MX2007000259A

MX2007000259A - Derivados de bisarilurea utiles para inhibir chk1.

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Publication number: MX2007000259A
Application number: MX2007000259A
Authority: MX
Inventors: Stephen T Schlachter; Laurence Edward Burgess; John Joseph Gaudino; Adam Wade Cook; Kimba L Fischer
Original assignee: Icos Corp
Priority date: 2004-06-25
Filing date: 2005-06-24
Publication date: 2007-07-20
Also published as: AU2005267185A1; BRPI0512593A; JP2008504283A; CN101006075A; CA2571424A1; WO2006012308A1; EP1765808A1; KR20070028591A

Abstract

Se describen compuestos de urea sustituidos con arilo y heteroarilo utiles en el tratamiento de enfermedades y condiciones relacionadas con dano o lesiones del ADN en la replicacion de ADN. Tambien se describen metodos para elaborar los compuestos, y su uso como agentes terapeuticos, por ejemplo, para tratar cancer y otras enfermedades caracterizadas por defectos en la replicacion de ADN, segregacion cromosomica, o division celular. Formula (I).

Description

DERIVADOS DE BISARI UREA ÚTILES PARA INHIBIR CHK1 CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a compuestos útiles para inhibir enzimas que mantienen y reparan la integridad del material genético. De manera más particular, la presente invención se refiere a una serie de compuestos de urea sustituidos con arilo y heteroarilo, a métodos para elaborar los compuestos, y a su uso como agentes terapéuticos, por ejemplo, en el tratamiento de cáncer y otras enfermedades caracterizadas por defectos en la replicación de ácido desoxirribonucleico (ADN) , segregación cromosómica, o división celular.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Una gran variedad de enfermedades, condiciones, y trastornos (de aquí en adelante "indicaciones") se caracterizan porque implican células que proliferan de manera aberrante. Tal como se utiliza en la presente invención, "células que proliferan de manera aberrante" (o "proliferación celular aberrante") significa proliferación celular que se desvía del curso normal, apropiado, o esperado. Por ejemplo, proliferación celular aberrante diseñados para aniquilar las células que proliferan de manera aberrante mediante alteración de procesos celulares vitales tales como metabolismo de ADN, síntesis de ADN, transcripción de ADN, y formación del huso del micro-túbulo. Estos también pueden funcionar, por ejemplo, introduciendo lesiones en el ADN que perturban la integridad estructural cromosómica. Los agentes que dañan al ADN se diseñan y administran en formas que tratan de inducir el daño máximo y la muerte celular consecuente en células que proliferan de manera aberrante con un mínimo de daño a células sanas, normales. Hasta la fecha se ha desarrollado una gran variedad de agentes que dañan al ADN. Otros están también en desarrollo. Los agentes que dañan el ADN incluyen agentes quimioterapéuticos y radiación. Por desgracia, la efectividad de los agentes que dañan al ADN para tratar condiciones que implican proliferación celular aberrante ha sido menos que la deseado, particularmente en el tratamiento de cáncer. La selectividad de dichos agentes hacia células que proliferan de manera aberrante con respecto a células sanas (algunas veces conocida como el índice terapéutico) con frecuencia es marginal. Asimismo, todas las células tienen mecanismos detectores y de reparación que pueden funcionar con propósitos opuestos a los agentes que dañan el ADN. Dichos mecanismos de detección, denominados puntos de comprobación del ciclo celular, ayudan a mantener el orden de las diversas etapas de replicación celular y a asegurar que cada paso se ejecute con una alta fidelidad (Hart ell et al . , Science, 246: 629-634 (1989); Weinert et al . , Genes Dev. , 8: 652 (1994)). Cuando las células detectan daño al ADN, incluyendo daño inducido intencionalmente mediante agentes que dañan al ADN, ciertas rutas de señalización activan los puntos de comprobación del ciclo celular y el ciclo de replicación celular temporalmente cesa ("se detiene") . Esta detención deja a las células tiempo para que las células que proliferan de manera aberrante reparen su ADN, con frecuencia hasta un grado suficiente para permitir que las células afectadas continúen viviendo y proliferen. Esta reparación no deseada tiende a socavar los esfuerzos para inducir suficiente daño al ADN para aniquilar las células que proliferan de manera aberrante. Por ejemplo, el agente quimioterapéutico denominado GEMZAR™ (gemcitabina, o 2 ' , 2 ' -difluoro-2' -desoxicitidina) daña al ADN incorporándose por sí mismo en el ADN durante la síntesis. Si se deja sin reparar, el ADN dañado por lo general se torna incapaz de sostener la vida. Sin embargo, en muchas células elegidas como blanco, los puntos de comprobación del ciclo celular detectan el ADN elaborado de manera inapropiada (o dañado de alguna otra forma) . Los puntos de comprobación del ciclo celular activados disparan la detención del ciclo celular durante un tiempo suficiente para permitir que se repare el ADN dañado. Se cree que esta es una manera en la cual las células que proliferan de manera aberrante resisten el efecto aniquilador de célula de los agentes que dañan el ADN tales como agentes quimioterapéuticos, radiación, y otras terapias. Otros agentes que dañan al ADN ocasionan que las células de tumor se detengan en la fase S. Se ha observado que las células de tumor resisten ciertos agentes quimioterapéuticos simplemente deteniéndose en la fase S mientras se administra el agente quimioterapéutico. Después, tan rápido como se retire el fármaco, se repara el daño al ADN, cesa la detención del ciclo celular, y las células avanzan a través del resto del ciclo celular (Shi et al . , Cáncer Res . 61 : 1065-1012 , 2001). Otros agentes terapéuticos ocasionan la detención del ciclo celular en otros puntos de comprobación, incluyendo Gl y G2 (descrito con mayor detalle más adelante) . Los agentes para daño al ADN que activan los puntos de comprobación del ciclo celular se conocen en términos generales en la presente invención como "activadores de punto de comprobación". Los agentes para daño al ADN que activan el punto de comprobación designado "Chkl" (pronunciado como "check- uno") se conocen en la presente invención como "activadores de Chkl". Los inhibidores de dichos puntos de comprobación, de manera general y específica, son conocidos en la presente invención como "inhibidores de punto de comprobación" e "inhibidores de Chkl", respectivamente. Por lo tanto, se espera que la inhibición de varios puntos de comprobación de daño al ADN ayude a evitar que las células reparen terapéuticamente el daño al ADN inducido y a sensibilizar las células elegidas como blanco a los agentes que dañan el ADN. A su vez, se espera que dicha sensibilización incremente el índice terapéutico de estas terapias. Para entender de manera más completa la presente invención, lo siguiente es una discusión más detallada de las fases del ciclo celular y el papel de Chkl. El ciclo celular es estructural y funcionalmente el mismo en su proceso básico y modo de regulación a través de todas las especies eucariotas. El ciclo celular mitótico (somático) consiste de cuatro fases: la fase Gl (espacio), la fase S (síntesis) , la fase G2 (espacio) , y la fase M (mitosis) . Las fases Gl, S, y G2 son llamadas colectivamente la interfaz del ciclo celular. Durante la fase Gl, las actividades bio-sintéticas de la célula avanzan a una velocidad elevada. La fase S comienza cuando inicia la síntesis de ADN, y termina cuando el contenido de 7 ADN del núcleo de la célula se ha duplicado y se forman dos conjuntos idénticos de cromosomas. La célula entra entonces a la fase G2, la cual continua hasta que comienza la mitosis. En la mitosis, los cromosomas se aparean y separan, se forman dos nuevos núcleos, y ocurre la citocinesis en la cual la célula se divide en dos células hija cada una de las cuales recibe un núcleo que contiene uno de los dos conjuntos de cromosomas. La citocinesis termina la fase M y marca el comienzo de la interfase del siguiente ciclo celular. La secuencia en la cual los eventos del ciclo celular proceden está estrictamente regulada, de manera tal que el inicio de un evento de ciclo celular depende de la terminación del evento de ciclo celular previo. Esto permite fidelidad en la duplicación y segregación del material genético de una generación de células somáticas a la siguiente. Se ha reportado que los puntos de comprobación del ciclo celular comprenden por lo menos tres clases distintas de polipéptidos, los cuales actúan en forma secuencial en respuesta a las señales del ciclo celular o defectos en los mecanismos cromosómicos (Carr A. M., Science, 271:314-315, 1996). La primera clase es una familia de proteínas que detecta o percibe el daño al ADN o anormalidades en el ciclo celular. Estos detectores incluyen la proteína mutada de Ataxia-Telangiectasia (Atm) y la proteína relacionada con Rad de Ataxia-Telangiectasia (Atr) . La segunda clase de polipéptidos amplifica y transmite la señal detectada por el detector y queda ejemplificada por Rad53 (Alen et al . , Genes Dev, 8:2416-2488, (1994)) y Chkl. Una tercera clase de polipéptidos incluye efectores de ciclo celular, tales como p53, los cuales median una respuesta celular, por ejemplo, la detención de mitosis y apoptosis . Gran parte del entendimiento actual de la función de los puntos de comprobación del ciclo celular se ha obtenido a partir del estudio de líneas de células derivadas de tumor. En muchos casos, las células de tumor han perdido puntos de comprobación claves del ciclo celular (Hartwell et al . , Science 266: 1821-28 , 1994). Se ha reportado que un paso clave en la evolución de las células hacia un estado neoplásico es la adquisición de mutaciones que inactivan las rutas de punto de comprobación del ciclo celular, tales como aquellas que involucran a p53 (Weinberg R.A., Cell 81 : 323 330, 1995; Levine A. J. , Cell 88: 3234 331, 1997) . La pérdida de estos puntos de comprobación de ciclo celular da como resultado la replicación de células de tumor a pesar del daño al ADN. El tejido no canceroso, el cual tiene puntos de comprobación de ciclo celular intactos, típicamente está aislado contra la perturbación temporal de una ruta individual de punto de comprobación. 'Sin embargo, las células de tumor tienen defectos en las rutas que controlan el avance del ciclo celular de modo tal que la perturbación de puntos de comprobación adicionales las hace particularmente sensibles a los agentes que dañan el ADN. Por ejemplo, las células de tumor que contienen p53 mutante son defectuosas tanto en el punto de comprobación de daño al ADN en Gl como en la capacidad para mantener el punto de comprobación del daño a ADN de G2 (Bunz et al . , Science, 282:1497 501, 1998). Se espera que los inhibidores de punto de comprobación que eligen como blanco el inicio del punto de comprobación de G2 o el punto de comprobación de la fase S disminuyan adicionalmente la capacidad de estas células de tumor para reparar el daño al ADN y, por lo tanto, son candidatos para incrementar el índice terapéutico tanto de radiación como de quimioterapia sistémica (Gesner T., Abstract at SRl Conference: Protein Phosphorylation and Drug Discovery World Summit, marzo de 2003) . En presencia de daño al ADN o de cualquier impedimento para la replicación del ADN, las proteínas de punto de comprobación Atm y Atr inician una ruta de transducción de señal que • conduce a la detención del ciclo celular. Se ha demostrado que Atm desempeña una función en el punto de comprobación de daño al ADN en respuesta a radiación ionizante. Atr es estimulada por agentes que 10 ocasionan rupturas en el ADN de doble cadena, rupturas en el ADN de cadena sencilla, y por agentes que bloquean la radiación al ADN. Chkl es una proteína cinasa que se encuentra corriente abajo de Atm y/o Atr en la ruta de transducción de señal de punto de comprobación de daño al ADN (Sánchez et al., Science, 277:1497 1501, 1997; patente E.U.A. No. 6,218,109). En células de mamífero, Chkl se fosforila en respuesta a agentes que ocasionan daño al ADN incluyendo radiación ionizante (IR) , luz ultravioleta (UV) , e hidroxiurea (Sánchez et al., supra; Lui et al., Genes Dev., 14:1448 1459, 2000). Esta fosforilación que activa a Chkl en células de mamífero es dependiente de Atm (Chen et al., Oncogene, 18:249-256, 1999) y Atr (Lui et al., supra). Asimismo, se ha demostrado que Chkl fosforila tanto a weel (O'Conell et al., EMBO J. , 16:545 554, 1997) como a Pdsl (Sánchez et al., Science, 286:1166 1171, 1999), productos génicos que se sabe son importantes en el control del ciclo celular. Estos estudios demuestran que Chkl de mamífero juega un papel en el punto de comprobación de daño al ADN dependiente de Atm que conduce a la detención en fase S. Recientemente se ha esclarecido un papel para Chkl en las células de mamífero en fase S (Feijoo et al., J. Cell. Biol., 154:913-923, 2001; Zhao et al., PNAS USA, 99:14795- 11 800, 2002; Xiao et al . , J. Biol . Chem . , 278 (24) : 21161-21773, 2003; Sorensen et al., Cáncer Cell , 3 (3) : 247-58, 2003) que resalta el papel de Chkl en el monitoreo de la integridad de la síntesis de ADN. Chkl invoca una detención en fase S mediante fosforilación de Cdc25A, la cual regula la actividad de ciclinaA/Cdk2 (Xiao et al . , supra y Sorensen et al . , supra). Chkl también invoca una detención en G2 mediante fosforilación e inactivación de Cdc25C, la fosfatasa de especificidad doble que normalmente desfosforila a ciclina-B/cdc2 (también conocida como Cdkl) a medida que la célula pasa de G2 hacia la mitosis (Fernery et al . , Science, 277:1495 7, 1997; Sánchez et al . , supra; Matsuoka et al . , Science, 282:1893-1897 , 1998; y Blasina et al . , Curr. Biol . , 9:1 10, 1999). En ambos casos, la regulación de la actividad de Cdk induce una detención del ciclo celular para evitar que las células entren a la mitosis en presencia de daño al ADN o de ADN sin duplicar. Clases adicionales de inhibidores de punto de comprobación de ciclo celular funcionan en cualquiera de la fase Gl o G2/M. UCN-01, o 7-hidroxiestaurosporina, originalmente se aisló como un inhibidor de cinasa no específico que tiene su efecto primario sobre la proteína cinasa C, pero recientemente se ha descubierto que inhibe la actividad de Chkl y abroga el punto de comprobación de ciclo celular en G2 (Shi et al . , supra). Por lo tanto, UCN- 12 01 es un inhibidor de Chkl no selectivo. Como resultado, UCN-01 es tóxico para las células a dosis elevadas. A dosis bajas, éste inhibe de manera no específica muchas cinasas celulares y también inhibe el punto de comprobación en Gl (Tenzer y Pruschy, Curr. Med. Chem . Anti-Cancer Agents, 3:35-46, 2003) . UCN-01 se ha utilizado en conjunto con terapias contra cáncer, tales como radiación, el agente anti-cáncer camptotecina (Tenzer y Pruschy, supra) , y gemcitabina (Shi et al . , supra), con éxito limitado. Además, UCN-01 también se ha utilizado para potenciar los efectos de la reparación de no apareamiento (MMR) de ADN inducido por temozolomida (TMZ) en células de glioblastoma (Hirose et al . , Cáncer Res . , 51:5843-5849, 2001). En la clínica, UCN-01 es un agente quimioterapéutico no tan efectivo como se esperaba, posiblemente debido a una falla en el programa de tratamiento y a una carencia de identificación de objetivos moleculares clave particulares (Grant y Roberts, Drug Resistance Updates, 6:15-26, 2003). Por lo tanto, Mack et al . reportan la potenciación dependiente del ciclo celular de cisplatina por parte de UCN-01 en una línea de célula de carcinoma de pulmón de célula no pequeña en cultivo, pero no identifican con especificidad el punto o puntos de comprobación de ciclo celular claves elegidos como blanco por UCN-01. (Mack et al . , Cáncer Chemother. Pharmacol . , 13 51 (4) :337-348, 2003) . Existen muchas otras estrategias para sensibilizar las células de tumor al tratamiento con agentes quimioterapéuticos que afectan el ciclo celular. Por ejemplo, la administración de 2-amino-purina abroga los mecanismos de punto de comprobación múltiples de ciclo celular, tales como detención en Gl inducida por mimosina o la detención en fase S inducida por hidroxiurea, lo gue permite que la célula pase a y a través de la mitosis (Andreassen et al . , Proc Nati Acad Sci USA, 86: 2212-2216, 1992) . Cafeína, una metilxantina, también se ha utilizado para incrementar la citotoxicidad de los agentes que dañan al ADN, tales como cisplatina y radiación ionizante, mediando el avance a través del punto de comprobación de G2 e induciendo de esta manera la muerte celular. (Bracey et al . , Clin . Cáncer Res . , 3:1371-1381, 1997). Sin embargo, la dosis de cafeína utilizada para lograr la abrogación del ciclo celular supera los niveles clínicamente aceptables y no es una opción terapéutica viable. De manera adicional, se han utilizado nucleótidos anti-sentido para la cinasa Chkl para incrementar la sensibilidad al inhibidor de topoisomerasa BNP1350 (Yin et al . , Biochem . Biophys . Res . Commun . , 295: 435-44 , 2002), pero demuestran problemas típicamente asociados con el tratamiento de anti-sentido y terapia de genes. 14 Se han descrito inhibidores de Chkl en los documentos WO 02/070494, WO 04/014876, y WO 03/101444. Los inhibidores de Chkl adicionales incluyen compuestos de diarilurea, por ejemplo, compuestos de urea sustituida con arilo y heteroarilo descritos en la publicación de patente E.U.A. No. 2003-0069284 Al; metilxantinas y compuestos relacionados (Fan et al . , Cáncer Res . 55:1649-54, 1995); ureidotiofenos (WO 03/029241) ; N-pirrolopiridinil-carboxamidas (WO 03/28724); oligonucleótidos de Chkl anti-sentido (WO 01/57206) ; antagonistas de receptor de Chkl (WO 00/16781) ; derivados de carboxamida heteroaromáticos (WO 03/037886); aminotiofenos (WO 03/029242); (indazolil)-bencimidazoles (WO 03/004488); heterocíclico-hidroxi-imino-fluorenos (WO 02/16326) ; derivados que contienen estructura base de escitonemano, (escitonemina) (patente E.U.A. No. 6,495,586); heteroarilbenzamidas (WO 01/53274); compuestos de indazol (WO 01/53268); indolacarbazoles (véase Tenzer et al . , supra); derivados de cromano (WO 02/070515); paulonas (Schuitz et al . , J. Med. Chem . , Vol . 42:2909-2919, (1999)); indenopirazoles (WO 99/17769); flavonas (Sedlacek et al . , Int J. Oncol . , 9:1143-1168, (1996)); derivados peptídicos del bucle peptídico de serina treonina cinasas (WO 98/53050); y oxindoles (WO 03/051838). Sin embargo, sigue existiendo la necesidad en la técnica respecto a inhibidores de Chkl efectivos y 15 selectivos de Chkl. La presente invención enfrenta estas y otras necesidades.