MX2008000355A - Nuevo derivado de 1,-dioxido de 1,4-benzotiazepina con mejores propiedades, metodo para su produccion, medicamentos que contienen este compuesto y su uso. - Google Patents

Abstract

La invencion se refiere a un compuesto de formula (A) (ver formula A) y a su sales fisiologicamente aceptables; Dicho compuesto es adecuado, por ejemplo, como hipolipidemico.

Description

NUEVO DERIVADO DE 1,1 -DIÓXIDO DE 1,4-BENZOTlAZEPINA CON MEJORES PROPIEDADES. MÉTODO PARA SU PRODUCCIÓN. MEDICAMENTOS QUE CONTIENEN ESTE COMPUESTO Y SU USO.

La invención se refiere a un derivado de 1 ,1 -dióxido de 1 ,4-benzotiazepina y a sus sales fisiológicamente aceptables. El derivado de 1 ,1 -dióxido de 1 ,4-benzotiazepina y su uso para tratar la hiperlipidemia y también la arteriosclerosis y la hipercolesterolemia ya se han descrito (documento EP 1169313). Un objetivo de la invención era proporcionar un compuesto que, comparado con los compuestos descritos en el documento EP 1169313, tiene una eficacia considerablemente mejor. Por consiguiente, la invención se refiere a compuestos de fórmula A y sus sales farmacéuticamente aceptables. Debido a que son más solubles en agua que los compuestos de partida o los compuestos básicos, las sales farmacéuticamente aceptables son particularmente adecuadas para las aplicaciones médicas. Estas sales deben tener un anión o catión farmacéuticamente aceptable. Las sales de adición de ácido adecuadas farmacéuticamente aceptables del compuesto de acuerdo con la invención son sales de ácidos inorgánicos, tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido fosfórico, ácido metafosfórico, ácido nítrico y ácido sulfúrico, y también ácidos orgánicos, tales como ácido acético, ácido bencenosulfónico, ácido benzoico, ácido cítrico, ácido etanosulfónico, ácido fumárico, ácido glucónico, ácido glicólico, ácido isetiónico, ácido láctico, ácido lactobiónico, ácido maleico, ácido málico, ácido metanosulfónico, ácido succínico, ácido p-toluenosulfónico y ácido tartárico. Las sales que contienen un anión que no es farmacéuticamente aceptable, tal como por ejemplo, el trifluoroacetato, también están dentro del alcance de la invención como productos intermedios útiles para preparar o purificar sales farmacéuticamente aceptables y/o para usar en aplicaciones no terapéuticas, por ejemplo, en aplicaciones ¡n vivo. El compuesto de acuerdo con la invención también puede estar presente en diferentes formas polimorfas, por ejemplo, en formas amorfa y polimorfa cristalina. Todas las formas polimorfas del compuesto de acuerdo con la invención están dentro del alcance de la invención y son otro aspecto de la invención. En lo sucesivo, cualquier referencia a "compuesto(s) de acuerdo con la fórmula A" se refiere al compuesto de fórmula A descrito antes y a sus sales y solvatos.

