MXPA01011336A - Uso de bacterias de acido lactico en la preparacion de leches fermentadas para el tratamiento de los niveles deprimidos de inmunidad. - Google Patents

Abstract

El uso de bacterias de acido lactico, por ejemplo Lactobacillus casei, en la preparacion de leches fermentadas para el tratamiento de los niveles de inmunidad temporalmente deprimidos en individuos sometidos a tension fisiologica, con un contenido de Lactobacillus casei mayor de 1 x 105 unidades formadoras de colonias por mililitro.

Description

c y \ USO DE BACTERIAS DE ACIDO LÁCTICO EN LA PREPARACIÓN DE LECHES FERMENTADAS PARA EL TRATAMIENTO DE LOS NIVELES DEPRIMIDOS DE INMUNIDAD Esta invención se refiere al uso de bacterias de ácido láctico para la preparación de leches fermentadas pretendidas para la prevención y el tratamiento de los niveles de actividad inmune temporalmente reducidos, y para normalizar los niveles de actividad inmune que estén deprimidos en comparación con lo que se puede considerar normal, especialmente en individuos sanos que estén sujetos a un ejercicio intenso, o en general a una gran tensión fisiológica, ocasionada directamente por el esfuerzo físico, o inducida por situaciones de tensión psicológica. En particular, se refiere al uso de Lactobacillus casei en la preparación de leche fermentada para aliviar la depresión fisiológica de los niveles de inmunidad en seres humanos. De una manera más específica, esta invención se refiere a un medio para mejorar las condiciones inmunes de individuos sanos cuando se someten a diferentes tipos de tensión fisiológica. La presente invención se ha desarrollado como el resultado de las investigaciones realizadas por los inventores para encontrar algún medio preventivo y/o terapéutico para asegurar una rápida recuperación de una * *£ act. idad inmune temporalmente reducida, inducida por tensión' física o psicológica. Esta invención se ha logrado al seguir la investigación de los efectos de las leches fermentadas con bacterias de ácido láctico, tales como Lactobacillus casei, 5 en individuos que se dedican a un ejercicio vigoroso, y especialmente en los atletas, y en general en individuos sometidos a condiciones de tensión fisiológica. Como es bien sabido, existe un interés creciente en la comunidad científica especialista en los efectos favorables producidos 10 por el ejercicio. No obstante, se ha observado que, bajo condiciones de ejercicio muy vigoroso, tal como en los • atletas, tanto durante los períodos de entrenamiento como durante los períodos de ejercicio competitivo, se presenta un efecto inverso al normalmente esperado en el sistema inmune 15 en la forma de una reducción en la actividad de dicho sistema inmune, y se han producido reportes que describen enfermedades infecciosas ligeras en los atletas como un resultado de la reducción en su nivel de inmunidad después de un ejercicio exhaustivo, medido por una disminución en el 20 número y actividad de las células conocidas como NK ("aniquiladoras naturales") después de un ejercicio intenso y prolongado. Como es bien sabido, bajo las condiciones de ejercicio intenso y prolongado, tales como, por ejemplo, en 25 los atletas y otros individuos que se dedican a hacer un Mlm ^áíii^^ É ^ÉI? ^ M esfuerzo muy grande, y en general los individuos sometidos a condiciones de tensión fisiológica, ha habido una tendencia a ayudar a los individuos a recuperarse a través de bebidas isotónicas y/o bebidas vitamínicas de diferentes clases. No obstante, los inventores han observado que no se han hecho intentos serios en la comunidad científica por lograr una rápida restauración de los niveles de inmunidad en los individuos que se dedican a este ejercicio intenso y prolongado, con el resultado de que, en estas personas, se presenta una situación en donde, aunque la restauración natural puede permitir a individuos recuperar la capacidad para dedicarse a hacer mayores esfuerzos después de un período de agotamiento, los niveles de actividad inmune permanecen bajos durante un período prolongado hasta que la recuperación natural los restablece lentamente. Es precisamente la existencia de estos períodos de baja respuesta inmune en estos individuos que generalmente están en un estado de salud satisfactorio, como puede ser el caso en los atletas, lo que los expone a contraer ciertas infecciones como resultado de su situación temporal de tener un bajo nivel de actividad inmune. Los inventores han realizado investigación y experimentos específicamente con el objeto de superar el inconveniente mencionado anteriormente, es decir, la actividad inmune temporalmente baja en individuos que se i »** ¿m * km ercicio vigoroso. En el transcurso de las * "wInivestigaciones realizadas por los inventores, han descubierto, de una manera sorprendente, que es posible lograr, simultáneamente, una reducción menos pronunciada en el nivel de actividad inmune, y una restauración más rápida de este nivel en los individuos en un estado de salud generalmente