MXPA01003072A - Enantiomero activo del agonista rar gama-especifico - Google Patents

Abstract

Se describe el (R)-enantiómero de la fórmula (I), que ha sido inesperadamente encontrado para poseer toda la actividad biológica del compuesto racémico descrito en la técnica anterior como un agonista RAR?-especifico.

Description

ENANTIOMERO ACTIVO DEL AGONISTA RAR GAMA-ESPECIFICO ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN 1. Campo de la Invención La presente invención se relaciona con la preparación del (+)- o (R) -enantiómero de un agonista RAR?-especí fico previamente descrito en la técnica anterior y el descubrimiento de toda la actividad retinoide de tal agonista reside en tal enantiómero. El (R) -enantiómero de la presente invención puede ser utilizado en una amplia variedad de condiciones dermatológicas, por ejemplo, en el acné, psoriasis, eczema y fotoenvej ecimiento de la piel, en el tratamiento de corneopatías en ofta ología, en el tratamiento de enfermedad-es degenerativas del tejido conectivo, por ejemplo artritis, y en el tratamiento de malignidad. 2. Descripción de la Técnica Anterior La Patente de los Estados Unidos 5,624,957 describe el compuesto racémico, ácido 3-fluoro-4 ( 2 ' (5" , 6" , 7" , 8"-tetrahidro-5" , 5" , 8" , 8" -tetrametil-2" -naftil ) -2 ' -hidroxi ) acetamidobenzoico (ver Ejemplo 1) como un retinoide RAR?-especí fico con la propiedad REF. NO. 128375 altamente útil de carecer de la toxicidad del hígado de retinoides no selectivos. El compuesto también se describe en B.P. Klaholz, et al . , Nature Structural Biology, 5(3), pp . 199-202 (1998), como un complejo con la proteína del receptor RAR?. Sin embargo, el compuesto indicado que une al receptor es el (S)-enantiómero, que está en la forma inactiva . Aunque la referencia de la patente descrita en lo anterior indica que los retinoides RAR?-especí fieos descritos existen en la forma de los enantiómeros individuales así como también mezclas racémicas, no existe descripción del (R) -enantiómero o el hecho de que, inesperadamente, toda la actividad retinoide del compuesto del Ejemplo 1 reside en su enantiómero.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona el compuesto de la fórmula IA R-enantiómero o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. El enanti?mero IA tienen actividad como retinoide y es útil de esta forma en el tratamiento de alteraciones de la piel tales como acné, enfermedad de Darier, psoriasis, ictiosis, eczema, dermatitis atópica y cánceres epiteliales. También es útil en el tratamiento de enfermedades artríticas y otros trastornos inmunológicos (por ejemplo, lupus eritematoso) , para estimular la cicatrización de heridas, para tratar el síndrome del ojo seco y en el tratamiento de los efectos del daño solar a la piel, es decir fotoenvejecimiento. También es útil en el tratamiento de diversos tumores malignos y lesiones de la piel premalignas, por ejemplo queratosos actínicos. También incluido en la invención es un proceso para preparar enanti?mero IA por medio de síntesis quiral o separación, y composiciones farmacéuticas que contienen el enanti?mero IA en combinación con un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable del mismo. En otro aspecto de la invención, se proporciona un método para tratar un mamífero hospedante para condiciones dermatológicas, reunaticas, antitumorales respiratorias u oftalmológicas conocidas que puedes ser afectadas por derivados de retinoides los cuales comprenden administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula IA o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En aún otro aspecto de la invención, se proporciona ?n método para la prevención del carcinoma celular escamoso espontáneo en pacientes de transplante humano omprometidos que comprende administrar sistemáticamente una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula IA. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Como se observó en lo anterior se describe el compuesto racémico de la fórmula I en la Patente de los Estados Unidos 5,624,957 junto con su método de preparación y usos terapéuticos. El compuesto I es un agonista RAR?-especí fico que tiene la ventaja de carecer de la toxicidad del hígado característica de retinoides no específicos. Los presentes inventores han descubierto, sorprendente e inesperadamente, que toda de la actividad retinoide del compuesto I reside en el (+)-o (R) -enantiómero IA, es decir, IA IB R-enantiómero S-enantlómero (activo) (inactivo) Los enantiómeros individuales del compuesto I se- pueden aislar sometiendo el aliléster del compuesto I (6, siguiente) a cromatografía quiral para aislar los alilésteres de los ácidos enantio éricos , seguido por desdoblamiento bajo condiciones templadas para preservar la pureza enantiomérica de los productos. La síntesis de 6 generalmente siguiendo la síntesis descrita en la Patente de los Estados Unidos 5,624,957: COO-alilo COO-alilo 6 El ácido 1 conocido (Patente de los Estados Unidos 5,624,957) puede ser reducido al aminoácido, 2, utilizando ya sea hidrogenación catalítica o un agente reductor químico, tal como cloruro estannoso. El ácido 2 se puede convertir a aminoéster 3 utilizando, por ejemplo, bromuro de alilo. El ácido 4 conocido es entonces convertido a su cloruro ácido y condensado con 3 para dar 5, el cual puede ser reducido utilizando borohidruro de sodio para dar 6. El intermediario 6 es luego sometido a cromatografía sobre una columna Chiralpak AD para dar 7a y 7b, el cual se desdobla bajo condiciones templadas (por ejemplo, catalizador de morfolina y paladio) para dar los enantiómeros (R) y (S) individuales.

