KR20070028591A - Ｃｈｋ1의 억제에 유용한 비스아릴우레아 유도체 - Google Patents

Abstract

본 발명은 DNA 손상 또는 DNA 복제중 생길 수 있는 병변과 관련된 질병 및 증상을 치료하는데 유용한 아릴- 및 헤테로아릴-치환 우레아 화합물을 제공한다. 또한, 본 발명은 이 화합물을 제조하는 방법 및, 예를 들어, DNA 복제, 염색체 분리 또는 세포 분열에 있어서의 결함을 특징으로 하는 암 및 기타 질병을 치료하는데 있어서 상기 화합물의 치료제로서의 용도를 제공한다. 상기 화합물은 하기 구조식 I의 구조를 갖는다.

[화학식 I]

Description

ＣＨＫ1의 억제에 유용한 비스아릴우레아 유도체{BISARYLUREA DERIVATIVES USEFUL FOR INHIBITING ＣＨＫ1}

본 발명은 유전 물질의 완전성을 유지하고 손상을 수선하는 효소를 억제시키는 데 유용한 화합물에 관한 것이다. 더욱 구체적으로, 본 발명은 아릴- 및 헤테로아릴-치환 우레아 계열 화합물, 이 화합물의 제조 방법 및 이 화합물의 치료제로서의 용도 예를 들어, 데옥시리보핵산(DNA) 복제, 염색체 분리 또는 세포 분열상 결손을 특징으로 하는 암 및 기타 질병의 치료에 사용되는 치료제로서의 용도에 관한 것이다.

다수의 질병, 병상 및 이상(이하 "징후"라 칭함)은 비정상적으로 증식하는 세포가 관여하고 있는 것을 특징으로 한다. 본원에 사용된 "비정상적으로 증식하는 세포"(또는 "비정상 세포 증식")이란, 정상적이거나, 적절하거나 또는 예상되는 경로로부터 이탈된 세포 증식을 의미한다. 예를 들어, 비정상 세포 증식에는 DNA 또는 기타 세포 성분이 손상을 입거나 또는 결손된, 적당하지 않은 세포 증식을 포함한다. 비정상 세포 증식에는 또한 세포 분열이 부적절하게 높은 수준으로 진행되거나, 세포가 부적절하게 낮은 수준으로 사멸됨(예를 들어, 세포 사멸)에 의하거나 또는 이로써 매개되는 징후, 또는 이러한 결과들 중 어느 하나 또는 둘 다를 초래 하는 징후를 포함한다. 이러한 징후는 예를 들어, 세포, 세포군 또는 조직(들)의 단일 또는 다발성 국소 비정상 증식을 특징으로 할 수 있으며, 이 징후에는 암성(cancerous)(양성 또는 악성) 및 비 암성(noncancerous) 징후를 포함한다.

정의 상으로, 모든 암(양성 및 악성)은 비정상 세포 증식의 몇몇 형태를 포함한다. 이의 비 제한적 예로서는 암종 및 육종을 포함한다. 다른 예에 관하여는 이하에 기술되어 있다. 일부 비 암성 징후로서는 비정상 세포 증식도 포함한다. 비정상 세포 증식과 관련된 비 암성 징후의 비 제한적 예로서는 류마티스성 관절염, 건선, 백반, 웨그너 육아종증 및 전신 루프스병을 포함한다. 다른 예에 관하여는 이하에 기술되어 있다.

비정상적으로 증식하는 세포와 관련된 징후를 치료하는 한 가지 방법으로서는 DNA 손상 제제를 사용하는 것을 포함한다. 이 제제는 생명 유지에 필요한 세포내 경로 예를 들어, DNA 대사, DNA 합성, DNA 전사 및 방추 미세소관 형성 경로를 파괴함으로써 비정상적으로 증식하는 세포를 사멸시키도록 설계된다. 이 제제는 또한 예를 들어, 염색체 구조의 완전성을 교란시키는 병변을 DNA에 도입시킴으로써 작용할 수 있다. DNA 손상 제제는 정상적인 건강한 세포에는 최소한의 손상을 주도록 하면서, 비정상적으로 증식하는 세포는 최대한 손상시켜, 결국에는 세포가 사멸되도록 유도하는 방식으로 설계 및 투여된다.

다수의 DNA 손상 제제가 현재까지 개발되고 있다. 다른 제제들도 또한 개발중에 있다. DNA 손상 제제로서는 화학 요법 제제 및 방사선을 포함한다. 그러나 불행하게도, 비정상적 세포 증식과 관련된 증상을 치료하는데 있어서(특히, 암 치료 에 있어서) DNA 손상 제제의 효능은 기대에 못 미치고 있다. 비정상적으로 증식하는 세포에 사용되는 제제의 건강한 세포에 대한 선택성(종종 치료 지수(therapeutical index)라고도 칭함)은 거의 없다고 볼 수 있다.

뿐만 아니라, 모든 세포는 DNA 손상 제제에 대하여 범용으로 작용할 수 있는 감작 및 수선 기작을 보유한다. 이러한 감작 기작(세포 주기 체크포인트(cell cycle checkpoint)라고도 함)들은 다수의 세포 복제 단계의 순서를 유지시키고 이들 각 단계가 높은 신뢰도로 실행될 수 있도록 돕는다[Hartwell et al., Science, 246:629-634 (1989); Weinert et al., Genes Dev., 8:652 (1994)]. 세포가 DNA 손상 제제에 의하여 유도된 의도적 손상을 포함하여 DNA 손상을 발견하면, 임의의 신호 전달 경로는 세포 주기를 일시적으로 중단시키는("정지(arrest)"), 세포 주기 체크포인트와 세포 복제 주기를 활성화한다. 이러한 정지로 인하여, 비정상적으로 증식하는 세포의 세포 주기를 통해 그 세포의 DNA가 수선될 수도 있고, 종종 DNA 손상된 세포가 계속해서 생존 및 증식하는데 충분한 정도로 수선되기도 한다. 이와 같이 원하지 않는 수선 작용은 비정상적으로 증식하는 세포를 사멸하는데 충분하도록 DNA를 손상시키고자 하는 노력을 수포로 만드는 경향이 있다.

예를 들어, 화학 요법 제제 예를 들어, Gemzar^TM(젬시타빈, 또는 2',2' 디플루오로-2'-데옥시시티딘)는 그 자체를 DNA 합성중에 DNA에 통합시켜 DNA를 손상시킨다. 좌측의 수선되지 않은, 즉, 손상된 DNA는 일반적으로 계속해서 유지될 수 없게 된다. 그러나, 다수의 표적화 세포에 있어서, 세포 주기 체크포인트를 통하여 적절치 못하게 생성된(또는 손상된) DNA가 선별된다. 활성화된 세포 주기 체크포인트는 손상된 DNA가 수선될 수 있는데 충분한 시간 동안 세포 주기를 정지시키게 된다. 이는 비정상적으로 증식하는 세포가 DNA 손상 제제 예를 들어, 화학 요법 제제, 방사선 요법 제제 및 기타 요법 제제의 세포 사멸 효능을 억제한다는 것을 이론상으로 증명하는 한 가지 방법이다.

기타 DNA 손상 제제는 종양 세포가 S-기에 정지하도록 만든다. 종양 세포는 화학 요법 제제가 투여되는 동안 S-기에 머무름으로써 이러한 화학 요법을 쓸모없게 만드는 것으로 파악된다. 이 약품이 제거되면, DNA 손상은 수선되고, 세포 주기 정지(cell cylce arrest)는 막을 내리게 되며, 이 세포들은 나머지 세포 주기를 진행시키게 된다[Shi et al., Cancer Res. 61:1065-1072, 2001]. 기타 치료법은 다른 체크포인트 시점 예를 들어, G1 및 G2 기(이하, 보다 상세히 설명함)에 세포 주기가 정지하도록 만든다. 세포 주기 체크포인트를 활성화하는 DNA 손상 제제를 본원에서는 일반적으로 "체크포인트 활성화제(checkpoint activator)"라 칭한다. "Chk1"("체크포인트 1"이라 칭함)으로 지정된 체크포인트를 활성화하는 DNA 손상 제제를 "Chk1 활성화제"라 칭한다. 이러한 체크포인트에 대한 억제제를, 일반적으로 그리고 구체적으로, 각각 "체크포인트 억제제" 및 "Chk1 억제제"라 칭한다.

그러므로, 다양한 DNA 손상 체크포인트를 억제하면, 치료 목적으로 유도한 DNA 손상을 세포가 수선하는 것을 차단하고 DNA 손상 제제에 대하여 표적화된 세포를 감작하는 것을 보조할 것으로 예상된다. 이에 따라서, 이와 같은 감작화는 이러한 치료제의 치료 지수를 증가시킬 것으로 기대된다.

본 발명을 더욱 깊이 이해하기 위하여, 이하에서는 세포 주기 단계 및 Chk1의 역할에 대하여 더욱 상세히 설명하고자 한다.

세포 주기는 모든 진핵 생물 종에 걸쳐서 기본적인 과정과 조절 방식이 구조적으로 그리고 기능적으로 동일하다. 유사 분열(체세포) 세포 주기는 4개의 기로 이루어져 있다: G1(휴지)기, S(합성)기, G2(휴지)기 및 M(유사 분열)기. 상기 G1, S 및 G2기를 총칭하여 세포 주기의 간기(interphase)라 칭한다. G1기 동안에는, 세포의 생물 합성이 고속으로 진행된다. S기는 DNA 합성이 시작될 때 개시되고, 세포 핵의 DNA 함량이 2배가 되고 2개의 동일한 염색체 세트가 생성될 때 종료된다.

이후, 세포는 유사 분열이 개시될 때까지 지속되는 G2기에 도입된다. 유사 분열에 있어서, 염색체는 쌍을 이루고 분리되며, 그 과정에서 2개의 핵이 형성되고, 세포가 2개의 딸 세포(여기서, 각각의 딸 세포는 2개의 염색체 세트 중 어느 하나를 함유하는 하나의 핵을 보유함)로 분열되는 세포질 분열이 일어나게 된다. 세포질 분열이 종료되면 M기도 종료되는데, 이는 다음 세포 주기의 간기가 시작됨을 알리는 것이다. 세포 주기 단계들이 진행되는 순서는 엄격하게 조절되는 것으로서, 하나의 세포 주기 단계의 개시는 이전 세포 주기 단계가 완료되었는지 여부에 달려 있다. 이로써 유전 물질이 제1 세대 체세포로부터 다음 세대의 체세포까지 복제 및 분리될 때 신뢰성이 유지될 수 있는 것이다.

세포 주기 체크포인트는, 세포 주기 시그널 또는 염색체 기작의 결함에 반응하여 연속적으로 작용하는 3개 이상의 별도 폴리펩티드 부류를 포함하는 것으로 알려져 있다[Carr, A.M., Science, 271:314-315 (1996)]. 첫 번째 부류는 세포 주기 진행 중 DNA 손상 또는 이상을 발견 또는 감작하는 단백질 군이다. 이러한 감작 인자의 예로서는 모세 혈관 확장성 운동 실조 돌연 변이 단백질(Atm) 및 모세 혈관 확장성 운동 실조 방사선 관련 단백질(Ataxia Telangiectasia Rad-related preotein)(Atr)을 포함한다. 검출 인자에 의하여 검출되는 시그널을 증폭 및 전이시키는 두 번째 폴리펩티드 부류의 예로서는 Rad53[Alen et al., Genes Dev. 8:2416-2488 (1994)] 및 Chk1이 있다. 폴리펩티드의 세 번째 부류로서는 예를 들어, 유사 분열 및 세포 사멸을 지연시키는 세포 반응을 매개하는 세포 주기 효과 인자 예를 들어, p53을 포함한다.

현재 세포 주기 체크포인트의 기능에 관하여 알고 있는 대부분의 사실들은 종양 유도성 세포주의 연구 결과를 통하여 알게 되었다. 다수의 경우에 있어서, 종양 세포들은 중요한 세포 주기 체크포인트를 수행하지 않는다[Hartwell et al., Science 266:1821 28, 1994]. 세포가 신생물 형성 상태로 진화하는데 있어서 중요한 단계는 세포 주기 체크포인트 경로를 불활성화하는 돌연 변이 예를 들어, p53 관여 돌연 변이를 발생시키는 것이라고 보고된 바 있다[Weinberg, R.A., Cell 81:323 330, 1995; Levine, A. J., Cell 88:3234 331, 1997]. 이와 같은 세포 주기 체크포인트가 존재하지 않으면, DNA가 손상됨에도 불구하고 종양 세포가 계속해서 복제하게 된다.

원래대로 세포 주기 체크포인트를 수행하는 비 암성 조직은 통상적으로 단일의 체크포인트 경로를 일시적으로 파괴함으로써 자유롭게 된다. 그러나, 종양 세포는 세포 주기 진행을 제어하는 경로에 결함이 있어서, 추가의 체크포인트를 방해하 게 되면 이 종양 세포는 DNA 손상 제제에 특히 민감하게 되고 만다. 예를 들어, 돌연 변이 p53을 함유하는 종양 세포는 G1 DNA 손상 체크포인트와 G2 DNA 손상 체크포인트를 유지시키는 능력 모두에 결함이 있다[Bunz et al., Science, 282:1497 501, 1998]. G2 체크포인트 또는 S기 체크포인트의 개시를 표적화하는 체크포인트 억제제는 상기 종양 세포가 DNA 손상을 수선하는 능력을 더욱 망쳐놓는 것으로 예측되며, 그 결과 방사선 및 전신 화학 요법 양자 모두에 있어서 치료 지수를 상승시키는 후보 물질이 된다[Gesner, T., Abstract at SRI Conference: Protein Phosphorylation and Drug Discovery World Summit, March 2003].

DNA 손상 또는 DNA 복제에 대한 임의의 방해 물질 존재 하에, 체크포인트 단백질인 Atm 및 Atr은 세포 주기를 정지시키는 시그널 전달 경로를 개시한다. Atm은 이온화 방사선(IR)에 반응하여 DNA 손상 체크포인트에 영향을 미치는 것으로 파악된다. Atr은 이중 사슬 DNA 및 단일 사슬 DNA를 파괴시키는 제제와, DNA 방사선 조사를 차단하는 제제에 의해 자극된다.

Chk1은 DNA 손상 체크포인트 시그널 전달 경로에 있어서 Atm 및/또는 Atr의 하류에 존재하는 단백질 키나제이다[Sanchez et al., Science, 277:1497 1501, 1997; 미국 특허 제 6,218,109 호]. 포유 동물 세포에 있어서, Chk1은 DNA를 손상시키는 제제 예를 들어, 이온화 방사선(IR), 자외(UV) 광선 및 히드록시우레아에 반응하여 인산화된다[Sanchez et al., 상동 ; Lui et al., Genes Dev., 14:1448 1459, 2000]. 포유 동물 세포 내에서 Chk1을 활성화하는 상기 인산화 작용은 Atm[Chen et al., Oncogene, 18:249-256, 1999] 및 Atr[Lui et al., 상동]에 의존 적이다. 뿐만 아니라, Chk1은 세포 주기 제어에 있어서 중요한 역할을 하는 것으로 공지되어 있는 유전자 산물인 wee1[O'Connell et al., BMBO J., 16:545 554, 1997] 및 Psd1[Sanchez et al., Science, 286:1166 1171, 1999] 둘 다를 인산화하는 것으로 파악된다.

이러한 연구 결과를 통하여, 포유 동물 Chk1은 세포 주기를 S기에 정지시키는 Atm 의존성 DNA 손상 체크포인트에 영향을 미친다는 사실이 입증되었다. 최근에 S기에 있는 포유 동물 세포에 있어서 Chk1의 역할 구체적으로, DNA 합성 과정의 완전성을 모니터함에 있어서 Chk1의 역할에 관하여 규명된바 있다[Feijoo et al., J. Cell Biol., 154:913-923, 2001; Zhao et al., PNAS USA, 99:14795-800, 2002; Xiao et al., J Biol Chem., 278 (24) :21767- 21773, 2003; Sorensen et al., Cancer Cell, 3(3):247-58, 2003]. Chk1은 사이클린 A/cdk2 활성을 조절하는 Cdc25A를 인산화함으로써 S기 정제를 유발시킨다[Xiao et al., 상동, 및 Sorensen et al., 상동]. Chk1은 또한 보통 세포가 G2기에서 유사 분열기로 진행할 때 사이클린-B/cdc2(Cdk1이라고도 알려짐)를 탈인산화시키는 이중 특이성 포스파타제인 Cdc25C를 인산화 및 불활성화시킴으로써 G2기에 정지시킨다[Fernery et al., Science, 277:1495 7, 1997; Sanchez et al., 상동, Matsuoka et al., Science, 282:1893-1897, 1998; 및 Blasina et al., Curr. Biol., 9:1 10, 1999]. 상기 두 가지 경우에 있어서, Cdk 활성을 조절함으로써 세포 주기를 정지시켜, DNA 손상시 또는 비 복제 DNA의 존재 하에서 세포가 유사 분열을 개시하는 것을 막을 수 있게 된다.

세포 주기 체크포인트 억제제의 추가 부류는 G1 또는 G2/M기 중 어느 하나의 단계에서 작용을 한다. UCN-01 즉, 7-히드록시스토로스포린은 원래 비특이적 키나제 억제제(단백질 키나제 C에 주로 영향을 미침)로서 분리되었으나, 최근에는 Chk1의 활성을 억제하고 G2 세포 주기 체크포인트를 방해하는 것으로 파악되고 있다[Shi et al., 상동]. 그러므로, UCN-01은 비 선택적 Chk1 억제제이다. 결과적으로, UCN-01은 다량 투여시 세포에 독성이 있다. 반면에, 이를 소량 투여시에는 다수의 세포성 키나제를 비특이적으로 억제할 뿐만 아니라, G1 체크포인트도 방해한다[Tenzer and Pruschy, Curr. Med Chem. Anti-Cancer Agents, 3:35-46, 2003].

UCN-01은 성공률이 제한적인 암 치료제 예를 들어, 방사선, 항암제인 캠토테신[Tenzer and Pruschy, 상동] 및 젬시타빈[Shi et al., 상동]과 함께 사용되고 있다. 뿐만 아니라, UCN-01은 또한 뇌종양 세포에서 테모졸로미드(TMZ) 유도성 DNA 미스매치 수선(MMR)의 효능을 증가시키는데에도 사용되고 있다[Hirose et al., Cancer Res., 61:5843-5849, 2001]. 임상적으로, UCN-01은 기대되는 만큼 효과적이지 못한 화학 요법 제제인데, 그 이유는 아마도 치료 계획 수립이 용이하지 않고, 특정 중요 분자 표적이 확인되지 않기 때문일 것이다[Grant and Roberts, Drug Resistance Updates, 6:15-26, 2003]. 그러므로, Mack et. al.에 따르면, 배양된 비 소 세포성 폐암종 세포주에 있어서 UCN-01에 의한 시스-플라틴의 세포 주기 의존성 강화 작용은 UCN-01에 의해 표적화된 중요 세포 주기 체크포인트를 특이적으로 분석할 수 없다고 한다[Mack et al., Cancer Chemother Pharmacol., 51 (4) :337-348, 2003].

세포 주기에 영향을 미치는 화학 요법을 사용하는 치료에 대해서 종양 세포를 감작시키기 위한 몇 가지 방안이 존재한다. 예를 들어, 2-아미노퓨린을 투여하면 다수의 세포 주기 체크포인트 기작 예를 들어, 미모신-유도성 G1 정지 또는 히드록시우레아 유도성 S기 정지를 방해하여, 세포가 유사 분열을 개시하여 진행시키도록 만드는 방법이 있다[Andreassen et al., Proc Natl Acad Sci USA., 86:2272-2276, 1992]. 메틸잔틴인 카페인도 또한 G2 체크포인트로의 진행을 매개하여, 세포 사멸을 초래함으로써 DNA-손상 제제 예를 들어, 시스-플라틴 및 이온화 방사선의 세포 독성을 강화시키는데 사용되고 있다[Bracey et al., Clin. Cancer Res., 3:1371-1381, 1997]. 그러나, 세포 주기의 진행을 억제하는 데에 사용되는 카페인의 양은 임상학적으로 허용 가능한 수준을 초과하므로, 이를 치료용으로 선택하는 것은 바람직하지 않다. 또한, Chk1 키나제에 대한 안티센스 뉴클레오티드는 토포이소머라제 억제제인 BNP1350에 대한 감수성을 증가시키는데 사용되지만[Yin et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 295:435-44, 2002], 이는 통상적으로 안티센스 치료 및 유전자 요법과 관련하여 문제를 일으키게 된다.

Chk1 억제제에 관하여는 WO 02/070494, WO 04/014876 및 WO 03/101444에 개시되어 있다. 부가의 Chk1 억제제로서는 디아릴우레아 화합물 예를 들어, 아릴- 및 헤테로아릴-치환 우레아 화합물[미국 특허 공보 2003-0069284 A1]; 메틸잔틴 및 관련 화합물[Fan et al., Cancer Res., 55:1649-54 (1995)]; 우레이도티오펜[WO 03/029241]; N-피롤로피리디닐 카복사미드(WO 0/28724); 안티센스 Chkl 뉴클레오티드(WO 01/57206) ; Chk1 수용체 길항제(WO 00/16781) ; 헤테로방향족 카복사미드 유도체(WO 03/037886) ; 아미노티오펜(WO 03/029242) ; (인다졸릴)벤즈이미다졸(WO 03/004488); 복소환-히드록시이미노-플루오렌(WO 02/16326) ; 사이톤만 스켈레톤-함유 유도체(scytoneman skeleton-containing derivatives; 사이톤민)(미국 특허 제 6,495,586 호); 헤테로아릴벤즈아미드(WO 01/53274) ; 인다졸 화합물(WO 01/53268) ; 인돌라카바졸(Tenzer et al., 상동); 크로만 유도체(WO 02/070515) ; 폴론(Schultz et al., J. Med. Chem., Vol. 42:2909-2919 (1999)); 인데노피라졸(WO 99/17769) ; 플라본(Sedlacek et al., Int. J. Oncol., 9:1143-1168 (1996); 세린-트레오닌 키나제 펩티드 루프의 펩티드 유도체(WO 98/53050) ; 및 옥신돌(WO 03/051838)을 포함한다.