satisfactorio, tales como los atletas que se dedican a pruebas intensas de entrenamiento y/o deportivas, y en general, los individuos sometidos a condiciones de tensión fisiológica, a través de la administración de leches fermentadas que contengan Lactobacillus casei a ellos. Este efecto sorprendente se ha confirmado mediante las pruebas realizadas, y se explicará en el transcurso de esta descripción. La importancia de esta invención necesita señalarse debido a sus efectos de amplio rango y a su efectividad, y debido a que no está en línea con el uso conocido de las leches fermentadas, con el objetivo especial de incrementar los niveles de calcio en el cuerpo, la flora intestinal, y otros factores similares, mientras que hasta ahora su uso en personas con un estado de salud generalmente satisfactorio, e inclusive menos en el caso de los individuos que se dedican a un ejercicio intenso y prolongado, no se ha considerado de especial interés. Anteriormente se ha reportado que, en los pacientes expuestos a patógenos, la absorción de leche fermentada que contenga Lactobacillus casei reduce la severidad de las infecciones, en particular de las infecciones intestinales. Por ejemplo, Reinert y colaboradores (Anales Españoles de Pediatría, 1997) han demostrado que la duración de diarrea aguda en los niños se redujo mediante el consumo de leche fermentada con Lactobacill us casei . Sin embargo, no se reportó ningún efecto preventivo. En cualquier otra parte, se ha demostrado que la ingestión de productos de leche fermentada induce cambio en 10 la microflora intestinal, y podría ejercer una influencia sobre las funciones digestivas (Guerin-Danan y colaboradores, 1998) . De una manera sorprendente, ahora los inventores han descubierto que la ingestión de leche fermentada que 15 contenga cuando menos una bacteria de ácido láctico, tal como Lactobacillus casei , puede contribuir a una reducción en el nivel de depresión de la función inmune sistémica en individuos sanos bajo condiciones de tensión fisiológica, y también permite tener una restauración más rápida de los 20 niveles normales, alcanzando por consiguiente una acción preventiva, al limitar la reducción temporal del nivel inmune, y al acelerar la restauración de los niveles que existían antes de la situación de la tensión fisiológica. Esta tensión fisiológica puede ocurrir, por 25 ejemplo, después de una actividad física o intelectual . . ¿ftí t *!' intensa, durante el embarazo, como un resultado de tensión psicológica, etcétera. Por consiguiente, uno de los propósitos de esta invención es el uso de leches fermentadas oralmente 5 administradas para los propósitos de lograr un efecto significativo sobre la restauración de la actividad inmune; otro propósito de la invención es el uso de las leches fermentadas para la prevención y reducción de la función inmune sistémica en sujetos sanos en condición de tensión 10 fisiológica. Por consiguiente, se adaptará particularmente en los casos en donde haya una mayor reducción temporal en • estos niveles cuando el individuo se dedique a una actividad física intensa y prolongada. Las leches de preferencia se fermentan con 15 bacterias de ácido láctico pertenecientes a los géneros Lactobacillus , Lactococcus , Streptococcus y Bifidobacterium . Las bacterias de ácido láctico de preferencia se seleccionan a partir del grupo que comprende: Lactobacill us helvet icus 20 - Lactobacillus delbrueckii , subespecie bulgari - cus Lactobacillus casei Lactobacill us paracasei Lactobacillus zeae 25 - Lactobacillus acidophilus Lactococcus lactis Streptococcus thermophilus Bifidobacterium longum y/o Bifidobacterium breve * 5 De preferencia, la leche contiene cuando menos una cepa de Lactobacillus casei . En una modalidad preferida, esta cepa es la cepa depositada en la CNCM (Collection Nationale de Culture de Microorganismes, Institut Pasteur, 25 rué Docteur Roux) bajo el número 1-1518 el 30 de diciembre de 10 1994. De conformidad con la invención, la leche • fermentada también puede contener otras bacterias de ácido láctico, tales como las descritas en la solicitud de TCP Número WO 96/20607. 15 En una modalidad preferida, la cepa de Lactobacill us casei estará presente en el producto en una concentración mínima de 105 unidades formadoras de colonias/mililitro, más preferiblemente entre 106 y 109 unidades formadoras de colonias/mililitro. Los productos que • 20 proporcionan buenos resultados de acuerdo con la invención contendrán Lactobacillus casei en concentraciones mayores de 107 unidades formadoras de colonias/mililitro. Lactobacillus casei se puede utilizar para la preparación de leches fermentadas en una forma semisólida o 25 pastosa, similar al yogurt, o en una forma líquida, para el *m tratamiento de las condiciones temporales caracterizadas por un bajo nivel de actividad inmune. Los experimentos se realizaron en grupos de atletas que mostraron una reducción en el número de células aniquiladoras naturales después de un intenso esfuerzo.