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a inhibidores potentes y selectivos de la cinasa de punto de comprobación Chkl. Los presentes inhibidores de Chkl son útiles para tratar indicaciones que implican proliferación celular aberrante, y como agentes quimio-sensibilizadores y radio-sensibilizadores en el tratamiento de indicaciones relacionadas con el daño o lesiones al ADN en la duplicación del ADN. Por lo tanto, un aspecto de la presente invención es proveer compuestos de la fórmula estructural (I) . Los compuestos son útiles en un método para inhibir Chkl que comprende un paso de administrar una cantidad efectiva de un compuesto de la fórmula estructural (I) a un individuo. Los compuestos de la fórmula (I) tienen una fórmula estructural: ( i : 16 en la cual X1 es nada, -O-, -S-, -CH2-, o -NÍR1)-; ?2 es _0-? -s-, o -NÍR1)-; Y es 0 ó S; o =Y representa dos átomos de hidrógeno unidos a un átomo de carbono común; W se selecciona a partir del grupo que consiste de heteroarilo, arilo, heterocicloalquilo, cicloalquilo, y alquilo de C?_s sustituido con un grupo heteroarilo o arilo, en el cual dicho grupo arilo de W está opcionalmente sustituido con uno a cuatro sustituyentes representados por R2, dicho grupo heteroarilo de W está opcionalmente sustituido con uno a cuatro sustituyentes representados por R5, y dichos grupos heterocicloalquilo y cicloalquilo de W están opcionalmente sustituidos con uno o dos sustituyentes alquilo de C?-6; R1 se selecciona a partir del grupo que consiste de hidro, alquilo de C?_6, alquenilo de C2_5, alquinilo de C2-e, y arilo; R2 se selecciona a partir del grupo que consiste de heteroarilo, halógeno, alquilo de C?_6 opcionalmente sustituido, alquenilo de C2_6, OCF3, N02, CN, NC, N(R3)2, OR3, C02R3, C(0)N(R3)2, C(0)R3, N(R1)COR3, N (R1) C (O) OR3, N (R1) C (O) -alquilen (C?_6) -C (O) R3, N (R1) C (O) -alquilen (C?_6) -C (O) OR3, N (R1) C (O) -alquilen (C?_6) -OR3, N (R1) C (O) -alquilen (C?_6) -NHC(0)OR3, N(R1)C(0) -alquilen (C?_6)-S02NR3, alquilen (C?_6) -OR3, y SR3; 17 R3 se selecciona a partir del grupo que consiste de hidro, alquilo de C?~6, alquenilo de C2_6, cicloalquilo, arilo, heteroarilo, S02R4, halógeno, alquilo de C?-6 sustituido con uno o más de halógeno, hidroxi, arilo, heteroarilo, heterocicloalquilo, N(R4)2, y S02R4, alquilen (C_6) -arilo, alquilen (C?~ß) -heteroarilo, alquilen (C?-6) -heterocicloalquilo de C3_8, alquilen (C?_5) -S02-arilo, alquilen (C?_6) -N (R4) 2 opcionalmente sustituido, OCF3, alquilen (C?-d) -N (R4)3+, heterocicloalquilo de C3-8, y CH (alquilen (C?_6) -N(R4) 2) 2, o dos grupos R3 se toman juntos para forma.r un anillo alifático de 3 a 8 miembros opcionalmente sustituido; R4 se selecciona a partir del grupo que consiste de nada, hidro, alquilo de C-6, cicloalquilo, arilo, heteroarilo, alquilen (C?_6) -arilo, y S02-alquilo de C?-6, o dos grupos R4 se toman juntos para formar un anillo de 3 a 8 miembros opcionalmente sustituido; R5 se selecciona a partir del grupo que consiste de alquilo de C?_6, alquinilo de C2_6, arilo, heteroarilo, heterocicloalquilo, N(R3)2, N(Rx)C(0)R3, N(R1)C02R3, OR3, halógeno, N3, CN, alquilen (C?-6) -arilo, alquilen (C?_6) -N (R3) 2, C(0)R3, C(0)0R3, C(0)N(R3)2, CF3, y Alquilen (Ci R6 se selecciona a partir del grupo que consiste de hidro, alquilo de C?_6, alguenilo de C2_6, cicloalguilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, S02R4, alquilo de C?-6 sustituido con uno o más de halógeno, hidroxi, arilo, heteroarilo, heterocicloalquilo, N(R4)2, y S02R4, alquilen (C?-6) -arilo, alquilen (C?_6) -heteroarilo, alquilen (C?-6) -heterocicloalquilo de C3-8, alquilen (C?_6) -S02-arilo, alquilen (C?_6) -N (R4) 2 opcionalmente sustituido, 0CF3, alquilen (C?_6) -N (R4) 3+, heterocicloalquilo de C3_a, y CH (alquilen (C?_6) -NR4) 2) 2; R7 y R8 , de manera independiente, se seleccionan a partir del grupo que consiste de hidro, alquilo de C?_6, halógeno, OR3, N(R3)2, C(0)N(R3)2, alquilen (C?_3) -arilo, CN, N02, C(0)0RX1, C(0)R1:L, y SR11; R9 es -C=C-R10 o -CF3, o un grupo R8 y un grupo R9 se toman junto con los átomos de carbono a los cuales éstos están unidos para formar un sistema de anillo alifático o aromático carbocíclico de 5 o 6 miembros que contiene opcionalmente uno a tres heteroátomos que se seleccionan a partir del grupo que consiste de O, NR4, y S; R10 se selecciona a partir del grupo que consiste 19 de hidro, alquilo de C?-6, arilo, alquilen (C?-5) -arilo, heteroarilo, y alquilen (C?_6) -heteroarilo; R11 se selecciona a partir del grupo que consiste de hidro, alquilo de C?_6, alquenilo de C2_6, arilo, alquilen (C?_3) -arilo, cicloalquilo de C3_8, y alquilen (C?_3) -cicloalquilo de C3_8; n es 1 ó 2; o una sal, o un profármaco, o un solvato de los mismos farmacéuticamente aceptables. Otro aspecto de la presente invención es proveer composiciones farmacéuticas que comprendan uno o más compuestos de la fórmula estructural (I) , y el uso de las composiciones en un tratamiento terapéutico de una enfermedad o trastorno, en el cual la inhibición de Chkl, in vivo o ex vivo, provee un beneficio terapéutico o es de interés en investigación o para diagnóstico. Incluso otro aspecto de la presente invención es proveer un método para sensibilizar células en un individuo sometido a tratamiento quimioterapéutico o radio-terapéutico para una condición médica que comprende administración de un compuesto de la fórmula estructural (I) en combinación con un agente quimioterapéutico, un agente radio-terapéutico, o ambos, al individuo. Una indicación no limitativa tratada mediante este método es un cáncer. 20 Otro aspecto de la presente invención es proveer un método para inhibir o evitar la proliferación celular aberrante. En una modalidad, un método comprende poner en contacto una población de células que comprende células que proliferan de manera aberrante con por lo menos un activador de Chkl en una cantidad y durante un tiempo suficiente para sincronizar sustancialmente la detención del ciclo celular entre las células que proliferan de manera aberrante. Después de lograr la sincronización sustancial de la detención del ciclo celular en la población de células, la población de células se pone en contacto con por lo menos un inhibidor de Chkl en una cantidad y durante un tiempo suficiente para abrogar sustancialmente la detención del ciclo celular. Estos y otros aspectos de la presente invención se harán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada de las modalidades preferidas.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Los compuestos de la presente invención tienen una fórmula estructural (I) : 21 en la cual X1 es nada, -O-, -S-, -CH2-, o -N(RX)-; X2 es -O-, -S-, o -N(RX)-; Y es 0 ó S; o =Y representa dos átomos de hidrógeno unidos a un átomo de carbono común; W se selecciona a partir del grupo que consiste de heteroarilo, arilo, heterocicloalquilo, cicloalquilo, y alquilo de C?_6 sustituido con un grupo heteroarilo o arilo, en el cual dicho grupo arilo de W está opcionalmente sustituido con uno a cuatro sustituyentes representados por R2, dicho grupo heteroarilo de W está opcionalmente sustituido con uno a cuatro sustituyentes representados por R5, y dichos grupos heterocicloalquilo y cicloalquilo de W están opcionalmente sustituidos con uno o dos sustituyentes alquilo de C?_6; R1 se selecciona a partir del grupo que consiste de hidro, alquilo de C?_6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, y arilo; R2 se selecciona a partir del grupo que consiste de heteroarilo, halógeno, alquilo de C?_6 opcionalmente 22 sustituido, alquenilo de C2_6, OCF3, N02, CN, NC, N(R3)2, OR3, C02R3, C(0)N(R3)2, C(0)R3, N(RX)C0R3, N (R1) C (0) OR3, N (R1) C (0) -alquilen (C?_6) -C (0) R3, N (R1) C (0) -alquilen (C?_6) -C (0) OR3, N (R1) C (O) -alquilen (C?_6) -OR3, N (R1) C (O) -alquilen (C?_6) -NHC(0)OR3, N(RX)C (O) -alquilen (C?_6)-S02NR3, alquilen (C?_6) -OR3, y SR3; R3 se selecciona a partir del grupo que consiste de hidro, alquilo de C?_6, alquenilo de C2_6, cicloalquilo, arilo, heteroarilo, S02R4, halógeno, alquilo de C?-6 sustituido con uno o más de halógeno, hidroxi, arilo, heteroarilo, heterocicloalquilo, N(R)2, y S02R4, alquilen (C?_6) -arilo, alquilen (C?_6) -heteroarilo, alquilen (C?-6) -heterocicloalquilo de C3_8, alquilen (C?~6) -S02-arilo, alquilen (C?_6) -N (R4)2 opcionalmente sustituido, 0CF3, alquilen (C?_6) -N (R4) 3+, heterocicloalquilo de C3_8, y CH (alquilen (C?-6) -N (R4)2)2, o dos grupos R3 se toman juntos para formar un anillo alifático de 3 a 8 miembros opcionalmente sustituido; R4 se selecciona a partir del grupo que consiste de nada, hidro, alquilo de C?_6, cicloalquilo, arilo, heteroarilo, alquilen (C?-e) -arilo, y S02-alquilo de C?-e, o dos grupos R4 se toman juntos para formar un anillo de 3 a 8 miembros opcionalmente sustituido; R5 se selecciona a partir del grupo que consiste de alquilo de C?_6, alquinilo de C2-6, arilo, heteroarilo, 23 heterocicloalquilo, N(R3)2, N(Rx)C(0)R3, N(R1)C02R3, OR3, halógeno, N3, CN, alquilen (C?_6) -arilo, alquilen (C?_6) -N (R3) 2, C(0)R3, C(0)0R3, C(0)N(R3)2, CF3, y Alquilen (C?_3 R6 se selecciona a partir del grupo que consiste de hidro, alquilo de C?_6, alquenilo de C2_6, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, S02R4, alquilo de C?-6 sustituido con uno o más de halógeno, hidroxi, arilo, heteroarilo, heterocicloalquilo, N(R4)2, y S02R4, alquilen (C?_6) -arilo, alquilen (C_6) -heteroarilo, alquilen (C?_e) -heterocicloalquilo de C3_8, alquilen (C?_d) -S02-arilo, alquilen (C?-6) -N (R4) 2 opcionalmente sustituido, OCF3, alquilen (C?-e) -N (R4) 3+, heterocicloalquilo de C3_8, y CH (alquilen (C?_6) -NR4) 2) 2; R7 y R8 , de manera independiente, se seleccionan a partir del grupo que consiste de hidro, alquilo de C_6, halógeno, OR3, N(R3)2, C(0)N(R3)2, alquilen (C?_3) -arilo, CN, N02, C(0)OR1:L, C(0)R1X, y SR11; R9 es -C=C-R10 o -CF3, o un grupo R8 y un grupo R9 se toman junto con los átomos de carbono a los cuales éstos están unidos para formar un sistema de anillo alifático o 24 aromático carbocíclico de 5 o 6 miembros que contiene opcionalmente uno a tres heteroátomos que se seleccionan a partir del grupo que consiste de 0, NR4, y S; R10 se selecciona a partir del grupo que consiste de hidro, alquilo de C?_6, arilo, alquilen (C?_6) -arilo, heteroarilo, y alquilen (C_6) -heteroarilo; R11 se selecciona a partir del grupo que consiste de hidro, alquilo de C?_6, alquenilo de C2_6, arilo, alquilen (C?_3) -arilo, cicloalquilo de C3_8, y alquilen (C?_3) -cicloalquilo de C3_8; n es 1 ó 2; o sales, o profármacos, o solvatos de los mismos farmacéuticamente aceptables. Los compuestos preferidos de la presente invención son aquellos en los cuales X1 y X2 son -N(H)~; Y es 0 ó S; y W es heteroarilo opcionalmente sustituido. En una modalidad, W es heteroarilo que contiene por lo menos dos heteroátomos que se seleccionan a partir del grupo que consiste de N, 0, y S, dicho anillo heteroarilo está opcionalmente sustituido con uno a cuatro sustituyentes que se seleccionan a partir del grupo que consiste de alquilo de C?~6 opcionalmente sustituido, arilo, heteroarilo, N(R3)2, OR3, C(0)N(R3)2, C02R3, CN, CF3, y halógeno, en los cuales R3 es como se definió previamente. 25 Otros compuestos preferidos de la fórmula estructural (I) son aquellos en los cuales W se selecciona a partir del grupo que consiste de piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, y triazinilo, opcionalmente sustituidos con uno a cuatro sustituyentes que se seleccionan a partir del grupo que consiste de alquilo de C?-6, arilo, heteroarilo, N(R3)2, C(0)N(R3)2, C02R3, OR3, CF3, y halógeno. Los compuestos preferidos adicionales de la fórmula estructural (I) son aquellos en los cuales R6 se selecciona a partir del grupo que consiste de alquilo de C?-6 opcionalmente sustituido, alquilen (C?_6) -N (R4) 2, alquilen (C?_6) -heteroarilo, alquilen (C?-g) -heterocicloalquilo, y heterocicloalquilo de C3_8. En otras modalidades preferidas, R6 se selecciona a partir del grupo que consiste de alquilo de C?_6, (CH2) ?_6-N (CH3) 2, (CH2) ?_6-N (CH3) 2, 26 H H 27 28 H 20 29 H H 25 30 25 31 En otras modalidades preferidas, W se selecciona ei grupo que consiste de 32 sustituidos opcionalmente con uno a cuatro sustituyentes que se seleccionan a partir del grupo que consiste de alquilo de C?-6, alquinilo de C2-e, arilo, heteroarilo, CN, C02R3, N(R3)2, OR3, CF3, y halógeno. En modalidades más preferidas, W es o En una modalidad más preferida, W es pirazinilo y X1 y X2 son cada uno N(H) . 33 En otras modalidades preferidas, W es pirazin-2-ilo sustituido con un grupo R5 en la posición 5, es decir, En modalidades más preferidas, R5 es CF3, CH3, o nada. Otras modalidades más preferidas incluyen aquellas en las cuales R7 es H; R8 es H; R9 se selecciona a partir del grupo que consiste de -C=CH y CF3; o R8 y R9 se toman juntos con los átomos de carbono a los cuales éstos están unidos para formar o Incluso en otra modalidad más preferida, R se selecciona a partir de - (CH2) 2N (CH3) 2, 34 Tal como se utiliza en la presente invención, el término "alquilo" incluye grupos hidrocarburo de cadena recta y ramificada que contienen el número indicado de átomos de carbono, típicamente metilo, etilo, y grupos 35 propilo y butilo de cadena recta y ramificada. A menos gue se indique de otra manera, el grupo hidrocarburo puede contener hasta 20 átomos de carbono. El término "alquilo" incluye "alquilo con estructura en puente", es decir, un grupo hidrocarburo bicíclico o policíclico de C6-C?6, por ejemplo, norbornilo, adamantilo, biciclo [2.2.2] -octilo, biciclo [2.2.1] -heptilo, biciclo [3.2.1] -octilo, o decahidronaftilo. Los grupos alquilo pueden estar opcionalmente sustituidos, por ejemplo, con hidroxi (OH) , halógeno, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, amino (N(R3)2), y sulfonilo (S02R3) , en los cuales R3 es como se definió previamente. El término "cicloalquilo" se define como un grupo hidrocarburo de C3_8 cíclico, por ejemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciciohexilo, o ciclopentilo. "Heterocicloalquilo" se define en forma similar a la de cicloalquilo, excepto que el anillo contiene uno a tres heteroátomos que se seleccionan de manera independiente a partir del grupo que consiste de oxígeno, nitrógeno, y azufre. Los grupos cicloalquilo y heterocicloalquilo pueden ser sistemas de anillo saturados o parcialmente insaturados sustituidos opcionalmente con, por ejemplo, uno a tres grupos, que se seleccionan de manera independiente a partir del grupo que consiste de alquilo de C?-4, alquilen (C?_3) -OH, C(0)NH2, NH2, oxo (=0), arilo, 36 trifluoroetanoilo, y OH. Los grupos heterocicloalquilo opcionalmente también pueden estar sustituidos en N con alquilo de C-6, hidroxi-alquilo de C?_6, alquilen (C?_3) -arilo, o alquilen (C?_3) heteroarilo. El término "alquenilo" se define en forma idéntica a la de "alquilo", excepto que el grupo contiene un doble enlace carbono-carbono. El término "alquinilo" se define en forma idéntica a la de "alquilo", excepto que el grupo contiene un triple enlace carbono-carbono. El término "alquileno" se refiere a un grupo alquilo que tiene un sustituyente. Por ejemplo, el término "alquilen (C-6) -C (O) OR" se refiere a un grupo alquilo que contiene uno a seis átomos de carbono sustituido con un grupo -C(0)OR. El grupo alquileno está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes previamente listados como un sustituyente opcional de alquilo. El término "halógeno" o "halo" se define en la presente invención como flúor, bromo, cloro, y yodo. El término "arilo", solo o en combinación, se define en la presente invención como un grupo aromático monocíclico o policíclico, de preferencia un grupo aromático monocíclico o bicíclico, por ejemplo, fenilo o naftilo. A menos que se indique de otra manera, un grupo arilo puede no estar sustituido o estar sustituido con uno 37 o más, y en particular uno a cuatro grupos que se seleccionan de manera independiente a partir de, por ejemplo, halógeno, alquilo de C?_6, alquenilo de C2_6, OCF3, N02, CN, NC, N(R3)2, OR3, C02R3, C(0)N(R3)2, C(0)R3, N(Rx)C0R3, N(Rx)C(0)OR3, N (R1) C (0) OR3, N (R1) C (0) -alquilen (C?_3) -C(0)R3, N(Rx)C(0) -alquilen (C?_3)-C(0)OR3, CR^CÍO)-alquilen (C?_3) -OR3, N (R1) C (0) -alquilen (C?_3) -NHC (0) OR3, NÍR^CÍO) -alquilen (C?_3) -S02NR3, alquilen (C?_3) -OR1, y SR3, en los cuales R1 y R3 son como se definieron previamente. Los grupos arilo de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, fenilo, naftilo, tetrahidronaftilo, clorofenilo, metilfenilo, metoxifenilo, trifluorometilfenilo, nitro-fenilo, 2 , 4-metoxiclorofenilo, y similares. Los términos "aril-alquilo de C?-3" y "heteroaril-alquilo de C_3" se definen como un grupo arilo o heteroarilo que tiene un sustituyente alquilo de C?_3. El término "heteroarilo" se define en la presente invención como un sistema de anillo monocíclico o bicíclico que contiene uno o dos anillos aromáticos y que contiene por lo menos un átomo de nitrógeno, oxígeno o azufre en un anillo aromático. A menos que se indique de otra manera, un grupo heteroarilo puede estar no sustituido o estar sustituido con uno o más, y en particular uno a cuatro, sustituyentes que se seleccionan a partir de, por ejemplo, alquilo de C?_6, arilo, heteroarilo, CF3, CN, C(0)N(R3)2, 38 C02R2, N(R3)2, OR3, y halógeno, en los cuales R3 es como se definió previamente. Los ejemplos de grupos heteroarilo incluyen, pero no se limitan a, tienilo, furilo, piridilo, oxazolilo, quinolilo, isoquinolilo, indolilo, triazinilo, triazolilo, isotiazolilo, isoxazolilo, imidizolilo, benzotiazolilo, pirazinilo, pirimidinilo, tiazolilo, y tiadiazolilo. El término "hidro" se define como -H. El término "hidroxi" se define como -OH. El término "nitro" se define como -N02. El término "ciano" se define como -CN. El término "isociano" se define como -NC. El término "trifluorometoxi" se define como -OCF3. El término "azido" se define como -N3. El término "anillo de 3 a 8 miembros" tal como se utiliza en la presente invención se refiere a grupos carbocíclicos y heterocíclicos alifáticos o aromáticos, incluyendo, pero sin limitarse a, morfolinilo, piperidinilo, fenilo, tiofenilo, furilo, pirrolilo, imidazolilo, pirimidinilo, y piridinilo, opcionalmente sustituidos con uno o más, y en particular uno a tres, grupos ejemplificados anteriormente para grupos arilo. El contenido de átomos de carbono de las porciones que contienen hidrocarburo se indica mediante un 39 subíndice que designa el número mínimo y máximo de átomos de carbono en la porción, por ejemplo, "alquilo de C?-6" se refiere a un grupo alquilo que tiene de uno a seis átomos de carbono, inclusive. En las estructuras en la presente invención, para un enlace que carece de un sustituyente, el sustituyente es metilo, por ejemplo, Cuando se indica que ningún sustituyente está unido a un átomo de carbono en un anillo, se entiende que el átomo de carbono contiene el número apropiado de átomos de hidrógeno. Además, cuando se indica que ningún sustituyente está unido a un grupo carbonilo o a un átomo de nitrógeno, por ejemplo, se entiende que el sustituyente es hidrógeno, por ejemplo, O O II II R—C es R—C-H y R-N es R-NH2 .