El compuesto de fórmula A también se puede administrar combinado con otros compuestos activos. La cantidad de un compuesto de acuerdo con la fórmula A que es necesaria con el fin de lograr el efecto biológico deseado, depende de una serie de factores, por ejemplo, el compuesto específico que se selecciona, el uso pretendido, el tipo de administración y el estado clínico del paciente. En general, la dosis diaria está en el intervalo de 0,01 mg a 100 mg (típicamente de 0,05 mg a 50 mg) por día, por kilogramo de peso corporal, p. ej., 0,1-10 mg/kg/día. Las formulaciones de dosis individuales que se pueden administrar por vía oral, tal como comprimidos o cápsulas, pueden contener, por ejemplo de 1 ,0 a 1000 mg, típicamente de 10 a 600 mg. Aunque se pueden usar los propios compuestos de acuerdo con la fórmula A como el compuesto para tratar las afecciones mencionadas, preferiblemente están presentes junto con un vehículo aceptable, en forma de una composición farmacéutica. Por supuesto el vehículo debe ser aceptable, en el sentido de ser compatible con los otros constituyentes de la composición y no ser perjudiciales para la salud del paciente. El vehículo puede ser un sólido o un líquido o ambos, y preferiblemente se formula con el compuesto en forma de una dosis individual, por ejemplo, en forma de un comprimido que puede contener de 0,05% a 95% en peso del compuesto activo. Pueden estar también presentes otras sustancias farmacéuticamente activas, incluyendo otros compuestos de acuerdo con la fórmula A. Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con al invención se pueden preparar usando uno de los métodos farmacéuticos conocidos, que consiste esencialmente en mezclar los constituyentes con sustancias vehículo farmacológicamente aceptables y/o sustancias auxiliares. Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención son las que son adecuadas para la administración oral y peroral (p. ej., sublingual), aunque el modo de administración más adecuado dependa, en cada caso individual, de la naturaleza y gravedad de la afección que se va a tratar y de la naturaleza del compuesto de acuerdo con la Fórmula A que se use en cada caso. Las formulaciones revestidas con azúcar y las formulaciones de liberación retardada revestidas con azúcar también pertenecen al alcance de la invención. Se prefieren formulaciones que son resistentes a los ácidos y resistentes a los jugos gástricos. Revestimientos resistentes a los jugos gástricos adecuados incluyen ace tato-fta lato de celulosa, poli(acetato-ftalato de vinilo), ftalato de hidroxipropilmetil-celulosa y polímeros aniónicos de ácido metacrílico y metacrilato de metilo. Los compuestos farmacéuticos adecuados para administración oral pueden estar presentes en unidades separadas, tales como cápsulas, sellos, pastillas o comprimidos, los cuales en cada caso contienen una cantidad específica del compuesto de acuerdo con la fórmula A; como polvos o granulos; como una disolución o suspensión en un líquido acuoso o no acuoso; o como una emulsión de aceite en agua o de agua en aceite. Como ya se ha mencionado, estas composiciones se pueden preparar usando cualquier método farmacéutico adecuado que incluya una etapa en la que se ponen en contacto el compuesto activo y el vehículo (que puede consistir en uno o más constituyentes adicionales). En general, las composiciones se preparan mediante mezclamiento uniforme y homogéneo del compuesto activo con un líquido y/o vehículo sólido finamente dividido, después de lo cual el producto se moldea, si es necesario. Por lo tanto, se puede preparar un comprimido por ejemplo prensando o moldeando un polvo o un granulado del compuesto, junto con uno o más constituyentes adicionales cuando sea apropiado. Los comprimidos prensados se pueden preparar comprimiendo el compuesto en forma fluida tal como, por ejemplo, en forma de polvo o granulos, que se mezcla cuando sea apropiado con un agente aglutinante, lubricante, diluyente inerte y/o uno (o varios) agente(s) tensioactivo(s)/ dispersante(s), en una máquina adecuada. Los comprimidos moldeados pueden prepararse moldeando el compuesto pulverulento que se humedece con un diluyente líquido inerte en una máquina adecuada. Las composiciones farmacéuticas que son adecuadas para la administración peroral (sublingual) incluyen pastillas que contienen un compuesto de acuerdo con la fórmula A junto con un agente de sabor, normalmente sacarosa o goma arábiga o tragacanto, y pastillas, que incluyen el compuesto en una base inerte tal como gelatina y glicerol o sacarosa y goma arábiga. Una modalidad adicional de las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención comprende sales de metales adecuadas, tales como por ejemplo, sales de calcio, aluminio, hierro, cobre, cinc, magnesio, manganeso o cinc. Se prefieren las sales de calcio y cinc, tales como por ejemplo, fosfato de calcio, lactato de calcio, carbonato de calcio, gluconato de calcio, acetato de calcio, fosfato de cinc, lactato de cinc, carbonato de cinc, gluconato de cinc o acetato de cinc. La adición de estas sales a la composición farmacéutica puede reducir o prevenir la aparición de diarrea en el paciente. Los siguientes son adecuados para su uso como compuestos activos adicionales para las preparaciones de combinación: Todos los antidiabéticos que se citan en el capítulo 12 en el documento Roten Liste [Lista Roja] 2005. Se pueden combinar con compuestos de fórmula A de acuerdo con la invención, en particular para el propósito de la mejora sinérgica del efecto. La combinación de compuestos activos se puede administrar bien administrando por separado los compuestos activos al paciente o administrándolos