MX2013007839A - Metodo para estimular el hongo micorrizico arbuscular (hma) solubilizador de fosforo. - Google Patents

Abstract

Las esporas del hongo micorrizico arbuscular son producidas rápidamente en presencia de un medio fosfato que contenga flavonoides, de manera que de 2 a 6 meses son producidas miles de nuevas esporas del mismo tipo, que solubilizan fósforo disponible en la simbiosis de un vegetal en menos tiempo y con mayor calidad. Por lo anterior, se diseñó este método para estimular con calidad y cantidad las estructuras morfológicas: espora, hifas, vesiculas y arbusculos para la solubilizar el elemento químico fósforo, en el suelo para la planta, por medio un flavonoide.

Description

METODO PARA ESTIMULAR EL HONGO MICORRIZICO ARBUSCULAR (HMA) SOLUBILIZADOR DE FOSFORO DESCRIPCION CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se desarrolla en el campo de la biotecnología y específicamente en el área de la microbiología agrícola, con referencia a microorganismos del grupo de los Glomeromycota como solubilizadores de nutrimentos con énfasis a fósforo.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION Debido a los efectos negativos que han causado los fertilizantes químicos en el deterioro del medio ambiente, se trabaja, desde hace algunas décadas, en la introducción de alternativas de biofertilización en el manejo de los cultivos. El uso de las micorrizas es una de las técnicas biológicas empleadas en muchos de ellos; sin embargo, en los sistemas agroforestales-cacaoteros aún no se ha logrado extenderla ampliamente en la producción y algunos estudios han estado dirigidos en especies forestales, leguminosas y muy pocas gramíneas. Las micorrizas permiten una aplicación exitosa mediante el recubrimiento de las semillas. Por otra parte, las relaciones micorrizas pueden ser la clave para disminuir la cantidad de fertilizantes (especialmente fosfatos inorgánicos) que debe aplicarse para obtener buenos rendimientos; en los suelos con altos contenidos de fósforo (P) la inoculación con micorriza incrementa el ] crecimiento y el establecimiento temprano de los cultivos.

Como se indica en la patenté número 5,125,955 de Board of Trustees operating Michigan State University, East Lansing, Mich, esta se refiere al método y composición para la estimulación en el hongo micorrizico arbuscular vesículas usando isoflavonoides. Por otra parte, la patente número 5,002,603 de Board of Trustees operating Michigan State University, East Lansing, Mich descubrieron un método y composición para estimular vesículas-arbuscular micorrizal en el hongo. En la invención con el número de patente US 2010/0300166 se menciona que la composición del biofertilizante es un agente que optimiza la asimilación de la materia orgánica por la planta, favoreciendo el consumo de fósforo y nitrógeno por las plantas.

Las funciones principales de los hongos es absorber y transferir a la planta los nutrimentos, principalmente fósforo, cobre y zinc. Otro beneficio observado se refiere a que contribuyen a conservar el suelo a través de la formación y estabilización de agregados.

Uno de los retos para reducir la problemática de los agroecosistemas se refiere al aislamiento, selección e introducción de hongos que establezcan interacciones micorrizicas eficientes, en diferentes prácticas agrícolas y condiciones ambientales. A diferencia de los otros métodos, nuestra invención es un método que estimula y produce mayor cantidad de esporas, hifas, vesículas y arbúsculos, para absorber y solubilizar el nutrimento fósforo del suelo a la raíz de la planta, con una calidad debido al medio en que se aisla y desarrolla el hongo.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS En figura 1 muestra el método para estimular hifas, esporas, vesículas y arbúsculos del hongo solubilizador de fosforo.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La micorriza arbuscular, conocida también como hongo micorrícico arbuscular (HMA), es el tipo más extendido en el reino vegetal, puesto que se estima que coloniza más del 80% de las especies de plantas con raíz, y ha sido descrita en plantas Briófitas, Pteridofitas, Gimnospermas y Angiospermas (Guerrero, 1996). Los hongos formadores de micorrizas requieren de una planta receptora para completar su ciclo de vida, por lo tanto, su distribución en el suelo se realiza alrededor de las especies de plantas (Kirk et al., 2004). Actualmente los HMA se agrupan en el Phylum Glomeromycota, agrupando dos subórdenes: 1) Glomineae lo constituye dos fami lias con sus respectivos géneros: A) Glomaceae {Glomus, Sclerocystis), y B) Acaulosporaceae (Acaulospora, Entrophospora) y 2) Gigasporineae con tres familias cada una con sus respectivo géneros A) Gigasporaceae (Gigaspora, Scutellospora) B) Paraglomaceae (Paraglomus), y C) Archaeosporaceae (Archaeospora) (INVAM, 2010; Morton y Redecker, 2001).

