MX2010014003A - Mediadores de peptido mejorados de eflujo de colesterol. - Google Patents

Abstract

La presente invención provee una familia de polipéptidos que no son de origen natural que tienen actividad de eflujo de colesterol que es paralela a aquella de las apolipoproteínas de longitud completa (por ejemplo, apo Al y apo E) y que tienen alta selectividad por ABAC1 que es paralela a aquella de las apolipoproteínas de longitud completa. La invención también provee composiciones que comprenden tales polipéptidos, métodos para identificar, seleccionar y sintetizar tales polipéptidos y métodos para el tratamiento, prevención o diagnosis de enfermedades y alteraciones asociadas con dislipidemía, hipercolesterolemia e inflamación.

Description

EDIADORES DE PÉPTIDO MEJORADOS DE EFLUJO DE COLE REFERENCIAS CRUZADAS PARA SOLICITUDES RELACIONA La presente solicitud reclama el beneficio de la sional estadounidense no. 61/073,708, registrada de 2008, dicha solicitud incorporándose encia .

La materia sujeto en esta solicitud también se olicitud PCT número PCT/US07 /87477 , registrada mbre de 2007, cuya divulgación se incorpora encia, en su totalidad para cualquier fin.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La enfermedad cardiovascular (CVD) es ipal de morbidez y mortandad en los Estados ca y en todo el mundo. La acumulación de col sminución de concentraciones de LDL en el plasm inas y otras medicaciones que disminuyen el en aproximadamente un tercio de los eventos d que dos tercios de los eventos permanecen ( ío, "Randomized trial of cholesterol lowering nts with coronary heart disease: the Se statin Survival Study (4S) , Lancet, 344(8934) ); and "Influence of pravastatin and plasma cal events in the West of Scotland Coronary (WOSCOPS), Circulation, 197(15): 1440-5 (1998). ituye una necesidad médica grande sin satisfacer.

Los niveles elevados de colesterol de ? a están asociados con el riesgo reducido de ater on et al., "High Density Lipoprotein As A r Against Coronary Heart Disease", Am. J. Med. , )). Estudios epidemiológicos recientes han sido idad en la mediación de la ruta de tran terol- inversa anti-aterogénica (RCT) . La RCT in porte de colesterol de macrófagos periféricos excreción de esterol en heces (Lewis et ah, "Ne The Regulation of HDL¦ Metabolísm and Reverse C port", Circ. Res., 96:1221-32 (2005)). La etapa a . velocidad de RC Involucra estimulación del terol de macrófagos, mediada mediante apolip ales tales como Apo A-I y Apo E. Este proceso de I terol genera HDL naciente y- requiere que el tra ásete enlace de ATP Al . (ABCA1 ) o de otra sclerosis se desarrolle (Calpe-Berdiel et al. nce In Vivo of Impaired Macrophage-Specifi sterol Transport in ATP -Binding Cassette Trans ient Mice", Biochim. Biophys. Acta,, 1738(1-3): 6 es la molécula defectuosa en la enfermedad de és en el desarrollo de estrategias para manipula terapéuticos. La prueba explorativa de es pto han mostrado que inyecciones con variantes ngitud completa, por ejemplo, proApoA-I, Apo A- A-I 2 tipo silvestre en complejos de f mentan el RCT (Eriksson et al, Stimulation id Excretion After Infusión of R olipoprotein A-I. Potential Reverse Cholesterol umans", Circulation, 100 ( 6.) : 594-8 (1999)), y r sclerosis coronaria (Nissen et al, "Effect of R I Milano on Coronary Atherosclerosis in Pati Coronary Syndromes: A Randomized Controlled Tri 7):2292-300 (2003); and Tardif et al, "Effect osclerosis-Safety and Efficacy (ERASE) Inves 297:1675-82. Epub March 26 (2007)). Aunque prom ina de ApoA-I de longitud completa tien te- para mediar el eflujo de colesterol para est ir placas ateroscleróticas, esto es, para el t enfermedades cardiovasculares. Sorprendentem nte invención satisface esta necesidad asi c idades al proveer tales composiciones y métodos.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La. presente invención se refiere a pép n efectos sobre el .metabolismo de lipidos. Los l mponente estructural celular importante y provee e para señalización celular fundamental en l yen prostaglandinas, especies oxidantes rea ares. Por medio de rutas de señalización, lo én · ontribuyen a la orquestación de resp iña, por ejemplo, a estímulos inflamatorios. Tal pidos están implicados en varios estados de enf aquella de las apolipoproteínas de longitud com ío, Apo AI y po E) ; y que tiene alta select que es paralela a aquella de las apolipopro tud completa. Más en particular, la presente e una familia de polipéptidos que se presentan atural que actúan como ligandos funcionales dad para ABCA1 y que estimulan el eflu o de ar con aproximadamente la capacidad . y po poproteinas naturales en una base por molé éptidos de la presente invención estimulan el terol de células espumosas de macrófagos even un incremento sostenido de secreción d , y reducen la severidad de aterosclerosis e colesterolémicos .

Como tal, los polipéptidos de la presente es, - los polipéptidos que tienen actividad ario agudo para reducir el contenido de lipidos estabilizar placas vulnerables. Además, los po la presente invención pueden ser usados nativamente , en combinación con otros cológicos conocidos para el tratamiento de dis colesterolemia e · inflamación para ele ntraciones de HDL en el plasma y/o para pr porte de colesterol inverso.

Los péptidos¦ de presente invención comprend teristicas que definen" conjuntamente las p cocinéticas y farmacodinámicas de los péptid teristicas incluyen una estructura de hél tación anfipática de los aminoácidos a lo largo tructura de hélice a. Los péptidos comprenden do úos ácidos separados a lo largo del eje hidro ctura de hélice es aplicada además por la fo fóbicas, por ejemplo, el ángulo de cuña hidrofó del eje de las posiciones de hélice a del pépt ana celular alrededor del transportador d tiendo mediante esto- la interacción funcional, dos interactúan con las membranas celulares de lógica en que confieren- un eflujo de lipido esp con. mínimos efectos.de membrana celular no espe En un aspecto adicional, la invención está - en el descubrimiento de que el área superficia na sola hélice puede ser expandida (esto es, fóbica puede ser incrementada) en un péptido peq ácidos de longitud al utilizar residuos hidrofób L, F, I, W, en posiciones apropiadas en la h ío, posiciones 10, 12, etc., para proveer un e individual pequeño que tiene la secuencia de ncía central de 20 aminoácidos y tiene En un aspecto, la presente invención éptido aislado que comprende (y en ciertas mo ste de o alternativamente consiste esencialmen ncia de am X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X1 15X16X17 18X19X20 1' ^n donde : y Xi5 son aminoácidos seleccionados independient que consiste de E y D; X y Xi8 son ar cionados independientemente del grupo que consi A; X9, X10, Xi3 Xie1 y X20 ' son aminoácidos sel endientemente del grupo que consiste de F, L y minoácido L, A, F o W; X3 , X5 y X19 son a cionados independientemente del grupo que consi i4 es un aminoácido R, A o E; y X2, ef ^8 ácidos seleccionados independientemente del ste de L, V y A; en donde cada letra significa inoácido de una letra convencional. onsiste de F, L, W, I, V y A; X3, X5, y X19 son a cionados independientemente del grupo que consi C; Xi4 es un aminoácido R, A, E o C; y XQ es A, as modalidades de tales péptidos de la invenció io/ ??2, Xi3 ??6 i7 Y X20 son sel endientemente del grupo- que consiste de F, L, as modalidades, X4, Xn y Xi8 son sel endientemente¦ del grupo que consiste de A, D as modalidades, las posiciones X y Xn son A. idades, las posiciones X4 y Xn son sel endientemente del grupo que consiste de D y E. idades, X9 es L, F o W. En algunas modalidade tres de las posiciones X2, ?ß, X12 y X17 son L. idades, X1 es R; y X17 es L- o F. En algunas moda . En algunas modalidades, X2 es L o V. E idades X6, X10, X12, i3r Xi6 X17 y X20 son sel endientemente del grupo que consiste de D y E; X4 y Xn son seleccionados independientemente del ste de D, E y A; X3, X5 y X19 son sel endientemente del grupo que consiste de K y R; X14 es R, E o A; y X6, Xi0, X12, X13, Xie, X17 cionados independientemente del grupo que consi y W. En algunas modalidades, X10/ Xi2* i3r Xi6f X1 cionados independientemente del grupo que consis En algunas modalidades, la invención do que comprende (y en ciertas modalidades, con nativamente consiste esencialmente de) , la sec ácidos : X1LRAX5LX7AX9X10AX12X13RX15X16X17X18RX20 ( SE en donde Xi, X7, X15 y Xis son sel endientemente del grupo que consiste de D y E; 9 es W, L o F; y X3.0, X12, Xi3, ie, X17 cionados independientemente del grupo que consis En algunas modalidades, un péptido de la ende (y en ciertas modalidades, consist nativamente consiste esencialmente /E) (K/R) LEA (W/F/L) (F/L) ( D/E) L { F/L ) RE ( F/L) LER ( F/L) 0) .

En algunas modalidades, los péptidos de la se describen en la presente comprenden ademá X2 i es seleccionado del grupo que consiste de n algunas modalidades, el polipéptido de la ende además X21 y X22 /- en donde X21 es selecci que consiste de C, K, Y y L y X22 es S o C. idades, X21 es K. En algunas modalidades, X22 as modalidades, X21 o X22 es C. Los polipépti ción tienen actividad de eflujo de colesterol y idades, una cisteina está presente en posición 3 SEQ ID NO: 1 o es sustituida en posición 3, 5, ID NO: 27, 28, 39 ó 30. Por ejemplo, e idades, un péptido de la invención, por ejempl , comprende una de las siguientes sustitucione C, R1 —>C y R19—>C. En algunas modalidades, Q ID NO: 27, 28, 29 ó 30 puede también compr tución de cisteina en posición 3, 5, 14 ó 19. idades, . un péptido de la invención puede comp ina en SEQ ID NO: 1 o una cisteina que está sus ión 3, 5, 14 ó 19 de SEQ ID NO: 27, 28, 39 do residuo de cisteina en posición 21 ó 22* En algunas modalidades, un polipéptido de l ción comprende (y en ciertas modalidades, cons nativamente consiste esencialmente de) una sec ácidos seleccionada del grupo que consiste de: DLRDKLDA LDLLRDLLDRL (SEQ ID NO: 11), ELRDRLEA LDLLRELLERL (SEQ ID NO: 12), DLRDRLDAWLDLLRDLLDRL (SEQ ID NO: 13), EVREKLEAWFEAFREFAERFKS (SEQ ID NO: 14), EVREKLEAWFELFREFAERFKS (SEQ ID NO: 15), EVREKLEA FELFREFAERFLS (SEQ ID NO: 16), EVREKLEAWFELFREFLERFKS (SEQ ID NO: 17), EVREKLEAWFELFREFLERFLS (SEQ ID NO: 18), EVREKLEAWFELFREFLERFL (SEQ ID NO: 19), EVREKLEAWFELFREFLERF (SEQ ID NO: 20), EIREKIEAWIEIIREIIERI (SEQ ID NO: 21), ELREKLEAWFELFEEFFARFKS (SEQ ID NO: 22), ELREKLEAWFELFAEFFARFKS (SEQ ID NO: 23), ELREKLEAWFELFAEFFARFK (SEQ ID NO: 24), ELREKLEAWFELFAEFFARF (SEQ ID NO: 25), ELRAKLEAWFEAFAEFFARF (SEQ ID NO: 26), ricia, el polipéptido tiene por lo menos 75% de riblemente 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 98%, 99% o 100% de identidad a un polipéptido se rupo que consiste de SEQ ID NOs : 2-26, 31, 32 y La invención también provee un polipéptido idad de eflujo de colesterol, en donde el poli lipéptido que . tiene una secuencia resumida en el Tabla A, Tabla B o Tabla C.

En algunas modalidades, el péptido de la in ado, por ejemplo, via un residuo de prolina do helicoidal alfa anfipático que tiene act o de colesterol. En algunas modalidades, un pép ción es enlazado a un segundo péptido de la inv do péptido de la invención puede ser el mismo pé do diferente. Asi, la invención también éptido que tiene actividad de eflujo de coles ficativamente la vida media en el suero. Asi idad, los polipéptidos de la presente invención s un grupo protector acoplado al término amino xi. En una modalidad, los polipéptidos compren rimer grupo protector acoplado al término am do grupo protector acoplado al término carboxilo.

Grupos protectores apropiados incluyen, per ados a, acetilo (Ac) , amida, grupos alquilo d s de carbono, Fmoc, t-butoxicarbonilo (Tboc) , enacetilo, grupo. 1-fluorencarboxilico, g encarboxilico, grupo 9-fluorenona-l-ca loxicarbonilo, xantilo (Xan) , tritilo ( tritilo (Mtt) , 4-metoxitritilo ( mt) , 4-met til-bencensulfonilo (Mtr) , mesitilen-2-sulfoni imetoxibenzhidrxlo . (Mbh) , tosilo (Tos) , metil croman-6-sulfonilo (Pmc) , 4-metilbencilo ( rimer grupo protector incluye pero no está li lof. propionilo y un alquilo de 3 a 20 átomos d na modalidad preferida, el primer grupo protec lo. . En otra modalidad preferida, los po enden un segundo grupo protector acoplado a xilo, el segundo grupo protector es una amida.

• Los- polipéptidos de la presente invenci ender todos los aminoácidos "L", todos los amino a mezcla de aminoácidos "L" y "D". Se ha endentemente que los polipéptidos que compr ácidos completamente D estimulan el eflujo de lta capacidad y alta afinidad como los polipépt ácido.

Los polipéptidos de la invención tienen ac o de colesterol. En algunas modalidades, un poli resente invención tiene una actividad estabil Los polipéptidos de la invención inducen ción de pre -l HDL . en el plasma humano e/interacción con partículas alfa-HDL distintas, ía de partículas de HDL en plasma humano y rem culas . alfa-HDL . para desplazar apoA-I, p ante esto partículas pre-ß HDL.

Además, los péptidos de la invención son en el eflujo de colesterol moderada por prep-l roporción molar de péptido: apoA-I (en plasma) d mente a una proporción molar de 1:1; entemente a una proporción de 1:5 ó 1:10 o más b Una modalidad adicional de la invenci siciones farmacéuticas que comprenden por lo éptido descrito en la presente y un portador o able farmacéuticamente. En algunas modalid siciones f rmacéuticas comprenden un agente t lesterol (por ejemplo, enfermedad cardiovascular) Otro aspecto de la presente invenció domiméticos de los polipéptidos revelados en la una modalidad, la presente invención p domimético que tiene una conformación susta mensional como un polipéptido que tiene una se ácidos de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 27, SEQ ID N : 29 o SEQ I NO: 30. En otra modalidad, la ción provee un peptidomimético que tiene una co ncialmente tridimensional como un polipéptido secuencia de aminoácidos seleccionada del ste de SEQ ID NOs : 2-26, 31, 32 y 33. En una mod domimético es un análogo retro-inverso. En otra i ptidomimético es un análogo retro-enantio . En to idad, el peptidomimético es un análogo de tran se revela en la presente, los peptidomiméti do seleccionado del grupo que consiste de SEQ ID nvención provee adicionalraente un péptido a- ático que se- enlaza a .HDL. Además, la invenci onalmente un . péptido de a-hélice anfipático ai ío, que tiene un solo elemento de péptido de a inoácidos y en algunas modalidades, un elemento hélice de 21 aminoácidos o 22 aminoácidos, que e o de colesterol ABCAl-específica .

En un aspecto adicional, la presente invenc composición que comprende un polipéptido de la ción, tal como un polipéptido que tiene una se ácidos seleccionada del grupo que consiste de S o un peptidomimético del mismo acomplejado con odalidad, el lipido es un fosfolipido. En otra i fosfolipidos consisten de l-pamitoil-2-oleoil-sn fatidilcolina ("POPC") . En todavía otra moda ser administrado al sujeto en lugar de administ éptido (o peptidomimético) . La presente invenc ácidos nucleicos. En base en su actividad de terol, los polipéptidos y peptidomiméticos de l ción pueden ser usados- ventajosamente para trata edir una enfermedad o condición asociada con dis colesterolemia e inflamación.

En otro aspecto, la invención provee part o sintéticas, por ejemplo, una partícula de tica,- para la administración de agentes terapéu óstico que comprenden los polipéptidos descri nte, por ejemplo, un polipéptido que tiene una cionada del grupo que consiste de SEQ ID NO: 1 .culas .pueden ser usadas, por ejemplo, para a es terapéuticos para el tratamiento de cáncer miento de una infección. idad de este método, el mamífero es un osticado por tener uno o más síntomas de atero ra modalidad, el mamífero es diagnosticado como aterosclerosis . Preferiblemente, el mamífero es puede también ser un animal no humano. En una iar, .el polipéptido tiene una secuencia de amin D NO: 1, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO : 30 o una secuencia de aminoácidos seleccionada onsiste de SEQ ID NOs: 2-26, 31, 32 y 33.

