MX2008004928A - Metodo para suministrar celulas progenitoras de foliculo piloso a la piel. - Google Patents
Metodo para suministrar celulas progenitoras de foliculo piloso a la piel.Info
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Abstract
La presente invención es un método para formar ejes del cabello salientes que comprende hacer una herida en la piel y colocar células progenitoras de folículo piloso sobre la herida, en donde un eje del cabello saliente se forma de las células progenitoras de folículo piloso. La presente invención es también un método para formar nueva piel que comprende hacer una herida en la piel y colocar células formadoras de piel sobre la herida, en donde nueva piel se forma de las células formadoras de piel.
Description
METODO PARA SUMINISTRAR CELULAS PROGENITORAS DE FOLICULO PILOSO A LA PIEL .ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El desarrollo de técnicas de suministro de células apropiadas es importante para muchas aplicaciones. No solo las células se deben suministrar a la parte apropiada del sujeto, sino la morfología de las células debe ser mantenida. i La morfología de' las células puede ser importante en muchos contextos. La morfología celular indica el estado de las células, tanto en términos de la salud de las células como en términos del estado de diferenciación de la célula. Cambios en la forma de la célula, o morfogenésis , son centrales a la función, desarrollo y enfermedad celular. Los procesos fisiológicos en las células son acompañados frecuentemente por cambios en la morfología celular. Ejemplos incluyen cambios en la ubicación intracelular , arreglo y estructura de los constituyentes celulares, tales como organelos, racimos moleculares o e? citoesqueleto, cambios en la morfología en la célula completa, tal como su forma y área, cambios en el espaciamiento y proximidad entre las células, y propiedades de colonias multicelulares tales como su forma, tamaño y ubicaciones celulares. BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN En una modalidad, la presente invención es un método para formar ejes del cabello salientes que comprende
hacer una herida en la piel y colocar células progenitoras de folículo piloso sobre la herida, en donde un eje del cabello saliente se forma de las células progenitoras de folículo piloso. La presente invención también es un método para formar nueva piel que comprende hacer una herida en la piel y colocar células formadoras de piel sobre la herida, en donde se forma nueva piel de las células formadoras de piel. BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La FIG. 1 muestra una rejilla de cortes superficiales sobre la superficie de la piel de un ratón desnudo y excrescencia de cabello (inserción) observada en dos semanas de pos-administración con células de la piel de ratón recién nacido negro. La FIG, 2 muestra una cuchilla de bisturí que se utiliza para hacer una herida punzante superficial sobre la superficie de laj piel de un ratón desnudo y el excrescencia de cabello (inserción) observada en dos semanas de posadministración de las células de piel de ratón recién nacido negro en la herida. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Se ha descubierto que las células se pueden suministrar en la piel superficial sin perturbar las características inherentes de las células al hacer una herida en un área donde las células se desean y colocar las células sobre la herida. Se espera que las células se orienten por sí
mismas apropiadamente para formar la estructura deseada* en el suministro con el método de la .presente invención. Adecuadamente, las células se pueden colocar sobre la superficie de la piel sobre la parte superior de la herida o en la herida misma. El método de suministro celular de la presente invención se puede utilizar para formar ejes del cabello salientes. El método de suministro celular de la presente invención también se puede utilizar para formar nueva piel para tratar, reparar o mejorar condiciones que incluyen, pero no se limita a, úlceras de -la piel, ulceras de pie diabético, llagas de cama, heridas de quemadura, infecciones microbianas, y cicatrices tales como aquellas que resultan de cirugía, acné, o enfermedades tales como varicela. El suministro de células apropiadas mediante los métodos de la presente invención también se podría utilizar para formar glándulas sudoríparas, uñas, parpados, pestañas y otros cabellos. El método de la presente invención también podría ser utilizado para formar la dermis o epidermis utilizando células autólogas o alogenitas genéticamente alteradas. Adecuadamente, el método de suministro celular de la presente invención se puede utilizara para formar tanto capas dérmicas como epidérmicas de la piel.- Alternativamente, ya sea las capas dérmicas o las epidérmicas se pueden formar mediante el método de la presente invención.
