MD4304C1 - Tulpină de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki - bioinsecticid pentru combaterea lepidopterelor din genul Lymantria - Google Patents
Tulpină de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki - bioinsecticid pentru combaterea lepidopterelor din genul Lymantria Download PDFInfo
- Publication number
- MD4304C1 MD4304C1 MDA20130057A MD20130057A MD4304C1 MD 4304 C1 MD4304 C1 MD 4304C1 MD A20130057 A MDA20130057 A MD A20130057A MD 20130057 A MD20130057 A MD 20130057A MD 4304 C1 MD4304 C1 MD 4304C1
- Authority
- MD
- Moldova
- Prior art keywords
- strain
- kurstaki
- bacillus thuringiensis
- thuringiensis subsp
- lymantria
- Prior art date
Links
- 241001147758 Bacillus thuringiensis serovar kurstaki Species 0.000 title claims abstract description 14
- 241000721696 Lymantria Species 0.000 title claims abstract description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 5
- 241000255777 Lepidoptera Species 0.000 abstract description 16
- 230000000749 insecticidal effect Effects 0.000 abstract description 10
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 abstract description 6
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 abstract description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 8
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 6
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 6
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 6
- 241000721703 Lymantria dispar Species 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 108700003918 Bacillus Thuringiensis insecticidal crystal Proteins 0.000 description 3
- 241000220225 Malus Species 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- ROWKJAVDOGWPAT-UHFFFAOYSA-N Acetoin Chemical compound CC(O)C(C)=O ROWKJAVDOGWPAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091023242 Internal transcribed spacer Proteins 0.000 description 2
- 229910021380 Manganese Chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L Manganese chloride Chemical compound Cl[Mn]Cl GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241001168634 Phyllobius oblongus Species 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000011565 manganese chloride Substances 0.000 description 2
- 235000002867 manganese chloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N Aesculin Natural products OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1Oc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N Cichoriin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1)c1c(O)cc2c(OC(=O)C=C2)c1 WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N 0.000 description 1
- 101150102464 Cry1 gene Proteins 0.000 description 1
- 235000017788 Cydonia oblonga Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000022586 Erebidae Species 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 206010061217 Infestation Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 1
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 1
- 241000220324 Pyrus Species 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N Salicin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1)c1c(CO)cccc1 NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 239000003570 air Substances 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N alpha-salicin Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 235000021016 apples Nutrition 0.000 description 1
- 229940097012 bacillus thuringiensis Drugs 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000853 biopesticidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N esculin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC(C(=C1)O)=CC2=C1OC(=O)C=C2 XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N 0.000 description 1
- 229940093496 esculin Drugs 0.000 description 1
- AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N esculin Natural products OC1OC(COc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O)C(O)C(O)C1O AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M hydrogensulfate Chemical compound OS([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 235000021017 pears Nutrition 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 238000002135 phase contrast microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N salicin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N 0.000 description 1
- 229940120668 salicin Drugs 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Invenţia se referă la microbiologie şi biotehnologie, şi poate fi utilizată în agricultură pentru combaterea lepidopterelor din genul Lymantria.Tulpina de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki, izolată din mediul natural, este depozitată în Colecţia Naţională de Microorganisme Nepatogene cu numărul CNMN-BB-04 şi poate fi utilizată pentru producerea bioinsecticidelor.Tulpina de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki CNMN-BB-04 manifestă o activitate insecticidă pronunţată asupra lepidopterelor din genul Lymantria.
Description
Invenţia se referă la microbiologie şi biotehnologie şi poate fi utilizată în agricultură pentru combaterea lepidopterelor din genul Lymantria.
Mai multe soiuri de fructe seminţoase, inclusiv de mere, pere şi gutui, sunt cultivate în zonele cu climă temperată. O diversitate bogată de insecte atacă aceste tipuri de fructe în toată lumea. Lepidopterele sunt considerate dăunători des întâlniţi în multe state din Europa, inclusiv în Republica Moldova (Жигальцева М.И. Комплекс листовёрток вредителей плодоводства в Молдавии с обоснованием методов борьбы//М.И. Жигальцева: Автореф. дис. канд. с.-х. наук. Ленинград, 1959, 20 p.).