En otra modalidad relacionada, los métodos s administrar por lo menos un agente t onal. Ejemplos de tales agentes terapéuticos no están limitados a, un anticuerpo, un inh a, un agente antibacteriano, un agente anti oide, un agente antiinflamatorio no esteroidal, olito, una citocina o un receptor de citocina s nmediatamente antes de la administración éptido(s) o peptidomimético (s) . Alternativa e adicional puede ser administrado una seman 24 horas, 8 horas o inmediatamente despu istración, del (los) polipéptido (s) o peptidomimé Todavía otro- aspecto de la presente invenc os para estabilizar una placa vulnerable, ende administrar · a un mamífero por lo menos un p ptidomimético descrito en la presente. Otra vez, abilidad en el arte apreciarán que un ácido nu ica tal polipéptido puede, ser administrado al de administrar el polipéptido. Tales ácidos nuc stos por la presente invención. En una modalid o, el mamífero es un mamífero diagnosticado por s placas vulnerables. En otra modalidad, el m osticado como en riesgo de tener una(s) dislipidemia, hipercolesterolemia o inflamació idad preferida, la presente invención provee miento o prevención de un síntoma de ateroscl comprende un recipiente que contiene un poli domimético de la presente invención. El equ ender además . un portador aceptable · farmacéu s, el kit puede comprender además mater ucciones que enseñan el uso del polip domimético para tratar o prevenir una enf ción asociada con dislipidemia, hipercoleste mación, tal como aterosclerosis . Los polip domiméticos provistos en los kits de la presente n comprender aminoácidos completamente L, a etamente D o una mezcla de aminoácidos L y D.

En relación con los kits anteriores, el m ucciones puede incluir un documento o medios gr étodo comprende: (a) proveer un polipéptido ori una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, EQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29 o SEQ ID NO: 30 o secuencia de aminoácidos seleccionada del ste de SEQ ID NOs:.2-26, .31, 32 y 33; (b) modifi una posición de aminoácido del polipéptido pa variante de polipéptido; (c) seleccionar la va éptido en cuanto a actividad de eflujo de cole idad de estabilización de ABCA; (d) selec nte de polipéptido que tiene por lo menos 8 idad de eflujo de- colesterol del polipéptido or cionar la variante de polipéptido que tiene po e la actividad de estabilización de ABCA del p nal; y (e) sintetizar la variante de p cionada. En algunas modalidades, el polip icado, por ejemplo, mediante sustitución, canc én ser modificada para fabricar peptidomimético ibe en la presente.

En todavía otro aspecto, la presente invenc o de por lo menos un polipéptido o peptidomimét nte invención en la preparación de un medicam r el eflujo de colesterol en un mamífero. En m iares, el polipéptido tiene una secuencia de a cionada del grupo que consiste de SEQ ID NO: nativamente, un peptidomimético del mismo, idad, el peptidomimético tiene una co ncialmente . tridimensional como un polipéptido secuencia" de aminoácidos seleccionada del ste de SEQ ID NO: 1-33.

En un aspecto .adicional, la presente invenc o de por lo menos un polipéptido o peptidomimé nte invención en la preparación de un medicamen ción provee el uso de por lo menos un poli domimético de la presente invención en la prep edicamento para estabilizar una placa vulnera ero. En modalidades ejemplares, el polipéptid ncia de aminoácidos seleccionada del grupo que c ID NO: 1-33 o alternativamente, un peptidomim . En una modalidad, el peptidomimético t rmación sustancialmente tridimensional como un p iene una secuencia de aminoácidos seleccionada onsiste de SEQ ID NO: 1-33.

Otro aspecto de la presente invención prove ico aislado que codifica un polipéptido de la ción, un vector de expresión' que comprende ico y una célula huésped que comprende el sión.

Un polipéptido y peptidomimético de la in ción- puede ser usado . para investigar interac roteina-receptor¦ en animales y modelos de cularmente cuando un polipéptido o peptidomimét nte invención es marcado {por ejemplo, activo, marcador fluorescente, etc. ) .

Un polipéptido o peptidomimético de -la también ser usado para identificar modelos d iados para elucidación de rutas metabólicas de 1 ío, un polipéptido o peptidomimético puede ser ificar modelos de animales e interacciones d có que tienen un efecto .sobre el transporte de so .

Otros elementos, objetos y ventajas de la i odalidades preferidas se harán evidentes a part ra de la descripción detallada, ejemplos, reivin uras que siguen. do por el eje longitudinal de la superficie ado. Los circuios sombreados indican aminoácido úos catiónicos circuios parcialmente sombre os en ambos paneles se refieren a la secuencia p ácidos .

La Figura 3 provee datos que muestran la ac o de colesterol de SEQ ID NO: 2 contra apoA-I d eta. El panel A muestra la dependencia del terol sobre la concentración (libre de lipido SE do (cuadrados); apolipoproteina (apo) A-I libre ulos) ) . El panel B muestra la dependencia del terol sobre la expresión de ABCAl determina as tratadas con y sin cAMP.

La Figura 4 provee datos que muestran que -mer de SEQ ID NO: 2 con residuos KS agregados imula el eflujo de colesterol de ABCAl. . sustituir a leucina sobre la superficie no dos de .eflujo de. colesterol sin afectar advers idad. El panel A muestra el porcentaje de coles ar que apareció en el¦ medio (8 horas) en re miento con los péptidos indicados. El panel B dencia del eflujo de colesterol sobre la concen éptidos.

La Figura 7 provee datos que muestra ulación de eflujo de colesterol de ABCA1 es in el número o de residuos de leucina hidrofóbi do. El panel A muestra el porcentaje de [3H] ar que apareció en el medio en respuesta al t os péptidos indicados. El panel B muestra la d eflujo- de. colesterol sobre la concentració dos .

La Figura 8 provee datos que muestran vencion pueden ser diseñados con números increm úos- de fenilalanina sobre la superficie no ar adversamente la habilidad para estimular el erol de ABCA1. El panel A muestro el porcentaj terol celular que apareció en el medio en res miento con el péptido indicado. El panel B m dencia del eflujo de colesterol sobre la concen dos .

La Figura 10 provee datos que muestran qu eucina y fenilalanina de péptidos de la inve lazados con isoleucina sin afectar advers idad para estimular el eflujo de colesterol de A muestra el porcentaje de [3H] colesterol c ció en el medio en respuesta al tratamiento dos indicados. El panel B muestra la depend o de colesterol sobre la concentración de péptid tico . cargado negativamente puede sustituir mico cargado negativamente sin afectar advers idad para estimular el eflujo de colesterol de A muestra el porcentaje de [3H] colesterol c ció en el medio en respuesta al tratamiento dos indicados. El panel B muestra la depend o de colesterol · sobre la concentración de péptid La Figura 13 provee datos que muestran qu cido aspártico y ácido glutámico son intercamb dos descritos en la presente y que ya sea u n ser usados en combinaciones con otras sustit ácido. Los resultados son expresados como porc idad de control (8 h) obtenido usando el péptido La Figura 14 provee datos que muestran que o fenilalanina (F) pueden sustituir por leuci terol de ABCA1. La Figura 15 muestra el porcenta terol celular que apareció en el medio en res miento con los péptidos indicados.

La Figura 16 provee datos que muestran tuciones de alanina sobre la superficie polar ablemente la habilidad de los péptidos de la ción para estimular el eflujo de colesterol de es A y B muestran el porcentaje de [3H] colester pareció en el medio *en respuesta al tratamient dos indicados* El panel G muestra la depend o de colesterol sobre la concentración de péptid La Figura 17 provee datos que muestran qu sustituir a arginina 14- (R14) y ácido glutámic fectar adversamente la habilidad para estimular olesterol de ABC l. El panel A muestra el por colesterol celular que apareció en el medio en El panel B muestra la actividad de eflujo de s complejos de péptido: POPC.

La Figura 19 provee datos que muestran qu a invención reducen la arterosclerosis estab es deficientes de apolipoproteina E alimentados ental de alto contenido de grasa. El panel A n sión de arterosclerosis en ratones testigo dos con péptido, expresada como porcentaje rta con lesiones. El panel B muestra el con o de placa de seno aórtica, determinada mediante ed 0.

La. Figura 20 provee datos que muestran tuciones de aminoácido para conferir resi ctos de oxidación derivados de mieloperoxidasa A muestra la actividad de fusión de coles do SEQ ID NO: 2 incubado con y sin acroleina. E stn1 l 3 3 4 5 6 7 $ 9 X 1 l 1 1 1 1 0 1 2 3 4 5 6 7 A<9) E E F E V *»* F E F F E F Í? D L K D R L D ? L L D L L A D L L W C A C SS Q W W A E W W X Q I I I G I I C I v V V v v v v v A A A A A A A A D NO:27 es: D NO:28 es: D NO:30 es: /E) (K/R) LEA (W/F/L) (F/L) { D/E) L { F/L) RE ( F/L) LER ( F/L) En algunas modalidades, cualquiera de los pé D Nos. 27-30 comprende además una función 21 que algunas modalidades, tal péptido comprende adem ión 22, en donde la posición 22 es S o C. En alg idades, el péptido comprende además posiciones 2 la posición 21 es K y la posición 22 es S.

RIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Y MODALIDADES P TRODUCCIÓN La presente invención provee, int éptidos que poseen fuerte actividad de terol y actividad de estabilización de éptidos de la presente invención tienen act ácidos no encontrada en la naturaleza, en tanto idades similares en naturaleza a las apolip ales. Por consiguiente, los polipéptidos de la ción son herramientas biológicas importantes par tro e in vivo de. ABCA1, también como agentes te tantes para numerosas aplicaciones terapéuticas.

Modalidades preferidas de tales polipépti as en la secuencia de SEQ ID NOS: 1-33, tam ntes conservadoras de las mismas. En algunas mo polipéptido de la invención tiene la sec ácidos SEQ ID N0:1, SEQ ID NO:27, 28, 29 o 30. idades, un polipéptido de la invención tiene la inoácidos de cualquiera de SEQ ID NO: SEQ ID Nos: La invención provee composiciones que compren éptidos, métodos para identificar, selec tizar tales polipéptidos y métodos de tr enamiento de lípidos.

EFINICIONES El término "ABC" o "cassette de enlace d re a. proteínas de membrana de multidominio, re l eflujo.y afluencia controlada de alócritos (po terol) a través de membranas celulares. Las pr comprenden cuatro dominios, con dos donr membrana (TMD) responsables por el enlace de porte y dos dominios de enlace de nucleóti nsables por acoplar la energía de la hidrólisis os conformacionales en los TMD. Los miembros de yen, por ejemplo ABCA1 y ABCA7 (véase, por ejemp J. Lipid Res./ 42:1007-1017(2001)). ABCA1 es car enis et al., J -Biol Chem. , 279 ( 40 ): 41529-36 ( 20 un papel en el eflujo de colesterol y es enbank Accession Nos.: AJ012376; NM_173076; 5502; NP_005493; 095477. La estructura de p ización genómica del gen de ABCA7 humano es d ardo et - al., Cytogenet Cell Genet . , 92(3-4): 264 secuencias de¦ ABCA7 son resumidas en Genbank NM_033308; NM_019112; NP_150651; NP_061985; AAK ia de proteínas de enlace de ATP relacionadas terizadas (véase, por ejemplo Higgins et al., mbr., 22 ( 4 ): 571-92 ( 1990 ) ; Higgins et al., 111- (1988) ; Higgins et al., Nature, 323( 86); Doolittle et al., Nature, 323 ( 6087) : 51-3 ( t and Holland, Mol Microbial., 4 ( 6 ) : 873-80 ( 19 ínas pertenecientes a esta familia también conti opias de la secuencia de consenso "A" (véase, p r et al., EMBO, 1 ( 8 ): 945-51 ( 1982 ) ) o el "P-bucle ., Trends Biochem Sci., 15(11) :430-4 6155(1990)) ipalmente aminoácidos hidrofóbicos (por ejemplo lie, Pro, Phe, Trp y et) (véase, por ejemplo , Ann. Rev. Biophys'. Biophys. Chem.,- 16:561 (1 ce, 223:249 (1984) ) .

La cara polar de -una alfa hélice anfipática as instancias, mostrar una "alineación de a dos negativamente" o "una alineación de a s", esto es una serie de aminoácidos ivamente o aminoácidos ácidos (por ejemplo Asp ados aproximadamente de manera igual (por ej imadamente cada una, dos o tres vueltas hel o de la -estructura secundaria del polipéptido. es anfipáticas .juegan un papel tanto en intera ina-proteina intra- - e inter-moleculares y pr roteínas (por ejemplo, que incluyen apolipoprot enden alfa hélices anfipáticas que han sido post poproteínas y proteínas amiloides de suero.

Una estructura que es "substancialmente sim guración tridimensional" de un polipéptido de la fiere a una estructura que comprende una secuenc uencia de número, por ejemplo de 24 residuos de dopta una estructura secundaria de alfa hélice iene una orientación anfipática de aminoácidos eje de la estructura de alfa-hélice con una s es, cara, que es polar y consiste principa úos hidrofílicos y la otra superficie es una car omprende principalmente residuos hidrofóbicos . siduos ácidos separados están presentes a lo lar fílico. Un polipéptido o peptidomimético que ctura substancialmente similar a una co mensional de un polipéptido de la invención tam abilidad para estimular el eflujo de colestero perficie celular o transportadores de cásete de (por ejemplo, transportadores de ABC) . La interac poproteínas y ABCA1 produce el eflujo de colest ble de partículas de HDL. Las apolipoproteinas jemplo Apo A-I, Apo A-II, Apo A-IV, Apo C-I, Apo , Apo E y proteínas amiloides de suero, tal com suero.

El término "apolipoproteína AI" o " po re a un polipéptido que comprende 243 aminoá n dominios N- y C- terminales (véase, por ejempl J. Biol. Chem., 278:23227-23232 (2003) y Sait Lipid Res., 43 : 350-380 (2004 )).' La estructura te A-I comprende- un dominio de haz de cuatro h nal y un dominio C-terminal que se enlaza emente (véase, por ejemplo Saito et al., Prog. L 0-380 (2004) y Mishra et al., Biochemistry, 37:1 291-6 (1997)). Los segmentos alfa-he iduales de apo A-I son definidos en parte, ibución relativa de residuos cargados positivame nados como clase A o. Y (véase, por ejemplo Sait ol. Chem., 278:23227-23232 (2003)). Las hélices n aminoácidos cargados positivamente en la int o-agua, mientras que las hélices de clase Y e ácido cargado positivamente hacia la parte me ficie polar además de residuos catiónicos ínte lécula de apo A-I intacta ha sido cristalizada, forma truncada de la proteína (A-I ?1-43) (v ío Ajees et al. PNAS, 103:2126-2131 (2006); B Acta Crystallogr. D. Biol. Crystallogr . , 55 ) and Segrest et al., J. BiolChem. , 274:3 ) ) . Las secuencias de apo A-I son resumidas por os de acceso de Genbank P02647, J0009; AAB64381; ar y .ensamble de .HDL naciente ( Palgunachari iocler. - Thromb. Vasc- Biol., 16:328-338 otopulos et. al., J. Biol. Chem. , 277:39477-394 i et al., J. Biol. Chem., 278:6719-6730 (20 go, hélices individuales de apo A-I con alta ac e de lipido, tales como las hélices 1 y 10, no stimular el eflujo de colesterol dependiente e, por e emploNataraj an et al., J. Biol. Chem., (2004)). En la naturaleza, los est ivamente largos de varias alfa-hélices anfipáti dispuestas en serie y unidas de extremo a ex úos de prolina son requeridos para me acciones de ABCA1 productivas, esto es, terol y ensamble de HDL (véase, por ejemplo Be Biochem. 44:4591-4599 (2005); Natarajan et al., , 279:24044-24052 (2004); Chroni et al. J. Bi a proteina del plasma sanguíneo que juega tante en la homeostasis del lípido en la pare én como en el cerebro (véase, por ejemplo Wahrl ol. Chem., 279:40987-40993 (2004)).Apo E es sin tada por células espumosas de macrofago dentro d oscleróticas en donde funciona para man stasis de colesterol celular (véase, por ejempl Proc. Nati. Acad. Sci USA,¦ 78:7545-7549 (1981) Science, ;219:871-873 (1983); Rosenfeld ioscler. Thromb., 13:1382-1389 (1993); O'Brien e athol., 144:538-548 ¦ -(1994) ) al invertir el fe a espumosa de macrofago. Estos defectos están re la habilidad de apo E para estimular el terol celular vía ABCA1, también como su I porte de colesterol inverso (Hará et al., J. Bi 080-3086 (1991); Smith et al., J. Biol. Chem., o intercelular contribuyendo al desarrollo de al lógicas (véase, por ejemplo Hirsch-Reinshagen e hem., 279:41197-41207 (2004); ahrle et al., 279:40987-40993 (2004) and Koldamavo et al., , 280:43224-43235 (2005) ) La proteina de apo E está compuesta de un e cuatro hélices N-terminal y hélices C-terminal ar a apo-AI (Saito et al., Prog. Lipid Res.,. ); Saito et al., . J. Biol. Chem., 278:23227-232 et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 103 ) ) . El dominio C-terminal de apo E está compues ntos helicoidales largos separados por un r na (véase, por ejemplo Hatters et al., Tren 416, in press, www. sciencedirect . com (2006) ; W Prot. Chem., 45:249-302 (1994); Saito et al., , 278:23227-23232 (2003)). El primer segmento c ivamente largos de múltiples segmentos he ados en serie para producir interacciones de o de colesterol ABCAl-celular (Vedhachalam ) . Secuencias de apo E son resumidas en los n o de Genbank NM_000041; P02649; AAH03557; AAB5 518.

Los términos "eflujo de colesterol" y "ac o de colesterol'' se refieren al eflujo de col uier tipo de célula. Por ejemplo, células esp fago en la pared arterial liberan (esto es, terol a aceptores apropiados, tales como apolip DL. Un compuesto que modera el eflujo de coleste beración, esto es, movimiento de colesterol ha a célula y al medio o compartimiento extrace o de colesterol es frecuentemente acompaña dida por, esto es, sigue el- eflujo de fosfolipi ración con el nivel del eflujo de colesterol e ompuesto .