Las micorrizas arbusculares se originan a partir que proceden de los propágulos existentes en el suelo (esporas maduras, fragmentos de raíz micorrizados, o plantas microrrizadas que crecen en vecindad). Cuando una hifa contacta con la superficie de una célula epidémica de la raíz, forma un apresorio que originará seguidamente la hifa colonizadora que penetrará en dicha célula o atravesará el espacio intercelular (León, 2006). En la zona externa del cortex de la raíz forma unas estructuras intercelulares típicas que son los "ovillos"; en la zona media, las hifas crecen normalmente de forma longitudinal en los espacios intercelulares; mientras que en la zona interna las hifas penetran intercelularmente y forman los arbúsculos por ramificación repetida a nivel de los cuales se produce el intercambio de nutrientes (León, 2006).

Las etapas del desarrollo en los sistemas suelo/planta los hongos de micorriza arbuscular son simbiontes obligados con un ciclo de vida dividido en dos etapas distintas. ¡ Por un la'do, los estadios de reposo y reproductivo (esporas, esporocarpos, y posiblemente también vesículas) son independientes de la planta. Por otra parte, los estadios vegetativos están involucrados en interacciones complejas con las plantas entre las cuales se incluyen el reconocimiento, la colonización y el intercambio de nutrientes. Estas etapas son representadas por el desarrollo de hifas externas en el suelo e hifas y espirales, arbúsculos y vesículas dentro de- la raíz (León, 2006).

Las esporas son producidas rápidamente en presencia de una planta hospedera, de manera que a los 4 o 6 meses son producidas miles de nuevas esporas del mismo tipo. Las esporas son formadas en el micelio extraradical o agregadas en estructuras más o menos bien definidas llamadas esporocarpos. Aunque en algunas especies las características de los esporocarpos son importantes, las características individuales de las esporas son las que principálmente'se'ütilizan para la identificación. Las esporas difieren en forma, estructura, contenido citoplasmático, color, tamaño, número de paredes vía de germinación, morfología de esporas secundarias y presencia o ausencia de esporocarpos (Gerdemann y Trappe, 1974; Mosse et al., 1981 ;Morton, 1990).

El fenotipo de la espora es el resultado de procesos de desarrollo completamente diferentes de aquellos del talo, por lo que la espora es considerada ser autónoma en forma y' función por algunos investigadores. Sin embargo, el tubo germinal de la espora puede originarse a partir de una red hifal filamentosa, arbúsculos, vesículas o células accesorias (Morton et al., 1995). El compromiso de la hifa arbuscular altamente modificada en la colonización no es muy posible. Morton (1993) considera que un individuo fungal es representado por una sola espora identificable la cual consiste de una sola célula multinucleada. Esta célula puede dar origen a una nueva colonia fungal con componentes del micelio dentro de una raíz y en el suelo. Esta colonia vegetativa eventualmente dará origen a nuevos individuos en forma de nuevas esporas.

Las esporas son células morfológicamente especializadas las cuales no contribuyen directamente ni soportan actividades del desarrollo de la micorriza e interacciones hospedero-hongo. La función de la espora es llevar la formación genética a nuevos hábitats e iniciar nuevos individuos especialmente separados del organismo parental. En ausencia de información sobre el ciclo nuclear o existencia de etapas sexuales no es posible determinar si las esporas representan realmente nuevas generaciones de nuevos individuos. Sin embargo, existe una gran variabilidad genética entre las esporas dentro de una sola especie e incluso entre las que se originan de un cultivo que parte de una sola espora (Lloyd-McGilp et al., 1996; Rosendahl y Taylor, .1997; Sander et al., 1995; Wyss y Bonfante, 1993; Zézé et al., 1997). Esto complica los factores y resalta la necesidad de investigaciones en el ciclo de vida y la genética del hongo.

