MX2008003067A - Composicion que comrpende un dendrimero y el uso del mismo para enlazar fosfato. - Google Patents

Abstract

La presente invencion proporciona metodos y composiciones mejorados para controlar y/o reducir terapeuticamente los niveles de fosfato serico en animales y en pacientes mamiferos. Los metodos comprenden administrar al paciente una cantidad de una composicion de dendrimero efectiva para prevenir la absorcion de cantidades substanciales de fosfato a partir del tracto GI del paciente. En una version preferida, una dosis de entre 2.5 y 15 gramos por dia es efectiva para evitar que sea absorbido mas de 80% de fosfato presente en el tracto GI del paciente. La composicion de dendrimero puede comprender una forma clorhidrato, bromhidrato, hidroacetato o hidroanionica.

Description

COMPOSICIÓN QUE COMPRENDE UN DENDRIMERO Y EL USO DEL MISMO PARA ENLAZAR FOSFATO CAMPO DE LA INVENCIÓN La invención se relaciona generalmente a métodos y composiciones para enlazar fosfato terapéutico en un paciente mamífero, preferentemente por uso de dendrímeros, como se define posteriormente. Más preferentemente, los métodos y composiciones de la presente invención son usados con pacientes en diálisis y otros quienes tienen una incapacidad para excretar fosfato. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El riñon es esencial no solamente por su capacidad de filtrar toxinas y nutrientes en exceso a partir de la sangre, sino también por su capacidad para sintetizar la forma activa de la vitamina D3, 1, 25-dihidroxivitamina D3 [1, 25 (OH)2D3]. En pacientes con enfermedad renal crónica, ambas funciones están dañadas. Consecuentemente, los niveles de l,25(OH)2D3 disminuyen, llevando a la hipocalcemia.

Mientras tanto, los nutrientes, particularmente el fósforo, se acumulan en la sangre. La hipocalcemia y la hiperfosfate ia son ambos estimulantes potentes de la secreción de la hormona paratiroides (PTH por sus siglas en inglés) . Al paso del tiempo, el hiperparatiroidismo en la presencia de incluso cantidades en trazas de l,25(OH)2D3 provoca la reabsorción ósea en exceso, llevando a una REF.:190462 afección conocida como osteodistrofia renal (1) . Además del tratamiento de diálisis, es esencial suprimir los niveles excesivos de la PTH y reducir el fósforo en la sangre para evitar esta afección. . Los análogos de la vitamina D, tales como 1,25-dihidroxi-19-nor-vitamina D2 (19-nor-D2, Zemplar®, Abbott Laboratories, Abbott Park, IL) y la-hidroxivitamina D2 [la- (OH)D2, Hectorol®, Genzyme Corporation/Bone Care International, Middleton, Wl] son administrados a los pacientes para suprimir el hiperparatiroidismo. Aunque estos análogos son efectivos para suprimir los niveles de PTH, todavía retienen alguna capacidad para estimular la absorción de calcio y fosfato intestinal, lo cual puede ser problemático cuando los análogos son administrados en altas dosis o junto con enlazadores de fosfato oral a base de calcio (1) . Reducir la absorción de fósforo a partir de los alimentos es también una tarea reto. La recomendación dietética permitida (RDA por sus siglas en inglés) para fósforo es 700 mg por día (2), pero la mayoría de los americanos consume 1000-1600 mg de fósforo cada día (3) . La restricción dietética de fósforo no es muy efectiva debido a la riqueza en fósforo de alimentos tales como los productos lácteos, carne, pescado, huevo, nueces, granos, comidas horneadas, y bebidas suaves. Por otra parte, se estima que 65-75% del fósforo consumido es absorbido (4) . Como un resultado, los enlazadores de fosfato oral son con frecuencia administrados con las comidas para reducir la absorción del fósforo. En los años setenta, los enlazadores a base de aluminio fueron extensivamente usados para enlazar al fosfato a partir de los alimentos, pero el uso fue severamente reducido después de que se mostró de que el aluminio se acumulaba en los pacientes provocando efectos laterales tóxicos tales como enfermedades óseas, encefalopatía, y anemia (5) . El acetato de calcio (PhosLo, Nabi Pharmaceuticals, Boca Ratón, FL) se desarrolla entonces como una alternativa para los enlazadores a base de aluminio, pero debe ser administrado en altos niveles para ser efectivo. Adicionalmente, cuando se administra junto con l,25(OH)2D3 o un análogo de la vitamina D, el calcio oral puede contribuir a la hipercalcemia (5) . Recientemente, el carbonato de lantano (Fosrenol®, Shire US Incorporated, Wayne, PA) fue aprobado por la FDA para uso como un enlazador de fosfato oral. Aunque efectivo, su baja velocidad de absorción incrementa algo de especulación de que pueden originarse cuestiones de toxicidad con el uso a largo plazo (6). El clorhidrato de sevelamer (Renagel®, Genzyme Corporation, Cambridge, MA) , un polímero de enlace de fosfato, ha sido exitosamente usado para reducir la absorción del fósforo dietético con efectos laterales menores que el aluminio o el calcio (7) . Desafortunadamente, el clorhidrato de sevelamer es costoso (costo promedio de $4400 por año en 2002) y debe ser tomado en grandes cantidades (dosis promedio de 6.5 g por día) para ser efectivo (8). Los dendrímeros son herramientas terapéuticas bien conocidas. Los dendrímeros han sido usados en aplicaciones las cuales incluyen agentes de imagen, nano-andamios, fármacos antitumorales, agentes de transfección de genes, recipientes a nanoescala y proteínas artificiales biomiméticas (14) . Sin embargo, las composiciones de dendrímero terapéuticas que enlazan fosfato, por lo mismo tratando la hiperfosfatemia y enfermedad renal crónica, no son conocidas . De esta forma, existe una necesidad para composiciones de dendrímeros las cuales contienen varias cantidades de aminas libres que pueden enlazar al fosfato e inhiben su absorción in vivo. BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona un método mejorado para controlar losniveles de fosfato sérico en mamíferos el cual comprende administrar al mamífero una cantidad de una composición de dendríméro efectiva para evitar la absorción de cantidades substanciales de fosfato a partir del tracto Gl del mamífero, en donde se controla el nivel de fosfato sérico del mamífero. Una dosis de entre 2.5 y 15 gramos por día es efectiva para evitar de que sea absorbido por lo menos 50% de fosfato presente en el tracto Gl del mamífero. La composición de dendrímero puede comprender un clorhidrato, bromhidrato, hidroacetato, o alguna forma de anión hidro. En una versión preferida se selecciona el dendrímero a partir del grupo el cual consiste de tetraclorhidrato de eritro-1, 2 , 3 , 4-tetraaminobutano o diaminobutano . En una versión preferida adicional la composición de dendrímero comprende un dendrímero de acuerdo a las estructuras 4, 5 ó 6 (Figuras ID-1F) . En otra versión, la presente invención proporciona un método para reducir la absorción de fosfato intestinal en animales por administrar al animal una cantidad de una composición de dendrímero efectiva para evitar la absorción de cantidades substanciales de fosfato a partir de tracto Gl del animal, en donde se reduce el nivel de fosfato sérico de los animales. En una versión preferida, una dosis diaria de entre 2.5 y 15 gramos por día es efectiva para evitar que sea absorbido por lo menos 50% de fosfato presente en el tracto Gl del animal . En una versión preferida se evita por lo menos que sea absorbido 80% del fosfato del tracto Gl del animal . La composición del dendrímero puede comprender un clorhidrato, bromhidrato o hidroacetato u otras formas hidroaniónicas . BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Las Figuras 1A-1G muestran los enlazadores de fosfato terapéuticos de la presente invención. Figura ÍA) Estructura 1: diclorhidrato de 1, 4 : 3 , 6-dianhidro-2 , 5-diamino- 2, 5-dideoxi-D-iditol (FC) . Figura IB) Estructura ' 2: tetrac?orhidrato de eritro-1, 2, 3 , 4-tetraaminobutano (KB-54). Figura ÍC) Estructura 3: dendrímero diaminobutano (DAB-4-C1) Generación 1. Figura ID) Estructura 4: dendrímero de diaminobutano Generación 2 (DAB-8-C1) . Figura ÍE) Estructura 5: Dendrímero de diaminobutano (DAB-16-C1) Generación 3. Figura ÍF) Estructura 6: Dendrímero de diaminobutano (DAB-64- Cl) generación 5. Figura 1G) Estructura 1 -. D.AB-8-AcOH. Las Figuras 2A-2B muestran que el Calcio o Renagel ® enlazan fosfato in vivo. Se administra a ratas en ayuno 0.5 ml de agua ó 20 mg de calcio (como acetato de calcio) ó 14.4 mg de Renagel® disuelto en agua por medio de gavage gástrico. Se administra inmediatamente a las ratas una dosis de 3 µCi33P en 0.5 ml de amortiguador el cual contiene 10, 50 ó 100 mM de KH2P04 y se sacrifican después de 60 minutos. Figura 2A) por ciento de dosis de 33P oral el cual permanece en el tracto digestivo. *Significativamente diferente de las ratas administradas con agua antes de 33P en el mismo nivel de fosfato no etiquetado (p<0.05). ** _Significativamente diferente de ratas administradas con 14.4 mg de Renagel ® antes a 33P en el mismo nivel de fosfato no etiquetado (p<0.05). Figura 2B) por ciento de dosis de 33P oral detectado en suero. * Significativamente diferentes de ratas administradas con agua antes de 33P en el mismo nivel de fosfato no etiquetado (p<0.05). Las Figuras 3A-3B comparan los enlazadores de fosfato oral novedosos descritos en la presente. Se administra a las ratas en ayuno 0.5 ml de agua ó 10 mg de calcio (como acetato de calcio), 14.4 mg de Rénagel®, o un enlazador de fosfato novedoso (descrito en la Tabla 1) disuelto en agua por medio de gavage. gástrico. Se administran inmediatamente a las ratas una segunda- dosis de 3 µCi33P en 0.5 ml de amortiguador el cual contiene 10 mM de KH2P04, y se sacrifican después de 60 minutos. Figura 3A) Por ciento de dosis de 33P oral que permanece en el tracto digestivo. Figura 3B) por ciento de dosis de 33P oral detectado en suero. ^Significativamente diferente de las ratas administradas con agua antes a 33P (p<0.05). **Significativamente diferente de las ratas administradas con Renagel® antes a 33P (p<0.05). Las Figuras 4A-4B ilustran la respuesta de dosis a los compuestos de dendrímero. Se administra a las ratas en ayuno 0.5 ml de agua ó 14.4 mg de Renagel® o un enlazador de fosfato novedoso disuelto en agua por medio de gavage gástrico. Se administran inmediatamente las ratas una dosis de 3 µCi 33P en 0.5 ml de amortiguador el cual contiene 10 mM de KH2P04 y se sacrifican después de 60 minutos. Figura 4A) por ciento de dosis de 33P oral la cual permanece en el tracto digestivo. Figura 4B) por ciento de dosis de 33P oral detectada en suero. *Significativamente diferente de ratas administradas con agua antes a 33P (p<0.05). **Significativamente diferente de ratas administradas con Renagel® antes a 33P (p<0.05). Las Figuras 5A-5B ilustra el mecanismo que subyace a la capacidad del dendrímero para enlazar al fosfato. Se administra a las ratas en ayuno 0.5 ml de agua ó 14.4 mg de Renagel® o un enlazador de fosfato novedoso disuelto en agua por medio de gavage gástrico. Se administran inmediatamente las ratas una dosis de 3 µCi 33P en 0.5 ml de amortiguador el cual contiene 10 mM de KH2P04 y se sacrifican después de 60 minutos. Figura 5A) por ciento de dosis de 33P oral la cual permanece en el tracto digestivo. Figura 5B) por ciento de dosis de 33P oral detectado en suero. *Significativamente diferente de ratas administradas con agua antes a 33P (p<0.05). **Significativamente diferente de ratas administradas con Renagel® antes a 33P (p<0.05). ND= no detectable. La Figura 6 ilustra la síntesis de la Estructura 1, FC. La Figura 7 ilustra la síntesis de la Estructura 2, KB-54.

