MX2007009718A

MX2007009718A - Metodos para tratar trastornos cutaneos utilizando un antagonista il-31ra.

Info

Publication number: MX2007009718A
Application number: MX2007009718A
Authority: MX
Inventors: Janine Bilsborough
Original assignee: Zymogenetics Inc
Priority date: 2005-02-14
Filing date: 2006-02-14
Publication date: 2007-09-26
Also published as: EP1858924A1; US20170137525A1; US20170275369A1; IL184371A; US20090252730A1; CA2594490A1; AU2006214404B2; US20200239581A1; US10611846B2; US9139651B2; US20180094068A1; US20180244790A1; IL207688A0; WO2006088855A1; US7871618B2; US20110117052A1; US20150344581A1; AU2006214404A1; US20060182743A1; US11312779B2

Abstract

La presente invencion se relaciona con metodos para tratar a pacientes que padecen de dermatitis de contacto, reacciones alergenicas cutaneas de tipo retrasado inducidas por medicamento, necrolisis epidermica toxica, linfoma de linfocitos T cutaneos, penfigoide buloso, alopecia areata, vitiligo, acne rosacea, prurigo nodularis, escleroderma, virus de herpes simplex o combinaciones al administrar un antagonista de IL-31RA.

Description

MÉTODOS PARA TRATAR TRASTORNOS CUT NEOS UTILIZANDO UN ANTAGONISTA IL-31RA DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La piel juega un papel importante en el sistema inmunológico y consiste de capas. La epidermis es una capa superficial. Debajo de la epidermis se encuentra la dermis, una capa de tejido conectivo. Debajo de la dermis está la hipodermis, una capa de grandes cantidades de tejido adiposo. Los linfocitos T circulantes se desplazan a la piel bajo condiciones normales inflamatorias. El antígeno linfocítico cutáneo (CLA) se considera un receptor de base para linfocitos T con tropismo por la piel. Santamaria-Babi, L. , Eur . J. Derma tol . 14:13-18, 2004. CLA es una estructura de carbohidratos la cual se expresa en la memoria de los linfocitos T como un epítopo de la proteína de superficie celular única denominada P-selectina glucoproteína ligando- 1 (PSGL-1, por sus siglas en inglés) y facilita la unión de linfocitos T a E-selectina y la molécula de adhesión inducible expresada sobre endotelio vascular. Véase Fuhlbrigge RC, et al., Na ture 1997; 389:978-81. Se sabe de varias enfermedades de la piel que expresan altas concentraciones de linfocitos T CLA+ que incluyen dermatitis atópica, dermatitis de contacto, reacciones alérgicas inducidas por medicamento, virus REF. :184265 trópicos de la piel y prurito asociado a virus, vitíligo, linfoma de linfocitos T cutáneo, alopecia aerata, acné rosácea, acné vulgar, prurigo nodular y penfigoide buloso. Existe la necesidad de tratar dichas enfermedades cutáneas mediadas por linfocitos T. Las actividades in vivo demostradas de la familia de citocina ilustran el enorme potencial clínico y la necesidad de otras citocinas, agonistas de citocina y antagonistas de citocina. La presente invención resuelve estas necesidades al suministrar un método para tratar dichas enfermedades con antagonistas de IL-31RA, por ejemplo el receptor soluble de IL-31RA o neutralizar el anticuerpo monoclonal IL-31RA o un fragmento, un receptor de la citocina IL-31 recién identificada. Cuando se sobreexpresa en ratones, IL-31 resulta en síntomas similares a dermatitis. Los linfocitos T que tienen ecotaxia por piel y los queratinocitos epidérmicos se han implicado en la patología de enfermedades cutáneas en humanos. La presente invención proporciona dichos polipéptidos para estos y otros usos que pueden ser evidentes para aquellos expertos en la técnica a partir de las enseñanzas en la presente.

Definiciones Antes de establecer la invención con detalle, puede ser útil para la comprensión de la misma definir los siguientes términos: A menos que se especifique de otra manera, los términos "uno", "una", "el", y "por lo menos uno" se utilizan de manera intercambiable y significan uno o más de uno. El término "etiqueta de afinidad" se utiliza en la presente para indicar un segmento polipeptídico que se puede unir a un segundo polipéptido para proporcionar para purificación o detección del segundo polipéptido o proporciona sitios para unión del segundo polipéptido a un sustrato. En principal, cualquier péptido o proteína para el cual un anticuerpo u otro agente de unión específico está disponible se puede utilizar como una etiqueta de afinidad. Las etiquetas de afinidad incluyen una secuencia de poli-histidina, proteína A (Nilsson et al., EMBO J, 4K.- 1075, 1985 ; Nilsson et al . , Methods Enzymol. 198:3, 1991), glutation S transferasa (Smith and Johnson, Gene 67 : 31 , 1988), etiqueta de afinidad Glu-Glu (Grussenmeyer et al., Proc . Na ti . Acad. Sci . USA 82 : 1952 - 4 , 1985), sustancia P, el péptido FlagMR (Hopp et al., Biotechnology 5:1204-10, 1988), el péptido de unión de estreptavidina u otro epítopo antigénico o dominio de unión. Véase, en general, Ford et al., Protein Expression and Purifica tion 2 : 95-107, 1991. Los ADN que codifican para las etiquetas de afinidad están disponibles de proveedores comerciales (por ejemplo Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ) .

El término "variante alélica" se utiliza en la presente para indicar de dos o más formas alternativas de un gen que ocupa el mismo locus cromosómico. La variación alélica surge de manera natural por mutación y puede resultar en polimorfismo fenotípico dentro de poblaciones. Las mutaciones de genes pueden ser silenciosas (no hay cambio en el polipéptido codificado) o pueden codificar para polipéptidos que tengan una secuencia alterada de aminoácidos. El término variante alélica también se utiliza en la presente para indicar una proteína codificada por una variante alélica de un gen. Los términos "amino-terminal" y "carboxilo-terminal" como se utilizan en la presente indican posiciones dentro de los polipéptidos. Cuando el contexto lo permite, estos términos se utilizan con referencia a una secuencia particular o una porción de un polipéptido para indicar proximidad o posición relativa. Por ejemplo, cierta secuencia colocada en la parte carboxilo terminal a una secuencia de referencia dentro de un polipéptido se localiza próxima a la parte carboxilo terminal de la secuencia de referencia pero no necesariamente en la parte carboxilo terminal del polipéptido completo. El término "par complemento/anti-complemento" indica porciones no idénticas que forman un par estable, no asociado covalentemente bajo condiciones apropiadas. Por ejemplo la biotina y la avidina (o estreptavidina) son miembros prototipo de un par complemento/anti-complemento. Otros pares de complemento/anti-complemento ejemplares incluyen pares receptor/ligando, pares anticuerpo/antígeno (o hapteno o epítopo) , pares de polinucleótidos sentido/antisentido y similares. Cuando es deseable la disociación subsecuente del par complemento/anti-complemento, el par complemento/anti-complemento tiene una afinidad de unión de <109 M"1. El término "complementos de una molécula polinucleotídica" indica una molécula polinucleotídica que tiene una secuencia de base complementaria y orientación inversa en comparación con una secuencia de referencia. Por ejemplo, la secuencia 5'ATGCACGGG 3' es complementaria a 5'CCCGTGCAT 3 ' . El término "contiguo" indica un polinucleótido que tiene una cadena contigua de secuencia idéntica o complementaria con otro polinucleótido. Las secuencias contiguas se dice que se "superponen" a una cadena dada de secuencia polinucleotídica ya sea en su totalidad o a lo largo de una cadena parcial del polinucleótido. Por ejemplo, las secuencias contiguas representativas para la secuencia polinucleotídica 5 ' -ATGGCTTAGCTT-3 ' (SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 18) son 5 ' -TAGCTTgagtc-3 ' (SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 19) y 3 ' -gtcgacTACCGA-5 ' (SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 20) . El término "secuencia nucleotídica degenerada" indica una secuencia de nucleótidos que incluye uno o más codones degenerados (en comparación con una molécula polinucleotídica de referencia que codifica para un polipéptido) . Los codones degenerados contienen diferentes tripletes de nucleótidos pero codifican para el mismo residuo aminoácido (es decir, cada uno de los tripletes GAU y GAC codifica para Asp) . El término "vector de expresión" se utiliza para indicar una molécula de ADN, lineal o circular, que comprende un segmento que codifica para un polipéptido de interés unido operablemente a segmentos adicionales que se proporcionan para su transcripción. Dichos segmentos adicionales incluyen secuencias promotoras y terminadoras y también incluyen uno más orígenes de replicación, uno o más marcadores seleccionables, un mejorador, una señal de poliadenilación, etc. Los vectores de expresión generalmente se derivan de ADN plasmídico o viral o pueden contener elementos de ambos. El término "aislado" cuando se aplica a un polinucleótido, indica que el polinucleótido se ha separado de su ambiente genético natural y por lo tanto está libre de otras secuencias codificantes extrañas o no deseadas y está en una forma adecuada para uso dentro de sistemas de producción de proteína sometidos a ingeniería genética. Tales moléculas aisladas son aquellas que están separadas de su ambiente natural y que incluyen ADNc y clones genómicos . Las moléculas aisladas de ADN de la presente invención están libres de otros genes con los cuales habitualmente se relacionan, pero pueden incluir regiones 5' y 3' no traducidas que se formen de manera natural tales como promotores y terminadores. La identificación de regiones asociadas será evidente para una persona habitualmente experta en la técnica (véase, por ejemplo, Dynan y Tijan, Na ture 316:774-78, 1985). Un polipéptido o proteína "aislado" es un polipéptido o proteína que se encuentra en una condición diferente a su ambiente natural, por ejemplo separado de la sangre o del tejido animal. En una forma preferida el polipéptido aislado está sustancialmente libre de otros polipéptidos, particularmente otros polipéptidos de origen animal. Se prefiere proporcionar el polipéptido en una forma altamente purificada, es decir, mayor de 95% puro, de manera más preferible más de 99% puro. Cuando se utiliza en este contexto, el término "aislado" no excluye la presencia del mismo polipéptido en formas físicas alternativas tales como dímeros o alternativamente formas glucosiladas o que formen derivados . El término "unido operablemente" cuando se refiere a segmentos de ADN, indica que los segmentos están distribuidos de manera que funcionan de manera concertada para su propósito deseado, por ejemplo la transcripción se inicia en el promotor y avanza a través del segmento codificante al terminador. El término "ortólogo" indica un polipéptido o proteína que se obtiene de una especie que es la contraparte funcional de un polipéptido o proteína de una especie diferente. Las diferencias de secuencia entre ortólogos son el resultado de la diferenciación de las especies. "Parálogos" son proteínas distintas pero relacionadas estructuralmente producidas por un organismo. Se considera que los parálogos surgen a través de la duplicación de genes. Por ejemplo la a-globina, ß-globina y mioglobina son parálogos entre sí. Un "polinucleótido" es un polímero de cadena sencilla o doble de bases desoxirribonucleotídicas o ribonucleotídicas que se leen desde el extremo 5 ' al 3 ' . Los polinucleótidos incluyen ARN y AD?, y se pueden aislar de fuentes naturales, se pueden sintetizar in vitro o se pueden preparar a partir de una combinación de moléculas naturales y sintéticas. Los tamaños de los polinucleótidos se expresan como pares de bases (abreviado como "pb"), nucleótidos ("nt") o kilobases "kb") . Cuando lo permite el contexto, estos dos últimos términos pueden describir polinucleótidos que son de cadena sencilla o de cadena doble. Cuando se aplica el término de moléculas de cadena doble se utiliza para indicar la longitud total y se comprenderá que son equivalentes al término "pares de bases". Se reconocerá por aquellos expertos en la técnica que las dos cadenas de un polinucleótido de cadena doble pueden diferir ligeramente en longitud y que los extremos de la misma se pueden dispersar como resultado de la separación enzimática; por lo tanto todos los nucleótidos dentro de una molécula polinucleóticica de cadena doble pueden no estar pareados . Un "polipéptido" es un polímero de residuos aminoácidos unidos por enlaces peptídicos, ya sea producidos de manera natural o sintética. Los polipéptidos de menos de aproximadamente 10 residuos aminoácidos se denominan comúnmente como "péptidos" . El término "promotor" se utiliza en la presente por su significado reconocido en la técnica para indicar una porción de un gen que contiene secuencias de ADN que proporcionan la unión de ARN polimerasa además de transcripción. Las secuencias promotoras comúnmente, pero no siempre se encuentran en las regiones no codificantes 5 ' de los genes . Una "proteína" es una macromolécula que comprende una o más cadenas polipeptídicas. Una proteína también puede comprender componentes no peptídicos tales como grupos carbohidrato. Los carbohidratos y otros sustituyentes no peptídicos se pueden agregar a una proteína por la célula en la cual se produce la proteína y los cuales variarán con el tipo de célula. Las proteínas se definen en la presente en términos de sus estructuras principales de aminoácidos; los sustituyentes tales como grupos carbohidrato generalmente no se especifican, no obstante pueden estar presentes. El término "receptor" indica una proteína asociada a célula que se une a una molécula bioactiva (es decir, un ligando) y que media el efecto del ligando sobre la célula. Los receptores unidos a membrana se caracterizan por una estructura peptídica múltiple que comprende un dominio de unión de ligando ex racelular y un dominio efector intracelular que típicamente está involucrado en la transducción de señal. La unión del ligando al receptor resulta en un cambio de conformación en el receptor que provoca una interacción entre el dominio efector y una o varias moléculas adicionales en la célula. Esta interacción a su vez genera una alteración en el metabolismo de la célula. Los eventos metabólicos que están unidos a las interacciones receptor-ligando incluyen trancripción de genes, fosforilación, desfosforilación, incremento en la producción de AMP cíclico, movilización de calcio celular, movilización de lípidos de membrana, adhesión celular, hidrólisis de lípidos de inositol e hidrólisis de fosfolípidos. En general, los receptores pueden estar unidos a membrana, pueden ser citosólicos o nucleares, monoméricos (por ejemplo receptor de hormona estimulante de tiroides, receptor ß-adrenérgico) o multiméricos (por ejemplo receptor PDGF, receptor de hormona del crecimiento, receptor IL-3, receptor de GM-CSF, receptor de G-CSF, receptor de eritropoyetina y receptor de IL-6. El término "secuencia de señal secretora" indica una secuencia de ADN que codifica para un polipéptido (un "péptido secretor") que, como un componente de un polipéptido más grande, dirige al polipéptido más grande a través de una vía secretora de una célula en la cual se sintetiza. El polipéptido más grande comúnmente se separa para remover al péptido secretor durante su tránsito a través de la vía secretora . Un "receptor soluble" es un polipéptido receptor que no está unido a una membrana celular. Los receptores solubles son más comúnmente polipéptidos de receptor que unen ligando que carecen de dominios transmembranal y citoplásmico. Los receptores solubles pueden comprender residuos aminoácidos adicionales tales como etiquetas de afinidad que proporcionen la purificación del polipéptido o que suministren sitios para unión del polipéptido a un sustrato o secuencias de región constante de inmunoglobulina. Muchos receptores de superficie celular tienen contrapartes solubles, como se encuentran en la naturaleza que son generados por proteolísis. Se afirma que los polipéptidos receptores solubles están sustancialmente libres de los segmentos polipeptídicos transmembranal e intracelular cuando carecen de porciones suficientes de estos segmentos para proporcionar anclaje en membrana o transducción de señal, respectivamente . En la presente se utiliza el término "variante de empalme" para indicar formas alternativas de ARN transcritos de un gen. La variación de empalme surge naturalmente mediante el uso de sitios de empalme alternativos dentro de una molécula de AR? transcrita o menos comúnmente entre moléculas de AR? transcritas por separado y puede resultar en varios AR?m transcritos del mismo gen. Las variantes de empalme pueden codificar para polipéptidos que tengan una secuencia alterada de aminoácidos. El término variante de empalme también se utiliza en la presente para indicar una proteína codificada por una variante de empalme de un ARNm transcrito de un gen. Los pesos moleculares y las longitudes de los polímeros determinados por métodos analíticos imprecisos (por ejemplo electroforesis en gel) se comprenderá que son valores aproximados. Cuando dicho valor se expresa como "alrededor de" X o "aproximadamente" X, se entenderá que el valor indicado de X es preciso en +10%. Todas las referencia mencionadas en la presente se incorporan como referencia en su totalidad.

