MX2011002896A - Combinaciones sinergicas de un inhibidor macrociclico del virus de la hepatitis c y un nucleosido. - Google Patents

Abstract

La presente invención se relaciona con una combinación sinérgica del compuesto de la fórmula I: (Ver fórmula (I)) o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, y el compuesto de la fórmula II: (Ver fórmula (II)) o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.

Description

COMBINACIONES SINÉRGICAS DE UN INHIBIDOR MACROCÍCLICO DEL VIRUS DE LA HEPATITIS C Y UN NUCLEÓSIDO CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con las combinaciones sinérgicas de un inhibidor macrocíclico de la proteasa NS3/4A del VHC y un nucleósido inhibidor de la polimerasa NS5B del VHC.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El virus de la Hepatitis C (VHC), un miembro de la familia de virus Flaviviridae en el gen hepacivirus, es la principal causa de enfermedad hepática crónica en el mundo. Aunque el desarrollo del diagnóstico y del cribado de sangre ha reducido considerablemente la tasa de nuevas infecciones, el VHC continúa siendo una carga para la salud mundial debido a su naturaleza crónica y su potencial para provocar daño hepático de largo plazo. Existen seis genotipos principales del VHC (1-6) y múltiples subtipos (representados por letras). El genotipol b predomina en Europa, mientras que el genotipo 1a predomina en América del Norte. El genotipo es clínicamente importante para determinar la respuesta potencial al tratamiento y la duración requerida de tal tratamiento.

El VHC se transmite principalmente por contacto con la sangre.

Posteriormente a la infección aguda inicial, la mayoría de los individuos infectados desarrolla hepatitis crónica porque el VHC se replica preferentemente en los hepatocitos pero no es directamente citopático. A lo largo de los años, una cantidad considerable de personas infectadas padece fibrosis, cirrosis y carcinoma hepatocelular, siendo la infección crónica del VHC la principal causa de transplantes de hígado. Lo expuesto y la cantidad de pacientes afectados, han hecho del VHC un foco de considerable investigación médica.

La replicación del genoma del VHC está mediada por una cantidad de enzimas, entre las cuales se encuentra la serina proteasa NS3/4A del VHC y su cofactor asociado, NS4A. Otra enzima esencial en este proceso es la polimerasa NS5B. Tanto la serina proteasa NS3/4A como la polimerasa NS5B se consideran esenciales para la replicación viral y los inhibidores de estas enzimas se consideran fármacos candidatos para el tratamiento del VHC.

El estándar actual de atención consiste en un tratamiento combinado de interferón-a (IFN-a) pegilado semanal y ribavirina dos veces al día, y es capaz de curar ~80% de los pacientes infectados por el genotipo 2 o 3, pero solamente 40 a 50% de pacientes del genotipo 1. Además de la baja tasa de éxito en pacientes del genotipo 1 , este tratamiento está asociado con un rango de efectos colaterales que incluyen síntomas similares a los de la gripe, anemia y depresión. En consecuencia, existe la necesidad de fármacos más seguros y potentes que, en particular eliminen las desventajas de tratamiento actual del VHC tales como efectos colaterales, eficacia limitada, escasa tolerancia y emergencia de resistencia, como así también fallas en su cumplimiento.

La alta tasa de error de la polimerasa del VHC conjuntamente con un alto recambio viral da lugar a una población heterogénea de genomas del VHC dentro de cada paciente y, según la frecuencia y adecuación de tales variantes, constituye un importante obstáculo para la erradicación del virus. De este modo, es probable que los tratamientos futuros consistan en una combinación de varios fármacos antivirales, si es necesario con IFN-a y ribavirina, para mejorar el efecto antiviral y también para elevar el umbral del desarrollo de resistencia, y finalmente mejorar las tasas de respuesta virológica sostenida (RVS).

Se han descripto varios agentes que inhiben la serina proteasa NS3/4A del VHC. El documento WO 05/073195 divulga inhibidores lineales y macrocíclicos de serina proteasa NS3 con un resto central de prolina sustituida y el documento WO 05/073216 con un resto central ciclopentilo. Entre éstos, los derivados macrocíclicos resultan atractivos debido a su potencia e interesante perfil farmacocinético. El documento WO 2007/014926 divulga una serie de inhibidores macrocíclicos de serina proteasa NS3. Entre éstos, el compuesto (1 R,4R,6S,15R,17R)-c/s-/\/-[17-[2-(4-isopropiltiazol-2-il)-7-metoxi-8-metilquinolin-4-iloxi]-13-metil-2, 14-dioxo-3, 13-diazatriciclo[13.3.0.0 ,6]octadec-7-en-4-carbonil](ciclopropil)sulfonamida, que también se puede denominar (1 R,4R,6S,7Z,15R,17R)-A/-[17-[2-(4- isopropiltiazol-2-il)-7-metoxi-8-metilquinolin^-iloxi]-13-metil-2,14-dioxo-3, 13-diazatriciclo[13.3.0.04 f3]octadec-7-en-4-carbonil](ciclopropil)sulfonamida, es decir, el compuesto de la fórmula I con la fórmula química descripta a continuación, es de particular interés. Este compuesto muestra pronunciada actividad contra el VHC, tiene un atractivo perfil farmacocinético, y es bien tolerado. Este compuesto se puede preparar mediante el proceso de síntesis descripto en el Ejemplo 5 del documento WO 2007/014926.