그러나, 당 업계에서는 여전히 효율적이고 선택적인 Chk1 억제제를 필요로 하고 있다. 본 발명은 상기 및 기타 요망에 부응하는 것이다.

발명의 개요

본 발명은 체크포인트 키나제 Chk1의 유효하고 선택적인 억제제에 관한 것이다. 본 발명의 Chk1 억제제는 비정상 세포 증식과 관련된 징후를 치료하는데 유용하며, 또한 DNA 복제에 있어서 DNA 손상 또는 병변(lesion)과 관련된 징후를 치료하는 데에 있어서 화학 요법 감수성 증강 물질(chemosensitizing agent) 및 방사선 감수성 증강 물질(radiosensitizing agent)로서도 유용하다.

그러므로, 본 발명의 제1 측면은 하기 화학식 I의 화합물을 제공하는 것이다. 이 화합물은 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 프로드러그 또는 용매화물을 유효량으로 개체에 투여하는 단계를 포함하는 Chk1 억제 방법에 유용하다.

화학식 I의 화합물은 다음과 같은 구조를 갖는다.

상기 식 중,

X¹은 존재하지 않거나, -O-, -S-, -CH₂- 또는 -N(R¹)-이고;

X²는 -O-, -S- 또는 -N(R¹)-이며;

Y는 O 또는 S이거나; 또는 =Y는 공통 탄소 원자에 결합되어 있는 2개의 수소 원자를 나타내며;

W는 헤테로아릴, 아릴, 헤테로시클로알킬, 시클로알킬, 및 헤테로아릴 또는 아릴 기로 치환되는 C_{1 ∼ 6}알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 상기 아릴기인 W는 R²로 표시되는 1∼4개의 치환기로 임의 치환되고, 상기 헤테로아릴기인 W는 R⁵로 표시되는 1∼4개의 치환기로 임의 치환되며, 상기 헤테로시클로알킬 및 시클로알킬 기인 W는 1개 또는 2개의 C_{1 ∼ 6}알킬 치환기로 임의 치환되며;

R¹은 하이드로, C_{1 ∼ 6}알킬, C_{2 ∼ 6}알케닐, C_{2 ∼ 6}알키닐 및 아릴로 이루어진 군으로부터 선택되며;

R²는 헤테로아릴, 할로, 임의 치환되는 C_{1 ∼ 6}알킬, C_{2 ∼ 6}알케닐, OCF₃, NO₂, CN, NC, N(R³)₂, OR³, CO₂R³, C(O)N(R³)₂, C(O)R³, N(R¹)COR³, N(R¹)C(O)OR³, N(R¹)-C(0)C_{1∼ 6}알킬렌C(0)R³, N(R¹)C(0)C_{1 ∼ 6}알킬렌C(0)OR³, N(R¹)C(0)C_{1 ∼ 6}알킬렌OR³, N(R¹)C(O)C_{1 ∼ 6}알킬렌NHC-(O)OR³, N(R¹)C(O)C_{1 ∼ 6}알킬렌SO₂NR³, C_{1 ∼ 6}알킬렌OR³ 및 SR³로 이루어진 군으로부터 선택되고;

R³는 하이드로, C_{1 ∼ 6}알킬, C_{2 ∼ 6}알케닐, 시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, SO₂R⁴, 할로, 및 할로, 히드록시, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로시클로알킬, N(R⁴)₂ 및 SO₂R⁴ 중 하나 이상으로 치환되는 C_{1 ∼ 6}알킬, C_{1 ∼ 6}알킬렌아릴, C_{1 ∼ 6}알킬렌헤테로아릴, C_{1 ∼ 6}알킬렌C_{3∼ 8}헤테로시클로알킬, C_{1 ∼ 6}알킬렌SO₂아릴, 임의 치환되는 C_{1 ∼ 6}알킬렌N(R⁴)₂, OCF₃, C_{1∼ 6}알킬렌N(R⁴)₃ ⁺, C_{3 ∼ 8}헤테로시클로알킬 및 CH(C_{1 ∼ 6}알킬렌N(R⁴)₂)₂로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 2개의 R³기는 함께 임의 치환되는 3∼8원 지방족 고리를 형성하고;

R⁴는 존재하지 않거나 또는 하이드로, C_{1 ∼ 6}알킬, 시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, C_{1 ∼ 6}알킬렌아릴 및 SO₂C_{1 ∼ 6}알킬로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 2개의 R⁴기는 함께 임의 치환되는 3∼8원 고리를 형성하고;

R⁵는 C_{1 ∼ 6}알킬, C_{2 ∼ 6}알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로시클로알킬, N(R³)₂, N(R¹)C(O)R³, N(R¹)CO₂R³, OR³, 할로, N₃, CN, C_{1 ∼ 6}알킬렌아릴, C_{1 ∼ 6}알킬렌N(R³)₂, C(O)R³, C(O)OR³, C(O)N(R³)₂, CF₃ 및

으로 이루어진 군으로부터 선택되며;

R⁶은 하이드로, C_{1 ∼ 6}알킬, C_{2 ∼ 6}알케닐, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, SO₂R⁴, 및 할로, 히드록시, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로시클로알킬, N(R⁴)₂ 및 SO₂R⁴ 중 하나 이상으로 치환되는 C_{1 ∼ 6}알킬, C_{1 ∼ 6}알킬렌아릴, C_{1 ∼ 6}알킬렌헤테로아릴, C_{1 ∼ 6}알킬렌C_{3 ∼ 8}헤테로시클로알킬, C_{1 ∼ 6}알킬렌SO₂아릴, 임의 치환되는 C_{1 ∼6} 알킬렌N(R⁴)₂, OCF₃, C_{1 ∼ 6}알킬렌-N(R⁴)₃ ⁺, C_{3 ∼ 8}헤테로시클로알킬 및 CH(C_{1 ∼ 6}알킬렌-N(R⁴)₂)₂로 이루어진 군으로부터 선택되고;

R⁷ 및 R⁸은 하이드로, C_{1 ∼ 6}알킬, 할로, OR³, N(R³)₂, C(O)N(R³)₂, C_{1 ∼ 3}알킬렌아릴, CN, NO₂, C(O)OR¹¹, C(O)R¹¹ 및 SR¹¹로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되며;

R⁹는 -C≡C-R¹⁰ 또는 -CF₃이거나, 또는 R⁸ 및 R⁹ 기는 이들이 결합되어 있는 탄소와 함께 임의로 O, NR⁴ 및 S으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1∼3개의 이종 원자를 함유하는 5원 또는 6원 탄소환 지방족 또는 방향족 고리계를 형성하고;

R¹⁰은 하이드로, C_{1 ∼ 6}알킬, 아릴, C_{1 ∼ 6}알킬렌아릴, 헤테로아릴 및 C_{1 ∼ 6}알킬렌헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되며;

R¹¹은 하이드로, C_{1 ∼ 6}알킬, C_{2 ∼ 6}알케닐, 아릴, C_{1 ∼ 3}알킬렌아릴, C_{3 ∼ 8}시클로알킬 및 C_{1 ∼ 3}알킬렌C_{3 ∼ 8}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;

n은 1 또는 2이다.

본 발명의 제2 측면은 하나 이상의 화학식 I의 화합물을 포함하는 약학 조성물과, 질병 또는 질환의 치료에 있어서 이 조성물의 용도를 제공하며, 여기서 생체 내 또는 생체 외에서 Chk1의 억제는 치료적 이점을 제공하거나 또는 연구 또는 진단에 중요하다.

본 발명의 제3 측면은 화학식 I의 화합물을 화학 요법 제제, 방사능 요법 제제 또는 양 제제와 조합하여 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 의학적 증상에 대하여 화학 요법 또는 방사선 요법 치료를 받는 개체의 세포를 감작시키는 방법을 제공한다. 본 방법에 의하여 치료되는 비 제한적 징후의 예로서는 암이 있다.

본 발명의 제4 측면은 비정상 세포 증식을 억제 또는 방지하는 방법을 제공한다. 하나의 구체예에서, 본 방법은 비정상적으로 증식하는 세포들 중에서 세포 주기 정지를 실질적으로 동조시키는데에 충분한 양으로 이에 충분한 시간 동안 하나 이상의 Chk1 활성화제와 비정상적으로 증식하는 세포를 포함하는 세포 군집을 접촉시키는 단계를 포함한다. 세포 군집 내에서 세포 주기 정지를 실질적으로 동조시킴에 있어서, 세포 군집은 실질적으로 세포 주기 정지를 방해하는데에 충분한 양과 이에 충분한 시간 동안 하나 이상의 Chk1 억제제와 접촉하게 된다.

본 발명의 상기 측면들 및 기타 측면들은 이하 바람직한 구체예의 상세한 설명을 통하여 명백해 질 것이다.

바람직한 구체예의 상세한 설명

본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 프로드러그 또는 용매화물은 다음의 화학식을 갖는다.

[화학식 I]

상기 식 중,

X¹은 존재하지 않거나, -O-, -S-, -CH₂- 또는 -N(R¹)-이고;

X²는 -O-, -S- 또는 -N(R¹)-이며;

Y는 O 또는 S이거나; 또는 =Y는 공통 탄소 원자에 결합되어 있는 2개의 수소 원자를 나타내며;

W는 헤테로아릴, 아릴, 헤테로시클로알킬, 시클로알킬 및 헤테로아릴 또는 아릴 기로 치환되는 C_{1 ∼ 6}알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서, 상기 아릴기인 W는 R²로 표시되는 1∼4개의 치환기로 임의 치환되고, 상기 헤테로아릴기인 W는 R⁵로 표시되는 1∼4개의 치환기로 임의 치환되며, 상기 헤테로시클로알킬 및 시클로알킬 기인 W는 1개 또는 2개의 C_{1 ∼ 6}알킬 치환기로 임의 치환되며;

R¹은 하이드로, C_{1 ∼ 6}알킬, C_{2 ∼ 6}알케닐, C_{2 ∼ 6}알키닐 및 아릴로 이루어진 군으로부터 선택되며;

R²는 헤테로아릴, 할로, 임의 치환되는 C_{1 ∼ 6}알킬, C_{2 ∼ 6}알케닐, OCF₃, NO₂, CN, NC, N(R³)₂, OR³, CO₂R³, C(O)N(R³)₂, C(O)R³, N(R¹)COR³, N(R¹)C(O)OR³, N(R¹)-C(0)C_{1∼ 6}알킬렌C(0)R³, N(R¹)C(0)C_{1 ∼ 6}알킬렌C(0)OR³, N(R¹)C(0)C_{1 ∼ 6}알킬렌OR³, N(R¹)C(O)C_{1 ∼ 6}알킬렌NHC-(O)OR³, N(R¹)C(O)C_{1 ∼ 6}알킬렌SO₂NR³, C_{1 ∼ 6}알킬렌OR³ 및 SR³으로 이루어진 군으로부터 선택되고;

R³은 하이드로, C_{1 ∼ 6}알킬, C_{2 ∼ 6}알케닐, 시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, SO₂R⁴, 할로, 및 할로, 히드록시, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로시클로알킬, N(R⁴)₂ 및 SO₂R⁴ 중 하나 이상으로 치환되는 C_{1 ∼ 6}알킬, C_{1 ∼ 6}알킬렌아릴, C_{1 ∼ 6}알킬렌헤테로아릴, C_{1 ∼ 6}알킬렌C_{3∼ 8}헤테로시클로알킬, C_{1 ∼ 6}알킬렌SO₂아릴, 임의 치환되는 C_{1 ∼ 6}알킬렌N(R⁴)₂, OCF₃, C_{1∼ 6}알킬렌N(R⁴)₃ ⁺, C_{3 ∼ 8}헤테로시클로알킬 및 CH(C_{1 ∼ 6}알킬렌N(R⁴)₂)₂로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 2개의 R³기는 함께 임의 치환되는 3∼8원 지방족 고리를 형성하고;

R⁴는 존재하지 않거나 또는 하이드로, C_{1 ∼ 6}알킬, 시클로알킬, 아릴, 헤테로아 릴, C_{1 ∼ 6}알킬렌아릴 및 SO₂C_{1 ∼ 6}알킬로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 2개의 R⁴기는 함께 임의 치환되는 3∼8원 고리를 형성하고;

R⁵는 C_{1 ∼ 6}알킬, C_{2 ∼ 6}알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로시클로알킬, N(R³)₂, N(R¹)C(O)R³, N(R¹)CO₂R³, OR³, 할로, N₃, CN, C_{1 ∼ 6}알킬렌아릴, C_{1 ∼ 6}알킬렌N(R³)₂, C(O)R³, C(O)OR³, C(O)N(R³)₂, CF₃ 및

으로 이루어진 군으로부터 선택되며;

R⁶은 하이드로, C_{1 ∼ 6}알킬, C_{2 ∼ 6}알케닐, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, SO₂R⁴, 및 할로, 히드록시, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로시클로알킬, N(R⁴)₂ 및 SO₂R⁴ 중 하나 이상으로 치환되는 C_{1 ∼ 6}알킬, C_{1 ∼ 6}알킬렌아릴, C_{1 ∼ 6}알킬렌헤테로아릴, C_{1 ∼ 6}알킬렌C_{3 ∼ 8}헤테로시클로알킬, C_{1 ∼ 6}알킬렌SO₂아릴, 임의 치환되는 C_{1 ∼ 6}알킬렌N(R⁴)₂, OCF₃, C_{1 ∼ 6}알킬렌-N(R⁴)₃ ⁺, C_{3 ∼ 8}헤테로시클로알킬 및 CH(C_{1 ∼ 6}알킬렌-N(R⁴)₂)₂로 이루어진 군으로부터 선택되고;

R⁷ 및 R⁸은 하이드로, C_{1 ∼ 6}알킬, 할로, OR³, N(R³)₂, C(O)N(R³)₂, C_{1 ∼ 3}알킬렌아릴, CN, NO₂, C(O)OR¹¹, C(O)R¹¹ 및 SR¹¹로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되며;

R⁹는 -C≡C-R¹⁰ 또는 -CF₃이거나, 또는 R⁸ 및 R⁹ 기는 이들이 결합되어 있는 탄소와 함께 임의로 O, NR⁴ 및 S으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1∼3개의 이종 원자를 함유하는 5원 또는 6원 탄소환 지방족 또는 방향족 고리계를 형성하고;

R¹⁰은 하이드로, C_{1 ∼ 6}알킬, 아릴, C_{1 ∼ 6}알킬렌아릴, 헤테로아릴 및 C_{1 ∼ 6}알킬렌헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되며;

R¹¹은 하이드로, C_{1 ∼ 6}알킬, C_{2 ∼ 6}알케닐, 아릴, C_{1 ∼ 3}알킬렌아릴, C_{3 ∼ 8}시클로알킬 및 C_{1 ∼ 3}알킬렌C_{3 ∼ 8}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;

n은 1 또는 2이다.

본 발명의 바람직한 화합물은, X¹ 및 X²가 -N(H)-이고; Y는 O 또는 S이며; W는 임의 치환되는 헤테로아릴린인 화합물이다. 하나의 구체예에서, W는 N, O 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되는 이종 원자를 2개 이상 함유하는 헤테로아릴이며, 여기서, 상기 헤테로아릴 고리는 임의 치환되는 C_{1 ∼ 6}알킬, 아릴, 헤테로아릴, N(R³)₂, OR³, C(O)N(R³)₂, CO₂R³, CN, CF₃ 및 할로로 이루어진 군으로부터 선택되는 1∼4개의 치환기로 임의 치환되고, 여기서 상기 R³은 상기 정의한 바와 같다.

기타 바람직한 화학식 I의 화합물은, W가 C_{1 ∼ 6}알킬, 아릴, 헤테로아릴, N(R³)₂, C(O)N(R³)₂, CO₂R³, OR³, CF₃ 및 할로로 이루어진 군으로부터 선택되는 1∼4개의 치환기로 임의 치환되는 피리다지닐, 피리미디닐, 피라지닐 및 트리아지닐로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물이다.

화학식 I의 바람직한 추가의 화합물은, R⁶가 임의 치환되는 C_{1 ∼ 6}알킬, C_{1 ∼ 6}알킬렌N(R⁴)₂, C_{1 ∼ 6}알킬렌-헤테로아릴, C_{1 ∼ 6}알킬렌헤테로시클로알킬 및 C_{3 ∼ 8}헤테로시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물이다. 다른 바람직한 구체예에 있어서, R⁶는 C_{1 ∼ 6}알킬, (CH₂)_1∼6N(CH₃)₂, (CH₂)_1∼6NH(CH₃),

로 이루어진 군으로부터 선택된다.

다른 바람직한 구체예에 있어서, W는 C_{1 ∼ 6}알킬, C_{2 ∼ 6}알키닐, 아릴, 헤테로아릴, CN, CO₂R³, N(R³)₂, OR³, CF₃ 및 할로로 이루어진 군으로부터 선택되는 1개 ∼ 4개의 치환기로 임의 치환되는

으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

더욱 바람직한 구체예에 있어서, W는

이다.

가장 바람직한 구체예에 있어서, W는 피라지닐이고, X¹ 및 X²는 각각 N(H)이다.

다른 바람직한 구체예에 있어서, W는 5번 위치에서 R⁵기와 치환되는 피라지노-2-일 즉,

이다.

가장 바람직한 구체예에서, R⁵는 CF₃, CH₃이거나 또는 존재하지 않는다. 기타 가장 바람직한 구체예로서는, R⁷이 H이고; R⁸은 H이며; R⁹는 -C≡CH 및 CF₃로 이루어진 군으로부터 선택되거나; 또는 R⁸ 및 R⁹가 이들이 결합되어 있는 탄소 원자와 함께

을 형성하는 화합물을 포함한다.

가장 바람직한 다른 구체예에 있어서, R⁶은 -(CH₂)₂N(CH₃)₂,

으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

본원에 사용된 "알킬"이라는 용어에는 정해진 수의 탄소 원자를 함유하는 직쇄형 및 분지형 탄화수소기(통상적으로 메틸, 에틸 및 직쇄형 및 분지형 프로필 및 부틸 기)를 포함한다. 달리 특정하지 않는 한, 탄화수소기는 20개 이하의 탄소 원자를 함유할 수 있다. "알킬"이라는 용어는 "가교형 알킬" 즉, C₆∼C₁₆ 이환형 또는 다환형 탄화수소기 예를 들어, 노르보닐, 아다만틸, 비시클로[2.2.2]옥틸, 비시클 로[2.2.1]헵틸, 비시클로[3.2.1]옥틸 또는 데카하이드로나프틸을 포함한다. 알킬기는 예를 들어, 히드록시(OH), 할로, 아릴, 헤테로아릴, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 아미노(N(R³)₂) 및 설포닐(SO₂R³) [여기서, R³는 상기 정의한 바와 같음]로 임의 치환될 수 있다.

"시클로알킬"이란 용어는, 고리형 C_{3 ∼ 8}탄화수소기 예를 들어, 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로헥실 또는 시클로펜틸로서 정의된다. "헤테로시클로알킬"은, 고리가 산소, 질소 및 황으로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 1개 ∼ 3개의 이종 원자를 함유한다는 점을 제외하고는 시클로알킬과 유사하게 정의된다. 시클로알킬 및 헤테로시클로알킬 기는 예를 들어, C1∼4알킬, C_{1 ∼ 3}알킬렌OH, C(O)NH₂, NH₂, 옥소(=O), 아릴, 트리플루오로에타노일 및 OH로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 1개 ∼ 3개의 기로 임의 치환되는 포화 또는 부분 불포화 고리계일 수 있다. 헤테로시클로알킬기는 C_{1 ∼ 6}알킬, 히드록시C_{1 ∼ 6}알킬, C_{1 ∼ 3}알킬렌아릴 또는 C_{1 ∼ 3}알킬렌헤테로아릴과 추가로 N-치환될 수도 있다.

"알케닐"이란 용어는, 탄소-탄소 이중 결합을 함유한다는 점을 제외하고는 "알킬"의 경우와 동일하게 정의된다.

"알키닐"이란 용어는, 탄소-탄소 삼중 결합을 함유한다는 점을 제외하고는 "알킬"의 경우와 동일하게 정의된다.

"알킬렌"이란 용어는, 치환기를 보유하는 알킬기를 의미한다. 예를 들어, "C_{1∼ 6}알킬렌C(O)OR"이란 용어는, -C(O)OR기로 치환되는 1개 ∼ 6개의 탄소 원자를 함유하는 알킬기를 의미한다. 상기 알킬렌기는 임의 알킬 치환기로서 상기 나열된 하나 이상의 치환기로 치환될 수도 있다.

"할로" 또는 "할로겐"이란 용어는 플루오르, 브롬, 염소 및 요오드로서 정의된다.

