MX2012014862A - Composiciones y metodos para estabilizar formulaciones que contienen proteinas. - Google Patents

Composiciones y metodos para estabilizar formulaciones que contienen proteinas.

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Abstract

La presente invención se refiere al uso de ciertas composiciones de alqulglicósido para la prevención de agregación y oxidación de anticuerpos y otras proteínas en formulaciones terapéuticas útiles de las mismas.

Description

COMPOSICIONES Y MÉTODOS PARA ESTABILIZAR FORMULACIONES QUE CONTIENEN PROTEÍNAS SOLICITUD RELACIONADA Esta solicitud reclama el beneficio de la Solicitud de Patente Provisional de los E.U.A. Número de Serie 61/358,105, presentada en junio 24, 2010, esta solicitud se incorpora completamente aquí por referencia.
CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere al uso de ciertas composiciones de alquilglicósido para la prevención de agregación y oxidación de anticuerpos y otras proteínas en formulaciones terapéuticamente útiles de las mismas.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Cuando un estabilizante para una formulación de proteína se requiere para proteger una proteína contra desnaturalización ante agitación, sacudida, cizallado y congelado-descongelado, o en estado inactivo en la interfase, a menudo se emplea un detergente no iónico (es decir un surfactante) (ver por ejemplo la Patente de los E.U.A. Número 5,183,746). Esto se ejemplifica por el uso de polisorbatos en muchos productos que contienen proteína. Por ejemplo, polisorbatos 20 y 80 (Tween® 20 y Tween® 80) se emplean en la formulación de productos bioterapéuticos tanto para evitar adsorción de superficie como estabilizantes contra agregación de proteínas (Kerwin, J. Pharm. Sci. 97 ( 8 ): 2924-2936 (2008)).
Los polisorbatos son surfactantes no iónicos anfipáticos compuestos por ésteres de ácidos grasos de polioxietileno (POE) sorbitán, siendo polioxietileno sorbitán monolaurato para polisorbato 20 y polioxietileno sorbitán monooleato para polisorbato 80.
Desafortunadamente, sin embargo los polisorbatos pueden someterse a degradación ya sea por oxidación o hidrólisis. Cuando se degrada una molécula de polisorbato, genera diversos subproductos de degradación incluyendo por ejemplo ácidos grasos, POE sorbitán, PEG, PEG ésteres y alquil ácidos. Ciertos de estos subproductos de degradación de polisorbato, incluyendo los ácidos grasos libres, pueden provocar incrementada turbidez de y agregación de proteínas en formulaciones que contienen proteínas. Por lo tanto, mientras que los polisorbatos se emplean comúnmente como estabilizantes de proteínas, los ácidos grasos y otros subproductos de degradación desprendidos de la degradación de polisorbato con el tiempo, pueden impactar adversamente el efecto protector que exhiben los polisorbatos en formulaciones que contienen proteínas.
Las proteínas se someten a grados variantes de degradación durante purificación y almacenamiento, en donde la oxidación (incluyendo oxidación inducida por luz) es una de las rutas principales de degradación que tiene un efecto destructivo en estabilidad y potencia de proteínas.
Reacciones oxidativas provocan destrucción de residuos aminoácido, hidrólisis de enlace péptido y por lo tanto inestabilidad de proteínas debido a alteración de la estructura terciaria de las proteínas y agregación de proteínas (Davies, J. Biol. Chem. 262: 9895-901 (1987)). Oxidación de productos farmacéuticos de proteínas se ha revisado por Nguyen (Capítulo 4 en Formulation and Delivery of Protein and Peptides (1994)), Hovorka, (J. Pharm Sci. 90:25369 (2001)) y Li (Biotech Bioengineering 48:490-500 (1995) ) .
Dado lo anterior, es evidente que hay necesidad por la identificación de composiciones útiles para mejorar la estabilidad y evitar la agregación y/u oxidación de proteínas en formulaciones que contienen proteínas.
COMPENDIO DE LA INVENCIÓN La presente invención se basa en el hallazgo novedoso de que ciertas composiciones de alquilglicósido son útiles para estabilizar y/o reducir agregación o inmunogenicidad de anticuerpos u otras proteínas en formulaciones terapéuticamente útiles. Aún más, la presente invención además se basa en el hallazgo novedoso de que ciertas composiciones de alquilglicósido son útiles para evitar la oxidación de residuos aminoácido, particularmente residuos triptofano, en anticuerpos u otras proteínas en formulaciones terapéuticas útiles. Más específicamente, un aspecto de la presente invención se dirige a métodos para utilizar alquilglicósidos que tienen un valor de concentración micelar critica (CMC = Critical Micelle Concentration) de al menos 1.0 mM, como agentes estabilizantes de proteínas o reductores de agregación. En ciertas modalidades de la presente invención, la composición de alquilglicósido se emplea en la formulación que contiene anticuerpo u otra proteína a una concentración que está por debajo de su valor CMC respectivo.
De acuerdo con esto, en un aspecto, la presente invención se refiere a una composición de materia que comprende una proteína y un alquilglicósido que tiene un valor CMC de aproximadamente 1.0 mM o mayor en agua a 25°C. En ciertas modalidades, la proteína presente en la composición de materia es un anticuerpo, que puede ser opcionalmente un anticuerpo monoclonal. Todavía en otras modalidades, el alquilglicósido se elige del grupo que consiste de n-hexil- -D-glucopiranósido, n-heptil-ß-?-glucopiranósido, n-octil^-D-glucopiranósido, ?-????-ß-D-glucopiranósido, n-decil-p-D-glucopiranósido, 3-ciclohexil-l-propil^-D-glucósido, 3-ciclohexil-l-butil- -D-glucósido, n-hexil^-D-maltopiranósido, n-octil- -D-maltopiranósido, n-?????-ß-D-maltopiranosido, n-decil- -D-maltopiranosido, ciclohexil-meti?-ß-D-maltosido, 2-ciclohexil-etil^-D-maltósido, 3-ciclohexil-propil^-D-maltósido, 4-ciclohexil-butil-p-D-maltósido y 5-ciclohexil-pentil-p-D-maltósido . Todavía en otras modalidades, la composición de materia comprende una cantidad inhibidora de agregación inducida por agitación o una cantidad que evita oxidación del alquilglicósido . Todavía en otra modalidad, el alquilglicósido está presente en la composición de materia a una concentración que es menor que el valor CMC del alquilglicósido en agua a 25°C, la composición de materia puede ser acuosa, puede ser estable a una temperatura de aproximadamente 2-8 °C por al menos un año y/o puede ser estable a una temperatura de aproximadamente 30 °C por al menos un mes. Opcionalmente, la composición de materia no se liofiliza y no está sujeta a liofilización previa o puede ser una formulación liofilizada reconstituida.
En otro aspecto, la presente invención se dirige a un artículo de manufactura que comprende un recipiente que contiene la composición de materia anteriormente descrita.
Todavía otro aspecto de la presente invención se dirige a producir una formulación farmacéutica que comprende preparar la composición de materia anteriormente descrita y evaluar la estabilidad física, estabilidad química o actividad biológica de la proteína en la composición de materia .
Todavía otro aspecto de la presente invención se dirige a un método para inhibir agregación inducida por agitación de una proteina presente · en una primer solución acuosa, en donde el método comprende la etapa de agregar a la primer solución acuosa, una cantidad inhibidora de agregación inducida por agitación de un alquilglicósido que tiene un valor CMC de aproximadamente 1.0 mM o mayor en agua a 25°C, de esta manera proporcionando una segunda solución acuosa.
Todavía otro aspecto de la presente invención se dirije a un método para evitar la oxidación de una proteína presente en una primer solución acuosa, en donde el método comprende la etapa de agregar a la primer solución acuosa una cantidad inhibidora de oxidación de un alquilglicósido que tiene un valor CMC de aproximadamente 1.0 mM o mayor en agua a 25°C, de esta manera proporcionando una segunda solución acuosa .
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 muestra el efecto de ciertos surfactantes en agregación inducida por agitación de un anticuerpo monoclonal anti-MUC16 en solución acuosa.
La Figura 2 muestra el efecto de ciertos surfactantes en agregación inducida por agitación de un anticuerpo monoclonal anti-MUC16 en solución acuosa.
La Figura 3 muestra el efecto de ciertos surfactantes en agregación inducida por agitación de un anticuerpo monoclonal anti-MUC16 en solución acuosa.
La Figura 4 muestra el efecto de n-octil-ß-?-glucopiranósido en la turbidez de soluciones acuosas que comprenden un anticuerpo monoclonal anti-MUC16.
La Figura 5 muestra el efecto de n-octil- -D-glucopiranósido en el mantenimiento de por ciento de monómero de un anticuerpo monoclonal anti-MUC16 en solución acuosa.
La Figura 6 muestra el efecto de n-octil-ß-?-glucopiranósido o polisorbato 20 en la turbidez de soluciones acuosas que comprenden un anticuerpo monoclonal anti- UC16.
La Figura 7 muestra el efecto de n-octil-ß-?-glucopiranósido o polisorbato 20 en la turbidez de soluciones acuosas ' que comprenden un anticuerpo monoclonal anti-IgE.
La Figura 8 muestra el efecto de n-octil-ß-?-glucopiranósido o polisorbato 20 en la turbidez de soluciones acuosas que comprenden un anticuerpo monoclonal anti-CDlla.
La Figura 9 muestra el efecto de n-octil-p-D-glucopiranósido o polisorbato 20 en la turbidez de soluciones acuosas que comprenden un anticuerpo monoclonal anti-CD22.
La Figura 10 muestra el efecto de n-octil-ß-?-glucopiranósido o polisorbato 20 en el mantenimiento de por ciento de monómero de un anticuerpo monoclonal anti-MUC16 en solución acuosa.
La Figura 11 muestra el efecto de n-octil- -D-glucopiranósido o polisorbato 20 en el mantenimiento de por ciento de monómero de un anticuerpo anti-IgE en solución acuosa.
La Figura 12 muestra el efecto de n-octil-p-D-glucopiranósido o polisorbato 20 en el mantenimiento de por ciento de monómero de un anticuerpo monoclonal anti-CDlla en solución acuosa.
La Figura 13 muestra el efecto de n-octil-ß-?-glucopiranósido o polisorbato 20 en el mantenimiento de por ciento de monómero de un anticuerpo monoclonal anti-CD22 en solución acuosa.
La Figura 14 muestra la cantidad de peróxido de hidrógeno generada por diversos alquilglicósidos o polisorbato 20 en solución con el tiempo.
La Figura 15 muestra el efecto de diversos alquilglicósidos o polisorbato 20 en la prevención de oxidación de un anticuerpo anti-CDlla en solución acuosa.
La Figura 16 muestra el efecto de diversos alquilglicósidos o polisorbato 20 en la prevención de oxidación o anticuerpo anti-CD22 en solución acuosa.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA MODALIDAD PREFERIDA La presente invención puede comprenderse más fácilmente por referencia a la siguiente descripción detallada de modalidades especificas y los Ejemplos ahí incluidos .
A menos que se defina de otra forma, todos los términos técnicos y cientificos aqui empleados tienen el mismo significado que se entiende comúnmente por una persona con destreza ordinaria en la técnica a la cual pertenece esta invención. Aunque cualesquiera métodos y materiales similares o equivalentes a aquellos aquí descritos pueden emplearse en la práctica o prueba de la invención, los métodos y materiales preferidos ahora se describen. Todas las publicaciones aqui mencionadas se incorporan por referencia en su totalidad.
Aqui, intervalos o cantidades numéricas precedidas por el término "aproximadamente", incluyen expresamente el intervalo exacto o cantidad numérica exacta.
La agregación de anticuerpos y otras proteínas es provocada primordialmente por interacciones hidrofóbicas que -eventualmente llevan a desnaturalización. Cuando la región hidrofóbica de una proteina parcial o completamente desdoblada se expone al agua, esto crea una situación termodinámicamente desfavorable debido al hecho de que el interior hidrofóbico normalmente enterrado ahora está expuesto a un ambiente acuoso hidrofílico. Consecuentemente, la disminución en entropía de estructurar moléculas de agua alrededor de la región hidrofóbica fuerza a la proteína desnaturalizada a agregarse, primordialmente a través de las regiones' hidrofóbicas expuestas. De, esta manera, también puede estar comprometida la solubilidad de la proteína. En algunos casos, autoasociación de subunidades de proteína ya sean nativas o mal plegadas, puede ocurrir bajo ciertas condiciones y esto puede llevar a precipitación y pérdida en actividad .
Factores que afectan agregación de proteínas en solución en general incluyen concentración de proteína, pH, temperatura, otros excipientes y tensión mecánica. Algunos factores (por ejemplo, temperatura) pueden controlarse más fácilmente que otros durante purificación, formulación, fabricación, almacenamiento y uso (por ejemplo, tensión mecánica) . Estudios de formulación dictarán la o las selecciones apropiadas de pH y excipientes que no inducen agregación y/o de hecho ayudan en la prevención de agregación. La concentración de proteína está dictada por la dosis terapéutica requerida y dependiendo de lo que es esta concentración, determinará si existe el potencial para superiores estados asociados (dímeros, tetrámeros, etc.), lo que puede entonces llevar a agregación en solución. Estudios cuidadosos deben realizarse durante el desarrollo de formulación para determinar qué factores influencian agregación de proteínas y entonces cómo estos factores pueden ser eliminados o controlados.
El deseo por identificar preparaciones de solución estable de un anticuerpo u otra proteína para uso en administración parenteral u otra, puede llevar al desarrollo de metodología de prueba para evaluar el impacto de diversos aditivos en estabilidad física. Con base en los factores conocidos que influencian agregación de proteínas y los requerimientos de estas aplicaciones, puede evaluarse estabilidad física utilizando procedimientos mecánicos que involucran agitación o rotación de soluciones de proteínas. La metodología para prueba de tensión física para identificar la capacidad de diversos aditivos para evitar agregación puede involucrar exposición a sacudida o agitación en el plano horizontal o rotación x cm desde el eje de una rueda que gira a n rev/min en el plano vertical. Turbidez resultante de agregación, usualmente se determina como una función del tiempo por inspección visual o análisis de dispersión de luz. En forma alterna, reducciones en el contenido de proteína soluble debido a precipitación pueden cuantificarse por ensayo HPLC como una función del tiempo.
La presente invención se basa en el hallazgo novedoso de que ciertas composiciones de alquilglicósido son útiles para estabilizar o reducir agregación e inmunogenicidad de anticuerpos u otras proteínas en formulaciones terapéuticamente útiles. Aún más, la presente invención se basa adicionalmente en el hallazgo novedoso de que ciertas composiciones de alquilglicósido son útiles para estabilizar o reducir agregación e inmunogenicidad de anticuerpos u otras proteínas en formulaciones terapéuticamente útiles.
"Surfactantes" son agentes tensioactivos que pueden ejercer su efecto en superficies de sólido-sólido, sólido-liquido, líquido-liquido y líquido-aire debido a su composición química, que contiene tanto grupos hidrofílicos como hidrofóbicos . Estos materiales reducen la concentración de proteínas en soluciones diluidas en las interfases aire-agua y/o agua-sólido, en donde las proteínas pueden ser adsorbidas y agregadas potencialmente . Surfactantes pueden ligar a interfases hidrofóbicas en formulaciones de proteínas. Proteínas en la superficie del agua se agregarán, particularmente cuando se agitan, debido a desdoblado y subsecuente agregación de la monocapa de proteínas.
"Surfactantes" pueden desnaturalizar proteínas, pero también pueden estabilizarlas contra desnaturalización de superficie. En general, surfactantes iónicos pueden desnaturalizar proteínas. Sin embargo, surfactantes no iónicos usualmente no desnaturalizan proteínas incluso a concentraciones relativamente elevadas (1% p/v) . La mayoría de los surfactantes no iónicos parenteralmente aceptables provienen ya sea de los grupos polisorbato o poliéter. Polisorbato 20 y 80 son estabilizantes surfactantes contemporáneos en formulaciones de proteínas comercializadas. Sin embargo, otros surfactantes empleados en formulaciones de proteínas incluyen Pluronic F-68 y miembros de la clase "Brij". Ninguno de estos son alquilglicósidos de la presente invención.
Eventos físicos pueden resultar en exposición a eventos químicos. La inestabilidad química de proteínas puede involucrar la disociación o formación de enlaces covalentes con la estructura primaria de proteínas. Varias reacciones de oxidación en proteínas se han reportado. En el medio alcalino o neutro, los residuos de los aminoácidos cisteína, histidina, metionina, triptofano y tirosina son especialmente tendientes a oxidación. En condiciones acídicas, sin embargo la metionina es sensible. A menudo, las reacciones de oxidación provocan una gran pérdida en actividad biológica e incluso inmunogenicidad. Es bien conocido en la técnica que la oxidación de residuos aminoácido en proteínas, en especial residuos triptofano puede ser inducida por exposición a la luz .
Los peróxidos son contaminantes conocidos de surfactantes no iónicos. Peróxidos en polisorbatos pueden resultar en degradación oxidativa de proteínas. Los formuladores tienden a cribar fuentes de polisorbatos y otros aditivos poliméricos en formulaciones de proteínas para contaminación de peróxido y establecer especificaciones de peróxido para utilizar el aditivo. En forma alterna, la incorporación de un antioxidante se utiliza para ayudar a superar el potencial por surfactantes no iónicos para servir como catalizadores oxidativos para proteínas sensibles a oxígeno.
"Surfactantes" son moléculas con regiones polares y no polares bien definidas, que les permiten agregarse en solución para formar micelios. Dependiendo de la naturaleza del área polar, los surfactantes pueden ser surfactantes no iónicos, aniónicos, catiónicos y zwitteriónicos . Surfactantes no iónicos pueden ser basados en azúcar. Surfactantes basados en azúcar pueden ser alquilglicósidos .
Como se emplea aquí, "alquilglicósido" se refiere a cualquier azúcar unida por un enlace a cualquier alquilo hidrofóbico como se conoce en la técnica. El enlace entre la cadena alquilo hidrofóbica y el sacárido hidrofilico puede incluir entre otras posibilidades, un enlace glicosidico, éster, tioglicosidico, tioéster, éter, amida o ureido. Ejemplos -de los cuales aquí se describen. Los términos alquilglicósido y alquilsacárido pueden emplearse aquí en forma intercambiable.
La estructura general de los alquilglicósidos de la presente invención es Ri-0- (CH2) ?-R, en donde R puede ser por ejemplo, CH3, ciclohexilo (C6H ) , u otra cadena alquilo incluyendo sus isómeros y Ri es un azúcar, típicamente glucosa o maltosa. Alquilglicósidos ejemplares incluyen aquellos en donde Ri es glucosa, R es CH3, y x es 5. (n-hexilo-ß-D-glucopiranósido) , x es 6 (n-heptil-p-D-glucopiranósido) , x es 7 (n-octil- -D-glucopiranósido) , x es 8 (?-????-ß-D-glucopiranósido) , x es 9 (n-decil-p-D-glucopiranósido) , y x es 11 (n-dodecil- -D-glucopiranósido) . En ocasiones, los glucopiranosidos se denominan glucósidos.