La ARN polimerasa dependiente de ARN NS5B es esencial para la replicación del genoma del ARN. Se conocen tanto inhibidores nucleósidos como no nucleósidos de esta enzima. Por ejemplo, WO 2008/043704 describe una cantidad de inhibidores nucleósidos, uno de los cuales es 4-amino-1-((2R,3S,4S,5 R)-5-azido-4-h id roxi-5-h id roximeti l-3-meti l-tetra h id rof u ran-2-il)-1 H-pirimidin-2-ona, es decir, el compuesto de la fórmula II con la estructura química ilustrada a continuación. Este compuesto se puede preparar mediante el procedimiento de síntesis descripto en el Ejemplo 1 del documento WO 2008/043704.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con una combinación sinérgica que comprende el compuesto de la fórmula I: o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, y el compuesto de la fórmula II: o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, Se ha descubierto que ambos ingredientes activos actúan sinérgicamente de modo tal que se necesita una cantidad menor de los ingredientes activos para ejercer un efecto inhibitorio eficaz contra el VHC.

Los compuestos de la fórmula I o de la fórmula II se pueden usar en forma de sales farmacéuticamente aceptables o en forma libre (es decir no salina). Las formas salinas se pueden obtener mediante el tratamiento de la forma libre con un ácido o base. Son de interés las sales de adición de ácido y base farmacéuticamente aceptables, que se considera que comprenden las formas de sales de adición de ácido y base no tóxicas terapéuticamente activas que los compuestos de la fórmula I y II son capaces de formar. Las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la fórmula I y II se pueden obtener convenientemente mediante el tratamiento de la forma libre con el ácido adecuado. Los ácidos apropiados comprenden, por ejemplo, ácidos inorgánicos como haluros hidrogenados, tal como ácido hidrobrómico, o en particular ácido hidroclorídrico; o ácido sulfúrico, nítrico, fosfórico o similares; o ácidos orgánicos tales como, por ejemplo, ácido acético, propanoico, hidroacético, láctico, pirúvico, oxálico, malónico, succínico, maleico, fumárico, málico, (es decir ácido hidroxibutanodioico), tartárico, cítrico, metanosulfónico, etanosulfónico, bencenosulfónico, p-toluenosulfónico, ciclámico, salicílico, p-aminosalicílico, pamoico y similares. Los compuestos de la fórmula I también pueden convertirse en formas de sales metálicas o por adición de aminas farmacéuticamente aceptables mediante tratamiento con las bases orgánicas o inorgánicas adecuadas. Las formas de sales de bases adecuadas comprenden, por ejemplo, las sales de amonio, las sales de metales alcalinos y alcalinotérreos, por ejemplo sales de litio, sodio o potasio; o las sales de calcio o magnesio; sales con bases orgánicas, por ejemplo las sales de benzatina, A/-metil-D-glucamina, hidrabamina y sales con aminoácidos tales como, por ejemplo, arginina, lisina y similares. Se considera que el término sal por adición también comprende cualquier solvato que, los compuestos de la fórmula I o fórmula II, como así también sus sales, puedan formar. Tales solvatos son, por ejemplo, hidratos, alcoholatos, por ejemplo etanolatos y similares. Son de interés las formas libres (es decir no sales) del compuesto de la fórmula II, o las formas de sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la fórmula I.

La relación EC50 entre ambos ingredientes activos I y II en las combinaciones de la invención pueden variar. En una realización dicha relación está en un rango de 10:1 y 1 :10, o de 5:1 y 1 :5, o de 3:1 y 1 :3, o de 2:1 y 1 :2. En una realización particular dicha relación es aproximadamente 1 :1. Como se usa en la presente, el término "relación EC50" se refiere a la relación de la concentración EC50 del compuesto de fórmula I con el valor ECso del compuesto de fórmula II, habiéndose obtenido dicho valor ECso en el ensayo de replicón del VHC. Este último en particular es el método de ensayo que se describe a continuación. En este ensayo, sobre la base del genotipo 1b del VHC, se halló que el valor EC50 del compuesto I era 8 n y el valor EC50 del compuesto II 5 µ?.