La presente invención proporciona métodos novedosos para utilizar antagonistas de IL-31RA en la detección, diagnóstico y tratamiento de enfermedades, en particular enfermedades que tienen una alta relación con el antígeno linfocítico cutáneo (CLA, por sus siglas en inglés) . La presente invención se basa, en parte, en el descubrimiento de que la citocina identificada previamente, IL-31, se expresa en linfocitos T con ecotaxia hacia piel, pero no en linfocitos T con ecotaxia a intestino. IL-31 es una proteína descubierta recientemente que tiene la estructura de una citocina con cuatro conjuntos helicoidales. Esta citocina se ha identificado previamente como IL-31 y se ha descrito completamente en la solicitud de patente de E.U.A. número 10/352,554 presentada el 21 de enero del 2003. Véase la solicitud de patente de E.U.A. publica número 2003-0224487 y la solicitud PCT WO 03/060090, todas incorporadas en la presente como referencia. Véase también Dillon et al., Nature Immunol 5:572-760, 2004. IL-31 es un ligando con alta especificidad por el receptor IL-31RA y por lo menos una subunidad adicional que comprende el receptor ß de oncostatinaM (OSMRß) . El polinucleótido nativo y las secuencias polipeptídicas para IL-31 humana se muestran en las SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 1 y 2, respectivamente. El polinucleótido nativo y las secuencias polipeptídicas para IL-31 de ratón se muestran como las SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 3 y 4 respectivamente. Como se utilizan en la presente, el término IL-31 también significa y se denomina de manera intercambiable con Zcytorl71ig e IL-31RA también significa y se denomina de manera intercambiable como Zcytorl7, como se utiliza en la publicación de patente de E.U.A. número 20030224487 (incorporada en la presente como referencia) como se muestra en lo anterior. El receptor heterodimérico para IL-31 también se describe en el documento 20030224487 y comprende a zcytorl7 (nombre HUGO, IL-31RA) y con por lo menos una subunidad adicional que comprende al receptor ß de oncostatinaM (OSMRß) . Las secuencias nativas polinucleotídicas y polipeptídicas para la forma "larga" de IL-31RA se muestran en las SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 5 y 6, respectivamente. Las secuencias nativas polinucleotídicas y polipeptídicas para la forma "corta" de IL-31RA se muestran en las SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 7 y 8, respectivamente. De manera adicional, las formas truncadas del polipéptido IL-31RA parecen expresarse de manera natural. Ambas formas codifican para receptores solubles de IL-31RA. Las secuencias polinucleotídica y polipeptídica de IL-31RA solubles "largas" se muestran como las SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 9 y 10, respectivamente. Las secuencias polinucleotídicas y polipeptídicas de IL-31RA solubles "cortas" se muestran en las SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 11 y 12, respectivamente. Las secuencias polinucleotídicas y polipeptídicas nativas para IL-31RA de ratón se muestran en las SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 13 y 14, respectivamente. Las secuencias polinucleotídicas y polipeptídicas nativas para OSMRß se muestran en las SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 15 y 16, respectivamente. Véanse las solicitudes PCT WO 02/00721 y WO 04/003140 ambas incorporadas como referencia. La secuencia de señal secretora de IL-31 está comprendida de los residuos aminoácidos 1 (Met) a 23 (Ala) y el polipéptido maduro está constituido de los residuos aminoácido 24 (Ser) a 164 (Thr) como se muestra en la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 2. El análisis de secuenciado de la parte N terminal adicional de IL-31 purificado a partir de células 293 T muestran en la parte N terminal en el residuo 27 (Leu) como se muestra en la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 2 con el polipéptido maduro comprendido de los residuos aminoácidos 27 (Leu) a 164 (Thr) , como se muestra en la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO : 2. Las subunidades de receptor de citocina están caracterizadas por una estructura de dominio múltiple que comprende un dominio extracelular, un dominio transmembranal que ancla el polipéptido en la membrana celular y un dominio intracelular. El dominio extracelular puede ser un dominio que se une a ligando y el dominio intracelular puede ser un dominio efector involucrado en la transducción de señal, aunque las funciones de unión de ligando y efectora pueden encontrarse en subunidades separadas de un receptor multimérico. Los dominios y las características estructurales de los polipéptidos IL-31RA (zcytorl7) se describen adicionalmente en lo siguiente. El análisis del polipéptido IL-31RA codificado por la secuencia de ADN de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 5 muestra un marco de lectura abierto que codifica para 732 aminoácidos (SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6) que comprende el péptido señal secretorio predicho de 19 residuos aminoácidos (residuo 1 (Met) a residuo 19 (Ala) de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6) y un polipéptido maduro de 713 aminoácidos (residuo 20 (Ala) a residuo 732 (Val) de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6) . El análisis del polipéptido IL-31RA codificado por la secuencia de ADN de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 7 muestra un marco de lectura abierto que codifica para 662 aminoácidos (SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8) que comprende un péptido de señal secretora predicho de 32 residuos aminoácidos (residuo 1 (Met) a residuo 32 (Ala) de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8) y un polipéptido maduro de 630 aminoácidos (residuo 33 (Ala) a residuo 662 (lie) de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8) . Además del motivo WSXWS (SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 17) (que corresponde a los residuos 211 a 215 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6 y los residuos 224 a 228 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8) el receptor comprende un dominio extracelular (residuos 20 (Ala) a 519 (Glu) de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6; residuos 33 (Ala) a 532 (Glu) de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8) , la cual incluye un dominio que une citocina de aproximadamente 200 residuos aminoácidos (residuos 20 (Ala) a 227 (Pro) de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6; residuos 33 (Ala) a 240 (Pro) de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8) ; un enlazante de dominio (residuos 122 (Thr) a 125 (Pro) de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6; residuos 135 (Thr) a 138 (Pro) de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8); una región de cadena penúltima (residuos 194 (Phe) a 202 (Arg) de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6; residuos 207 (Phe) a 215 (Arg) de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8 ) ; un dominio de fibronectina tipo III (residuos 228 (Cys) a 519 (Glu) de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6; residuos 241 (Cys) a 532 (Glu) de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8) ; un dominio transmembranal (residuos 520 (lie) a 543 (Leu) de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6 ; residuos 533 (He) a 556 (Leu) de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8) ; dominio de señalización intracelular completo (residuos 544 (Lys) a 732 (Val) de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6; y residuos 557 (Lys) a 662 (He) de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8) la cual contiene un sitio de señalización "Caja I" (residuos 554 (Trp) a 560 (Pro) de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6; residuos 567 (Trp) a 573 (Pro) de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8) y un sitio de señalización "Caja II" (residuos 617 (Gln) a 620 (Phe) de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6; residuos 630 (Gln) a 633 (Phe) de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8) . Aquellos expertos en la técnica reconocerán que estos límites de dominio son aproximados y se basan en alineaciones con proteínas conocidas y predicciones del plegado de la proteína. Además de estos dominios, las características de receptor conservadas en el receptor codificado incluyen (como se muestra en la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6) un residuo Cys conservado en la posición 30 (posición 43 como se muestra en la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8) , el motivo CXW (en donde X es cualquier aminoácido) en las posiciones 40-42 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6 (posiciones 53-55 como se muestra en la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8), residuo Trp en la posición 170 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6 (posición 183 como se muestra en la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8 ) y un residuo Arg conservado en la posición 202 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6 (posición 215 como se muestra en la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8) . Los polinucleótidos correspondientes que codifican para las regiones de polipéptido IL-31RA, dominios, motivos, residuos y secuencias descritas en lo anterior son como se muestran en las SECUENCIAS DE IDENTIFICACIÓN NÚMEROS: 5 y 7. Además, las formas truncadas del polipéptido IL-3IRA parecen expresarse de manera natural. Ambas formas codifican para receptores zcytorl7 solubles. En la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 9 se muestra un polinucleótido que codifica para una "forma larga" del receptor zcytorl7 soluble, truncado dentro del dominio de fibronectina tipo III, y el polipéptido correspondiente se muestra en la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 10. Esta forma truncada codifica para los residuos 1 (Met) a 324 (Lys) de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6 y por lo tanto comprende una secuencia de señal intacta WSXWS (SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 17) motivo, enlazante, dominio de unión a citocina, cadena penúltima y conservada, motivo Cys, CXW, Trp y residuos Arg como se describe en lo anterior. Un polinucleótido que codifica para la "forma corta del receptor IL-31RA soluble, truncado en el extremo del dominio de unión a citocina se muestra en la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 11 y el polipéptido correspondiente se muestra en la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 12. Esta forma truncada codifica para un polipéptido de 239 residuos que es idéntico a los residuos 1 (Met) a 225 (Glu) de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6 y después diverge y por lo tanto comprende una secuencia de señal intacta WSXWS (SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 17) motivo, enlazante, dominio de unión a citocina, cadena penúltima y motivo conservado Cys CXW, residuos Trp y Arg como se describen en lo anterior. Tanto los linfocitos T con ecotaxia a piel como los queratinocitos epidérmicos están relacionados en la patología de enfermedades cutáneas en humanos . Como se muestra en la presente, el ARNm para IL-31 y la expresión de proteínas se limita a la población de linfocitos T CLA+ con ecotaxia a piel tanto en pacientes con dermatitis atópica (AD) como en individuos normales, mientras que el análisis del receptor para IL-31, IL-31RA por inmunohistoquímica (IHC) sugiere concentraciones ligeramente mayores de expresión de IL-31RA en queratinocitos de piel en biopsias de piel de pacientes que padecen AD aguda y crónica en comparación con individuos normales. Cuando se sobreexpresa en ratones, IL-31 resulta en prurito y el desarrollo de dermatitis cutánea que recuerda la dermatitis atópica humana (AD) . Los estudios de inmunohistoquímica (IHC, por sus siglas en inglés) que se muestran en la presente muestran que la proteína IL-31RA se expresa por queratinocitos cutáneos y macrófagos infiltrados en biopsias de piel a partir de pacientes con AD. La comparación entre pacientes con AD e individuos normales sugiere que IL-31RA se exprese en concentraciones más altas en queratinocitos epidérmicos en las muestras de AD. Los infiltrados de células cutáneas, los cuales están presentes en números mayores en la piel de pacientes con AD en comparación con los individuos normales, expresan ARNm para IL-31. El análisis histomorfométrico de estas células sugiere una línea linfocítica en donde la mayor parte de las células producen tinción positiva para el antígeno linfocítico cutáneo (CLA, por sus siglas en inglés) y CD3 , lo que demuestra que los linfocitos T con ecotaxia hacia piel en la piel expresan ARNm para IL-31. Mediante el análisis de linfocitos T de sangre periférica para IL-31, el ARNm para IL-31 y la expresión de proteínas se limita en gran medida a linocitos T con ecotaxia a piel CD45RO+ CLA+ en persona con AD y voluntarios normales. Además, los linfocitos T CLA+ circulantes de pacientes con AD son capaces de producir concentraciones más altas de IL-31 en comparación con linfocitos T CLA+ de individuos normales aunque existe una gran variabilidad entre las muestras de los pacientes. Estos resultados proporcionan pruebas convincentes de que la expresión de IL-31 se relaciona con dermatitis atópica y puede contribuir al desarrollo de inflamación cutánea y prurito por AD. Como se muestra en la presente, IL-31 es producido localmente en la piel y por células de infiltración cutánea. La producción local de citocinas en tejidos por linfocitos T se considera que es un mecanismo clave para la patogénesis de la enfermedad en AD y en los números aumentados de linfocitos T tanto en circulación como en piel se considera que se relacionan con la enfermedad. Aunque los pacientes con ADN y los controles normales tienen linfocitos T CLA+ circulantes que expresan IL-31 por activación, los linfocitos T CLA+ de pacientes con AD se ha informado que existen en un estado más activado en comparación con las células de individuos normales. Véase Akdis M. J. Immunol . , 159:4611-4619, 1997. En consecuencia, el umbral de estimulación necesario para la producción de IL-31 por los linfocitos T CLA+ puede diferir entre pacientes con dermatitis y sujetos control. Como se muestra en la presente, los linfocitos T CLA+ circulantes de pacientes con AD después de 24 horas de estimulación con concentraciones subóptimas de anticuerpo anti-CD3 en ausencia de anticuerpo anti-CD28 tiene la capacidad de producir concentraciones más altas de IL-31 en comparación con células de individuos normales. Debido a la variabilidad en las concentraciones de IL-31 producidas por los linfocitos T CLA+ de pacientes individuales con AD no existe una diferencia significativa en la producción promedio de IL-31 de los linfocitos T CLA+ circulantes de individuos normales o con AD. No obstante, dado que se localizan más linfocitos T CLA+ en la piel de pacientes con AD, en comparación con los individuos normales, existe un potencial aumentado de actividad IL-31 en el microambiente de la piel de AD . El ejemplo 1 demuestra los linfocitos T CLA+ circulantes de algunos pacientes con AD producen concentraciones mayores de IL-31 en comparación con células de individuos normales. La detección de IL-31 en pacientes de dicha subpoblación utilizando el bioanálisis que se proporciona en la presente o con cualquier análisis que detecte IL-31 producido por linfocitos T circulantes en la sangre puede ser útil para determinar si un antagonista de IL-31 será útil como tratamiento para enfermedades en donde la presencia de IL-31 causa inflamación. Se puede utilizar una línea de células que sea dependiente de OSMRß y la vía enlazada de IL-31RA para supervivencia y crecimiento en ausencia de otros factores de crecimiento con el fin de medir la actividad de IL-31. Tales líneas de células que dependen del factor de crecimiento incluyen BaF3 , FDC-P1 y M07e. Para información sobre la línea de células BaF3 , véase Palacios y Steinmetz ( Cell , 41 : 121 -734, 1985) y Mathey-Prevot et al., (Mol . Cell , Biol . , 6:4133-4135, 1986) . Para información sobre la línea de células FDC- Pl, véase Hapel et al., (Blood, 64:786-790, 1984). Para información sobre la línea de células M07e véase Kiss et al., ( Leukemia , 7:235-240, 1993). La secuencia de aminoácidos para los receptores OSMRß e IL-31RA indica que los receptores codificados que pertenecen a la subfamilia de receptor de citocina clase I que incluye, pero que no se limita a los receptores para IL- 2, IL-4, IL-7, Lif, IL-12, IL-15, EPO, TPO, GM-CSF y G-CSF (para una revisión véase Cosman, "The Hematopoietin Receptor Superfamily" en Cytoifine 5(2):95-106, 1993). El receptor de IL-31RA se describe completamente en la solicitud de patente PCT número US01/20484 (publicación WIPO número WO 02/00721) . El análisis de la distribución de tejido del ARNm del receptor IL-31RA muestra la expresión en el subconjunto de linfocitos T CD4+ y CD8+ activados, monocitos CD14+ y una expresión más débil en linfocitos B CD19+. Además, el ARNm está presente en líneas de células monocíticas en reposo o activadas THP-1 (ATCC No. TIB-202), U937 (ATCC No. CRL-1593.2) y HL60 (ATCC No. CCL-240). Los péptidos y polipéptidos que presentan un epítopo antigénico, preferiblemente contienen por lo menos cuatro a diez aminoácidos, por lo menos diez a catorce aminoácidos o aproximadamente 14 a aproximadamente 30 aminoácidos de los dominios extracelulares de las SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO 6 o SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8. Dichos péptidos y polipéptidos que tienen epítopos se pueden elaborar por fragmentación del dominio extracelular del polipéptido IL-31RA o por síntesis peptídica química, como se describe en la presente. Además, los epítopos se pueden seleccionar por desplazamiento de fago de bibliotecas de péptidos aleatorias (véase, por ejemplo, Lañe y Stephen, Curr. Opin. Immunol . 5:268 (1993); y Córtese et al . , Curr. Opin. Biotechnol. :616 (1996)). Los métodos convencionales para identificar epítopos y producir anticuerpos para péptidos pequeños que comprenden un epítopo se han descrito, por ejemplo, por Mole, "Epitope Mapping" , en Methods in Molecular Biology, Vol. 10, Manson (ed.), páginas 105-116 (The Humana Press, Inc. 1992); Price, "Production and Characterization of Synthetic Peptide-Derived Antibodies", en Monoclonal Antibodies : Production, Engineering, and Clinical Application, Ritter y Ladyman (eds.), páginas 60-84 (Cambridge University Press 1995) y Coligan et. al . , (eds.), Current Protocols in Immunology, páginas 9.3.1 - 9.3.5 y páginas 9.4.1 - 9.4.11 (John Wiley & Sons 1997). Los polipéptidos IL-31RA de la presente invención que incluyen polipéptidos de longitud completa, fragmentos funcionales y polipéptidos de fusión se pueden producir, purificar y renaturalizar por métodos bien conocidos en la técnica y como se describe en las publicaciones PCT WO 02/00721 y WO 04/003140. Se prefiere purificar los polipéptidos de la presente invención hasta >80% de pureza, de manera más preferible hasta >90% de pureza, incluso de manera más preferible ^95% de pureza y de manera particularmente preferida es un estado farmacéuticamente puro, que es mayor de 99.9% puro con respecto a las macromoléculas contaminantes, particularmente otras proteínas y ácidos nucleicos libre de agentes infecciosos y pirogénicos. Preferiblemente, un polipéptido purificado está sustancialmente libre de otros polipéptidos, particularmente otros polipéptidos de origen animal. La presente invención proporciona métodos para utilizar antagonistas de IL-31RA que incluyen anticuerpos anti- IL-3 IRA y fragmentos, receptores IL-31RA solubles y receptores IL-31RA/0SMRß solubles para reducir, inhibir o evitar la inflamación en los microambientes celulares en donde una o más células en el microambiente son linfocitos T que son positivos para el antígeno linfocítico cutáneo. Los anticuerpos de una respuesta inmunológica generada por inoculación de un animal con los antígenos IL-3IRA, por ejemplo un dominio extracelular de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6 o una porción del mismo, tal como el dominio de unión a ligando) se puede aislar y purificar y se conocen en la técnica y se describen en la presente. Los métodos para preparar y aislar anticuerpos policlonales y monoclonales son bien conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, Current Protocols in Immunology, Cooligan, et al., (eds.), National Institutes of Health, John, Wiley and Sons, Inc., 1995; Sambrook et al., Molecular Cloning:A Labora tory Manual , Segunda Edi ción , Cold Spring Harbor, NY, 1989; y Hurrell, J. G. R. , Ed. , Monoclonal Hybridoma An tibodies : Techniques and Appli ca tions , CRC Press, Inc., Boca Ratón, FL. , 1982. Como será evidente para una persona habitualmente experta en la técnica se pueden generar anticuerpos monoclonales a partir de inoculación de una diversidad de animales homeotérmicos tales como caballos, vacas, chivos, borregos, perros, pollos, conejos, ratones y ratas con un polipéptido IL-31RA o un fragmento del mismo. Se puede incrementar la inmunogenicidad del polipéptido IL-31RA mediante el uso de un adyuvante tal como alumbre (hidróxido de aluminio) o adyuvante completo o incompleto de Freund. Los polipéptidos útiles para inmunización también incluyen polipéptidos de fusión tales como las fusiones de IL-31RA o una porción de las mismas con un polipéptido de inmunoglobulina o con una proteína que une maltosa. El inmunógeno polipeptídico puede ser una molécula de longitud completa o una porción de la misma. Si la porción polipeptídica es "similar a hapteno" dicha porción ventajosamente se puede unir o enlazar a un portador macromolecular (tal como hemocianina de lapa de bocallave (KLH, por sus siglas en inglés) , albúmina sérica bovina (BSA, por sus siglas en inglés o toxoide del tétanos) para inmunización. Como se utiliza en la presente, el término "anticuerpos" incluye anticuerpos policlonales, anticuerpos policlonales purificados por afinidad, anticuerpos monoclonales y fragmentos que unen antígeno tales como el fragmento Fab, el fragmento Fab' , el fragmento F(ab')2, los fragmentos proteolíticos de cadena sencilla Fv(scFv, por sus siglas en inglés) . Los anticuerpos intactos sometidos a ingeniería genética o fragmentos tales como anticuerpos quiméricos, fragmentos 7v, anticuerpo de cadena sencilla y similares así como péptidos y polipéptidos sintéticos que unen antígeno también se incluyen. Los anticuerpos no humanos pueden ser humanizados por injerto de los CDR no humanos en una infraestructura y regiones constantes humanas o por incorporación de la totalidad de los dominios variables no humanos completos (opcionalmente "recubrimiento" junto con una superficie similar a la humana por sustitución de los residuos expuestos, en donde el resultado es un anticuerpo "jaspeado") . En algunos casos los anticuerpos humanizados pueden retener residuos no humanos dentro de los dominios de infraestructura de región variable humana para mejorar las características de unión adecuada. Mediante los anticuerpos humanizados se puede incrementar la vida media biológica y se reduce el potencial de reacciones inmunológicas adversas cuando se administra a humanos . Además se pueden producir anticuerpos humanos en animales no humanos transgénicos que se han sometido a ingeniería para contener genes para inmunoglobulina humana como se describe en la publicación WIPO número WO 98/24893. Se prefiere que los genes de inmunoglobulina endógenos en estos animales sean inactivados o eliminados, por ejemplo por recombinación homologa. Se considera que los anticuerpos se unen específicamente si: 1) presentan un nivel de umbral de actividad de unión, y 2) no dan reacción cruzada significativa con moléculas polipeptídicas relacionadas. Se determina un nivel umbral de unión si los anticuerpos anti-IL-31RA en la presente se unen al polipéptido, péptido o epítopo de IL-31RA con una afinidad por lo menos 10 veces mayor que la afinidad de unión para el polipéptido control (que no es IL-31RA) . Se prefiere que los anticuerpos presenten una afinidad de unión (Ka) de 106 M"1 o mayor, preferiblemente 107 M"1 o mayor, de manera más preferible 108 M"1 o mayor, y de manera más preferible 109 M"1 o mayor. La afinidad de unión de un anticuerpo se puede determinar fácilmente por una persona habitualmente experta en la técnica, por ejemplo mediante análisis Scatchard (Scatchard, G., Ann . NY Acad. Sci . 51:660-672, 1949). La presente invención proporciona un método para tratar a un paciente que padece de un trastorno cutáneo, el método comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-IL-31RA o un fragmento al paciente, en donde el anticuerpo anti-IL-31RA o un fragmento se une con los residuos aminoácidos 20-519 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6 o una porción del mismo, de los residuos aminoácidos 33-532 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8 o una porción de la misma, y en donde el anticuerpo anti-IL- 3IRA o un fragmento evita, inhibe el progreso o retrasa el inicio o reduce la gravedad y/o inhibe por lo menos una de las condiciones o síntomas del trastorno cutáneo que se selecciona del grupo que consiste de dermatitis atópica, dermatitis de contacto, reacciones alérgicas cutáneas de tipo tardío inducidas por medicamentos, necrólisis epidérmica tóxica, linfoma de linfocitos T cutáneos, penfigoide buloso, alopecia areata, vitíligo, acné rosácea, prurigo nodular escleroderma y virus de herpes simplex. El anticuerpo anti-IL-31RA opcionalmente puede ser un anticuerpo policlonal o un anticuerpo monoclonal neutralizante (la presente invención también proporciona un hibridoma para producir el anticuerpo monoclonal IL-31RA neutralizante) . Opcionalmente, el fragmento de anticuerpo anti-IL-3 IRA puede ser un fragmento Fab, un fragmento Fab1, un fragmento F(ab')2, la cadena sencilla Fv (scFV) , anticuerpo específico doble, anticuerpo de dominio o anticuerpo biespecífico. El anticuerpo anti-IL-31RA o un fragmento se pueden unir con los residuos aminoácidos 20-277 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6 o 33-240 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8. El anticuerpo anti-IL-3IRA o un fragmento se pueden unir con aproximadamente 4-10 residuos aminoácidos de los residuos aminoácidos 20-519 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6 o los residuos aminoácidos 33-532 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8. El anticuerpo anti-IL-31RA o un fragmento se pueden unir con aproximadamente 10-14 residuos aminoácidos de los residuos aminoácidos 20-519 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6 o los residuos aminoácidos 33-532 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8. El anticuerpo anti-IL-31RA o un fragmento se pueden unir con aproximadamente 14-30 residuos aminoácidos de los residuos aminoácidos 20-519 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6 o los residuos aminoácidos 33-532 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8. El anticuerpo anti-IL-31 o un fragmento del mismo se puede conjugar adicionalmente a un polietilenglicol o a albúmina sérica humana. La presente invención también proporciona un método para tratar a un paciente que padece de un trastorno cutáneo, el método comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un receptor soluble de IL-31RA al paciente, en donde el receptor soluble de IL-31RA se une con un polipéptido IL-31 que consiste de los residuos aminoácidos 1-164 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 2 y en donde el receptor IL-31RA soluble evita, inhibe el progreso o retrasa el inicio, reduce la gravedad y/o inhibe por lo menos una de las condiciones o síntomas del trastorno cutáneo que se selecciona del grupo que consiste de dermatitois atópica, dermatitis de contacto, reacciones alérgicas cutáneas de tipo tardío inducidas por medicamento, necrólisis epidérmica tóxica, linfoma de linfocitos T cutáneos, penfigoide buloso, alopecia areata, vitíligo, acné rosácea, prurigo nodular, escleroderma y virus de herpes simplex. El receptor IL-31RA soluble puede comprender los residuos aminoácidos 20-519 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6 o 33-240 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8, los residuos aminoácidos 1-324 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 10 o los residuos aminoácidos 1-239 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 12. El receptor IL-31RA soluble puede conjugarse adicionalmente a la región Fc de las diversas inmunoglobulinas (IgG, IgA, IgD, IgM o IgE) . Opcionalmente, el receptor IL-31RA soluble puede ser un homodímero IL-31RA o un heterodímero IL-31RA/OSMRß . El receptor IL-31RA soluble puede unirse con un polipéptido IL-31 que comprende, que consiste esencialmente, que consiste de los residuos aminoácidos 24-164 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 2 o 27-164 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 2. El receptor IL-31RA soluble puede conjugarse adicionalmente a un polietilenglicol o a albúmina sérica humana. La presente invención también proporciona moléculas de ácido nucleico que codifican para IL-31RA aislado que pueden hibridizar bajo condiciones rigurosas con moléculas de ácido nucleico que tienen la secuencia nucleotídica de los nucleótidos 58-1557 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 5 o los nucleótidos 97-1596 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 7, o con moléculas de ácido nucleico que tienen una secuencia nucleotídica complementaria con los nucleótidos 58-1557 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 5 o los nucleótidos 97-1596 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 7. En general, las condiciones rigurosas se seleccionan para que sean aproximadamente 5°C menor que el punto de fusión térmica (Tm) para la secuencia específica a una fuerza iónica y pH definidos. La Tm es la temperatura (bajo fuerza iónica y pH definidos) a la cual 50% de la secuencia objetivo hibridiza con una sonda con la que coincide perfectamente. Un par de moléculas de ácido nucleico tales como ADN-ADN, ARN-ARN y ADN-ARN pueden hibridizar si las secuencias nucleotídicas tienen cierto grado de complementariedad. Los híbridos pueden tolerar pares de bases mal pareados en la hélice doble pero la estabilidad del híbrido es alterada por el grado de malos pareamientos . La Tm del híbrido mal pareado disminuye en 1°C por cada 1-1.5% de mal pareamiento de bases. Al hacer variar la rigurosidad de las condiciones de hibridación permite controlar el grado de mal pareamiento que estará presente en el híbrido. El grado de rigurosidad se incrementa conforma aumenta la temperatura de hibridación y disminuyen la fuerza iónico y el amortiguador de hibridación. Está dentro de las habilidades de una persona experta en la técnica adaptar estas condiciones para uso con un híbrido polinucleotídico particular. La Tm para una secuencia objetivo específica es la temperatura (bajo las condiciones definidas) en las cuales 50% de la secuencia objetivo hibridizará con una secuencia de sonda con la que coincide perfectamente. Dichas condiciones las cuales alteran la Tm incluyen el tamaño y el contenido de par de bases de la sonda polinucleotídica, la fuerza iónica y la solución de hibridación y la presencia de agentes desestabilizantes en la solución de hibridación. Se conocen en la técnica numerosas ecuaciones para calcular Tm y son específicos para ADN, ARN e híbridos de ADN-ARN y secuencias de sonda polinucleotídica de longitud variable (véase, por ejemplo Sambrook et al., Molecular Cl oning: A Labora tory Manual , Segunda edición (Cold Spring Harbor Press 1989); Ausubel et al., (eds.), Curren t Protocol s in Molecular Biology (John Wiley and Sons, Inc. 1987); Berger y Kimmel (eds.), Guide to Molecular Cloning Techniques , (Academic Press, Inc., 1987) y Wetmur, Crit. Rev.