본원에서 "아릴"이라는 용어는, 단독으로 사용되거나 또는 조합하여 사용되는 경우, 단환 또는 다환 방향족 기, 바람직하게는 단환 또는 이환 방향족 기 예를 들어, 페닐 또는 나프틸로서 정의된다. 달리 표시하지 않는 한, 아릴기는 비치환되거나, 또는 예를 들어, 할로, C_{1 ∼ 6}알킬, C_{2 ∼ 6}알케닐, OCF₃, NO₂, CN, NC, N(R³)₂, OR³, CO₂R³, C(O)N(R³)₂, C(O)R³, N(R¹)COR³, N(R¹)C(O)OR³, N(R¹)C(O)OR³, N(R¹)C(O)C_{1 ∼3}알킬렌C(O)R³, N(R¹)C(O)C_{1 ∼ 3}알킬렌C(O)OR³, N(R¹)C(O)C_{1 ∼ 3}알킬렌OR³, N(R¹)C(O)C_{1 ∼ 3}알킬렌NHC(O)OR³, N(R¹)C(O)C_{1 ∼ 3}알킬렌SO₂NR³, C_{1 ∼ 3}알킬렌OR¹ 및 SR³[여기서, 상기 R¹ 및 R³는 상기 정의한 바와 같음]로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 기, 구체적으로 1개 ∼ 4개의 기로 치환될 수 있다. 대표적인 아릴기로서는 페닐, 나프틸, 테트라하이드로나프틸, 클로로페닐, 메틸페닐, 메톡시페닐, 트리플루오로메틸페닐, 니트로페닐, 2,4-메톡시클로로페닐 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. " 아릴C_{1∼ 3}알킬" 및 "헤테로아릴C_{1 ∼ 3}알킬"이란 용어는, C_{1 ∼ 3}알킬 치환기를 보유하는 아릴 또는 헤테로아릴 기로서 정의된다.

본원에서 "헤테로아릴"이란 용어는, 1개 또는 2개의 방향족 고리를 함유하고 이 방향족 고리내에 하나 이상의 질소, 산소 또는 황 원자를 함유하는 단환 또는 이환 고리계로서 정의된다. 달리 표시하지 않는 한, 헤테로아릴기는 치환되지 않거나, 또는 예를 들어, C_{1 ∼ 6}알킬, 아릴, 헤테로아릴, CF₃, CN, C(O)N(R³)₂, CO₂R², N(R³)₂, OR³ 및 할로[여기서, 상기 R³는 상기 정의한 바와 같음]로부터 선택되는 하나 이상의 치환기, 구체적으로 1개 ∼4개의 치환기로 치환될 수 있다. 헤테로아릴기의 예로서는 티에닐, 푸릴, 피리딜, 옥사졸릴, 퀴놀릴, 이소퀴놀릴, 인돌릴, 트리아지닐, 트리아졸릴, 이소티아졸릴, 이속사졸릴, 이미디졸릴, 벤조티아졸릴, 피라지닐, 피리미디닐, 티아졸릴 및 티아디아졸릴을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

"하이드로"라는 용어는 -H로서 정의된다.

"히드록시"라는 용어는 -OH로서 정의된다.

"니트로"라는 용어는 -NO₂로서 정의된다.

"시아노"라는 용어는 -CN로서 정의된다.

"이소시아노"라는 용어는 -NC로서 정의된다.

"트리플루오로메톡시"라는 용어는 -OCF₃로서 정의된다.

"아지도"라는 용어는 -N₃으로서 정의된다.

본원에 사용된 "3∼8원 고리"라는 용어는, 탄소환 및 복소환 지방족 또는 방향족 기를 의미하는 것으로서, 하나 이상, 구체적으로 1개 ∼ 3개의 기(아릴기에 대하여 상기와 같이 예시된 기)로 임의 치환되는, 모폴리닐, 피페리디닐, 페닐, 티오페닐, 푸릴, 피롤릴, 이미다졸릴, 피리미디닐 및 피리디닐을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

부분(moiety)들을 포함하는 탄화수소의 탄소 원자 함량은 그 부분에 존재하는 탄소 원자의 최소 및 최대 수를 지정하는 아래 첨자로써 나타내는데, 예를 들어, "C_{1 ∼ 6}알킬"의 경우, 1개 ∼ 6개의 탄소 원자를 보유하는 알킬기가 포함되어 있음을 나타낸다.

치환기가 결여된 결합에 관한 본원의 구조식에 있어서, 이 치환기는 메틸로서, 예를 들어,

는

이다.

치환기가 고리 상의 탄소 원자에 결합되어 있는 것으로 표시되지 않는 경우, 탄소 원자는 적당한 수의 수소 원자를 함유하고 있음을 알 수 있다. 뿐만 아니라, 치환기가 예를 들어 카보닐기 또는 질소 원자에 결합되어 있는 것으로 표시되지 않는 경우, 치환기는 수소임을 알 수 있는데, 예를 들어,

는

이고,

는

이다.

약어 "Me"는 메틸이다. 약어 CO 및 C(O)는 카보닐(C=O)이다.

N(R^X)₂ [여기서, X는 예를 들어, R^a, R^b, R³ 및 R⁴ 등과 같이 알파벳 또는 숫자를 나타냄]라는 표시는 2개의 R^X기가 공통의 질소 원자에 결합되어 있음을 나타내는 것이다. 이러한 표시에 사용될 경우, R^X기는 동일하거나 또는 상이할 수 있으며, 상기 R^X기는 R^X기에 의하여 정의되는 군으로부터 선택된다.

"Chk1 억제제"란, 이미 공지되어 있거나 또는 그 이후에 발견된 천연 생성 또는 합성인 임의의 화합물로서, 최소한 부분적으로나마 Chk1 단백질의 세포 주기 체크포인트 활성을 방해할 수 있는 화합물을 의미한다. 세포가 세포 주기의 특정 단계(즉, 세포 주기 중 다음 단계로의 진행이 정지되는 단계)를 통과할 수 있도록 세포 체크포인트 기작이 충분히 무력화되는 경우, 또는 세포가 직접적으로 세포 사멸 단계로 건너뛸 수 있도록 세포 체크포인트 기작이 충분히 무력화되는 경우, 세포 주기 체크포인트가 저지될 수 있다. 세포 주기 체크포인트를 저지함으로써, 세포는 이후의 세포 주기 단계에 손상 또는 결함을 전달할 수 있게 되어, 그 결과, 세포 사멸을 유도 또는 촉진하게 된다. 세포 사멸은 세포 사멸 및 비정상적 계속 분열(mitotic catastrophe)을 비롯한 임의의 기작에 의하여 유발될 수 있다.

"Chk1 활성화제"란, 세포 주기 체크포인트 수행시 DNA 수선 및 일관성 유지능(homeostasis)에 있어서 Chk1 키나제 활성을 활성화시키는 능력을 보유하는, 이미 공지되어 있는 임의의 제제 또는 그 이후에 발견된 제제로서, 최소한 부분적으로나마 세포 주기를 정지시키는 제제를 의미한다. Chk1 활성화제로서는 세포 주기 중 임의의 단계(본원에서는 그 활성화제에 대한 "표적 단계"라 칭할 수 있음)에 세포 주기를 정지시킬 수 있는 제제를 포함한다. 표적 단계로서는 유사 분열 단계를 제외한 세포 주기 단계들 중 임의의 단계 즉, G1기, S기 및 G2기를 포함한다. 본 발명에 유용한 Chk1 활성화제로서는 DNA 손상 제제 예를 들어, 화학 요법 제제 및/또는 방사선을 포함한다. 적당한 Chk1 활성화제로서는 또한 방사선 요법 제제 예를 들어, 전리 또는 자외 방사선도 포함한다. 방사선 Chk1 활성화제로서는 감마 방사선, X-레이 방사선, 자외 광선, 가시 광선, 적외 방사선, 마이크로파 방사선 및 이들의 혼합 방사선을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

"비정상 세포 증식의 억제"란, 비정상적으로 증식하는 세포가 증식하는 속도를 지연시키거나 또는 아예 증식시키지 않는 것을 의미한다. 이러한 억제는 복제율을 감소시키고 세포 사멸율을 증가시킴으로 인하거나, 또는 둘 다로 인할 수 있다. 세포 사멸은 세포 사멸 및 비정상적 계속 분열을 비롯한 임의의 기작에 의하여 유발될 수 있다.

"비정상 세포 증식의 예방"이란, 비정상 세포 증식 현상이 발생하기 이전에 그것을 억제하거나, 또는 이러한 비정상 증식 현상의 재발을 억제하는 것을 의미한다.

"생체 내"란, 살아있는 개체 즉, 동물 또는 사람의 체내를 의미한다. 본 발명에 있어서, 제제는 비정상적으로 복제하는 세포의 증식을 지연시키거나 또는 아예 증식시키지 않도록 개체 내에서 치료적으로 사용될 수 있다. 이 제제는 또한 비정상 세포 증식 현상의 발생 또는 재발이나, 비정상 증식과 관련된 증상이 발생하 는 것을 막기 위해서 예방약으로서 사용될 수도 있다.

"생체 외"란, 살아있는 개체의 외부를 의미한다. 생체 외 세포 군집의 예로서는 시험관 내 세포 배양액 및 생물학적 시료 예를 들어, 사람 또는 동물로부터 유래되는 유체 또는 조직 시료를 포함한다. 이러한 시료들은 당 업계에 널리 공지된 방법에 의하여 얻을 수 있다. 대표적인 생물학적 유체 시료로서는 혈액, 뇌척수액, 소변, 타액을 포함한다. 대표적인 조직 시료로서는 종양 및 이의 생검편을 포함한다. 여기서, 본 발명의 화합물은 다용도(치료적 용도 및 실험적 용도)로 사용될 수 있다.

본원에 사용된 "방사선 감수성 증강 물질(radiosensitizer)"이란 용어는, 전자기 방사선에 대한 세포의 감수성을 증가시키고/증가시키거나 전자기 방사선으로 치료 가능한 질병의 치료를 촉진하는데 치료적 유효량으로 사람 또는 기타 동물에 투여되는 화합물로서 정의된다.

본원에 사용된 "전자기 방사선" 및 "방사선"이란 용어에는 파장이 10^-20에서 100 미터인 방사선을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명은 화학식 I의 화합물로부터 도출 가능한 모든 입체 이성체 및 기하 이성체를 포함한다. 본 발명은 라세미 화합물뿐만 아니라, 광학 활성 이성체도 포함한다. 화학식 I의 화합물이 단일 거울상 이성체로서 바람직할 경우, 이 화합물은 최종 생산물을 분할(resolution)하거나, 또는 이성체상 순수한 출발 물질이나 예를 들어, 문헌[Z. Ma et al., Tetrahedron: Asymmetry, 8(6), pages 883-888 (1997)] 에 개시된 키랄 보조 시약을 사용하여 입체 특이적으로 합성함으로써 얻을 수 있다. 최종 산물, 중간체 또는 출발 물질의 분할은 당 업계에 공지된 임의의 방법에 의하여 실행 가능하다. 또한, 화학식 I의 화합물의 호변 이성체가 생성될 수 있는 경우, 본 발명은 이 화합물의 모든 호변 이성체도 포함한다. 이하에 기술된 바와 같이, 특이적 입체 이성체는 예외적으로 화학 요법 또는 방사선 요법 치료와 함께 Chk1을 억제하는 능력을 나타낼 수도 있다.

화학식 I의 화합물의 프로드러그는 또한 본 발명의 방법에 있어서 화합물로서 사용될 수도 있다. 화합물을 제형화 및/또는 투여에 적당한 형태로 유도체화 한 후 생체 내에서 약물로서 방출시키는, 프로드러그 연구법은 화합물의 물리화학적 특성을 일시적으로(예를 들어, 생체 가변적으로) 바꾸는데에 성공적으로 사용된다는 사실은 널리 알려져 있는 바이다[H. Bundgaard, Ed., "Design of Prodrugs", Elsevier, Amsterdam, (1985) ; R.B. Silverman, "The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action," Academic Press, San Diego, chapter 8, (1992) ; K.M. Hillgren et al., Med. Res. Rev., 15, 83 (1995)].

본 발명의 화합물은 하나 이상의 작용기를 함유할 수 있다. 원하는 경우 또는 필요한 경우, 이 작용기는 변형되어 프로드러그를 제공할 수 있다. 적당한 프로드러그로서는 예를 들어, 산 유도체 예를 들어, 아미드 및 에스테르를 포함한다. 당업자는 N-산화물이 프로드러그로서 사용될 수 있다는 사실도 알 고 있다.

본원에 사용된 "약학적으로 허용 가능한 염"이란 용어는, 산성 부분을 함유하고 적당한 양이온을 보유하는 염을 형성하는 화학식 I의 화합물을 의미한다. 약 학적으로 허용 가능한 적당한 양이온으로서는 알칼리 금속(예를 들어, 나트륨 또는 칼륨) 및 알칼리 토금속(예를 들어, 칼슘 또는 마그네슘) 양이온을 포함한다. 뿐만 아니라, 염기성 중심부를 함유하는 약학적으로 허용 가능한 화학식 I의 화합물의 염으로서는 약학적으로 허용 가능한 산으로 형성된 산부가 염이 있다. 이에 대한 비 제한적 예로서는 염산염, 브롬화수소산염, 황산염, 중황산염, 인산염, 인산수소염, 아세트산염, 벤조산염, 숙신산염, 푸마르산염, 말산염, 젖산염, 구연산염, 타르타르산염, 글루콘산염, 메탄설폰산염, 벤젠설폰산염 및 p-톨루엔설폰산염을 포함한다. 상기 나열한 예들을 비추어 볼 때, 본원에 나타낸 본 발명의 화합물에 대한 임의의 정의는 화학식 I의 화합물과 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물을 포함하는 의미이다.

본 발명의 화합물은 순수한 화합물로서 치료적으로 투여될 수 있으나, 화학식 I의 화합물은 약학 조성물 또는 제형으로서 투여되는 것이 바람직하다. 그러므로, 본 발명은 화학식 I의 화합물과 약학적으로 허용 가능한 희석제 또는 담체를 함께 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 뿐만 아니라, 본 발명은 화학식 I의 화합물과 약학적으로 허용 가능한 희석제 또는 담체를 혼합하는 것을 포함하는, 약학 조성물의 제조 방법을 제공한다.

그러므로, 본 발명은 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 프로드러그 또는 용매화물과, 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체 및, 임의로는 기타 치료 성분 및/또는 예방 성분을 포함하는 약학 제형을 추가로 제공한다. 상기 담체는 제형의 기타 성분들과 혼화 가능하고 이의 수용체에 무해하다는 점에서 "허용 가능한" 것이다.

체크포인트 키나제의 억제는 통상적으로 용량-반응 분석법(dose-response assay) 즉, 감수성이 높은 분석 시스템을, 효능이 관찰되지 않거나 또는 최소한으로 관찰되는 농도에서 부분적 효능이 관찰되는 더 높은 농도를 거쳐 최대의 효능이 관찰되는 포화 농도에 이르는 농도를 포함하는 다양한 범위의 농도의 목적 화합물과 접촉시키는 분석법을 이용하여 측정된다. 이론상으로, 억제 화합물의 용량-반응 효과에 대한 분석 결과는 농도의 함수로서 억제 정도를 나타내는 S자형 곡선으로 나타낼 수 있다. 상기 곡선은 또한 이론상으로 분석법에서 최소 및 최대 효소 활성 간 차이의 50%에 해당하는 수준으로 체크포인트 효소의 활성을 감소시키는데 충분한 농도의 지점을 통과하기도 한다. 이 농도를 억제 농도(50%) 또는 IC₅₀ 값이라 정의한다. 바람직하게, 상기 IC₅₀ 값은 통상의 생화학적 (비 세포적) 분석 기술 또는 세포계 분석 기술을 이용하여 측정된다.

억제제 효능의 비교 결과는 상대적 IC₅₀ 값을 참고로 하여 제공되는데, 여기서 IC₅₀ 값이 클수록 시험 화합물의 효능은 기준 화합물(reference compound)에 비하여 떨어진다는 것을 의미하고, IC₅₀ 값이 작을수록 시험 화합물의 효능은 기준 화합물에 비하여 더 우수하다는 것을 의미한다. 본 발명의 화합물의 IC₅₀ 값은 5 μM 미만이고, 용량-반응 분석법을 이용하여 측정할 때에는 0.1 nM까지 떨어진다. 바람직한 화합물의 IC₅₀ 값은 500 nM 이하이다. 본 발명의 더욱 바람직한 화합물의 IC₅₀ 값은 250 nM 미만, 100 nM 미만, 50 nM 미만 또는 20 nM 미만이다.

본 발명의 바람직한 Chk1 억제제는 선택적인 화합물로서, 다음과 같은 단백질 키나제에 비하여 Chk1을 억제하는 선택성이 20배 이상인 화합물이다: 단백질 키나제 A, 단백질 키나제 C, cdc2 및 pp60v-src. 더욱 바람직한 본 발명의 Chk1 억제제는 다음과 같은 단백질 키나제에 비하여 Chk1을 억제하는 선택성이 75배 이상인 화합물이다: 단백질 키나제 A, 단백질 키나제 C, cdc2 및 pp60v-src. 가장 바람직한 본 발명의 Chk1 억제제는 단백질 키나제 A, 단백질 키나제 C, cdc2 및 pp60v-src, 단백질 키나제 B/Akt-1, p38MapK, ERK1, p70S6K, cdc2, cdk2, chk2 및 ab1 티로신 키나제에 비하여 Chk1을 억제하는 선택성이 75배 이상인 화합물이다. "~배 선택성(fold selectivity)"은, 비교용 키나제에 대한 Chk1 억제제의 IC₅₀ 값을 Chk1에 대한 Chk1 억제제의 IC₅₀ 값으로 나눈 것으로 정의된다.

선택적 Chk1 억제제는 단독 투여될 때 화학 요법 제제로서 작용하지 않는다. 이와 반대로, 비 선택적 Chk1 억제제는 그것이 세포 성장에 필요한 부가의 단백질 키나제 또는 효소를 보다 실질적으로 억제하는 능력을 이용하여 화학 요법 제제로서 작용할 수 있다. 이로써 유해한 부작용 및/또는 치료 지수의 감소를 유발시키는 부가의 세포 상 효능을 나타낼 수 있다.

본 발명에 사용하기에 적당한 화합물 및 약학 조성물로서는 활성 성분이 의도로 하는 목적을 이룰 수 있는 유효량으로 투여될 수 있는 조성물을 포함한다. 더 구체적으로, "치료적 유효량"이란, 징후를 보이는 개체를 치료하거나, 또는 이 징 후에 따른 증상들을 경감시키는데 충분한 양을 의미한다. 치료적 유효량의 측정 방법은 당 업계의 숙련자에게 널리 알려져 있으며, 구체적으로 당업자는 본원에 제공된 상세한 설명을 참고로 하여 상기 치료적 유효량을 측정할 수 있다.

Chk1 억제제에 더하여, 본 발명의 약학 조성물은 시토킨, 림포카인, 성장 인자, 기타 조혈 인자 또는 이들의 혼합물을 포함하여, 약학 조성물을 단독 투여할 때 발생할 수 있는 즉, 단독 투여함에 따른 유해한 부작용을 감소시킬 수 있도록 제형화될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물에 특히 유용한 시토킨, 림포카인, 성장 인자 또는 기타 조혈 인자로서는 M-CSF, GM-CSF, TNF, IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-1O, IL-1l, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IFN, TNF, G-CSF, Meg-CSF, GM-CSF, 혈소판 증식 인자, 줄기 세포 인자, 적혈구 생성 촉진 인자, Ang-1, Ang-2, Ang-4, Ang-Y, 및/또는 인간 엔지오포이에틴-유사 폴리펩티드를 비롯한 엔지오포이에틴, 혈관 내피 성장 인자(VEGF), 엔지오제닌, 골 형성 단백질-1(BMP-1), BMP-2, BMP-3, BMP-4, BMP-5, BMP-6, BMP-7, BMP-8, BMP-9, BMP-10, BMP-11, BMP-12, BMP-13, BMP-14, BMP-15, BMP 수용체 IA, BMP 수용체 IB, 뇌 유래성 신경영양인자, 모양체 신경영양인자, 모양체 신경영양인자 수용체 시토킨-유도성 중성구 화학 주성 인자 1, 시토킨-유도성 중성구 화학 주성 인자 2, 시토킨-유도성 중성구 화학 주성 인자 2, 내피 세포 성장 인자, 엔도셀린-1, 표피 성장 인자, 상피-유래 중성구 유인 물질, 섬유아세포 성장 인자(FGF) 4, FGF 5, FGF 6, FGF 7, FGF 8, FGF 8b, FGF 8c, FGF 9, FGF 10, FGF 산성, FGF 염기성, 신경교 세포주-유래 영양 인자 수용체 1, 신경교 세포주-유 래 영양 인자 수용체 2, 성장 관련 단백질, 성장 관련 단백질, 성장 관련 단백질, 성장 관련 단백질, 헤파린 결합 표피 성장 인자, 간세포 성장 인자, 간세포 성장 인자 수용체, 인슐린-유사 성장 인자 I, 인슐린-유사 성장 인자 수용체, 인슐린-유사 성장 인자 II, 인슐린-유사 성장 인자 결합 단백질, 케라티노사이트 성장 인자, 백혈병 억제제, 백혈병 억제제 수용체, 신경 성장 인자, 신경 성장 인자 수용체, 뉴로트로핀-3, 뉴로트로핀-4, 태반 성장 인자, 태반 성장 인자 2, 혈소판-유래 내피 세포 성장 인자, 혈소판 유래 성장 인자, 혈소판 유래 성장 인자 A 사슬, 혈소판 유래 성장 인자 AA, 혈소판 유래 성장 인자 AB, 혈소판 유래 성장 인자 B 사슬, 혈소판 유래 성장 인자 BB, 혈소판 유래 성장 인자 수용체, 혈소판 유래 성장 인자 수용체, 전구 B 세포 성장 촉진 인자, 줄기 세포 인자, 줄기 세포 인자 수용체, 변형 성장 인자(TGF), TGF, TGF 1, TGF 1.2, TGF 2, TGF 3, TGF 5, 후기 TGF 1, TGF 결합 단백질 I, TGF 결합 단백질 II, TGF 결합 단백질 III, 제I형 종양 괴사 인자 수용체, 제II형 종양 괴사 인자 수용체, 유로키나제류 플라스미노겐 활성화제 수용체, 혈관 내피 성장 인자 및 이들의 키메라 단백질 및 생물학적 또는 면역학적 활성 단편을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

화학식 I의 화합물은 또한 치료 방법에 있어서 화합물의 유리한 특성을 개선시키는 보조 부분(auxiliary moiety)에 컨쥬게이트화 또는 결합될 수 있다. 이러한 컨쥬게이트는 화합물을 목적으로 하는 특정 해부학적 위치 또는 부위(예를 들어, 종양)에 운반하는 것을 촉진할 수 있으며, 이로써 표적 세포 내에서 화합물의 치료적 농도를 유지시켜 이 화합물의 약물 동력학적 특성 및 약물 동태학적 특성을 바 꾸고/바꾸거나, 이 화합물의 치료 지수 또는 안전성 프로필을 개선할 수 있다. 적당한 보조 부분으로서는 예를 들어, 아미노산, 올리고펩티드 또는 폴리펩티드 예를 들어, 항체 예를 들어, 모노클로날 항체 및 기타 가공된 항체; 및 표적 세포 또는 조직 내에 존재하는 수용체에 대한 천연 또는 합성 리간드를 포함한다. 기타 적당한 보조 부분으로서는 상기 화합물의 표적 세포에 의한 생분포 및/또는 흡수를 촉진하는 지방산 또는 지질부를 포함한다[예를 들어, Bradley et al., Clin. Cancer Res. (2001) 7:3229 참조].