Numeroase specii de lepidoptere pot provoca daune pomilor fructiferi, cele mai susceptibile specii depind atât de tipul de pomi fructiferi, cât şi de zona geografică (David J. Carter Pest Lepidoptera of Europe: with special reference to the British Isles. Springer Science&Business media, 1984, 431 p.).
Împotriva lepidopterelor se utilizează un spectru larg de insecticide, însă aplicarea acestor preparate manifestă acţiuni negative asupra organismelor nevizate (Гулий В.В., Памужак Н.Г. Справочник по защите растений для фермеров. Кишинев, Universitas, Москва: Росагросервис, 1992, 464 p.).
Elaborarea unor metode inofensive şi totodată eficiente de combatere a lepidopterelor este una dintre problemele stringente şi actuale.
Controlul microbiologic al insectelor dăunătoare a fost adesea considerat ca o alternativă favorabilă folosirii insecticidelor chimice, care posedă o acţiune nespecifică, poluează mediul ambiant şi se acumulează în aer, apă şi sol.
Bacillus thuringiensis (Bt) este o bacterie cunoscută ca un agent important în controlul biologic. Aceasta este utilizată pe scară largă ca bioinsecticid pentru combaterea multor insecte dăunătoare şi constituie baza a peste 90% din biopesticidele disponibile în comerţ, datorită absenţei efectelor toxice asupra omului şi altor organisme homeoterme, precum şi datorită nepoluării mediului ambiant.
Este cunoscută tulpina Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki Z-52, utilizată pentru obţinerea preparatului ”Lepidocid”- insecticid biologic pentru combaterea lepidopterelor [1].
Cea mai apropiată după esenţă şi rezultatul tehnic este tulpina de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki B-159/252Bt, activă împotriva dăunătorilor din ordinul Lepidoptera [2].
Dezavantajul acestei tulpini constă în faptul că activitatea ei insecticidă este mai puţin eficientă. Respectiv, pentru obţinerea tulpinii în cantităţi industriale se vor consuma mai mulţi reactivi pentru mediul de cultivare, implicând cheltuieli suplimentare, ca urmare sporind costul produsului. Un alt dezavantaj este cantitatea mare de spori per mililitru introdusă în mediul ambiant, pentru asigurarea efectului insecticid.
Problema pe care o rezolvă prezenta invenţie constă în obţinerea din mediul natural a unei tulpini autohtone noi de bacterii Bacillus thuringiensis, care ar asigura producerea de proteine cu efecte insecticide şi cu o activitate mai înaltă contra lepidopterelor.
Esenţa invenţiei constă în faptul că se propune o tulpină nouă de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki, depozitată în Colecţia Naţională de Microorganisme Nepatogene a Institutului de Microbiologie şi Biotehnologie al AŞM sub nr. CNMN BB-04 în calitate de bioinsecticid pentru combaterea lepidopterelor din genul Lymantria.
Rezultatul tehnic al invenţiei constă în faptul că tulpina propusă:
- posedă o activitate insecticidă mai înaltă asupra lepidopterelor faţă de cea mai apropiată soluţie;
- este o tulpină autohtonă, ceea ce reduce semnificativ costurile pentru obţinerea bioinsecticidelor şi asigură micşorarea gradului de poluare a mediului ambiant.
Rezultatul tehnic, în special efectul insecticid obţinut, este determinat de particularităţile biochimice ale tulpinii, şi anume de capacitatea de a sintetiza δ-endotoxine.
Cultura propusă nu este patogenă pentru organismele homeoterme şi se păstrează în tuburi pe medii agarizate T3 (Travers R., Martin P., Reichelderfer C. Selective process for efficient isolation of soils Bacillus spp. Appl. Environ. Microbiol., 1987, 53 (6), p. 1263-1266), la temperatura de 4°C în Colecţia Naţională de Microorganisme Nepatogene a Institutului de Microbiologie şi Biotehnologie al AŞM.
