MX2014012803A - Peptidos agonistas de receptor activado por proteasa tipo 4 (par4). - Google Patents

Abstract

La presente invención proporciona péptidos agonistas de PAR4. Estos péptidos son útiles para desarrollar robustos ensayos del receptor PAR4.

Description

PEPTIDOS AGONISTAS DE RECEPTOR ACTIVADO POR PROTEASA TIPO 4 Campo de la Invención La presente invención proporciona novedosos péptidos que se unen al receptor PAR4 y tienen actividad agonista o agonista Los péptidos se pueden usar para desarrollar robustos ensayos para receptores Antecedentes de la Invención Las enfermedades tromboembólicas siguen siendo la principal causa de muerte en los países desarrollados a pesar de la disponibilidad de anticoagulantes tales como warfarina heparinas de bajo peso molecular por sus siglas en pentasacáridos sintéticos y agentes tales como aspirina y clopidogrel Las terapias actuales tienen limitaciones incluyendo riesgo incrementado de sangrado así como eficacia parcial relación a la reducción del riesgo cardiovascular en el intervalo de 20 a De esta el descubrimiento y desarrollo de antitrombóticos orales o parenterales seguros y eficaces para la prevención y tratamiento de una amplia variedad de trastornos tromboembólicos sigue siendo un objetivo La es el activador conocido más potente de agregación y desgranulación La activación de las plaquetas está implicada causalmente en oclusiones vasculares aterotrombóticas La trombina activa plaquetas al cortar receptores acoplados a proteína G llamados receptores activados por proteasa por sus siglas en Los PARs proporcionan su propio ligando crítico presente en el dominio extracelular que no está enmascarado por corte con la subsecuente unión intramolecular al receptor para inducir señalización de ligando Los péptidos sintéticos que imitan la secuencia del recién formado extremo después de la activación proteolítica pueden inducir señalización independientemente del corte del Las plaquetas son un participante clave en los eventos aterotrombóticos Las plaquetas humanas expresan al menos dos receptores de denominados comúnmente PARI y PAR4 Los inhibidores de PARI han sido investigados y varios incluyendo vorapaxar y atopaxar han avanzado a pruebas clínicas de etapas en la prueba fase III TRACER en pacientes de vorapaxar no redujo significativamente eventos pero incrementó significativamente el riesgo de hemorragia mayor et N Med De esta sigue habiendo una necesidad por descubrir nuevos agentes antiplaquetarios con eficacia incrementada y efectos secundarios de sangrado Existen varios reportes iniciales de estudios preclínicos de inhibidores de et of Analogues as Novel Antiplatelet describe en el resumen que el compuesto 58 encontró que era un inhibidor selectivo y potente de la activación plaquetaria dependiente de receptor activado por proteasa tipo 4 El compuesto 58 también es denominado en et Inhibition of Receptor Platelet Activation by Haemost véase et and platelet Bioorg EP1166785 Al y EP0667345 Describen varios derivados de pirazol que son útiles como inhibidores de agregación Breve Descripeión de la Invención Algunas modalidades de la presente invención se refieren a péptidos que modulan receptores de PAR4 como agonistas o agonistas parciales del Estos péptidos exhiben actividad biológica mejorada con relación a una secuencia de agonista PAR4 nativa conocida en la haciéndolos entonces candidatos ideales para el desarrollo de ensayos del receptor PAR4 En algunas el péptido agonista de PAR4 es un péptido aislado que comprende una secuencia de aminoácidos de la en el extremo del péptido está Xaai se selecciona de Tyr y se selecciona de Phe Bip y y el extremo está En algunas el péptido agonista de comprende un péptido seleccionado de SEQ ID y En otras el péptido agonista de PAR4 comprende un péptido seleccionado de SEQ ID y En otras el péptido agonista de PAR4 comprende un péptido de SEQ ID En algunas el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En otras el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En algunas el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En otras el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En algunas el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En algunas el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos s de SEQ ID En otras el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En algunas el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En otras el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En algunas el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En otras el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En algunas el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En algunas el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En otras el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En algunas el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En otras el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En algunas el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En otras el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En algunas el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En otras el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En algunas el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En otras el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En algunas el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En otras el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente de o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En algunas el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En algunas el péptido agonista de PAR4 comprende una secuencia de la fórmula I y comprende además Lys después de En otras el péptido agonista de PAR4 comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula I y comprende además después de En otras el péptido agonista de PAR4 comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula I y comprende además después de En otras el péptido agonista de PAR4 comprende Lys después de como se muestra abajo en la fórmula en el extremo del péptido está Xaai se selecciona de Tyr y Xaa2 se selecciona de y y el extremo está En otras el péptido agonista de PAR4 comprende además después de como se muestra abajo en la fórmula en el extremo del péptido está Xaai se selecciona de Tyr y Xaa2 se selecciona de Phe Bip y y el extremo está En otras el péptido agonista de PAR4 comprende además después de como se muestra abajo en la fórmula en el extremo del péptido está Xaai se selecciona de Tyr y Xaa2 se selecciona de Bi y y el extremo está Algunas modalidades de la presente invención están dirigidas a un péptido que comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula en el extremo del péptido no está fusionado a un se selecciona del grupo que consiste en Tyr y Xaa2 se selecciona del grupo que consiste en Trp Bip y y el péptido tiene actividad agonista de En algunas modalidades Xaai es En otras Xaa2 es En algunas el péptido consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de En otras el extremo del péptido está En otras la secuencia de aminoácidos comprende además Lys después de En otras la secuencia de aminoácidos comprende además después de En otras la secuencia de aminoácidos comprende además después de En otras el péptido activa un receptor de En otras la activación del receptor de PAR4 es medida por un ensayo de agregación un ensayo o En algunas la activación del receptor de PAR4 es más alta que la activación del receptor de PAR4 por el péptido que consiste en SEQ ID Por la activación del receptor de PAR4 puede ser al menos aproximadamente 10 al menos alrededor de 20 al menos aproximadamente 30 al menos alrededor de 40 al menos aproximadamente 50 al menos alrededor de al menos aproximadamente 70 al menos alrededor de 80 al menos aproximadamente 90 al menos alrededor de 100 o al menos aproximadamente 110 veces más alta que la activación del receptor de PAR4 por el péptido que consiste en SEQ ID Se ha encontrado que compuestos de imidazotiadiazol o imidazopiridazina de acuerdo con la presente invención son antagonistas de PAR4 que inhiben agregación plaquetaria en ensayo de agregación plaquetaria inducida por En la presente invención proporciona novedosos análogos de imidazot iadiazol y análogos de imidazopiridazina que son antagonistas de PAR4 y son útiles como inhibidores selectivos de agregación incluyendo sales farmacéuticamente solvatos o ásteres de profármaco de los La presente invención también proporciona procedimientos e intermediarios para elaborar los compuestos de la presente invención o sales farmacéuticamente solvatos o ésteres de profármaco de los La presente invención también proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden un portador farmacéuticamente aceptable y al menos uno de los compuestos de la presente invención o estereoisómeros sales farmacéuticamente solvatos o ésteres de fármaco de los La presente invención también proporciona un método para el tratamiento o profilaxis de trastornos tromboembólicos que comprende administrar a un paciente que requiera tal tratamiento o una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos uno de los compuestos de la presente invención o sales farmacéuticamente solvatos o ésteres de profármaco de los La presente invención también proporciona los compuestos de la presente invención o sales farmacéuticamente solvatos o ésteres de profármaco de los para usarse en terapia La presente invención también proporciona el uso de los compuestos de la presente invención o sales farmacéuticamente solvatos o ésteres de profármaco de los en la elaboración de un medicamento para el tratamiento o profilaxis de un trastorno Otras características y ventajas de la invención serán aparentes a partir de la siguiente descripeión detallada y las Breve Descripeión de las Figuras La figura 1A es una gráfica que muestra la eficacia del compuesto del ejemplo 3 para inhibir la agregación de plaquetas lavadas humanas estimuladas por La figura IB es una gráfica que muestra la IC50 del compuesto del ejemplo 3 para inhibir agregación plaquetaria inducida por Descripeión Detallada de la Invención PÉPTIDOS AGONISTAS DE PAR4 Una modalidad de la presente invención proporciona péptidos agonistas de PAR4 que tienen potencia mejorada con respecto a un péptido agonista de AYPGKF ID Véase et Biol Chem En algunas modalidades de la presente los péptidos agonistas de PAR4 tienen una mejora de hasta 20 veces en potencia con respecto a SEQ ID En otras los péptidos de PAR4 tienen una mejora de hasta en potencia con respecto a SEQ ID En otras los péptidos PAR4 tienen una mejora de hasta 100 veces en potencia con respecto a SEQ ID Como resultado de la potencia los péptidos agonistas de PAR4 de la presente invención se pueden usar para desarrollar robustos ensayos de receptores de PAR4 con sensibilidad y especificidad Las definiciones provistas en la presente sin a los términos usados a lo largo de esta a menos que se limite de otra manera en casos Según se usa en la el término agonista de significa un péptido que puede activar completa o parcialmente el receptor de PAR4 y provocar eventos de señalización respuestas funcionales asociadas con activación del receptor de Ejemplos de péptidos agonistas de PAR4 son SEQ ID y mostradas en la tabla en donde los extremos terminales de las secuencias están libres y los extremos de las secuencias están amidados En la tabla los números en la parte superior de la gráfica refleja la posición del aminoácido dentro del con la posición 1 iniciando en el extremo terminal Tabla 1 En algunas un péptido agonista de PAR4 tiene una ED50 100 En otras un péptido agonista de PAR4 tiene una ED50 10 Ejemplos de ensayos para medir la actividad agonista de PAR4 pero no están limitados el ensayo de agregación plaquetaria descrito en el ejemplo G y el ensayo FLIPR descrito en el ejemplo En algunas el péptido es un péptido aislado que comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula en el extremo del péptido está Xaai se selecciona de Tyr y se selecciona de y y el extremo está El término es un término que se conoce bien por aquellos expertos en la Por el término se puede usar para decir que el extremo terminal del péptido no está bloqueado o El término también se puede usar para decir que el extremo del péptido no está fusionado a un En algunas el extremo terminal del péptido no está fusionado a ningún sino que está fusionado a una o más porciones que no son El guión en las fórmulas o y según se usa en secuencias de aminoácidos de la representa un enlace En algunas el péptido agonista de PAR4 comprende un péptido seleccionado de SEQ ID y En otras el péptido agonista de PAR4 comprende un péptido seleccionado de SEQ ID y En otras el péptido agonista de PAR4 comprende el péptido de SEQ ID En algunas el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En otras el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En algunas el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En algunas el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En otras el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En algunas el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En otras el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de En algunas el péptido agonista de consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En otras el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En algunas el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En algunas el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En otras el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En algunas el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En otras el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En algunas el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En otras el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En algunas el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En otras el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En algunas el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de En otras el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En algunas el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de En otras el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En algunas el péptido agonista de PAR4 consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID En algunas el péptido agonista de PAR4 comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula I y comprende además Lys después de En otras el péptido agonista de PAR4 comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula I y comprende además después de En otras el péptido agonista de PAR4 comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula I y comprende además Gly después de En otras el péptido agonista de PAR4 comprende además Lys después de como se muestra abajo en la fórmula en el extremo del péptido está Xaai se selecciona de Tyr y Xaa2 se selecciona de y y el extremo está En otras el péptido agonista de PAR4 comprende además después de como se muestra abajo en la fórmula en el extremo del péptido está Xaai se selecciona de Tyr y Xaa2 se selecciona de Bip y y y el extremo está En otras el péptido agonista de PAR4 comprende además después de como se muestra abajo en la fórmula en el extremo del péptido está Xaai se selecciona de Tyr y Xaa2 se selecciona de y y el extremo está Algunas modalidades de la presente invención están dirigidas a un péptido que comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula en el extremo del péptido no está fusionado a un Xaai se selecciona de Tyr y Xaa2 se selecciona de y y el péptido tiene una actividad agonista de PAR4 En algunas modalidades Xaai es En otras Xaa2 es En algunas el péptido consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de En otras el extremo del péptido está En algunas la secuencia de aminoácidos comprende además Lys después de En otras la secuencia de aminoácidos comprende además después de En otras la secuencia de aminoácidos comprende además Gly después de En algunas el péptido activa un receptor de En otras la activación del recetor de PAR4 se mide por un ensayo de agregación un ensayo o En algunas la activación del receptor de PAR4 es más alta que la activación del receptor de PAR4 por el péptido que consiste en SEQ ID Por la activación del receptor de PAR4 puede ser de al menos aproximadamente 10 por lo menos alrededor de 20 al menos aproximadamente 30 al menos alrededor de 40 al menos aproximadamente 50 al menos alrededor de 60 al menos aproximadamente 70 al menos alrededor de 80 al menos aproximadamente 90 al menos alrededor de 100 o al menos aproximadamente 110 veces más alta que la activación del receptor PAR4 por el péptido que consiste en SEQ ID Un aminoácido incluye un compuesto representado por la estructura general o o R en donde R y son como se describe A menos que se indique de otra el término según se emplea en la solo o como parte de otro sin un grupo amino y un grupo carboxilo enlazado al mismo conocido como un carbono en donde R pueden ser una cadena natural o no incluyendo La configuración absoluta en el carbono se conoce comúnmente como la configuración o con excepeión de que posee una configuración En caso de que ambos de los sustituyentes y sean iguales a el aminoácido es glicina y no es Los aminoácidos descritos en la presente están en la configuración a menos que se indique lo Los aminoácidos pueden ser referidos en la presente ya sea por sus símbolos de tres letras conocidos comúnmente o por los símbolos de una letra recomendados por la Comisión de Nomenclatura Bioquímica de la Un péptido agonista de PAR4 de la presente invención puede incluir aminoácidos codificados naturalmente así como aminoácidos codificados no Un codificado no se refiere a un aminoácido que no es uno de los 20 aminoácidos comunes o es pirrolisina o Otros términos que se pueden usar sinónimamente con el término codificado no son no no de origen y versiones con varios guiones y sin guiones de los Ejemplos de aminoácidos codificados no naturalmente que pueden estar presentes en los péptidos agonistas de PAR4 se muestran a Tpi Los péptidos agonistas de PAR4 descritos en la presente muestran afinidad mejorada para el receptor de y se pueden usar como agonistas para activar el receptor de en ensayos del receptor de PAR4 Los péptidos descritos en la presente pueden ser producidos por síntesis química usando varias en fase sólida tales como aquellas descritas en et The Pept ides Analysis Synthesis Biol volumen Methods in Peptide Part páginas et eds Academic Nueva publ y en stewart et Sol id Phase Pept ide Synthesis 2a Pierce Chemical Co La estrategia deseada se basa en el grupo Fmoc enilmet i1 para la protección temporal del grupo en combinación con el grupo para la protección temporal de las cadenas laterales del aminoácido por et Fluorenylmethoxycarbonyl amino Protecting in The Peptides Analysis Synthesis Biol vol Methods in Peptide Part páginas et Academic San Los péptidos pueden ser sintetizados de una manera gradual o en un soporte polimérico insoluble también como una iniciando a partir del extremo del Una síntesis es iniciada al anexar el aminoácido terminal del péptido a la resina a través de la formación de un enlace de amida o Esto permite la eventual liberación del péptido resultante como una amida o ácido carboxílico Como en casos en los que esté presente un el residuo puede ser unido a la resina de alcohol 1ico Bachem Inc King of como se describe en la presente después de la conclusión del ensamble de la secuencia el alcohol peptídico resultante es liberado con LÍBH4 en THF et descrito página El aminoácido y todos los demás aminoácidos usados en la síntesis tienen que tener sus grupos y funcionalidades de cadena lateral están protegidos diferencialmente de tal manera que el grupo protector pueda ser retirado selectivamente durante la El acoplamiento de un aminoácido se lleva a cabo por activación de su grupo carboxilo como un éster activo y reacción del mismo con el grupo amino no bloqueado del aminoácido unido a la La secuencia de desprotección y acoplamiento del grupo se repite hasta que la secuencia peptídica completa sea El péptido es luego liberado de la resina con 1a desprotección concomitante de las funcionalidades de la cadena normalmente en presencia de depuradores adecuados para limitar reacciones El péptido resultante es finalmente purificado mediante HPLC de fase La síntesis de las resinas de peptidilo requeridas como precursores para los péptidos finales utiliza resinas de polímero de poliestireno reticuladas disponibles comercialmente San Applied Foster Los soportes sólidos que se prefieren resina de metoxif fenoxiace benzhidrilamina de amida de Rink resina ifieId de amida de resina de Fmoc aminometil ield para las carboxamidas El acoplamiento de primero y subsecuentes aminoácidos puede lograrse usando ésteres activos HOBT o HOAT producidos a partir de o a partir de Los soportes sólidos preferidos resina de cloruro de 2 itilo y resinas de 9 iloxi field de amida de para fragmentos péptidos La carga del primer aminoácido en la resina de cloruro de itilo se logra mejor al hacer reaccionar el aminoácido protegido con con la resina en diclorometano y Si es una pequeña cantidad de DMF puede añadirse para facilitar la disolución del aminoácido Las síntesis de los péptidos agonistas de PAR4 descritos en la presente puede llevarse a cabo usando un sintetizador de tal como un Sintetizador de Péptidos Múltiple Advanced ChemTech o un sintetizador Advanced ChemTech modelo 90 o un sintetizador de péptido de Applied Biosystems Inc El sintetizador MPS396Q se usó para preparar hasta 96 péptidos simultáneamente el Sintetizador Advanced ChemTech modelo 90 se usó para preparar secuencias de péptidos comunes en una gran escala 5 mmol de El sintetizador ABI 433A se usó para preparar péptidos individuales en una escala de hasta En todos los la síntesis de péptidos en fase sólida por pasos se llevó a cabo utilizando la estrategia de protección con Fmoc lo descrito en la Ejemplos de aminoácidos protegidos ortogonalmente que pueden usarse en s íntesi s en f ase sól ida se muestran abaj o Los precursores de resina de peptidilo para sus peptidos respectivos pueden cortarse y desprotegerse usando cualquier procedimientos estándar por et Int Peptide Protein Res Un método deseado es el uso de TFA en presencia de agua y TIS como la resina de peptidilo se agita en 1 mg de resina de durante horas a temperatura La resina gastada es luego filtrada y la solución TFA es concentrada y secada bajo presión El péptido crudo resultante es ya sea precipitado y lavado con Et20 o se vuelve a disolver directamente en DMSO o ácido acético acuoso al 505 para publicación por HPLC Los péptidos con la pureza deseada pueden obtenerse por purificación usando HPLC por en un cromatógrafo de líquidos Waters modelo 4000 o Shimadzu modelo La solución de péptido crudo se inyecta en una columna YMC S5 ODS 100 y