 25°C) más baja. Por ejemplo, la desacilación de la Seudomicina A se puede conducir en una solución amortiguada que contiene KP04 0.05 M y KCl 0.8 M. Un nivel saturado del substrato generalmente está entre alrededor de 0.5 mg y alrededor de 1 mg por ml de reacción. Como se discutió antes, las seudomicinas son productos naturales aislados de la bacteria Pseudomonas syringae que se han caracterizado como lipodepsinonapéptidos .que contienen una porción de péptido cíclico cerrada por un enlace de lactona y que incluye los 4-clorotreonina amino ácidos (CIThr) inusuales, ácido 3-hidroxiaspártico (HOAsp) , ácido 2, 3-deshidro-2-aminobutírico (Dhb) , y ácido 2,4- diaminobutírico (Dab) . Los métodos para el crecimiento de varias cepas de P. syringae para producir los diferentes análogos de seudomicina (A, A' , B, B C, y CA son generalmente descritos posteriormente y también descritos en más detalle en la Solicitud de Patente PCT Serie No. PCT/US00/08728 presentada por Hilton, et al. en Abril 14, 2000 titulada "Pseudomycin Production by Pseudomonas Syringae, " incorporada en esta por referencia, la Solicitud de Patente PCT Serie No. PCT/US00/08727 presentada por Kulanthaivel, et al. en Abril 14, 2000 titulada "Pseudomycin Natural Products," incorporada en esta por referencia, y las Patentes Norteamericanas Nos. 5,576,298 y 5,837,685, cada una de las cuales son incorporadas en esta por referencia. Las cepas aisladas de P. syringae que producen una o más seudomicinas son conocidas en la técnica. La cepa de tipo silvestre MSU 174 y un mutante de esta cepa generado por transposón mutagénesis, MSU 16H se describen en las Patentes Norteamericanas Nos. 5,576,298 y 5,837,685; Harrison, et al., "Pseudomycins, a family de novel peptides from Pseudomonas syringae possessing broad-spectrum antifungal activity," J. Gen. Microbiology, 137, 2857-2865 (1991); y La b et al., * Transposon mutagenesis and tagging of fluorescent pseudomonas: Antimycotic production is necessary for control of Dutch elm disease," Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 84, 6447- 6451 (1987) . Una cepa de P. syringae que es adecuada para la producción de una o más seudomicinas se puede aislar de fuentes ambientales incluyendo plantas (por ejemplo, plantas de cebada, plantas cítricas, y plantas de lilac) así como también, fuentes tales como tierra, agua, aire, y polvo. Una cepa preferida se aisla de plantas. Las cepas de P. syringae que se aislan de fuentes ambientales se pueden referir como del tipo silvestre. Como se usa en este documento 'tipo silvestre" se refiere a un genotipo dominante el cual sucede naturalmente en la colonia de organismos normal de P. syringae (por ejemplo, cepas o aislados de P. syringae que se encuentran en la naturaleza y no se producen por manipulación en laboratorio) . Igual a la mayoría de los organismos, las características de los cultivos que producen seudomicina empleados (cepas de P. syringae tales como MSU 174, MSU 16H, SU 206, 25-B1, 7H9-1) se sujetan a variación. En consecuencia, la progenie de estas cepas (por ejemplo, recombinantes, mutantes y variantes) se puede obtener por métodos conocidos en la técnica. Las cepas mutantes de P. syringae también son adecuadas -para la producción de una o más seudomicinas. Como se usa en esta, "mutante" se refiere a un cambio hereditario repentino en el fenotipo de una cepa, el cual puede ser espontáneo o inducido por agentes mutagénicos conocidos, tal como radiación (por ejemplo, radiación ultravioleta o rayos x) , mutágenos químicos (por ejemplo, metansulfonato de etilo (EMS), diepoxioctano, N-metil-N-nitro-N' -nitrosoguanina (NTG) , y ácido nitroso) , mutagénesis específica del sitio, y transposón mediado por mutagénesis. Los mutantes que producen seudomicina de P. syringae se pueden producir tratando las bacterias con una cantidad de un agente mutagénico efectivo para producir mutantes que producen en exceso una o más seudomicinas, que producen una seudomicina (por ejemplo seudomicina B) en exceso sobre otras seudomicinas, o que producen una o más seudomicinas bajo condiciones ventajosas de crecimiento. Mientras que el tipo y cantidad de agente mutagénico a ser usado puede variar, un método preferido es diluir en serie el NTG a niveles que varían desde 1 a 100 µg/ml. Los mutantes preferidos son aquellos que producen en exceso la seudomicina B y crecen en medios mínimos definidos. Los aislados ambientales, cepas de mutante, y otras cepas deseables de P. syringae se pueden someter a la selección de rasgos deseables del habito de crecimiento, fuente de nutriente del medio de crecimiento, fuente de carbono, condiciones de crecimiento, requerimientos de amino ácido, y similares. Preferiblemente, una cepa de P. syringae que produce seudomicina se selecciona para el crecimiento en medio mínimo definido tal como medio N21 y/o para la producción de una o más seudomicinas a niveles mayores que alrededor de 10 µg/ml. Las cepas preferidas exhiben la característica de producir una o más seudomicinas cuando crecen en un medio que incluye tres o unos pocos aminoácidos y opcionalmente, ya sea un lípido, un producto de papa o combinación de estos. Las cepas recombinantes se pueden desarrollar transformando las cepas de P. syringae, usando procedimientos conocidos en la técnica. A través del uso de tecnología de ADN recombinante, las cepas de P. syringae se pueden transformar para expresar una variedad de productos de genes además de los antibióticos que estas cepas producen. Por ejemplo, uno puede modificar las cepas para introducir copias múltiples de los genes endógenos de biosíntesis de seudomicina para lograr mayor rendimiento de seudomicina. Para producir una o más seudomicinas de un tipo silvestre o cepa mutante de P. syringae, el organismo se cultiva con agitación en un medio de nutriente acuoso que incluye una cantidad efectiva de tres o unos pocos aminoácidos, preferiblemente ácido glutámico, glicina, histidina, o una combinación de estos. Alternativamente, la glicina se combina con uno o más de un producto de papa y un lipido. El cultivo se realiza bajo condiciones efectivas para el crecimiento de P. syringae y la producción de la seudomicina o seudomicinas deseadas. Las condiciones efectivas incluyen temperaturas desde alrededor de 22 °C a alrededor de 27 °C, y una duración de alrededor de 36 horas a alrededor de 96 horas. El control de la concentración de oxígeno en el medio durante el cultivo de P. syringae es ventajoso para la producción de una seudomicina. Preferiblemente, los niveles de oxígeno se mantienen a alrededor de 5 a 50% de saturación, más preferiblemente alrededor de 30% de saturación. El rocío con aire, oxígeno puro, o mezclas de gas que incluyen oxígeno puede regular la concentración de oxígeno en el medio.