Tulpina a fost izolată în cultură pură din corpul insectei Phyllobius oblongus L. (Thiery I., Frachon E. Identification, isolation, culture and preservation of enthomopathogenic bacteria, 1997, p. 55-73. In: Lacey A.L. (eds) Manual of Techniques in Insect Pathology, Academic Press, London), colectate pe teritoriul Republicii Moldova.
Pentru cultivarea tulpinii poate fi utilizat mediul nutritiv cu următoarea componenţă (g/l): tripton (sau Casein Trypsic Peptone) - 3; triptoză - 2; extract de drojdii - 1,5; NaH2PO4 × H2O - 6,9; MnCl2 × 4H2O - 0,008; agar - 15; pH - 6,8.
Caracterele morfo-culturale ale tulpinii: bacterii gram-pozitive cu spori. Celulele vegetative sunt mari şi mobile, dispuse câte una, în perechi sau în lanţuri. Mărimea celulelor variază de la 1,5…1,7 până la 3,6…6,2 µm. Formează şi produc incluziuni proteice cristalice de formă bipiramidală. Pe mediul NA peste 24 ore tulpina formează colonii de culoare albă-gri cu marginea filiformă şi suprafaţa mată.
Caracteristica fiziologo-biochimică a tulpinii
Microorganism facultativ anaerob. Tulpina creşte în limitele de temperatură de +5...+40ºC. Temperatura optimă de creştere este de +28...+32ºC. Valoarea optimă a pH-ului pentru dezvoltarea tulpinii este de 5,2. Tulpina produce catalază, hidrolizează amidonul şi cazeina, lichefiază gelatina. Formează acetilmetilcarbinol, lecitinază şi urează. Nu descompune esculina şi salicina. Nu formează acizi şi gaze din maltoză, lactoză şi zaharoze. Asimilează glucoza, manoza cu formarea de acizi. Nu formează sulfat de hidrogen şi indol. Tulpina produce δ-endotoxine cu proprietăţi insecticide.
Gradul de puritate al tulpinii
Tulpina a fost izolată în cultură pură din corpul insectei Phyllobius oblongus L. (Thiery I., Frachon E. Identification, isolation, culture and preservation of enthomopathogenic bacteria, 1997, p. 55-73. In: Lacey A.L. (eds) Manual of Techniques in Insect Pathology, Academic Press, London), colectate pe teritoriul Republicii Moldova. Pentru cultivare necesită utilizarea mediului agarizat T3. Gradul de puritate al tulpinii a fost verificat prin Reacţia de Polimerizare în Lanţ cu utilizarea primerilor specifici ITS (Internal Transcribed Spacer) 16S-23S şi amplificarea porţiunii de genă Cry1.
Exemplu de utilizare a invenţiei
Tulpina Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki este cultivată timp de o zi pe un agitator la temperatura de 30°C pe mediul nutritiv agarizat T3 cu următoarea componenţă (g/l): tripton - 3; triptoză - 2; extract de drojdii - 1,5; NaH2PO4 × H2O - 6,9; MnCl2 × 4H2O - 0,008; agar - 15; pH - 6,8. Celulele sunt precipitate, resuspensionate în apă distilată şi incubate pe un agitator circular pentru o noapte la 30°C, timp în care celulele lizează eliberând spori şi cristale. Ulterior este determinată concentraţia de spori şi cristale de δ-endotoxine din lichidul cultural rezultat. Concentraţia de spori este determinată după numărul de colonii în creştere pe mediul agarizat T3 după însămânţarea diluţiei. Prezenţa cristalelor este monitorizată cu ajutorul microscopiei prin contrast de fază. Prezenţa δ-endotoxinelor este determinată prin reacţia de precipitare, iar conţinutul lor cantitativ - folosind ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay).