COO-alito 7a 7b R-enantiómero S-enantiómero Se llevó a cabo análisis de pureza óptica por CLAP analítica quiral, seguido por la derivatización del ácido libre al metiléster correspondiente bajo condiciones sin racemizar. La determinación de la configuración absoluta se llevó a cabo por análisis de cristales de rayos X de 8, el éster (R) -Mosher de 7a: FaCi jPCHj COO-alilo 7a COO-alilo El activo (R) I puede ser sintetizado enantioselectiva ente por la siguiente vía, utilizando como un paso de llave, la reducción enantioselectiva de cetoéster 10 con un agente de reducción quiral conocido de borano (R)-Alpine: ?& COOEt ?o COO-alilo 10 12a + 3 7a (R) I Se convierte el etiléster conocido 9 (Patente de los Estados Unidos 5,624,957) a aliléster 10 utilizando hidrólisis de base seguido por alquilación de alilbromuro. 10 es entonces reducido enantioselectivamente a 11 utilizando borano (R)-Alpine. El 11 crudo (~94% ee) se hidroliza a 12 crudo (94% ee), luego se purifica 12 a >99% ee por vía una cristalización. La activación de 12 con difosgeno y condensación con aminoéster 3 da 7a, cuyo grupo éster es desdoblado para dar el producto final, (R) I (ee >99%). El compuesto IA puede ser convertido con bases a sales farmacéuticamente aceptables del mismo por métodos conocidos en la técnica. Los ejemplos de sales adecuadas son sales de amonio y de metal alcalino, especialmente de sodio, potasio y litio, y sales de metal alcalinotérreo, especialmente calcio y magnesio, así como también con sales con bases adecuadas tales como con alquilaminas inferiores, por ejemplo metilamina, etilamina o ciclohexilamina , o con alquilaminas inferiores " sustituidas tales como dietanolamina o trietanolamina y con piperidina o morfolina . Como se observó en lo anterior, el compuesto de la presente invención tiene actividad como retinoide y puede, por lo tanto, ser utilizado para el tratamiento de condiciones dermatológicas, reumáticas, antitumorales, respiratorias y oftalmológicas conocidas para ser afectadas por medio de derivados retinoides. Por ejemplo, el compuesto puede ser utilizado para el tratamiento de: condiciones dermatológicas unidas a un trastorno de queratinización que implica diferenciación y proliferación, por ejemplo en el tratamiento del acné vulgar, acné comedónico o polimórfico, acné nodulocístico, acné conglobata, acné senil y acnés secundarios tales como acné por energía solar, por farmacéuticos y ocupacionales ; para tratar otros tipos de trastornos de queratización tales como ictiosis, estados de ictiosiforme, enfermedad de Darier, queratoderma palmoplantar , estados de leucoplaquia y leucoplaquiforme, y liquenplano; para tratar condiciones dermatológicas unidas a un trastorno de queratinización con un componente inflamatorio y/o inmunoalérgico, por ejemplo todas las formas de psoriasis, si cutáneas, mucosas y ungueal, reumatismo psoriático, o alternativamente, atopía cutánea, tal como eczema, o atopía respiratoria; para tratar proliferaciones dermáticas o epidérmicas, si benignas o malignas, incluyendo aquellas de origen vital, tal como verrugas comunes, verrugas lisas y epidermodisplasia verruciformis ; para el tratamiento de otros trastornos dermatológicos tales como dermatosis vesicular y enfermedades de colágeno; para el tratamiento de ciertos trastornos oftalmológicos; en particular corneopatías ; para profilaxis o tratamiento del envejecimiento de la piel, ambas inducidas por luz ( fotoenvej ecimiento) y que ocurren con el paso del tiempo; para prevenir o tratar las estigmas de la atrofia epidérmica y/o dérmica inducidas por corticosteroides locales o sistémicos, o cualquier otra forma de atrofia cutánea; para el tratamiento de tumores malignos; para el tratamiento de lesiones de la piel premalignas tales como queratosis actínica; para enfermedades reumáticas, especialmente aquellas de una clase inflamatoria o degenerativa que ataca las articulaciones, músculos, tendones y otras partes del aparato motor, por ejemplo artritis reumática ; para promover la cicatrización; y para combatir trastornos de función sebácea, tales como seborrea de acné o seborrea simple. Los cánceres de la piel, especialmente carcinomas celulares escamosas, son las malignidades más frecuentes en pacientes inmunocomprometidos , por ejemplo recipientes de transplante de órganos. Las retinoides sistémicas tales como isotretinoina han sido estudiadas para la prevención de carcinomas celulares escamosas, espontáneas, pero de efectos secundarios adversos o uso a plazos largos tal como su utilidad de límite de toxicidad del hígado. El compuesto IA, sin embargo, carece de la toxicidad del hígado de retinoides no específicos, es especialmente útil para esta indicación. De esta forma la presente invención incluye el método para prevenir carcinomas celulares escamosas, espontáneas en pacientes de transplante humano inmunocompromet idos que comprenden administrar sistemáticamente una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula IA. Los compuestos de la presente invención pueden ser administrados oral, parenteral o tópicamente, dependiendo de tales consideraciones como la condición a ser tratada, necesidad para el tratamiento del sitio específico, cantidad de fármaco a ser administrado, y consideraciones similares. Son generalmente utilizadas como composiciones farmacéuticas con uno o más portadores o diluyentes farmacéuticos adecuados utilizados convencionalmente en la tecnología farmacéutica. En el tratamiento de condiciones dermatológicas, generalmente se preferirá administrar los compuestos tópicamente, aunque en ciertos casos se empleará tal tratamiento de formulación oral para acné o psoriasis severos. Para otras indicaciones, puede ser preferida la administración parenteral, oral o tópica. Las composiciones farmacéuticas pueden estar en forma sólida tal como cápsulas, tabletas, polvos, geles, bálsamos, ungüentos, etc., o en forma líquida tal como soluciones, suspensiones o emulsiones. Para la administración parenteral, el fármaco puede ser preparado en forma de dosis unitaria en ampollas o en recipientes de dosis múltiples y puede contener aditivos tales como agentes de suspensión, estabilización y dispersión. Las composiciones parenterales pueden estar en la forma fácil para usar o en forma de polvo para la reconstitución en el tiempo de suministro con un vehículo adecuado tal como agua estéril. Ejemplos ilustrativos de formulaciones farmacéuticas adecuadas se describen, por ejemplo, en U.K. 2,164,938A. El compuesto de la presente invención se puede administrar sólo o en mezcla con otros medicamentos, por ejemplo agentes para tratar la resequedad de la piel, para proporcionar protección contra foto-envejecimiento, para prevenir la infección, para reducir la irritación e inflamación, y similares. Las dosis y el régimen de dosis en los cuales se administran al compuesto de la presente invención, variará de acuerdo con el compuesto, forma de dosis, modo de administración, la condición que es tratada y los particulares del paciente que es tratado. Por consiguiente, concentraciones terapéuticas óptimas se determinarán mejor en el tiempo de administración por procedimientos de determinación de dosis convencionales. En general, sin embargo, los compuestos pueden ser administrados en cantidades de aproximadamente 0.05 mg a aproximadamente 5 mg por kg al día de peso corporal en una o más dosis. Isotretinoina (Accutane®) y etretinato (Tegison®) se utilizan clínicamente para tratar acné cístico recalcitrante severo y psoriasis recalcitrante severa, incluyendo la eritrodérmica y los tipos pustulosos generalizados, respectivamente. Su modo de uso es ilustrado ampliamente en la Physician's Desk Reference, 47th Edition (1993), publicada por Medical Economics Data. Los compuestos de la presente invención pueden ser administrados en una forma similar a la isotretinoina y el etretinato de acuerdo con estas guías. Para el tratamiento de otras indicaciones, tales como tumores, los compuestos de la presente invención pueden ser administrados a mamíferos, incluyendo humanos, en una forma similar a compuestos retinoides en la literatura que ha sido mostrada que es activa para tales indicaciones .