El término "actividad de estabilización d ilización de ABCAl" se refiere a la me ngación de la vida media de una proteina de ir su degradación. Un compuesto que tiene act ilización de ABCAl recargará significativa dación . de proteínas. Esto producirá un incr es de proteina de . ABCAl celulares de por lo 75%, 100%. o por lo menos 2 veces, 4 veces, 8 o más alto en comparación con protéina de ABCAl sencia del compuesto.

El término actividad anti-inflamatoria" se evención o reducción de inflamación. La inflam ocida por jugar un papel en el desar osclerosis y asociada con dis ado con la activación de macrófago, diferen ción en los tejidos extra-vasculares. Un comp actividad anti-inflamatoria disminuirá una matoria tal como, es medida por una dismi dores inflamatorios (por ejemplo, moléculas de iñas y/o lipidos oxidados) y/o una dismi fagos y/o en . placas y tejidos, en comparaci cia del compuesto.

El término "actividad antioxidante" se ref nción o reducción de oxidación provocada por e no de reactivas (ROS) , en las que se incluyen, p ido de hidrógeno (H2O2) ; ión de hipoclorit al hidroxilo (-0H) y el anión de superóxido o de sustancias que son de origen natural (po inas y moléculas pequeñas) , poseen actividad ant ejemplo, las apolipoproteinas pueden in s que tienen actividad . anti-oxidante, para deses arterial de mediadores inflamatorios y/o ef uración de un equilibrio redox favorable en te esto con actividad antioxidante, tiene xidante que es por lo menos 25%, 50%, 75%, 100% 2 veces, 4 veces, 8 veces, 10 veces o más al idad antioxidante en ausencia del compuesto.

"Estabilización de placa", como se us nte, se. refiere a la estabilización de placas v esgo de ruptura o erosión al remover colesterol en lipido, en las que se incluyen pero no l ión de colesterol de macrófagos de célula esp s contienen sustancias promogénicas, esto es, cuando son expuestas al plasma son muy poder ar plaquetas con el riesgo de trombosis local sos, tales como . factor de tejido. La ruptura de ulante para la síntesis y secreción de yendo metaloproteinasas de matriz (MMP) que tien isis · sobre la capa fibrosa y producción de o, un factor de coagulación potente.

"Transporte de colesterol inverso (RCT)" c presente, se refiere al proceso de remover col as espumosas de macrófago y la placa rica en lí arterial, con transferencia subsecuente a t a al hígado para absorción, procesamiento y excr oles neutros (colesterol) y esteróles ácidos ( xilado/bilis ) en heces. El eflujo de colesterol osas de macrófago es un requerimiento para el be en sí mismo, aunque el cqlesterol puede ser de células adyacentes menos vulnerables. Sin em ho adicional de tal colesterol mediante tran culas semejantes a HDL al hígado para excrec El término "pre-beta formación" en el co invención se refiere a la formación de partíc HDL. Pre-beta HDL son partículas deficientes de enden moléculas de Apo A-I, comúnmente molécula y pequeñas cantidades de fosfolipidos . Las part eta-HDL actúan como aceptores iniciales de terol celular y/o moderan el eflujo de cole .

.Una enfermedad o alteración asoci ipidemia" es cualquier enfermedad o alteración tabolismo de lipido es desregulado, debido a al ipidos del tejido (esto, es, sangre) y concentr roteina y/o mediación aberrante de eflujo de co ilización de ABC-A aberrante. Tales enfermedades jemplo enfermedad del corazón, lesiones arterosc ente cerebrovascular , enfermedad de Alz minoácidos se refiere a compues.tos que tienen ctura química básica como un aminoácido que es al, por ejemplo, un carbono alfa que está enla geno, un grupo carboxilo, un grupo amino y un gr ío homoserina, norleucina, sulfóxido de nina metilsulfonio . - Tales análogos tienen icados (por ejemplo, norleucina) o cadenas fun olipéptido modificadas, que retienen la misma ea básica como un aminoácido que es de origen icos -de aminoácidos se refiere a compuestos qu n una estructura que es diferente de la estructu al de un aminoácido, pero que funcionan de mane aminoácido que es de origen natural. Una descr iada de aminoácidos, también como sustitu ácidos conservadoras es provista a continuac ón intitulada "polipéptidos" . limeros de aminoácido en los cuales uno o más r ácidos es un mimético químico artificial de un es de origen natural correspondiente, tam eros de aminoácidos que son de origen natural y minoácido que no son de origen natural. Los po ácido comprenden aminoácidos completamente L, a etamente D o una mezcla de aminoácidos L y D. no "péptido o péptido mimético" en la presente ente enfatiza que se ' contemplan los pép enden los aminoácidos que son de origen natural, én aminoácidos modificados .

Los términos "aislado", "purific ógicamente puro" se refieren a material ancial o esencialmente libre de compone lmente lo acompañan como es encontrado en al. La pureza y homogeneidad son determinadas nos 99% puro.

Los términos "idéntico" o por ciento de " contexto de dos o más secuencias de polipéptid ácidos nucleicos) se refiere a dos o más sec cuencias que son las mismas o tienen un ificado de¦ residuos de aminoácidos o nucleótido ismos, por ejemplo, 60% de identidad, preferible 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 99% o 100% de identidad sobre una región especif una secuencia de¦ aminoácidos de SEQ ID NO: 2-26, o los primeros 20 aminoácidos de aquellas secu e 21 o 22 aminoácidos de longi-tud, cuando son co ados por-' correspondencia máxima sobre una v ración o región designada, tal como es medida e los siguientes algoritmos de comparación de se nte alineación manual e inspección visual. En etros del programa de algoritmo de secuencia. parámetros de programa predeterminado o nativos pueden ser diseñados. Luego, el alg ración de secuencias calcula el por ciento de i ecuencia para las secuencias de prueba en relaci ncía de referencia, en base a los parámetros del comparación de secuencias de ácidos nucleicos y san los algoritmos BLAST y. BLAST 2.0 y los terminados discutidos posteriormente en la prese Los términos "ácido nucleico" y "polinucle s intercambiablemente en la presente para re iribonucleótidos . o ribonucleótidos y polímero s ya .sea en forma de una sola hebra o de doble no abarca ácidos nucleicos que contienen an ótidos conocidos o residuos o enlaces d mental modificados, que son sintéticos, se pr rvadoramenté" de la misma (por ejemplo, sustit degeneradas) y secuencias complementarias, ta secuencia indicada explícitamente. Especi tuciones de codón degeneradas pueden ser óbt ar secuencias en las cuales la tercera posición codones seleccionado (o todos) es sustituida co ase mezclada y/o residuos de desoxirosina (Batz ic Acid Res. 19:5081 (1991); Ohtsuka et al., , 260:2605-2608 (1985);. Rossolini et al., M s, 8:91-98 (1994)). El término ácido nucleico cambiablemente con gen, cADN, mARN oligonue ucleótido.

Un "vector de expresión" es una construcció ico, generado recombinante o sintéticamente, con lementos de ácido nucleico especificados que cripción de un ácido nucleico particular en como CHO, HeLa y los. semejantes, por ejemplo vadas, explantes y células in vivo.

.Un "marcador" · o "marcador detectable" sición detectable mediante medios espectr uímicos, bioquímicos, inmunoquímicos o quím ío, marcadores útiles incluyen radioisótopos (po 5S, 32P, -31Cr o 125I), tintes fluorescentes, reacti lectrones, enzimas (por ejemplo, fosfatasa idasa de rábano u otros usados comúnmente en u LISA) biotina, digoxigenina o haptenos y prot cuales antisueros - o anticuerpos monoclonal nibles (por ejemplo, el polipéptido codificado 1, 2 ó 3 se puede hacer detectable por ej porar un radiomarcador al polipéptido y u tar anticuerpos específicamente reactivos éptido) . recuencia de, o retarda el inicio de síntom ción médica en un sujeto en relación con un suj e la composición.

Como · se usa en, la presente, "que trata" si disminuir, detener o invertir el avance de la al medad. En una modalidad preferida, "que trata" tir el avance al punto de eliminar la alt medad.

Como se -usa en la presente, "inhibe" signif dad es reducida en comparación con la cantid ntaría en una muestra testigo. En una modalidad e significa que la cantidad es reducida por más ás probablemente por más de 75% o aún 100%.

Un "sujeto", "paciente" o "mamífero" a s los métodos revelados en la presente puede sig n humano o animal no humano. actividad anti-inflamatoria, cualquier combi ¦ actividades y preferiblemente, todas idades.

Los péptidos de la 'invención están basa brimiento sorprendente de una secuencia de a al o del núcleo, SEQ ID NO: 1, que tiene un ef flujo de colesterol.. Los- polipéptidos de la ción son - polipéptidos que no son de origen na ío, SEQ ID NOs. .2-26 y 31-33, que estimulan el terol dependiente de ABCAl con una potencia mol uella de apolipoproteinas {por ejemplo, Apo A- . Interesantemente, los miembros de fa éptidos de la presente invención son de tamañ spondiente a un solo segmento helicoidal que actividad biológica y potencia de apolip tas y los estiramientos largos de segmentos -he ncías de aminoácidos tienen propensiones difer r una estructura -helicoidal. Metionina, na, glutamato y lisina todos tienen propensione e especialmente alta, mientras que prolina, ina y serina tienen propensiones de formación ivamente deficientes.

En una modalidad, la presente invención éptido aislado (y composiciones que compren dos) que comprende una secuencia de aminoácidos .. En algunas modalidades, la presente invención éptido aislado que comprende la siguiente sec ácidos X1X2X3X4X5 6X7 X9X10 11X12X13X1 X15X16X17X18 19 20 27) en donde Xi, X7, X3.5 y Xis son sel endientemente del grupo que consiste de D y E; X X y X son seleccionados independientemente del ste de D, E y A; X3, X5 y ??9 son sel I ende un péptido que tiene la secuencia de ar ida en SEQ ID NO.: 2 o variantes de la misma que de las siguientes sustituciones: una L o F sust posición 9; sustituciones V por L en la sup , por ejemplo, una sustitución V por L en p tuciones L o I para residuos F sobre la supe en posiciones 10, 13, 16 y/o 20; sustituciones úos L en posiciones 2, 6, 12 y/o 17; sustituci r ejemplo en posición 5.; sustituciones de ácido no - o .más residuos de ácido glutámico en SEQ ID tución W por L en posición 12; sustituciones A ficie polar, por ejemplo sustituciones A por R e en posición 4, E en posición 11 y/o E en posic as modalidades, SEQ ID NO: 2 o tales variant ender además los residuos KS agregados al térmi lgunas modalidades, variantes de SEQ ID NO: ción. En efecto, utilizando las enseñanzas provi nte, otros polipéptidos apropiados {por ejemplo, rvadoras) pueden ser producidos sistemática ío - mediante sustituciones conservadoras rvadoras. (por ejemplo, reemplazado D por E) , ex laciones -y los. semejantes. Además, utilizando lo stos en la presente, otros polipéptidos apropia seleccionados sistemáticamente por actividades das .

Asi, en otra modalidad, la presente invenc ntes de polipéptido de los polipéptidos de SEQ 31-33. En una modalidad ejemplar, los polipépti o menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85 90%, por lo menos 95% o por lo menos 98% de ide olipéptidos de un polipéptido seleccionado del ste de SEQ ID NO; 2-26, 31, 32 y 33. Como se apr ión equivalente en las secuencias, comparadas es el mismo aminoácido o base, entonces las molé icas en aquella posición; cuando el sitio equiva do por el mismo residuo o un residuo de aminoáci ejemplo, similar en natural estérica y/o ele ces las moléculas pueden ser denominadas como lar) en aquella posición. La expresión como por ogia, esto es, similitud o identidad se refi ón del número de aminoácidos similares o idé iones compartidas por las secuencias comparad itmos y/o programas de alineación pueden ser ue se incluyen, por ejemplo, FASTA, BLAST y ENT ST están disponibles como parte del paquete de a ncías de GCG (University of Wisconsin, Madison ser usado . con, por ejemplo, ajustes predet Z está disponible por medio del National C épti'dos de SEQ ID NO: 2-26 y 31-33 son sustit úos de aminoácidos conservadores (o semi-conse érmino "sustituciones de aminoácido conserva re a la sustitución (conceptualmente o de otra minoácido de uno de tales grupos con un ente del¦ mismo grupo. Una manera funcional pa edades comunes entre aminoácidos individuales e frecuencias normalizadas de cambios de aminoáci inas correspondientes de organismos homólogos ( ío, ' Schulz, G. E. and R. H. Schirmer, Prin in Structure, Springer-Verlag) . De acuerdo sis, grupos de aminoácidos pueden ser definidos, ácidos dentro de un grupo se intercambian prefe si y por consiguiente, se asemejan entre si po en su impacto sobre la estructura de protei e, por ejemplo, Schulz, G. E. and R. H. un grupo ligeramente polar, que consiste de M ) un grupo de residuo pequeño que consiste de Asn, Gly, Ala, Glu, Gln y Pro; (ix) un grupo ali ste de Val, Leu, lie, Met y Cys; y (x) un grupo ño que consiste de Ser y Thr.

En otra modalidad ejemplar, que otra vez poner o traslapar con las modalidades iormente, "una sustitución de aminoácido conser referir a la sustitución de un- aminoácido por o ar en peso molecular o similar en hidrofobici ular similar" y "hidrofobicidad similar" sig que está dentro de 25%, más preferiblemente 20% ños de 10% del valor respectivo. Datos p ulares de aminoácidos e hidrofobicidades son re bla 1. Una clasificación de hidrofobicidad es r Tabla 2; una sustitución conservadora que Tabla 1 : Parámetros para los L-a/ ¿z-aminoácidos No Modificados Fisiológi os, libres, los pesos de residuos pueden ser ob r un equivalente de agua (18 g/mol) . s hidrofobicidades dadas son los valores "Esca minaciones computacionales log(P) por el Proced entó Pequeño" (véase "Development of Hydr eters to Analyze Proteins Which Bear nslational Modifications" Black, S.D. y Mould, em., 193:72-82 (1991)). -La ecuación usada para e es de log(P) sin procesar a los valores escalado sigue: Parámetros Escalados - (Parámetros Sin /4.484.

Tabla 2 : Tendencia de Parámetros de Hidrofobicidad para los L-a ^-aminoácidos Fisiol Phe > Leu = lie > Tyr = Trp > Val > Met > Pro > Cys > Ala > Gly > Phr > Ser > Lys > Gln > Asn > His > Glu > Asp > Arg idades, una variante conservadora de un polip invención comprenderá una actividad de por lo 86%,- 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 98%, 99% o 100% de aquella encontrada en un poli ID NO: 1, 27, 28, 29. ó 30; o, más partícula ia encontrada en un polipéptido seleccionado del ste de SEQ ID NOs : 2-26 y 31- 33. Otra vez, idades, los polipéptidos de esta invención posee actividad. Por ejemplo, un polipéptido de la comprender actividad moderadora de eflujo de c idad de estabilización de ABCA, nflamatoria, también como actividad ant uier combinación de estas actividades o idealme actividades. Las variantes conservadoras pueden s de las mismas actividades e idealmente, tod s actividades. Los análisis de selección descri al, sustituciones con aminoácidos que no son al {por ejemplo, sulfóxido de metionina, sulfonio, norleucina, ácido episilon-aminocapro nobutanoico, ácido tetrahidroisoquinolin-3-ca 8-aminocaprílico, ácido 4-aminobutirico, Lys(N uoroacetilo) , . ácido -aminoisobutirico y los s n ser usados en los polipéptidos de la presente con las otras sustituciones de aminoácido, amino on de origen natural son comúnmente sustituido a que en la sustitución, retienen el carácter nico o iónico de residuos que sustituyen.

El experimentado en el arte entenderá úos de aminoácido pueden ser agregados ya sea al érmino N de los polipéptidos de la presente inv ar la actividad de tales polipéptidos. Asi, un p invención que. comprende una secuencia helicoid r un polipéptido de bi-hélice o polipéptido de ejemplo de 40, 50, 60, 70, 80, 90 ó 100 amin tud. Asi, una secuencia de cualquiera de SEQ ID tener adiciones de aminoácido o puede ser u ío, una molécula de un polipéptido de la inve ío, SEQ. ID NO: 2-26 ó -31-33, puede ser uni ula del polipéptido por medio de un residuo proveer un polipéptido que es de por lo ácidos de longitud. Similarmente, dos 20-mer, d 2-mer, un 20-mer y un 22-mer, un 21-mer y 20-me y 22-mer pueden ser unidos por ejemplo, utili na, dando como resultado mediante esto un polip e 41-45 residuos de longitud. Tal péptido de b do de multimero tienen actividad que es equival riblemente excede, la actividad de un péptido d e de la invención que consiste del péptido de b o a la actividad deseada.

En algunas modalidades, un péptido de héli ibe en la presente puede ser modificado al su tar un aminoácido portador de tiol (por ejemplo terfase polar/no polar de la hélice .

En una modalidad particularmente prefe éptidos de la presente invención comprenden uno ácidos como se describen en la presente. E idades, cada aminoácido (por ejemplo, cada iomérico) es un D-aminoácido . Se ha encon éptidos que comprenden aminoácidos complet uían el ¦ eflujo de colesterol con alta capacid dad como los polipéptidos de L-aminoácido . ácidos son incorporados fácilmente en una o más polipéptido al usar un residuo de aminoácido d D en la síntesis química. Los residuos de for más en general por lo menos cuatro, más en gene cinco, preferiblemente por lo menos s riblemente por lo menos siete y más preferibleme ocho D-aminoácidos . En una modalidad, esencial aminoácido (enantiomérico) es un aminoácido de f as modalidades, por lo menos 80%, preferiblemen 90%, más preferiblemente por lo menos 95 ácidos enantioméricos son aminoácidos de forma idad particularmente preferida, esencialme ácido enantiomérico es un aminoácido de forma D.