Se pregăteşte suspensia de contaminare în apă distilată cu diferite concentraţii: 0,9 × 109 spori/ml; 0,9 × 108 spori/ml; 0,9 × 107 spori/ml; 0,9 × 106 spori/ml; 0,9 × 105 spori/ml. Cea mai efectivă dintre concentraţiile testate, pentru Lymantria dispar L. 1758, s-a dovedit a fi 0,9 × 108 spori/ml.
În experienţă se utilizează dăunătorul pomilor fructiferi Lymantria dispar Linnaeus, 1758 (Lepidoptera).
Eficacitatea tulpinii de bacterii propuse a fost evaluată prin monitorizarea efectivului numeric al dăunătorilor colectaţi după prelucrare şi cantitatea exemplarelor de insecte pierite după infestare.
Exemplul 1
Evaluarea activităţii insecticide a tulpinii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki a fost testată pe larvele provenite din populaţia naturală a speciei Lymantria dispar Linnaeus, 1758 (Lepidoptera, Erebidae). Se prepară o serie din cinci diluţii ale culturii bacteriene în soluţie de 0,9% NaCl cu pasul 10 (concentraţiile indicate mai sus). În calitate de martor a fost utilizată soluţia de 0,9% NaCl. În suspensiile pregătite sunt introduse frunze de măr de aproximativ aceeaşi mărime, care sunt uscate la temperatura de 20°C şi plasate în vase Petri. Pentru fiecare diluţie sunt utilizate câte 10 insecte şi 2…5 frunze de măr tratate. Mortalitatea insectelor a fost cuantificată după 3 zile de incubaţie în incubator la 21°C.
Activitatea biologică a tulpinii, exprimată în LC50, a fost calculată după formula lui Kerber conform valorilor concentraţiilor de spori în diluţiile culturii bacteriene: lg LC50 = lgCM-Σ (ΣL - 0,5), unde CM este concentraţia maximă testată; Σ - logaritmul multiplicării diluţiei; ΣL - suma valorilor L pentru toate concentraţiile. Astfel o reducere cu 50% a efectivului dăunătorului Lymantria dispar L. poate fi obţinută la aplicarea culturii bacteriene Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki în concentraţie de 1,392 × 105 spori/ml, în soluţie de 0,9% NaCl. Rezultatele sunt prezentate în tabel.
Tabel
Nivelul pieirii dăunătorului Lymantria dispar L. după prelucrare cu suspensie
din cultura bacteriană a tulpinilor de Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki
Nr. Tulpina Titrul sporilor, mlrd spori/ml Activitatea insecticidă LC50, spori/ml 1 Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki 0,9 1,392 × 105 2 Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki B159/252Bt 4,03 2,377 × 105
Datele din tabel denotă că tulpina bacteriană propusă Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki posedă o activitate insecticidă pronunţată asupra lepidopterelor şi poate fi utilizată ca agent biologic în controlul efectivului lor numeric. Tulpina este ecologic inofensivă, deoarece a fost extrasă din mediu natural, nu este patogenă pentru plante şi organismele homeoterme. În natură nu sunt introduse organisme noi, ceea ce exclude deteriorarea ecosistemelor, cum se observă în cazul utilizării altor patogeni şi preparate.