El control del pH del medio durante el cultivo de P. syringae también es ventajoso. Las seudomicinas son inestables a pH básico, y la degradación significativa puede ocurrir si el pH del medio de cultivo es arriba de alrededor de 6 por más de alrededor de 12 horas. Preferiblemente, el pH del medio de cultivo se mantiene entre 6 y 4. La P. syringae puede producir una o más seudomicinas cuando crecen en el cultivo por lote. Sin embargo, la alimentación por lote o alimentación semi-continua de glucosa y opcionalmente, un ácido o base (por ejemplo, hidróxido de amonio) para controlar el pH, aumentan la producción. La producción de seudomicina se puede aumentar adicionalmente usando métodos de cultivo continuos en los cuales la glucosa e hidróxido de amonio se alimentan automáticamente. La elección de la cepa de P. syringae puede afectar la cantidad y distribución de seudomicina o seudomicinas producidas. Por ejemplo, las cepas MSU 16H y 67 Hl cada una produce predominantemente seudomicina A, pero también produce seudomicina B y C, típicamente en relaciones de 4:2:1. La cepa 67 Hl típicamente produce niveles de seudomicinas alrededor de tres a cinco veces mayores que los que se producen por la cepa MSU 16H. Comparada con las cepas MSU 16H y 67 Hl, la cepa 25-B1 produce más seudomicina B y menos seudomicina C. Las cepas 7H9-1 son distintivas en la producción predominantemente de seudomicina B y mayor cantidad de seudomicina B que otras cepas. Por ejemplo, esta cepa puede producir la seudomicina B en al menos un aumento de diez veces sobre ambas seudomicinas A o C. Como se discutió antes, el proceso descrito en esta también es útil para la desacilación de compuestos de siringomicina. La Siringomicina E, siringotoxina B, y siringoestatina A se pueden producir de cultivos de cepas de Pseudomonas syringae pv. syringae B301D, PS268, y SY12, respectivamente. Las siringomicinas Ai y G también se pueden aislar de Pseudomonas syringae pv. syiringae . Las cepas B301D y PS268 se desarrollan en un medio de dextrosa de papa como se describe por Zhang, L., y J. Y. Takemoto, "Effects of Pseudomonas syringae phytotoxin, syringomycin, on plasma membrane functions of Rhodotorula pilimanae," Phytopathol. 77 (2) :297-303 (1987). La cepa SY12 crece en medio mínimo de siringomicina complementado con arbutina 100M (Sigma Chemical Co., A 4256; St. Louis, Mo . ) y fructuosa al 0.1% (SRMAF) (19, 23) . SR-E, ST-B, y SS-A se purifican por cromatografía líquida de alta resolución como se describe previamente por Bid ai, A. P., y J. Y. Takemoto, 'Bacterial phytotoxin, syringomycin, induces a protein kinase- mediatedphosphorylation of red beet plasma membrane polypeptides," Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 84:6755-6759 (1987) . El AmB solubilizado que contiene desoxicolato de sodio al 35% (Sigma Chemical Co., A 9528; St. Louis, Mo.) y cetoconazol (Sigma Chemical Co., K-1003; St. Louis, Mo.) se usan como estándares de prueba. Una descripción detallada para la producción y aislamiento de tres siringomicina E, siringotoxina B y siringoestatina A de lipodepsinonapéptidos cíclicos se puede encontrar en la Patente Norteamericana No. 5,830,855, incorporada en esta por referencia. El núcleo de seudomicina o siringomicina o compuestos reordenados correspondientes (Compuestos II y IV) se pueden aislar y usar per se o en la forma de su sal o solvato farmacéuticamente aceptable. El término 'sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a sales de adición del ácido no tóxicas derivadas de ácidos orgánicos e inorgánicos. Los derivados de sal adecuados incluyen haluros, tiocianatos, sulfatos, bisulfatos, sulfitos, bisulfitos, arilsulfonatos, alquilsulfatos, fosfonatos, monohidrógen-fosfatos, dihidrógenfosfatos, metafosfatos, pirofosfonatos, alcanoatos, cicloalquilalcanoatos, arilalconatos, adipatos, alginatos, aspartatos, benzoatos, fumaratos, glucoheptanoatos, glicerofosfatos, lactatos, maleatos, nicotinatos, oxalatos, palmitatos, pectinatos, picratos, pivalatos, succinatos, tartaratos, citratos, canforatos, canforsulfonatos, digluconatos, trifluoroacetatos, y similares . El término 'solvato" se refiere a un agregado que comprende una o más moléculas del soluto (es decir, compuesto de seudomicina y siringomicina) con una o más moléculas de un solvente farmacéutico, tal como agua, etanol, y similares. Cuando el solvente es agua, entonces el agregado es referido como hidrato. Los solvatos se forman generalmente por la disolución del núcleo o compuesto reordenado (Compuestos II ó IV) en el solvente apropiado con calor y retardar el enfriamiento para generar una forma de solvato cristalina o amorfa.