En todavía ¦ otra modalidad, se domiméticos de los polipéptidos de la presente eptidomimético" incluye cualquier forma modific a de aminoácido, en los- que se incluyen pero no osforilación, coronación, modificaciones de ácid yendo estructuras de cadena fundamental no natu itud de patente estadounidense No. 2006/006 anzas de la cual son incorporadas por refere los propósitos. Otros peptidomiméticos y m cación de .los mismos serán conocidos para aq idad en. el arte.

En modalidades preferidas, los peptidomimét nte invención caen en una de dos catego gados; y (ii) análogos. Numerosos subrogados rollados para el enlace de amida de polipépt gados aprovechados frecuentemente para el enlac yen, pero no están limitados a los siguientes g -olefinas, (ii) fluoroalqueno, (iii) metilenam namidas y (v) sulfonamidas . Ejemplos de tales revelados en la publicación de solicitud d ounidense No. 2006/0069030. Adici domiméticos basados en modificaciones más susta iclos en el arte, de manera similar a éptidos a base de L-aminoácido . Más especi íos .de métodos apropiados para preparar tales -inversos son descritos en la patente estadoun ,752, que fue expedida a Sisto et al. El product mediarios. del mismo, pueden ser purificados med lquier otro método cromatográfico apropiado con íos de habilidad en el arte.

En otra modalidad, el péptido o peptidomimé go retro-enantio . Los análogos retro-enantio tizados a partir - de D-aminoácidos d cialmente (o análogos de los mismos) utilizand ntesis de polipéptido en fase sólida o en fase d dar .

En todavía otra modalidad, el peptidomimét go o derivado de trans-olefina . Tales análogos tizados por. el método anterior a otros pseudod fabricar pseudopéptidos . con varias funci nicas en lugar de funcionalidades de amida. Po odipéptidos correspondientes a ciertas secuenci dos pueden ser fabricados y luego acoplados con nte técnicas estándar para producir un an éptido que tiene enlaces olefinicos alternan úos .

Todavía otra clase de derivados peptid ye derivados de fosfonato. La síntesis de tales osfonato puede ser adaptada a partir de es sis conocidos (véase, por ejemplo, Loots et ides: Chemistry and .Biology", (Escom Science P n, p. 118, 1988); Petrillo et al., in "Peptides: Function (Proceedings of the 9th America sium)", (Pierce Chemical Co. Rockland, 111., 198 squier azúcar y azúcar alcoholes que son de orig sintéticos, en los que se incluyen, por ejemplo, tosa, ramnosa, mañosa, arabinosa y otros azúca ctivós alcoholes.

En ciertas modalidades, los peptidomiméti ción pueden comprender además modificaciones a modificaciones de post-traducción . Tales modi yen, pero no están limitadas a, ac xilación, glicosilación, fosforilación, lipi ción. Como resultado, los peptidómiméticos m n contener elementos sin aminoácido, ta tilenglicoles, lipidos, poli- o mono-sacáridos y efectos de tales elementos sin aminoácido onalidad de un peptidomimético pueden ser zando los métodos de análisis revelados en la pr Asi, en una modalidad preferida, los peptid a presente invención, .en los que se incluyen, po eptidomiméticos retro-inversos, pueden ser modif manera- que los grupos R sobre los ai ituyentes y/o los aminoácidos terminales son b es,- protegidos por un grupo protector. Se ha el bloqueo,, particularmente de los términos xi, mejora . extensamente la administración menta significativamente la vida media en el s sa en- la presente,¦ "grupo protector" se refi t.uyente temporal ¦ que protege un grupo cialmente reactivo de transformaciones eables. Ejemplos de tales grupos protectores i al ésteres de ácidos carboxilicos , éteres de oles y acétales y. cetales de aldehidos y ctivamente. El campo de química de grupo protect ado (Greene, T. W. ; Wuts, P. G. M. Protective nilo (Mts), 4 , 4-dimetoxibenzhidrilo (Mbh) , tosi , 7 , 8-pentametil croman-6-sulfonilo (Pmc), 4-me l),. 4-metoxibencilo (MeOBzl) , benciloxi (BzlO) , benzoilo (Bz) , 3-nitro-2-piridinsulfenilo (I dimetil-2 , 6-dioxociclohexiliden) etilo (Dde) , robenzilo ( 2 , 6-DiCl-Bzl ) , 2-clorobenziloxicarbon -bromobenziloxicarbonilo (2-Br-Z) f benciloximet hexiloxi (cHxO) , t-butoximetilo (Bum) , t-butoxi o (tBu) y trifluoroacetilo (TFA) . La variable o entero de 0 a 12, comúnmente 0 a 6 tal como 0 s protectores apropiados . son revelados en l ounidense No.. 6,933,279, las enseñanzas de la poradas por referencia.

En una modalidad, grupos protectores yen, pero no están limitados a, grupos acetilo lo con los grupos acetilo y alquilo siendo parti ío, se puede usar una resina de amida de Rink. onsumación de la síntesis, los grupos protecto nentes sobre aminoácidos bifuncionales ácidos, Glu y aminoácidos básicos, tales como Lys, ta idroxilo de Tyr, son todos removidos simultánean éptidos liberados de tal resina utilizando t viene con el · -terminal protegido como acetil nal protegido como NH2, con la remoción simu los otros grupos protectores. ntesis Química Los polipéptidos pueden ser sintetizados qu zando métodos bien conocidos en el arte, en l yen, por ejemplo, síntesis en fase sólida (v ío, Merrifield, J. Am. Chem. Soc, 85:2149-2154 on et al., Methods in Enzymology, Volume 289: S nte espectroscopia de masas de GC. Una vez sin polipéptidos pueden ser modificados, por eje s acetilo N^terminal y grupos amida C-termina ibe anteriormente. Los polipéptidos sintetizad islados adicionalmente mediante HPLC a una puré enos ¦ aproximadamente 80%, preferiblemente 90 riblemente 95%. presión Recombinante Los polipéptidos descritos en la presen én ser expresados recombxnantemente, en especial éptido no comprende residuos de aminoácido idad depende de las técnicas de rutina en el ica recombinante. En general, la nomenclatu dimientos de laboratorio en tecnología de ADN re ito en la presente son aquellas bien conocidas y nt Protocols in Molecular Biology (Ausubel et ) · Reacción en cadena de polimerasa u otros ficación in vitro pueden también ser útiles, po clonar secuencias de ácido nucleico que codi éptidos a ser expresados., para fabricar ácidos uso como sondas para detectar la presencia d icación en muestras fisiológicas, para secuenc nucleico o para otros propósitos. Los ácidos ficados mediante reacción de PCR pueden ser puri de agarosa y clonados a un vector apropiado.

La expresión genética de una secuenci ción puede también ser analizada mediante idas en e.l arte, por ejemplo transcripción ficación de mARN, aislamiento de ARN total o po ern blotting, dot blotting, hibridación romotor fuerte o un promotor/mej orador para d cripción, un terminador de transcripción/traduc ido nucleico que codifica una proteina, un sitio ibosoma para inicio de traducción. El promotor e tivamente a la secuencia de ácido nucleico que c éptido de la invención o una sub-secuencia d tores bacterianos apropiados son bien conocidos scritos, por ejemplo, en Sambrook et al. y Ausu elementos que ·..están incluidos comúnmente en ve sión también incluyen un replicón que funciona e n que codifica resistencia a antibiótico para p ción de bacterias que albergan plásmidos recom s de restricción únicos en regiones no esenc ido · para permitir la inserción de iónticas. La gen de resistencia a antibiótico idos no es critico, cualquiera' de los muchos adas a los polipéptidos . recombinantes para prove islamiento convenientes , por ejemplo, etiqueta os casos, secuencias de escisión enzimática (po (His ) g-Ile-Glu-Gly-Arg que forman el sitio de es r Xa) son agregadas a los polipéptidos reco mas¦ de expresión bacteriana para expresar los po disponibles en, por ejemplo, E. coli, Bacil nella (Palva et al., Gene 22:229-235 (1983); Nature¦ 302: 543-545 (1983). Kits para tales s sión están disponibles comercialmente . Los si sión eucariónticos de células mamiferas, c ura y de insecto son bien conocidos en el art én disponibles comercialmente.

Métodos de transfección estándar son us cir lineas celulares que expresan grandes can éptidos de la invención, que son luego p s. Estos incluyen el uso de transfección de o, polibreno, fusión de protoplasto, electr omas, .microinyección, vectores de plasma, vector alquiera de los otros métodos bien conoc ducir ADN genómico clonado, cADN, ADN sintéti ial genético extraño a una célula huésped {v ío, Sambrook et al., supra) . Solamente es necesa dimiento de diseño . genético particular usado se ducir exitosamente por lo menos un gen a la célu de expresar un polipéptido de la invención.

¦Después que el vector de expresión es int células, las células transfectadas son cultiv ciones que favorecen la expresión de un polipép ción. Polipéptidos de la invención son recupe vo utilizando técnicas estándar ide riormente en la presente. lo, Scopes, Protein Purification : Principies an ); U.S. Patent No. 4, 673, 641; Ausubel et al., ook et al., supra) .

Un número de procedimientos pueden ser o los polipéptidos van a ser purificados. Po éptidos que tienen propiedades de adhesión lecidas pueden ser fusionados de manera rev éptidos recombinantes . Con el ligando aprop éptidos recombinantes pueden ser adsorbidos sele olumna de purificación y luego liberados en la orma relativamente pura. El polipéptido fusionad ido mediante actividad enzimática. Finalme éptidos pueden ser purificados utilizando co oafinidad. ÉTODOS PARA IDENTIFICAR POLIPÉPTIDOS CON ACTIVID ldad, los métodos de selección involucran la se pluralidad de polipéptidos de prueba para i los · polipéptidos que moderan el eflujo de cole ilizan ABCA (por ejemplo, ABCA1) · por ejemplo eras, en las que se incluyen células humanas.

Además de selección en cuanto a su hábi r el eflujo de colesterol y/o estabilizar éptidos de prueba candidatos pueden tam cionados en cuanto a otras actividades en l yen por ejemplo, actividades anti-oxidantes y a inflamatorias* Un número de diferentes prot ción pueden ser utilizados para identificar poli domiméticos de la presente invención que tienen oxidante y/o actividad anti-inflamatoria .

Será fácilmente evidente para aquellos de arte que otros numerosos análisis de selección, emistry, 41:2089-2096 (2002); Jia et al . , ys. Res. . Common. , 297:206-213 (2002). En idades,. se usa un polipéptido que se sabe que o de colesterol (por ejemplo, hélice 9/10 de Apo cionar mediadores adicionales de eflujo de col álisis a base de célula. Por ejemplo, lineas ce cuales el eflujo de .colesterol puede ser zando un análogo de cAMP que regula ascendent sión de .proteína de ABCA1 (por ejemplo, macróf n ser usados convenientemente para determinar la n polipéptido de la presente invención para o de colesterol. Las células son incubada terol marcado (por ejemplo, [3H] colester ciones apropiadas para la absorción de colester as. Así, cAMP o análogos de cAMP (por ejemplo, ncubados con las células por un tiempo apropiado os de enlace para . probar la habilidad del poli a para enlazarse a ABCA (por ejemplo, ABCA1 trado que los polipéptidos que tienen act ilización- de ABCA son también moderadores pro o de colesterol. Como tal, en una modalidad pref éptidos o peptidomiméticos de la presente invenc abilidad de- mediar el eflujo de colesterol y e En una modalidad de selección, los ensayos n ser análisis competitivos. Otros análisis inc ío, medición directa de ABCA (por ejemplo, pr o ácidos nucleicos) enseguida del contact éptido de prueba. sayos de enlace Los ensayos de enlace involucran armente comprenden poner en contacto ABCA con minar si un polipéptido de prueba tiene act ilización de ABCA. Los análisis de competencia idos en el arte. Comúnmente, un compuesto compet n compuesto .que se sabe que se enlaza a ABCA, al manera . que las diferencias en enlace a ío, en presencia de una cantidad incrementa éptido de prueba de la invención que se puede puede ser medida. El marcador o grupo cular usado en el análisis no es un aspecto crí ción, en tanto que no interfiera significativame e · del compuesto de prueba a ABCA. Como se desc nte, ¦ el grupo detectable (o alternativamente, dor detectable) puede ser cualquier material que edad fisica o química detectable. Tales tables han sido bien desarrollados en el oanálisis y en general, la mayoría de cualquie o, fosfatasa alcalina y otras usadas comúnme sis de ELISA) y marcadores colorimétricos tales dal o vidrio coloreado o perlas de plástico (po stireno, polipropileno, látex, etc.).

En algunas modalidades, células que expres as que no expresan ABCA son usadas para medir la estabilización, de. ABCA (por ejemplo, ABCA1 éptido de prueba al medir las afinidades de enla ivas del polipéptido de prueba y un compuesto ejemplo, polipéptido de Apo A-I A o Apo A- tud completa) para ABCA. En algunas modali dad de enlace de Apo A-I A de longitud completa rada con la afinidad de enlace de un polipépti a invención como se describe por ejemplo en, ' J. Lipid Res., 44:828-836 (2003). Células qu son incubadas en presencia y ausencia del dición Directa de ABCA En algunas modalidades , la estabilización a mediante medición directa de ABCA (por ejemplo BCA o ácido nucleico) utilizando un análisis a. Los análisis a base de célula pueden ser efe squier células en las cuales ABCA es expré ío, macrófagos J774), en las que se incluyen c sido transíectadas con - ABCA (por ejemplo, célu uier tipo de . célula puede ser usada. Por ej n usar · macrófagos de J774 para determinar los ina de ABCA1 relativas en presencia y au éptidos de la invención. Las células son prime ntacto con un compuesto que inducirá a ABCA (po o un análogo de cAMP tal como, 8-bromo-cAMP) dentemente la expresión de ABCA (por ejemplo expuesto a niveles de proteina de ABCA1 sirv lección en cuanto a actividad antioxidante Los polipéptidos o peptidomiméticos de la n ser seleccionados en cuanto a actividad an zando métodos conocidos en el arte. Por ej cación de patente estadounidense 2003/0087819 ples análisis que pueden ser usados para dét idad -antioxidante de un .polipéptido, en lo yen, por ejemplo el . ensayo de sustrato mi ato - micelar que comprende un fosfolipido (por e toil-2-linoleoil fosfatidil colina) es usado velocidades de peroxidación de lipido cataÜ as especificas (por ejemplo, lipoxigenasa de na/xantina oxidasa) . Las enzimas inician la pe lipido en seguida de la adición de po binantes de. la invención a las micelas de fosfol mentos en dienos conjugados (un producto de pe lación de peróxido de lipido obtenida en aus éptido (esto es, la meseta asociada con las ción) es posible derivar información cuantit cto a la potencia de los polipéptidos de la inve ío, una concentración de polipéptidos que tado una protección, de 50% contra la peroxi os) . Otros métodos son concernientes con la se éptidos en cuanto .a capacidad para impedir la ox roteínas de Apo B tales como LDL, VLDL y Lp (A) .

Otros análisis para seleccionar la xidante son revelados en la publicación de P 923, las enseñanzas de la cual son incorpora nte por referencia. lección en cuanto a actividad anti-inflamatoria Los polipéptidos o peptidomiméticos de la idad de LCAT utilizando un sustrato de prot no y Forte et al., J. Lipid Res., 43:477-485 ( ibe la ificación de actividad de PON. Otras selección ir el monitoreo de la capacidad de los polipép ir la expresión de mARN y/o producción de prote as objetivo en seguida de varias' estimulaci ío, moléculas de adhesión, TNF-alfa, LPS o com s mismos) . rmación de Pre-beta El péptido de la invención puede ta cionado en cuanto a la habilidad para inducir la Dli pre-beta-1 en plasma humano. En un ejempl sis, un péptido a ser probado es agregado o. El plasma con y sin péptido es incubado moderadores del eflujo de colesterol o que inter pueden ser probados adicionalmente ¦ para v idad para mediar el eflujo de colesterol y/o e El formato básico de tales, métodos involucra a ompuesto principal identificado durante una al a un animal que sirve como modelo. Los anima zando en estudios de validación en general son alquier clase. Ejemplos específicos de animales yen pero no están limitados a primates (por ancés, monos y los semejantes) y roedores (po es, ratas, conejillos -de indias, conejos antes) . En una modalidad preferida, se usan rató ratones apo A-II-/- o ratones apo C III-/-. les adicionales son descritos en, por ejemplo Ma Sem. CellDev. Biol., 14:25-35 (2003). otecas" son luego seleccionadas en uno o más se describe en la presente, para identificar ntos de la biblioteca (esto es, polipé domiméticos ) que exhiben una actividad cara da. Los compuestos asi identificados pueden se uestos principales" convencionales o pueden ser smos como terapéuticos potenciales o reales.

Una biblioteca de polipéptidocombinatoria ción de diversos polipéptidos generados ya se sis química q síntesis biológica, al combinar un ues de construcción" químicos, esto es aminoácid cular, una biblioteca de polipéptidocombinator rmada al combinar un conjunto de bloques de co cos (aminoácidos) en cada manera posible para un ompuesto dada (esto es, el número de aminoáci esto de polipéptido) . Millones de compu y están disponibles comercialmente de una dive es diferentes (véase, por ejemplo E edBioPhysics Inc., Troy, NY, MPS, 3 cedChemTech, Louisville KY, Symphony, Rainin, W AppliedBiosystems, Foster City, CA, 9050 Plus, rd, MA) .