La Figura 8 ilustra la síntesis de la Estructura 3, DAB-4-C1. La Figura 9 ilustra la síntesis de la Estructura 4, DAB-8-C1. La Figura 10 ilustra la síntesis de la Estructura 5, DAB-16-C1. La Figura 11 ilustra la síntesis de la Estructura 6, DAB-64-C1. La Figura 12 ilustra la síntesis de la Estructura 7, DAB-8-AcOH. La Figura 13 ilustra el efecto de los dendrímeros de hidroacetato en la absorción intestinal de 33P. La Figura 14 ilustra el efecto de los dendrímeros de hidroacetato en la absorción de 33P en el suero. DESCRICPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona un método de enlace del fosfato terapéutico en un animal o paciente mamífero, preferentemente por el uso de un dendrímero, como se define posteriormente. Más preferentemente, se usa el método de la presente invención con pacientes con diálisis y otros quienes tienen una incapacidad para excretar el fosfato. La presente invención también proporciona composiciones de dendríméros terapéuticas. Preferentemente, la presente invención es una forma clorhidrato, bromhidrato o hidroacetato de dendrímeros descritos en las Patentes de los Estados Unidos de Norteamérica 5,530,092 y 5,610,268, incorporadas en la presente. Más preferentemente, la presente invención es la forma clorhidrato de DAB-16 y DAB-64 (Figuras ÍE y ÍF) . La presente invención implica tratar un paciente con una cantidad de composición de dendrímero efectiva para controlar los niveles de fosfato séricos en el paciente. Por ".control", se entiende incrementar y/o, más preferentemente, disminuir la cantidad de fosfato absorbida por el tracto Gl del paciente de acuerdo a la dosis y composición del dendrímero administrado al paciente. Por ejemplo, cuando un paciente requiere niveles reducidos de fosfato sérico, la presente invención evita la absorción de cantidades substanciales de fosfato a partir del tracto Gl . Por "substancial" se entiende en la presente invención que evita que por lo menos 50% del fosfato sea absorbido en el tracto Gl . Más preferentemente, la presente invención evita que por lo menos 80% del fosfato sea absorbido en el tracto Gl . La eficacia de esta invención está determinada por medir los niveles de fosfato séricos del paciente por cualquier prueba convencional conocida en la técnica. La presente invención es efectiva cuando los niveles de fosfato sérico del paciente se reducen por al menos 10%, pero más preferentemente, cuando los niveles de fosfato sérico del paciente se reducen por al menos 20%. Se administra el dendrímero en una cantidad en el intervalo entre 2.5 y 15 gramos por día. Esta dosis es preferentemente dividida igualmente entre dos o más comidas . Una ruta preferida de administración es en forma líquida, tal como una bebida o una cápsula. Es una ventaja de la presente invención que la composición de dendrímero sea soluble. La invención puede también incluir una composición farmacéutica la cual comprende una composición de dendrímero combinada con un portador aceptable farmacéuticamente propuesto para reducir y/o controlar los niveles de fosfato séricos en mamíferos. La composición puede ser administrada a un mamífero, una célula, o un órgano aislado. Ejemplos de portadores farmacéuticos adecuados son bien conocidos en la técnica e incluyen soluciones salinas amortiguadas con fosfato, agua, emulsiones, tales como emulsiones de aceite/agua, varios tipos de agentes de humectación, soluciones estériles y similares. Las composiciones las cuales comprenden tales portadores pueden ser formuladas por métodos, convencionales bien conocidos. Estas composiciones farmacéuticas pueden ser administradas al mamífero en una dosis adecuada. La administración de las composiciones adecuadas puede ser efectuada por diferentes formas, por ejemplo, por inyección intravenosa, intraperitoneal, subcutánea, intramuscular, tópica o intradérmica, o por inhalación o inyección intracranial . Por "composición de dendrímero" se entiende para incluir las moléculas descritas en las Patentes de los Estados Unidos de Norteamérica 5,530,092 y 5,610,268, incorporadas en la presente para referencia. Estas moléculas incluyen macromoléculas las cuales comprenden un núcleo y ramificaciones que emanan del núcleo, en donde las ramificaciones son basadas en cianuro de vinilo y/o unidades de fumarildinatrilo. Más preferentemente, el dendrímero comprende un dendrímero de diaminobutano (DAB) . Por "composición de dendrímero" se entiende también el incluir versiones neutralizadas de dendrímeros descritos en las patentes enlistadas anteriormente. Más preferentemente, el dendrímero de diaminobutano está en la forma clorhidrato, como se describe posteriormente. Otras formas neutralizadas preferibles incluyen la forma bromhidrato (o cualquier haluro o ácido orgánico) y la forma de hidroacetato. Las composiciones de dendrímero de este tipo pueden ser sintetizadas de acuerdo a las técnicas convencionales, incluyendo aquellas descritas en las Patentes de los Estados Unidos de Norteamérica 5,530,092 y 5,610,268, incorporadas en la presente para referencia, y Buhleier, "Cascade" y "Non-skid-Chain-Like" Synthesis of Molecular Cavity Topologies, Síntesis, 155-158 (Febrero de 1978). Ejemplos Los siguientes ejemplos indican aspectos preferidos de la presente invención. Se entiende, sin embargo, que estos ejemplos son proporcionados por la forma de ilustración y nada en los mismos debe ser tomado como una limitación ante el alcance total de la invención. Materiales y Métodos Animales: Se usan ratas macho Sprague-Dawley (Harían Sprague-Dawley, Madison, Wl) las cuales pesan aproximadamente 120 gramos en todos los experimentos. En los experimentos para medir la absorción de 33P, se alimentan las ratas con dieta de comida de laboratorio (Lab Diet 5012, Richmond, IN) la cual contiene 1% de calcio y 0.7% de fósforo ad libitum por menos de una semana antes del experimento. En los experimentos para medir los niveles de calcio y fósforo fecal, se alimentan las ratas con dieta purificada descrita previamente (9) por 9 días. Esta dieta es mezclada con proteína de clara de huevo (Harían Tecklad, Madison, Wl) y contiene 0.20% de fósforo inorgánico y 0.47% de calcio. Se complementa la dieta purificada con 100 µl de aceite de fríjol de soya (aceite Wesson, ConAgra Foods, Irvine, CA) el cual contiene 500 µg de a-tocoferol, 60 µg de menadiona, 40 µg de ß-caroteno y 1.875 µg de colcalciferol tres veces a la semana. Todas las ratas son alojadas en jaulas para colgar de alambre bajo un ciclo de 12 horas de luz/12 horas de oscuridad y tienen libre acceso al agua destilada. Todos los métodos experimentales son aprobados por el Research Animal Resources Center en la University of Wisconsin-Madison. Absorción de fosfato intestinal: Después de ayuno en la noche, se administra a las ratas 0.5 ml de agua o un enlazador de fosfato oral disuelto en agua por medio de un gavage gástrico. Se administra inmediatamente una segunda dosis de 0.5 ml la cual contiene 3 µCi 33P (como H3P0 , actividad específica 155.8 Ci/mg, New England Nuclear/Perkin Elmer, Boston, MA) en un amortiguador de KH2P0 10, 50 ó 100 mM en pH 7.4 por medio de gavage gástrico. Se sacrifican las ratas por asfixia con C02 inmediatamente o 60 minutos después de la dosis oral. Las ratas que son sacrificadas inmediatamente (etiquetadas "0 minutos de control" en las figuras) son usadas para determinar si la dosis de 33P oral es administrada apropiadamente y recuperada completamente. Se recolecta la sangre por medio de punción del corazón y se centrífuga en 1500 x g por 15 minutos en 22°C para separación de suero. Se amarra una sutura al extremo cranial del esófago para contener el líquido dentro del estómago. El tracto digestivo total es entonces removido y se permite disolver por varios días en HN03 concentrado (aproximadamente 1 ml de HN03 por gramo de tejido) . El volumen exacto del tracto digestivo disuelto es determinado por diluir los tejidos disueltos a volúmenes iguales con agua. La cantidad de radioactividad en el suero corporal total y volumen total de tejido disuelto es determinada después del conteo de escintilación líquida de 50 µl de alícuotas por triplicado (Tri-Carb liquid Scintillation .Analyzer, Perkin-Elmer/Packard, Boston, MA) . Se estima el suero corporal total para ser 40 ml de suero/kg de peso corporal (10) . Mediciones de calcio y fósforo fecal. Se alimentan las ratas con la dieta purificada descrita anterior o la misma dieta con 1.2% de calcio, 0.15% de Renagel®, ó 0.15% de DAB-4, D.AB-8, ó DAB-16 por 7 días. Las ratas son entonces cambiadas a jaulas metabólicas y se recolecta materia fecal por 48 horas. Se congelan las muestras fecales, se liofilizan y se calientan por arriba de 600°C durante la noche en un horno de mufla. Se disuelven entonces las cenizas restantes durante la noche en 25 ml de HCl 6N. La concentración del calcio del ácido es determinada por espectroscopia de absorción atómica de flama (Modelo 3110, Perkin Elmer, Norwaik, CT) usando una alícuota de las cenizas disueltas diluidas 1:40 con 1 g/1 de LaCl3. La concentración de fósforo de una alícuota de las cenizas disueltas es determinada por un ensayo colorimétrico descrito previamente (11) . Análisis estadístico. Los datos son presentados como media + error estándar de la media (SEM por sus siglas en inglés) . Se comparan los grupos de tratamiento por un análisis totalmente factorial de varianza (ANOVA) y se someten las medias a pruebas de