MX2011005250A - Inhibidores de triazolotiadiazol de cinasa de proteina c-met. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere al compuesto 1, que es útil en la inhibición de cinasa de proteína c-Met. La invención también proporciona composiciones farmacéuticamente aceptables que comprenden el compuesto 1 y métodos para usar las composiciones en el tratamiento de trastornos proliferativos.

Description

INHIBIDOR DE TRIAZOLOTIADIAZOL DE CINASA DE PROTEINA C- ET CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a inhibidores selectivos de c-Met. La invención también proporciona composiciones farmacéuticamente aceptables que comprenden un inhibidor de c-Met y métodos para usar las composiciones en el tratamiento de diversos trastornos proliferativos .

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El factor de crecimiento de hepatocitos (HGF) , también conocido como factor de dispersión, es un factor de crecimiento multifuncional que potencia la transformación y el desarrollo tumoral mediante la inducción de mitogénesis y motilidad celular. Adicionalmente , el HGF promueve la metástasis mediante la estimulación de la motilidad celular y la invasión a través de diversas vías de señalización. Para producir efectos celulares, el HGF debe unirse a su receptor, c-Met, un receptor de cinasa de tirosina. c-Met, una proteína heterodimérica ampliamente expresada que comprende una subunidad- de 50 kilodaltonios (kDa) y una subunidad-alfa de 145 kDa (Maggiora et al., J. Cell Physiol., 173:183-186, 1997) , se sobreexpresa en un porcentaje considerable de cánceres humanos y se amplifica durante la transición entre tumores primarios y metástasis. Los diversos cánceres en que REF: 219881 está implicada la sobreexpresión de c-Met incluyen, a modo no taxativo, adenocarcinoma gástrico, cáncer renal, carcinoma pulmonar microcítico, cáncer colorrectal, cáncer de próstata, cáncer de cerebro, cáncer hepático, cáncer de páncreas y cáncer de mama. c-Met también se encuentra implicada en aterosclerosis y fibrosis pulmonar.

Recientemente se reconoció que la prolongación del QT cardíaco inducida por fármacos causa efectos secundarios adversos o fatales en muchos ámbitos clínicos . El canal de potasio cardíaco hERG (gen humano relacionado con el éter-a-go-go) codifica la subunidad-a de la corriente rectificadora tardía rápida JKr en el corazón, lo que contribuye de forma destacada con la repolarización terminal en miocitos ventriculares humanos. Véase Dennis et al, Bioche ical Society Transactions 35 (5) : 1060-1063 (2007). Se ha mostrado que la inhibición del canal de potasio hERG puede llevar a una prolongación del intervalo QT, lo que se considera ampliamente como un factor de riesgo crítico de arritmia torsades de pointes (TdP) . Por consiguiente, superar la unión a hERG se ha vuelto un obstáculo principal en la creación de fármacos .

Además de la conciencia de la posibilidad de prolongación del QT inducida por fármacos, también es importante el metabolismo de agentes farmacológicos mediante la actividad del citocromo P450, particularmente en terapias que pueden implicar una combinación de tales agentes. Las enzimas del citocromo P450 catalizan la oxidación de muchos compuestos terapéuticos y tienen un papel importante en la extensión y la duración de los efectos de los fármacos, al catabolizar fármacos a metabolitos inactivos o al bioactivar profármacos hasta sus formas activas . Los agentes anticancerígenos muestran una gran variación en la respuesta de las personas, en parte debida a la variabilidad farmacocinética . Véase Scipture et al., Lancet Oncology 6:780-789 (2005). El sitio de metabolismo más importante mediado por el citocromo P450 es el hígado, donde estas enzimas se expresan de forma ubicua. También existen pruebas de que hay metabolismo en los tumores y que la presencia de estas enzimas en los tumores puede tener efectos deseables o adversos en la eficacia de agentes quimioterapéuticos , dependiendo de la isoforma presente y del agente citotóxico dado. Por lo tanto, la creación de agentes antitumorales que tengan perfiles de metabolismo de fármaco favorables también es una meta en el descubrimiento de fármacos.

Por consiguiente, existe una gran necesidad de crear compuestos útiles como inhibidores del receptor de cinasa de proteína c-Met. En particular, los compuestos preferidos deberían tener gran afinidad hacia el receptor c-Met y mostrar actividad funcional como antagonistas, al mismo tiempo que muestran poca afinidad hacia otros receptores de cinasa. Asimismo, es preferible proporcionar antagonistas del receptor c-Met que tengan poca o ninguna unión a hERG y perfiles farmacocinéticos/farmacodinámicos favorables.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Se descubrió que la 6- ( (S) -1- (6- (l-metil-lJí-pirazol-4-il) - [1,2,4] triazolo[3,4-£>] [1, 3 , 4] tiadiazol-3-il) etil) quinolina (compuesto 1) y las composiciones farmacéuticamente aceptables de la misma son eficaces en la inhibición de c-Met. En particular, el compuesto 1 inhibe de forma selectiva la actividad de c-Met en ensayos biológicos como, por ejemplo, la inhibición de la actividad de c-Met en células conocidas por sobreexpresar este receptor. Adicionalmente, el compuesto 1 mostró una mínima actividad del canal de potasio asociada con hERG. Además, el compuesto 1 tiene propiedades farmacocinéticas adecuadas, como lo prueba su comportamiento en modelos animales y ensayos in vitro, particularmente en estudios de metabolismo que implican isoenzimas del citocromo P450.

Por consiguiente, la invención presenta el siguiente compuesto : H, (1) , o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

La invención también proporciona una forma cristalina del compuesto 1.

La invención también proporciona composiciones farmacéuticas que incluyen el compuesto 1 en cualquier forma y un portador, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable. Adicionalmente, la invención proporciona métodos para tratar o aminorar la gravedad de una enfermedad, afección o trastorno proliferativo en un paciente que incluye la etapa de administrar al paciente una dosis terapéuticamente eficaz del compuesto 1 o una composición farmacéutica del mismo.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Definiciones y terminología general Como se usan en la presente, se aplicarán las siguientes definiciones a menos que se indique lo contrario. A los efectos de la presente invención, los elementos químicos se identifican de acuerdo con la tabla periódica de los elementos, versión CAS y el Handbook of Chemistry and Physics, 75a Ed. 1994. Adicionalmente, los principios generales de la química orgánica se describen en "Organic Chemistry," Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito : 1999 y "March' s Advanced Organic Chemistry," 5* Ed. , Smith, M.B. y March,. J., eds . John iley & Sons, Nueva York: 2001, cuyos contenidos se incorporan a la presente en su totalidad a modo de referencia.

Descripción del compuesto de la invención En un primer aspecto, la invención presenta el siguiente compuesto: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En otro aspecto, la invención presenta una forma cristalina del compuesto 1. En una modalidad, el compuesto cristalino 1 se caracteriza por uno o más de los siguientes picos a 20°C en un patrón de difracción de rayos X (escala 2-theta) : entre 6.2 y 6.4 (por ejemplo, aproximadamente 6.3), entre 9.1 y 9.3 (por ejemplo, aproximadamente 9.2), entre 11.4 y 11.6 (por ejemplo, aproximadamente 11.5), entre 13.2 y 13.4 (por ejemplo, aproximadamente 13.3), entre 13.7 y 13.9 (por ejemplo, aproximadamente 13.8), entre 14.1 y 14.3 (por ejemplo, aproximadamente 14.2), entre 14.7 y 14.9 (por ejemplo, aproximadamente 14.8), entre 16.1 y 16.3 (por ejemplo, aproximadamente 16.2), entre 18.1 y 18.3 (por ejemplo, aproximadamente 18.2), entre 18.6 y 18.8 (por ejemplo, aproximadamente 18.7) y entre 19.7 y 19.9 (por ejemplo, aproximadamente 19.8).

Composiciones, formulaciones y administración de los compuestos de la invención En otro aspecto, la invención proporciona una composición que comprende el compuesto 1 o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo y un portador, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable . En una modalidad, la cantidad de compuesto en una composición de la presente invención es una cantidad que sea eficaz para inhibir de forma medible c-Met en una muestra biológica o en un paciente. Preferentemente, la composición de la presente invención se formula para administración a un paciente que necesita la composición. Más preferentemente, la composición de la presente invención se formula para administración oral a un paciente.

El término "paciente", como se utiliza en la presente, significa un animal, preferentemente un mamífero y, más preferentemente, un humano.

También se entenderá que el compuesto 1 puede existir en forma libre para tratamiento o, cuando corresponda, como un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo. De acuerdo con la presente invención, un derivado farmacéuticamente aceptable incluye, a modo no taxativo, profármacos, sales, esteres, sales de tales ésteres o cualquier otro aducto o derivado farmacéuticamente aceptable que, tras la administración a un paciente que lo necesita, puede proporcionar, de forma directa o indirecta, el compuesto 1 como se describe de otra forma en la presente o un metabolito o residuo del mismo.

Como se utiliza en la presente, el término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a aquellas sales que, dentro del alcance de la opinión médica bien fundada, son adecuadas para su uso en contacto con los tej idos de humanos y animales inferiores sin toxicidad, irritación o respuesta alérgica indebidas y similares.