La germinación de esporas es una parte integral del ciclo de vida de los hongos de micorriza arbuscular ya que representa la iniciación de la etapa vegetativa del crecimiento. Los caracteres de germinación son importantes para la taxonomía ya que son utilizados para distinguir entre los dos géneros de Gigasporinae, Gigaspora y Scutellospora. En Gigaspora la germinación ocurre directamente a través de la pared celular mientras que en Scutellospora ésta ocurre a partir de un escudo de germinación formado sobre o dentro de una capa de pared interna (Walter y Sanders, 1986).

La dormancia de esporas puede variar desde dos semanas hasta muchos meses en especies de Acaulospora, G. intraradices y Gigaspora gigantea (Gazey et al., 1992; Tomrnerup.- 1983). La germinación de esporas puede también estar influenciada por el pH, la humedad, los exudados de la raíz hospedera y otros factores (Tomrnerup. 1983; Hetrick, 1984; Siquiera et al,. 1985). Por ejemplo, las esporas de Glomus mosseae germinan más rápidamente cuando son almacenadas a bajas temperaturas (Hepper y Smith, 1976). Muchas bacterias del suelo pueden afectar la germinación de esporas. Algunas pueden ser inhibidoras mientras otras promueven la germinación y formación micorrizales (Fitter y Garbaye, 1994).

En presencia de factores de la raíz hospedera, el crecimiento de la hifa es a partir de esporas no es todavía bien comprendido. Originalmente se propuso que la falta de síntesis de DNA y proliferación nuclear podrían ser la causa (Burggraaf y Beringer, 1989), pero las observaciones de migración nuclear y replicación de DNA nuclear en la hifas creciendo a partir de esporas (Bianciotto y Bonfante, 1993); Bécard y Pfeffer, 1993), han llevado al recházo :de:;es:tá- hipótesis, y otros mecanismos deben ser los responsables de la falta de crecimiento. Estos podrían incluir sistemas de transporte de membrana no efectivo tal que la habilidad de absorber nutrientes es limitada (Smith y Smith, 1986).

Las espora transportadas por el suelo de HMA son consideradas las estructuras reproductivas más importantes, pero sus números en suelo están a menudo poco relacionadas con la. formación de micorrizas en raíz (Abbott y Robson, 1984b; Ebbers et.al., 1987; McGee, 1989). Para algunas especies, la producción de esporas solo ocurre después de que un nivel umbral de colonización es alcanzado (Gazey et al., 1992). Además la producción de esporas es influenciada por muchos factores incluyendo la planta hospedera y el tipo de suelo.

Solo se pueden hacer pocas generaciones útiles acerca de las condiciones que llevan a la formación de esporas a parte de la necesidad dejar pasar algunos meses desde la colonización inicial de hospedero. En relación a otros micorriticos de MA, las esporas son consideradas generalmente como más resistentes a condiciones adversas (Abbott y robson, 1982b) que otros fragmentos colonizados de raíz o hifas y pueden actuar como estructuras de supervivencia a largo plazo, con alguna capacidad para la dispersión por agua y por viento ( oske y Gemma, 1990; Friese y Alien, 1991). . . . .

El proceso y la taza de colonización determinan la efectividad de un HMA o una asociación micorrizal. La colonización puede originarse a partir de esporas, fragmentos de raíz infectados o hifas (Smith y read, 1997). La red hifal y los fragmentos de raíz son dados a ser la fuente principal por la cual las plantas son colonizadas (Smith y Walter, 1981 ; Jasper et al., 1992; Hepper, 1981). Al mismo tiempo que la infección de esparce dentro de las células corticales de la raíz hospedera, un micelio de hifas extraradicales crece fuera, hacia éT suelo.' Las hifas extraradicales tienen un papel importante en la adquisición de nutrientes y forman una fuente de colonización secundaria a lo largo de y entre las raíces (Harley y Smith, 1983; Smith y Gianiazzi-Pearson, 1988; Smith et al., 1992).