Sobre la base de los valores EC50 mencionados, se pueden determinar niveles efectivos de plasma sanguíneo al multiplicar los valores EC50 por un factor que expresa la unión a proteínas plasmáticas y un factor que representa un margen de seguridad. El último factor se puede establecer en aproximadamente 10. La unión a proteínas se puede determinar mediante la medición de la cantidad unida a proteínas sanguíneas tales como seroalbúmina humana, lipoproteína, glicoproteína, globulinas a, ß, e ?. Los niveles efectivos de plasma sanguíneo, que también se pueden denominar dosis virológicas activas, representan aquellas dosis necesarias para proporcionar actividad antiviral eficaz, es decir, dosis que efectivamente reducen la carga viral. La carga viral se reduce efectivamente cuando se reduce a aproximadamente uno o dos órdenes de magnitud, preferentemente debajo del límite de detección del virus. A partir de las dosis virológicas activas, la dosis (o cantidad de fármaco) a ser administrada se puede calcular con el volumen de distribución (VD), que también se conoce como volumen de distribución aparente. Este es un término farmacológico usado para cuantificar la distribución de una medicación entre el plasma y el resto del cuerpo después de una dosificación oral o parenteral. Se define como el volumen en que se necesitaría distribuir la cantidad del fármaco para producir la concentración en sangre observada. El VD se puede determinar en modelos animales en los cuales se administran cantidades predeterminadas de la sustancia activa y se miden los niveles de plasma sanguíneo.

Las cantidades del compuesto de la fórmula I en las combinaciones de la invención que se administran diariamente pueden variar entre aproximadamente 1 mg y aproximadamente 2,500 mg, aproximadamente 5 mg y aproximadamente 1000 mg, o entre aproximadamente 10 mg y aproximadamente 500 mg, o entre aproximadamente 25 mg y aproximadamente 250 mg, o entre aproximadamente 25 mg y aproximadamente 200 mg. Son ejemplos de cantidades diarias del compuesto de la fórmula I 25 mg, 50 mg, 75 mg, 100 g mg, 125 mg, 150 mg, 200 mg, y 400 mg. Las cantidades del compuesto de la fórmula II que se administran diariamente pueden variar entre aproximadamente 250 mg y aproximadamente 20,000 mg, o entre aproximadamente 500 mg y aproximadamente 16,000 mg, o entre aproximadamente 1 ,000 mg y aproximadamente 12,000 mg, o entre aproximadamente 3,000 mg y aproximadamente 12,000 mg, o entre aproximadamente 3,000 mg y aproximadamente 6,000 mg. Son ejemplos de cantidades diarias del compuesto de la fórmula II 3,000 mg, 4,500 mg, 6,000 mg, 12,000 mg. Todas las cantidades mencionadas en este párrafo y en los siguientes se refieren a la forma libre (es decir, la forma no salina). Los valores mencionados representan equivalentes de formas libres, es decir cantidades como si la forma libre fuera administrada. Si se administran sales es necesario calcular las cantidades en función de la relación del peso molecular entre la sal y la forma libre.

Combinaciones ilustrativas del compuesto de la fórmula I y del compuesto de la fórmula II en mg por día/mg por día incluyen, por ejemplo, 25/3,000; 25/6,000; 25/12,000; 50/3,000; 50/6,000; 50/12,000; 100/3,000; 100/6,000; 100/12,000; 200/3,000; 200/6,000; 200/12,000.

Las dosis diarias mencionadas se calculan para un peso corporal promedio de aproximadamente 70 kg y deberían recalcularse en el caso de aplicaciones pediátricas, o cuando se utilizan con pacientes con un peso corporal sustancialmente desviado.

Las dosis se pueden presentar como una, dos, tres o cuatro o más sub-dosis administradas a intervalos apropiados a lo largo del día. La dosis utilizada corresponde preferentemente a la cantidad diaria del compuesto de la fórmula I, o del compuesto de la fórmula II, antes mencionada, o a una sub-dosis de ésta, tal como 1/2, 1/3 o 1/4 de ésta. Una forma de dosificación puede contener el compuesto de la fórmula I, o de la fórmula II, o ambos, en una cantidad igual a los rangos o cantidades mencionadas en los párrafos anteriores, por ejemplo una forma de dosis puede contener 25 mg, 50 mg, 100 mg, 200 mg del compuesto I, o 250 mg, 500 mg, 1 ,000 mg, 1 ,500 mg, o 2,000 mg del compuesto II, ya sea en formulaciones separadas o en una formulación combinada. En una realización, el compuesto de la fórmula I se administra una vez al día (q.d.), en particular como una dosis por día, y el compuesto de la fórmula II se administra una o dos veces por día (q.d. o b.i.d.), en particular como una o como dos dosis por día. En el caso en que ambos compuestos de la fórmula I y de la fórmula II tengan que administrarse una vez al día, esto se puede lograr administrando dos dosis separadas, una con el compuesto I, la otra con el compuesto II, o administrando una dosis combinada que contenga ambos compuestos I y II. En el caso en que el compuesto de la fórmula I tenga que administrarse una vez al día, y el compuesto de la fórmula II tenga que administrarse dos veces al día, esto se puede lograr administrando tres dosis separadas, una con el compuesto I, dos con el compuesto II o administrando una dosis combinada que contenga ambos compuestos I y II, y, si se desea, una dosis adicional con el compuesto II.