Alquilglicósidos ejemplares adicionalmente incluyen aquellos en donde Ri es maltosa, R es CH3, y x es 5 (n-hexil-ß-D-maltopiranósido) , x es 7 (n-octil- -D-maltopiranósido) , x es 8 (?-?????-ß-D-maltopiranósido) , x es 9 (n-decil-ß-?-maltopiranósido) , x es 10 (n-undecil-p-D-maltopiranósido) , x es 11 (n-dodecil-p-D-maltopiranósido) , x es 12 (n-tridecil-ß-D-maltopiranósido) , x es 13 (n-tetradecil^-D-maltopiranósido) , y x es 15 (n-hexadecil-ß-?-maltopiranósido) . En ocasiones, los maltopiranósidos se denominan maltósidos.
Alquilglicósidos ejemplares además incluyen aquellos en donde Ri es glucosa, x es 3, y R es ciclohexil ( 3-ciclohexil-l-propil^-D-glucósido) ; y en donde Ri es maltosa, x es 4, y R es ciclohexil ( 4-ciclohexil-l-butil- ß-D- maltósido) .
En un aspecto especifico de la presente invención, los alquilglicósidos empleados en la presente invención son aquellos que exhiben un valor de concentración critica de micelios (CMC) de aproximadamente 1.0 mM o mayor en agua entre 20 - 25°C, de preferencia 25°C. Alquilglicósidos ejemplares que ¦ tienen estos valores CMC se muestran en la Tabla I a continuación, en donde otros son bien conocidos en la técnica.
Tabla I Un alquilglicósido particular puede ser empleado en forma individual como un anticuerpo u otro agente estabilizador de proteina (o reducción-de-oxidación o reducción-de-agregación) o puede emplearse en combinación con otros alquilglicósidos . Los alquilglicósidos encuentran uso como anticuerpo u otros agentes estabilizantes de proteínas (o anti-agregación o anti-oxidación) a través de un amplio intervalo de concentraciones en solución acuosa. En modalidades particulares de la presente invención, el alquilglicósido (si se emplea como un solo agente) o alquilglicósidos (si se emplean en combinación) puede estar presente en el anticuerpo acuoso - u otra formulación que contiene proteina a una concentración desde aproximadamente 0.001 mM a aproximadamente 500 mM, más preferible de aproximadamente 0.005 mM a aproximadamente 400 mM, más preferible de aproximadamente 0.01 mM a aproximadamente 300 mM, más preferible de aproximadamente 0.02 mM a aproximadamente 250 mM, más preferible de aproximadamente 0.03 mM a aproximadamente 200 mM, más preferible de aproximadamente 0.05 mM a aproximadamente 100 mM, más preferible de aproximadamente 0.1 mM a aproximadamente 100 mM, más preferible de aproximadamente 0.1 mM a aproximadamente 50 mM.
En una modalidad particularmente preferida de la presente invención, un alquilglicósido particular puede emplearse como un anticuerpo u otro agente estabilizante de proteina (o de reducción-oxidación o -agregación) a una concentración que es menor que su valor CMC respectivo.
Respecto a lo anterior, se entiende en la técnica que la síntesis química de compuestos tales como los alquilglicósidos aquí descritos, resulta en una mezcla algo heterogénea de compuestos en vez de una preparación completamente homogénea. Como tal, cuando aquí se describe que se emplea un alquilglicósido particular, habrá de entenderse que la definición se refiere a los componentes mayoritarios de la mezcla heterogénea que resultan de su síntesis química.
Por "polipéptido" o "proteína" se entiende una secuencia de aminoácidos para los cuales la longitud de cadena es suficiente para producir los niveles superiores de estructura terciaria y/o cuaternaria. De esta manera, proteínas se distinguen de "péptidos" que son también moléculas basadas en aminoácidos que no tienen esta estructura. Típicamente, una proteína para utilizar aquí tendrá un peso molecular de al menos aproximadamente 5-20 kD, en forma alterna al menos aproximadamente 15-20 kD, de preferencia al menos aproximadamente 20 kD. "Péptido" se entiende una secuencia de aminoácidos que generalmente no exhibe un nivel superior de estructura terciaria y/o cuaternaria. Péptidos en general tienen un peso molecular menor a aproximadamente 5 kD.
Ejemplos de polipéptidos abarcados dentro de la presente definición, incluyen proteínas de mamíferos tales como por ejemplo renina; una hormona de crecimiento incluyendo hormona de crecimiento humano y hormona de crecimiento bovino; factor de liberación de hormona de crecimiento; hormona paratiroides ; hormona de estímulo de tiroides; lipoproteínas ; alfa-l-antitripsina ; cadena insulina A; cadena insulina B; proinsulina; hormona de estimulo de folículos; calcitonina; hormona luteinizante; glucágon; factores de coagulación tales como factor VIIIC, factor IX, factor de tejido y factor de von Willebrand; factores anti-coagulantes tales como Proteína C; factor natriurético atrial; surfactante pulmonar; un activador de plasminógeno, tal como uroquinasa u orina humana o activador de plasminógeno tipo tejido (t-PA) ; bombesina; trombina; factor de crecimiento hemopoyético; factor alfa y beta de necrosis de tumor; encefalinasa; célula T normalmente regulada ante activación expresada y secretada (RANTES = Regulated On Activation Normally T-Cell Expressed And Secreted) ; proteína inflamatoria de macrófagos humanos (???-1-alfa) ; una albúmina de suero tal como albúmina de suero humano; sustancia inhibidora muelleriana; cadena relaxina A; cadena relaxina B; prorelaxina; péptido asociado con gonadotropina de ratón; una proteína microbiana tal como una beta-lactamasa; DNase; IgE; un antígeno asociado a linfocitos T citotóxicos (CTLA = Cytotoxic T-Lymphocyte Associated Antigen) , tal como CTLA-4; inhibina; activina; factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF = Vascular Endothelial Growth Factor) ; receptores para hormonas o factores de crecimiento; proteína A o D; factores reumatoides; un factor neurotrófico tal como factor neurotrófico derivado de huesos (BDNF = Bone-Derived Neurotrophic Factor), neurotrofina-3, -4, -5, o -6 (NT-3, NT-4, NT-5, o NT-6) , o un factor de crecimiento de nervios tal como NGF-ß; factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF = Platelet-Derived Growth Factor) ; factor de crecimiento de fibroblastos tal como aFGF y bFGF; factor de crecimiento epidérmico (EGF = Epidermal Growth Factor) ; factor de crecimiento de transformación (TGF = Transforming Growth Factor) tal como TGF-alfa y TGF-beta, incluyendo TGF-ß?, TGF-ß2, TGF^3, TGF^4, o TGF-ßd; factor de crecimiento de tipo insulina -I y -II (IGF-I y IGF-II); des ( 1-3 ) -IGF-I (IGF-I de cerebro) , proteínas de enlace a factor de crecimiento tipo insulina (IGFBPs = Insulin-Like Growth Factor Binding Proteins); proteínas CD tales como CD3, CD4, CD8 , CD19 y CD20; eritropoyetina; factores osteoinductivos ; inmunotoxinas; una proteína morfogenética de huesos (BMP = Bone Morphogenetic Protein) ; una interferona tal como interferona-alfa, -beta, y -gamma; factores de estímulos de colonias (CSFs = Colony Stimulating Factors) , por ejemplo, M-CSF, GM-CSF, y G-CSF; interleucinas (ILs), por ejemplo, IL-1 a IL-10; superóxido dismutasa; receptores de células T; proteínas de membrana superficial; factor de aceleración de deterioro; antígeno viral tal como por ejemplo una porción del envolvente de SIDA (AIDS) ; proteínas de transporte; receptores de migración; adresinas; proteínas regulatorias ; integrinas tales como CDlla, CDllb, CDllc, CD18, un ICAM, VLA-4 y VCAM; un antígeno asociado a tumor tal como CA125 (antigeno de cáncer de ovarios) o receptor HER2, HER3 o HER ; inmunoadhesinas; y fragmentos y/o variantes de cualquiera de las proteínas anteriormente citadas, así como anticuerpos incluyendo fragmentos de anticuerpo que ligan a cualquiera de las proteínas anteriormente citadas.
La proteína que se formula de preferencia es esencialmente pura y de manera conveniente esencialmente homogénea (es decir, libre de proteínas contaminantes). Proteína "esencialmente pura" significa una composición que comprende al menos aproximadamente 90% en peso de la proteína, con base en el peso total de la composición, de preferencia al menos aproximadamente 95% en peso. Proteína "esencialmente homogénea" significa una composición que comprende al menos aproximadamente 99% en peso de la proteína, con base en el peso total de la composición.
En ciertas modalidades, la proteína es un anticuerpo. El anticuerpo aquí se dirige contra un "antígeno" de interés. De preferencia, el antígeno es una proteína biológicamente importante y la administración del anticuerpo a un mamífero que sufre de una enfermedad o desorden puede resultar en un beneficio terapéutico para ese mamífero. Sin embargo, anticuerpos dirigidos contra antígenos no proteínicos (tales como antígenos glicolípidos asociados con tumor; ver Patente de los E.U.A. Número 5,091,178) también se contemplan. Cuando el antígeno es una proteína, puede ser una molécula de transmembrana (por ejemplo, receptor) o ligando tal como un factor de crecimiento. Antigenos ejemplares incluyen aquellas proteínas previamente discutidas. Objetivos moleculares preferidos para anticuerpos abarcados por la presente invención incluyen polipéptidos CD tales como CD3, CD4 , CD8 , CD19, CD20 y CD34; miembros de la familia de receptor HER tales como el receptor EGF (HERI), receptor HER2, HER3 o HER4 ; moléculas de adhesión celular tales como LFA-1 , acl, pl50,95, VLA-4, ICAM-1, VCA e integrina av/b3 incluyendo cualquiera de sus subunidades a o b (por ejemplo, anticuerpos anti-CDlla, anti-CD18 o anti-CDllb) ; factores de crecimiento tales como VEGF; IgE; antígenos de grupo sanguíneo; receptor flk2/flt3; receptor de obesidad (OB) ; receptor mpl; CTLA-4; polipéptidos C, etc. Antígenos solubles o sus fragmentos opcionalmente conjugados con otras moléculas pueden emplearse como inmunógenos para generar anticuerpos. Para moléculas transmembrana tales como receptores, fragmentos de estos (por ejemplo, el dominio extracelular de receptor) pueden emplearse como el inmunógeno. En forma alterna, células que expresan las moléculas de transmembrana pueden emplearse como el inmunógeno. Estas células pueden derivarse de una fuente natural (por ejemplo líneas de células de cáncer) o pueden ser células que se han transformado por técnicas recombinantes para expresar la molécula de transmembrana.
Ejemplos de anticuerpos a purificarse aquí incluyen pero no están limitados a: anticuerpos HER2 incluyendo trastuzumab (HERCEPTIN®) (Cárter et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 89:4285-4289 (1992), Patente de los E.U.A. Número 5,725,856) y pertuzumab (OMNITARG™) ( O01/00245 ) ; anticuerpos CD20 (ver a continuación); anticuerpos IL-8 (St John et al., Chest, 103:932 (1993), y la Publicación de Patente Internacional Número WO 95/23865) ; anticuerpos VEGF o receptores VEGF incluyendo anticuerpos VEGF humanizados y/o madurados de afinidad tales como el anticuerpo VEGF humanizado huA4.6.1 bevacizumab (AVASTIN®) y ranibizumab (LUCENTES®) (Kim et al., Growth Factors, 7:53-64 (1992), Publicaciones de Patentes Internacionales Números WO 96/30046, y WO 98/45331, publicadas en octubre 15, 1998); anticuerpos PSCA (WO01/40309) ; anticuerpos CDlla incluyendo efalizumab (RAPTIVA®) (Patentes de los E.U.A. Número 6,037,454, Patentes de los E.U.A. Número 5,622,700, WO 98/23761, Stoppa et al., Transplant Intl. 4:3-7 (1991), y Hourmant et al., Transplantation 58:377-380 (1994)); anticuerpos que ligan IgE incluyendo omalizumab (XOLAIR®) (Presta et al., J. Immunol. 151:2623-2632 (1993), y la Publicación de Patentes Internacional Número WO 95/19181; Patente de los E.U.A. Número 5,714,338, otorgada en febrero 3, 1998 o Patente de los E.U.A. Número 5,091,313, otorgada en febrero 25, 1992, WO 93/04173 publicada en marzo 4, 1993, o la Solicitud de Patente Internacional Número PCT/US98/13410 presentada en junio 30, 1998, Patente de los E.U.A. Número 5,714,338); anticuerpos CD18 (Patente de los E.U.A. Número 5,622,700, otorgada en abril 22, 1997, o como en WO 97/26912, publicada en julio 31, 1997); anticuerpos de anticuerpo receptor Apo-2 (WO 98/51793 publicada en noviembre 19, 1998); anticuerpos de Factor de Tejido (TF) (Patente Europea Número 0 420 937 Bl otorgada en noviembre 9, 1994); anticuerpos de a4-a7 integrina (WO 98/06248 publicada en febrero 19, 1998); anticuerpos EGFR (por ejemplo, anticuerpo 225 quimerizado o humanizado, cetuximab, ERBUTIX®as como en WO 96/40210 publicada en diciembre 19, 1996) ; anticuerpos CD3 tales como OKT3 (Patente de los E.U.A. Número 4,515,893 otorgada en mayo 7, 1985); anticuerpos CD25 o Tac tales como CHI-621 (SIMULECT®) y ZENAPAX® (Ver Patente de los E.U.A. Número 5,693,762 otorgada en diciembre 2, 1997); anticuerpos CD4 tales como el anticuerpo cM-7412 (Choi et al., Arthrites Rheum 39(1): 52-56 (1996)); anticuerpos CD52 tales como CAMPATH-1H ( ILEX/Berlex) (Riechmann et al., Nature 332:323-337 (1988)); anticuerpos receptores de Fe tales como el anticuerpo 22 dirigido contra Fc(RI como en Graziano et al., J. Immunol. 155 (10) : 4996-5002 (1995)); anticuerpos de antigeno carcinoembriónico (CEA = Carcinoembryonic Antigen) tales como hMN-14 (Sharkey et al., Cáncer Res. 55(23Suppl): 5935s-5945s (1995)); anticuerpos dirigidos contra células epiteliales de mama incluyendo huBrE-3, hu-Mc 3 y CHL6 (Ceriani et al., Cáncer Res. 55(23): 5852s-5856s (1995); y Richman et al., Cáncer Res. 55(23 Supp) : 5916s-5920s (1995)); anticuerpos que ligan a células de carcinoma de colon tales como C242 (Litton et al., Eur J. Immunol. 26(1): 1-9 (1996)); anticuerpos CD38, por ejemplo, AT 13/5 (Elles et al., J. Immunol. 155 (2 ): 925-937 (1995)); anticuerpos CD33 tales como Hu M195 (Jurcic et al., Cáncer Res 55(23 Suppl) : 5908s-5910s (1995)) y CMA-676 o CDP771; anticuerpos EpCA tales como 17-1A (PANOREX®); anticuerpos GpIIb/IIIa tales como abciximab o c7E3 Fab (REOPRO®) ; anticuerpos RSV tales como MEDI-493 (SYNAGIS®) ; anticuerpos CMV tales como PROTOVIR®; anticuerpos HIV tales como PR0542; anticuerpos de hepatitis tales como el anticuerpo Hep B OSTAVIR®; anticuerpo CA125 incluyendo anti- UC16 (WO2007/001851; Yin, B T y Lloyd, KO, J. Biol. Chem. 276:27371-27375 (2001)) y OvaRex; anticuerpo de epitopo GD3 idiotipico BEC2; anticuerpo a?ß3 (por ejemplo, VITAXIN®; Medimmune) ; anticuerpo de carcinoma de células renales humanas tal como ch-G250; ING-1; anticuerpo anti-humano 17-lAn (3622W94); y anticuerpo de tumor colo-rectal antihumano (A33) ; anticuerpo de melanoma anti-humano R24 dirigido contra gangliósido GD3; carcinoma de células escamosas antihumano (SF-25) ; anticuerpo de antígeno de leucocitos humanos (HLA = Human Leukocyte Antigen) tal como Smart ID10 y el anticuerpo anti-HLA DR Oncolym (Lym-1) ; anticuerpo CD37 tal como TRU 016 (Trubion) ; anticuerpo IL-21 ( Zymogenetics /Novo Nordesk) ; anticuerpo de células anti-B (Impheron) ; Ab que hace blanco en células B ( Immunogen/Aventes ) ; 1D09C3 (Morphosys/GPC) ; LymphoRad 131 (HGS) ; anticuerpo Lym-1, tal como Lym-lY-90 (USC) y anti-Lym-1 Oncolym (USC/Peregrine) ; LIF 226 (Enhanced Lifesci.); anticuerpo BAFF (por ejemplo, WO 03/33658); anticuerpo receptor BAFF (ver, por ejemplo, WO 02/24909); anticuerpo BR3; anticuerpo Blys tal como belimumab; LY PHOSTAT -B™; ESF 154 (UCSD/Roche/Tragen) ; gomilixima (Idee 152; Biogen Idee); anticuerpo receptor de IL-6 tal como atlizumab (ACTEMRA™; Chugai/Roche ) ; anticuerpo IL-15 tal como HuMax-Il-15 (Genmab/Amgen) ; anticuerpo receptor de quimiocina anticuerpo CCR2 (por ejemplo, MLN1202; Millieneum) ; anticuerpo anti-complemento tal como anticuerpo C5 (por ejemplo, eculizumab, 5G1.1; Alexion) ; formulación oral de inmunoglobulina humana (por ejemplo, IgPO; Protein Therapeutics) ; anticuerpo IL-12 tal como ABT-874 (CAT/Abbott) ; Teneliximab (B S-224818; BMS) ; anticuerpos CD40 incluyendo S2C6 y sus variantes humanizadas (WO00/75348) y TNX 100 (Chiron/Tanox) ; anticuerpos TNF- incluyendo cA2 o infliximab (REMICADE®) , CDP571, MAK-195, adalimumab (HU IRAMR) , fragmento de anticuerpo TNF-a pegilado tal como CDP-870 (Celltech) , D2E7 (Knoll) , anticuerpo policlonal anti-TNF-a (por ejemplo, PassTNF; Verigen) ; anticuerpos CD22 tales como LL2 o epratuzumab (LYMPHOCIDE®; Immunomedics ) , incluyendo epratuzumab 1-90 y epratzumab 1-131, anticuerpo Abiogen's CD22 (Abiogen, Italia), CMC 544 ( yeth/Celltech) , combotox (UT Soutwestern) , BL22 (NIH) , y LympoScan Tc99 (Immunomedics) .