1. SU 769787 A1 1984.01.23
2. RU 2179392 C1 2002.02.20
Claims (1)
- Tulpină de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki CNMN-BB-04 în calitate de bioinsecticid pentru combaterea lepidopterelor din genul Lymantria.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| MDA20130057A MD4304C1 (ro) | 2013-08-13 | 2013-08-13 | Tulpină de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki - bioinsecticid pentru combaterea lepidopterelor din genul Lymantria |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| MDA20130057A MD4304C1 (ro) | 2013-08-13 | 2013-08-13 | Tulpină de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki - bioinsecticid pentru combaterea lepidopterelor din genul Lymantria |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| MD4304B1 MD4304B1 (ro) | 2014-09-30 |
| MD4304C1 true MD4304C1 (ro) | 2015-04-30 |
Family
ID=51625701
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| MDA20130057A MD4304C1 (ro) | 2013-08-13 | 2013-08-13 | Tulpină de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki - bioinsecticid pentru combaterea lepidopterelor din genul Lymantria |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| MD (1) | MD4304C1 (ro) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MD1106Z (ro) * | 2016-07-04 | 2017-07-31 | Институт Генетики, Физиологии И Защиты Растений Академии Наук Молдовы | Mediu nutritiv pentru cultivarea tulpinii Bacillus subtilis CNMN-BB-09 |
| MD1187Z (ro) * | 2017-02-08 | 2018-04-30 | Институт Генетики, Физиологии И Защиты Растений Академии Наук Молдовы | Procedeu de tratare a seminţelor de tomate înainte de semănat |
Citations (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU769787A1 (ru) * | 1979-05-22 | 1984-01-23 | Химический Завод "Прогресс" | Штамм @ @ @ @ @ -продуцент @ -эндотоксина |
| JPH02270805A (ja) * | 1988-10-27 | 1990-11-05 | Mycogen Corp | 鱗翅類害虫に活性な、Ｂ．ｔ．ＰＳ８１Ｆと命名される新規なバシラス・スリンギエンシス分離体、及び鱗翅類に対し活性の毒素をコードした遺伝子 |
| RU95108471A (ru) * | 1995-05-24 | 1997-02-20 | В.В. Шевцов | Штамм бактерий bacillus thuringiensis var.kurstaki вкпм в-5156 - продуцент эндотоксина для получения биоинсектицида |
| RU2108384C1 (ru) * | 1995-06-27 | 1998-04-10 | Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов | Штамм bacillus thuringiensis - продуцент эндотоксина против жесткокрылых насекомых и способ его культивирования |
| RU2122791C1 (ru) * | 1997-12-08 | 1998-12-10 | Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов | Штамм бактерий bacillus thuringiensis var. israelensis, предназначенный для получения препарата, активного против личинок комаров |
| EA199900041A1 (ru) * | 1998-12-24 | 1999-02-25 | Ооо, "Био-3" | Энтомопатогенный препарат против личинок комаров на основе штамма bacillus thuringiensis var. israelensis h-14 вкпм в-7572 |
| US5952547A (en) * | 1991-10-30 | 1999-09-14 | Plant Genetic Systems, N.V. | Modified Bacillus thuringiensis genes with improved expression in plant cells, methods of production on and use |
| US5976564A (en) * | 1994-03-14 | 1999-11-02 | Abbott Laboratories | Pesticidal composition and bacillus thurigiensis strain |
| KR20010002073A (ko) * | 1999-06-11 | 2001-01-05 | 구본탁 | 셀룰로오즈 분해활성이 부가된 바실러스 튜린기엔시스 변이주 |
| RU2179392C1 (ru) * | 2000-12-27 | 2002-02-20 | Бердский завод биологических препаратов | Штамм бактерий bac. thuringiensis var. kurstaki вкм в-2248д, используемый для получения энтомопатогенных препаратов |
| US20040058860A1 (en) * | 1989-06-27 | 2004-03-25 | Jewel Payne | Novel bacillus thuringiensis isolate active against lepidopteran pests, and genes encoding novel lepidopteran-active toxins |