Biochem . Mol , Biol . 26: 221 (1990)). El programa Software de análisis de secuencia tal como OLIGO 6.0 (LSR; Long Lake, MN) y Primer Premier 4.0 (Premier Biosoft International; Palo Alto, CA) , así como los sitios en Internet son herramientas disponibles para analizar una secuencia dada y calcular la Tm en base en criterios definidos por el usuario. Dichos programas pueden analizar una secuencia dada bajo condiciones definidas e identificar secuencias de sonda adecuadas. Típicamente, la hibridación de secuencias polinucleotídicas más largas, >50 pares de base se realiza a temperaturas de aproximadamente 20-25°C por debajo de la Tm calculada. Para sondas más pequeñas <50 pares de base, la hibridación típicamente se lleva a cabo a la Tm de 5-10°C por debajo de la Tm calculada. Esto permite la tasa máxima de hibridación para los híbridos ADN-ADN y ADN-ARN. Después de la hibridación, las moléculas de ácido nucleico se pueden lavar para eliminar las moléculas de ácido nucleico no hibridizadas bajo condiciones rigurosas o bajo condiciones de alta rigurosidad. Las condiciones típicas de lavado riguroso incluyen lavado en una solución de 0.5x - 2x SSC con dodeciisulfato de sodio (SDS), 0.1% a 55-65°C. Es decir, las moléculas de ácido nucleico que codifican para una variante del polipéptido IL-31RA hibridizan con una molécula de ácido nucleico que tenga la secuencia nucleotídica de los nucleótidos 58-1557 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 5 (o su complemento) o nucleótidos 97-1596 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 7, (o su complemento) bajo condiciones de lavado rigurosas en las cuales el lavado riguroso es equivalente a 0.5x - 2x SSC con SDS 0.1% a 55-65°C, que incluye 0.5x SSC con SDS 0.1% a 55°C o 2x SSC con SDS 0.1% a 65 °C Una persona experta en la técnica puede diseñar con facilidad condiciones equivalentes, por ejemplo al sustituir con SSPE a SSC en la solución de lavado. Las condiciones típicas de lavado altamente riguroso incluyen lavado en una solución de 0. lx - 0.2x SC con dodeciisulfato de sodio (SDS) 0.1% a 50-65°C En otras palabras, las moléculas de ácido nucleico que codifican para una variante del polipéptido IL-31RA hibridizan con una molécula de ácido nucleico que tiene la secuencia nucleotídica de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 1 (o su complemento) bajo condiciones de lavado altamente rigurosas en las cuales la rigurosidad de lavado es equivalente a 0. lx - 0.2x SSC con SDS 0.1% a 50-65°C, que incluye 0. lx SSC con SDS 0.1% a 50°C o 0.2x SSC con 0.1% de SDS a 65°C. La presente invención también proporciona polipéptidos IL-31RA aislados que tienen una identidad de secuencia sustancialmente similar a los polipéptidos que tienen los residuos aminoácidos 20-519 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6 y/o residuos aminoácidos 33-532 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8 o sus ortólogos. En la presente se utiliza el término "identidad de secuencia sustancialmente similar" para indicar polipéptidos que comprenden por lo menos 70%, por lo menos 80%, por lo menos 90%, por lo menos 95%, por lo menos 96%, por lo menos 97%, por lo menos 98%, por lo menos 99%, por lo menos 99.5% o mayor de 99.5% de identidad de secuencia con las secuencias que se muestran en los residuos aminoácidos 20-519 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6 y/o los residuos aminoácidos 33-532 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8 o sus ortólogos. La presente invención incluye además moléculas de ácido nucleico que codifican para dichos polipéptidos . Los métodos para determinar el porcentaje de identidad se describen en las publicaciones PCT WO 02/00721 (incorporada como referencia) y 04/003140 (incorporada como referencia) . La presente invención proporciona un método para tratar a un paciente que padece de un trastorno cutáneo, el método comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-IL-31RA o un fragmento al paciente, en donde el anticuerpo anti-IL31RA o fragmento se une con una secuencia de aminoácidos que tiene por lo menos 90%, por lo menos 91%, por lo menos 92%, por lo menos 93%, por lo menos 94%, por lo menos 95%, por lo menos 96%, por lo menos 97%, por lo menos 98%, por lo menos 99%, por lo menos 99.5% o más de 99.5% de identidad de secuencia con los residuos aminoácidos 20-519 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6 o una porción de la misma, o los residuos aminoácidos 33-532 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8 o una porción de la misma y en donde al anticuerpo anti-IL-3IRA o un fragmento, evita, inhibe el progreso o retrasa el inicio o reduce la gravedad y/o inhibe por lo menos una de las condiciones o síntomas del trastorno cutáneo que se selecciona del grupo que consiste de dermatitis atópica, dermatitis de contacto, reacciones alérgicas cutáneas de tipo tardío inducidas por medicamento, necrólisis epidérmica tóxica, linfoma de linfocitos T cutáneos, penfigoide buloso, alopecia areata, vitíligo, acné rosacea, prurigo nodular, escleroderma y virus de herpes simplex. El anticuerpo anti-IL-31RA opcionalmente puede ser un anticuerpo policlonal o un anticuerpo monoclonal neutralizante (la presente invención también proporciona un híbridoma para producir el anticuerpo monoclonal IL-31RA neutralizante) . Opcionalmente, el fragmento de anticuerpo anti-IL-31RA puede ser un fragmento Fab, un fragmento Fab1, un fragmento F(ab')2, Fv de cadena sencilla (scFV) , por sus siglas en inglés, un anticuerpo específico doble, un anticuerpo de dominio o un anticuerpo biespecífico. El anticuerpo anti-IL-31RA o un fragmento se pueden unir con los residuos aminoácidos 20-277 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6 o 33-240 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NUMERO: 8. El anticuerpo anti-IL-3IRA o un fragmento se pueden unir con aproximadamente 4-10 residuos aminoácidos de los residuos aminoácidos 20-519 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6 o los residuos aminoácidos 33-532 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8. El anticuerpo anti-IL-31RA o un fragmento se pueden unir con aproximadamente 10-14 residuos aminoácidos de los residuos aminoácidos 20-519 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6 o los residuos aminoácidos 33-532 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8. El anticuerpo anti-IL-3IRA o un fragmento se pueden unir con aproximadamente 14-30 residuos aminoácidos de los residuos aminoácidos 20-519 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6 o los residuos aminoácidos 33-532 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8. El anticuerpo anti-IL-31 o un fragmento se pueden conjugar adicionalmente a polietilenglicol o a albúmina sérica humana. La presente invención también proporciona un método para tratar a un paciente que padece de un trastorno cutáneo, el método comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un receptor IL-31RA soluble al paciente, en donde el receptor IL-31RA soluble tiene por lo menos 90%, por lo menos 91%, por lo menos 92%, por lo menos 93%, por lo menos 94%, por lo menos 95%, por lo menos 96%, por lo menos 97%, por lo menos 98%, por lo menos 99%, por lo menos 99.5% o más de 99.5% de identidad de secuencia con los residuos aminoácidos 20-519 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6 o una porción de la misma, o los residuos aminoácidos 33-532 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8 , y en donde el receptor soluble de IL-31RA se une con un polipéptido IL-31 que consiste de los residuos aminoácidos 1-164 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 2 y en donde el receptor IL-31RA soluble evita, inhibe el progreso, retrasa el inicio, reduce la gravedad y/o inhibe por lo menos una de las condiciones o síntomas de un trastorno cutáneo que se selecciona del grupo que consiste de dermatitis atópica, dermatitis de contacto, reacciones alérgicas cutáneas de tipo tardío inducidas por medicamento, necrólisis epidérmica tóxica, linfoma de linfocitos T cutáneos, pénfigoide buloso, alopecia areata, vitíligo, acné rosácea, prurigo nodular, escleroderma y virus de herpes simplex. El receptor IL-31RA soluble puede comprender los residuos aminoácidos 20-519 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6 O 33-240 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8, los residuos aminoácidos 1-324 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 10 o los residuos aminoácidos 1-239 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 12. El receptor IL-31RA soluble puede conjugarse adicionalmente a la región Fc de las diversas inmunoglobulinas (IgG, IgA, IgD, IgM o IgE) . Opcionalmente, el receptor IL-31RA soluble puede ser un homodímero IL-31RA o un heterodímero IL-3IRA/OSMRß . El receptor IL-31RA soluble se puede unir con un polipéptido de IL-31 que comprende, que consiste esencialmente, o que consiste de los residuos aminoácidos 24-164 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 2 o 27-164 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 2. El receptor IL-31RA soluble se puede conjugar adicionalmente a un polietilentlicol o a albúmina sérica humana. Se pueden utilizar una diversidad de análisis conocidos por los expertos en la técnica para detectar anticuerpos los cuales se unen a proteínas o polipéptidos de IL-31RA. Los análisis ejemplares se describen detalladamente en An tibodies : A Labora tory Manual , Harlow and Lañe (Eds.), Cold Spring Harbor Laboratory Press 1988. Los ejemplos representativos de dichos análisis incluyen: inmunoelectroforesis concurrente, radioinmunoanálisis, radioinmunoprecipitación, análisis inmunosorbente unido a enzima (ELISA, por sus siglas en inglés) , dot blot o análisis Western blot, análisis de inhibición o competencia y análisis indirecto (tipo emparedado) . Además, los anticuerpos pueden cribarse para encontrarse con proteína o polipéptido IL-31RA natural versus mutante. Los anticuerpos para IL-31RA se pueden utilizar para etiquetar células que expresen IL-31RA; para aislar IL-31RA por purificación de afinidad; para análisis de diagnóstico para determinar las concentraciones circulantes de polipéptidos IL-31RA; para detectar o cuantificar IL-31RA soluble como un marcador de patología o enfermedad subyacente; en métodos analíticos que utilizan FACS; para el cribado de bibliotecas de expresión; para generar anticuerpos antiidiotípicos y como anticuerpos neutralizantes o como antagonistas para bloquear la actividad de IL-31 in vitro e in vivo. Las etiquetas o marcas directas adecuadas incluyen radionúclidos, enzimas, sustratos, cofactores, inhibidores, marcadores fluorescentes, marcadores quimioluminiscentes, partículas magnéticas y similares, las etiquetas o marcas indirectas pueden caracterizar el uso de biotina-avidina u otros pares de complemento/anticomplemento como intermediarios . Los anticuerpos en la presente también pueden conjugarse, directa o indirectamente a medicamentos, toxinas, radionúclidos y similares y estos conjugados se utilizan para el diagnóstico in vivo o para aplicaciones terapéuticas. Además, los anticuerpos para IL-31RA o fragmentos de los mismos se pueden utilizar in vitro para detectar IL-31RA desnaturalizado o fragmentos de los mismos en análisis, por ejemplo Western blot u otros análisis conocidos en la técnica. Las moléculas detectables adecuadas pueden unirse directa o indirectamente al polipéptido o anticuerpo e incluyen radionúclidos, enzimas, sustratos, cofactores, inhibidores, marcadores fluorescentes, marcadores quimioluminiscentes, partículas magnéticas y similares. Las moléculas citotóxicas adecuadas se pueden unir directa o indirectamente al polipéptido o anticuerpo e incluyen toxinas bacterianas o vegetales (por ejemplo difteria, toxina, saponina, exotoxinas de Pseudomonas , ricina, abrina y similares) así como radionúclidos terapéuticos tales como yodo-131, renio-188 o itrio-90 (ya sea unido directamente al polipéptido o anticuerpo o unido indirectamente a través de un medio de una porción quelante, por ejemplo) . Los polipéptidos o anticuerpos también se pueden conjugar a medicamentos citotóxicos tales como adriamicina. Para unión indirecta de una molécula detectable o citotóxica, la molécula detectable o citotóxica se puede conjugar con un miembro de un par complementario/anticomplementariop en donde el otro miembro se une al polipéptido o la porción de anticuerpo. Para estos propósitos la biotina/estreptavidina son un par ejemplar de complementario/anticomplementario. Las proteínas de fusión polipéptido-toxina o las proteínas de fusión anticuerpo-toxina se pueden utilizar para inhibición o supresión dirigida a célula o a tejido (por ejemplo para tratar células cancerosas o tejidos) . De manera alternativa, si el polipéptido tiene dominios funcionales múltiples (es decir, un dominio de activación o un dominio de unión de receptor más un dominio de dirección) , una proteína de fusión que incluye únicamente al dominio de dirección puede ser adecuado para dirigir una molécula detectable, una molécula citotóxica o una molécula complementaria a una célula o un tipo de tejido de interés. En los casos en donde el dominio únicamente de la proteína de fusión incluye una molécula complementaria, la molécula anticomplementaria se puede conjugar a una molécula detectable o citotóxica. Dichas proteínas de fusión de dominio-molécula complementaria por lo tanto representan un portador dirigido genético o un vehículo para el suministro específico a la célula/tejido de conjugados de molécula anticomplementaria detectable/citotóxica genéricos. Tanto los linfocitos T con ecotaxia a piel como los queratinocitos epidérmicos se han relacionado en la patología de enfermedades cutáneas en los humanos. Como se muestra en el ejemplo 1 en la presente, de los subconjuntos de linfocitos T, el ARNm para IL-31 y la expresión de proteínas se limitan a la población de linfocitos T CLA+ con ecotaxia a piel en humanos. Como tal, un antagonista de IL-31RA que incluye un anticuerpo o un fragmento del mismo o un antagonista de receptor soluble (receptores solubles de IL-31RA e IL-31RA/0SMRß) serán útiles para tratar, suprimir, inhibir el progreso y/o reducir la gravedad de enfermedades cutáneas y epidérmicas las cuales tengan expresión de linfocitos T CLA+ . Dichas enfermedades incluyen, por ejemplo, dermatitis atópica, dermatitis de contacto, psoriasis, reacciones alérgicas inducida por medicamento, virus trópico de piel y prurito asociado a virus, vitíligo, linfoma de linfocitos T cutáneos, alopecia areata, acné rosácea, acné vulgar, prurigo nodular y penfigoide buloso.