La abreviatura "Me" es metilo. Las abreviaturas CO y C(O) son carbonilo (C=0) . La notación N(RX)2 en la cual x representa un carácter alfanumérico o numérico, tal como por ejemplo Ra, Rb, R3, R4 y similares, se utiliza para indicar dos grupos 40 Rx unidos a un átomo de nitrógeno común. Cuando se utiliza en dicha notación, el grupo Rx puede ser el mismo o diferente, y se selecciona a partir del grupo como el definido por el grupo Rx. "Inhibidor de Chkl" significa cualquier compuesto, conocido o que se descubra posteriormente, ya sea de origen natural o sintético, que pueda abrogar por lo menos parcialmente la actividad de punto de comprobación del ciclo celular de la protéína Chkl. La abrogación del punto de comprobación de ciclo celular se logra cuando el o los mecanismos de punto de comprobación celular es o son superados lo suficiente para permitir que la célula pase de la fase del ciclo celular en la cual ésta se .detiene hacia la siguiente fase en el ciclo celular o para permitir que la célula pase directamente a muerte celular. La abrogación del punto de comprobación de ciclo celular permite que las células acarreen el daño o las imperfecciones a fases subsiguientes del ciclo celular, induciendo o promoviendo de esta manera la muerte celular. La muerte celular puede ocurrir mediante cualquier mecanismo asociado, incluyendo apoptosis y catástrofe mitótica. "Activador de Chkl" significa cualquier agente conocido o que se descubra posteriormente que tenga la capacidad de activar la actividad de cinasa Chkl en la reparación del ADN y homeostasis en los puntos de 41 comprobación de ciclo celular, y que por lo tanto induzca la detención por lo menos parcial del ciclo celular. Los activadores de Chkl incluyen agentes que pueden detener el ciclo celular en cualquier fase del ciclo de la célula, cuya fase puede ser conocida en la presente invención como la "fase objetivo" para dicho activador. Las fases objetivo incluyen cualquiera de las fases del ciclo celular excepto mitosis, es decir, la fase Gl, fase S y fase G2. Los activadores de Chkl útiles en la invención incluyen agentes que dañan el ADN, tales como agentes quimioterapéuticos y/o radiación. Los activadores de Chkl apropiados también incluyen agentes radio-terapéuticos, tales como radiación ionizante o radiación ultravioleta. Los activadores de Chkl por radiación incluyen, pero no se limitan a, radiación gamma, radiación con rayos X, luz ultravioleta, luz visible, radiación infrarroja, radiación de microondas, y mezclas de las mismas. "Inhibir la proliferación celular aberrante" significa retardar o eliminar la velocidad a la cual proliferan las células que proliferan de manera aberrante. Esta inhibición puede ser el resultado ya sea de una velocidad disminuida de duplicación, una velocidad incrementada de muerte celular, o ambas. La muerte celular puede ocurrir mediante cualquier mecanismo, incluyendo apoptosis y catástrofe mitótica. 42 "Prevenir la proliferación celular aberrante" significa inhibir la proliferación celular aberrante antes de su aparición, o inhibir la recurrencia de la misma. "Zn vivo" significa dentro de un individuo vivo, tal como dentro de un animal o humano. En este contexto, los agentes se pueden utilizar terapéuticamente en un individuo para retardar o eliminar la proliferación de células gue se repliquen de manera aberrante. Los agentes también se pueden utilizar como un profiláctico para evitar la aparición o recurrencia de proliferación celular aberrante o la manifestación de síntomas asociados con la misma. "Ex vivo" significa fuera de un individuo vivo. Los ejemplos de poblaciones celulares ex vivo incluyen cultivo de células in vitro y muestras biológicas tales como muestras de fluido o tejido provenientes de humanos o animales. Dichas muestras se pueden obtener utilizando métodos bien conocidos en la técnica. Los ejemplos de muestras fluidas biológicas incluyen sangre, fluido cerebro-espinal, orina, saliva. Los ejemplos de muestras de tejido incluyen tumores y biopsias de los mismos. En este contexto, los compuestos de la presente invención pueden estar en numerosas aplicaciones, tanto terapéuticas como experimentales . El término "radio-sensibilizador", tal como se 43 utiliza en la presente invención, se define como un compuesto, administrado a un humano u otro animal en una cantidad terapéuticamente efectiva para incrementar la sensibilidad de las células hacia radiación electro-magnética y/o para promover el tratamiento de enfermedades que pueden ser tratadas con radiación electromagnética. Los términos "radiación electromagnética" y "radiación" tal como se utilizan en la presente invención incluyen, pero no se limitan a, radiación que tiene la longitud de onda de 10-20 hasta 100 metros. La presente invención incluye todos los posibles estereoisómeros e isómeros geométricos de los compuestos de la fórmula estructural (I) . La presente invención incluye no solamente compuestos racémicos, sino también isómeros ópticamente activos. Cuando un compuesto de la fórmula estructural (I) se desea como un solo enantiómero, éste se puede obtener ya sea mediante resolución del producto final o mediante síntesis estereoespecífica ya sea a partir de un material de partida isoméricamente puro o a través del uso de un reactivo auxiliar quiral, por ejemplo, véase Ma et al . , Tetrahedron : Asymmetry, 8 (6) , páginas 883-888, (1997). La resolución del producto final, de un intermediario, o de un material de partida se puede lograr utilizando cualquier método apropiado conocido en la técnica. De manera adicional, en situaciones en las cuales son posibles 44 tautómeros de los compuestos de la fórmula estructural (I) , la presente invención pretende incluir todas las formas tautoméricas de los compuestos. Como se demuestra posteriormente en la presente invención, estereoisómeros específicos pueden presentar una capacidad excepcional para inhibir Chkl en combinación con tratamientos quimioterapéuticos o radio-terapéuticos. También se pueden utilizar profármacos de compuestos de la fórmula estructural (I) , como el compuesto, en un método de la presente invención. Esta bien establecido que se ha utilizado exitosamente una estrategia con profármaco, en la cual un compuesto se transforma en derivado hasta una forma apropiada para formulación y/o administración, después se libera como un fármaco in vivo, para alterar transitoriamente (por ejemplo, bio-reversibilidad) las propiedades fisicoquímicas del compuesto (véase, H. Bundgaard, Ed. , "Design of Prodrugs", Elsevier, Amsterdam, (1985) ; Silverman, "The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action", Academic Press, San Diego, capítulo 8, (1992); Hillgren et al . , Med. Res . Rev. , 15, 83, (1995) ) . Los compuestos de la presente invención pueden contener uno o más grupos funcionales. Los grupos, funcionales, si se desea o si fuera necesario, se pueden modificar para proveer un profármaco. Los profármacos 45 apropiados incluyen, por ejemplo, derivados de ácido, tales como amidas y esteres. Los expertos en la técnica también apreciarán que se pueden utilizar N-óxidos como un profármaco. Tal como se utiliza en la presente invención, el término- "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a compuestos de la fórmula estructural (I) que contienen una porción con carácter ácido y que forman sales que tienen cationes apropiados. Los cationes farmacéuticamente aceptables apropiados incluyen cationes de metal alcalino (por ejemplo, sodio o potasio) y de metal alcalinotérreo (por ejemplo, calcio o magnesio) . Además, las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la fórmula estructural (I) que contienen un centro básico son sales acidas de adición que se forman con ácidos farmacéuticamente aceptables. Los ejemplos no limitativos incluyen las sales clorhidrato, bromhidrato, sulfato, bisulfato, fosfato, bifosfato, acetato, benzoato, succinato, fumarato, maleato, lactato, citrato, tartrato, gluconato, metansulfonato, bencensulfonato, y p-toluensulfonato. En vista de lo anterior, cualquier referencia a compuestos de la presente invención que aparezca en la presente invención pretende incluir los compuestos de la fórmula estructural (I) así como las sales o solvatos de los mismos farmacéuticamente aceptables. 46 Los compuestos de la presente invención se pueden administrar terapéuticamente como el compuesto químico puro, pero es preferible administrar los compuestos de la fórmula estructural (I) como una composición o formulación farmacéutica. Por lo tanto, la presente invención provee una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la fórmula (I) junto con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable para el mismo. También se provee un procedimiento para preparar una composición farmacéutica que comprende mezclar un compuesto de la fórmula (I) con un diluyente o vehículo para el mismo farmacéuticamente aceptable. Por consiguiente, la presente invención también provee formulaciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la fórmula estructural (I) , o una sal, profármaco, o solvato del mismo farmacéuticamente aceptable, junto con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables y, de manera opcional, otros ingredientes terapéuticos y/o profilácticos. Los vehículos son "aceptables" en el sentido de ser compatibles con los otros ingredientes de la formulación y no perjudiciales para el receptor de los mismos. La inhibición de la cinasa de punto de comprobación, típicamente se mide utilizando una prueba dosis-respuesta en la cual un sistema de prueba sensible se 47 pone en contacto con un compuesto de interés a través de un intervalo de concentraciones, incluyendo concentraciones a las cuales no se observa o se observa un efecto mínimo, a través de concentraciones más altas en las cuales se observa un efecto parcial, hasta concentraciones de saturación a las cuales se observa un efecto máximo. Teóricamente, dichas pruebas del efecto dosis-respuesta de los compuestos inhibidores se pueden describir como una curva sigmoidal que expresa un grado de inhibición como una función de la concentración. La curva también teóricamente pasa a través de un punto en el cual la concentración es suficiente para reducir la actividad de la enzima de punto de comprobación hasta un nivel que sea 50% de aquel de la diferencia entre la actividad enzimática mínima y máxima en la prueba. Esta concentración se define como la Concentración Inhibidora (50%) o valor CI50. La determinación de los valores de CI50 de preferencia se efectúa utilizando técnicas de ensayo bioquímico convencionales (acelulares) o técnicas de ensayo basadas en célula. Las comparaciones de la eficacia de los inhibidores con frecuencia se proveen con referencia a valores de CI50 comparativos, en las cuales un valor de CI50 más alto indica que el compuesto de prueba es menos potente, y un valor de CI50 menor indica que el compuesto 48 es más potente, que un compuesto de referencia. Los compuestos de la presente invención demuestran un valor de CI50 menor de 5 µM, y hacia abajo hasta 0.1 nM, cuando se miden utilizando la prueba de dosis-respuesta. Los compuestos preferidos demuestran un valor de CI50 de 500 nM o menor. Los compuestos más preferidos de la presente invención demuestran un valor de CI50 menor de 250 nM, menor de 100 nM, menor de 50 nM, o menor de 20 nM. Los inhibidores de Chkl preferidos de la invención son selectivos, es decir, demuestran una selectividad de por lo menos 20 veces para inhibir Chkl con respecto a las siguientes proteína cinasas: proteína cinasa A, proteína cinasa C, cdc2, y pp60v-src. Los inhibidores de Chkl más preferidos de la presente invención de preferencia presentan selectividad de por lo menos 75 veces para inhibir a Chkl con respecto a las siguientes proteína cinasas: proteína cinasa A, proteína cinasa C, cdc2, y pp60v-src. Los inhibidores de Chkl todavía más preferidos de la presente invención demuestran selectividad de por lo menos 75 veces contra proteína cinasa A, proteína cinasa C, cdc2, pp60v-src, proteína cinasa B/Akt-1, p38MapK, ERKl, p70S6K, cdc2, cdk2, Chk2, y la tirosina cinasa abl. "Selectividad en número de veces" se define como el valor CI50 del inhibidor de Chkl para la cinasa de comparación dividido entre el valor de CI50 del inhibidor de Chkl para 49 Chkl. Los inhibidores de Chkl selectivos no funcionan como agentes quimioterapéuticos cuando se administran solos. Un inhibidor de Chkl no selectivo, por el contrario, puede actuar como un agente de quimioterapia gracias a su capacidad para inhibir de manera más sustancial proteína cinasas o enzimas adicionales que son requeridas para el crecimiento celular. Esto puede dar como resultado efectos celulares adicionales que conducen a efectos secundarios adversos y/o a un índice terapéutico reducido. Los compuestos y composiciones farmacéuticas apropiadas para ser utilizadas en la presente invención incluyen aquellas en las cuales el ingrediente activo se administra en una cantidad efectiva para lograr su propósito pretendido. De manera más específica, una "cantidad terapéuticamente efectiva" significa una cantidad suficiente para tratar a un individuo que padece de una indicación, o para aliviar los síntomas existentes de la indicación. La determinación de una cantidad terapéuticamente efectiva está dentro de la capacidad del experto en la técnica, especialmente en vista de la descripción detallada provista en la presente invención. Además del inhibidor de Chkl, las composiciones farmacéuticas de la invención se pueden formular para que incluyan citocinas, linfocinas, factores de crecimiento, 50 otros factores hematopoyéticos, o mezclas de los mismos, para reducir los efectos secundarios adversos que puedan surgir a partir de, o que estén asociados con, la administración de la composición farmacéutica sola. Las citocinas, linfocinas, factores de crecimiento, u otros factores hematopoyéticos particularmente útiles en las composiciones farmacéuticas de la invención incluyen, pero no se limitan a, M-CSF, GM-CSF, TNF, IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IFN, TNF, G-CSF, Meg-CSF, GM-CSF, trombopoyetina, factor de célula madre, eritropoyetina, angiopoyetinas, incluyendo Ang-1, Ang-2, Ang-4, Ang-Y, y/o el polipéptido tipo angiopoyetina de humano, factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF) , angiogenina, proteína 1 morfogénica de tejido óseo (BMP-1) , BMP-2, BMP-3, BMP-4, BMP-5, BMP-6, BMP-7, BMP-8, BMP-9, BMP-10, BMP-11, BMP-12, BMP-13, BMP-14, BMP-15, receptor IA de BMP, receptor IB de BMP, factor neurotrófico derivado de cerebro, factor neurotrófico ciliar, factor 1 quimiotáctico de neutrófilo inducido por citocina del receptor del factor neurotrófico ciliar, factor 2 quimio-táctico de neutrófilo inducido por citocina, factor 2 quimiotáctico de neutrófilo inducido por citocina, factor de crecimiento de célula endotelial, endotelina 1, factor de 51 crecimiento epidérmico, atrayente de neutrófilo derivado del epitelio, factor de crecimiento de fibroblasto (FGF) 4, FGF 5, FGF 6, FGF 7, FGF 8, FGF 8b, FGF 8c, FGF 9, FGF 10, FGF de carácter ácido, FGF de carácter básico, receptor 1 del factor neurotrófico derivado de línea de célula de la glía, receptor 2 de factor neurotrófico derivado de línea de célula de la glía, proteína relacionada con el crecimiento, proteína relacionada con el crecimiento, proteína relacionada con el crecimiento, proteína relacionada con el crecimiento, factor de crecimiento epidérmico de unión a heparina, factor de crecimiento de hepatocito, receptor del factor de crecimiento de hepatocito, factor I de crecimiento tipo insulina, receptor del factor de crecimiento tipo insulina, factor II de crecimiento tipo insulina, proteína de unión al factor de crecimiento tipo insulina, factor de crecimiento de queratinocito, factor inhibidor de leucemia, receptor del factor inhibidor de leucemia, factor de crecimiento de nervio, receptor del factor de crecimiento de nervio, neurotrofina-3, neurotrofina-4, factor de crecimiento de placenta, factor 2 de crecimiento de placenta, factor de crecimiento de célula endotelial derivado de plaquetas, factor de crecimiento derivado de plaquetas, cadena del factor A del crecimiento derivado de plaquetas, factor AA de 52 crecimiento derivado de plaquetas, factor AB de crecimiento derivado de plaquetas, cadena del factor B de crecimiento derivado de plaquetas, factor BB de crecimiento derivado de plaquetas, receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas, receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas, factor estimulante de crecimiento de pre-célula B, factor de célula madre, receptor del factor de célula madre, factor de crecimiento transformante (TGF), TGF, TGF 1, TGF 1.2, TGF 2,. TGF 3, TGF 5, TGF 1 latente, TGF, proteína I de unión, proteína II de unión a TGF, proteína III de unión a TGF, receptor tipo 1 del factor de necrosis tumoral, receptor tipo II del factor de necrosis tumoral, receptor de activador de plasminógeno tipo urocinasa, factor de crecimiento del endotelio vascular, y proteínas quiméricas y fragmentos de las mismas biológicamente o inmunológicamente activos. Los compuestos de la fórmula estructural (I) también se pueden conjugar o ligar a porciones auxiliares que promuevan una propiedad benéfica del compuesto en un método de uso terapéutico. Dichos conjugados pueden incrementar el suministro de los compuestos a un sitio anatómico particular o región de interés (por ejemplo, un tumor) , pueden permitir concentraciones terapéuticas sostenidas de los compuestos en las células objetivo, 53 pueden alterar las propiedades farmacocinéticas y farmacodinámicas de los compuestos, y/o pueden mejorar el índice terapéutico o perfil de seguridad de los compuestos. Las porciones auxiliares apropiadas incluyen, por ejemplo, aminoácidos, oligopéptidos, o polipéptidos, por ejemplo, anticuerpos tales como anticuerpos monoclonales y otros anticuerpos manipulados genéticamente; y ligandos naturales o sintéticos para los receptores en las células o tejidos objetivo. Otros auxiliares apropiados incluyen porciones de ácido graso o lípido que promuevan la biodistribución y/o absorción del compuesto por parte de las células objetivo (véase, por ejemplo, Bradley et al . , Clin . Cáncer Res. , (2001) 7:3229) . Las formulaciones de la presente invención se pueden administrar en una manera normal para el tratamiento de las enfermedades indicadas, tal como mediante administración por vía oral, parenteral, trans-mucosas (por ejemplo, sublingual o mediante administración en la cavidad oral) , tópica, transdérmica, rectal, o inhalación (por ejemplo, inhalación nasal o pulmonar profunda) . La administración por vía parenteral incluye, pero no se limita a modos de administración por vía intravenosa, intra-arterial, intraperitoneal, subcutánea, intramuscular, intratecal, e intra-articular. La administración por vía parenteral también se puede lograr utilizando una técnica 54 de alta presión, tal como POWDERJECT™. Para administración por vía oral, incluyendo administración en la cavidad bucal, la composición puede estar en forma de tabletas o pastillas formuladas en una manera convencional. Por ejemplo, las tabletas y cápsulas para administración por vía oral pueden contener excipientes convencionales tales como agentes aglutinantes (por ejemplo, jarabe, acacia, gelatina, sorbitol, tragacanto, mucílago de almidón, o polivinilpirrolidona) , materiales de relleno (por ejemplo, lactosa, azúcar, celulosa microcristalina, almidón de maíz, fosfato de calcio, o sorbitol), lubricantes (por ejemplo, estearato de magnesio, ácido esteárico, talco, polietilenglicol o sílice) , desintegrantes (por ejemplo, almidón de papa o glicolato de almidón sódico) , o agentes humectantes (por ejemplo, laurílsulfato de sodio). Las tabletas se pueden recubrir de conformidad con métodos bien conocidos en la técnica. De manera alternativa, los compuestos de la presente invención se pueden incorporar en preparados líquidos orales tales como suspensiones acuosas u oleosas, soluciones, emulsiones, jarabes, o elíxires, por ejemplo. Asimismo, las formulaciones que contienen estos compuestos se pueden presentar como un producto seco que se reconstituye con agua u otro vehículo apropiado antes de 55 usar. Dichos preparados líquidos pueden contener aditivos convencionales, por ejemplo agentes para suspensión tales como jarabe de sorbitol, metilcelulosa, jarabe de glucosa/azúcar, gelatina, hidroxietilcelulosa, hidroxi-propilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa, gel de estearato de aluminio, y grasas comestibles hidrogenadas; agentes emulsificantes, tales como lecitina, mono-oleato de sorbitán, o acacia; vehículos no acuosos (los cuales pueden incluir aceites comestibles) , tales como aceite de almendras dulces, aceite de coco fraccionado, esteres oleosos, propilenglicol, y alcohol etílico; y conservadores, tales como p-hidroxibenzoato de metilo o propilo y ácido sórbico. Dichos preparados también se pueden formular como supositorios, por ejemplo, que contengan bases convencionales para supositorio, tales como manteca de cacao u otros glicéridos. Las composiciones para inhalación típicamente se pueden proveer en forma de una solución, suspensión, o emulsión que se puede administrar como un polvo seco o en forma de un aerosol utilizando un propelente convencional, tal como dicloro-difluorometano o triclorofluorometano. Las formulaciones tópicas y transdérmicas típicas comprenden vehículos acuosos o no acuosos convencionales, tales como gotas oftálmicas, cremas, ungüentos, lociones y pastas, o están en forma de 56 un emplaste, parche, o membrana medicada. De manera adicional, las composiciones de la presente invención se pueden formular para administración por vía parenteral mediante inyección o infusión continua. Las formulaciones para inyección pueden estar en forma de suspensiones, soluciones, o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos, y pueden contener agentes de formulación, tales como agentes para suspensión, estabilizadores y/o dispersantes. De manera alternativa, el ingrediente activo puede estar en forma de polvo para reconstitución con un vehículo apropiado (por ejemplo, agua libre de pirógenos, estéril) antes de usar. Una composición de la presente invención también se puede formular como un preparado para depósito. Dichas formulaciones de acción prolongada se pueden administrar mediante implante (por ejemplo, en forma subcutánea o intramuscular) o mediante inyección intramuscular. Por consiguiente, los compuestos de la invención se pueden formular con materiales poliméricos o hidrofóbicos apropiados (por ejemplo, una emulsión en un aceite aceptable) , resinas de intercambio iónico, o como derivados poco solubles (por ejemplo, una sal muy poco soluble) . Para uso veterinario, un compuesto de la fórmula (I) , o una sal, profármaco, o solvente del mismo farmacéuticamente aceptable, se administra como una 57 formulación apropiadamente aceptable de conformidad con la practica veterinaria normal. El médico veterinario puede determinar fácilmente el régimen de dosificación y la vía de administración que sean las más apropiadas para un animal particular. Los animales que se pueden tratar mediante los compuestos y métodos de la presente invención incluyen, pero no se limitan a, mascotas, ganado, animales de espectáculo, y especímenes de zoológico.