diferencia significativa menor de Tukey, Scheffe y Fisher (LSD por sus siglas en inglés) (Systat 5.2.1, Systat Software, Inc., Point Richmond, CA) . Las diferencias son consideradas significativas si por lo menos dos de las pruebas detectan significancia con un valor p< 0.05, a menos que se especifique otra cosa. Síntesis de la Estructura 1, FC. Como se observa en la Figura 6, la síntesis de la Estructura 1, FC (compuesto 17 en la Figura 6) es un proceso de tres etapas. En la etapa 1, se agita una suspensión de 174 mg (0.95 mmoles) D-manitol (compuesto 14) en 4 ml (49.4 mmoles) de piridina seca bajo argón en temperatura ambiente por 0.5 horas. Entonces, se agrega diclorometano seco (14 ml) , se enfría la mezcla a 10°C (baño de sal hielo) y se agrega en gotas anhídrido triflico (1.15 ml, 6.86 mmoles) durante un periodo de 0.5 horas. Se continua la agitación en 4°C (temperatura fría) por 12 horas. Se diluye la solución con diclorometano (20 ml) y se lava con agua (6 x 7 ml) , solución acuosa saturada de CuS0 (7 ml) , otra vez agua (3 x 7 ml) y se seca en Na2S04 anhidro, se filtra. La evaporación de los solventes, luego la cromatografía de columna muy rápida (30% de hexano/acetato de etilo) produce un compuesto inestable, semisólido cremoso 15 (139 mg, 0.14 mmoles, 15% de rendimiento). [a]D + 97.9 (c.1.0, CHC13); XH NMR (400 MHz, CDC13): d 4.15 (m, 2H) , 4.77 (dd, 2H, J=4.1 Hz, J=8.1 Hz), 5.21 (dd, 2H, J=4.3 Hz, J=9.3 Hz); 13C NMR (100 MHz, CDC13): d70.9, 80.4, 80.45, 118.5 (q, JC,F=318.98 Hz) . En la etapa 2, se disuelven 120 mg (0.123 mmoles) del compuesto 15 y 72 mg (1.107 mmoles) de NaN3 en benceno seco (2 ml) . Se agrega el 18-crown-6 (0.956 g, 0.36 mmoles) y se agita la mezcla de reacción bajo argón en 40°C por 3 horas, después se enfría a temperatura ambiente, se diluye con CH2C12 (10 ml) y se lava con agua (6 x 4 ml) . Se seca la capa orgánica en ?a2S04 anhidro, se filtra y se concentra cuidadosamente bajo presión reducida. Se purifica el residuo por cromatografía de columna (acetato de etilo al 20%/hexano) . Después de la cromatografía, se remueven los solventes bajo presión reducida y finalmente por purga una corriente de argón por 1 hora para dar el compuesto 16 co o un aceite incoloro (20 mg, 0.102 mmoles, 83% de rendimiento). X ?MR (400 MHz, CDCl3): d 3.89 (dd, 2H, J=4.0 Hz, J=10.2 Hz) , 3.93 (dd, 2H, J=1.5 Hz , J=10.1 Hz) , 4.6 (dd, 2H, J=1.2 Hz, J=3.8 Hz); 13C ?MR (100 MHz, CDCl3): d 65.7, 71.9, 86.0. En la etapa 3, se disuelven 20 mg (0.102 mmoles) del compuesto 16 en 2 ml de etanol y se agregan 10 mg de Pd al 10%/C. Se remueve el aire por purgar con argón por 15 minutos . Se hidrogena la mezcla usando una corriente lenta de hidrógeno en temperatura ambiente por 3 horas (control de TLC, acetato de etilo al 20%/hexano) . Después de eso, se filtra la mezcla a través de celite. Se lavan el matraz y celite con etanol (10 ml) . El filtrado el cual contiene 1,4:3, 6-dianhidro-2 , 5-diamino-2 , 5-dideoxi-D-iditol sin purificar es tratado con una solución de HCl (HCl acuoso-37.3%: 35 µl , 0.432 mmoles; etanol: 1.2 ml) y se agita en temperatura ambiente por 2 horas. Se filtra entonces el precipitado, se lava con etanol (15 ml) , se seca en aire por 12 horas y después en un horno de vacío en 60°C por 48 horas para dar 13 mg (0.06 mmoles, después de dos etapas 59% de rendimiento) del compuesto 17 como un cristal blanco (punto de fusión arriba de 270°C; en 250°C el compuesto cambia a gris oscuro. [a]D + 55.2 (c.1.1, H20) ; XH NMR (400 MHz, D20) : d 4.01-4.07 (m, 4H) , 4.22 (dd, 2H, J=5.1 Hz, J=10.9 Hz) , 5.01 (S, 2H) ; J=1.5 Hz, J=10.1 Hz) ; H NMR (400 MHz, DMS0-d6) : d 3.68 (br s, 2H) , 3.88 (dd, 2H, J=2.6 Hz, J=10.3 Hz), 3.98 (dd, 2H, J=5.2 Hz, J=10.4 Hz) , 4.85 (s, 2H) , 8.71 (br s, 6H) ; 13C NMR (100 MHz, D20) : d 55.9, 70.1, 84.5; 13C NMR (100 MHz, DMSO-de): d55.5, 70.2, 84.7; Análisis elemental calculado para C6H?402N2Cl2 : C 33.52%, H 6.56%, N 13.03%, Cl 32.03%; encontrado C 33.24%, H 6.43%, N 12.72%, Cl 33.98%. Síntesis de la estructura 2 , KB-54. Como se observa en la Figura 7, la síntesis de la Estructura 2, KB-54 (compuesto 4 en la Figura 7) es un proceso de tres etapas. La etapa 1 implica la síntesis" de 1, 2 , 3 , 4-tetra-0-bencensulfonil-meso-eritritol (compuesto 2) . El compuesto 3 es sintetizado por disolver 13 g (106 mmoles) de meso-eritritol (compuesto 1) en piridina seca (400 ml) . Se enfría la solución a -10°C (baño de sal hielo) y se agrega en gotas cloruro de bencensulfonilo (81.5 ml, 640 mmoles) en un periodo de 1 hora. Se remueve el baño de enfriamiento y se agita la mezcla en temperatura ambiente por 5 horas. Se recolecta el precipitado y se lava con acetato de etilo (250 ml) , agua (1L0 y otra vez con acetato de etilo (200 ml) . Entonces se seca el producto con aire por 12 horas y entonces en horno de vacío en 50°C por 30 horas para producir 27 g (39 mmoles, 37% de rendimiento) de cristales blancos (compuesto 2) (punto de fusión 184-186°C, lit, punto de fusión 184-185.5°C -R.L. Willer, J. Org. Chem., 1984, 49, 5150-5154). Se combinan los filtrados orgánicos, se concentran a 200 ml y se permite que esté a temperatura ambiente para dar la siguiente porción del producto cristalino. Se repiten los procedimientos de lavado y secado, produciendo 30 g (44 mmoles, 41% de rendimiento) de una segunda porción del compuesto 2 (punto de fusión 183-185°C) . El rendimiento total es 57 g (83 mmoles, 78% de rendimiento) . XH NMR (400 MHz, D20) : d 4.03 (dd, 2H, J=6.6 Hz, J=11.5 Hz) , 4.31 (d, 2H, J=11.5 Hz) , 5.03 (d, 2H, J=6.7 Hz) , 7.60-7.81 ( , 20H) ; 13C NMR (100 MHz, DMS0-d6) : d 66.7, 76.7, 127.56, 129.7, 129.8, 134.3, 134.6, 134.7, 134.8; MS (ESI) masa exacta calculada para C28H260?2S4Na([M+Na]+) 705.0205, encontrada 705.175. La etapa 2 implica la síntesis de eritro-1, 2, 3, 4-tetraazidobutano (compuesto 3). Esto es realizado por combinar 27 g (39 mmoles) del compuesto 2 con 17.17 g (264 mmoles) de NaN3, 0.5 g de (1.80 mmoles) de 18-crown-6 y 220 ml de DMF seco en un matraz equipado con un condensador de reflujo. Se agita la mezcla de reacción en 100°C por 48 horas y entonces se enfría a temperatura ambiente, se diluye con agua (0.5 ml) y se lava con CH2C12 (7 x 200 ml) . Se combinan las capas orgánicas, se lavan con agua (8 x 100 ml) y solución acuosa saturada de NaCl (3 x 100 ml) se secan en Na2S0 anhidro, se filtran y se concentran muy cuidadosamente bajo presión reducida. Se purifica el residuo café oscuro (el cual contiene cantidades pequeñas de DMF) por cromatografía de columna (Hexano, 5-10% de acetato de etilo/hexano) para dar 6.36 g (0.028 mmoles, 72% de rendimiento) del compuesto 3 , un líquido incoloro. Debido a los peligros bien conocidos de loscompuestos poliazido, se concentra parcialmente el producto bajo presión reducida después de la cromatografía y se remueven el residuo de solventes por purgar una corriente de argón por 2 horas (R. L. Willer, J. Org. Chem., 1984, 49, 5150-5154). X NMR (400 MHz, CDC13): d 3.52-3.8 (m, 4H) , 3.67 (d, 2H, J=10.2 Hz); 13C NMR (100 MHz, CDC13): d 52.0, 61.5. En la etapa 3, se disuelve el compuesto 3 5.93 g (26.7 mmoles) en 130 ml de etanol y se agrega 1.5 g de Pd al 10%/C. Se remueve el aire por purgar con argón por 15 minutos. Se hidrogena la mezcla usando una corriente baja de hidrógeno en temperatura ambiente por 5 horas (control de TLC, 10% de acetato de etilo/hexano) . Después de esto se filtra la mezcla a través de celite. Se lava el matraz y la celite con metanol (12 ml) . El filtrado el cual contiene eritro-1 , 2 , 3 , 4-tetraaminobutano sin purificar es tratado con una solución de HCl (HCl acuoso-36.3% : 9.73 ml, 117.4 mmoles: metanol: 34 ml) y se agita en temperatura ambiente por 12 horas. Se filtra el precipitado rosa pálido, se lava con metanol (300 ml) , se seca en aire por 12 horas y después en un horno de vacío en 60°C por 48 horas para dar 4.84 g (8.3 mmoles, después de dos etapas, rendimiento de 68%) del compuesto 4 (punto de fusión, 255°C; en 150°C el compuesto 4 cambia a café). XH NMR (400 MHz, D20) : d 3.20 (dd, 2H, J=8.6 Hz, J=14.0 Hz), 3.35 (dd, 2H, J=3.0 Hz, J=14.0 Hz), 3.75 (br d, 2H, J=9.3 Hz); XH NMR (400 MHz, DMSO-d6) : d 3.31 (dd, 2H, J=7.2 Hz, J=14.2 Hz) , 3.47 (dd, 2H, J=3.8 Hz, J=14.3 Hz) , 4.08 (br d, 2H, J=8.9 Hz) , 8.98 (br s, 12H) ; 13C NMR (100 MHz, D20) : d 39.0, 50.3; 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) : d 38.2, 49.9; Análisis elemental calculado para CH?sNCl4; C 18.19%, H 6.87%, N 21.21%, Cl 53.71; encontrado C 18.37%, H 7.01%, N 21.29%, Cl 53.46%. Síntesis de la Estructura 3, DAB-4-C1. Como se observa en la Figura 8, la conversión del dendrímero DAB-Am-4 a clorhidrato (Compuesto 6) es realizado por disolver 8.47 g (26.76 mmoles) de DAB-Am-4, dendrímero de polipropilenimina tetraamina, generación 1.0 (producto DSM) (compuesto 5) en agua deionizada (200 ml) . Se remueve el aire por purgar con argón por 15 minutos y solución de HCl (HCl acuoso-37.0%; 15.85 ml, 193.02 mmoles; agua deionizada: 30 ml) se agrega en gotas. Se agita la mezcla de reacción en temperatura ambiente por 1 hora y entonces se remueven los solventes bajo presión reducida. Se disuelve el residuo en 100 ml de agua deionizada y se evapora (se repite el procedimiento cinco veces), se seca en bomba de vacío (48 horas) y finalmente en horno de vacío en 60°C por 2 días para producir 14.32 g (26.75 mmoles, rendimiento cuantitativo) de un cristal beige (compuesto 6) (punto de fusión 242-245°C) . XH