Dermatitis Atópica La dermatitis atópica (AD, por sus siglas en inglés) , es una enfermedad cutánea inflamatoria con recaída crónica, con una incidencia cada vez mayor durante las últimas décadas. Clínicamente, se caracteriza a AD por placas altamente pruríticas y con frecuencia escoriadas y pápulas que muestran un curso de recaída crónica. El diagnóstico de AD se basa principalmente en hallazgos clínicos mayores y menores. Véase Hanifin J.M., Arch Derma tol : 135, 1551 (1999). La hisopatología muestra espongiosis, hiperqueratosis y paraqueratosis focal en lesiones agudas mientras que existe hiperplasia epidérmica marcada con hiperqueratosis y paraqueratosis, acantosis/hipergranulocis e infiltración perivascular de la dermis con linfocitos y mastocitos abundantes constituyen los elementos definitorios de las lesiones crónicas. Los linfocitos T juegan un papel central en el inicio de las respuestas inmunológicas locales en tejidos y las pruebas sugieren que la infiltración en piel de los linfocitos T en particular puede jugar un papel clave en el inicio y mantenimiento de respuestas inmunológicas mal reguladas en la piel. Aproximadamente 90% de los linfocitos T infiltrados en los sitios inflamatorios cutáneos expresan el Ag asociado a linfocitos cutáneos (CLA+) el cual une E-selectina, una molécula de adhesión inducible en el endotelio (revisado por Santamaria-Babi L.F., et al., Eur J Derma tol : 14 , 13, (2004)). Se ha documentado un incremento significativo en los linfocitos T CLA+ circulantes entre pacientes con AD, en comparación con individuos control (véase Teraki Y., et al., Br J Derma tol : 143, 373 (2000)), mientras que otras investigaciones han demostrado que los linfocitos T CLA+ de memoria de pacientes AD responden de manera preferencial a extractos de alérgeno en comparación con la población CLA- (véase Santamaria-Babi, L.F., et al . , J Exp Med : 181 , 1935, (1995)). En los humanos, la patogénesis de trastornos atópicos de la piel se ha relacionado con incrementos en linfocitos T CLA+ que expresen concentraciones aumentadas de citocinas tipo Th-2 como IL-5 e IL-13. Véase Akdis M., et al., Eur J Immunol : 30, 3533 (2000); y Hamid Q. , et al., J Allergy Clin Immunol : 98, 225 (1996). Los ratones NC/Nga desarrollan de manera espontánea lesiones similares a AD que son paralelas a AD en humanos en muchos aspectos que incluyen el curso clínico y los signos, histopatología e in unopatología cuando se alojan en condiciones libres de patógenos no especificadas (sin-SPF) de aproximadamente 6-8 semanas de edad. En contraste, los ratones NC/Nga que se mantienen bajo condiciones SPF no desarrollan lesiones cutáneas. No obstante, el inicio de las lesiones cutáneas espontáneas y el comportamiento de rascado se puede sincronizar en ratones NC/Nga albergados en una instalación SPF mediante inyección intradérmica semanal de antígeno crudo de acaro de polvo. Véase Matsuoka H., et al., Allergy: 58, 139 (2003). Por lo tanto, el desarrollo de AD en ratones NC/Nga es un modelo útil para la evaluación de sustancias terapéuticas novedosas para el tratamiento de AD. Además del modelo NC/Nga de AD espontánea, la sensibilización epicutánea de ratones utilizando OVA también se puede utilizar como un modelo para inducir engrosamiento epidérmico y dérmico, dependiente de antígeno, con infiltrado mononuclear en piel de ratones sensibilizados. Esto habitualmente coincide con concentraciones séricas elevadas de IgE total y específico, no obstante, en este modelo normalmente no se produce disfunción de la barrera cutánea o prurito. Véase Spergel J.M., J Clin Invest , 101 : 1614, (1998). Este protocolo se puede modificar con el fin de inducir carencia de regulación en la barrera cutánea y prurito mediante sensibilización de ratones transgénicos TCR OVA DO11.10 con OVA. El incremento en el número de linfocitos T específicos a antígeno que pueden reconocer el antígeno sensibilizante puede incrementar el nivel de inflamación en la piel para inducir un comportamiento de rascado visible y liquenificación/incrustaciones de la piel. Tanto el modelo de AD espontáneo de NC/Nga como el modelo de OVA epicutáneo DO11.10 se utilizan para investigar la expresión de IL-31 e IL-31RA en AD . Véase el ejemplo 3. Un antagonista neutralizante de IL-31RA puede ser eficaz para inhibir, reducir, minimizar o evitar reacciones de dermatitis atópica. Véase ejemplo 3 para un modelo in vivo para la prueba del efecto de un antagonista de IL-31 en un modelo de dermatitis atópica.

Dermatitis de Contacto La dermatitis de contacto alérgica se define como una reacción inmunológica mediada por linfocitos T a un antígeno que se pone en contacto con la piel. La población de linfocitos T CLA+ se considera que está involucrado en el inicio de la dermatitis dado que las respuestas de linfocitos T dependientes de alérgeno se confinan en gran medida a la población de células CLA+ (véase Santamaria-Babi, L.F., et al., J. Exp Med: 181 , 1935, (1995)). Datos recientes han encontrado que únicamente los linfocitos T de memoria (CD5RO+) CD4+CLA+ y no CD8+ proliferan y producen citocinas de dos tipos, tipo-1 (IFN-?) y tipo-2 (IL-5) en respuesta a níquel, un alérgeno de hipersensibilidad por contacto común.

Además, las células que expresan CLA en combinación con CD4 , CD45RO (memoria) o CD69 se incrementan después de estimulación específica con níquel y expresan los receptores de quimiocina CXCR3 , CCR4 , CCR10 pero no CCR6. Véase Moed H. , et al., Br J Derma tol : 51 , 32, (2004). En modelos animales, se ha demostrado que la dermatitis de contacto alérgica es dependiente de linfocitos T y que las células T que corresponden alérgica migran al sitio de aplicación del alérgeno. Véase de manera general: Engeman T.M., et al., J. Immunol : 164, 5207, (2000); Ferguson T.A. & Kupper T.S. J Immunol : 150, 1172, (1993); y Gorbachev A.V. & Fairchild R.L., Crit Rev Immunol : 21, 451 (2001). Dado que los linfocitos T CLA+ producen IL-31 y la estimulación con IL-31 de queratinocitos cutáneos puede inducir quimiocinas proinflamatorias, se ha relacionado a IL-31 en la patofisiología de la dermatitis de contacto. Un antagonista neutralizante de IL-31RA, por ejemplo anticuerpo o fragmento del mismo o receptor soluble (receptores solubles IL-31RA e IL-3IRA/OSMRß) pueden ser eficaces para inhibir, reducir, minimizar o evitar las reacciones de dermatitis de contacto. Véase el ejemplo 2 para un modelo in vivo para probar el efecto de un antagonista de IL-31 en un modelo de dermatitis de contacto.

Reacciones alérgicas cutáneas de tipo tardío inducidas por medicamento Las reacciones alérgicas cutáneo de tipo tardío inducidas por medicamento son muy heterogéneas y pueden reflejar muchos eventos patofisiológicos distintos. Véase Brockow K., et al., Allergy, 51, 45 (2002). Los mecanismos inmunológicos involucrados en estas reacciones se ha demostrado como mediados por anticuerpos o por células. En la alergia a medicamentos inmediata en una reacción de anticuerpo mediada por IgE se puede demostrar por una prueba de picadura cutánea positiva y/o intradérmica después de 20 min, mientras que las reacciones no inmediatas a medicamentos se pueden presentar más de una hora después de la última ingestión del medicamento y con frecuencia son mediadas por linfocitos T. Las reacciones de tipo tardío mediadas por linfocitos T no inmediatas pueden producirse en pacientes con reacciones adversas a medicamentos a penicilinas, por ejemplo. Las respuestas a linfocitos T proliferativos a penicilinas se ha demostrado que se limitan a la subpoblación CLA+ de memoria (CD45RO+) de linfocitos T de pacientes alérgicos a penicilina mientras que el subconjunto CD45RO+CLA- no muestra respuesta proliferativa. Véase Blanca M. , Leyva L., et al., Blood Cells Mol Dis : 31 , 75 (2003). Las reacciones de hipersensibilidad de tipo tardío (DTH, por sus siglas en inglés) se pueden reproducir artificialmente en ratones lo que permite la determinación de factores que pueden estar involucrados en el inicio y perpetuación de la respuesta DTH. Un antagonista neutralizante de IL-31RA, por ejemplo anticuerpo o receptor soluble (receptores solubles de IL-31RA e IL-31RA/0SMRß) pueden ser eficaces para inhibir, reducir, minimizar o evitar reacciones de hipersensibilidad de tipo tardío. Véase el ejemplo 4 para un modelo in vivo de prueba del efecto de un antagonista de IL-31 en un modelo DTH. La necrólisis epidérmica tóxica (TEN, por sus siglas en inglés) es una reacción a medicamentos muy rara pero extremadamente grave caracterizada por apoptosis ampliamente diseminada de la epidermis con ampollas extensas. Los estudios han mostrado que los linfocitos que se infiltran en las ampollas son linfocitos T CLA+ y que presentan citotoxicidad hacia los queratinocitos epidérmicos. Véase Leyva L., et al., J Allergy Clin Immunol : 105, 157 (2000); y Nassif A., Bensussan A., et al., J Allergy Clin Immunol : 114 , 1209 2004). Se han generado un sistema de ratones transgénicos, por medio de los cuales se expresa OVA bajo el control del promotor de queratina-5 (K5, por sus siglas en inglés) en queratinocitos epidérmicos y de folículo piloso de ratones para establecer un modelo animal para TEN. Los linfocitos T CD8+ específicos para OVA cuando se adoptan por transferencia en ratones K5-OVA, experimentan activación y proliferación de los nodulos linfáticos drenados en piel y se dirigen a la piel de ratones K5-0VA, lo que resulta en el desarrollo de lesiones cutáneas que recuerdan a TEN. Véase Azukizawa H., et al., Eur J Immunol : 33, 1879 (2003). Un antagonista neutralizante de IL-31RA, por ejemplo un anticuerpo o receptor soluble (receptores solubles de IL-31RA e IL-31RA/OSMRß) pueden ser eficaces para inhibir, reducir, minimizar o evitar las reacciones de TEN.

Penfigoide buloso El penfigoide buloso es un trastorno subepidér ico el cual se manifiesta como ampollas subepidérmicas con infiltrado dérmico de neutrófilos y eosinófilos. El diagnóstico está caracterizado por la presencia de anticuerpos específicos a antígeno, los cuales son específicos contra proteínas de adhesión de la epidermis y de la unión dérmica-epidérmica. Véase Jordon R.E., JAMA : 200, 751 (1967) . Los estudios analizan el papel de los linfocitos T en la patogénesis de penfigoide buloso mediante análisis de PBL y linfocitos T en ampollas cutáneas ha demostrado una predominancia de linfocitos T CLA+ que expresan concentraciones aumentadas de citocinas TH2 como IL-4 e IL-13. Véase Teraki Y., et al . , J Invest Derma toi : 117 , 1097 (2001) . En pacientes con penfigoide buloso después de tratamiento con corticosteroides sistémicos se disminuye de manera significativa la frecuencia de células productoras de interleucina 13 CLA+, pero no CLA- . Las disminuciones en células CLA+ después de tratamiento con corticosteroides se relaciona con una mejora clínica. Véase Teraki, ibid. La neutralización de IL-31 por un antagonista de IL-31RA, por ejemplo un anticuerpo o fragmento del mismo o un receptor soluble (receptores so ubles de IL-31RA e IL-31RA/0SMRß) puede mejorar el resultado clínico del penfigoide buloso.

Alopecia areata La alopecia areata (AA) se considera como una enfermedad autoinmune limitada a tejido de folículos pilosos en las cuales se suprime la actividad folicular debido a la actividad continua de infiltrados linfocíticos . AA resulta en parches de pérdida completa de pelo en cualquier parte del cuerpo, aunque la pérdida real de los folículos pilosos no se produce, incluso en lesiones sin pelo. Aunque se carece de signos clínicos de inflamación, las biopsias cutáneas de los sitios de enfermedad activa muestran inflamación linfocítica perifolicular de células principalmente CD4+ junto con infiltrado intrafolicular de CD8+. Véase Kalish R.S., & Gilhar A. J Investig Derma tol Symp Proc : 8, 164 (2003). Los estudios han mostrado que los linfocitos CD4+ o CD8+ que se infiltran en cuello cabelludo expresan CLA y, en sangre periférica de individuos con AA, el porcentaje de linfocitos CLA+ CD4+ o CD8+ es significativamente mayor que el de los controles normales. Además, los pacientes con AA grave o progresiva muestran una condición positiva a CLA mucho más alta en comparación con pacientes que se recuperan de la enfermedad y presentan una disminución en el porcentaje de células CLA+ en un buen curso clínico. Véase Yano S., et al., Acta Derm Venereol : 82, 82 (2002) . Estos estudios por lo tanto sugieren que los linfocitos CLA+ pueden jugar un papel importante en AA. Los modelos en senoinjerto han demostrado que los linfocitos T activados es probable que jueguen un papel en la patogénesis de AA. El cuero cabelludo con lesiones de pacientes con AA injertado en ratones desnudos (atímicos) vuelve a hacer crecer el pelo coincidente con una pérdida de linfocitos de infiltración del injerto y la transferencia de linfocitos T activados por lesión a ratones SCID puede transferir la pérdida de pelo a explantes de cuero cabelludo humano en ratones SCID. Véase Kalish R.S. & Gilhar A. J Inves tig Derma tol Symp Proc : 8, 164 (2003) . Una diversidad de tratamientos inmunomoduladores son parte del tratamiento habitual para este trastorno, no obstante ninguno de estos tratamientos ha mostrado consistencia en su eficacia. Véase Tang L., et al . , J Invest Derma tol ; 120, 400 (2003); Tang L. , et al . , (2004); y Tang L., et al., J. Am Acad Derma tol : 49, 1013 (2003). El anticuerpo neutralizante anti-IL-3IRA o un fragmento del mismo o un receptor soluble de IL-31RA (receptores solubles de IL-31RA e IL-31RA/OSMRß) pueden ser eficaces para limitar, reducir, inhibir o evitar los efectos del desarrollo de AA.

Acné vulgar/Acné rosácea El acné vulgar es un trastorno del aparato pilosebáceo y es el problema más común en la piel en la adolescencia. Las anomalías en la queratinización folicular se considera que producen la lesión de acné. El acné rosácea se deferencia del acné vulgar por la presencia de pápulas rojas, pústulas, quistes y telangiectasis extensas pero la ausencia de comedones (cabezas blancas) . Una expresión aumentada de sebo de las glándulas sebáceas es un factor principal de la patofisíología del acné vulgar. Otras funciones de las glándulas sebáceas también se relacionan con el desarrollo de acné, que incluyen lípidos proinflamatorios sebáceos; diferentes citocinas producidas localmente; péptidos periglandulares y neuropéptidos tales como hormona liberadora de corticotropina, la cual se produce por sebositos; y sustancia P, la cual se expresa en las terminales nerviosas en la vecindad de las glándulas con apariencia sana de pacientes con acné. Véase Zouboulis C.C. Clin Derma tol : 22, 360 (2004) . Aunque la patofisiología del acné vulgar y el acné rosácea permanece desconocido, las observaciones clínicas y los estudios cistopatológicos sugieren que la inflamación del folículo polisebáceo puede ser central en la patogénesis de acné rosácea y acné vulgar. Los estudios iniciales respecto al análisis de los subconjuntos de linfocitos T que infiltran las lesiones rosácea indican que la mayor parte de los linfocitos T expresan CD4. Véase Rufli T. & Buchner S.A. Derma tológi ca ; 169, 1(1984). Los linfocitos T CD4+ producen IL-31 y el análisis por IHC de la piel para expresión de IL-31 sugiere que IL-31 se expresa en glándulas sebáceas y sudoríparas. La estimulación con IL-31 de los queratinocitos epidérmicos incluyen la expresión de quimiocinas lo cual probablemente resulte en infiltración celular lo que sugiere que IL-31 puede contribuir a la respuesta proinflamatoria en la piel. Por lo tanto, IL-31 puede contribuir a la patofisiología de acné rosácea y acné vulgar. En consecuencia, un antagonista de IL-31RA tal como un anticuerpo anti-IL-3IRA o un fragmento del mismo o un receptor soluble de IL-31RA (receptores solubles de IL-31RA e IL-31RA/OSMRß) pueden ser útiles para tratar, reducir la gravedad, inhibir el progreso o abatir y/o eliminar uno o más síntomas relacionados con acné rosácea y acné vulgar.