Las sales farmacéuticamente aceptables se conocen bien en la técnica. Por ejemplo, S. M. Berge et al., describen con detalle sales farmacéuticamente aceptables en <J. Pharmaceutical Sciences, 66:1-19, 1977, que se incorpora a la presente a modo de referencia. Las sales farmacéuticamente aceptables del compuesto 1 incluyen aquellas derivadas de ácidos y bases orgánicas e inorgánicas adecuadas. Los ejemplos de sales de adición de ácido no tóxicas farmacéuticamente aceptables son sales de un grupo amino formadas con ácidos inorgánicos como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico y ácido perclórico o con ácidos orgánicos como ácido acético, ácido oxálico, ácido maleico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico o ácido malónico o mediante el uso de otros métodos utilizados en la técnica como intercambio de iones. Otras sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales de adipato, alginato, ascorbato, aspartato, bencenosulfonato, benzoato, bisulfato, borato, butirato, canforato, canforsulfonato, citrato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, formato, fumarato, glucoheptonato, glicerofosfato, gluconato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, hidroyoduro, 2 -hidroxi-etanosulfonato, lactobionato, lactato, laurato, sulfato de laurilo, malato, maleato, malonato, metanosulfonato, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, nitrato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, estearato, succinato, sulfato, tartrato, tiocianato, p-toluenosulfonato, undecanoato, valerato y similares . Las sales derivadas de bases apropiadas incluyen sales de metal alcalino, metal alcalino térreo, amonio y N+ (alquiloCi-4) 4 · Como se describió anteriormente, las composiciones farmacéuticamente aceptables de la presente invención comprenden adicionalmente un portador, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable que, como se utiliza en la presente, incluye cualquiera y todos los solventes, diluyentes u otros vehículos líquidos, asistentes de suspensión o dispersión, agentes tensioactivos, agentes isotónicos, agentes espesantes o emulsionantes, conservantes, aglutinantes sólidos, lubricantes y similares, según sea adecuado para la forma de dosificación particular deseada. En Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21a edición, 2005, ed. D.B. Troy, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia y Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick y J. C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, Nueva York, cada uno de cuyos contenidos se incorporan a la presente a modo de referencia, se describen diversos portadores utilizados en la formulación de composiciones farmacéuticamente aceptables y técnicas conocidas para la preparación de los mismos. Salvo en la medida en que cualquier medio portador convencional sea incompatible con el compuesto 1, como al producir cualquier efecto biológico no deseado o al interactuar de otra forma perjudicialmente con cualquier otro componente o componentes de la composición farmacéuticamente aceptable, su uso se contempla dentro del alcance de la presente invención.

Algunos ejemplos de materiales que pueden servir como portadores farmacéuticamente aceptables incluyen, a modo no taxativo, intercambiadores de iones, alúmina, estearato de aluminio, lecitina, proteínas séricas como albúmina de suero humano, sustancias amortiguadoras como fosfatos, glicina, ácido sórbico o sorbato de potasio, mezclas de glicérido parciales de ácidos grasos vegetales saturados, agua, sales o electrolitos, tales como sulfato de protamina, fosfato de hidrógeno disódico, dihidrógenofosfato de potasio, cloruro de sodio, sales de zinc, sílice coloidal, trisilicato de magnesio, polivinilpirrolidona, poliacrilatos , ceras, polímeros bloqueadores de polietileno-polioxipropileno, grasa de lana, azúcares como lactosa, glucosa o sucrosa, almidones como almidón de maíz y almidón de papa, celulosa y sus derivados como carboximetil celulosa sódica, celulosa de etilo y acetato de celulosa, tragacanto en polvo, malta, gelatina, talco, excipientes como manteca de cacao y ceras para supositorios, aceites como aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón, aceite de cártamo, aceite de sésamo, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de soja, glicoles como glicol propilénico o glicol polietilénico, ásteres como oleato de etilo y laurato de etilo, agar, agentes amortiguadores como hidróxido de magnesio e hidróxido de aluminio, ácido algínico, agua libre de pirógenos, solución salina isotónica, solución de Ringer, alcohol etílico y soluciones amortiguadoras de fosfato, así como otros lubricantes compatibles no tóxicos como lauril sulfato de sodio y'estearato de magnesio, así como agentes colorantes, agentes de liberación, agentes de recubrimiento, agentes edulcorantes, saborizantes y perfumantes, conservantes y antioxidantes también pueden estar presentes en la composición, de acuerdo con la opinión de quien los formula.

Las composiciones de la presente invención pueden administrarse de forma oral, parenteral, mediante atomización por inhalación, de forma tópica, rectal, nasal, bucal, vaginal o a través de un depósito implantado. El término "parenteral" como se usa en la presente incluye técnicas de inyección o infusión subcutánea, intravenosa, intramuscular, intrarticular, intrasinovial, intraesternal, intratecal, intraocular, intrahepática, intralesional e intracranial . Preferentemente, las composiciones se administran de forma oral, intraperitoneal o intravenosa. Las formas inyectables estériles de las composiciones de la presente invención pueden ser suspensiones acuosas u oleaginosas. Estas suspensiones pueden formularse de acuerdo con métodos conocidos en la técnica usando agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspensión adecuados. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o solvente no tóxico parenteralmente aceptable, por ejemplo, como una solución en 1 , 3 -butanodiol . Entre los vehículos y solventes aceptables que pueden emplearse se encuentran agua, solución de Ringer y solución isotónica de cloruro de sodio. Adicionalmente, los aceites fijos estériles se utilizan convencionalmente como medios solventes o de suspensión.

A tales efectos, puede utilizarse cualquier aceite fijo insípido, incluyendo mono o diglicéridos sintéticos. Los ácidos grasos como ácido oleico y sus derivados glicéridos son útiles en la preparación de inyectables, ya que son aceites naturales farmacéuticamente aceptables, tales como aceite de oliva o aceite de risino, especialmente en sus versiones polioxietiladas . Estas soluciones o suspensiones oleosas pueden contener también un diluyente o dispersante alcohólico de cadena larga, como carboximetilcelulosa o agentes dispersantes similares que se usan comúnmente en la formulación de formas de dosificación farmacéuticamente aceptables, incluyendo emulsiones y suspensiones. Otros tensioactivos comúnmente usados, como Tweens, Spans y otros agentes emulsionantes o potenciadores de la biodisponibilidad que se usan comúnmente en la fabricación de sólidos, líquidos u otras formas de dosificación farmacéuticamente aceptables, también pueden usarse con fines de formulación.

Las composiciones farmacéuticamente aceptables de la presente invención pueden administrarse en cualquier forma de dosificación oralmente aceptable incluyendo, a modo no taxativo, cápsulas, comprimidos y suspensiones o soluciones acuosas. En el caso de comprimidos para uso oral, los portadores comúnmente utilizados incluyen lactosa y almidón de maíz. También se agregan típicamente agentes lubricantes como estearato de magnesio. Para la administración oral en forma de cápsula, los diluyentes útiles incluyen lactosa y almidón de maíz seco. Cuando se necesitan suspensiones acuosas para uso oral, el ingrediente activo se combina con agentes emulsionantes o de suspensión. Si se desea, también pueden agregarse algunos agentes edulcorantes, saborizantes o colorantes.

De manera alternativa, las composiciones farmacéuticamente aceptables de la presente invención pueden administrarse en forma de supositorios para administración rectal. Estos pueden prepararse mezclando el agente con un excipiente no irritante adecuado que sea sólido a temperatura ambiente pero líquido a temperatura rectal y, por lo tanto, se derrita en el recto para liberar el fármaco. Tales materiales incluyen manteca de cacao, cera de abeja y glicoles polietilénicos .

Las composiciones farmacéuticamente aceptables de la presente invención también pueden administrarse en forma tópica, especialmente cuando el objetivo de tratamiento incluye áreas u órganos fácilmente accesibles mediante aplicación tópica, incluyendo enfermedades oculares, cutáneas o del tracto intestinal inferior. Se preparan fácilmente formulaciones tópicas adecuadas para cada una de estas áreas u órganos .

La aplicación tópica en el tracto intestinal inferior puede realizarse en una formulación de supositorio rectal (remitirse a lo que antecede) o en una formulación de enema adecuada. También pueden usarse parches tópicamente transdermales .

Para aplicaciones tópicas, las composiciones farmacéuticamente aceptables pueden formularse en un ungüento adecuado que contenga el componente activo suspendido o disuelto en uno o más portadores. Los portadores para administración tópica del compuesto 1 incluyen, a modo no taxativo, aceite mineral, vaselina líquida, vaselina blanca, glicol propilénico, polioxietileno, compuesto de polioxipropileno, cera emulsionante y agua. De manera alternativa, las composiciones farmacéuticamente aceptables pueden formularse en una loción o crema adecuada que contenga los componentes activos suspendidos o disueltos en uno o más portadores farmacéuticamente aceptables. Los portadores adecuados incluyen, a modo no taxativo, aceite mineral, monoestearato de sorbitán, polisorbato 60, cera de ésteres de cetilo, alcohol cetearílico, 2-octildodecanol, alcohol bencílico y agua.

Para uso oftálmico, las composiciones farmacéuticamente aceptables se pueden formular, por ejemplo, como suspensiones micronizadas en solución salina estéril isotónica con pH ajustado u otra solución acuosa o, preferentemente, como soluciones en solución salina estéril isotónica con pH ajustado u otra solución acuosa, con o sin un conservante como cloruro de bencilalconio . De manera alternativa, para usos oftálmicos, las composiciones farmacéuticamente aceptables se pueden formular en un ungüento como vaselina. Las composiciones farmacéuticamente aceptables de la presente invención también se pueden administrar mediante aerosol nasal o inhalación. Tales composiciones se preparan de acuerdo con métodos bien conocidos en la técnica de la formulación farmacéutica y se pueden preparar como soluciones en solución salina, utilizando alcohol bencílico u otros conservantes o promotores de absorción adecuados para potenciar la biodisponibilidad, fluorocarbonos y/u otros agentes solubilizantes o dispersantes convencionales.

De manera más preferente, se formulan composiciones farmacéuticamente aceptables de la presente invención para administración oral.

Las formas de dosificación líquida para administración oral incluyen, a modo no taxativo, emulsiones, microemulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmacéuticamente aceptables. Además de los compuestos activos, las formas de dosificación líquida pueden contener diluyentes inertes comúnmente utilizados en la técnica como, por ejemplo, agua u otros solventes, agentes solubilizantes y emulsionantes como alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, glicol propilénico, glicol 1,3-butilénico, dimetilformamida, aceites (en particular, aceites de semilla de algodón, cacahuete, maíz, germen, oliva, ricino y sésamo) , glicerol, alcohol tetrahidrofurfurílico, glicoles polietilénicos y ésteres de ácidos grasos de sorbitán y mezclas de los mismos. Además de los diluyentes inertes, las composiciones orales también pueden incluir adyuvantes como agentes humectantes, agentes emulsionantes y de suspensión, agentes edulcorantes, saborizantes y perfumantes.

