MX2010010417A - Biosensor con especificidad mejorada por un analito. - Google Patents

Abstract

Una matriz química para el uso en la determinación de la concentración de un analito en un fluido biológico incluye una glucosa deshidrogenasa, dinucleótido de nicotinamida adenina, una sal cuaternaria de alquilfenazina y una nitrosoanilina. La matriz química se utiliza con un biosensor electroquímico para determinar la concentración de un analito después de que ocurre una reacción dentro del biosensor, momento en el cual se completa un análisis para determinar la concentración. Un método para determinar la concentración de un analito utilizando la matriz química de glucosa deshidrogenasa, dinucleótido de nicotinamida adenina, una sal cuaternaria de alquilfenazina y una nitrosoanilina es otro aspecto que se describe. El método también presenta adicionalmente tiempos de prueba de cinco segundos o menos. Los métodos que utilizan la nueva matriz química pueden determinar fácilmente un analito tal como glucosa en la sangre en concentraciones de aproximadamente 20-600 mg/dL en un pH de aproximadamente 6.5 a aproximadamente 8.5.

Description

BIOSENSOR CON ESPECIFICIDAD MEJORADA POR UN ANALITO Descripción de la Invención La presente descripción se refiere en general a una matriz química y a métodos para medir la presencia y/o concentración de un analito en un fluido biológico. Más específicamente, pero no exclusivamente, la presente descripción se refiere a una matriz química y a métodos que incrementan la especificidad por un analito cuando se mide un analito con un biosensor electroquímico en presencia de sustancias interferentes . Como se utiliza en este documento, el término "matriz química" se refiere a una región física que contiene por lo menos una sustancia química que es capaz de reaccionar con un analito. La medición de la concentración de sustancias, particularmente en presencia de otras sustancias desorientadoras y bajo condiciones variadas, es importante en muchos campos. Por ejemplo, la medición de glucosa en fluidos corporales, tal como sangre, bajo condiciones variadas y en presencia de sustancias interferentes , es crucial para el tratamiento efectivo de la diabetes. El no controlar apropiadamente los niveles de glucosa en la sangre puede producir complicaciones extremas, que incluyen ceguera y pérdida de circulación en las extremidades, lo cual puede privar finalmente al diabético del uso de sus dedos, manos, REF: 213823 pies, etcétera. Las tiras de prueba se utilizan frecuentemente para medir la presencia y/o concentración de analitos seleccionados en muestras de prueba. Por ejemplo, una variedad de tiras de prueba se utiliza para medir las concentraciones de glucosa en la sangre para supervisar el nivel de azúcar en la sangre de personas con diabetes. Estas tiras de prueba incluyen una cámara de reacción en la cual se ha depositado una composición de reactivo. Las tendencias actuales en las tiras de prueba requieren muestras de prueba más pequeñas y tiempos de análisis de pruebas más rápidos. Un beneficio significativo se proporciona al paciente cuando se utilizan muestras de prueba más pequeñas, las cuales se pueden obtener de áreas menos sensibles del cuerpo, tal como el antebrazo. Adicionalmente , los tiempos de prueba más rápidos y más precisos proporcionan una conveniencia adicional y un mejor control del nivel de azúcar de la sangre del paciente. Se conocen varios métodos para medir la concentración de analitos, tales como, por ejemplo, glucosa, en una muestra de sangre. Estos métodos se encuentran típicamente dentro de una de dos categorías: métodos ópticos y métodos electroquímicos. Los métodos ópticos involucran generalmente la espectroscopia de reflectancia o absorbancia para observar el cambio de espectro en un reactivo. Estos cambios son causados por una reacción química que produce un cambio de color que es indicativo de la concentración del analito. Los métodos electroquímicos involucran generalmente respuestas amperimétricas , coulométricas, potenciométricas y/o conductivas que son indicativas de la concentración del analito. Véase, por ejemplo, las Patentes de los Estados Unidos Nos. 4,233,029 de Columbus; 4,225,410 de Pace; 4,323,536 de Columbus; 4,008,448 de Muggli; 4,654,197 de Lilja y colaboradores; 5,108,564 de Szuminsky y colaboradores; 5,120,420 de Nankai y colaboradores; 5,128,015 de Szuminsky y colaboradores; 5,243,516 de White; 5,437,999 de Diebold y colaboradores; 5,288,636 de Pollmann y colaboradores; 5,628,890 de Cárter y colaboradores; 5,682,884 de Hill y colaboradores; 5,727,548 de Hill y colaboradores; 5,997,817 de Crismore y colaboradores; 6,004,441 de Fuj iwara y colaboradores; 4,919,770 de Priedel y colaboradores; y 6,054,039 de Shieh, las cuales se incorporan por este acto a manera de referencia en su totalidad. Los métodos electroquímicos utilizan típicamente medidores de glucosa en la sangre (pero no siempre) para medir la respuesta electroquímica de una muestra de sangre en presencia de un reactivo. El reactivo reacciona con la glucosa para producir portadores de carga que no están presentes de otra manera en la sangre. Consecuentemente, la respuesta electroquímica de la sangre en presencia de una señal determinada tiene por objeto ser dependiente principalmente de la concentración de la glucosa en la sangre. Los reactivos típicos que se utilizan en los medidores electroquímicos de glucosa en la sangre se dan a conocer en las Patentes de los Estados Unidos Nos. 5,997,817, 5,122,244 y 5,286,362, las cuales se incorporan por este acto a manera de referencia en su totalidad. Una variedad de fuentes de error puede crear resultados inexactos cuando se miden los niveles de un analito en un fluido corporal. Algunas veces las condiciones rigurosas a las cuales se expone el sensor empeoran la exactitud del sensor. Ocasionalmente, el sensor puede experimentar condiciones dañinas, frecuentemente denominadas "descomposición de la tira" o "abuso del frasquito" , lo cual se refiere a cuando los sensores durante el almacenamiento son abusados y expuestos a condiciones perjudiciales, tales como calor, luz y/o humedad excesivos. Esta exposición al calor y/o humedad excesivos puede dar por resultado la disminución de la velocidad de los tiempos de reacción debido a la pérdida de actividad de las enzimas. En el pasado, estos asuntos se han evitado por medio del uso de enzimas que tienen tiempos de reacción muy rápidos y actividades específicas altas con el analito que es medido. Al utilizar enzimas con esas características particulares, se pueden lograr reacciones que tienen niveles altos y similares de consumación bajo todas las condiciones de prueba, tal como a varias temperaturas y niveles de hematocrito. Sin embargo, como un tema práctico, las enzimas no pueden incorporarse usualmente con cantidades suficientemente altas en el sensor sin causar una pérdida significativa en el desempeño del sensor. Además, las enzimas de actividades específicas altas no siempre son deseables para todos los analitos. Por ejemplo, estos sistemas para determinar los niveles de glucosa aún no logran satisfacer la necesidad de estar libres de los efectos de interferentes , tales como maltosa, galactosa, xilosa y similares, los cuales pueden crear lecturas inexactas . Por ejemplo, los pacientes que se someten a diálisis peritoneal o terapia de IGG pueden experimentar altos niveles de maltosa en su sangre, lo cual puede interferir con las lecturas exactas de glucosa en la sangre. Por lo tanto, la interferencia de maltosa puede ser un problema significativo. Como ilustración, el sistema de supervisión de glucosa en la sangre FreeystyleMR de Abbott Laboratories emplea una enzima glucosa-tinte-oxidorreductasa (GlucDOR) en conjunto con una técnica coulométrica con un tiempo de prueba variable. Sin embargo, este sistema aún es inaceptable clínicamente debido a la interferencia de maltosa y, como un tema práctico, el uso de la coulometría, como se practica actualmente, tiene una variedad de desventajas significativas. Además, se han hecho intentos para minimizar el efecto de interferencia de la maltosa al clonar nuevas enzimas GlucDOR con una especificidad mayor hacia la glucosa. Sin embargo, el progreso no a dado por resultado una solución factible. En todavía otro ejemplo, el sistema PCx/TrueMeasureMR de Abbott Laboratories utiliza la amperimetria acoplada con una enzima Glucosa Deshidrogenasa dependiente de Dinucleótido de Nicotinamida Adenina (NAD) (GDH/NAD) . para proporcionar un sistema sustancialmente libre de la interferencia de maltosa. Sin embargo, el sistema amperimétrico puede proporcionar lecturas inexactas debido a la interferencia del nivel de oxígeno en la sangre (p02), un efecto que causa que las lecturas de los niveles de glucosa varíen debido a una diversidad de factores que incluyen donde se toma la muestra. Por ejemplo, los niveles de oxígeno en la sangre pueden variar sustancialmente dependiendo si la muestra es sangre capilar, venosa o arterial. Consecuentemente, para minimizar la interferencia del oxígeno, un usuario de este sistema debe indicar la fuente o carácter de la muestra de sangre antes de tomar la muestra. Como se puede apreciar, requerir que el usuario introduzca información con respecto a la muestra de sangre proporciona una fuente adicional de error si la información es introducida erróneamente por el usuario.