Ejemplos de anticuerpos CD20 incluyen: "C2B8", que ahora se denomina "rituximab" ("RITUXAN®") (Patente de los E.U.A. Número 5,736,137); el anticuerpo murino 2B8 etiquetado con itrio- [90] designado "Y2B8" o "Ibritumomab Tiuxetan" (ZEVALIN®) comercialmente disponible de IDEC Pharmaceuticals , Inc. (Patente de los E.U.A. Número 5,736,137; 2B8 depositado con ATCC bajo el número de acceso HB11388 en junio 22, 1993) ; IgG2a murino "Bl" también denominado "Tositumomab" , opcionalmente etiquetado con 131I para generar el anticuerpo "131I-B1" o "yodo 1131 tositumomab" (BEXXAR™) comercialmente disponible de Corixa (ver, también Patente de los E.U.A. Número 5,595,721); anticuerpo monoclonal murino "1F5" (Press et al., Blood 69 (2 ): 584-591 (1987)) y sus variantes incluyendo "parchado en cuadro" o 1F5 humanizado ( O 2003/002607, Leung, S.; ATCC depósito HB-96450); 2H7 murino y anticuerpo 2H7 quimérico (Patente de los E.U.A. Número 5,677,180); 2H7 humanizado (WO 2004/056312, Lowman et al.,); 2F2 (HuMax-CD20 ) , un anticuerpo de alta afinidad totalmente humano dirigido en la molécula CD20 en la membrana celular de las células B (Genmab, Dinamarca; ver, por ejemplo, Glennie y van de Winkel, Drug Discovery Today 8: 503-510 (2003) y Cragg et al., Blood 101: 1045-1052 (2003); WO 2004/035607; US2004/0167319) ; los anticuerpos monoclonales humanos establecidos en WO 2004/035607 y US2004/0167319 (Teeling et al.,); los anticuerpos tienen cadenas azúcar ligadas a N-glicósido complejas enlazadas a la región Fe descrita en US 2004/0093621 (Shitara et al.,); anticuerpos monoclonales y fragmentos de enlace de antigeno que ligan a CD20 (WO 2005/000901, Tedder et al.,) tales como HB20-3, HB20-4, HB20-25, y MB20-11; moléculas de enlace CD20 tales como la serie AME de anticuerpos, por ejemplo, anticuerpos AME 33 como se establece en WO 2004/103404 y US2005/0025764 (Watkins et al., Eli Lilly/Applied Molecular Evolution, AME) ; moléculas de enlace CD20 tales como aquellas descritas en US 2005/0025764 (Watkins et al.,); anticuerpo A20 o sus variantes tales como anticuerpo A20 quimérico o humanizado (cA20, hA20, respectivamente) o IMMU-106 (US 2003/0219433, Immunomedics ) ; anticuerpos de enlace CD20 incluyendo Leu-16, 1H4, o 2B8 agotado en epitopo, opcionalmente conjugado con IL-2, tal como en US 2005/0069545A1 y WO 2005/16969 (Carr et al.,); anticuerpo biespecifico que liga a CD22 y CD20, por ejemplo, hLL2xhA20 (WO2005/14618 , Chang et al.,); anticuerpos monoclonales L27, G28-2, 93-1B3, B-Cl o NU-B2 disponibles de International Leukocyte Typing Workshop (Valentine et al., In: Leukocyte Typing III (McMichael, Ed., p. 440, Oxford University Press (1987)); 1H4 (Haesma et al., Blood 92:184 (1998)); conjugado aurestatina E anti-CD20 (Seattle Genetics) ; anti-CD20-IL2 (EMD/Biovation/City of Hope) ; terapia MAb anti-CD20 (EpiCyte) ; anticuerpo anti-CD20 TRU 015 (Trubion) .
El término "anticuerpo" como se emplea aquí, incluye anticuerpos monoclonales (incluyendo anticuerpos de longitud integra que tienen una región Fe de inmunoglobulina) , composiciones de anticuerpo con especificidad poliepitópica, anticuerpos multiespecificos (por ejemplo, anticuerpos biespecificos , diacuerpos y moléculas de cadena sencilla asi como fragmentos de anticuerpo (por ejemplo, Fab, F(ab')2, y Fv) . El término "inmunoglobulina" (Ig) se emplea aquí en forma intercambiable con "anticuerpo".
La unidad anticuerpo de 4 cadenas básicas es una glicoproteina heterotetramérica compuesta por dos cadenas ligeras (L) idénticas y dos cadenas pesadas (H) idénticas. Un anticuerpo IgM consiste de 5 unidades heterotetraméricas básicas junto con un polipéptido adicional denominado una cadena J y contiene 10 sitios de enlace de antigeno, mientras que los anticuerpos IgA comprenden de 2-5 de las unidades de 4 cadenas básicas que pueden polimerizarse para formar ensambles polivalentes en combinación con la cadena J. En el caso de IgGs, la unidad de 4 cadenas en general es de aproximadamente 150,000 daltons. Cada cadena L se liga a una cadena H por un enlace disulfuro covalente, mientras que las dos cadenas H se ligan entre si por uno o más enlaces disulfuro dependiendo del isotipo de cadena H. Cada cadena H y L tiene puentes disulfuro intracadena regularmente espaciados. Cada cadena H tiene en el extremo N, un dominio variable (VH) seguido por tres dominios constantes (CH) para cada una de las cadenas OÍ y ? y los cuatro dominios CH para los isotipos µ y e. Cada cadena L tiene en el extremo N, un dominio variable (VL) seguido por un dominio constante en su otro extremo. La VL se alinea con VH y el CL se alinea con el primer dominio constante de la cadena pesada (CH1). Residuos aminoácidos particulares se considera que forman una interfase entre los dominios variables de cadena ligera y cadena pesada. El apareamiento de una VH y VL . en conjunto forma un sitio de enlace de antigeno sencillo. Para las estructuras y propiedades de las diferentes clases de anticuerpos, ver, por ejemplo, Basic and Clinical Immunology, 8th Edition, Daniel P. Sties, Abba I. Terr y Trestram G. Parsolw (eds), Appleton & Lange, Norwalk, Conn. , 1994, página 71 y Capitulo 6.
La cadena L de cualquier especie de vertebrados puede asignarse a uno de dos tipos claramente distintos denominados kappa y lambda, con base en las secuencias de aminoácido de sus dominios constantes. Dependiendo de la secuencia de aminoácidos del dominio constante de sus cadenas pesadas (CH) , pueden asignarse inmunoglobulinas a diferentes clases o isotipos. Hay cinco clases de inmunoglobulinas: IgA, IgD, IgE, IgG y IgM, que tienen cadenas pesadas designadas a, d, e, ?, y µ, respectivamente. Las clases ? y además se dividen en subclases en base a las diferencias relativamente menores en la secuencia y función CH, por ejemplo humanas expresan las siguientes subclases: IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl y IgA2.
El término "variable" se refiere al hecho de que ciertos segmentos de los dominios variables difieren extensamente en secuencia entre anticuerpos. El dominio V media enlace de antigeno y define la especificidad de un anticuerpo particular por su antigeno particular. Sin embargo, la variabilidad no se distribuye uniformemente a través de toda la extensión de los dominios variables. Por el contrario, las regiones V consisten de tramos relativamente invariantes denominados regiones marco (FRs) de aproximadamente 15-30 residuos aminoácidos separadas por regiones más cortas de variabilidad extrema denominadas "regiones hipervariables" o en ocasiones "regiones de determinación de complementariedad" (CDRs = Complementarity Determining Regions) que cada una son de aproximadamente 9-12 residuos aminoácido de longitud. Los dominios variables de las cadenas pesadas y ligeras nativas cada uno comprenden cuatro FRs, sustancialmente adoptando una configuración de hoja ß, conectada por tres regiones hipervariables , que forman bucles que conectan y en algunos casos forman parte de, la estructura de hoja ß. Las regiones hipervariables en cada cadena se mantienen en conjunto en proximidad inmediata por las FRs y con las regiones hipervariables de la otra cadena, contribuyen a la formación del sitio de enlace de antigeno de anticuerpos (ver Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991) . Los dominios constantes no están involucrados directamente en enlace de un anticuerpo con un antigeno, pero exhiben diversas funciones efectoras tales como participación de la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpo (ADCC = Antibody Dependent Cellular Cytotoxicity) .
La expresión "región hipervariable" (también conocida como "regiones de determinación de complementariedad" o CDRs) cuando se emplea aquí, se refieren a los residuos aminoácidos de un anticuerpo que son, (usualmente de tres o cuatro regiones cortas de variabilidad de secuencia extrema) dentro del dominio de región V de una inmunoglobulina que forma el sitio de enlace de antigeno y son los determinantes principales de la especificidad de antigeno. Hay al menos dos métodos para identificar los residuos CDR: (1) Un enfoque con base en variabilidad de secuencia a través de especies (es decir, Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institute of Health, Bethesda, M S 1991); y (2) Un enfoque con base en estudios cristalográficos de complejos antigeno-anticuerpo (Chothia, C. et al., J. Mol. Biol. 196: 901-917 (1987)). Sin embargo, en la medida de que las dos técnicas de identificación de residuo definen regiones de superposición, pero no regiones idénticas, pueden combinarse para definir una CDR híbrida.
La expresión "anticuerpo monoclonal" como se emplea aquí, se refiere a un anticuerpo que se obtiene de una población de anticuerpos sustancialmente homogénea, es decir los anticuerpos individuales que comprenden la población son idénticos excepto por mutaciones de origen natural posibles y/o modificaciones post-traducción (por ejemplo, isomerizaciones, amidaciones) que pueden estar presentes en cantidades menores. Anticuerpos monoclonales son altamente específicos, dirigidos contra un solo sitio antigénico. Además, en contraste con preparaciones de anticuerpo convencionales (policlonales ) que típicamente incluyen anticuerpos diferentes dirigidos contra diferentes determinantes (epítopos) , cada anticuerpo monoclonal se dirige contra un solo determinante en el antígeno. Además de su especificidad, los anticuerpos monoclonales son ventajosos ya que se sintetizan por el cultivo de hibridoma, sin contaminar por otras inmunoglobulinas . El modificador "monoclonal" indica el carácter del anticuerpo obtenido de una población de anticuerpos sustancialmente homogénea y no habrá de considerarse que requiere producción del anticuerpo por ningún método particular. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales para utilizarse de acuerdo con la presente invención pueden elaborarse por el método de hibridoma primero descrito por Kohler et al., Nature, 256: 495 (1975), o pueden elaborarse por métodos de DNA recombinante (ver por ejemplo, la Patente de los E.U.A. Número 4,816,567) . Los "anticuerpos monoclonales" también pueden aislarse de bibliotecas de anticuerpo fago utilizando las técnicas descritas en Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991) y Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991), por ejemplo.
Los anticuerpos monoclonales aquí específicamente incluyen anticuerpos "quiméricos" (inmunoglobulinas) en donde una porción de la cadena pesada y/o ligera es idéntica con u homologa a secuencias correspondientes en anticuerpos derivados de una especie particular o que pertenecen a una clase o subclase de anticuerpo particular, mientras que el resto de la o las cadenas es idéntico con u homólogo a secuencias correspondientes en anticuerpos derivados de otras especies o que pertenecen a otra clase o subclase de anticuerpo, así como fragmentos de estos anticuerpos, siempre que exhiban la actividad biológica deseada (Patente de los E.U.A. Número 4,816, 567; Morrison et¦ al., Proc. Nati. Acad.
Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)). Anticuerpos quiméricos de interés aquí incluyen anticuerpos "primatizados" que comprenden secuencias de enlace de antigeno de dominio variable derivadas de un primate no humano (por ejemplo, Mono del Viejo Mundo, Simio, etc.) y secuencias de región de contenido humano.
Un anticuerpo "intacto" es aquel que comprende un sitio de enlace de antigeno asi como un CL y dominios de cadena pesada, CH1, CH2 y CH3. Los dominios constantes pueden ser dominios constantes de secuencia nativa (por ejemplo dominios constantes de secuencia nativa humana) o sus variantes de secuencia de aminoácidos. De preferencia, el anticuerpo humano tiene una o más funciones efectoras.
Un "fragmento de anticuerpo" comprende una porción de un anticuerpo intacto, de preferencia el enlace de antigeno y/o la región variable del anticuerpo intacto. Ejemplos de fragmentos de anticuerpo incluyen fragmentos Fab, Fab', F(ab' )2 y Fv; diacuerpos; anticuerpos lineales (ver Patente de los E.U.A. Número 5,641,870, Ejemplo 2; Zapata et al., Protein Eng. 8(10): 1057-1062
[1995]); moléculas de anticuerpo de cadena sencilla y anticuerpos multiespecificos formados de fragmentos de anticuerpos.
Digestión con papaina de anticuerpos produce dos fragmentos de enlace de antigeno idénticos denominados fragmentos "Fab", y un fragmento "Fe" residual, una designación que refleja la capacidad por cristalizar fácilmente. El fragmento Fab consiste de toda una cadena L junto con el dominio de región variable de la cadena H (VH) y el primer dominio constante de una cadena pesada (CH1) . Cada fragmento Fab es monovalente respecto al enlace de antigeno, es decir tiene un sitio de enlace de antigeno sencillo. Tratamiento con pepsina de un anticuerpo produce un solo fragmento grande F(ab')2 que corresponde aproximadamente a dos fragmentos Fab enlazados con disulfuró que tienen diferente actividad de enlace de antigeno y todavía son capaces de entrelazar antígeno. Fragmento Fab1 difiere de fragmentos Fab al tener unos pocos residuos adicionales en el extremo carboxi del dominio CH1 incluyendo uno o más cisteínas de la región bisagra de anticuerpo. Fab'-SH es la designación aquí por Fab1 en donde el o los residuos cisteína de los dominios constantes contienen un grupo tiol libre. Fragmentos de anticuerpo F(ab')2 originalmente se produjeron como pares de fragmentos Fab' que tienen cisteínas bisagra entre ellos. Otros acoplamientos químicos de fragmentos de anticuerpo también se conocen.
El fragmento Fe comprende las porciones carboxi terminales de ambas cadenas H sostenidas en conjunto por disulfuros. Las funciones efectoras de anticuerpo se determinan por secuencias en la región Fe, la región que también se reconoce por receptores Fe (FcR) que se encuentran en ciertos tipos de células.
"Fv" es el fragmento de anticuerpo mínimo que contiene un sitio de enlace y reconocimiento de antígeno completo. Este fragmento consiste de un dímero de un dominio de región variable de cadena ligera y uno de cadena pesada en una asociación cerrada, no covalente. Del pliegue de estos dos dominios emanan seis bucles hipervariables (3 bucles cada uno de la cadena H y L) que contribuyen a los residuos aminoácido para enlace de antígeno y confieren especificidad de enlace de antígeno al anticuerpo. Sin embargo, incluso un solo dominio variable (o la mitad de un Fv comprende sólo tres CDRs específicos para un antígeno) , tiene la capacidad por reconocer y ligar antígeno, aunque a una menor afinidad que todo el sitio de enlace.
"Fv de cadena sencilla" también abreviado como "sFv" o "scFv" consiste de fragmentos de anticuerpo que comprenden los dominios de anticuerpo VH y VL conectados en una sola cadena polipéptido. De preferencia, el polipéptido sFv además comprende un enlazador polipéptido entre los dominios VH y VL que permiten a sFv formar la estructura deseada para enlace de antígeno. Para revisar los sFv, ver Pluckthun en The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994).
La expresión "diacuerpos" se refiere a pequeños fragmentos de anticuerpo preparados al construir fragmentos sFv (ver párrafo precedente) con enlazadores cortos (aproximadamente 5-10) residuos) entre los dominios VH y VL de manera tal que apareamiento intercadena pero no intracadena de los dominios V se logran, de esta manera resultando en un fragmento bivalente, es decir un fragmento que tiene dos sitios de enlace de antigeno. Diacuerpos biespecificos son heterodimeros de dos fragmentos sFv de "cruce" en donde los dominios VH y VL de los dos anticuerpos están presentes en diferentes cadenas polipéptido. Se describen diacuerpos con mayor detalle por ejemplo en EP 404,097; WO 93/11161; Hollinger et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993) .
Un anticuerpo que "liga específicamente a" o es "específico para" un polipéptido particular o un epítopo en un polipéptido particular es aquel que liga a ese polipéptido o epítopo particular en un polipéptido particular sin ligar sustancialmente a cualquier otro polipéptido o epítopo polipéptido .
La expresión "fase sólida" describe una matriz no acuosa a la cual puede adherirse el anticuerpo de la presente invención. Ejemplos de fase sólida abarcados aquí incluyen aquellos formados parcialmente o totalmente de vidrio (por ejemplo vidrio de poro controlado) polisacáridos (por ejemplo agarosa) , poliacrilamidas, poliestireno, polivinil alcohol y siliconas. En ciertas modalidades, dependiendo del contexto, la fase sólida puede comprender el pozo de una placa de ensayo; en otras es una columna de purificación (por ejemplo, una columna de cromatografía de afinidad) . Este término también incluye una fase sólida discontinua de partículas discretas tales como aquellas descritas en la Patente de los E.U.A. Número 4,275,149.
Formas "humanizadas" de anticuerpos no humanos (por ejemplo, murinas) son inmunoglobulinas quiméricas, cadenas de inmunoglobulinas o sus fragmentos (tales como Fv, Fab, Fab 1 , F(ab')2 u otras subsecuencias de enlace de antígeno de anticuerpos) primordialmente de secuencias humanas, que contienen secuencia mínima derivada de inmunoglobulina no humana. En su mayoría, anticuerpos humanizados son inmunoglobulinas humanas (anticuerpo recipiente) en donde residuos de una región hipervariables (también CDR) del recipiente se reemplazan por residuos de una región hipervariable de una especie no humana (anticuerpo donador) tal como ratón, rata o conejo que tiene las deseadas especificidad, afinidad y capacidad. En algunos casos, residuos de región marco Fv (FR) de la inmunoglobulina humana se reemplazan con residuos no humanos correspondientes. Además, "anticuerpos humanizados" como se emplean aquí, también puede comprender residuos que no se encuentran ni en el anticuerpo recipiente ni en el anticuerpo donador. Estas modificaciones se hacen para refinar adicionalmente y optimizar el desempeño de anticuerpo. El anticuerpo humanizado en forma óptima también comprenderá cuando menos una porción de una región constante de inmunoglobulina (Fe) , típicamente la de una inmunoglobulina humana. Para mayores detalles, ver Jones et al., Nature, 321:522-525 (1986); Reichmann et al., Nature, 332:323-329 (1988); y Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 2:593-596 (1992).