NMR (400 MHz, D20) : d 1.89 (s, 4H) , 2.14-2.24 (m, 8H) , 3.15 (t, 8H, J=7.5 Hz) , 3.36-3.40 (m, 12); 13C NMR (100 MHz, D20) : d 20.5, 21.6, 36.4, 49.9, 52.3; .Análisis elemental calculado para C_.6H46N6Cl6; C 35.90%, H, 8.66%, N 15.69%, Cl 39.73; encontrado C 35.88%, H 8.73%, N 15.28%, Cl 39.25% Síntesis de la estructura 4, DAB-8-C1. Como se observa en la Figura 9, la conversión del dendrímero DAB-Am-8, generación 2.0 en clorhidrato (compuesto 8) se realiza por disolver (10 g, 12.93 mmoles) de DAB-Am-8 de dendrímero de polipropilenimina octaamina, generación 2.0 (producto DSM) en agua deionizada (300 ml) . Se remueve el aire por purgar con argón por 15 minutos y se agrega en gotas una solución de HCl (HCl acuoso-37.0%: 19.3 ml, 235.44 mmoles; agua deionizada; 40 ml) . Se agita la mezcla de reacción en temperatura ambiente por 1 hora y entonces se remueven los solventes bajo presión reducida. Se disuelve el residuo en 100 ml de agua deionizada y se evapora (se repite el procedimiento cinco veces) , se seca en bomba de vacío (24 horas) y finalmente en horno de vacío en 60°C por 3 días para producir 16.44 g (12.81 mmoles, 99%) de compuesto 8 cristalino blanco (punto de fusión 153-155°C) . XH NMR (400 MHz, D20) : d 1.94 (s, 4H) , 2.18-2.23 (m, 16H) , 2.26-2.34 (m, 8H) , 3.16 (t, 16H, J=7.8 Hz), 3.41-3.43 (m, 36H) ; 13C NMR (100 MHz, D20) : d 19.0, 20.6, 21.6, 36.4, 49.8, 49.9, 50.0, 52.6; Análisis elemental calculado para C0H?10N?4Cl?4; C 37.42%, H 8.63%, N 15.27%, Cl 38.66%; encontrado C 35.81%, H 9.22%, N 14.52%, Cl 37.66%. La proporción de los elementos indica conversión total de los grupos amino en clorhidratos: Cl/C calculado 1.03, Cl/N 2.53, C N 2.45; encontrado Cl/C 1.05, Cl/N, 2.59, C/N 2.46. Síntesis de la Estructura 5, DAB-16-C1. Como se observa en la Figura 10, la conversión del dendrímero DAB-Am-16, generación 3.0 en el clorhidrato (10) es realizada por disolver 5 g (2.96 mmoles) de dendrímero DAB-Am-16, dendrímero de polipropilenimina hexadecaamina (9) en agua deionizada (150 ml) . Se remueve el aire por purgar con argón por 15 minutos y se agrega en gotas una solución de HCl (HCl acuosa-37%: 9.5 ml, 115.56 mmoles de agua deionizada: 20 ml) . La mezcla de reacción es agitada en temperatura ambiente por 1 hora y entonces se remueven los solventes bajo presión reducida. Se disuelve el residuo en 150 ml de agua deionizada y se evapora (se repite el procedimiento cinco veces), se seca en bomba de vacío (24 horas) y finalmente en horno de vacío en 60°C por 3 días para producir 8.24 g (2.96 inmoles, rendimiento cuantitativo) de compuesto cristalino cremoso (10) (punto de fusión 266°C) . ?H NMR (600 MHz, D20) : d 1.81 (s, 4H) , 2.07-2.10 (m, 32H) , 2.14-2.19 (m, 24H) , 3.06 (t, 32H, J=7.7 Hz), 3.28-2.37 (m, 84H) ; 13C NMR (100 MHz, D20) : d 19.0, 19.1, 20.7, 21.6, 36.4, 49.8, 49.9, 50.1, 50.3, 52.9; Análisis elemental calculado para C88H238N3oCl3o: C 38.01%, H 8.63%, N 15.11%, Cl 38.25%, encontrado C 38.25%, H 9.13%, N 15.11%, Cl 38.25%. La proporción de los elementos indica conversión total de grupos amino en clorhidratos : calculado Cl/C 1.01, Cl/N 2.53, C/N 2.51; encontrado Cl/C 1.03, Cl/N 2.60, C/N 2.52. Síntesis de la Estructura 6, DAB-64-C1. Como se observa en la Figura 11, la conversión del dendrímero DAB-Am-64, Generación 5.0 en clorhidrato (12) es realizada por disolver 1.06 g (0.14 mmoles) de DAB-Am-64, dendrímero de polipropilenimina tetrahexacontaamina en CH3C1 (25 ml) . Se remueve el aire por purgar con argón por 15, minutos y se agrega en gotas una solución concentrada de HCl (HCl acuoso 37.3%: 1.66 ml , 19.99 mmoles). Se agita la mezcla de reacción en temperatura ambiente por 1 hora y entonces se remueven los solventes bajo presión reducida. Se disuelve el residuo en 20 ml de agua deionizada y se evapora (se repite el procedimiento cinco veces) , se seca en bomba de vacío (5 horas) y finalmente en horno de vacío en 60°C por 3 días para producir 1.525 g (0.13 mmoles, 95% de rendimiento) del compuesto cristalino amarillo (12) ((punto de fusión 274-276°C) . X NMR (600 MHz, D20) : d 1.793 (s, 4H) , 2.11-2.19 y 2.23-2.34 (2x m, 248H) , 3.09 (t, 128H, J=7.6 Hz) , 2.32-2.47 (m, 372H) ; 13C NMR (100 MHz, D20) -solo señales visibles fáciles: d 19.2, 19.3, 20.9, 21.8, 36.7, 49.3, 49.7, 49.9, 50.3, 51.0; Análisis elemental calculado para C376H?oo6N?26Cl126; C 38.39%, H 8.62%, N 15.00%, Cl 37.07%; C encontrado 38.43%, H 9.25%, N 15.05%, Cl 38.35%. La proporción de elementos indica conversión total de grupos amino en clorhidratos; Cl/C calculado 0.99, Cl/N 2.53, C/N 2.55; encontrado Cl/C 0.99, Cl/N 2.54, C/N 2.55. Síntesis de la estructura 7, DAB-8-AcOH. Como se observa en la Figura 12, la conversión del dendrímero D.AB-Am-8, generación 2.0 en decahidroacetato es realizada por disolver 6.92 g (8.95 mmoles) de DAB-Am-8, dendrímero de polipropilenimina octaamina, generación 2.0 (producto DSM) 1 en agua deionizada (260 ml) . Se remueve el aire por purgar con argón por 15 minutos y se agrega en gotas una solución de AcOH (AcOH glacial: 8.0 ml, 137.86 mmoles; agua deionizada, 160 ml) . Se agita la mezcla de reacción en temperatura ambiente por 12 horas y entonces se remueven los solventes bajo presión reducida. Se disuelve el residuo en 250 ml de agua deionizada y se evapora (se repite el procedimiento dieciséis veces) . Finalmente, se disuelve la muestra en 100 ml de agua deionizada, se congela y se liofiliza (48 h) para producir 11.78 g (8.57 mmoles, 96%) del compuesto 3 como el aceite anaranjado pálido muy pegajoso. 1H NMR (400 MHz, D20) : d 1.63 (s, 4H) , 1.74-1.85 (m, 24H) , 1.88 (s, 30H) , 2.52-2.62 (m, 24H) , 2.86-3.02 ( , 28H) , 13C NMR (100 MHz, D20) : d 20.9, 21.7, 23.2, 23.4, 37.7, 49.7, 50.3, 50.8, 52.6, 181.3; Análisis elemental calculado para C6oH?6N10o: C 52.45%, H 9.97%, N 14.27; encontrado C 52.05%, H 10.28%, N 14.43%. Resultados Calcio o Renagel® enlazan fosfato in vivo. En mediciones previas de la absorción de fosfato intestinal, se administra 33P en un amortiguador de KH2P0 0.5 M. Sin embargo, cuando se mezclan 0.5 mM de KH2P0 con 100 mM de CaCl2, esa concentración de fosfato no precipita. Esto sugiere que una concentración superior de KH2P0 es necesaria para que el calcio enlace al fosfato. De hecho, para detectar la precipitación de fosfato por exceso de calcio, el nivel de fosfato necesario tiene que ser incrementado a 10 mM (datos no mostrados) . De esta forma, para determinar las afecciones óptimas para probar enlazadores de fosfato oral in vivo, se administra agua, 20 mg de calcio (como acetato de calcio) , ó 14.4 mg de Renagel® a ratas en ayuno. Las ratas son administradas inmediatamente con una dosis oral de 33P en un amortiguador el cual contiene 10, 50 ó 100 mM de KH2P0 , y se sacrifican después de 60 minutos. Como se muestra en la Figura 2A, a las ratas que se administra 20 mg de calcio ó 14.4 mg de Renagel® antes a 33P tienen significativamente más 33P restante en el intestino después de 60 minutos que las ratas a las que se les administra agua antes a 33P independientemente del nivel de fosfato no etiquetado en la dosis oral. Por otra parte, 20 mg de calcio enlazan más 33P en el intestino que 14.4 mg de Renagel®, y esta diferencia alcanza significancia cuando se administra 33P en 10 ó 100 mM de fosfato. Una disminución significativa en niveles de 33P sérico también es detectada en ratas dosificadas con 10 mg de calcio, pero la disminución en niveles de 33P sérico observado en ratas dosificadas con 14.4 mg de Renagel® no es estadísticamente significante (Figura 2B) . Comparación de enlazadores de fosfato orales novedosos. La capacidad de enlace de enlazadores de fosfato orales novedosos mostrados en las Figuras 1A-1G es comparada con el calcio y Renagel®. La Tabla 1 enlista el peso y cantidades molares de todos los compuestos usados en este y subsecuentes experimentos . Las ratas son administradas primero con 0.5 ml de agua ó 0.5 ml de agua que contiene 10 mg de calcio (como acetato de calcio), 14.4 mg de Renagel®, o un enlazador de fosfato novedoso. Una dosis oral de 33P en un amortiguador de KH2P04 10 mM es inmediatamente administrada y las ratas son sacrificadas 60 minutos después. Tanto 10 mg de calcio y 14.4 mg de Renagel® incrementan significativamente la cantidad de 33P que permanece en el tracto digestivo (Figura 4A) , y reducen significativamente los niveles de 33P sérico (Figura 4B) . Los enlazadores novedosos KB-54 (Estructura 2, Figura IB) , DAB-4 (Estructura 3, Figura ÍC) , D.AB-8 (Estructura 4, Figura ID) , DAB-16 (Estructura 5, Figura ÍE) y DAB-64 (Estructura 6, Figura ÍF) también incrementan significativamente la cantidad de 33P restante en el tracto digestivo y reducen significativamente los niveles de 33P sérico. Adicionalmente, DAB-8-C1 (Estructura 4, Figura ID) y DAB-16-C1 (Estructura 5, Figura ÍE) incrementan significativamente la cantidad de 33P restante en el tracto digestivo y reducen significativamente los niveles de 33P sérico comparados con una cantidad comparable de Renagel®. FC (Estructura 1, Figura ÍA) no afecta la cantidad de 33P que permanece en el tracto digestivo, pero provoca una disminución ligera, pero significativa en niveles de 33P sérico. Tabla 1. Resumen de soluciones usadas para enlazar una dosis de 33P oral. Se administra 0.5 ml de una solución la cual contiene enlazador de fosfato oral a las ratas antes a la dosis de 33P oral. NA= no disponible porque la información estructural es privada.