Los métodos convencionales para estudiar las comunidades naturales de HMA están basados en la identificación de esporas asexuales provenientes de suelo. La Taxonomía de HMA está todavía ampliamente basada en caracteres morfológicos de las esporas, con algunas excepciones (Opik, 2004).

Los estados de carácter morfológicos cambian durante el curso de desarrollo de las esporas lo que comúnmente complica la identificación de especímenes en campo. Más aún, la presencia de esporas en el suelo no siempre coincide con la colonización fungi en raíces, pero la morfología de las estructuras fúngales intraradiculares permite la identificación, en el mejor de los casos, hasta nivel de familia. Esta identificación tan primaria pone los limites en cuanto al estudio taxonómico de los HMA (Opik, 2004).

Un factor importante que afecta los estudios de los hongos micorriticos arbusculares, incluyendo la taxonomía, es su naturaleza biotrófica obligada; hasta ahora, no han sido cultivados en ausencia de un hospedero. Aunque hace falta el cultivo axénico, es posible que crezcan en un cultivo estéril con raíces de plantas, o con los llamados pelos radiculares transformados con Agrobacterium rhizogenes (Becard y Fortín, 1988) Los métodos de cultivo de raíces y órganos de micorriza, puede ser las raíces de hospedero: los cultivos de órganos y raíces fueron desarrollados por White et al., (1999). Estos autores utilizaron raíces extirpadas en un medio mineral sintético suplementado con vitaminas y una fuente de carbohidratos. Sin embargo el crecimiento profuso de raíces, caracterizado por la formación de numerosas ramas de bajo orden, han sido obtenido con relativamente pocas especies vegetales. La formación de raíces de bajo orden es esencial para el incremento rápido de la biomasa de raíz y el establecimiento de cultivos continuos (Fortín et al., 2002).

En los cultivos Lycopersicum esculentum y Trifolium pratense se obtuvieron las raíces para reconocer micorrizas in vitro con Glomus mosseae. Los autores demostraron por primera vez que las esporas del hongo de micorriza arbuscular pudieron ser exitosamente utilizadas para colonizar raíces extirpadas creciendo en un medio de base mineral. Luego Strullu y Romand (1986, 1987) mostraron que también es posible restablecer micorrizas en raíces estirpadas de fresa, cebolla y tomate utilizando la fase intraradicular (vesículas o pedazos enteros de raíz micorriza!) de muchas especies de Glomus como inoculo (Fortín et al., 2002).

Daucus carota y Convolvulus spium estuvieron entre las primeras especies en ser transformadas utilizando Agrobacterium rhizogenes. Estas raíces transformadoras Ri T-DNA han servido desde entonces en un amplio rango de estudios fundamentales y aplicados. Uno de los más importantes ha sido el estudio de la simbiosis de micorriza aburcular. El primer cultivo de pelos radiculares colonizadas por un hongo de micorriza arbuscular. El primer cultivo dé pelos radiculares colonizadas por un hongo de micorriza arbuscular fue logrado por Mugnier y Mosse (1987). Estos autores colonizaron exitosamente pelos radiculares de Convolvulus septum utilizado esporas de G. mosseae pero, como con el caso del cultivo de raíces y órganos de trébol no transformado, no hubo esporulación.

La primera esporulación in vitro de un hongo micorriza arbuscular fue obtenida por Bécard y Fortín (1988) utilizado pelos radiculares en zanahoria colonizados por Glom s mirar adices. Las producción de esporas siguió a las reducciones en la concentraciones de determinados nutrientes en el medio de cultivo que permitió evitar la inhibición de la micorriza, pero que no afecto ni el crecimiento de la raíz ni su desarrollo. Esto, llevo a la producción de cultivos monoaxénicos reproducibles de G. intraradices que fueron caracterizados por tener grandes cantidades de micelio y esporas (Diop et al., 1992). ¦ ·¦·. · El medio mínimo bajo en minerales (M) y el medio modificado Strullu-Romand (MSR) fueron exitosamente utilizados para obtener esporulación tanto de hongo como la micorriza utilizado cultivos de raíces de tomate no transformado. No obstante, las raíces transformadas tienen un mayor potencial de crecimiento, lo que las hace más adaptables a diferentes condiciones experimentales, y pueden ser generadas de la mayoría de las plantas dicotiledóneas. Sin embargo, comparaciones rigurosas entre cultivos de raíces transformados y no transformados nunca han sido realizados, tales estudios deberían ser idealmente realizados utilizado raíces del mismo material vegetal (Fortín et al., 2002).