Además de disminuir la velocidad de la actividad de las enzimas, el abuso del frasquito también puede dar por resultado un incremento de la corriente de fondo, algunas veces referida como "corriente vacía" cuando se toman lecturas. Existe una variedad de fuentes para la corriente de fondo o vacía. Por ejemplo, es deseable que los mediadores, los cuales se utilizan para transferir electrones de la enzima al electrodo, estén en un estado oxidado antes de que se utilice el sensor. A través del tiempo, el calor y/o la humedad del abuso del frasquito tenderán a reducir el mediador. Si parte del mediador está en forma reducida antes de que se utilice el sensor, una porción de la corriente resultará del electrodo de trabajo que oxida la forma reducida del mediador. La corriente de fondo o vacía resultante tenderá a desviar el mediador, lo cual a su vez puede conducir a resultados inexactos. Otras impurezas en el reactivo también pueden incrementar los problemas de la corriente de fondo o vacía. Se han propuesto sensores amperimétricos que utilizan un planteamiento de "agotamiento" que trata el problema de la corriente vacía. En este planteamiento, dos señales DC se aplican al sensor. La primera señal DC, o señal de agotamiento, se utiliza para consumir u oxidar cualquier especie responsable de la corriente vacía en la misma capa de difusión que se utiliza posteriormente para analizar el analito. Posteriormente, la segunda señal, o señal de análisis, se utiliza para analizar los niveles del analito. Los potenciales tanto de agotamiento como de análisis tienen la misma polaridad. Aunque esta técnica de agotamiento reduce el efecto de la corriente vacía o de fondo, lo hace a expensas de oxidar parcialmente (o reducir) el analito a ser medido, reduciendo en consecuencia la relación de ruido con respecto a señal del sensor. Además, estas técnicas no han logrado compensar las variaciones en el tiempo de reacción causadas por factores como temperatura y enzimas con velocidades de reacción lentas/variables, por nombrar algunos ejemplos. Además, las enzimas utilizadas, en estos sensores tienden a ser susceptibles a la interferencia de maltosa. En vista de lo anterior, es deseable un biosensor utilizado para medir un analito (tal como glucosa) para tener una matriz química con especificidad incrementada por el analito y que sea capaz de minimizar las interferencias resultantes de fluctuaciones en los niveles de oxígeno y de sustancias interferentes tal como maltosa. Es deseable además proporcionar una matriz química que sea estable fotoquímicamente . Las modalidades de las composiciones, métodos y dispositivos dados a conocer en este documento involucran una matriz química que tiene especificidad incrementada por un analito (tal como glucosa) que es capaz de minimizar las interferencias resultantes de fluctuaciones en los niveles de oxígeno y de sustancias relacionadas (tal como maltosa). En términos generales, la matriz química comprende glucosa deshidrogenasa, dinucleótido de nicotinamida adenina, un derivado de fenazina y una nitrosoanilina . Las modalidades preferidas de la matriz química son típicamente estables a un pH de aproximadamente 6.5 a aproximadamente 8.5 y son estables fotoquímicamente . Una matriz química o los componentes de la misma se consideran estables fotoquímicamente si la matriz o un componente de la misma permanece incoloro con la exposición a la iluminación fluorescente ordinaria durante por lo menos una hora. Un primer aspecto de la presente descripción proporciona una composición de matriz química para el uso en el análisis de la concentración de un analito. Esta matriz química la cual es estable en un pH de aproximadamente 6.5 a aproximadamente 8.5, es estable fotoquímicamente e incluye glucosa deshidrogenasa, dinucleótido de nicotinamida adenina, una sal cuaternaria de alquilfenazina y una nitrosoanilina. Las sales cuaternarias de alquilfenazina adecuadas que son útiles en la presente descripción incluyen, pero no están limitadas a, 5-alquil-fenazinas ilustradas por la fórmula la: Z donde : Z se selecciona del grupo que consiste de -(CH2)mCOOH, NH-COCH3 y -OY, donde m es un número entero que varía de 0 a aproximadamente 6 e Y se selecciona del grupo que consiste de O II -(CH2)„-C-Q, -(CH2)n-Q, y - (CH2CH20)n - Q; donde n es un número entero que varía de aproximadamente 1 a aproximadamente 4 , Q es -OH, -OR1, -NH2, -NHR2 , -NRR3, NH(CH2)0NR2R3, -NH(CH2)o0H( -NHCH2CH2- (OCH2CH2) Q-G, - (CH2) DNR2R3 , - (0CH2CH2)oNR2R3 y - (OCH2CH2) o0H, donde G es -COOH, NR2R3 o O R1 es un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, R2 y R3 son los mismos o diferentes y cada uno representa H o un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, o es un número entero que varía de aproximadamente 1 a aproximadamente 6; y X es un anión seleccionado del grupo que consiste de haluro, sulfato, sulfato de alquilo, fosfato, fosfito, carboxilato, CF3COO", CH3OS02", C2H5OS02" y CH3S03". Un segundo aspecto de la presente descripción proporciona una composición de matriz química que se puede utilizar para determinar la concentración de un analito donde la matriz química incluye glucosa deshidrogenasa, dinucleótido de nicotinamida adenina, una nitrosoanilina y una 5-alquil-l-carboxialcoxifenazina estable fotoquímicamente que es útil para determinar la concentración de un analito. El "grupo carboxi" en un grupo carboxialcoxifenazina incluye ácidos carboxilieos , sus sales, ésteres, amidas, nitrilos y otros derivados conocidos de ácidos carboxilieos . Las 5-alquil-l-carboxialcoxifenazinas particularmente adecuadas se representan por la fórmula lia a continuación.

Ha donde 6 se selecciona del grupo que consiste de -OH, -OR1, NH2, -NHR2, -NR2R3, -NH (CH2 ) mNR2R3 , -NH(CH2)mOH, -0(CH2)mNH2 y -0(CH2)mOH, R1 es un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, R2 y R3 son los mismos o diferentes y cada uno representa H o un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, X" es un anión seleccionado del grupo que consiste de haluro, sulfato, sulfato de alquilo, fosfato, fosfito, carboxilato, CF3COO", CH3OS02~, C2H5OS02" y CH3S03~, y n y m son números enteros que varían de aproximadamente 1 a aproximadamente 6. Un tercer aspecto de la presente descripción proporciona una composición de matriz química adicional para el uso en el análisis de la concentración de un analito. Esta matriz química incluye: (a) glucosa deshidrogenasa; (b) dinucleótido de nicotinamida adenina; (c) un etozulafato de fenazina que tiene la fórmula : donde R6 se selecciona del grupo que consiste de -OH, -OR1, NH2, -NR2R3, -NH(CH2)mNH2, -NH(CH2)m0H, -0(CH2)mNH2 y 0(CH2)mOH, R2 y R3 son los mismos o diferentes y cada uno representa H o un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, X" es un anión seleccionado del grupo que consiste de haluro, sulfato, sulfato de alquilo, fosfato, fosfito, carboxilato, CF3COO", CH3OSO2", C2H5OSO2" y CH3SO3", n es un número entero que varía de aproximadamente 1 a aproximadamente 6, m es un número entero que varía de aproximadamente 1 a aproximadamente 6 ; y (d) un derivado de nitrosoanilina que tiene la fórmula : donde R10 es 3-OCH3 y R11 y R12 = CH2CH2OH En . esta matriz química, una fenazina de la fórmula la también puede ser sustituida por la fenazina de la fórmula lia anterior. Un cuarto aspecto de la presente descripción proporciona una composición de matriz química que es útil para determinar la concentración de un analito. La composición incluye glucosa deshidrogenasa , dinucleótido de nicotinamida adenina, una nitrosoanilina y una 1-carboxialquiloxi-5-alquilfenazina estable fotoquímicamente . Un quinto aspecto de la presente descripción proporciona un método para el análisis electroquímico de un analito en una muestra líquida que involucra la reacción del analito con la matriz la cual incluye glucosa deshidrogenasa, dinucleótido de nicotinamida adenina, una nitrosoanilina y una l-carboxialquiloxi-5-alquilfenazina estable fotoquímicamente para proporcionar un agente electroactivo capaz de producir una respuesta electroquímica, proporcionar una señal para producir una respuesta electroquímica, medir la respuesta electroquímica producida y determinar la concentración del analito en la muestra líquida con base en la respuesta electroquímica medida. Este método involucra típicamente aplicar la muestra a un área de aplicación de un biosensor que tiene una tira de prueba en el mismo que incluye una modalidad de la matriz química descrita anteriormente y cuantificar el analito por medio de la reacción con la matriz química. El método es particularmente efectivo en la determinación de los niveles de glucosa en la sangre que varían de aproximadamente 20 mg/dL a aproximadamente 600 mg/dL y puede proporcionar tiempos de prueba de aproximadamente 5 segundos o menos. El tiempo de prueba se refiere al tiempo entre la aplicación de una muestra de prueba a una tira de prueba (o la detección realmente de la aplicación de la muestra de prueba) y cuando se obtiene un resultado de prueba y se exhibe en la pantalla de un dispositivo de supervisión configurado para el uso con el biosensor.