Prurigo nodular Prurigo nodular es una erupción de nodulos liquenificados y excoriados provocado por prurito intratable que es difícil de tratar. Aunque el frotado crónico resulta en liquenificación y el raspado en excoriaciones lineales, los individuos quienes toman y se arrancan la parte pruritosa, la piel irritada tiende a producir pápulas marcadamente engrosadas conocidas como nodulos de prurigo. Aunque el prurigo nodular no es específico para dermatitis atópica, muchos pacientes con estos nodulos también presentan una reacción atópica, la cual se manifiesta como rinitis alérgica, asma o alergia a alimentos. Los linfocitos T representan la mayor parte de las células infiltradas en lesiones de prurigo y estas lesiones con frecuencia representan la mayor parte de las lesiones cutáneas pruríticas en pacientes con atopia. El tratamiento tópico de prurigo nodular con capsaicina, un alcaloide antiprurítico que interfiere con la percepción de prurito y dolor por supresión de neuropéptidos como sustancia P en nervios cutáneos sensitivos pequeños ha demostrado ser un régimen eficaz e inocuo que resulta en el aclarado de las lesiones cutáneas. Véase Stander S., et. al., J Am Acad Derma tol : 44, 471(2001). Los estudios de la respuesta prurítica en ratones NC/Nga utilizando el tratamiento de capsaicina muestra que se evita casi por completo el desarrollo espontáneo de lesiones por dermatitis. Además, la elevación de las concentraciones séricas de IgE se suprime de manera significativa y los eosinófilos infiltrados y el número de mastocitos en las pieles con lesiones de ratones tratados con capsaicina se reducen. Véase Mihara K. , et al., Br J Derma tol : 151, 335 (2004). Las observaciones de este grupo sugieren que el comportamiento de raspado puede contribuir al desarrollo de dermatitis al incrementar diversas respuestas inmunológicas, y por lo tanto implican que la prevención de la sensación de prurito y/o el comportamiento de rascado asociado con prurito puede ser un tratamiento eficaz para AD. Véase Mihara K. , et al., Br J Derma tol : 151, 335 (2004) . El suministro crónico de IL-31 induce prurito y alopecia en ratones seguido por el desarrollo de lesiones cutáneas que recuerdan a dermatitis, lo que sugiere que IL-31 induce prurito. Véase Dillon S.R., et al., Na t Immunol : 5, 752 (2004) . La relación de IL-31 se prueba en inducción de la respuesta prurítica por dos métodos: (i) el tratamiento con capsaicina de ratones tratados con IL-31, y (ii) el tratamiento con IL-31 de ratones en quien se ha anulado la expresión del gen para Tacl, lo cual reduce de manera significativa las respuestas de dolor nociceptivo debido a la carencia de expresión de neuropéptidos en el ejemplo 5. Además, en el ejemplo 5 se prueba si la neutralización de IL-31 en ratones tratados con IL-31 puede evitar el prurito y la alopecia.

Virus con tropismo cutáneo y prurito asociado a virus Los linfocitos T CD8+ específicos para virus de herpes simple (HSV) en sangre periférica y los linfocitos T CD8+ específicos para HSV de lesiones herpéticas expresan altas concentraciones de CLA como los linfocitos T CD8+ específicos para virus de herpes sin tropismo cutáneo carecen de expresión de CLA. Véase Koelle D.M. et al., J. Clin Invest : 110, 537 (2002) . Los linfocitos T CD4+ reactivos a HSV-2 también expresan CLA, pero en concentraciones menores que las observadas previamente para los linfocitos T CD8+. Véase González J.C., et al., J Infect Dis : 191 , 243 (2005). También se ha relacionado del prurito con infecciones virales herpéticas (Véase Hung K.Y., et al., Blood Purif: 1 6, 147 (1998), aunque otras enfermedades virales, como infección por VIH también se han relacionado con lesiones cutáneas pruríticas. El prurito intratable y grave con frecuencia se relaciona con lesiones cutáneas eritematopapulares e hipereosinofilia, lo cual es una condición que se observa en algunos pacientes infectados con VIH no atópicos 36. Véase Singh F. & Rudikoff D, Am J Clin Derma tol ; 4 , 177 (2003) ; y Milazzo F., Piconi S., et al . , Allergy; 54 , 266 (1999). La asociación de virus con tropismo cutáneo, con prurito y linfocitos T CLA+ sugiere que los linfocitos T productores de IL-31 pueden estar involucrados en la patofisiología de infecciones virales. La inflamación es una respuesta protectora de un organismo para advertir de un agente invasor. La inflamación es una cascada de eventos que involucran muchos mediadores celulares y humorales. Por otra parte, la supresión de respuestas inflamatorias puede generar un hospedador con el sistema inmunológico dañado; no obstante, si no se verifica, la inflamación puede llevar a complicaciones graves que incluyen enfermedades inflamatorias crónicas (por ejemplo artritis reumatoide, esclerosis múltiple, enfermedad de intestino inflamatorio y similares) , choque septisé ico e insuficiencia de órganos múltiples. De manera importante, estos estados diversos de enfermedad comparten mediadores inflamatorios comunes. Las enfermedades colectivas que se caracterizan por inflamación tienen un gran impacto sobre la morbilidad y mortalidad humanas. Por lo tanto, es claro que las moléculas antiinflamatorias tales como los anticuerpos anti-IL-31RA y fragmentos de los mismos y los receptores solubles de IL-31RA como se describen en la presente, pueden tener un potencial terapéutico crucial para una gran cantidad de enfermedades humanas y animales, para asma y alergia hasta autoinmunidad y choque septisémico. Como tales, el uso de anticuerpos antiinflamatorios anti-IL-31RA y fragmentos de los mismos y receptores solubles de IL-31RA como se describe en la presente se pueden utilizar terapéuticamente como antagonistas de IL-31RA para tratamiento, reducción de la gravedad o inhibición del progreso y para abatir enfermedades tales como artritis, endotoxemia, enfermedad de intestino inflamatorio, psoriasis, enfermedades relacionadas y similares . Se ha demostrado que IL-31 induce varios genes para quimiocina y citocina en queratinocitos epidérmicos humanos normales (los NHEK, por sus siglas en inglés) que incluye genes que codifican para GROa, (CXCL1), TARC (CC117), MIP3ß, (CCL19) , MDC (CCL22) , MIP-3 (CCL23), MIP-1 ß (CCL4) e 1-309. Véase Dillon S.R., et al., Nat Immunol : 5 , 752 (2004). TARC y MDC se unen a CCR4 , un receptor de quimiocina asociado con linfocitos T tipo Th2 y se expresan de manera predominante por linfocitos T CLA+ en sangre periférica. Ambas quimiocinas se han implicado en el reclutado de linfocito T en la piel de pacientes AD lo que sugiere que estas quimiocinas contribuyen al procedimiento inflamatorio relacionado con la patogénesis de AD. Véase el Ejemplo 10 para un modelo para medir la reducción en las concentraciones de TARC y MDC al administrar un antagonista de IL-31. La psoriasis es una condición cutánea crónica que afecta a más de siete millones de norteamericanos. La psoriasis se produce cuando las células nuevas de la piel crecen de manera anormal lo que resulta en partes inflamados, hinchados y con escamas en la piel en donde la piel antigua aún no se ha eliminado rápidamente. Las placas de psoriasis, la forma más común, se caracteriza por partes inflamados de la piel ("lesiones") que tienen en la parte superior escamas de color blanco plateado. La psoriasis se puede limitar a algunas placas o involucrar áreas moderadas a extensas de la piel, con una apariencia más común como el cuero cabelludo, rodillos, codos y el tórax. Aunque es altamente visible, la psoriasis no es una enfermedad contagiosa. La patogénesis de las enfermedades involucra inflamación crónica de los tejidos afectados. Los anticuerpos anti-IL-31RA y fragmentos de los mismos y receptores solubles (receptores solubles IL-31RA e IL-31RA/0SMRß) pueden servir como una herramienta terapéutica útil para tratar, inhibir el progreso, reducir la gravedad o reducir la inflamación y los efectos patológicos en psoriasis, otras enfermedades cutáneas inflamatorias, alergia de la piel y mucosas y enfermedades seleccionadas. La psoriasis es un trastorno inflamatorio mediado por linfocitos T en la piel que puede provocar incomodidad considerable. Es una enfermedad para la cual no hay cura y afecta a personas de todas las edades. La psoriasis afecta de manera predominante a dos por ciento de la población europea y de América del Norte. Aunque los individuos con psoriasis moderada con frecuencia pueden controlar su enfermedad con agentes tópicos, más de un millón de pacientes en el mundo requieren tratamiento con radiación ultravioleta o inmunosupresora sistémica. Desafortunadamente, la inconveniencia y los riesgos de radiación ultravioleta y la toxicidad de muchos tratamientos limitan su uso a largo plazo. Además, los pacientes habitualmente presentan recurrencia de psoriasis y en algunos casos recaída poco después de suspender el tratamiento inmunosupresor. La presente invención proporciona un método para inhibir la activación o diferenciación de monocitos/macrófagos . Los monocitos son células que se han diferenciado de manera incompleta y que se desplazan a diversos tej idos en donde maduran y se vuelven macrófagos . Los macrófagos juegan un papel central en la respuesta inmunológica al presentar antígeno a linfocitos y juegan un papel de soporte como células adicionales para los linfocitos al secretar numerosas citocinas. Los macrófagos pueden interiorizar moléculas extracelulares y, por activación, presenta la capacidad aumentada de destruir microorganismos intracelulares y células tumorales. Los macrófagos activados también están involucrados en la estimulación de inflamación aguda o local . Las moléculas de la presente invención tienen uso particular en el brazo de monocitos/macrófagos del sistema inmunológico. Se conocen métodos que pueden determinar dicha actividad. Por ejemplo, el interferón ? (IFN-?) es un activador potente de fagocitos mononucleares. Por ejemplo, un incremento en la expresión de IL-31RA por activación de células THP-1 (ATCC No. TIB-202) con interferón ? puede sugerir que este receptor está involucrado en la activación de monocitos. Los monocitos son células que se han diferenciado de manera incompleta y que se desplazan a diversos tejidos en donde maduran y se vuelven macrófagos. Los macrófagos juegan un papel central en la respuesta inmunológica al presentar antígeno a linfocitos y juegan un papel de soporte como células adicionales para los linfocitos al secretar numerosas citocinas. Los macrófagos pueden interiorizar moléculas extracelulares y, por activación, presenta la capacidad aumentada de destruir microorganismos intracelulares y células tumorales. Los macrófagos activados también están involucrados en la estimulación de inflamación aguda o local. Además, se ha demostrado que la función de monocitos-macrófagos es anormal en una diversidad de estado de enfermedad. Por ejemplo, véase Johnston, RB, New Eng. J. Med . 318 : 141 - 152 , 1998. Una persona experta en la técnica puede reconocer que los agonistas del receptor IL-31RA tal como el anticuerpo agonista de IL-31RA son útiles. Por ejemplo, un desplazamiento disminuido de monocitos se ha reportado en poblaciones con una predisposición a infección tal como lactantes recién nacidos, pacientes que reciben corticosteroides u otro tratamiento inmunosupresor y pacientes con diabetes mellitus, quemaduras o SIDA. Los agonistas para IL-31RA, tal como el anticuerpo agonista de IL-31RA pueden resultar en un incremento en la capacidad de monocitos para desplazarse y posiblemente evitar la infección en estas poblaciones. También existe un defecto profundo en la destrucción fagocítica por fagocitos mononucleares de pacientes con enfermedad granulomatosa crónica. Esto tiene como resultado la formación de abcesos subcutáneos así como abcesos en el hígado, pulmones, bazo y nodulos linfáticos. Un agonista del receptor de IL-31RA tal como el anticuerpo agonista de IL-31RA puede corregir o mejorar el defecto fagocítico. Además, se ha reportado citotoxicidad de monocitos defectuosa en pacientes con cáncer y con el síndrome de Wiskott-Aldrich (eczema, trombocitopenia e infecciones recurrentes) . La activación de monocitos por agonistas del receptor IL-31RA tal como el anticuerpo agonista de IL-31RA pueden ayudar en el tratamiento de estas condiciones. El sistema de monocito-macrófago está involucrado de manera prominente en varias enfermedades de almacenamiento de lípidos (esfingolipidosis) tal como la enfermedad de Gaucher. La resistencia a la infección puede dañarse debido a un defecto en la función de los macrófagos, lo cual puede ser tratado por agonistas al receptor de IL-31RA tal como el anticuerpo agonista de IL-31RA. Utilizando métodos conocidos en la técnica y descritos en la presente, una persona experta en la técnica puede determinar fácilmente la actividad de los agonistas y antagonistas de IL-31RA en enfermedades que tienen una fuerte relación con los linfocitos T CLA+ . Además, dado que IL-31 se expresa en un linfocito T, de manera específica para macrófagos y monocitos y estas enfermedades involucran anomalías en las células monocíticas, tal como proliferación celular, función, localización y activación, los polinucleótidos, polipéptidos y anticuerpos de la presente invención se pueden utilizar como diagnósticos para detectar dichas anomalías en células monocíticas e indican la presencia de enfermedad. Dichos métodos involucran tomar una muestra biológica de un paciente tal como sangre, saliva o biopsia y compararla con una muestra control normal. Se pueden utilizar métodos histológicos, citológicos, de citometría de flujo, bioquímicos y de otro tipo para determinar las concentraciones relativas o la localización de IL-31 o células que expresan IL-31, es decir, monocitos en la muestra de pacientes en comparación con el control normal. Un cambio en el nivel (aumento o disminución) de la expresión de IL-31 o un cambio en el número de localización de los monocitos (por ejemplo incremento o infiltración de células monocíticas en tejidos en donde normalmente no están presentes) en comparación con un control puede ser indicativo de una enfermedad. Tales métodos de diagnóstico también incluyen medir, por ejemplo, TARC y MDC. Dichos métodos son bien conocidos en la técnica y se describen en la presente. Los antagonistas de IL-31RA tal como los anticuerpos anti-lL-31 RA se pueden utilizar para modular el sistema inmunológico al unir el receptor IL-31RA y por lo tanto evitar la unión de IL-31 con el receptor endógeno de IL-31. De manera alternativa, los antagonistas de IL-31RA tales como los receptores solubles de IL-31RA e IL-31RA/0SMRß también se pueden utilizar para modular el sistema inmunológico al inhibir la unión de IL-31 con el receptor endógeno de IL-31RA. En consecuencia, la presente invención incluye el uso de anticuerpos IL-31RA y fragmentos de los mismos así como receptores solubles de IL-31RA (IL-31RAa dn IL-31RA/0SMRß) los cuaies pueden ser administrados a un sujeto el cual presenta un exceso de IL-31. También se pueden utilizar los antagonistas de IL-31RA (por ejemplo anticuerpos anti-IL-31RA y fragmentos de los mismos así como IL-31RA soluble y receptores solubles de IL-31RA/0SMRß) para tratar enfermedades que tengan una alta correlación de linfocitos T CLA+ . Los sujetos adecuados incluyen mamíferos tales como humanos . Se ha demostrado que IL-31 se expresa en células mononucleares activadas y puede estar involucrado en regular la inflamación. Como tales, los anticuerpos y receptores solubles de la presente invención pueden ser analizados y utilizados para determinar su capacidad para modificar inflamación o se pueden utilizar como un marcador para inflamación. Los métodos para determinar calidades proinflamatorias y antiinflamatoria de IL-31 se conocen en la técnica y se exponen en la presente. Además, pueden estar involucrados en la regulación por aumento de la producción de reactivos en fase aguda tal como suero amiloide A (SAA), al-antiquimiotripsina y haptoglobina y que la expresión del receptor de IL-31RA se puede incrementar por inyección de lipopolisacáridos (LPS) in vivo que está involucrado en la respuesta inflamatoria (Dumoutier, L. et al., Proc . Na t ' l . Acad. Sci . 97:10144-10149, 2000). La producción de proteínas en fase aguda tal como SAA se considera un mecanismo de supervivencia a corto plazo en donde la inflamación es benéfica; no obstante, el mantenimiento de proteínas en fase aguda por períodos más prolongados contribuye a la inflamación crónica y puede ser dañino para la salud humana. Para una revisión, véase Uhlar, CM y Whitehead, AS, Eur. J. Biochem , 265:501-523 , 1999, y Baumann H. y Gauldie, J. Immunology Today 15:74-80, 1994. Además, la proteína SAA en fase aguda se implica en la patogénesis de varias enfermedades inflamatorias crónicas, también está relacionada en aterosclerosis y artritis reumatoide y es el precursor de la proteína amiloide A depositada en amiloidosis (Uhlar, CM y Whitehead, supra ) . Por lo tanto, cuando un ligando tal como IL-31 que actúa como una molécula proinflamatoria e induce la producción de SAA, los antagonistas pueden ser útiles para tratar la enfermedad inflamatoria u otras enfermedades relacionadas con las proteínas de respuesta en fase aguda inducida por el ligando. Dichos antagonistas se proporcionan en la presente invención. Por ejemplo, un método para reducir la inflamación comprende administrar a un mamífero con inflamación una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que comprende anticuerpo anti-IL-3IRA (por ejemplo anticuerpo neutralizante) o un fragmento del mismo, o un receptor soluble (por ejemplo los receptores solubles IL-31RA e IL-31RA/OSMRß) que son suficientes para reducir la inflamación. Además, un método para suprimir una respuesta inflamatoria en un mamífero con inflamación puede estar constituida por: (1) determinación de la concentración de proteína amiloide A en suero; (2) administración de una composición que comprende anticuerpo anti-IL-31RA como se describe en la presente o receptor soluble (receptores solubles de IL-31RA e IL-31RA/0SMRß) en un portador farmacéutico aceptable; (3) determinación del nivel postadministración de la proteína amiloide A en suero; (4) comparación de la concentración de proteína amiloide A en suero en la etapa (1) después de la concentración de proteína amiloide A en suero en la etapa (3), en donde una carencia de incremento o una disminución en la concentración de proteína amoloide A en suero es indicativo de supresión de una respuesta inflamatoria. Además, los anticuerpos anti-IL- 3IRA y fragmentos de los mismos que bloquean la unión y/o señalización de IL-31 a IL-31RA y los receptores solubles de IL-31RA (IL-31RA e IL-31RA/OSMRß) que se unen a IL-31 y por lo tanto evita la unión de IL-31 a IL-31RA basado en células son útiles para antagonizar o bloquear la señalización de IL-31 y por lo tanto son útiles en el tratamiento o para inhibir el progreso o reducir la gravedad, o reducir uno o más síntomas relacionados con la dermatitis de contacto, reacciones alérgicas cutáneas de tipo tardío inducidas por medicamento, necrólisis epidérmica tóxica, linfoma de linfocitos T cutáneos, penfigoide buloso, alopecia areata, vitíligo, acné rosácea, prurigo nodular, escleroderma y virus herpes simple. Los anticuerpos anti-IL-31RA e IL-31RA soluble (receptores solubles de IL-31RA e IL-31RA/OSMRß) que comprenden receptores son útiles como antagonistas de IL-31. Tales efectos antagonísticos se pueden obtener por neutralización directa o unión de su ligando natural. Además de los usos antagonistas, los receptores solubles pueden unir IL-31 y actuar como un portador o proteínas portadoras con el fin de transportar IL-31 a diferentes tejidos, órganos y células dentro del cuerpo. Como tales, los receptores solubles se pueden fusionar o acoplar a moléculas, polipéptídos o porciones químicas que dirigen el complejo de receptor soluble- ligando a un sitio específico tal como un tejido, célula inmunológica específica, monocitos o tumor. Por ejemplo, en infección aguda de algunos cánceres, se puede obtener como resultado el beneficio a partir de la inducción de inflamación y las proteínas de respuesta de fase aguda local. Por lo tanto, los receptores solubles descritos en la presente o los anticuerpos (y fragmentos de los mismos) de la presente invención se pueden utilizar para dirigir específicamente la acción de un ligando IL-31 proinflamatorio. Véase Cosman, D. Cytokine 5 : 95-106, 1993; y Fernandez-Botran, R. Exp . Opin . Invest . Drugs 9:497-513, 2000. IL-31 también se puede utilizar dentro de sistemas de diagnóstico para la detección de concentraciones circulantes de ligando y en la detección de la respuesta inflamatoria en fase aguda. Dentro de una modalidad relacionada, los anticuerpos u otros agentes que se unen específicamente a IL-31, por ejemplo IL-31RA soluble e IL-31RA/0SMRß soluble se pueden utilizar para detectar polipéptidos IL-31 circulantes. Las concentraciones aumentadas o disminuidas de ligando o de polipéptidos de receptor pueden ser indicativos de condiciones patológicas que incluyen inflamación o cáncer. Además, la detección de proteínas o moléculas en fase aguda tales como IL-31 puede ser indicativo de una condición inflamatoria crónica en algunos estados de enfermedad (por ejemplo artritis reumatoide) . La detección de tales condiciones sirve para ayudar en el diagnóstico de enfermedad así como para ayudar al médico a seleccionar el tratamiento adecuado. Generalmente, la dosificación de anticuerpo IL-31RA administrado o un fragmento del mismo o receptor soluble de IL-31RA o receptor soluble de IL-31RA/0SMRß variará dependiendo de factores tales como la edad del paciente, peso, altura, sexo, condición médica general y antecedentes médicos. Típicamente, es deseable proporcionar al receptor con una dosificación de anticuerpo IL-31RA o un fragmento del mismo o receptor soluble de IL-31RA o el receptor soluble de IL-31RA/OSMRß el cual esté en el intervalo de aproximadamente 1 pg/kg a 10 mg/kg (cantidad de agente/peso corporal del paciente) , aunque también se puede administrar según lo determinen las circunstancias una dosificación menor o mayor. Una persona experta en la técnica puede determinar con facilidad dichas dosificaciones y realizar ajustes a las mismas utilizando métodos conocidos en la técnica. La administración del anticuerpo IL-31RA o un fragmento del mismo o del receptor soluble de IL-31RA o el receptor soluble de IL-31RA/OSMRß a un sujeto puede ser por vía tópica, intradérmica, por inhalación, intravenosa, intraarterial, intraperitoneal, intramuscular, subcutánea, intraplural, intratecal, por perfusión a través de un catéter regional o por inyección directa intralesional. Cuando se administran proteínas terapéuticas por inyección, la administración puede ser mediante infusión continua o por un bolo único o múltiple. Las vías de administración adicionales incluyen oral, por mucosa-membrana, pulmonar y transcutánea. El suministro oral puede ser adecuado para microesferas de poliéster, microesferas de zeina, microesferas proteinoides, microesferas de policianoacrilato y sistemas basados en lípidos (véase, por ejemplo, DiBase and Morrel, "Oral Delivery of Microencapsulated Proteins" , in Protein Delivery; Physical Sys tems , Sanders and Hendren (eds, páginas 255-288 (Plenum Press 1997) ) . La factibilidad de un suministro intranasal se ejemplifica dicho modo de administración de insulina (véase, por ejemplo, Hinchcliffe and Illum, Adv. Drug Deliv. Rev. 35: 199 (1999)). Las partículas secas o líquidas que comprenden anticuerpo IL-31RA o un fragmento del mismo o receptor soluble de IL-31RA o receptor soluble de IL-31RA/OSMRß se pueden preparar e inhalar con la ayuda de dispersantes de polvo seco, generadores de aerosol líquido o nebulizantes (por ejemplo, Pettit and Gombotz, TIBTECH 16:343 (1998); Patton et al., Adv. Drug Deliv. Rev. 35: 235 (1999)). Este enfoque se ilustra por el sistema de administración para diabetes AERX el cual es un inhalador electrónico portátil que suministra insulina en forma de aerosol a los pulmones. Los estudios han demostrado que las proteínas tan grandes como 48,000 kDa se han suministrado a través de la piel en concentraciones terapéuticas con la ayuda de ultrasonido de baja frecuencia los que ilustra la factibilidad de la administración trascutánea (Mitragotri et al., Science 269: 850 (1995)). El suministro transdérmico utilizando electroporación proporciona otro medio para administrar anticuerpo IL-31RA o un fragmento del mismo o un receptor soluble de IL-31RA o un receptor soluble de IL-31RA/0SMRß (Potts et al . , Pharm . Biotechnol . 10: 213 (1997)). Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo IL-31RA o un fragmento del mismo (antagonista o agonista) o un receptor soluble de IL-31RA o un receptor soluble de IL-31RA/0SMRß se pueden formular de acuerdo con métodos conocidos para preparar composiciones farmacéuticamente útiles por lo que las proteínas terapéuticas se combinan en una mezcla con un portador farmacéuticamente aceptable. Se dice que una composición es un "portador farmacéuticamente aceptable" si su administración puede ser tolerada por el paciente que la recibe. La solución salina estéril amortiguada con fosfato es un ejemplo de un portador farmacéuticamente aceptable. Otros portadores adecuados son bien conocidos por aquellos expertos en la técnica. Véase, por ejemplo, Gennaro (ed.), Remington ' s Pharma ceutical Sciences , décima novena edición (mack Publishing Company 1995) . Con el propósito de suministrar un tratamiento, un anticuerpo IL-31RA o fragmento del mismo (antagonista y agonista) o un receptor soluble de IL-31RA o un receptor de IL-31RA/0SMRß y un portador farmacéuticamente aceptable se administran a un paciente en una cantidad terapéuticamente eficaz. Se afirma que una combinación de un anticuerpo IL-31RA (antagonista y agonista) o un receptor de IL-31RA soluble (por ejemplo un homodímero de IL-31RA y un heterodímero de zcytorl7/OSMRß) y un portador farmacéuticamente aceptable se administran en una "cantidad terapéuticamente eficaz" si la cantidad administrada es fisiológicamente significativa. Un agente es fisiológicamente significativo si su presencia resulta en un cambio detectable en la fisiología del paciente quien lo recibe. Por ejemplo, un agente utilizado para tratar inflamación es fisiológicamente significativo si su presencia alivia por lo menos una porción de la respuesta inflamatoria. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo IL-31RA o un fragmento del mismo (antagonista y agonista) o un receptor soluble de IL-31RA o un receptor soluble de IL-31RA/0SMRß se pueden suministrar en forma líquida, en un aerosol o en forma sólida. Las formas líquidas se ilustran por soluciones inyectables, aerosoles, gotitas, soluciones topológicas y suspensiones orales. Las formas sólidas ejemplares incluyen cápsulas, comprimidos y formas de liberación controlada. Esta última forma se ilustra por las bombas miniosmóticas e implantes (Bremer et al., Pharm .