se eluye con un gradiente lineal de MeCN en ambas reguladas en pH con TFA al usando una velocidad de flujo de con monitoreo de efluente por absorbancia UV a 220 Las estructuras de los péptidos purificados pueden confirmarse por análisis MS de Las siguientes abreviaturas se emplean en los ejemplos y en cualquier lado en la Ph fenilo Bz o Bnz bencilo Me metilo Et etilo Pr Bu Trt tritilo TMS trimetilsililo TIS triisopropilsilano Et20 éter dietílico HOAc o AcOH ácido acético AcCN o CH3CN acetonitrilo DMF EtOAc acetato de etilo TFA ácido trifluoroacético NMM NMP DCM diclorometano TEA trietilamina min h o hr L litro mL o mi mililitro microlitro g mg mol meq miliequivalente rt o RT temperatura ambiente acuoso Reactivo BOP hexafluorofosfato de de Reactivo de PyBOP hexafluorofosfato de fosfonio HBTU hexafluorofosfato de HATU de HCTU hexafluorofosfato de DIEA diisopropiletilamina Fmoc o FMOC fluorenilmetiloxicarbonilo Boc o BOC HOBT o hidratado HOAT HPLC cromatografía de líquidos de alto rendimiento cromatografía de líquidos de alto de masas RM resonancia magnética nuclear ANTAGONISTAS DE PAR4 COMPUESTOS DE IMIDAZOTIADIAZOL E IMIDAZOPIRIDAZINA DE LA INVENCION En un primer la presente invención proporciona un compuesto de imidazotiadiazol o imidazopiridazina de la fórmula I que tiene la un sal farmacéuticamente solvato o éster de profármaco del en es o N Y es S o de tal forma que N esté en un anillo heteroarilo bicíclico de 8 ó 9 miembros que contenga un nitrógeno en cada anillo y un nitrógeno de cabeza de se selecciona tal como Br o alquilo de tal como o alcoxi de por haloalquilo de el cual contiene 1 a 5 en donde halo por F o por ej emplo CF3CF2 I F2C y CHFCH3 y alquiltio de tal como se selecciona tal como Br o alquilo de tal como alcoxi de tal como haloalquilo de el cual contiene 1 a 5 en donde halo por F o tal como CF3CF3CF2 I F2C CHF2 y CHFCH3 y F2CH alquiltio de tal como R8 y R9 se seleccionan independientemente alquilo de tal como tal como C1 o alcoxi de tal como y siempre que al menos uno de R8 y R9 no sea R2 se selecciona tal como F o alquilo de alcoxi de tal como y X1 es N X3 y X4 se selecciona independientemente de CR3 R3 es alcoxi de tal como alquiltio de tal como tal como F CF30 CHF2O o haloalquilo de el cual contiene 1 a 5 tal como o R4 y R5 se seleccionan independientemente de H y alquilo de tal como se pueden tomar juntos con el carbono al cual estén fijados para formar un anillo cicloalquilo de tal como es un anillo heteroarilo de 5 miembros que contiene al menos un átomo de N o tal como uno o dos átomos de N y un átomo de o dos o tres átomos de R6 se selecciona de tal como Br o 0CF3 alcoxicarbonilo de alquilsulfonilo de alquilo de sustituido por 0 a 3 grupos seleccionados independientemente de tal como Cl o hidroxialquilo de alcoxi de de de de alquiltio de y dialquilaminofenilo de de o R6 es en D es un que se selecciona un enlace 0 II alquileno de tal como alquilenoxi de tal como alquilentio de tal como alquilenoxi de de tal como alquilentio de de tal como de tal como o de tal como y A se selecciona arilo de fenilo o sustituido por 0 a 3 grupos seleccionados independientemente de tal como F o alcoxi de alquilo de 0CF3 o heteroarilo de 5 a 10 miembros sustituido por a 3 grupos seleccionados independientemente de tal como Cl o heteroarilo de 5 ó 6 hidroxialquílo de o alquilo de heterociclilo de 4 a 10 miembros sustituido por 0 a 3 grupos seleccionados independientemente de tal como Cl o heteroarilo de 5 ó 6 hidroxialquílo de arilo de o alquilo de o cicloalquilo de sustituido por 0 a 3 grupos seleccionados independientemente de tal como Cl o heteroarilo de 5 ó 6 hidroxialquílo de arilo de o alquilo de y R12 son cada que se seleccionados alquilo de tal como sustituido por 0 a 3 grupos seleccionados independientemente de alcoxi de alquilo de OCHF2 y de sustituido por 0 a 3 grupos seleccionados independientemente de tal como C1 o hetaroarilo de 5 ó 6 hidroxialquilo de o alquilo de de 4 a 10 miembros sustituido por 0 a 3 grupos seleccionados independientemente de tales como C1 o heteroarilo de 5 ó 6 hidroxialquilo de o alquilo de de 5 a 10 miembros sustituido por 0 a 3 grupos seleccionados independientemente de tal como Cl o heteroarilo de 5 ó 6 hidroalquilo de o alquilo de dialquilamino de de alquilcarbonilamino de de dialcoxi de de dialquilaminofenilo de cianoalquilo de alcoxi de de como y cuando están unidos al mismo se combinan para formar un anillo heterocíclico de 4 a 6 miembros que contiene átomos de carbono y 0 a 2 heteroátomos adicionales seleccionados de O y R13 es cada que se seleccionado de alquilo de y R7 se selecciona de tal como F o y alquilo de tal como R10 se selecciona de alquilo de tal como el cual es Br o alcoxi de por y haloalquilo de el cual puede contener 1 a 5 en donde halo es F o cada que se se selecciona de 2 y se selecciona de 4 ó y cada que se se selecciona de 1 y R6 puede cicloalquilo de sustituido por 0 a 3 grupos seleccionados independientemente de tal como Cl o heteroarilo de 5 ó 6 hidroxialquilo de alquilo de heterociclilo de 5 a 10 miembros sustituido por 0 a 3 grupos seleccionados independientemente de tal como Cl o heteroarilo de 5 ó 6 hidroxialquilo de o alquilo de heterociclilo de 4 a 10 miembros sustituido por 0 a 3 grupos seleccionados independientemente de tal como Cl o heteroarilo de 5 ó 6 hidroxialquilo de o alquilo de cicloalquiloxi de sustituido por 0 a 3 grupos seleccionados independientemente de tal como Cl o heteroarilo de 5 ó 6 hidroxialquilo de o alquilo de tal como fenilo o sustituido por 0 a 3 grupos seleccionados independientemente de tal como F o haloalquilo de el cual contiene 1 a 5 tal como por CF3 y alcoxi de alquilo de ciclopropilo y tal como en donde el arilo es sustituido por 0 a 3 grupos seleccionados independientemente de alcoxi de alquilo de OCHF2 y tal como en donde el arilo es sustituido por 0 a 3 grupos seleccionados independientemente del grupo que consiste en alcoxi de alquilo de OCHF2 y arilalcoxi de tal como en donde el arilo es sustituido por 0 a 3 grupos seleccionados independientemente de alcoxi de alquilo de y heteroarilalquilo de de 5 a 10 en donde el heteroarilo es sustituido por 0 a 3 grupos seleccionados independientemente del grupo que consiste en alcoxi de alquilo de y heteroarilalcoxi de de 5 a 10 en donde el heteroarilo es sustituido por 0 a 3 grupos seleccionados independientemente del grupo que consiste en alcoxi de alquilo de arilalquilo de tal en donde el arilo es sustituido por 0 a 3 grupos seleccionados independientemente de alcoxi de CF3 OCHF2y dialquilaminof enilo de de C alcoxicarbonilo de alquilsulfonilo de y En algunas modalidades de los compuestos de la invención de la fórmula Y es S o X1 es CH o X3 y X4 son cada uno independientemente R9 es o y se seleccionan alquilo de tal como alquiltio de tal como alcoxi de tal como y haloalquilo de el cual puede contener 1 a 5 átomos de tales como F y es R3 se selecciona alcoxi de tal como y tal como F o n es y R4 y R5 son cada uno los compuestos de la invención pueden tener las y En algunas la presente invención ncluye compuestos que tienen las IE En algunas la presente invención incluye compuestos dentro del alcance de la fórmula I en donde R6 es o que tienen las IG IJ arilo de fenilo o sustituido por 0 a 3 grupos seleccionados independientemente de tal como F o alcoxi de alquilo de OCF3 o heteroarilo de 5 a 10 miembros sustituido por 0 a 3 grupos seleccionados independientemente de tal como Cl o 0CF3Í heteroarilo de 5 ó 6 hidroxialquilo de tal como alquilo de tal como alcoxi de tal como o dialquilamino de tal como heterociclilo de 4 a 10 miembros sustituido por 0 a 3 grupos seleccionados independientemente de tal como Cl o heteroarilo de 5 ó 6 hidroxialquilo de tal como alquilo de tal como alcoxi de tal como CH3O o dialquilamino de tal como cicloalquilo de sustituido por 0 a 3 grupos seleccionados independientemente de tal como Cl o heteroarilo de 5 ó 6 hidroxialquilo de alquilo de tal como alcoxi de tal como o dialquilamino de tal como y R6a es alquilo de haloalquilo de sustituido con 1 a 5 alcoxi de alquiltio de cicloalcoxi de alcoxicarbonilo de alquilsulfonilo de fenilalcoxi de heteroarilalcoxi de fenilalquilo de dialquilaminofenilo de de de de de o alcoxi de de de y R7 es Cl o Ejemplos del anillo heteroarilo de 5 miembros R6 presente en los compuestos de la fórmula I pero no están limitados a R7 R Ejemplos de los grupos R6 presentes en los compuestos de la fórmula I pero no están limitados O fenilo tal como heterociclilo tal como tal como heteroarilo tal como W N heteroarilalquilo de tal como CH2CH2 tal como tal como alcoxi de C de C de tal como alquilo de tal como o arilalquilo de tal como CH2 R7 se selecciona de H y alquilo de tal como Ejemplos de grupos adecuados para usarse en los compuestos de la fórmula I pero no están limitados alquilo de tal como alquiltio de tal como alcoxi de tal como y haloalquilo de tal como o Ejemplos de grupos R3 adecuados para usarse en los compuestos de la fórmula I pero no están limitados alcoxi de tal como y tal como R2 es de preferencia Y es preferiblemente S o En algunas la presente invención incluye compuestos de la fórmula en Y es S o X1 es X2 es X3 es X4 es R3 es F o R2 es y R4 y R5 son cada uno En algunas la presente invención incluye compuestos de la fórmula I en Y es S o X1 es X2 es X3 es X4 es R4 y R5 son cada uno es y y se seleccionan independientemente de haloalquilo de tal como o R2 es y R3 es F o En algunas la presente invención incluye compuestos de la fórmula I en es R1 y y se seleccionan independientemente de CH3 o haloalquilo de tal como R2 es R3 es F o y en donde R6a se define como anteriormente en la presente y puede haloalquilo de sustituido con 5 tales como CF3 O tal como OCF3 N heteroarilalquilo de tal como CH2CH2 cicloalcoxi de alcoxicarbonilo de alquilsulfonilo de dialquilaminofenilo de de tal como de de C alquilo de C tal como CH2CH2OCH3 alcoxi de de de tal como alquilo de tal como CH3 o alcoxi de tal como arilalquilo de tal como y R7 es H o alquilo de tal como En algunas la presente invención incluye compuestos de la fórmula I en es R1 o R1 y se seleccionan independientemente de CH3S O haloalquilo de tal como R2 es R3 es CH3O O Cl en donde fenilo tal como tal como tal como 0 R7 es H o alquilo de tal como En algunas la presente invención incluye compuestos de la fórmula I en Y es X1 es 5 X2 es X3 es X4 es R2 es R4 y R5 son cada uno 0 es es CH30 o R3 es R4 y R5 son cada uno 5 R7 es H o En algunas la presente invención incluye compuestos de la fórmula en Y es X1 es X2 es X3 es X4 es R2 es R4 y R5 son cada uno es es R3 es 0 R7 es En algunas la presente invención incluye compuestos de la fórmula en es alcoxi de tal como alquilo de 5 tal como etilo e o tal como Br o Cl R2 es R3 es alcoxi de tal como o tal como F o Cl 0 R4 es y R5 es H En algunas la presente invención incluye compuestos de la fórmula en X1 es 5 es alcoxi de tal como o tal como donde o se selecciona independientemente de alquilo de tal como C2H5 o o alcoxi de tal como R8 y R9 son cada uno y R2 es En algunas la presente invención incluye compuestos de la fórmula en X1 es CH o R3 es OCH3 tal como y R6 es y fenilo sustituido con 0 a 3 sustituyentes seleccionados de 1 ó 2 grupos tal como haloalquilo de que contiene 1 a 5 tal como alquilo de tal como CH3 y alcoxi de o R6 es alquilo de tal como CH3 o haloalquilo de tal como En algunas la presente invención incluye compuestos de la fórmula I en donde es un anillo heteroarilo de 5 miembros que contiene uno o dos átomos de N y un átomo de S o tres átomos de En algunas la presente invención incluye compuestos de la fórmula I en R8 y R9 son cada uno En algunas la presente invención incluye compuestos de la fórmula I en en donde es alcoxi de tal como o alquilo de tal como R2 es X1 es R3 es alcoxi de tal como o tal como y R6 es fenilo sustituido con 1 ó 2 tal como F o por o O fenilo sustituido con tal como o R8 y R9 son cada uno y en donde es alquilo de tal como X1 es R2 es R3 es alcoxi de C tal como R6 es fenilo sustituido con CF3 tal como y R8 y R9 son cada uno En algunas la presente invención incluye compuestos de la invención que tienen la Quiral los compuestos PAR4 de la invención tienen IC50S en el ensayo FLIPR más adelante de 5 mMo muy preferiblemente 500 nM o y todavía más preferiblemente 10 nM o Ejemplos de estos compuestos PAR4 preferidos son aquellos reportados en los ejemplos de trabajo específicos Datos de actividad para un número de estos compuestos se presentan en la tabla del ejemplo En algunas la presente invención proporciona al menos un compuesto de la presente invención o un sal farmacéuticamente solvato o áster de profármaco del En algunas la presente invención proporciona una composición que incluye un portador farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula o sales farmacéuticamente solvatos o ésteres de profármaco del solo o en combinación con otro agente En algunas la presente invención proporciona una composición farmacéutica que incluye además otros agentes En una modalidad la presente invención proporciona una composición en donde los agentes terapéuticos adicionales son un agente antiplaquetario o una combinación de los De los agentes antiplaquetarios son antagonistas de P2Y12 los antagonistas de P2Y12 son ticagrelor o En otra modalidad la presente invención proporciona una composición en donde los agentes terapéuticos adicionales son un anticoagulante o una combinación de los De los agentes anticoagulantes son inhibidores de FXa o inhibidores de los inhibidores de FXa son apixaban o De el inhibidor de trombina es En algunas la presente invención proporciona un método para el tratamiento o profilaxis de un trastorno tromboembólico que incluye la etapa de administrar a un sujeto un que requiera de tal tratamiento o una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos uno de los compuestos de la presente invención o sales farmacéuticamente o ésteres de profármaco de los En algunas la presente invención incluye un método para el tratamiento de un trastorno o la profilaxis primaria de un trastorno que incluye las etapas de administrar a un paciente un que lo requiera una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula o sales farmacéuticamente solvatos o ásteres de profármaco del en donde el trastorno tromboembólico se selecciona de trastornos tromboembólicos cardiovasculares trastornos tromboembólicos cardiovasculares trastornos tromboembólicos en las cámaras del corazón o en la circulación trastornos tromboembólicos cerebrovasculares arteriales y trastornos tromboembólicos cerebrovasculares En algunas la presente invención incluye un método como el descrito en donde el trastorno tromboembólico se selecciona de angina un síndrome coronario fibrilación primer infarto de infarto de miocardio muerte súbita ataque isquémico accidente enfermedad arterial oclusiva trombosis trombosis venosa embolia trombosis arterial trombosis arterial embolia embolia embolia pulmonar y trombosis que resulte de implantes dispositivos o procedimientos en los que la sangre sea expuesta a una superficie artificial que promueva En algunas la presente invención incluye un método para inhibir o prevenir agregación que incluye la etapa de administrar a un sujeto como un que lo una cantidad terapéuticamente efectiva de un antagonista de que es un compuesto de la fórmula de la OTRAS MODALIDADES DE LA INVENCIÓN En algunas la presente invención proporciona un procedimiento para elaborar un compuesto de la presente invención o sales farmacéuticamente solvatos o ésteres de profármaco del En una la presente invención proporciona un intermedio para elaborar un compuesto de la presente invención o sales farmacéuticamente solvatos o ésteres de profármaco del En algunas la invención proporciona un método de tratamiento o profilaxis de un trastorno tromboembólico que incluye administrar a un sujeto que lo requiera un una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto que se une a PAR4 como un compuesto de la fórmula de la e inhibe corte señalización de en donde el sujeto tiene un repertorio de receptores plaquetarios En algunas la presente invención proporciona un compuesto de la presente o sales farmacéuticamente solvatos o ásteres de profármaco del para usarse en el tratamiento o profilaxis de un trastorno En algunas la presente invención también proporciona el uso de un compuesto de la presente o sales farmacéuticamente solvatos o esteres de profármaco del en la elaboración de un medicamento para el tratamiento o profilaxis de un trastorno La presente invención puede incorporarse en otras formas especificas sin alejarse del espíritu o atributos esenciales de la Esta invención abarca todas las combinaciones de aspectos preferidos de la invención indicadas en la Se entiende que cualesquiera y todas las modalidades de la presente invención pueden tomarse en conjunto con cualquier otra modalidad o modalidades para describir modalidades También se debe entender que cada elemento individual de las modalidades es su propia modalidad cualquier elemento de una modalidad intenta ser combinado con cualquiera y todos los demás elementos de cualquier modalidad para describir una modalidad QUÍMICA Los compuestos de esta invención pueden tener uno o más centros A menos que se indique lo todas las formas quirales y y racémicas de los compuestos de la presente invención se incluyen en la presente Muchos isómeros geométricos de d dobles enlaces y similares también pueden estar presentes en los y todos estos isómeros estables se contemplan en la presente Las formas geométricas cis y trans de los compuestos de la presente invención se describen y pueden aislarse como una mezcla de isómeros o como formas isoméricas Los presentes compuestos pueden ser aislados en formas ópticamente activa o Se sabe bien en la cómo preparar formas ópticamente tal como por resolución de formas racémicas o por síntesis a partir de materiales de partida ópticamente Se abarcan todas las formas quirales y y racémicas y todas las formas isoméricas geométricas de una a menos que se indique específicamente la estereoquímica o forma isomérica Cuando no se hace mención específica de la configuración cis trans o R o de un compuesto de un carbono entonces cualquiera de los isómeros de o una mezcla de más de un isómero se Los procedimientos para la preparación pueden usar enantiómeros o diastereómeros como materiales de Todos los procedimientos usados para preparar compuestos de la presente invención y productos intermediarios elaborados ahí se consideran parte de la presente Cuando los productos enantioméricos o diastereoméricos son se pueden preparar por métodos por por cromatografía o cristalización Los compuestos de la presente y sales de los pueden existir en varias formas en las cuales átomos de hidrógeno son predispuestos en otras partes de las moléculas y los enlaces químicos entre los átomos de las moléculas son consecuentemente Se debe entender que todas las formas en la medida en que puedan están incluidas dentro de la El peso molecular de los compuestos de la presente invención es de preferencia menos de aproximadamente 800 gramos por Según se usa el término o solo o como parte de otro intenta incluir grupos hidrocarburo alifáticos saturados tanto de cadena ramificada como recta que tienen de 1 a 10 carbonos o el número especificado de átomos de Por de intenta incluir grupos alquilo de Cg y por de indica alquilo que tiene 1 a 6 átomos de Todos los grupos alquilo pueden ser no sustituidos sustituidos con al menos un hidrógeno que sea reemplazado por otro grupo Ejemplos de grupos alquilo pero no están limitados metilo etilo propilo e butilo y pentilo así como isómeros de cadena de los y similares así como grupos tales que pueden incluir opeionalmente 1 a 4 sustituyentes tales como por Cl o o o heteroariloxi alquiltio así como de de de en donde Ra y Rb son iguales o diferentes y se seleccionan independientemente de cicloalquilo de un heterociclo de 4 a 7 miembros un heteroarilo de 5 a 6 o cuando están unidos al mismo átomo de nitrógeno pueden unirse para formar un heterociclo o y se selecciona de los mismos grupos que Ra y Rb pero no es Cada grupo Ra y cuando no es y cada grupo Rc opeionalmente tiene hasta tres sustituyentes adicionales unidos en cualquier átomo de carbono o nitrógeno disponible de Rb dicho sustituyente siendo iguales o diferentes y se seleccionan independientemente del grupo que consiste en alquilo de alquenilo de de de de de S de NH de N de de de de de de cicloalquilo de un heterociclo de 4 a 7 o un heteroarilo de 5 a 6 Cuando un alquilo sustituido es sustituido con un grupo cicloalquilo o los sistemas de anillos son como se define abajo y entonces pueden tener dos o tres también como se define o solo o como parte de otro intenta incluir cadenas de hidrocarburo de configuración ya sea recta o ramificada y que tienen uno o más dobles enlaces que pueden presentarse en cualquier punto estable a lo largo de la Por de intenta incluir grupos alquenilo de C5 y Ejemplos de alquenilo pero no están limitados y y los cuales pueden ser sustituidos opeionalmente con 1 a 4 en particular tiol o solo como parte de otro intenta incluir cadenas de hidrocarburo de configuración ya sea recta o ramificada y que tienen uno o más triples enlaces que se puede presentar en cualquier punto estable a lo largo de la Por de intenta incluir C5 y grupos alqinilo de tales como pentinilo y y los cuales pueden ser sustituidos opeionalmente con 1 a 4 en El término o solo o como parte de otro se refiere a un grupo en donde alquilo es como se definió de intenta incluir grupos alcoxi de y grupos alcoxi de Ejemplos de grupos alcoxi pero no están limitados propoxi e y o solo o como parte de otro representa un grupo alquilo o grupo alcoxi como el definido arriba con el número indicado de átomos de carbono unidos a través de un puente de por ejemplo y o solo o como parte de otro incluye bromo y intenta incluir grupos hidrocarburo alifáticos saturados tanto de cadena recta como ramificada que tienen el número especificado de átomos de sustituidos con 1 a 7 de preferencia 1 a 4 preferiblemente F Ejemplos de haloalquilo pero no están limitados heptafluoropropilo y Ejemplos de haloalquilo también incluyen que intenta incluir grupos hidrocarburo alifáticos saturados tanto de cadena recta como ramificada que tienen el número especificado de átomos de carbono sustituidos con 1 a 7 átomos de de preferencia 1 a 4 átomos de de representa un grupo haloalquilo como el definido arriba con el número indicado de átomos de carbono unidos a través de un puente de Por de intenta incluir grupos haloalcoxi de y Ejemplos de haloalcoxi pero no están limitados pentafluoroetoxi y representa un grupo haloalquilo como el definido arriba con el número indicado de átomos de carbono unidos a través de un puente de por ejemplo y A menos que se indique lo el término según se emplea en la presente solo o como parte de otro grupo incluye grupos hidrocarburo