La herida se puede formar mediante cualquier técnica que altere la superficie exterior del área en la cual las células se desean tal como punción, corte o raspadura del área con un instrumento afilado, que incluyen, pero no se limita a, una cuchilla de bisturí o una aguja. La herida también se puede formar al raspar el área con, por ejemplo, agujas tales como microagujas o agujas ranuradas. Para ciertas modalidades, el instrumento afilado se puede modificar para formar una herida con una profundidad medida. Por ejemplo, la herida puede ser por lo menos aproximadamente 10 µp? en profundidad, por o menos aproximadamente 200 µt? en profundidad, no más de aproximadamente 500 µp? en profundidad, o no más de aproximadamente 250 µ?t? en profundidad. La herida puede ser de aproximadamente 10 µp? a aproximadamente 500 µ?? en profundidad. La herida puede ser ilimitada en longitud máxima. En ciértas modalidades de la invención, la profundidad de la herida se puede ajustar para suministrar las células en la subepidermis, la dermis papilar, la dermis reticular superior, o los mismos niveles del lecho de la uña de la piel acral (piel de la palma de la mano-de la planta del pie) . Adecuadamente, la herida es poco profunda suficiente que el sujeto no sangra. La herida sana adecuadamente sin formar una cicatriz. Después de que las células se colocan sobre la
herida, la herida se pude cubrir con un vendaje o aposito; por ejemplo, un aposito no adherente, o un aposito de plástico transparente tal como Tegaderm® (3M, St . Paul, MN) o un aposito para quemaduras basado en gel. Vaselina o la similar también se puede aplicar a la herida. El aposito se puede dejar en lugar preciso por aproximadamente 3 a aproximadamente 7 días. Adecuadamente, el aposito puede ser sustancialmente impermeable al agua. ¦ Las células pueden comprender células dérmicas, células epidérmicas, células madre epidérmicas, células básales, queratinocitos , fibroblastos o combinaciones de los mismos. Las células se pueden derivar de fuentes foliculares, ecrinas o de uña. Adecuadamente, las células son células formadoras de piel o células progenitoras de folículo piloso. Para ciertas modalidades de la presente invención, la relación de las células epidérmicas a dérmicas es adecuadamente de manera aproximada 10:1 a aproximadamente 1:10. Adecuadamente, la relación puede ser de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 5:1. Las células se pueden proporcionar adecuadamente en una suspensión en; un portador fisiológicamente aceptable, por ejemplo, solución salina estéril. Componentes adicionales también se pueden adicionar a la suspensión celular. Componentes adicionales adecuados incluyen factores de crecimiento, moléculas ' de nutrientes o moléculas
estabilizadoras . , Los siguientes ejemplos se proporcionan para ayudar en el entendimiento adicional de la invención. Los materiales y métodos particulares empleados son considerados que son ilustrativos de la invención y no se proponen para ser limitativos sobre el alcance de las reivindicaciones. EJEMPLOS Ejemplo 1. Excrescencia de cabello de células inductivas de •folículo administradas a cortes superficiales sobre la superficie de la piel de ratón. Un ratón desnudo atímico (nu/nu) (Charles River, Inc.) se anestesió y una rejilla de cortes superficiales
(Figura 1) se hizo sobre la pie dorsal con el uso de una cuchilla de bisturí de número 11. Los cortes fueron poco profundos suficientes no para extraer sangre. Una mezcla de células de piel de ratón negro recién nacido recientemente aisladas que comprenden 100,000 células epidérmicas y 200,000 células dérmicas se preparó como sigue. Piel truncal se removió de ratones recién nacidos y se enjuagó en Ca2+ y Mg2+ libre de PBS. La piel se colocó en horizontal en Dispase que contiene PBS (2.5 mg por mi, Invitrogen, Carslbad, CA) a 4°C durante la noche o 37 °C durante 2 horas. Células dérmicas y epidérmicas inductivas se aislaron como se describe en Weinberg y colaboradores, J. Invest. Dermatol . , 100:229-236
(1993), que se incorpora en la presente por referencia. Una
suspensión de las células en 2 microlitros de solución salina reguladas estéril se suministró a la red de cortes mediante pipeta. La piel se separó suavemente durante unos pocos segundos para permitir al fluido absorberse por toda la rejilla. Un aposito hidrofóbico no adherente (gasa recubierta con petrolato) se aplicó a la herida y el ratón se vendó adicionalmente con una envoltura elástica para prevenir la remoción del aposito en la recuperación de la anestesia. El aposito se removió después de 10 días. Después de 2 semanas el crecimiento de cabello se observó (Figure 1, inserción) principalmente dentro del patrón de rejilla. El ratón luego se eutanizó y la piel se removió suavemente. La observación de la parte inferior de la piel casi no reveló cabellos que crecen hacia dentro y la presencia de bulbos de folículo que corresponden al cabello visible visto sobre la superficie de la piel. Ejemplo 2. Excrescencia de cabello de células inductivas de folículo administradas a la herida punzante superficial sobre la superficie de, la piel de ratón. Un ratón desnudo atímico (nu/nu) (Charles River, Inc.) se anestesió y una herida punzante se hizo en la piel al perforar con la punta de una cuchilla de bisturí del número 11 mantenida en un ángulo bajo a la superficie de la piel (Figura 2) . Una mezcla de célula de la piel de ratón negro recién nacido recientemente aislada que comprenden