MÉTODOS DE SÍNTESIS Los compuestos de la presente invención se pueden preparar mediante los siguientes esquemas de síntesis. Los materiales de partida se pueden obtener a partir de fuentes comerciales o se pueden preparar utilizando métodos de la literatura bien establecidos conocidos por los expertos en la técnica. Los grupos X, R1, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 son como se definieron anteriormente.

ESQUEMA DE REACCIÓN 1 X—R6 58 Como se muestra en el esquema de reacción 1, los compuestos de la fórmula 1 se pueden convertir en los compuestos de la fórmula 2 mediante tratamiento con una base, tal como carbonato de potasio, trietilamina o hidruro de sodio, seguido por la adición de R6X, en el cual X es un halogenuro, mesilato, o tosilato. Los ejemplos de solventes 59 utilizados en esta reacción incluyen DMF, THF, CH2C12, y mezclas de los mismos. La reacción se efectúa a temperaturas entre 0°C y 100°C durante 15 minutos hasta 12 horas aproximadamente. De manera alternativa, los compuestos de la fórmula 1 se pueden mezclar con un compuesto de la fórmula R6X, en la cual X es hidroxilo, y la mezcla resultante se trata con trifenilfosfina y azodicarboxílato de diisopropilo en un solvente, tal como THF, para obtener los compuestos de la fórmula 2. Los compuestos de la fórmula 2 se pueden tratar como hidrógeno gaseoso en presencia de un catalizador tal como óxido de platino, paladio sobre carbono, o níquel Raney, o se pueden tratar con una fuente de ácido, tal como cloruro de amonio acuoso saturado o cloruro de hidrógeno acuoso en presencia de zinc metálico, para proveer los compuestos de la fórmula 3. Los ejemplos de solventes utilizados en esta reacción incluyen metanol, etanol, acetato de etilo, o mezclas de los mismos. La reacción generalmente se efectúa a temperatura ambiente o menor durante periodos de una a doce horas . Los compuestos de la formula 5 se pueden preparar combinando los compuestos de la fórmula 3 con los compuestos de la fórmula 4 (preparados como se describe en el esquema de reacción 2) . Los ejemplos de solventes 60 utilizados en esta reacción incluyen tolueno, benceno, y xileno. La reacción se efectúa a temperaturas de 60 °C a 100 °C durante cinco a doce horas.

ESQUEMA DE REACCIÓN 2 6 4 Como se muestra en el esquema de reacción 2, los compuestos de la fórmula 4 se pueden preparar tratando un compuesto de la fórmula 6 con una base, tal como DIEA, y difenil-fosforil-azida. Un solvente típico para esta reacción es THF, y la reacción se efectúa detrás de una campana de protección a temperatura de 20°C a 80°C durante una a doce horas .

ESQUEMA DE REACCIÓN 3 H 61 El esquema de reacción 3 muestra una síntesis alternativa de los compuestos de la fórmula 5. Los compuestos de la fórmula 3 se tratan con compuestos de la fórmula 7, los cuales se preparan de conformidad con el esquema de reacción 4. Un solvente que se puede utilizar es DMF, y la temperatura de reacción se mantiene entre temperatura ambiente y 60°C a lo largo de un intervalo de tiempo de una a doce horas .

ESQUEMA DE REACCIÓN 4 8 Como se muestra en el esquema de reacción 4, los compuestos de la fórmula 7 se pueden preparar a partir de los compuestos de la fórmula 8 mediante tratamiento con un cloroformiato de arilo, tal como cloroformiato de fenilo o cloroformiato de p-nitrofenilo, en presencia de una base, 62 tal como piridina. Los ejemplos de solventes utilizados en esta reacción incluyen CH2C12 o piridina, a temperaturas de 0°C hasta temperatura ambiente.

ESQUEMA DE REACCIÓN 5 El esquema de reacción 5 muestra una estrategia alternativa para los compuestos de la fórmula 5. Los compuestos de la fórmula 9 se convierten en los compuestos de la fórmula 2 mediante tratamiento con un alcohol en 63 presencia de una base, tal como hidruro de sodio, bis (trimetilsilil) amida de potasio, o n-butil-litio. Los ejemplos de solventes utilizados en esta reacción incluyen THF, o éter dietílico. La reacción típicamente se efectúa a temperaturas entre -15°C y temperatura ambiente durante 1 a 6 horas aproximadamente. Los compuestos de la fórmula 2 se convierten en los compuestos de la fórmula 5 siguiendo los procedimientos descritos en el esquema de reacción 1 ESQUEMA DE REACCIÓN 6 H 64 El esquema de reacción 6 muestra una síntesis alternativa para los compuestos de la fórmula 5. Los compuestos de la fórmula 3 se pueden convertir en los compuestos de la fórmula 10 siguiendo los procedimientos descritos en el esquema de reacción 4. Los compuestos de la fórmula 10 se pueden convertir en los compuestos de la fórmula 5 siguiendo los procedimientos descritos en el esquema de reacción 1. Los ejemplos no limitativos, específicos de compuestos de la fórmula estructural (I) se proveen más adelante, cuyas síntesis se efectúan de conformidad con los procedimientos indicados más adelante y en la Publicación de Solicitud de Patente E.U.A. copendiente No. 2003-0069284 Al, incorporada en la presente invención para referencia. Las abreviaturas utilizadas en las siguientes síntesis son: horas (h) , agua (H20) , sulfato de magnesio (MgS0 ) , ácido clorhídrico (HCl) , sulfóxido de dimetilo (DMSO) , azodicarboxilato de di-isopropilo (DIAD) , cloruro de metileno (CH2C12) , cloroformo (CHC13) , metanol (MeOH) , hidróxido de amonio (NH40H) , cloroformo deuterado (CDC13) , tetrahidrofurano (THF) , N-metilpirrolidona (NMP) , ácido acético (AcOH) , acetato de etilo (EtOAc) , etanol (EtOH) , éter dietílico (Et20) , carbonato de sodio (Na2C03) , bicarbonato de sodio (NaHC03) , ácido nítrico (HN03) , ácido clorhídrico (HCl) , cloruro de sodio (NaCl) , sulfato de 65 sodio (Na2S0 ) , dimetilformamida (DMF), 1,8-diazabiciclo [5.4.0] undec-7-eno (DBU), y N,N-di-isopropil-etilamina (DIEA) .

Intermediario 1 Azida de 5-metil-pirazin-2- carbonilo A una suspensión agitada de ácido 5-metil-pirazin-2-carboxílico (25 g, 181 mmoles) en 540 ml de THF a temperatura ambiente bajo nitrógeno se agrega DIEA (31.7 ml, 181 mmoles) lo que da como resultado una solución de color café. Después se agrega mediante goteo azida de difenilfosforilo (39.2 ml, 181 mmoles) como una solución en 50 ml de THF en el transcurso de 1 hora detrás de una campana de protección. La reacción se deja agitando durante la noche. Después la reacción se evapora con ' evaporador giratorio hasta un volumen pequeño a temperatura ambiente y se divide entre Et20 (1 litro) y H20 (1 litro) . La capa de H20 se extrae de nuevo con 2 x 250 ml de Et20, y las capas orgánicas combinadas se lavan 2 1 litro con bicarbonato de sodio. Las capas orgánicas se secan (MgS04) , se filtran, y se concentran hasta una masa sólida, la cual se tritura 66 con Et20 par obtener el producto como un sólido de color amarillo (15 g, 50%) . Se puede aislar compuesto más puro tomando 1 g del producto crudo en 20 ml de Et20, y tratando con 1-2 g de carbón decolorante a temperatura ambiente durante unos cuantos minutos. Después de filtrar y concentrar, este material es homogéneo mediante CCF en EtOAc y de color blanco puro. La recuperación típicamente es de 65%.

Compuesto 1 1-[5-et il-2-(l-metil-piperidin-3-ilmetoxi)- fenil]-3-(5-metil-pirazin-2-il)-urea Paso 1 3- (4-bromo-2-nitro-fenoximetil) -1-metil-piperidina A una solución agitada de l-metilpiperidin-3-metanol (1 g, 5.3 mmoles), 2-nitro-4-bromofenol (1.15 g, 5.3 mmoles), y trifenilfosfina (1.39 g, 5.3 mmoles) en THF seco (25 ml) bajo una atmósfera de nitrógeno se agrega 67 mediante goteo una solución de azodicarboxilato de diisopropilo (1.04 ml, 5.3 mmoles). La mezcla resultante se agita a temperatura ambiente durante 12 horas, se diluye con acetato de etilo (75 ml) y se lava con salmuera (2 x 50 ml) . Las capas orgánicas combinadas se secan con MgS04, se filtran, y se concentran a presión reducida. El material crudo se purifica en cromatografía en columna (gel de sílice) y se eluye con MeOH al 5% en CH2C12 para obtener un aceite incoloro.

Paso 2 1-metil-3- (2-nitro-4-trimetil-silaniletinil-fenoximetil) -piperidina A una solución agitada de 3- (4-bromo-2-nitro-fenoximetil) -1-metil-piperidina (910 mg, 2.76 mmoles) en 40 ml de benceno a temperatura ambiente bajo nitrógeno se agrega trimetilsililacetileno (543 mg, 5.5 mmoles), diclorobis (trifenilfosfina) -paladio (II) (39 mg, 0.55 mmoles), yoduro de cobre(I) (42 mg, 0.22 mmoles), y DBU (1.26 gm, 8.3 mmoles) . La mezcla de reacción se calienta a reflujo durante 6 horas. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, la mezcla de reacción se filtra con benceno, y el material filtrado se divide entre acetato de etilo (100 ml) y H20 (100 ml) . Los extractos orgánicos se secan (MgS04) , se filtran, se concentran, y se someten a 68 cromatografía en CH2Cl2/MeOH 95/5 para obtener el producto deseado.

Paso 3 2- (l-metil-piperidin-3-ilmetoxi) -5-trimetilsilanil-etinil-fenilamina A una solución agitada de 1-metil-3- (2-nitro-4-trimetilsilaniletinil-fenoximetil) -piperidina (1.25 g, 3.72 mmoles) en 20 ml de AcOH a reflujo se agrega polvo de hierro (1.4 g/25 g/átomo) en porciones. Después de 1 hora, la mezcla de reacción se enfría ligeramente, se diluye con 50 ml de EtOAc, y se filtra, después el sólido se enjuaga con EtOAc. El material filtrado se evapora hasta sequedad, y el residuo se divide entre EtOAc (50 ml) y NaHC03 saturado (50 ml) . La fase acuosa se extrae con 50 ml de EtOAC, y las capas orgánicas combinadas se lavan con 100 ml de salmuera, se secan (MgS04) , se filtran y se concentran hasta un aceite (100%) .

Paso 4 1- [2- (l-metil-piperidin-3-il-metoxi) -5-trimetil-silaniletinil-fenil] -3- (5-metil-pirazin-2-il) -urea A una solución agitada de azida de 5-metil-pirazin-2-carbonilo (163 mg; 1.0 mmoles) en tolueno (4 ml) que previamente se calienta a 90 °C durante 15 minutos se 69 agrega 1-metil-3- (2-nitro-4-trimetilsilaniletinil-fenoxi-metil) -piperidina (305 mg, 1 mmol). La mezcla se enfría hasta 65°C y se agita durante 12 horas. La mezcla de reacción se enfría después hasta temperatura y se filtra , lo que produce el material deseado.

Paso 5 1- [5-etinil-2- (l-metil-piperidin-3-ilmetoxi) -fenil] -3- (5-metil-pirazin-2-il) -urea A una solución agitada de 1- [2- (1-metil-piperidin-3-ilmetoxi) -5-trimetilsilaniletinil-fenil] -3- (5- . metil-pirazin-2-il) -urea (43 mg, 0.095 mmoles) en 5 ml de EtOH absoluto a reflujo bajo nitrógeno se agrega fluoruro de potasio (27 mg, 0.47 mmoles). La reacción se somete a reflujo durante 1.5 horas, se enfría hasta temperatura ambiente, y se divide entre acetato de etilo (30 ml) y H20 (30 ml) . Los extractos orgánicos se aislan, se secan (MgS04) , se filtran, y se concentran para obtener para obtener el producto como un sólido de color canela (35 mg, 97%) . XH RMN (400 MHz, CDC13) d: 11.31 (br s, 1H) , 8.56 (s, 1H) , 8.23 (s, ÍH) , 8.17 (s, 1H) , 7.59 (br s, 1H) , 7.16 (d, 1H) , 6.78 (d, 1H) , 3.86 (m, 2H) , 3.12 (m, ÍH) , 2.96 (s, ÍH) , 2.82 (m, ÍH) , 2.52 (s, 3H) , 2.34 (m, 1H) , 2.20 (s, 3H), 1.97 (m, ÍH) , 1.91-1.63 (m, 4H) , 1.07 (m, ÍH) . LRMS (apci, positivo) m/e 380.5 (M+l). 70 Compuesto 2 1-[2-(2-dimetilamino-etoxi)-5-etinil- fenil]-3-(5-metil-pirazin-2-il)-urea Paso 1 Dimetil- [2- (2~nitro-4-trimetilsilaniletinil- fenoxi) -etil] -amina Se prepara de conformidad con el procedimiento del compuesto 1 paso 2 utilizando [2- (4-bromo-2-nitro- fenoxi) -etil] -dimetil-amina (preparada como se describe en el Compuesto 1 Paso 1, a partir de 4-bromo-2-nitrofenol y N,N-di-metilaminoetanol) .

Paso 2 2- (2-dimetilamino-etoxi) -5-trimetilsilaniletinil- fenilamina Se disuelve dimetil- [2- (2-nitro-4-trimetil-silaniletinil-fenoxi) -etil] -amina (1 mmol) en 1 ml de MeOH, con 0.5 ml de cloruro de amonio saturado seguido por polvo 71 de zinc (5 mmoles) . La mezcla se agita durante 10 minutos, después se diluye con EtOAc (50 ml) y carbonato de sodio (50 ml de solución acuosa al 10%) . La capa orgánica se seca con MgS04, se filtra, y se concentra a presión reducida para obtener un aceite transparente (97%) .

Paso 3 1- [2- (2-dimetilamino-etoxi) -5-trimetilsilanil-etinil-fenil] -3- (5-metil-pirazin-2-il) -urea Se prepara de conformidad con el procedimiento del compuesto 1 Paso 4.

Paso 4 1- [2- (2-dimetilamino-etoxi) -5-etinil-fenil] -3- (5-metil-pirazin-2-il) -urea El producto final se prepara de conformidad con el procedimiento del compuesto 1 Paso 5 (81 mg, 97%) . XH RMN (400 MHz, CDC13) d: 10.68 (br s, 1H) , 8.57 (s, ÍH) , 8.51 (s, ÍH) , 8.08 (s, ÍH) , 7.95 (s, ÍH) , 7.18 (d, ÍH) , 6.82 (d, ÍH) , 4.18 (m, 2H) , 2.99 (s, 1H) , 2.82 (m, 2H), 2.52 (s, 3H) , 2.39 (s, 6H) . LRMS (apci, positivo) m/e 340.5 (M+l). 72 Compuesto 3 l-[5-etinil-2-(piridin-3-ilmetoxi)- fenil]-3-(5-metil-pirazin-2-il)-urea Paso 1 3- (2-nitro-4-trimetilsilaniletinil-fenoximetil) -piridina Se prepara de conformidad con el procedimiento del compuesto 1 Paso 2 utilizando 3- (4-bromo-2-nitro-fenoxi-metil) -piridina (preparada como se describe en el Compuesto 1 Paso 1, a partir de 4-bromo-2-nitrofenol y 3-piridin-metanol) .