본 발명의 제형은 특정 질병의 치료를 위하여 표준적인 방식 예를 들어, 경구, 비 경구, 경점막(예를 들어, 설하 또는 협측 투여), 국소, 경피, 직장, 흡입(예를 들어, 비강 또는 심폐 흡입) 방식으로 투여될 수 있다. 비 경구 투여법으로서는 정맥 내, 동맥 내, 복강 내, 피하, 근육 내, 초 내 및 관절 내 투여법을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 비 경구 투여법은 또한 고압 기술 예를 들어, POWDERJECT^™를 이용하여 수행될 수 있다.

협측 투여를 포함하여 경구 투여에 있어서, 조성물은 통상의 방식으로 제형화된 정제 또는 로진즈의 형태일 수 있다. 예를 들어, 경구 투여용 정제 및 캡슐은 통상의 부형제 예를 들어, 결합제(예를 들어, 시럽, 아카시아, 젤라틴, 소르비톨, 트라가칸트, 점성 전분 또는 폴리비닐피롤리돈), 충전제(예를 들어, 락토즈, 당, 미소결정형 셀룰로즈, 전분 점질물(mucilage), 인산칼슘 또는 소르비톨), 활택제(예를 들어, 스테아르산 마그네슘, 스테아르산, 활석, 폴리에틸렌 글리콜 또는 실 리카), 붕해제(예를 들어, 감자 전분 또는 글리콜산 나트륨 전분) 또는 습윤제(예를 들어, 황산 나트륨 라우릴)를 함유할 수 있다. 정제는 당 업계에 널리 공지된 방법에 따라서 피복될 수 있다.

대안적으로, 본 발명의 화합물은 경구 투여용 액체 제제 예를 들어, 수성 또는 유성 현탁액, 용액, 유액, 시럽 또는 엘릭시르에 통합될 수 있다. 더욱이, 이 화합물을 함유하는 제형은 사용 전에 물이나 기타 적당한 비히클로 구성될 건조 생산물로서 제공될 수 있다. 이러한 액체 제제는 통상적인 부가제 예를 들어, 현탁제 예를 들어, 소르비톨 시럽, 메틸 셀룰로즈, 글루코즈/당 시럽, 젤라틴, 히드록시에틸셀룰로즈, 히드록시프로필메틸셀룰로즈, 카복시메틸셀룰로즈, 스테아르산알루미늄 겔 및 수소화된 식용 지방; 유화제 예를 들어, 레시틴, 소르비탄 모노올레이트, 또는 아카시아; 비수성 비히클(식용 오일 포함할 수 있음) 예를 들어, 아몬드 오일, 분류된 코코넛 오일, 유성 에스테르, 프로필렌 글리콜 및 에틸 알콜; 및 보존제 예를 들어, 메틸 또는 프로필 p-히드록시벤조에이트 및 소르빈산을 함유할 수 있다.

이러한 제제는 또한 예를 들어, 통상의 좌제 베이스 예를 들어, 코코아 버터 또는 기타 글리세라이드를 함유하는 좌제로서 제형화될 수도 있다. 흡입용 조성물은 통상적으로 건조 분말이나 통상적인 추진제 예를 들어, 디클로로디플루오로메탄 또는 트리클로로플루오로메탄을 사용하는 에어로졸 형태로서 투여될 수 있는 용액, 현탁액 또는 유액의 형태로 제공될 수 있다. 통상의 국소 및 경피 제형은 통상의 수성 또는 비 수성 비히클 예를 들어, 안약, 크림, 연고, 로션 및 페이스트를 포함 하거나, 또는 의학용 플라스터, 패치 또는 막의 형태일 수 있다.

부가적으로, 본 발명의 조성물은 주사 또는 연속 주입법에 의한 비 경구 투여용으로 제형화될 수 있다. 주사용 제형은 유성 또는 수성 비히클 중의 현탁액, 용액 또는 유액의 형태일 수 있으며, 제형화 제제 예를 들어, 현탁제, 안정화제 및/또는 분산제를 함유할 수 있다. 대안적으로, 활성 성분은 사용 전에 적당한 비히클(예를 들어, 멸균 수, 발열원 무함유 수)와 함께 구성될 분말 형태일 수 있다.

본 발명의 조성물은 또한 데포우(depot) 제제로서 제형화될 수 있다. 이와 같은 장기 작용성 제형은 임플란트(예를 들어, 피하 또는 근육 내) 또는 근육 내 주사에 의해 투여될 수 있다. 그러므로, 본 발명의 화합물은 적당한 중합체 또는 소수성 물질(예를 들어, 허용 가능한 오일 중 유액), 이온 교환 수지로 제형화될 수 있거나, 또는 거의 불용성인 유도체(예를 들어, 거의 불용성인 염)로서 제형화될 수 있다.

수의학적 용도로서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 프로드러그 또는 용매화물은 통상의 수의학적 방법에 따라서 적당히 허용 가능한 제형으로서 투여된다. 수의사는 특정 동물에 가장 적당한 투여 방식 및 투여 경로를 용이하게 결정할 수 있다. 본 발명의 화합물 및 방법에 의해 치료 가능한 동물의 예로서는 애완 동물, 가축, 전시용 동물(show animal) 및 동물원의 동물들을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

합성 방법

본 발명의 화합물은 다음과 같은 합성 반응에 의하여 제조될 수 있다. 출발 물질은 상업적 공급처로부터 구입할 수 있거나 또는 당업자에게 널리 알려져 있는 체계적으로 확립된 문헌에 기재된 방법에 의해 제조될 수 있다. X, R¹, R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸, R⁹ 기는 상기 정의한 바와 같다.

상기 반응식 1에 나타낸 바와 같이, 화학식 1의 화합물은, 이것을 염기 예를 들어, 탄산칼륨, 트리에틸아민 또는 수소화나트륨으로 처리한 후, 여기에 R⁶X [여기 서, X는 할로겐화물, 메실레이트 또는 토실레이트임]를 첨가하면 화학식 2의 화합물로 변환될 수 있다. 이 반응에서 사용된 용매의 예로서는 DMF, THF, CH₂Cl₂ 및 이의 혼합물을 포함한다. 본 반응은 0 ∼ 100℃의 온도에서 약 15분 ∼ 12 시간 동안 진행된다.

대안적으로, 상기 화학식 1의 화합물은 화학식 R⁶X[여기서, X는 히드록실임]의 화합물과 혼합될 수 있으며, 이때 생성된 혼합물을 용매 예를 들어, THF 중 트리페닐포스핀 및 디이소프로필아조디카복실레이트로 처리하면 화학식 2의 화합물을 얻을 수 있다.

화학식 2의 화합물을 촉매 예를 들어, 산화백금, 탄소상 팔라듐 또는 레이니 니켈의 존재하에 수소 가스로 처리하거나, 또는 아연 금속의 존재하에 산 공급원 예를 들어, 포화 수성 염화암모늄 또는 수성 염화수소로 처리하면, 화학식 3의 화합물을 얻을 수 있다. 본 반응에 사용된 용매의 예로서는 메탄올, 에탄올, 아세트산에틸 또는 이들의 혼합물을 포함한다. 일반적으로 본 반응은 1 ∼ 12 시간 동안 실온 또는 그 이하의 온도에서 진행된다.

화학식 5의 화합물은 화학식 3의 화합물을 화학식 4의 화합물(반응식 2에 기술된 바와 같이 제조)과 배합함으로써 제조될 수 있다. 본 반응에 사용되는 용매의 예로서는 톨루엔, 벤젠 및 자일렌을 포함한다. 본 반응은 5 ∼ 12 시간 동안 60 ∼ 100℃의 온도에서 진행된다.

상기 반응식 2에 나타낸 바와 같이, 화학식 4의 화합물은 화학식 6의 화합물을 염기 예를 들어, DIEA 및 디페닐 포스포릴 아지드로 처리함으로써 제조될 수 있다. 본 반응에 통상적으로 사용되는 용매는 THF이며, 본 반응은 1∼12 시간 동안 20∼80℃의 블래스트 실드(blast shield) 뒤에서 수행된다.

상기 반응식 3은 화학식 5의 화합물의 대안적 합성법을 나타내는 것이다. 화학식 3의 화합물은 화학식 7의 화합물(반응식 4에 따라서 제조됨)로 처리된다. 사용될 수 있는 하나의 용매는 DMF이고, 반응 온도는 1 ∼12 시간에 걸쳐서 실온 ∼ 60℃로 유지시킨다.

상기 반응식 4에 나타낸 바와 같이, 화학식 7의 화합물은 염기 예를 들어, 피리딘의 존재하에 화학식 8의 화합물을 클로로포름산아릴 예를 들어, 클로로포름산페닐 또는 클로로포름산p-니트로페닐로 처리하여 제조될 수 있다. 본 반응에 사용되는 용매의 예로서는 CH₂Cl₂ 또는 피리딘을 포함하며, 이때의 반응 온도는 0℃ ∼ 실온이다.

상기 반응식 5는 화학식 5의 화합물에 대한 대안적 합성법을 나타내는 것이다. 화학식 9의 화합물을 염기 예를 들어, 수소화나트륨, 포타슘 비스(트리메틸실릴)아미드 또는 n-부틸리튬의 존재하에 알콜로 처리하면 화학식 2의 화합물로 전환된다. 본 반응에 사용된 용매의 예로서는 THF 또는 디에틸 에테르를 포함한다. 본 반응은 통상적으로 약 1 ∼ 6 시간 동안 -15℃ ∼ 실온의 온도에서 진행된다. 화학식 2의 화합물은 반응식 1에 기술된 방법에 의해서 화학식 5의 화합물로 전환된다.

상기 반응식 6은 화학식 5의 화합물의 대안적 합성법을 나타내는 것이다. 화학식 3의 화합물은 반응식 4에 기술된 방법에 의해서 화학식 10의 화합물로 전환될 수 있다. 화학식 10의 화합물은 반응식 1에 기술된 방법에 의해서 화학식 5의 화합물로 전환될 수 있다.

특이적이며 비 제한적인 화학식 I의 화합물의 예를 이하에 제공하였는데, 이 화합물의 합성법은 이하에 제시된 방법과, 본원에 참고용으로 인용되어 있는 공동 계류 미국 특허 출원의 공보 제 2003-0069284 A1에 개시된 방법에 따라서 수행된다.

이하 합성 방법에 사용된 약어는 다음과 같다: 시간(h), 물(H₂O), 황산마그네슘(MgSO₄), 염산(HCl), 디메틸설폭시드(DMSO), 디이소프로필 아조디카복실레이트(DIAD), 염화메틸렌(CH₂Cl₂), 클로로포름(CHCl₃), 메탄올(MeOH), 수소화암모늄(NH₄OH), 중 클로로포름(deuterated chloroform)(CDCl₃), 테트라하이드로푸란(THF), N-메틸피롤리돈(NMP), 아세트산(AcOH), 아세트산 에틸(EtOAc), 에탄올(EtOH), 디에틸에테르(Et₂O), 탄산나트륨(Na₂CO₃), 중탄산나트륨(NaHCO₃), 질산(HNO₃), 염산(HCl), 염화나트륨(NaCl), 황산나트륨(Na₂SO₄), 디메틸포름아미드(DMF), 1,8-디아자비시클로-[5.4.0]운덱-7-엔(DBU), 및 N,N-디이소프로필에틸아민(DIEA) .

중간체 1

5-메틸-피라진-2-카보닐 아지드

실온 및 질소 대기 하, 540 ㎖ THF중 5-메틸-피라진-2-카르복실산(25 g, 181 mmol)의 교반 현탁액에 DIEA(31.7 ㎖, 181mmol)을 첨가한 결과, 갈색 용액이 생성되었다. 이후 1 시간에 걸쳐 블래스트 실드 뒤에서 디페닐 포스포릴 아지드(39.2 ㎖, 181 mmol)를 50 ㎖ THF 중 용액의 형태로 적가하였다. 이 반응물을 밤새도록 교반하였다. 이후 상기 반응물을 실온에서 회전 증발(rotoevaporation)시켜 부피를 작게 만들고, 이를 Et₂O(1 ℓ) 및 H₂O(1ℓ) 사이에 분할하였다. H₂O층을 Et₂O(2 × 250 ㎖)로 역추출한 다음, 합하여진 유기층을 포화 중탄산나트륨 1 ℓ로 2회 세척하였다. 이 유기층을 건조시키고(MgSO₄), 여과, 농축 및 Et₂O로 분쇄하여 고체 메스로 만든 결과, 황색 고체인 생성물(15 g, 50%)을 얻었다. 20 ㎖ Et₂O 중 미정제 생성물 1 g을 취하여 이를 실온에서 수 분 동안 1∼2 g의 탈색 탄소(decolorizing carbon)로 처리한 결과, 더욱 순수한 화합물을 분리할 수 있었다. 여과 및 농축 이후, 이 물질을 EtOAc 중에서 TLC로 균질화시킨 결과, 순수한 백색 물질을 얻을 수 있었다. 회수율은 통상적으로 65%였다.

화합물 1

1-[5-에티닐-2-(1-메틸-피페리딘-3-일메톡시)-페닐]-3-(5-메틸-피라진-2-일)-우레아

1 단계 : 3-(4- 브로모 -2-니트로- 페녹시메틸 )-1- 메틸 -피페리딘

질소 대기하에서, 무수 HTF(25 ㎖) 중 1-메틸피페리딘-3-메탄올(1 g, 5.3 mmol), 2-니트로-4-브로모-페놀(1.15 g, 5.3 mmol) 및 트리페닐포스핀(1.39 g, 5.3 mmol)의 교반된 용액에 디이소프로필 아조디카복실레이트(1.04 ㎖, 5.3 mmol) 용액을 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 12 시간 동안 교반한 다음, 이를 에틸 아세테이트(75 ㎖)로 희석시킨 다음 염수(2 × 50 ㎖)로 세척하였다. 합하여진 유기층을 MgSO₄로 건조시키고 여과한 다음, 감압 하에서 농축하였다. 미정제 물질을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔) 상에서 정제할 때, CH₂Cl₂ 중 5% MeOH와 함께 용리한 결과 무색의 오일을 얻었다.

2 단계 : 1- 메틸 -3-(2-니트로-4- 트리메틸 - 실라닐에티닐 - 페녹시메틸 )-피페리딘

실온 및 질소 대기하에서 40 ㎖ 벤젠 중 3-(4-브로모-2-니트로-페녹시메틸)- 1-메틸-피페리딘(910 ㎎, 2.76 mmol)의 교반 용액에 트리메틸실릴아세틸렌(543 ㎎, 5.5 mmol), 디클로로비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II)(39 ㎎, 0.55 mmol), 요오드화 제1구리(42 ㎎, 0.22 mmol) 및 DBU(1.26 g, 8.3 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 6 시간 동안 환류 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 다음, 반응 혼합물을 벤젠으로 여과하고, 여과물을 아세트산에틸(100 ㎖) 및 H₂O(100 ㎖) 사이에 분할하였다. 유기층을 건조시키고(MgSO₄), 여과, 농축 및 크로마토그래피(95/5 CH₂Cl₂/MeOH) 시킨 결과, 목적 생성물을 얻었다.

3 단계 : 2-(1- 메틸 -피페리딘-3- 일메톡시 )-5- 트리메틸실라닐에티닐 - 페닐아민

환류 하 20 ㎖의 AcOH 중 1-메틸-3-(2-니트로-4-트리메틸실라닐에티닐-페녹시메틸)-피페리딘(1.25 g, 3.72 mmol)의 교반 용액에 철 분말(1.4 g/25 g/원자)을 일부씩 가하였다. 1 시간 경과 후, 반응 혼합물을 약간 식힌 후, EtOAc 50 ㎖로 희석시켜 여과한 다음, 이 고체를 EtOAc로 헹구었다. 여과물을 증발 건조시키고, 잔류물을 EtOAc(50 ㎖)와 포화 NaHCO₃(50 ㎖) 사이에 분할하였다. 수성 상을 EtOAc 50 ㎖로 추출하고, 합하여진 유기층을 염수 100 ㎖로 세척한 다음, 건조(MgSO₄), 여과 및 농축시킨 결과 오일(100%)을 얻었다.

4 단계 : 1-[2-(1- 메틸 -피페리딘-3-일- 메톡시 )-5- 트리메틸실라닐에티닐 - 페닐 ]-3-(5- 메틸 -피라진-2-일)- 우레아

톨루엔(4 ㎖) 중 5-메틸-피라진-2-카보닐 아지드(163 ㎎; 1.0 mmol)의 교반 용액[15분 동안 90℃까지 미리 가열함]에 1-메틸-3-(2-니트로-4-트리메틸실라닐에 티닐-페녹시메틸)-피페리딘(305 ㎎; 1 mmol)을 첨가하였다. 이 혼합물을 65℃로 냉각시키고 12 시간 동안 교반하였다. 이후 상기 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 여과한 결과, 목적 물질을 얻었다.

5 단계 : 1-[5- 에티닐 -2-(1- 메틸 -피페리딘-3- 일메톡시 )- 페닐 ]-3-(5- 메틸 -피라진-2-일)- 우레아

질소 대기 환류 하에서 무수 EtOH 5 ㎖중 1-[2-(1-메틸-피페리딘-3-일메톡시)-5-트리메틸실라닐에티닐-페닐]-3-(5-메틸-피라진-2-일)-우레아(43 ㎎, 0.095 mmol)의 교반 용액에 플루오르화칼륨(27 ㎎, 0.47 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 1시간 30분 동안 환류시키고 실온으로 냉각시킨 다음, 아세트산 에틸(30 ㎖) 및 H₂O(30 ㎖) 사이에 분할하였다. 유기층을 분리, 건조(MgSO₄), 여과 및 농축시킨 결과, 황갈색 고체인 생산물(35 ㎎, 97%)을 얻었다. ¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 11.31 (br s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.59 (br s, 1H), 7.16 (d, 1H), 6.78 (d, 1H), 3.86 (m, 2H), 3.12 (m, 1H), 2.96 (s, 1H), 2.82 (m, 1H), 2.52 (s, 3H), 2.34 (m, 1H), 2.20 (s, 3H), 1.97 (m, 1H), 1.91-1.63 (m, 4H), 1.07 (m, 1H) . LRMS (apci, 포지티브) m/e 380.5 (M+1)

화합물 2:

1-[2-(2-디메틸아미노-에톡시)-5-에티닐-페닐]-3-(5-메틸-피라진-2-일)-우레아

1 단계: 디메틸-[2-(2-니트로-4- 트리메틸실라닐에티닐 - 페녹시 )-에틸]-아민

[2-(4-브로모-2-니트로-페녹시)-에틸]-디메틸-아민 [4-브로모-2-니트로페놀 및 N,N-디메틸아미노에탄올로부터 "화합물 1의 1 단계"에서와 같이 제조]을 사용하여 "화합물 1의 2 단계"의 방법에 따라서 제조하였다.

2 단계: 2-(2-디메틸아미노- 에톡시 )-5- 트리메틸실라닐에티닐 - 페닐아민

디메틸-[2-(2-니트로-4-트리메틸실라닐-에티닐-페녹시)-에틸]-아민 (1 mmol)을 MeOH 1 ㎖에 용해시키고, 여기에 포화 염화암모늄 0.5 ㎖ → 아연 분말(5 mmol)을 첨가하였다. 이 혼합물을 10분 동안 교반한 다음, EtOAc(50 ㎖) 및 탄산나트륨(10% 수용액 50 ㎖)으로 희석시켰다. 유기층을 MgSO₄으로 건조 및 여과시키고, 감압하에서 농축시킨 결과, 투명한 오일(97%)을 얻었다.

3 단계: 1-[2-(2-디메틸아미노- 에톡시 )-5- 트리메틸실라닐에티닐 - 페닐 ]-3-(5-메틸-피라진-2-일)- 우레아

"화합물 1의 4 단계"의 방법에 따라서 제조하였다.