Un sexto aspecto de la presente descripción proporciona un método para el análisis electroquímico de un analito en una muestra líquida, el cual comprende aplicar la muestra a un área de aplicación de un biosensor que tiene una tira de prueba que incluye la matriz química, cuantificar el analito por medio de la reacción con la matriz química y exhibir un resultado de la cuantificación en una pantalla de un dispositivo de supervisión configurado para el uso con el biosensor, en donde la matriz química incluye glucosa deshidrogenasa, dinucleótido de nicotinamida adenina, una nitrosoanilina y una sal cuaternaria de 5-alquilfenazina que tiene la fórmula: Z donde : Z se selecciona del grupo que consiste de - (CH2) mCOOH, NH-COCH3 y -0Y, donde m puede ser cualquier número entero que varía de 0 a aproximadamente 6 e Y se selecciona del grupo que consiste de -(CH2)„-Q, y -(CH2CH20)n-Q; donde n es un número entero que varía de aproximadamente 1 a aproximadamente 4, Q es -OH, -0R1, -NH2, -NHR2, -NR2R3 , NH(CH2)0NR2R3, -NH(CH2)o0H, -NHCH2CH2- (OCH2CH2) 0-G, - (CH2 ) QNR2R3 , - (0CH2CH2)oNR2R3 y - (OCH2CH2) o0H, donde G es -COOH, NR2R3, o R1 es un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, R2 y R3 son los mismos o diferentes y cada uno representa H o un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, o es un número entero que varía de aproximadamente 1 a aproximadamente 6; y X es un anión seleccionado del grupo que consiste de haluro, sulfato, sulfato de alquilo, fosfato, fosfito, carboxilato, CF3COO", CH3OS02~, C2H5OS02" y CH3S03". Aunque una variedad de nitrosoanilinas se puede utilizar en la matriz química para este método, la nitrosoanilina ilustrada por la estructura III es particularmente adecuada. Numerosas ventajas y aspectos adicionales de la presente descripción serán aparentes a partir de la descripción de las modalidades preferidas y las figuras que siguen . La FIGURA 1 es una primer vista superior de una tira de prueba utilizada con las modalidades de la presente descripción e incluye una capa de cubierta de la tira de prueba retirada. La FIGURA 2 es una segunda vista superior de la tira de prueba de la FIGURA 1 con la capa de cubierta en su lugar. La FIGURA 3 es un diagrama que ilustra el carácter lineal de la respuesta de la sangre/glucosa determinada con la nueva matriz química descrita en el Ejemplo 1 (cuyo título es "Respuesta a la Dosis en la Sangre, Matriz - 15 u/µ? de glucosa deshidrogenasa, fenazina III 2 mM (R1=0H, n=3) , NAD 35 nM y nitrosoanilina VII 40 mM, Condiciones de Prueba -retardo de 2.5 segundos + lectura de 2.5 segundos con potencial de 500 mV" ) . La FIGURA 4 es un diagrama que ilustra la falta de interferencia de oxígeno en dos niveles de oxígeno y en niveles de glucosa que varían de aproximadamente 0 a aproximadamente 120 mg/dL (cuyo título es "Estudio de Gas en la Sangre, Matriz - 15 u/µ? de glucosa deshidrogenasa, fenazina III 2 mM (R1=OH, n=3) , NAD 35 nM y nitrosoanilina VII 40 mM, Condiciones de Prueba - retardo de 2.5 segundos + lectura de 2.5 segundos con potencial de 500 mV" ) . La FIGURA 5 es una diagrama que ilustra la falta de interferencia de oxígeno en dos niveles de oxígeno y en niveles de glucosa que varían de aproximadamente 0 a aproximadamente 700 mg/dL (cuyo título es "Estudio de Gas en la Sangre #2, Matriz - 15 u/µ? de glucosa deshidrogenasa , fenazina III 2 mM (R^OH, n=3) , NAD 35 nM y nitrosoanilina VII 40 mM, Condiciones de Prueba - retardo de 3 segundos + lectura de 2 segundos con potencial de 500 mV" ) . La FIGURA 6 es un diagrama que ilustra la interferencia de maltosa utilizando una tira de prueba convencional y la ausencia de interferencia con una tira de prueba basada en la nueva matriz química (cuyo título es "Estudio de Interferencia de Maltosa, Matriz - 15 u/µ? de glucosa deshidrogenasa, fenazina III 2 mM (R1=0H, n=3) , NAD 35 nM y nitrosoanilina VII 40 mM, Condiciones de Prueba -retardo de 2.5 segundos + lectura de 2.5 segundos con potencial de 500 mV" ) . Con el propósito de promover un entendimiento de los principios de la descripción, ahora se hará referencia a las modalidades ilustradas en los dibujos y se utilizará lenguaje específico para describir las mismas. No obstante, se entenderá que no se pretende con lo cual la limitación del alcance de la descripción. Estas alteraciones y modificaciones adicionales en el dispositivo ilustrado y estas aplicaciones adicionales de los principios de la descripción como se ilustra en este documento como se le ocurriría normalmente a una persona experta en el campo al cual se refiere la descripción están contempladas dentro del alcance de la descripción. En particular, aunque la 1 descripción se plantea en términos de un medidor de glucosa en la sangre, se contempla que la invención se puede utilizar con dispositivos para medir otros analitos y otros tipos de muestras. Estas modalidades alternativas requieren ciertas adaptaciones a las modalidades planteadas en este documento que serían aparentes para aquellas personas expertas en el campo . La presente descripción trata generalmente sobre una matriz química que se utiliza para determinar la concentración de un analito (tal como, por ejemplo, glucosa) en presencia de componentes relacionados (tal como, por ejemplo, maltosa) y niveles variantes de componentes no relacionados (tal como, por ejemplo, oxígeno) . Como se observó previamente, tanto la presencia de maltosa y las variaciones en los niveles de oxígeno pueden interferir con la determinación de glucosa llevada a cabo con una variedad de biosensores electroquímicos. Mientras que la matriz química y los métodos acompañantes se describirán a continuación con referencia al análisis de los niveles de glucosa en la sangre, se debe reconocer que la matriz química y los métodos dados a conocer se pueden utilizar también para analizar otros tipos de analitos. Las modalidades de la presente descripción contemplan una nueva matriz química para el uso en la determinación de la concentración de un analito en un fluido biológico. Típicamente, las modalidades de la nueva composición de matriz química incluyen una glucosa deshidrogenasa, dinucleótido de nicotinamida adenina, un derivado de fenazina y/o una nitrosoanilina o un derivado de la misma. Las diferentes modalidades de la matriz química se utilizan con un biosensor electroquímico para determinar la concentración de un analito después de que ocurre una reacción dentro del biosensor. Las modalidades de los derivados de fenazina incluyen derivados de fenazina estables fotoquímicamente , tales como sales cuaternarias de 5-alquil-fenazina 1-sustituida . Las modalidades adicionales también están contempladas. Un método para determinar la concentración de un analito utilizando modalidades de la matriz química dada a conocer es otro aspecto de la descripción. El método puede determinar, por ejemplo, los niveles de glucosa en la sangre que varían de aproximadamente 20 mg/L a aproximadamente 600 mg/L en tiempos de prueba de aproximadamente cinco segundos o menos. La matriz química puede funcionar bien en un pH de aproximadamente 6.5 a aproximadamente 8.5. La nueva matriz química ahora se describirá completamente en detalle. Los componentes de la nueva matriz química pueden incluir una enzima, un cofactor, un reactivo y un mediador. Cuando se emplea, la enzima puede ser glucosa deshidrogenasa, el cofactor puede ser dinucleótido de nicotinamida adenina, el reactivo puede ser un derivado de fenazina y el mediador puede ser una nitrosoanilina . Las modalidades de los derivados de fenazina incluyen sales cuaternarias de 5 -alquilfenazina . Se entenderá que la nitrosoanilina es un ejemplo de un mediador de electrones indirecto en el sentido de que una molécula de nitrosoanilina no está involucrada directamente por sí misma en una secuencia de mediación de electrones empleada típicamente en los métodos electroquímicos de detección y medición de un analito en cambio, la nitrosoanilina participa en la secuencia al reaccionar con la glucosa y otros componentes de la matriz química para generar un producto de reacción electroactivo retirado una o dos veces y es el producto de reacción electroactivo que está involucrado directamente en la secuencia de mediación típica, como se puede describir y explicar más completamente en las Patentes de los Estados Unidos Nos. 5,122,244 y 5,286,362 (referidas anteriormente). No obstante lo anterior, la nitrosoanilina y/o sus derivados pueden ser referidos como un mediador en este documento y en otras referencias creadas y/o preparadas por el solicitante con el entendimiento de que la nitrosoanilina es un precursor para el mediador involucrado directamente en la secuencia mediadora electroquímica. Derivados de Fenazina Aunque no se requieran, los derivados adecuados de fenazina se seleccionan típicamente de tal manera que los derivados sean estables en presencia de luz y particularmente en un rango de pH de aproximadamente 7 a aproximadamente 8.5. Los derivados adecuados de fenazina incluyen sales cuaternarias de 5-alquilfenazina, tales como sales cuaternarias de fenazina 5-alquil-l-sustituida del tipo ilustrado por la fórmula la descrita anteriormente y las fórmulas lia y Ilb proporcionadas posteriormente: lia Ilb donde R6 se selecciona del grupo que consiste de -OH, -0R1, NH2, -NHR2 , -NR2R3 , -NH (CH2) mNR2R3 , -NH(CH2)mOH, -Ó(CH2)mNH2 y - 0(CH2)mOH, R1 es un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, R2 y R3 son los mismos o diferentes y cada uno representa H o un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, X" es un anión seleccionado del grupo que consiste de haluro, sulfato, sulfato de alquilo, fosfato, fosfito, carboxilato, CF3COO", CH3OSO2 " , C2H5OSC)2~ y CH3SO3 " , y n y m son números enteros que varían de aproximadamente 1 a aproximadamente 6. Nitrosoanilinas Las nitrosoanilinas tienen la fórmula general III R10 III en la cual R10 indica hidrógeno, halógeno, alcoxi o alquiltio y R11 representa un residuo de alquilo o hidroxialquilo y R12 representa un residuo de hidroxialquilo o R11 y R12 son los mismos o diferentes y cada uno representa un residuo de dialquilaminoalquilo, un residuo de hidroxialquilo, hidroxialcoxialquilo o alcoxialquilo sustituido opcionalmente por OH en la porción de alquilo o un residuo de polialcoxialquilo sustituido opcionalmente por un residuo de hidroxi en la porción de alquilo, o R11 y R12 forman un residuo de alquileno interrumpido por azufre o nitrógeno en el cual el nitrógeno es sustituido por un residuo de alquilo, hidroxialquilo, hidroxialcoxialquilo, alcoxihidroxialquilo , dioxanilil-alquilo o polialcoxialquilo, cada uno de los cuales es sustituido opcionalmente por sí mismo en la porción de alquilo por un residuo de hidroxi, o si R10 está en la posición orto con respecto a NR1:LR12, R11 también junto con R10 representa un residuo de alquileno en donde R12 entonces representa un residuo de hidroxialquilo o, si el residuo de alquileno contiene 3 átomos de carbono, también representa opcionalmente un residuo de alquilo. En este respecto, halógeno indica flúor, cloro, bromo o yodo. Flúor y cloro son halógenos típicos para R10. Alquilo, alcoxi o alquiltio son residuos con 1 a 6 átomos de carbono, siendo particularmente adecuados aquellos que contienen de 1 a 3 átomos de carbono. La definición anterior para alquilo también tiene aplicación a la porción de alquilo en los residuos de hidroxialquilo, dialquilaminoalquilo, hidroxialcoxi-alquilo, alcoxiálquilo , polialcoxialquilo, alcoxi -hidroxialquilo y dioxanilil-alquilo . Un residuo de dioxanilil -alquilo es un residuo en el cual un sistema de anillos de dioxano se enlaza a un residuo de alquilo. Es típicamente un sistema de anillos de 1,4-dioxano, es decir Un residuo de polialcoxialquilo es un residuo de -alquil- (alcoxi) p-alcoxi en el cual p es igual a 1-10. Típicamente, p es igual a 1-4; y más típicamente, p es igual a 1-3. Un residuo de alquileno es un residuo de cadena recta o ramificada, preferiblemente de cadena recta y puede estar ya sea saturado o insaturado, tal como una cadena de hidrocarburo saturada que consiste de 2-5, preferiblemente 2-4, átomos de carbono con dos sitios de enlace libres. Dentro del significado de un residuo de alquileno de R11 y R12 el cual es interrumpido por azufre o nitrógeno, un residuo de tiomorfolina o piperazina formado por la inclusión del átomo de nitrógeno es adecuado. El residuo de piperazina es especialmente adecuado. Dentro del significado del residuo de alquileno formado a partir de R11 y R12, el residuo de indolina o 1 , 2 , 3 , 4 -tetrahidroquinolina formado por la inclusión del anillo aromático de la fórmula general V es adecuado.