INDIVIDUOS Y MÉTODOS Individuos Se obtuvo el acuerdo para tomar parte en el estudio 10 de un grupo de 99 personas de ambos sexos. Los individuos fueron atletas comprometidos que se dedicaban a una actividad física aeróbica cuando menos tres veces a la semana durante un período de más de 30 minutos, con una intensidad del 60 por ciento de su máximo V02 ó más. A todos los individuos se 15 les pidió abstenerse de tomar los ácidos ergogénicos que estaban utilizando durante un período mínimo de 2 meses antes de iniciar la prueba. Se excluyeron los individuos con hipersensibilidad o intolerancia conocida a los productos de la leche, así como los individuos con dietas especiales, 20 tales como dietas de reducción de peso o dietas vegetarianas. También se excluyeron los individuos que había experimentado episodios de asma inducido por ejercicio, y aquéllos que había recibido antibióticos u otro tratamiento médico durante un período hasta de un mes antes del día -35. 25 La Tabla 1 indica las características de los individuos comprometidos en el experimento. Tabla 1 Características de los Individuos Diseño experimental El experimento comprendió dos partes: En la primera parte, cada individuo se dedicó a una cantidad previamente establecida de e ercicio de cicloergómetro para alcanzar su máximo V02. Después de un período de calentamiento de 5 minutos con una energía generada de 50 vatios, se incrementó la energía por 30 vatios cada 3 minutos, hasta que se alcanzó el nivel del establecimiento del cansancio. Los valores de V02, ritmo cardíaco, pC0 , p02 de ventilación, y cociente de respiración, se midieron cada 30 segundos en el aire exhalado a través de toda la prueba. También se midió continuamente el valor EKG. También se midió la concentración de lactato en sangre y la temperatura de la membrana timpánica antes de la prueba y 5 minutos después de ella, con el objetivo de evaluar la temperatura en el sistema nervioso central. Se tomaron muestras de sangre venosa del lóbulo de la oreja para el análisis del lactato. El análisis se realizó utilizando un método de fotoenzima medida utilizando un fotómetro Hitachi/Boehringer Mannheim "^ 5 4020. La temperatura de la membrana timpánica se midió utilizando un explorador de temperatura infrarrojo (Ototemp 3000 SD Natick, MA) . Después de un reposo durante un período de entre 1 semana y 10 días, se realizó una segunda prueba de ejercicio en el cicloergómetro al 75 por ciento del máximo 10 V02 durante 60 minutos. Antes de la prueba de máximo esfuerzo, se obtuvieron historias de casos de los individuos • y de la salud de su familiares, junto con un análisis de sangre completo, incluyendo conteo sanguíneo, colesterol, HDL, LDL, glucosa, ácido úrico, urea, Got, GPT, y proteínas. 15 Los individuos asistieron a laboratorio después de un ligero desayuno (sin leche u otros productos de leche). Después de descansar durante unos 20 minutos, cada uno de los individuos se dedicó al ejercicio con una energía de 50 vatios durante 5 minutos, y subsecuentemente al 75 por ciento • 20 de V02 durante 60 minutos a 60 r.p.m. Durante la ventilación de prueba, se monitoreó el uso de 0 (V02) y la emisión de C02 (VC02) durante períodos de 30 minutos, 45 minutos, y 60 minutos, utilizando el equipo Jaeger Bos-Sprint (Erich Jaeger GmbH, Wurzburg, Alemania) calibrado antes de cada una 25 de las pruebas. El equipo consistió en un analizador de oxígeno paramagnético, y en equipo infrarrojo para el dióxido de carbono (C02) , y un neumotacógrafo tipo Fleisch. De la misma manera, se registró el ritmo cardíaco y el EKG continuamente a través de toda la prueba. Se extrajo sangre • 5 para el análisis de células aniquiladoras naturales y otros parámetros relacionados con el nivel inmune, de la vena anticubital derecha con el individuo acostado, antes de la prueba, y nuevamente 5 minutos y 2 horas después de la prueba. Se midió la concentración de lactatos en sangre y la 10 temperatura de la membrana timpánica antes de la prueba y 5 minutos después. Los investigadores creyeron que sería útil • medir la temperatura, debido a que se ha demostrado que la hipertermia puede inducir cambios inmunes que son similares a los cambios observados en relación con el ejercicio (B.K. 15 Pedersen y colaboradores, 1994, M.M. Hammami y colaboradores, 1998) . Segunda etapa de la investigación Se seleccionaron 25 individuos a partir de un grupo de 94 (5 