Las combinaciones de la invención se pueden administrar una, dos, tres, cuatro, o, si se desea, múltiples veces al día. En una realización, la combinación se administra una vez al día. En otra realización, la combinación se administra dos veces al día o tres veces al día. La administración de la dosis puede ser mediante formas separadas de dosificación, es decir, formas de dosificación que contienen solamente el compuesto I o solamente el compuesto II; o mediante formas de dosificación combinadas que contengan ambos ingredientes activos I y II. Además, como se mencionó anteriormente, se puede mezclar el uso de una dosis combinada de una, dos o más formas de dosificación que contienen el compuesto I o, preferentemente, que contienen el compuesto II. Las formas de dosificación que se pueden administrar se describen a continuación, prefiriéndose las formas de dosificación oral, en particular comprimidos y cápsulas.

Ambos ingredientes activos se pueden formular en composiciones farmacéuticas tanto en forma separada como en una composición farmacéutica combinada. En este último caso, se proporciona una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de la fórmula I, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, y el compuesto de la fórmula II, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, siendo lo antedicho como se especifica en la presente, y un portador farmacéuticamente aceptado. Una cantidad terapéuticamente eficaz es, en este contexto, una cantidad suficiente para actuar de manera profiláctica contra la infección del VHC, o para estabilizarla o reducirla, en un sujetos infectados o en riesgo de ser infectados. Cantidades terapéuticamente efectivas pueden corresponder, en particular, a las cantidades mencionadas anteriormente para administración sobre una base diaria o a subdosis de éstas en la facilidad de múltiples administraciones diarias.

En un aspecto adicional, esta invención se relaciona con un proceso para preparar una composición farmacéutica como se especifica en la presente, que comprende mezclar exhaustivamente un portador farmacéuticamente aceptado con una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de la fórmula I, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, y una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de la fórmula II, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.

Las combinaciones proporcionadas en la presente también se pueden formular como una preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencial en el tratamiento del VHC. En tal caso, el compuesto de la fórmula I se formula en una composición farmacéutica que contiene otros excipientes farmacéuticamente aceptados, y el compuesto de la fórmula II se formula separadamente en una composición farmacéutica que contiene otros excipientes farmacéuticamente aceptados. De forma conveniente, estas dos composiciones farmacéuticas separadas pueden ser parte de un conjunto para uso simultáneo, separado o secuencial.

Los componentes individuales de la combinación de la presente invención se pueden administrar en forma simultánea o separada en momentos diferentes durante el curso del tratamiento o en forma concurrente en formas de combinación únicas o divididas.

Por lo tanto, los compuestos de la fórmula I y II, individualmente o combinados, se pueden formular en varias composiciones farmacéuticas adecuadas para los propósitos de la administración. En éstos, una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto particular, o de ambos compuestos, se combina con un portador farmacéuticamente aceptable, tal portador puede tomar una amplia variedad de formas según la forma de preparación deseada para la administración. Las composiciones farmacéuticas se pueden preparar como medicamentos para administración oral, parenteral (inclusive subcutánea, intramuscular e intravenosa), rectal, transdermal, bucal o nasal. Las composiciones adecuadas para administración oral incluyen polvos, granulados, agregados, comprimidos, pildoras comprimidas o recubiertas, grageas, sobres, cápsulas duras o de gelatina, jarabes y suspensiones. Las composiciones adecuadas para administración parenteral incluyen soluciones o emulsiones acuosas o no acuosas, mientras que las composiciones adecuadas para administración rectal incluyen supositorios con un vehículo hidrofílico o hidrófobo. Para la administración tópica se pueden utilizar sistemas de entrega transdermal y para administración nasal se pueden usar sistemas de entrega en aerosol.