H2OH V Como la sal del derivado de nitrosoanilina de acuerdo con la presente descripción de la fórmula general III, son adecuadas aquellas de ácidos fuertes, en particular ácidos minerales tales como ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico y ácido fosfórico. Los clorhidratos son especialmente adecuados. Los siguientes nuevos derivados de nitrosoanilina son componentes especialmente adecuados de la presente matriz química : a) 2 , 2 ' - [ (3 - fluoro-4 -nitrosofenil) imino] bis-etanol , b) 2 , 2 '-[( 3 -cloro-4 -nitrosofenil ) imino] bis-etanol , c) 2 , 2 ' - [ ( 3 -metoxi -4 -nit osofenil) imino] bis-etanol , d) 2, 2' - [ (3-metilmercapto-4-nitrosofenil) imino] bis-etanol , e) 2- [ (2-hidroxietoxi) etil- (4-nitrosofenil) amino] etanol, f) 2- [ (2-metoxietoxi) etil- (4 -nitrosofenil) amino] etanol, g) 1- [N- (2-hidroxietil) - (4-nitrosoanilino) ] -3 -metoxi-2-propanol , h) 1- [N- (2-hidroxietil) - (4-nitrosoanilino) ] -3- (2-hidroxietoxi) -2-propanol , i) l-metil-4- (4-nitrosofenil) -piperazina, j ) 4 - (4 -nitrosofenil ) -1-piperazino-etanol , k) 5-nitroso-l-indolin-etanol , 1) l-metil-6-nitroso-l , 2 , 3 , 4-tetrahidroquinolina, m) 6-nitroso-3 , 4-dihidro-l (2?) quinolin-etanol y sus sales n) 2- [ (2-hidroxietil-4-nitrosofenil) amino] etanol . De éstos, los compuestos a) , d) , e) , £) , g) y h) así como también sus sales son particularmente adecuados. El compuesto e) o sus sales, en particular el clorhidrato, es especialmente adecuado. Preparación del Componente de Fenazina Uno de los componentes de la matriz química incluye un derivado de fenazina. El derivado de fenazina se puede seleccionar de una variedad de diferentes fenazinas sustituidas, sin embargo, las fenazinas 5-alquil-l-sustituidas son útiles en esta presente descripción, más preferiblemente las fenazinas 5-etil-l-sustituidas . Es adecuada en una variedad de diferentes grupos de unión en la posición 1 de la fenazina 5-alquilada. La fenazina sustituida, adecuada incluye la estructura la, proporcionada a continuación: la donde : Z se selecciona del grupo que consiste de - (CH2) mCOOH, NH-COCH3 y -0Y, donde m es un número entero que varía de 0 a aproximadamente 6 e Y se selecciona del grupo que consiste de O II -(CH2)n-C-Q, -(CH2)„-Q, y -(CH2CH20)n-Q; donde n es un número entero que varía de aproximadamente 1 a aproximadamente 4, Q es -OH, -OR1, -NH2, -NHR2, -NR2R3, NH(CH2)0NR2R3, -NH(CH2)o0H, -NHCH2CH2- (OCH2CH2) 0-G,' - (CH2) 0NR2R3 , - (0CH2CH2)oNR2R3 y - (OCH2CH2) 0OH, donde G es -COOH, NRR3, o O Ib 1 es un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, R2 y R3 son los mismos o diferentes y cada uno representa H o un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono o es un número entero que varía de aproximadamente 1 a aproximadamente 6; y X es un anión seleccionado del grupo que consiste de haluro, sulfato, sulfato de alquilo, fosfato, fosfito, carboxilato, CF3COO", CH3OSO2", C2H5OS02~ y CH3SO3". Un derivado de fenazina especialmente adecuado se puede ilustrar por medio de la fórmula lia proporcionada a continuación : Ha donde R6 se selecciona del grupo que consiste de -OH, -OR1, NH2, -NHR2, -NR2R3, -NH (CH2) mNR2R3, -NH (CH2) ra0H, -0(CH2)mNH2 y -0(CH2)mOH, R1 es alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, R2 y R3 son los mismos o diferentes y cada uno representa H o un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, X" es un anión seleccionado del grupo que consiste de haluro, sulfato, sulfato de alquilo, fosfato, fosfito, carboxilato, CF3C00", CH3OS02", C2H5OS02" y CH3SO3", y n y m son números enteros que varían de aproximadamente 1 a aproximadamente 6. Los esquemas de reacción 1-9, que siguen, ilustran algunas rutas de reacción típicas las cuales se pueden utilizar para preparar los derivados adecuados de fenazina. Esquema de Reacción 1 Acetona Sulfato de dietilo 2COj Purificado por medio de la HPLC preparativa utilizando AcCN: H20 que contenía TFA al 0.1% El esquema de reacción 1 representa la síntesis del derivado de fenazina de ácido 5-etil-l-alcoxi-carboxílico (5) . La preparación de este compuesto se describe en la bibliografía [véase Eur. J. Biochem, 179, 293-298 (1989)] . Sin embargo, el procedimiento sintético se modificó extensivamente para proporcionar las cantidades necesarias de la fenazina sustituida (5) . La 1-hidroxifenazina (1.) se adquirió de TCI America. Esta se hizo reaccionar con 4 -bromobutirato de etilo en presencia de carbonato de potasio y 18-corona 6 en acetona bajo condiciones de reflujo para proporcionar el éster etílico de fenazina (3J . La reacción del éster etílico de fenazina (3) con sulfato de dietilo como se describe en la bibliografía no proporcionó ningún producto N-alquilado. El proceso de reacción para la N-etilación del éster etílico de fenazina (3_) se investigó al agregar una base, tal como carbonato de potasio. De esta manera, la reacción del éster etílico de fenazina (3_) con sulfato de dietilo en presencia de carbonato de potasio a 0°C durante 18 horas proporcionó el derivado de fenazina de éster etílico de ácido carboxílico 5-N-etil-l-sustituida (4) . El éster etílico de 5-N-etil-fenazina resultante se hidrolizó por medio de ácido clorhídrico diluido para obtener eí derivado de 5-etil-l-carboxibutil-fenazina (5) . Esquema de Reacción 2 HCI dil. (purificación por medio de la HPLC preparativa utilizando AcCN, H20 que contenía CF3COOH al 0.1% El esquema de reacción 2 representa la síntesis de un derivado de fenazina 1-alcoxi-sustituida (_9) que tiene un conector hidrófilo el cual puede afectar la solubilidad de la fenazina. La disponibilidad de las fenazinas sustituidas, hidrófilas permite un mayor rango de formulaciones de matrices. El derivado de ácido 1-hidroxibutí ico de 5-N-etil-fenazina (í5) se hace reaccionar con N-3,3- dimetilaminopropil-carbodiimida de 1 -etilo y N-hidroxisuccinimida para proporcionar la N-hidroxisuccinimida correspondiente. Este éster activado se hace reaccionar con el éster metílico de amino d-PEG comercialmente disponible (Quanta Biodesign, EUA) en presencia de una base terciaria, tal como trietilamina . La desprotección de un éster metílico se describe en la bibliografía (véase Greene, T. y Wuts, P., "Protective Groups in Organic synthesis" , 2a edición, Wiley Intersciences, 1991) . El grupo éster metílico se puede desproteger en presencia de un ácido o una base para proporcionar el derivado de fenazina {9) con un conector de PEG. La hidrólisis del éster metílico con ácido clorhídrico diluido ha probado ser particularmente adecuada en este sistema de química de fenazina. Esquema de Reacción 3 El esquema de reacción 3 describe la síntesis de un derivado de fenazina dimerizada (11.) · Una matriz química que incluye el derivado de fenazina ( 11 ) proporciona típicamente sensibilidad mejorada. El derivado de fenazina (1_1) se puede preparar al hacer reaccionar el éster activado (6^) con 2 , 2 - ( etilendioxi ) bis -etilamina (Aldrich Chemical Company, EUA) , en presencia de una base terciaria tal como trietilamina o diisopropiletilamina y en un solvente tal como dimetilformamida o tetrahidrofurano a una temperatura que varía de 0°C a la temperatura ambiente. Las combinaciones de base/solvente particularmente adecuadas incluyen trietilamina/dimetilformamida . Esquema de Reacción 4 Sulfato de dietilo 2C03 El esquema de reacción 4 ilustra la síntesis de una N- et i 1 - fenaz ina 1-sustituida terminada en amino. La O -Alqui 1 ac i ón de una 1 - hidroxi f enaz ina se puede llevar a cabo utilizando un agente de alquilación amino-protegido terminal, tal como por ejemplo, un ftalimido o un derivado de t-BOC. La amina protegida con t-Boc resultante se puede desproteger bajo condiciones ácidas, tal como ácido trif luoroacét ico , mientras que la amina protegida con ftalimido resultante se puede desproteger en presencia de hidrazina o metilamina. Un método particularmente adecuado incluye la reacción de 1-hi droxi fena z ina con N - ( 4 - bromobut i 1 ) £ ta 1 imi da . (Acros Chemicals, EUA) , en presencia de una base, tal como carbonato de potasio en un solvente tal como acetona, DMF o THF bajo condiciones de reflujo. Se ha descubierto que la acetona es un solvente particularmente adecuado para esta reacción. El producto alquilado resultante (13_) se hace reaccionar con sulfato de dietilo en presencia de carbonato de potasio para proporcionar la fenazina protegida con ftalimido de N-etilo (14_) . El grupo ftalimido se desprotege con metilamina en metanol a temperatura ambiente para proporcionar la N - et i 1 - f enaz ina 1-sustituida terminada en amino (15) .

Esquema de Reacción 5 El esquema de reacción 5 describe la síntesis de un derivado de fenazina 1-sustituida terminada en hidroxilo. La 1 -hidroxi - fenazina (1) se hace reaccionar con un agente de alquilación protegido con hidroxi, tal como por ejemplo, (3-bromopropoxi) -terc-butildimetilsilano (16^), (Aldrich chemical company, EUA) en presencia de carbonato de potasio en acetona bajo condiciones de reflujo para proporcionar el derivado de fenazina protegido con terc-butildimetilsilano (TBDMS) (1/7) . La N-alquilación del compuesto ( 1_7 ) se realiza con sulfato de dietilo en presencia de carbonato de potasio para proporcionar el derivado de fenazina terminada en hidroxilo protegida N-etil-l-sustituida (18J . La desprotección del grupo TBDMS se realiza en presencia de fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF) en THF a temperatura ambiente para proporcionar la N-etil-fenazina de 1 -hidroxibutilo (19).