Las preparaciones inyectables, por ejemplo, suspensiones acuosas u oleaginosas inyectables estériles, se pueden formular de acuerdo con la técnica conocida usando agentes humectantes o dispersantes y agentes de suspensión adecuados. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución, suspensión o emulsión inyectable estéril en un diluyente o solvente no tóxico parenteralmente aceptable, por ejemplo, como una solución en 1 , 3 -butanodiol . Entre los vehículos y solventes aceptables que pueden emplearse se encuentran agua, solución de Ringer, U.S.P. y solución isotónica de cloruro de sodio. Adicionalmente, los aceites fijos estériles se utilizan convencionalmente como medios solventes o de suspensión. A tales efectos, puede utilizarse cualquier aceite fijo insípido, incluyendo mono o diglicéridos sintéticos. Adicionalmente, se usan ácidos grasos como ácido oleico en la preparación de inyectables.

Las formulaciones inyectables se pueden esterilizar, por ejemplo, mediante filtración a través de un filtro de retención de bacterias o mediante la incorporación de agentes esterilizantes en forma de composiciones sólidas estériles que se puedan disolver o dispersar en agua estéril u otro medio inyectable estéril antes de su uso.

Para prolongar el efecto del compuesto 1, a menudo resulta deseable ralentizar la absorción de este compuesto a partir de inyección intramuscular o subcutánea. Esto se puede realizar mediante el uso de una suspensión líquida de material cristalino o amorfo con baja solubilidad en agua. La velocidad de absorción del compuesto 1 depende entonces de su velocidad de disolución que, a su vez, puede depender del tamaño del cristal y la forma cristalina. De manera alternativa, la disolución o suspensión del compuesto l en un vehículo oleoso logra la absorción retardada de una forma de compuesto administrada parenteralmente . Las formas de depósito inyectables se pueden realizar mediante la formación de matrices microencapsuladas del compuesto 1 en polímeros biodegradables como polilactida-poliglicósido . Dependiendo de la relación del compuesto al polímero y de la naturaleza del polímero particular utilizado, se puede controlar la velocidad de liberación del compuesto. Los ejemplos de otros polímeros biodegradables incluyen poli (ortoésteres) y poli (anhídridos) . Las formulaciones inyectables de depósito también se preparan atrapando el compuesto 1 en liposomas o microemulsiones compatibles con tejidos corporales.

Las composiciones para administración rectal o vaginal son preferentemente supositorios que se pueden preparar mezclando el compuesto 1 con excipientes o portadores no irritantes adecuados como manteca de cacao, glicol polietilénico o una cera de supositorio que sean sólidos a temperatura ambiente pero líquidos a temperatura corporal y, por lo tanto, se derritan en el recto o la cavidad vaginal y liberen el compuesto activo.

Las formas de dosificación sólidas para administración oral incluyen cápsulas, comprimidos, pastillas, polvos y gránulos . En tales formas de dosificación sólidas, el compuesto activo se mezcla con al menos un excipiente o portador inerte farmacéuticamente aceptable como citrato de sodio o fosfato de dicalcio y/o a) rellenos o extensores como almidones, lactosa, sucrosa, glucosa, manitol y ácido silícico, b) aglutinantes como, por ejemplo, carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinil-pirrolidona, sucrosa y acacia, c) humectantes como glicerol, d) agentes desintegrantes como agar-agar, carbonato de calcio, almidón de papa o tapioca, ácido algínico, algunos silicatos y carbonato de sodio, e) agentes retardantes de solución como parafina, f) aceleradores de la absorción como compuestos de amonio cuaternario, g) agentes humectantes como, por ejemplo, alcohol cetílico y monoestearato de glicerol, h) absorbentes como arcilla de caolín y bentonita e i) lubricantes como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, glicoles de polietileno sólidos, lauril sulfato de sodio y mezclas de los mismos. En el caso de cápsulas, comprimidos y pastillas, la forma de dosificación también puede comprender agentes amortiguadores.

También se pueden usar composiciones sólidas similares como rellenos en cápsulas rellenas de gelatina duras y blandas usando excipientes como lactosa o azúcar de leche, así como glicoles de polietileno de alto peso molecular y similares. Las formas de dosificación sólidas de comprimidos, grageas, cápsulas, pildoras y gránulos se pueden preparar con recubrimientos y membranas como recubrimientos entéricos u otros recubrimientos bien conocidos en la técnica de la formulación farmacéutica. Opcionalmente, pueden contener agentes opacificantes y también puede ser de una composición tal que liberen el o los ingredientes activos solamente o preferentemente en una determinada parte del tracto intestinal, opcionalmente, en forma retardada. Los ejemplos de composiciones de inclusión que se pueden usar incluyen sustancias y ceras poliméricas. También se pueden usar composiciones sólidas similares como rellenos en cápsulas rellenas de gelatina duras y blandas usando excipientes como lactosa o azúcar de leche, así como glicoles polietilénicos de alto peso molecular y similares.

Los compuestos activos también pueden encontrarse en forma microencapsulada con uno o más excipientes como se expresó anteriormente. Las formas de dosificación sólidas de comprimidos, grageas, cápsulas, pildoras y gránulos se pueden preparar con recubrimientos y membranas como recubrimientos entéricos, recubrimientos de control de la liberación u otros recubrimientos bien conocidos en la técnica de la formulación farmacéutica. En tales formas de dosificación sólidas el compuesto activo se pude mezclar con al menos un diluyente inerte como sucrosa, lactosa o almidón. Tales formas de dosificación también pueden comprender, como es habitual en la práctica, sustancias adicionales sin ser diluyentes inertes, por ejemplo, lubricantes de preparación de comprimidos y otros asistentes de preparación de comprimidos como un estearato de magnesio y celulosa microcristalina. En el caso de cápsulas, comprimidos y pastillas, las formas de dosificación también puede comprender agentes amortiguadores. Opcionalmente, pueden contener agentes opacificantes y pueden ser de una composición tal que liberen el o los ingredientes activos solamente o preferentemente en una parte del tracto intestinal, opcionalmente, en forma retardada. Los ejemplos de composiciones de inclusión que se pueden usar incluyen sustancias y ceras poliméricas .

Las formas de dosificación para administración tópica y transdérmica del compuesto 1 incluyen ungüentos, pastas, cremas, lociones, geles, polvos, soluciones, atomizadores, inhaladores o parches . El componente activo se mezcla en condiciones estériles con un portador farmacéuticamente aceptable y cualquier conservante o amortiguador necesario. Las formulaciones oftálmicas, las gotas para los oídos y las gotas para los ojos también se encuentran contempladas dentro del alcance de la presente invención. Adicionalmente, la presente invención contempla el uso de parches transdérmicos que tienen la ventaja adicional de proporcionar un suministro controlado del compuesto 1 al cuerpo. Tales formas de dosificación se pueden realizar disolviendo o administrando el compuesto 1 en el medio apropiado. También se pueden usar potenciadores de la absorción para aumentar el flujo del compuesto 1 a través de la piel . La velocidad se puede controlar proporcionando una membrana de control de la velocidad o dispersando el compuesto 1 en un gel o una matriz poliméricos .

El compuesto 1 se formula preferentemente en una forma individual de dosificación para facilitar la administración y lograr la uniformidad de la dosificación. La expresión "forma individual de dosificación" como se utiliza en la presente se refiere a una unidad físicamente separada de agente adecuado para el paciente que se va a tratar. No obstante, se entenderá que el uso diario total del compuesto 1 y las composiciones que comprenden el compuesto 1 lo decidirá el médico tratante dentro del alcance de la opinión médica bien fundada. El nivel de dosis eficaz específico para cualquier paciente u organismo particular dependerá de una variedad de factores que incluyen el trastorno que se trate y la gravedad del mismo, la actividad del compuesto específico utilizado, la composición específica empleada, la edad, el peso corporal, la salud general, el sexo y la dieta del paciente, el tiempo de administración, la vía de administración y la velocidad de excreción del compuesto específico utilizado, la duración del tratamiento, la combinación o coincidencia de fármacos con el compuesto específico empleado y factores similares bien conocidos en la técnica médica.

La cantidad de compuesto 1 que se puede combinar con los materiales portadores para producir una composición en una forma de dosificación individual dependerá del hospedador tratado y del modo particular de administración. Preferentemente, las composiciones se deberían formular de forma tal que se pueda administrar una dosificación de entre 0.01 y 100 mg/kg de peso corporal/día del inhibidor al paciente que recibe estas composiciones. En un ejemplo, las composiciones se formulan de forma tal que la dosificación del compuesto 1 es de entre 5 y 30 mg/kg de peso corporal/día.

Dependiendo de la afección o enfermedad particular que se va a tratar o prevenir, también pueden estar presentes en la composición de la presente invención agentes terapéuticos adicionales que se administran normalmente para tratar o prevenir tal afección. Como se utilizan en la presente, los agentes terapéuticos adicionales que se administran normalmente para tratar o prevenir una enfermedad o afección particular se conocen como "adecuados para la enfermedad o afección que se trata" . A continuación se proporcionan ejemplos de agentes terapéuticos adicionales.

La cantidad de agente terapéutico adicional en las composiciones de la presente invención no superará la cantidad que se administraría normalmente en una composición que comprenda ese agente terapéutico como único agente activo. Preferentemente, la cantidad de agente terapéutico adicional en las composiciones descritas actualmente se encontrará en el intervalo de entre 50% y 100% de la cantidad que se encuentra normalmente en una composición que comprenda ese agente como único agente activo terapéutico.

Usos del compuesto 1 y composiciones que comprenden el compuesto 1 De acuerdo con una modalidad, la invención se refiere a un método para inhibir la actividad de la cinasa de proteína c-Met en una muestra biológica que comprende la etapa de poner en contacto tal muestra biológica con el compuesto 1 o una composición que comprende tal compuesto. El término "muestra biológica", como se utiliza en la presente, significa una muestra fuera de un organismo vivo e incluye, a modo no taxativo, cultivos celulares o extractos de los mismos, material sometido a biopsia obtenido de un mamífero o extractos del mismo, así como sangre, saliva, orina, heces, semen, lágrimas u otros fluidos corporales o extractos de los mismos . La inhibición de la actividad de cinasa en una muestra biológica es útil para una variedad de fines conocidos por el experto en la técnica. Los ejemplos de tales fines incluyen, a modo no taxativo, ensayos biológicos y almacenamiento de muestras biológicas. En una modalidad, el método para inhibir la actividad de cinasa en una muestra biológica se limita a métodos no terapéuticos.