Respuesta a dosis a compuestos de dendrímero. Se compara la capacidad de DAB-4, DAB-8, DAB-16, y DAB-64 para enlazar fosfato en un estudio de respuesta a dosis. Se administra primero a las ratas 0.5 ml de agua, 0.5 ml de agua la cual contiene 14.4 mg de Renagel®, ó un dendrímero. Una dosis oral de 33P en 10 mM de amortiguador KH3P0 es inmediatamente administrada y se sacrifican las ratas después de 60 minutos. Todos los compuestos de dendrímero incrementan el 33P restante en el tracto digestivo (Figura 4A) y correspondiente disminuyen los niveles de 33P sérico (Figura 4B) en una forma dependiente a dosis. Casi todos los incrementos en 33P permanecen en el tracto digestivo, y muchas de las disminuciones en niveles de 33P sérico, son estadísticamente significativas. Además, los dos niveles más altos de DAB-8 y DAB-16, y el nivel más alto de DAB-64, incrementan significativamente el 33P restante en el intestino y reducen significativamente los niveles de 33P sérico comparados con Renagel®. Mecanismo gue subyace a la capacidad del compuesto de dendrímero para enlazar fosfato. Para determinar si el número de grupos amino libres en el compuesto dendrímero es responsable para su capacidad de enlace al fosfato, se administra a las ratas números iguales de moles o grupos amino libres a partir de DAB-4, DAB-8 y DAB-16. Se administra inmediatamente a las ratas una dosis oral de 33P en un amortiguador de KH2P04 10 M y se sacrifican después de 60 minutos . Como se observa en la Figura 5A, el Renagel® y todos los niveles de los dendrímeros son capaces de incrementar la cantidad de 33P que permanece en el tracto digestivo a un grado significativo. Sin embargo, 13.9 mg de DAB-16-C1 es el único nivel de enlazador capaz de reducir significativamente los niveles de 33P séricos (Figura 5B) . En forma interesante, cuando se agrega una cantidad equivalente de grupos amino libres de DAB-4 y DAB-16, el DAB-16 es capaz de retener significativamente más 33P en el tracto digestivo. Las ratas son alimentadas con una dieta de control purificada la cual contiene 0.47% de calcio y 0.20% de fósforo o la misma dieta con calcio agregado, ó 0.15% de Renagel®, DAB-4, DAB-8, ó DAB-15 por una semana. Se recolectan entonces las muestras fecales por 48 horas, se secan y se llevan a cenizas. Se disuelven las cenizas en ácido para determinar los niveles de calcio y fósforo. Los niveles de calcio fecal son incrementados significativamente en ratas alimentadas con una dieta de calcio al 1.20%, lo cual confirma que las dietas son mezcladas y administradas correctamente. Se incrementa el fósforo fecal, aunque no significativamente, en ratas alimentadas con una dieta la cual contiene 1.20% de calcio ó 0.15% de DAB-4. Como se muestra en la Tabla 2, las ratas que son alimentadas con D.AB-18 al 0.15% ó DAB-16 tienen niveles de fósforo fecal incrementados significativamente comparados con ratas alimentadas con una dieta de control o una dieta con 0.15% de Renagel® de acuerdo a la prueba LSD de Fisher solamente. Como se observa en las Figuras 13 y 14, los dendrímeros de hidroacetato (tal como la estructura 7, Figura 1G) trabajan solo tan efectivamente como los dendrímeros de clorhidrato . Tabla 2 : Los dendrímeros incrementan los niveles de fósforo fecal: Los niveles de calcio y fósforo fecal a partir de ratas alimentadas con una dieta de control la cual contiene 0.47% de Cal y 0.2% de P, o dieta de control con calcio, Renagel®, DAB-4, DAB-8 ó DAB-16 agregado. Los datos son presentados como media + error estándar de las medias (SEM) . *Significativamente 'diferente de la cantidad de calcio en heces fecales a partir de ratas alimentadas con una dieta de control (p<0.05) . **Significativamente diferente de la cantidad de calcio en heces fecales a partir de ratas alimentadas con dieta de control como se detecta por la prueba LSD de Fisher solamente (p<0.05) .