individuos no desearon continuar) para la segunda • 20 etapa de la investigación. La selección se basó en el hecho de que los individuos mostraron una reducción significativa (más del 3 por ciento) en el número de células aniquiladoras naturales, en comparación con sus niveles básales en plasma dos horas después de la prueba. Durante la segunda etapa de 25 la investigación, los individuos se incluyeron en dos grupos ^É^^^tttítfM^MMiiÉíMi^i^iilÉlitt paralelos. El grupo 1 recibió 500 mililitros al día de leche oralmente administrada .fermentada con La ctobacillus casei durante un período de 1 mes, y el grupo 2 recibió 500 mililitros de leche oralmente administrada al día durante un • 5 período de 1 mes. La leche fermentada que contiene Lactobacillus casei se suministró a diferentes intervalos, y se mantuvo a una temperatura de 2°C a 6°C. Al final de cada uno de los períodos, todos los individuos se sometieron a una prueba de ejercicio de 60 minutos al 75 por ciento de su 10 máximo V02 en el ciclo del ergómetro a 60 r.p.m. Se obtuvieron muestras de sangre de la vena anticubital antes de • la prueba, y nuevamente en períodos de 5 minutos y 2 horas después de cada prueba, para una análisis de los parámetros inmunes . 15 Se obtuvo la historia dietética de cada individuo dos días antes de las pruebas (después de beber la leche fermentada con Lactobacillus casei , y leche), y se analizaron utilizando el programa de computación Professional Diet Balancer (Nutridata Software Co., Wappingers Falls, NY, EUA). 20 Este programa de computación tiene una base de datos de 1,600 artículos alimenticios con 23 valores de nutrientes para cada tipo de alimento. El programa compara el total de cada nutriente indicado por los individuos con la cantidad diaria recomendada de EUA (RDA) basándose en el peso, la edad, el 25 sexo, y la actividad física o el consumo de energía. Fue á** h*k*k*. *?..? ....^áÉ^-^»-^^^ útil medir el porcentaje de carbohidratos en su ingestión total de calorías. Esto es importante debido a que Nieman y colaboradores (1997) han demostrado que los carbohidratos afectan la redistribución de las células aniquiladoras 5 naturales. Leche fermentada que contiene Lactobacill us casei Se preparó leche fermentada con Lactobacill us casei utilizando cultivos de yogurt tradicionales ( L . bulgari cus y S . Thermophil us) en adición a Lactobacillus casei (cepa DN- 10 114001) . Se confirmó la presencia de un mínimo de 107 unidades formadoras de colonias por mililitro (c.f.u./ml) de • bacterias de yogurt, encontrándose un contenido de 3.2 x 108 unidades formadoras de colonias/mililitro de Lactobacillus casei . 15 La composición del nutriente fue: 3.7 gramos de proteínas, 3.3 gramos de grasas, y 5.2 gramos de carbohidratos x 100 gramos. Métodos Recolección de muestra y preparación de suero. • 20 Se extrajeron 20 mililitros de sangre venosa de cada atleta. Se recolectaron 10 mililitros en tubos heparinizados comerciales (Sarstedt, Alemania), y se dejaron coagular 10 mililitros durante 30 minutos a temperatura ambiente en tubos de 10 mililitros (Sarstedt, Alemania) . Los 25 tubos se centrifugaron (1,500 g) a la temperatura ambiente, y li^^i^^3ija ^^^| se removió el suero. Todas las muestras se probaron para determinar las inmunoglobulinas dentro de las siguientes 3 horas, y luego se almacenaron a -30 °C antes de la prueba de citocina . 5 Conteos de células sanguíneas En las gráficas adjuntas: La Figura 1 muestra los resultados con sangre entera, finiendo CD3-FITC/CD16+CD56-PE, y se analizó en un citómetro de flujo Epics XL-MCL. 10 La Figura 2 muestra la temperatura de la membrana timpánica medida mediante termografía infrarroja antes y después de la prueba de ejercicio. Las dos columnas más claras a la izquierda de la gráfica muestran las temperaturas con la administración de leche, antes y 5 minutos después, 15 respectivamente, y las dos gráficas más obscuras [sic] a la derecha muestran la situación correspondiente a Lactobacill us casei . La Figura 3 muestra la concentración de lactato en sangre antes y después de una prueba de ejercicio, después de 20 la ingestión de leche fermentada conteniendo Lactobacillus casei y leche, representando las columnas, respectivamente: antes, 3 minutos después, y 5 minutos después; correspondiendo las columnas más obscuras a la leche fermentada que contiene Lactobacillus casei , y las columnas 25 más claras a la leche.