Por ejemplo, en la preparación de composiciones para administración oral, se puede emplear cualquiera de los medios usuales farmacéuticos, tales como, por ejemplo, agua, glicoles, aceites, alcoholes y similares en el caso de composiciones líquidas orales tales como suspensiones, jarabes, elixires, emulsiones y soluciones; o portadores sólidos tales como almidones, azúcares, caolín, lubricantes, ligantes, agentes desintegrantes y similares en el caso de composiciones sólidas. Para las composiciones parenterales, el portador usualmente comprenderá agua estéril, al menos en gran parte, aunque se pueden agregar otros ingredientes, tales como solubilizantes, emulsionantes y otros auxiliares. Se pueden preparar soluciones inyectables en las cuales el portador comprende solución salina, solución glucosada o una mezcla de ambas. También se pueden preparar suspensiones inyectables en cuyo caso se pueden emplear agentes de suspensión y similares. También se incluyen preparaciones en forma sólida concebidas para convertirse, inmediatamente después de usarlas, en preparaciones en forma líquida tales como polvos para reconstitución. En las composiciones adecuadas para administración percutánea, el portador opcionalmente comprende un agente mejorador de la penetración de la piel y/o un agente humectante, opcionalmente combinado con aditivos compatibles con la piel, en menor proporción. Los compuestos de las fórmulas I o II, o sus combinaciones, también se pueden administrar por vía de inhalación oral o insuflación mediante formulaciones adecuadas para este tipo de administración tales como una solución, una suspensión, o un polvo seco. Las composiciones farmacéuticas adecuadas para administración en forma de aerosoles o rocíos son, por ejemplo, suspensiones del compuesto de la fórmula I o II, o ambos, en un portador líquido farmacéuticamente aceptado, tal como etanol o agua, o una mezcla de éstos. Si se requiere, la formulación adicionalmente también puede contener otros auxiliares farmacéuticos tales como surfactantes, emulsionantes y estabilizantes, como así también un propelente. Tal preparación usualmente contiene el compuesto activo en una concentración de aproximadamente 0.1 a 50%, en particular entre aproximadamente 0.3 y 3% en peso.

Las composiciones farmacéuticas pueden contener el ingrediente activo de la fórmula I, o de la fórmula II, o ambos, en una concentración de aproximadamente 0.1 % a aproximadamente 50%, o aproximadamente 1% a aproximadamente 30%, o aproximadamente 3% a aproximadamente 20%, o aproximadamente 5% a aproximadamente 20%, siendo todos los porcentajes por peso. En las composiciones que contienen ambos compuestos, el de la fórmula I y el de la fórmula II, el compuesto de la fórmula I está presente en una concentración de aproximadamente 0.1% a aproximadamente 50%, o a aproximadamente 1 % a aproximadamente 30%, o aproximadamente 3% a aproximadamente 20%, o aproximadamente 5% a aproximadamente 20%; y el compuesto de la fórmula II está presente en una concentración de aproximadamente 3% a aproximadamente 50%, o aproximadamente 5% a aproximadamente 50%, o aproximadamente 10% a aproximadamente 50%, o aproximadamente 10% a aproximadamente 50%, o aproximadamente 10% a aproximadamente 30%.

Las composiciones farmacéuticas se pueden presentar convenientemente en forma de dosis unitaria para una fácil administración y uniformidad de dosificación. Los ejemplos incluyen comprimidos (inclusive comprimidos ranurados o recubiertos), cápsulas, pildoras, supositorios, paquetes de polvo, obleas, soluciones inyectables o soluciones o similares, y sus múltiplos segregados. Son de interés las formas de dosis sólidas para administración oral tales como comprimidos o cápsulas.

Las formas de dosificación sólidas en dosis unitarias se pueden envasar en cualquier envase conocido, prefiriéndose el blíster, en particular para los comprimidos y cápsulas. Cuando el compuesto de la fórmula I y de la fórmula II se formulan por separado, se pueden envasar en blísters separados, pero un blíster puede asimismo comprender formas de dosis unitaria del compuesto I como del compuesto II, por ejemplo, una fila con unidades del compuesto I y otra con el compuesto II. Otras posibilidades también son factibles, por ejemplo para la administración bid del compuesto II, una fila de comprimidos con una combinación de dosificación unitaria de ambos compuestos I y II, y una fila con el compuesto de la fórmula II. El paciente entonces podría tomar, por ejemplo, la dosis combinada por la mañana y la dosis del compuesto II por la noche.

Las combinaciones de esta invención se pueden usar para tratar infecciones del VHC como así también enfermedades asociadas con el VHC. Las enfermedades asociadas con el VHC incluyen fibrosis hepática progresiva, inflamación y necrosis que conducen a cirrosis, enfermedad hepática terminal y CHC (carcinoma hepatocelular).

La actividad viral in vitro contra el VHC del compuesto de la fórmula I o de la fórmula II se puede ensayar en un sistema de replicón del VHC basado en Lohmann et al (1999) Science 285:1 10-113, con las modificaciones posteriores descriptas por Krieger eí al (2001) Journal of Virology 75: 4614-4624 (incorporadas a la presente como referencia), que se ilustra con mayor detalle en la sección ejemplos. Este modelo, si bien no es un modelo completo de infección por VHC, es ampliamente aceptado como el modelo más sólido y eficaz de replicación autónoma del ARN del VHC actualmente disponible. También se puede ensayar la actividad antiviral in vitro contra el VHC mediante ensayos enzimáticos.

La combinación del compuesto de la fórmula I y el compuesto de la fórmula II, como se especifica en la presente, es útil en el tratamiento de animales de sangre caliente, en particular seres humanos, infectados con el VHC, y para la profilaxis de infecciones del VHC.