EJEMPLOS Muestras Biológicas La P. syringae MSU 16H está públicamente disponible de la American Type Culture Collection, Parkla n Drive, Rockville, MD USA como No. de Acceso ATCC 67028. Las cepas de P. syringae 25-B1, 7H9-1, y 67 Hl se depositaron con la American Type Culture Collection en Marzo 23, 2000 y se asignaron los siguientes Números de Acceso: 25-B1 No. de Acceso PTA-1622 7H9-1 No. de Acceso PTA-1623 67 Hl No. de Acceso PTA-1621 Abreviaturas Químicas Las siguientes abreviaturas se usan en todos los ejemplos para representar los materiales listados respectivos : ACN - acetonitrilo TFA - ácido trifluoroacético DMF - dimetilformamida Ejemplo 1 El ejemplo ilustra la desacilación de Seudomicina A usando ECB Desacilasa enzima. La Seudomicina A (59 µg) y la ECB Desacilasa purificada (50 µl) en 900 µl de una solución amortiguadora acuosa que contiene fosfato de potasio 0.05M y cloruro de potasio 0.8 M. El pH permanece entre 6.0 y 8.0. La temperatura se incrementó desde 25°C a 40°C. La reacción se verificó por HPLC (columna Waters C18 µBondapak 3.9 X 300 mm, 235 nm, acetonitrilo al 1%/ácido trifluoroacético al 0.2% (4 minutos) a acetonitrilo al 60%/ácido trifluoroacético al 0.2% (16 minutos) ) . Se observaron tanto el núcleo de amina seudimicina (Compuesto I) como el núcleo de hidroxi de seudomicina reordenado (Compuesto II) . Ambos Compuestos I y II muestran iones de M+H idénticos (m/z 981.3) en la espectroscopia de masa de ionización por electrorocío (ESIMS) correspondiente a una fórmula molecular de C37H6?ClN120?7. (Véase Tabla I posterior) Análisis detallado de 1H y TOCSY (espectroscopia de correlación total) los espectros de NMR habilitan la asignación de todos los protones para la hidrólisis de productos los cuales soportan las estructuras I y II. Los cambios químicos de 1ti NMR de los ß-protones (4.83 y 4.46 ppm) del residuo de serina de I fueron consistentes con aquellos encontrados en las seudomicinas A, B y C, indicando que el macrociclo de péptido estuvo intacto. Además, como se espera, el espectro de TOCSY no muestra el protón de amida típico como parte del sistema de rotatorio de la serina. De otra manera, en la II los ß-protones de serina sometidos a cambios por arriba del campo considerable (3.78 y 3.74 ppm) sugieren que estos protones no condujeron la funcionalidad de lactona. Esto y el hecho de que los ß-protones, además del protón, se correlacionan a un protón de amida a 8.04 ppm en el espectro de TOCSY indican que la lactona del macrociclo reordena un núcleo del péptido como se representa en II. Tabla I Datosa de XH NMR de I y II en H20+CD3CN aLos cambios químicos reportados son relativos a la señal del solvente (1.94 ppm). b Las asignaciones se pueden intercambiar.