| MY129859A (en) * | 1987-12-24 | 2007-05-31 | Ici Plc | Bacterial strains of the bacterium bacillus thuringiensis and uses therefor |
| WO2008011574A2 (en) * | 2006-07-21 | 2008-01-24 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Bacillus thuringiensis toxin with anti-lepidopteran activity |
| WO2008011584A2 (en) * | 2006-07-21 | 2008-01-24 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Bacillus thuringiensis toxin with anti-lepidopteran activity |
| RU2347809C1 (ru) * | 2007-08-31 | 2009-02-27 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП ГосНИИгенетика) | Штамм бактерий bacillus thuringiensis, проявляющий фунгицидную активность, инсектицидную активность и подавляющий вирулентные свойства фитопатогенных бактерий erwinia carotovora |
| KR20100103199A (ko) * | 2009-03-13 | 2010-09-27 | 충남대학교산학협력단 | 살충 활성이 있는 바실러스 투린지엔시스 아종 쿠르스타키 ｋｂ100 균주 및 이의 용도 |
| MX2010013641A (es) * | 2008-06-11 | 2011-01-14 | Pionner Hi Bred International Inc | Gen bacillus thuringiensis novedoso con actividad contra lepidopteros. |
| CN102154171A (zh) * | 2011-01-13 | 2011-08-17 | 河北农业大学 | 一株对蚊子幼虫高效的苏云金芽孢杆菌 |
| RU2434939C1 (ru) * | 2010-08-23 | 2011-11-27 | Сергей Ананьевич Тюрин | Штамм бактерий bacillus thuringiensis биос-1, обладающий инсектоакарицидной активностью |
| US20120065127A1 (en) * | 2009-01-23 | 2012-03-15 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Novel Bacillus thuringiensis Gene with Lepidopteran Activity |
| RU2453595C1 (ru) * | 2011-03-18 | 2012-06-20 | Государственное научное учреждение Дальневосточный зональный научно-исследовательский ветеринарный институт Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ДальЗНИВИ Россельхозакадемии) | Штамм бактерий bacillus thuringiensis для получения биоинсектицида для борьбы с большой восковой молью |
| CN103087954A (zh) * | 2013-01-18 | 2013-05-08 | 南京林业大学 | 一种石灰岩高效侵蚀细菌苏云金芽孢杆菌nl-11及其应用 |
| CN103160449A (zh) * | 2011-12-14 | 2013-06-19 | 河北农业大学 | 苏云金芽孢杆菌mb-15菌株及其可湿性粉剂的制备方法 |
| MD4196C1 (ro) * | 2012-04-27 | 2013-09-30 | Институт Зоологии Академии Наук Молдовы | Tulpină de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki -bioinsecticid pentru combaterea coleopterelor curculionoide |
-
2013
- 2013-08-13 MD MDA20130057A patent/MD4304C1/ro active IP Right Grant
Patent Citations (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU769787A1 (ru) * | 1979-05-22 | 1984-01-23 | Химический Завод "Прогресс" | Штамм @ @ @ @ @ -продуцент @ -эндотоксина |
| MY129859A (en) * | 1987-12-24 | 2007-05-31 | Ici Plc | Bacterial strains of the bacterium bacillus thuringiensis and uses therefor |
| JPH02270805A (ja) * | 1988-10-27 | 1990-11-05 | Mycogen Corp | 鱗翅類害虫に活性な、Ｂ．ｔ．ＰＳ８１Ｆと命名される新規なバシラス・スリンギエンシス分離体、及び鱗翅類に対し活性の毒素をコードした遺伝子 |
| US20040058860A1 (en) * | 1989-06-27 | 2004-03-25 | Jewel Payne | Novel bacillus thuringiensis isolate active against lepidopteran pests, and genes encoding novel lepidopteran-active toxins |
| US7511129B2 (en) * | 1989-06-27 | 2009-03-31 | Mycogen Corporation | Bacillus thuringiensis isolate active against lepidopteran pests, and genes encoding novel lepidopteran-active toxins |
| US6737273B2 (en) * | 1989-06-27 | 2004-05-18 | Myocogen Corporation | Bacillus thuringiensis isolate active against lepidopteran pests, and genes encoding novel lepidopteran-active toxins |
| US5952547A (en) * | 1991-10-30 | 1999-09-14 | Plant Genetic Systems, N.V. | Modified Bacillus thuringiensis genes with improved expression in plant cells, methods of production on and use |