TODOS DE USO Los polipéptidos que no son de origen natu nte invención utilizan la ruta de transporte de sa · potente (RCT) para, mediar el eflujo de c s de ser potentes y mediadores selectivos del térol dependiente de ABGAl, los polipétidos de l ción también . tienen actividad de estabilización idad antioxidante también como activid matoria, cualquier combinación de estas acti etros de lípido en un mamífero. Una mejora en " ipido" incluye, por ejemplo uno o más de una dism ropensión de lipoproteinas para adherirse a ineo, una disminución en la cantidad osclerótica (aunque las concentraciones de LDL lasma pueden no ser cambiadas significativame ción en el potencial de oxidación de una partic L, una regresión en arterosclerosis (por ejempl a mediante angiografia carótida o ultrasonid ción en eventos cardiacos. Asi, los polip domiméticos de la · presente invención pueden s tratar o impedir (esto es, tratar profilác medades y condiciones asociadas con dis colesterolemia e inflamación o enfermedades y c son tratables al alterar los parámetros del lip aquellas enfermedades y condiciones revelad En.. una modalidad, la presente invenci os para tratamiento, mejora y/o prevención de rnas de arterosclerosis . Los métodos riblemente administrar a un organismo, preferib ero y más preferiblemente un humano, uno o m éptidos de esta invención (o peptidomiméticos éptidos) . El (los) polipéptido ( s ) puede istrado(s) como se describe en la presente, de a uier número de- métodos estándar, en los que s no limitados a inyección, supositorio, atomizac nte de . liberación en - tiempo, parche tra ente y los semejantes. En una modalidad parti rida, el (los) polipéptido ( s ) es (son) admin ente. (por ejemplo, como un jarabe, cápsula, .

Los métodos de la presente invención ismos) pueden ser administrados a un organismo, mano o animal no humano para impedir el inicio, rollo de uno o más síntomas de arterosclerosi datos apropiados para tratamiento profiláctico, jemplo aquellos sujetos que tienen uno o más f o por arterosclerosis (por ejemplo, historia dor genéticos que se correlacionan con artero tensión, obesidad, alto consumo de alcohol, f de colesterol en la sangre, alto nivel de tri sangre, LDL, VLDL, IDL elevado en la sangre o tes o una historia familiar de diabetes, alto co os en la sangre, ataque al corazón, angina o rovascular, etc.).

El tratamiento puede complementar o el idad de cirugía vascular haciendo al tratamie osclerosis sistémico y sostenible. Así, el pép ción son también útiles en un número de otros particular, ' se ha encontrado que comp ovasculares (por ejemplo, arterosclerosis , rovascular, etc.) f ecuentemente acompañan o o de una respuesta inflamatoria de fase a esta inflamatoria de fase aguda está frec ada con una enfermedad inflamatoria recurr ío, lepra, tuberculosis, lupus eritematoso tis reumatoide, etc.), una infección viral (po enza, HIV, etc.), una infección bacteriana, una ca, un trasplante de órgano, una herida u otro t sis implantada, una biopelicula y los semejantes.

En vista de su actividad antioxida éptidos descritos en la presente pueden ser u ir o impedir la formación de fosfolipidos oxidad seguida de la respuesta inflamatoria de fa nfermedad en los cuales los lípidos y el metab os. juegan un papel. Así, por ejemplo, una pe o está en riesgo de enfermedad coronaria istrada profilácticamente con un polipéptido ción durante la temporada de gripa. Un human l) sujeto a ¦ una condición inflamatoria recurr ío, artritis reumatoide, varias enfermedades au puede ser tratado con un polipéptido de esta mitigar o impedir el desarrollo de. arterosc ente- cerebrovascular. Similarmente, un humano l) sometido a trauma, por ejemplo lesión aguda, jido, etc.; puede ser tratado con un polipépti ción para mitigar o impedir el desar osclerosis o accidente cerebrovascular.

En ciertas instancias, tales métodos abar osis de la presencia .o riesgo de una añan a la enfermedad . y pueden también c icaciones .adicionales, por ejemplo en ovasculares o enfermedades de deposición de prot amiloidosis.

Un aspecto importante de la respuesta de i .perfil biosintético radicalmente alterado de circunstancias normales, el hígado sintetiza un terístico . de proteínas del plasma a concentra o estable. Muchas -de estas proteínas tienen tantes y niveles en el plasma más altos de estos ase aguda (APR) o proteínas de fase aguda ridos durante la respuesta de fase aguda en seg ulo inflamatorio. Aunque la mayoría de tizados mediante hepatocitos, algunos son prod tipo de células,- en los que se incluyen monocito eliales, fibroblastos y adipocitos. La mayoría En ciertas modalidades, la respuesta infla aguda o riesgo de la misma es evaluada al medir La medición de tales marcadores es bien cono íos de- habilidad en el arte y existen eíales que proveen tal medición (por ejeir otechServices, Louisville, KY) . Una vez qu minado que una persona está experimentando una matoria de fase aguda o está en riesgo de experi esta inflamatoria de fase aguda, los polipépti nte invención pueden ser administrados para ir la formación, .de fosfolipidos oxidados dur da de la respuesta inflamatoria de fase aguda, m nando mediante esto complicaciones cardio adas con tal condición. apamiento o prevención de un síntoma o condició ática, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, lzheimer, SIDA, calcificación coronaria, estenos fica, osteoporosis y los semejantes. En tales mé éptidos o . peptidomiméticos de la presente invenc dministrados a un humano .o animal no humano para ir la formación de fosfolipidos oxidados, inh niendo mediante esto un síntoma de una enfermeda ialgia reumática, poliarteritisnodosa, esc sis pulmonar idiopática, enfermedad pulmonar o ca, enfermedad de Alzheimer, SIDA, cal aria, estenosis aórtica calcifica, osteoporos antes .

Comúnmente, todos los métodos anteriores dministración de un solo polipéptido de esta in nativamente, la administración de dos o más po entes de esta invención. Tales polipéptidos p ¦ Además, aunque todos los métodos anteriores itos en la presente con respecto a huma mente evidente para aquellos de habilidad en el métodos son también útiles para otros anim ío para uso veterinario. Asi, organismos yen, pero no están limitados a, humanos, pr os, caninos, equinos, felinos, porcinos, morfos y los semejantes. tabilización de Placas Vulnerables Como se explica en la presente, la enfe ón, específicamente enfermedad de arteria coro ausa principal de muerte, discapacidad y gastos a salud en los Estados Unidos de América y ot trializados . Hasta recientemente, la mayoría de corazón era considerada principalmente el resu lo puede romperse .y alojarse en el vaso de ot omo el cerebro, dando como resultado un choque t En la pasada década, sin embargo, h ncia^ cambiante a alguna extensión del par sclerosis, enfermedad de arteria coronaria y a ón. En tanto que la acumulación de placa d cir angina e isquemia severa en las arterias c s datos clínicos sugieren que la ruptura rables, que son frecuentemente no oclusivas, can la. vasta mayoría de ataques al corazón. La timada tan alta como 60-80 por ciento.

En muchas instancias, las placas vulne n sobre el lumen del vaso; más bien, muy semej so, son introducidos dentro de la pared art ía de las placas vulnerables incluyen un fondo as de músculo liso (endoteliales ) y un infiltrad z, que dan como resultado necrosis de célula ge optosis, pro-coagulación y debilitamiento de sa. El proceso de inflamación puede debilita sa. a la extensión que suficiente esfuerzo mec aquel producido por presión sanguínea incrementa como, resultado ruptura. El núcleo del lipid nido de la placa vulnerable puede luego derram ente sanguínea, iniciando mediante esto una c lación. La cascada produce un coágulo sanguín resultado potencialmente un ataque al co ente cerebrovascular. El proceso es exacerbado d ación de colágeno y componentes de placa (po eno y factor de tejido), que realzan la c és de su liberación.

Se ha encontrado que los polipéptidos de l ción .pueden estabilizar placas vulnerables al Otra vez, ¦ los polipéptidos de la presente n reducir el contenido de lipido de l ilizando mediante esto tales placas "vulnerables" En una modalidad, el mamífero es un osticado por tener una o más placas vulnerables idad, un número de análisis de diagnóstico dif desarrollados para . la detección (por ejemplo, d ización) de placas vulnerables, que incluyen e detección - de . temperatura, estrategias de tegias -de formación de imagen (por ejemplo, di utilizan resonancia magnética, ultrasonido, i escencia, luz visible, ondas de radio, rayos tegias generales para discriminar la placa vul o vascular saludable.de los alrededores y los e, por ejemplo, patentes estadounidenses Nos. ,159, 6,475,210 y 7,118,567). üna estrategia in dad por la placa vulnerable, más que pa able. La detección del marcador puede asi pe ción de la placa vulnerable. Alternativamente, e no tener necesariamente afinidad para rable, pero simplemente cambiará las propiedade asociado con la placa vulnerable. El cambio de ser detectado y. asi permitir la detección de rable.

En otra, modalidad, el mamífero está en una o más placas vulnerables. En esta moda rna clínico se ha desarrollado y/o un evento ido que conduce a aquel de habilidad ordina ca a creer que el mamífero está en riesgo de t lacas vulnerables.

En relación con los métodos anterio ilizar una placa vulnerable, el (los) poli - o en combinación con otros agentes far idos para el tratamiento de dis colesterolemia e inflamación para ntraciones de HDL en el plasma y/o promover el lesterol inverso.

ERAPIA COMBINADA En algunas modalidades, los polipé domiméticos de la presente invención son admini nación con uno o más agentes terapéuticos adició ratamiento o prevención de enfermedades y al adas- con dislipidemia, hipercolesterolemia e in como enfermedad cardiovascular, en los que se sclerosis. Por ejemplo, en una modalidad, un p a presente invención es administrado en conju uiera de los tratamientos estándar para ateroscl terectomia) ;· y cambio del estilo de vida (por s de bajo . contenido¦ de grasa, pérdida de icio) .

Más en , particular, los polipép domiméticos de la. presente invención pueden ser nación, ya sea como unidades separadas o com , con uno o más de los siguientes: un anticuer a a una molécula inflamatoria indeseable o ci interleucina-6, interleucina-8 , factor estim ía de macrófago de granulocito y factor-a de n ; un inhibidor de enzima tal como aprotinina inh asa o un inhibidor de ciclooxigenasa; un antib amoxicilina, rifampicina, eritromicina; u iral tal como aciclovir; un anti-inflamatorio omo un glucocorticoide ;. un anti-inflamatorio no como aspirina, ibuprofeno o acetaminofeno; o un ción pueden ser usados en combinación con fárma mente'para tratar alteraciones de lipidos en, po ntes diabéticos. Tales fármacos incluyen, pero ados a, inhibidores de reductasa de H G-C inico, ezetimida, secuestrantes de ácido biliar, cido fibrico, inhibidor de MTP, inhibidor d idores de CETP. Ejemplos de inhibidores d tasa incluyen lovastatina, pravastatina, siirr astatina, fluvastatina y atorvastatina . Ej strantes de ácido biliar incluyen cole tipol y colesevelam. Ejemplos de . derivados co incluyen gemfibrozil y fenofibrato, Los polipéptidos o peptidomiméticos de la n también ser usados en combinación con fárm tensores, tales como por ejemplo, diuréticos, bl inhibidores de catepsina S, metildopa, agon Los polipéptidos o peptidomiméticos de la n también ser usados en combinación con ovasculares tales como antagonistas de canal d onistas y agonistas del receptor ß-ad onistas de aldosterona, inhibidores de ACE, an receptor de angiotensiona II, nitrovasodil sidos cardiacos. Los polipéptidos o peptidomimét ción pueden también ser usados en combinación co inflamatorios tales como antagonistas de rec stas y antagonistas moderados por el rec idores de COX-2, NSAID, salicilatos, acet ados de ácido propiónico, ácidos enólicos, l-sustituidas, inhibidores de ciclooxigenasa y a onistas de bradiquinina .

Otros agentes terapéuticos apropiados par nación con los polipéptidos o peptidomimétic - ser administrado primero, seguido por el poli vención. En algunos casos, el polipéptido de la agente terapéutico adicional son administrados e lación. En otros casos, el polipéptido y éutico adicional son administrados en for entes. Cuando, el polipéptido y el agente t onal son administrados en formulaciones difer istración puede ser simultánea o secuencial.

FORMULACIONES FARMACEUTICAS Con el- fin de llevar a cabo los métod ción, uno o más polipéptidos de esta in domiméticos de los mismos son administrados a un osticado por tener o en riesgo de tener una en ación asociada con dislipidemia, hipercoleste mación (por ejemplo, a un individuo diagnost nte, la ruta de administración puede s peritoneal, transdérmica, subcutánea, mediante venosa o intramuscular, mediante inhalación, lesional, infusión; administración moderada por istración tópica, intratecal, cavidad gingival bronquial, nasal, transmucosal, intestinal, , o cualquier otro métodos conocido en el art imentado en el arte pueda percibir fácilmen idades de las composiciones de la invención rimientos protectores en forma de partículas, i roteasa o mej oradores de permeación para varias istración, en las que se incluyen parenteral, y oral. Las composiciones farmacéuticas p istradas en una variedad de formas de do rias dependiendo del método/modo de administraci osificación unitarias apropiadas incluyen pero on fisiológicamente compatibles y que preferib fieren con¦ o de otra manera inhiben la acti éptido o peptidomimético . Preferiblemente, el p iado para administración intravenosa, intramuscu peritoneal, transdérmica, tópica o subcutánea. ables farmacéuticamente pueden contener un estos aceptables fisiológicamente que actúan, po estabilizar la composición o para incrementar o absorción del (los) . agente (s) activo (s). lógicamente aceptables pueden incluir, por hidratos, tales como glucosa, sacarosa o xidantes, tales como ácido ascórbico o glutation ntes, proteínas de bajo peso molecular, composi en del despeje o hidrólisis de los agentes a ientes u otros estabilizadores y/o soluciones r H. lo de la ruta de administración del (los) polipé domimético ( s ) y de las características fisi culares del (los) polipéptido (s) o peptidomiméti En una modalidad preferida, el portador céuticamente es solución salina fisiológic dores aceptables farmacéuticamente y sus formula conocidos y descritos en general por ej gton: The Science and Practice of Pharmacy, 21s delphia, PA. Lippincott Williams .& Wilkins, 20 ientes aceptables farmacéuticamente son bien co rte y se pueden encontrar por ejemplo en, Ha aceutical Excipients (5th ed., Ed. Rowe¦ aceutical Press, Washington, D. C) . Otra sición farmacéutica puede ser formulada como una emulsión, liposoma, cápsula, tableta u ot iada. El componente activo puede ser recubier o istración de fármacos transdérmicos convencion "parches" transdérmicos, en donde el (los) polipé domimético ( s ) está(n) comúnmente contenido (s) estructura laminada que sirve como dispo istración de fármaco para ser fijado a la pie ctura, la composición de fármaco está contenida na capa o "depósito", debajo de una capa d ior. Se apreciará que el término "depósito" xto se refiere a una cantidad de "ingr o(s)" que está finalmente disponible para admini uperficie de la piel. Asi, por ejemplo el "depós ir el (los) ingrediente (s) activo (s) en un adhe capa de soporte del parche o en cualquiera de un iferentes formulaciones de matriz conocidas par abilidad en el arte. El parche puede contene ito. o puede contener múltiples depósitos. ntas, con adhesivo debajo del depósito que, en ser ya sea una matriz polimérica como se iormente o puede ser. un depósito rígido o de tomar alguna otra forma. La capa de soporte ados, que sirve como la superficie supe sitivo, funciona preferiblemente como un ctural primario del "parche" y provee el dispo de su flexibilidad. El material seleccionado pa oporte es de preferencia substancialmente impe agente (s) activo (s) y cualesquier otros mate presentes.

Otras formulaciones preferidas para admi a de fármaco incluyen pero no están limitadas a s. Las pomadas son preparaciones semi-sólidas as comúnmente en petrolato u otros derivados del cremas que contienen el agente activo selecci ionante en una formulación de crema es en g ctante no iónico, aniónico, catiónico o anfot a o base de crema especifica a ser usada, iará por aquellos experimentados en el arte, e erá administración de fármaco óptima. Como dores o vehículos, una base de pomada debe se le, no irritante y no sensibilizante.

En algunas modalidades, se usan di ntados (por ejemplo, stents arteriales e intrav que se incluyen stents de emulsión y catéte ntar las formulaciones que comprenden los poli domiméticos de la invención. Por ejemplo, as que comprenden los polipéptidos y peptidomi nvención son administrados directamente a trav s y catéteres. En algunas modalidades, los eres pueden ser recubiertos con formulaci ,849. Catéteres apropiados son descritos por e patentes estadounidenses Nos. 6,829,497; -,730; 6,827,703; 6,824,554; 6,824,553; ,532; y 6,819,951.

A diferencia de . las formulaciones de p as, los . polipéptidos de esta invención ácidos de forma L o forma D pueden ser adminis ente, sin protección -contra proteólisis por ago, -etc. No obstante, en ciertas modali istración del polipéptido puede ser mejorada m e excipientes . protectores . Esto se lleva a cabo a al acomplejar el polipéptido con una compos rlo resistente a hidrólisis ácida e hidrólisis empacar el polipéptido en un portador apro tente tal como un liposoma. Medios para éptidos para administración oral son bien conoc ilizado (Tracy, Biotechnol. Prog., 14:108 (1998) ., Nature Med., 2:795 (1996); Herbert et al., P .. 15:357 (1998)), que involucra el uso de un p esto de micro-esferas poliméricas biodegrad enen , el polipéptido en una matriz polimérica que nada como una formulación seca con o sin otros a El proceso de fabricación de micro-esfer fue diseñado obtener una alta eficiencia de ene olipéptidos en tanto que se mantiene la inte ina. El proceso consiste de (i) preparación de roteína secadas por congelación a partir de p l mediante secado por congelación por atomizac ión de fármaco con excipientes estabilizan ración de una suspensión de fármaco-polimero s icación o homogeneización para reducir el cula de fármaco, (iii) producción de micro-e raturas (por ejemplo -40 °C) . Durante la encapsu éptido es mantenido en estado sólido en ausenci izando asi la movilidad conformacional inducida polipéptido, impidiendo reacciones de degra éptido que incluyen agua como reactivo y faces orgánicas-acuosas en donde los polipépti r desnaturalización. Un proceso preferido usa so cuales la mayoría de los polipéptidos son i ciendo así altas eficiencias de encapsulación de 95%) .