La Figura 4 muestra un diagrama de los valores NKL promedio, correspondiendo la línea obscura a la leche fermentada con Lactobacillus casei , y la línea clara a la leche . La Figura 5 muestra, de una manera similar a la Figura 4, el diagrama de los valores NKA promedio. Para determinar los subconjuntos de linfocitos, se mezclaron 100 microlitros de sangre heparinizada con 10 microlitros de anticuerpos monoclonales seleccionados (mab) conjugados con isotiocianato de fluorosceina (FITC), ficoeritrina (PE), o picoeritrina-roja de Texas (ECD) en la siguientes combinaciones de teñido: mab anti-CD4 (PE) / mab anti-CD8 (FITC) / mab anti-C3 (ECD) de la Coulter Company (Coulter Corp. EUA), mab anti-CD19 (PE) / mab anti-HLADR (FITC) / mab anti-CD3 (ECD), mab anti-CD14 (PE) / mab anti- CD64 (FITC) de la Immunotech Company (Immunotech, Francia), y mab anti-CD16+CD56 (PE) / mab anti-CD3 (FITC) de la Becton Dickinson Company (Becton Dickinson, EUA) (Figura 1) . Después de 15 minutos de incubación en la obscuridad, las muestras se lisaron con una solución Immunoprep en la unidad Q-prep (Coulter Corp., EUA). El lisado se analizó inmediatamente utilizando un citómetro de flujo Coulter Epics XL-MCL. El número de células contadas fue de 10,000 por muestra. Los descubrimientos se expresaron como porcentajes de células que dan lugar a una fluorescencia específica en ^^*3U*t*fájL ^*? é áÉ^*^*^ m una región controlada de linfocitos, con la excepción de CD14/CD64, que se monitoreó en la región de monocitos. Actividad de células NK ("aniquiladoras naturales") Se aislaron células mononucleares a partir de la sangre periférica y de la sangre heparinizada, mediante centrifugación sobre un gradiente de densidad. Se diluyeron 8 mililitros de sangre entera a 1:1 con suero regulado con fosfato. Esto se colocó en la forma de capas sobre 5 mililitros de Lymphoprep (Nycomed, Noruega) , y se centrifugaron (600 g) durante 20 minutos a 20°C. La capa de células mononucleares se removió y se lavó dos veces con RPMI 1640 (GIBCO) complementado con el 10 por ciento de suero AB humano (GIBCO) . El granulo se reconstituyó con una concentración de 2 x 106 células/mililitro (células efectoras) . La actividad aniquiladora natural se evaluó utilizando la prueba de citotoxicidad EuTDA (Wallac, Finlandia) . Se agregaron 2 mililitros de K562 (ATCC-CCL 243) a 1 x 106 células/mililitro, y se cargaron con 5 microlitros de un ligando para alentar la fluorescencia (BATDA) a 20°C durante 15 minutos. Las células se lavaron 6 veces con suero regulado con fosfato, con el 10 por ciento de albúmina de suero bovino. Finalmente, el granulo se ajustó con RPMI 1640 hasta x 10 células/mililitro (células Se colocaron 100 microlitros de estas células en cada pozo de , EUA) conteniendo relación de diana: efectora de 40:1, 20:1, 10:1, y 5:1. La placa de microtitulación se incubó a 37 °C durante 2 horas en una • incubadora con el 5 por ciento de C02. Cuando se terminó la incubación, la placa se centrifugó durante 5 minutos a 500 g. Luego se transfirieron 20 microlitros del sobrenadante a una placa de fondo plano (placa de microtitulación DELFIA) ; se agregaron 200 microlitros de solución Eu a cada uno de los 10 pozos, y luego se incubaron a temperatura ambiente durante 15 minutos en un dispositivo Sacudidas. Finalmente se midió la • fluorescencia en un fluorómetro de resolución de tiempo DELFIA 1221 (Wallac) . Los controles incluyeron liberación espontánea (100 microlitros del medio RPMI 1640 agregados a 15 las células diana marcadas), y la liberación total (100 microlitros del medio RPMI 1640 complementado con el 10 por ciento de Tween, agregados a las células diana marcadas) . El porcentaje de lisis se calculó utilizando los conteos para cada proporción E:T: 20 (liberación desde las muestras - liberación espontánea) % de lisis = x 100 (liberación total - liberación espontánea) 25 m gm^¡ mt Los resultados se estandarizaron a unidades líticas (LU) , calculadas como el número de células efectoras requeridas para la lisis del 20 por ciento de las 5 x 103 células diana, y se tomaron como el número de unidades 5 líticas incluidas en un 1 x 107 células. El coeficiente interno de variación para la prueba fue del 3 por ciento. Inmunoglobulinas Las inmunoglobulinas (IgG, IgA y IgM) se determinaron cuantitativamente mediante nefelometría utilizando el equipo 10 BN II (Behring Nephelometer II). Las