en forma de preparaciones de combinación en las que varios compuestos activos están presentes en una preparación farmacéutica. La mayoría de los compuestos activos que se citan a continuación están descritos en el USP Dictionary of USAN and International Drug Ñames, US Pharmacopeia, Rockville 2001. Los antidiabéticos incluyen insulina y derivados de insulina, tales como Lantus® (véase www.lantus.com) o HMR 1964, insulinas de actuación rápida (véase el documento US 6.221.633), derivados de GLP-1 , tales como los que Novo Nordisk A/S ha descrito en el documento WO 98/08871 , Zealand ha descrito en el documento WO/04156 y Beaufour-lpsen ha descrito en el documento WO 00/34331 , y también compuestos activos hipoglucémicos activos por vía oral. Los compuestos activos hipoglucémicos activos por vía oral preferiblemente incluyen sulfonilureas, biguanidinas, meglitinidas, oxadiazolidindionas, tiazolidindionas, glucosidasa e inhibidores de glucógeno-fosforilasa, antagonistas de glucagón, agonistas de GLP-1 , agentes de apertura de canales de calcio, tales como los que ha descrito Novo Nordisk A/S en los documentos WO 97/26265 y WO 99/03861 , sensibilizadores de insulina, inhibidores de enzimas hepáticos que están implicados en la estimulación de la gluconeogénesis y/o glicogenolisis, moduladores de la absorción de glucosa, transporte de glucosa y reabsorción de glucosa, compuestos que alteran el metabolismo de grasas, tales como compuestos activos antihiperlipidémicos y compuestos activos antilipidémicos, compuestos de disminuyen la ingestión de alimento, agonistas de PPAR y agonistas de PXR, y compuestos activos que actúan en el canal de potasio dependiente de ATP en las células beta. En una modalidad de la invención, los compuestos de fórmula A se administran combinados con un inhibidor de la HMGCoA-reductasa, tales como simvastatina, fluvastatina, pravastatina, lovastatina, atorvastatina, cerivastatina o rosuvastatina. En una modalidad de la invención, los compuestos de fórmula I se administran combinados con un inhibidor de la absorción de colesterol, tales como ezetimiba, tiquesida, pamaquesida o con un compuesto como se describe en los documentos PCT/EP 2004/00269, PCT/EP 2003/05815, PCT/EP 2003/05814, PCT/EP 2003/05816, EP 0114531 o US 6.498.156. En una modalidad de la invención, los compuestos de fórmula A se administran combinados con un agonista de PPAR gamma, tales como rosiglitazona, pioglitazona, JTT-501 o Gl 262570. En una modalidad de la invención, los compuestos de fórmula A se administran combinados con un agonista de PPAR alfa, tal como GW 9578 o GW 7647. En una modalidad de la invención, los compuestos de fórmula A se administran combinados con una agonista de PPAR alfa/gamma mixto, tal como GW 1536, AVE 8042, AVE 8134 o AVE 0847, o como se describe en los documentos PCT/US 00/11833, PCT/US 00/11490 o WO 03/020269. En una modalidad de la invención, los compuestos de fórmula A se administran combinados con un fibrato, tal como fenofibrato, clofibrato o bezafibrato. En una modalidad de la invención, los compuestos de fórmula A se administran combinados con un inhibidor de MTP, tal como implitapida, BMS-201038 O R-103757. En una modalidad de la invención, los compuestos de fórmula A se administran combinados con un inhibidor de CETP tal como JTT-705. En una modalidad de la invención, los compuestos de fórmula A se administran combinados con un adsorbente de ácidos biliares polímero, tal como colestiramina o colesevelam. En una modalidad de la invención, los compuestos de fórmula A se administran combinados con un inductor del receptor de LDL (véase el documento US 6.342.512). En una modalidad de la invención, los compuestos de fórmula A se administran combinados con un inhibidor de ACAT, tal como avasimiba. En una modalidad de la invención, los compuestos de fórmula A se administran combinados con un antioxidante, tal como OPC-14117. En una modalidad de la invención, los compuestos de fórmula A se administran combinados con un inhibidor de lipoproteína lipasa, tal como NO-1886. En una modalidad de la invención, los compuestos de fórmula A se administran combinados con un inhibidor de ATP-citrato-liasa, tal como SB-204990. En una modalidad de la invención, los compuestos de fórmula A se administran combinados con un inhibidor de escualeno-sintasa, tal como BMS-188494. En una modalidad de la invención, los compuestos de fórmula A se administran combinados con un antagonista de lipoproteína (a), tal como Cl-1027 o ácido nicotínico. En una modalidad de la invención, los compuestos de fórmula A se administran combinados con un inhibidor de lipasa, tal como orlistat. En una modalidad de la invención, los compuestos de fórmula A - lo ¬ se administran combinados con insulina. En una modalidad, los compuestos de fórmula A se administran combinados con una sulfonilurea, tal como toibutamida, glibenclamida, glipizida o glimepirida. En una modalidad, los compuestos de fórmula A se administran combinados con una biguanida, tal como metformina. Incluso en otra modalidad, los compuestos de fórmula A se administran combinados con una meglitinida, tal como repaglinida. En una modalidad, los compuestos de fórmula A se administran combinados con una tiazolidindiona, tal como troglitazona, ciglitazona, pioglitazona, rosiglitazona o los compuestos descritos por la Dr. Reddy's Research Foundation en el documento WO 97/41097, en particular la 5-[[4-[(3,4-dihidro-3-metil-4-oxo-2-quinazolinilmetoxi]fenil]metil]-2,4-tiazolidindiona. En una modalidad, los compuestos de fórmula A se administran combinados con un inhibidor de a-glucosidasa, tal como miglitol o acarbosa. En una modalidad, los