El término "c-Met" es sinónimo de "c-MET," "cMet", "MET" , "Met" u otras designaciones conocidas por el experto en la técnica.

De acuerdo con otra modalidad, la invención se refiere a un método para inhibir la actividad de la cinasa de proteína c- et en un paciente, que comprende la etapa de administrar al paciente el compuesto 1 o una composición que comprende tal compuesto.

El término "enfermedad mediada por c-Met" o "afección mediada por c-Met", como se utiliza en la presente, significa cualquier estado de enfermedad u otra afección perjudicial en la que se sabe que c-Met tiene participación. Los términos "enfermedad mediada por c-Met" o "afección mediada por c-Met" también significan aquellas enfermedades o afecciones que se mejoran mediante el tratamiento con un inhibidor de c-Met. Tales afecciones incluyen, a modo no taxativo, cáncer renal, gástrico, de colon, de cerebro, de mama, de próstata, de hígado, de páncreas o de pulmón, glioblastoma, aterosclerosis o fibrosis pulmonar.

En un aspecto, la presente invención presenta un método para tratar un trastorno proliferativo en un paciente que comprende la etapa de administrar al paciente una dosis terapéuticamente eficaz del compuesto 1 o una composición que comprende el compuesto 1.

De acuerdo con una modalidad, el trastorno proliferativo es cáncer como, por ejemplo, cáncer renal, gástrico, de colon, de cerebro, de mama, de hígado, de próstata y de pulmón o un glioblastoma .

En otra modalidad, la presente invención se refiere a un método para tratar o aminorar la gravedad del carcinoma hepatocelular en un paciente que lo necesita, que comprende administrar al paciente el compuesto 1 o una composición del mismo .

En otra modalidad, el trastorno proliferativo es policitemia vera, trombocitemia esencial, mielofibrosis idiopática crónica, metaplasia mieloide con mielofibrosis , leucemia mieloide crónica (CML) , leucemia mielomonocítica crónica, leucemia eosinofílica crónica, síndrome hipereosinofílico, mastocitosis sistemática, CML atípica o leucemia mielomonocítica juvenil.

En otra modalidad, el trastorno proliferativo es aterosclerosis o fibrosis pulmonar.

Otro aspecto de la presente invención se refiere a un método para inhibir la metástasis tumoral en un paciente que lo necesita, que comprende administrar al paciente el compuesto 1 o una composición del mismo.

Dependiendo de la afección o enfermedad particular que se va a tratar, también pueden estar presentes en la composición de la presente invención agentes terapéuticos adicionales que se administran normalmente para tratar tal afección. Como se utiliza en la presente, los agentes terapéuticos adicionales que se administran normalmente para tratar una enfermedad o afección particular se conocen como "adecuados para la enfermedad o afección que se trata" .

En una modalidad, los agentes quimioterapéuticos u otros agentes antiproliferativos se pueden combinar con el compuesto 1 para tratar enfermedades proliferativas y cáncer. Los ejemplos de agentes quimioterapéuticos conocidos incluyen, a modo no taxativo, agentes alquilantes como, por ejemplo, ciclofosfamida, lomustina, busulfán, procarbazina, ifosfamida, altretamina, melfalán, fosfato de estramustina, hexametilmelamina, mecloretamina, tiotepa, estreptozocina, clorambucilo, temozolomida, dacarbazina, semustina o carmustina; agentes de platino como, por ejemplo, cisplatino, carboplatino, oxaliplatino, ZD-0473 (AnorMED) , espiroplatino, lobaplatino (Aeterna) , carboxiftalatoplatino, satraplatino (Johnson Matthey) , tetraplatino BBR-3464, (Hoffmahn-La Roche), ormiplatino, SM-11355 (Sumítomo) , iproplatino o AP-5280 (Access) ; antimetabolitos como, por ejemplo, azacitidina, tomudex, gemcitabina, trimetréxato, capecitabina, desoxicoforraicina, 5-fluorourácilo, fludarabina, floxuridina, pentostatina, 2-clorodesoxiadenosina, raltitrexed, 6-mercaptopurina, hidroxiurea, 6-tioguanina, decitabina (SuperGen) , citarabina, clofarabina (Bioenvision) , 2-fluorodesoxi citidina, irofulveno (MGI Pharma) , metotrexato, DMDC (Hoffmann-La Roche) , idatrexato o etinilcitidina (Taiho) ; inhibidores de topoisomerasa como, por ejemplo, amsacrina, rubitecán (SuperGen) , epirubicina, mesilato de exatecán (Daiichi) , etoposida, quinamed (ChemGenex) , teniposida, mitoxantrona, gimatecán (Sigma-Tau) , irinotecán (CPT-11) , diflomoteclán (Beaufour-Ipsen) , 7-etil-10-hidroxi-camptotecina, TAS-103 (Taiho) , topotecán, elsamitrucina (Spectrum) , dexrazoxanet (TopoTarget) , J-107088 (Merck & Co) , pixantrona (Novuspharma) , BNP-1350 (BioNumerik) , análogo de rebecamicina (Exelixis), CKD-602 (Chong Kun Dang) , BBR-3576 (Novuspharma) o KW-2170 (Kyowa Hakko) ; antibióticos antitumorales como, por ejemplo, dactinomicina (actinomicina D) , amonafida, doxorubicina (adriamicina) , azonafida, desoxirubicina, antrapirazol, valrubicina, oxantrazol, daunorubicina (daunomicina) , losoxantrona, epirubicina, bleomicina, sulfato (blenoxano) , terarubicina, ácido bleomicínico, idarübicina, bleomicina A, rubidazona, bleomicina B, plicamicina, mitomicina C, porfiromicina, MEN-10755 (Menarini) , cianomorfolinodoxorubicina, GPX-100 (Gem Pharmaceuticals) o mitoxantrona (novantrona) , agentes antimitóticos como, por ejemplo, paclitaxel, SB 408075 (GlaxoSmithKline) , docetaxel, E7010 (Abbott) , colchicinas, PG-TXL (Cell Therapeutics) , vinblastina, IDN 5109 (Bayer) , vincristina A, 105972 (Abbott) , vinorelbina, A 204197 (Abbott) , vindesina, LU 223651 (BASF) , dolastatina 10 (NCI) , D 24851 (ASTAMedica) , rizoxina (Fujisawa), ER-86526 (Eisai) , mivobulina (Warner-Lambert) , combretastatina A4 (BMS) , cemadotina (BASF) , isohomohalicondrina-B (Pharma ar) , RPR 109881A (Aventis) , ZD 6126 (AstraZeneca) , TXD 258 (Aventis) , PEG-paclitaxel (Enzon,) epotilona B (Novartis) , AZ10992 (Asahi) , T 900607 (Tularik) , IDN-5109 (Indena) , T 138067 (Tularik) , AVLB (Prescient NeuroPharma) , criptoficina 52 (Eli Lilly) , azaepotilona B (BMS) , vinflunina (Fabre) , BNP-7787 (BioNumerik) , auristatina PE (Teikoku Hormone) , prof rmaco CA-4 (OXiGENE) , BMS 247550 (BMS) , dolastatina-10 (NIH) , BMS 184476 (BMS), CA-4 (OXiGENE) , BMS 188797 (BMS) o taxpprexín (Protarga) ; inhibidores de aromatasa como, por ejemplo, aminoglutetimida, exemestano, letrozol, atamestano (BioMedicines) , anastrazol, YM-511 (Yamanouchi) o formestano; inhibidores de la timidilato sintasa como, por ejemplo, pemetrexed (Eli Lilly), nolatrexed (Eximias), ZD-9331 (BTG) o CoFactor™ (BioKeys) ; antagonistas de ADN como, por ejemplo, trabectedina (PharmaMar) , mafosfamida (Baxter International) , glufosfamida (Baxter International) , apazicuona (Spectrum Pharmaceuticals) , albúmina + 32P (Isotope Solutions) , 06-bencil-guanina (Paligent) , timectacina (NewBiotics) o edotreotida (Novartis) ; inhibidores de farnesiltransferasa como, por ejemplo, arglabina (NuOncology Labs) , tipifarnib (Johnson & Johnson) , lonafarnib (Schering-Plough) , alcohol perilílico (DOR BioPharma) o BAY-43-9006 (Bayer) ; inhibidores de bomba como, por ejemplo, CBT-1 (CBA Pharma) , trihidrocloruro de zosuquidar (Eli Lilly) , tariquidar (Xenova) , biricodar dicitrato (Vértex) o MS-209 (Schering AG) ; inhibidores de histona acetiltransferasa como, por ejemplo, tacedinalina (Pfizer) , butirato de pivaloiloximetilo (Titán) , SAHA (Aton Pharma) , depsipéptido (Fujisawa) o MS-275 (Schering AG) ; inhibidores de metaloproteinasa como, por ejemplo, Neovastat (Aeterna Laboratories) , CMT-3 (CollaGenex) , marimastat (British Biotech) o BMS-275291 (Celltech) ; inhibidores de reductasa de ribonucleósido como, por ejemplo, maltolato de galio (Titán) , tezacitabina (Aventis) , triapina (Vion) o didox (Molecules for Health) ; agonistas/antagonistas de TNF alfa como, por ejemplo, virulizín (Lorus Therapeutics) , revimid (Celgene) , CDC-394 (Celgene) , entanercept (Immunex Corp.), infliximab (Centocor, Inc.) o adalimumab (Abbott Laboratories); antagonistas del receptor de entodelina A como, por ejemplo, atrasentán (Abbott) , YM-598 (Yamanouchi) o ZD-4054 (AstraZeneca) ; agonistas del receptor de ácido retinoico como, por ejemplo, fenretinida (Johnson & Johnson) , alitretinoina (Ligand) o LGD-1550 (Ligand) ; inmunomoduladores como, por ejemplo, terapia con dexosoma de interferón (Anosys) , oncofago (Antigenics) , pentrix (Australian Cáncer Technology) , G K (Progenies) , ISF-154 (Tragen) , vacuna contra el adenocarcinoma (Biomira) , vacuna contra el cáncer (Intercell) , CTP-37 (AVI BioPharma) , norelina (Biostar) , IRX-2 (Immuno-Rx) , BLP-25 (Biomira) , PEP-005 (Peplin Biotech) , MGV (Progenies), vacuna synchrovax (CTL Immuno) , beta-aletina (Dovetail), vacuna contra el melanoma (CTL Immuno), terapia contra CLL (Vasogen) o vacuna de p21 RAS (GemVax) ; agentes hormonales y antihormonales como, por ejemplo, estrógenos, prednisona, , estrógenos conjugados, metilprednisolona, estradiol de etinilo, prednisolona, clortrianiseno, aminoglutetimida, idenestrol, leuprolida, hidroxiprogesterona caproato, goserelina, medroxiprogesterona, leuporelina, testosterona, bicalutamida, propionato de testosterona, fluoximesterona, flutamida, metiltestosterona, octreotida, dietilestilbestrol, nilutamida, megestrol, mitotano, tamoxifeno, P-04 (Novogen) , toremofina, 2 -metoxiestradiol (EntreMed) , dexametasona o arzoxifeno (Eli Lilly) ; agentes fotodinámicos como, por ejemplo, talaporfina (Light Sciences) , Pd-bacteriofeoforbida (Yeda) , Theralux (Theratechnologies) , lutetio-texafirina (Pharmacyclics) , motexafina gadolinio (Pharmacyclics) o hipericina e inhibidores de la cinasa de tirosina como, por ejemplo, imatinib (Novartis) , kahalido F (PharmaMar) , leflunomida (Sugen/Pharmacia) , CEP-701 (Cep alon) , ZD1839 (AstraZeneca) , CEP-751 (Cephalon) , erlotinib (Oncogene Science) , MLN518 (Millenium) , canertinib (Pfizer) , PKC412 (Novartis) , escualamina (Genaera) , fenoxodiol, SU5416 (Pharmacia) , trastuzumab (Genentech) , SU6668 (Pharmacia) , C225 (ImClone) , ZD4190 (AstraZeneca) , rhu-Mab (Genentech) , ZD6474 (AstraZeneca), MDX-H210 (Medarex) , vatalanib (Novartis), 2C4 (Genentech) , PKI166 (Novartis) , MDX-447 (Medarex) , G 2016 (GlaxoSmithKline) , ABX-EGF (Abgenix) , EKB-509 ( yeth) , IMC-1C11 (ImClone) o EKB-569 (Wyeth) .