En otra modalidad, uno o más component ión pueden ser provistos como un "concentr ío en un recipiente de almacenamiento (por ejem en pre-medido) preparado para dilución o en u le preparada para adición a un volumen de agua.

En ciertas modalidades de la presente inve ío, poloxámeros o poloxaminas ) . Otras modalidad siciones de la invención incorporan formas en p rimientos protectores, inhibidores de pr adores de permeación para varias rutas de admin as que se incluyen parenteral, pulmonar, nasa dores aceptables incluyen carboximetil celulos odificada .

La composición farmacéutica de . la presente referiblemente estéril y. no pirogénica al istración y es preferiblemente estable ciones de manufactura y almacenamiento siciones farmacéuticas pueden ser esterilizada cas de esterilización convencionales bien conoci En aplicaciones terapéuticas, las composi invención son administradas a un individuo dia tener o en riesgo de tener una enfermedad o alud del paciente. Una sola administración o istraciones de las composiciones pueden ser admi diendo de la dosificación y frecuencia como se olerado por el paciente. En cualquier caso, la c proveer una cantidad suficiente de los in os, . esto es, polipéptidos o peptidomimético laciones de esta invención para tratar efe rar uno o más síntomas) el individuo o paciente.

. . La concentración del polipéptido o pepti variar ampliamente y será seleccionada princip a los volúmenes- de fluido, viscosidades, pesó es de plasma circulantes del polipéptido, toxic éptido, avances de la enfermedad (por osclerosis) , la producción de anticuerpos que íficamente al polipéptido y los semejantes de a odo de administración particular selecciona ción pueden ser administrados a una proporción d la LD50 del polipéptido y los efectos secund éptido a varias concentraciones , tal como son a sa y salud global del paciente. La administració r a cabo via una sola, dosis o dosis divid ío, dosis administradas en una base regular (po amente) por un periodo de tiempo (por ejemplo, 2 s o 1-3 semanas o más) .

Como se explica en la presente, los poli domiméticos de la presente invención pu icados . en una diversidad de maneras difere ío, los polipéptidos pueden ser modificados de os grupos R. sobré los aminoácidos constituyente ácidos terminales son bloqueados, esto es, prot grupo protector. Se ha encontrado que el cularmente de los términos amino y/o carbox . Wiley-Interscience .

Por ejemplo, sales de adición de ácido son rtir de la base libre utilizando metodología con involucra comúnmente reacción con un ácido apr al, la base del fármaco es disuelta en un ico polar tal como metanol o etanol y el ácido e smo. La sal resultante ya sea precipita o puede de la solución mediante la adición de un solv . Ácidos apropiados para preparación de sales cido incluyen tanto ácidos orgánicos, por ejem co, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido oxálico, ácido málico, ácido malónico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácid benzoico, ácido cinámico, ácido mandélic sulfónico, ácido etansulfónico, ácido p-toluen salicílico y los semejantes, también co reparadas de manera similar utilizando una base céuticamente tal - como hidróxido de sodio, hiá io, hidróxido, de ¦ amonio, hidróxido de tilamina. o los semejantes. Sales básicas parti ridas incluyen sales de metal alcalino, por ejem dio y sales de cobre.

La preparación de ésteres involucra comú onalización de grupos hidroxilo y/o carboxilo presentes en los . polipéptidos o peptidomiméti nte invención. Los ésteres son comúnmente deriv tuidos de los grupos alcohol libres, esto es, on derivadas de ácidos carboxilicos de fórmula R es alquilo y preferiblemente, alquilo infe es pueden ser reconvertidos a los ácidos libr , al usar procedimientos de hidrogenólisis o ncionales. esto que es terapéuticamente inactivo hast icado por el sistema metabólico de un individuo.

Las formulaciones y métodos de admi iores se entenderá claramente que son ilustrat antes de ninguna manera. Se apreciará que, util anzas provistas' en la presente, otras formul de administración apropiados pueden ser mente .

FORMULACIONES A BASE DE LIPIDO En otro aspecto, los polipéptidos y peptid presente invención son administrados preferib nción con uno o más lipidos. Los lipidos p lados como, un excipiente para proteger y/o m porte/absorción de los polipéptidos o peptidom n ser administrados separadamente. resente invención. Por ejemplo, la formación omas es. en general conocida para aquellos de ha rte. Recientemente, liposomas fueron desarrol ilidad en el suero y tiempos medios de c ados (véase por ejemplo, patente estadouni ,516). Además, varios métodos de preparaciones d eparaciones semejantes a liposoma como port co potenciales han sido revisados (véase por tes estadounidenses Nos. 5,567,434; 5,552,157; , 868 y 5, 795, 587) En una- modalidad, los polipéptidos o peptid a presente invención son acomplejados con un l un fosfolipido (por ejemplo, 1 -pamitoil-2- rol-fosfatidilcolina ("POPC") de manera similar ada en la publicación de solicitud de ounidense No. 2005/0142180, que fue publicada -idad de eflujo de colesterol de células .

Como tal, la presente . invención provee co éptido-lipido (o alternativamente, compl domimético-lipido) que tienen una habilidad in el eflujo de colesterol de las células. Comú o ¦ es mezclado con el polipéptido antes istración. Los polipéptidos de la presente ir os pueden ser mezclados en una solución rciones apropiadas y pueden ser acomplejados os conocidos en el arte, en los que se incluye ados a, secado . por congelación, solubiliz gente seguida por diálisis, microfluidización, omogenización . La. eficiencia de complejo izada, por ejemplo, al hacer variar la presión, sónica o concentración del detergente. Un ejem gente usado comúnmente para preparar com ladas que son desheladas hasta que se obtiene un énea antes de la administración a un sujeto en ismo.

El. lípido puede ser cualquier lipido ido para aquellos de habilidad en el arte idad, se pueden usar lipidos que no contienen f que se incluyen estearilamina, dodecilamina, pa lo, (1, 3) -D-manosil- (1, 3) diglicérido, aminofenil esteril-6 (glicosiltio) hexil éter glicolipidos N- (2, 3-di (9- (Z) -octadeceniloxi) ) -prop-1 tilamonio y amidas de ácido graso.

En otra modalidad, un fosfolipido o una lipidos es usada. Fosfolipidos apropiados incl stán limitados a, un fosfolipido de cadena d ña, fosfatidilcolina, fosfatidilcolina de tidilcolina de soya, dipalmitoilfosfati lamina, ¦ osfatidilinositol , fosfatidi fatidilglicerol, dimiristoilfosfatidilglicerol, osfatidilglicerol, diestearoilfosfatidi oilfosfatidilglicerol, ácido fosfatidico, istoilfosfatidico, ácido dipalmitoilfo istoilfosfatidiletanolamina, dipalmitoilf lamina, dimiristoilfosfatidilserina, di tidilserina, fosfatidilserina del cerebro, esfin golipidos, - esfingomielina de mitoilesfingomielina, diestearoilesfingomielina, rosida, gangliósidos, cerebrósidos, fosfatidi fosfatídico, lisolecitina, lisofosfatidilet ina, cardiolipina, dicetilfosfato, di titiletanolamina y colesterol y sus armente, el fosfolipido puede ser un derivado o uiera de los fosfolipidos anteriores y otra ro-3-fosfocolina" ) .

Será fácilmente evidente para aquellos de l arte que el complejo que comprende un polipépt nte- invención y un lípido, preferible lípidos, puede comprender cualquier cantidad de uier cantidad del polipéptido, a condición d ejo sea efectivo para mediar el eflujo de coles ez, para tratar enfermedades y síntomas asociad . Como se menciona previamente, se ha endentemente que cuando los polipéptidos de" la ción son acomplejados con, por ejemplo, rciones que fluctúan de aproximadamente imadamente 1:5 (polipéptido : POPC) , se forman par o-polipéptido distintas que tienen tamaños imadamente 5 y aproximadamente 20 nm, que da res idad significativamente mejorada, esto es, hábi ción pueden ser fabricados mediante cualqui ido para aquel de habilidad en el arte. En algú eseable mezclar el lipido y el polipéptido an istración. Los lipidos pueden estar en solución liposomas o emulsiones- formadas utilizando dar, tales como homogenización, sonificación o nificación es en general efectuada con un soni , tal como un sonificador de punta Branson, en . Comúnmente, la suspensión es sometida a varios icación. La extrusión se puede llevar a cabo sores de biomembrana, tal como el Extr mbrana Lipex (Lipex Biomembrane Extrusor, Inc. á) . El tamaño de poro definido en los filtros de ' generar vesículas liposomales unilamelares d íficos. Los liposomas pueden también ser formado sión por medio de un filtro de cerámica asimé variedad de métodos bien conocidos para imentados en el arte pueden ser usados para pr ejos de polipéptido-lipido . Un número de nibles .para preparar liposornas o proteoliposom usadas.- Por . ejemplo, un- polipéptido de la ción (por ejemplo, polipéptido de 3N0S: 1-30, po >lipéptido de SEQ ID NOS: 1-26 ó 31-33, pued icado (utilizando un baño o sonificador de sond o apropiado para formar los complejos de po o. En ciertas modalidades, el polipéptido nado con vesiculos de lipido preformados d tado la formación espontánea de un coi éptido-lipido. En otra modalidad, el cor éptido-lipido puede también ser fabricado me o de diálisis de detergente. En este método, polipéptido, lipido y un detergente, tal como métodos son revelados por ejemplo, en las ounidenses Nos. -6, 004, 925, 6, 037, 323 y 6, 046 anzas de todas las cuales son incorporadas en l referencia en su totalidad. Otros métodos para p complejos de polipéptido-lipido serán evide íos de habilidad en el arte.

En una modalidad preferida, los comp éptido-lipido pueden ser fabricados enización .

En un aspecto adicional, la invención p cula de lipido sintética que comprende un poli invención. Tal partícula puede ser usada istración de un agente terapéutico o a óstico. En algunas modalidades, un .polipépti ción es un componente de una partícula de LDL tras modalidades, el polipéptido de la invenc s) .

En algunas modalidades, la partícula tica comprende un antibiótico o fármaco miento de una infección. Tal agente puede inclu ióticos o antimicrobianos (por ejemplo, antiba úngales y antivirales) .

En modalidades adicionales, una partícula tica que comprende un péptido de la invención cor e para el tratamiento o diagnosis de cáncer o el tratamiento de .una alteración del sistema ner ??,- una partícula sintética que comprende un pé escribe en la presente puede ser administrad miento o diagnosis de tumores o para el trat osis de cánceres de célula . de sangre. Los tumore nomas y sarcomas. Cánceres ejemplares que p dos incluyen cánceres del riñon, pecho, pulmó En algunas modalidades, la partícula tica de la presente invención es usada pa medades del sistema nervioso central. En idades, la enfermedad del sistema nervioso c cionada del grupo que consiste de rovascular, epilepsia, trauma de la cabeza, (por ejemplo, disfunción cognoscitiva asocia gitis provocada por picornavirus , togavirus, , paramixovirus y areanavirus) , infección bacte ío, meningitis tal como meningitis cript gitis bacteriana fulminante, neurotub lasmosis y neurosífilis ) , inyecciones fung ttsia, de protozooarios o helmínticas, enfe imer, enfermedad de Parkinson, esclerosis m medades metabólicas hereditarias del cerebro.

Tales partículas sintéticas pueden ser adm culas que pueden no comprender lipidos, que pued usadas para la administración de agentes de dia es terapéuticos como se describe anteriormente, rticulas que pueden no ser a base de lipido son ejemplo, en la publicación de solicitud d ounidense Nos. 20070128290 y 20050238725 -y r itas en las mismas. Por ejemplo, un pépti ción puede · ser empleado como un componente solub es- adsorbido a o asociado con la superfici cula que comprende un agente terapé ósticamente activo. Tales partículas son en g de aproximadamente 1000 nm o 500 nm de diámet roximadamente 200 nm de diámetro. En otras modal cula es de aproximadamente 80 nm de diámetro. idades la partícula es menor de aproximadamente tro. terol . similares a las apolipoproteinas de eta, en una base por molécula y que ti tividad por ABACI de manera similar a las apolip ngitud -completa,< .los polipéptidos incluyen, per ados a, los polipéptidos- que tienen una sec ácidos que comprende SEQ ID NOS: 1-33.

En ciertas modalidades, los ácidos nucl ican los polipéptidos de la invención son us fección de células in vitro e in vivo. Est icos pueden ser insertados a cualquiera de un res bien, conocidos para la transfección d ivo y organismos como se describe posteriorme nte. Los ácidos nucleicos son transfectados a c o in vivo, por medio de la interacción del ve a objetivo. Los ácidos nucleicos, bajo el cont tor, expresan luego un polipéptido de la propensas a tratamiento por otras terapias ión de procedimientos de terapia genética, véase ce, 256:808-813 (1992); Nabel et al., TIBTECH, 1 ); Mitani et al., TIBTECH, 11:162-166 (1993); ce, 926-932 (1993); Dillon, TIBTECH, 11: 167-1 r, Nature, 357:455-460 (1992); Van Brunt, Biot :1149-1154 (1998); Vigne, Restorative Neur science, 8:35-36 (1995); Kremer et al, Britís tin, 51(1): 31-44 (1995).; Haddada et al., in Curr icrobiology and Immunology (Doerfler & Bohm eds . u et al., Gene Therapy, 1:13-26 (1994)).

Para la administración de ácidos nucleicos, vectores virales-. Vectores apropiados incl ío, vectores de virus de herpes simplex como s lley et al., Curr. Gene Ther. , 1 (4): 339-58 (200 irus y replicones de partículas como se describ sistemas de vector de virus adeno-asocia iados pueden ser construidos fácilmente cas bien conocidas en el arte (véase, por ejempl ounidenses Nos. 5,173,414 y 5,139,941; publicaci WO 92/.01070 y WO 93/03769; Lebkowski et al., , 8:3988-3996 (1988); Vincent et al. (1990) Va Spring Harbor. Laboratory Press) ; Cárter, Curre otechnology 3:533-539 (1992) ; Muzyczka, Current biol, and Immunol, 158:97-129 (1992); Kotin, py, 5:793-801 (1994); Shelling et al., Gene -169. (1994); y Zhou et al., J. Exp. Med. , 179: )). Vectores apropiados adicionales incluyen cantes gen-atenuados de E1B descritos en por ej l., Cáncer Gene Ther., 9(9): 725-36 (2002) y ve virus no replicante descritos en, Pascual e ol, 160 (9) : 465-72 (1998). Vectores ejemplares plataforma conveniente y efectiva para si istración de- gen. Una secuencia de n cionada que codifica un polipéptido de la in tada a , un vector y empacada en partículas re zando técnicas conocidas en el arte. El virus re luego ser aislado y administrado a un sujeto* Vectores apropiados incluyen vectores le se describe en por ejemplo, Scherr et al., , 2(1): 45-55 (2002). Sistemas retrovirales il onales han sido descritos (por ejemplo, ounidense No. 5,219,740; Miller et al., BioT -990 (1989); Miller, Human Gene Therapy, 1:5-a et al, Virology, 180:849-852 (1991); Burns et Acad. Sci. USA, 90:8033-8037 (1993); y Boris-Law Opin. Genet. Develop. , 3 : 102-109 (1993).

Otros sistemas de administración a b 90: 11498-11502 (1993); Guzman et al, Ci 38-2848 (1993); Guzman et al,, Cir. Res., 73 ); y Lotze et al, Cáncer Gene Ther. , 9 (8): 692-9 SO COMO HERRAMIENTAS DE INVESTIGACIÓN Y EN M OSIS Los polipéptidos y peptidomiméticos de la también útiles como herramientas de investiga ío, lo . polipéptidos o peptidomiméticos de la n ser usados para investigar interacc roteina-receptor en animales y modelos de cularmente cuando un polipéptido o peptidomim es marcado con una porción detectable, por ej dor radioactivo, un marcador fluorescente, etc olipéptidos de la invención pueden también ser u ificar modelos de animales .apropiados para eluc as y tejidos que expresan ABCA.

En otras modalidades, los polipép domiméticos de la invención pueden ser usados diagnosticar enfermedades y alteraciones asoc o - de colesterol aberrante o con ABCA. Por eje dos pueden ser usados en análisis para di iencia - de transporte de colesterol inversa ificar individuos predichos para ser respond miento de péptido. Tales análisis de diagnóstic sis' in vitro. .Por ejemplo, el eflujo de colest evaluada en un análisis en el cual un polipépt ción, por ejemplo, cualquiera de NO: 1-33, es me a de un sujeto y expuesto a células para indi o responderla al tratamiento (por ejemplo, un e en eflujo en presencia del péptido en comparac o moderada por el plasma en ausencia del pépti porción detectable y administrados a un su lo, un mamífero tal como un humano) . La detecc ón detectable permite la formación de image a, tejido u órgano de interés, en los que se inc lo, una lesión aterosclerótica o una placa amilo El término "formación de imagen" se ref dimiento o modalidad para generar una image ón detectable in vivo, ex vivo, o in vitro ibe en la presente o es conocido para aquel de l arte. Ejemplos de modalidades de formación yen, pero, no están limitadas a, resonancia ancia magnética nuclear, radioscintigrafía, tom ón de positrón, tomografia computada, fluores rrojo cercano, rayos X, ultrasonido, luz ultr visible (véase, por ejemplo, Dahnhert, Radiolo l (4th ed. 1999); Brant et al, Fundamentáis of ido para aquel de habilidad en el arte. Como se nte,- la porción detectable . puede estar enlazada ectamente .a un polipéptido o. peptidomiméti ción. - Un enlazador puede servir para en éptido o · peptidomimético a una porción d nativamente, un enlazador puede enlazar el pol e una porción detectable. Asimismo, una porción ser enlazada a más de un enlazador. El us lidad de porciones detectables anexadas a un p te que la detección de la porción detec mentada (por ejemplo, al incrementar su radi nicidad o capacidad de relajación) o alterna permitir que el polipéptido sea detectado en idad de formación de imagen.