compuestos de fórmula A se administran combinados con un agonista de adenosina A1 tal como los descritos en los documentos EP 0912520 o PCT/EP06749. En una modalidad, los compuestos de fórmula A se administran combinados con un compuesto activo que actúa en el canal de potasio dependiente de ATP de las células beta, tal como toibutamida, glibenclamida, glipizida, glimepirida o repaglinida. En una modalidad, los compuestos de fórmula A se administran combinados con un más de uno de los compuestos mencionados, por ejemplo, combinados con una sulfonilurea y metformina, una sulfonilurea y acarbosa, repaglinida y metformina, insulina y una sulfonilurea, insulina y metformina, insulina y troglitazona, insulina y lovastatina, etc. En una modalidad, los compuestos de fórmula A se administran combinados con moduladores de CART (véase "cocaine-amphetamine-regulated transcript influences energy metabolism, anxiety and gastric emptying in mice" Asakawa, A, et al., M.: Hormone and Metabolic Research (2001), 33(9), 554-558), antagonistas de NPY, p. ej. hidrocloruro de {4-[(4-aminoquinazolin-2-ilamino)metil]ciclohexilmetil}amida del ácido naftaleno-1-sulfónico (CGP 71683A)), antagonistas del receptor 1 de cannabinoides (véase, p. ej., los documentos EP 0656354, WO 00/15609 o WO 02/076949), agonistas de MC4 (p. ej., [2-(3a-bencil-2-metil-3-oxo-2,3,3a,4,6,7-hexahidropi-razolo[4,3-c]piridin-5-¡l)-1-(4-clorofenil)-2-oxoetil]amida del ácido 1-amino-1 ,2,3,4-tetrahidronaftaleno-2-carboxílico; (documento WO 01/91752)), antaño-nistas de orexina (p. ej. hidrocloruro de 1-(2-metilbenzoxazol-6-il)-3-[1 ,5]naftiri-din-4-il-urea (SB-334867-A)), agonistas de H3 sal del ácido oxálico de la (3-ciclohexil-1-(4,4-d¡metil-1 ,4,6,7-tetrahidroimidazo[4,5-c]piridin-5-il)-propan-1-ona (documento WO 00/63208)); agonistas de TNF, antagonistas de CRF (p. ej. [2-metil-9-(2,4,6-trimetilfenil)-9H-1 ,3,9-triazafluoren-4-il]dipropilamina (documento WO 00/66585)), antagonistas de CRF BP (p. ej. urocortina), agonistas de urocortina, agonistas de ß3 (p. ej. hidrocloruro de 1-(4-cloro-3-metanosulfonilmetilfenil)-2-[2-(2,3-dimetil-1 H-indol-6-iloxi)etilamino]etanol (documento WO 01/83451)), agonistas de MSH (hormona estimulante de melanocitos), antagonistas del receptor de MCH (hormona concentradora de melanina) (véase, p. ej., el documento WO 03/15769), agonistas de CCK-A (p. ej. sal del ácido trifluoroacético del ácido {2-[4-(4-cloro-2,5-dimetoxifenil)-5-(2-ciclohexiletil)tiazol-2-ilcarbamoil]-5,7-dimetilindol-1 -iljacético (documento WO 99/15525), o SR-146131 (documento WO 0244150) o SSR-125180), inhibidores de la recaptación de serotonina (p. ej. dexfenfluramina), compuestos serotoninérgicos y noradrenérgicos mixtos (p. ej. documento WO 00/71549), agonistas de 5HT, p. ej. sal del ácido oxálico de la 1-(3-etilbenzofuran-7-il)piperazina (documento WO 01/09111), agonistas de bombesina, antagonistas de galanina, hormona de crecimiento (p. ej. hormona de crecimiento humano), compuestos liberadores de la hormona de crecimiento (6-benciloxi-1-(2-diisopropilaminoetilcarbamoil)-3,4-dihidro-1 H-isoquinolina-2-carboxilato de terc-butilo (documento WO 01/85695)), agonistas de TRH (véase, p. ej. el documento EP 0 462 884) moduladores de la proteína 2 o proteína 3 desacoplante, agonistas de leptina (véase, p. ej. Lee, Daniel W.; Leinung, Matthew C; Rozhavskaya-Arena, Marina; Grasso, Patricia. "Leptin agonists as a potential approach to the treatment of obesity". Drugs of the Future (2001), 26(9), 873-881), agonistas de DA (bromocriptina, doprexina), inhibidores de lipasa/amilasa (p. ej. documento WO 00/40569), moduladores de PPAR (p. ej. documento WO 00/78312), inhibidores de 11 ß-HSD1 (11-beta-hidroxiesteroide-deshidrogenasa tipo 1) (véase, p. ej. documento WO 01/90094 o T. Barí et al., J. Med. Chem. (2002), 45, 3813- 3815), inhibidores de acetil-CoA-carboxilasa (ACC; véase p. ej. documento WO 99/46262), inhibidores de dipeptidilpeptidasa IV (DPP-IV; véase p. ej. el documento EP 1259246), moduladores de RXR o agonistas de TR-ß. En una modalidad de la invención, el otro compuesto activo es la leptina; véase, por ejemplo "Perspectives ¡n the therapeutic use of leptin", Salvador, Javier; Gomez-Ambrosi, Javier; Fruhbeck, Gema, Expert Opinión on Pharmacotherapy (2001), 2 (10), 1615-1622. En una modalidad, el compuesto activo es dexanfetamina o anfetamina. En una modalidad, el compuesto activo es fenfluramina o dexfenfluramina. Incluso en otra modalidad, el compuesto activo es sibutramina. En una modalidad, el compuesto activo es orlistat. En una modalidad, el otro compuesto activo es mazindol o fentermina. En una modalidad, los compuestos de fórmula A se administran combinados con sustancias de lastre, preferiblemente sustancias de lastre insolubles, p. ej., carob/Caromax®) (Zunft H. J.; et al., "Carob pulp preparation for treatment of hypercholesterolemia", ADVANCES IN THERAPY (2001 Sep-Oct), 18 (5), 230-6). Caromax es un producto que contiene algarroba, de Nutrinova, Nutrition Specialties & Food Ingredients GmbH, Industriepark Hoechst, 65926 Frankfurt/Main). La combinación con Caromax® se puede realizar en una preparación o mediante la administración por separado de los compuestos de fórmula A y Caromax®. En relación con esto, Caromax® también se puede administrar en forma de productos alimenticios, por ejemplo en pan, pasteles y pastas o barras de muesli. Se comprenderá que cada combinación adecuada de los compuestos según la invención con uno o más de los compuestos mencionados anteriormente y, si se desea, una o más sustancias farmacológicamente activas adicionales, se considera que está dentro del alcance protegido de la presente invención.