Paso 2 2- (piridin-3-ilmetoxi) -5-trimetilsilaniletinil-fenilamina Se prepara de conformidad con el procedimiento del compuesto 1, Paso 3. 73 Paso 3 1- (5-metil-pirazin-2-il) -3- [2- (piridin-3-ilmetoxi) -5-trimetilsilaniletinil-fenil] -urea Se prepara de conformidad con el procedimiento del compuesto 1, Paso 4.

Paso 4 1- [5-etinil-2- (piridin-3-ilmetoxi) -fenil] -3- (5-metil-pirazin-2-il) -urea El producto final se prepara de conformidad con el procedimiento del compuesto 1, Paso 5. aH RMN (400 MHz, d6-DMS0) d: 10.16 (s, 1H) , 8.79 (s, ÍH) , 8.64 (d, ÍH) , 8.56 (br s, ÍH) , 8.37 (s, ÍH) , 7.96 (d, ÍH) , 7.50 (d, ÍH) , 7.28 (br s, ÍH) , 7.18 (m, 2H) , 5.26 (s, 2H) , 4.02 (s, 1H) , 2.30 (s, 3H) . LRMS (apci, positivo) m/e 360.4 (M+l).

Compuesto 4 l-[3-(l-metil-piperidin-3-ilmetoxi)-5,6,7,8-tetrahidro- naftalen-2-il]-3-(5-metil-pirazin-2-il)-urea 74 Paso 1 3-nitro-5, 6,7, 8-tetrahidronaftalen-2-ol Se disuelve 5, 6, 7, 8-tetrahidronaftalen-2-ol (2.0 g, 13.5 mmoles) en CHC13 (45 ml) y ácido acético (22.5 ml) . Se agrega mediante goteo una solución de HN03 concentrado (0.87 ml, 13.7 mmoles) en ácido acético (22.5 ml) . Después de agitar durante 20 horas, la mezcla se diluye con agua (70 ml) y se neutraliza hasta pH 10 con Na2C03. La capa acuosa se separa y se lava con CHC13. Las capas orgánicas combinadas se lavan con agua, salmuera, se secan con MgS0, se filtran y se concentran al vacío. El material crudo se somete a cromatografía en sílice utilizando EtOAc/hexanos 1:10, seguido por una segunda cromatografía en Si02 utilizando hexanos/éter etílico (75:1).

Paso 2 l-metil-3- (3-nitro-5, 6, 7, 8-tetrahidronaftalen-2-iloximetil) -piperidina Se prepara de conformidad con el procedimiento para el compuesto 1 Paso 1 utilizando 3-nitro-5, 6, 7, 8-tetrahidronaftalen-2-ol (véase lo indicado anteriormente) y ( l-metil-piperidin-3-il) -metanol . 75 Paso 3 3- (l-metil-piperidin-3-ilmetoxi) -5,6,7 , 8-tetrahidro-naftalen-2-ilamina Se prepara a partir de 1-metil-3- (3-nitro-5, 6, 7, 8-tetrahidronaftalen-2-iloximetil) -piperidina (1 mmol) en EtOH (20 ml) con Pd(OH)2 (cantidad catalítica). La mezcla se agita a presión atmosférica durante 16 horas. El catalizador se elimina mediante filtración con celita y el material filtrado se concentra a presión reducida para obtener el material deseado.

Paso 4 1- [3- (1-metil-piperidin-3-il-metoxi) -5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il] -3- (5-metil-pirazin-2-il) -urea Se prepara de conformidad con el procedimiento para el compuesto 1, paso 4 utilizando 3-(l-metil-piperidin-3-ilmetoxi) -5, 6, 7, 8-tetrahidronaftalen-2-ilamina y azida de 5-metil-pirazin-2-carbonilo. XH RMN (400 MHz, CDC13) d: 10.98 (brd s, 1H) , 8.45 (brd s, ÍH) , 8.36-8.30 (m, 1H) , 8.20 (s, ÍH) , 8.02 (s, ÍH) , 6.54 (S, 1H) , 3.91-3.79 (m, 2H) , 3.27-3.14 (m, ÍH) , 2.96-2.84 (m, 1H) , 2.56-2.46 (m, 4H) , 2.51 (s, 3H) , 2.43-2.29 (m, 1H) , 2.30 (s, 3H) , 2.11-1.99 (m, ÍH) , 1.93-1.83 (m, 2H) , 1.83-1.69 (m, 6H) , 1.18-1.04 (m, 1H) . LRMS (APCI, Positivo) m/e 410.3 (M+l). 76 Compuesto 5 1-[3-(l-metil-piperidin-2-ilmetoxi)-5,6,7,8-tetrahidro- naftalen-2-il]-3-(5-metil-pirazin-2-il)-urea Paso 1 3-nitro-5, 6, 7, 8-tetrahidronaftalen-2-ol Se prepara de conformidad con el procedimiento descrito para el Compuesto 4, Paso 1.

Paso 2 l-metil-2- (3-nitro-5, 6, 7, 8-tetrahidronaftalen-2-iloximetil) -piperidina Se prepara de conformidad con el procedimiento para el compuesto 1, Paso 1, utilizando 3-nitro-5, 6, 7, 8- tetrahidronaftalen-2-ol y (l-metil-piperidin-2-il) - metanol. 77 Paso 3 3- (l-metil-piperidin-2-ilmetoxi) -5, 6, 1 , 8-tetrahidronaftalen-2-ilamina Se prepara de conformidad con el procedimiento para el compuesto 4, Paso 3, utilizando l-metil-2- (3-nitro-5,6,7, 8-tetrahidronaftalen-2-iloximetil) -piperidina.

Paso 4 1- [3- (l-metil-piperidin-2-il-metoxi) -5, 6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il] -3- (5-metil-pirazin-2-il) -urea Se prepara de conformidad con el procedimiento para el compuesto 1, Paso 4, utilizando 3-(l-metil-piperidin-2-ilmetoxi) -5, 6, 7, 8-tetrahidronaftalen-2-ilamina y azida de 5-metil-pirazin-2-carbonilo. El material crudo se recristaliza con etanol absoluto. XH RMN (400 MHz, d6-DMSO) d: 10.06 (s, ÍH) , 10.02-9.87 (brd, ÍH) , 8.66 (s, ÍH) , 8.16 (s, ÍH) , 7.89 (s, ÍH) , 6.69 (s, 1H) , 4.55-4.47 (m, ÍH) , 2.89-2.81 (m, ÍH) , 2.71-2.60 (m, 7H) , 2.43 (s, 3H) , 2.30 (s, 3H) , 2.07-1.97 (m, ÍH) , 1.85-1.74 (m, ÍH) , 1.74-1.58 (m, 7H) , 1.57-1.45 (m, 1H) . LRMS (APCI, Positivo) m/e 410.5 (M+l).

Compuesto 6 (S)-l-(5-metü-pirazin-2-il)-3-[2-(?iperidin-3- ilmetoxi)-5-trifluorometil-fenil]-urea Paso 1 Ester ter-butílico del ácido (S) -3-hidroximetil-piperidin-1-carboxílico Se prepara de conformidad con el documento WO 02/070494 utilizando éster 1-ter-butílico del ácido (S)-piperidin-1, 3-dicarboxílico .

Paso 2 Ester ter-butílico del ácido (S) -3- (4-trifluorometil-2-nitro-fenoximetil) -piperidin-1-carboxilico Se prepara de conformidad con el Compuesto 1, Paso 1, utilizando éster ter-butílico del ácido (S)-3- hidroximetil-piperidin-1-carboxílico y 2-nitro-4-trifluorometil-fenol . 79 Paso 3 Ester ter-butílico del ácido (S) -3- (2-amino-4-trifluorometil-fenoximetil) -piperidin-1-carboxílico A una solución agitada de éster ter-butílico del ácido (S) -3- (4-trifluorometil-2-nitro-fenoximetil) -piperidin-1-carboxílico (4.04 g, 10 mmoles) en etanol (30 ml) se agrega catalizador de Pearlman (421 mg, 3 mmoles) . La reacción se purga tres veces con hidrógeno (globo) y se agita durante 12 horas . La reacción se filtra a través de celita y se seca a presión reducida. El material se purifica utilizando un cartucho 40M de Biotage eluyendo con hexanos/acetato de etilo (3/1) para obtener un aceite que posteriormente solidifica hasta un sólido de color blanco.

Paso 4 Ester ter-butílico del ácido (S) -3-{4-trifluorometil-2- [3- (5-metil-pirazin-2-il) -ureido] -fenoximetil } -piperidin-1-carboxílico A 'una solución agitada de azida de 5-metil-pirazin-2-carbonilo (1.14 g, 7 mmoles) en tolueno (20 ml) se coloca en un baño de aceite previamente calentado a 90°C durante 15 minutos. Se agrega el éster ter-butílico del ácido (S) -3- (2-amino-4-trifluorometil-fenoximetil) -piperidin-1-carboxílico (2.62 g, 7 mmoles), la - reacción se enfría 80 hasta 65°C y se agita durante 12 horas. La reacción se enfría hasta temperatura ambiente y se concentra a presión reducida. El sólido se purifica utilizando un cartucho 40M de Biotage, eluyendo con hexanos/acetato de etilo (1/1) para obtener un sólido amorfo.

Paso 5 (S) -1- (5-metil-pirazin-2-il) -3- [2- (piperidin-3-ilmetoxi) -5-trifluorometil-fenil] -urea A una solución agitada del éster ter-butílico del ácido (S) -3- { 4-trifluorometil-2- [3- (5-metil-pirazin-2-il) -ureido] -fenoximetil }-piperidin-l-carboxílico (560 mg, 1.1 mmoles) en dioxano (2 ml) se agrega HCl (4 ml de una solución 4M en dioxano) . Después de agitar durante 3 horas, la reacción se concentra a presión reducida para obtener 400 mg (89%) de un sólido de color amarillo claro. 2H RMN (400 MHz, d6-DMSO) d: 10.60 (s, ÍH) , 9.20 (s, 2H) , 8.79 (s, 1H) , 8.60 (s, 1H) , 8.35 (s, 1H) , 7.40 (d, 1H) , 7.20 (s, 1H) , 4.15 (m, 2H) , 3.50 (d, ÍH) 3.30 (d, 1H) , 2.90 (m, 2H) , 2.40 (s, 3H) , 1.40-2.00 (m, 4H) . LRMS (apci, positivo) m/e 410.30 (M+l).

Compuesto 7 (R)-l-(5-metil-pirazin-2-il)-3-[2-(piperidin-3-il- metoxi)-5-trifluorometil-fenil]-urea Paso 1 Ester ter-butílico del ácido (R) -3-hidroximetil-piperidin-1-carboxílico Se prepara de conformidad con el documento WO 02/070494 utilizando éster 1-ter-butílico del ácido (R)-piperidin-1, 3-dicarboxílico.

Paso 2 Ester ter-butílico del ácido (R) -3- (4-trifluorometil-2-nitrofenoximetil) -piperidin-1-carboxílico Se prepara de conformidad con el Compuesto 1, Paso 1, utilizando éster ter-butílico del ácido (R)-3-hidroximetil-piperidin-1-carboxílico y 2-nitro-4-trifluorometil-fenol . 82 Paso 3 Ester ter-butílico del ácido (R) -3- (2-amino-4-trifluorometil-fenoximetil) -piperidin-1-carboxílico Se prepara de conformidad con el Compuesto 4, Paso 3, utilizando éster ter-butílico del ácido (R)-3-(4-trifluorometil-2-nitro-fenoximetil) -piperidin-1-carboxílico .

Paso 4 Ester ter-butílico del ácido (R) -3-{4-trifluorometil-2- [3- (5-metil-pirazin-2-il) -ureido] -fenoximetil } -piperidin-1-carboxílico Se prepara de conformidad con el Compuesto 1, Paso 4, utilizando éster ter-butílico del ácido (R)-3-(2-amino-4-trifluorometil-fenoximetil) -piperidin-1-carboxílico y azida de 5-metil-pirazin-2-carbonilo.

Paso 5 Sal clorhidrato de (R) -1- (5-metil-pirazin-2-il) -3- [2- (piperidin-3-ilmetoxi) -5-trifluorometil-fenil] -urea Se prepara de conformidad con el Compuesto 6, Paso 5, utilizando éster ter-butílico del ácido (R)-3-{4-trifluorometil-2- [3- (5-metil-pirazin-2-il) -ureido] -fenoximetil } -piperidin-1-carboxílico . 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) d: 10.50 (s, 1H) , 9.08 (s, 2H) , 8.78 (s, 1H) , 8.60 (s, 1H) , 8.25 (s, 1H) , 7.40 (d,- 83 ÍH) , 7.20 (d, 1H) , 4.10 (m, 2H) , 3.70 (m, ÍH) , 3.50 ( , 1H) , 3.22 (d, 1H) , 2.90 (m, 2H) , 2.40 (s, 3H) , 1.95 (d, 1H) , 1.80 (m, 2H) , 1.45 (m, ÍH) . LRMS (apci, positivo) m/e 410.3 (M+l).

Compuesto 8 1 -[2-(l -metil-piperidin-4-iloxi)-5-trifluorometil- fenil] -3 -(5-metil-pirazin-2-il)-urea Paso 1 l-metil-4- (2-nitro-4-trifluorometil-fenoxi) -piperidina Se diluyen 2-nitro-4-trifluorometil-fenol (2.07 g, 10 mmoles), l-metil-piperidin-4-ol (1.21 g, 10.5 mmoles), y trifenilfosfina (2.75 g, 10.5 mmoles) con 30 ml de THF y se colocan bajo nitrógeno. La mezcla de reacción se enfría hasta 0°C, después se agrega mediante goteo DIAD (2.12 g, 10.5 mmoles) en 1 ml de THF. La mezcla de reacción se deja agitar durante 12 horas calentando hasta temperatura ambiente. La reacción se diluye con acetato de 84 etilo (150 ml) y carbonato de sodio (150 ml de una solución acuosa al 10%) . La capa orgánica se lava con salmuera, se seca con MgS0 , se filtra, y se seca a presión reducida. El producto se purifica utilizando un cartucho 40M de Biotage, eluyendo con hexano/acetato de etilo (500 ml 1/1) , después CH2Cl2/MeOH/NH4OH (98/8/2, 500 ml) para obtener un aceite de color amarillo claro.

Paso 2 2- (l-metil-piperidin-4-iloxi) -5-trifluorometil-fenilamina Se prepara de conformidad con el Compuesto 2, Paso 2, utilizando l-metil-4- (2-nitro-4-trifluorometil-fenoxi) -piperidina.

Paso 3 1- [2- (l-metil-piperidin-4-il-oxi) -5-trifluoro-metil-fenil] -3- (5-metil-pirazin-2-il) -urea Se prepara de conformidad con el Compuesto 1, Paso 4, utilizando 2- (l-metil-piperidin-4-iloxi) -5-trifluoro-metil-fenilamina y azida de 5-metil-pirazin-2-carbonilo. XH RMN (400 MHz, CDC13) d: 8.65 (s, 1H) , 8.45 (s, 1H) , 8.15 (s, ÍH) , 7.22 (d, 1H) , 6.95 (d, ÍH) , 4.45 (m, ÍH) , 2.95 (m, 2H) , 2.55 (s, 3H) , 2.45 (s, 3H) , 1.85-2.30 85 ( , 6H) LRMS (apci, positivo) m/e 410.3 (M+l) Compuesto 9 1 -(5 -metil-pirazin-2-il)-3 -[2-(piperidin-3 -il- metoxi)-5-trifluorometil-fenil]-urea Paso 1 Ester ter-butílico del ácido 3-(2-nitro- 4~trifluorometil-fenoximetil) -piperidin-1-carboxilico Se prepara de conformidad con el Compuesto 1, Paso 1, utilizando 2-nitro-4-trifluorometil-fenol y éster ter-butílico del ácido 3-hidroximetil-piperidin-l-carboxílico.

Paso 2 Ester ter-butilico del ácido 3- (2-amino-4-trifluorometil-fenoximetil) -piperidin-1-carboxílico Se prepara de conformidad con el Compuesto 6, 86 Paso 3, utilizando éster ter-butílico del ácido 3-(2-nitro-4-trifluorometil-fenoximetil) -piperidin-1-carboxílico.

Paso 3 Ester ter-butilico del ácido 3-{2- [3- (5-metil-pirazin-2-il) -ureido] -4-trifluorometil-fenoximetil }-piperidin-1-carboxílico Se prepara de conformidad con el Compuesto 1, Paso 4, utilizando éster ter-butílico del ácido 3-(2-amino-4-trifluorometil-fenoximetil) -piperidin-1-carboxílico y azida de 5-metil-pirazin-2-carbonilo.

Paso 4 Sal clorhidrato de 1- (5-metil-pirazin-2-il) -3- [2-(piperidin-3-ilmetoxi) -5-trifluorometil-fenil] -urea Se prepara de conformidad con el Compuesto 6, Paso 5, utilizando éster ter-butílico del ácido 3-{2-[3-(5-metil-pirazin-2-il) -ureido] -4-trifluorometil-fenoximetil } -piperidin-1-carboxílico . XR RMN (400 MHz, d6-DMSO) d: 10.41 (s, ÍH) , 8.90 (m, 2H) , 8.79 (s, ÍH) , 8.60 (s, 1H) , 8.25 (s, 1H) , 7.40 (d, ÍH) , 7.25 (d, ÍH) , 4.15 (m, 2H) , 2.40 (s, 3H) , 1.20-3.80 (m, 9H) . LRMS (apci, positivo) m/e 410.3 (M+l). 87 Compuesto 10 1 - [2-( 1 -metil-piperidin-3 -ilmetoxi)-5-trifluorometil- fenil]-3-(5-metil-pirazin-2-il)-urea Paso 1 1-metil-3- (2-nitro-4-trifluorometil-fenoximetil) -piperidina Se diluyen 2-nitro-4-trifluorometil-fenol (2.07 g, 10 mmoles), (l-metil-piperidin-3-il) -metanol (1.36 g, 10.5 mmoles) y trifenilfosfina (2.75 g, 10.5 mmoles), con 30 ml de THF y se colocan bajo nitrógeno. La reacción se enfría hasta 0°C, después se agrega DIAD (2.12 g, 10.5 mmoles) mediante goteo en 2 ml de THF. La mezcla de reacción se deja agitar durante 12 horas mientras se calienta hasta temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluye con acetato de etilo (100 ml) y HCl (50 ml de 2N) . La capa acuosa se lava con acetato de etilo (2 x 50 ml) , después se basifica con hidróxido de sodio sólido hasta pH = 12. El producto se extrae con acetato de etilo (3 x 50 ml) . La capa orgánica se lava con salmuera, se seca con MgS0 , se filtra, y se seca a presión reducida. El producto se purifica utilizando un cartucho 40M de Biotage, eluyendo con CH2Cl2/MeOH/NH4OH (90/8/2) para obtener un sólido de color amarillo.

Paso 2 2- (l-metil-piperidin-3-ilmetoxi) -5-trifluorometil-fenilamina Se prepara de conformidad con el Compuesto 4, Paso 3, utilizando 1-metil-3- (2-nitro-4-trifluorometil-fenoxi-metil) -piperidina.