Un "anticuerpo dependiente de especie" por ejemplo, un anticuerpo IgE antihumano mamífero es un anticuerpo que tiene una más fuerte afinidad de enlace para un antígeno de una primer especie de mamífero que para un homólogo de ese antígeno de una segunda especie de mamífero. Normalmente, el anticuerpo dependiente de especie "liga específicamente" con un antígeno humano (es decir tiene un valor de afinidad de enlace (Kd) no mayor a aproximadamente lxlO"7 M, en forma alterna no mayor a aproximadamente lxlO-8 M, en forma alterna no mayor a aproximadamente lxlO"9 M) , pero tiene una afinidad enlace para un homólogo del antígeno de una segunda especie de mamífero no humano que es al menos aproximadamente 50 veces, al menos aproximadamente 500 veces, o al menos aproximadamente 1000 veces más débil que su afinidad de enlace para el antígeno no humano. El anticuerpo dependiente de especie puede ser de cualesquiera diversos tipos de anticuerpos como se definió anteriormente, pero de preferencia es un anticuerpo humanizado o humano.
"Funciones efectoras" de anticuerpo se refieren a aquellas actividades biológicas atribuibles a la región Fe (una región Fe de secuencia nativa o región Fe variante de secuencia de aminoácidos) de un anticuerpo, y varían con el isotipo de anticuerpo. Ejemplos de funciones efectoras de anticuerpo incluyen: enlace Clq y citotoxicidad dependiente de complemento; enlace de receptor Fe; citotoxicidad mediada por células dependientes de anticuerpo (ADCC) ; fagocitosis; regulación a la baja de receptores de superficie celular (por ejemplo receptores de célula B) ; y activación de célula B.
"Citotoxicidad mediada por células dependientes de anticuerpo" o ADCC se refiere a una forma de citotoxicidad en donde Ig secretada ligada en receptores Fe (FcRs) presente en ciertas células citotóxicas (por ejemplo, células destructoras naturales (NK = Natural Killer) , neutrófilos y macrófagos) permite que estas células efectoras citotóxicas liguen específicamente a una célula objetivo que contiene antígeno y subsecuentemente exterminen a la célula objetivo con citotoxinas. Los anticuerpos "arman" las células citotóxicas y se requieren para exterminar la célula objetivo por este mecanismo. Las células primarias para mediar ADCC, células NK, expresan FcyRIII sólo mientras que los monocitos expresan FcyRI, FcyRII y FcyRIII. La expresión Fe en células hematopoyéticas se resume en la Tabla 3 en la página 464 de Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-92 (1991) . Para estimar la actividad ADCC de una molécula de interés, un ensayo ACDD in vítro, tal como el descrito en las Patentes de los E.U.A. Números 5,500,362 o 5,821,337, puede realizarse. Células efectoras útiles para estos ensayos incluyen células mononucleares de sangre periférica (PBMC = Peripheral Blood Mononuclear Cells) y células destructoras naturales (NK) . En forma alterna o adicional, la actividad ADCC de la molécula de interés puede estimarse in vivo, por ejemplo en un modelo de animal tal como el descrito en Clynes et al., PNAS USA 95: 652-656 (1998) .
"Receptor Fe" o "FcR" describe un receptor que liga a la región Fe de un anticuerpo. El FcR preferido es un FcR humano de secuencia nativa. Aún más, un FcR preferido es aquel que liga un anticuerpo IgG (un receptor gamma) e incluye receptores de las subclases FcyRI, FcyRII y FCYRIII, incluyendo variantes alélicas y formas combinadas de manera alterna de estos receptores, receptores FcyRII incluyen FcyRIIA (un "receptor de activación") y FcyRIIB (un "receptor de inhibición") , que tienen similares secuencias de aminoácidos que difieren primordialmente en sus dominios citoplásmicos . El receptor de activación FcyRIIA contiene un motivo de activación basado en tirosina inmunoreceptor (ITAM = Immunoreceptor Tyrosine-Based Activation Motif) en su dominio citoplásmico . Inhibe el receptor FcyRIIB contiene un motivo de inhibición basado en tirosina inmunoreceptor (ITIM Immunoreceptor Tyrosine-Based Inhibition otif) en su dominio citoplásmico . (Ver M. Daeron, Annu. Rev. Immunol . 15:203-234 (1997). FcRs se revisan en Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-92 (1991); Capel et al., Immunomethods 4: 25-34 (1994); y Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126: 330-41 (1995) . Otros FcRs, incluyendo aquellos que se van a identificar en el futuro, son abarcados por el término "FcR" aquí. El término también incluye el receptor neonatal FcRn, que es responsable por la transferencia de IgGs maternos al feto. Guyer et al., J. Immunol. 117: 587 (1976) y Kim et al., J. Immunol. 24: 249 (1994).
"Células efectoras humanas" son leucocitos que expresan uno o más FcRs y realizan funciones efectoras. De preferencia, las células expresan al menos FcyRIII y realizan función efectora ADCC. Ejemplos de leucocitos humanos que median ADCC incluyen células mononucleares de sangre periférica (PBMC = Peripheral Blood Mononuclear Cells) , células destructoras naturales (NK) , monocitos, células citotóxicas y neutrófilos, con PB Cs y células MNK que se prefieren. Las células efectoras pueden ser aisladas de una fuente nativa, por ejemplo sangre.
"Citotoxicidad dependiente de complemento" de "CDC" se refiere a la lisis de una célula objetivo en la presencia de complemento. La activación de la ruta de complemento clásico se inicia por el enlace del primer componente del sistema de complemento (Clq) a anticuerpos (de la subclase apropiada) que se ligan a su antigeno cognado. Para estimar activación de complemento, un ensayo CDC, por ejemplo como se describe en Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202: 163 (1996), puede realizarse.
La expresión "formulación farmacéutica" se refiere a una preparación que está en dicha forma para permitir que la actividad biológica del ingrediente activo sea efectiva, y que no contiene componentes adicionales que son inaceptablemente tóxicos a un sujeto al cual se administrará la formulación.
Un anticuerpo posee "actividad biológica" en una formulación farmacéutica si la actividad biológica del anticuerpo en un tiempo determinado está dentro de aproximadamente 10% (dentro de los errores del ensayo) de la actividad biológica que se exhibe al tiempo en que se preparó la formulación farmacéutica, como se determina- por la habilidad del anticuerpo in vitro o in vivo para ligar al antigeno y resultar en una respuesta biológica medible.
Una formulación "estable" es aquella en la que la proteina esencialmente retiene su estabilidad fisica y/o química ante almacenamiento. La estabilidad puede medirse a una temperatura selecta por un periodo de tiempo selecto. De preferencia, la formulación es estable a temperatura ambiente (~30°C) o a 40°C por al menos 1 mes y/o estable a aproximadamente 2-8 °C por al menos 1 año y de preferencia por al menos 2 años. Por ejemplo, la extensión de agregación durante almacenamiento puede emplearse como un indicador de estabilidad de proteina. De esta manera, una formulación "estable" puede ser aquella en donde al menos aproximadamente 10% y de preferencia al menos aproximadamente 5% de la proteina está presente como un agregado en la formulación. Diversas técnicas analíticas para medir estabilidad de proteína están disponibles en la técnica y se revisan por ejemplo en Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs . (1991) y Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90 (1993).
Incrementar la "estabilidad" de una formulación que contiene proteínas, se refiere a reducir (en comparación con una formulación que contiene proteínas sin tratar) o evitar la formación de agregados de proteína en esa formulación.
El término "solución acuosa" se refiere a una solución en que el agua es el medio de disolución o solvente. Cuando una sustancia se disuelve en un líquido, la mezcla se denomina una solución. La sustancia disuelta es el soluto y el líquido que hace la disolución (en este caso agua) es el solvente .
La expresión "agente estabilizante" o "estabilizante" como se emplea aquí, es un producto químico o compuesto que se agrega a una solución o mezcla o suspensión o composición o composición terapéutica, para mantenerla en un estado estable o sin cambio; o es aquel que se emplea debido a que produce una reacción que involucra cambios en átomos o moléculas que llevan a un estado más estable o sin cambio .
Con el término "agregado" o "agregación" como se emplea aquí, se pretende que se reúna o recolecte en una masa o un todo, por ejemplo como en la agregación de péptidos, polipéptidos , anticuerpos o sus variantes. Agregados pueden ser auto agregados o agregados debido a otros factores, por ejemplo agentes de agregación, agentes de precipitación, agitación u otros medios y métodos con los que péptidos, polipéptidos, anticuerpos o sus variantes puedan reunirse.
Agregación inducida por agitación es la formación de agregados en una solución que contiene proteínas inducida por agitación, en donde la agitación es poner en movimiento mediante agitación o sacudida.
Un anticuerpo que es "susceptible a agregación" es aquel que se ha observado que se agrega con otra u otras moléculas de anticuerpo especialmente ante agitación.
Por "inhibir" agregación inducida por agitación se pretende evitar, reducir o disminuir la cantidad de agregación inducida por agitación, debido al comparar la cantidad de agregado presente en una solución que contiene proteina, que comprende al menos un inhibidor de agregación inducida por agitación con la cantidad de agregado presente en una solución que contiene proteina que no comprende cuando menos un inhibidor de agregación inducida por agitación.
Una cantidad "inhibidora de agregación inducida por agitación" de un alquilglicósido es la cantidad de este alquilglicósido que inhibe en forma detectable la agregación inducida por agitación de una proteina, en comparación con una proteina idénticamente tratada en la ausencia del alquilglicósido.
Una proteina "oxidada" aquí es aquella en la que uno o más residuos aminoácido de la misma se han oxidado. En ciertas modalidades, el aminoácido oxidado es triptofano. La oxidación de aminoácidos de proteínas puede ser inducida por exposición a la luz, que por lo tanto se refiere aquí como "oxidación inducida por luz".
Una proteina que es "susceptible a oxidación" es aquella que comprende uno o más residuos que se han encontrado tienden a oxidación.
Por "inhibir" o "evitar" oxidación se entiende como reducir o disminuir la cantidad de oxidación, medido al comparar la cantidad de oxidación presente en una solución que contiene proteina, que comprende cuando menos un inhibidor de oxidación con la cantidad de oxidación presente en una solución que contiene proteina que no comprende al menos un inhibidor de oxidación.
Una cantidad que "evita oxidación" en alquilglicósido es la cantidad de ese alquilglicósido que inhibe en forma detectable o reduce la oxidación de una proteína en comparación con una proteina tratada en forma idéntica en la ausencia del alquilglicósido.
Métodos que pueden encontrar uso en la presente invención para medir agregación inducida por agitación y/u oxidación de proteínas incluyen electroforesis en gel, enfoque isoeléctrico, electroforesis capilar, cromatografía tal como cromatografía de exclusión de tamaño, cromatografía de intercambio de iones y cromatografía de líquido de alto desempeño de fase inversa, mapeo de péptidos, mapeo de oligosacáridos , espectrometría de masas, espectroscopia de absorbancia ultravioleta, espectroscopia de fluorescencia, espectroscopia de dicroísmo circular, calorimetría de titulación isotérmica, calorimetría de barrido diferencial, ultracentrifugación analítica, dispersión de luz dinámica, proteólisis, y entrelazamiento o reticulación, medición de turbidez, ensayos de retardo de filtro, ensayos inmunológicos, ensayos de enlace de colorante fluorescente, ensayos de tinción de proteína, microscopía y detección de agregados por ELISA u otros ensayos de enlace.
La "concentración de micelios crítica" (CMC) es la concentración umbral en la que un surfactante se agrega en solución para formar agrupamientos o grumos denominados micelios. Como se emplea aquí, valores CMC para cualquier surfactante particular se miden a 20 - 25°C en agua, de preferencia a 25°C en agua, y pueden expresarse en unidades de mM o p/v. Debido a que la formación de los micelios a partir de los monómeros constituyentes involucra un equilibrio, la existencia de un intervalo de concentración estrecho para los micelios, por debajo del cual la solución contiene cantidades despreciables de micelios y sobre el cual prácticamente todo el surfactante adicional se encuentra en la forma de micelios adicionales, se ha establecido. Una compilación de CMCs para cientos de compuestos en solución acuosa se ha preparado por Mukerjee, P. and Mysels, K.J. (1971) Critical Micelle Concentrations of Aqueous Surfactant Systems, NSRDS-NBS 36. Superintendent of Documents, U.S. Government Printing Office, Washington, DC. Ver también, http : //www . anatrace . com/docs/detergent_data . pdf .
Una técnica común empleada para determinar CMC es la medida directa de la tensión superficial en equilibrio como función de la concentración de surfactante utilizando un tensiómetro de superficie. Otros métodos incluyen medir la intensidad de luz dispersa, solubilización de colorantes fluorescentes, etc., como una función de la concentración de surfactante. Éstas y otras de estas técnicas son bien conocidas en la especialidad y se emplean en forma rutinaria. "Aislado (a)" cuando se emplea para describir los diversos polipéptidos y anticuerpos aquí descritos, significa un polipéptido o anticuerpo que se ha identificado, separado y/o recuperado de un componente de su ambiente de producción. De preferencia, el polipéptido aislado está libre de asociación con todos los otros componentes de su ambiente de producción. Componentes contaminantes de su ambiente de producción, tales como los que resultan de células transfectado recombinantes, son materiales que típicamente interferirán con usos de diagnóstico o terapéuticos para el polipéptido y pueden incluir enzimas, hormonas y otros solutos proteináceos o no proteináceos . En modalidades preferidas, el polipéptido será purificado (1) a un grado suficiente para obtener al menos 15 residuos de secuencia de aminoácidos interna o N-terminal por el uso de un secuenciador de copa de centrifugado o (2) a homogeneidad por SDS-PAGE bajo condiciones no reductoras o reductoras utilizando azul Coomassie o de preferencia tinción con plata. De manera ordinaria, sin embargo un anticuerpo o polipéptido aislado se preparará por al menos una etapa de purificación.
Una molécula de ácido nucleico "aislada" que codifica los polipéptidos y anticuerpos aquí, es una molécula de ácido nucleico que se identifica y separa de al menos uná molécula de ácido nucleico contaminante con la cual se asocia ordinariamente en el ambiente en el que se produjo. De preferencia, el ácido nucleico aislado está libre de asociación con todos los componentes asociados con el ambiente de producción. Las moléculas de ácido nucleico aisladas que codifican los polipéptidos y anticuerpos aquí están en una forma diferente a la forma o ámbito en el que se encuentra en la naturaleza. Moléculas de ácido nucleico aisladas por lo tanto se distinguen de ácido nucleico que codifica los polipéptidos y anticuerpos aquí existentes naturalmente en las células.
La expresión "secuencias de control" se refiere a secuencias de DNA necesarias para la expresión de una secuencia de codificación enlazada operativamente en un organismo hospedero particular. Las secuencias de control que son adecuadas para procariotas, por ejemplo incluyen un promotor, opcionalmente una secuencia de operador y un sitio de enlace de ribosoma. Células eucarióticas se conocen que utilizan promotores, señales de poliadenilación y mej oradores. Ácido nucleico se "enlaza operativamente" cuando se coloca en una relación funcional con otra secuencia de ácido nucleico. Por ejemplo DNA para una presecuencia o líder secretorio se enlaza operativamente con DNA para un polipéptido si se expresa como una preproteína que participa en la secreción del polipéptido; un promotor o mejorador se enlaza operativamente a una secuencia de codificación si afecta la transcripción de la secuencia; o un sitio de enlace de ribosoma se enlaza operativamente con una secuencia de codificación y se ubica para facilitar la traducción. En general, "enlazado operativamente" significa · que las secuencias de DNA ligadas están contiguas y en el caso de un líder secretorio contiguas y en fase de lectura. Sin embargo, los mejoradores no tienen que ser contiguos. El enlace se logra por ligación en sitios de restricción convenientes. Si estos sitios no existen, los adaptadores oligonucleótidos sintéticos o enlazadores se emplean de acuerdo con la práctica convencional.
La expresión "etiquetado con epítopo" como se emplea aquí, se refiere a un polipéptido quimérico que comprende un polipéptido o anticuerpo aquí descrito fusionado a un "polipéptido etiqueta". El polipéptido etiqueta tiene residuos suficientes para proporcionar un epítopo contra el cual puede elaborarse un anticuerpo, sin embargo suficientemente cortos de manera tal que no interfieran con la actividad del polipéptido al cual se fusiona. El polipéptido etiqueta de preferencia también es sustancialmente único de manera tal que el anticuerpo no reacciona sustancialmente en forma cruzada con otros epítopos. Polipéptidos etiqueta convenientes en general tienen al menos seis residuos aminoácido y usualmente entre aproximadamente 8 y 50 residuos aminoácido (de preferencia, entre aproximadamente 10 y 20 residuos aminoácido) .
Como se emplea aquí, el término "inmunoadhesina" designa moléculas tipo anticuerpo que combinan la especificidad de enlace de una proteina heteróloga (una "adhesina") con las funciones efectoras de dominios constantes de inmunoglobulina . Estructuralmente, las inmunoadhesinas comprenden una fusión de una secuencia de aminoácidos con la especificidad de enlace deseada que es diferente al sitio de enlace de reconocimiento de antigeno de un anticuerpo (es decir es "heterólogo" ) y una secuencia de dominio constante de inmunoglobulina. La parte de adhesina en una molécula de inmunoadhesina, típicamente es una secuencia de aminoácidos contigua que comprende al menos el sitio de enlace de un receptor o un ligando. La secuencia de dominio constante de inmunoglobulina en la inmunoadhesina puede obtenerse de cualquier inmunoglobulina tales como los subtipos IgG-1, IgG-2, IgG-3 o IgG-4, IgA (incluyendo IgA-1 y IgA-2), IgE, IgD o Ig . Las fusiones Ig de preferencia incluyen la sustitución de un dominio de un polipéptido o anticuerpo aquí descrito en lugar de al menos una región variable dentro de una molécula Ig. En una modalidad particularmente preferida, la fusión de inmunoglobulina incluye la bisagra, CH2 y CH3, o la región CH1, CH2 y CH3 de una molécula IgGl. Para la producción de fusiones de inmunoglobulina ver también la Patente de los E.U.A. Número 5,428,130 otorgada en junio 27, 1995.
Una formulación "isotónica" es aquella que esencialmente tiene la misma presión osmótica que la sangre humana. Las formulaciones isotónicas en general tendrán una presión osmótica de aproximadamente 250 a 350 mOsm. El término "hipotónica" describe una formulación con una presión osmótica inferior a la de la sangre humana. De manera correspondiente, el término "hipertónica" se emplea para describir una formulación con una presión osmótica sobre la de la sangre humana. La isotonicidad puede medirse utilizando un osmómetro de tipo presión de vapor o congelamiento con hielo, por ejemplo. Las formulaciones de la presente invención son hipertónicas como resultado de la adición de sal y/o amortiguador.