cíclicos saturados o parcialmente insaturados contienen 1 ó 2 dobles que contienen 1 a 3 incluyendo alquilo alquilo bicíclico o alquilo que contiene un total de 3 a 10 carbonos que forman el anillo de y los cuales pueden ser fusionados a 1 ó 2 anillos aromáticos como se describe para que incluye cualquiera de los cuales grupos pueden ser sustituidos opeionalmente con 1 a 4 sustituyentes tales como tiol cualquiera de los sustituyentes para así como grupos tales incluyendo 2 enlaces libres y por lo tanto son grupos de Según se usa o intenta significar cualquier anillo bicíclico o tricíclico monocíclico de 66 7 miembros o bicíclico o bicíclico de 12 ó 13 cualquiera de los cuales puede ser parcialmente insaturado o Ejemplos de tales carbociclos pero no están limitados antracenilo y tetrahidronaftilo Como se mostró los anillos puenteados también están incluidos en la definición de carbociclo Los carbociclos a menos que se especifique lo son fenilo e Cuando el término es intenta incluir Un anillo puenteado se presenta cuando uno o más átomos de carbono enlazan dos átomos de carbono no Los puentes preferidos son uno o dos átomos de Se hace notar que un puente siempre convierte un anillo monocíclico en un anillo Cuando un anillo es los sustituyentes indicados para el anillo también pueden estar presentes en el Los grupos se refieren a hidrocarburos aromáticos monocíclicos o por naftilo y Las porciones arilo se conocen bien y se por en Condensed Chemical 13a John Wiley Nueva York de se refiere a fenilo y A menos que se especifique lo de o puede ser no sustituido o sustituido con 1 a 3 grupos seleccionados de de OCHF2I alquilo de y Según se usa en la el término de grupo o intenta significar un anillo heterocíclico monocíclico de 6 ó 7 miembros bicíclico de 13 ó 14 miembros estable que es saturado o parcialmente y que contiene átomos de carbono y 3 ó 4 heteroátomos seleccionados independientemente de 0 y y que incluye cualquier grupo bicíclico en el cual cualquiera de los anillos heterocíclicos definidos arriba se fusiona a un anillo de Los heteroátomos de nitrógeno y azufre pueden ser opeionalmente oxidados y en donde p es 1 ó El átomo de nitrógeno puede ser sustituido o no sustituido N o NR en donde R es H u otro si se El anillo heterocíclico puede ser unido a su grupo colgante en cualquier heteroátomo o átomo de carbono que dé como resultado una estructura Los anillos heterocíclicos descritos en la presente pueden ser opcionalmente sustituidos en carbono o en un átomo de nitrógeno si el compuesto resultante es con 1 a 3 grupos seleccionados de de alquilo de y Un nitrógeno en el heterociclo puede ser opcionalmente Se prefiere que cuando el número total de átomos de S y 0 en el heterociclo exceda entonces estos heteroátomos no estén adyacentes entre Se prefiere que el número total de átomos de S y O en el heterociclo no sea mayor que Cuando se usa el término no se intenta que incluya Ejemplos de grupos heterocíclicos onocíclicos incluyen tiamorfolinilo y y Ejemplos de grupos heterociclo bicíclicos incluyen Los grupos heterociclo preferidos incluyen ser opeionalmente sustituidos Según se usa en la el término heterocíclico o intenta significar hidrocarburos aromáticos monocíclicos y policíclicos que incluyen al menos un miembro de anillo de oxígeno o Los grupos heteroarilo sin furilo benzotienilo benzodioxolanilo y benzodioxano Los grupos heteroarilo son no sustituidos o sustituidos con 1 a 3 grupos seleccionados de de SCH3 alquilo de y El átomo de nitrógeno es sustituido o no sustituido N o NR en donde R es H u otro sustituyente si se Los heteroátomos de nitrógeno y azufre pueden ser opeionalmente oxidados y en donde p es 1 ó Los anillos puenteados también están incluidos en la definición de Un anillo puenteado se presenta cuando uno o más átomos N o enlazan dos átomos de nitrógeno no Ejemplos de anillos pero no están limitados un átomo de dos átomos de un átomo de dos átomos de nitrógeno y un grupo Se indica que un puente siempre convierte un anillo monocíclico en un anillo Cuando un anillo es los sustituyentes indicados por el anillo también pueden estar presentes en el Los grupos heteroarilo que se prefieren incluyen N y similares Cuando el término se usa en la presente para referirse a un anillo o ese grupo puede ser completamente insaturado o parcialmente El término solo o como parte de otro grupo se refiere a un grupo carbonilo enlazado a un radical muy el grupo así como los grupos bivalentes o que están enlazados a radicales El grupo Re puede seleccionarse de alquilo alquenilo sustituido o alquinilo como se define en la o cuando sea el grupo bivalente por alquenileno y La designación anexa a un anillo u otro grupo se refiere a un enlace libre o grupo de A lo largo de la los grupos y sustituyentes de los mismos pueden seleccionarse por un experto en el campo para proporcionar porciones y compuestos y compuestos útiles como compuestos farmacéuticamente aceptables compuestos intermedios útiles para elaborar compuestos farmacéuticamente El término se usa para representar una especie cargada negativamente tal como acetato y Según se hace referencia el término significa que al menos un átomo de hidrógeno es reemplazado con un grupo no siempre que valencias normales se mantengan y que la sustitución se traduzca en un compuesto Cuando un sustituyente es ceto entonces 2 hidrógenos en el átomo son Sustituyentes ceto no están presentes en porciones Dobles enlaces de según se usa son dobles enlaces que se forman entre dos átomos de anillo adyacentes o En casos en los que hayan átomos de nitrógeno en compuestos de la presente estos pueden convertirse en mediante tratamiento con un agente oxidante peróxidos de hidrógeno para dar otros compuestos de esta se muestran y reclaman átomos de nitrógeno que se considera cubren tanto el nitrógeno mostrado como su derivado de óxido En casos en los que hay átomos de carbono cuaternarios en compuestos de la presente estos pueden ser reemplazados por átomos de siempre que no formen enlaces o Cuando cualquier variable se presenta más de una vez en cualquier constituyente o fórmula para un su definición cada que se presenta es independiente de su definición cada que se presenta otra por si se muestra que un grupo es sustituido con 0 a 3 entonces ese grupo puede ser opeionalmente sustituido con hasta tres grupos y cada que se presenta se selecciona independientemente de la definición de combinaciones de sustituyentes variables son permisibles sólo si tales combinaciones se traducen en compuestos Cuando se muestra que un enlace a un sustituyente cruza un enlace que conecta dos átomos en un entonces ese sustituyente puede ser unido a cualquier átomo en el Cuando un sustituyente se lista sin indicar el átomo en el cual ese sustituyente está enlazado al resto del compuesto de una fórmula entonces ese sustituyente puede ser unido mediante cualquier átomo en ese Combinaciones de sustituyentes variables son permisibles sólo si estas combinaciones se traducen en compuestos La frase se emplea aquí para hacer referencia a aquellos composiciones formas de dosis que dentro del alcance del juicio médico adecuados para usarse en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin respuesta alérgica excesivas otro problema o de acuerdo con una relación Según se usa en la farmacéuticamente se refieren a derivados de los compuestos descritos en donde el compuesto de origen se modifica al hacer sales ácidas o de base del Ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables pero no están limitadas sales de ácidos minerales u orgánicos de grupos básicos tales como y sales alcalinas u orgánicas de grupos ácidos tales como ácidos Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen las sales no tóxicas convencionales o las sales de amonio cuaternario del presente compuesto por a partir de ácidos inorgánicos u orgánicos no Por estas sales no tóxicas convencionales incluyen aquellas derivadas de ácidos inorgánicos tales como y y las sales preparadas a partir de ácidos orgánicos tales como oxálico e y Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente invención pueden ser sintetizadas del compuesto de origen que contenga una porción básica o ácida mediante métodos químicos esas sales pueden prepararse al hacer reaccionar las formas de ácido o base libre de estos compuestos con una cantidad estequiométrica de la base o ácido adecuada en agua o en un solvente o en una mezcla de los medios no acuosos tales como acetato de isopropanol o acetonitrilo son Listas de sales adecuadas que se encuentran en s Pharmaceutical Sciences 18a Mack Publishing PA cuya descripeión se incorpora aquí por los compuestos de la fórmula I pueden tener formas de áster de Cualquier compuesto que se convierta in vivo para proporcionar el agente bioactivo un compuesto de la fórmula es un profármaco dentro del alcance y espíritu de la Se conocen bien en la varias formas de Para ejemplos de estos derivados de Design of Elsevier y et Methods in Academic Press capítulo and Application of et A Textbook of Drug Design and páginas Harwood Academic Publishers Drug Rev et Sci et al Bull 32 692 y Medicinal Principies and The Royal Society of RU Los compuestos isotópicamente marcados de la presente es en los que uno o más de los átomos descritos son reemplazados por un isótopo de ese átomo es reemplazado por o por e isótopos de hidrógeno que incluyen tritio y también son proporcionados en la Estos compuestos tienen una variedad de usos Por como estándares y reactivos para determinar la capacidad de un compuesto farmacéutico potencial para unirse a proteínas o receptores o para compuestos de proyección de imágenes de esta invención unidos a receptores biológicos in vivo o in Los compuestos de la presente invención después de su de preferencia aislados y purificados para obtener una composición que contenga una cantidad en peso igual a o mayor que de preferencia del compuesto de la presente invención el cual se use o se formule después como se describe Estos compuestos también se contemplan en la presente como parte de la presente y intentan indicar un compuesto que es lo suficientemente robusto como para sobrevivir al aislamiento hasta un grado de pureza útil a partir de una mezcla de y formulación en un agente terapéutico Se prefiere que los compuestos de la presente invención no contengan un grupo o El término significa una asociación física de un compuesto de esta invención con una o más moléculas ya sea orgánicas o Esta asociación física incluye enlace por En ciertos casos el solvato será capaz de por ejemplo cuando una o más moléculas de solvente se incorporen en la red de cristal del sólido abarca solvatos tanto en fase de solución como Ejemplos de solvatos pero no están limitados metanolatos e Métodos de solvatación se conocen generalmente en la Las abreviaturas usadas en la presente se definen como para una para dos para tres para grados para equivalente o para gramo o para miligramo o para litro o para mililitro o para microlitro o para para para milimol o para minuto o para hora u para temperatura para tiempo de para para libras por pulgada para o para para peso para punto de o para espectrometría de para espectroscopia de masas por ionización de para alta para espectrometría de masas de alta para espectrometría de masas por cromatografía de para cromatografía de líquidos de alta para HPLC de fase para cromatografía de capa para material de para espectroscopia por resonancia magnética para para para para para para para para para Hertz y para cromatografía de capa y son designaciones estereoquímicas familiares para un experto en la Los compuestos de la presente invención se pueden preparar en un número de formas conocidas por un experto en la de síntesis Los compuestos de la presente invención pueden ser sintetizados usando los métodos descritos junto con métodos sintéticos conocidos en la técnica de química orgánica o por variaciones en los mismos según se aprecia por aquellos expertos en la Los métodos que se prefieren pero no están limitados aquellos descritos Las reacciones se llevan a cabo en un solvente o mezcla de solventes adecuado para los reactivos y materiales empleados y adecuado para las transformaciones que se estén Se entenderá por aquellos expertos en la técnica de síntesis orgánica que la funcionalidad presente en la molécula debe estar de acuerdo con las transformaciones Esto algunas veces requerirá un juicio para modificar el orden de las etapas sintéticas o para seleccionar un esquema de proceso particular sobre otro para obtener así un compuesto deseado de la También se reconocerá que otra consideración importante en la planeación de cualquier ruta sintética en este campo es la elección juiciosa del grupo protector usado para protección de los grupos funcionales reactivos presentes en los compuestos descritos en esta Un documento autoritativo que describe las muchas alternativas para el practicante entrenado es Uts et Greene s Prot ect i ve Groups In Organi c Syn thes i 4a Interscience Los compuestos de la fórmula de esta invención pueden obtenerse por condensación de una amina de la fórmula III con una cetona de la fórmula IV que contiene un grupo saliente Z tal como un yoduro o tosilato y un grupo protector PG tal como bencilo como se muestra en el esquema de reacción Ambos compuestos de la fórmula III y IV están disponibles comercialmente o se pueden preparar por medios conocidos por un experto en la Esta condensación es promovida por ya sea térmicamente o de preferencia por irradiación de El grupo protector puede ser retirado por métodos conocidos en la tales como BCI3 a en presencia de La alquilación subsecuente usando ya sea un alcohol VI bajo condiciones de Mitsunobu o un bromuro VII en presencia de una base tal como carbonato de potasio proporciona los compuestos de la fórmula Los alcoholes y bromuros VI y VII están disponibles comercialmente o pueden prepararse por métodos conocidos en la Esquema de reacción 1 Vil Como los compuestos de la fórmula I pueden prepararse a partir de compuestos de la fórmula IX después de la activación del grupo tiometilo por oxidación a una sulfona VII como se muestra en el esquema de reacción Esto permite la introducción de una variedad de nucleófilos como grupos tales como tioles y aminas en presencia de una base tal como carbonato de potasio o hidruro de sodio ya sea concentrado o en un solvente aprótico y polar tal como dimetilformamida para dar compuestos Los compuestos XI pueden convertirse en compuestos de la fórmula I por remoción del grupo protector y alquilación como se describe en el esquema de reacción Esquema de reacción 2 O Benzofuranos sustituidos que portan sustituyentes en la posición 2 pueden prepararse como se muestra en el esquema de reacción XII pueden prepararse por métodos conocidos por un experto en la de síntesis y se pueden condensar con cetonas de la fórmula XIII que porten un grupo saliente Q tal como bromo o para dar benzofuranos La bromación de compuestos de la fórmula XIV da bromocetonas que se pueden condensar con un aminoheterociclo sustituido III de acuerdo con el esquema de reacción I para dar compuestos de la fórmula Las bromocetonas XV son un subconjunto específico de compuestos IV en el esquema de reacción Esquema de reacción 3 PGO 1 XIII Compuestos de benzoxazol de la fórmula 1 pueden prepararse iniciando a partir de aminoheterociclo sustituido III y ésteres piruvato de la fórmula XVI que contengan un grupo saliente Z tal como un o tosilato como se muestra en el esquema de reacción Ambos compuestos de la fórmula III y XVI están disponibles comercialmente o están disponibles por medios conocidos por un experto en la Después de la condensación y saponificación del éster para formar el ácido los aminofenoles de la fórmula XIX se acoplan para formar amidas de la fórmula que se pueden cielar bajo catálisis con ácido para formar conpuestos de benzoxazol de la fórmula Estos pueden ser desprotegidos y alquilados como se muestra en el esquema de reacción 1 para proporcionar conpuestos de la fórmula Esquema de reacción 4 R XXI XX Los aminoheterociclos XXIV pueden prepararse a partir de disulfuro de carbono por medio del intermediario de tioxantato Estos aminoheterociclos son útiles para la preparación de compuestos de la fórmula Esquema de reacción 5 MeOH 1h rt N N Lavado con éterMe0 K MeOH XXII XXIV XXIII Los aminoheterociclos los cuales son intermedios útiles para la preparación de compuestos de la fórmula I en donde Y pueden prepararse a partir de cetoésteres La ciclización con seguida por oxidación con bromo da piridazinonas La desplazamiento con hidrazina y posterior hidrogenacien proporciona aminoheterociclos los cuales son un subconjunto específico de compuestos III en el esquema de reacción De esta estos aminoheterociclos son útiles para la preparación de coapuestos de la fórmula Esquema de reacción 6 POCI3 XXVIII XXIX XXX Ejemplos Los siguientes compuestos de la invención han sido aislados y caracterizados usando los métodos descritos en la Demuestran un alcance parcial de la invención y no se intenta que sean limitativos del alcance de la En los procedimientos las relaciones de soluciones expresan una relación de a menos que se indique de otro Los desplazamientos químicos de RMN se reportan en partes por millón Los productos fueron analizados mediante HPLC analítica de fase inversa usando los siguientes Método X 30 fase A B T de solv T solv tiempo de 4 Flujo Método Agilent fase solv de de H20 de de H20 de T T tiempo de 4 Flujo Método Columna Sunfire C18 de mieras x 30 eluida a 3 con un gradiente de 2 a partir de de A a de B de de de de de de UV 220 Método Columna Eclipse de mieras x 30 eluida a 3 con un gradiente de 2 min a partir de de A a de B de de de de de de UV 220 Método Columna Eclipse de mieras x 30 eluida a 3 con un gradiente de 2 min a partir de de A a de B de de de de de de UV 220 Método Columna de mieras eluida a 3 con un gradiente de 2 min a partir de de A a de B de de de de de de UV 220 Ejemplo 1 HO Una solución de áster etílico de ácido en éter etílico se enfrió a y se trató con una solución de LAH en THF seco añadida por goteo durante 10 Después de 3 horas a la mezcla se enfrió rápidamente con saturado 20 La mezcla se dejó calentar hasta y se extrajo con éter etílico x 50 Los extractos combinados se lavaron con se secaron sobre MgS04 anhidro y se concentraron para dar un La filtración sobre una almohadilla de gel de sílice x 7 y elución con acetato de etilo dieron un aceite que se destiló para dar el material del título como un aceite que se HRMS calculado para encontrado 600 d IB benzo OBnO Una solución de benzo en dimetilformamida se trató con carbonato de potasio anhidro en polvo añadido todo de una La mezcla resultante se agitó al vacío durante 10 min y se enjuagó con El matraz de reacción se puso en un baño de agua y se trató con bromuro de bencilo añadido por goteo durante 15 La mezcla resultante se agitó después a 22 durante 18 horas quedó material de partida por El sólido se filtró y se lavó con dimetilf ormamida El filtrado se evaporó al vacío y el aceite residual se diluyó con acetato de etilo se lavó con ácido clorhídrico N bicarbonato de sodio saturado y Después de secar sobre sulfato de magnesio la evaporación del solvente dio un jarabe La cristalización a partir de acetato de etilo y hexano dio g de e t oxi 2 2 dime t i 1 1 3 4 ona como prismas incoloros La cromatografía de los licores madre en gel de sílice x 13 c elución tolueno acetato de etilo dio g de material adicional para dar un rendimiento total de g calculado para C sH encontrado CDC 13 600 MHz d 2 H 2 H J Hz J OBn Una solución de en diclorometano se enfrió a y se trató con 43 mL de una solución M de hidruro de diisobutilaluminio en tolueno añadido por goteo durante 20 La mezcla resultante se agitó después a durante 3 La mezcla de reacción se enfrió rápidamente mediante la adición cuidadosa de metanol añadido por goteo durante 15 seguido por ácido clorhídrico 1N añadido por goteo durante 15 Después se retiró el baño de enfriamiento y se añadieron 150 mL adicionales de ácido clorhídrico 1N durante 20 La mezcla se agitó después a durante 2 horas y se diluyó con diclorometano La fase orgánica se recogió y la fase acuosas se extrajo con diclorometano x 50 Los extractos orgánicos combinados se lavaron con se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentraron al El aceite residual se diluyó con tetrahidrofurano se trató con 10 mL de ácido clorhídrico N y se agitó a durante 2 La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo se lavó con se secó sobre sulfato de magnesio se evaporó al vacío para dar un aceite La cromatografía en gel de sílice x 13 elución con dio g de del aldehido del título como un aceite claro que se solidificó después del LC calculado para C15H15O4 encontrado RMN 600 d 5 OBn Una solución de metoxibenzaldehído en dimetilformamida se trató con carbonato de cesio anhidro en polvo añadido todo de una La mezcla resultante se agitó al vacío durante 10 minutos y luego se lavó con El matraz de reacción se puso en un baño de agua y se trató con cloroacetona añadida por goteo durante 15 La mezcla resultante se agitó después a durante 18 horas quedó aldehido de partida por tic y formación del aldehido alquilado El sólido se filtró y se lavó con El filtrado se evaporó al vacío y el aceite residual se diluyó con acetato de etilo se lavó con ácido clorhídrico N bicarbonato de sodio saturado y Después de secar sobre sulfato de magnesio la evaporación del solvente dio un jarabe Este jarabe se diluyó con tetrahidrofurano y acetato de etilo se trató con ácido monohidratado y se agitó a durante 1 h indicó cielización completa del aldehido alquilado intermedio al La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo se lavó con bicarbonato de sodio saturado y Después de secar sobre sulfato de magnesio la evaporación del solvente dio un jarabe La cromatografía en gel de sílice x 12 elución con de etilo dio g de del benzofurano del título como un sólido La recristalización a partir de acetato de etilo y hexano dio el material del título como prismas amarillos grandes LC HRMS calculado para C18H17O4 encontrado RMN 600 d J J bromoet anona OBn Un matraz de tres cuellos de 250 mL equipado con una varilla de agitación magnética y purgado con una atmósfera de nitrógeno se cargó con tetrahidrofurano anhidro seguido por mL de una solución de de litio en La mezcla se enfrió a y se trató con una solución de en tetrahidrofurano añadida por goteo durante 10 La mezcla resultante se agitó después a durante 45 Luego se añadió por goteo clorotrimetilsilano durante 5 minutos y la solución resultante se agitó a durante otros 20 Después se quitó el baño de enfriamiento y la mezcla se dejó calentar a la temperatura ambiente durante 30 La mezcla de reacción se enfrió después rápidamente por la adición a una solución fría de acetato de etilo bicarbonato de sodio saturado y La fase orgánica se secó rápidamente sobre sulfato de