JTT-501 Eiemplo A El compuesto A se preparó como sigue: Esquema de fórmulas 1 Esquema de fórmulas 2 (síntesis del isocianato 2) 4 5 Síntesis del compuesto 1a: El compuesto enantioméricamente puro 1a se obtiene a partir de la anuida racémica 1 (documento EP 1169313 compuesto 8a/b) por cromatografía quiral usando Chiralpak AS-H76 con una fase móvil de n-heptano/metanol/etanol 10/1/1 más DEA al 0,1%. Por cristalización en THF/EA/n-heptano, se puede purificar incluso más el compuesto 1a (ee 99,9%). El isómero más activo tiene una rotación óptica positiva, y la estereoquímica absoluta se determinó por estructura de rayos X de monocristal.

Síntesis del compuesto 5: A 80°C, se disuelven 4,5 g de glucosamina 4 (Aldrich) en 100 ml de DMF, y después se añaden 5 g de N-(benciloxicarboniloxi)succinimida (ABCR). Después de 20 minutos, se añaden gota a gota 100 ml de anhídrido acético/piridina (1 :1), y la solución de la reacción se mantiene a 50°C durante 1 hora. El disolvente se destila con alto vacío y el residuo se purifica por cromatografía ultrarrápida. Rendimiento 10,1 g (77%) de compuesto 5 en forma de un sólido incoloro. TLC (n-heptano/acetato de etilo 1 :2). Rf = 0,4. C24H31NO12 (525,51). EM (M+H)+ = 525,25.