Los agentes adicionales se pueden administrar por separado de la composición que contiene el compuesto 1, como parte de un régimen de dosificación múltiple. De manera alternativa, los agentes pueden ser parte de una forma de dosificación individual, mezclados con el compuesto 1 en una composición única. Si se administran como parte de un régimen de dosificación múltiple, los dos agentes activos se pueden proporcionar simultáneamente, secuencialmente o con un período de tiempo entre sí, normalmente dentro de las 5. horas de distancia entre sí.

La cantidad de ambos, el compuesto 1 y el agente terapéutico adicional (en las composiciones que comprenden un agente terapéutico adicional como se describió anteriormente) , que se puede combinar con los materiales portadores para producir una forma dosificación individual variará dependiendo del hospedador que se trate y el modo de administración particular. Preferentemente, las composiciones de la presente invención se deberían formular de forma tal que se pueda administrar una dosificación de entre 0.01 y 100 mg/kg de peso corporal/día del compuesto 1. En un ejemplo, las composiciones se formulan de forma tal que la dosificación del compuesto 1 sea de entre 5 y 30 mg/kg de peso corporal/día.

En las composiciones que comprenden un agente terapéutico adicional, el agente terapéutico adicional y el compuesto 1 pueden actuar de forma sinergística. Por consiguiente, la cantidad de agente terapéutico adicional en tales composiciones será menor a la necesaria en una monoterapia que utilice solamente el agente terapéutico. En tales composiciones, se puede administrar una dosificación de entre 0.01 y 100 mg/kg de peso corporal/día de agente terapéutico adicional.

La cantidad de agente terapéutico adicional en las composiciones de la presente invención no superará la cantidad que se administraría normalmente en una composición que comprenda ese agente terapéutico como único agente activo. Preferentemente, la cantidad de agente terapéutico adicional en las composiciones descritas actualmente se encontrará en el intervalo de entre 50% y 100% de la cantidad que se encuentra normalmente en una composición que comprende ese agente como único agente terapéuticamente activo.

El compuesto 1 o las composiciones farmacéuticas del mismo también se pueden incorporar en composiciones para recubrir un dispositivo médico implantable, como prótesis, válvulas artificiales, injertos vasculares, endoprótesis y catéteres. Se han utilizado las endoprótesis vasculares, por ejemplo^ para superar la restenosis (re-estrechamiento de la pared del vaso luego de la lesión) . No obstante, los pacientes que usan endoprótesis u otros dispositivos implantables presentan riesgo de formación de coágulos o activación de plaquetas. Estos efectos no deseados se pueden evitar o mitigar pre-recubriendo el dispositivo con una composición farmacéuticamente aceptable que comprenda un inhibidor de cinasa. Los recubrimientos adecuados y la preparación general de dispositivos implantables recubiertos se describen en las patentes estadounidenses 6,099,562; 5,886,026 y 5,304,121. Los recubrimientos son típicamente materiales poliméricos biocompatibles como un polímero., de hidrogel, polimetildisiloxano, policaprolactona, glicol polietilénico, ácido poliláctico, acetato de etilenvinilo y mezclas de los mismos. Los recubrimientos se pueden cubrir adicionalraente con una capa final adecuada de fluorosilicona, polisacáridos , glicol polietilénico, fosfolípidos o combinaciones de los mismos, para dar características de liberación controlada a la composición. Los dispositivos implantables recubiertos con el compuesto 1 son otra modalidad de la presente invención.

A los efectos de que la invención descrita en la presente se pueda entender con más amplitud, se proporcionan los siguientes ejemplos. Se debe entender que los ejemplos se proporcionan con fines ilustrativos solamente y que no se deben interpretar como una limitación de la invención de ninguna forma.

Preparación del compuesto 1 Las siguientes definiciones describen términos y abreviaturas utilizados en la presente: Salmuera una solución saturada de NaCl en agua BSA albúmina de suero bovino DMSO dimetilsulfóxido ESMS espectrometría de masa por electropulverización EtOAc acetato de etilo EtOH alcohol etílico FB base libre HPLC cromatografía líquida de alto rendimiento LCMS cromatografía líquida - espectrometría de masa Me metilo MeOH metanol Ph fenilo RT temperatura ambiente TCA ácido tricloroacético THF tetrahidrofu ano TFA ácido trifluoroacético Como se usan en la presente, otras abreviaturas, símbolos y convenciones son coherentes con aquellos utilizados en la literatura científica contemporánea. Véase, por ejemplo, Janet S. Dodd, ed., The ACS Style Guide: A Manual for Authors and Editors, 2a Ed. , Washington, D.C.: American Chemical Society, 1997, incorporado a la presente en su totalidad a modo de referencia.

Como se utiliza en la presente, el término "R (min)" se refiere al tiempo de retención de HPLC, en minutos, asociado con un compuesto. A menos que se indique lo contrario, el método de HPLC utilizado para obtener el tiempo de retención expresado es el siguiente: columna: columna Zorbax SB C18, 3.0 x 150 mm; gradiente: 10-90% acetonitrilo/agua (0.1% de TFA), 5 minutos; velocidad de flujo: 1.0 mL/minuto y detección: 254 y 214 nm.

Procedimiento sintético El compuesto 1 se puede preparar mediante el siguient método, como se muestra en el Esquema de reacción 1 y s ejemplifica en el Ejemplo 1.

H2S0_, conc. O. (CH20)n MeOH , reflujo e3N C 16H33+ HS04- [1001 ] (etapa i)

[1002] tolueno , reflujo (etapa ii) Esquema de reacción 1 Ejemplo 1. Preparación de 6- ( (S) -1- (6- (1-metil-lH-pirazol-4 -il) -[1,2,4] triazolo [3 , 4-Jb] [1,3,4] tiadiazol-3 -il) etil) quinolina (compuesto 1) Como se muestra en la etapa i del Esquema de reacción 1, se agregó por goteo ácido sulfúrico concentrado (206 mL, 3.868 mol) a una solución de ácido 2- (quinolin-6-il) acético (compuesto 1001, 658.2 g, 3.516 mol, Okeanos Tech Co. , No. de Cat . OK-J- 05024) en 6.5 litros de metanol. Durante la adición, se observó una leve emisión de calor. Luego dé haber completado la adición, la reacción se agitó a reflujo durante 4 horas. Luego de enfriar, se quitaron los volátiles a presión reducida, el residuo resultante se diluyó con 4 litros de acetato de etilo, se enfrió en un baño de hielo, se trató con NaOH 2N (2.1 litros, 1.2 equiv.) hasta que se alcanzó un pH de 4 y luego se trató con bicarbonato de sodio saturado hasta que se alcanzó un pH de 8. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo dos veces con acetato de etilo. Los orgánicos combinados se lavaron con bicarbonato de sodio saturado, se lavaron con agua, se lavaron con salmuera, se secaron en MgS04 anhidro, se filtraron y se evaporaron a presión reducida para proporcionar 2- (quinolin-6 -il) acetato de metilo como un aceite pardo claro (compuesto 1002, 696.8 g, 98% de rendimiento) . ESMS (M+l) , 202.14; H NMR (300.0 MHZ, DMSO-d6) d 8.90 (1H, dd, J = 1.7, 4.2 Hz), 8.14 - 8.10 (1H, m) , 8.08 (1H, d, J = 8.7 Hz) , 7.72 (1H, d, J = 1.4 Hz) , 7.65 (1H, dd, J = 2.0, 8.7 Hz) , 7.40 (1H, dd, J = 4.2, 8.3 Hz), 3.83 (2H, s) , 3.73 (3H, s) .