DESCRIPCIÓN DE LAS MODALIDADES ESPECIFICAS El ejemplo específico que sigue ilustra la síntesis del enantiómero de la presente invención. Definiciones para algunas de las abreviaturas utilizadas más abajo son como sigue: DMSO dimetiisulfóxido CDC13 cloroformo deuterado EtOH alcohol etílico DMF dimetilformamida ee exceso enantiomérico EtOAc acetato de etilo Et3N trietilamina IPA alcohol isopropílico DCC diciclohexilcarbodiimida Ph -fenilo THF tetrahidrofurano TMS trimetilsililo A. 2-propeniléster de ác±do 4-am no-3-fluorobenzoico , 3 Se agregó Pd/C al 10% (1.98 g) a un matraz de hidrogenación de 450 ml, y el matraz se limpió o lavó con N2. Se agregó una solución de ácido nitrobenzoico 1 (21.9 g, 118.3 mmoles) en 140 ml de etanol y ácido acético (1 ml) al matraz. Se condujo la hidrogenación a 1.05 kg/cm (15 psi) en una forma cuidadosamente controlada, en donde después de la presión de gotas de H2 a cero, la agitación del matraz se continuó por un par de minutos antes de re-presurizarse . Después de la incorporación de hidrógeno cesó, la presión se elevó a 2.81 kg/cm2 (40 psi), y se continuó la agitación por unos 30 minutos adicionales para asegurar la terminación de la reducción. El catalizador se filtró a través de Celite, y se eliminó el solvente in va cuo para producir ácido aminobenzoico 2 como un sólido blanquecino. Se disolvió el ácido crudo 2 en DMF (140.0 ml) , se trató con K2C03 (16.0 g, 115.8 mmoles) y bromuro de alilo (11.8 ml, 132.3 mmoles), y se agitó vigorosamente a temperatura ambiente por 24 horas. La mezcla de reacción cruda se trató" con HCl ÍN (120 ml ) cuidadosamente. Se diluyó entonces con agua (70 ml), y se extrajo con CH2C12 (400 ml ) . Se lavó la capa orgánica con agua (70 ml, 5X) y salmuera. Se secó con MgS04, se filtró y evaporó in va cuo para producir un aceite crudo. El aceite crudo se purificó con cromatografía instantánea (gel de sílice; EtOAc/hexanos al 10-20%) para producir anilina 3 como un sólido amarillo débil (20.4 g, rendimiento combinado). 3: P.f. 53.5-55.5°C, IR (KBr): 3418, 3337, 3215, 1708, 1639, 1609, 1582, 1522. RMN XH (CDC13, d = 7.28) : 7.73-7.68 ( , 2H, C-2H & C-6H) , 6.77 (app t, J = 8.6, 1H, C-5H) , 6.03 (m, 1H, OCH2CH) , 5.40 (dm, J = 16.4, 1H, = trans CH2) , 5.28 (dm, J = 10.4, 1H, = cis CH2) , 4.79 (dm, J = 5.6, 2H, OCH2) , 4.21 (s amplio, 2H, NH2) . EMNR: (ESI) m/z (M-H)" = 194.3. Análisis Calculado para C10H?0FNO2 : C, 61.53; H, 5.16; N, 7.18. Encontrado: C, 61.60; H, 5.18; N, 7.16.