curvas de referencia se construyeron mediante calibración de múltiples puntos • basándose en el estándar de IFCC CRM-470. En el protocolo para el ensayo del suero, las muestras de suero se diluyeron y se midieron automáticamente; las diluciones utilizadas 15 fueron de 1:20 (IgA e IgM) , y de 1:400 (IgG). Los resultados se expresan en miligramos/decilitro. Citocinas Se hicieron pruebas para determinar IL-lbeta, sIL- 2R, e IL-6 mediante ensayo inmunométrico de enzima • 20 quimioluminiscente, utilizando un analizador automático IMMULITE (Diagnostic Products Corp. DPC, EUA) . Los límites de detección fueron: 5 picogramos/mililitro para IL-1B, 10 unidades/mililitro para sIL-2R, y 2 picogramos/mililitro para IL-6. IL-2 e INF-gamma se realizaron mediante ELISA 25 Immunotech (Immunotech, Francia) de acuerdo con las instrucciones del f^^a-icante. Los límites de detección fueron de 10 picograaos/mililitro para IL-2, y de 0.5 unidades/mililitro para tNF-gamma. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 5 Las pruebas de ejercicio realizadas para el tratamiento con leche y con leche fermentada mostraron el mismo nivel de incremento en la temperatura del tímpano, con respecto a los valores de la línea base en 5 minutos (Figura 2) . En ningún caso, la temperatura excedió de 37 °C. Se ha 10 demostrado que la temperatura rectal es 1°C más alta que la temperatura del tímpano. Fue demostrado por B.K. Pedersen y • colaboradores, 1994, que una temperatura nuclear de 39°C puede dar lugar a cambios en el sistema inmune, que son similares a los cambios experimentados en relación con el 15 ejercicio. Por consiguiente, no ninguna interferencia con el sistema inmune después del ejercicio podía haberse debido al incremento en la temperatura observado en la investigación realizada por los inventores. La concentración de lactato de la línea base en • 20 sangre, y el incremento a los 3 y 5 minutos después del ejercicio, no mostró una diferencia significativa entre los dos programas de tratamiento (Figura 3) . Células aniquiladoras naturales - no hubo diferencia alguna en la concentración de las células 25 aniquiladoras naturales en cualquiera de los puntos correspondientes a la línea base 5 minutos y 2 horas después del tratamiento entre la leche fermentada con Lactobacill us casei y la leche (Figura 2). Se observó una diferencia significativa después del ejercicio en la respuesta de la • concentración de células aniquiladoras naturales entre 5 minutos y 2 horas, tanto en el grupo que había tomado leche fermentada conteniendo Lactobacillus casei , como en el grupo que había tomado leche. La reducción en las células aniquiladoras naturales observada después de 2 horas fue 10 significativamente menor en el grupo que había tomado leche fermentada con Lactobacillus caseí (3.14 para la leche • fermentada con Lactobacillus casei , en comparación con 5.24 para la leche; p<0.0035) (Figura 4). En lo que se refiere a la actividad de las células 15 aniquiladoras naturales, se observó una tendencia hacia una mayor actividad en ambos grupos (leche fermentada con La ctobacillus casei , y leche) entre la línea base y 5 minutos. También se observó una reducción entre 5 minutos y 2 horas en el caso de la leche fermentada con Lactobacillus 20 casei y la leche, siendo la tendencia para la leche fermentada con Lactobacillus casei menor que para la leche (Figura 5) . La función inmune deprimida después de períodos de ejercicio pesado y de entrenamiento excesivo está 25 parcialmente relacionada con la mayor secreción de cortisona rM^ Étf-tti^ü^ y e^^^&j yi \ma etapa de proteína aguda mediada por IL-6 (J.A. Woods y colaboradores, 1999) . El descubrimiento de que la ingestión de leche fermentada con Lactobacillus casei puede modular la reducción en el nivel de células aniquiladoras naturales, puede ayudar parcialmente a contrarrestar la acción inmunosupresora de la cortisona en los atletas durante un intenso entrenamiento y en competencia. De acuerdo con los experimentos hechos para aseverar el efecto más eficaz del nuevo uso para Lactobacillus casei en la preparación de leches fermentadas, el contenido de Lactobacill us casei estará presente en una cantidad mayor de 1 x 107 unidades formadoras de colonias por mililitro . Todo lo que no afecte, altere, cambie, o enmiende la esencia del nuevo uso descrito, se puede variar para los propósitos de esta invención. É¿^É¡^