Conclusión: El manejo del fosfato sanguíneo es un elemento reto, pero esencial, en el tratamiento de hiperparatiroidismo secundario en pacientes con enfermedad renal crónica. Además del tratamiento de diálisis, los pacientes son con frecuencia administrados con análogos de vitamina D para suprimir los niveles de PTH y enlazadores de fosfato oral para reducir la absorción de, fosfato a partir de alimentos. Aunque varios tipos de enlazadores de fosfato oral han sido desarrollados, todos tienen eficacia limitada debido a la toxicidad potencial, capacidad de enlace baja, ó alto costo.

El presente documento compara una variedad de compuestos novedosos los cuales contienen grupos amino libres para el potencial para enlazar fosfato cuando se administran oralmente en ratas. Uno de estos compuestos, FC, no parece enlazar una dosis de 33P oral. Sin embargo, KB-54 y la primera, segunda, tercera y quinta generaciones de un dendrímero de DAB reducen la absorción de una dosis de 33P oral . Cada generación del compuesto dendrímero enlaza 33P oral en una forma dependiente a dosis, y DAB-8 y DAB-16 enlazan significativamente más 33P que una cantidad equivalente de Renagel®. El mecanismo por el cual los compuestos de dendrímero enlazan fosfato es investigado por medir la capacidad de igual número de moles y número igual de grupos amino libres a partir de DAB-4, DAB-8 y DAB-16 para reducir la absorción de 33P. Cuando se administra un número equivalente de grupos amino libres en la forma de DiAB-4 y D.AB-16 no enlaza significativamente más 33P, lo cual sugiere que los grupos amino libres no son responsables exclusivamente para la capacidad del dendrímero para enlazar fosfato.' Sin embargo, cuando se administra una cantidad equimolar de DAB-8 y DAB-16 a las ratas, DAB-16 retiene significativamente más 33P en el tracto digestivo, lo cual implica que el número de grupos amino libres puede ser, en parte, responsable para la capacidad del compuesto dendrímero para enlazar fosfato. Los niveles tolerables de dendrímeros DAB-4, DAB-8, y DAB-16 son entonces alimentados a las ratas y se encuentra que incrementan los niveles de fósforo fecal. Aunque las diferencias son significativas por la prueba LSD de Fisher solamente, el incremento en fósforo fecal por DAB-8 y DAB-16 es significativamente superior que el incremento a partir de una cantidad de calcio en exceso o equivalente de Renagel®. Desafortunadamente, se conoce poco con respecto a la toxicidad de los dendrímeros DAB cuando se administran oralmente. La investigación previa ha mostrado que los dendrímeros DAB son citotóxicos in vitro (12), y cuando se administran intravenosamente, los dendrímeros DAB son letales (13). En los experimentos de la presente, sin embargo, los dendrímeros DAB son bien tolerados por las ratas cuando se administran oralmente. DAB-4, DAB-8 y DAB-16 como clorhidratos son tolerados en 0.15% de la dieta, pero cuando se alimentan en niveles tan altos como 0.3% ó 0.6%, solamente se observan heces fecales suaves después de 5 días (datos no mostrados) . REFERENCIAS 1. Brown, A.J., Dusso, A.S. and Slatopolosky, E. 2002 Vitamin D analogues for secundary hyperparathyoidism. Nephrol Dail Transplant 17 Suppl 10:10-19. 2. Food and Nutrition Board, Institute of Medicine, 1997. Dietary reference intakes for calcium, phosphorus, magnesium, vitamin D, and fluoride. Washington, D.C.: National Academy Press . 3. Wardlaw, G.M. , and Kessel, M.W. 2002.