magnesio anhidro y se evaporó al vacío para dar el éter silil enólico como un aceite que es con tolueno El éter silil enólico fue luego disuelto en tetrahidrofurano seco enfriado a y tratado con bicarbonato de sodio sólido seguido por bromosuccinimida añadida en porciones pequeñas durante 15 La mezcla de reacción se dejó calentar a durante 2 h y luego se enfrió rápidamente mediante la adición de acetato de etilo y bicarbonato de sodio La fase orgánica se lavó con se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se evaporó para dar un aceite La cromatografía en gel de sílice x 12 c elución con tolueno acetato de dio g de de la bromometilcetona del título como un sólido La recristalización a partir de acetato de etilo y hexano dio prismas amarillos LC HRMS calculado para Ci8Hi6Br04 encontrado RMN 600 d J bromoimidazo Una mezcla de y en isopropanol se calentó en un matraz de presión equipado con una varilla de agitación magnética a durante 18 horas después de 20 y luego formación de un precipitado después de 2 La mezcla enfriada se transfirió después a cinco frascos para microondas de 20 mL y luego se calentó en un aparato de microondas hasta durante 30 Cada frasco se diluyó después con diclorometano se lavó con bicarbonato de sodio saturado y salmuera y se secó sobre sulfato de magnesio Las fracciones fueron combinadas y concentradas al La cromatografía del sólido residual anaranj en gel de sílice x 10 elución lenta con diclorometano debido a solubilidad dio g del imidazotiadiazol del título contaminado con un poco de El material sólido se trituró con acetato de etilo se se lavó con acetato de etilo y se secó al vacío para dar g de de imidazotiadiazol del título puro como un sólido blanquecino que se usa tal cual para la siguiente LC HRMS calculado para C2oHi5BrN303S encontrado RMN 600 d OBn Una solución de en una mezcla de y metanol se trató a con mL de una solución al en peso de metóxido de sodio en metanol añadida en una Se añadió más metanol y la mezcla se agitó durante 1 La mezcla de reacción se enfrió rápidamente por la adición de 25 mL de ácido clorhídrico 1N seguido por 20 mi de bicarbonato de sodio El solvente se evaporó bajo presión reducida y el residuo se diluyó con diclorometano se lavó con se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se evaporó al La cromatografía del residuo en gel de sílice x 10 elución con acetato de dio g de del compuesto del título como un sólido Este material se recristalizó a partir de acetato de etilo mL por de para dar agujas LC HRMS calculado para encontrado 600 d J Una mezcla de metoxibenzof iadiazol y petnamet ilbenceno en diclorometano se enfrió a bajo una atmósfera de nitrógeno y luego se trató inmediatamente evitar con 8 mL de una solución 1 M de tricloruro de boro en diclorometano añadida por goteo durante 3 La mezcla resultante se agitó a durante 1 La mezcla de reacción se enfrió después rápidamente por la adición de una solución de bicarbonato de sodio en agua añadida en una El baño de enfriamiento se retiró y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 El sólido formado se se lavó sucesivamente con agua y diclorometano La torta de filtro se dejó remojar con etanol anhidro y después se succionó hasta la El sólido blanco obtenido fue luego secado al vacío durante 24 h para dar g de de material del título puro por El filtrado y lavado combinados se diluyeron con diclorometano y se agitaron en un baño de agua caliente hasta que la fase orgánica fuera transparente sin sólidos aparentes en La fase orgánica se se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se filtró rápidamente mientras estaba aún El filtrado se evaporó y el residuo y hexamet se trituró con tolueno el sólido se recogió y se lavó con tolueno para dar g de de rendimiento de material del título como un sólido pardo por LC HRMS calculado para C14H12N3O4S encontrado RMN 600 d Ejemplo Una mezcla de 6 metoxi imidazo m y trif enilfosf ina se mantuvo al vacío durante 10 La mezcla se enjuagó con nitrógeno y luego se cargó con THF seco y met i11iazol La mezcla se calentó a y se sonicó durante 5 La mezcla enfriada se trató con una solución de DIAD en THF seco añadida en tres porciones por goteo durante 20 La mezcla fue homogénea después de 40 min y se agitó a durante 6 La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano se lavó con bicarbonato de sodio salmuera y se secó sobre La evaporación de un residuo semisólido que se purificó por cromatografía en gel de sílice x 10 para proporcionar el material del título como cubos LC HRMS calculado para C19H17N4O4S2 encontrado RMN 600 d J Ejemplo 2 de etilo Una mezcla de 63 y reactivo de Lawesson en THF se calentó a reflujo durante 18 La reacción se enfrió después a temperatura ambiente y se trató con bromopiruvato de etilo 63 La reacción se agitó a reflujo durante 18 horas luego se concentró al vacío y se diluyó con acetato de Esta mezcla se lavó con agua y se salmuera se secó sobre sulfato de magnesio se filtró y se El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice x 11 después segunda vez con 120 g de gel de de para dar el material del título como un sólido amarillo RMN 400 d J HO S CF3 de etilo se hizo reaccionar como se describió en el ejemplo 1A y dio el material del título deseado como un aceite claro después de la destilación 400 d Ejemplo y se hicieron reaccionar como se describió en el ejemplo 1 y dieron el material del título después de la cristalización en LC HRMS calculado para C19H14F3N4O4S2 encontrado RMN 600 d J Ejemplo 3 de metilo Una solución de benzotioamida en THF se trató por goteo con bromopiruvato de etilo 39 y se calentó a reflujo durante 18 La reacción se concentró después al se diluyó con acetato de se lavó con agua salmuera y se secó sobre sulfato de magnesio El residuo obtenido después de la concentración se purificó mediante cromatografía en gel de sílice x 11 de seguido por una segunda purificación con de El material del título se obtuvo después de la concentración como un aceite amarillo RMN 400 3B En un matraz de fondo redondo de 250 mL de metilo se disolvió en éter etílico La solución se enfrió a y se trató con hidruro de litio aluminio en porciones durante 20 La reacción se agitó a durante luego se trató con 20 mL de una solución saturada de Na La reacción se dejó alcanzar la temperatura ambiente y se diluyó con acetato de se lavó con HC1 1N salmuera se secó sobre sulfato de magnesio se filtró y se El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice x 12 de acetato de para dar un aceite amarillo pálido que luego se destilo a pb 110 120 y proporcionó el material del título como un aceite RMN 400 Ejemplo imidazo Una mezcla de 6 metoxiimidazo trif enilfosf ina y feni 11iazol tanol en un matraz de 200 mL equipado con un embudo de adición se mantuvo al vacío durante 10 La mezcla se lavó después con nitrógeno y se cargó con tetrahidrof urano seco destilado sobre hidróxido de litio La solución se calentó a y luego se sonicó durante 5 La mezcla heterogénea enfriada se trató después a con una solución de azodi carboxi 1ato de diisopropilo en tetrahidrof urano añadida por goteo durante La reacción fue homogénea al final de la La mezcla se agitó después durante h horas La mezcla de reacción se diluyó después con dicloromet no se lavó con bicarbonato de sodio saturado salmuera y se secó de magnesio La evaporación dio un sólido blanco que se sometió a cromatografía en de sílice x 12 elución diclorometano acetato de etilo a Las fracciones se recogieron y se evaporaron para dar el compuesto deseado como un sólido contaminado con hidrazida por La en acetato de etilo dio el material del título puro como un sólido Los licores madre fueron sometidos a cromatografía en gel de sílice x 12 elución con de etilo a para dar después de la cristalización a partir de acetato de etilo para proporcionar compuesto deseado adicional total como un sólido LC HRMS calculado para C2H encontrado RMN 400 Ejemplo 4 de etilo S Una solución de de etilo en tetrahidrofurano se trató con reactivo de Lawesson en polvo y y la solución clara anaranjada resultante se calentó bajo reflujo del baño durante 4 h de TLC con Rf superior formada con cierto material de partida La mezcla enfriada se concentró bajo presión reducida y el residuo se diluyó con acetato de etilo se lavó con bicarbonato de sodio salmuera y se secó sobre sulfato de magnesio La evaporación de un sólido anaranjado que se sometió a cromatografía en gel de sílice x 10 elución con de y proporcionó el material del título de un sólido LC RMN 400 d ppm de etilo Una mezcla de y de etilo en benceno y etanol se agitó a temperatura ambiente durante 18 La mezcla se calentó a durante 1 El solvente se evaporó bajo presión reducida y el residuo se dividió entre acetato de etilo y bicarbonato de sodio acuoso saturado La fase orgánica se lavó con se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró al El aceite claro residual se sometió a cromatografía en gel de sílice x 10 elución con de y dio un aceite amarillo Esto se destiló al vacío destilación bulbo a temperatura de baño de para proporcionar el material del título como un jarabe amarillo pálido que se solidificó hasta un sólido casi incoloro después del LC HRMS calculado para C12H12NO2S encontrado RMN 400 d Una solución de de etilo en dietílico en un matraz de 500 mL bajo una atmósfera de nitrógeno se enfrió a de hielo de y se trató con añadido todo de una La mezcla se agitó a durante La reacción se enfrió rápidamente mediante la adición por goteo de acetato de etilo agua seguida por hidróxido de sodio acuoso al y agua El baño se retiró después y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 50 El sólido que se formó se filtró y se lavó con éter El filtrado se combinó y el lavado se lavó con salmuera y se secó sobre sulfato de magnesio La evaporación de un aceite amarillo que se purificó por cromatografía en gel de sílice x 8 elución con de etilo a El aceite amarillo claro resultante se destiló después al vacío bulbo a temperatura de baño de para proporcionar el material del título de un jarabe LC HRMS calculado para C10H10NOS encontrado RMN 400 d Una solución de en diclorómetaño se enfrió a de y se trató con añadido por goteo durante 2 Se formó inmediatamente una goma blanca Después de 10 el baño se retiró y la solución se agitó a durante 4 La mezcla de reacción se enfrió rápidamente con hielo y se vertió en una mezcla de acetato de etilo y bicarbonato de sodio saturada La fase orgánica se lavó con se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró al El residuo sólido se sometió a cromatografía en gel de sílice x 6 elución con para dar el material del título como un aceite amarillo claro que se solidificó en el refrigerador hasta un sólido amarillo LC HRMS calculado para CioH9BrNS z encontrado 400 Ejemplo Una suspensión de y en se mantuvo al vacío durante 5 El matraz fue después lavado con nitrógeno y carbonato de potasio en polvo frescamente anhidro y se añadió todo de una La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente con pocos periodos de sonicación cortos durante 1 La mezcla heterogénea se volvió casi homogénea el carbonato de después de 10 min y se empezó a precipitar de nuevo hasta un sólido La mezcla de reacción se enfrió rápidamente con ácido clorhídrico 1N y luego se dividió entre diclorometano y bicarbonato de sodio saturado La fase orgánica se lavó con se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró al El residuo amarillo pálido sólido se sometió a cromatografía en gel de sílice x 6 elución con de para dar el material del título como un sólido amarillo La cristalización en acetato de etilo proporcionó el material del título como un sólido amarillo LC HRMS calculado para encontrado RMN 400 d Ejemplo 5 4 de metilo Una solución de de metilo en THF se trató con morfolina y se sometió a reflujo durante 18 La reacción se diluyó después con acetato de etilo y se lavó con saturado salmuera y se secó sobre sulfato de magnesio se filtró y se El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice x 10 de para dar el material del título como un sólido 1H RMN 400 d Una solución de de metilo en éter etílico se trató en porciones durante 10 min con hidruro de litio aluminio La mezcla se agitó a durante 4 después se trató lentamente con acetato de etilo y saturado La mezcla se dejó calentar a la temperatura se diluyó con acetato de se lavó con NaHC03 saturado salmuera se secó sobre sulfato de magnesio se filtró y se El residuo se purificó en cromatografía en gel de sílice x 10 de a de para dar el material del título como un sólido beige que después se destiló a y dio el producto deseado como un sólido LC HRMS calculado para C8H13N2O2S encontrado RMN 400 d Ejemplo trifenilfosfina y se añadieron en un matraz de fondo redondo de 25 mL y se purgó bajo vacío en Después se añadió tetrahidrofurano y la mezcla se trató con DIAD en tetrahidrofurano La mezcla se agitó a durante hora y se diluyó con acetato de Esto se lavó con saturado y salmuera se secó sobre sulfato de magnesio se filtró y se El residuo se purificó en cromatografía en gel de sílice x 10 acetato de etilo al en y el residuo obtenido después de la concentración se cristalizó en acetato de etilo para dar el material del título como cristales y como un sólido impuro amorfo a partir del licor madre LC HRMS calculado para C22H22N5O5S2 encontrado 400 d E emplo 6 Una solución de ácido en se trató con cloruro de oxalilo 109 y DMF y la reacción se agitó durante 3 Después de la evaporación al el residuo se con CH2CI2 y después se disolvió en THF y se trató por goteo con una mezcla de hidróxido de amonio y agua durante 5 La reacción se agitó después a durante 30 min y luego a durante 1 La reacción se diluyó con se lavó con agua HCl 1N saturado y salmuera se secó sobre sulfato de magnesio se filtró y se Una vez que el producto parecía ser soluble en la fase acuosa se evaporó al vacío y se extrajo con CH2CI2 200 se secó sobre sulfato de magnesio se filtró y se concentró para dar el material del titulo como un aceite que se Esto fue destilado a para proporcionar el producto deseado puro como un aceite claro que se solidificó como un sólido RMN 400 d muy muy S Una solución de en THF se trató con reactivo de Lawesson y la reacción se llevó a reflujo durante 18 La reacción se dejó después enfriar hasta la temperatura ambiente y se concentró al se diluyó con acetato de se lavó con NaHCCL saturado y salmuera Las fases acuosas fueron extraídas con acetato de etilo x 200 y los extractos orgánicos se secaron sobre sulfato de magnesio se filtraron y se El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice x 11 de para dar el material del título como un aceite 1H RMN 400 d muy muy de etilo A una solución de etoxietoxi m en etanol se le añadió por goteo bromopiruvato de etilo y la mezcla se llevó a reflujo durante 18 La reacción se concentró después al se diluyó con acetato de se lavó con agua salmuera se secó sobre sulfato de magnesio se filtró y se El residuo se purificó mediante cromatografía en columna con gel de sílice x 10 de acetato de para dar el material del título como un LC min RMN 400 d ppm J J i A una solución de metoxietoxi de etilo 6C en éter se le añadió en porciones hidruro de litio aluminio durante 10 minutos a La reacción se agitó después a durante 1 Después se añadió a la reacción acetato de etilo seguido por agua y la reacción se dejó alcanzar la temperatura La mezcla se diluyó después con acetato de se lavó con HCl 1N y salmuera Las fases acuosas combinadas fueron extraídas con acetato de etilo x 300 secadas sobre sulfato de magnesio filtradas y El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice x 10 acetato de para dar el material del título como un aceite LC 1H RMN 400 d Una solución de en éter se trató con a temperatura formación de un La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 luego se diluyó con acetato de etilo y se lavó con saturado y salmuera se secó sobre sulfato de magnesio se filtró y se El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice x 10 de acetato de et para dar el material del título como un aceite RMN 400 d Ejemplo Una suspensión de y 4 met oxietoxi en DMF se purgó al vacío y nitrógeno durante 10 La mezcla se trató después con carbonato de potasio y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante La reacción se diluyó después con dicloromet se lavó con agua salmuera se secó sobre sulfato de magnesio se filtró y se El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice x 10 acetato de etilo al para dar el material del título que se cristalizó en acetato de etilo y proporcionó el material del título deseado junto con material no cristalizado LC HRMS calculado para C22H23N4O6S2 encontrado RMN 400 MHz d ppm 1H s 1H J Hz 1H 3 S 2 H Ejemplo 7 imidazo tiadiazol 7A de etilo Una mezcla de de etilo de y benzonitrilo en diclorobenceno 137 se calentó a durante 4 La reacción se enfrió después hasta la temperatura ambiente y el solvente se evaporó al calentar la reacción a a vacío El residuo se purificó en cromatografía de gel de sílice de CH2CI2 hasta de EtOAc en para proporcionar el material del título LC HRMS calculado para C11H11N2O2S encontrado RMN 400 d A una solución de carboxilato de etilo 230 en etanol anhidro se le añadió NaBH4 a La mezcla de reacción se calentó a durante 30 luego se añadió HCl 1N y se evaporó a Se añadió diclorometano a la reacción seguido por salmuera y esto se extrajo con diclorometano Las capas orgánicas se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro y se El residuo se purificó en cromatografía en columna de gel de sílice de CH2CI2 hasta de para proporcionar el material del título LC LCMS calculado para C9H9N2OS encontrado RMN 400 d Hz Ejemplo 2 f 2 imidazo 3 tiadiazol tiadiazol y 2 5 se pusieron en un matraz y esto se enjuagó con Se añadió THF seco y a esta suspensión resultante se le añadió ina y una solución de 1 1 dipiperidina en THF seco se añadió por goteo por medio de una bomba de jeringa durante 2 La suspensión que resultaba se agitó durante 2 horas adicionales a temperatura tiempo despues del cual la LC mostró que no quedaba material de La mezcla se diluyó con se lavó con HCl acuoso saturado y se secó sobre sulfato de magnesio se filtró y se El residuo se purificó en cromatografía en gel de sílice de di c lor orne t 100 de hexanos a de diclorometano hasta de hasta de y se liofilizó en para dar el material del título LC calculado para C23H18N5O4S2 encontrado RMN 400 MHz d Ejemplo 8 de etilo A una solución de oxoacetato de etilo en THF seco se le añadió reactivo de Lawesson La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas sin ninguna La mezcla se calentó después hasta y luego se calentó a Se añadió reactivo de Lawesson y después de 16 h a la reacción se completó a la La mezcla se evaporó hasta la sequedad y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna con gel de sílice de C C hexanos hasta de para proporcionar el material del título LC LCMS calculado para C11H11N2O2S encontrado RMN 400 d pp 8B 3 4 metanol A una solución de l 3 4 carboxilato de etilo mgs mmol en metanol anhidro 5 124 se le añadió NaBH4 mgs 5 98 a 0 La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h Se añadió AcOH y la reacción se concentró hasta la El residuo se disolvió en salmuera y y se extrajo con EtOAc Los extractos orgánicos combinados se lavaron acuoso saturado y y se secaron sobre sulfato de magnesio Después de la filtración y el residuo se trituró con éter etílico para dar el material del título como una primera cosecha LCMS calculado para encontrado 400 d Ejemplo En un matraz de fondo redondo de 200 se añadió benceno a carboxilato de etilo 80 y 6 toxiimidazo y la mezcla se sonificó durante 30 segundos y se concentró al vacío para remover trazas de agua en el material de Se añadió tr ifeni1f osfina y la mezcla se secó al alto vacío durante 10 Se añadió THF y la mezcla se soni durante 5 Se añadió por goteo durante aproximadamente 1 azodicarboxilato de diisopropilo en THF y la demostró que la reacción no se había Se añadió nuevamente azodicarboxilato de diisopropilo y la mezcla se diluyó en se lavó con acuoso saturado salmuera y se secó sobre MgSC anhidro y se El residuo se purificó en cromatografía en gel de sílice CH2CI2 hasta de EtOAc para dar un residuo que se trituró con MeCN y dio el material del título mgs LC HRMS calculado para encontrado RMN 400 d ppm 3H 3 H Ejemplo 9 2 6 6 il e toxi imidazo 3 tiadiazol 9 A 2 6 6 2 1 imidazo Una solución de 2 2 205 en THF se trató a temperatura ambiente y bajo una atmósfera de con alcohol propargílico i1fos fina y por durante un periodo de 25 min con una solución de en THF La mezcla se sonicó en un baño durante 30 min y se agitó a temperatura ambiente durante otros 30 La mezcla se disolvió después en diclorometano y se lavó con NaHC03 acuoso salmuera y se secó La evaporación del solvente dio un sólido que se purificó mediante cromatografía en columna con gel de sílice ISCO para dar el material del título de 1H RMN 400 MHz d ppm Azidobenceno N Una solución de anilina en acetonitrilo 191 se enfrió en un baño de hielo y se trató con nitrito de y por goteo con El baño de hielo se retiró y la mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente bajo Se evaporó cuidadosamente acetonitrilo azidobenceno es también y el residuo se pasó a través de una almohadilla de gel de sílice y se diluyó con éter de petróleo La evaporación del solvente dio el material del título como un aceite de que aún contenía ciertas trazas de solvente como se muestra por 1H 400 d ppm Ejemplo met imidazo Una solución de 20 y azidobenceno 19 en DMF se trató a temperatura ambiente y bajo una atmósfera de nitrógeno con dihidrof de sodio mgs y sulfato de pentahidratado La mezcla se agitó durante 2 horas seguida por y luego se diluyó con diclorometano y se lavó con salmuera y se secó El solvente se evaporó y el residuo sólido se trituró con acetonitrilo x 1 y se liofilizó para dar el material del título de LC HRMS calculado para C23H19N6O4S encontrado RMN 400 d ppm 10 2 il metoxi 2 i l i idazo 1 En un frasco para microondas de 5 se añadieron iloxi imidazo 27 azidobenceno 30 DMF anhidro y bajo una atmósfera de El frasco se tapó y se calentó a durante 20 minutos en el aparato de microondas El solvente se evaporó y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice se concentró y se trituró dos veces con x 1 Al sólido se le añadió acetonitrilo y agua y la mezcla se liofilizó durante el fin de semana para dar el material del título de LC HRMS calculado para encontrado RMN 400 d ppm Preparación de alcoholes Los siguientes alcoholes fueron preparados de acuerdo con los procedimientos descritos en los ejemplos 3 a 15 15 Preparación de bromuros Los siguientes bromuros fueron preparados de acuerdo con los procedimientos descritos en el ejemplo Ejemplos 11 a 35 Los siguientes ejemplos adicionales han sido aislados y caracterizados usando los métodos descritos 10 15 15 15 15 10 15 10 15 Ejemplo 