Una formulación "reconstituida" es aquella que se ha preparado al disolver una formulación de anticuerpo o proteina liofilizada en un diluyente tal que la proteina se dispersa en la formulación reconstituida. La formulación reconstituida es adecuada para administración (por ejemplo administración parenteral) a un paciente a tratar con la proteina de interés y en ciertas modalidades de la invención, puede ser aquella que es adecuada para administración subcutánea .
Un "ácido farmacéutico aceptable" incluye ácidos inorgánicos y orgánicos que no son tóxicos a las concentraciones y en la manera en que se formulan. Por ejemplo, ácidos inorgánicos convenientes incluyen clorhídrico, perclórico, bromhídrico, yodhídrico, nítrico, sulfúrico, sulfónico, sulfínico, sulfanílico, fosfórico, carbónico, etc. Ácidos orgánicos convenientes incluyen de alquilo con cadena recta y ramificada, aromáticos, cíclicos, cicloalifáticos , arilalifáticos, heterocíclicos, saturados, insaturados, mono, di- y tri-carboxílieos , incluyendo por ejemplo fórmico, acético, 2-hidroxiacético, trifluoroacético, fenilacético, trimetilacético, t-butil acético, antranílico, propanóico, 2-hidroxipropanóico, 2-oxopropanóico, propandióico, ciclopentanpropiónico, ciclopentanpropiónico, 3-fenilpropiónico, butanóico, butandióico, benzoico, 3- (4-hidroxibenzoil ) benzoico, 2-acetoxi-benzóico, ascórbico, cinámico, lauril sulfúrico, esteárico, mucónico, mandélico, succínico, embónico, fumárico, mélico, maléico, hidroximaléico, malónico, láctico, cítrico, tartárico, glicólico, glicónico, glucónico, pirúvico, glioxálico, oxálico, mesílico, sucínico, salicílico, itálico, palmóico, palméico, tiociánico, metansulfónico, etansulfónico, 1, 2-etandisulfónico, 2-hidroxietansulfónico, bencensulfónico, 4-clorobencensulfónico, naftalen-2-sulfónico, p-toluensulfónico, canforsulfónico, 4-metilbiciclo [2.2.2 ] -oct-2-en-l-carboxílico, glucoheptónico, 4, 1 -metilenbis-3-(hidroxi-2-en-l-carboxílico) , hidroxinaptóico .
"Bases farmacéuticas aceptables" incluyen bases inorgánicas y orgánicas que no son tóxicas a la concentración y forma en la que se elaboran. Por ejemplo, bases convenientes incluyen aquellas formadas de metales formadores de bases inorgánicas tales como litio, sodio, potasio, magnesio, calcio, amonio, hierro, zinc, cobre, manganeso, aluminio, N-metilglucamina, morfolina, piperidina y bases no tóxicas orgánicas incluyendo de amina primaria, secundaria y terciaria, aminas sustituidas, aminas cíclicas y resinas de intercambio de iones básicas [e.g., N(R')4+ (en donde R1 es independientemente H o Ci_4 alquilo, por ejemplo, amonio, Tris)], por ejemplo, isopropilamina, trietilamina, dietilamina, trietilamina, tripropilamina, etanolamina, 2-dietilaminoetanol, trimetamina, diciclohexilamina, lisina, arginina, histidina, cafeína, procaína, hidrabamina, colina, betaína, etilendiamina, glucosamina, metilglucamina, teobromina, purinas, piperazina, piperidina, N-etilpiperidina, resinas poliamina y semejantes. Bases no tóxicas orgánicas particularmente preferidas son isopropilamina, dietilamina, etanolamina, trimetamina, diciclohexilamina, colina y cafeína. Ácidos y bases farmacéuticos aceptables adicionales utilizables con la presente invención, incluyen aquellos que se derivan de los aminoácidos, por ejemplo, histidina, glicina, fenilalanina, ácido aspártico, ácido glutámico, lisina y asparagina.
Amortiguadores y sales "farmacéuticas aceptables" incluyen aquellos derivados tanto de sales de adición de ácido y base de los ácidos y bases anteriormente indicados. Amortiguadores específicos y/o sales incluyen histidina, succinato y acetato.
Un "lioprotector" es una molécula que cuando se combina con una proteína de interés evita significativamente o reduce inestabilidad físico-química de la proteína ante liofilización y subsecuente almacenamiento. Lioprotectores ejemplares incluyen azúcares y su azúcar alcoholes correspondientes; un aminoácido tal como glutamato monosodxo o histidina; una metilamina tal como betaína; una sal liotrópica tal como sulfato de magnesio; un poliol tal como trihídrico o azúcar alcohol de superior peso molecular, por ejemplo glicerina, dextrano, eritritol, glicerol, arabitol, xilitol, sorbitol y manitol; propilen glicol; polietilen glicol; Pluronics®; y sus combinaciones. Lioprotectores ejemplares adicionales incluyen glicerina y gelatina y los azúcares melibiosa, melezitosa, rafinosa, manotriosa y estaquiosa. Ejemplos de azúcares reductores incluyen glucosa, maltosa, lactosa, maltulosa, iso-maltulosa y lactulosa. Ejemplos de azúcares no reductores incluyen glicósidos no reductores de compuestos polihidroxi seleccionados de azúcar alcoholes y otros polialcoholes de cadena recta. Azúcar alcoholes preferidos son monoglicósidos , en especial aquellos compuestos que se obtienen por reducción de disacáridos tales como lactosa, maltosa, lactulosa y maltulosa. El grupo lateral glicosidico ya puede ser glucosidico o galactosidico . Ejemplos adicionales de azúcar alcoholes son glucitol, maltitol, lactitol e iso-maltulosa . Los lioprotectores preferidos son los azúcares no reductores trehalosa o sacarosa .
El lioprotector agregado a la formulación pre-liofilizada en una "cantidad lioprotectora" que significa que después de liofilización de la proteina en la presencia de una cantidad lioprotectora del lioprotector, la proteina esencialmente retiene su estabilidad fisicoquímica ante liofilización y almacenamiento.
Un "azúcar farmacéutico aceptable" es una molécula que cuando se combina con una proteína de interés, evita o reduce significativamente la inestabilidad fisicoquímica de la proteína ante almacenamiento. Cuando la formulación se pretende liofilizada y después reconstituida, "azúcares farmacéuticos aceptables" también pueden ser conocidos como un "lioprotector". Azúcares ejemplares y su azúcar alcoholes correspondientes incluyen: un aminoácido tal como glutamato de mónosodio o histidina; una metilamina tal como betaína; una sal liotrópica tal como sulfato de magnesio; un poliol tal como trihídrico o azúcar alcohol de superior peso molecular, por ejemplo glicerina, dextrano, eritritol, glicerol, arabitol, xilitol, sorbitol y manitol; propilen glicol; polietilen glicol; Pluronics®; y sus combinaciones. Lioprotectores ejemplares adicionales incluyen glicerina y gelatina, y los azúcares melibiosa, melezitosa, rafinosa, manotriosa y estaquiosa. Ejemplo de azúcares reductores incluyen glucosa, maltosa, lactosa, maltulosa, iso-maltulosa y lactulosa. Ejemplos de azúcares no reductores incluyen glicósidos no reductores de compuestos polihidroxi seleccionados de azúcar alcoholes y otros polialcoholes de cadena recta. Azúcar alcoholes preferidos son monoglicósidos, en especial aquellos compuestos que se obtienen por reducción de disacáridos tales como lactosa, maltosa, lactulosa y maltulosa. El grupo lateral glicosidico puede ser tanto glucosidico o galactosidico . Ejemplos adicionales de azúcar alcoholes son glucitol, maltitol, lactitol y iso-maltulosa. Los azúcares farmacéuticos aceptables preferidos son los azúcares no reductores trehalosa o sacarosa.
Azúcares farmacéuticos aceptables se agregan a la formulación en una "cantidad protectora" (por ejemplo, de pre-liofilización) lo que significa que la proteina retiene esencialmente su estabilidad fisicoquímica durante almacenamiento (por ejemplo, después de reconstitución y almacenamiento) .
El "diluyente" de interés aquí es aquel que es farmacéutico aceptable (seguro y no tóxico para administración a un humano) y es útil para la preparación de una formulación liquida, tal como una formulación reconstituida después de liofilización . Diluyentes ejemplares incluyen agua estéril, agua bacterioestática para inyección (BWFI = Bacteriostatic Water For Injection) , una solución amortiguadora de pH (por ejemplo, salino amortiguado con fosfato) , solución salina estéril, solución de Ringer o solución de dextrosa. En una modalidad alterna, diluyentes pueden incluir soluciones acuosas de sales y/o amortiguadores .
Un "conservador" es un compuesto que puede agregarse a las formulaciones aquí para reducir actividad bacteriana. La adición de un conservador puede por ejemplo facilitar la producción de una formulación de múltiples usos (múltiples dosis) . Ejemplos de conservadores potenciales incluyen cloruro de octadecildimetilbencil amonio, cloruro de hexametonio, cloruro de benzalconio (una mezcla de cloruros de alquilbencildimetilamonio en donde los grupos alquilo son compuestos de cadena larga) y cloruro de bencetonio. Otros tipos de conservadores incluyen alcoholes aromáticos tales como fenol, butilo y alcohol bencílico, alquila parabenos tales como metil o propil parabenos, catecol, resorcinol, ciclohexanol, 3-pentanol y m-cresol. El conservador más preferido aquí es alcohol bencílico.
"Tratamiento" se refiere tanto a tratamiento terapéutico como medidas profilácticas o preventivas. Aquellos que requieren tratamiento incluyen aquellos que ya tienen el desorden asi como aquellos en donde el desorden se va a evitar.
"Mamífero" para propósitos de tratamiento se refiere a cualquier animal clasificado como un mamífero, incluyendo humanos, animales domésticos y de granja, y animales de zoológico, deportes o mascotas, tales como perros, caballos, conejos, ganado, cerdos, hámsteres, gerbos, ratones, hurones, ratas, gatos, etc. De preferencia, el mamífero es un humano.
Un "desorden" es cualquier condición que se beneficie de tratamiento con la proteína. Esto incluye desórdenes o enfermedades crónicos y agudos incluyendo aquellas condiciones patológicas que predisponen al mamífero al desorden en cuestión. Ejemplos no limitantes de desórdenes a tratar aquí incluyen carcinomas e inflamaciones.
Una "cantidad terapéutica efectiva" es al menos la concentración mínima requerida para efectuar una mejora o prevención medible de un desorden particular. Cantidades terapéuticas efectivas de proteínas conocidas son bien conocidas en la especialidad, mientras que las cantidades efectivas de proteínas a continuación descubiertas pueden determinarse por técnicas estándar que están bien dentro de la destreza de una persona con habilidad en la técnica tal como un médico ordinario.
Métodos para preparación de anticuerpos (incluyendo anticuerpos conjugados a una toxina) y otras proteínas que pueden formularse como se describe aquí, son bien conocidos en la técnica y se describen en detalle por ejemplo en WO2007/001851.
Anticuerpos y otras proteínas pueden formularse de acuerdo con la presente invención ya sea en forma acuosa o liofilizada, esta última es capaz, si se reconstituye en una forma acuosa.
Las formulaciones aquí descritas pueden prepararse como formulaciones liofilizadas reconstituidas. Las proteínas o anticuerpos aquí descritos se liofilizan y después reconstituyen para producir las formulaciones líquidas de la invención. En esta modalidad particular después de preparación de la proteína de interés como se describió anteriormente, se produce una "formulación pre-liofilizada" . La cantidad de proteína presente en la formulación pre-liofilizada se determina tomando en cuenta los volúmenes de dosis deseadas, el o los modos de administración, etc. Por ejemplo, la concentración de partida de un anticuerpo intacto puede ser de aproximadamente 2 mg/ml a aproximadamente 50 mg/ml, de preferencia de aproximadamente 5 mg/ml a aproximadamente 40 mg/ml y más preferible de aproximadamente 20-30 mg/ml.
La proteína a formular, en general está presente en solución. Por ejemplo, en las formulaciones líquidas de la invención, la proteína puede estar presente en una solución amortiguada con pH, a un pH de aproximadamente 4-8, y de preferencia de aproximadamente 5-7. La concentración amortiguadora puede ser de aproximadamente 1 mM a aproximadamente 20 mM, en forma alterna de aproximadamente 3 mM a aproximadamente 15 mM, dependiendo por ejemplo del amortiguador y la tonicidad deseada de la formulación (por ejemplo, de la formulación reconstituida) . Ejemplares amortiguadores y/o sales son aquellos que son farmacéuticamente aceptables pueden ser creados a partir de convenientes ácidos, bases y sales de los mismos, tales como aquellos que se definen bajo ácidos, bases o amortiguadores "farmacéuticos aceptables".
En una modalidad, un lioprotector se agrega a la formulación pre-liofilizada . La cantidad de lioprotector en la formulación pre-liofilizada en general es tal que al reconstituir, la formulación resultante sea isotónica. Sin embargo, formulaciones reconstituidas hipertónicas también pueden ser convenientes. Además, la cantidad de lioprotector no debe ser muy baja tal que una cantidad inaceptable de degradación/agregación de la proteína ocurre ante liofilización . Sin embargo, concentraciones lioprotectoras ejemplares en la formulación pre-liofilizada son de aproximadamente 10 mM a aproximadamente 400 mM, en forma alterna de aproximadamente 30 mM a aproximadamente 300 mM, en forma alterna de aproximadamente 50 mM a aproximadamente 100 mM. Lioprotectores ejemplares -incluyen azúcares y azúcar alcoholes tales como sacarosa, mañosa, trehalosa, glucosa, sorbitol, manitol. Sin embargo, bajo circunstancias particulares, ciertos lioprotectores también pueden contribuir a un aumento en viscosidad de la formulación. Como tal, debe tenerse cuidado para seleccionar lioprotectores particulares que reducen al mínimo o neutralizan este efecto. Lioprotectores adicionales se describen anteriormente bajo la definición de "lioprotectores" también referidos aquí como "azúcares farmacéuticos aceptables".
La proporción de proteína a lioprotector puede variar por cada proteína o anticuerpo particular y combinación de lioprotectores. En el caso de un anticuerpo como la proteína de selección y un azúcar, (tal como sacarosa o trehalosa) como lioprotector para generar una formulación reconstituida isotónica con una concentración elevada de proteínas, la proporción molar de lioprotector a anticuerpo puede ser de aproximadamente 100 a aproximadamente 1500 moles de lioprotector a 1 mol de anticuerpo, y de preferencia de aproximadamente 200 a aproximadamente 1000 moles de lioprotector a 1 mol de anticuerpo, por ejemplo de aproximadamente 200 a aproximadamente 600 moles de lioprotector a 1 mol de anticuerpo.
Una mezcla de lioprotector (tal como sacarosa o trehalosa) y un agente espesante (por ejemplo, manitol o glicina) puede emplearse en la preparación de la formulación de pre-liofilización . El agente espesante puede permitir la producción de una torta liofilizada uniforme sin exceso de cavidades, etc., sin excesivas bolsas en los mismos, etc. Otros portadores, excipientes o estabilizantes farmacéuticos aceptables tales como aquellos descritos en Remington ' s Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980) pueden incluirse en la formulación pre-liofilizada (y/o la formulación liofilizada y/o la formulación reconstituida) siempre que no afecten adversamente las características deseadas de la formulación. Portadores, excipientes o estabilizantes aceptables no son tóxicos a los recipientes a las dosis y concentraciones empleadas e incluyen: agentes amortiguadores adicionales; conservadores; co-solventes ; antioxidantes incluyendo ácido ascórbico y metionina; agentes quelantes tales como EDTA; complejos de metal (por ejemplo, complejos Zn-proteína) ; polímeros biodegradables tales como poliésteres; y/o contraiones formadores de sal tales como sodio .
La formulación aquí también puede contener más de una proteína según sea necesario para la indicación particular que se trata, de preferencia aquellas con actividades complementarias que no afectan adversamente la otra proteina. Por ejemplo, puede ser conveniente proporcionar dos o más anticuerpos que ligan al objetivo deseado (por ejemplo receptor o antigeno) en una sola formulación. Dichas proteínas están presentes de manera conveniente en combinación, en cantidades que son efectivas para el propósito pretendido.
Las formulaciones a utilizarse para administración in vivo deben ser estériles. Esto se logra fácilmente por filtración a través de membranas de filtración estéril, antes de, o siguiendo la liofilización y reconstitución. En forma alterna, la esterilidad de toda la mezcla puede lograrse por tratamiento en autoclave los ingredientes, excepto proteina a aproximadamente 120 °C por aproximadamente 30 minutos, por ej emplo .
Después de la proteina, se mezclan componentes lioprotectores opcionales y otros componentes opcionales en conjunto, la formulación se liofiliza. Muchos secadores por congelamiento diferentes están disponibles para este propósito tales como Hull50™ (Hull, USA) o GT20 ™ (Leybold-Heraeus, Alemania) . El secado por congelamiento se logra al congelar la formulación y subsecuentemente sublimar hielo del contenido congelado a una temperatura conveniente para secado primario. Bajo esta condición, la temperatura de producto está por debajo del punto eutéctico o la temperatura de colapso de la formulación. Típicamente, la temperatura de estante para el secado primario estará en el intervalo desde aproximadamente -30 a 25 °C (siempre que el producto permanece congelado durante el secado primario) a una presión conveniente, en el intervalo típico de aproximadamente 50 a 250 mTorr. La formulación, tamaño y tipo de recipiente que -contiene la muestra (es decir ampolleta de vidrio) y el volumen de líquido primordialmente dictará el tiempo requerido para secar, que puede estar en el intervalo desde unas cuantas horas a varios días (por ejemplo 40-60 horas) . Opcionalmente, una segunda etapa de secado también puede realizarse dependiendo del nivel de humedad residual deseado en el producto. La temperatura en la cual el secado secundario se lleva a cabo está en el intervalo desde aproximadamente 0-40°C, dependiendo primordialmente del tipo y tamaño del recipiente y el tipo de proteína empleada. Por ejemplo, la temperatura de estante a través de toda la fase de eliminación de agua de liofilización puede ser de aproximadamente 15-30 °C (por ejemplo, a aproximadamente 20°C) . El tiempo y presión requeridos para el secado secundario serán aquellos que produzcan una torta liofilizada conveniente, dependiendo por ejemplo de la temperatura y otros parámetros. El tiempo de secado secundario está dictado por el nivel de humedad residual deseado en el producto y típicamente tarda al menos aproximadamente 5 horas (por ejemplo, 10-15 horas) . La presión puede ser la misma que la empleada durante la etapa de secado primario. Condiciones de secado por congelamiento pueden variarse dependiendo de la formulación y tamaño de ampolleta.