Síntesis del compuesto 6: Se disuelven 17,45 g del pentaacetato 5 en 200 ml de ácido clorhídrico en metanol 0,25 M, y se añaden 1 ,3 g de paladio sobre carbón activo al 10% en atmósfera de argón. A una presión de hidrógeno de 5 bar, la mezcla se hidrogena a temperatura ambiente durante una hora. El catalizador se separa y se destilan aproximadamente 150 ml de metanol. Después de añadir éter MTB, precipita el hidrocloruro 6. Se obtienen 13 g (92%) de sólido incoloro de compuesto 6. C16H25NO10xHCI (427,84), EM (M+H)+ = 392,21.

Síntesis del compuesto 2: Se suspenden 1 ,5 g del hidrocloruro 6 en 50 ml de cloruro de metileno, en atmósfera de argón, y se enfría a 0°C. Se añaden sucesivamente a esta suspensión 1 ,5 g de trifosgeno y 3 ml de trietilamina, y la mezcla se agita a 0°C durante 1 hora. La solución de la reacción se diluye con 50 ml de n-heptano/acetato de etilo (1 :1) y se filtra a través de un poco de gel de sílice. El disolvente se destila dando 1 ,52 de sólido 2 amorfo en forma de un producto bruto, que se usó directamente sin purificación adicional, para la siguiente etapa.

Síntesis del compuesto 3: A temperatura ambiente, se disuelven 5,45 g (12,3 mmol) de la anuida 1a y 3,58 g (8,5 mmol) del isocianato 2 en 150 ml de cloruro de metileno. Después de una hora a temperatura ambiente, la mezcla se concentra y el residuo se purifica por cromatografía ultrarrápida. Rendimiento 4,72 g (64%) de compuesto 3 en forma de un sólido incoloro. TLC (n-heptano/acetato de etilo 1 :2). Rf = 0,3. C42H60N4O13S (861 ,03). EM (M+H)+ = 861 ,59.

Síntesis del compuesto A: Se disuelven 4,7 g de compuesto 3 en 60 ml de metanol y 20 ml de trietilamina y se deja reposar a temperatura ambiente durante 16 horas. La solución se concentra y el residuo se purifica por cromatografía ultrarrápida (cloruro de metileno/metanol/amoniaco concentrado 30/10/3). Rendimiento 2,17 g (60%) de compuesto A en forma de un sólido amorfo. TLC (cloruro de metileno/metanol/amoniaco concentrado 30/10/3). Rf = 0,4. C32H50N O8S (650,84). EM (M+H)+ = 651 ,34. El ensayo biológico del compuesto A de acuerdo con la invención se llevó a cabo usando el ensayo de inhibición de I BAT in vitro. Este ensayo examina el efecto del compuesto de acuerdo con la invención en la actividad de transporte ¡leal del transportador de ácidos biliares dependiente de sodio humano expresado de forma recombinante (IBAT = cotransportador ¡leal de Na+/ácidos biliares, ASBT = transportador de ácidos biliares apical dependiente de sodio, SLC10A2 = vehículo soluto familia 10, miembro 2).