La mayoría de los casos 2 tipos de inoculo fungal pueden ser utilizadas para iniciar cultivos monoxénicos: Esporas extraradicules o propágulos de la fase intraradical del hongo sin embargo, cultivos de especies de hongo de micorriza arbuscular que no producen vesículas (por ejemplo Scufellospora y Gigaspora) son sistemáticamente producidos utilizado por esporas, las cuales usualmente son grandes y germinan vigorosamente. Recientemente también han sido utilizados esporocarpos de G. moseae en un intento para establecer cultivos in vitro (fortín et aL, 2002). Las esporas son usualmente colectadas de campo, o de matera por tamizaje húmedo con muestras de pequeñas cantidades de esporas (decimos o cientos), las esporas pueden ser escogidas individualmente bajo microscopía, sin embargo para grandes cantidades de 'esporas se usa la separación de esporas con gradiente de centrifugación, utilizando sustancias con concentraciones de glicerol, sucrosa o algún medio de contraste. Las esporas no deben expuestas por muchos tiempo a estas sustancias (Fortín et al., 2002).

Adaptaciones recientes de estos métodos utilizan cajas de Petri en las cuales raíz y hongo son cultivados juntos en un comportamiento mientras que al micelio externó se le permite ramificarse a un segundo comportamiento separado de las raíces (ST-ARNAUD et al., 1996). Números crecientes de especies de hongos están siendo establecidas en este sistema de cultivo, el cual está probando ser útil para estudios del simbiote fungal. Tales sistemas proveen acceso a esporas y micelio del hongo puros y estériles que son esenciales para análisis moleculares y útiles para la taxonomía de estos hongos (Chabot et al., 1992).

Las ventajas proporcionadas por la micorrización para las plantas son numerosas. Gracias á ella, la planta es capaz de explorar más volumen de suelo del que alcanza con sus raíces, al sumársele en esta labor las hifas del hongo; también capta con mayor facilidad ciertos elementos (fósforo, nitrógeno, calcio y potasio) y agua del suelo. La protección brindada por el hongo hace que, además, la planta sea más resistente a los cambios de temperatura y la acidificación del suelo derivada de la presencia de azufre, magnesio y aluminio. Por si todo esto fuera poco, algunas reacciones fisiológicas del hongo inducen a la raíz a mantenerse activa durante más tiempo que si no estuviese micorrizada.

Los beneficios de la micorriza para la planta y el suelo (Smith y Read, 2008). Una planta colonizada por hongos micorrícico arbusculares recibe como beneficio: un incremento en la biomasa vegetal, principalmente en suelos con bajo contenido de nutrientes (Abbott y Robson, 1984).

La disponibilidad de nutrientes poco móviles del suelo (como fósforo, zinc o cobre) (Robson, 1994); se reducen el estrés hídrico y aumenta la tolerancia a la sequía (Sieverding, 1984); se incrementa la protección contra patógenos de la raíz y se produce la detoxificación de metales pesados. En las condiciones de cultivo en el trópico, usualmente los suelos tienden a presentar concentraciones bajas de fósforo, y muchas plantas son altamente dependientes de la simbiosis con los hongos formadores de micorrizas (Pfeffer et al., 2004). La micorriza es una de las adaptaciones más importantes de las plantas para subsistir en suelos ácidos (Rillig et al., 2001). La agroforestería se refiere a sistemas y tecnologías de uso del suelo en los cuales las especies leñosas perennes (árboles, arbustos, palmas, etc.) se utilizan en el mismo sistema de manejo que cultivos agrícolas y/o producción animal, en alguna forma de arreglo espacial o secuencia temporal (Leake et al., 2004). En los sistemas agroforestales existen interacciones tanto ecológicas como económicas entre los diferentes componentes.