Antes de administración al paciente, la formulación liofilizada se reconstituye con un diluyente farmacéutico aceptable tal que la concentración de proteina en la formulación reconstituida es al menos aproximadamente 50 mg/ml, por ejemplo de aproximadamente 50 mg/ml a aproximadamente 400 mg/ml, en forma alterna de aproximadamente 80 mg/ml a aproximadamente 300 mg/ml, en forma alterna de aproximadamente 90 mg/ml a aproximadamente 150 mg/ml. Estas altas concentraciones de proteína en la formulación reconstituida se consideran particularmente útiles cuando se pretende suministro subcutáneo de la formulación reconstituida. Sin embargo, para otras rutas de administración, tales como administración intravenosa, menores concentraciones de la proteína en la formulación reconstituida pueden ser deseables (por ejemplo de aproximadamente 5-50 mg/ml o de aproximadamente 10—40 mg/ml de proteína en la formulación reconstituida) . En ciertas modalidades, la concentración de proteína en la formulación reconstituida es significativamente superior que aquella en la formulación pre-liofilizada . Por ejemplo, la concentración de proteína en la formulación reconstituida puede ser aproximadamente 2-40 veces, en forma alterna 3-10 veces, y en forma alterna 3-6 veces (por ejemplo al menos tres veces o al menos cuatro) la formulación pre-liofilizada .
La reconstitución en general se lleva a cabo a una temperatura de aproximadamente 25 °C para asegurar completa hidratación, aunque otras temperaturas pueden emplearse según se desee. El tiempo requerido para reconstitución dependerá por ejemplo en el tipo de diluyente, cantidad del o de los excipientes y proteína. Diluyentes ejemplares incluyen agua estéril, agua bacteriostática para inyección (BWF) , Una solución amortiguada de pH (por ejemplo, salino amortiguado con fosfato) solución salina estéril, solución de Ringer o solución de dextrosa. El diluyente opcionalmente contiene un conservador. Conservadores ejemplares se han descrito anteriormente, con alcoholes aromáticos tales como bencil o fenol alcohol que son los conservadores preferidos. La cantidad de conservador empleado se determina al estimar diferentes concentraciones de conservador por compatibilidad con la proteína y prueba de eficacia conservadora. Por ejemplo, si el conservador es un alcohol aromático (tal como bencil alcohol) puede estar presente en una cantidad desde aproximadamente 0.1-2.0% y de preferencia de aproximadamente 0.5-1.5% pero más preferible de aproximadamente 1.0-1.2%.
De preferencia, la formulación reconstituida tiene menos de 6000 partículas por ampolleta que son >10 pm de tamaño.
Se preparan formulaciones terapéuticas para almacenamiento al mezclar el ingrediente activo que tiene el grado de pureza deseado con portadores excipientes o estabilizantes farmacéuticos aceptables opcionales (Remington ' s Pharmaceutical Sciences 18ava. edición, Mack Publishing Co., Easton, Pa . 18042
[1990]). Portadores, excipientes o estabilizantes aceptables no son tóxicos para los recipientes a las dosis y concentraciones empleadas, e incluyen amortiguadores, antioxidantes, incluyendo ácido ascórbico, metionina, vitamina E, metabisulfito de sodio, conservadores, isotonificadores, estabilizantes, complejos metálicos (por ejemplo, complejos Zn-proteína) y/o agentes quelantes tales como EDTA.
Cuando el agente terapéutico es un fragmento de anticuerpo, se prefiere el fragmento más pequeño que liga específicamente al dominio de enlace de la proteína objetivo. Por ejemplo, con base en las secuencias de región variable de un anticuerpo, fragmentos de anticuerpo o incluso moléculas péptido pueden diseñarse que retengan la capacidad por ligar la secuencia de proteína objetivo. Estos péptidos pueden sintetizarse químicamente y/o producirse por tecnología de ADN recombinante (ver, por ejemplo, Marasco et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90: 7889-7893
[1993]).
Se emplean amortiguadores para controlar el pH en un intervalo que optimiza la efectividad terapéutica, especialmente si la estabilidad depende del pH. Amortiguadores de preferencia están presentes a concentraciones en el intervalo de aproximadamente 50 mM a aproximadamente 25? mM. Agentes amortiguadores convenientes para uso con la presente invención incluyen tanto ácidos orgánicos como inorgánicos y sus sales. Por ejemplo, citrato, fosfato, succinato, tartrato, fumarato, gluconato, oxalato, lactato, acetato. Adicionalmente , amortiguadores pueden comprender sales histidina y trimetilamina tales como Tris.
Se agregan conservadores para retardar el crecimiento microbiano y típicamente están presentes en un intervalo de 0.2%-1.0% (p/v) . Conservadores convenientes para utilizar con la presente invención incluyen cloruro de octadecildimetilbencil amonio, cloruro de hexametonio; haluros de benzalconio (por ejemplo cloruro, bromuro, yoduro) , cloruro de bencetonio; timerosal, fenol, butil o bencil alcohol; alquil parabenos tales como metil o propil parabeno; catecol; resorcinol; ciclohexanol, 3-pentanol y m-cresol .
Agentes de tonicidad en ocasiones conocidos como "estabilizantes" están presentes para ajustar o mantener la tonicidad de una composición líquida. Cuando se emplean con grandes biomoléculas cargadas tales como proteínas y anticuerpos, a menudo se denominan "estabilizantes" debido a que pueden interactuar con los grupos cargados de las cadenas laterales aminoácido, de esta manera reduciendo el potencial para interacciones ínter e intramoleculares. Agentes de tonicidad pueden estar presentes en cualquier cantidad entre 0.1% a 25% en peso de preferencia 1 a 5%, tomando en cuenta las cantidades relativas de los otros ingredientes. Agentes de tonicidad preferidos incluyen azúcar alcoholes polihídricos , de preferencia azúcar alcoholes trihídricos o superiores tales como glicerina, eritritol, arabitol, xilitol, sorbitol y manitol.
Excipientes adicionales incluyen agentes que pueden servir como uno o más de los siguientes: (1) agentes espesantes, (2) mejoradores de solubilidad, (3) estabilizantes y (4) agentes que evitan la desnaturalización o adherencia a las paredes del recipiente. Estos excipientes incluyen azúcar alcoholes polihídricos (citados previamente) ; aminoácidos tales como alanina, glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina, lisina, ornitina, leucina, 2-fenilalanina, ácido glutámico, treonina, etc.; azúcares o azúcar alcoholes orgánicos tales como sacarosa, lactosa, lactitol, trehalosa, estaquiosa, mañosa, sorbosa, xilosa, ribosa, ribitol, mioinisitosa, mioinisitol, galactosa, galactitol, glicerol, ciclitoles (por ejemplo, inositol) , polietilen glicol; agentes reductores que contienen azufre tales como urea, glutationa, ácido tióctico, tioglicolato de sodio, tioglicerol, -monotioglicerol y tiosulfato de sodio; proteínas de bajo peso molecular tales como albúmina de suero humano, albúmina de suero bovino, gelatina u otras inmunoglobulinas; polímeros hidrofílicos tales como polivinilpirrolidona, monosacáridos (por ejemplo, xilosa, mañosa, fructosa, glucosa) ; disacáridos (por ejemplo, lactosa, maltosa, sacarosa) ; trisacáridos tales como rafinosa; y polisacáridos tales como dextrina o dextrano.
Para que las formulaciones se utilicen para administración in vivo, deben ser estériles. La formulación puede hacerse estéril por filtración a través de membranas de filtración estériles. Las composiciones terapéuticas aquí en general se colocan en un recipiente que tiene un puerto de acceso estéril, por ejemplo una ampolleta o bolsa de solución intravenosa que tiene un tapón perforable por una aguja de inyección hipodérmica.
La ruta de administración es de acuerdo con métodos conocidos y aceptados tales como por un solo o múltiples bolos o infusión sobre un periodo prolongado de tiempo en una forma conveniente, por ejemplo inyección o infusión por rutas subcutáneas, intravenosas, intraperitoneales , intramusculares, intra-arteriales, intralesiones o intra-articulares, administración tópica, inhalación o por medios de liberación sostenida o liberación prolongada.
La formulación aquí también puede contener más de un compuesto activo según sea necesario para la indicación particular que se trata, de preferencia aquellas con actividades complementarias que no se afectan adversamente entre si. En forma alterna o además, la composición pueden comprender un agente citotóxico, citoquina o agente inhibidor de crecimiento. Estas moléculas están convenientemente presentes en combinación en cantidades que son efectivas para el propósito pretendido.
Los ingredientes activos pueden estar atrapados en microcápsulas preparadas por ejemplo por técnicas de coacervación o por polimerización interfacial, por ejemplo hidroximetilcelulosa o microcápsulas de gelatina y microcápsulas de poli.(metilmetacilato) respectivamente en sistemas de suministro de fármacos coloidales (por ejemplo liposomas, microesferas de albúmina, microemulsiones , nanoparticulas y nanocápsulas) , o en macroemulsiones . Esas técnicas se describen en Remington 's Pharmaceutical Sciences 18ava. edición, supra.
Pueden elaborarse preparación de liberación sostenida. Ejemplos convenientes de preparaciones de liberación sostenida incluyen matrices semipermeables de polímeros hidrofóbicos sólidos que contienen el anticuerpo, estas matrices están en la forma de artículos conformados, por ejemplo películas o microcápsulas. Ejemplos de matrices de liberación sostenida incluyen poliésteres, hidrogeles (por ejemplo poli (2-hidroxietil-metacrilato) , o poli (vinilalcohol) ) , polilactidas (Patente de los E.U.A. Número 3,773,919), copolimeros de ácido L-glutámico y ?-etil-L-glutamato, etilen vinil acetato no degradable, copolimeros de ácido láctico-ácido glicólico degradables tales como LUPRON DEPOT™ (microesferas inyectables compuestas por copolimero de ácido láctico-ácido glicólico y leuprolida acetato) y ácido poli-D- ( - ) -3-hidroxibutirico . Micro encapsulación de proteínas recombinantes para liberación sostenida se ha realizado exitosamente con hormona de crecimiento humano ( (rhGH) interferona- ( rhIFN- ) , interleucina-2 y MN rpg 120. Johnson et al., Nat. Med. 2: 795-799 (1996); Yasuda et al., Biomed. Ther. 27: 1221-1223 (1993); Hora et al., Bio/'Technology 8: 755-758 (1990); Cleland, "Design and Production of Single Immunization Vaccines Using Polylactide Polyglycolide Microsphere Systems," in Vaccine Design: The Subunit and Adjuvant Approach, Powell and Newman, eds . , (Plenum Press: New York, 1995), pp. 439-462; WO 97/03692; WO 96/40072; WO 96/07399; y la Patente de los E.U.A. Número 5,654,010).
Las formulaciones de liberación sostenida de estas proteínas pueden desarrollarse utilizando polímero de ácido poliláctico-coglicólico (PLGA) debido a su biocompatibilidad y amplio intervalo de propiedades biodegradables . Los productos de degradación de PLGA, ácidos láctico y glicólico pueden liberarse o eliminarse rápidamente en el cuerpo humano. Aún más, la degradabilidad de este polímero puede ajustarse de meses a años dependiendo de su peso molecular y composición. Lewis, "Controlled reléase of bioactive agents from lactide/glycolide polymer", in Biodegradable Polymers as Drug Delivery Systems ( arcel Dekker; New York, 1990) , M. Chasin and R. Langer (Eds.) pp. 1-41.
Mientras que polímeros tales como etilen vinil acetato y ácido láctico-ácido glicólico permiten la liberación de moléculas por más de 100- días, ciertos hidrogeles liberan proteínas por periodos de tiempo más cortos. Cuando anticuerpos encapsulados permanecen en el cuerpo por un largo periodo, pueden desnaturalizarse o agregarse como resultado de exposición a humedad a 37 °C, resultando en una pérdida de actividad biológica y posibles cambios en inmunogenicidad. Estrategias racionales pueden diseñarse para estabilización dependiendo del mecanismo involucrado. Por ejemplo, si se descubre que el mecanismo de agregación es una formación de enlace S--S intermolecular a través de intercambio tiodisulfuro, puede lograrse estabilización al modificar residuos sulfhidrilo, liofilización a partir de soluciones acídicas, controlar el contenido de humedad, utilizando aditivos apropiados y desarrollando composiciones de matriz de polímero específicas .
Composiciones de lipospmas o proteinoides también pueden emplearse para formular las proteínas o anticuerpos aquí descritos. Ver Patentes de los E.U.A. Números 4,925,673 y 5,013,556.
La estabilidad de las proteínas y anticuerpos aquí descritos puede mejorarse a través del uso de "sales de metal polivalentes solubles en agua" no tóxicas. Ejemplos incluyen Ca2+, Mg2+, Zn2+, Fe2+, Fe3+, Cu2+, Sn2+, Sn3+, Al2+ y Al3+. Aniones ejemplares que pueden formar sales solubles en agua con los cationes de metal polivalente anteriores incluyen aquellos formados de ácidos inorgánicos y/o ácidos orgánicos. Estas sales solubles en agua tienen una solubilidad en agua (a 20°C) de al menos aproximadamente 20 mg/ml, en forma alterna al menos aproximadamente 100 mg/ml, en forma alterna al menos aproximadamente 200 mg/ml. Ácidos inorgánicos convenientes que pueden emplearse para formar las "sales de metales polivalentes solubles en agua" incluyen ácido clorhídrico, acético, sulfúrico, nítrico, tiociánico y fosfórico. Ácidos orgánicos convenientes que pueden emplearse incluyen ácido carboxílico alifático y ácidos aromáticos. Ácidos alifáticos dentro de esta definición pueden definirse como ácidos carboxílicos C2-9 saturados o insaturados (por ejemplo, ácidos mono-, di- y tri-carboxílicos alifáticos) . Por ejemplo, ácidos monocarboxilicos ejemplares en esta definición incluyen los ácidos monocarboxilicos C2-9 saturados acético, propiónico, butírico, valérico, capróico, enántico, caprílico pelargónico y capriónico, y ácidos monocarboxilicos C2-9 insaturados acrílico, propriólico, metacrílico, crotónico e isocrotónico . Ácidos dicarboxílieos ejemplares incluyen los ácidos dicarboxílicos C2-9 saturados malónico, succínico, glutárico, adípico y pimélico, mientras que ácidos dicarboxílicos C2-9 insaturados incluyen ácidos maléico, fumárico, citracónico y mesacónico. Ácidos tricarboxilicos ejemplares incluyen los ácidos tricarboxilicos C2-9 saturados tricarbalílico y ácido 1, 2, 3-butantricarboxílico . Adicionalmente, los ácidos carboxílicos de esta definición también pueden contener uno o dos grupos hidroxilo para formar ácidos hidroxicarboxílicos . Ácidos hidroxicarboxílicos ejemplares incluyen ácido glicólico, láctico, glicérico, tartrónico, málico, tartárico y cítrico. Ácidos aromáticos dentro de esta definición incluyen ácido benzoico y salicílico.
Sales de metales polivalentes solubles en agua comúnmente empleadas que pueden utilizarse para ayudar en estabilizar los polipéptidos encapsulados de esta invención, incluyen por ejemplo: (1) las sales de haluros de metales de ácidos inorgánicos (por ejemplo, cloruro de zinc, cloruro de calcio), sulfatos, nitratos, fosfatos y tiocianatos; (2) las sales metálicas de ácidos carboxílicos alifáticos (por ejemplo, acetato de calcio, acetato de zinc, propionato de calcio, glicolato de zinc, lactato de calcio, lactato de zinc y tartrato de zinc); y (3) las sales metálicas de ácidos carboxilicos aromáticos de benzoatos (por ejemplo, benzoato de zinc) y salicilatos.
Para la prevención o tratamiento de enfermedad, la dosis apropiada de un agente activo dependerá del tipo de enfermedad a tratar, ¦ como se definió anteriormente, la severidad y curso de enfermedad, si el agente se administra para propósitos preventivos o terapéuticos, terapia previa, la histo'ria clínica del paciente y respuesta al agente, y la discreción del médico que lo atiende. El agente se administra en forma conveniente al paciente en un tiempo o sobre una serie de tratamientos.
El método de la invención puede combinarse con métodos conocidos de tratamiento para un desorden, ya sea como etapas de tratamiento combinadas o adicionales o como componentes adicionales de una formulación terapéutica.
Dosis y concentración de fármaco deseado de las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden variar dependiendo del uso previsto particular. La determinación de la dosis apropiada o ruta de administración está bien dentro de la habilidad de una persona con destreza ordinaria. Experimentos en animales proporcionan una guía confiable para la determinación de dosis efectivas para terapia en humanos. Ajuste en escala interespecies de dosis efectivas puede realizarse siguiendo los principios establecidos por Mordenti, J. and Chappell, W. "The Use of Interspecies Scaling in Toxicokinetics, " In Toxicokinetics and New Drug Development, Yacobi et al., Eds, Pergamon Press, New York 1989, pp. 42-46.
Cuando se utiliza la administración de los polipéptidos o anticuerpos in vivo aquí descrita, las cantidades de dosis normales pueden variar de aproximadamente 10 ng/kg hasta aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal de mamífero o más por día, de preferencia aproximadamente 1 mg/kg/día a 10 mg/kg/día, dependiendo de la ruta de administración. Guía respecto a las dosis y métodos de suministro particulares se proporcionan en la literatura; ver por ejemplo, la Patente de los E.U.A. Número 4,657,760; 5,206,344; o 5,225,212. Está dentro del alcance de la invención que diferentes formulaciones serán efectivas para diferentes tratamientos y diferentes desórdenes, y que la administración pretendida para tratar un órgano o tejido específico puede requerir el suministro en una forma diferente para otro órgano o tejido. Aún más, las dosis pueden suministrarse por una o más administraciones separadas, o por infusión continua. Para administraciones repetidas, durante varios días o más, dependiendo de la condición, el tratamiento se mantiene hasta que ocurre una supresión deseada de los síntomas de la enfermedad. Sin embargo, otros regímenes de dosis pueden ser útiles. El avance de esta terapia se supervisa fácilmente por técnicas y ensayos convencionales.
Las formulaciones de la presente invención, incluyen pero no están limitadas a formulaciones reconstituidas, se administran a un mamífero que requiere tratamiento con la proteína, de preferencia un humano, de acuerdo con métodos conocidos, tales como administración intravenosa, como un bolo o por infusión continua sobre un período de tiempo, por rutas intramusculares, intraperitoneales , intracerebroespinales , subcutáneas, intra-articulares, intrasinoviales , intratecales , orales, tópicas o de inhalación.