Paso 3 1- [2- (l-metil-piperidin-3-il-metoxi) -5-trifluoro-metil-fenil] -3- (5-metil-pirazin-2-il) -urea Se prepara de conformidad con el Compuesto 1, Paso 4, utilizando 2- (l-metil-piperidin-3-ilmetoxi) -5-tri-fluorometil-fenilamina y azida de 5-metil-pirazin-2-carbonilo. XH RMN (400 MHz, CDC13) d: 11.40 (s, ÍH) , 8.78 (s, ÍH) , 8.20-8.40 (m, 3H) , 7.28 (d, ÍH) , 6.95 (d, ÍH) , 3.95 (m, 2H) , 3.20 (m, ÍH) , 2.85 (m, ÍH) , 2.50 (s, 3H) , 1.00-2.40 (m, 10H) . LRMS (apci, positivo) m/e 424.4 (M+l). 89 Compuesto 11 l-(5-metil-pirazin-2-il)-3-[7-(piridin-3-ilmetoxi)- 2,3-dihidrobenzo[l,4]dioxin-6-il]-urea Paso 1 Sal clorhidrato de 3- (7-nitro-2, 3-dihidro-benzo-[1, 4] dioxin-6-iloximetil) -piridina A una solución agitada de 7-nitro-2, 3-dihidro-benzo [1, 4] dioxin-6-ol (197 mg, 1 mmoles) (que se prepara de conformidad con los métodos de Bourlot et al., J. Med. Chem. , 1998, 41 (1 7) , 3140 y Besson et al., Tetrahedron, 1995, 51, 3197-3204) en 2.4 ml de THF a temperatura ambiente bajo nitrógeno se agrega piridin-3-il-metanol (97 µl, 1 mmol), seguido por trifenilfosfina (288 mg, 1.1 mmoles) y la adición mediante goteo de DIAD (216 ul, 1.1 mmoles) . Después de agitar durante la noche, la mezcla de reacción se concentra mediante evaporación en evaporador giratorio y se divide entre acetato de etilo y agua. El compuesto no se disuelve en ninguna de las capas, y se 90 aisla como la sal clorhidrato mediante filtración y lavado con acetato de etilo.

Paso 2 7- (piridin-3-ilmetoxi) -2, 3-dihidro-benzo [1, 4]dioxin- 6-ilamina Se prepara a partir de la sal clorhidrato de 3- (7-nitro-2, 3-dihidrobenzo [1,4] dioxin-6-iloximetil) -piridina (266 mg, 0.82 mmoles) de conformidad con el método del Compuesto 2 Paso 2. El producto se aisla como un aceite de morado el cual se utiliza inmediatamente en la siguiente reacción.

Paso 3 1- (5-metil-pirazin-2-il) -3- [7- (piridin-3-ilmetoxi) - 2, 3-dihidrobenzo [1, 4] dioxin-6-il] -urea El producto final se prepara de conformidad con el procedimiento del compuesto 1 Paso 4 a partir de 7- (piridin-3-ilmetoxi) -2, 3-dihidrobenzo [1,4] dioxin-6-ilamina y azida de 5-metil-pirazin-2-carbonilo y se aisla como un sólido de color canela. XH RMN (400 MHz, d6-DMSO) d: 10.22 (br s, ÍH) , 9.98 (s, 1H) , 8.77 (s, 1H) , 8.62 (d, ÍH) , 8.57 (s, ÍH) , 7.93 (d, ÍH) , 7.76 (S, 1H) , 7.44 (m, 2H) , 6.78 (s, ÍH) , 5.17 (s, 2H) , 4.20 (s, 4H) , 2.36 (s, 3H) . 91 LRMS (apci, positivo) m/e 394.0 (M+l).

Compuesto 12 l-[7-(2-dimetilamino-etoxi)-2,3-dihidrobenzo- [l,4]dioxin-6-il]-3-(5-metü-pirazin-2-il)-urea Paso 1 Dimetil- '[2- (7-nitro-2, 3-dihidrobenzo [1, 4] dioxin- 6-iloxi) -etil] -amina Se prepara de conformidad con el procedimiento del compuesto 1 Paso 1 utilizando N,N-dimetiletanolamina y 7-nitro-2, 3-dihidrobenzo [1, 4] dioxin-6-ol. El producto seaísla como un aceite de color amarillo.

Paso 2 7- (2-dimetilamino-etoxi) -2, 3-dihidro-benzo [1, 4] - dioxin-6-ilamina A una solución agitada de dimetil- [2- (7-nitro- 2, 3-dihidro-benzo[l, 4] dioxin-6-iloxi) -etil] -amina (151 mg, 92 0.56 mmoles) en 5.6 ml de etanol al 95% a temperatura ambiente se agrega catalizador de Pearlman (40 mg) . La suspensión se somete a un ciclo de vacío/purga tres veces con hidrógeno gaseoso, después se mantiene bajo 1 atmósfera de hidrógeno. Después de agitar durante la noche, el catalizador se elimina mediante filtración a través de papel filtro GF/F con etanol al 95% y el material filtrado se concentra hasta un aceite transparente, el cual lentamente se torna de color morado. El material se utiliza inmediatamente en la siguiente reacción.

Paso 3 1- [7- (2-dimetilamino-etoxi) -2, 3-dihidrobenzo [1,4]-dioxin-6-il] -3- (5-metil-pirazin-2-il) -urea El compuesto final se prepara de conformidad con el método del Compuesto 1 Paso 4, a partir de azida de 5-metil-pirazin-2-carbonilo y 7- (2-dimetilamino-etoxi) -2, 3-dihidrobenzo [1, 4] dioxin-6-ilamina. El producto se aisla como un sólido de color canela. XH RMN (400 MHz, d6-DMS0) d: 10.32 (br s, ÍH) , 10.03 (s, ÍH) , 9.51 (br S, ÍH) , 8.96 (s, 1H) , 8.19 (s, ÍH) , 7.65 (s, ÍH) , 6.64 (s, ÍH) , 4.25 (m, 2H) , 4.19 (s, 4H) , 3.59 (m, 2H) , 2.79 (s, 6H) , 2.36 (s, 3H) . LRMS (apci, positivo) m/e 374.4 (M+l). 93 Compuesto 13 l-[3-(2-dimetilamino-etoxi)-5,6,7,8-tetrahidro- naftalen-2-il]-3-(5-metil-pirazin-2-il)-urea Paso 1 3-Nitro-5, 6, 7, 8-tetrahidronaftalen-2-ol Véase Compuesto 4 Paso 1.

Paso 2 Dimetil- [2- (3-nitro-5, 6, 7, 8-tetrahidronaftalen-2- iloxi) -etjl] -amina Se prepara de conformidad con el procedimiento para el compuesto 1, Paso 1, utilizando 3-nitro-5, 6, 7, 8- tetrahidronaftalen-2-ol .

Paso 3 3- (2-dimetilamino-etoxi) -5,6,7, 8-tetrahidronaftalen- 2-ilamina Se prepara de conformidad con el procedimiento para el compuesto 1, Paso 3, utilizando dimetil- [2- (3- 94 nitro-5, 6,7, 8-tetrahidronaftalen-2-iloxi) -etil] -amina .

Paso 4 1- [3- (2-dimetilamino-etoxi) -5,6,7, 8-tetrahidro-naftalen-2-il] -3- (5-metil-pirazin-2-il) -urea Se prepara de conformidad con el procedimiento para el compuesto 1, Paso 4, utilizando 3- (2-dimetilamino-etoxi) -5, 6, 7, 8-tetrahidronaftalen-2-ilamina y azida de 5-metil-pirazin-2-carbonilo . XH RMN (400 MHz, CDC13) d: 10.26 (brd s, ÍH) , 8.74 (s, ÍH) , 8.45 (brd S, ÍH) , 8.07 (s, ÍH) , 7.99 (s, 1H) , 6.60 (s, 1), 4.17-4.10 (m, 2H) , 2.99-2.89 (m, 2H) , 2.77-2.66 (m, 4H) , 2.54-2.44 (m, 9H) , 1.81-1.73 (m, 4H) . LRMS (APCI, Positivo) m/e 370.3 (M+l).

Métodos terapéuticos Los compuestos de la presente invención se pueden utilizar para potenciar los efectos terapéuticos de radiación y/o un agente quimioterapéutico utilizado en el tratamiento de cánceres y otras indicaciones de proliferación celular que involucran células eucariotas, incluyendo aquellas en humanos y otros animales . Por ejemplo, los compuestos de la invención se pueden utilizar para incrementar el tratamiento de tumores que normalmente se tratan con un anti-metabolito, por ejemplo, metotrexato 95 o 5-fluorouracilo (5-FU) . En general, los compuestos de la presente invención inhiben células que proliferan de manera aberrante, tanto cancerosas como no cancerosas. El uso de los compuestos de la presente invención puede dar como resultado la regresión parcial o completa de células que proliferan en forma aberrante, es decir, la desaparición parcial o completa de dichas células de la población celular. Por lo tanto, por ejemplo, cuando la población de células que proliferan de manera aberrante son células de tumor, el método de la invención se puede utilizar para desacelerar la velocidad de crecimiento del tumor, reducir el tamaño o número de tumores, o para inducir la regresión parcial o completa del tumor. En todas las modalidades, la invención se puede utilizar in vivo o ex vivo cuando no se ha identificado proliferación de célula aberrante o en casos en los que no esté sucediendo la proliferación de célula aberrante, pero en los que se sospecha o se espera la proliferación aberrante de células, respectivamente. Asimismo, la invención también se puede utilizar en casos en los que se ha tratado previamente la proliferación celular aberrante con el fin de evitar o inhibir la recurrencia de la misma. En estas modalidades y en modalidades relacionadas, la "población de células que comprende células que proliferan de manera aberrante" se refiere a cualquier población de 96 células en la cual no se ha identificado o está sucediendo la proliferación de célula aberrante, pero en las cuales se sospecha o se espera la proliferación de célula aberrante, respectivamente, y/o cualquier población celular previamente tratada por proliferación celular aberrante para evitar o inhibir la recurrencia de la misma. Un método de la presente invención comprende la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto inhibidor de Chkl de la presente invención en combinación con un agente quimioterapéutico que pueda efectuar rupturas en el ADN de cadena sencilla o de cadena doble o que pueda bloquear la duplicación del ADN o la proliferación celular. De manera alternativa, un método de la presente invención comprende la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de por lo menos uno de los compuestos inhibidores de Chkl de la presente invención en combinación con terapias que incluyen el uso de un anticuerpo, por ejemplo, herceptina, que tiene actividad para inhibir la proliferación de células de cáncer. Por consiguiente, cánceres, por ejemplo, cánceres colorrectales, cánceres de cuello y cabeza, cánceres de páncreas, cánceres de tejido mamario, cánceres gástricos, cánceres de vejiga, cánceres de la vulva, leucemias, linfomas, melanomas, carcinomas de célula renal, cánceres 97 de ovario, tumores de cerebro, osteosarcomas, y carcinomas de pulmón, son susceptibles al tratamiento incrementado mediante administración de un inhibidor de Chkl de la presente invención en combinación con un agente quimio-terapéutico o un anticuerpo. Cánceres incluye tumores o neoplasmas los cuales son crecimientos de células de tejido en los que la multiplicación de las células es progresiva y sin control. Algunos de dichos crecimientos son benignos, pero otros son denominados "malignos", y pueden conducir a la muerte del organismo. Los neoplasmas malignos, o "cánceres", se distinguen de los crecimientos benignos en que, además de presentar proliferación celular agresiva, pueden invadir los tejidos circundantes y presentar metástasis. Asimismo, los neoplasmas malignos se caracterizan por mostrar una mayor pérdida de diferenciación (mayor "des-diferenciación") y organización una con relación a la otra y a los tejidos circundantes. Esta propiedad se llama "anaplasia". Los cánceres que pueden ser tratados mediante la presente invención incluyen también tumores sólidos, es decir, carcinomas y sarcomas. Los carcinomas incluyen neoplasmas malignos derivados de células del epitelio que infiltran (es decir, invaden) los tejidos circundantes y dan origen a metástasis. Los adenocarcinomas son 98 carcinomas derivados de tejido glandular, o de tejidos que forman estructuras glandulares reconocibles. Otra categoría amplia de cánceres incluye sarcomas, los cuales son tumores cuyas células están arraigadas en una sustancia fibrilar u homogénea, como el tejido conectivo embrionario. La presente invención también permite el tratamiento de cánceres de los sistemas mieloide o linfoide, incluyendo leucemias, linfomas, y otros cánceres que típicamente no están presentes como una masa tumoral, sino que están distribuidos en los sistemas vascular o linfo-reticular . La actividad de Chkl está asociada con diversas formas de cáncer en, por ejemplo, oncología de adulto y pediátrica, crecimiento de tumores sólidos/tumores malignos, carcinoma de célula mixoide y redonda, tumores localmente avanzados, cáncer metastásico, sarcomas de tejido blando de humano, incluyendo sarcoma de Ewing, metástasis de cáncer, incluyendo metástasis linfáticas, carcinoma de célula escamosa, particularmente de la cabeza y cuello, carcinoma de célula escamosa del esófago, carcinoma oral, tumores malignos de célula sanguínea, incluyendo mieloma múltiple, leucemias, incluyendo leucemia linfocítica aguda, leucemia no linfocítica aguda, leucemia linfocítica crónica, leucemia mielocítica crónica, y leucemia de célula pilosa, linfomas de efusión 99 (linfomas basados en cavidad corporal) , linfoma del timo, cáncer de pulmón (incluyendo carcinoma de célula pequeña, linfoma de célula T cutáneo, linfoma de Hodgkin, linfoma de tipo no Hodgkin, cáncer de la corteza adrenal, tumores productores de ACTH, cánceres de célula no pequeña, cáncer de tejido mamario, incluyendo carcinoma de célula pequeña y carcinoma de ducto) , cánceres gastrointestinales (incluyendo cáncer de estómago, cáncer de colon, cáncer colorrectal, y pólipos asociados con neoplasia colorrectal) , cáncer pancreático, cáncer hepático, cánceres urológicos (incluyendo cáncer de la vejiga, tal como tumores de vejiga superficiales primarios, carcinoma de célula transitoria invasivo de la vejiga y cáncer de la vejiga invasivo de músculo) , cáncer de próstata, tumores malignos del tracto genital femenino (incluyendo carcinoma de ovario, neoplasmas epiteliales del peritoneo primarios, carcinoma cervical, cánceres del endometrio uterino, cáncer vaginal, cáncer de la vulva, cáncer uterino y tumores sólidos en el folículo ovárico) , tumores malignos del tracto genital masculino (incluyendo cáncer de testículos y cáncer de pene) , cáncer de riñon (incluyendo carcinoma de célula renal) , cáncer de cerebro (incluyendo tumores intrínsecos del cerebro, neuroblastoma, tumores de cerebro astrocíticos, gliomas, e invasión de célula de tumor metastásico en el sistema nervioso central) , 100 cánceres de tejido óseo (incluyendo osteomas y osteosarcomas) , cánceres de la piel (incluyendo melanoma maligno, progreso de tumor de queratinocitos de piel de humano, y cáncer de célula escamosa) , cáncer de la tiroides, retinoblastoma, neuroblastoma, efusión peritoneal, efusión pleural maligna, mesotelioma, tumores de Wilms, cáncer de vesícula biliar, neoplasmas trofoblásticos, hemangiopericitoma, y sarcoma de Kaposi. Por consiguiente, se espera que la administración de un inhibidor de Chkl de la presente invención incremente los regímenes de tratamiento. Los compuestos de la presente invención también pueden potenciar la eficacia de fármacos utilizados en el tratamiento de enfermedades inflamatorias. Los ejemplos de enfermedades que se pueden beneficiar de la terapia de combinación con compuestos apropiados para el método de la presente invención son artritis reumatoide, psoriasis, vitíligo, granulomatosis de Wegener y lupus eritomatoso sistémico (LES) . El tratamiento de artritis, granulomatósis de Wegener, y LES con frecuencia implica el uso de terapias inmuno-supresoras, tales como radiación ionizante, metotrexato, y ciclofosfamida. Dichos tratamientos típicamente inducen, ya sea directa o indirectamente, el daño al ADN. La inhibición de la actividad de Chkl dentro de las células inmunes ofensoras hace que las células sean 101 más sensibles al control por parte de estos tratamientos estándar. Psoriasis y vitíligo comúnmente se tratan con radiación ultravioleta (UV) en combinación con psoraleno. Los presentes agentes para daño al ADN inducen el efecto aniquilador de UV y psoraleno, e incrementan el índice terapéutico de este régimen de tratamiento. En general, los compuestos útiles en los métodos de la presente invención potencian el control de células de enfermedad inflamatoria cuando se utilizan en combinación con "fármacos inmuno-supresores utilizados actualmente. Además de los cánceres descritos anteriormente, la presente invención también se puede utilizar en métodos para tratar células en proliferación no cancerosas. Dichas condiciones incluyen, pero no se limitan a, ateroesclerosis, restenosis, vasculitis, nefritis, retinopatía, enfermedad renal, trastornos proliferativos de la piel, psoriasis, cicatrización queloide, queratosis actínica, síndrome de Stevens-Johnson, artritis reumatoide (AR) , artritis crónica juvenil (AJC) de inicio sistémico, osteoporosis, lupus eritematoso sistémico, enfermedades hiper-proliferativas del ojo incluyendo crecimiento descendente del epitelio; vitreoretinopatía proliferativa (VRP) ; retinopatía diabética, enfermedades hemangio-proliferativas, ictiosis, o papilomas. 102 Las condiciones no cancerosas que pueden ser tratadas mediante la presente invención también incluyen inflamación y enfermedades, condiciones, o trastornos inflamatorios. Los ejemplos de dichas indicaciones incluyen, pero no se limitan a, artritis reumatoide, psoriasis, vitíligo, granulomatosis de Wegener y lupus eritomatoso sistémico (LES) . El tratamiento de artritis, granulomatósis de Wegener, y LES con frecuencia implica el uso de terapias inmuno-supresoras, tales como radiación ionizante, metotrexato, y ciclofosfamida. Psoriasis y vitíligo comúnmente se tratan con radiación ultravioleta (UV) en combinación con psoraleno. Dichos tratamientos típicamente inducen, ya sea directa o indirectamente, el daño al ADN. La inhibición de la actividad de Chkl dentro de las células inmunes ofensoras hace que las células sean más sensibles al control por parte de estos tratamientos estándar. En general, los inhibidores de Chkl útiles en la invención se pueden utilizar opcionalmente para potenciar el control de células de enfermedad inflamatoria cuando se utilizan en combinación con fármacos inmuno-supresores . Un método preferido para administrar un inhibidor de Chkl de la presente invención se describe en Keegan et al., Solicitud Provisional E.U.A. No. 60/503,925, presentada el 17 de septiembre de 2003, cuya descripción se 103 incorpora en su totalidad para referencia en la presente invención. Dichos métodos para inhibir la proliferación celular aberrante implican programar la administración de un activador de Chkl (por ejemplo un agente quimio-terapéutico) y un inhibidor de Chkl de conformidad con la presente invención. En este método, se administra por lo menos un activador de Chkl a una dosis y durante un tiempo suficiente para inducir la sincronización sustancial de la detención del ciclo celular en las células en proliferación. Después de lograr la sincronización sustancial de fase, se administra por lo menos un inhibidor de Chkl para abrogar la detención del ciclo celular e inducir la muerte celular terapéutica. El método es útil con cualquier activador de Chkl, y encuentra aplicación en el tratamiento o prevención de proliferación aberrante de célula cancerosa y no cancerosa. De preferencia, el inhibidor de Chkl es un inhibidor selectivo de Chkl. Se puede poner en contacto una población de células que proliferan de manera aberrante con un inhibidor de Chkl o se puede poner en contacto con más de un inhibidor de Chkl. Si se utiliza más de un inhibidor de Chkl, los inhibidores de Chkl se pueden coadministrar o administrar en tiempos separados según sea determinado por el médico encargado o el técnico de laboratorio. También se puede poner en contacto una población 104 de células que proliferan de manera aberrante con un activador de Chkl o se puede poner en contacto con más de un activador de Chkl. Si se utiliza más de un activador de Chkl, los activadores de Chkl se pueden coadministrar o administrar en tiempos separados según sea determinado por el médico encargado o el técnico de laboratorio. La presente invención se puede aplicar a poblaciones de células ex vivo . Por ejemplo, los compuestos de la presente invención se pueden utilizar ex vivo para determinar el programa y/o dosis óptima de administración de un inhibidor de Chkl para una indicación, tipo de célula, paciente dado, y otros parámetros. La información que se obtiene de dicho uso se puede utilizar para propósitos experimentales o en la clínica para establecer protocolos para tratamiento in vitro. Otros usos ex vivo para los cuales la invención es adecuada son evidentes para los expertos en la técnica. Un compuesto de la presente invención también puede radio-sensibilizar una célula. Las enfermedades que pueden ser tratadas con radiación electromagnética incluyen enfermedades neoplásicas, tumores benignos y malignos, y células cancerosas. La presente invención también contempla el tratamiento con radiación electromagnética de otras enfermedades no listadas en la presente. Las modalidades 105 preferidas de la presente invención emplean la radiación electro-magnética de: radiación gamma (10~20 hasta 10~13 metros) , radiación con rayos X (10-12 hasta 10~9 metros) , luz ultravioleta (10 nm hasta 400 nm) , luz visible (400 nm hasta 700 nm) , radiación infrarroja (700 nm hasta 1.0 mm) , y radiación con microondas (1 mm hasta 30 cm) . Muchos protocolos para tratamiento de cáncer actualmente emplean radio-sensibilizadores activados por radiación electromagnética, por ejemplo, rayos X. Los ejemplos de radio-sensibilizadores activados por rayos X incluyen, pero no se limitan a, los siguientes: metronidazol, misonidazol, desmetilmisonidazol, pimonidazol, etanidazol, nimorazol, mitomicina C, RSU 1069, SR 4233, E09, RB 6145, nicotinamida, 5-bromodesoxiuridina (BUdr) , 5-yododesoxiuridina (IUdR) , bromodesoxicitidina, fluorodesoxiuridina (FUdR) , hidroxiurea, cisplatina, y análogos y derivados terapéuticamente efectivos de los mismos . La terapia fotodinámica (PDT por sus siglas en inglés) de cánceres utiliza luz visible como el activador por radiación del agente sensibilizador. Los ejemplos de radio-sensibilizadores fotodinámicos incluyen los siguientes, pero no se limitan a: derivados de hematoporfirina, PHOTOFRIN®, derivados de benzoporfirina NPe6, etioporfirina de estaño (SnET2) , feoborbida-a, 106 bacterioclorofila-a, naftalocianinas, ftalocianinas, ftalocianina de zinc, y análogos y derivados terapéuticamente efectivos de los mismos. Los radio-sensibilizadores se pueden administrar en conjunto con una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más compuestos además del inhibidor de Chkl, dichos compuestos incluyen, pero no se limitan a, compuestos que promueven la incorporación de radio-sensibilizadores a las células objetivo, compuestos que controlan el flujo de agentes terapéuticos, nutrientes, y/u oxígeno a las células objetivo, agentes quimioterapéuticos que actúan sobre el tumor con o sin radiación adicional, u otros compuestos terapéuticamente efectivos para tratar cáncer u otra enfermedad. Los ejemplos de agentes terapéuticos adicionales que se pueden utilizar en conjunto con radio-sensibilizadores incluyen, pero no se limitan a, 5-fluorouracilo (5-FU) , leucovorin, oxígeno, carbógeno, transfusiones de eritrocitos, perfluorocarbonos (por ejemplo, FLUOSOLW®-DA) , 2,3-DPG, BW12C, bloqueadores de canal de calcio, pentoxifilina, compuestos antiangiogénesis, hidralazina, y L-BSO. Los agentes quimioterapéuticos que se pueden utilizar incluyen, pero no se limitan a, agentes alquilantes, anti-metabolitos, hormonas y antagonistas de las mismas, radioisótopos, anticuerpos, así como productos 107 naturales, y combinaciones de los mismos. Por ejemplo, se puede administrar un compuesto inhibidor de la presente invención con antibióticos, tales como doxorrubicina y otros análogos de tipo antraciclina, mostazas nitrogenadas, tales como ciclofosfamida, análogos de pirimidina tales como 5-fluorouracilo, cisplatina, hidroxiurea, taxol y sus derivados naturales y sintéticos, y similares. Como otro ejemplo, en el caso de tumores mixtos, tales como adenocarcinoma de mama, en los cuales los tumores incluyen células dependientes de gonadotropina e independientes de gonadotropina, el compuesto se puede administrar en conjunto con leuprólido o goserelina (análogos peptídicos sintéticos de LH-RH) . Otros protocolos anti-neoplásicos incluyen el uso de un compuesto inhibidor con otra modalidad de tratamiento, por ejemplo, cirugía o radiación, también conocidos en la presente invención como "modalidades anti-neoplásicas adjuntas". Los agentes quimioterapéuticos adicionales útiles en la invención incluyen hormonas y antagonistas de las mismas, radio-isótopos, anticuerpos, productos naturales, y combinaciones de los mismos. Los ejemplos de agentes quimioterapéuticos útiles para el método de la presente invención se listan en la siguiente tabla. 108 TABLA 109 TABLA 1 (cont.) Los ejemplos de agentes quimioterapéuticos que son particularmente útiles en conjunto con radio-sensibilizadores incluyen, por ejemplo, camptotecina, carboplatina, cisplatina, daunorrubicina, doxorrubicina, interferón (alfa, beta, gamma) , irinotecano, hidroxiurea, clorambucil, 5-fluorouracilo (5-FU), metotrexato, 2-cloroadenosina, fludarabina, azacitidina, gemcitabina, pemetrexed, interleucina 2, irinotecano, docetaxel, 110 paclitaxel, topotecano, y análogos y derivados de los mismos terapéuticamente efectivos. De conformidad con la presente invención, los compuestos de la presente invención son útiles en combinación con gemcitabina, solos o también con paclitaxel. Los compuestos de la presente invención también son útiles en combinación con pemetrexed, solo o también con cisplatina, carboplatina, u otras platinas. Un inhibidor de Chkl de la presente invención también se puede administrar en combinación con gemcitabina y pemetrexed. Un inhibidor de Chkl de la presente invención administrado en combinación con gemcitabina puede ser útil en el tratamiento de, por ejemplo, carcinoma pancreático, leiomiosarcoma del útero, sarcoma de tejido óseo, cáncer de pulmón de célula no pequeña metastásico, sarcoma de tejido blando de tronco y extremidades, cáncer de célula renal, adenocarcinoma, y enfermedad de Hodgkin. Un inhibidor de Chkl de la presente invención administrado con pemetrexed puede ser útil en el tratamiento de mesotelioma. Como será apreciado por los expertos en la técnica, la referencia en la presente invención a tratamiento se extiende a profilaxis, así como al tratamiento de enfermedades o síntomas establecidos. La referencia a tratamiento también se refiere a la reducción de la velocidad de proliferación o la reducción de 111 recurrencia de la indicación tratada. También se apreciará que la cantidad de un compuesto de la invención requerida para uso en el tratamiento varía con la naturaleza de la condición que está siendo tratada, y con la edad y la condición del paciente, y finalmente queda determinada por el médico o veterinario encargado. En general, sin embargo, las dosis administradas para el tratamiento de humano adulto típicamente están en el intervalo de 0.001 mg/kg hasta aproximadamente 100 mg/kg por día. La dosis deseada se puede administrar en forma conveniente en una sola dosis, o como dosis múltiples administradas a intervalos apropiados, por ejemplo como dos, tres, cuatro o más sub-dosis por día. En la práctica, el médico determina el régimen de dosificación real más apropiado para un paciente individual, y la dosis varía con la edad, peso, y respuesta del paciente particular. Las dosis anteriores son ejemplos del caso promedio, pero pueden existir casos individuales en los cuales se ameritan dosis más altas o más bajas, y dichas dosis están dentro del campo de la presente invención. De igual manera, el contacto de la población de células con un inhibidor de Chkl de la presente invención, puede ocurrir a cualquier dosis y tiempo suficientes para lograr la abrogación sustancial del punto de comprobación del ciclo celular. Típicamente, aunque no necesariamente, 112 dichos tiempos incluyen desde 72 horas aproximadamente hasta 96 horas aproximadamente, dependiendo de diversos factores. En algunas modalidades, sería deseable o necesario administrar el inhibidor de Chkl a través de un período de hasta varias semanas aproximadamente o más, según sea determinado por el médico o técnico encargado. Por lo tanto, un inhibidor de Chkl de la presente invención típicamente se puede administrar hasta 1 hora aproximadamente, hasta 2 horas aproximadamente, hasta 3 horas aproximadamente, hasta 4 horas aproximadamente, hasta 6 horas aproximadamente, hasta 12 horas aproximadamente, hasta 18 horas aproximadamente, hasta 24 horas aproximadamente, hasta 48 horas aproximadamente, o hasta 72 horas aproximadamente. Los expertos en la técnica apreciarán que los intervalos de tiempo expresados en la presente invención son solamente ejemplos y que los intervalos y sub-intervalos dentro y fuera de aquellos expresados también están dentro del campo de la invención. Los inhibidores de Chkl de la presente invención se pueden administrar a través de una pluralidad de dosis. Por ejemplo, el inhibidor de Chkl se puede administrar a una frecuencia de: cuatro dosis suministradas como una dosis por día a intervalos de cuatro días (q4d x 4) ; cuatro dosis suministradas como una dosis por día a intervalos de tres días (q3d x 4); una dosis suministrada por día a 113 intervalos de cinco días (qd x 5) ; una dosis por semana durante tres semanas (qwk3) ; cinco dosis diarias, con dos días de descanso, y otras cinco dosis diariamente (5/2/5) ; o, cualquier régimen de dosificación determinado como apropiado por la circunstancia.