4 단계: 1-[2-(2-디메틸아미노- 에톡시 )-5- 에티닐 - 페닐 ]-3-(5- 메틸 -피라진-2-일)- 우레아

"화학식 1의 5 단계"의 방법에 따라서 최종 생산물(81 ㎎, 97%)을 제조하였다.

¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 10.68 (br s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.18 (d, 1H), 6.82 (d, 1H), 4.18 (m, 2H), 2.99 (s, 1H), 2.82 (m, 2H), 2.52 (s, 3H), 2.39 (s, 6H) . LRMS (apci, 포지티브) m/e 340.5 (M+1).

화합물 3:

1-[5-에티닐-2-(피리딘-3-일메톡시)-페닐]-3-(5-메틸-피라진-2-일)-우레아

1 단계: 3-(2-니트로-4- 트리메틸실라닐 - 에티닐 - 페녹시메틸 )-피리딘

3-(4-브로모-2-니트로-페녹시-메틸)-피리딘 [4-브로모-2-니트로 페놀 및 3-피리딘 메탄올로부터 "화합물 1의 1 단계"에서와 같이 제조]을 사용하여 "화합물 1의 2 단계"의 방법에 따라서 제조하였다.

2 단계: 2-(피리딘-3- 일메톡시 )-5- 트리메틸실라닐에티닐 - 페닐아민

"화합물 1의 3 단계"의 방법에 따라서 제조하였다.

3 단계: 1-(5- 메틸 -피라진-2-일)-3-[2-(피리딘-3- 일메톡시 )-5- 트리메틸실라닐에티닐 - 페닐 ]- 우레아

"화합물 1의 4 단계"의 방법에 따라서 제조하였다.

4 단계: 1-[5-에티닐-2-(피리딘-3-일메톡시)-페닐]-3-(5-메틸-피라진-2-일)-우레아

"화합물 1의 5 단계"의 방법에 따라서 최종 생산물을 제조하였다.

¹H-NMR (400 MHz, d₆-DMSO) δ: 10.16 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.64 (d, 1H), 8.56 (br s, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.96 (d, 1H), 7.50 (d, 1H), 7.28 (br s, 1H), 7.18 (m, 2H), 5.26 (s, 2H), 4.02 (s, 1H), 2.30 (s, 3H) . LRMS (apci, 포지티브) m/e 360.4 (M+1).

화합물 4:

1-[3-(1-메틸-피페리딘-3-일메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로-나프탈렌-2-일]-3-(5-메틸-피라진-2-일)-우레아

1 단계: 3-니트로-5,6,7,8- 테트라하이드로나프탈렌 -2-올

CHCl₃(45 ㎖) 및 아세트산(22.5 ㎖) 중에 5,6,7,8-테트라하이드로-나프탈렌-2-올(2.0 g, 13.5 mmol)을 용해시켰다. 아세트산(22.5 ㎖) 중 농축 HNO₃(0.87 ㎖, 13.7 mmol) 용액을 적가하였다. 이를 20 시간 동안 교반한 다음에, 이 혼합물을 물(70 ㎖)로 희석시킨 다음 Na₂CO₃로 중화시켜 pH 10으로 만들었다. 수성 층을 분리한 다음 이를 CHCl₃로 세척하였다. 합하여진 유기층을 물, 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시킨 다음, 진공 하에서 여과 및 농축하였다. 미정제 물질을 EtOAc/헥산(1:10)을 사용하여 실리카 상에서 크로마토그래피한 다음, 헥산/에틸 에테르(75:1)를 사용하여 SiO₂ 상에서 두 번째로 크로마토그래피하였다.

2 단계: 1- 메틸 -3-(3-니트로-5,6,7,8- 테트라하이드로 -나프탈렌-2- 일옥시메틸 )-피페리딘

3-니트로-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-올(상기 참조) 및 (1-메틸-피페리딘-3-일)-메탄올을 사용하여 "화합물 1의 1 단계"의 방법에 따라서 제조하였다.

3 단계: 3-(1- 메틸 -피페리딘-3- 일메톡시 )-5,6,7,8- 테트라하이드로 -나프탈렌-2-일아민

EtOH(20 ㎖) 중 1-메틸-3-(3-니트로-5,6,7,8-테트라하이드로-나프탈렌-2-일옥시메틸)-피페리딘(1 mmol)으로부터 Pd(OH)₂(촉매량)을 이용하여 제조하였다. 이 혼합물을 대기압 하에서 16 시간 동안 교반하였다. 촉매를 셀라이트상에서 여과하 여 제거한 다음 이 여과물을 감압하에서 농축시킨 결과, 목적 물질을 얻었다.

4 단계: 1-[3-(1- 메틸 -피페리딘-3-일- 메톡시 )-5,6,7,8- 테트라하이드로 -나프탈렌-2-일]-3-(5- 메틸 -피라진-2-일)- 우레아

3-(1-메틸-피페리딘-3-일메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로-나프탈렌-2-일아민 및 5-메틸-피라진-2 카보닐 아지드를 사용하여 "화합물 1의 4 단계"의 방법에 따라서 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 10.98 (brd s, 1H), 8.45 (brd s, 1H), 8.36-8.30 (m, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 3.91-3.79 (m, 2H), 3.27-3.14 (m, 1H), 2.96-2.84 (m, 1H), 2.56-2.46 (m, 4H), 2.51 (s, 3H), 2.43-2.29 (m, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.11-1.99 (m, 1H), 1.93-1.83 (m, 2H), 1.83-1.69 (m, 6H), 1.18-1.04 (m, 1H) . LRMS (APCI, 포지티브) m/e 410.3 (M+1)

화합물 5:

1-[3-(1-메틸-피페리딘-2-일메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로-나프탈렌-2-일]-3-(5-메틸-피라진-2-일)-우레아

1 단계: 3-니트로-5,6,7,8- 테트라하이드로 -나프탈렌-2-올

"화합물 4의 1 단계"의 방법에 따라서 제조하였다.

2 단계: 1-메틸-2-(3-니트로-5,6,7,8-테트라하이드로-나프탈렌-2-일옥시메틸)-피페리딘

3-니트로-5,6,7,8-테트라하이드로-나프탈렌-2-올 및 (1-메틸-피페리딘-2-일)-메탄올을 사용하여 "화합물 1의 1 단계"의 방법에 따라서 제조하였다.

3 단계: 3-(1- 메틸 -피페리딘-2- 일메톡시 )-5,6,7,8- 테트라하이드로 -나프탈렌-2-일아민

1-메틸-2-(3-니트로-5,6,7,8-테트라하이드로-나프탈렌-2-일옥시메틸)-피페리딘을 사용하여 "화합물 4의 3 단계"의 방법에 따라서 제조하였다.

4 단계: 1-[3-(1- 메틸 -피페리딘-2-일- 메톡시 )-5,6,7,8- 테트라하이드로 -나프탈렌-2-일]-3-(5- 메틸 -피라진-2-일)- 우레아

3-(1-메틸-피페리딘-2-일메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로-나프탈렌-2-일아민 및 5-메틸-피라진-2-카보닐 아지드를 사용하여 "화합물 1의 4 단계"의 방법에 따라서 제조하였다. 미정제 물질을 무수 에탄올로부터 재결정화하였다. 1H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) δ: 10.06 (s, 1H), 10.02-9.87 (brd, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 6.69 (s, 1H), 4.55-4.47 (m, 1H), 2.89-2.81 (m, 1H), 2.71-2.60 (m, 7H), 2.43 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.07-1.97 (m, 1H), 1.85-1.74 (m, 1H), 1.74-1.58 (m, 7H), 1.57-1.45 (m, 1H) . LRMS (APCI, 포지티브) m/e 410.5 (M+1) .

화합물 6:

(S)-1-(5-메틸-피라진-2-일)-3-[2-(피페리딘-3-일메톡시)-5-트리플루오로메틸-페닐]-우레아

1 단계: (S)-3- 히드록시메틸 -피페리딘-1-카르복실산 tert -부틸 에스테르

(S)-피페리딘-1,3-디카르복실산 1-tert-부틸 에스테르를 사용하여 WO 02/070494에 개시된 방법에 따라서 제조하였다.

2 단계: (S)-3-(4- 트리플루오로메틸 -2-니트로- 페녹시메틸 )-피페리딘-1-카르복실산 tert -부틸 에스테르

(S)-3-히드록시메틸-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 및 2-니트로-4-트리플루오로메틸-페놀을 사용하여 "화합물 1의 1 단계"에 따라서 제조하였다.

3 단계: (S)-3-(2-아미노-4- 트리플루오로메틸 - 페녹시메틸 )-피페리딘-1-카르복실산 tert -부틸 에스테르

에탄올(30 ㎖) 중 (S)-3-(4-트리플루오로메틸-2-니트로-페녹시메틸)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르(4.04 g, 10 mmol)의 교반 용액에 펄만 촉매(421 ㎎, 3 mmol)를 첨가하였다. 이 반응물을 수소(벌룬;balloon)로 3회 정화한 후 12 시간 동안 교반하였다. 반응물을 셀라이트를 통하여 여과한 다음 감압하에서 건조시켰다. 이 물질을 Biotage 40M 카트리지(헥산/아세트산에틸(3/1) 용리)를 사용하여 정제한 결과, 오일(이후, 백색 고체로 고화됨)을 얻었다.

4 단계: (S)-3-{4- 트리플루오로메틸 -2-[3-(5- 메틸 -피라진-2-일)- 우레이도 ]-페녹시메틸}-피페리딘-1-카르복실산 tert -부틸 에스테르

톨루엔(20 ㎖) 중 5-메틸-피라진-2-카보닐 아지드(1.14 g, 7 mmol)의 교반 용액을 예열한 오일 조(90℃)에 15분 동안 넣었다. (S)-3-(2-아미노-4-트리플루오로메틸-페녹시메틸)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르(2.62 g, 7 mmol)를 첨가하고, 반응물을 65℃로 냉각시킨 다음 12 시간 동안 교반하였다. 이 반응물을 실온으로 냉각시킨 다음, 감압하에서 농축시켰다. 이 고체를 Biotage 40M 카트리지(헥산/아세트산에틸(1/1) 용리)를 사용하여 정제한 결과, 무정형의 고체를 얻었다.

5 단계: (S)-1-(5- 메틸 -피라진-2-일)-3-[2-(피페리딘-3- 일메톡시 )-5- 트리플루오로메틸 - 페닐 ]- 우레아

디옥산(2 ㎖) 중 (S)-3-{4-트리플루오로메틸-2-[3-(5-메틸-피라진-2-일)-우레이도]-페녹시메틸}-피페리딘-1-카복실산 tert-부틸 에스테르(560 ㎎, 1.1 mmol)의 교반 용액에 HCl(디옥산 중 4M 용액, 4 ㎖)을 첨가하였다. 3 시간 동안 교반한 다음, 반응물을 감압하에서 농축시킨 결과, 엷은 황색의 고체 400 ㎎(89%)을 얻었다. ¹H-NMR (400 MHz, d₆-DMSO) δ: 10.60 (s, 1H), 9.20 (s, 2H), 8.79 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.40 (d, 1H), 7.20 (s, 1H), 4.15 (m, 2H), 3.50 (d, 1H) 3.30 (d, 1H), 2.90 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 1.40-2.00 (m, 4H) . LRMS (apci, 포지티브) m/e 410.30 (M+1).

화합물 7:

(R)-1-(5-메틸-피라진-2-일)-3-[2-(피페리딘-3-일메톡시)-5-트리플루오로메틸-페닐]-우레아

1 단계: (R)-3- 히드록시메틸 -피페리딘-1-카르복실산 tert -부틸 에스테르

(R)-피페리딘-1,3-디카르복실산 1-tert-부틸 에스테르를 사용하여 WO 02/070494에 개시된 방법에 따라서 제조하였다.

2 단계: (R)-3-(4- 트리플루오로메틸 -2-니트로- 페녹시메틸 )-피페리딘-1-카르복실산 tert -부틸 에스테르

(R)-3-히드록시메틸-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 및 2-니트로-4-트리플루오로메틸-페놀을 사용하여 "화합물 1의 1 단계"에 따라서 제조하였다.

3 단계: (R)-3-(2-아미노-4- 트리플루오로메틸 - 페녹시메틸 )-피페리딘-1-카르복실산 tert -부틸 에스테르

(R)-3-(4-트리플루오로메틸-2-니트로-페녹시메틸)-피페리딘-1-카르복실산 tert부틸 에스테르를 사용하여 "화합물 4의 3 단계"에 따라서 제조하였다.

4 단계: (R)-3-{4- 트리플루오로메틸 -2-[3-(5- 메틸 -피라진-2-일)- 우레이도 ]-페녹시메틸}-피페리딘-1-카르복실산 tert- 부틸 에스테르

(R)-3-(2-아미노-4-트리플루오로메틸-페녹시메틸)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 및 5-메틸-피라진-2-카보닐 아지드를 사용하여 "화합물 1의 4 단계"에 따라서 제조하였다.

5 단계: (R)-1-(5- 메틸 -피라진-2-일)-3-[2-(피페리딘-3- 일메톡시 )-5- 트리플 루오로메틸- 페닐 ]- 우레아 하이드로 클로라이드 염

(R)-3-{4-트리플루오로메틸-2-[3-(5-메틸-피라진-2-일)-우레이도]-페녹시메틸}-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 사용하여 "화합물 6의 5 단계"에 따라서 제조하였다. ¹H-NMR (400 MHz, d₆-DMSO) δ: 10.50 (s, 1H), 9.08 (s, 2H), 8.78 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.40 (d, 1H), 7.20 (d, 1H), 4.10 (m, 2H), 3.70 (m, 1H), 3.50 (m, 1H), 3.22 (d, 1H), 2.90 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 1.95 (d, 1H), 1.80 (m, 2H), 1.45 (m, 1H) . LRMS (apci, 포지티브) m/e 410.3 (M+1).

화합물 8:

1-[2-(1-메틸-피페리딘-4-일옥시)-5-트리플루오로메틸-페닐]-3-(5-메틸-피라진-2-일)-우레아

1 단계: 1- 메틸 -4-(2-니트로-4- 트리플루오로메틸 - 페녹시 )-피페리딘

2-니트로-4-트리플루오로메틸-페놀(2.07 g, 10 mmol), 1-메틸-피페리딘-4-올(1.21 g, 10.5 mmol) 및 트리페닐포스핀(2.75 g, 10.5 mmol)을 THF 30 ㎖로 희석한 다음, 이를 질소 하에 방치하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시킨 다음, THF 1㎖ 중 DIAD(2.12 g, 10.5 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 12 시간 동안 교반하였으며, 이때 온도는 실온으로 상승하였다. 반응물을 아세트산에틸(150 ㎖) 및 탄산나트륨(10% 수용액 150 ㎖)으로 희석하였다. 유기층을 염수로 세척하고 MgSO₄에서 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 건조시켰다. 생성물을 Biotage 40M 카트리지(헥산/아세트산에틸(500 ㎖, 1/1) → CH₂Cl₂/MeOH/NH₄OH(98/8/2, 500 ㎖) 용리)를 사용하여 정제한 결과, 엷은 황색 오일을 얻었다.

2 단계: 2-(1- 메틸 -피페리딘-4- 일옥시 )-5- 트리플루오로메틸 - 페닐아민

1-메틸-4-(2-니트로-4-트리플루오로메틸-페녹시)-피페리딘을 사용하여 "화합 물 2의 2 단계"에 따라서 제조하였다.

3 단계: 1-[2-(1- 메틸 -피페리딘-4-일- 옥시 )-5- 트리플루오로메틸 - 페닐 ]-3-(5-메틸-피라진-2-일)- 우레아

2-(1-메틸-피페리딘-4-일옥시)-5-트리플루오로메틸-페닐아민 및 5-메틸-피라진-2-카보닐 아지드를 사용하여 "화합물 1의 4 단계"에 따라서 제조하였다. ¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 8.65 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.22 (d, 1H), 6.95 (d, 1H), 4.45 (m, 1H), 2.95 (m, 2H), 2.55 (s, 3H), 2.45 (s, 3H), 1.85-2.30 (m, 6H) . LRMS (apci, 포지티브) m/e 410.3 (M+1).

화합물 9:

1-(5-메틸-피라진-2-일)-3-[2-(피페리딘-3-일메톡시)-5-트리플루오로메틸-페닐]-우레아

1 단계: 3-(2-니트로-4- 트리플루오로메틸 - 페녹시메틸 )-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르

2-니트로-4-트리플루오로메틸-페놀 및 3-히드록시메틸-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 사용하여 "화합물 1의 1 단계"에 따라서 제조하였다.

2 단계: 3-(2-아미노-4- 트리플루오로메틸 - 페녹시메틸 )-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르

3-(2-니트로-4-트리플루오로메틸-페녹시메틸)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 사용하여 "화합물 3의 3 단계"에 따라서 제조하였다.

3 단계: 3-{2-[3-(5- 메틸 -피라진-2-일)- 우레이도 ]-4- 트리플루오로메틸 - 페녹 시메틸}-피페리딘-1-카르복실산 tert -부틸 에스테르

3-(2-아미노-4-트리플루오로메틸-페녹시메틸)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 및 5-메틸-피라진-2-카보닐 아지드를 사용하여 "화합물 1의 4 단계"에 따라서 제조하였다.

4 단계: 1-(5- 메틸 -피라진-2-일)-3-[2-(피페리딘-3- 일메톡시 )-5- 트리플루오 로메틸- 페닐 ]- 우레아 하이드로클로라이드 염

3-{2-[3-(5-메틸-피라진-2-일)-우레이도]-4-트리플루오로메틸-페녹시메틸}-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 사용하여 "화합물 6의 5 단계"에 따라서 제조하였다. ¹H-NMR (400 MHz, d₆-DMSO) δ: 10.41 (s, 1H), 8.90 (m, 2H), 8.79 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.40 (d, 1H), 7.25 (d, 1H), 4.15 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 1.20-3.80 (m, 9H) . LRMS (apci, 포지티브) m/e 410.3 (M+1).

화합물 10:

1-[2-(1-메틸-피페리딘-3-일메톡시)-5-트리플루오로메틸-페닐]-3-(5-메틸-피라진-2-일)-우레아

1 단계: 1- 메틸 -3-(2-니트로-4- 트리플루오로메틸 - 페녹시메틸 )-피페리딘

2-니트로-4-트리플루오로메틸-페놀(2.07 g, 10 mmol), (1-메틸-피페리딘-3-일)-메탄올(1.36 g, 10.5 mmol) 및 트리페닐포스핀(2.75 g, 10.5 mmol)을 THF 30 ㎖로 희석시킨 후, 질소 하에 방치하였다. 이 반응물을 0℃로 냉각시킨 다음, DIAD(2.12 g, 10.5 mmol)를 THF 2 ㎖에 적가하였다. 이 반응 혼합물을 12 시간 동안 교반하면서 온도는 실온으로 상승시켰다. 반응 혼합물을 아세트산에틸(100 ㎖) 및 HCl(2N, 50 ㎖)로 희석하였다. 수성 층을 아세트산에틸로 세척한 다음(2 × 50 ㎖), 고체 수산화나트륨으로 염기화시켜 pH를 12로 만들었다. 생성물을 아세트산에틸로 추출하였다(3 × 50 ㎖). 유기층을 염수로 세척한 다음, MgSO₄로 건조시키고, 여과한 다음, 감압하에서 건조시켰다. 생성물을 Biotage 40M 카트리지(CH₂Cl₂/MeOH/NH₄OH(90/8/2) 용리)를 사용하여 정제한 결과, 황색 고체를 얻었다.

2 단계: 2-(1- 메틸 -피페리딘-3- 일메톡시 )-5- 트리플루오로메틸 - 페닐아민

1-메틸-3-(2-니트로-4-트리플루오로메틸-페녹시-메틸)-피페리딘을 사용하여 "화합물 4의 3 단계"에 따라서 제조하였다.

3 단계: 1-[2-(1- 메틸 -피페리딘-3-일- 메톡시 )-5- 트리플루오로메틸 - 페닐 ]-3-(5-메 틸피라 진-2-일)- 우레아

2-(1-메틸-피페리딘-3-일메톡시)-5-트리플루오로메틸-페닐아민 및 5-메틸-피라진-2-카보닐 아지드를 사용하여 "화합물 1의 4 단계"에 따라서 제조하였다. ¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 11.40 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.20-8.40 (m, 3H), 7.28 (d, 1H), 6.95 (d, 1H), 3.95 (m, 2H), 3.20 (m, 1H), 2.85 (m, 1H), 2.50 (s, 3H), 1.00-2.40 (m, 10H) . LRMS (apci, 포지티브) m/e 424.4 (M+1).

화합물 11:

1-(5-메틸-피라진-2-일)-3-[7-(피리딘-3-일메톡시)-2,3-디하이드로-벤조[1,4]디옥신-6-일]-우레아

1 단계: 3-(7-니트로-2,3- 디하이드로 - 벤조 -[1,4] 디옥신 -6- 일옥시메틸 )-피리딘 하 이드로클로라이드 염

실온 및 질소 대기하에서 THF 2.4 ㎖ 중 7-니트로-2,3-디하이드로-벤조[1,4] 디옥신-6-올(197 ㎎, 1 mmol)[문헌[Bourlot et al., J. Med. Chem., 1998, 41(17), 3140 및 Besson et al., Tetrahedron, 1995, 51, 3197-3204]에 기재된 방법에 따라서 제조됨]의 교반 용액에 피리딘-3-일-메탄올(97 ㎕, 1 mmol) → 트리페닐-포스핀(288 ㎎, 1.1 mmol)을 첨가한 다음, DIAD(216 ㎕, 1.1 mmol)를 적가하였다. 밤새도록 교반한 다음, 반응 혼합물을 회전 증발법으로 농축시키고, 이를 아세트산에틸과 물 사이에 분할하였다. 이 화합물은 상기 두 층 중 어느 층에도 용해되지 않았으며, 여과 및 아세트산에틸을 사용하여 세척함으로써 하이드로클로라이드 염으로 분리되었다.