En modalidades preferidas, las formulaciones se suministran al mamífero por administración subcutánea (es decir, por debajo de la piel) . Para estos propósitos, la formulación puede ser inyectada utilizando una jeringa. Sin embargo, otros dispositivos para administración de la formulación están disponibles tales como dispositivos de inyección (por ejemplo los dispositivos Inject-ease™ y Genject™); plumas inyectoras (tales como la GenPen™) ; dispositivos auto-inyectores, dispositivos sin agujas (por ejemplo, MedíJector™ y BioJector™) ; y sistemas de suministro de parche subcutáneo.
En una modalidad especifica, la presente invención se dirige a equipos para una unidad de administración de una sola dosis. Estos equipos comprenden un recipiente de una formulación acuosa de proteina o anticuerpo terapéutico, incluyendo tanto jeringas llenas previamente de una sola o múltiples cámaras. Jeringas llenas previamente ejemplares están disponibles de Vétter GmbH, Ravensburg, Alemania.
La dosis apropiada ("cantidad terapéutica efectiva") de la proteina, dependerá por ejemplo de la condición a tratar, la severidad y curso de condición, si la proteina se administra para propósitos preventivos o terapéuticos, terapia previa, la historia clínica del paciente y respuesta a la proteína, el tipo de proteína empleada y la descripción del médico a cargo. La proteína se administra en forma conveniente al paciente en un solo momento o sobre una serie de tratamientos y puede administrarse al paciente en cualquier tiempo a partir del diagnóstico en adelante. La proteína puede administrarse como el único tratamiento o en conjunto con otros fármacos o terapias útiles en el tratamiento de la condición en cuestión.
Si la proteína de elección es un anticuerpo, de aproximadamente 0.1-20 mg/kg es una dosis candidato inicial para administración al paciente, por ejemplo por una o más administraciones separadas. Sin embargo, pueden ser útiles otros regímenes de dosis. El progreso de esta terapia se supervisa fácilmente por técnicas convencionales.
En otra modalidad de la invención, un artículo de manufactura se proporciona, que contiene la formulación y de preferencia proporciona instrucciones para su uso. El artículo de manufactura comprende un recipiente. Recipientes convenientes incluyen por ejemplo botellas, ampolletas (por ejemplo ampolletas de cámaras duales), jeringas (tales como jeringas de cámaras sencillas o duales) y tubos de ensayo. El recipiente puede formarse de una variedad de materiales tales como vidrio o plástico. La etiqueta, que está en, o está asociada con, el recipiente que contiene la formulación, puede indicar instrucciones para reconstitución y/o uso. La etiqueta puede indicar que la formulación es útil o se pretende para administración subcutánea. El recipiente que contiene la formulación puede ser una ampolleta de múltiples usos, que permite administraciones repetidas (por ejemplo de 2-6 administraciones) de la formulación reconstituida. El artículo de manufactura además puede comprender un segundo recipiente que comprende un diluyente conveniente (por ejemplo, BWFI) .. Al mezclar el diluyente y la formulación liofilizada, la concentración de proteína final en la formulación reconstituida en general será de al menos 50 mg/ml. El artículo de manufactura además puede incluir otros materiales que son convenientes desde un punto de vista comercial y de usuario, incluyendo otros amortiguadores, diluyentes, filtros, agujas, jeringas e insertos de empaque con instrucciones para uso.
La invención se comprenderá más completamente por referencia a los siguientes ejemplos. Sin embargo no habrá de considerarse como limitante del alcance de la invención. Todas las citas a través de la descripción se incorporan por referencia aquí expresamente.
EJEMPLO 1 : Investigación de Alquilglicósidos como Surfactantes No Iónicos para Evitar Agregación de Proteínas/Anticuerpos .
Este ejemplo ilustra el uso de alquilglicósidos como surfactantes no iónicos para evitar agregación de anticuerpos en solución acuosa. La acción protectora de diversos alquilglicósidos y polisorbato 20 contra agregación inducida por agitación de diversos anticuerpos monoclonales en solución, se evalúa utilizando dos formas diferentes de agitación: sacudida y agitación.
Agregación inducida por sacudida En este juego de estudios, una solución amortiguada (amortiguador fosfato de sodio 20 mM, pH 7.4) de anticuerpo monoclonal se somete a sacudida en un agitador orbital a 150 rpm, a una temperatura controlada de 37°C. Estos estudios se llevan a cabo utilizando un relleno de solución de 3 mi de la solución de anticuerpo en una ampolleta de vidrio de 6 ce.
Las muestras se retiran a intervalos regulares y analizan por por ciento de monómero utilizando cromatografía exclusiva de tamaño. Diversos surfactantes de la clase de alquilglicósido se evaluaron para su efectividad, para evitar agregación de proteínas durante sacudida. Los surfactantes se emplearon a concentraciones por debajo de su concentración de micelios critica (CMC) respectiva o sobre su respectiva CMC.
Agregación inducida por agitación En este juego de estudios, una barra agitadora magnética revestida con teflón se empleó para inducir agitación en una solución amortiguada (histidina-acetato 20 mM, pH 5.5) de anticuerpo monoclonal. 3 mi de la solución de anticuerpo se llenan en una ampolleta de vidrio de 6 ce y la solución se agita a 500 rpm utilizando una barra agitadora revestida con teflón. La solución se agitó por un periodo de 90 minutos y se retiraron muestras a intervalos regulares y analizaron por turbidez como una indicación de la formación de agregados insolubles. Diversos surfactantes de la clase de alquilglicósidos se evaluaron por su efectividad para evitar agregación de proteína durante agitación. Los surfactantes se emplearon a concentraciones por debajo de su concentración de micelios crítica (CMC) respectiva o sobre su CMC respectiva.
Resultados La Figura 1 muestra la dependencia del tiempo de por ciento de monómero de un anticuerpo monoclonal anti-MUC16 en solución, después de agitación a 150 rpm a 37°C por 64 horas sin que contenga surfactante y en la presencia de diversos surfactantes incluyendo n-decil-p-D-glucopiranósido, n-octil-p-D-glucopiranósido o polisorbato 20. Los surfactantes se emplearon a la mitad de la concentración de sus valores CMC respectivos, es decir, 1.1 mM (0.035% p/v) de n-decil- -D-glucopiranósido, 9 mM (0.24%) de n-octil-ß-?-glucopiranósido y 0.04 mM (0.0035%) de polisorbato 20.
Como se muestra en la Figura 1, en la ausencia de cualquier surfactante, una disminución en el por ciento de monómero del anticuerpo se observa al agitar sobre un periodo de 64 horas. Mientras que polisorbato 20 no fue efectivo para evitar pérdida del monómero inducida por agitación bajo estas condiciones, los dos surfactantes de la clase de alquilglicósidos probados, es decir, n-decil-p-D-glucopiranósido y n-octil- -D-glucopiranósido, fueron efectivos para evitar pérdida de monómero del anticuerpo monoclonál anti-MUC16 ante agitación. Por lo tanto, tanto n-decil- -D-glucopiranósido como n-octil- -D-glucopiranósido (es decir, alquilglicósidos que tienen valores CMC mayores a 1.0 mM) evitan efectivamente agregación inducida por agitación del anticuerpo monoclonal anti-MUC16 en solución.
Las Figuras 2 y 3 muestran el curso en tiempo de formación de turbidez en una solución de anticuerpo monoclonal anti-MUC16 seguido por agitación a 500 rpm utilizando una barra magnética revestida con teflón a temperatura ambiente por un periodo de 90 minutos. La turbidez se evalúa en soluciones que no contienen surfactante al igual que en soluciones que contienen diferentes surfactantes de alquilglicósido o polisorbato 20. En la Figura 2, la concentración de surfactante empleada fue un décimo de sus valores CMC respectivos, es decir, 1.8 mM (0.053%) de n-octil- -D-glucopiranósido, 0.18 mM (0.008%) de n-decil- -D-maltopiranósido, 0.22 mM (0.007%) de n-decil-p-D-glucopiranósido, 25 mM (0.66%) de n-hexil-p-D-glucopiranósido y 0.008 mM (0.0007%) de polisorbato 20. En la Figura 3, la concentración de surfactante empleada fue el doble que sus valores CMC respectivos, es decir, 36 mM (1.0%) de n-octil-ß-D-glucopiranósido, 3.6 mM (0.16%) de n-decil-p-D-maltopiranósido, 4.4 mM (0.14%) de n-decil-ß-?-glucopiranósido, 500 mM (12%) de n-hexil-p-D-glucopiranósido y 0.16 mM (0.014%) de polisorbato 20.
Como se ve en la Figura 2, a un décimo de la concentración de sus valores CMC respectivos, n-octil-p-D-glucopiranósido y polisorbato 20 fueron efectivos para evitar desarrollo de turbidez en comparación con la solución de anticuerpo que no contiene surfactante. La formación de turbidez típicamente se atribuye a la formación de grandes agregados insolubles del anticuerpo.
Como se ve adicionalmente en la Figura 3, al doble de concentración de sus CMCs respectivos, todos los surfactantes de la clase de alquilglicósidos fueron efectivos para evitar agregación del anticuerpo en solución como se mide por formación de turbidez.
En la Figura 4, el efecto de variar la concentración de n-octil-p-D-glucopiranósido en la turbidez de formulaciones de anticuerpo monoclonal anti-MUC16 durante agitación a 300 rpm por 72 horas a 37°C se investigó. Como se muestra en la Figura 4, a todas las diversas concentraciones probadas, es decir, 0.72 mM (0.02 p/v) , 1.8 mM (0.05 p/v) , 3.6 mM (0.1 p/v), 9 mM (0.25 p/v), 18 mM (0.5 p/v), n-octil-ß-D-glucopiranósido inhibió efectivamente la formación de agregados de anticuerpos visibles ante agitación como se mide por formación de turbidez.
En la Figura 5, se investigó el efecto de variar la concentración de n-octil- -D-glucopiranósido en el por ciento de monómero del anticuerpo monoclonal anti-MUC16 en solución, después de agitación a 300 rpm a 37°C por 72 horas. Como se muestra en la Figura 5, a todas las concentraciones diversas probadas, n-octil- -D-glucopiranósido mantiene efectivamente el por ciento de monómero del anticuerpo anti-MUC16 ante agitación cómo se compara con la muestra no agitada que se almacena bajo condiciones similares.
En las Figuras 6-9, el efecto de 0.23 mM (0.02% p/v) de polisorbato 20 o 3.6 mM (0.1% p/v) de n-octil-p-D-glucopiranósido en la turbidez de formulaciones acuosas de un anticuerpo monoclonal anti-MUC16 (Figura 6) , un anticuerpo monoclonal anti-IgE (Figura 7), un anticuerpo monoclonal anti-CDlla (Figura 8), y un anticuerpo monoclonal anti-CD22 (Figura 9) , durante agitación a 300 rpm por 72 horas a 37°C se investigó. Como se muestra en las Figuras 6-9, tanto polisorbato 20 como n-octil- -D-glucopiranósido inhiben efectivamente la formación de agregados de anticuerpos visibles para todos los anticuerpos probados ante agitación como se mide por formación de turbidez.
En las Figuras 10-13, se investigó el efecto de 0.23 irúM (0.02% p/v) de polisorbato 20 o 3.6 mM (0.1% p/v) de n-octil- -D-glucopiranósido en el por ciento de monómero de formulaciones acuosas de un anticuerpo monoclonal anti-MUC16 (Figura 10), un anticuerpo monoclonal anti-IgE (Figura 11), un anticuerpo monoclonal anti-CDlla (Figura 12), y un anticuerpo monoclonal anti-CD22 (Figura 13) , durante agitación a 300 rpm por 72 horas a 37°C. Como se muestra en las Figuras 10-13, n-octil- -D-glucopiranósido mantuvo efectivamente el por ciento de monómero de los diversos anticuerpos probados ante agitación en comparación con una muestra no agitada que se almacena bajo condiciones similares .
EJEMPLO 2 : Investigación de Alquilglicósidos como Surfactantes No Iónicos para Evitar Oxidación de Proteínas/Anticuerpos Este ejemplo ilustra el uso de alquilglicósidos como surfactantes no iónicos para evitar oxidación de anticuerpos en solución acuosa.
En un primer experimento, soluciones de surfactantes de la clase de alquilglicósidos, es decir, n-decil- -D-glucopiranósido, n-octil-p-D-glucopiranósido y n-decil^-D-maltopiranósido, asi como polisorbato 20 a una concentración de 0.1% p/v en agua se almacenaron a 40°C por un periodo de un mes. Después se retiraron muestras y analizaron por la presencia de peróxido de hidrógeno utilizando el ensayo Peróxido de Hidrógeno Rojo Amplex, los resultados de estos análisis se muestran en la Figura 14.
Como se ilustra en la Figura 14, soluciones que contienen surfactante alquilglicósido producen cantidades despreciables de peróxido de hidrógeno después de almacenamiento de estas soluciones a 40°C por un periodo de un mes. En contraste, aproximadamente 10 µ? de peróxido de hidrógeno se forman en la solución que contiene polisorbato 20 bajo condiciones de almacenamiento similares. Éstos datos sugieren que el uso de alquilglicósido como agente estabilizante de proteínas en formulaciones acuosas puede ser preferible en comparación con polisorbato 20, debido, a la propensidad relativamente menor de alquilglicósidos para producir peróxido de hidrógeno oxidante sobre el tiempo en solución .
En un segundo experimento, se evaluó la oxidación del residuo aminoácido Met256 en un anticuerpo -monoclonal anti-CDlla en soluciones que contienen ya sea n-decil-p-D-glucopiranósido, n-octil^-D-glucopiranósido, o polisorbato 20. Para este propósito, 3 mi de la solución de anticuerpo amortiguado (pH 6.0) que contiene 0.1% p/v del surfactante se almapenan en ampolletas de 6 ce ya sea a 5°C o 40°C por un periodo de ya sea 2 ó 4 semanas. Las muestras después se retiran y analizan por oxidación del residuo Met256, un aminoácido en secuencia de aminoácidos primarios anti-CDlla que previamente se ha mostrado tiende a oxidación. Los resultados de estos análisis se muestran en la Figura 15.
Como se muestra en la Figura 15, no se observó aumento significante en el por ciento de Met256 oxidado de anti-CDlla en soluciones que contienen n-decil^-D-glucopiranósido o n-octil^-D-glucopiranósido después de almacenamiento como se describió anteriormente, en comparación con la muestra inicial. En soluciones anti-CDlla que contienen polisorbato 20, sin embargo aproximadamente 16% de los residuos Met256 se encontraron oxidados después de almacenamiento de 40 grados C por un periodo de 4 semanas, en comparación con una oxidación de aproximadamente 2% del mismo residuo aminoácido al tiempo cero. De esta manera, estos datos sugieren que el uso de alquilglicósidos como agentes estabilizantes de proteina en formulaciones acuosas puede ser preferible en comparación con polisorbato 20, debido a la propensidad relativamente menor de alquilglicósidos para oxidar la proteina formulada con el tiempo en solución.
En un tercer experimento, se analizó oxidación inducida por reactivo Fenton de residuos aminoácidos de Met y Trp (es decir aminoácidos que se conocen susceptibles a oxidación) en un anticuerpo monoclonal anti-CD22. Específicamente, soluciones amortiguadas (histidina acetato 20 mM, pH 5.5) de anticuerpo monoclonal anti-CD22 que contiene 0.1 ppm de Fe3+ y 1 ppm de peróxido de hidrógeno se prepararon y almacenaron ya sea por 2 ó 4 semanas a 40 grados C, ya sea en la ausencia de surfactante o en la presencia de 0.23 mM (0.02% p/v) de polisorbato 20 o 3.6 mM (0.1% p/v) de n-octil- -D-glucopiranósido . Muestras después se retiraron y el por ciento de oxidación de residuos Met y Trp se determina a partir del por ciento de picos tempranos del anticuerpo que eluye a través de una columna fenil RP-HPLC. Los resultados de estos análisis se muestran en la Figura 16.
Como se ilustra en la Figura 16, oxidación inducida por reactivo de Fenton de aminoácidos susceptibles (Trp, Met) en el anti-CD22 monoclonal se inhibe en soluciones que contienen n-octil- -D-glucopiranósido en comparación con aquellas que contienen polisorbato 20, y es comparable a soluciones que no contienen surfactante. De esta manera, estos datos sugieren que el uso de alquilglicósidos como agentes que estabilizan proteínas en formulaciones acuosas, puede ser preferible en comparación con polisorbato 20, debido a la propensidad relativamente menor de alquilglicósidos en solución para oxidar la proteína formulada con el tiempo.
EJEMPLO 3: Investigación de Alquilglicósidos como Surfactantes No Iónicos para Evitar Oxidación Inducida por Luz de Residuos Triptofano en Proteínas/Anticuerpos Este ejemplo ilustra el uso de alquilglicósidos como surfactantes no iónicos para evitar oxidación inducida por luz de residuos triptofano en proteína/anticuerpos en solución acuosa.
Todos los .siguientes experimentos se realizaron como sigue.
Muestras de MAb y tratamiento con luz; Anticuerpo monoclonal LDL anti-oxidado humanizado, se produce por Genentech, Inc., a partir de una línea celular CHO. Tres muestras independientes se preparan para estudios de foto estabilidad: 1) muestra de control, ampolleta envuelta con hoja delgada de aluminio; 2) muestra de prueba, ampolleta expuesta a la luz (sin envolver) ; 3) muestra de prueba, ampolleta expuesta a la luz (sin envolver) que contiene el surfactante no iónico especificado. Tanto muestras expuestas a la luz como de control, se mantuvieron en una caja de luz por 24 horas. Exposición a la luz después de la guia ICH con el siguiente ajuste para un Atlas SUNTEST CPS+ Light Box: Nivel de Irradiancia = 250 watts/metro cuadrado; Ajuste de tiempo por 24 horas; Dosis UV total = 538 watts-horas/metro cuadrado; Dosis visible total = 1,320,000 lux-horas.
LC/MS/MS de mapa de péptido MAb tríptico: Muestras se digirieron con tripsina después de reducción y alquilación. Los péptidos resultantes se analizaron con un espectrómetro de masas Thermo LTQ-Orbitrap acoplado con un sistema HPLC capilar Agilent 1200. Columna HPLC: Júpiter 5 um C18 250 X 1.0 mm, gasto de flujo: 70 uL/min, temperatura del horno de columna: 55 grados C. Solvente A: 0.1% en agua TFA, B: 0.09% TFA en 90% ACN . Ajuste de Orbitrap: resolución MS 60000, MS/MS en modo dependiente de datos, utilizando LTQ.
Mediciones de Fluorescencia: Espectros de emisión de fluorescencia de triptófano intrínseco de soluciones, se obtuvieron utilizando un aparato Espectrofluorómetro Horiba Jobin Yvon Fluoromax-4 (Edison, NJ) equipado con un baño de agua de temperatura-controlada. Un espectro de emisión de triptófano se obtiene a partir de 300 a 450 nm ante excitación a 295 nm.