Como se muestra en la etapa ii del Esquema de reacción 1, 2- (quinolin-6-il) acetato de metilo (82 g, 407.5 mmol) , paraformaldehído (25.89 g, 862.1 mmol), K2C03 (101.4 g, 733.5 mmol) y sulfato de hidrógeno de hexadecil (trimetil) amonio (15.55 g, 40.75 mmol) se absorbieron en tolueno (1.6 litros) y se sometieron a reflujo durante 2 horas hasta que el material de partida se consumió completamente, según se controló mediante HPLC. La mezcla de reacción se enfrió usando un baño de hielo-agua y se filtró a través de tierra diatomácea. El filtrado se lavó con 1 litro de agua y la capa orgánica se secó en sulfato de sodio anhidro, se filtró y se evaporó a presión reducida para proporcionar 2- (quinolin-6-il)acrilato de metilo como un aceite incoloro claro (75.0 g) . Este material se utilizó inmediatamente sin purificación adicional en la reacción siguiente.

Por consiguiente, como se mostró en la etapa iii del Esquema de reacción 1, se disolvió 2- (quinolin-6-il) acrilato de metilo (75.0 g) en una solución que contenía hidróxido de sodio (65.2 g, 1.63 mol) en 1.1 litros de tetrahidrofurano y 1.1 litros de agua. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La capa orgánica se separó y la capa acuosa se lavó con 500 mL de tolueno. La capa acuosa luego se enfrió con un baño de hielo y se acidificó mediante la adición por goteo de HCl concentrado hasta que se alcanzó un pH de 4.5 (aproximadamente 125 mL de HCl conc . , 1.508 mol) , lo que dio como resultado un precipitado blanco. Luego de haber completado la adición, la reacción se agitó durante 0.5 horas adicionales a 5°C. El precipitado se recogió mediante filtración al vacío, se lavó con agua, se lavó con éter metil-t-butílico y se secó al vació para proporcionar ácido 2- (quinolin-6-il) acrílico (compuesto 1003, 36.2 g) : ESMS (M+l) , 200.06; XH MR (300.0 MHz, DMSO-ds) d 13.01 (1H, s) , 8.91 (1H, dd, J = 1.8, 4.2 Hz) , 8.40 (1H, d, J = 7.5 Hz), 8.07 (1H, d, J = 1.8 Hz) , 8.01 (1H, d, J = 8.7 Hz) , 7.84 (1H, dd, J = 1.9, 8.9 Hz) , 7.55 (1H, dd, J = 1.2, 8.4 Hz), 6.39 (1H, d, J = 0.9 Hz) , 6.17 (1H, d, J = 0.9 Hz) .

Como se muestra en la etapa iv del Esquema de reacción 1, se colocaron ácido 2- (quinolin-6-il) acrílico (84.5 g, 424 mmol) , metanol (422 mL) y trietilamina (118 mL) en un recipiente cilindrico de vidrio de 2 litros en nitrógeno. La solución se desoxigenó haciendo burbujear una corriente de hidrógeno a través de la solución durante 1 hora. Se agregó dicloro [(S) - {-) -2,2' -bis (difenilfosf ino) -1,1'-binaftil] rutenio (II) (710 mg, 0.848 mmol) a la solución y el recipiente de vidrio se colocó en un reactor de alta presión Parr de acero inoxidable y se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente en 1000 psi de gas de hidrógeno. Luego, se quitó la atmósfera de hidrógeno, se agregó un secuestrante de rutenio (Silicycle®-DMT, 8.78 g, 6 equiv.) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas adicionales. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida para proporcionar un aceite viscoso pardo que se disolvió en 170 mL de agua. La solución acuosa se acidificó mediante la adición por goteo de HCl 6N hasta que se alcanzó un pH de 4-5. El precipitado resultante se recogió mediante filtración al vacío, se lavó con agua, se lavó con éter metil- t-butílico y se secó en un horno de vacío a 50 °C durante la noche para proporcionar ácido (S) -2- (quinolin-6-il) propanoico (compuesto 1004, 68.6 g) como un sólido pardo rojizo: ESMS (M+l) , 202.19; XH NMR (300.0 MHz, DMSO-ds) d 12.42 (1H, br.s) , 8.87 (1H, dd, J = 1.7, 4.2 Hz) , 8.35 (1H, d, J = 7.6 Hz) , 7.98 (1H, d, J = 8.7 Hz) , 7.87 (1H, d, J = 1.7 Hz), 7.71 (1H, dd, J = 2.0, 8.7 Hz) , 7.52 (1H, dd, J = 4.2, 8.3 Hz), 3.91 (1H, q, J = 7.1 Hz) , 1.48 (3H, d, J = 7.1 Hz) . Se recogió una segunda extracción del producto cristalino (11.5 g) para un rendimiento general de 94%. El análisis mediante cromatografía de fluidos supercríticos (SFC) utilizando una columna quiral Whelk-O® y eluyendo con (30% de MeOH/0.2% de dietilamina) en C02 mostró un 91% de exceso enantiomérico (ee) del isómero-S deseado.

Como se muestra en la etapa v del Esquema de reacción 1, se suspendieron ácido (S) -2- (quinolin-6-il) ropanoico (50 g, 248.5 mmol) y 1 , 3 -diaminotiourea (29.02 g, 273.4 mmol) en una mezcla de sulfona de tetrametileno (sulfolano, 38 mL) y agua (57 mL) . Se agregó ácido metanosulfónico (35.5 mi, 546.7 mmol) a la mezcla, tras lo cual se disolvieron todos los sólidos . La temperatura de reacción se aumentó lentamente hasta 90 °C y la reacción se calentó a 90 °C durante 40 horas, cuando se observó un 68% de conversión del material de partida a producto mediante análisis de HPLC. La mezcla de reacción se enfrió en un baño de hielo y se agregó agua (75 mL) , seguido de la adición cuidadosa de bicarbonato de sodio saturado (500 mL) hasta que se logró un pH de 8. El precipitado púrpura fino resultante se recogió mediante filtración al vacío, se lavó con agua, bicarbonato de sodio saturado, agua y éter metil-t-butílico, respectivamente. El producto se secó en un horno de vacío a 55 °C durante 2 días para proporcionar 6- ( (S) -1- (5-mercapto-4-amino-4H-l, 2, 4-triazol-3 -il) etil) quinolina (compuesto 1005, 43 g) : ESMS (M+l), 272.09; XH NMR (300.0 MHz , DMSO-d6) d 13.65 (1H, br s) , 8.86 (1H, dd, J = 1.8, 8.4 Hz) , 8.34 (1H, d, J = 7.5 Hz) , 7.98 (1H, d, J = 8.7 Hz) , 7.84 (1H, dd, J = 1.7, 13.7 Hz) , 7.82 (1H, d, J = 1.5 Hz) , 7.70 (1H, dd, J = 1.8, 8.7 Hz) , 7.50 (1H, dd, J" = 1.8, 8.7 Hz) , 5.44 (2H, s) , 4.57 (1H, q, J = 7.2 Hz) , 1.65 (3H, d, J = 7.2 Hz) . El producto tenía un 92% de pureza según el análisis de 1H NMR, con la característica de que las impurezas principales eran el compuesto 1004 y sulfolano. El análisis de HPLC quiral mostró un 92% de ee (ChiralPak® AD-H, 70% de i -propanol/hexanos , tiempo de retención: 4.98 min para el enantiómero S, 12.33 min para el enantiómero R) . El producto se usó como estaba en la siguiente etapa sin purificación adicional.

El compuesto 1004 se pudo recuperar del filtrado acuoso ajustando su pH a 5, recogiendo todo material precipitado y extrayendo el filtrado restante con acetato de etilo (3 veces) . Los orgánicos combinados se secaron en sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se evaporaron a presión reducida para proporcionar un aceite oscuro que se absorbió en 90 mL de acetato de etilo y se calentó hasta reflujo durante 0.5 horas. El enfriamiento dio como resultado un precipitado adicional que, cuando se combinó con el precipitado recogido previamente, dio como resultado la recuperación del compuesto 1004 como un sólido blanco (7 g) .

Como se muestra en la etapa vi del Esquema de reacción 1, se disolvieron 6- ( (S) -1- (5-mercapto-4-amino-4H-l, 2, 4-triazol-3 -il) etil) quinolina (123.0 g, 453.3 mmol) y ácido 1-metil-lH'-pirazol-4-carboxílico (60.03 g, 476.0 mmol, Aldrich Chemical Co. No. de Cat. 682063) en P0C13 (1.23 litros) y sulfolano (246 mL) y se agitaron durante 18 horas a 83°C. Los volátiles se evaporaron a presión reducida y el residuo se destiló azeotrópicamente además con tolueno dos veces más a presión reducida. El aceite resultante se vertió lentamente en hielo-agua en agitación y la solución acuosa se extrajo con diclorometano para quitar todo sulfolano residual. La solución acuosa se trató con bicarbonato de sodio saturado (3.2 litros) hasta que se alcanzó un pH de 7. El aceite resultante se decantó y se disolvió en una cantidad pequeña de metanol y la capa acuosa restante se extrajo con diclorometano (4 veces) . Los extractos orgánicos combinados y la solución de metanol del aceite se combinaron y se lavaron con bicarbonato de sodio saturado, agua y salmuera, respectivamente. Los orgánicos se secaron en MgS04 anhidro, se filtraron y se evaporaron a presión reducida para proporcionar el producto bruto como un aceite pardo espeso. El producto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice, con elución con un gradiente de diclorometano a 5% de metanol en diclorometano . Las fracciones que contenían producto se evaporaron a presión reducida para proporcionar un sólido amarillo que se purificó adicionalmente mediante cristalización a partir de diclorometano (300 mL) y éter metil- t-butílico (300 mL) para proporcionar 6- ( (S) -1- (6- (1-metil-lH-pirazol-4-il) - [1,2,4] triazolo [3 , 4 -b] [1,3,4] tiadiazol-3-il)etil)quinolina (compuesto 1, 62.8 g, 38% de rendimiento) como un sólido amarillo claro: ESMS (M+l) , 362.38; XH NMR (300.0 MHz, D S0-d6) d 8.87 (1H, dd, J=1.7, 4.3 Hz) ; 8.54 (1H, s); 8.36 (1H, br. d, J=8.3Hz); 8.03 (1H, s) ; 8.00 (1H, d, J=8.3 Hz) ; 7.92 (1H, d, J=l .7 Hz) ; 7.80 (1H, dd, J=1.9, 8.8 Hz) ; 7.52 (1H, dd, J=4.2, 8.2 Hz); 4.90 (1H, q, J=7.2 Hz) ; 3.90 (3H, s); 1.86 (3H, d, J=7.2Hz). El análisis de HPLC quiral mostró 99+% de ee (ChiralPak® AD-H, 70% de etanol/hexanos .