2 단계: 7-(피리딘-3- 일메톡시 )-2,3- 디하이드로 - 벤조[1,4]디옥신 -6- 일아민

"화합물 2의 2 단계"의 방법에 따라서 3-(7-니트로-2,3-디하이드로벤조[1,4]디옥신-6-일옥시메틸)-피리딘 하이드로클로라이드 염(266 ㎎, 0.82 mmol)로부터 제조하였다. 보라색 오일인 생성물(다음 단계에 바로 사용됨)이 분리되었다.

3 단계: 1-(5- 메틸 -피라진-2-일)-3-[7-(피리딘-3- 일메톡시 )-2,3- 디하이드로 -벤조[ 1,4]디옥신 -6-일] 우레아

"화합물 1의 4 단계"의 방법에 따라서 7-(피리딘-3-일메톡시)-2,3-디하이드로-벤조[1,4]디옥신-6-일아민 및 5-메틸-피라진-2-카보닐 아지드로부터 최종 생산물을 제조하여 갈색 고체의 형태로 분리하였다. ¹H-NMR (400 MHz, d₆-DMSO) δ: 10.22 (br s, 1H), 9.98 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.62 (d, 1H), 8.57 (s, 1H), 7.93 (d, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.44 (m, 2H), 6.78 (s, 1H), 5.17 (s, 2H), 4.20 (s, 4H), 2.36 (s, 3H) . LRMS (apci, 포지티브) m/e 394.0 (M+1).

화합물 12:

1-[7-(2-디메틸아미노-에톡시)-2,3-디하이드로벤조[1,4]디옥신-6-일]-3-(5-메틸-피라진-2-일)-우레아

1 단계: 디메틸-[2-(7-니트로-2,3- 디하이드로벤조[1,4]디옥신 - 6-일옥시 )-에틸]-아민

N,N-디메틸에탄올아민 및 7-니트로-2,3-디하이드로-벤조[1,4]디옥신-6-올을 사용하여 "화합물 1의 1 단계"의 방법에 따라서 제조하였다. 생성물은 황색 오일의 형태로 분리되었다.

2 단계: 7-(2-디메틸아미노- 에톡시 )-2,3- 디하이드로벤조[1,4]디옥신 -6- 일아민

실온에서 95% 에탄올 5.6 ㎖ 중 디메틸-[2-(7-니트로-2,3-디하이드로-벤조[1,4]디옥신-6-일옥시)-에틸]-아민(151 ㎎, 0.56 mmol)의 교반 용액에 펄만 촉매(40 ㎎)를 첨가하였다. 이 현탁액을 수소 가스와 함께 3회 진공/정화 사이클링시킨 다음, 이를 수소 1 기압하에 방치하였다. 밤새도록 교반한 후, 95% 에탄올과 함께 상기 촉매를 GF/F 여과지에 통과시켜 여과함으로써 제거하고, 이 여과물을 투명 한 오일의 형태로 농축시켰다. 이후 이 오일은 서서히 보라색을 띠게 되었다. 이 물질을 다음 반응에 바로 사용하였다.

3 단계: 1-[7-(2-디메틸아미노- 에톡시 )-2,3- 디하이드로 - 벤조[1,4]디옥신 -6-일]-3-(5- 메틸 -피라진-2-일)- 우레아

"화합물 1의 4 단계"의 방법에 따라서, 5-메틸-피라진-2-카보닐 아지드 및 7-(2-디메틸아미노-에톡시)-2,3-디하이드로-벤조[1,4]디옥신-6-일아민으로부터 최종 화합물을 제조하였다. 이 생성물은 갈색 고체의 형태로 분리되었다. ¹H-NMR (400 MHz, d₆-DMSO) δ: 10.32 (br s, 1H), 10.03 (s, 1H), 9.51 (br s, 1H), 8.96 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 6.64 (s, 1H), 4.25 (m, 2H), 4.19 (s, 4H), 3.59 (m, 2H), 2.79 (s, 6H), 2.36 (s, 3H) . LRMS (apci, 포지티브) m/e 374.4 (M+1).

화합물 13:

1-[3-(2-디메틸아미노-에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로나프탈렌-2-일]-3-(5-메틸-피라진-2-일)-우레아

1 단계: 3-니트로-5,6,7,8- 테트라하이드로나프탈렌 -2-올

"화합물 4의 1 단계"을 참조하시오.

2 단계: 디메틸-[2-(3-니트로-5,6,7,8-테트라하이드로-나프탈렌-2-일옥시)-에틸]-아민

"화합물 1의 1 단계"의 방법에 따라서, 3-니트로-5,6,7,8-테트라하이드로-나프탈렌-2-올을 사용하여 제조하였다.

3 단계: 3-(2-디메틸아미노- 에톡시 )-5,6,7,8- 테트라하이드로 -나프탈렌-2- 일아민

"화합물 1의 3 단계"의 방법에 따라서, 디메틸-[2-(3-니트로-5,6,7,8-테트라하이드로-나프탈렌-2-일옥시)-에틸]-아민을 사용하여 제조하였다.

4 단계: 1-[3-(2-디메틸아미노-에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로-나프탈렌-2-일]-3-(5- 메틸 -피라진-2-일)- 우레아

"화합물 1의 4 단계"의 방법에 따라서, 3-(2-디메틸아미노-에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로-나프탈렌-2-일아민 및 5-메틸-피라진-2-카보닐 아지드를 사용하여 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 10.26 (brd s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.45 (brd S, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 6.60 (s, 1), 4.17-4.10 (m, 2H), 2.99-2.89 (m, 2H), 2.77-2.66 (m, 4H), 2.54-2.44 (m, 9H), 1.81-1.73 (m, 4H). LRMS (APCI, 포지티브) m/e 370.3 (M+1).

치료 방법

본 발명의 화합물은 진핵 생물 예를 들어, 사람 및 기타 동물의 암 및 기타 세포 증식 관련 징후를 치료하는데에 사용되는 방사선 및/또는 화학 요법 제제의 치료 효과를 배가시키는데에 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물은 대사 길항 물질 예를 들어, 메토트렉세이트 또는 5-플루오로우라실(5-FU)로 통상 치료되는 종양의 치료 효능을 강화하는데 사용될 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 화합물은 세포 즉, 암 세포 및 비 암 세포 둘 다의 비정상적 증식을 억제한다.

본 발명의 화합물을 사용함으로써 비정상적으로증식하는 세포를 부분적으로 또는 완전히 퇴화시킬 수 있는데, 즉, 이러한 세포들을 세포 군집으로부터 부분적으로 또는 완전히 사라지게 만들 수 있다. 그러므로, 예를 들어, 비정상적으로증식하는 세포의 군집이 종양 세포일 때, 본 발명의 방법은 종양의 성장 속도를 늦추고, 종양의 크기와 수를 줄이거나 또는 종양을 부분적으로 또는 완전히 퇴화시키는데에 사용될 수 있다.

모든 구체예에서, 본 발명은 비정상 세포 증식이 확인되지 않거나, 비정상 세포 증식의 진행이 멈추거나, 비정상 세포 증식이 의심되거나 또는 예상되는 경우, 생체 내 또는 생체 외에서 사용될 수 있다. 뿐만 아니라, 본 발명은 또한 비정상 세포 증식을 미리 처치하여 이러한 비정상 세포 증식이 재발하는 것을 예방하거나 또는 억제할 때에도 사용될 수도 있다. 본 구체예 및 관련 구체예에 있어서, "비정상적으로 증식하는 세포를 포함하는 세포 군집"이란, 비정상 세포 증식이 확인되지 않거나 진행을 멈춘 임의의 세포 군집, 또는 비정상 세포 증식이 의심되거나 또는 예상되는 임의의 세포 군집, 및/또는 비정상 세포 증식의 재발을 예방하거나 또는 억제하도록 미리 처치된 임의의 세포 군집을 의미한다.

본 발명의 하나의 방법은, 본 발명의 Chk1 억제 화합물을 화학 요법 제제와 함께 치료적 유효량으로 투여하는 단계[여기서, 상기 화학 요법 제제는 단일 또는 이중 사슬 DNA를 파괴하거나, 또는 DNA 복제 또는 세포 증식을 차단할 수 있음]를 포함한다. 대안적으로, 본 발명의 방법은 본 발명의 Chk1 억제 화합물중 하나 이상을 치료적 유효량으로 투여하고, 이와 동시에 항체 예를 들어, 허셉틴(암 세포의 증식 억제 활성을 가짐)을 사용하는 것을 포함하는 치료법도 병행하는 것을 포함한다. 따라서, 암 예를 들어, 결장직장암, 두경부암, 췌장암, 유방암, 위암, 방광암, 외음부 암, 백혈병, 림프종, 흑색종, 신장 세포암, 난소암, 뇌종양, 골육종 및 폐암종은 개선된 치료법 즉, 화학 요법 제제 또는 항체와 함께 본 발명의 Chk1 억제제를 투여하는 치료법으로 치료 가능하다.

암으로서는 조직 세포가 성장하여 형성된 종양 또는 신생물[즉, 세포 증식이 무제한적이고 연속적인 경우]을 포함한다. 이와 같은 성장물 중 일부는 양성이지만, 그 외의 성장물, 즉, "악성"이라 칭하여지는 성장물은 결국 유기체를 사멸시킬 수 있다. 악성 신생물 즉, "암"은 공격적인 세포 증식 현상을 나타내고, 주변 조직에 침투하여 전이될 수 있다는 점에서 양성 성장(benign growth)과 구별된다. 뿐만 아니라, 악성 신생물은 조직 상호 간 그리고 주위 조직의 분화를 더욱 강력하게 억제하고(더욱 강력하게 "탈분화"시키고) 조직화 능력도 더욱 많이 손상시킨다. 이러한 특성을 "퇴화"라 칭한다.

본 발명에 의하여 치료 가능한 암으로서는 또한 고형 암 즉, 암종 및 육종을 포함한다. 암종은 주위 조직으로 침윤(즉, 침투)하여 전이를 일으키는 상피 세포 유래 악성 신생물을 포함한다. 선암종은 선조직 또는 인지 가능한 선구조물을 형성하는 조직으로부터 유래되는 암종이다. 기타 암의 광범위한 부류에는 육종 즉, 세포가 섬유상 또는 균질한 물질 예를 들어, 배의 결합 조직에 묻혀있는 종양을 포함한다. 본 발명은 또한 골수 또는 림프계 관련 암 예를 들어, 백혈병, 림프종, 및 통상적으로 종양 덩어리로 존재하지는 않고 혈관계 또는 림프 망 계(lymphoreticular system)에 분포되어 있는 기타 암도 치료할 수 있다.

Chk1 활성은 예를 들어, 성인 및 소아 종양학에 있어서 다양한 형태의 암과 관련되어 있는데, 예를 들어, 고형 암/악성 종양의 성장, 점액양 세포 및 원형 세포 암종, 국소 진행성 종양(locally advanced tumor), 전이성 암, 사람 연조직 육종 예를 들어, 유잉(Ewing) 육종, 암 전이 예를 들어, 림프관성 전이, (구체적으로, 두경부의) 편평 세포 암종, 식도 편평 세포 암종, 구강 암종, 혈액 세포 악성 종양 예를 들어, 다발성 골수종, 백혈병 예를 들어, 급성 림프구성 백혈병, 급성 비 림프구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 및 모상 세포 백혈병, 삼출성 림프종(체강계 삼출성 림프종), 흉선 림프종 폐암(예를 들어, 소 세포 암종, 피부 T 세포 림프종, 호지킨 림프종, 비 호지킨 림프종, 부신 피질 암, ACTH-생산 종양, 비 소 세포 암, 유방암 예를 들어, 소 세포 암종 및 유선관 암종), 위장관 암(예를 들어, 위암, 결장암, 결장직장암, 및 결장직장 신생물 관련 용종), 췌장암, 간암, 비뇨기 암(예를 들어, 방광암 예를 들어, 일차 표재성 방광 종양, 방광의 침윤성 이행 세포 암종 및 근육-침윤성 방광암), 전립선암, 여성 생식기 악성 종양(예를 들어, 난소 암종, 일차 복막 상피성 신생물, 자궁 경부 암종, 자궁 내막 암, 질암, 여성 외음부 암, 자궁암 및 난소 여포내 고형 암), 남성 생식기 악성 종양(예를 들어, 고환암 및 음경암), 신장암(예를 들어, 신장 세포 암종), 뇌암(예를 들어, 내인성 뇌종양, 신경아세포종, 성상신경교세포 뇌종양, 신경교종 및 중추 신경계 내 전이성 종양 세포 침윤), 골암(예를 들어, 골종 및 골육종), 피부암(예를 들어, 악성 흑색종, 사람 피부 각질 세포의 진행성 종양, 및 편평 세포 암), 갑상선 암, 망막아세포종, 신경아세포종, 복막 삼출, 악성 흉막 삼출, 중피종, 빌림스 종양, 담낭암, 영양막 신생물, 혈관주위세포종 및 카포시 육종과 관련되어 있다. 그러므로, 본 발명의 Chk1 억제제를 투여하면 치료 효과를 강화시킬 것으로 예상된다.

본 발명의 화합물은 또한 염증성 질환의 치료에 있어서 약물의 효능을 배가시킬 수도 있다. 본 발명의 방법에 적당한 화합물과의 병행 요법으로 치료 효과를 볼 수 있는 질병의 예로서는, 류마티스성 관절염, 건선, 백반, 웨그너 육아종증 및 전신 홍반성 루프스병(SLE)이 있다. 관절염, 웨그너 육아종증 및 SLE의 치료법에는 종종 면역 억제 치료제 예를 들어, 이온화 방사선, 메토트렉세이트 및 사이클로포스파미드를 사용하는 것을 포함한다. 이러한 치료법은 통상적으로 직접적으로나 또는 간접적으로 DNA 손상을 유발시킨다. 면역 세포 공격 기작에 있어서 Chk1 활성을 억제하면, 이 면역 세포는 표준적 치료 방법에 더욱 민감하게 억제된다. 일반적으로 건선 및 백반은 자외선 조사(UV)와 소라렌 투여를 병행하여 치료된다. 본 발명의 DNA 손상 제제는 UV 및 소라렌 사멸 효능을 유도하며, 이 치료법의 치료 지수를 증가시킨다. 일반적으로, 본 발명의 방법에 유용한 화합물은 현재 사용되고 있는 면역 억제 약물과 함께 투여될 때 염증성 질환 세포를 더욱 강력하게 억제한다.

상기 기술된 암 이외에도, 본 발명은 비 암성 증식 세포를 치료하는 방법에 사용될 수도 있다. 이러한 증상으로서는 죽상 동맥경화증, 재협착증, 혈관염, 신장염, 망막증, 신장 질환, 증식성 피부 질환, 건선, 켈로이드 흉터, 광선 각화증, 스티븐-존슨 증후군, 류마티스성 관절염(RA), 전신 발병 연소자 만성 관절염(JCA), 골다공증, 전신 홍반성 루프스, 눈의 과증식성 질환 예를 들어, 상피 다운 그로쓰(epithelial down growth), 증식성 유리체망막병증(PVR), 당뇨병성 망막병증, 헤만지오-증식성 질환, 어린선 또는 유두종을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

또한, 본 발명에 의해 치료 가능한 비 암성 증상으로서는 염증 및 염증성 질병, 증상 또는 질환을 포함한다. 이러한 징후의 예로서는 류마티스성 관절염, 건선, 백반, 웨그너 육아종증 및 전신 홍반성 루프스(SLE)를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 관절염, 웨그너 육아종증 및 SLE의 치료법에는 종종 면역 억제 치료제 예를 들어, 이온화 방사선, 메토트렉세이트 및 사이클로포스파미드를 사용하는 것을 포함한다. 건선 및 백반은 일반적으로 소라렌 투여와 자외선(UV) 조사를 병행하여 치료한다. 이러한 치료법은 통상적으로 DNA를 직접적으로 또는 간접적으로 손상시킨다. 면역 세포 공격 기작에 있어서 Chk1 활성을 억제하면, 이 면역 세포가 표준적 치료 방법에 더욱 민감하게 된다. 일반적으로, 본 발명에 유용한 Chk1 억제제는 면역 억제 약물과 병용하여 투여될 때 염증성 질병 세포 억제 효과를 배가시킨다.

본 발명의 Chk1 억제제를 투여하는 한 가지 바람직한 방법은 Keegan외 다수 의 미국 가 명세서 출원 제 60/503,925 호(2003년 9월 17일자 출원) 및 여기에 참고 인용되어 있는 문헌에 기술되어 있다. 비정상 세포 증식을 억제하는 방법에는, 본 발명에 따른 Chk1 활성화제(예를 들어, 화학 요법 제제) 및 Chk1 억제제를 투여하는 것을 포함한다. 이 방법에서, 하나 이상의 Chk1 활성화제는 증식 세포에 있어서 세포 주기 정지를 실질적으로 동조시키기에 충분한 투여량 및 시간 동안 투여된다. 실질적인 단계 동조화를 일으키면, 하나 이상의 Chk1 억제제를 투여하여 세포 주기 정지를 해지시키고 치료적 세포 사멸 현상을 유발한다. 이 방법은 임의의 Chk1 활성화제를 사용하는 경우 유용하며, 암성 및 비 암성 비정상 세포 증식을 치료 또는 예방하는데 사용된다.

바람직하게, 상기 Chk1 억제제는 선택성 Chk1 억제제이다. 비정상적 증식 세포 군집은 하나의 Chk1 억제제와 접촉하거나 하나 이상의 Chk1 억제제와 접촉할 수 있다. 하나 이상의 Chk1 억제제가 사용되면, 이 Chk1 억제제들은 실험 참관의 또는 실험실 기술자에 의해 정해진 별도의 시간에 공동 투여 또는 개별 투여될 수 있다.

비정상적으로 증식하는 세포 군집은 또한 하나의 Chk1 활성화제와 접촉하거나 하나 이상의 Chk1 활성화제와 접촉할 수 있다. 하나 이상의 Chk1 활성화제가 사용되면, 상기 Chk1 활성화제는 실험 참관의 또는 실험실 기술자에 의해 정해진 별도의 시간에 공동 투여될 수 있거나 또는 개별 투여될 수 있다.

본 발명은 또한 세포 외 세포 군집에도 적용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물은 세포 외에서, 소정의 징후, 세포 유형, 환자 및 기타 매개 변수에 대한 Chk1 억제제의 투여 스케쥴 및/또는 투여량을 결정하는데 사용될 수 있다. 이러 한 용도로부터 수집된 정보는 시험관 내 치료법에 대한 프로토콜을 설정하기 위한 실험 목적으로 또는 임상 실험에서 사용될 수 있다. 본 발명을 사용하기에 적당한 기타의 세포 외 용도는 당 업자에게 널리 알려져 있다.

본 발명의 화합물은 또한 세포를 방사선 감작시킬 수도 있다. 전자기 방사선로 치료 가능한 질병으로서는 신생물 생성 질병, 양성 및 악성 종양 및 암 세포를 포함한다.

본원에 예시되어 있지 않은 기타 질병의 전자기 방사선 치료법도 또한 본 발명에 의해 고려된다. 본 발명의 바람직한 구체예는 다음과 같은 전자기 방사선을 이용한다: 감마-방사선(10^-20 내지 10^-13 m), X-레이 방사선(10^-12 내지 10^-9 m), 자외 광선(10∼400 ㎚), 가시 광선(400∼700 ㎚), 적외 방사선(700 ㎚∼1.0 ㎜) 및 마이크로파 방사선(1 ㎜∼30 ㎝).

다수의 암 치료 프로토콜은 현재 전자기 방사선 예를 들어, X-선에 의해 활성화되는 방사선 감수성 증강 물질을 사용한다. X선-활성화 방사선 감수성 증강 물질의 예로서는 다음과 같은 것을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다: 메트로니다졸, 미소니다졸, 데스메틸미소니다졸, 피모니다졸, 에타니다졸, 니모라졸, 미토마이신 C, RSU 1069, SR 4233, EO9, RB6145, 니코틴아미드, 5-브로모데옥시우리딘(BUdR), 5-요도데옥시우리딘(IUdR), 브로모데옥시시티딘, 플루오로데옥시우리딘(FUdR), 히드록시우레아, 시스-플라틴 및 이들의 치료적으로 유효한 유사체 및 유도체.

암의 광역학적 치료법(PDT: photodynamic therapy)에서는 감수성 증강 물질의 방사선 활성화제로서 가시 광선을 사용한다. 광역학적 방사선 감수성 증강 물질의 예로서는 다음과 같은 것들을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다: 헤마토포르피린 유도체, PHOTOFRIN®, 벤조포르피린 유도체, NPe6, 주석 에티오포르피린(SnET2), 포에보르비드-a, 박테리오클로로필-a, 나프탈로시아닌, 프탈로시아닌, 아연 프탈로시아닌, 및 이들의 치료학적으로 유효한 유사체 및 유도체.