Claims (8)

REIVINDICACIONES

1. El uso de bacterias de ácido láctico en la preparación de leches fermentadas para la prevención y el tratamiento de los niveles inmunes temporalmente deprimidos en individuos sometidos a tensión fisiológica.

2. El uso de bacterias de ácido láctico de acuerdo con la reivindicación 1, en donde las leches fermentadas contienen cuando menos una bacteria seleccionada a partir de los géneros Lactobacillus , La ctococcus , Streptococcus y Bifidobacterium, siendo las bacterias de ácido láctico preferidas aquéllas seleccionadas a partir del grupo que comprende Lactobacillus helveticus Lactobacillus delbrueckii , subespecie bulgari -cus Lactobacillus casei Lactobacillus paracasei Lactobacillus zeae Lactobacillus acidophilus Lactococcus lactis Streptococcus thermophilus Bifidobacterium longum y/o Bifidobacterium breve .

3. El uso de una bacteria de ácido láctico de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 ó 2, en donde las leches fermentadas contienen cuando menos La ctobacill us casei .

4 . El uso de una bacteria de ácido láctico de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 3, en la preparación de leches fermentadas para el tratamiento preventivo, con el objeto de limitar la reducción en el nivel de inmunidad en individuos sometidos a tensión fisiológica.

5. El uso de bacterias de ácido láctico de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 4, en la preparación de leches fermentadas para el tratamiento preventivo y de remedio de los bajos niveles de células aniquiladoras naturales en sangre, en individuos sometidos a tensión fisiológica.

6. El uso de bacterias de ácido láctico de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 5, en la preparación de leches fermentadas para el tratamiento de niveles de inmunidad temporalmente deprimidos en individuos sometidos a un intenso esfuerzo físico.

7. Leche fermentada que contiene cuando menos una Lactobacillus casei , para el uso de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizada porque la Lactobacill us caseí está presente en una cantidad mayor de 1 x 105 unidades formadoras de colonias por mililitro.

8. Leche fermentada que contiene cuando menos una La ctobacillus casei , para utilizarse de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizada porque la Lactoba cillus casei está presente en una cantidad mayor de 1 x 107 unidades formadoras de colonias por mililitro.