Ejemplo 2. Cristalización del compuesto 1 (base libre) Al compuesto 1 (906 mg) se agregaron 40 mL de acetonitrilo y 10 mL de metanol. Se disolvió el sólido en un baño de agua caliente a aproximadamente 90 °C. La solución se filtró y se permitió que se evaporara lentamente a temperatura ambiente durante 4 horas . Los cristales se precipitaron gradualmente. El licor madre se decantó y el sólido se secó a temperatura ambiente en 4 mm Hg de vacío durante la noche.

Se cargaron aproximadamente 10 mg del compuesto 1, base libre cristalina (FB) en un frasco con una barra de agitación magnética. Se agregaron aproximadamente 150 µ? de solvente a cada frasco. Si el compuesto 1 se había disuelto completamente, se agregaron más sólidos al frasco y se continuó la agitación de la suspensión resultante a temperatura ambiente. La solución de 4 días se filtró usando filtros de centrifugación y se diluyó en metanol para obtener datos de solubilidad mediante análisis de HPLC. Los resultados del estudio de solubilidad se muestran en la Tabla 1. Los datos de la difracción de rayos X de los cristales en la suspensión se tomaron luego de 4 y 14 días. Todas las formas que se encontraban aún cristalinas mostraron un patrón de difracción de rayos X que incluía los siguientes picos (escala theta) : entre 6.2 y 6.4 (por ejemplo, aproximadamente 6.3), entre 9.1 y 9.3 (por ejemplo, aproximadamente 9.2), entre 11.4 y 11.6 (por ejemplo, aproximadamente 11.5), entre 13.2 y 13.4 (por ejemplo, aproximadamente 13.3), entre 13.7 y 13.9 (por ejemplo, aproximadamente 13.8), entre 14.1 y 14.3 (por ejemplo, aproximadamente 14.2), entre 14.7 y 14.9 (por ejemplo, aproximadamente 14.8), entre 16.1 y 16.3 (por ejemplo, aproximadamente. 16.2), entre 18.1 y 18.3 (por ejemplo, aproximadamente 18.2), entre 18.6 y 18.8 (por ejemplo, aproximadamente 18.7) y entre 19.7 y 19.9 (por ejemplo, aproximadamente 19.8).

Tabla 1. Solubilidad del compuesto 1 en diferentes solventes según se midió a través de HPLC Para su estudio se eligió un cristal incoloro dimensiones en forma de aguja larga y fina de 0.5x0.05x0 mm3. La difracción de cristal único se realizó en un difractómetro APEX II CCD de Bruker a temperatura ambiente con radiación Cu Ka. Se tomaron fotos de la oscilación alrededor del eje ? en ángulos 4 f. Los datos se indexaron, se integraron y se llevaron a escala con el programa APEX. Las estructuras se resolvieron y se refinaron con el paquete SHELX-TL. Los datos cristalográficos se muestran en la Tabla 2.

Tabla 2. Datos de cristal para el compuesto 1 Temperatura 298 K Longitud de onda 1.54178 Á Sistema de cristal ortorrómbico Grupo espacial ?2?2?2? Dimensiones celulares unitarias a = 4.4317 (2) Á a= 90°. b = 13, 4692 (6)Á ß= 90° . c = 28.9709(13)Á ? = 90°.

Volumen 1729.32(13) Á3 Z 4 Densidad (calculada) 1.388 Mg/m3 Coeficiente de absorción 1.806 mm"1 F(000) 752 Tamaño de cristal 0.50 x 0.05 x 0.05 mm3 Intervalo theta para la recolección de datos 3.05 a 52.98°.

Intervalos de índice -4<=h<=4 , -I3<=k<=13 , -29<=1<=29 Reflexiones recogidas 9497 Reflexiones independientes 2007 [R(int) = 0.0210] Completo a t eta = 52.98° 99.8 % Transmisión máx. y mín. 0.9151 y 0.4654 Mínimos cuadrados de matriz completa en F2 Datos / limitaciones / parámetros 2007 / 0 / 237 Bondad del ajuste de F2 0.512 índices R finales [I>2sigma (I) ] Rl = 0.0217, wR2 = 0.0629 índices R (todos los datos) Rl = 0.0237, wR2 = 0.0666 Parámetro de estructura absoluta 0.035(17) Mayor orificio y pico diferentes 0.094 y -0.126 e.Á"3 Ejemplo 3. Formación de sal del compuesto 1 La base libre del compuesto 1 se disolvió en etanol para hacer una solución de 0.02 mmol/mL de concentración. Se agregaron soluciones de base y ácido a frascos separados que contenían la solución y luego se evaporaron los solventes a temperatura ambiente al vacío (presión de 4mmHg) . Se agregaron individualmente 2 -propanol (IPA) y etanol a frascos separados para volver a disolver los sólidos y se intentó la cristalización del sólido en cada frasco mediante evaporación lenta a temperatura ambiente. Los sólidos resultantes se caracterizaron mediante estudios de difracción de rayos X. Los resultados se muestran en la Tabla 3.

Tabla 3 Ensayo biológico del compuesto 1 Ejemplo 4. Ensayo de inhibición de cinasa c-Met El compuesto 1 se analizó para determinar su capacidad de inhibir cinasa c-Met usando un ensayo radiométrico estándar. Brevemente, en este ensayo de cinasa se cuestionó la transferencia del 33P- fosfato terminal en 33P-ATP a sustrato poliE4Y. El ensayo se realizó en placas de 96 pocilios hasta un volumen final de 100 L por pocilio que contenía 0.5 nM de c-Met, 100 mM de HEPES (pH de 7.5), 10 mM de MgCl2, 25 mM de NaCl, 0.01% de BSA, 1 mM de DTT, 0.5 mg/mL de poliE4Y y 35 µ? de ATP. Por consiguiente, los compuestos de la invención se disolvieron en DMSO para realizar soluciones madre iniciales de 10 mM. Luego se realizaron diluciones en serie de DMSO para obtener las soluciones finales del ensayo. Se agregó una alícuota de 1.5 pL de DMSO o inhibidor en DMSO a cada pocilio, seguido de la adición de 33P-ATP y, por último, la adición de c-Met y poliE4Y (obtenido de Sigma) . Luego de 20 rain, la reacción se inactivo con 50 pL de 30% de ácido tricloroacético (TCA) que contenía 4 mM de ATP. La mezcla de reacción se transfirió a las placas de filtro GF de 0.66 mm (Corning) y se lavó tres veces con 5% de TCA. Luego de la adición de 50 pL de centelleo de alta eficacia Ultímate Gold™ (Packard Bioscience) , las muestras se contaron en un contador de luminiscencia y centelleo de microplaca NXT TopCount de Packard (Packard BioScience) . Los valores de Ki se calcularon usando macros Solver de Microsoft Excel para ajustar los datos al modelo cinético para la inhibición de unión fuerte competitiva. El KA del compuesto 1 es 0.024 +/- 0.008 µ?.

Ejemplo 5. Inhibición de la actividad de c-Met en células de carcinoma gástrico Snu5 El compuesto 1 también se analizó para determinar su capacidad de inhibir la señal inducida por luciferasa en una línea celular Snu5 creada. Snu5 [obtenido de la American Type Culture Collection /Colección estadounidense de cultivos tipo/ (Número de catálogo CRL-5973)] es un carcinoma gástrico humano conocido por sobreexpresar c-Met, que es constitutivamente activa. La línea celular se transdujo con el retrovirus, pCLPCX, que contenía una construcción genética que consistía en elementos de respuesta del promotor 6xAPl y un gen de luciferasa con una secuencia PEST C-terminal (señal proteolítica de ornitina descarboxilasa de ratón, que reduce la semivida de la luciferasa) . La c-Met constitutivamente activa activa las vías celulares (principalmente la MAP cinasa) , lo que da como resultado una transcripción de luciferasa- PEST inducida por AP-1 y traducción al producto final, cuya actividad se puede cuantificar como una lectura quimioluminiscente tras la adición de luciferina (Steady-Glo de Promega) . La luminiscencia residual tiene una fuerte correlación con la inhibición de c-Met. Se obtuvo una línea celular estable seleccionando la nueva línea celular (Snu5-APl-Luc-Pest) con puromicina. Las células se cultivaron en medios completos [medios de Iscove (Invitrogen) con 10% de suero bovino fetal (FBS, Hyclone) y penicilina/genta icina (Invitrogen)]. Los compuestos de la invención se disolvieron en DMSO para realizar soluciones madre iniciales de 10 mM. Luego se realizaron diluciones en serie en DMSO y se transfirieron a medio completo para hacer una solución lOx. Las células Snu5-APl-Luc-Pest se contaron y se diluyeron hasta una solución de 200,000 células/mL. Las células (90 L) se agregaron a cada pocilio en una placa negra con fondo transparente de 96 pocilios (Costar) . Luego se agregaron 10 L de la solución del compuesto lOx a las células en triplicado. Las placas se incubaron en un incubador a 37°C con 5% de C02. Luego de 6 horas, se agregaron 50 µL del reactivo Steady-Glo (Promega) a cada pocilio y se colocaron en un agitador de placa durante 5 minutos para asegurarse de que las células se habían lisado por completo. La placa se leyó en un contador de luminiscencia y centelleo de líquido Microbeta 1450 (Perkin-Elmer) . La IC50 se calculó usando un ajuste de parámetro 4 usando el programa para graficar Prism (GraphPad) . La IC50 del compuesto 1 es 0.023 +/- 0.012 µ?.