PREPARACIÓN Y PRACTICA DEL ENSAYO DE INHIBICIÓN DEL IBAT IN VIVO: CLONACIÓN DE UN VECTOR DE EXPRESIÓN DEL IBAT HUMANO 1. Se clonó el ADNc (ácido desoxirribonucleico complementario) del IBAT humano usando métodos habituales de biología molecular, como se describe por ejemplo en Molecular Cloning: A Laboratory Manual, by Joseph Sambrook and David Russell, y se introduce en el vector pcDNAl de Invitrogen. La posterior secuenciación del inserto mostró la identidad completa con las bases 599 a 1645 de la secuencia de bases del IBAT humano, descrito por P.A. Dawson y depositado en el banco de datos de secuencias GenBank (número de acceso de GenBank: U10417). Las bases 599 a 1645 corresponden a la región codificante completa del IBAT humano. 2. Preparación de una línea celular recombinante con expresión constitutiva de I BAT El vector de expresión para el I BAT humano se introdujo mediante transfección estable en células CHO (ovario de hámster chino).

Para seleccionar los clones de células individuales, se añadió geneticina 400 µg/ml al medio de cultivo celular (medio Ham F12 complementado con suero de ternero fetal al 10%, 100 unidades/ml de penicilina, 100 unidades/ml de estreptomicina). Se ensayó la funcionalidad de los clones de células individuales resultantes de la selección según su actividad de absorción del ácido taurocólico marcado radiactivamente ([3H]-TCA). Se seleccionó el clon celular que tenía la actividad de absorción más alta para [3H]-TCA, posteriormente mostrado como CHO-hIBAT, para ensayos adicionales y se cultivó adicionalmente en presencia de geneticina 400 µg/ml. 3. Medición del efecto de inhibición del compuesto de acuerdo con la invención en la absorción dependiente de IBAT de ácido taurocólico en las células Las células CHO-hIBAT se sembraron con una concentración de 40.000 células por pocilio en medio de cultivo celular en placas de 96 pocilios recubiertas con poli-D-lisina y se cultivaron durante 24 h. Después las células se lavaron una vez con tampón de ensayo de transporte sin sodio (cloruro de colina 140 mM, cloruro de potasio 2 mM, cloruro de magnesio 1 mM, cloruro de calcio 1 mM, HEPES/Tris 10 mM, pH 7,5) y después se incubaron o bien con tampón de ensayo de transporte sin sodio como testigo negativo o bien con tampón de ensayo de transporte que comprende sodio (cloruro de sodio 140 mM, cloruro de potasio 2 mM, cloruro de magnesio 1 mM, cloruro de calcio 1 mM, HEPES/Tris 10 mM, pH 7,5) como testigo positivo, a temperatura ambiente durante 30 min. Al mismo tiempo, los pocilios de ensayo también se incubaron en presencia de concentraciones diferentes del compuesto que se iba a examinar en tampón de ensayo de transporte que comprende sodio, a temperatura ambiente durante 30 min. Usando una solución madre 10 mM en dimetiisulfóxido, las sustancias de ensayo se diluyeron de forma adecuada en tampón de ensayo de transporte (40 µl/pocillo). Después se inició el ensayo por adición de 10 µl/pocillo de una mezcla de ácido taurocólico marcado radiactivamente ([3H]-TCA) y ácido taurocólico sin marcar. La concentración final de ácido taurocólico en el ensayo era 10 µM. Después de un periodo de incubación de 60 min a temperatura ambiente, la reacción se paró por adición de 100 µl/pocillo de tampón de ensayo de transporte sin sodio (4°C), y cada pocilio se lavó tres veces con tampón de ensayo de transporte sin sodio. Finalmente, se añadieron 100 µl de líquido de centelleo a cada pocilio, y la radiactividad absorbida por las células se determinó en un lector de microplaca de centelleo MicroBeta de Wallac. El efecto de inhibición mitad del máximo de este compuesto (valor de CI50, concentración de inhibición 50) se determinó como sigue: 1. Determinación del valor para 0% de inhibición. Este es el valor medido en ausencia de sustancia, medido en tampón de ensayo de transporte que comprende sodio 2. Determinación del valor para 100% de inhibición. Este es el valor medido en ausencia de sustancia, medido en tampón de ensayo de transporte sin sodio 3. Cálculo de los valores de inhibición, en porcentaje, de las mediciones que se han llevado a cabo en presencia de diferentes concentraciones del compuesto que se iba a examinar. Usando estos valores, después se pudo determinar la concentración de compuesto a la cual la absorción de ácido taurocólico se redujo en 50% (valor de CI50). Para el Ejemplo A, se encontró que CI50 (IBAT humano) era: 0,155 µM Por comparación, también se midió el compuesto más similar de estructura del documento EP 1169313. Para el compuesto 11a (del Ejemplo 5) de fórmula: 11a se encontró que la CI50 (IBAT humano) era: 0,319 µM Comparado con este ejemplo comparativo del documento EP 1169313, la actividad del compuesto A de acuerdo con la invención es 206% mayor.