| US5976564A (en) * | 1994-03-14 | 1999-11-02 | Abbott Laboratories | Pesticidal composition and bacillus thurigiensis strain |
| RU95108471A (ru) * | 1995-05-24 | 1997-02-20 | В.В. Шевцов | Штамм бактерий bacillus thuringiensis var.kurstaki вкпм в-5156 - продуцент эндотоксина для получения биоинсектицида |
| RU2108384C1 (ru) * | 1995-06-27 | 1998-04-10 | Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов | Штамм bacillus thuringiensis - продуцент эндотоксина против жесткокрылых насекомых и способ его культивирования |
| RU2122791C1 (ru) * | 1997-12-08 | 1998-12-10 | Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов | Штамм бактерий bacillus thuringiensis var. israelensis, предназначенный для получения препарата, активного против личинок комаров |
| EA000295B1 (ru) * | 1998-12-24 | 1999-02-25 | Ооо "Био-3" | Энтомопатогенный препарат против личинок комаров на основе штамма бактерий bacillus thuringiensis var. israelensis h-14 вкпм в-7572 |
| EA199900041A1 (ru) * | 1998-12-24 | 1999-02-25 | Ооо, "Био-3" | Энтомопатогенный препарат против личинок комаров на основе штамма bacillus thuringiensis var. israelensis h-14 вкпм в-7572 |
| KR20010002073A (ko) * | 1999-06-11 | 2001-01-05 | 구본탁 | 셀룰로오즈 분해활성이 부가된 바실러스 튜린기엔시스 변이주 |
| RU2179392C1 (ru) * | 2000-12-27 | 2002-02-20 | Бердский завод биологических препаратов | Штамм бактерий bac. thuringiensis var. kurstaki вкм в-2248д, используемый для получения энтомопатогенных препаратов |
| WO2008011574A2 (en) * | 2006-07-21 | 2008-01-24 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Bacillus thuringiensis toxin with anti-lepidopteran activity |
| WO2008011584A2 (en) * | 2006-07-21 | 2008-01-24 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Bacillus thuringiensis toxin with anti-lepidopteran activity |
| RU2347809C1 (ru) * | 2007-08-31 | 2009-02-27 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП ГосНИИгенетика) | Штамм бактерий bacillus thuringiensis, проявляющий фунгицидную активность, инсектицидную активность и подавляющий вирулентные свойства фитопатогенных бактерий erwinia carotovora |
| MX2010013641A (es) * | 2008-06-11 | 2011-01-14 | Pionner Hi Bred International Inc | Gen bacillus thuringiensis novedoso con actividad contra lepidopteros. |
| US20120065127A1 (en) * | 2009-01-23 | 2012-03-15 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Novel Bacillus thuringiensis Gene with Lepidopteran Activity |
| KR20100103199A (ko) * | 2009-03-13 | 2010-09-27 | 충남대학교산학협력단 | 살충 활성이 있는 바실러스 투린지엔시스 아종 쿠르스타키 ｋｂ100 균주 및 이의 용도 |
| RU2434939C1 (ru) * | 2010-08-23 | 2011-11-27 | Сергей Ананьевич Тюрин | Штамм бактерий bacillus thuringiensis биос-1, обладающий инсектоакарицидной активностью |
| CN102154171A (zh) * | 2011-01-13 | 2011-08-17 | 河北农业大学 | 一株对蚊子幼虫高效的苏云金芽孢杆菌 |
| RU2453595C1 (ru) * | 2011-03-18 | 2012-06-20 | Государственное научное учреждение Дальневосточный зональный научно-исследовательский ветеринарный институт Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ДальЗНИВИ Россельхозакадемии) | Штамм бактерий bacillus thuringiensis для получения биоинсектицида для борьбы с большой восковой молью |
| CN103160449A (zh) * | 2011-12-14 | 2013-06-19 | 河北农业大学 | 苏云金芽孢杆菌mb-15菌株及其可湿性粉剂的制备方法 |
| MD4196C1 (ro) * | 2012-04-27 | 2013-09-30 | Институт Зоологии Академии Наук Молдовы | Tulpină de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki -bioinsecticid pentru combaterea coleopterelor curculionoide |