Ejemplo 6. Ensayo de inhibición de hE G El canal de potasio cardíaco, hERG, es responsable de una corriente rectificadora tardía rápida (Ixr) en el ventrículo humano. La inhibición de JKr es la causa más común de la prolongación del potencial de acción cardíaca mediante fármacos no cardíacos. El aumento en la duración del potencial de acción provoca una prolongación del intervalo de QT que se ha asociado con una arritmia ventricular peligrosa, torsade de pointes . La unión a hERG se determinó usando un estudio comparativo de bloqueo de hERG para evaluar el efecto de un compuesto de prueba dado en canales de hERG clonados expresados en células de mamífero. Véase, por ejemplo,. Brown y Rampe, Pharmaceutical News 7, 15-20, 2000; Rampe et al., FEBS Lett., 417, 28-32, 1997; Weirich y Antoni, Basic Res. Cardiol. 93(Supl. 1), 125-132, 1998 y Yap y Caín, Clin. Exp. Allergy, 29(Supl 3), 174-181, 1999.

Los compuestos de prueba se suministraron en solución salina fisiológica tamponada con HEPES (HB-PS) + 0.3% de sulfóxido de dimetilo (DMSO) . Cada compuesto de prueba se aplicó a células de riñon embriónico humano (HEK293 obtenidas de ChanTest Corp., Cleveland OH) que expresan hERG (n = 3, donde n = cantidad de células) en concentraciones suficientes para determinar una IC50. Las células se expusieron al compuesto de prueba durante el tiempo necesario para alcanzar un bloqueo en estado estacionario, pero no más de 10 minutos. Se aplicó el control positivo (90 nM de cisaprida) a dos células (n = 2). Las células expuestas a hERG luego se transfirieron a la cámara de registro y se superfusionó con solución de HB-PS. La solución de pipeta para registros de células incluía aspartato de potasio (130 mM) , MgCl2 (5 mM) , EGTA (5 mM) , ATP (4 mM) y HEPES (10 mM) a un pH ajustado a 7.2 con KOH. Los bloqueos de estado estacionario y de inicio de la corriente de hERG debido al compuesto de prueba se midieron usando un patrón de pulso con amplitudes fijas (despolarización: +20 mV durante 2 segundos, repolarización: -50 mV durante 2 segundos) , se repitió en intervalos de 10 segundos-, a partir de un potencial basal de -80 mV. La corriente de cola pico se midió durante la etapa de 2 segundos hasta -50 mV. Se mantuvo un estado estacionario durante al menos 30 segundos antes de aplicar el compuesto de prueba o el compuesto de control positivo. Las corrientes de cola pico se midieron hasta alcanzar un nuevo estado estacionario.

Se obtuvieron y analizaron datos usando la serie de programas pCLAMP (Versión 8.2) (MDS-AT, Sunnyvale, CA) . En breve, el estado estacionario obtenido antes y después de la aplicación del compuesto se utilizó para calcular el porcentaje de corriente inhibido en cada concentración. Los datos de concentración-respuesta se ajustaron a la siguiente ecuación: % de inhibición = { 1-1/ [1+ ( [Conc] /ICS0) Nl } *100 , donde [Conc] es la concentración de cada solución de compuesto analizada, IC50 es la concentración del compuesto de prueba que produce una inhibición media máxima, N es el coeficiente de Hill y % de inhibición es el porcentaje de corriente de potasio hERG inhibido en cada concentración de compuesto. Se resolvieron los ajustes de mínimos cuadrados no lineares con el complemento Solver para Microsoft Excel 2000 (Microsoft, Redmond WA) .

Se descubrió que el compuesto 1 inhibió hERG con una IC50 de 110 µ?, mientras que el compuesto 2 (se muestra a continuación) inhibió hERG con una IC50 de 13 µ?. (compuesto 2) Ejemplo 7. Ensayos de inhibición del citocromo P450 Se evaluó la estabilidad del compuesto 1 en isoformas del citocromo P450 (CYP) humano expresado en células de insecto con Baculovirus en ADNc CYP1A2 , CYP2B6 , CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6, CYP2E1 y CYP3A4. Por consiguiente, las isoformas del citocromo P450 recombinante humano en concentraciones finales de 50 pmoles de CYP/mL se incubaron en tampón de fosfato (pH 7.4) con 2.0 mM de NADPH y el compuesto 1 en concentraciones de compuesto de 1 µ? y 10 µ?. El muestreo se realizó a los 0 y 120 minutos y la cantidad de compuesto que aún quedaba se evaluó mediante análisis de LC/MS/MS. Los resultados se proporcionan en la Tabla 4 y se expresan como el porcentaje de compuesto restante luego de 120 minutos del período de incubación en comparación con la cantidad de compuesto presente a los 0 minutos (n = 3 en dos estudios separados), junto con la desviación estándar (SDEV) de cada estudio. Como se indica en los resultados tabulados, el compuesto 1 es metabolizado tanto por la isoforma CYP2C19 como por la CYP3A4, mientras que el compuesto 2 es metabolizado sustancialmente solo por la isoforma CYP3A4. La estimulación de la isoforma CYP2C19 con una concentración mayor (10 µ?) del compuesto 1 no alteró sus capacidades metabólicas al metabolizar el compuesto 1, lo que sugiere una capacidad relevante de metabolizar el compuesto 1 in vivo. Los resultados in vitro indican que el metabolismo parcial del compuesto 1 por parte de más de una forma del citocromo P450 durante 120 minutos disminuiría el potencial de interacción f rmaco- fármaco con fármacos co-administrados in vivo.

Tabla 4. Metabolismo de los compuestos 1 y 2 en isoenzimas CYP recombinantes humanas. isoforma CYP(% Compuesto 1 Compuesto 1 Compuesto 2 Compuesto 2 restante (1 µ?) (10 µ?) (1 µ?) (10 µ?) +/- SDEV) 113 +/- 7.2% 96.7 +/- 4.3% 91.4 +/" 9.1% 97 +/- 1.3% CYP1A2 79 +/- 9.6% 86 +/- 7.8% 87 +/- 6.4% 89 +/- 4.7% 91.7 +/" 10.4% 101 +/- 1.4% 83.1 +/" 3.8% 99.9 +/" 4.2% CYP2B6 93 +/- 5.4% 99 +/- 4.8% 91 +/- 1.5% 93 +/" 13.5% 128 +/- 22.5% 101 +/- 4.4% 74.3 +/" 23.3% 91.6 +/- 6.2% CYP2C9 96 +/- 2.2% 101 +/- 8.5% 95 +/- 2.8% 118 +/- 3.1% 34.9 +/" 12.3% 40.3 +/" 2.2% 83.7 +/" 1.1% 86.1 +/- 5.7% CYP2C19 12 +/- 2.1% 34 +/- 3.3% 152 +/- 23.2% 100 +/- 14.6% 102 +/- 3.6% 94.7 +/- 4.4% 96.4 +/- 8.7% 101 +/- 3.4% CYP2D6 125 +/- 44.2% 130 +/- 11% 247 +/- 122% 142 +/- 60% 109 +/- 19% 109 +/- 5.6% 95.6 +/- 7.0% 99.9 +/- 4.6% CYP2E1 164 +/" 54.8% 111 +/- 1.1% 210 +/- 93.4% 129 +/- 10.9% isoforma CYP(% Compuesto 1 Compuesto 1 Compuesto 2 Compuesto 2 restante (1 µ?) (10 µ?) (1 µ?) (10 µ?) +/- SDEV) 13.6 +/" 2.6% 31.8 +/- 2.1% 14.3 +/- 0.7% 55.5 +/- 2.6% CYP3A4 48 +/- 17.4% 56 +/- 14% 60 +/- 29% 114 +/- 1.7% Todas las publicaciones y las patentes citadas en la presente memoria descriptiva se incorporan a la presente como si cada una de tales publicaciones o patentes individuales se indicaran específica e individualmente como incorporadas a la presente a modo de referencia. Si bien la invención que antecede se describió con determinado detalle a modo de ilustración y ejemplo a los efectos de claridad de comprensión, será fácilmente comprendido por los expertos en la técnica a la luz de las enseñanzas de la presente invención que se pueden realizar determinados cambios y modificaciones a la misma sin desviarse del espíritu o el alcance de las reivindicaciones adjuntas.

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (9)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones:

1. Un compuesto caracterizado porque tiene la fórmula: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque es cristalino.

3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado por uno o más de los siguientes picos en un patrón de difracción de rayos X: 6.3, 9.2, 11.5, 13.3, 13.8, 14.2, 14.8, 16.2, 18.2, 18.7 y 19.8.

4. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende el compuesto de conformidad con las reivindicaciones 1 o 2 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un portador, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable.

5. La composición de conformidad con la reivindicación 4, caracterizada porque comprende adicionalmente un agente quimioterapéutico o antiproliferativo, un agente antiinflamatorio, un agente para el tratamiento de aterosclerosis o un agente para el tratamiento de fibrosis pulmonar.

6. Un método para tratar o aminorar la gravedad de un trastorno proliferativo en un paciente caracterizado porque comprende administrar el compuesto de conformidad con las reivindicaciones 1 o 2 o una composición farmacéutica que comprende el compuesto, en una cantidad suficiente para tratar o aminorar la gravedad del trastorno proliferativo en el paciente.

7. El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque el trastorno es cáncer metastásico.

8. El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque el trastorno es un glioblastoma, un carcinoma gástrico o un cáncer seleccionado de cáncer de colon, de mama, de próstata, de cerebro, de hígado, de páncreas o de pulmón.

9. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el trastorno es carcinoma hepatocelular.