36 y CHO Una mezcla de y Helvetica 1 en 30 mL de diclorometano se enfrió hasta A esta mezcla se le añadió por goteo durante 25 minutos tribromoborano en 10 mL de diclorometano y la reacción se agitó a durante aproximadamente La mezcla se vertió después en se diluyó con diclorometano y se extrajo dos veces con Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre se filtraron y se El residuo se purificó en cromatografía en columna con gel de sílice ISCO de oro de 40g usando de hexanos y de diclorometano hasta de hexanos con de diclorometano y de acetato de Ambos isómeros fueron recogidos al mismo tiempo para dar los materiales del título como un sólido cristalino oxibenzaldehído no RMN MHz CDC13 RMN CDCl3 d J A una solución de una mezcla de y metoxibenzaldehído en acetonitrilo 952 se le añadió yoduro de potasio carbonato de cesio y La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 se trató con eq de carbonato de cesio y se calentó a durante 1 hora y durante otra La reacción se dejó durante la noche a temperatura luego se filtró sobre una almohadilla pequeña de sílice y se enjuagó con acetato de etilo 500 El residuo obtenido después de la concentración se purificó mediante cromatografía en gel de sílice 120 g de sílice con de tolueno usando UV a 315 n luego la polaridad se incrementó con el tiempo hasta de acetato de Las fracciones fueron evaporadas para dar una mezcla de los isómeros deseados que se recristalizó durante la noche con acetato de El material del título se obtuvo como cristales LC LCMS calculado para C11H10FO3 encontrado 400 d OH A una solución agitada 216 en clorobenceno se le añadió tricloruro de aluminio Después de calentar durante 3 horas a la mezcla se enfrió rápidamente con hielo y HCl y se extrajo con acetato de etilo Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio se filtraron y El residuo se purificó en cromatografía en gel de sílice 24 eluyendo con un gradiente de hexanos y acetato de para dar el material del título como un sólido LC LCMS calculado para encontrado RM 400 d Se añadió benceno a 178 y la mezcla se sonicó durante 30 segundos y se concentró al vacío para retirar trazas de agua en el material de Se añadió trifenilfosfina y la mezcla se secó al alto vacío durante 10 Se añadieron 175 y THF y la mezcla se durante 5 Se anadió por goteo azodicarboxilato de diisopropilo en THF durante 1 h y la solución amarilla resultante se sonicó durante 15 min y se agitó durante la noche a temperatura La mezcla se diluyó en se lavó con se secó sobre y se El residuo se purificó en cromatografía de gel de sílice 24 g columna de usando de acetato de etilo en hexanos a de para dar el material del título como un sólido LC LCMS calculado para C2H15FNO3S encontrado RMN 400 d J A una suspensión de 132 en acetato de etilo se le añadió bromuro de y la mezcla se calentó a durante 48 El sólido se filtró y se enjuagó con EtOAc El sólido se purificó en cromatografía de gel de sílice 12 g con diclorometano y acetato de etilo y proporcionó el material del título como un sólido LC LCMS calculado para C2oHi4BrFN03S encontrado En un frasco de presión para microondas de mL se añadieron 35 en seguidos por La reacción se calentó a durante la noche y a durante 1 h en un horno de La mezcla de reacción se vertió después en una mezcla de diclorometano y saturado y esto se extrajo dos veces con Los extractos orgánicos se secaron sobre se filtraron y se El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice de oro ISCO de 12 g usando de luego de acetato de etilo y después de acetato de etilo en para dar el material del título como un sólido LC LCMS calculado para encontrado Ejemplo se disolvió en diclorometano requirieron cierto calor y Luego se añadió metanol seguido por metóxido de sodio en un La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 25 luego se enfrió rápidamente con HCl N y se agitó hasta que el color de la reacción cambiara a Después se añadió saturado y esto se extrajo con diclorometano Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre se filtraron y se El residuo se purificó mediante cromatografía en columna con gel de sílice de 12 g usando de diclorometano a de acetato de etilo en diclorometano de para dar el material del título como un sólido LC HRMS calculado para C23H15FN4O3S2 encontrado RMN 400 d E emplo 37 Una solución de y TMEDA en éter dietílico 962 a bajo atmósfera de N2 se cargó con BuLi por goteo durante un periodo de 30 minutos usando una bomba de Después de agitar durante 4 horas a se añadió DMF y la mezcla de reacción se continuó agitando durante horas después de lo cual se añadió HCl 1N a La mezcla de reacción se calentó a la temperatura ambiente y se extrajo con acetato de La fase orgánica se secó se filtró y se concentró hasta la El residuo se purificó mediante ISCO usando como Fracciones que contenían el producto deseado se concentraron hasta la sequedad para dar el material del título de como un sólido amarillo LC LCMS calculado para C9H10CIO3 encontrado 400 d A una solución agitada de dimetoxibenzaldehído en DCM 311 a se le añadió lentamente tribromuro de boro La mezcla de reacción se agitó a durante 10 minutos y después se calentó a la temperatura ambiente y se agitó durante 1 hora mientras se monitoreaba el progreso de la reacción por Una vez que todo el material de partida se había la reacción se enfrió rápidamente con agua y se extrajo con La fase orgánica se lavó con se secó se filtró y se concentró hasta la sequedad para dar el material del título de como un sólido LC LCMS calculado para encontrado RMN 400 d J Una solución agitada de metoxibenzaldehído en dimetilformamida se cargó con carbonato de cesio y La mezcla de reacción se calentó en un recipiente sellable a durante 7 se filtró sobre un papel filtro Whatman para retirar insolubles enjuagado con DCM y luego se lavó con La fase orgánica se secó se filtró y se concentró hasta la El residuo se purificó mediante ISCO usando como Las fracciones que contenían el producto deseado se concentraron para dar el material del título de como un sólido amarillo LC LCMS calculado para C11H10CIO3 encontrado 400 d J J Hz J OH g a de en diclorobenceno 148 se le añadió cloruro de aluminio en porciones durante un periodo de 10 El recipiente de reacción se selló después y se calentó a durante 40 después se enfrió a la temperatura ambiente y se vertió en hielo triturado de agitación enjuagada con Esto se agitó durante 30 luego se extrajo con acetato de La fase orgánica se secó se filtró y se concentró hasta la El residuo se purificó mediante ISCO usando como Las fracciones que contenían el producto deseado se concentraron para dar el material del título de como un sólido café LC LCMS calculado para encontrado RMN 400 Una solución agitada de m en DMF seco 129 a temperatura ambiente se cargó con K2CO3 y La mezcla de reacción se agitó durante horas y luego se dividió entre acetato de etilo y La fase orgánica se lavó con se secó se filtró y se concentró hasta la El residuo se purificó mediante ISCO usando como Las fracciones que contenían el producto deseado se concentraron para dar el material del título de como un aceite color LC LCMS calculado para C17H14CIO3 encontrado RMN 400 d J J 37F il bromoetanona Un matraz de fondo redondo de 200 secado con llama equipado con una varilla de agitación y bajo atmósfera de nitrógeno se cargó con THF anhidro seguido por bis de litio La mezcla se enfrió a y se trató con una solución de en THF mi 2 añadida por goteo durante 10 minutos por medio de una bomba de La mezcla resultante se agitó a durante 45 minutos y después se cargó con trimetilelorosilano añadido por goteo durante 5 minutos mediante bomba de jeringa y después se agitó durante otros 20 Se retiró el baño de enfriamiento y la mezcla se dejó calentar a durante 30 La mezcla de reacción se enfrió rápidamente con una mezcla de acetato de etilo frío saturado y La fase orgánica se secó agitando durante alrededor de 5 minutos para retirar todos los restos de se filtró y se concentró hasta la sequedad para dar el éter silil enólico como un aceite amarillo que se con tolueno El éter silil enólico se disolvió en THF seco se enfrió a un baño de enfriamiento hecho a partir de de usando hielo el baño se estabiliza a alrededor de a y se trató con seguido por añadida en porciones pequeñas durante 15 La mezcla de reacción se dejó calentar a durante 2 horas por y después se enfrió rápidamente mediante la adición de acetato de etilo y La fase orgánica se lavó con se secó y se evaporó para dar un sólido anaranjado que se purificó mediante ISCO usando como Las fracciones que contenían el producto deseado se concentraron para dar el material del de como un sólido LC LCMS calculado para Ci7Hi3BrCl03 encontrado bromoimidazo Un recipiente sellable se cargó con e IPA 324 La mezcla de reacción se calentó en un baño de aceite a durante 6 horas y después se calentó en el microondas a durante 1 La mezcla de reacción se dejó reposar durante 1 hora y el material insoluble se filtró y se enjuagó con MeOH para dar el producto deseado como un sólido café de LC LCMS calculado para Ci9Hi2BrCIN302S encontrado RMN 400 d J J metoxiimidazo A una solución agitada de en DCM 622 y metanol 247 se le añadió metóxido de sodio La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h 15 min mientras se monitoreaba mediante TLC de La mezcla de reacción se enfrió rápidamente con 1N y se extrajo con La fase orgánica se lavó con se secó se filtró y se concentró hasta la El residuo se trituró con MeOH y el material sólido se se enjuagó con MeOH y se succionó hasta la sequedad para dar el compuesto deseado como un sólido café de LC LCMS calculado para C20H15CIN3O3S encontrado 400 d J J 6 OH Una solución agitada de clorobenzof y pentamet ilbenceno en DCM bajo atmósfera de N2 se enfrió a después de lo cual se añadió por goteo durante 4 minutos tricloruro boro La reacción se monitoreó mediante TLC usando de EtOAc como La mezcla de reacción se agitó a durante 30 minutos después de lo cual se añadió una mezcla de agua y saturado y la mezcla se agitó hasta que la temperatura ambiente se obtuviera de baño de El precipitado sólido se filtró y se enjuagó con éter dietílico y luego se dejó secar durante la noche para dar el material del título de como un sólido El filtrado se extrajo con La fase orgánica se lavó con se secó y se concentró hasta la El residuo se purificó mediante ISCO usando como Las fracciones que contenían el producto deseado se concentraron para dar el material del título de como un sólido LC LCMS calculado para C13H9CIN3O3S encontrado RMN 400 J J J Ejemplo A un matraz de fondo redondo de 100 mL secado con llama que contenía metoxi imidazo benzof 25 y feni 11iazol en THF seco se le añadió trif butilfosf ina La solución resultante se cargó con una solución de ADDP en THF añadida por goteo durante 30 minutos por medio de una bomba de Después de agitar durante la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y después se lavó con HCl agua y La fase orgánica se secó y después se concentró hasta la El residuo se purificó mediante ISCO usando 0 a de éter dietílico en Las fracciones que contenían el producto deseado se concentraron para dar el material del título como un sólido beige de LC LCMS calculado para C23H16CIN4O3S2 encontrado RMN 400 d ppm J J J Ejemplo 38 benzo Una solución de et Synthetic en se trató con carbonato de potasio anhidro en polvo añadido todo de una La mezcla resultante se agito al vacío durante 10 minutos y después se lavó con El matraz de reacción se puso en un baño de agua y se trató con bromuro de bencilo añadido por goteo durante 15 La mezcla resultante se agitó después a durante 18 El sólido que se formó se filtró y se lavó con El filtrado se evaporó al vacío y el aceite residual se diluyó con acetato de etilo se lavó con ácido clorhídrico N bicarbonato de sodio saturado y Después de secar sobre sulfato de magnesio la evaporación del solvente dio un jarabe La cromatografía en gel de sílice x 13 elución con tolueno acetato de dio g de del material del título como un sólido LC H RMN 600 d J J 3 J OBn Una solución de 5 en diclorometano se enfrió a y se trató con una solución de hidruro de diisobutilaluminio en tolueno añadida por goteo durante 20 La mezcla resultante se agitó después a durante 3 La mezcla de reacción se enfrió rápidamente mediante la adición cuidadosa de metanol añadido por goteo durante 15 seguida por ácido clorhídrico 4 N añadido por goteo durante 15 Después se retiró el baño de enfriamiento y se añadió un adicional de 80 mL de ácido clorhídrico 4N durante 10 y la mezcla se agitó vigorosamente a durante 4 La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo se lavó con se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se evaporó al El aceite resultante se sometió a cromatografía en gel de sílice x 10 elución con para dar g de del material del título como un sólido amarillo LC HRMS calculado para C14H13O3 encontrado RMN 600 d J J 6 OBn Una solución de en se trató con carbonato de cesio anhidro en polvo añadido todo de una La mezcla resultante se agitó al vacío durante 10 minutos y después se enjuagó con El matraz de reacción se puso en un baño de agua y se trató con cloroacetona añadida por goteo durante 10 La mezcla resultante se agitó después a durante 18 h quedó aldehido de partida por tic y formación del aldehido alquilado La mezcla de reacción se mantuvo entonces al vacio durante 15 minutos para retirar cualquier cloroacetona que no hubiera reaccionado y luego se lavó con Después se añadió carbonato de cesio anhidro y la mezcla se calentó a y se agitó durante 40 h añadió más carbonato de 1 después de 24 h y 32 hasta completar la conversión del aldehido alquilado intermedio en el benzofurano como se monitores por El sólido se filtró y se lavó con El filtrado se evaporó al vacío y el aceite residual se diluyó con acetato de etilo se lavó con ácido clorhídrico N bicarbonato de sodio saturado y Después de secar sobre sulfato de magnesio la evaporación del solvente dio un jarabe La cromatografía en gel de sílice x 12 elución con de dio g de del benzofurano del título como un sólido amarillo La recristalización a partir de una mezcla de acetato de etilo y hexano dio prismas incoloros LC HRMS calculado para C17H15O3 encontrado RMN 600 d J J a bromómetanona OBn Un matraz de tres cuellos de 250 mL se equipa con una varilla de agitación magnética y se purga con una atmósfera de y luego se carga con tetrahidrofurano anhidro seguido por mL de una solución 1M de de litio en La mezcla se enfrió a y se trató con una solución de mmol en tetrahidrofurano añadida por goteo durante 10 La mezcla resultante se agitó después a durante 45 Después se añadió clorotrimetilsilano por goteo durante 5 min y la solución resultante se agitó a durante otros 20 El baño de enfriamiento se retiró después y la mezcla se dejó calentar a la temperatura ambiente durante 30 La mezcla de reacción se enfrió después rápidamente por la adición a una solución fría de acetato de etilo bicarbonato de sodio saturado y La fase orgánica se secó rápidamente sobre sulfato de magnesio anhidro y se evaporó al vacío para dar el éter silil enólico como un aceite que se con tolueno El éter silil enólico fue luego disuelto en tetrahidrofurano seco enfriado a y tratado con bicarbonato de sodio sólido seguido por bromosuccinimida añadida en porciones pequeñas durante 10 La mezcla de reacción se dejó calentar a durante 2 h y después se enfrió rápidamente mediante la adición de acetato de etilo y bicarbonato de sodio La fase orgánica se lavó con se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se evaporó para dar un aceite La cromatografía en gel de sílice x 12 elución con tolueno acetato de dio g de la bromometilcetona del título como un sólido La recristalización a partir de acetato de etilo y hexano dio prismas amarillo pálido de LC HRMS calculado para encontrado 600 d J J bromoimidazo Una mezcla de bromoetanona y en isopropanol se calentó en un matraz de presión equipado con una varilla de agitación magnética a durante 20 h 5 después de 20 min y luego formación de un precipitado después de 2 La mezcla enfriada se transfirió después a cinco frascos para microondas de 20 mL y después se calentó en un aparato de microondas hasta durante 20 Cada frasco fue luego diluido con diclorometano lavado 0 con bicarbonato de sodio saturado y salmuera secado sobre sulfato de magnesio Las fracciones se combinaron y se concentraron al La cromatografía del sólido residual en gel de sílice x 10 elución lenta con dio g del 5 imidazotiadiazol del título contaminado con un poco de El material sólido se trituró con acetato de etilo se se lavó con acetato de etilo y se secó al vacío para dar g de de imidazotiadiazol del título puro como 0 un sólido blanquecino que se usó como tal para la siguiente LC HRMS calculado para i9Hi3BrN302S encontrado H RMN 600 d J J 38F metoxiimidazo OBn Una solución de bromoimidazo en una mezcla de diclorometano y metanol se trató a con mL de una solución al en peso de metóxido de sodio en metanol añadida en una Se añadió más metanol y la mezcla se agitó durante 40 La mezcla de reacción se enfrió rápidamente mediante la adición de 40 mL de ácido clorhídrico 1N seguida por 10 mi de bicarbonato de sodio El solvente se evaporó bajo presión reducida y el residuo se diluyó con diclorometano se lavó con se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se evaporó al La cristalización del residuo sólido blanco a partir de dicloroetano dio g del material del título como un sólido La cromatografía de los licores madre en gel de sílice x 10 elución con diclorometano acetato de dio otros g de producto total LC HRMS calculado para 0907 encontrado 600 d J Hz y J OH Una mezcla de metoxiimidazo y pentametilbenceno en diclorometano se enfrió a bajo una atmósfera de nitrógeno y luego se trató inmediatamente con mL de una solución 1 M de tricloruro de boro en diclorometano añadida por goteo durante 3 La mezcla resultante se agitó a durante 1 La mezcla de reacción se enfrió después rápidamente mediante la adición de una solución de bicarbonato de sodio en agua añadida en una Se retiró el baño de enfriamiento y la mezcla resultante se agitó a la temperatura ambiente durante 1 El sólido formado se se lavó sucesivamente con agua y diclorometano La torta del filtro se dejó remover con etanol anhidro y luego se succionó hasta la El sólido blanco obtenido se secó después al vacío durante pocos días sobre metóxido de fósforo hasta un peso constante para dar g de del material del El filtrado y lavados combinados orgánica y acuosa de la etapa de se diluyeron con diclorometano y se agitaron en un baño de agua tibia hasta que la fase orgánica fuera clara sin sólidos aparentes en La fase orgánica se se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se filtró rápidamente mientras aún estaba El filtrado se evaporó y el residuo y se trituró con tolueno El sólido se recogió por filtración y se lavó con tolueno para después de secar al g de de rendimiento de material del título como un sólido LC HRMS calculado para C13H10N3O3S encontrado RM 600 d J J Ejemplo Una mezcla de trifenilfosfina y en un matraz de 50 mi se mantuvo al vacío durante 10 min y después se purgó con Se añadió tetrahidrofurano seco y la mezcla resultante se calentó lentamente y se mantuvo en un baño ultrasónico durante 5 La mezcla enfriada se trató a con una solución de azodicarboxilato de diisopropilo en tetrahidrofurano añadida por goteo durante 1 La mezcla se agitó después a durante 4 La mezcla de reacción transparente se enfrió rápidamente mediante la adición de diclorometano y bicarbonato de sodio saturado La fase orgánica se lavó con se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentró al La cromatografía del residuo en de sílice x 12 elución con diclorometano acetato de seguida por la cristalización de la fracción deseada a partir de acetato de etilo dieron g de del material del título como un sólido LC HRMS calculado para C23H17N4O3S2 encontrado H RMN 400 d J J 7 Ejemplo 39 metilimidazo Una mezcla de bromoetanona y en un matraz de presión de 150 se calentó a La mezcla era casi homogénea después de 30 de calentamiento y se precipitó de nuevo después de 40 La mezcla se calentó durante un total de 48 La mezcla de reacción enfriada se diluyó con diclorometano se lavó con bicarbonato de sodio salmuera y se secó sobre sulfato de magnesio La evaporación de un sólido café anaranjado que se sometió a cromatografía en gel de sílice 9 c elución con de para dar el material del título como un sólido café El sólido se hirvió con acetato de etilo parcialmente y se dejó reposar a temperatura ambiente durante 2 Los cristales se recogieron por filtración y se secaron durante la noche al vacío para dar el material del título como agujas cafés amarillo LC HRMS calculado para C23H20N3O3 encontrado RMN 400 d 2 J 1 1 J 1 2 2 J 2 J 1 1 Una solución de iridazina en una mezcla de diclorometano y metanol en un matraz de 1 L se hidrogenó sobre de paladio sobre carbón es 30 mg y bajo 1 atmósfera de hidrógeno durante 6 La mezcla de reacción se mantuvo al vacío durante 2 min y luego se lavó con El catalizador se filtró y se lavó con tibio 100 y el filtrado combinado se concentró bajo presión El residuo amarillo se hirvió con dicloroetano y se dejó reposar a temperatura ambiente durante 18 El sólido se filtró metanol por y se secó al vacío a durante 12 h para dar el material del título de de un sólido LC RMN 400 d J J J J J Ejemplo En un matraz de fondo redondo de 100 una suspensión de y de en DMF se purgó al vacío y N2 durante 10 La reacción se trató con carbonato de potasio y se agitó a durante 18 después se diluyó con DCM y se lavó con agua salmuera Las capas orgánicas se secaron sobre sulfato de magnesio se filtraron y se El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice x 10 a de EtOAc en para dar el material del título impuro El sólido se trituró en acetato de etilo caliente para proporcionar el material del título puro LC HRMS calculado para C26H21N4O3S encontrado RMN 400 d 2 J 1 1 J 1 1 1 3 J 1 2 1 Ejemplo 40 S Un recipiente de presión sellable de 350 mL se cargó con tiosemicarbazida y dioxano seco y la mezcla se enfrió a bajo una atmósfera de A esta mezcla de agitación rápida se le añadió lentamente una solución de ácido de Tetrahedron 981 en dioxano A la mezcla resultante se le añadió POCI3 por después se retiró el baño de enfriamiento y la suspensión blanca espesa se agitó a temperatura ambiente durante 1 El recipiente fue luego sellado y la mezcla se calentó a de baño de durante 5 La mezcla enfriada se agitó a temperatura ambiente durante 14 h esto fue por conveniencia únicamente y es y después el sobrenadante de dos fue decantado y concentrado bajo presión La fase inferior se vertió lentamente en agua helada y después el concentrado también fue Esta mezcla se agitó rápidamente hasta que fuera una solución esencialmente homogénea y después se basificó a pH usando NaOH acuoso al La