Se determinaron el efecto de luz, y el efecto protector de surfactantes no iónicos, en la oxidación de residuos triptófano en un anticuerpo LDL anti-oxidados . El anticuerpo probado posee residuos triptófano en las posiciones de aminoácidos 33 (i.e., Trp33) y 92 (i.e., Trp92) y el por ciento de oxidación inducida por luz en esos sitios se determinó como se describió previamente. Los resultados de estos análisis se muestran en la Tabla 2 siguiente.
Tabla 2 Conclusiones Alquilglicósidos que tienen valores CMC de aproximadamente 1 mM o mayores, confieren estabilidad contra agregación inducida por agitación de proteínas, incluyendo anticuerpos monoclonales .
La estabilidad contra agregación inducida por agitación conferida por alquilglicósidos que tienen valores CMC de aproximadamente 1 mM o mayores, no depende anticuerpo ya que el efecto benéfico se observa con diversos anticuerpos de diferente secuencia de aminoácidos.
De manera sorprendente, la estabilidad frente a la agregación inducida por agitación conferida por alquilglicósidos que tienen valores CMC de aproximadamente 1 mM o mayores, se observa cuando el alquilglicósido se emplea a una concentración que está por debajo de su valor CMC respectivo .
A diferencia de polisorbato 20, los alquilglicósidos que tienen valores CMC de aproximadamente 1 mM o superiores no forman peróxido de hidrógeno ante almacenamiento por una duración prolongada de tiempo.
A diferencia de polisorbato 20, los alquilglicósidos que tienen valores CMC de aproximadamente 1 mM o mayores, no inducen significativamente oxidación de aminoácidos susceptibles a oxidación en diversos anticuerpos monoclonales.
A diferencia de polisorbato 20, alquilglicósidos que tienen valores CMC de aproximadamente 1 mM o mayores son capaces de inhibir o reducir la cantidad de oxidación inducida por luz de residuos triptófano en anticuerpos y otras proteínas, particularmente cuando se utiliza a una concentración que está sobre su valor CMC respectivo.

Claims (37)

REIVINDICACIONES
1. Una composición de materia acuosa que comprende un anticuerpo y un alquilglicósido que tiene un valor CMC de aproximadamente 1.0 mM o mayor en agua a 25 grados C.
2. La composición de materia de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal.
3. La composición de materia de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el alquilglicósido se elige del grupo que consiste de n-hexil-p-D-glucopiranósido, n-heptil-p-D-glucopiranósido, n-octil-p-D-glucopiranósido, n-????-ß-D-glucopiranósido, n-decil^-D-glucopiranósido, 3-ciclohexil-l-propil- -D-glucósido, 3-ciclohexil-l-butil-p-D-glucósido, n-hexil-p-D-maltopiranósido, n-octil-ß-?-maltopiranósido, ?-?????-ß-D-maltopiranósido, n-decil- -D-maltopiranósido, ciclohexil-metil- -D-maltósido, 2-ciclohexil-eti?-ß-D-maltosido, 3-ciclohexil-propil- -D-maltósido, 4-ciclohexil-butil-p-D-maltósido, y 5-ciclohexil-penti?-ß-D-maltosido .
. La composición de materia de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el alquilglicósido es n-octil- -D-glucopiranósido .
5. La composición de materia de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el alquilglicósido es n-decil- -D-glucopiranósido .
6. La composición de materia de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el alquilglicósido es n-decil-p-D-maltopiranósido.
7. La composición de materia de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el alquilglicósido es n-hexil-p-D-glucopiranosido .
8. La composición de materia de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende una cantidad inhibidora de agregación inducida por agitación del alquilglicósido.
9. La composición de materia de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende una cantidad que evita oxidación del alquilglicósido.
10. La composición de materia de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque 'el alquilglicósido está presente a una concentración que es menor que el valor CMC del alquilglicósido en agua a 25 grados C.
11. La composición de materia de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque es estable a una temperatura de aproximadamente 2-8 grados C por al menos un año .
12. La composición de materia de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque es estable a una temperatura de aproximadamente 30 grados C por al menos un mes.
13. La composición de materia de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque no se liofiliza y no se somete a liofilización previa.
1 . La composición de materia de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque es una formulación liofilizada reconstituida.
15. La composición de materia de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el anticuerpo es susceptible a agregación.
16. La composición de materia de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el anticuerpo es susceptible a oxidación.
17. Método para inhibir agregación inducida por agitación de un anticuerpo presente en una primera solución acuosa, el método comprende la etapa de agregar a la primera solución acuosa una cantidad inhibidora de agregación inducida por agitación de un alquilglicósido que tiene un valor CMC de aproximadamente 1.0 mM o mayor en agua a 25 grados C, de esta manera proporcionando una segunda solución acuosa.
18. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal .
19. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque el alquilglicósido se elige del grupo que consiste de n-hexil^-D-glucopiranósido, n-heptil-ß-D-glucopiranósido, n-octil-p-D-glucopiranósido, n-nonil-ß-D-glucopiranósido, n-decil- -D-glucopiranósido, 3-ciclohexil-l-propil- -D-glucósido, 3-ciclohexil-l-butil- -D-glucósido, n-hexil-p-D-maltopiranósido, n-octil- -D-maltopiranósido, n-?????-ß-D-maltopiranósido, n-decil-3-D-maltopiranósido, ciclohexi1-meti?-ß-D-maltosido, 2-ciclohexil-etil^-D-maltósido, 3-ciclohexil-propil-ß-D-maltósido, 4-ciclohexil-butil- -D-maltósido, y 5-ciclohexil-pentil-ß-D-maltósido .
20. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque el alquilglicósido es n-octil-ß-?-glucopiranósido .
21. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque el alquilglicósido es n-decil-ß-?-glucopiranósido .
22. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque el alquilglicósido es n-decil-ß-?-maltopiranósido .
23. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque el alquilglicósido es n-hexil-p-D-glucopiranósido .
24. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque el alquilglicósido se agrega a una concentración final que es menor que el valor CMC de alquilglicósido en agua a 25 grados C.
25. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque además comprende la etapa de liofilizar la segunda solución acuosa.
26. Un método para evitar oxidación de un anticuerpo presente en una primera solución acuosa, el método comprende la etapa de agregar a la primera solución acuosa una cantidad que evita oxidación de un alquilglicósido que tiene un valor CMC de aproximadamente 1.0 mM o mayor en agua a 25 grados C, de esta manera proporcionando una segunda solución acuosa.
27. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal .
28. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque el alquilglicósido se elige del grupo que consiste de n-hexil^-D-glucopiranósido, n-heptil-ß-D-glucopiranósido, n-octil-p-D-glucopiranósido, n-nonil-ß-D-glucopiranósido, n-decil^-D-glucopiranósido, 3-ciclohexil-l-propil-p-D-glucósido, 3-ciclohexil-l-butil- -D-glucósido, n-hexil-^-D-maltopiranósido, n-octil-(3-D-maltopiranósido, n-?????-ß-D-maltopiranosido, n-decil-p-D-maltopiranósido, ciclohexi1-meti?-ß-D-maltosido, 2-ciclohexil-etil^-D-maltósido, 3-ciclohexil-propil^-D-maltósido, 4-ciclohexil-butil^-D-maltósido, y 5-ciclohexil-pentil^-D-maltósido .
29. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque el alquilglicósido es n-octil-p-D-glucopiranósido .
30. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque el alquilglicósido es n-decil-p-D-glucopiranósido .
31. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque el alquilglicósido es n-decil-p-D-maltopiranósido .
32. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque el alquilglicósido es ?-?e??-ß-?-glucopiranósido .
33. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque el alquilglicósido se agrega a una concentración final que es menor que el valor CMC de alquilglicósido en agua a 25 grados C.
3 . El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque el alquilglicósido se agrega a una concentración final que es mayor que el valor CMC de alquilglicósido en agua a 25 grados C.
35. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque comprende la etapa adicional de liofilizar la segunda solución acuosa.
36. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque la oxidación es oxidación inducida por luz.
37. El método de conformidad con la reivindicación caracterizado porque la oxidación inducida por luz es de dúos triptófano en el anticuerpo.
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Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2880802T3 (es) * 2010-06-24 2021-11-25 Hoffmann La Roche Composiciones y procedimientos para estabilizar formulaciones que contienen proteínas
BR112015022484A2 (pt) * 2013-03-13 2017-07-18 Genentech Inc formulações com oxidação reduzida
US20140314778A1 (en) 2013-03-13 2014-10-23 Genentech, Inc. Formulations with reduced oxidation
WO2015032972A1 (en) * 2013-09-09 2015-03-12 Lek Pharmaceuticals D.D. Nanoformulation of g-csf for non-parenteral delivery
WO2015032981A1 (en) * 2013-09-09 2015-03-12 Lek Pharmaceuticals D.D. Erythropoietin conjugates having oral bioavailability
US10188736B2 (en) 2013-09-30 2019-01-29 Enza Biotech Ab Surfactant composition
CN104707146B (zh) * 2013-12-16 2019-04-16 浙江海正药业股份有限公司 一种含有阿达木单抗的药物组合物
US20160074515A1 (en) 2014-06-20 2016-03-17 Reform Biologics, Llc Viscosity-reducing excipient compounds for protein formulations
US10478498B2 (en) 2014-06-20 2019-11-19 Reform Biologics, Llc Excipient compounds for biopolymer formulations
JP2019527729A (ja) 2016-07-13 2019-10-03 リフォーム バイオロジクス、エルエルシー 治療用タンパク質製剤のための安定化賦形剤
WO2019036619A1 (en) * 2017-08-18 2019-02-21 Reform Biologics, Llc STABILIZING EXCIPIENTS FOR FORMULATIONS OF THERAPEUTIC PROTEIN
CA3133652A1 (en) * 2019-04-01 2020-10-08 Genentech, Inc. Compositions and methods for stabilizing protein-containing formulations
WO2021107033A1 (ja) * 2019-11-29 2021-06-03 千寿製薬株式会社 医薬組成物

Family Cites Families (66)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US4275149A (en) 1978-11-24 1981-06-23 Syva Company Macromolecular environment control in specific receptor assays
US4657760A (en) 1979-03-20 1987-04-14 Ortho Pharmaceutical Corporation Methods and compositions using monoclonal antibody to human T cells
US4515893A (en) 1979-04-26 1985-05-07 Ortho Pharmaceutical Corporation Hybrid cell line for producing complement-fixing monoclonal antibody to human T cells
SE8205892D0 (sv) * 1982-10-18 1982-10-18 Bror Morein Immunogent membranproteinkomplex, sett for framstellning och anvendning derav som immunstimulerande medel och sasom vaccin
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5206344A (en) 1985-06-26 1993-04-27 Cetus Oncology Corporation Interleukin-2 muteins and polymer conjugation thereof
DK166762B1 (da) * 1986-01-14 1993-07-12 Nederlanden Staat Fremgangsmaade til fremstilling af immunogenkomplekser og farmaceutisk sammensaetning indeholdende saadanne komplekser
US5091178A (en) 1986-02-21 1992-02-25 Oncogen Tumor therapy with biologically active anti-tumor antibodies
NL8720442A (nl) 1986-08-18 1989-04-03 Clinical Technologies Ass Afgeefsystemen voor farmacologische agentia.
US5183746A (en) 1986-10-27 1993-02-02 Schering Aktiengesellschaft Formulation processes for pharmaceutical compositions of recombinant β-
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
US5091313A (en) 1988-08-05 1992-02-25 Tanox Biosystems, Inc. Antigenic epitopes of IgE present on B cell but not basophil surface
US5720937A (en) 1988-01-12 1998-02-24 Genentech, Inc. In vivo tumor detection assay
JP2749167B2 (ja) 1988-06-21 1998-05-13 ジェネンテク，インコーポレイテッド 心筋梗塞の処置のための方法および治療用組成物
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5225538A (en) 1989-02-23 1993-07-06 Genentech, Inc. Lymphocyte homing receptor/immunoglobulin fusion proteins
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
US5225212A (en) 1989-10-20 1993-07-06 Liposome Technology, Inc. Microreservoir liposome composition and method
US5013556A (en) 1989-10-20 1991-05-07 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
EP1400536A1 (en) 1991-06-14 2004-03-24 Genentech Inc. Method for making humanized antibodies
JP3457962B2 (ja) 1991-08-14 2003-10-20 ジェネンテク，インコーポレイテッド 特定Ｆｃεレセプターのための免疫グロブリン変異体
DK1136556T3 (da) 1991-11-25 2005-10-03 Enzon Inc Fremgangsmåde til fremstilling af multivalente antigen-bindende proteiner
DE69315847T2 (de) 1992-08-21 1998-06-25 Genentech Inc Verfahren zur behandlung einer durch lfa-1 vermittelten störung
US5736137A (en) 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
ES2151541T3 (es) 1992-12-02 2001-01-01 Alkermes Inc Microesferas que contienen hormona del crecimiento de liberacion prolongada.
US5595721A (en) 1993-09-16 1997-01-21 Coulter Pharmaceutical, Inc. Radioimmunotherapy of lymphoma using anti-CD20
ES2108566T3 (es) 1993-12-10 1997-12-16 Genentech Inc Procedimientos para diagnosticar alergias y para seleccionar agentes terapeuticos antialergicos.
JP3825798B2 (ja) 1994-01-18 2006-09-27 ジェネンテク，インコーポレイテッド ＩｇＥアンタゴニストを用いる寄生虫感染症の治療法
EP0749488A1 (en) 1994-03-03 1996-12-27 Genentech, Inc. Anti-il-8 monoclonal antibodies for treatment of inflammatory disorders
EP0779806B2 (en) 1994-09-09 2008-04-16 Takeda Pharmaceutical Company Limited Sustained release preparation containing metal salt of a peptide
IL117645A (en) 1995-03-30 2005-08-31 Genentech Inc Vascular endothelial cell growth factor antagonists for use as medicaments in the treatment of age-related macular degeneration
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
AU6267896A (en) 1995-06-07 1996-12-30 Imclone Systems Incorporated Antibody and antibody fragments for inhibiting the growth oftumors
DE69614685T2 (de) 1995-06-07 2002-06-27 Alkermes Inc Mittel zur verzögerten freisetzung von menschlichem wachstumshormon
ZA965368B (en) 1995-07-14 1997-01-14 Novo Nordisk As A pharmaceutical formulation
AU716785B2 (en) * 1995-07-27 2000-03-09 Genentech Inc. Stabile isotonic lyophilized protein formulation
DK0877626T3 (da) 1996-01-23 2002-12-30 Univ Vermont Anti-CD18 antistoffer til anvendelse mod slagtilfælde
US7147851B1 (en) 1996-08-15 2006-12-12 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Humanized immunoglobulin reactive with α4β7 integrin
US6037454A (en) 1996-11-27 2000-03-14 Genentech, Inc. Humanized anti-CD11a antibodies
WO1998023761A1 (en) 1996-11-27 1998-06-04 Genentech, Inc. HUMANIZED ANTI-CD11a ANTIBODIES
EP1325932B9 (en) 1997-04-07 2006-07-19 Genentech, Inc. Anti-vegf antibodies
CA2287911C (en) 1997-05-15 2014-05-06 Genentech, Inc. Apo-2 receptor
US6171586B1 (en) * 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
AU784045B2 (en) 1999-06-25 2006-01-19 Genentech Inc. Humanized anti-ErbB2 antibodies and treatment with anti-ErbB2 antibodies
CN1413220A (zh) 1999-10-29 2003-04-23 杰南技术公司 抗前列腺干细胞抗原(psca)抗体组合物及其应用方法
UA83458C2 (uk) 2000-09-18 2008-07-25 Байоджен Айдек Ма Інк. Виділений поліпептид baff-r (рецептор фактора активації в-клітин сімейства tnf)
AU3664102A (en) * 2000-12-01 2002-06-11 Battelle Memorial Institute Method for stabilizing biomolecules in liquid formulations
US7321026B2 (en) 2001-06-27 2008-01-22 Skytech Technology Limited Framework-patched immunoglobulins
WO2003033658A2 (en) 2001-10-17 2003-04-24 Human Genome Sciences, Inc. Neutrokine-alpha and neutrokine-alpha splice variant
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
EP1519959B1 (en) 2002-02-14 2014-04-02 Immunomedics, Inc. Anti-cd20 antibodies and fusion proteins thereof and methods of use
WO2004035607A2 (en) 2002-10-17 2004-04-29 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against cd20
BRPI0316779B1 (pt) 2002-12-16 2020-04-28 Genentech Inc anticorpo humanizado que liga cd20 humano, composição, artigo manufaturado, método de indução da apoptose, método de tratamento de câncer cd20 positivo, métodos de tratamento de doenças autoimunes, ácidos nucléicos isolados, vetores de expressão, células hospedeiras, método para a produção de um anticorpo 2h7 humanizado, polipeptídeo isolado, formulação líquida, método de tratamento de artrite reumatóide (ra) e anticorpos de ligação de cd20 humanizados
KR101412271B1 (ko) 2003-05-09 2014-06-25 듀크 유니버시티 Ｃｄ２０-특이적 항체 및 이를 이용한 방법
AR044388A1 (es) 2003-05-20 2005-09-07 Applied Molecular Evolution Moleculas de union a cd20
JP4818917B2 (ja) 2003-08-08 2011-11-16 イミューノメディクス、インコーポレイテッド 腫瘍および罹患細胞のアポトーシスを誘発するための二重特異性抗体
US8147832B2 (en) 2003-08-14 2012-04-03 Merck Patent Gmbh CD20-binding polypeptide compositions and methods
JO3000B1 (ar) * 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
PT2135881E (pt) 2005-06-20 2011-12-21 Genentech Inc Anticorpos que se ligam ao antigénio tat10772 associado a tumor para o diagnóstico e tratamento de tumor
WO2007002465A2 (en) 2005-06-23 2007-01-04 Rapid Pharmaceuticals, Llc Stabilizing alkylglycoside compositions and methods thereof
US8173594B2 (en) * 2006-06-23 2012-05-08 Aegis Therapeutics, Llc Stabilizing alkylglycoside compositions and methods thereof
EP2158920A1 (en) * 2006-06-23 2010-03-03 Aegis Therapeutics LLC Stabilizing alkylglycoside compositions and methods thereof
WO2008012062A1 (en) * 2006-07-24 2008-01-31 Polymun Scientific Immunbiologische Forschung Gmbh Antigenic proteoliposomes and method of manufacture
ES2880802T3 (es) 2010-06-24 2021-11-25 Hoffmann La Roche Composiciones y procedimientos para estabilizar formulaciones que contienen proteínas
US9813410B2 (en) 2014-06-26 2017-11-07 Rakuten, Inc. Information processing apparatus, information processing method, and information processing program

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