Claims (12)

REIVINDICACIONES

1.- Un compuesto de fórmula A o una de sus sales farmacéuticamente aceptable.

2.- Un medicamento, que comprende el compuesto según la reivindicación 1.

3.- Un medicamento, que comprende el compuesto según la reivindicación 1 , y al menos un compuesto activo adicional.

4.- Un medicamento según la reivindicación 3, que comprende, como compuesto activo adicional, uno o más compuestos que normalizan el metabolismo de lípidos.

5.- Un medicamento según la reivindicación 3 ó 4, que comprende, como compuesto activo adicional, uno o más antidiabéticos, compuestos activos como hipoglucémicos, fármacos antiadiposos, anorécticos, inhibidores de HMG-CoA-reductasa, inhibidores de la absorción de colesterol, agonistas de PPAR gamma, agonistas de PPAR alfa, agonistas de PPAR alfa/gamma, fibratos, inhibidores de MTP, inhibidores de CETP, adsorbentes polímeros de ácidos biliares, inductores del receptor LDL, inhibidores de ACAT, antioxidantes, inhibidores de lipoproteina-lipasa, inhibidores de ATP-citrato-liasa, inhibidores de escualeno-sintasa, antagonistas de lipoproteina (a), inhibidores de lipasa, insulinas, sulfonilureas, biguanidas, meglitinidas, tiazolidindionas, inhibidores de a-glucosidasa, compuestos activos que actúan en el canal de potasio dependiente de ATP de las células beta, agonistas de CART, agonistas de NPY, antagonistas del receptor 1 de cannabinoides, antagonistas del receptor de MCH, agonistas de MC4, agonistas de orexina, agonistas de H3, agonistas de TNF, agonistas de CRF, antagonistas de CRF BP, derivados de GLP-1 , agonistas de urocortina, agonistas de ß3, agonistas de MSH (hormona estimulantes de melanocitos), agonistas de CCK-A, inhibidores de la recaptación de serotonina, compuestos serotoninérgicos y noradrenérgicos mixtos, agonistas de 5HT, agonistas de bombesina, antagonistas de galanina, hormonas del crecimiento, compuestos liberadores de la hormona del crecimiento, agonistas de TRH, moduladores de la proteína 2 o 3 desacoplante, agonistas de leptina, agonistas de DA (bromocriptina, doprexina), inhibidores de lipasa/amilasa, inhibidores de 11 ß-HSD1 , inhibidores de ACC, inhibidores de DPP-IV, moduladores de PPAR, moduladores de RXR o agonistas de TR-ß o anfetaminas.

6.- Un medicamento según cualquiera de las reivindicaciones 2, 3, 4 ó 5, que comprende como auxiliar adicional, una o más sales metálicas.

7.- Un compuesto según la reivindicación 1 , para usar como medicamento para tratar trastornos del metabolismo de lípidos.

8.- Un procedimiento para preparar un medicamento que comprende el compuesto según la reivindicación 1 , que comprende mezclar el compuesto activo con un vehículo farmacéuticamente aceptable y llevar esta mezcla a una forma adecuada para la administración.

9.- El uso del compuesto según la reivindicación 1 , para preparar un medicamento para tratar la hiperlipidemia.

10.- El uso del compuesto según la reivindicación 1 , para preparar un medicamento para disminuir la concentración de colesterol en el suero.

11.- El uso del compuesto según la reivindicación 1 , para preparar un medicamento para tratar los síntomas arterioscleróticos.

12.- El uso del compuesto según la reivindicación 1 , para preparar un medicamento para tratar la resistencia a la insulina.