방사선 감수성 증강 물질은 Chk1 억제제 이외에도 치료적 유효량의 하나 이상의 화합물과 함께 투여될 수 있으며, 상기 화합물로서는 예를 들어, 표적 세포로의 방사선 감수성 증강 물질의 통합을 촉진하는 화합물, 치료제, 영양분 및/또는 산소의 표적 세포로의 흐름을 제어하는 화합물, 부가 방사선과 함께 또는 단독으로 작용하는 화학 요법 제제, 또는 기타 치료학적으로 유효한 암 또는 기타 질병 치료용 화합물이 있다. 방사선 감수성 증강 물질과 함께 사용될 수 있는 부가 치료제의 예로서는 5-플루오로우라실(5-FU), 류코보린, 산소, 카보겐, 적혈구 수혈, 과불화탄소(예를 들어, FLUOSOLW®-DA), 2,3-DPG, BW12C, 칼슘 채널 차단제, 펜톡시필린, 항혈관형성 화합물, 히드라진 및 L-BSO를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

사용될 수 있는 화학 요법 제제로서는 알킬화제, 대사 길항 물질, 호르몬 및 이의 길항 물질, 방사성 동위 원소, 항체, 그리고 천연 생성물, 및 이들의 조합을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 예를 들어, 본 발명의 억제 화합물은 항생제 예를 들어, 독소루비신 및 기타 안트라사이클린 유사체, 질소 머스타드 예를 들어, 사이클로포스파미드, 피리딘 유사체 예를 들어, 5-플루오로우라실, 시스-플라 틴, 히드록시우레아, 탁솔 및 이의 천연 및 합성 유도체 등과 함께 투여될 수 있다. 혼합 종양(mixed timor) 예를 들어, 유방의 선암종의 경우(즉, 종양이 고나도트로핀-의존성 및 고나도트로핀-독립성 세포를 포함하는 경우), 본 발명의 화합물은 루프롤리드 또는 고세렐린(LH-RH의 합성 펩티드 유사체)와 함께 투여될 수 있다. 기타 신생물 억제프로토콜은 기타 치료 양상 예를 들어, 수술 또는 방사선 조사와 억제 화합물을 사용하는 것을 포함한다[본원에서는 "부가 항-신생 양상(adjunct anti-neoplastic modalities)"이라 칭함]. 본 발명에 유용한 부가의 화학 요법 제제로서는 호르몬 및 이의 길항 물질, 방사성 동위 원소, 항체, 천연 생성물 및 이들의 혼합물을 포함한다. 본 발명의 방법에 유용한 화학 요법 제제의 예로서는 이하 표에 나열된 것들이 있다.

알킬화제	질소 머스타드		메클로레타민
사이클로포스파미드	이포스파미드		멜파란
클로람부실	니트로소우레아		카머스틴(BCNU)
로머스틴(CCNU)	세머스틴(메틸-CCNU)		에틸렌이민/메틸렌아민
트리에틸렌멜라민(TEM)	트리에틸렌 트리포스포라미드		(티오테파)
헥사메틸멜라민	(HMM, 알트레타민)		알킬 설포네이트
부설판	트리아진		다카바진(DTIC)
대사길항물질	폴산 유사체		메토트렉세이트
트리메트렉세이트	피리미딘 유사체		5-플루오로우라실
플루오로데옥시우리딘	젬시타빈		시토신 아라비노시드
(AraC, 시타라빈)	5-아자시티딘		2,2'-디플루오로데옥시시티딘
퓨린 유사체	6-머캅토퓨린		6-티오구아닌
아자티오프린	2'-데옥시코포마이신		(펜토스타틴)
에리트로히드록시노닐아데닌 (EHNA)	플루다라빈 포스페이트		2-클로로데옥시아데노신
(클라드리빈, 2-CdA)	다중 표적화 안티폴레이트		I형 토포이소머라제 억제제
캠프토테신	토포테칸		이리노테칸
천연 생성물	세포 분열 저해 약물		파클리탁셀
빈카 알칼로이드	빈블라스틴(VLB)		빈크리스틴
비노렐빈	탁소테어(도세탁셀)		에스트라머스틴
에스트라머스틴 포스페이트 에피포도필로톡신	에토포시드		테니포시드
항생제	악티노마이신 D		도노마이신(루비도마이신)
독소루비신(아드리아마이신)	미톡산트로네이다 루비신		블레오마이신스플리카마이신 (미트라마이신)

미토마이신 C	닥티노마이신		효소
L-아스파라기나제	생물 반응 개선제		인터페론-알파
IL-2	G-CSF		GM-CSF
분화 제제	레티논산 유도체		방사선 감수성 증강 물질
메트로니다졸	미소니다졸		데스메틸미소니다졸
피모니다졸	에타니다졸		니모라졸
RSU 1069	EO 9		RB 6145
SR 4233	니코틴아미드		5-브로모데오지우리딘
5-요도데옥시우리딘	브로모데옥시시티딘		기타 제제
백금 배위 착물	시스-플라틴		카보플라틴
옥살리플라틴	안트라센디온		미토잔트론
치환 우레아	히드록시우레아		메틸히드라진 유도체
N-메틸히드라진(M1H)	프로카바진		아드레노코르티칼 억제제
미토탄(o,p'-DDD)	엔지오글루테티미드		시토킨
인터페론(α,β,γ)	인터루킨-2 호르몬 및 길항제		아드레노코르티코스테로이드/ 길항제
프레드니손 및 균등물	덱사메타손		아이노글루테티미드
프로게스틴	히드록시프로게스테론 카프로에이트		메드록시프로게스테론 아세테이트
메게스트롤 아세테이트	에스트로겐		디에틸스틸베스트롤
에티닐 에스트라디올/ 균등물	안티에스트로겐		타목시펜
안드로겐	테스토스테론 프로피오네이트		플루옥시메스테론/균등물
안티안드로겐	플루타미드		고나도트로핀-방출
호르몬 유사체	루프롤리드		비스테로이드성 안티안드로겐
플루타미드	광 감수성 증강 물질		헤마토포르피린 유도체
포토프린	벤조포르피린 유도체		Npe6
주석 에티오포르피린(SnET2)	페오보라이드-a		박테리오클로로필-a
나프탈로시아닌	프탈로시아닌		아연 프탈로시아닌
성장 인자 수용체 길항 물질	EGFR 길항 물질		HER-2 길항 물질

방사선 감수성 증강 물질과 함께 사용할 경우 특히 유용한 화학 요법 제제의 예로서는 예를 들어, 캠프토테신, 카보플라틴, 시스-플라틴, 도노루비신, 독소루비신, 인터페론(알파, 베타, 감마), 이리노테칸, 히드록시우레아, 클로람부실, 5-플루오로우라실(5-FU), 메토트렉세이트, 2-클로로아데노신, 플루다라빈, 아자시티딘, 젬시타빈, 페메트렉시드, 인터루킨 2, 이리노테칸, 도세탁셀, 파클리탁셀, 토포테칸 및 이들의 치료학적으로 유효한 유사체 및 유도체를 포함한다.

본 발명에 의하면, 본 발명의 화합물은 젬시타빈과 함께, 또는 이 젬시타빈및 파클리탁셀과 함께 투여될 때 유용하다. 본 발명의 화합물은 또한 페메트렉시드와 함께, 또는 이 페메트렉시드 및 시스 플라틴, 카보플라틴 또는 기타 플라틴과 함께 투여될 때 유용하다. 본 발명의 Chk1 억제제는 또한 젬시타빈과 페메트렉시드와 함께 투여될 수도 있다.

젬시타빈과 함께 투여된 본 발명의 Chk1 억제제는 예를 들어, 췌장암, 자궁 평활근 육종, 골 육종, 전이성 비 소세포 폐암, 하지 구간 연조직 육종, 신장 세포 암, 선암종 및 호지킨병의 치료에 유용할 수 있다. 본 발명의 Chk1 억제제를 페메트렉시드와 함께 투여하면 중피종의 치료에 유용할 수 있다.

당 업계의 숙련자에 의하여 파악된 바와 같이, 치료법에 관한 본원의 참고 문헌은 확립된 질병 또는 증상의 예방법 및 치료법까지 그 범위를 확장할 수 있다. 치료법에 관한 참고 문헌은 또한 치료받은 징후의 증식 속도를 늦추거나 또는 이 징후의 재발률을 감소시키는 것에 관한 것이다. 치료에 사용되어야 하는 본 발명의 화합물의 양은 치료받을 증상의 특성과 환자의 연령 및 증상에 따라서 달라진다는 사실을 알 수 있으며, 이는 최종적으로 참관의 또는 수의사에 의하여 결정된다.

그러나, 일반적으로 성인에 투여되는 투여량은 통상적으로 하루에 0.001 ∼ 약 100 ㎎/㎏이다. 바람직한 투여량은 단일 투여 방식, 또는 복수 투여 방식[적당한 간격, 예를 들어, 하루에 2회, 3회, 4회 또는 그 이상의 횟수로 투여]으로 편리하게 투여될 수 있다. 실제로, 의사는 환자 개개인에 가장 적당한 투여 방식을 결정하며, 이때의 투여량은 연령, 체중 및 특정 환자의 반응에 따라서 달라진다. 상 기 투여량은 보통의 경우를 예로 든 것에 불과하며, 경우에 따라서 더 많은 투여량, 또는 더 적은 투여량이 유리할 경우도 있으며, 이러한 사실은 본 발명의 범위 내에 포함된다.

세포 군집과 본 발명의 Chk1 억제제는 세포 주기 체크포인트가 실질적으로 방해되는데 충분한 투여량 및 시간에 접촉될 수 있다. 통상적으로, 이러한 투여 시간은 여러 가지 인자에 따라서 약 72 ∼ 약 96 시간 이하일 수 있으나, 반드시 그러한 것은 아니다. 몇몇 구체예에서, 대략 수 주일 이하 또는 그 이상의 기간(참관의 또는 기술자에 의해 결정)에 걸쳐서 Chk1 억제제를 투여하는 것이 바람직하며 또한 그렇게 할 필요가 있다. 그러므로, 본 발명의 Chk1 억제제는 통상적으로 약 1 시간 이하, 약 2 시간 이하, 약 3 시간 이하, 약 4 시간 이하, 약 6 시간 이하, 약 12 시간 이하, 약 18 시간 이하, 약 24 시간 이하, 약 48 시간 이하, 또는 약 72 시간 이하 동안 투여될 수 있다. 당 업계의 숙련자는 본원에 예시된 시간 범위는 단지 예시적인 것이며, 이와 같이 예시된 시간 범위 및 이에 속하는 범위 내외도 본 발명의 범위에 포함된다는 사실을 이해하고 있다.

본 발명의 Chk1 억제제는 복수 회 투여하는 방식으로 투여될 수 있다. 예를 들어, Chk1 억제제는 다음과 같은 횟수로 투여될 수 있다: 4일 간격으로, 하루에 1회 투여하여 총 4회 투여(q4d × 4); 3일 간격으로, 하루에 1회 투여하여 총 4회 투여(q3d × 4); 5일 간격으로, 하루에 1회 투여(qd × 5); 3주 동안, 1주일에 1회 투여(qwk3); 5일 동안 매일 투여 → 2일간 투여 중지 → 5일 동안 매일 투여(5/2/5); 또는 경우에 따라서 적당한 것으로 판단되는 임의의 투여 방식.

실시예 1

Chk1 억제제의 IC ₅₀ 값 측정

이미 기술된 국제 출원 공보 WO 99/11795(1998년 9월 4일자 발행)에 개시된 바와 같이, 사람 Chk1 cDNA를 동정하여 클로닝하였다. FLAG® 태그를 전장 Chk1의 아미노 말단을 보유하는 틀 내에 삽입하였다. 상기 5' 프라이머는 EcoRI 위치, 코작 서열을 함유하며, 또한 M2 항체(Sigma, Saint Louis, IL)를 사용하는 친화도 정제용인 FLAG® 태그를 암호화하기도 한다. 상기 3' 프라이머는 SalI 위치를 함유한다. PCR-증폭 단편을 EcoRI-SalI 단편(Invitrogen, Carlsbad, CA)처럼 pCI-Neo에 클로닝한 다음, EcoRI-NotI 단편은 pFastBacI(Gibco-BRL, Bethesda, MD)에 서브 클로닝하였다. Gibco-BRL Bac-to-Bac 매뉴얼에 기술된 바와 같이 재조합 바큘로바이러스를 제조하여, 이를 CCM3 배지(HyClone Laboratories, Logan, UT) 내에서 생장한 Sf-9 세포를 감염시키는데에 사용하여, FLAG®-태깅된 Chkl 단백질을 발현시켰다.

바큘로바이러스-감염된 SF9 세포의 동결 펠렛으로부터 FLAG®-태깅된 Chk1을 정제하였다. 동결 세포 펠렛을 동 부피의 2 X 용해 완충액[100 mM Tris-HCl pH 7.5, 200 mM NaCl, 50 mM B-글리세로포스페이트, 25 mM NaF, 4 mM MgCl₂, 0.5 mM EGTA, 0.2% TWEEN®-20, 2 mM 바나듐산나트륨, 2 mM DTT 및 단백질 억제제 혼합물(Complete mini, Boehringer Mannheim 2000 catalog #1836170) 함유]과 혼합하였 다. 이후, 세포를 다운스 균질화기로부터 분리되어 있는(loose) 막자를 사용하여 20회 다운싱(douncing)시킨 후, 48,400 × g에서 1 시간 동안 원심분리시켰다. M2 친화도 컬럼을 10 컬럼 부피 만큼의 50 mM의 글리신(pH 3.5) → 20 mM Tris(pH 7.5) 및 150 mM NaCl로 3회 번갈아가며(Tris NaCl로 종료) 예비 세척하였다. 이후 상기 컬럼을 25 컬럼 부피의 20 mM Tris(pH 7.5), 150 mM NaCl, 0.1% TWEEN®-20, 1 mM EGTA, 1 mM EDTA 및 1 X 완전 미니 프로테아제 정제(complete mini protease tablet)로 세척하였다. 이후, 투명해 진 용해물을 4℃의 수조 내에서 4 시간 동안 방치하여 M2 친화도 수지에 결합시켰다. 그 다음, 상기 수지 및 용해물의 혼합물을 컬럼에 붓고 컬럼으로 흘려보내어 수집하였다. 이 수지를 10 컬럼 부피의 20 mM Tris(pH 7.5), 150 mM NaCl 및 3 mM N-옥틸 글루코시드로 세척하였다. 이후, FLAG®-태깅된 Chk1을 6 컬럼 부피의 냉각 20 mM Tris(pH 7.5), 150 mM NaCl, 3 mM N-옥틸 글루코시드(0.5 mg/㎖ FLAG® 펩티드(Sigma, 2000 Catalog # F-3290) 함유)를 사용하여 컬럼으로부터 용리시켰다. 3개의 분급물을 수집하여 FLAG-태깅된 Chk1이 존재하는지 여부에 대하여 분석하였다.

단백질 키나제를 100 ng 정제 FLAG®-Chkl(150 pmol ATP/분), 20 ㎛ Cdc25C 펩티드(H-leu-tyr-arg-ser-pro-ser-met-pro-glu-asn-leu-asn-arg-arg-arg-arg-OH)(서열 1), 4 ㎛ ATP, 2 μCi[³²P]γ-ATP, 20 mM Hepes(pH 7.2), 5 mM MgCl₂, 0.1% NP40 및 1 mM DTT를 포함하는, Chk1 키나제 활성 분석에 사용하였다. 본 분석법은 본 발명의 화합물의 IC₅₀을 측정하는데 이용되었다. ATP-함유 반응 혼합물을 첨가하여 반응을 개시하고 실온에서 10 분 동안 반응을 계속 진행시켰다. 여기에 인산(최종 농도 150 mM)을 첨가하여 상기 반응을 종결시키고, 이를 포스포셀룰로즈 디스크에 옮겼다. 이 포스포셀룰로즈 디스크를 150 mM 인산으로 5회 세척한 다음, 공기 건조시켰다. 섬광 유체를 가하고 디스크를 월랙 섬광 계측기(Wallac scintillation counter)에서 계수하였다. 상기 분석법을 수행한 본 발명의 Chk1 억제제의 IC₅₀ 값은 약 8∼약 500 nM이었다.

실시예 2

선택성

하나 이상의 기타 단백질 키나제 즉, DNA-PK, Cdc2, 카세인 키나제 I(CKI), Chk2, p38 MAP 키나제, ERK 키나제, 단백질 키나제 A(PKA), 및/또는 칼슘-칼모듈린단백질 키나제 II(CaM KII)에 대한 선택성에 대하여 본 발명의 Chk1 억제제를 시험하였다. Chk2를 제외하고 상기 키나제 모두에 대한 분석 과정은 문헌 예를 들어, 미국 특허 공보 제 2002-016521 A1 및 미국 특허 출원 제 08/184,605 호(1994년 1월 21일 출원)[상기 참고 문헌 모두는 본원에 참고 인용되어 있음]에 이미 개시되어 있다.

Chk2에 대한 화합물의 활성은 다음과 같이 분석된다: 128 ng의 정제 His-태깅 Chk2를 4 mM ATP, 1 mCi [³²P]γ-ATP, 20 mM Hepes pH 7.5, 5 mM MgCl₂ 및 0.25% NP₄0의 존재하에 실온에서 20분 동안 100 mM 이하의 Chkl 억제제와 함께 항온 처리하였다. 최종 농도 150 mM의 인산으로 반응을 종결시키고, 반응 혼합물의 5/8을 포 스포셀룰로즈 디스크로 옮겼다. 이 디스크를 150 mM의 인산으로 5회 세척하고, 공기 건조시켰다. 섬광제를 가한 후 월랙 베타 계측기로 방사능을 측정하였다.

p38 MAP 키나제, ERK 키나제, PKA, CaM KII 및 Cdc2를 뉴 잉글랜드 바이오랩(New England Biolabs)으로부터 구입하여, 제조자의 지침에 따라서 4∼50 μM ATP 및 시험용 Chkl 억제제(농도 = 100 μM)를 사용하여 분석을 수행하였다. 기타 효소에 비하여 시험된 모든 억제제의 Chk1에 대한 선택성은 100배 이상 컸다.

실시예 3

본 발명의 Chk1 억제제는 세포 내에서 Chk1 기능을 저해한다.

본 발명의 Chk1 억제제가 세포 내에서 Chk1 기능을 저해한다는 사실을 입증하기 위하여, 억제제를 분자 세포계 분석법에서 시험할 수 있었다. 포유 동물 Chk1은 시험관 내에서 Cdc25C를 인산화시키는 것으로 파악되는데, 이는 상기 포유 동물 Chk1이 DNA 손상에 반응하여 사이클린 B/cdc2를 소극적으로 조절하며, Chk1 억제제가 사이클린 B/cdc2의 활성을 강화하는 능력을 분석할 수 있다는 사실을 시사하는 것이다. 그에 관한 실험은 다음과 같이 디자인될 수 있다: HeLa 세포에 800 rad의 방사선을 조사하고 37℃에서 7 시간 동안 항온 처리하였다. 상기 세포는 기능적으로 p53을 저해하므로, 이 세포는 주로 G2기에 머무르게 된다. 이후, 노코다졸을 0.5 ㎍/㎖의 농도로 첨가하고, 이 세포를 37℃에서 15 시간 동안 항온 처리하였다. 노코다졸을 첨가하면 임의의 세포들이 G2 정지 기를 거쳐 M기로 진행하도록 만든다. 마지막으로, Chk1 억제제를 8 시간 동안 첨가하고, 세포를 수집한 다음, 용해시켜, 제조자에 의해 제안된 바대로, 동량의 단백질을 사이클린 B1(New England Biolabs)에 대한 항체를 사용하여 면역 침전시켰다. 이후, 히스톤 H1 키나제 활성을 분석하여 IP를 사이클린 B-관련 cdc2 키나제 활성에 대하여 분석하였다(Yu et al., J Biol Chem., Dec. 11, 1998; 273 (50) :33455-64).

뿐만 아니라, 본 발명의 Chk1 억제제가 IR-유도성 G2 DNA 손상 체크포인트를 방해하는 능력은 유사 분열 지수 분석 실험을 통하여 확인할 수 있다. HeLa 세포(약 1 x 1O⁶)를 상기와 같이 처리하였다. 원심분리로 세포를 수집하고, PBS로 1회 세척한 다음, 75 mM KCl 2.5 ㎖중에 재현탁시켜, 다시 원심 분리하였다. 이후 상기 세포를 새로 제조한 냉각 아세트산:메탄올(1:3) 3 ㎖ 중에서 고정시키고, 이를 20분 동안 얼음 상에서 항온 처리하였다. 세포를 펠렛화시키고, 고정 용액을 흡인기로 빨아낸 다음, PBS 0.5 ㎖ 중에 재현탁하였다. 고정 세포 100 ㎕를 현미경 유리 슬라이드 상에 피펫팅하고, 시료를 1 ㎖의 고정 용액과 함께 그 위에 떨어뜨려서, 유사 분열 스프레드(mitotic spreads)를 준비하였다. 이후, 슬라이드를 공기 건조시키고, 라이트 염색약(Sigma)으로 1 분 동안 염색한 다음, 물로 1회 그리고 50% 메탄올로 또 1회 세척하였다. 염색체가 응축되고 핵 외피가 없어진 것으로 보아 세포가 유사 분열을 일으켰음을 알 수 있었다.

실시예 4

본 발명의 Chk1 억제제는 암 치료에 의한 세포의 사멸률을 증가시킨다.