Biotechnol . 10:239 (1997); Ranade, "Implants in Drug Delivery", in Drug Delivery Systems , Ranade and Hollinger (eds.), páginas 95-123 (CRC Press 1995); Bremer et al . , "Protein Delivery with Infusión Pumps" , in Protein Delivery: Physi cal Sys tems , Sanders and Hendren (eds.), páginas 239-254 (Plenum Press 1997); Yewey et al . , "Delivery of Proteins from a Controlled Reléase Injectable Implant" , in Protein Delivery: physi ca l Systems , Sanders and Hendren (eds.), páginas 93-117 (Plenum Press 1997)). Otras formas sólidas incluyen cremas, pastas y otras aplicaciones topológicas y similares . Un anticuerpo IL-31RA o un fragmento del mismo (antagonista y agonista) o un receptor soluble de IL-31RA o un receptor soluble de IL-31RA/OSMRß se pueden encapsular dentro de liposomas utilizando técnicas estándar de microencapsulación de proteínas (véase, por ejemplo, Anderson et a l . , Infect . Immun . 31:1099 (1981), Anderson et. al . , Cáncer Res . 50: 1853 (1990) y Cohén et al . , Biochim . Biophys . Acta 1063:95 (1991), Alving et al . , "Preparation and Use of Liposomes in Immunological Studies" , in Liposome Technology, segunda edición, Vol. III. Gregoriadis (ed.), página 317 (CRC Press 1993), Wassef et al . , Meth . Enzymol . 149: 124 (1987)). Como se indica en lo anterior, los liposomas terapéuticamente útiles pueden contener una diversidad de componentes. Por ejemplo, los liposomas pueden estar constituidos por derivados lipidíeos de poli (etilenglicol) (Alien et al., Biochim. Biophys. Acta 1150: 9 (1993)). Otras formas de dosificación se pueden diseñar por aquellos expertos en la técnica como se muestra, por ejemplo, por Ansel y Popovich, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, quinta edición (Lea & Febiger 1990), Gennaro (ed.), Remington's Pharmaceutical Sciences, décimo novena edición (Mack Publishing Company 1995), and by Ranade and Hollinger, Drug Del ívery Systems (CRC Press 1996 ) . La descripción completa de todas las patentes, solicitudes de patente y publicaciones así como el material disponible electrónicamente (por ejemplo GenBank, envíos de secuencias de aminoácidos y nucleótidos) mencionados en la presente se incorporan como referencia. La descripción detallada precedente y los ejemplos se proporcionan con fines de claridad de comprensión únicamente. No deben considerarse a partir de los mismos limitaciones innecesarias . La invención no se limita a los detalles exactos mostrados y descritos para variaciones evidentes para una persona experta en la técnica las cuales incluirán dentro de la invención definida por las reivindicaciones.

EJEMPLOS EJEMPLO 1 Determinación de tipos de linfocitos T primarios humanos que expresan IL-31 por estimulación Selección de los sujetos de estudio y biopsias Se incluyeron en un estudio A doce pacientes con AD (enfermedad moderada a grave; mediana de edad de 32 años en donde estaba involucrada la piel en 5-45%) , 6 pacientes con psoriasis (la mediana de edad es de 56 años de edad y estaba involucrada la piel en 10-65%) y 12 individuos sanos (mediana de edad de 34 años) , después de recibir consentimiento informado. Ninguno de los pacientes recibió ningún corticosteroide sistémico previamente. Todos los pacientes se encuentran libres de corticosteroides tópicos durante una semana antes de su biopsia cutánea o de la toma de sangre. Se toman biopsias por perforación de dos mm de: 1) lesiones AD eritematosas agudas de menos de tres días de inicio, 2) lesiones AD liquenif icadas crónicas de mas de dos semanas de duración, 3) lesiones psoriáticas crónicas y 4) piel normal. Las muestras de piel se congelan de inmediato a -70°C para inmunohistoquímica o pruebas Western y de inmunomanchas (immuno-dot blotting) .

Aislamiento y activación de los subconj untos de linfoci tos T humanos primarios Para aislar los diferentes subconjuntos de linfocitos T se aislan PBMC humanos de donadores utilizando centrifugación en un gradiente estándar de Ficoll. Los linfocitos T totales después se aislan utilizando T Cell Isolation Kit II (Miltenyi Biotec) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se determina la eficacia de separación utilizando citometría de flujo estándar y se determina que es > 95% de linfocitos T. Dos poblaciones de linfocitos T separados "previamente no expuestos" CD45RA+ a partir de linfocitos T de "memoria" CD45RO+, la población de linfocitos T total se incuba con microesferas anti-CD45RO (Miltenyi Biotec) durante 15 minutos a +4°C y se separan magnéticamente de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Las poblaciones de linfocitos T previamente no expuestos y con memoria se determinan que son >90% puras, por citometría de flujo. Los linfocitos T de memoria CD45RO+ con frecuencia son específicos de tejido y de antígeno linfocitico cutáneo (CLA) y se utilizan para diferenciar linfocitos T con ecotaxia hacia piel de los linfocitos T con ecotaxia hacia intestino que expresan a4/ß7 en su superficie. Para determinar cuales de estos tipos de células producen IL-31, se aislan linfocitos T CLA+ de linfocitos T totales, se activan y se recolecta el medio condicionado para el bioanálisis de IL-31. Para hacer esto, se aislan linfocitos T totales y después se incuban en hielo durante 20 minutos en 1 ml de una dilución 1:50 de anticuerpo anti-CLA-FITC (PharMingen) . Las células después se lavan, se resuspenden en amortiguador MACS y se incuban con microesferas anti-FITC (Miltenyi Biotec) durante 15 minutos a +4°C. Las células después se lavan, se resuspenden y se separan magnéticamente sobre una columna LS de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Los linfocitos T marcados posteriormente se determinan que son >80% puros mientras que los linfocitos T carentes de CLA son >98% CLA- . Ambos linfocitos T, CLA+ y CLA-, se recolectan y cultivan de manera concurrente. Para activar los subconjuntos de linfocitos T CD45RA+ y CD45RO+, las células se cultivan durante la noche en placas de cultivo de tejido de 24 pozos tratadas previamente con 2.0 µg/ml de anticuerpo anti-CD3 (Southern Biotechnology) . Las células se colocan en placas a una concentración de 2.5 x 106 células/ml en medio de cultivo de tejido (RPMI, suero bovino fetal 5%, L-glutamina y piruvato de sodio (todos de Gibco)) suplementado con 2.0 µg/ml de anti-CD28 (Southern Biotechnology) y colocado en un incubador a +37 °C. Después de cuatro horas la mitad de los pozos se cosechan, las células se sedimentan y se congelan en medio acondicionado hasta -20°C, hasta el momento del bioanálisis de IL-31. Los subconjuntos de linfocitos T CLA+ y CLA- se activan de manera similar en placas de cultivo de tejidos de 48 pozos que han sido tratadas previamente con 2.0 µg/ml de anticuerpo anti-CD3 (Southern Biotechnology) . Las células se activan durante 16 horas o 24 horas en un incubador a +37°C a una concentración de 6.25 x 105 células/ml. Las muestras se cosechan, se sedimentan las células y se congelan con medio acondicionado a -20°C hasta el momento del bionanálisis de IL-31. Para activación subóptima, los linfocitos T CLA+ se cultivan en placas pretratadas con 0.5 µg/ml de naticuerpo anti-CD3.

Protocolo de bioanálisis de IL-31 humano : Se hacen crecer células BAF3 transfectadas con hll- 31RA, hOSMRß y KZ134 hasta 5 x 105 y 1 x 106 células/ml. Las células se lavan con medio de análisis (RPMI 1640, FBS 10%, L-glutamina, piruvato de sodio y Pen/strep (todos de Gibco) ) y se resuspenden a 3 x 105 células/ml en medio de análisis. En una placa opaca de 96 pozos se titulan estándares de hlL-31 por duplicado a partir de 600 pg/ml hasta 9.38 pg/ml en medio de análisis vía 100 µl/pozo, dilución seriada 1:2. Los estándares de control de calidad se agregan por duplicado a la placa a 350 pg/ml y 35 pg/ml en 100 µl . Las muestras de prueba con frecuencia se diluyen 1:2 o 1:4 y se agregan por duplicado a los pozos de muestra. Después se agregan a cada pozo 100 µl de células BAF3 lavadas para una concentración final de 3 x 104 células/pozo. La placa después se incuba durante 16-24 horas a +37 °C en un incubador de C02 5%. La placa después se centrifuga a 1200 rpm durante 5 minutos, se separa el medio y se agregan a cada pozo 25 µl/pozo de amortiguador de lisis (Promega) . Después de 10 minutos la placa se lee en un luminometro (Berthold) . El luminometro se agrega en 40 µl/pozo de mezcla de sustrato de luciferasa (Promega) y se integra la luminiscencia por un período de 4 segundos. Los valores de luminiscencia se exportan a una hoja se datos en donde se analizan y convierten en picogramos de IL-31 por 106 células por ml de volumen. Los datos se resumen en la tabla 1.

Resul tados del bioanálisis de IL-31 : Los resultados de las muestras de linfocitos T CD45Ra+ y CD45RO+ muestran que IL-31 se produce principalmente por los linfocitos T de memoria CD45RO+. Los linfocitos T CD45Ra+ y CD45RO+ de ambos donadores no producen IL-31 detectable cuando no son estimulados. No obstante, las muestras de CD45RO+ de ambos donadores #3 y #4 generan concentraciones significativas de IL-31 después de activación durante 24 horas con anti-CD3 unido a placa y anti-CD28 soluble (110.4 pg/106 células/ml y 145.6 pg/106 células/ml, respectivamente) . Inversamnete , cuando se activan los linfocitos T CD45RA+ de donadores #3 y #4 con anti-CD3 y anti-CD28, producen cantidades muy bajas de IL-31 (13.1 pg/ 106células/ml y 12.7 pg/106 células/ml, respectivamente) . Las muestras de linfocitos T CLA+ y CLA-muestran que IL-31 parece estar elaborado casi completamente por linfocitos T CLA+ activados. La población CLA- de linfocitos T (la cual incluye al linfocitos T previamente no expuestos, linfocitos T de memoria con ecotaxia hacia intestino a4/ß7 y linfocitos T no involucrados de tejido) de donadores no generan concentraciones detectables de IL-31 sin importar el punto de tiempo de la condición de activación. Los linfocitos T CLA+, por otra parte, generan concentraciones muy altas de IL-31 cuando se estimulan con 2.0 µg/ml de anticuerpo anti-CD3 unido a placa. El donador #5 genera 1385.7 pg/106 células/ml de IL-31 en 16 horas y >1920 pg/106 células/ml en 24 horas. El donador #6 genera 121.3 pg/106 células/ml de IL-31 a las 16 horas y 328.9 pg/10G células/ml de IL-31 a las 24 horas. Estos resultados demuestran claramente que de los subconjuntos de linfocitos T. 11-31 parece ser elaborado específicamente por linfocitos T cutáneos (CLA+) bajo condiciones de activación estándar.