Otros compuestos de seudomicina o siringomicina que tienen un grupo N-acilo se pueden desacilar usando los mismos procedimientos generales descritos anteriormente. Se hace constar que con relación a esta fecha el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención es el que resulta claro de la descripción de la invención.

Claims (12)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Un proceso para la desacilación de una cadena lateral de N-acilo de una seudomicina caracterizado porque comprende el paso de hacer reaccionar una seudomicina con una enzima de desacilación seleccionada del grupo que consiste de ECB desacilasa y polimixin acilasa para producir un núcleo de seudomicina . 2. El proceso de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el núcleo de seudomicina se representa por ya sea la estructura I ó II

II o una sal, hidrato o solvato de la misma farmacéuticamente aceptable.

3. El proceso de conformidad con al reivindicación 1, caracterizado porque la seudomicina se selecciona del grupo que consiste de seudomicina A, A' , B, B C, y CA

4. Un compuesto caracterizado porque tiene la siguiente estructura o una sal, hidrato o solvato del mismo farmacéuticamente aceptable, preparado por el proceso de las reivindicaciones 1, 2 ó 3.

5. Un compuesto caracterizado porque tiene la siguiente estructura o una sal, hidrato o solvato del mismo farmacéuticamente aceptable .

6. Un núcleo de seudomicina caracterizado porque se prepara haciendo reaccionar una seudomicina con una enzima de desacilación seleccionada del grupo que consiste de ECB desacilasa y polimixin acilasa.

7. El núcleo de seudomicina de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque la seudomicina se selecciona del grupo que consiste de seudomicina A, A' , B, B', C, y CA

8. Un proceso para la desacilación de una cadena lateral de N-acilo de una siringomicina, caracterizado porque comprende el paso de hacer reaccionar una siringomicina con una enzima de desacilación seleccionada del grupo que consiste de ECB desacilasa y polimixin acilasa para producir un núcleo de siringomicina.

9. El proceso de conformidad con al reivindicación 7, caracterizado porque el núcleo de siringomicina se representa por ya sea la estructura III ó IV. III IV o una sal, hidrato o solvato del mismo farmacéuticamente aceptable.

10. Un núcleo de siringomicina caracterizado porque se prepara haciendo reaccionar una siringomicina con una enzima de desacilación seleccionada del grupo que consiste de ECB desacilasa y polimixin acilasa.

11. Un compuesto caracterizado porque tiene la siguiente estructura o una sal, hidrato o solvato del mismo farmacéuticamente aceptable .

12. Un compuesto caracterizado porque tiene la siguiente estructura o una sal, hidrato o solvato del mismo farmacéuticamente aceptable.