El propósito es lograr un sinergismo entre los componentes el cual conduce a mejoras metas en un o más rango de características, tales como productividad y sostenibilidad, así como también diversos beneficios ambientales y no-comerciales. Como ciencia, es multi-disciplinaria y a menudo involucra la participación de campesinos o agricultores en la identificación, diseño y ejecución de las actividades de investigación.

Uno de los atributos más importantes de los sistemas agroforestales, consiste en que pueden ayudar a resolver los conflictos de uso del suelo a través de algunas funciones productivas y de servicios, tales como un efecto positivo en la productividad de los cultivos (Ingle^y et ai. ,.2007), reducción de la erosión y mejoramiento de las propiedades físicas y químicas de los suelos, así como buen desempeño en la captura de dióxido de carbono (O'Neill EG., 1994). Aunque los sistemas agroforestales se practican en forma tradicional desde la época precolombina, aún no se han integrado al desarrollo rural de Tabasco.

La agroforestería o la agroforestal, involucra muchas áreas del conocimiento, como silvicultura, agronomía, zootecnia, sociología, antropología, economía, biología, suelos, química ambiental, mercadotecnia, ingeniería de sistemas e ingeniería ambiental, entre otras. La agroforestería debe hacer énfasis en el aspecto social, en que el uso de las prácticas de manejo sean compatibles con los patrones culturales de la población local y, además, busque el incremento de la productividad y la diversifícación de la producción de alimentos, de tal manera que ayude en la subsistencia o seguridad alimentaria de la comunidad, acompañada de la conservación de los recursos; naturales renovables y la protección del medio ambiente.

También habría que destacar la formación de vesículas en el cortex cuya función es el almacenamiento de reservas lipídicas. Tras la colonización interna se produce la ramificación y desarrollo del micelio externo, que es clave en la captación de nutrientes y da lugar a nuevos puntos de colonización en la propia raíz o en otras próximas. Sobre la red tridimensional.de hifas que constituye se forman las esporas, estructuras de resistencia que, al madurar completan el ciclo del hongo (León, 2006).

Por lo que respecta a lo antes descrito y lo novedoso de este método, es que consiste en estimular hifas, esporas, vesículas y arbúsculos del hongo micorrizico solubilizador de fosforo, de acuerdo a la Figura 1 este método se inicia (1 ) preparando el medio fosfatado que debe reunir las condiciones necesarias para la nutrición, sin sustancias inhibidoras, con com'púé¾tbí qfottiicos tales como nitrógeno (0.9 a 10 gramos), calcio (1 a 10 gramos), carbono (0.9 a 10 gramos), vitaminas A y B (0.04 a 3 gramos), potasio (0.9 a 10 gramos) y flavoniodes (0.9 a 10 gramos), y pH 6.5 a 7.5, este medio fosfatado se prepara desde 10 a 1000 mililitros de agua y se le deberá introducir nitrógeno 1 a 30 gramos, fosforo de 0.1 a 1000 gramos, carbono 0.1 a 500 gramos, vitaminas 0.1. a 500 gramos y flavoniodes de 0.2 a 100 ppm, el pH 7.0, el cual se esteriliza en la autoclave a 120 grados centígrados a 15 átms, dejándose enfriar a temperatura ambiente libre de patógenos.

Una vez creándose el medio fosfatado se colocan las esporas (2) de los hongos micorrizicos arbusculares con flavonoides a pH 7,0, sembrando los hongos en caja petri, las cuales deben incubarse en posición vertical (al geotropismo negativo del tubo), en la oscuridad, a 20 a 34 grados centígrados de temperatura y 60 a 85 % de humedad relativa, durante 2 a'30 días; cuando existe esporulación y micelio abundante.

Una vez llevada a cabo la germinación y producción de esporas y micelio (3), en el tubo germinativo, se establece contacto físico de la célula con medio fosfatado, la hifa sufre un hinchamiento dando lugar a una estructura distinta denominada apresorio, las hifas inter corren a lo largo del medio fosfatado, dando lugar así a la estructuras de almacenamiento llamadas vesículas.