100,000 células epidérmicas y -200,000 células dérmicas se prepararon como se describe en lo anterior. Una suspensión de las células de 2 microlitros de solución salina regulada estéril se colocó gota a gota en el corte mediante pipeta. Un aposito hidrofóbico, no adherente (gasa recubierta con petrolato) se aplicó a la herida y el ratón se vendó adicionalmente con una envoltura elástica para prevenir la remoción de aposito en la recuperación de la anestesia. El aposito se removió después de 10 días. Después de 2 semanas el crecimiento de cabello se observó. (Figura 2, inserción) precisamente en el sitio de la incisión punzante. El ratón luego se eutanizó y la piel se removió suavemente. La observación de la parte inferior de la piel reveló casi nada de cabellos que crecen adentro y la presencia de bulbos del folículo que corresponden al cabello visible visto sobre la superficie de la piel. Ejemplos 3. Uso de materiales de aposito para heridas diferentes. Los ejemplos 1 y 2 se repitieron utilizando diferente tipos de materiales de aposito para herida como se muestra en la Tabla 1. TABLA 1 Suministro Superficial de Células de Ratón en Ratones : Desnudos
I 1
Ejemplo 4. Crecimiento de cabello nuevo en cuero cabelludo calvo mediante la aplicación de células autólogas en incisiones superficiales. Heridas superficiales se crean sobre la cabeza de un sujeto humano con una cuchilla quirúrgica o bisturí, como rejillas, múltiples cruces, líneas paralelas o similares tal patrón para lograr el efecto . cosmético deseado para el crecimiento de cabello. Células dérmicas y epidérmicas tricogénicas humanas autólogas (opcionalmente mezcladas con melanocitos de folículo piloso si es necesario para restaurar la pigmentación de cabello) en suspensión luego se extienden sobre la parte superior de los cortes superficiales con puntas de pipeta o jeringas y la herida se cubre durante 2-3 días para prevenir a las células .de · desecarse a ser incorporadas en la piel. Folículos pilosos salientes luego se forman. Ejemplo 5. Crecimiento de cabello nuevo en cuero cabelludo calvo mediante la aplicación de células dérmicas en incisiones superficiales. Heridas se crean sobre la cabeza de un sujeto humano con una cuchilla quirúrgica o bisturí, como rejillas,
múltiples cruces, lineas paralelas o similares tal patrón para lograr el efecto cosmético deseado para el crecimiento de cabello. Las células dérmicas tricogénicas humanas solas ( opcionalmente mezcladas con melanocitos de folículo piloso si se necesita para restaurar la pigmentación del cabello) en suspensión luego; se extienden sobre la parte superior de los cortes superficiales con puntas de pipeta o jeringas y la herida se cubre durante 2-3 días para prevenir a las células desecarse previo a ser incorporadas en la piel. Luego se forman folículos pilosos salientes. Ejemplo 6. Formación de nueva piel para tratar a un sujeto con una ulcera de pie diabético. Un sujeto con una ulcera de pie diabético se anestesia bajo anestesia local o general, y una serie de cortes superficiales se hace en la ulcera. Los cortes son poco profundos suficientes para no extraer sangre. Una suspensión de células básales en 2 microlitros de solución salina regulada estéril se suministra a los corte mediante pipeta. La piel se separa suavemente por unos pocos segundos para permitir al fluido absorberse a través de la red. Un aposito hidrofóbico, no adherente (gas o recubierta con petrolato) se aplica a la herida. El aposito se remueve después de 10 días. La nueva piel se forma un al ulcera se sana. Ejemplo 7. Formación de nueva piel para tratar a- un sujeto