| CN103087954A (zh) * | 2013-01-18 | 2013-05-08 | 南京林业大学 | 一种石灰岩高效侵蚀细菌苏云金芽孢杆菌nl-11及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MD4304B1 (ro) | 2014-09-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hata et al. | Induction of systemic resistance against bacterial leaf streak disease and growth promotion in rice plant by Streptomyces shenzhenesis TKSC3 and Streptomyces sp. SS8 | |
| Prasanna et al. | A novel strain of Brevibacillus laterosporus produces chitinases that contribute to its biocontrol potential | |
| CN104762223B (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌ba-ka3及其应用 | |
| Prasanna et al. | Cyanobacteria mediated plant growth promotion and bioprotection against Fusarium wilt in tomato | |
| Boyle et al. | Endophyte-host interactions III. Local vs. systemic colonization | |
| CN103589674B (zh) | 枯草芽孢杆菌Pc3及其在制备防治植物致病真菌发酵上清液中的应用 | |
| CN106906167B (zh) | 一株生防用解淀粉芽胞杆菌及其应用 | |
| Calvo‐Bado et al. | Microbial community responses associated with the development of oomycete plant pathogens on tomato roots in soilless growing systems | |
| Le Floch et al. | Enhancement of development and induction of resistance in tomato plants by the antagonist, Pythium oligandrum | |
| RU2528058C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus amyloliquefaciens, обладающий фунгицидным и бактерицидным действием, и биологический препарат на его основе для защиты зерновых растений от заболеваний, вызываемых фитопатогенными грибами | |
| CN106479934A (zh) | 一种灰霉病菌拮抗菌株及其筛选方法和应用 | |
| CN101463336A (zh) | 类产碱单胞mob13及其应用 | |
| Amruta et al. | Isolation and identification of rice blast disease-suppressing antagonistic bacterial strains from the rhizosphere of rice. | |
| MD4304C1 (ro) | Tulpină de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki - bioinsecticid pentru combaterea lepidopterelor din genul Lymantria | |
| López et al. | Evaluation of Xanthomonas campestris survival in a soil microcosm system | |
| CN103087944A (zh) | 一种蜡样芽孢杆菌菌株及其用途 | |
| KR20110113992A (ko) | 크리세오박테리움 ｆｂｆ-7 균주 배양물 및 이를 함유하는 뿌리혹선충 방제용 조성물 | |
| Avupati et al. | Diversity and functional annotation of chitinolytic Bacillus and associated chitinases from north western Indian Himalayas | |
| MD4196C1 (ro) | Tulpină de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki -bioinsecticid pentru combaterea coleopterelor curculionoide | |
| CN109749970B (zh) | 植物内芽孢杆菌在抗植物寄生线虫中的应用 | |
| Maruti et al. | Isolation and In Vitro Screening of Endophytes against Wilt Pathogen in Pomegranate and Guava. | |
| Makhlouf et al. | Suppression of bacterial wilt disease of tomato plants using some bacterial strains | |
| KR100986653B1 (ko) | 슈도모나스 에스피 피에프-1 균주를 이용한 식물병 방제제 | |
| Al-Momani et al. | Ecology, toxicity, and hydrolytic activities of Bacillus thuringiensis in forests | |
| Prasad et al. | Isolation, screening and characterization of Azotobacter from rhizospheric soils for different plant growth promotion (pgp) & antagonistic activities and compatibility with agrochemicals: an in vitro study |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG4A | Patent for invention issued | ||
| TC4A | Change of name of proprietor (patent for invention) |
Owner name: INSTITUTIA PUBLICA UNIVERSITATEA DE STAT DIN MOLDOVA, MD STR. A. MATEEVICI NR. 60, MD-2009, CHISINAU, REPUBLICA MOLDOVA Free format text: PREVIOUS NAME OF PROPRIETOR: INSTITUTUL DE ZOOLOGIE AL ACADEMIEI DE STIINTE A MOLDOVEI, MD STR. ACADEMIEI NR. 1, MD-2028, CHISINAU, REPUBLICA MOLDOVA |