본 발명의 화합물에 의해 Chk1이 억제됨으로 인하여 표적화 세포가 DNA 손상 제제의 사멸 효과를 감작한다는 사실을 증명하기 위하여, 세포를 본 발명의 Chk1 억제제의 존재하에 항온 처리함과 동시에, 방사선 또는 DNA 손상 화학 제제에 노출시켰다. 96웰 미세 역가 평판 내 웰 당 1000 ∼ 2000개의 밀도로 세포를 도말하고, 이 세포를 37℃의 가습 항온 처리기(5% CO₂) 내 10% FBS, 100 U/㎖ 페니실린 및 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신 함유 RMPI 1640 중에서 18 시간 동안 성장시켰다. 시험된 세포는 임의의 목적 세포 또는 세포주 예를 들어, HeLa, ACHN, 786-0, HCT116, SW620, HT29, Colo205, SK-MEL-5, SK-MEL-28, A549, H322, OVCAR-3, SK-OV-3, MDA-MB-231, MCF-7, PC- 3, HL-60, K562 및 M0LT4를 포함할 수 있다. 모든 세포주의 명칭은 다음과 같은 사람 세포주에 대한 것이다:

HeLa	자궁 경부 선암종
ACHN	신장 선암종
786-0	신장 선암종
HCT116	결장 암종
SW620	결장 암종, 림프절 전이
HT29	대장 선암종
Colo205	결장 선암종
SK-MEL-5	흑색종
SK-MEL-28	악성 흑색종
A549	폐 암종
H322	기관세지폐포 암종
OVCAR-3	난소 선암종
SK-OV-3	난소 선암종
MDA-MB-231	유방 선암종
MCF-7	유방 선암종
PC-3	전립성 선암종(뼈로의 전이)
HL-60	급성 전골수성 백혈병
K562	만성 골수성 백혈병
M0LT4	급성 림프성 백혈병; T 임파 아구 세포

세포를 화학 요법 약물만을 함유하거나 또는 화학 요법 약물과 Chk1 억제제를 함유하는 배지로 처리하였다. 세포를 약 5일 동안 항온 처리한 다음, 3H-티미딘 흡수 수준을 측정하여 세포 성장률을 측정하였다. 화학 요법 약물로서는, 에토포시 드, 독소루비신, 시스-플라틴, 클로람부실, 5-플루오로우라실(5-FU)를 포함한다. 세포 성장을 미 처리 대조구 세포의 90%까지 억제하는데 필요한 약물의 농도를 GI₉₀이라 정의한다.

본 발명의 화합물을 부가의 대사 길항 물질 예를 들어, 메토트렉세이트, 히드록시우레아, 2-클로로아데노신, 플루다라빈, 아자시티딘 및 젬시티빈과 함께 시험하여, 상기 화합물이 상기 제제들의 세포 사멸 능력을 증가시킬 수 있는지 평가하였다. 본 발명의 화합물을 젬시티빈과 함께 사용하였을 때 HT29 결장 직장 암종의 사멸 능력이 증가하였는지 여부를 평가함으로써 상호 비교될 수 있다.

뿐만 아니라, 본 발명의 Chk1 억제제가 방사선에 의한 사멸율을 상승시키는지 여부를 시험할 수 있다.

실시예 5

동물 종양 모델

본 발명의 Chk1 억제제가 마우스 내에서 DNA 손상 제제에 의한 종양의 사멸능을 강화시킬 수 있는 능력에 대하여 시험하기 위해서, 결장 종양 세포주를 사용하여 이종 이식 종양 모델을 확립하였다. 5-플루오로우라실(5-FU) 또는 젬시타빈이DNA 손상 제제로 사용될 수 있다. HT29 및 Colo205(사람 결장 암종) 및 H460 및Calu-6(비 소세포 암종) 세포를 사용하여 6∼8주령 암컷 흉선 Balb/c(nu/nu) 마우스 내에서 이종 이식 종양을 증식시켰다. 무 발열원 조건하에서 층상 공기 유동 캐비넷 내에 마우스를 넣고, 멸균된 먹이 및 물을 임의로 공급하였다. 세포주를 5% CO₂ 가습 환경에서, 10% FBS, 100 U/㎖ 페니실린, 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신 및 1.5 mM L-글루타민이 보강된 RPMI 1640 배지 내에서 종속 합류(subconfluence) 상태가 될 때까지 성장시켰다. CMF-PBS 내에 단일 세포 현탁액을 준비하고, 세포 농도를 1 ×10⁸ 세포/㎖로 맞추었다. 마우스의 오른쪽 옆구리 또는 오른쪽 다리에 총 1 ×10⁷ 개(100 ㎕)의 세포를 피하 주사(s.c.)하였다.

마우스를 4개의 치료 군으로 랜덤하게 나누어(5∼15 마리/군), 종양 부피가 75∼100 ㎤(일반적으로 접종 후 7∼11일 경과)가 될 때까지 마우스를 사용하였다. 버니어 캘리퍼스로 종양의 크기를 측정하고, 실험상 유도된 식에 따라서 종양 부피를 측정하였다: 종양 부피(㎤) = 종양 길이(㎝) x 종양 폭(㎝) x 종양 높이(㎝)/3.3. 치료법은 i) 160 ㎎/㎏의 젬시타빈 100 ㎕를 복강내(i.p) 주사하는 것을 포함한다. 젬시타빈 처리된 마우스 내에서는 종양 성장이 지연되는 것이 관찰되었다. 마우스에 160 ㎎/㎏의 젬시타빈을 투여함과 동시에 Chk1 억제제를 경구 투여하면, 종양 부피를 줄여 개체의 생명을 연장시킬 것으로 기대된다. 종양 크기는 실험기간 동안 하루 걸러서 모니터하였다.

분명한 점은, 상기 제시된 비와 같이 본 발명에는 발명의 사상과 범위를 벗어나지 않고 다수의 변형 및 변화가 가하여 질 수 있다는 사실이다. 그러므로, 함축된 발명의 제한 범위는 오로지 첨부된 청구항에 의하여 한정되는 것이다.

SEQUENCE LISTING <110> Icos Corporation <120> Compounds Useful for Inhibiting CHK1 <130> 27866/39987A <140> To be Assigned <141> 2005-06-24 <150> US 60/583,080 <151> 2004-06-24 <160> 1 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 16 <212> PRT <213> artificial <220> <223> synthetic peptide <400> 1 Leu Tyr Arg Ser Pro Ser Met Pro Glu Asn Leu Asn Arg Arg Arg Arg 1 5 10 15

Claims (32)

1. 하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 프로드러그 또는 용매화물:

   [화학식 I]

   

   상기 식 중,

   X¹은 존재하지 않거나, -O-, -S-, -CH₂- 또는 -N(R¹)-이고;

   X²는 -O-, -S- 또는 -N(R¹)-이며;

   Y는 O 또는 S이거나; 또는 =Y는 공통 탄소 원자에 결합되어 있는 2개의 수소 원자를 나타내며;

   W는 헤테로아릴, 아릴, 헤테로시클로알킬, 시클로알킬, 및 헤테로아릴 또는 아릴 기로 치환되는 C_{1 ∼ 6}알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 상기 아릴기인 W는 R²로 표시되는 1∼4개의 치환기로 임의 치환되고, 상기 헤테로아릴기인 W는 R⁵로 표시되는 1∼4개의 치환기로 임의 치환되며, 상기 헤테로시클로알킬 및 시클로 알킬 기인 W는 1개 또는 2개의 C_{1 ∼ 6}알킬 치환기로 임의 치환되며;

   R¹은 하이드로, C_{1 ∼ 6}알킬, C_{2 ∼ 6}알케닐, C_{2 ∼ 6}알키닐 및 아릴로 이루어진 군으로부터 선택되며;

   R²는 헤테로아릴, 할로, 임의 치환되는 C_{1 ∼ 6}알킬, C_{2 ∼ 6}알케닐, OCF₃, NO₂, CN, NC, N(R³)₂, OR³, CO₂R³, C(O)N(R³)₂, C(O)R³, N(R¹)COR³, N(R¹)C(O)OR³, N(R¹)-C(0)C_{1∼ 6}알킬렌C(0)R³, N(R¹)C(0)C_{1 ∼ 6}알킬렌C(0)OR³, N(R¹)C(0)C_{1 ∼ 6}알킬렌OR³, N(R¹)C(O)C_{1 ∼ 6}알킬렌NHC-(O)OR³, N(R¹)C(O)C_{1 ∼ 6}알킬렌SO₂NR³, C_{1 ∼ 6}알킬렌OR³ 및 SR³로 이루어진 군으로부터 선택되고;

   R³는 하이드로, C_{1 ∼ 6}알킬, C_{2 ∼ 6}알케닐, 시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, SO₂R⁴, 할로, 및 할로, 히드록시, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로시클로알킬, N(R⁴)₂ 및 SO₂R⁴ 중 하나 이상으로 치환되는 C_{1 ∼ 6}알킬, C_{1 ∼ 6}알킬렌아릴, C_{1 ∼ 6}알킬렌헤테로아릴, C_{1 ∼ 6}알킬렌C_{3∼ 8}헤테로시클로알킬, C_{1 ∼ 6}알킬렌SO₂아릴, 임의 치환되는 C_{1 ∼ 6}알킬렌N(R⁴)₂, OCF₃, C_{1∼ 6}알킬렌N(R⁴)₃ ⁺, C_{3 ∼ 8}헤테로시클로알킬 및 CH(C_{1 ∼ 6}알킬렌N(R⁴)₂)₂로 이루어진 군으 로부터 선택되거나, 또는 2개의 R³기는 함께 임의 치환되는 3∼8원 지방족 고리를 형성하고;

   R⁴는 존재하지 않거나 또는 하이드로, C_{1 ∼ 6}알킬, 시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, C_{1 ∼ 6}알킬렌아릴 및 SO₂C_{1 ∼ 6}알킬로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 2개의 R⁴기는 함께 임의 치환되는 3∼8원 고리를 형성하고;

   R⁵는 C_{1 ∼ 6}알킬, C_{2 ∼ 6}알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로시클로알킬, N(R³)₂, N(R¹)C(O)R³, N(R¹)CO₂R³, OR³, 할로, N₃, CN, C_{1 ∼ 6}알킬렌아릴, C_{1 ∼ 6}알킬렌N(R³)₂, C(O)R³, C(O)OR³, C(O)N(R³)₂, CF₃ 및

   

   으로 이루어진 군으로부터 선택되며;

   R⁶은 하이드로, C_{1 ∼ 6}알킬, C_{2 ∼ 6}알케닐, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, SO₂R⁴, 및 할로, 히드록시, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로시클로알킬, N(R⁴)₂ 및 SO₂R⁴ 중 하나 이상으로 치환되는 C_{1 ∼ 6}알킬, C_{1 ∼ 6}알킬렌아릴, C_{1 ∼ 6}알킬렌헤테로아릴, C_{1 ∼ 6}알킬렌C_{3 ∼ 8}헤테로시클로알킬, C_{1 ∼ 6}알킬렌SO₂아릴, 임의 치환되는 C_{1 ∼ 6} 알킬렌N(R⁴)₂, OCF₃, C_{1 ∼ 6}알킬렌-N(R⁴)₃ ⁺, C_{3 ∼ 8}헤테로시클로알킬 및 CH(C_{1 ∼ 6}알킬렌-N(R⁴)₂)₂로 이루어진 군으로부터 선택되고;

   R⁷ 및 R⁸은 하이드로, OR³, C_{1 ∼ 6}알킬, 할로, N(R³)₂, C(O)N(R³)₂, C_{1 ∼ 3}알킬렌아릴, CN, NO₂, C(O)OR¹¹, C(O)R¹¹ 및 SR¹¹로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되며;

   R⁹는 -C≡C-R¹⁰ 또는 -CF₃이거나, 또는 R⁸ 및 R⁹ 기는 이들이 결합되어 있는 탄소와 함께 임의로 O, NR⁴ 및 S으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1∼3개의 이종 원자를 함유하는 5원 또는 6원 탄소환 지방족 또는 방향족 고리계를 형성하고;

   R¹⁰은 하이드로, C_{1 ∼ 6}알킬, 아릴, C_{1 ∼ 6}알킬렌아릴, 헤테로아릴 및 C_{1 ∼ 6}알킬렌헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되며;

   R¹¹은 하이드로, C_{1 ∼ 6}알킬, C_{2 ∼ 6}알케닐, 아릴, C_{1 ∼ 3}알킬렌아릴, C_{3 ∼ 8}시클로알킬 및 C_{1 ∼ 3}알킬렌C_{3 ∼ 8}시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;

   n은 1 또는 2이다.
2. 제1항에 있어서,

   X¹ 및 X²는 -N(H)-이고;

   Y는 O 또는 S이며;

   W는 N, O 및 S으로 이루어진 군으로부터 선택되는 2 이상의 이종 원자를 함유하는 임의 치환 헤테로아릴

   인 것인 화합물.
3. 제2항에 있어서, R⁶은 임의 치환되는 C_{1 ∼ 6}알킬렌N(R⁴)₂, C_{1 ∼ 6}알킬렌헤테로아릴, C_{1 ∼ 6}알킬렌헤테로시클로알킬 및 C_{3 ∼ 8}헤테로시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물.
4. 제3항에 있어서, 상기 R⁶은 -CH₂CH₃, -(CH₂)_1∼6N(CH₃)₂, -(CH₂)_1∼6NH(CH₃),

   

   

   

   

   

   

   로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물.
5. 제2항에 있어서, 상기 W는 임의 치환되는 C_{1 ∼ 6}알킬, C_{2 ∼ 6}알키닐, 아릴, 헤테로아릴, N(R³)₂, C(O)N(R³)₂, CO(OR³), OR³, CF₃, CN 및 할로로 이루어진 군으로부터 선택되는 1∼4개의 치환기로 임의 치환되는, 피리다지닐, 피리미디닐, 피라지닐 및 트리아지닐로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물.
6. 제2항에 있어서, 상기 W는

   

   

   로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물.
7. 제2항에 있어서, 상기 W는

   

   로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물.
8. 제2항에 있어서, 상기 W는 피라지닐인 것인 화합물.
9. 제8항에 있어서, 상기 W는 5번 위치에서 R⁵ 치환기로 치환되는 피라지노-2-일인 것인 화합물.
10. 제9항에 있어서, 상기 R⁵는 CF₃ 및 CH₃로 이루어진 군으로부터 선택되거나 또는 존재하지 않는 것인 화합물.
11. 제1항에 있어서, 상기 R⁷ 및 R⁸은 하이드로인 것인 화합물.
12. 제1항에 있어서, 상기 R⁹는 -C≡CH 또는 -CF₃인 것인 화합물.
13. 제1항에 있어서, 상기 R⁸ 및 R⁹는 이들이 결합되어 있는 탄소 원자와 함께

    

    를 형성하는 것인 화합물.
14. 제3항에 있어서, 상기 R⁶은 -(CH₂)₂N(CH₃)₂,

    

    

    로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물.
15. 제1항의 화합물 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물.
16. 1-[5-에티닐-2-(1-메틸-피페리딘-3-일메톡시)-페닐]-3-(5-메틸-피라진-2-일)-우레아;

    1-[2-(2-디메틸아미노-에톡시)-5-에티닐-페닐]-3-(5-메틸-피라진-2-일)-우레아;

    1-[5-에티닐-2-(피리딘-3-일메톡시)-페닐]-3-(5-메틸-피라진-2-일)-우레아;

    1-[3-(1-메틸-피페리딘-3-일메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로-나프탈렌-2-일]-3-(5-메틸-피라진-2-일)-우레아;

    1-[3-(1-메틸-피페리딘-2-일메톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로-나프탈렌-2-일]-3-(5-메틸-피라진-2-일)-우레아;

    (S)-1-(5-메틸-피라진-2-일)-3-[2-(피페리딘-3-일메톡시)-5-트리플루오로메틸-페닐]-우레아;

    (R)-1-(5-메틸-피라진-2-일)-3-[2-(피페리딘-3-일메톡시)-5-트리플루오로메틸-페닐]-우레아;

    1-[2-(1-메틸-피페리딘-4-일옥시)-5-트리플루오로메틸-페닐]-3-(5-메틸-피라진-2-일)-우레아;

    1-(5-메틸-피라진-2-일)-3-[2-(피페리딘-3-일메톡시)-5-트리플루오로메틸-페닐]-우레아;

    1-[2-(1-메틸-피페리딘-3-일메톡시)-5-트리플루오로메틸-페닐]-3-(5-메틸-피라진-2-일)-우레아;

    1-(5-메틸-피라진-2-일)-3-[7-(피리딘-3-일메톡시)-2,3-디하이드로-벤조[1,4]디옥신-6-일]-우레아;

    1-[7-(2-디메틸아미노-에톡시)-2,3-디하이드로-벤조-[1,4]디옥신-6-일]-3-(5-메틸-피라진-2-일)-우레아; 및

    1-[3-(2-디메틸아미노-에톡시)-5,6,7,8-테트라하이드로-나프탈렌-2-일]-3-(5-메틸-피라진-2-일)-우레아

    로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물.
17. 세포 내에서 체크포인트 키나제 1(checkpoint kinase 1)을 억제하는 방법으로서, 치료적 유효량의 제1항의 화합물과 세포를 접촉시키는 단계를 포함하는 방법.
18. 의학적 징후에 대하여 화학 요법 치료 또는 방사선 요법 치료가 진행중인 개체 내에서 세포를 감작시키는 방법으로서, 치료적 유효량의 제1항의 화합물을 화학 요법 제제, 방사선 요법 제제 또는 이들의 혼합물과 조합하여 개체에 투여하는 단계를 포함하는 방법.
19. 제18항에 있어서, 개체에 시토킨, 림포카인, 성장 인자, 기타 조혈 인자 또는 이들의 혼합물을 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
20. 제18항에 있어서, 상기 화학 요법 제제는 알킬화제, 대사 길항 물질, 호르몬 또는 이의 길항 물질, 방사성 동위 원소, 항체 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택하는 것인 방법.
21. 제18항에 있어서, 상기 방사선 요법 제제는 감마-방사선, X-레이 방사선, 자외 광선, 가시 광선, 적외 방사선 및 마이크로파 방사선으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
22. 제18항에 있어서, 상기 의학적 징후는 결장직장암, 두경부암, 췌장암, 유방암, 위암, 방광암, 외음부 암, 백혈병, 림프종, 흑색종, 신장 세포 암종, 난소암, 뇌종양, 골육종 및 폐암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 암인 것인 방법.
23. 제18항에 있어서, 상기 의학적 징후는 점액양 세포 및 원형 세포 암종, 국소 진행성 종양(locally advanced tumor), 전이성 암, 유잉 육종, 암 전이, 림프관성 전이, 편평 세포 암종, 식도 편평 세포 암종, 구강 암종, 다발성 골수종, 급성 림프구성 백혈병, 급성 비 림프구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 모상 세포 백혈병, 삼출성 림프종(체강계 삼출성 림프종), 흉선 림프종 폐암, 소 세포 암종, 피부 T 세포 림프종, 호지킨 림프종, 비 호지킨 림프종, 부신 피질 암, ACTH-생산 종양, 비 소 세포 암, 유방암, 소 세포 암종, 유선관 암종, 위암, 결장암, 결장직장암, 결장직장 신생물 관련 용종, 췌장암, 간암, 방광암, 일차 표재성 방광 종양, 방광의 침윤성 이행 세포 암종, 근육-침윤성 방광암, 전립선암, 난소 암종, 일차 복막 상피성 신생물, 자궁 경부 암종, 자궁 내막 암, 질암, 여성 외음부 암, 자궁암 및 난소 여포내 고형 암, 고환암, 음경암, 신장 세포 암종, 내인성 뇌종양, 신경아세포종, 성상신경교세포 뇌종양, 신경교종, 중추 신경계 내 전이성 종양 세포 침윤, 골종, 골육종, 악성 흑색종, 사람 피부 각질 세포의 진행성 종양, 편평 세포 암, 갑상선 암, 망막아세포종, 신경아세포종, 복막 삼출, 악성 흉막 삼출, 중피종, 빌림스 종양, 담낭암, 영양막 신생물, 혈관주위세포종 및 카포시 육종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 암인 것인 방법.
24. 제18항에 있어서, 상기 치료는 류마티스성 관절염, 건선, 백반, 웨그너 육아종증 및 전신 홍반성 루프스병으로 이루어진 군으로부터 선택되는 염증성 질환에 대하여 투여하는 것인 방법.
25. 제18항에 있어서, 상기 제1항의 화합물은 Chk1의 억제시 단백질 키나제 A, 단백질 키나제 C, cdc2 및 pp60v-src에 비하여 20배 이상의 선택성을 보유하는 것인 방법.
26. 제18항에 있어서, 상기 제1항의 화합물은 Chk1의 억제시 단백질 키나제 A, 단백질 키나제 C, cdc2 및 pp60v-src에 비하여 75배 이상의 선택성을 보유하는 것인 방법.
27. 제18항에 있어서, 상기 제1항의 화합물은 Chk1의 억제시 단백질 키나제 A, 단백질 키나제 C, cdc2 및 pp60v-src에 비하여 100배 이상의 선택성을 보유하는 것인 방법.
28. 비정상적 세포 증식을 억제하는 방법으로서, 비정상적으로 증식하는 세포들 중에서 세포 주기 정지를 실질적으로 동조시키는 Chk1 활성화제와 비정상적으로 증식하는 세포를 포함하는 세포 군집을 접촉시킨 후, 상기 세포 군집과 상기 제1항의 화합물을 접촉시켜 상기 세포 주기 정지를 실질적으로 방해하는 단계를 포함하는 것인 방법.
29. 제28항에 있어서, 상기 Chk1 활성화제는 하나 이상의 화학 요법 제제를 포함하는 것인 방법.
30. 제28항에 있어서, 상기 Chk1 활성화제는 이온화 방사선 또는 자외 방사선을 포함하는 것인 방법.
31. 제28항에 있어서, 상기 이온화 방사선은 방사선 감수성 증강 물질, 광감수성 증강 물질 또는 이들의 혼합물과 함께 투여하는 것인 방법.
32. 제28항에 있어서, 상기 비정상적으로 증식하는 세포는 비 암성(noncancerous)인 것인 방법.