Esquema de Reacción 6 Sulfato de dietilo K2C03 El esquema de reacción 6 ilustra la síntesis del éter 1-hidroxibutil-metílico de N-etil - fenazina . El éter de fenazina (2_1) se prepara por medio de la alquilación de la 1-hidroxifenazina (1) con 4 -metoxibutilbromuro (Aldrich Chemical Company, EUA) para proporcionar el derivado de fenazina (2JL) . La N-etil - fenazina (22) se prepara por medio de la reacción del compuesto (21) con sulfato de dietilo en presencia de carbonato de potasio. Esquema de Reacción 7 El esquema de reacción 7 ilustra la síntesis de un derivado de 1-carboxi-N-etil-fenazina (29a) y 8-metil-l-carboxi-N-etil-fenazina (29b) . Una mezcla de anilina (un orto-toluidina) y ácido 2 -bromo-3 -nitrobenzoico se hace reaccionar en presencia de CuCl, polvo de Cu y N-etilmorfolina en butano-2 , 3 -diol de 70 a 80°C durante 8 a 24 horas. Esta mezcla de reacción se diluye con una solución de NH40H 0.1 M y se filtra a través de un lecho de celite. La solución resultante se vierte lentamente sobre HC1 2N para proporcionar el ácido N-fenil-3-nitro antranílico (25a) o el derivado de metilo sustituido (25b) . Los productos intermedios (25a) o (25b) se hacen reaccionar con borohidruro de sodio en una solución de NaOH 2N bajo condiciones de reflujo para efectuar el cierre de anillos y proporcionar la sal sódica de una fenazina, la cual, con la acidificación, proporciona los compuestos (26a) o (26b) . El cloruro ácido del derivado de 1-carboxi de fenazina (u 8-metil-l-carboxifenazina) se prepara por medio de la reacción con cloruro de tionilo y el cloruro ácido resultante se convierte a éster metílico por medio de la reacción con metanol en HC1. El éster metílico de fenazina resultante (27a) o (27b) se alquila con sulfato de dietilo y carbonato de potasio para proporcionar los derivados de N-etil-fenazina correspondientes (28a) o (28b) . Finalmente, el grupo éster metílico de las fenazinas (28a) o (28b) se hidroliza con ácido clorhídrico diluido para proporcionar el compuesto (29a) o (29b) . Esquema de Reacción 8 cético Acido acético El esquema de reacción 8 proporciona una ruta sintética para un derivado de 1-acetamido-N-etil-fenazina (3_5) · Un clorhidrato de 3 -amino-catecol (3_0) se hace reaccionar con óxido de plata y sulfato de sodio anhidro en acetato de etilo para proporcionar la 3-amino-l , 2-quinona (31) , la cual se hace reaccionar además in situ con orto-fenilendiamina (3_2) para proporcionar la 1-amino-fenazina (3_3_) . La amino-fenazina (3_3) es acetilada con anhídrido acético en ácido acético para proporcionar la 1-acetamido-fenazina (3_4) . La 1-acetamido-fenazina resultante se hace reaccionar con sulfato de dietilo en presencia de carbonato de potasio para proporcionar la N-etil-l-acetamido-fenazina (35) .

Esquema de Reacción 9 El esquema de reacción 9 proporciona una ruta sintética para el derivado de l-carboximetil-5-N-etil- fenazina (4_2) . El derivado de bromo (3_7) se forma por medio de la reacción de la 1-metil-fenazina (3_6) (disponible de Apin Chemicals, UK) con N-bromosuccinimida en presencia de peróxido de benzoilo y un solvente. El tetracloruro de carbono es un solvente particularmente adecuado para la reacción de bromación. La reacción del bromuro (3_7) con KCN en un solvente adecuado, tal como, por ejemplo, DMF, proporciona el derivado de 1-cianometil-fenazina (3_8) · La hidrólisis ácida de la cianofenazina (3_8) proporciona la 1- carboximetil- fenazina (3_9) . El grupo ácido del compuesto (39) se convierte a un éster metílico por medio de la reacción con metanol y HCl para proporcionar el éster de fenazina (4_0) . El éster (4_0) puede se N-alquilado con sulfato de dimetilo en presencia de carbonato de potasio para proporcionar el éster de 5-etil-fenazina (41) . La hidrólisis del éster (4_1) con ácido clorhídrico diluido proporciona la 5-etil-l-carboximetil-fenazina (4_2) . Preparación del Componente de Nitrosoanilina Los compuestos de la fórmula general III se pueden producir por medio de la reacción de un compuesto de la fórmula general VI, en la cual R4 , R5 y R6 tienen el mismo significado que en los compuestos de la fórmula general III, con nitrilo. Los detalles concernientes a la formula III se proporcionan anteriormente.

VI III Un proceso análogo se conoce a partir de J. J.

D'Amico y colaboradores, J. Amer. Chem . Soc . 81, 5957 (1959) . El nitrito alcalino se utiliza típicamente como el nitrito, en el cual el litio, sodio, potasio, rubidio o cesio es posible como el metal alcalino; el nitrito de sodio y el nitrito de potasio son particularmente adecuados. El nitrito de sodio es especialmente adecuado. La reacción toma lugar típicamente en un medio ácido a baja temperatura. Es ventajoso cuando la temperatura es inferior a 10°C, preferiblemente entre -10 y +5°C. Es ventajoso cuando la reacción de un compuesto de la fórmula general VI con nitrito toma lugar en un medio acuoso. Un pH adecuado para el medio es menor que 3 y menor que 2 es particularmente adecuado. En una modalidad para la reacción, un compuesto de la formula general VI o una sal del mismo, tal como una sal de un ácido mineral tal como ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico o ácido fosfórico, se agrega primero a un medio ácido acuoso y se enfría. Luego, el nitrito, típicamente en una forma disuelta, se agrega mientras se mantiene la mezcla de reacción a una temperatura baja. Es ventajoso cuando un medio acuoso también se utiliza como el solvente para el nitrito. Después de la adición del nitrito, la mezcla de reacción se mantiene a baja temperatura hasta que la reacción se completa. A fin de procesar la mezcla de reacción, se extrae típicamente con un solvente orgánico y el producto se aisla del extracto. Matriz Química Una primera modalidad de la matriz química incluye glucosa deshidrogenasa , dinucleótido de nicotinamida adenina,. una sal cuaternaria de 5-etil-fenazina y una nitrosoanilina . Aunque no se requiere, las sales cuaternarias adecuadas son estables fotoquímicamente en la forma acostumbrada. Los ejemplos de sales cuaternarias de 5-etilo estables fotoquímicamente se ilustran por medio de la formula la y Ilb: Z la donde : Z se selecciona del grupo que consiste de -(CH2)mCOOH, NH-COCH3 y -OY, donde m es un número entero que varía de 0 a aproximadamente 6 e Y se selecciona del grupo que consiste de O II -(CH2)n-C-Q, -(CH2)n-Q, y - (CH2CH20)n - Q; donde n es un número entero que varía de aproximadamente 1 a aproximadamente 4, Q es -OH, -OR1, -NH2, -NHR2, -NR2R3, -NH (CH2) 0NR2R3 , -NH (CH2) o0H, -NHCH2CH2- (OCH2CH2) 0-G, (CH2)0NR2R3, - (OCH2CH2) 0NR2R3 y - (OCH2CH2 ) o0H , donde G es - COOH, NR2R3 o O Ib R1 es un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, R2 y R3 son los mismos o diferentes y cada uno representa H o un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, o es un número entero que varía de aproximadamente 1 a aproximadamente 6 ; y X es un anión seleccionado del grupo que consiste de haluro, sulfato, sulfato de alquilo, fosfato, fosfito, carboxilato, CF3COO", CH3OS02", C2H5OS02" y CH3SO3"; y Ilb donde R6 se selecciona del grupo que consiste de -OH, -OR1, NH2, -NHR2, -NR2R3, -NH (CH2) mNR2R3 , -NH(CH2)ra0H, -0(CH2)mNH2 y - 0(CH2)m0H, R1 es un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, R2 y R3 son los mismos o diferentes y cada uno representa H o un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, X" es un anión seleccionado del grupo que consiste de haluro, sulfato, sulfato de alquilo, fosfato, fosfito, carboxilato, CF3COO~ , CH3OSO2", C2H5OSO2" y CH3SO3", y n y m son números enteros que varían de aproximadamente 1 a aproximadamente 6. Una modalidad adicional de la matriz química incluye una sal cuaternaria de alquilo de fenazina que tiene la fórmula ilustrada en las fórmulas lia y Ilb, proporcionadas anteriormente . Las sales cuaternarias adecuadas son estables fotoquímicamente en la forma acostumbrada y son estables en un pH de aproximadamente 6.5 a aproximadamente 8.5. Los componentes adicionales de esta modalidad pueden incluir glucosa deshidrogenasa, dinucleótido de nicotinamida adenina y/o una nitrosoanilina . Las nitrosoanilinas adecuadas son representadas por la fórmula III, proporcionada anteriormente. Una modalidad aún adicional de la matriz química incluye glucosa deshidrogenasa, dinucleótido de nicotinamida adenina, una sal cuaternaria de 5-etil-fenazina representada por la fórmula Ilb proporcionada anteriormente y una 1,4-nitrosoanilina representada por la fórmula VII.

VII Las sales cuaternarias de fenazina adecuadas son estables fotoquímicamente en la forma acostumbrada.