EJEMPLOS EJEMPLO 1 Determinación de los valores de CI50 de los inhibidores de Chkl Se identifica el ADNc de Chkl de humano y se clona como se describió previamente en la publicación de solicitud internacional no. WO 99/11795, presentada el 4 de septiembre de 1998. Se inserta una marca FLAG® en marco con el extremo amino terminal de Chkl de longitud completa. El iniciador 5' contiene un sitio EcoRI, una secuencia Kozak, y también codifica para una marca FLAG® para purificación por afinidad utilizando el anticuerpo M2 (Sigma, Saint Louis, IL) . El iniciador 3' contiene un sitio Salí. El fragmento amplificado mediante PCR se clona en pCI-Neo como un fragmento EcoRI-SalI (Invitrogen, Carlsbad, CA) , después se . sub-clona como un fragmento EcoRI-Notl en pFastBací (Gibco-BRL, Bethesda, MD) . Se prepara baculovirus 114 recombinante como se describe en el manual Bac-to-Bac de Gibco-BRL y se utiliza para infectar células Sf-9 cultivadas en medio CCM3 (Hy-Clone Laboratories, Logan, UT) para expresión de la proteína Chkl marcada con FLAG®. Se purifica Chkl marcado con FLAG® a partir de comprimidos congelados de células SF9 infectadas con baculovirus. Los comprimidos celulares congelados se mezclan con un volumen igual de solución reguladora para lisis 2X que contiene Trís-HCl 100 mM pH 7.5, 200 mM de NaCl, 50 M de B-glicerofosfato, 25 mM de NaF, 4 mM de MgCl2, 0.5 mM de EGTA, 0.2% de TWEEN®-20, 2 mM de vanadato de sodio, 2 mM de DTT, y una mezcla de inhibidores de proteasa (Complete mini, Boehringer Mannheim catálogo 2000 #1836170) . Las células después se trituran (dounced) 20 veces con el pistilo suelto de un homogenizador Dounce y se centrifugan a 48,400 x g durante 1 hora. La columna de afinidad M2 se lava previamente con 10 volúmenes de columna de glicina 50 mM pH 3.5 seguido por Tris 20 mM pH 7.5, 150 mM de NaCl alternando tres veces y finalizando con un lavado con Tris NaCl. La columna después se lava con 25 volúmenes de columna de Tris 20 mM pH 7.5, 150 mM de NaCl, 0.1% de TWEEN®-20, 1 M de EGTA, 1 mM de EDTA y tabletas IX "complete mini" de proteasa. El lisado clarificado después se une a la resina de afinidad M2 por lotes a 4°C durante 4 horas. La mezcla de resina y lisado 115 se vierte después en una columna y se recolecta el flujo que pasa a través de la misma. La resina se lava con 10 volúmenes de columna de Tris 20 mM pH 7.5, 150 mM de NaCl, y N-octil-glucósido 3 mM. Chkl marcado con FLAG® se eluye después de la columna con 6 volúmenes de columna de Tris 20 mM pH 7.5, 150 mM de NaCl, 3 mM de N-octil-glucósido fría que contiene 0.5 mg/ml de péptido FLAG® (Sigma, Catálogo 2000 # F-3290) . Se recolectan tres fracciones y se analizan respecto a la presencia de Chkl marcado con FLAG. La proteína cinasa se utiliza en una prueba para actividad de cinasa dChkl que incluye 100 ng de FLAG®-Chkl purificado (150 pmoles de ATP/min) , 20 µm de péptido de Cdc25C (H-leu-tyr-arg-ser-pro-ser-met-pro-glu-asn-leu-asn-arg-arg-arg-arg-OH) (SEQ ID NO: 1), 4 µm de ATP, 2 µCi de [32P]?-ATP, Hepes 20 mM pH 7.2, 5 mM de MgCl2, 0.1% de NP40, y 1 mM de DTT. Esta prueba se utiliza para determinar la CI5o de los compuestos de la presente invención. Las reacciones se inician mediante la adición de mezcla de reacción que contiene ATP y se llevan a cabo a temperatura ambiente durante 10 minutos. Las reacciones se detienen mediante adición de ácido fosfórico (concentración final 150 mM) y se transfieren a discos de fosfocelulosa. Los discos de fosfocelulosa se lavan cinco veces con ácido fosfórico 150 mM y se secan al aire. Se agrega fluido para 116 centelleo y los discos se cuentan en un contador para centelleo Wallac. Los inhibidores de Chkl de la , presente invención que se someten a la prueba tienen valores de CI50 medidos de 8 aproximadamente hasta 500 nM aproximadamente.

EJEMPLO 2 Selectividad Los inhibidores de Chkl de la presente invención se analizan respecto a la selectividad contra una o más de otras proteínas cinasas, es decir, DNA-PK, Cdc2, caseína cinasa I (CKI) , Chk2, p38 MAP cinasas, ERK cinasa, proteína cinasa A (PKA) , y/o proteína cinasa II de calmodulina de calcio (CaM KII) . Los procedimientos de prueba para todas estas cinasas excepto Chk2 han sido descritos previamente en la literatura, incluyendo la publicación de patente E.U.A. No. 2002-016521 Al, y la solicitud de patente E.U.A. 08/184,605, presentadas el 21 de enero de 1994, de las cuales ambas se incorporan en la presente invención para referencia. La actividad de los compuestos contra Chk2 se analiza de la siguiente manera: se incuban 128 ng de Chk2 marcada con His purificada con hasta 100 mM de inhibidor de Chkl en presencia de 4 mM de ATP, 1 Ci de [32P]?-ATP, Hepes 20 mM pH 7.5, 5 mM de MgCl2, y 0.25% de NP40 durante 20 117 minutos a temperatura ambiente. Las reacciones se detienen con una concentración final de 150 mM de ácido fosfórico, y 5/8 de la mezcla de reacción se transfieren a discos de fosfocelulosa. Los discos se lavan cinco veces con ácido fosfórico 150 mM, y se secan al aire. Se agrega el agente para centelleo y se cuenta la radioactividad utilizando un contador beta Wallac. p38 MAP cinasa, ERK cinasa, PKA, CaM KII, y Cdc2 se adquieren de New England Biolabs, y las pruebas se efectúan de conformidad con las instrucciones del fabricante utilizando 4-50 µM de ATP y analizando concentraciones de inhibidor de Chkl tan altas como 100 µM. Todos los inhibidores evaluados muestran una selectividad de por lo menos 100 veces para Chkl con respecto a las otras enzimas.

EJEMPLO 3 Inhibidores de Chkl de la invención inhiben la función de Chkl en las células Para establecer que los inhibidores de Chkl de la invención inhiben la función de Chkl en las células, los inhibidores se pueden analizar en pruebas moleculares basadas en célula. Debido a que se ha demostrado que Chkl de mamífero fosforila a Cdc25C in vitro, lo que sugiere 118 que ésta regula en forma negativa ciclina B/cdc2 en respuesta al daño al ADN, se puede analizar la capacidad de los inhibidores de Chkl para incrementar la actividad de Ciclina B/cdc2. El experimento se puede diseñar de la siguiente manera: Se irradian células HeLa con 800 rads y se incuban durante 7 horas a 37 °C. Debido a que estas células funcionalmente son p53 negativas, éstas se detienen exclusivamente en G2. Después, se agrega nocodazol a una concentración de 0.5 µg/ml y las células se incuban durante 15 horas a 37 °C. La adición de nocodazol está diseñada para atrapar cualesquiera células que pasen a través de la detención en G2 hacia M. Por último, se agrega un inhibidor de Chkl durante 8 horas, se recolectan las células, se lisan y se precipitan inmunológicamente cantidades iguales de proteína con un anticuerpo para Ciclina Bl (New England Biolabs) en la forma sugerida por el fabricante. Los inmuno-precipitados se analizan después respecto a actividad de cinasa cdc2 asociada con Ciclina B analizando la actividad de la cinasa de histona Hl (Yu et al., J Biol Chem . , Dic . 11 de 1998; 273 (50) :33455-64) . Además, se puede establecer la capacidad de los inhibidores de Chkl de la presente invención para abrogar el punto de comprobación de daño a ADN en G2 inducido por IR utilizando experimentos de prueba de índice mitótico. Se 119 tratan células HeLa (aproximadamente 1 x 106) como se describió anteriormente. Las células se recolectan mediante centrifugación, se lavan una vez con PBS, después se vuelven a suspender en 2.5 ml de KCl 75 mM y se vuelven a centrifugar. Las células se fijan después en 3 ml de una mezcla de ácido acético:metanol (1:3) fría recién preparada y se incuban sobre hielo durante 20 minutos. Las células se convierten en comprimidos, se aspira la solución de fijación y se vuelven a suspender en 0.5 ml de PBS. Se preparan frotis mitóticos pipeteando 100 µl de las células fijas sobre un porta-objetos para microscopio y la muestra se anega con 1 ml de solución para fijación. Los portaobjetos se secan después al aire, se tiñen con tinción de Wright (Sigma) durante 1 minuto, seguido por un lavado con agua y un lavado con metanol al 50%. La presencia de cromosomas condensados y la ausencia de envoltura nuclear identifica las células mitóticas.