suspensión resultante se filtró y la torta del filtro se lavó con agua la LC de este sólido beige mostró que contenía sólo una traza del producto por lo que ya no se investigó El filtrado combinado se extrajo después con EtOAc y la fase orgánica se secó y se evaporó para dar un sólido crema que era el producto esencialmente puro de acuerdo con LC y Este material se usó tal cual sin purificación Una muestra analítica se purificó mediante cromatografía por vaporización para dar un sólido LC calculado para C4H6FN3S RMN d J J LC R 407 y 202 se suspendieron en propanol 130 y se calentaron a durante 18 Después de 5 la solución se volvió Un precipitado estuvo presente después de la agitación Las mezclas enfriadas fueron transferidas a frascos para microondas de 20 mL y después calentadas 30 minutos a Las mezclas fueron diluidas en CH2CI2 y lavadas una vez con una vez con se secaron sobre anhidro y se El residuo se purificó en ISCO usando una columna de 40 g Gold El producto crudo se adsorbió sobre Las fracciones se recogieron y el sólido anaranjado obtenido se trituró dos veces en ACN para dar el material del título como un sólido amarillo LC MS calculado para C22H19FN3O3S RMN d ppm J J J 1 J J Una mezcla de S y pentametilbenceno en diclorometano 373 se enfrió a bajo atmósfera de nitrógeno y luego se trató inmediatamente evitar con tricloruro de boro M en diclorometano añadido por goteo durante 3 La mezcla resultante se agitó a durante 1 La mezcla de reacción se enfrió rápidamente mediante la adición de una solución de bicarbonato de sodio en agua añadida en una El baño de enfriamiento se retiró y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 El sólido formado se se lavó sucesivamente con agua y diclorometano La torta de filtro se remojó con etanol anhidro y se secó por El sólido blanco obtenido se secó al vacío en P2O5 durante 36 LC MS calculado para C15H13FN3O3S d ppm a J J Ejemplo A una mezcla de y trifenilfosfina bajo se le añadió THF seco A la solución ámbar claro resultante se le añadió una solución de DIAD en THF seco por goteo durante 2 horas para dar una solución amarillo Después de agitar a temperatura ambiente durante 30 min la LC mostró que no quedaba material de Los materiales volátiles fueron luego retirados bajo presión reducida para dar una bomba La cromatografía por vaporización de dio el producto como una goma casi Esta goma se trituró con un volumen mínimo de MeOH y la solución resultante se filtró y la torta del filtro se lavó con un volumen mínimo de MeOH y luego se secó al vacío para dar el material del título de como un sólido La muestra de presentación se liofilizó a pa4rtir de como un sólido LC HRMS calculado para C25H20FN4O3S2 encontrado 400 d J J J J BIOLOGIA El término de indica un inhibidor de agregación plaquetaria que se une a PAR4 e inhibe el corte señalización de la actividad de PAR4 se reduce de una manera dependiente de dosis en al menos en comparación con tal actividad en una célula de La célula de control es una célula que no ha sido tratada con el La actividad de PAR4 se determina por cualquier método estándar en la incluyendo aquellos descritos en la presente ejemplo movilización de calcio en células que expresan agregación ensayos de activación plaquetaria que por movilización de liberación de o o modelos de trombosis y El término de también incluye un compuesto que inhibe tanto PARI como Es deseable encontrar compuestos con características adecuadas y mejoradas en comparación con los agentes en una o más de las siguientes categorías que se dan como y no se intenta que sean propiedades incluyendo biodisponibilidad vida media y propiedades requisitos de factores que reducen las características de pico a mínimo de concentración en sangre factores que incrementan la concentración de fármaco activo en el factores que reducen la probabilidad de interacciones factores que reducen el potencial de efectos secundarios incluyendo selectividad versus otros objetivos índice terapéutico mejorado con menos propensión a y factores que mejoran costos de fabricación o El término según se usa en la significa un sea de origen natural o derivado Los compuestos pueden por moléculas orgánicas moléculas orgánicas de origen moléculas de ácido moléculas de ácido nucleico péptidas y componentes y derivados de los Según se usa el término abarca todas las especies de Según se usa en la el término se refiere a cualquier organismo humano o no humano que pudiera beneficiarse potencialmente de tratamiento con un antagonista de Ejemplos de sujetos incluyen seres humanos de cualquier edad con factores de riesgo de enfermedad o pacientes que ya hayan experimentado un episodio de enfermedad Los factores de riesgo comunes pero no están limitados sexo tabaquismo o historial de elevación de elevación de colesterol total o colesterol En algunas el sujeto es una especie que tiene un repertorio de receptores plaquetario Según se usa en la el término de receptores plaquetarios significa que un sujeto expresa PARI y PAR4 en plaquetas o sus Ejemplos de sujetos que tienen un repertorio de receptores plaquetarios dobles incluyen seres primates no humanos y En otras el sujeto es una especie que tiene un repertorio de receptores plaquetarios Según se usa en la el término de receptores plaquetarios significa que un sujeto expresa PAR3 y PAR4 en plaquetas o sus Ejemplos de sujetos que tienen un repertorio de receptores plaquetarios doble incluyen roedores y Según se usa en la o cubren el tratamiento de un estado de enfermedad en un particularmente el tratamiento de un estado de enfermedad en un particularmente en un e inhibir el estado de es detener su desarrollo aliviar el estado de es causar regresión del estado de Según se usa en la o cubren el tratamiento preventivo de un estado de enfermedad en un particularmente un enfocado a reducir la probabilidad de la ocurrencia de un estado de enfermedad Los pacientes se seleccionan para terapia preventiva con base en factores que se sabe incrementan el riesgo de sufrir un estado de enfermedad clínica en comparación con la población Las terapias de pueden dividirse en prevención primaria y prevención La prevención primaria se define como tratamiento en un sujeto que aún no se ha presentado con un estado de enfermedad mientras que la prevención secundaria se define como prevenir una segunda ocurrencia del mismo o diferente estado de enfermedad Según se usa en la de cubre terapias que reducen la incidencia de desarrollo de un estado de enfermedad las terapias de prevención primaria y secundaria son ejemplos de reducción de terapéuticamente intenta incluir una cantidad de un compuesto de la presente invención que es efectiva cuando se administra sola o en combinación para inhibir antagonizar PAR4 prevenir o tratar los trastornos listados en la Cuando se aplica a una el término se refiere a cantidades combinadas de los ingredientes activos que se traducen en el efecto preventivo o ya sea administradas en en serie o El término según se usa en la se refiere a la formación o presencia de un trombo dentro de un vaso sanguíneo que puede causar isquemia o infarto de tejidos irrigados por el El término según se usa en la se refiere al bloqueo repentino de una arteria por un coágulo o material extraño que se ha llevado a su sitio de alojamiento por el torrente El término según se usa en la se refiere a la obstrucción de un vaso sanguíneo con material trombótico llevado por el torrente sanguíneo desde el sitio de origen para taponar otro El término implica trastornos tanto trombóticos como El término según se usa en la presente incluye trastornos tromboembólicos cardiovasculares trastornos tromboembólicos cardiovasculares venosos o cerebrovasculares y trastornos tromboembólicos en las cámaras del corazón o en la circulación El término según se usa en la presente también incluye trastornos específicos seleccionados pero no limitados angina inestable u otros síndromes coronarios fibrilación infarto de miocardio primero o muerte repentina ataque isquémico accidente enfermedad arterial oclusiva trombosis trombosis venosa embolia trombosis arterial trombosis arterial embolia embolia embolia pulmonar y trombosis que resulta de dispositivos o procedimientos médicos en los cuales la sangre es expuesta a una superficie artificial que promueve Los implantes o dispositivos médicos pero no están limitados válvulas válvulas catéteres oxigenadores de puertos de acceso dispositivos de ayuda ventricular o corazones artificiales o cámaras e injertos de Los procedimientos pero no están limitados derivación intervención coronaria percutánea y En otra el término incluye síndrome coronario accidente trombosis venosa profunda y embolia En otra la presente invención proporciona un método para el tratamiento de un trastorno en donde el trastorno tromboembólico se selecciona de angina un síndrome coronario fibrilación infarto de ataque isquémico accidente enfermedad arterial oclusiva trombosis trombosis de venas embolia trombosis arterial trombosis arterial embolia embolia embolia pulmonar y trombosis que resulta de dispositivos o procedimientos médicos en los cuales la sangre es expuesta a una superficie artificial que promueve En otra la presente invención proporciona un método para el tratamiento de un trastorno en donde el trastorno tromboembólico se selecciona de síndrome coronario accidente trombosis fibrilación atrial y trombosis que resulta de implantes y dispositivos En otra la presente invención proporciona un método para la profilaxis primaria de un trastorno en donde el trastorno se selecciona de angina un síndrome coronario fibrilación infarto de ataque isquémico accidente enfermedad arterial oclusiva trombosis trombosis de venas embolia trombosis arterial trombosis arterial embolia embolia embolia pulmonar y trombosis que resulta de dispositivos o procedimientos médicos en los cuales la sangre es expuesta a una superficie artificial que promueve En otra la presente invención proporciona un método para la profilaxis primaria de un trastorno en donde el trastorno tromboembólico se selecciona de síndrome coronario accidente trombosis venosa y trombosis que resulta de implantes o dispositivos En otra la presente invención proporciona un método para la profilaxis secundaria de un trastorno en donde el trastorno tromboembólico se selecciona de angina un síndrome coronario fibrilación infarto de ataque isquémico accidente enfermedad arterial oclusiva trombosis trombosis de venas embolia trombosis arterial trombosis arterial embolia embolia embolia pulmonar y trombosis que resulta de implantes dispositivos o procedimientos en los cuales la sangre es expuesta a una superficie artificial que promueve En otra la presente invención proporciona un método para la profilaxis secundaria de un trastorno en donde el trastorno tromboembólico se selecciona de síndrome coronario accidente fibrilación atrial y trombosis El término según se usa en la se refiere a accidente cerebrovascular embólico o accidente cerebrovascular aterotrombótico que se origina a partir de trombosis oclusiva en la carótida carótida interna o arterias Se hace notar que trombosis incluye oclusión de vasos después de una y reoclusión durante o después de angioplastia coronaria transluminal Los trastornos tromboembólicos pueden originarse de condiciones que pero no están limitadas a cirugía o complicaciones inmovilización fibrilación trombofilia efectos de medicamentos u y complicaciones de Los trastornos tromboembólicos están asociados frecuentemente con pacientes con Los factores de riesgo para aterosclerosis incluyen pero no están limitados a género trastornos de lípidos y diabetes Los factores de riesgo para aterosclerosis son al mismo tiempo factores de riesgo para complicaciones de es trastornos En forma la fibrilación arterial frecuentemente está asociada con trastornos Los factores de riesgo para fibrilación arterial y trastornos tromboembólicos subsecuentes incluyen enfermedad enfermedad cardiaca enfermedad de válvulas mitrales no enfermedad cardiovascular enfermedad pulmonar crónica y una variedad de anormalidades cardiacas misceláneas así como La diabetes mellitus frecuentemente está asociada con aterosclerosis y trastornos Los factores de riesgo para el tipo 2 más común incluyen pero no están limitados a historial inactividad glucosa en ayunas o prueba de tolerancia a glucosa alteradas historial de diabetes mellitus gestacional o parto de un bajo colesterol HDL y síndrome de ovarios La trombosis ha estado asociada con una variedad de tipos de por cáncer cáncer de tumores cáncer cáncer cáncer de malignidades gastrointestinales y linfoma de Hodgkins o no Estudios recientes sugieren que la frecuencia de cáncer en pacientes con trombosis refleja la frecuencia de un tipo de cáncer particular en la población et Medicine 78 Levine et Engl 334 et 722 En los cánceres más comunes asociados con trombosis en hombres son cáncer de cerebral y y en mujeres son cáncer de ovarios y La tasa observada de tromboembolia venosa en pacientes de cáncer es Las tasas variables de VTE entre diferentes tipos de tumores están más probablemente relacionadas con la selección de la población de Los pacientes de cáncer en riesgo de trombosis pueden poseer cualesquiera o todos de los siguientes factores de la etapa del cáncer presencia de la presencia de catéteres venosos cirugía y terapias anticáncer incluyendo y hormonas y fármacos De esta es una práctica clínica común dosificar pacientes que tengan tumores avanzados con heparina o heparina de bajo peso molecular para prevenir trastornos Un número de preparaciones de heparina de bajo peso molecular han sido aprobadas por la FDA para estas El término según se usa en la significa cualquier que contiene al menos un agente terapéutica o biológicamente activo y es adecuado para su administración al Cualquiera de estas formulaciones puede prepararse mediante métodos bien conocidos y aceptados de la por The Science and Practice of 20a Mack Publishing PA La invención incluye administrar a un sujeto una composición farmacéutica que incluye un compuesto que se une a PAR4 e inhibe el corte señalización de PAR4 en la presente un de o La composición farmacéutica se administra usando métodos conocidos en la De el compuesto se administra por tópicamente o por intramuscularmente e El compuesto se formula opeionalmente como un componente de un coctel de fármacos terapéuticos para tratar un trastorno En una modalidad la composición farmacéutica se administra Los compuestos terapéuticos descritos en la presente se formulan en composiciones farmacéuticas utilizando métodos Por un antagonista de PAR4 se formula en una cápsula o una tableta para administración Las cápsulas pueden contener cualquier material farmacéuticamente aceptable estándar tal como gelatina o Las tabletas pueden formularse de acuerdo con procedimientos convencionales al comprimir mezclas de un compuesto terapéutico con un portador sólido y un Ejemplos de portadores sólidos incluyen almidón y bentonita de El compuesto se administra en forma de una tableta de cubierta dura o una cápsula que contiene un por lactosa o una carga convencional y un agente de Otras formulaciones incluyen un esponja resorbible o Estas formulaciones se producen usando métodos bien conocidos en la Las composiciones de la invención también son útiles para administración tal como intramuscular e Ejemplos de formulaciones adecuadas para administración parenteral incluyen soluciones acuosas del agente activo en una solución salina una solución de glucosa al u otro excipiente farmacéuticamente aceptable Los agentes de solubilización estándares tales como PVP o ciclodextrinas también se utilizan como excipientes para el suministro de los compuestos La dosis preferida del antagonista de PAR4 es una dosis biológicamente Una dosis biológicamente activa es una dosis que inhibirá el corte señalización de PAR4 y tendrá un efecto el antagonista de PAR4 tiene la capacidad de reducir la actividad de PAR4 en al menos o más de debajo de los niveles de control no Los niveles de PAR4 en plaquetas se miden mediante cualquier método conocido en la por ensayo de unión a agregación ensayos de activación plaquetaria expresión de con Western blot o análisis ELISA usando anticuerpos sensibles a corte en Como la actividad biológica de PAR4 se mide al evaluar la señalización celular provocada por PAR4 movilización de calcio u otros ensayos de segundos En algunas una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto PAR4 es de preferencia alrededor de menos de 100 50 10 5 1 o menos de 1 En una modalidad la cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto PAR4 es de menos de 5 En una modalidad más la cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto PAR4 es menos de 1 Las dosis efectivas según se reconoce por aquellos expertos en la dependiendo de la ruta de administración y uso de los La actividad de los antagonistas de PAR4 de la presente invención puede medirse en una variedad de ensayos in Ejemplos de ensayos se muestran en los ejemplos El ensayo FLIPR es un ejemplo de ensayo in vitro para medir la actividad de los antagonistas de PAR4 de la presente En este movilización de calcio intracelular se induce en células que expresan PAR4 por un agonista de PAR4 y la movilización de calcio se por ejemplo El ensayo FLIPR es también un ejemplo de ensayo in vitro para medir la actividad agonista de péptidos agonistas de Véase ejemplo AYPGKF ID es un antagonista de PAR4 Un agonista de PAR4 alternativo es Como se muestra en el ejemplo B ID fue validado como un agonista de PAR4 en el ensayo Una comparación colateral de los valores IC50 de compuestos se llevó a cabo usando AYPGKF ID versus Los resultados demostraron una fuerte correlación entre los dos ID tiene actividad agonista mejorada en comparación con AYPGKF ID con una EC50 que es más 10 veces más baja que la EC50 para AYPGKF ID en el ensayo Los péptidos agonistas de PAR4 con potencia mejorada hacen posible un ensayo más robusto con sensibilidad y especificidad ID puede sintetizarse usando métodos bien conocidos por aquellos expertos en la como se muestra en los ejemplos El ensayo FLIPR también se puede usar como un ensayo de control para probar la actividad agonista o actividad antagonista de PARI en una línea celular que exprese tanto PARI como La actividad antagonista de PARI puede probarse por la capacidad del compuesto para inhibir movilización de calcio inducida por el péptido agonista de PARI SFFLRR ID u otros péptidos agonistas de Los compuestos de la presente invención pueden probarse in vitro para su capacidad para inhibir la agregación plaquetaria inducida por como se muestra en el ejemplo un producto proteolítico de que ya no interactúa con corta y activa selectivamente PAR4 et Pathway of platelet aggregation ediated by glycoprotein Biol La agregación plaquetaria puede en un formato de ensayo de agregación con microplaca de 96 pocilios o usando un agregómetro plaquetario El ensayo de agregación también se puede emplear para probar la selectividad del compuesto para inhibir agregación plaquetaria inducida por péptidos agonistas de péptido agonista de ADP o análogo de tromboxano Un ensayo de agregación plaquetaria para medir la actividad agonista de péptidos agonistas de PAR4 se muestra en el ejemplo El ejemplo D es un ensayo de agregación plaquetaria inducida por La activa tanto PARI como La capacidad de un antagonista de PAR4 selectivo de la presente en el compuesto del ejemplo 3 para inhibir la agregación plaquetaria se midió usando un agregómetro óptico La inhibición de la agregación plaquetaria inducida por trombina por el compuesto del ejemplo 3 se muestra en las figuras 1A y Los datos por primera vez en la que un antagonista de PAR4 solo puede inhibir de manera efectiva la agregación El grado de inhibición plaquetaria por el antagonista de PAR4 es al menos comparable con lo que se ha descrito previamente para antagonistas de El ejemplo E es un ensayo de agregación plaquetaria inducida por factor Las condiciones en este ensayo imitan los efectos fisiológicos durante la formación de En este la agregación plaquetaria en PRP humano fue iniciada por la adición de factor tisular y El factor el iniciador de la cascada de coagulación es altamente elevado en la placa aterosclerótica La exposición de sangre a factor tisular en el sitio aterosclerótico desencadena una robusta generación de trombina e induce la formación de trombos La actividad de los antagonistas de PAR4 de la presente invención también se puede medir en una variedad de ensayos in Ejemplos de mamíferos que pueden proporcionar modelos de trombosis y hemostasis para probar la eficacia de los antagonistas de PAR4 de la presente invención como agentes antitrombóticos pero no están limitados cobayos y Los modelos de eficacia relevantes pero no están limitados trombosis arterial carótida inducida trombosis de arteria carótida inducida por FeCl3 y trombosis por derivación Modelos de tiempo de sangrado tiempos de sangrado renal y otras mediciones de tiempo de sangrado pueden usarse para evaluar el riesgo de hemorragia de los agentes antitrombóticos descritos en la presente ENSAYOS Materiales Péptidos agonistas de PARI y PAR4 SFFLRR ID es un péptido agonista selectivo de PARI de alta receptor Seminare in Thrombosis and 22 Los péptidos agonistas de PAR4 AYPGKF ID y ID fueron ID mostró actividad agonista de PAR4 mejorada sobre AYPGKF ID en el ensayo FLIPR de mM para ID y 61 mM para AYPGKF ID y en ensayo de agregación plaquetaria lavado de mM para ID y 13 mM para ID Células que expresan PAR4 Células HEK293 que expresaban establemente PAR4 fueron generadas mediante un método estándar de transfección de un vector de expresión de de F2R23 humano o por RAGE de Athersys y seleccionados con base en la expresión de proteínas PAR4 de expresión de Esas células demostraron respuestas funcionales a una elevación de calcio intracelular inducida por péptido agonista de PAR4 usando Imaging Píate Molecular Devices Corp Estas células expresan PARI endógeno y pueden provocar señal de calcio después de estimulación con péptido agonista de Las células crecieron en Modified Médium de de 3 de puromicina y 25 nM de a con de Preparación de plasma rico en plaquetas Sangre humana se recolectó en citrato de sodio al a una relación de 1 mi por 9 mi de El plasma rico en plaquetas fue aislado por centrifugación a 170 g durante 14 Preparación de plaquetas lavadas Sangre humana se recogió en ACD mM de citrato 78 de ácido 110 M de pH a una relación de por 10 mi en PRP Fue aislado por centrifugación a 170 g durante 14 minutos y las plaquetas se sedimentaron más por centrifugación a g durante 6 Las plaquetas fueron lavadas una vez con 10 mi de ACD que contenía 1 de albúmina de suero Las plaquetas fueron resuspendidas a en regulador de pH de Tyrode mM de 2 mM de mM de 1 mM de 5 mM de 20 mM de pH Ejemplo A Ensayo FLIPR en celulas HEK293 que expresan PAR4 para actividad La actividad de los antagonistas