B. 2-Propeniléster de ácido 3-fluoro-4 (2 ' (5" , 6" , 1" , 8" - tetrahidro-5" ,5" ,8" , 8ff-tetrametil-2f,-naftil) 2' -oxo) - acetamidobenzoico , 5 Se agregó Et3N (16.0 ml, 114.8 mmoles) durante cinco minutos a una solución de CH2CI2 enfriada (0°C) (100.0 ml) de ácido 4 (10.15 g, 39.00 mmoles) y S0C12 (8.0 ml, 109.7 mmoles) . Se eliminó -el baño de enfriamiento 10 minutos tarde, y se continuó la agitación a temperatura ambiente por 1 hora y 50 minutos adicionales. La mezcla de reacción se diluyó con CH2C12, y se lavó rápidamente con agua y se secó sobre MgS04. Se filtró y se eliminó el solvente in vacuo para producir un aceite viscoso café oscuro, el cual se somete a la etapa de acoplamiento sin ninguna purificación. Se agregó gota a gota Et3N (8.0 ml, 57.4 mmoles) durante unos pocos minutos a una solución de EtOAc (110.0 ml) del benzoato de alilo 3 (7.30 g, 37.6 mmoles) y el preparado anterior de cloruro ácido. Se agitó luego durante la noche. La mezcla se diluyó con EtOAc, se lavó con agua y salmuera. La capa orgánica se secó con MgS04, se filtró y se evaporó in va cuo . La cromatografía instantánea (el aceite se cargó directamente a gel de sílice; EtOAc/hexanos al 5-7%) produjo cetamida 5 como un aceite viscoso rojo-café que se solidificó eventualmente a un sólido denso. Pesó 11.38 g (un rendimiento combinado de 67%) . 5: IR (KBr) : 3352, 2959, 2922, 1719, 1705, 1670, 1618, 1599, 1528. RMN XH (CDC13, 5 = 7.28): 9.42 (s amplio, 1 H, NH), 8.63 (t app, J = 8.1, 1H, NHCCH) , 8.43 (d, J = 1.8, 1H, HCCCO), 8.18 (dd, J = 8.4, 1.8, 1H, HCCCO), 7.96 (d, J = 8/7, 1H, FCCH), 7.87 (dd, J = 11.2, 1.8, 1H, NCCHCH) , 7.47 (d, J = 8.4, 1H, CHCHCCO) , 6.05 (m, 1H, OCH2CH_) , 5.44 (dm, J = 17.2, 1 H, = trans CH2), 5.34 (dm, J = 10.4, 1H, cis CH2), 4.85 (dt, J = 5.7, 1.2, 2H, OCH2), 1.75 (s, 4H, CH2CH2), 1.37 (s, 6H, CH3/CH3), 1.34 (s, 6H, CH3/CH3). EMNR: (ESI) m/z (M-H)" = 436.4.

C. l(2-Propenil)éster de ácido 3-flnoro-4(2' (5",6",7",8"- •te rahidro-5" ,5" , 8" , 8"-tetoamet_.l-2"-naftil) 2' -hxdroxi) - acetamidobenzoico , 6 Se agregó NaBH (16.5 mg, 0.436 mmoles) en una porción de una solución de alcohol alílico (11.0 ml) de cetoamida 5 (450.0 mg, 1.029 mmoles). La mezcla de reacción se agitó vigorosamente por 10 minutos, luego se enfrió rápidamente con 2 gotas de HCl concentrado, y se dividió entre EtOAc (150 ml ) y solución de NaHC03 diluida (es decir, 5 ml de solución de NaHC03 saturada + 45 ml de agua) . La capa de agua se extrajo del fondo con EtOAc (50 ml) . La fase orgánica combinada se lavó con salmuera y se secó con MgS0 . Luego se filtro y evaporó. La cromatografía instantánea del material crudo (la muestra fue cargada como una malla de gel de sílice; EtOAc/hexanos al 20-25%) produjo alcohol 6 como un aceite incoloro que se solidificó lentamente a temperatura ambiente. Pesó 412 mg (rendimiento = 91.1%) . 6: IR (KBr) 3600-3150 (br), 3366, 2959, 1719, 1692, 1620, 1593, 1532. RMN XH (CDC13, d = 7.28) 8.75 (s amplio, 1H, NH) , 8.51 (t app, J = 8.2, 1H, FCCCH), 7.88 (d, J = 8.7, 1H, FCCH), 7.81 (dd, J = 11.4, 1.8, 1H, NCCHCH), 7.42 (d, J = 1.9, 1H, CCHCCO) , 7.37 (d, J 8.2, 1H, CHCHCCHOH), 7.25 (dd, J = 8.2, 1.9, 1H, CHCHCCHOH), 6.04 (m, 1H, 0CH2CH) , 5.42 (dm, J = 17.2, 1H, = trans CH2), 5.32 (dm, J = 11.7, 1H, O = cis CH2), 5.25 (d, J = 3.0, 1H, CHOH), 4.83 (dm, J = 5.7, 2H, OCH2), 3.05 (d, J = 3.0, 1H, OH), 1.70 (s, 4H, CH2CH2), 1.33 (s, 3H, CH3) , 1.30 (s, 3H, CH3) , 1.29 (s, 6H, CH3/CH3) . EMNR: (ESI) m/z (M-H)" = 438.3. 2-Propeniléster de ácido (R) (S) -3-fluoro- 4 (2' (5", 6" ,7" ,8"-te rahidro-5",5" , 8" , 8"-te rametil-2"- naftil) 2' -hidroxi) -acetamidobenzoico , 7a y 7b La resolución de alcohol 6 se efectuó en el sistema Waters HPLC con un sistema-control de serie 4000 y un detector de serie 490E de acuerdo con las condiciones descritas más abajo. El patrón de elución se monitoreó a cuatro longitudes de onda (210, 254, 280 y 300 nm) donde los perfiles de absorción similares se observaron. Columna: Chiralpak AD (5 cm x 50 cm) pre-equilibrada con hexanos/ I PA 60:40 por 0:5 horas. Muestra de la Carga: 3.0 g de alcohol 6 se agregó a 40 ml de hexanos/IPA 1:1. La mezcla se sonificó con calentamiento moderado (~40°C) hasta que se efectuó la disolución total. La solución se eliminó del baño de sonificación y se dejó enfriar a temperatura ambiente. Luego se cargó directamente en la columna a 10 ml/minutos. Elución: Se llevó a cabo la elución de la columna con una solución de hexanos/IPA 60:40 a 50 ml/minutos. Se llevó a cabo manualmente la recolección de la muestra en tres fracciones: el primer enantiómero (7a) sale entre 15-25 minutos; la fracción intermedia se descarga, y la última fracción fue el segundo enantiómero (7b) que se eluyó entre -40-65 minutos. La eliminación del solvente in va cuo produjo un aceite viscoso, en ambos casos. Análisis de Pureza Óptica: Ambas fracciones se determinaron para ser ópticamente puras cuando se analizaron de acuerdo con las condiciones siguientes: Instrumento: Cromatografía líquida HP 1090 con DAD Columna: Chiracel AD, 0.46 cm x 25 cm Fase Móvil: 80/20 (hexanos/IPA) Velocidad de flujo: 1.5 ml/minutos Detección: Absorción de UV @ 210 nm Se preparó la muestra en hexanos/IPA 1:1 Tiempo de elución: alcohol 7a (2.86 minutos) y alcohol 7b (10.92 minutos E. 2-Propenilés er de ácido (R) 3-fluoro-4(2 (5" , 6" , 1" , 8"- tetrahidro-5",5" , 8" , 8"-tetrametil-2"-naftil) 2f - ( (R) -a- etoxi-a-trifluorometilfenilacetoxi) ) acet.app.dobenzoico, 8 Se agregó DCC (115.0 mg, 0.557 mmoles) en una porción a una solución de CH2C12 (3.0 ml ) de ácido (R)- Mosher (127.0 mg, 0.542 mmoles), alcohol 7a (197.0 mg, 0.449 mmoles) y DMAP (5.2 mg, 0.043 mmoles). La reacción se agitó por un total de 4 horas y se filtró a través de un obturador de algodón para eliminar el subproducto de urea. El solvente se eliminó in va cuo y el aceite resultante se sometió a cromatografía instantánea (gel de sílice; EtOAc/hexanos 10-15%) para producir éster de Mosher 8 como una espuma blanca (278 mg, 94%) . Los cristales de calidad de rayos X se desarrollaron en EtOH (~2 ml) con unas pocas gotas de agua, a temperatura ambiente. La estructura absoluta de la posición bencílica de 7A se determinó para ser (R) .