TABLA 1 EJEMPLO 2 Relación de IL-31 en el inicio y perpetuación de hipersensibilidad de contacto Método I A ratones BALB/c se les pinta en la parte media del lomo rasurada con 25 µl de DNFB (2 , 4 -dinitrofluorobenceno, Sigma, St Louis MO) disuelto en una solución de acetona: aceite de oliva (4:1) utilizando un equipo de pipeta. Un grupo control tratado con vehículo recibe 25 µl de acetona: aceite de oliva únicamente. Después de 5 días los ratones se anestesian con isofluorano en una cámara de inhalación y se miden el pabellón de la oreja de los animales experimentales y control con un micrómetro de ingeniero (Mitutoyo) para obtener una medición inicial. A los ratones después se les expone al aplicarles 10 µl de DNFB 0.25% en acetona: aceite de oliva (4:1) en ambos lados de cada oreja de todos los ratones. Se mide la hipersensibilidad de contacto a las 24 h y 48 h después como la diferencia entre la oreja derecha (expuesta) y la oreja izquierda (no expuesta) . Todas las mediciones se realizan por un micrómetro de ingeniero. Se determinan los valores de fondo por la diferencia en la hinchazón de la oreja entre las orejas expuesta y no expuesta de ratones que previamente no han sido expuestos. La sangre completa y el suero para el análisis por FACS y/o ELISA se recolecta antes de la matanza y se extirpan las orejas para realizar un análisis histológico.

Método II (Induce respuesta Th2) A ratones BALB/c se les pinta en la parte media del lomo rasurada con 100 µl de FITC (isotiocianato de fluoresceína) 0.5% en una solución 1:1 de acetona/ftalato de dibutilo (MSDS disponible utilizando equipo de pipeta en los días 1, 2 y 8. En el día 13, se anestesia a los ratones con isofluorano en una cámara de inhalación y los dos pabellones de la oreja de los animales experimentales control se mide con un micrómetro de ingeniero (Mututoyo) para obtener una medición inicial. Se expone los ratones al aplicar las 25 µl de FITC 0.5% (en acetona/ftalato de dibutilo 1:1) en la superficie local de cada oreja. Se mide la hipersensibilidad de contacto a 24 h y 48 h posteriormente como la diferencia entre la oreja derecha (expuesta) y la oreja izquierda (no expuesta) . Todas las mediciones se realizan con un micrómetro de ingeniero. Se determinan los valores de fondo por la diferencia en la hinchazón de la oreja entre las orejas expuestas y no expuestas de ratones que previamente no han sido expuestas. La sangre completa y el suero para los análisis de FACS y/o ELISA se recolectan antes de la matanza y se extirpan las orejas y recolectan para análisis histológico.

Método III (induce respuestas Thl) A ratones BALB/c se les pinta en la parte media el lomo rasurada, con 25 µl de oxazalona 2% (en actona/aceite de oliva 4:1) utilizando un equipo de pipeta. En el día 7 se anestesia los ratones con isofluorano en una cámara de inhalación y ambos pabellones de la oreja de los animales experimentales y control se mide con un micrómetro de ingeniero (Mitutoyo) para obtener la medición inicial. Se expone los ratones al aplicar 18 µl de oxazalona en la superficie dorsal de cada oreja. Se mide la hipersensibilidad de contacto a las 24 h y 48 h después como una diferencia entre la oreja derecha (expuesta) y la oreja izquierda (no expuesta) . Todas las mediciones se realizan con el micrómetro de ingeniero. Se determinan los valores de fondo por la diferencia en la hinchazón de la oreja entre las orejas expuestas y no expuestas de ratones previamente no expuestos . La sangre completa y el suero para el análisis de FACS y/o ELISA se recolecta antes de la matanza y las orejas se extirpan y recolectan para análisis histológico. La relación de IL-31 en el inicio y perpetuación de la hipersensibilidad de contacto se prueba utilizando un anticuerpo neutralizante contra IL-31 tanto en la fase de sensibilización como de exposición del experimento.

Ejemplo 3 Relación de IL-31 en la derma ti tis atópica Método I (Sensibilización de ra tones NC/Nga) Se adquieren ratones machos NC/Nga de Charles River Laboratories, Japón. Los ratones son de 4 semanas de edad en la llegada y se les alberga en condiciones de cuarentena SPF durante 4 semanas para aclimatarlos. Los ratones son de aproximadamente 10-11 semanas de edad al inicio de la sensibilización con antígeno. A los ratones se les anestesia con isofluorano y se rasuran los lomos con una rasuradora eléctrica. Se inyecta intradérmicamente una cantidad aproximada de 10 µg de extracto Derma tophagoides pteronyssinus (Dp) (Indoor Biotechnologies, Charlottesville, Virginia, pedido especial) en el pliegue del cuello 3 veces a la semana durante 5 a 6 semanas hasta que los ratones desarrollan lesiones cutáneas. Los animales control recibieron 10 ml de inyecciones intradérmicas de PBS 3 veces a la semana. Se prepara el extracto de Dp de acuerdo con el método de Matsuoka y colaboradores. Matsuoka H., et al., Allergy: 58, 139 (2003). Brevemente, 595 mg de extracto de cultivo agotado liofilizado Dp se disuelve en 12 ml de PBS estéril (Gibco) . Se mezcla Dp en un tubo Falcon de 50 ml en un oscilador por agitación durante 30 minutos. El extracto se centrifuga durante 10 minutos a 2000 rpm y el sobrenadante se recolecta y se forman alícuotas en tubos de criofrasco de 1 ml y se almacenan a -20°C Método II (Sensibil i za ción de ra tones D011 . 10) Se crían ratones transgénicos DO11.10 a partir de una colonia interna y presentan entre 9.5 y 14 semanas de edad al inicio de la sensibilización con antígeno. A las veinticuatro horas antes de la sensibilización epicutánea se anestesia a los ratones con isof luorano y la totalidad del tórax ( lomo y abdomen) de los ratones se rasuran con una rasuradora eléctrica . A los ratones después se les coloca con tiras de cinta con una cinta quirúrgica de Elastin (Johnson y Johnson) de lomo . Se humedecen parches de Gaus estéril de 1 cm2 ya sea con 500 µg de ovalbúmina (Calbiochem 32467) o PBS estéril (Gibco) y se adhieren en el lado trasero izquierdo de los ratones con un aposito DuoDerm Extra Thin Dressing ( ConvaTec 187932 ) . El parche y el aposito después se cubre en una envoltura corporal de la cinta quirúrgica de Elastin de manera que el ratón no puede retirar o destruir los parches . Los parches se llevan durante 7 días y se retiran. Los ratones después se dejan reposar durante dos semanas antes de recibir otra ronda de sensibilización epicutánea. Los ratones reciben un total de tres sensibilizaciones en una semana.

Resul tados El análisis inmunohistoquímico de la expresión de IL-31RA en la piel lesional y no lesional de animales NC/Nga sensibilizados con ácaros de polvo y DO11 . 10 sensibilizados con OVA muestra que el IL- 31RA se expresa por queratinocitos epidérmicos en ratones , no obstante no se pudo encontrar una diferencia signif icativa en concentraciones de expresión entre los animales sensibilizados con antígeno versus los sensibilizados con PBS.

Ejemplo 4 Relación de IL-31 con la hipersensibilidad de tipo tardío Métodos Para generar una respuesta DTH, se senbiliza a los ratones con el antígeno en el día 0 o inmunización subcutánea en la base de la cola con 100 µg de ovalbúmina (OVA) en adyuvante completo de Freund (CFA, volumen total de 50-100 µl) . Una semana después se anestesia a los ratones con isofluorano en una cámara de inhalación en ambos pabellones de las orejas de animales experimentales y control y se mide con un micrómetro de ingeniero (Mitutoyo) para obtener una medición inicial. Se expone a los ratones intradérmicamente con 10 µg de OVA en PBS en un volumen total de 10 µl dentro del pabellón de la oreja izquierda justo por debajo de la piel sin tocar ninguna vena. Como un control los ratones también recibieron una inyección de 10 µl de PBS en el pabellón de la oreja derecha. En algunos casos, un grupo control separado proporciona una inyección i.d. de OVA en la oreja también se trató con corticosteroides tópicos como un control positivo para inhibir la reacción. A las 24 y 48 h después de la exposición los ratones se anestesian y se mide el espesor de las orejas. Los resultados se expresan como: hinchazón específica de oreja = (medición 24 h - medición 0 h) para oreja experimental - (medición a las 24 h - medición a 0 h) para la oreja de control negativo. La induración, un elemento definitorio de DTH, es detectable a las 18 horas después de la inyección del antígeno sensibilizado y se vuelve máximo a las 24-48 horas. El período de retraso en el inicio de la induración palpable es la razón por la que se le denomina a la respuesta de "tipo tardío". Resul tados Los ratones transgénicos IL-31 se prueban para DTH, no obstante, debido a un incremento en el espesor de la oreja en animales transgénicos IL-31 no expuestos, no se puede determinar una diferencia estadísticamente significativa en DTH entre animales Tg IL-31 en comparación con los controles naturales . También se probaron animales en los cuales se bloquea la expresión del gen para IL-31RA en una respuesta DTH y no se puede observar una diferencia significativa en la respuesta de DTH entre los animales receptores con el gen bloqueado y los de tipo natural.

Ejemplo 5 Relación de IL-31 en la inducción de la respuesta de comezón Método 1 (Tratamiento con IL-31 de ratones pretra tados con capsaicina) Se anestesia a animales BALB/c de diez semanas de edad (CRL) y se les inyecta con un agente analgésico de larga duración, clorhidrato de bupranorfina por vía subcutánea a 0.1 mg/kg antes de la inyección de 0.25 ml de una solución de 4 mg/ml de capsaicina en etanol 10% + Tween 80 10% en solución salina, subcutáneamente dentro de la nuca del cuello. Los animales se mantienen anestesiados durante por lo menos 30 minutos después del tratamiento con neurotoxina. A las 48 horas después, se implantan subcutáneamente bombas osmóticas de 14 días para el suministro continuo de 20 µg/día de IL-31 durante 14 días. Los ratones son monitoreados diariamente durante 6 días para determinar alopecia y prurito utilizando los siguientes criterios: 0 = sin rascado, el animal tiene una apariencia normal, 1 = adelgazamiento del recubrimiento en áreas pequeñas, se observa rascado, 2 = pérdida menor de pelo (parches pequeños) , rascado, 3 = pérdida moderada de pelo, rascado, y 4 = pérdida grave de pelo, rascado excesivo. Los resultados demuestran que aunque los ratones no tratados con capsaicina muestran una calificación media de rascado/pérdida de pelo de 2.625 después de tres días de suministro de IL-31, los ratones tratados con capsaicina muestran una clasificación significativamente menor de 1. De esta manera, los ratones tratados con capsaicina antes del suministro de IL-31 muestran tanto un retraso en la incidencia de rascado cono pérdida de pelo y una calificación menor en la intensidad de rascado y pérdida de pelo durante los seis días después del experimento. Estos datos sugieren que IL-31 induce cierto componente neuronal que contribuye a la alopecia y prurito inducido por IL-31. Por lo tanto, la neutralización de IL-31 puede disminuir la incidencia e intensidad del prurito y por lo tanto la dermatitis en pacientes que padecen de trastornos cutáneos que involucran prurito .

Método II (Tra tamiento con IL-31 de ra tones con deficiencia en el gen) Los ratones que son homocigotos nulos para el gen Tacl no expresan sustancia P detectable o neurocinina A. Estos ratones presentan respuesta de dolor nociceptivo significativamente reducido a estímulos moderados e intensos y por lo tanto son una herramienta útil para estudiar la contribución de los péptidos de taquicinina al procesamiento de dolor/comezón y los estados de enfermedad inflamatoria. Se implantan a ratones que tienen bloqueado el gen Tacl de 12 semanas de edad con bombas osmóticas de 14 días que suministran 1 µg/día de proteína IL-31 y se observan diariamente para determinar alopecia y prurito utilizando los siguientes criterios: 0 = sin rascado, el animal tiene una apariencia normal, 1 = adelgazamiento de la cubierta en áreas pequeñas, se observa rascado, 2 = pérdida menor de pelo (parches pequeños) , rascado, 3 = pérdida moderada de pelo, rascado y 4 = pérdida grave de pelo, rascado excesivo. Los resultados en este estudio muestran que los ratones deficientes en Tacl son menos susceptibles a rascado/pérdida de pelo inducida por IL-31 en comparación con ratones control naturales. Aunque 100% (10/10) de los ratones naturales han desarrollado pruebas de rascado y pérdida de pelo en el día 6 de tratamiento con IL-31, sólo 33.3% (2/6) de los ratones deficientes en Tacl muestran signos de rascado y pérdida de pelo en el mismo punto en el tiempo. Estos datos muestran que IL-31 induce un componente neuronal que contribuye al fenotipo de rascado/pérdida de pelo en ratones tratados con IL-31 y la neutralización de IL-31 puede disminuir la incidencia e intensidad del rascado en el contexto de dermatitis.

Método III (Efecto de la administración de anticuerpo neutralizante de IL-31 en ra tones tra tados con IL-31) A ratones BALB/c hembra normales (CRL) de aproximadamente 8 a 12 semanas de edad se les implanta subcutáneamente con bombas osmóticas de 14 días (Alzet, #2002) que suministran 1 µg/día de mIL-31. Los grupos de ratones recibieron inyecciones intraperitoneales (i.p.) de anticuerpo monoclonal de rata anti-IL-31 de ratón 10 mg/kg (200 µg/ratón) dos veces a la semana comenzando 1 semana antes del suministro de IL-31. Los grupos control de ratones recibieron inyecciones i.p. de vehículo (PBS/BSA 0.1%) con protocolos de dosificación idénticos. Se clasificó a los ratones diariamente para determinar alopecia y prurito utilizando los siguientes criterios: 0 = sin rascado, el animal tiene una apariencia normal, 1 = adelgazamiento del recubrimiento en las áreas pequeñas, se observa rascado, 2 = pérdida menor de pelo (parches pequeños) , rascado, 3 = pérdida moderada de pelo, rascado y 4 = pérdida grave de pelo, rascado excesivo. En todos los experimentos, los ratones tratados con anticuerpo monoclonal mAB (por sus siglas en inglés) de rata anti-IL-31 presentan un retraso en el inicio de los síntomas de aproximadamente 5 a 7 días y una calificación general menor para alopecia y prurito. Todos los grupos de ratones tratados con mAb (sin importar la frecuencia de dosis o la concentración) desarrollaron alopecia y prurito similar a los ratones control en el día 13 del estudio. Estos datos sugieren que la neutralización de IL-31 puede retrasar el inicio de la respuesta de rascado/pérdida de pelo inducida por IL-31.

Ejemplo 6 Tinción inmunohistoquimica (IHC) de IL-31 en lesiones cutáneas de dermatitis psoriática y atópica no involucrada La dermatitis psoriática, atópica no involucrada y la piel normal se prueban para determinar el ligando IL-31 por IHC Las células de control positivo consisten de células BHK transfectadas con IL-31. Los controles negativos realizados incluyen: (1) células BHK no transfectadas, (2) tejidos representativos de tinción y células con proteína A purificada de suero de conejo normal y que detectan anticuerpo que se une como es habitual. El reactivo de anticuerpo es E5758 (anticuerpo de conejo anti-huIL-31 CEE, Aff. purificado en 1.0 mg/ml). Las células control incluyen células C02-6020: BHK que expresan zcytorl7 Lig hu-CEE/21, y BHK naturales. Los tejidos probados incluyen muestras cutáneas de dermatitis atópica aguda, muestras cutáneas de dermatitis atópica crónica, muestras de piel de área no afectada y muestras de piel control normal así como otras muestras de control internos. Las células y tejidos descritos en lo anterior se fijan durante la noche en NBF 10% y se embeben en parafina utilizando técnicas estándar. Se colocan en horno secciones de 5 µM a 61°C durante 30 min para adhesión de tejido. Los cortes posteriormente se retira la cera en 3 x 5 ' en xileno y se rehidratan mediante alcohol gradual como sigue: 2 x 2' en EtOH 100%, 2 x 2' en EtOH X95%, 1 x 2' en EtOH 70%. Los cortes se enjuagan en dH20 y después se realiza el calentamiento que induce recuperación de epítopo (HIER) durante 20 minutos bajo vapor seguido por 20 minutos de enfriamiento hasta temperatura ambiente en Tris 10 mM, EDTA 1 mM, pH 9.0. Los cortes se cargan en un equipo DakoCytomation Autostainer. Los cortes se enjuagan con amortiguador TBS/Tween (TBST), preparado como lo indica el fabricante. Se bloquea biotina endógena con incubación durante 10 minutos en solución de avidina, se lava en TBST seguido por incubación durante 10 minutos en solución de biotina. Los cortes se lavan en TBST. Se aplica un bloqueo de proteína (PBSB) (polvo de bloqueo 0.5% en PBS, Perkin Elmer NEL700001KT) durante 30 minutos y se limpian por enjuagado los cortes. El anticuerpo primario se diluye a 500 ng/ml y se aplica durante 60 minutos en amortiguador de dilución de anticuerpo ChemMate (parte #ADB250, Ventana Medical systems) . Los tejidos se lavan dos veces en TBST y después se incuban 45 minutos en anticuerpo de chivo contra conejo biotinado, 750 ng/ml en PBSB (catálogo #BA-1000, Vector Labs) . Los cortes se lavan dos veces en TBST. Se incuba el reactivo Vectastain Élite ABC (catálogo #PK-7100, Vector Labs) durante 45 minutos. Los cortes se lavan dos veces en TBST. Las señales se desarrollan con DAB+ (catálogo #K-3468, DakoCytomation) durante 10 minutos a temperatura ambiente. Los cortes de tejido después se someten a tinción contrastante en hematoxilina (catálogo #H-3401 Vector Labs) , se deshidratan y se les coloca un cubreobjetos en VectorMount (catálogo #H-500, Vector Labs) .

Resul tados Cél ulas con trol : Las células BHK se transfectan con IL-31 y se tiñen positivamente con IL-31 anticuerpo E5758 mientras las células no transfectadas son negativas para este anticuerpo. Las mismas células transfectadas y no transfectadas son negativas con sueros anti-conejo. 2) análisis cutáneo de derma ti tis a tópica : El patrón de tinción para IL-31 en las muestras de piel AD es idéntico a de las pieles psoriáticas reportadas previamente: los queratinocitos y los linfocitos T CD3+ se tiñen de manera negativa para IL-31. Una tinción débil pero más bien uniforme en las células epiteliales en la porción secretora de las glándulas sebáceas está presente, pero se observa una señal fuerte en la capa interna del epitelio en la porción del ducto. La glándula sebácea es positiva para IL-31. No hay diferencia en la tinción de IL-31 entre piel de AD y la normal . La tinción inmunohistoquímica (IHC) de dermatitis psoriatica atópica no involucrada y piel normal muestra una fuerte tinción de IL-31 en la sección holocrina de las glándulas sebáceas. Considerando el fenotipo del ratón transgénico 11-31 es interesante hacer notar que las glándulas sebáceas se originan como un botón epitelial de la raíz exterior de la cubierta de los folículos pilosos. Además de las glándulas sebáceas se observa una tinción débil pero más bien uniforme de IL-31 en las células epiteliales en la porción secretora de las glándulas sebáceas y una señal fuerte en la capa interior del epitelio se observa en la porción del ducto de las glándulas sebáceas.