Por lo tanto, la presente invención, asimismo se relaciona con un método para el tratamiento de un animal de sangre caliente, en particular un ser humano, infectado con VHC, o que está en riesgo de infectarse con VHC, dicho método que comprende la administración de una cantidad eficaz de anti-VHC de una combinación del compuesto de la fórmula I y del compuesto de la fórmula II, como se especifica en la presente. La presente invención proporciona también un método para el tratamiento de afecciones relacionadas con el VHC o para prevenir afecciones relacionadas con el VHC en un mamífero que comprende administrar una cantidad anti-viral eficaz de una combinación del compuesto de la fórmula I y del compuesto de la fórmula II, como se especifica en la presente.

Las combinaciones de la presente invención se pueden usar como medicamentos. La presente invención también se relaciona con el uso de una combinación, como se describe en la presente, para la elaboración de un medicamento para el tratamiento o la prevención de la infección del VHC o afecciones relacionadas con el VHC.

En un aspecto adicional, la invención se relaciona con un producto que contiene el compuesto de la fórmula I y el compuesto de la fórmula II, y opcionalmente otro compuesto anti-VHC, como una preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencial en el tratamiento de infecciones del VHC.

A su vez, las preparaciones de la presente invención se pueden combinar con uno o varios compuestos anti-VHC. Son de interés las combinaciones con IFN-a (pegilado o no) y/o ribavirina.

Los otros agentes que se pueden co-administrar con las combinaciones de la presente invención se pueden administrar como formulaciones separadas o se pueden co-formular con uno o ambos de los ingredientes activos de la fórmula I o de la fórmula II.

Las combinaciones de la presente invención, inclusive aquellas con otros agentes anti-VHC, también se pueden combinar con un agente que tiene un efecto positivo sobre el metabolismo y/o farmacocinética de un fármaco que mejora la biodisponibilidad, por ejemplo, ritonavir o una de sus sales farmacéuticamente aceptables. El ritonavir puede usarse como una formulación separada, o se puede co-formular con uno o varios de los agentes activos de las combinaciones de la presente invención. La relación peso/peso del compuesto de la fórmula I o del compuesto de la fórmula II con ritonavir puede estar en el rango de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 1 :10, o desde aproximadamente 6:1 a aproximadamente 1 :6, o desde aproximadamente 1 :1 a aproximadamente 10:1, o desde aproximadamente 1:1 a aproximadamente 6:1 , o desde aproximadamente 1 :1 a aproximadamente 4:1, o desde aproximadamente 1 :1 a aproximadamente 3:1 , o desde aproximadamente 1 :1 a aproximadamente 2:1.

En aún otro aspecto de la invención, se proporcionan combinaciones del compuesto de la fórmula (I) y ésteres pro-fármacos del compuesto de la fórmula II. Estos comprenden compuestos de la fórmula II descriptos en WO 2008/043704, en particular los ésteres 4' y 5' hidroxi, que se pueden representar mediante la fórmula lia: o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, donde R1 es hidrógeno y R2 es CO-alquiloCi.ie; o R2 es hidrógeno y R1 es CO-alquiloCi-i8; o ambos R1 y R2 son CO-alquiloCi-i8; donde cada alquiloCi-i8 es independientemente un grupo hidrocaburo saturado ramificado o no ramificado que tiene desde uno hasta 18 átomos de carbono; y donde cada alquiloC-Me en particular es alquiloCi-6 y más particularmente es alquiloC3-4. Ejemplos de tales profármacos son los compuestos de la fórmula lia donde R1 es hidrógeno y R2 es isopropilo; o donde R2 es hidrógeno y R1 es isopropil-CO-; o donde ambos R1 y R2 son isopropil-CO-. El término isopropil-CO- se refiere a un ácido del éster isobutírico, que también se puede denominar isobutirilo. Las sales farmacéuticamente aceptables de los profármacos de la fórmula lia son tal como se describieron anteriormente para las sales de los compuestos de la fórmula II.

En este aspecto, el compuesto de la fórmula (II) se reemplaza por una cantidad equivalente de un éster profármaco en las combinaciones, formulaciones, usos o métodos descriptos anteriormente.

Como se usa en la presente, el término "aproximadamente" tiene su significado convencional. En realizaciones particulares, cuando está en relación con un valor numérico, éste se puede interpretar con el significado del valor numérico ± 10%, o ± 5%, o ± 2%, o ± 1%, o ± 0.5%, o ± 0.1%. En otras realizaciones, significa el valor preciso, es decir al omitir la palabra "aproximadamente".

EJEMPLOS Los siguientes ejemplos tienen por objeto ilustrar la presente invención y no limitar la invención a éstos.