B". Ácido (R) 3-fluoro-4(2' (5" , 6" , 7" , 8"-tetrahidro- 5", 5", 8 " , 8"-tetrametil-2"-na til) 2' -hidroxi) - acetamidobenzoico , (R) -IA Se agregó Pd(Ph3P) (216.0 mg, 0.187 mmoles) en una porción a una solución de THF (50.0 ml) de aliléster 7a (3.00 g, 6.826 mmoles) y morfolina (5.0 ml , 57.34 mmoles) . La solución se agitó por 40 minutos, se diluyó con EtOAc (150 ml ) , y se lavó con HCl ÍN (40 ml, 2X) y salmuera. La capa orgánica se secó con MgS04, se filtró y evaporó in va cuo para producir un sólido. La muestra se purificó con cromatografía instantánea (columna corta; se cargó la muestra como una malla de gel de sílice; 75 hexanos: 24 EtOAc: 0.5 de HC02H al 90%: 0.5 de MeOH) para producir ácido (R) I como un sólido blanco pesando 2.50 g (91.6%). Recristalización: aproximadamente 8 ml de EtOAc se agregó al sólido, y la mezcla se calentó hasta que la disolución total fue efectuada. Con adición de hexanos (65 ml ) a la solución, se inició inmediatamente la formación de cristales blancos. Media hora más tarde, el sólido se filtró y se lavó con EtOAc/hexanos al 20%. La exposición de la muestra a alto vacío produjo 1.824 g de ácido.

(R)I: P.f. 193.0-195.5°C Análisis Calculado para C23H26FN04: C, 69.16; H, 6.56; N, 3.51. Encontrado: C, 69.07; H, 6.57; N, 3.31.

(S)I: P.f. 194.5-197°C Análisis Calculado para C23H26FN04: C, 69.16; H, 6.56; N, 3.51. Encontrado: C, 69.01; H, 6.51; N, 3.28.

Rotación Especifica [MeOH, 25o] Longitud de onda Aliléster 7a AlHéster 7b Ácido(R)IA Ácido(3)IB Análisis de pureza óptica de los metilésteres : Se disolvió ácido IA (31.4 mg, 0.0786 mmoles) en 3.0 ml de una mezcla de C6H6/ eOH (7:2), y se trató con TMS-diazometano (200 µl de 2.0 M en hexanos, 0.40 mmoles) . Después se agitó la mezcla de reacción por 11 minutos, el exceso de reactivo se enfrió rápidamente con 2 gotas de ácido acético. La mayor parte del componente volátil se eliminó in va cuo, y el material crudo se sometió directamente a cromatografía instantánea (gel de sílice; EtOAc/hexanos al 15%) para producir el metiléster de IA como un aceite incoloro. El análisis de CLAP del éster en una columna AD indicó que fue ópticamente pura. (Tiempo de elución: (R) -met iléster = 3.00 minutos; ( S ) -metiléster = 11.17 minutos).

G. 2-Propeniléater de ácido 2-oxo- (5' , 6' , 7' ,8' -tetrahidro- 5' ,5' , 8' ,8'-tetrametil-n& -2' -il) acético, 10 Se agregó una solución de KOH (150.0 ml de 1.76 M, 264.0 mmoles) a una solución de EtOH (350 ml ) de etilcetoéster 9 (50.3 g, 174.4 mmoles). Después de un mezclado minucioso, la solución se dejó reposar a temperatura ambiente por 30 minutos. Se diluyó con agua (500 ml) y se acidificó con HCl al 5% a pH 3-4. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (1.0 1 y 250 ml) . La fase orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó con MgS0 , se filtró y evaporó in va cuo . El aceite crudo resultante se expuso a alto vacío durante la noche para producir ácido 4 como un sólido amarillo. Se agregaron K2C03 (24.0 g, 173.6 mmoles) y bromuro de alilo (18.0 ml , 208.0 mmoles) a una solución de DMF (200 ml ) del ácido crudo. La alilación se completó con 150 minutos. La mezcla de reacción se trató lentamente con HCl 1 N (170 ml ) , con agitación vigorosa. La mezcla resultante se diluyó con agua (100 ml), y se extrajo con CH2C12 (500 y 100 ml) . La fase orgánica combinada se lavó con agua (100 ml , 5X), y salmuera, se secó con MgS04, se filtró y evaporó in vacuo. El aceite crudo se purificó con cromatografía instantánea (gel de sílice; EtOAc/Hexanos al 10%) para producir éster 10 como un sólido denso (50.0 g, 95% de rendimiento combinado) . 10: IR (KBr) : 2963, 2930, 2869, 1736, 1682, 1600. RMN *H (CDC13, d = 7.28): 8.00 (d, J = 1.9, 1H, C-1H) , 7.73 (dd, J = 8.3, 1.9, 1H, C-3H) , 7.45 (d, J = 8.3, 1H, C-4H) , 6.05 (m, 1H, CH=CH2), 5.47 (dm, J = 17.2, 1H, = trans CH2). 5.37 (dm, J = 10.5, 1H, = cis CH2), 4.89 (dm, J = 5.9, 1H, OCH2) , 1.73 (s app, 4H, CH2CH2) , 1.324 (s, 6H, CH3/CH3), 1.320 (s, 6H, CH3/CH3). EMNR (ESI) m/z (M-H)" = 259.4. Análisis Calculado para C?9H2403: C, 75.97; H, 8.05. Encontrado: C, 15 . 92 ; H, 8.21.