con llagas de cama. Un sujeto con llagas de cama se anestesia bajo anestesia local ó general y una serie de cortes super iciales se hace en llagas de cama. Los cortes son poco profundos suficientes para no extraer sangre. Una suspensión de células básales en 2 microlitros de solución salina regulada estéril se suministra a los corte mediante pipeta. La piel se separa suavemente por unos pocos segundos para permitir al fluido absorberse a través de la red. Un aposito hidrofóbico, no adherente (gas o recubierta con petrolato) se aplica a la herida. El aposito se remueve después de 10 días. La nueva piel se forma un al ulcera se sana. Como se utiliza en esta especificación y las reivindicaciones : adjuntas, las formas singulares "un", "uno" y "el" incluyen referentes plurales a menos que el contexto lo dicte claramente de otra manera. También será notado que el término "o" se emplea generalmente en su sentido que incluye "y/o" a menos que el contexto lo dicte claramente de otra manera. Todas las publicaciones, patentes y solicitudes de patente se incorporan expresamente en la presente por referencia al mismo grado como si cada publicación individual o solicitud de patente se indicara especifica o individualmente por referencia. En caso de conflicto entre la presente descripción y las patentes incorporadas, publicaciones y ^ referencias, la presente descripción debe
controlarlo . También se entiende específicamente que cualquier intervalo numérico recitado en la presente incluye todos los valores del valor más bajo al valor superior, es decir, todas las combinaciones posibles de valores numéricos entre el valor más bajo y el valor más alto enumerado van a ser considerados que se establecen expresamente en esta solicitud. Por ejemplo, si un intervalo de concentración se establece como 1% a 50%, se propone que l-os valores tal como 2% a 40%, 10%! a 30%, o 1% a 3%, etc., se' enumeran expresamente en esta especificación. Si un intervalo de concentración es "por lo menos 5%", se propone que todos los valores de porcentaje hasta y que incluyen 100% también son expresamente enumerados. Estos son solo ejemplos de lo que se propone específicamente. La invención ha sido descrita con referencia a i varias modalidades y técnicas específicas. Sin embargo, debe ser entendido que muchas variaciones y modificaciones se pueden hacer mientras que permanecen dentro del espíritu y alcance de la invención.
Claims (21)
- REIVINDICACIONES 1. Un método para formar ejes del cabello salientes, caracterizado porque comprende hacer una herida en la piel y colocar células progenitoras de folículo piloso sobre la herida, en donde se forma un eje del cabello saliente.
- 2. El! método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque las células comprenden células dérmicas.
- 3. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque las células comprenden células epidérmicas .
- 4. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque las células se colocan en la piel subepidérmica .
- 5. Ei método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado: porque las células se colocan en la piel dérmica papilar.
- 6. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque las células se colocan en la piel dérmica reticular superior.
- 7. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la herida es por lo menos de aproximadamente 10 µp? en profundidad.
- 8. El .método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la herida es por lo menos de aproximadamente 2,00 µp? en profundidad.
- 9. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la herida no es más de aproximadamente 5'00 µp\ en profundidad.
- 10. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la herida no es más de aproximadamente 2,50 µp? en profundidad.
- 11. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque además comprende cubrir la herida que contiene células progenitoras de folículo piloso con un aposito para heridas.
- 12. Un método para formar nueva piel, caracterizado porque comprende hacer una herida en un área en necesidad de nueva piel y colocar células formadoras de piel sobre la herida, en donde se forma nueva piel.
- 13. . El método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque las células comprenden células básales .
- 14. El método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque las células se colocan en la piel subepidérmica . '
- 15. El1 método de conformidad ' con la reivindicación 12, caracterizado porque las células se colocan en la piel dérmica papilar.
- 16. El método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque las células se colocan en la piel dérmica reticular superior.
- 17. El método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque la herida es por lo menos de aproximadamente 10 µp\ en profundidad.
- 18. El método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque la herida es por lo menos de aproximadamente 200 µp? en profundidad.
- 19. El¡ método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque la herida no es más de aproximadamente 500 µ?t? en profundidad.
- 20. El método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque la herida no es más de aproximadamente 250 en profundidad.
- 21. El, método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque además comprende cubrir la herida que contiene las, células formadoras de .piel con un aposito para heridas.
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