Una modalidad aún adicional de la composición de la matriz química incluye una sal cuaternaria de 5-alquil-fenazina estable fotoquímicamente . La composición puede contener adicionalmente glucosa deshidrogenasa, dinucleótido de nicotinamida adenina y una nitrosoanilina . Las sales cuaternarias de fenazina adecuadas son representadas por la fórmula I, proporcionada anteriormente. Las nitrosoanilinas adecuadas son representadas por la fórmula III, proporcionada anteriormente . Otra modalidad incluye un método o una prueba para determinar la concentración de una muestra de analito (particularmente, glucosa en la sangre) utilizando las modalidades de la matriz química. El método incluye utilizar una configuración de biosensor y una tira de prueba como se describiera previamente. La matriz química se utiliza en una reacción química para determinar la concentración del analito. Ciertos métodos utilizan una matriz química que incluye glucosa deshidrogenasa, dinucleótido de nicotinamida adenina, una sal cuaternaria de 5-alquil-fenazina y una nitrosoanilina. Otros ciertos métodos utilizan una sal cuaternaria de 5 -alquilfenazina representada por la fórmula Ilb y todavía otros métodos utilizan una nitrosoanilina representada por la fórmula VII. El método descrito en este documento se puede utilizar para analizar muestras que contienen de aproximadamente 20 mg/L a aproximadamente 600 mg/L de glucosa en la sangre en un tiempo de prueba de aproximadamente 5 segundos o menos. Los resultados óptimos se pueden obtener con la utilización de la matriz química dentro de un rango de pH de aproximadamente 6.5 a aproximadamente 8.5. La referencia a las figuras da a conocer adicionalmente aspectos de la presente descripción. Un sensor electroquímico, amperimétrico de analito 20, que es adecuado para el uso con la química y los métodos descritos en este documento, se ilustra en las FIGURAS 1 y 2. Se debe reconocer que el sensor 20 en las FIGURAS 1 Y 2 es solamente un ejemplo de un tipo de sensor que se puede utilizar en conjunto con la química y el método de acuerdo con la presente descripción y que otros tipos de sensores con diferentes configuraciones se pueden utilizar similarmente . Por ejemplo, aunque el sensor ilustrado en las FIGURAS 1 y 2 tiene electrodos formados en una disposición interdigitante , sensores que tienen una configuración diferente o con electrodos adicionales se pueden utilizar con la matriz química y el método dados a conocer. Como otro ejemplo, los electrodos en la modalidad ilustrada tienen una configuración co-planar, pero se debe apreciar que los electrodos 22 en otras modalidades pueden tener otras configuraciones, tal como una construcción de encaramiento . Por razones de brevedad así como también de claridad, no todas las características del sistema sensor serán descritas en detalle a continuación, pero se hace referencia a ejemplos de otros tipos de sensores con los cuales son útiles las químicas y métodos inventivos, incluyendo aquellos descritos en la Patente de los Estados Unidos No. 5,989,917; Patente de los Estados Unidos No. 6,270,637; y Solicitud Publicada de los Estados Unidos No. 2003/0155237 Al, todas las cuales se incorporan por este acto a manera de referencia en su totalidad. Volviendo ahora a la FIGURA 1, el sensor 20 incluye una disposición interdigitante de electrodos 22 dispuestos en un substrato flexible 24. Uno de los electrodos 22 en el par actúa como un electrodo de trabajo y el otro electrodo actúa como un contraelectrodo. Sin embargo, como se indicara anteriormente, los electrodos 22 de acuerdo con una modalidad de la presente descripción pueden intercambiar papeles. Es decir, un electrodo 22 en un momento puede actuar como un electrodo de trabajo y en otro momento puede actuar como un contraelectrodo. En la modalidad ilustrada, se muestran dos electrodos 22, pero se debe reconocer que el sensor 20 en otras modalidades puede incluir más electrodos. Los electrodos 22 se acoplan a conectores eléctricamente conductivos 26 que incluyen patines del electrodo 28 localizados sobre la superficie del substrato flexible 24, donde los patines del electrodo 28 están disponibles para ser conectados a un circuito electrónico externo, tal como un medidor. Los conectores 26 también incluyen porciones de conectores 30, las cuales conectan los elementos de electrodo en la disposición 22 a los patines 28 y las cuales pueden estar cubiertas típicamente por una capa de aislamiento. Con referencia a la FIGURA 2, la capa separadora no conductiva 32 está dispuesta sobre el substrato 24 y las porciones de conectores 30 de los conectores 26. La capa separadora 32 define una cámara de muestra capilar 34 y la cámara de muestra 34 tiene una abertura de entrada en la cual la muestra de fluido se atrae al interior de la cámara de muestra 34. Una capa de reactivo 35 está dispuesta sobre la disposición 22 dentro de la cámara de muestra 34. La capa de reactivo 35 se describirá en detalle adicional posteriormente pero está configurada para analizar la muestra de fluido. La hoja delgada de metal 36 cubre el separador 32 y una porción de la cámara capilar 34 excepto por un conducto de ventilación 38, el cual se utiliza para ventilar el aire de la cámara 34. Preparación de las soluciones de matriz Solución de Matriz Estándar Una solución madre de amortiguador se preparó al agregar 25.148 g de sal de sesquisodio Pipes, 0.125 g de Tritón X-100 y 2.40 g de Trehalosa a 400 mL de agua doblemente destilada y ajustar el pH de la solución a 7.00. Esta solución se agregó a un matraz volumétrico de 500 mL y se diluyó con agua doblemente destilada para hacer 500 mL de solución. La preparación de la solución de amortiguador/polímero se completó al combinar 396 gramos de solución de amortiguador inicial con 2 g de óxido de polietileno (300K) y 2 g de Natrosol 250M. Con el reposo durante toda la noche, todos los sólidos se habían disuelto y la solución estaba lista para el uso. Una solución de matriz se preparó a partir de la solución madre de amortiguador al: (a) agregar los siguientes ingredientes a una taza de mezclado veloz de 25 mL que contenía 11.198 g de solución madre de amortiguador en una forma en serie y el mezclado veloz durante 1 minuto a 33,000 rpm después de cada adición: 0.5592 g de KCl, 0.1824 g de NAD grado 1 y 0.0913 g de nitrosoanilina sustituida (Estructura VII); (b) ajustar el pH a 7.00; y (c) agregar 0.0163 g de 1- (3-carboxipropiloxi) -5-etilfenazina (compuesto 5_ del Esquema de reacción 1) al contenedor mezclando durante 1 minuto a 33,000 rpm y finalmente, agregar 0.6574 g de la enzima glucosa deshidrogenasa y mezclar velozmente durante 2 minutos a 33,000 rpm . Soluciones de Matriz Adicionales utilizando fenazinas alternativas Las soluciones de matriz se pueden preparar similarmente utilizando el método proporcionado anteriormente al sustituir los derivados de fenazina 1-sustituida alternativa por la 1- (3 -carboxipropiloxi ) -5-etil-fenazina o al sustituir similarmente las nitrosoanilinas alternativas por la nitrosoanilina representada por la fórmula VI. Los derivados de fenazina adecuados son estables fotoquímicamente en la forma acostumbrada. Aunque las sales cuaternarias de fenazina l-etil-5-sustituida ilustradas por la fórmula II pueden ser más adecuadas, también se pueden utilizar otras sales cuaternarias de fenazina l-alquil-5-sustituidas que son ilustradas por la fórmula I. Soluciones de Matriz Adicionales utilizando nitrosoanilinas alternativas Las soluciones de matriz también se pueden preparar por medio del método proporcionado anteriormente al sustituir las nitrosoanilinas representadas por la fórmula III por la nitrosoanilina representada por la fórmula VII. Preparación de las Tiras de Prueba Las tarjetas de electrodos marca ACCU-CHEK AvivaMR con separador y diseño capilar se cargaron con aproximadamente 1.8 µL de la solución de matriz básica descrita anteriormente en cada canal de electrodo y se secaron a aproximadamente 45°C durante aproximadamente 1 minuto. Las tarjetas secas se almacenaron en una atmósfera seca durante toda la noche y las tiras de las hojas delgadas de metal, superiores, hidrófilas se laminaron manualmente sobre la capa separadora. Las tarjetas se cortaron en tiras apropiadas y se almacenaron en frasquitos desecados hasta que se utilizaron. Este método se puede utilizar similarmente para preparar tiras de prueba a base de las diversas soluciones de matriz descritas anteriormente. Examen de la Respuestas a la Dosis de Sangre Entera Las muestras de sangre entera que contenían siete diferentes niveles de glucosa (de aproximadamente 50 a aproximadamente 600 mg/dL) se midieron utilizando las tiras de prueba preparadas anteriormente a partir de la solución de matriz básica utilizando aproximadamente un retardo de 2.5 segundos y aproximadamente una lectura de 2.5 segundos, lo que significa que se aplicó una señal aproximadamente 2.5 segundos después del contacto de la muestra con la tira de prueba y se tomó una lectura aproximadamente 2.5 segundos después de la aplicación de la señal. La corriente promedio se midió en aproximadamente 5 segundos después del contacto de la muestra con la tira de prueba para proporcionar una relación lineal entre la corriente y la concentración de glucosa. El establecimiento de una relación lineal entre la concentración de glucosa y la lectura de corriente facilita la utilización de la matriz química para analizar un analito tal como glucosa. Los resultados se proporcionan en la FIGURA 3. Se obtuvieron resultados similares utilizando tiras de prueba preparadas a partir de las diversas soluciones de matriz descritas anteriormente.