H. 1 (2-Propenil) éstßr de ácido (R) -2-hidroxi- (5 ' , 6' , 7 ' , 8' - tetrahidro-5, ,5' ,8' , 8' -t trametil-naft-2' -il) acético, 11 Se trituró cetoéster 10 (33.60 g, 111.85 mmoles) con un mortero y una mano de moler de mortero y se transfirió en un equipo de matraz de fondo redondo de 1 1 con un agitador magnético. El matraz luego se lavó con nitrógeno. Se transfirió Borano de (R) -Alpine (57.0 ml, 202.7 mmoles; líquido puro al 97%) al matraz de reacción por medio de una jeringa. La mezcla se agitó vigorosamente a temperatura ambiente por un total de 64 horas. Para enfriar rápidamente el exceso de Borano de Alpine, la mezcla se enfrió a 15°C y se trató con acetaldehído (16.8 ml, 300.5 mmoles). Unos pocos minutos tarde, el baño de enfriamiento se eliminó y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente por 45 minutos. La mezcla de reacción se lavó entonces con N2 mientras que se calentó con un baño de agua de 45°C que se dejó enfriar a la temperatura ambiente durante las siguientes 3.75 horas. Se agregó éter (200 ml) a la mezcla de reacción. La solución resultante se enfrió a ~10°C y se trató con etanolamina (14.5 ml, 240.2 mmoles) gota a gota durante unos pocos minutos. El baño de enfriamiento se eliminó y la mezcla se agitó a temperatura ambiente por unos 30 minutos adicionales. La mezcla se filtró, y el precipitado blanco se lavó con hexanos (140 ml ) . El filtrado se diluyó con EtOAc (200 ml ) y se lavó con solución de HCl diluido (preparado de 200 ml de agua y 5 ml de HCl al 5%). La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó con MgS0 se filtró y evaporó in va cuo para producir un aceite semi-viscoso . El material crudo se sometió directamente a cromatografía instantánea (gel de sílice; EtoOAc/Hexanos al 7.5-20%) para producir hidroxiéster 11 impuro (33.8 g) como un aceite incoloro.

I. Acido (R)-2-hidroxi-(5' ,6' , T , 8' -tetrahidro-5' ,5' , 8' , 8' - tetrametil-na t-2' -il) acético, 12 Se agregó morfolina (42.0 ml, 481.6 mmoles), seguido por Pd(Ph3P)4 (1.00 g, 0.865 mmoles) a una solución de THF (420 ml ) de 33.8 g de hidroxiéster 11 impuro. El matraz se lavó con N2 por unos pocos minutos, y la mezcla de reacción se agitó por unos 50 minutos adicionales. Se diluyó luego con EtOAc (700 ml) y se lavó con solución de HCl 1 N (230 ml, 2X) , y salmuera. La capa orgánica se secó con MgS04, se filtró y evaporó in va cuo para producir un aceite que contiene precipitado amarillo. El material crudo se sometió directamente a cromatografía instantánea en gel de sílice. La columna fue primero lavada con EtOAc/hexanos al 25%, luego se eluyó primero con hexanos/EtOAc/MeOH/ácido fórmico al 90% 75:25:0.5:0.5 seguido por EtOAc/hexanos/MeOH/ácido fórmico al 90% 75:25:0.5:0.5. Se recolectaron dos fracciones del material deseado: una fracción ligeramente impura 12 como una espuma blanca (2.46 g), y un hidroxiácido puro 12 como un sólido denso blanquecino (19.5 g; un rendimiento combinado de dos etapas de >67%) .

Análisis de pureza óptica " de ácido 12 con CLAP: Se convirtió ácido 12 a su metiléster de acuerdo con el procedimiento descrito por IA, con la excepción de que se emplee EtOAc/hexanos al 10% en la purificación por cromatografía instantánea. El análisis del aceite incoloro resultante de acuerdo con las condiciones observadas más abajo dio ~94% ee.