Ejemplo 7 Tinción inmunohistoquímica (IHC) de IL-31Ra en derma ti tis psoriática no involucrada y a tópica La dermatitis psoriática no involucrada atópica y 1 piel normal se prueban para IL-31RA por IHC Las células de control positivo consisten de células BHK dobles transfectadas con IL-31RA y OSMR. Los controles negativos realizados incluyen: (1) células BHK no transfectadas, (2) tejidos representativos de tinción y células con proteína A purificada de suero de conejo normal y anticuerpo de detección que se une como es habitual . El reactivo de anticuerpo es E6292 (conejo anti-huIL-31RAs-CEE v.4 a 1.33 mg/ml) . Las células control incluyen células BHK C02-5117 que expresan IL-31RA humano y OSMR humano (total de células en el sedimento: 3.9 x 106, la viabilidad es >90%) y C04-1587: BHK natural (células totales en el sedimento: 5 x 106) . Otros tejidos examinados incluyen: 5 muestras de piel de dermatitis atópica aguda, 10 muestras de piel de dermatitis atópica crónica, 10 muestras de piel de área no afectada, muestras de piel de control normal y otras muestras de piel internas. Las células y tejidos descritos en lo anterior se fijan durante la noche en NBF 10% y se embeben en parafina utilizando técnicas estándar. Se colocan en un horno secciones de 5 µM a 61°C durante 30 min para adhesión de tejido. A los cortes se les retira la cera subsecuentemente en 3x5' en xileno y se rehidratan a través de alcoholes graduados, como sigue: 2X2' en EtOH 100%, 2X2' en EtOH X95%, 1x2' en EtOH 70%. Los cortes se enjuagan en dH20 y después se realiza recuperación de epítopo inducido por calor (HIER) durante 20 minutos bajo vapor seguido por 20 minutos de enfriamiento hasta temperatura ambiente en Tris 10 mM , EDTA 1 M , pH 9.0. Los cortes se cargan en DakoCytomation Autostainer. Los cortes se enjuagan con amortiguador TBS/Tween (TBST) preparado como lo indica el fabricante. Se bloquea la biotina endógena con una incubación durante 10 minutos en una solución de avidina, se lava en TBST seguido por incubación durante 10 minutos en solución de biotina. Los cortes se lavan en TBST. Se aplica un bloqueo de proteína (PBSB) (polvo de bloqueo 0.5% en PBS, Perkin Elmer NEL700001KT) durante 30 minutos y se elimina por enjuagado de los cortes. Los anticuerpo primarios diluidos de 665 ng/ml a 1330 ng/ml para IL-31RA se aplican durante 60 minutos en amortiguador de dilución de anticuerpo ChemMate (parte# ADB250, Ventana medical systems) . Los tejidos se lavan dos veces en TBST y después se incuban 45 minutos en anticuerpo de chivo anticonejo biotinado, 750 ng/ml en PBSB (catálogo # BA-1000, Vector Labs) . Los cortes se lavan dos veces en TBST. Se incuba el reactivo Vectastain Élite ABC (catálogo #pK-7100, Vector Labs) durante 45 minutos. Los cortes se lavan dos veces en TBST. Las señales se desarrollan con DAB+ (catálogo# K-3468, DakoCytomation) durante 10 minutos a temperatura ambiente. Los cortes de tejido después se someten a tinción contrastante en hematoxilina (catálogo# H-3401 Vector Labs) , se deshidratan y se les colocan un cubreobjetos en VectorMount (catálogo# H-5000, Vector Labs). Los resultados se muestran en la tabla 2 Tabla 2: Resultados de IHC para IL-31RA en biopsias de piel de AD aguda y no involucrada en comparación con voluntarios normales Identificación calificación de IHC Calificación de del caso para IL-31RA* IHC para CD3* __ AD-1 2-3 AD-2 2-3 2 AD-3 2-3 1-2 AD-4 3 1 AD-5 2 2 UAD1 1-2 1 UAD-2 1 0-1 UAD-3 ND ND UAD-4 ND ND UAD-5 1-2 0-1 UAD-6 2-3 ND UAD-7 2 1 UAD-8 1 1 UAD-9 1-2 1 UAD-10 2 ND Normal--1 1 0-1 Normal--2 0-1 0-1 Normal--3 1 0-1 Abreviaturas: AD: dermatitis atópica; UAD: no involucrada; ND: no realizado * La señal de IHC se califica de 0 (sin señal) a 4 (señal intensa) Existe una ligera regulación por aumento de IL-31RA en la epidermis de muestras de piel AD. Posiblemente un porcentaje pequeño de linfocitos T CD3+ son positivos para IL-31RA en las pieles AD . Existen células CLA+ positivos en todas las muestras probadas. La piel AD puede tener más células CLA+ positivos en comparación con las muestras normales o UAD. IL-31RA también se expresa en las células epiteliales de glándulas sebáceas ecrinas con las células epiteliales cuboidales en la porción secretora de las glándulas ecrinas lo que demuestra una concentración ligeramente mayor de proteína IL-31RA en comparación con la porción del ducto. De manera colectiva, estos datos demuestran que IL-3IRA se expresa por queratinocitos epidérmicos tanto de voluntarios control como de pacientes con AD. No obstante, las concentraciones de IL-31RA expresadas en queratinocitos de biopsias de piel AD es mayor que las concentraciones observadas en biopsias de piel de controles normales, lo que indica un potencial de capacidad de respuesta aumentada a IL-31 en el contexto de AD . También se encontró que IL-31RA se expresa en un subconjunto de células infiltradas perivasculares presentes en biopsias de piel de pacientes con AD pero que no están presentes en biopsias de piel control. Estas células IL-31RA+ se reconocen por un anticuerpo específico para el marcador de macrófago de tejido CD68, lo que indica que estas células son macrófagos de tejido que se infiltran en la piel.

EJEMPLO 8 Aislamien to de células de infil tración en piel por microscopía de capta ción láser y análisis de IL-31MRNA por RT-PCR La presencia de linfocitos T infiltrados en piel es una característica definitoria de biopsias de piel de pacientes con AD en comparación con individuos normales. Dado que IL-31 es una citocina asociada a linfocitos T, se examinó la expresión de IL-31 en linfocitos T que se infiltran en piel en biopsias de tejido de pacientes AD. En primer lugar se confirma por IHC la presencia de números aumentados de linfocitos T CD3+ en biopsias de tejido de piel de pacientes con AD en comparación con individuos normales. Véase la tabla 2. Después se utiliza microscopía de captación láser para aislar específicamente células de infiltración cutánea para análisis de ARNm para IL-31 por RT-PCR. El ARNm para IL-31 se expresa por células que se infiltran en la piel a partir de pacientes con AD aguda. En tejidos normales, las células de infiltración normalmente no se encuentran y por lo tanto no se pueden probar. No obstante, la capa de queratinocitos epidérmicos, la cual está presente en piel tanto con AD como normal, se analiza para la expresión de ARNm para IL-31 y se encuentra en concentraciones menores de ARNm para IL-31 en muestras normales en comparación con la capa de queratinocitos epidérmicos con muestras con AD. El análisis semicuantitativo de la expresión de ARNm para 11-31 en comparación con un gen de control interno (HPRT) muestra que aunque las concentraciones de ARNm para IL-31 no son significativamente diferentes entre muestras de AD y normales, existe una tendencia hacia la expresión más alta de IL-31 en piel de pacientes con AD.

EJEMPLO 9 IL-31 es producido por cél ulas T de memoria con un fenotipo de ecotaxia a piel El análisis de biopsias de piel confirma que los linfocitos T CD3+ infiltrados en la piel, los cuales expresan ARNm para IL-31 expresan un marcador de ecotaxia a piel de antígeno de linfocitos cutáneos (CLA, por sus siglas en inglés) . De la población de linfocitos T total en sangre periférica humana normal, se encontró que la expresión de IL-31 se limita en gran medida a células de memoria/efectoras CD45RO+ en oposición a la población de linfocitos T que previamente no han sido expuestos, CD45RA+. Con el fin de determinar si la producción IL-31 se relaciona con los linfocitos T con ecotaxia a piel CLA+, se aislaron linfocitos T CLa+ y CLA- de sangre periférica de pacientes en quienes se diagnosticó con AD y voluntarios control y se comparó ARNm para IL-31 y las concentraciones de proteína después de estimulación anti-CD3 más anti-CD28. Nuestros resultados indican que ARNm para IL-31 se encuentra elevado de manera significativa en linfocitos T CLA+ en individuos con AD como normales a las 4 h (p?.0087 y p0.0022 CLA+ en comparación con CLA- para AD y normal, respectivamente) y las 24 h (p?.0022 CLA+ en comparación con CLA- para AD y muestras normales) después de la estimulación. El análisis de las concentraciones de proteína IL-31 en sobrenadantes de cultivo confirma que IL-31 se produce de manera predominante por linfocitos T CLA+ y que no es detectable IL-31 en sobrenadantes de cultivo de linfocitos T CLA- de individuos tanto con AD como controles . No existen diferencias significativas en las concentraciones de IL-31 entre pacientes con Ad y pacientes normales . También se analizó la producción de IL-31 por linfocitos T en sangre periférica que expresan otros marcadores de ecotaxia específicos de tejido tal como el marcador de ecotaxia específico para intestino a4ß7, de voluntarios normales. La comparación de las concentraciones de IL-31 producido por los linfocitos T CLA+ y las células a4ß7+ demuestra que los linfocitos T CLA+ producen de manera preferencial IL-31 en comparación con las células a4ß7 (promedio de 34.5 pg/ml y 14.42 pg/ml de IL-31, respectivamente).

Aunque los pacientes con AD y los controles normales tienen linfocitos T CLA+ circulantes que expresan IL-31 cuando se activan, los linfocitos T CLA+ de pacientes con AD se ha informado que existen en un estado más activado en comparación con células de individuos normales. En consecuencia, el umbral de estimulación necesario para la producción de IL-31 por los linfocitos T CLA+ puede diferir entre pacientes con dermatitis y sujetos control. Para probar esta hipótesis, estimulamos linfocitos T CLA+ de pacientes con AD e individuos control, con concentraciones inferiores a las óptimas de anti-CD3 en ausencia de anti-CD28 y se analizó la producción de IL-31 en sobrenadantes de cultivo a las 24 h después de la estimulación. Nuestros resultados demuestran que los linfocitos T CLA+ circulantes de algunos pacientes con AD producen concentraciones más altas de IL-31 en comparación con las células de individuos normales en este estudio con concentraciones máximas que alcanzan 1200 pg/ml, mientras que las concentraciones detectadas máximas en sobrenadantes de CLA+ normales es de solo 400 pg/ml y las concentraciones detectadas máximas para pacientes con psoriasis es de 73 pg/ml en concentraciones subóptimas de estimulación anti-CD3. Cinco de once pacientes con AD mostraron concentraciones de IL-31 por debajo del límite de detección de nuestro análisis, lo que sugiere que puede existir un subconjunto de pacientes con AD en donde se produzca IL-31 en concentraciones bajas. Esto puede reflejar las variaciones en la etapa de la enfermedad en nuestra población bajo estudio. No obstante, más de la mitad de los pacientes con AD presentaron una tendencia a concentraciones mayores de IL-31 en comparación con pacientes con psoriasis e individuos normales después de estimulación subóptima con anti-CD3. Dado que más linfocitos T CLA+ se localizan en la piel de pacientes con AD en comparación con individuos normales, nuestros estudios sugieren que existe un potencial aumentado de actividad para IL-31 en el microambiente cutáneo de AD . Por lo tanto, este estudio puede sugerir que una subpoblación de pacientes con AD, la cual puede tener más linfocitos T CLA+ activados producen IL-31.

Ejemplo 10 Reducción de TARC y MDC en respuesta a an ticuerpo an ti -IL-31 en modelos de ra tón con AD Método 1 Se sensibilizó intradérmicamente a ratones NC/Nga de seis semanas de edad (CRL Japón) , con 50 µg de extracto de acaro de polvo (D. pteronyssinus, Indoor Biotechnologies) tres veces a la semana en el lomo y se calificaron para lesiones similares a AD. Después de 5 semanas de sensibilización se mato a los ratones y se extirparon las orejas derechas y se colocaron en un pozo único de un recipiente de cultivo de 48 pozos (Corning) suplementado con RPMI + FBS 2% (GIBCO Invitrogen) . Las placas se colocaron en incubadores con humedad controlada con C02 5%. Los sobrenadantes se recolectaron después de 24 horas y se congelaron a -20°C hasta análisis adicional.

Método II Se sensibilizó intradérmicamente a ratones NC/Nga hembra de doce semanas de edad (CRL Japón) , con 10 µg de SEB (Toxin Technology) en la oreja y en el lomo tres veces por semana. Los ratones fueron clasificados para las lesiones similares a AD . Después de 5 semanas de sensibilización se mato a los ratones y se tomaron perforaciones de biopsia de 6 mm de la oreja inyectada de cada ratón y se colocaron en un pozo único de una palca de cultivo de 48 pozos suplementado con RPMI + FBS 2%. Las placas se colocaron en incubadores con humedad controlada con C02 5%. Los sobrenadantes se recolectaron después de 24 horas y se congelaron a -20°C hasta análisis posterior. Los grupos de ratones en ambos estudios se trataron ya sea con anticuerpo monoclonal de rata anti -IL- 31 de ratón a 10 mg/kg o con vehículo, intraperitonealmente dos veces cada semana comenzando después de 1 a 2 semanas de sensibilización. Las concentraciones de TARC y MDSC en las muestras de sobrenadante de 24 horas se midieron por ELISA convencional (R&D Systems) . Las concentraciones de TARC y MDSC son menores en los sobrenadantes de oreja de los ratones tratados con anti-IL-31 en comparación con los ratones control en ambos estudios, no obstante, estos resultados no son estadísticamente significativos cuando se analizan por ANOVA debido probablemente al tamaño pequeño de la muestra. Cuando los datos de ambos experimentos se combinan y analizan existe una diferencia estadísticamente significativa entre los grupos tratados . Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Uso de un anticuerpo anti-IL-31RA o un fragmento, en donde el anticuerpo anti-IL-31RA o un fragmento se une con los residuos aminoácidos 20-519 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6 o una porción de la misma, o los residuos aminoácidos 33-532 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8 o una porción de la misma, y en donde el anticuerpo anti-IL-31RA o un fragmento evita, inhibe el progreso o retrasa el inicio, reduce la gravedad y/o inhibe por lo menos una de las condiciones o síntomas de trastornos de la piel que se seleccionan del grupo que consiste de dermatitis atópica, dermatitis de contacto, reacciones alérgicas cutáneas de tipo tardío inducidas por medicamento, necrólisis epidérmica tóxica, linfoma de linfocitos T cutáneos, pénfigoide buloso, alopecia aerata, vitíligo, acné rosácea, prurigo nodular, escleroderma y virus de herpes simples, para elabrar un medicamento para tratar a un paciente que padece de trastorno en la piel.

2. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde el anticuerpo anti-IL-31RA es un anticuerpo policlonal.

3. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde el anticuerpo anti-IL-31RA es un anticuerpo monoclonal neutralizante.

4. Un híbridoma, caracterizado porque produce un anticuerpo monoclonal de conformidad con la reivindicación 3.

5. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde el fragmento de anticuerpo es un fragmento Fab.

6. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde el fragmento de anticuerpo es un fragmento Fab ' .

7. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde el fragmento de anticuerpo es un fragmento F ( ab ' ) 2 •

8. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde el fragmento de anticuerpo es Fv de cadena sencilla.

9. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde el anticuerpo anti-IL-31RA o un fragmento se une con los residuos aminoácidos 20-277 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6 o 33-240 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NUMERO: 8.

10. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde el anticuerpo anti-IL-31RA o un fragmento se une con aproximadamente 4-10 residuos aminoácidos de los residuos aminoácidos 20-519 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6 o los residuos aminoácidos 33-532 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8.

11. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde el anticuerpo anti-IL-31RA o un fragmento se une con aproximadamente 10-14 residuos aminoácidos de los residuos aminoácidos 20-519 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6 o los residuos aminoácidos 33-532 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8.

12. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde el anticuerpo anti-IL-31RA o un fragmento se une con aproximadamente 14-30 residuos aminoácidos de los residuos aminoácidos 20-519 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6 o los residuos aminoácidos 33-532 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8.

13. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde el fragmento se conjuga adicionalmente a un polietilenglicol.

14. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde el fragmento se conjuga adicionalmente a albúmina sérica humana.

15. Uso de un receptor IL-31RA soluble, en donde el receptor IL-31RA soluble se une con un polipéptido IL-31 que consiste de los residuos aminoácidos 1-64 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 2 y en donde el receptor IL-31RA soluble evita, inhibe el progreso, retrasa el inicio, reduce la gravedad y/o inhibe por lo menos una de las condiciones o síntomas del trastorno de la piel que se selecciona del grupo que consiste de dermatitis atópica, dermatitis de contacto, reacciones alérgicas cutáneas de tipo tardío inducidas por medicamento, necrólisis epidérmica tóxica, linfoma de linfocitos T cutáneos, pénfigoide buloso, alopecia areata, vitíligo, acné rosácea, prurigo nodular, escleroderma y virus de herpes simples, para elaborar un medicamento para tratar un paciente que padece de un trastorno en la piel.

16. El uso de conformidad con la reivindicación 15, en donde el receptor IL-31RA soluble comprende los residuos aminoácidos 20-519 de la SECUECNIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 6 o 33-240 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 8.

17. El uso de conformidad con la reivindicación 15, en donde el receptor IL-31RA soluble comprende los residuos aminoácidos 1-324 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 10.

18. El uso de conformidad con la reivindicación 15, en donde el receptor IL-31RA soluble comprende los residuos aminoácidos 1-239 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO: 12.

19. El uso de conformidad con la reivindicación 15, en donde el receptor IL-31RA soluble se conjuga adicionalmente a la región Fc de IgG, IgA, IgD, IgM o IgE .

20. El uso de conformidad con la reivindicación 15, en donde el receptor IL-31RA soluble es un homodímero IL-31RA.

21. El uso de conformidad con la reivindicación 15, en donde el receptor IL-31RA soluble es un heterodímero IL- 3 IRA/OSMRß .

22. El uso de conformidad con la reivindicación 15, en donde el receptor IL-31RA soluble se une con un polipéptido IL-31 que consiste de los residuos aminoácidos 24-164 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO 2.

23. El uso de conformidad con la reivindicación 15, en donde el receptor IL-31RA soluble se une con un polipéptido IL-31 que consiste de los residuos aminoácidos 27-164 de la SECUENCIA DE IDENTIFICACIÓN NÚMERO 2.

24. El uso de conformidad con la reivindicación 15, en donde el receptor IL-31RA soluble se conjuga adicionalmente a un polietilenglicol .

25. El uso de conformidad con la reivindicación 15, en donde el receptor IL-31RA soluble se conjuga adicionalmente a albúmina sérica humana .