El enlace de una porción detectable a un p tidomimético de la invención puede ser obtenid ío, que contienen brazos separadores gradables o químicamente sensibles o que incorpo cisión enzimáticos son usados. El enlazador par n aspecto crítico de la invención. Cualquier ido en el . arte puede ser usado en tanto que se éptido o ' peptidomimético y la porción ntamente por un período apropiado, esto es, u íente para que - el polipéptido y objetivo dés tados.

Las porciones detectables usadas en los mét nte invención pueden ser cualquier porción ción ya sea directa o indirectamente en un pró rmación de imagen descrito en la presente o con de habilidad en el arte. Por ejemplo, las ones detectables pueden ser usadas: porciones qu ede provocar que emitan radiación detectable (po burbujas de gas) .

Un intervalo muy amplio de materiales d nte modalidades de formación de imagen son con y la porción detectable será seleccionada de a odalidad de formación de imagen a ser usada, ío, para formación de imagen - de ultrasonido, u nico .o un material apto de generar un material I normalmente seleccionado; para formación de X, la. porción detectable será en general o co pesado (por ejemplo, de peso atómico 38 o ma ción de imagen de MR imagen, la porción detecta a un isótopo de espin nuclear no cero (tal como ial que tiene espines de electrones desapareados edades paramagnéticas, superparam magnéticas o ferromagnéticas ; para formación de la porción detectable será un dispersante de óstico incluyen, por ejemplo, partículas de o magnéticas, vesículos que contienen gas, agnéticos quelados (tal como Gd, Dy, Mn, Fe, etc ejemplo, patentes estadounidenses Nos. 5,228, 44 4,863,715; 4,770,183 -y 5,387,080; publicación d 7/25073., WO 96/09840, O 85/02772, WO 92/ 783, WO 91/15243, WO .93/05818, WO 96/23524, WO 6/17628; EP-A-554213; . y GB 9624918.0; radionú ,. iones de metal paramagnéticos, iones escentes, iones de metal pesado y grupo de ione ibe en la publicación de PCT No. WO 91/14460, WO 92/17215, WO 96/40287 y WO 96/22914; y ounidenses Nos. 4,647,447, 5,367,080 y ones atómicas de no metal tales como por ejemplo y átomos pesados tales como I; porciones crom ofóricas orgánicas como se describe en Matsuoka, 628; tintes visibles como se describe en, W s, The Chemistry and Application of Dyes, ed Chemistry (1990); Haugland, Handbook of F s and Research Chemicals (6th ed. 1996).

Ejemplos . de modalidades de formación iadas para detectar la porción detectable en do incluyen, pero no están limitadas a, tica, resonancia magnética nuclear, radi'osci rafía de emisión de positrones, tomografía escericia de infrarrojo cercano, rayos X, ultras violeta, o luz visible, en donde la imagen de table es indicadora de la actividad de una celular específica (véase, por ejemplo, logy . Review Manual (4th ed. 1999) ; Brant mentáis of Diagnostic Radiobiology, (2nd e leder et al, Primer of Diagnostic Imaging, (2nd os y son aptos de ejercer efectos indeseabl idos después que el . procedimiento de formación terminado, puede ser deseable diseñar biodegrada ador que asegura la bioeliminacion apropiada o r ólico del polipéptido y/o porciones detectables ador puede, contener una función biodegradable miento produce productos de rompimiento con pa stribución modificados que resultan de la libera ón detectable del polipéptido o de la fragmentac ctura macromolecular . A manera de ejemp adores que portan porciones de ion de metal q le tener el enlazador que incorpore una gradable que en el rompimiento libere un compues table que contiene la porción detectable. Asi, gradables pueden ser incorporadas, si se desea, tructura del enlazador, preferiblemente en siti idad -preferida, la presente . invención provee kit miento, esto es, .mejora, de uno o más si sclerosis o para el tratamiento profiláctico de ejemplo, humano o. animal) en riesgo de ateroscle comprenden preferiblemente un recipiente que co s. .de los polipéptidos (o peptidomiméticos) ción. El polipéptido o peptidomimético puede se na formulación de dosificación unitaria (por ta, capleta, parche, supositorio, etc.) y/o nalmente combinado con uno o más excipientes céuticamente .

El kit puede comprender opcionalmente uno agentes usados en. el tratamiento de una enf ción asociada, con dislipidemia, hipercoleste mación (tal como enfermedad del cora sclerosis) . Tales agentes incluyen, pero ción. Materiales instruccionales preferidos des de uno o más polipéptidos o peptidomiméticos ción, pór ejemplo, para mitigar uno o más si osclerosis y/o para impedir el inicio o increme s de tales síntomas en un individuo en osclerosis. Los materiales de instruccione én, opcionalmente, enseñar dosificacion éutico preferido, contra indicaciones y los semej .. . En ¦ tanto · que los materiales instru enden comúnmente materiales escritos o impresos, ados a tales. Cualquier medio capaz de almace ucciones y comunicarlas a un usuario final es c esta invención. Tales medios incluyen pero ados a medios de almacenamiento electrónico (p s magnéticos, cintas, cartuchos, chips, etc. os (por ejemplo CD-ROM) y los semejantes. Tal ' ¦ ' ¦ * , '¦ _ + EJEMPLOS lo 1 idad de eflujo de colesterol de péptidos de 22-m Los péptidos son( enlistados en grupos que os en composición efectuados para increm encia. en estimulación el eflujo de colesterol ecuencias son identificadas por números que corr úmeros de lote de síntesis.

N257-1.1 corresponde a un péptido de 22-me samente con actividad biológica. La secu ácidos · del ¦ péptido. N257-11 es ELREKLEA REA ra 1, que muestra un diagrama de rueda hélic do) . El eflujo .de colesterol de ABCAl estimulada n en general alta capacidad, aunque altas conce n requeridas para la actividad y asi el pépti encia de eflujo débil. % de efusión de colesterol (8 horas) in cAMP 0.9 i ±0.1 El péptido estimula la efusión de colesterol d + cAMP ó,99±l.4 Km Aproximadamente 10-20 µ{ ?1 ío 2 idad de eflujo de colesterol de los péptidos r y 22-mer Los péptidos que comprenden la serie N3 nados con. sustituciones de aminoácido para incr encia de eflujo de colesterol del péptido orig Se propuso una sustitución (R10?F, péptido N35 der la superficie no polar a 140 grados; esto e los puentes de sal supuestos en el péptido ori os produjeron péptidos que fueron más potentes q stimular el eflujo de colesterol, aunque las dencia de la concentración mostraron una resp de residuos de completamente leucina para reemp úos completamente de fenilalanina .

A. Serie de péptidos número : N356 Los péptidos de 20-, 21- y 20-mer basa o de N257-11 Sustituciones diseñadas para increme encia de eflujo de colesterol.

EKLE AWRE AF.EEFFARFKS Secuencia de N257-11 original (enlistada ante uencia número de serie número de aminoácidos REKLEAWFEAFEEFFARFKS N356-1 22-mer REKXJEÁ XVRELFEEFFÁ RFKS N356-2 22-mer EK^EA FE^FEEFFARFKS N356-3 22-mer E LEAWFELFAEFFARFKS N356-4 22-mer EKLEAWFELFAEFFARFK N356-5 21-mer REKLE A WFELFAE FFARF N356-6 20-mer RAKLEAWFEAFAEFFARF N356-7 20-mer Los residuos subrayados representan Dependencia de la concentración (eficiencia lesterol) de efusión de colesterol / 4 horas ?5 -2 M356-3 M3.56-5 g/ml . i 0 0 0 0.14 0.02 0.0 i 0 0 0.57 0.61 0.31 Ó.23 .0 0.23 0,02 1.20 1.89 i ,59 0.67 4.7? ? 30 4.34 5.6S 4.27 4.07 0 5,6] 5.70 5.13 6.06 3.5 3.78 O 3.50 5.92 3.24 6.52 3.20 351 . Serie de péptido : N965 Los péptidos de 22-, N257-11 y N365 uencia número de serie número de amino REKLEAWFEAFREFAERFKS N965-I 22-mer REKLEAWFELFREFAERFKS N965-2 22-mer REKLEAWFELFREFAERFLS N965-3 22-mer ¾E LEAWFELFREFLERFKS N965-4 22-mer REKLEAWFELFREFLERFLS N965-5 22-mer efusión de colesterol / 8 horas N965-1 N965-2 N965-3 N965-4 963-5 N965-6 N965-7 N965-8 MP 1.75*0.20 1.2JH0.18 1 ,45±0.12 1.52 0.07 2.91±0.44 3.15±0.36 1.50*0. 14 2.29±0.16 MP 9.90 1.04 6.97*0.77 3.85*0,65 4.7í>±0.33 5.52±0.38 6J 8±0.34 4.03*0.37 5.26*0,95 pendencia de la concentración (eficiencia de efusión de colesterol) de efusión de colesterol / 4 horas N965-1 N965-2 N965-3 N965-4 . 965-5 N965-6 N965-7 N965-8 0 0 0.23 0.29 0.12 0. 1 0.03 0.15 0.13 0.13 0.47 0.67 0.90 0.49 0.30 0.52 0 0.01 1.06 2.70 2.13 1.59 1.39 1.72 0.44 2.23 3.48 4.72 4.89 1.98 4.94 4.60 2.90 5.96 3.05 4.00 4.06 3.65 3.62 6.01 3.98 2,53 2.94 3.82 2.75 2.66 3.66 Serie de péptido número : NI 154 Péptidos de 20-mer basados en N965 -8 L EKLEAWFELFREFLE F original N965-8 (ATI-185 Secuencia número de serie número de aminoácid ELRERLE AWFE LFREFLERF NI 154-1 20-mer ELRDKLEAWFDLFREFLERF ?? 154-2 20-mer DLRDKLBAWFDLFRDFLttRF N 1 154-3 20-mer ELRDRLE AWFDLFRE FLERF NI 154-4 20-mer DLRDRLDAWFDLFRDFLDRF N I 154-5 20-mer % de efusión de colesterol / 8 horas NI 154-1 NI 154-2 N 154-3 NI 1.54-4 ÑU Sin cAM? 1.85*0.28 1.47±0.15 1.61*034 2,59*035 3.06 Más cAMP 5.20*0.25 3.00*0.21 3.29*044 1 1.4*0.70 9.8*8 Dependencia de la concentración (eficiencia de efusión de colesterol) % de efusión de colesterol / 4 horas NI 154-1 NI 154-2 NI 154-3 NI 154-4 NI 1 µgml 0.1 0.10 0.03 0 0 0 0.3 0.41 0.51 0.19 1.30 1.92 1.0 2,06 2, 17 1.3 i 3.51 2.77 3.0 5J 1 2.59 2.66 4J4 5.28 10 4.44 2.14 2.12 5.02 5.29 30 3.Ó7 1.66 2.21 3.65 3.53 Péptádos N1154 6-11:. Datos de eflujo de ófagos J774 + cAMP, regula ascendentemente ABCAl) de efusión de colesterol / 8 horas Ni 154-6 Ni 154-7 Ni 154-8 NI 154-9 N1 154- 10 N cAMP U7±0.09 1 ,23*0.10 1.3 i±0t08 1.8R0. Í4 2.66±0.41 4. s cAMP 4.29*0.68 4, 14±Ü.84 4.38*0.43 4.83*032 835*0.33 . 9.

Dependencia de la concentración (eñciencia de efusión de colesterol) % de efusión de colesterol / 4 horas NI 154 6 N1 I 54-7 N I 154-8 ?? 54-9 N1154- 10 ra un diagrama de rueda helicoidal que m aleza anfipática del péptido. El panel B m ama de rueda helicodal que muestra el péptido c je longitudinal de la superficie polar y apla los sombreados indican aminoácidos ácidos y lo almente sombreados residuos catiónicos. Los n paneles se refieren a la secuencia pr ácidos . ío 4 Este ejemplo muestra la actividad de terol de SEQ ID NO: 2 contra apo A-I de longitud fagos J774 marcados con [3H] colesterol fueron u ar la actividad de eflujo de colesterol de pépt nte invención. Células J774 depositadas sobre vo de 24 cavidades fueron marcadas (48 horas co ? células tratadas con cAMP. El porcentaje terol celular que apareció en el medio a 8 ado, restando el eflujo de fondo al medio libre . Los valores son las medias ± SD apo A-I, n= péptido, n=3. Los. valores de Km reflejan la efic stimulación de eflujo de colesterol fueron entos de programación Prism 4) de curvas de depe oncentración utilizando la ecuación de Michaeli de eflujo de 4 horas. El péptido de SEQ ID NO: eflujo de colesterol~5 veces más eficiente ración con apo A-I en una base en masa (Km = a apo A-I Km = 3.4 ± 0.6 yg/ml, respectivamente molar, la eficiencia de eflujo del péptido alente a apo A-I (Km = 0.26 ± 0.11 contra apo A- .

El panel B de la Figura 3 muestra que el Este ejemplo demuestra que un análogo de ID NO: 2 con residuos de KS agregados al término lujo de colesterol de ABCA1, similar al péptido de 20-mer.

NO:2 ELREKLEAWELFREFLERF NO:31 ELREKLEAWFELFREFLERF S Células J774 marcadas con [3H] colesterol cAMP (0.3 mM) fueron enjuagadas y expuestas a s de lipidos en un medio libre de suero, como s 1 ejemplo 4. Los resultados son mostrados en la orcentaje de [3H] colesterol celular que apare (8 horas) en respuesta ya sea al péptido {barras abiertas) o el péptido de SEQ ID NO: 3 eadas) es mostrado. Los valores son de imento. Se usaron cavidades por duplicado Células J774 marcadas con [3H] colesterol y tidos como se describe en el ejemplo 4. El panel estra el porcentaje de [3H] colesterol celular q i medio (8 horas) en respuesta a los péptidos SEQ ID NO: 32 y SEQ ID- O: 33 Los péptidos fueron libre de lipidos a 30 µ?/??? de medio libre s es son de un solo experimento, utilizando cavi icado para cada péptido/condición. Se muestran . Los péptidos estimularon relativamente altos o de colesterol de células inducidas para la re (esto es ± cAMP, .barras- sombreadas), en compa niveles sin cAMP (barras abiertas) . El panel B dencia del eflujo de colesterol sobre la concen éptidos de SEQ ID NO: 32 y SEQ ID NO: 33. Se usar das con cAMP. Los valores son de un solo exper ades. por duplicado para cada condición. dos de SEQ ID N0:2 (20-mer) y SEQ ID N0:31 (22 ene cada · uno valina (V) por leucina (L) en pos ncía primaria. Los péptidos fueron usados en f ipidos a 30 µg/ml de medio libre de suero. Los v n solo experimento, utilizando cavidades por .cada péptido/condición. Se muestran las medias dos estimularon relativamente altos niveles de terol de células inducidas para la respuesta es, ± cAMP,. barras sombreadas) , en comparación es sin cAMP (barras abiertas) . El panel B provee ran la dependencia del eflujo de colesterol ntración de péptidos (indicado por la leyenda) ; as tratadas con cAMP. Los valores son de imento con- cavidades por duplicado para cada con ío 8 ció en el medio (8 horas) en respuesta a los pé do testigo corresponde a SEQ ID NO: 31 que contie osición 2 (cuadrados) ; este péptido contiene un úos de leucina (L) . Los péptidos con 3 y 4 n actividad de fusión de colesterol idéntica es SEQ ID N0:2) con y sin L2>V) . En contr dos con menos de 3 residuos de L estimularon el terol deficientemente. El- panel B provee ran la dependencia del eflujo de colesterol ntración de péptidos. Como se indica, el úos L hidrofóbicos confirieron eficiencia de terol para el péptido de la presente invención; as tratadas con cAMP. lo 9 Este ejemplo demuestra que los péptid un péptido que muestra una superficie no úos completamente · L (excepto W9) . Los resul ados en la Figura 8. El panel A muestra el por colesterol celular que apareció en el medio (8 esta al péptido de SEQ ID NO: 2 contra SEQ ID tuciones F>L. El panel B muestra un experimento en el panel. A, excepto . que se usó un péptido con- sustituciones F>I . Los péptidos en ambos pan n usados en forma libre de lipidos a 30 µq/ l de suero. El panel C muestra la dependencia del terol sobre la concentración de péptidos, indica ulación del eflujo de colesterol de ABCA diente de residuos aromáticos (fenilalanina) ; as tratadas con cA P. ío 10 sustituciones L>F en posiciones 2, 6, 12 y 17 do que muestra una superficie no polar con úos F (excepto W9) . Los resultados son mostra a 9. El panel A muestra el porcentaje de [ H] ar que apareció en el medio (8 horas) en res do de SEQ ID NO: 2 contra SEQ ID NO: 2 con sus Los péptidos fueron usados en forma libre de li de medio, libre - de suero. El panel B m dencia del eflujo de colesterol sobre la concen do de SEQ ID NO: 2 con y sin sustituciones L>F; as tratadas con cAMP. ío 11 Este ejemplo demuestra que residuos de alanina de péptidos de la invención pu lazados con isoleucina sin afectar advers pto W9) . Los resultados son mostrados en la Fig A muestra el porcentaje de [3H] colesterol ce ció en el medio (8 horas) en respuesta al pépti :2 contra SEQ ID NO: 2 que tiene sustituciones L> usaron péptidos en forma libre de lipido ntración de 30 µg/ml de medio libre de suero. ra la dependencia del eflujo de colesterol ntración de péptidos de SEQ ID; NO: 2 co tuciones de isoleucina, como se indica en la l n células tratadas con cAMP. ío 12 Este ejemplo demuestra que arginina ivamente,. se puede sustituir por lisina ivamente en péptidos sin afectar adversamente la estimular el eflujo de colesterol de ABCAl. pendencia del eflujo de colesterol sobre la con éptidos de SEQ ID NO: 2 con- y sin sustitución de n células tratadas con cA P. ío 13 Este ejemplo demuestra que el ácido aspárti ivamente puede ¦ sustituir al ácido glutámic ivamente - - en los péptidos presentes sin samente la habilidad para estimular el e terol de ABCA1.