Análisis de CLAP Quiral Instrumento: Cromatografía líquida HP 1090 con DAD Columna: Chiracel OD, 0.46 cm x 25 cm Fase Móvil: hexanos/IPA 95:5 Velocidad de flujo: 1.0 ml/minutos Detección: Absorción de UV @ 210 nm Se preparó la muestra en hexanos/IPA 1:1 Tiempo de elución: 6.92 minutos (S-hidroximetiléster ) ; 8.73 minutos (R-hidroximetiléster ) Mejoramiento de pureza óptica de hidroxiácido 12 por medio de recristalización: Se mezclaron y trituraron varios lotes de hidroxiácido 12 con un ee en el intervalo de 93-94%, y un peso total de 57.0 g con un mortero y una mano de moler de mortero. El material se dividió en dos lotes iguales, y cada uno se disolvió en 140 ml de EtOAc a temperatura ambiente, se trató con 280 ml de hexanos, y luego se almacenó en un refrigerador por 21 horas. El precipitado se filtró y se lavó con 100 ml de EtOAc/hexanos al 10% y se secó con aire. Los dos grupos produjeron un total de 23.3 g de sólido blando blanco. El análisis de CLAP quiral de su derivado metiléster indicó un ee >99.5%. Un segundo cultivo dio 7.3 g; el análisis de CLAP quiral indicó un ee >99.5%), y un tercer cultivo dio 8.3 g con un ee de 99.4%. 12: P.f. 145.0-147.5°C. IR (KBr): 3433, 3389, 2959, 2922, 2857, 1739, 1728. RMN XH (CDC13, d = 7.28): 7.38 (d, J = 1.9, 1H, C-l H) , 7.33 (d, J = 8.2, 1H, C- 4H) , 7.20 (dd, J = 8.2, 1.9, 1H, C-3H) , 5.23 (s, 1H, CHOH) , 1.70 (s app, 4H, CH2CH2) , 1.30 (s, 3H, CH3) , 1.29 (s, 3H, CH3) , 1.28 (s, 6H, CH3/CH3) . EMNR (ESI) m/z (M-H)" = 261.4.

Análisis Calculado para C16H2203: C, 73.25; H, 8.45. Encontrado: C, 73.47; H, 8.34. [a] 3D = -100.85° (c, 1.016, MeOH) .

J. Ácido 1 (2-propenil) éster de ácido (R) -3-fluoro- (2' (5" , 6",7" , 8"-tetrahidro-5" ,5" ,8" , 8"-tetramatil-2"- naftil) ' -hidroxi) -ace amidobenzoico, 7a Se agregó en gotas" una solución de THF (50.0 ml ) de cloroformiato de triclorometilo (12.0 ml, 99.5 mmoles) durante 4 minutos a una solución de THF (200.0 ml ) de hidroxiácido 12 (26.2 g, 99.9 mmoles). La solución se calentó con un baño de aceite (63-65°C) por 5 horas y 10 minutos. El baño de aceite se reemplazó con un baño de agua de 35°C, y la mezcla de reacción se lavó con N2 por 1.5 horas. Se eliminó la mayor parte de los restos del componente volátil in vacuo, y el aceite crudo resultante se expuso a alto vacío por 1 hora con lavado de N2 intermitente. El crudo se diluyó con CH2C12 y se evaporó. El aceite resultante se expuso a alta vacío por 45 minutos con lavado de N2 intermitente para dar 12a. Se agregó anilina 3 (17.7 g, 90.7 mmoles) a una solución de CH2C12 (195.0 ml ) de dioxolandiona crudo (12a) durante unos pocos minutos. La mezcla de reacción se agitó por un total de 16 horas. Se diluyó con CH2C12 (450 ml ) y se lavó con agua (220 ml ) . La capa de CH2C12 se secó con MgS04, se filtró y evaporó in va cuo . El material crudo se purificó entonces con cromatografía instantánea repetida (gel de sílice; elución de CH2C12 para producir una mezcla de anilina 12 y alcohol 7a, seguido por elución de EtOAc al 20% para producir alcohol limpio 7a) . El material de la elución de CH2C12 se volvió a someter a la misma condición para producir un material acoplado más limpio. Se obtuvo una espuma blanca (33.7 g, rendimiento al 77%) . ee >99.5%. 7a: IR (KBr): 3442 (br), 3374, 2961, 2928, 2861, 1724, 1699, 1620, 1594, 1527. RMN 1H (CDC13, d = 7.28): 8.77 (d amplio, J = 2.8, 1H, NH), 8.51 (t app, J = 8.1, FCCCH), 7.87 (d, J 9.2, 1H, FCCH), 7.80 (dd, J = 11.4, 1.8, 1H, CHCHC02), 7.42 (d, J = 1.9, 1H, CCHCCOH), 7.36 (d, J = 8.2, CCHCHCCOH), 7.25 (dd, J = 8.2, 1.9, CCHCHCCOH), 6.02 (m, 1H, 0CH2CH), 5.42 (dm, J = 17.2, 1H, = trans CH2) ,' 5.32 (dm, J = 10.4, 1H, = cis CH2) , 5.24 (d, J = 2.5, 1H, CHOH) , 4.83 (dm, J = 5.7, 2H, OCH2) , 3.11 (d, J = 2.5, 1H, CHOH) , 1.70 (s, 4H, CH2CH2) , 1.33 (s, 3H, CH3) , 1.30 (s, 3H, CH3) , 1.29 (s, 6H, CH3/CH3) . EMNR (ESI) m/z (M-H)" = 438.5.

Análisis Calculado para C26H30FNO4: C, 71.05; H, 6.88; N, 3.19. Encontrado: C, 70.79; H, 6.87; N, 3.14. [a]u25 = +2.50° (c, 1.898, MeOH) K. Acido (R) -3- luoro-4(2' (5" , 6" , 7" , 8"-tetrahidro- 5", 5" ,8" , 8"-tetra etil-2"-naf il) 2' -hidroxi) - acetamidobenzoico , (R) IA Se agregó Pd(Ph3P) (0.55 g, 0.476 mmoles) a una solución de THF (190.0 ml ) de benzoato de alilo 7a (20.55 g, 46.76 mmoles) y morfolina (29.0 ml, 332.5 mmoles) . La mezcla de reacción se agitó por 20 minutos. Se diluyó con EtOAc (300.0 ml ) y se lavó con HCl ÍN (170.0 ml, 2X) y salmuera, y se secó con MgS04. La mezcla se filtró y evaporó in vacuo. La purificación con cromatografía instantánea (la muestra se cargó como una malla de gel de sílice; hexanos/EtOAc/MeOH/ácido fórmico al 90% 75:25:0.5:0.5 -> EtOAc/hexanos/MeOH/ácido fórmico al 90% 60:40:0.5:0.5) produjo ácido (R) IA como un sólido blanquecino. El ácido se disolvió en EtOAc (58 ml) con calentamiento; luego se agregó hexanos calientes (470 ml) durante un minuto. La solución se enfrió y el precipitado se filtró y lavó con 100 ml de EtOAc/hexanos al 20%. El ácido (R) IA se recuperó como un sólido brillante blanco (16.4 g, rendimiento del 87.8%) . (R)IA: P.f. = 194.5-199.0°C. IR (KBr) 3565, 3421, 3396, 3068, 2957, 2924, 2904, 2856, 1721, 1685, 1676, 1618, 1592, 1526. RMN 1Ü (DMSO, d = 2.51) 13.12 (s, C02H) , 9.79 (d, J = 1.5, NH) , 8.10 (t app, J = 8.3, NHCCH) , 7.78-7.72 (m, 2H, FCCHCCH) , 7.46 (d, J = 1.5, CCHC) , 7.30 (d, J = 8.1, 1H, CHCHCCOH), 7.21 (dd, J = 8.1, 1.5, 1H, CHCHCCOH) , 6.58 (d, J = 4.5, 1H, OH), 5.16 (d, J = 4.5, CHOH), 1.63 (s, 4H, CH2CH2), 1.25 (s, 3H), CH3) , 1.24 (s, 3H, CH3), 1.22 (s, 6H, CH3/CH3). EMNR (ESI) m/z (M-H)~ = 398.5.