EJEMPLO 1 Actividad de los compuestos de la fórmula I ? II Ensayo de replicón Se examinó la actividad de los compuestos de la fórmula I en la inhibición del ARN del VHC en un ensayo celular. El ensayo demostró que los compuestos de la fórmula I exhibieron actividad contra replicones funcionales del VHC en un cultivo celular. El ensayo celular se basó en un constructo de expresión bicistrónica, como describió Lohmann et al (1999) Science vol. 285 pp. 110-1 13 con las modificaciones descriptas por Krieger et al (2001 ) Journal of Virology 75: 4614-4624 en una estrategia de cribado de objetivos múltiples. En esencia, el método fue el siguiente: El ensayo se basó en la línea celular transfectada estable Huh-7 luc/neo (de aquí en más Huh-Luc). Esta línea celular alberga un ARN que codifica un constructo de expresión bicistrónica que comprende las regiones NS3-NS5B del tipo salvaje del VHC tipo 1 b traducido de un Sitio Interno de Entrada al Ribosoma (SIER) del virus de la encefalomiocarditis (VEMC), precedido por una porción mensajera (luciferasa de luciérnaga), y una porción de marcador seleccionable (neoR, fosfotransferasa de neomicina). El constructo es bordeado por 5' y 3' RNT (regiones no traducidas) del VHC tipo 1 b. El cultivo continuo de las células de replicón en presencia de G418 (neoR) depende de la replicación del ARN del VHC. Las células transfectadas estables de replicón que expresan el ARN del VHC, que se replican en forma autónoma y en altos niveles, que codifican, entre otras> luciferasa, se utilizan para cribar los compuestos antivirales.

Las células con replicón se plaquearon en placas de 384 pocilios en presencia de los compuestos de prueba y control que se agregaron en diversas concentraciones. Después de incubación durante tres días, se midió la replicación del VHC mediante el ensayo de actividad de luciferasa (utilizando sustratos y reactivos de luciferasa convencionales, y un lector de microplaca Perkin Elmer ViewLux® ultraHTS). Las células con replicón en los cultivos de control tienen alta expresión de luciferasa en ausencia de cualquier inhibidor. La actividad inhibitoria del compuesto se controló sobre células Huh-Luc, permitiendo una curva de dosis-respuesta para cada compuesto de ensayo. Luego, se calcularon los valores EC50, cuyo valor representa la cantidad de compuesto requerida para disminuir 50% el nivel de actividad de luciferasa detectado, o más específicamente, la capacidad del ARN del replicón del VHC ligado genéticamente para replicarse.

EJEMPLO 2 Determinación del efecto cuando se combinan los compuestos de las fórmulas I y II.

La presencia o ausencia de sinergia se determinó usando el modelo de Loewe. El modelo de aditividad Loewe (Loewe S, Muischnek H. Effect of combinations: mathematical basis of problem. Arch. Exp. Pathol.

Pharmakol. 1926; 114:313-326), a menudo denominado "adición de dosis", está basado en el concepto de que la interacción que se produce es cero cuando la respuesta producida por la dosis A más la respuesta producida por la dosis B es igual a la respuesta producida por la dosis A + B. Esto siempre es así para un único fármaco ya que un único fármaco no interactúa con sí mismo. Diferentes drogas que exhiben adición de dosis simplemente se comportan como diluciones entre sí, y su efecto esperado es la suma de sus dosis y potencias relativas de acuerdo con la ecuación: Da/DA + Db/DB = 1 donde DA y DB son dosis de los fármacos A y B que producen un nivel específico de respuesta cuando se administran individualmente, y Da y Db son dosis de los fármacos que producen el mismo nivel de respuesta cuando se administran en combinación. Los desvíos de la aditividad Loewe se cuantifican por lo general usando el índice de combinación: IC = Da/DA + Db/DB Se utilizó CalcuSyn (Biosoft, Ferguson, Mo.) para analizar la información de inhibición del replicón del VHC para el modelo de aditividad de Loewe. Valores de IC de < 0.9, 0.9-1.1 , y > 1.1 indican sinergia y efecto de adición, o antagonismo, respectivamente.

Se calculó el índice de combinación (IC) para una dosis eficaz de 50%, 75%, o 90%. Se realizaron dos ensayos separados con combinaciones del compuesto de fórmula I y el compuesto de fórmula II. Un ensayo se realizó con cinco placas de ensayo y el otro con cuatro placas de ensayo. Se calcularon los valores de la mediana de ED50, ED75 y ED90 (valores IC) como así también los desvíos estándar (valores DE), estos valores se detallan en el cuadro a continuación. Estos valores indican una relación sinérgica.