Perspectives in Nutrition. New York, NY: McGraw-Hill Higher Education. 4. Tenehouse, H.S. 2005. Regulation of phosphorus homeostasis by the Type lia Na/phosphate cotransporter. Annu Rev Nutr 25:197-214. 5. Goodman, W.G. 2003, . Medical management of secondary hyperparathyroidism in chronic renal failure. Nephrol Dial Transplant 18 Suppl 3:1112-8. 6. Coladonato, J.A. 2005. Control of hyperphosphatemia among patients with ESRD, J Am Soc Nephrol 16 Suppl 2:S107-114. 7. Amin, N. 2002. The impact of improved phosphorus control: use of sevelamer hydrochloride in patients with chronic renal failure. Nephrol Dial Transplant 17:340-345. 8. Cizman, B. 2003. Hyperphosphataemia and treatment with sevelamer in haemadialysis patients. Nephrol Dial Transplant 18 Suppl 5:v47-49. 9. Suda, T., DeLuca, H.F., and Tanaka, Y. 1970. Bilogicla activity of 25-hydroxyergocalciferol in rats. J Nutr 100:1049-1052. 10. Hawk, T., and Leary, S.L. 1999. Formulary for laboratory animáis. .Ames, Iowa: Iowa State University Press. 11. Itaya, K., and Ui, M. 1966. A new mocromethod for the colorimetric determination of inorganic phosphate. Clin Chim Acta 14:361-366. 12. Duncan, R., and Izzo, L. 2005. Dendrimer biocompatibility and toxicity. Adv Drug Deliv Rev 57:2215-2237. 13. Schatzlein, A.G., Zinselmeyer, B.H., Elouzi, A., Dufes, C, Chim, Y.T., Roberts, C.J., Davies, M.C., Munro, A., Gray, A.I., and Uchegbu, I.F. 2005. Oreferential Liver gene expression with polypropylenimine dendrimers, J Control Reléase 101:247-258. 14. Svenson, S., Tomalia, D.A. 2005. Dendriemers in biomedical applications-reflections on the field. Advanced Drug Delivery Reviews 57:2106-2129. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (20)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Uso de una composición de dendrímero para elaborar un medicamento, para evitar la absorción de cantidades substanciales de fosfato a partir del tracto Gl del mamífero, en donde se controla el nivel de fosfato sérico del mamífero.

2. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde se evita que se absorba por lo menos 50% de fosfato en el tracto Gl del mamífero.

3. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde se evita que se absorba por lo menos 80% del fosfato en el tracto Gl del mamífero.

4. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde la cantidad de la composición de dendrímero administrada al mamífero está entre 2.5 y 15 gramos por día.

5. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde la composición de dendrímero comprende un dendrímero en forma hidroaniónica.

6. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde la composición de dendrímero comprende un dendrímero en forma de clorhidrato.

7. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde la composición de dendrímero comprende un dendrímero en forma de bromhidrato.

8. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde la composición de dendrímero comprende un dendrímero en forma de hidroacetato.

9. Una composición de dendrímero caracterizada porque comprende un dendrímero en una forma de clorhidrato, bromhidrato o hidroacetato.

10. La composición de conformidad con la reivindicación. 9, caracterizada porque la composición de dendrímero se selecciona del grupo que consiste de tetrahidroclorhidrato de eritro-1, 2 , 3 , 4-tetraaminobutano o diaminobutano .

11. La composición de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada porque la composición comprende la estructura de conformidad con la Estructura 4.

12. La composición de conformidad con la reivindicación 9,' caracterizada porque la composición comprende la estructura de conformidad con la Estructura 5.

13. La composición de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada porque la composición comprende la estructura de conformidad con la Estructura 6.

14. Uso de una composición de dendrímero para elaborar un medicamento, para evitar la absorción de cantidades substanciales de fosfato a partir del tracto Gl del animal, en donde se reduce la absorción de fosfato intestinal del animal .

15. El uso de conformidad con la reivindicación 14, en donde se evita que sea absorbido por lo menos 50% del fosfato en el tracto Gl del animal.

16. El uso de conformidad con la reivindicación 14, en donde se evita que sea absorbido por lo menos 80% del fosfato en el tracto Gl del animal.

17. El uso de conformidad con la reivindicación 14, en donde la cantidad de la composición de dendrímero administrada al animal está entre 2.5 y 15 gramos por día.

18. El uso de conformidad con la reivindicación 14, en donde la composición de dendrímero comprende un dendrímero en forma de clorhidrato.

19. El uso de conformidad con la reivindicación 14, en donde la composición - de dendrímero comprende un dendrímero en forma de bromhidrato .

20. El uso de conformidad con la reivindicación 14, en donde la composición de dendrímero comprende un dendrímero en forma de hidroacetato .