Análisis Calculado para C23H26FN04: C, 69.19; H, 6.56; N, 3.51. Encontrado: C, 69.23; H, 6.37; N, 3.44.

[ ]D25 = +1.13 (c, 2.113, MeOH). Análisis de CLAP quiral del derivado metiléster: ee >99.5%.

Biología El ensayo de transactivación mide la capacidad de un retinoide para activar un gen reportero en presencia de uno de los subtipos receptores de ácido retinoico (a, ß, o ?) . Los detalles del ensayo de transactivación con base en el receptor se describen en la literatura, por ejemplo ver Nature 1988, 332, 850-853. En el ensayo de transactivación retinoide, las células HeLa se co-transfectaron con ADN que codifica a, ß, o ? de RAR, y una respuesta de RAR del gen reportero CAT (cloroanfenicolacetiltransferasa) . La eficacia retinoide se midió por la concentración del producto del gen CAT inducido como se determinó por el ensayo ELISA. La dosis en la cual el nivel de CAT es 1/2 del nivel máximo es terminado en el EC50. El valor de EC50 medio para cada uno de los receptores se calcula utilizando un programa adaptado inducido generado por computadora. La siguiente tabla reporta los valores de EC50 para ambos enantiómeros (en nM) : ED50 de Transactivación (% máx.) Toda la actividad reside en el enantiómero R Ningún receptor de retinoides selectivos ha sido mostrado para prevenir la conversión de papilomas a tumores malignos en el sistema de dos etapas de carcinogenesis de la piel de ratón, donde DMBA (7,12-dimetilbenzantraceno) se utiliza como el iniciador y acetato de 12-tetradecanoil-forbol-13 (TPA) se utiliza como el promotor. El modelo y los resultados se describen en, por ejemplo, L.C. Chen. et al . ; Cáncer Letters, 78, pp. 63-7 (1994); D.R. Shalinsky, et al . ; Proc. Ann. Meet. Am. Assoc. Cáncer Res., 35, p. A-831 (1994); y L.C. Chen, et al . ; Carcinogenesis, 15, pp. 2383-6 (1994). También han sido mostrados para ser de beneficio en pacientes de transplante de órganos humanos, quiénes están en riesgo acrecentado de desarrollar tumores malignos en la piel debido a la terapia inmunosupresora requerida. Estudios clínicos se describen en S. Euvrard, et al . ; BioDrugs, 8, pp. 176-84 (1997); J.N.B. Bavinck, et al . ; J. Clin. Oncol., 13, pp. 1933-8 (1995); y G.E. Gibson, et al . ; J. Eur. Acad. Dermatol. Venereol . , 10, pp. 42-7 (1998) . La presente invención ha descubierto ahora que el enantiómero IA activo, posee actividad superior en este modelo. El modelo utilizado fue esencialmente el mismo como se describió en las referencias anteriores. El compuesto IA y ácido 13-cis-retinoico (control) se dieron en diversos grupos de ratones por inyección intraperitoneal al inicio de la fase de promoción de TPA, y el número y tamaño de papilomas se monitoreó por 10 semanas. El compuesto IA en dosis de 15 mg/kg o mayor significativamente reduce tanto el número como el tamaño de papilomas, mientras el ácido 13-cis-retinoico en 50 mg/kg fue inactivo bajo estas condiciones. Los resultados del estudio se resumen en la tabla siguiente: * diferencia significativa según la estadística (p<0.05) vs . vehículo o sin tratar.

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención .

Claims (8)

3 1 RE VI DICACIONE S Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones:

1. El compuesto de la fórmula IA R-enantiómero o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo

2. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 y un portador o diluyente farmacéuticamente efectivo.

3. Uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 para la manufactura de un medicamento para tratar trastornos dermatológicos en un mamífero.

4. Uso de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el trastorno dermatológico es acné .

5. Uso método de conformidad con la rei indicación 3, caracterizado porque el trastorno dermatológico es psoriasis.

6. Uso de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el trastorno dermatológico es una lesión premaligna.

7. Uso de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el trastorno dermatológico es una queratosa actínica.

8. Uso del compuesto de conformidad con la reivindicación 1 para la manufactura de un medicamento para prevenir el carcinoma celular escamoso espontáneo en pacientes de transplante humano inmunocomprometidos . ENANTIOMERO ACTIVO DEL AGONISTA RAR GAMA-ESPECÍFICO RESUMEN DE LA INVENCIÓN Se describe el (R) -enantiómero de la fórmula (I), que ha sido inesperadamente encontrado para poseer toda la actividad biológica del compuesto racémico descrito en la técnica anterior como un agonista RAR?-específico .