IC = índice de combinación DE = desvío estándar EJEMPLO 3 Liberación de compuestos originales a partir de profármacos Ciertos profármacos dentro del alcance de la fórmula lia requieren transformación in vivo para liberar nucleósido, por ejemplo en la pared intestinal o el hígado, antes de la fosforilación intracelular en las especies activas. Estos profármacos, por lo tanto, no son sensibles a ensayos de sinergia directa en sistemas celulares tales como los sistemas de replicón empleados en el Ejemplo 1. Sin embargo, es posible medir la liberación del compuesto original de la fórmula II a continuación de la administración de un profármaco de la fórmula lia a una especie animal adecuada, y por lo tanto inferir que la administración del profármaco junto con el inhibidor de proteasa de la fórmula I exhibirá sinergia in vivo. La rata se considera un modelo útil para la evaluación de parámetros farmacocinéticos de análogos nucleósidos.

Los compuestos de la fórmula lia donde R1 y R2 son isobutirilo (Compuesto 3a), o donde R es R2 isobutirilo y R2 es H (Compuesto 3b) se formularon como 6.7 mM en 28% (vehículo hidroxipropil- -ciclodextrina). Una única dosis de 20 µ?t???/kg se administró mediante cebado por vía oral (3 ml/kg) a ratas macho Sprague Dawley duplicadas, que no habían sido alimentadas durante 16 horas. Se tomaron muestras de sangre a intervalos de tiempo de 15, 30, 60, 120, 240, 360 y 480 minutos. El compuesto original 4'-azido-2'-deoxi-2'-metilarabinoc¡tosina se cuantificó en suero mediante MS/MS como sigue: 0 µ? de plasma se precipitó con 150 µ? de acetronitrilo helado que contenía el warfarin estándar interno. Las muestras se centrifugaron a 3.700 rpm durante 20 minutos. 100 µ? del sobrenadante se diluyeron primero con 100 µ? de agua, y los 75 µ? de la muestra diluida se diluyeron a su vez con 75 µ? de agua. Columna: Synergy POLAR-RPTM, 4pm, 5.0*4.6mm. Fase móvil: gradiente acetonitrilo en 10mM de acetato de amonio.

En este ensayo, el compuesto 3a dio lugar a Cmax original de 4.56 µ? y un AUC0-t de 15.3 pM.h, mientras que el compuesto 3b dio lugar a Cmax original de 4.65 pM.h y un AUC0-t de 12.7 µ?.?. Suponiendo que el peso de una rata estándar es de aproximadamente 250 g, estas cifras para la concentración de plasma de las especies originales después de la administración oral del profármaco de la fórmula lia representa un valor muy por encima del IC50 del original en el sistema de replicón, proporcionando por lo tanto la confirmación de que los profármacos, cuando se aplican in vivo, comparten las propiedades sinérgicas mostradas por el nucleósido original.

Claims (12)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Una combinación sinérgica que comprende el compuesto de la fórmula I: o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, y el compuesto de la fórmula II: o una de sus sales farmacéuticamente aceptables; o un éster profármaco de éste, que puede representarse mediante la fórmula lia: donde R1 es hidrógeno y R2 es CO-alquiloC-Me; o R2 es hidrógeno y R1 es CO-alquiloCi-18; o ambos R1 y R2 son CO-alquiloCi-i8; o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.

2. - La combinación de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque el compuesto de la fórmula I se combina con un compuesto de la fórmula 11.

3. - La combinación de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque el compuesto de la fórmula I se combina con un compuesto de la fórmula Ha.

4. - La combinación de conformidad con la reivindicación 3, caracterizada además porque ambos R1 y R2 son isopropilo-CO-

5. - La combinación de conformidad con las reivindicaciones 1-4, caracterizada además porque la relación de EC50 entre ambos compuestos I y II está en el rango de 3:1 a 1 :3.

6. - La combinación de conformidad con las reivindicaciones 1-4, caracterizada además porque la relación de EC50 entre ambos compuestos I y II es aproximadamente 1 :1.

7. - La combinación de conformidad con las reivindicaciones 1-4, caracterizada además porque contiene entre aproximadamente 25 mg y aproximadamente 200 mg de equivalentes de forma libre del compuesto de la fórmula I y entre aproximadamente 3,000 mg y aproximadamente 12,000 mg de equivalentes de forma libre del compuesto de la fórmula II.

8. - La combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizada además porque se combina con un agente adicional seleccionado entre ribarivina e interferón.

9. - Una composición farmacéutica que comprende una combinación sinérgica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, y un portador farmacéuticamente aceptado.

10.- Un producto que comprende el compuesto de la fórmula I y el compuesto de la fórmula II o de la fórmula lia, todo como se define en la reivindicación 1 , como una preparación combinada para utilizarse simultáneamente, separadamente o secuencialmente en el tratamiento del VHC.

11.- El uso de una combinación de cualquiera de las reivindicaciones 1-8 para preparar un medicamento para tratar una infección del VHC o de las enfermedades asociadas con él.

12.- El uso de un compuesto de la fórmula I y el compuesto de la fórmula II o de la fórmula III, todo como se define en la reivindicación 1 , para preparar una preparación combinada para tratar VHC; en donde la preparación combinada se adapta para ser administrable simultáneamente, separadamente o secuencialmente.