de PAR4 de la presente invención se probó en células que expresaban PAR4 al monitorear la movilización de calcio intracelular inducida por ID usando FDSS6000 por También puede llevarse a cabo ensayos de control para actividad agonista y actividad antagonista de células del clon de PAR4 EBNA de HEK293 fueron colocadas en placas 24 horas antes del experimento en placas de fondo negras recubiertas con lisina de 384 pocilios Las células fueron colocadas a en 20 de medio de crecimiento y se incubaron a con de CO2 durante la En el momento del el medio se reemplazó con 40 de lx de solución salina de pH regulado de Hank 10 Mm de y 20 m? de compuesto de prueba también diluido en regulador de pH lx HBSS se añadió a varias concentraciones y de concentración final de DMSO en el FDSS para medición del Las células fueron luego incubadas durante 30 min a temperatura ambiente seguidas por la adición de 20 m? de péptido agonista para medición de antagonistas en el El péptido agonista ID para el análisis de antagonista de PAR4 o SFFLRR para el ensayo de control de PARI se probaron rutinariamente para asegurar una respuesta a EC50 en el ensayo mM para Ly ID y 600 nM para Ejemplo B Validación de NH2 ID como un agonista de PAR4 Para validar ID como un agonista de PAR4 en el ensayo se llevó a cabo una comparación colateral de los valores de 180 compuestos usando AYPGKF ID versus Los resultados demostraron una fuerte correlación entre los dos ensayos de correlación de clasificación de Spearman rho La relevancia del ensayo FLIPR en las células HEK293 se confirmó por una conectividad de ensayo directo al ensayo de plaquetas Los valores IC50 de compuestos del ensayo FLIPR de AYPGKF estuvieron fuertemente relacionados con aquellos del ensayo de agregación plaquetaria lavado con AYPGKF de correlación de clasificación de Spearman rho Resultados similares se obtuvieron comparando los datos de FLIPR y de plaquetas lavadas usando Ejemplo C Ensayos de agregación plaquetaria inducida por gamma trombina para actividad La capacidad de los compuestos de la presente invención para inhibir la agregación plaquetaria inducía por se probó en un formato de ensayo de agregación de microplaca de 96 PRP o suspensión de plaquetas lavadas fue durante 5 minutos a temperatura ambiente con concentraciones variables de La agregación fue iniciada por nM de gamma trombina Essex que se tituló diariamente para lograr de agregación Refludan a 1 se añadió a la muestra de gamma trombina para evitar la activación de PARI inducida por contaminación con trombina La placa fue después puesta en un lector de placa Plus de Molecular Devices a La placa se mezcló durante 10 segundos antes de la primera lectura y 50 segundos entre cada lectura durante hasta 15 minutos a 405 Los datos fueron recabados con software La placa también incluía una muestra de control no tratada que sirvió como mientras que el regulador de pH que no contenía plaquetas fue la La agregación plaquetaria se determinó al restar la ODmax de la ODmin para el valor de agregación de En muestras la transmisión observada se restó del valor mínimo y luego se comparó con el valor de agregación de para determinar el porcentaje de Los valores IC50 se determinan usando software Excel Los ensayos de agregación también fueron empleados para probar la selectividad del compuesto contra otros receptores de plaquetas usando SFFLRR para colágeno para receptores de ADP para P2Y1 y P2Y12 y U46619 Ann para receptores de Ejemplo D Ensayos de agregación plaquetaria inducida por para actividad La capacidad del antagonista de PAR4 para inhibir la agregación plaquetaria inducida por se probó usando plaquetas lavadas El ejemplo 3 fue pre incubado con plaquetas lavadas durante 20 La agregación fue iniciada por la adición de nM de Essex a 300 de plaquetas lavadas a una velocidad de agitación de La agregación plaquetaria se monitoreó usando un agregómetro óptico y el área bajo la curva a 6 min fue La IC50 se calculó usando control de vehículo como de La IC50 para la inhibición de la agregación plaquetaria por el ejemplo 3 se calculó como de 5 nM 1A y Ejemplo E Ensayo de agregación plaquetaria inducida por factor tisular para actividad La capacidad de los antagonistas de PARI o PAR4 para inhibir la agregación plaquetaria inducida por trombina endógena puede ser probada en un ensayo de agregación conducido por factor La agregación es iniciada por la adición de CaCl2 y factor tisular humano lo cual se traduce en la generación de trombina a través de la activación de la vía de coagulación en el Los agentes anticoagulantes tales como inhibidor de tripsina de maíz Essex a 50 y FG también se añaden a la muestra para evitar la formación de coágulos de fibrina durante el tiempo del La agregación plaquetaria se monitorea usando instrumentación estándar que incluye un agregómetro óptico o agregómetro de Ejemplo F La siguiente tabla muestra los resultados obtenidos empleando varios compuestos de la invención probados en el ensayo FLIPR y el ensayo de agregación plaquetaria Como se indicó el ensayo un ensayo in mide la actividad antagonista de PAR4 de los compuestos probados como se describe en el ejemplo El ensayo un ensayo in vi mide el ensayo antagonista de PAR4 de los compuestos probados en presencia de proteínas de plasma y agonista de trombina como se describe en el ejemplo Ejemplo G Ensayos de agregación plaquetaria inducida por peptidos agonistas de PAR4 para actividad agonista de péptidos agonistas de La capacidad de los compuestos de la presente invención para inducir agregación plaquetaria se probó en un formato de ensayo de agregación de microplaca de 96 una suspensión de plaquetas lavadas con concentraciones variables de compuestos agonistas fue La agregación se inició por la adición de un péptido agonista de prueba La placa se puso después en un lector de placa Plus de Molecular Devices a La placa se mezcló durante 10 segundos antes de la primera lectura y 20 segundos entre cada lectura durante hasta 15 minutos a 405 Los datos fueron recabados con software La placa también incluía una muestra de control no tratada que sirvió como mientras que regulador de pH que no contenía plaquetas fue la La agregación plaquetaria se determinó restando la ODmax de la ODmin para el de valor de En muestras la transmisión observada fue restada del valor mínimo y luego comparada con el de valor de agregación para determinar el porcentaje de Los valores EDso se determinaron usando software Excel Ejemplo H Ensayo FLIPR en células HEK293 que expresan PAR4 para actividad agonista de péptidos agonistas de La actividad de los péptidos agonistas de PAR4 de la presente invención se probó en células que expresan PAR4 al monitorear movilización de calcio intracelular inducida por PAR4 usando FDSS6000 por células HEK293 que expresaban PAR4 humano fueron colocadas antes del experimento en placas de fondo negras recubiertas con sina de 96 pocilios o 384 pocilios Las células fueron puestas a o e incubadas a con de CO2 durante la En el momento del el medio fue reemplazado con lx solución salina de pH regulado de 10 mM de para los ensayos de 96 pocilios o 384 pocilios Las células fueron luego incubadas durante 30 minutos a temperatura ambiente seguidas por la adición de una concentración variable de péptido agonista para la medición en el Ejemplo I La siguiente tabla muestra los resultados obtenidos cuando varios péptidos fueron evaluados usando los métodos descritos en los ejemplos G y H 5 10 15 20 25 No Probado SÍNTESIS DE PÉPTIDOS AGONISTAS DE PAR4 Ejemplo AA Síntesis de péptidos en fase sólida usando el Advanced ChemTech Modelo Sintetizador y sintetizador de péptidos múltiples modelo 396W de Advance ChemTech La resina resina de Rink MBHA fue preparada usando el siguiente Resina de Rink MBHA mmol se cargó en un reactor de 200 mL y se puso en un sintetizador modelo 90 de Advanced La resina se sometió a los siguientes Lavado con 1 x 60 mL x 2 de piperidina en 1 x 60 mL x 5 de piperidina en 1 x 60 mL x 15 Lavados con 4 x 60 mL x 1 Lavados con 4 x 60 mL x 1 Acoplamiento Lavados con 4 x 60 mL x 1 Los acoplamientos se llevaron a cabo usando los reactivos en la siguiente La y HCTU fueron disueltas en A esto se le añadió el DIEA con La solución restante se agregó después a la resina desprotegida y se dejó mezclar durante 1 a horas hasta que se obtuviera una prueba de ninhidrina de Kaiser El grupo Fmoc fue retirado del residuo Pro usando las etapas 2 a 5 La resina amida de Rink MBHA fue suplementada en y 2 mL de la suspensión se añadieron a 88 pocilios en un sintetizador de péptidos múltiple modelo 396W de Advanced Una solución de en DMF se añadió a cada seguida por mL de DIC M en El bloque de reacción se remolinó durante 25 Las resinas de peptidilo fueron lavadas y desprotegidas como se describe o la adecuada se acopló como arriba a las resinas de peptidilo seguidas por lavado y remoción del grupo protector Fmoc como se indicó Los lavados finales fueron NMP luego DCM ambos 4 x 2 mL x 1 seguidos por una purga por nitrógeno de 10 minutos de las resinas de Los péptidos deseados fueron de sus resinas de peptidilo respectivas por tratamiento con una mezcla de corte de TFA como Una solución de se añadió a cada pocilio en el bloque de que se remolinó después durante 30 Esto se repitió una vez más y las soluciones de TFA de los pocilios fueron recogidas por presión positiva en frascos ubicados en un bloque de 96 frascos coincidente en el fondo del Los frascos se dejaron reposar de tal manera que el tiempo de contacto total con el coctel fuera de 80 Los frascos fueron concentrados en un hasta un volumen de aproximadamente mL que luego se añadió a éter diisopropílico y se agitó El frasco se mantuvo a durante 1 Los precipitados fueron sedimentados por centrifugación y los sobrenadantes fueron Los frascos se secaron en un durante 30 minutos para producir los péptidos típicamente en rendimientos de Los péptidos crudos se disolvieron directamente en agua y acetonitrilo y se filtraron en Los solventes fueron retirados en un para producir los péptidos crudos que se usaron tal Análisis HPLC de los péptidos Después de purificación por HPLC preparativa como se describió cada péptido fue analizado por analítica en un sistema de HPLC analítica Shimadzu o que consistía un controlador de sistema un un detector SPD10AV o o un detector de disposición de diodos Se usó uno de los siguientes una columna Luna 5 mM x 50 se usó y se llevó a cabo la elución usando el siguiente de B en A durante 10 fase móvil de fase móvil de Caracterización por espectrometría de masas Ejemplo BB Síntesis de péptidos en fase sólida simultánea de péptidos en un sintetizador de péptidos múltiple modelo de Advanced ChemTech La resina de amida de Rink g de una sustitución de se hinchó en final 8 La suspensión de resina se distribuyó a 8 pocilios en el bloque de reacción mL por El grupo fue luego retirado usando dos 5 y 15 minutos cada uno con de piperidina en DMF mL por La resina se lavó con NMP x mL x 1 Una solución M de y M de en NMP se añadió a la resina seguida por una solución de DIC M en NMP Las resinas se removieron durante 2 horas después de lo cual la resina se se lavó con NMP x mL x 1 Este ciclo se repitió hasta que el número de ciclos de acoplamiento automáticos necesario para ensamblar las secuencias peptídicas respectivas según se determina por la tabla de síntesis de secuencia El protocolo de síntesis por pasos detallado usado para una síntesis de péptido simultánea de típica se describe Este protocolo se adaptó para la síntesis simultánea de disposiciones de análogos que variaban de 4 a 96 por corrida Síntesis automática de péptidos agonistas de PAR4 Resina de MBHA de Repetir las etapas cambiando el según se requiera de silano HPLC Xaal 0 Antes de iniciar las se prepararon las siguientes soluciones de reactivos y se pusieron en el instrumento según se De piperidina en DIC en Los aminoácidos protegidos con Fmoc requeridos fueron preparados como soluciones en y puestas en las posiciones adecuadas en el estante de aminoácidos de 32 el grupo Fmoc se retiró con de piperidina en DMF como se describió y las resinas de peptidilo fueron lavadas con NMP x y DCM x Los péptidos deseados fueron de sus resinas de peptidilo respectivas mediante tratamiento con una mezcla de corte de TFA como una solución de se añadió a cada pocilio en el bloque de que luego se remolinó durante 30 Esto se repitió dos veces más y las soluciones de TFA de los pocilios fueron recogidas por presión positiva en frascos ubicados en un bloque de 96 frascos coincidente en el fondo del Los frascos fueron concentrados en un hasta un volumen de aproximadamente Los péptidos crudos fueron luego precipitados por la adición de éter diisopropílico y al ser brevemente Los precipitados se sedimentaron por centrifugación y los sobrenadantes fueron Los frascos se secaron en un para producir los péptidos típicamente en rendimientos de Los péptidos crudos se disolvieron directamente en 2 mL de agua y se añadió acetonitrilo según fuera necesario para completar la Los péptidos fueron purificados por HPLC Purificación por HPLC preparativa de los péptidos crudos HPLC preparativa se llevó a cabo ya sea en un cromatógrafo de líquidos Waters modelo 4000 o un Shimadzu modelo Cada solución de péptidos crudo se inyectó en una columna YMC S5 x 20 y se eluyó usando un gradiente lineal de MeCN en ambos regulados en pH con de Un gradiente típico usado fue de a de en de durante 40 a una velocidad de flujo de 15 in con detección UV de efluente a 217 Las fracciones a 10 fueron recogidas en un colector de Las que contenían el péptido deseado según se determina por HPLC y análisis MS se agruparon y liofilizaron para producir polvos blancos Análisis HPLC de los péptidos purificados Después de la purificación por HPLC preparativa como se describió cada péptido fue analizado mediante analítica en un sistema de HPLC analítico Shimadzu o que consistía un controlador de sistema un un detector SPD10AV o M6A o un detector de disposición de diodos Se usó uno de los siguientes método una columna YMC S3 x 150 y la elución se llevó a cabo usando el siguiente de B en A durante 30 método una columna YMC S3 x 150 se usó y la elución se llevó a cabo usando el siguiente de B en A durante 60 fase móvil de fase móvil de Caracterización por espectrometría de masas Cada péptido fue caracterizado por espectrometría de masas por electroaspersión ya sea en modo de inyección de flujo o Se usaron espectrómetros de masas de cuadrupolo individual Finnigan SSQ7000 San en todos los análisis en modo de electroaspersión iónica positiva y Los datos de escaneo completos fueron adquiridos sobre el intervalo de masas de 300 a amu para un tiempo de escaneo de El cuadrupolo se operó a resolución Para los análisis de inyección de el espectrómetro de masas fue interconectado a una bomba Waters 616 HPLC y equipado con un automuestreador HTS PAL Las muestras fueron inyectadas en una fase móvil que contenía de con de hidróxido de La velocidad de flujo para los análisis fue y el volumen de inyección 6 Un cromatógrafo de líquidos ThermoSeparations Constametric 3500 San y automuestreador HTS PAL fueron usados para los análisis Las separaciones cromatográficas se lograron usando una columna Luna Cíe de 5 2 x 30 mm La velocidad de flujo para los análisis fue y el efluente de la columna se de tal manera que el flujo en la interfaz de electroaspersión fuera 400 Un gradiente lineal de a de B en a durante 4 minutos fue en donde la fase móvil A era de con 10 de acetato de amonio y la fase móvil B era de con 10 mM de acetato de La respuesta UV se monitoreó a 220 Las muestras fueron disueltas en 200 de El volumen de inyección fue 5 En todos los el peso molecular medido experimentalmente estuvo dentro de Daltons del peso molecular Ejemplo CC Síntesis de ID El péptido de SEQ ID 3 se sintetizó mediante síntesis en fase sólida usando un sintetizador de péptidos Advance ChemTech modelo Cada ciclo de acoplamiento incluyó las siguientes de piperidina en 1 x 30 mL x 5 de piperidina en DMF 1 x 30 x 15 Lavados con 8 x 30 mL x 1 Acoplamiento de la Lavados con 4 x 30 mL x 1 Acoplamiento de a resina de amida de Sieber La resina de amida de Sieber se lavó con DMF x 40 mL x 5 y el grupo Fmoc se retiró usando las etapas 1 a 3 A una solución de y HCTU en NMP se le añadió DIEA La solución resultante se remolinó brevemente y luego se añadió a la resina Se añadió DCM al reactor y la mezcla se mezcló durante un total de 3 La resina se lavó después sucesivamente con DMF y DCM 4 x 30 L x 1 se trató con anhídrido acético en DCM x 60 y se lavó con DCM x 30 mL x 1 La resina se secó al vacío durante la El rendimiento de resina fue Una muestra de la resina se sometió a un procedimiento de determinación con Fmoc et 49 La sustitución se determinó como de Las mmol totales en la resina fueron Acoplamiento de La resina se lavó con DMF x 40 mL x 5 y luego se trató como se describió arriba para retirar el grupo A una solución de y HCTU en NMP se le añadió DIEA La solución resultante se remolinó brevemente y se añadió a la resina Se añadió DCM al reactor y todo se mezcló durante 4 horas y luego se lavó sucesivamente con DMF y DCM 4 x 30 mL x 1 Una prueba de ninhidrina de Kaiser de la resina de péptido fue Acoplamiento de El grupo Fmoc se retiró como se describió A una solución de y HCTU en NMP se le añadió DIEA La solución resultante se remolinó brevemente y se añadió a la resina Se añadió DCM al reactor y la mezcla se mezcló durante un total de 3 La resina peptídica se lavó después sucesivamente con DMF y DCM 4 x 30 mL x 1 La resina peptídica se trató con anhídrico acético al en DCM durante 20 minutos y luego se lavó con DCM x 30 mL x 1 Acoplamiento de La resina peptídica se lavó con DMF x 30 mL x 5 y el grupo Fmoc se retiró como se describió A una solución de y HCTU en NMP se le añadió DIEA La solución resultante se remolinó brevemente y se añadió a la resina Se añadió DCM al reactor y la mezcla se mezcló durante 4 y luego se lavó sucesivamente con DMF y DCM 4 x 30 mL x 1 Acoplamiento de La resina peptídica se lavó con DMF x 30 mL x 5 y el grupo Fmoc se retiró como se describió A una solución de y HCTU en NMP se le añadió DIEA La solución resultante se remolinó brevemente y se añadió a la resina Se añadió DCM al reactor y la mezcla se mezcló durante y luego se lavó sucesivamente con DMF y DCM 4 x 30 mL x 1 Acoplamiento de El grupo Fmoc se retiró como se describió A una solución de y HCTU en NMP se le añadió DIEA La solución resultante se remolinó brevemente y se añadió a la resina Se añadió DCM al reactor y la mezcla se mezcló durante 1 Una muestra de resina se sometió dos veces a una prueba con ninhidridina de Kaiser y el resultado fue positivo en ambos La resina peptídica se lavó despues sucesivamente con DMF y DCM 4 x 30 mL x 1 Una muestra de la resina peptídica se usando durante 1 El producto aislado indicó que el acoplamiento era ampliamente A una solución de y en se le añadió DIC La solución resultante se remolinó brevemente y luego se añadió a la resina Se añadió DCM al reactor y todo se mezcló durante 16 después se lavó sucesivamente con DMF y DCM 4 x 30 mL x 1 Una muestra de la resina peptídica dio una prueba con ninhidrina de Kaiser sugiriendo conclusión del Acoplamiento de El grupo Fmoc se retiró como se describió A una solución de y HCTU se le añadió DIEA La solución resultante se remolinó brevemente y luego se añadió a la resina Se añadió DCM al reactor y la mezcla se mezcló durante 4 horas y luego se lavó sucesivamente con DMF y DCM 4 x 30 mL x 1 Una muestra de la resina peptídica dio una prueba con ninhidrina de Kaiser A una solución de y en NMP se le añadió DIC La solución resultante se remolinó brevemente y luego se añadió a la resina Se añadió DCM al reactor y la mezcla se mezcló durante 80 Una muestra de la resina peptídica dio una prueba con ninhidrina de Kaiser La resina péptida se lavó con DMF x 30 mL x 1 Acoplamiento de El grupo Fmoc se removió como se describió A una solución de y en NMP se le añadió DIC La solución resultante se remolinó brevemente y luego se añadió a la resina Se añadió DCM al la mezcla se mezcló durante 4 horas y después se lavó sucesivamente con DMF y DCM 4 x 30 mL x 1 Una muestra de la resina peptídica dio una prueba con ninhidrina de Kaiser Acoplamiento de El grupo Fmoc se retiró como se describió A una solución de y en NMP se le añadió DIC La solución resultante se remolinó brevemente y luego se añadió a la resina Se añadió DCM al reactor y la mezcla se mezcló durante 20 La resina peptídica se lavó después sucesivamente con DMF y DCM 4 x 30 mL x 1 Una muestra de la resina peptídica se trató con durante 1 El producto aislado indicó conclusión del Acoplamiento de El grupo Fmoc se removió como se describió A una solución de y en NMP se le añadió DIC La solución resultante se remolinó brevemente y luego se añadió a la resina Se añadió DCM al reactor y la mezcla se mezcló durante 16 La resina peptídica se lavó después sucesivamente con DMF y DCM 4 x 30 mL x 1 Una muestra de la resina peptídica se sometió a la prueba con ninhidrina de Kaiser y dio un resultado sugiriendo conclusión del Corte de la resina y desprotección La resina peptídica se transfirió del reactor ACT 90 al reactor manual de 250 mL usando La resina peptídica se lavó con DCM x 40 mL x 1 y luego se trató con x 40 mL x 20 min y 2 x 15 mL x 20 y después con DCM x 30 mL x 20 Los filtrados se recogieron se combinaron y luego se concentraron por presión El residuo resultante se trituró con éter diisopropílico y el precipitado se recogió por se lavó con éter diisopropílico x 10 y se secó al vacío para dar el péptido crudo El análisis del péptido crudo mostró la presencia de Por lo el péptido se disolvió en ácido acético al en agua y la solución resultante se dejó reposar a la temperatura ambiente durante 1 La solución peptídica se congeló y liofilizó para producir el péptido crudo deseado HPLC preparativa HPLC preparativa se llevó a cabo en una HPLC preparativa Waters modelo El péptido crudo se inyectó en una columna Luna C18 5 250 x 30 mm y se eluyó usando un gradiente lineal de de B a de B durante 60 minutos a una velocidad de flujo de 15 con detección de efluente a 217 El regulador de pH A fue de TFA en El regulador de pH B fue de TFA en Las fracciones que contenían el producto deseado de las tres corridas de HPLC preparativas fueron concentradas por presión congeladas y liofilizadas para dar g de péptido Las fracciones que contenían el péptido deseado pero de pureza insuficiente fueron congeladas y Estas fueron sometidas a purificación adicional como se describe y se combinaron con g del péptido purificado para producir g del péptido final puro por HPLC Ejemplo DD Los procedimientos descritos arriba fueron usados para sintetizar los siguientes Se hace constar que con relación a esta el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la la citada es el que resulta claro de la presente descripeión de la insufficientOCRQuality