Seguidamente iniciamos con el cultivo y cuenteo de esporas de una sola especie y calidad, cuya caracterización morfológica (color, tamaño, y otras características macroscópicas) en el medio, este a su vez funciona como una trampa, en el cual ocurre la esporulación (4) del hongo, etapa necesaria para la preservación y caracterización taxonómica, y se determina el porcentaje de colonización, es necesario conservar el balance de fósforo durante el desarrolló.' También se mide el diámetro del micelio después de 3 a 20 días, dependiendo de las especies de hongos, se detecta las esporas vivas. Una composición que comprende esporas vivas, micelio, vesículas-arbuscular del hongo y aditivos químicos orgánicos e inorgánicos en la estimulación en un determinado tiempo para el crecimiento de esporas, hifas, vesículas, y arbusculares en las raíces de las plantas. La determinación de la habilidad para absorber y transportar fósforo del hongo hasta el hospedante se determina por la solubilización de fósforo en formar de un halo presente en el medio de desarrollo y crecimiento del hongo micorrizico arbuscular. Para poder seleccionar las cepas que presentan actividad de solubilización de fosforo se estableció un índice de solubilización derivado de la aritmética del diámetro de halo (a) y la distancia entre los centros geométricos de las colonias de hongos (b). Formula del índice de solubilización: a/b X 10 = índice de halo de solubilización de fósforo, Se reemplaza el medio para el conteo de esporas con una cámara-Fuchs-Rosenthal, el número se multiplica por el factor de la cámara y por el factor del cuadrado y como resultado es el número de esporas por mi o gr. Medir el diámetro del micelio después de 3 a 20 días, dependiendo de las especies de hongos.

Una planta colonizada por hongos micorrízico arbuscular recibe como beneficio: 1) Incremento en la biomasa vegetal, principalmente en suelos con bajo contenido de nutrientes, 2) Disponibilidad de nutrientes no móvil como el fósforo, zinc y cobre, 3) Reducen el estrés hídrico, 4) Aumenta la tolerancia a la sequía, 5) Incrementa la protección contra patógenos de la raíz y 6) Produce la detoxificación de metales pesados. En las condiciones de cultivo en el trópico, usualmente los suelos tienden a presentar concentraciones bajas de fósforo, y muchas plantas son altamente dependientes de la simbiosis.

Claims (1)

REIVINDICACIONES Habiendo descrito suficiente mi invención, considero como una novedad y por lo tanto reclamo como de mi exclusiva propiedad, lo contenido en las siguientes clausulas:

1. -Método para estimular el hongo micorrizico arbuscular (HMA) solubilizador de fosforo caracterizado porque consta de: A) Preparar un medio fosfatado que contiene nitrógeno (0.9 a 10 gramos), calcio (1 a 10 gramos), carbono (0.9 a 10 gramos), vitaminas A y B (0.04 a 3 gramos), potasio (0.9 a 10 gramos) y flavoniodes (0.9 a 10 gramos), y pH 6.5 a 7.5. B) Adicionar al medio fosfatado estéril agua (10 a 1000 mililitros), nitrógeno (1 a 30 gramos), fosforo (0.1 a 1000 gramos), carbono (0.1 a 500 gramos), vitaminas (0.1 a 500 gramos) y fiavonoides (0. 2 a 100 ppm), y un pH 6.5 a 7.0 C) Esterilizar el medio fosfatado en la autoclave a 120 °C a 15 atms y D) Enfriar el medio fosfatado esterilizado a temperatura ambiental libre de patógenos, E) Colocar las esporas de los hongos micorrizicos arbusculares en el medio fosfatado con fiavonoides, a pH 6.5 a 7.0 F) Incubar las esporas del hongo micorrizico arbuscular con el medio fosfatado y fiavonoides a temperatura 20 a 34° C, durante 2 a 30 días, cuando existe esporulación y micelio abundante, G) Seleccionar las cepas que presentan actividad de solubilización de fosforo se estableció un índice de solubilización derivado de la aritmética del diámetro de halo (a) y la distancia entre los centros geométricos de las colonias de hongos (b), H) Determinar con la formula el índice de halo de solubilización: a/b X 10 I) Reemplazar el medio para el conteo de esporas con una cámara-Fuchs-Rosenthal, el número se multiplica por el factor de la cámara, por el factor del cuadrado y como resultado es el número de esporas por mi o gr J) Medir el diámetro del micelio después de 3 a 20 días, dependiendo de las especies de hongos.