Células J774 fueron .marcadas con [3H] coles scribe en el ejemplo 4. Se llevaron a cabo exper tuir ácido aspártico (D) por ácido glutámico (E) iones 4, 11 o posiciones 4, 11 más 1, 7, 15, 1 ficie polar del péptido de SEQ ID NO: 2. El últi do mediante el cual todos los residuos ' ácid lo 14 Este ejemplo demuestra que los residuos tico y ácido glutámico son intercambiables en ea uno u otro pueden ser usados en combinación tuciones de aminoácidos.

Células J774 · fueron marcadas con [3H] coles scribe en el ejemplo 4. Se llevaron a cabo exper tuir ácido aspártico (D) por ácido glutámic iones 4, 11 o posiciones 4, 11 más 1, 7, 15, 1 ficie polar del péptido de SEQ ID NO: 2 o el pépt : 2 que tiene varias otras sustituciones, tales c los residuos de leucina (esto es FIO, 13, 16, tados son presentados en la Figura 13. Se usaro orma libre de lipidos a 30 µg/ml de medio libre estran datos de células tratadas con cAMP. Los expresados como porcentaje de actividad de c l intercambiar posiciones de 9 y L12 (cambio de éptido .de SEQ ID NO: 2 o al sustituir fenilalani na (L) en posición 12 (L12>F) en el péptido de S tomar el péptido de L12>F correspondiente e in úos de F12 con 9 (esto es, cambio de W9<-> tuciones de aminoácidos indicadas en el péptido fueron también diseñadas al péptido de SEQ ID enen. la sustitución de L2>V como se describe en OS resultados son ' mostrados en la Figura 14. E ra el . porcenta e de [3H] colesterol celular qu i medio (.8. horas) en respuesta al péptido de S a el péptido de SEQ ID NO: 2 con sustitu ácidos indicadas. El panel B muestra un e ar a aquel efectuado para el panel A, excepto péptidos a base de SEQ ID NO: 2 fueron constr tuciones E4,11>D y K5>R. Los péptidos (panele bilidad para estimular el eflujo de colesterol d Células J774 fueron marcadas con [3H] coles escribe en el ejemplo 4. Se llevaron a cabo ex zando el péptido de SEQ ID NO: 2 compuesto ácidos. completamente D o al invertir la sec ácidos primaria. Los resultados son mostrados en La Figura 15 muestra el porcentaje de [3H] ar que apareció en el medio (8 horas) en res do de SEQ ID N0:2de. control (L-aminoácidos ) con compuesto de D-aminoácidos y el peptidomi ncia inversa (L-aminoácidos) . Los péptidos fue rma libre de lipidos a 30 µg/ml de medio libre d ío 17 Este ejemplo demuestra que las sustitu na sobre la superficie polar incrementan favorab ID NO: 2 contra SEQ ID NO: 2 con intercambio' de E cambios · (E4<>A8 y EII0A8) disminuyeron la act o del péptido de SEQ ID NO: 2, indicando que A e ne importancia para la actividad. El panel B m tados de un experimento similar a aquel para el to que los péptidos de SEQ ID NO: 2 con sustitu n utilizados. Los péptidos (paneles A y B) fue rma libre de lipidos a 30 µ?/p?? de medio libre anel. C muestra la dependencia del eflujo de la concentración del péptido de SEQ ID NO: 2 y p ID NO: 2 con - úmeros incrementados de sustitució la . superficie polar. Las sustituciones d les B, y^ C) incrementaron extensamente la habi do de SEQ ID NO: 2 para estimular el eflujo de BCA1 eficientemente. Esto contrasta con los ientes (actividad de eflujo disminuida) ibe en el ejemplo 4. Se llevaron a cabo exper tuir alanina (A) por arginina y ácido glu iones 14 y 18, respectivamente, que representan uente supuesto. Las sustituciones fueron diseñ do de SEQ ID NO: 2 con la sustitución L17>F con resultados, son mostrados en la Figura 17. El ra¦ el . porcentaje de [3H] colesterol celular qu medio (8 horas) en respuesta a los péptidos. Lo n usados en forma de libre de lipidos a 30 µg/m de suero. El panel B muestra la dependencia del terol, sobre la concentración del péptido de SE sustituciones de alanina (como se indica) . E ulo el colesterol a alta eficiencia (esto e a a 3 µg/ml) similar al péptido de SEQ ID NO: ras 3 y 4) .

Un péptido de 20-mer correspondiente a SE rito en el ejemplo 13) fue formulado con 1-pa l-fosfatidil colina (POPC) utilizando un proced sis de colato modificado. Los resultados de un e evalúa el eflujo de colesterol son mostrados en El panel A muestra una fotografía de gel que de o de partícula de complejo de péptido: POPC de nte electroforesis de gel de gradiente no desnat %). El carril 1 corresponde a complejos de pépti arril 2 a péptido libre de lípidos. El panel B idad de eflujo de colesterol de los complejos d tal como se juzga utilizando macrófagos de J77 [3H] colesterol . y tratados con (barras sombread (barras abiertas) .¦ Por propósitos comparativos, lujo de colesterol en respuesta al péptido de SE de lípidos. La .concentración del péptido libre Ratones macho deficientes de apolipoproteí a siete semanas de edad fueron alimentados con ental de alto contenido de grasa por un tot as. Durante las últimas 6 semanas con la diet nido de grasa, los ratones recibieron i peritoneales (ip) un día si y un dia no ya sea d a ¦ (testigo) o el péptido de SEQ ID NO: 12 for La dosis de péptido: POPC fue de 30 mg/kg ral en base a la masa del péptido. Los resulta ados en la Figura 19. El panel A provee datos qu xtensión de arterosclerosis en ratones testigo dos con péptido, expresado como porcentaje rta con lesiones. El panel B muestra el con o de la placa sinus aórtica, determinada media eite rojo O. Los valores son las medias ± SEM, n rupo en ambos paneles. dos testigo y péptidos tratados con acroleina fu zados u usados para los experimentos de terol. Los resultados de este experimento son mo igura 20. El panel A muestra la actividad de terol del péptido de SEQ ID NO: 2 incubado eína. La acroleina disminuyó extensamente la act éptido de SEQ ID NO: 2. El panel B muestra la ac o de colesterol del péptido de SEQ ID NO: 12, q os modestos de acroleina. Macrófagos de J774 tr que regula ascendentemente ABCA1, fueron usado es. Se llevaron a cabo análisis de eflujo de zando péptidos a 2 µg/ml de medio libre de suero. ío 22 Los péptidos de la invención inducen la fo e pre-beta-1 en plasma humano via un mecanismo geles resultantes fueron transferidas a nitroc zadas mediante análisis de Western-blot util uerpo apo A-I. Los resultados son mostrados en a distribución de sub-poblaciones de HDL en plas vehículo solo (barras abiertas), péptido de SE esto de aminoácidos completamente D (sombreado i tido de SEQ ID NO: 2 compuesto de aminoácidos com mbreado oscuro) son mostradas. El tratamiento d jo incremento preferencial en HDL de pre-be ciones de sub-poblaciones de alfa-HDL indica dos interactúan específicamente con distintas e ara generar partículas de apo A-I pre-beta-1.

Se comprenderá que la descripción anterio ilustrativa y no descriptiva. Muchas modalida ntes para aquellos de habilidad en el arte des ra de la descripción anterior. Por consigu

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES 1. Un polipéptido aislado caracteriza ende la siguiente secuencia de aminoácidos: • X1X2X3 4 5 6X7 8X9X10 11 12X13X14 15 15 17X18X19X20 (SEQ ID N0:1) en donde: Xi, X7 y Xi5son ¦ aminoácidos sel endientemente del grupo que consiste de E y D; X4, X11 y X18 son aminoácidos sel endientemente del grupo que consiste de E, D, A X2, sr ^9 XiOf Xi2r i3 Xi6/ Xi7 y X20 son aI cionados independientemente del grupo que consi I, V y A. X3, X5 y Xi9son aminoácidos sel endientemente del grupo que consiste de R, K y C; Xi es un aminoácido R, A, E o C y uiera de las reivindicaciones precedentes, car e X9 es L, F o W. 5. El polipéptido aislado de confor uiera de las reivindicaciones precedentes, car e por lo menos tres de las posiciones X2, X o son L. 6. El polipéptido aislado de confor uiera de las reivindicaciones precedentes, car e una o más posiciones X4, ?ß y X11 es A. 7. El polipéptido aislado de conformida ndicación 6, caracterizado porque XQ es A. 8. El polipéptido aislado de conformida ndicación 1, caracterizado porque X4 Xn cionados independientemente del grupo que consi 9. El polipéptido aislado de conformida nde : Xi, X7, i5y Xisson seleccionados independ rupo que consiste de D y E; X2 es L, I o V; X4 y X11 son . seleccionados independíentel que consiste de D, E y A; X3, X5 y X19 son seleccionados independient que consiste de K y R; X9 es W, F o L; X14 es R, E o A y X6, X10 i2 X13, ??ß ??7 y X20 son sel-endientemente del grupo que consiste de F, L, I 11. El polipéptido aislado de conformida ndicación 10, caracterizado Xio, 12/ X13, Xi6^ X17 cionados independientemente del grupo que consis X9 es F, L o W y Xio , X12 , X13 xi6 Xi7 Y X20 son sel endientemente del grupo que consiste de F y L. 13. El polipéptido aislado de conformida ndicación 10, caracterizado porque el polipépti ende : X1LRX4X5LX7AX9X10 11X12 13RX15X16X17X18RX20 ( SEQ ID en donde: Xi , X , X7 Xii X15 y Xi8 son sel endientemente del grupo que consiste de D y E; X5 es K o R; X9 es F, L o W y Xio Xi2 # X13 Xier Xi7 y X20 son sel endientemente del grupo que consiste de F y L. 14. El polipéptido aislado de conformida ndicación 13, caracterizado porque el p e comprende además X22 , en donde X22 es S o C. 17. El péptido aislado de conformidad ndicación 15, caracterizado porque X21 es K. 18. El péptido aislado de conformidad ndicación 17, caracterizado porque X22 es S. 19. El péptido aislado de conformidad I ndicación 16, caracterizado porque X21 o X22 es C. 20. El polipéptido aislado de confor uiera de las reivindicaciones precedentes, car e el polipéptido comprende además un grupo prote 21. El polipéptido aislado de conformida ndicación 20, caracterizado porque el grupo pr rupo protector seleccionado del grupo que co lo (Ac) , amida, grupos alquilo dé 3 a 20 no, Fmoc, t-butoxicarbonilo (Tboc) , grupo lo, grupo 1-fluoren carboxilico, grupo Bzl) , 2-cloro benciloxi carbonilo (2-C1-Z), 2-br carbonilo (2-Br-Z) , bencil oxi metilo (Bom) , ci (cHxO) , t-butoxi metilo (Bum) , t-butoxi (tBuO) , y trifluoro acetilo (TFA) . ': 22. . El polipéptido aislado de confor uiera de las reivindicaciones 20 o 21, car e el grupo protector es acoplado al término no carboxi. 23. El polipéptido aislado de conformida ndicación 20> 21 o 22, caracterizado porque el p ende un primer grupo protector acoplado al térmi gundo grupo protector acoplado al término carbox 24. El polipéptido aislado de conformida ndicación 23, caracterizado porque el pri ctor es un grupo protector seleccionado del ste de acetilo, propionilo y un alquilo de 3 a aminoácidos completamente enantioméricos son a 28. El polipéptido aislado de confor uiera de las reivindicaciones 1 a 26, caracteriz aminoácidos enantioméricos son una mezcla de ar aminoácidos "D". 29. El polipéptido aislado de confor uiera de las reivindicaciones precedentes, car e el péptido es enlazado a un segundo péptido ecuencia resumida en la reivindicación 1. 30. El polipéptido aislado de conformida ndicación 29, caracterizado porque el segund la misma secuencia como el primer péptido. 31. El polipéptido aislado de confor uiera de las reivindicaciones precedentes, car e el polipéptido tiene actividad de eflujo de co uiera de las reivindicaciones precedentes, car e el polipéptido protege a fosfolipidos de la n agente oxidante. 35. El polipéptido aislado de confor uiera de las reivindicaciones precedentes, car e el polipéptido- es mezclado con un portador céuticamente . • 36. Un peptidomimético caracterizado porque rmación tridimensional substancialmente simil éptido de conformidad con cualquiera ndicaciones 1 a 34. 37'. El peptidomimético de conformidad ndicación 36, caracterizado porque el peptidom álogo retro-inverso. 38. El peptidomimético de conformidad ndicación 36/ caracterizado porque el peptidom ovascular . 41. La composición de conformidad ndicación 40, caracterizada porque el agente t eleccionado del grupo que consiste de una est íñante de ácido biliar, un inhibidor de agrup etas, nicotiramida, un activador de PPAR, vit naciones de los mismos. 42. Una composición caracterizada porque co éptido de conformidad con cualquiera ndicaciones 1 a 34 o un peptidomimético de confo uiera de las reivindicaciones 36 a 38 complejo c 43. La composición de conformidad ndicación . 42, caracterizada porque el lípi lipido . 44. La composición de conformidad ndicación 43, caracterizada porque el fosfolíp 47. El método de conformidad con la reiv aracterizado porque el polipéptido estabiliza AB 48. El método, de conformidad con la reiv aracterizado porque el ABCA es ABCA1. 49. El método de conformidad con la reiv caracterizado porque el polipéptido tiene activ nte.. 50. El método de conformidad con la reiv caracterizado porque el polipéptido tiene activ matoria . 51. El método de conformidad con la reiv aracterizado porque el mamífero es un humano. 52. El método de conformidad con la reiv aracterizado porqueel mamífero es un mamífero no 53. Un método para el tratamiento de un osclerosis en un mamífero, el método está car 56. El método de conformidad con la reiv aracterizado porque el mamífero es un humano, 57. El método de conformidad con la reiv aracterizado > porque el mamífero es un mamífero n . 58. Un método para estabilizar una placa na pared de. lumen de · un mamífero, el mé terizado porque comprende administrar al ma éptido de conformidad con cualquiera ndicaciones 1 a 34. 59. El método de conformidad con la reiv caracterizado porque el mamífero es un osticado por tener una o más placas vulnerables. 60. El método de conformidad con la reiv caracterizado porque el mamífero es un osticado en riesgo por tener una o más placas vu 61. Un método para fabricar una va ctividad de eflujo de colesterol y/o acti ilización de ABCA. (e) seleccionar la variante de polipéptido o menos 80% de la actividad de eflujo de coleste éptidos y tiene una secuencia de aminoácidos y/o seleccionar la variante de polipéptido que enos 80% de la actividad de estabilización de éptido' que tiene secuencia de aminoácidos de SEQ (f) sintetizar la variante de p cionada . 62. El método de conformidad con la reiv caracterizado porque la variante de polipéptido o menos un aminoácido D. 63. El método de conformidad con la reiv caracterizado porque el término carboxi de la v éptido comprende un aminoácido D y el término a 66. El kit de conformidad con la reivindi terizado porque comprende además un portador céuticamente . 67. El kit de conformidad con la reivindi terizado porque el polipéptido es combinad dor aceptable farmacéuticamente en una formu icación unitaria. . 68. El polipéptido aislado de confor uiera de las reivindicaciones 1 a 34 o el pepti onformidad - con cualquiera de las reivindicacione uso como medicamento. 69. El polipéptido aislado de confor uiera de las reivindicaciones 1 a 34 o un pepti nformidad con cualquiera de las reivindicacione terizado porque se usa para el tratamient ación asociada con dislipidemia . colesterolemia . 72. El polipéptido aislado de confor uiera de las reivindicaciones 1 a 34 o el pepti onformidad con cualquiera de las reivindicacione terizado porque se usa para el tratamiento de in 73. El polipéptido aislado de confor uiera de las reivindicaciones 1 a 34 o el pepti nformidad con cualquiera de las reivindicacione terizado porque se usa en el tratam osclerosis- o en el tratamiento para impedir un osclerosis . 74. El polipéptido aislado de confor uiera de las reivindicaciones 1 a 34 o el pepti ríformidad con cualquiera de las reivindicacione terizado porque se usa para el tratam ilización de placa. 77. El ligando de afinidad detectable de c la. reivindicación 76, caracterizado porque el m cionado del grupo que consiste de tintes flúo es, tintes cromofóricos , . compuestos quimiolumi inas bioluminiscentes, enzimas, radioisótopos, xido de hierro magnéticas, vesículas que contie s cuánticos.