Claims (20)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones:

1. Un péptido agonista de PAR4, caracterizado porque comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula I, Ala-Xaai-Pro-Gly-Xaa2-Leu-Val (fórmula I) en donde, el extremo amino-terminal del péptido está libre; Xaai se selecciona de Tyr y Phe(4-F); Xaa2 se selecciona de Trp(5-0H), (D,L)-Trp (5-Br), D- Trp, Bzt, Tpi, His, Tza, 3-Th, 3-Fur, His(Bzl), Phe, Tyr, Phe (penta-F), 2-Pya, 3-Pya, 4-Pya, Dpa, 3-Py (4-tolilo), Bip (2-metilo), 1-naftil-Ala, 2-naftil-Ala, Tyr(Bzl) y estirilo-Ala; y el extremo C-terminal está amidado.

2. El péptido agonista de PAR4 de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque Xaai es Phe(4-F).

3. El péptido agonista de PAR4 de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque Xaa2 es Trp.

4. Un péptido agonista de PAR4 caracterizado porque comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3.

5. El péptido agonista de PAR4 de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende además Lys después de Val.

6. El péptido agonista de PAR4 de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende además Lys-Asn después de Val.

7. El péptido agonista de PAR4 de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende además Lys-Asn-Gly después de Val.

8. Un péptido caracterizado porque comprende una secuencia de aminoácidos de la fórmula I, Ala-Xaai-Pro-Gly-Xaa2-Leu-Val (fórmula I) en donde, el extremo amino-terminal del péptido no está fusionado a un aminoácido; Xaai se selecciona de Tyr y Phe(4-F),- Xaa2 se selecciona del grupo que consiste en Tr (5-OH), (D,L)-Trp (5-Br), D-Trp, Bzt, Tpi, His, Tza, 3-Th, 3-Fur, His(Bzl), Phe, Tyr, Phe(penta-F), 2-Pya, 3-Pya, 4-Pya, Dpa, 3-Pya(4-tolilo), Bip(2-metilo), 1-naftil-Ala, 2-naftil-Ala, Tyr(Bzl) y estirilo-Ala; y el péptido tiene actividad agonista de PAR4.

9. El péptido agonista de PAR4 de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque Xaai es Phe(4-F).

10. El péptido agonista de PAR4 de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque aa2 es Trp.

11. Un péptido agonista de PAR4 caracterizado porque comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3.

12. El péptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos comprende además Lys después de Val.

13. El péptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos comprende además Lys-Asn después de Val.

14. El péptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos comprende además Lys-Asn-Gly después de Val.

15. El péptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 14, caracterizado porque consiste esencialmente en o consiste en la secuencia de aminoácidos.

16. El péptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 15, caracterizado porque el extremo C-terminal está amidado.

17. El péptido agonista de PAR4 de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 o el péptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 16, caracterizado porque activa un receptor PAR4.

18. El péptido agonista de PAR4 o el péptido de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque la activación del receptor PAR4 se mide por un ensayo de agregación plaquetaria, un ensayo FLIPR, o ambos.

19. El péptido agonista de PAR4 o el péptido de conformidad con la reivindicación 17 ó 18, caracterizado porque la activación del receptor PAR4 es más alta que la activación del receptor PAR4 por el péptido que consiste en SEQ ID NO: 1.

20. El péptido agonista de PAR4 o el péptido de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque la activación del receptor PAR4 es al menos aproximadamente 10 veces, al menos aproximadamente 20 veces, al menos aproximadamente 30 veces, al menos aproximadamente 40 veces, al menos aproximadamente 50 veces, al menos aproximadamente 60 veces, al menos aproximadamente 70 veces, al menos aproximadamente 80 veces, al menos aproximadamente 90 veces, al menos aproximadamente 100 veces o al menos aproximadamente 110 veces más alta que la activación del receptor PAR4 por el péptido que consiste en SEQ ID NO: 1.