EJEMPLO 4 Inhibidores de Chkl de la presente invención incrementan la aniquilación de células mediante tratamientos para cáncer Para demostrar que la inhibición de Chkl mediante un compuesto de la presente invención sensibiliza las células elegidas como blanco al efecto aniquilador de los 120 agentes que dañan el ADN, se pueden incubar células en presencia de un inhibidor de Chkl de la presente invención y se exponen ya sea a irradiación o a un agente químico que daña el ADN. Las células sembradas a una densidad de 1000-2000 por cavidad en placas para microtitulación de 96 cavidades se cultivan en medio RMPI 1640 que contiene 10% de FBS, 100 U/ml de penicilina y 100 µg/ml de estreptomicina durante 18 horas a 37 °C en una incubadora humedecida con 5% de C02. Las células evaluadas pueden incluir cualesquiera células o líneas celulares de interés, tales como HeLa, ACHN, 786-0, HCT116, SW620, HT29, Colo205, SK-MEL-5, SK-MEL-28, A549, H322, OVCAR-3, SK-OV-3, MDA-MB-231, MCF-7, PC-3, HL-60, K562, y MOLT4. Todas las designaciones de línea celular se refieren a las siguientes líneas de célula de humano: 121 Las células se tratan con medio que contiene fármacos quimioterapéuticos solos o fármacos quimioterapéuticos y un inhibidor de Chkl. Las células se incuban durante 5 días aproximadamente antes de medir el crecimiento mediante determinación de los niveles de absorción de 3H-timidina. Los fármacos quimioterapéuticos incluyen etopósido, doxorrubicina, cisplatina, clorambucil, 5-fluorouracilo (5-FU) . La concentración de fármaco necesaria para inhibir el crecimiento celular para el 90% de las células de control no tratadas se define como la GI9o- Los compuestos de la presente invención se pueden analizar con antimetabolitos adicionales, incluyendo metotrexato, hidroxiurea, 2-cloroadenosina, fludarabina, azacitidina, y gemcitibina para establecer en la misma la capacidad de los agentes para incrementar la aniquilación. Los compuestos de la presente invención 122 se pueden comparar entre sí determinando la aniquilación incrementada de carcinoma colorrectal HT29 en combinación con gemcitabina. Además, se puede analizar la capacidad de los inhibidores de Chkl de la invención para incrementar la aniquilación mediante radiación.

EJEMPLO 5 Modelos animales de tumor Para evaluar la capacidad de los inhibidores de Chkl de la invención para incrementar la aniquilación de tumores mediante agentes que dañan el ADN en ratones, se establecen xenoinjertos de modelos de tumor utilizando líneas de célula de tumor de colon. Se puede utilizar 5-fluorouracilo (5-Fü) o gemcitabina como agentes que dañan al ADN. Se pueden utilizar células HT29 y Colo205 (carcinoma de colon de humano) y células H460 y Calu-6 (carcinoma de célula no pequeña) para propagar los tumores de xenoinjerto en ratones de 6-8 semanas de edad de género femenino tímicos Balb/c (nu/nu) . Los ratones se mantienen en una cabina con flujo de aire laminar bajo condiciones libres de patógenos y se alimentan con comida y agua estériles ad libitum . Las líneas celulares se cultivan hasta subconfluencia en medio RPMI 1640 complementado con 123 10% de FBS, 100 U/ml de penicilina, 100 µg/ml de estreptomicina, y 1.5 mM de L-glutamina en un ambiente humedecido con 5% de C02. Se preparan suspensiones de célula individual en CMF-PBS, y la concentración celular se ajusta a 1 x 108 células/ml. Los ratones se inoculan por vía subcutánea (s.c.) en el flanco derecho o la pierna derecha con un total de 1 x 107 células (100 µl) . Los ratones se aleatorizan (5-15 ratones/grupo) en cuatro grupos de tratamiento y se utilizan cuando los tumores alcanzan un volumen de 75-100 cm3 (normalmente 7-11 días después de la inoculación) . Los tumores se miden con calibradores de Vernier y los volúmenes de tumor se calculan utilizando la fórmula derivada empíricamente: Volumen de tumor (cm3) = longitud del tumor (cm) x anchura del tumor (cm) x profundidad del tumor (cm) /3.3.

El tratamiento consiste de i) inyección intraperitoneal (i.p) de 100 µl de gemcitabina a 160 mg/kg. Se observa un retraso en el crecimiento del tumor en los ratones tratados con gemcitabina. Se espera que el tratamiento de los ratones con 160 mg/kg de gemcitabina en combinación con la administración por vía oral de inhibidores de Chkl reduzca los volúmenes de tumor y prolongue la vida. El tamaño del tumor se monitorea cada tercer día durante todo el tiempo 124 que dura el experimento. Evidentemente, se pueden hacer muchas modificaciones y variaciones de la invención como se describió anteriormente en la presente sin alejarse del alcance y campo de la misma, y, por lo tanto, únicamente se deben imponer limitaciones tales como las que se indican mediante las reivindicaciones anexas.

Claims

125 NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiendo descrito el presente invento se considera como novedad y por lo tanto se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes: REIVINDICACIONES 1.- Un compuesto que tiene una fórmula estructural en la cual X1 es nada, -O-, -S-, -CH2-, o -N(RX)-; X2 es -O-, -S-, o -NÍR1)-; Y es O ó S; o =Y representa dos átomos de hidrógeno unidos a un átomo de carbono común; W se selecciona a partir del grupo que consiste de heteroarilo, arilo, heterocicloalquilo, cicloalquilo, y alquilo de C?_6 sustituido con un grupo heteroarilo o arilo, en el cual dicho grupo arilo de W está opcionalmente sustituido con uno a cuatro sustituyentes representados por R2, dicho grupo heteroarilo de W está opcionalmente 126 sustituido con uno a cuatro sustituyentes representados por R5, y dichos grupos heterocicloalquilo y cicloalquilo de W están opcionalmente sustituidos con uno o dos sustituyentes alquilo de C?-ß; R1 se selecciona a partir del grupo que consiste de hidro, alquilo de Ci-?, alquenilo de C2_6, alquinilo de C2-6, y arilo; R2 se selecciona a partir del grupo que consiste de heteroarilo, halógeno, alquilo de C?_6 opcionalmente sustituido, alquenilo de C2_6, OCF3, N02, CN, NC, N(R3)2, OR3, C02R3, C(0)N(R3)2, C(0)R3, N(R1)COR3, N (R1) C (O) OR3, N (R1) C (O) -alquilen (C?_6) -C (O) R3, N (R1) C (O) -alquilen (C?_6) -C (O) OR3, N (R1) C (O) -alquilen (C?_6) -OR3, N (R1) C (O) -alquilen (C?_6) -NHC(0)OR3, N(RX)C (O) -alquilen (C^e) -S02NR3, alquilen (C?_6) -OR3, y SR3; R3 se selecciona a partir del grupo que consiste de hidro, alquilo de C\s, alquenilo de C2_6, cicloalquilo, arilo, heteroarilo, S02R4, halógeno, alquilo de C?_6 sustituido con uno o más de halógeno, hidroxi, arilo, heteroarilo, heterocicloalquilo, N(R)2, y S02R4, alquilen (C?_6) -arilo, alquilen (C?_6) -heteroarilo, alquilen (C?-6) -heterocicloalquilo de C3_8, alquilen (C?_6) -S02-arilo, alquilen (Ci-d) -N (R4) 2 opcionalmente sustituido, OCF3, alquilen (C?_6) -N (R4) 3+, heterocicloalquilo de C3_8, y CH (alquilen (C?_6) -N (R4) 2) 2, o dos grupos R3 se to an juntos 127 para formar un anillo alifático de 3 a 8 miembros opcionalmente sustituido; R4 se selecciona a partir del grupo que consiste de nada, hidro, alquilo de C?_6, cicloalquilo, arilo, heteroarilo, alquilen (C?_6) -arilo, y S02-alquilo de C?~6, o dos grupos R4 se toman juntos para formar un anillo de 3 a 8 miembros opcionalmente sustituido; R5 se selecciona a partir del grupo que consiste de alquilo de C?_5, alquinilo de C2_e, arilo, heteroarilo, heterocicloalquilo, N(R3)2, NIR^CIOR3, N(Ra)C02R3, OR3, halógeno, N3, CN, alquilen (Ci-g) -arilo, alquilen (C?-ß) -N (R3) 2, C(0)R3, C(0)OR3, C(0)N(R3)2, CF3, y Alquilen (C? R6 se selecciona a partir del grupo que consiste de hidro, alquilo de C?-6, alquenilo de C2_6, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, S02R4, alquilo de C?_6 sustituido con uno o más de halógeno, hidroxi, arilo, heteroarilo, heterocicloalquilo, N(R)2, y S02R4, alquilen (C?_6) -arilo, alquilen (C?~ß) -heteroarilo, alquilen (C?_6) -heterocicloalquilo de C3_8, alquilen (C?-ß) -S02-arilo, alquilen (C?-6) -N (R4)2 opcionalmente sustituido, OCF3, alquilen (C?_6) -N(R4) 3+, heterocicloalquilo de C3-s, y 128 CH (alquilen (d-6) -NR4) 2) 2; R7 y R8 , de manera independiente, se seleccionan a partir del grupo que consiste de hidro, OR3, alquilo de C?-6, halógeno, N(R3)2, C(0)N(R3)2, alquilen (C?_3) -arilo, CN, N02, C(0)0RX1, C(0)R , y SR11; R9 es -C=C-R10 o -CF3, o un grupo R8 y un grupo R9 se toman junto con los átomos de carbono a los cuales éstos están unidos para formar un sistema de anillo alifático o aromático carbocíclico de 5 o 6 miembros que contiene opcionalmente uno a tres heteroátomos que se seleccionan a partir del grupo que consiste de O, NR4, y S; R10 se selecciona a partir del grupo que consiste de hidro, alquilo de C?_6, arilo, alquilen (C!_6) -arilo, heteroarilo, y alquilen (C?_6) -heteroarilo; R11 se selecciona a partir del grupo que consiste de hidro, alquilo de C?-ßr alquenilo de C2-6A arilo, alquilen (C1-3) -arilo, cicloalquilo de C3_8, y alquilen (C?_3) -cicloalquilo de C3_8; n es 1 ó 2; o una sal, o profármaco, o solvato de los mismos farmacéuticamente aceptables. 2. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 caracterizado porque X1 y X2 son -N(H) ; Y es O ó S; 129 W es heteroarilo opcionalmente sustituido que contiene por lo menos dos heteroátomos que se seleccionan a partir del grupo que consiste de N, O, y S. 3. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque R6 se selecciona a partir del grupo que consiste de alquilen (C?_6) -N (R4) 2 opcionalmente sustituido, alquilen (C?_s) -heteroarilo, alquilen (C?_6) -heterociclo-alquilo, y heterocicloalquilo de C3-8- 4.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque R6 se selecciona a partir del grupo que consiste de -CH2CH3, - (CH2) ?_6-N (CH3) 2, -(CH2)1_6NH(CH3), 130 H H 25 131 20 25 132 H H 25 133 H 25 134 y 25 135 5.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque W se selecciona a partir deí grupo que consiste de piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, y triazinilo, opcionalmente sustituidos con uno a cuatro sustituyentes que se seleccionan a partir del grupo que consiste de alquilo de C?-6 opcionalmente sustituido, alquinilo de C2_6, arilo, heteroarilo, N(R3)2, C(0)N(R3)2, C(0)OR3, OR3, CF3, CN, y halógeno. 6.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque W se selecciona a partir del grupo que consiste de 136 1 . - El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque W se selecciona a partir del grupo que consiste de 137 8. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque W es pirazinilo. 9. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque W es pirazino-2-ilo sustituido con un sustituyente R5 en la posición 5. 10.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque R5 se selecciona a partir del grupo que consiste de CF3, CH3, y nada. 11.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R7 y R8 son hidro. 12. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R9 es -C=CH o -CF3. 13.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R8 y R9 se toman junto con los átomos de carbono a los cuales estos están unidos para formar o 14.- El compuesto de conformidad con la 138 reivindicación 3, caracterizado porque R6 se selecciona a partir del grupo que consiste de - (CH2) 2N (CH3) 2, 139 15.- Una composición que comprende un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 y un vehículo farmacéuticamente aceptable. 16.- Un compuesto que se selecciona a partir del grupo que consiste de: 1- [5-etinil-2- (l-metil-piperidin-3-ilmetoxi) -fenil] -3- (5-metil-pirazin-2-il) -urea 1- [2- (2-dimetilamino-etoxi) -5-etinil-fenil] -3- (5-metil-pirazin-2-ü) -urea 1- [5-etinil-2- (piridin-3-ilmetoxi) -fenil] -3- (5-metil-pirazin-2-il) -urea 1- [3- (l-metil-piperidin-3-ilmetoxi) -5, 6,7,8-tetrahidro-naftalen-2-il] -3- (5-metil-pirazin-2-il) -urea 1- [3- (l-metil-piperidin-2-ilmetoxi) -5, 6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il] -3- (5-metil-pirazin-2-il) -urea (S) -1- (5-metil-pirazin-2-il) -3- [2- (piperidin-3-ilmetoxi) -5-trifluorometil-fenil] -urea (R) -1- (5-metil-pirazin-2-il) -3- [2- (piperidin-3-ilmetoxi) -5-trifluorometil-fenil] -urea 1- [2- (l-metil-piperidin-4-iloxi) -5-trifluorometil-fenil] -3- (5-metil-pirazin-2-il) -urea 1- (5-metil-pirazin-2-il) -3- [2- (piperidin-3-ilmetoxi) -5-trifluorometil-fenil] -urea 1- [2- (l-metil-piperidin-3-ilmetoxi) -5-trifluorometil-fenil] -3- (5-metil-pirazin-2-il) -urea 140 1- (5-metil-pirazin-2-il) -3- [7- (piridin-3-ilmetoxi) -2, 3-dihidrobenzo [1, 4] dioxin-6-il] -urea 1- [7- (2-dimetilamino-etoxi) -2, 3-dihidrobenzo [1,4] dioxin-6-il] -3- (5-metil-pirazin-2-il) -urea; y 1- [3- (2-dimetilamino-etoxi) -5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-il] -3- (5-metil-pirazin-2-il) -urea. 17. - Un método para inhibir la cinasa 1 de punto de comprobación en una célula que comprende un paso de poner en contacto la célula con una cantidad efectiva de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1. 18.- Un método para sensibilizar células en un individuo sometido a tratamiento quimioterapéutico o radio-terapéutico para una indicación médica, que comprende administrar al individuo una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 en combinación con un agente quimioterapéutico, un agente radio-terapéutico, o una mezcla de los mismos. ! 19.- El método de conformidad con la reivindicación 18, que comprende también administrar al individuo una citocina, linfocina, factor de crecimiento, otro factor hematopoyético, o mezcla de los mismos. 20.- El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el agente 141 quimioterapéutico se selecciona a partir del grupo que consiste de un agente alquilante, un antimetabolito, una hormona o antagonista de la misma, un radioisótopo, un anticuerpo, y mezclas de los mismos. 21.- El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el agente radio-terapéutico se selecciona a partir del grupo que consiste de radiación gamma, radiación de rayos X, luz ultravioleta, luz visible, radiación infrarroja, y radiación de microondas. 22.- El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque la condición es un cáncer que se selecciona a partir del grupo que consiste de un cáncer colorrectal, un cáncer de cabeza y cuello, un cáncer pancreático, un cáncer de tejido mamario, un cáncer gástrico, un cáncer de vejiga, un cáncer de la vulva, una leucemia, un linfoma, un melanoma, un carcinoma de célula renal, un cáncer de ovario, un tumor de cerebro, un osteosarcoma, y un carcinoma de pulmón. 23.- El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque la condición es un cáncer que se selecciona a partir del grupo que consiste de carcinoma de célula mixoide y redonda, un tumor localmente avanzado, un cáncer metastático, sarcoma de Ewing, una metástasis de cáncer, una metástasis 142 linfática, carcinoma de célula escamosa, carcinoma de célula escamosa del esófago, carcinoma oral, mieloma múltiple, leucemia linfocítica aguda, leucemia no linfocítica aguda, leucemia linfocítica crónica, leucemia mielocítica crónica, leucemia de célula pilosa, linfomas de efusión (linfomas basados en cavidad corporal) , linfoma del timo, cáncer de pulmón, carcinoma de célula pequeña, linfoma de célula T cutáneo, linfoma de Hodgkin, linfoma de tipo no Hodgkin, cáncer de la corteza adrenal, tumores productores de ACTH, cánceres de célula no pequeña, cáncer de tejido mamario, carcinoma de célula pequeña, carcinoma de ducto, cáncer de estómago, cáncer de colon, cáncer colorrectal, pólipos asociados con neoplasia colorrectal, cáncer pancreático, cáncer hepático, cáncer de la vejiga, tumores de vejiga superficiales primarios, carcinoma de célula transitoria invasivo de la vejiga, cáncer de la vejiga invasivo de músculo, cáncer de próstata, carcinoma de ovario, neoplasmas epiteliales del peritoneo primarios, carcinoma cervical, cánceres del endometrio uterino, cáncer vaginal, cáncer de la vulva, cáncer uterino y tumores sólidos en el folículo ovárico, cáncer de testículos, cáncer de pene, carcinoma de célula renal, tumor intrínseco del cerebro, neuroblastoma, tumor de cerebro astrocítico, glioma, invasión de célula de tumor 143 metastático en el sistema nervioso central, osteoma y osteosarcoma, melanoma maligno, progreso de tumor de queratinocitos de piel de humano, cáncer de célula escamosa, cáncer de la tiroides, retinoblastoma, neuroblastoma, efusión peritoneal, efusión pleural maligna, mesotelioma, tumores de Wilms, cáncer de vesícula biliar, neoplasma trofoblástica, hemangiopericitoma, y sarcoma de Kaposi. 24.- El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el tratamiento se administra para una condición inflamatoria que se selecciona a partir del grupo que consiste de artritis reumatoide, psoriasis, vitíligo, granulomatosis de Wegener, y lupus eritematoso sistémico. 25.- El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el compuesto de conformidad con la reivindicación 1 tiene una selectividad de por lo menos 20 veces para inhibir Chkl con respecto a proteína cinasa A, proteína cinasa C, cdc2, y pp60v-src. 26.- El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el compuesto de conformidad con la reivindicación 1 tiene una selectividad de por lo menos 75 veces para inhibir Chkl con respecto a proteína cinasa A, proteína cinasa C, 144 cdc2, y pp60v-src. 27.- El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el compuesto de conformidad con la reivindicación 1 tiene una selectividad de por lo menos 100 veces para inhibir Chkl con respecto a proteína cinasa A, proteína cinasa C, cdc2, y pp60v-src. 28.- Un método para inhibir la proliferación celular aberrante que comprende poner en contacto una población de células que comprende células que proliferan de manera aberrante con un activador de Chkl para sincronizar sustancialmente la detención del ciclo celular entre dichas células que proliferan de manera aberrante, y • posteriormente poner en contacto dicha población de células con un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 para abrogar sustancialmente dicha detención del ciclo celular. 29.- El método de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque dicho activador de Chkl comprende por lo menos un agente quimioterapéutico. 30.- El método de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque dicho activador de Chkl comprende radiación ionizante o ultravioleta. 31.- El método de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque dicha radiación 145 ionizante se administra en conjunto con un radio-sensibilizador, un foto-sensibilizador, o una mezcla de los mismos . 32.- El método de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque dichas células que proliferan de manera aberrante no son cancerosas.