Desempeño de la matriz en diferentes niveles de oxígeno Las muestras de glucosa en la sangre que tenían niveles de glucosa que variaban de aproximadamente 0 a aproximadamente 110 mg/dL se saturaron con oxígeno en aproximadamente 39 mm Hg y en aproximadamente 100 mm Hg de oxígeno y los niveles de glucosa se determinaron utilizando las tiras de prueba descritas anteriormente que se prepararon a partir de la solución de matriz básica. Las muestras se condujeron con aproximadamente un retardo de 3 segundos y aproximadamente una lectura de 2 segundos. La corriente promedio en aproximadamente 5 segundos se determinó y se representó en un diagrama. Ningún nivel de oxígeno afectó la medición de glucosa como se ilustró en el diagrama proporcionado en la FIGURA 4. Se obtuvieron resultados similares con la repetición de este ejemplo con tiras de prueba preparadas a partir de las soluciones de matriz alternativas que se describieran anteriormente. En una prueba subsecuente, las muestras de sangre que tenían niveles de glucosa que variaban de aproximadamente 50 a aproximadamente 600 mg/L se saturaron con oxígeno en aproximadamente 42 mm Hg y aproximadamente 135 mm Hg de oxígeno y los niveles de glucosa se midieron utilizando las tiras de prueba preparadas anteriormente a partir de la solución de matriz básica. Ningún nivel de oxígeno afectó la medición de glucosa sobre este rango de concentración más amplio como se ilustra en la FIGURA 5. Se obtuvieron resultados similares con la repetición de este ejemplo con tiras de prueba preparadas a partir de las soluciones de matriz alternativas que se describieran anteriormente. Estudios de Interferencia de Maltosa Una solución madre de maltosa se preparó al agregar 21 mM de maltosa a 200 mL de solución salina. Se prepararon 6 muestra de sangre que contenían niveles de glucosa que variaban de aproximadamente 10 a aproximadamente 550 mg/L. Cada muestra se dividió en dos porciones y a una serie de muestras se agregó 0.05 mL de una solución madre de maltosa para cada porción de 1 mL de la muestra de prueba. A la segunda serie de muestras, un volumen igual de una solución salina se agregó a porciones de 1 mL de la muestra de prueba. El contenido de glucosa de las muestras se determinó con una tira de prueba estándar marca ACCU-CHEK AvivaR y una tira de prueba que tenía elementos estructurales generalmente similares, pero que contenía la nueva matriz química descrita anteriormente. Como se ilustra en la FIGURA 6, la maltosa inflo las mediciones hechas con la tira estándar marca ACCU-CHEK AvivaMR, mientras que las determinaciones hechas con la nueva matriz química fueron sustancialmente las mismas que las muestras que no contenían maltosa. Se obtuvieron resultados similares con la repetición de este estudio con tiras de prueba preparadas a partir de las soluciones de matriz alternativas que se describieran anteri ¦ormente. ACCU-CHEKMR y Avi»vaMR son marcas regi>stradas en los Estados Unidos de Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Stra e 116, D-68305 Mannheim, Alemania. Mientras que la descripción ha sido ilustrada y descrita en detalle en las figuras y la descripción anterior, se debe considerar a la misma como de carácter ilustrativo y no restrictivo, entendiéndose que solo se han mostrado y descrito modalidades seleccionadas y que se desea que todos los cambios, modificaciones y equivalentes que entran en el espíritu de las descripciones reportadas hasta ahora y/o definidas por las siguientes reivindicaciones sean protegidos. Además, todas las publicaciones citadas en este documento son indicativas del nivel de experiencia en el campo y en consecuencia se incorporan a manera de referencia en su totalidad como si cada una hubiera sido incorporada individualmente a manera de referencia y se hubiera expuesto completamente. Lo siguiente es una lista de modalidades preferidas de la invención: 1. Una composición de matriz química que es útil en la determinación de la concentración de un analito, la matriz comprende glucosa deshidrogenasa , dinucleótido de nicotinamida adenina, una sal cuaternaria de 5-alquilfenazina y una nitrosoanilina, en donde la matriz es estable en un pH de aproximadamente 6.5 a aproximadamente 8.5 y es estable fotoquímicamente . La composición de la modalidad preferida 1, en donde la sal cuaternaria de 5 - alqui 1 fenaz ina es un compuesto que tiene la fórmula: donde : Z se selecciona del grupo que consiste de - ( CH2 ) mCOOH , -NH-COCH3 y -0Y, donde m puede ser cualquier número entero que varía de 0 a aproximadamente 6 e Y se selecciona del grupo que consiste de O II -(CH2)n-C-Q, -(CH2)n-Q, y (CH2CH20)n - Q; donde n es un número entero que varía aproximadamente 1 a aproximadamente 4, Q es -OH, OR1, -NH2, -NHR2 , -NR -NH(CH2)0NR2R3, NH(CH2)o0H, -NHCH2CH2- (OCH2CH2) o (CH2)0NR2R3, (OCH2CH2) o0H, donde G es -COOH, O R1 es un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, R2 y R3 son los mismos o diferentes y cada uno representa H o un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, o es un número entero que varía de aproximadamente 1 a aproximadamente 6; y X es un anión seleccionado del grupo que consiste de haluro, sulfato, sulfato de alquilo, fosfato, fosfito, carboxilato, CF3COO~, CH3OS02~, C2H5OS02~ y CH3S03~ . La composición de la modalidad preferida 1, en donde la nitrosoani 1 ina es un compuesto que tiene la fórmula: Y, R10 indica hidrógeno, halógeno, alcoxi o alquiltio, R11 representa un residuo de alquilo o hidroxialquilo R12 representa un residuo de hidroxialqui lo o R11 y R12 son los mismos o diferentes y cada uno representa un residuo de dialquilaminoalquilo, un residuo de hidroxialquilo, hidroxialcoxialquilo o alcoxialquilo , o R11 y R12 forman un residuo de alquileno interrumpido por azufre, nitrógeno o un residuo de nitrógeno sustituido, o con la condición de que si R10 está en la posición orto con respecto a NR11R12, R11 también junto con R10 representan un residuo de alquileno en donde R12 entonces representa un residuo de hidroxialquilo o, R10 y R12 son los mismos o diferentes y cada uno representa un residuo de hidroxialquilo o una sal del mismo . La matriz química de la modalidad preferida 2, en donde R1 es C2H5. La matriz química de la modalidad preferida 4, en donde la nitrosoanilina tiene la fórmula: La composición de matriz química de la modalidad preferida 5, en donde Z es -0- ( CH2 ) 3C0H . La composición de matriz química de la modalidad preferida 5, en donde Z es -0- (CH2 ) 4 O -NHCH2CH2- (OCH2CH2) 4-C00H. 8. La composición de matriz química de la modalidad preferida 5, en donde Z es -0- (CH2) 4-NH2. 9. La composición de matriz química de la modal idad preferida 5, en donde Z es -0- (CH2) 3-OH. 10. La composición de matriz química de la modalidad preferida 5, en donde Z es -0- (CH2) 4-OCH3 11. La composición de matriz química de la modalidad preferida 5, en donde Z es - (CH2) C00H. 12. La composición de matriz química de la modalidad preferida 5, en donde Z es -NH-COCH3. 13. Una composición de matriz química para el uso en el análisis de la concentración de un analito, la composición comprende glucosa deshidrogenasa ; dinucleótido de nicotinamida adenina; una nitrosoanil ina y una sal cuaternaria de 5- alquilfenazina que tiene la fórmula: donde R6 se selecciona del grupo que consiste de -OH, 0R1, -NH2, -NHR2 , -NR2R3 , -NH(CH2)mNR2R3, -NH(CH2)m0H, 0(CH2)mNH2 y -0(CH2)mOH, R1 es un grupo alquilo de 1 a átomos de carbono, R2 y R3 son los mismos o diferentes y cada uno representa H o un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, X" es un anión seleccionado del grupo que consiste de haluro, sulfato, sulfato de alquilo, fosfato, fosfito, carboxilato, CF3COO~, CH3OS02", C2H5OS02" y CH3S03", y n y m son números enteros que varían de aproximadamente 1 a aproximadamente 6. 14. La matriz química de la modalidad preferida 13, en donde R1 es C2H5. 15. La matriz química de la modalidad preferida 14, en donde la nitrosoanil ina tiene la fórmula: R1Q indica hidrógeno, halógeno, alcoxi o alquiltio, R11 representa un residuo de alquilo o hidroxialquilo y R12 representa un residuo de hidroxialquilo o R11 y R12 son los mismos o diferentes y cada uno representa un residuo de dialquilaminoalquilo, un residuo de hidroxialquilo, hidroxialcoxialquilo o alcoxialquilo , o R11 y R12 forman un residuo de alquileno interrumpido por azufre, nitrógeno o un residuo de nitrógeno sustituido, o con la condición de que si R10 está en la posición orto con respecto a NR1:LR12, R11 también junto con R10 representan un residuo de alquileno en donde R12 entonces representa un residuo de hidroxialquilo o, R10 y R12 son los mismos o diferentes y cada uno representa un residuo de hidroxialquilo o una sal del mismo. La matriz química de la modalidad preferida 15, en donde la nitrosoanilina tiene la fórmula: Una composición de matriz química para el uso en el análisis de la concentración de un analito, que comprende glucosa deshidrogenasa , dinucleótido de nicotinamida adenina, una nitrosoanilina y una 1-carboxialquiloxi - 5 -alquil fenazina estable fotoquímicamente que es útil para determinar la concentración de un analito. La matriz química de la modalidad preferida 17, en donde la nitrosoanilina tiene la fórmula: en donde , R indica hidrógeno, halógeno, alcoxi o alquiltio, R11 representa un residuo de alquilo o hidroxialquilo y R12 representa un residuo de hidroxialquilo o R11 y R12 son los mismos o diferentes y cada uno representa un residuo de dialquilaminoalquilo, un residuo de hidroxialquilo, hidroxialcoxialquilo o alcoxialquilo , o R11 y R12 forman un residuo de alquileno interrumpido por azufre, nitrógeno o un residuo de nitrógeno sustituido, o con la condición de que si R10 está en la posición orto con respecto a NR1:LR12, R11 también junto con R10 representan un residuo de alquileno en donde R12 entonces representa un residuo de hidroxialquilo. La matriz química de la modalidad preferida 18, en donde la 5 -alquil - 1 - carboxialqui loxi fenazina es un compuesto que tiene la fórmula: en donde R6 se selecciona del grupo que consiste de -OH, -OR1 -NH2, -NHR2, -NR2R3, - H ( CH2 ) mNR2R3 , -NH(CH2)m0H, 0(CH2)mNH2 y -0(CH2)mOH, R1 es un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, R2 y R3 son los mismos o diferentes y cada uno representa H o un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono , X" es un anión seleccionado del grupo que consiste de haluro, sulfato, sulfato de alquilo, fosfato, fosfito, carboxilato, CF3COO", CH3OS02~, C2H5OS02" y CH3SO3", y n y m son números enteros que varían de aproximadamente 1 a aproximadamente 6. Un método para el análisis electroquímico de un analito en una muestra líquida, en cual comprende hacer reaccionar el analito con la matriz que incluye glucosa deshidrogenasa , dinucleótido de nicotinamida adenina, una nitrosoani 1 ina y una 1 -carboxialquiloxi -5-alquilfenazina estable fotoquímicamente para proporcionar un agente electroactivo , medir una respuesta electroquímica producida por el agente electroactivo y determinar la concentración del analito en la muestra líquida con base en la respuesta electroquímica medida. El método de la modalidad preferida 20, en donde el analito es glucosa y la muestra contiene de aproximadamente 20 mg/dL a aproximadamente 600 mg/dL de glucosa de la sangre. El método de la modalidad preferida 20, en donde la matriz química tiene un pH de aproximadamente 6.5 a aproximadamente 8.5. Un método para el análisis electroquímico de un analito en una muestra líquida, el cual comprende aplicar la muestra a un área de aplicación de un biosensor que tiene una tira de prueba que incluye una matriz química, cuantificar el analito por medio de la reacción con la matriz química y exhibir un resultado de la cuantificación en una pantalla de un dispositivo de supervisión configurado para el uso con el biosensor, en donde la matriz química incluye glucosa deshidrogenaba, dinucleótido de nicotinamida adenina, una nitrosoanilina, y una sal cuaternaria de 5-alquil enazina que tiene la fórmula: Z donde Z se selecciona del grupo que consiste de -(CH2)mCOOH, -NH-COCH3 y -OY, donde m es un número entero que varía de 0 a aproximadamente 6 e Y se selecciona del grupo que consiste de II -(CH2)n-C-Q, -(CH2)n-Q, y - (CH2CH20)„ - Q; donde n es un número entero que varía de aproximadamente 1 a aproximadamente 4; Q es -OH, -0R1, -NH2, -NHR2, -NR2R3, -NH ( CH2 ) QNR2R3 , -NH(CH2)o0H, -NHCH2CH2- (0CH2CH2)o-G( - (CH2 ) QNR2R3 , - (OCH2CH2) 0NR2R3 y - (OCH2CH2) o0H ; y G es -COOH, NR2R3 o donde R1 es un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, R2 y R3 son los mismos o diferentes y cada uno representa H o un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, o es un número entero que varía de aproximadamente 1 a aproximadamente 6 ; y X es un anión seleccionado del grupo que consiste de haluro, sulfato, sulfato de alquilo, fosfato, fosfito, carboxilato, CF3 COO" , CH3OS02", C2H5OS02" y CH3 SO3 " . 24. El método de la modalidad preferida 23, en donde la cuantificación se puede llevar a cabo para la muestra que tiene un nivel de glucosa en la sangre que varía de aproximadamente 20 a aproximadamente 600 mg/dL 25. El método de la modalidad preferida 23, en donde la cuantificación y la exhibición ocurren dentro de aproximadamente 5 segundos o menos después de la aplicación de la muestra. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (14)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Una composición de matriz química que es útil en la determinación de la concentración de un analito, caracterizada porque comprende glucosa deshidrogenasa , dinucleótido de nicotinamida adenina, una sal cuaternaria de 5-alquilfenazina y una nitrosoanilina, en donde la matriz es estable en un pH de 6.5 a 8.5 y es estable fotoquímicamente .

2. La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la sal cuaternaria de 5-alquilfenazina es un compuesto que tiene la fórmula: Z donde : Z se selecciona del grupo que consiste de -(CH2)mC00H, -NH-COCH3 y -0Y, donde m puede ser cualquier número entero que varía de 0 a 6 e Y se selecciona del grupo que consiste de II -(CH2)n-C-Q, -(CH2)n-Q, y - (CH2CH20)n - Q; donde n es un número entero que varía de 1 a 4 , Q es -OH, -0R1, -NH2, - HR2, -NR2R3, -NH (CH2) o R2R3, - H (CH2) o0H, -NHCH2CH2- (OCH2CH2) o-G, - (CH2 ) QNR2R3 , - (OCH2CH2) QNR2R3 o (OCH2CH2) o0H, donde G es -COOH, NR2R3 , o donde R1 es un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, R2 y R3 son los mismos o diferentes y cada uno representa H o un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, o es un número entero que varía de 1 a 6 ; y X es un anión seleccionado del grupo que consiste de haluro, sulfato, sulfato de alquilo, fosfato, fosfito, carboxilato, CF3C00", CH3OSO2 " , C2H5OSO2" y CH3SO3 " .

3. La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la nitrosoanilina es un compuesto que tiene la fórmula: R10 indica hidrógeno, halógeno, alcoxi o alquiltio, R11 representa un residuo de alquilo o hidroxialquilo y R12 representa un residuo de hidroxialquilo o R11 y R12 son los mismos o diferentes y cada uno representa un residuo de dialquilaminoalquilo, un residuo de hidroxialquilo, hidroxialcoxialquilo o alcoxialquilo, o R11 y R12 forman un residuo de alquileno interrumpido por azufre, nitrógeno o un residuo de nitrógeno sustituido, o con la condición de que si R10 está en la posición orto con respecto a NR1:LR12, R11 también junto con R10 representan un residuo de alquileno en donde R12 entonces representa un residuo de hidroxialquilo o, R10 y R12 son los mismos o diferentes y cada uno representa un residuo de hidroxialquilo o una sal del mismo.

4. La matriz química de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada porque R1 es C2H5.

5. La matriz química de conformidad con la reivindicación 4, caracterizada porque la nitrosoanilina tiene la fórmula:

6. La composición de la matriz química de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada porque Z se selecciona del grupo que consiste de -0- (CH2) 3C0H, 0- (CH2) 4CO-NHCH2CH2- (OCH2CH2) 4-COOH, -0- (CH2)4-NH2-, -0-(CH2)3-OH, -0- (CH2)4-OCH3, - (CH2) COOH y -NH-COCH3.

7. Una composición de la matriz química para el uso en el análisis de la concentración de un analito, caracterizada porque comprende glucosa deshidrogenasa ; dinucleótido de nicotinamida adenina; una nitrosoanilina y una sal cuaternaria de 5-alquilfenazina que tiene la fórmula: donde R6 se selecciona del grupo que consiste de -OH, -0R1, -NH2, -NHR2, -NR2R3, -NH (CH2) mNRR3 , -NH(CH2)m0H, -0(CH2)mNH2 y -0(CH2)m0H, R1 es un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, R2 y R3 son los mismos o diferentes y cada uno representa H o un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, X" es un anión seleccionado del grupo que consiste de haluro, sulfato, sulfato de alquilo, fosfato, fosfito, carboxilato, CF3COO", CH3OS02~, C2H50S02" y CH3S03~, y n y m son números enteros que varían de 1 a 6.

8. La matriz química de conformidad con la reivindicación 7, caracterizada porque R1 es C2H5. 9. La matriz química de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada porque la nitrosoanilina tiene la fórmula:

Y R10 indica hidrógeno, halógeno, alcoxi o alquiltio, R11 representa un residuo de alquilo o hidroxialquilo y R12 representa un residuo de hidroxialquilo o R11 y R12 son los mismos o diferentes y cada uno representa un residuo de dialquilaminoalquilo, un residuo de hidroxialquilo, hidroxialcoxialquilo o alcoxialquilo, o R11 y R12 forman un residuo de alquileno interrumpido por azufre, nitrógeno o un residuo de nitrógeno sustituido, o con la condición de que si R10 está en la posición orto con respecto a NR11R12, R11 también junto con R10 representan un residuo de alquileno en donde R12 entonces representa un residuo de hidroxialquilo o, R10 y R12 son los mismos o diferentes y cada uno representa un residuo de hidroxialquilo o una sal del mismo.

10. La matriz química de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada porque la nitrosoanilina tiene la fórmula:

11. Una composición de la matriz química para el uso en el análisis de la concentración de un analito, caracterizada porque comprende glucosa deshidrogenasa, dinucleótido de nicotinamida adenina, una nitrosoanilina y una l-carboxialquiloxi-5-alquilfenazina estable fotoquímicamente que es útil para determinar la concentración de un analito.

12. La matriz química de conformidad con la reivindicación 11, caracterizada porque la nitrosoanilina tiene la fórmula: Río en donde , R10 indica hidrógeno, halógeno, alcoxi o alquiltio, R11 representa un residuo de alquilo o hidroxialquilo y R12 representa un residuo de hidroxialquilo o R11 y R12 son los mismos o diferentes y cada uno representa un residuo de dialquilaminoalquilo, un residuo de hidroxialquilo, hidroxialcoxialquilo o alcoxialquilo, o R11 y R12 forman un residuo de alquileno interrumpido por azufre, nitrógeno o un residuo de nitrógeno sustituido, o con la condición de que si R10 está en la posición orto con respecto a NR^R12, R11 también junto con R10 representan un residuo de alquileno en donde R12 entonces representa un residuo de hidroxialquilo .

13. La matriz química de conformidad con la reivindicación 12, caracterizada porque la 5-alquil-l-carboxialquiloxifenazina es un compuesto que tiene la fórmula : en donde R6 se selecciona del grupo que consiste de -OH, -OR1, -NH2, -NHR2, - R2R3, -NHÍCH^ NR'R3, -NH(CH2)mOH, -0(CH2)n>NH2 y -0(CH2)mOH, R1 es un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, R2 y R3 son los mismos o diferentes y cada uno representa H o un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, X" es un anión seleccionado del grupo que consiste de haluro, sulfato, sulfato de alquilo, fosfato, fosfito, carboxilato, CF3C00", CH3OS02", C2H5OS02" y CH3S03", y n y m son números enteros que varían de 1 a 6.

14. Un método para el análisis electroquímico de un analito en una muestra líquida, caracterizado porque comprende hacer reaccionar el analito con la matriz que incluye glucosa deshidrogenasa, dinucleótido de nicotinamida adenina, una nitrosoanilina y una l-carboxialquiloxi-5-alquilfenazina estable fotoquímicamente para proporcionar un agente electroactivo, medir una respuesta electroquímica producida por el agente electroactivo y determinar la concentración del analito en la muestra líquida con base en la respuesta electroquímica medida. Un método para el análisis electroquímico un analito en una muestra liquida, caracterizado porque comprende aplicar la muestra a un área de aplicación de un biosensor que tiene una tira de prueba que incluye una matriz química, cuantificar el analito por medio de la reacción con la matriz química y exhibir un resultado de la cuantificación en una pantalla de un dispositivo de supervisión configurado para el uso con el biosensor, en donde la matriz química incluye glucosa deshidrogenasa, dinucleótido de nicotinamida adenina, una nitrosoanilina, y una sal cuaternaria 5-alquilfenazina que tiene la fórmula: Z donde Z se selecciona del grupo que consiste de -(CH2)mCOOH, NH-COCH3 y -OY, donde m es un número entero que varía de 0 a 6 e Y se selecciona del grupo que consiste de O II -(CH2)„-C-Q, -(CH2)n-Q, y - (CH2CH20)„ - Q; donde n es un número entero que varía de 1 a 4 ; Q es -OH, -NH2, -NHR2, -NR2R3, -NH (CH2) 0NR2R3, -NH (CH2)o0H, -NHCH2CH2- (0CH2CH2) O-G, - (CH2 ) 0NR2R3 , - (OCH2CH2 ) Q R2R3 y (0CH2CH2)o0H; y G es -COOH, NR2R3 o O donde ; R1 es un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, R2 y R3 son los mismos o diferentes y cada uno representa H o un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, o es un número entero que varía de 1 a 6 ; y X es un anión seleccionado del grupo que consiste de haluro, sulfato, sulfato de alquilo, fosfato, fosfito, carboxilato, CF3C00", CH3OSCV , C2H50SO2" y CH3SO3" .