MD4196C1 - Tulpină de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki -bioinsecticid pentru combaterea coleopterelor curculionoide - Google Patents
Tulpină de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki -bioinsecticid pentru combaterea coleopterelor curculionoide Download PDFInfo
- Publication number
- MD4196C1 MD4196C1 MDA20120040A MD20120040A MD4196C1 MD 4196 C1 MD4196 C1 MD 4196C1 MD A20120040 A MDA20120040 A MD A20120040A MD 20120040 A MD20120040 A MD 20120040A MD 4196 C1 MD4196 C1 MD 4196C1
- Authority
- MD
- Moldova
- Prior art keywords
- strain
- kurstaki
- bacillus thuringiensis
- thuringiensis subsp
- spores
- Prior art date
Links
- 241001147758 Bacillus thuringiensis serovar kurstaki Species 0.000 title claims abstract description 20
- 241000254171 Curculionidae Species 0.000 title abstract description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 3
- 230000000749 insecticidal effect Effects 0.000 abstract description 13
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 abstract description 12
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 2
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 13
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 13
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 13
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 8
- 241000220225 Malus Species 0.000 description 7
- 241001396833 Neocoenorhinidius pauxillus Species 0.000 description 7
- 241000254173 Coleoptera Species 0.000 description 6
- 241001168634 Phyllobius oblongus Species 0.000 description 6
- 241001168723 Sitona lineatus Species 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 description 4
- 235000017587 Medicago sativa ssp. sativa Nutrition 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 241000255777 Lepidoptera Species 0.000 description 3
- 241000219823 Medicago Species 0.000 description 3
- 229940097012 bacillus thuringiensis Drugs 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 3
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ROWKJAVDOGWPAT-UHFFFAOYSA-N Acetoin Chemical compound CC(O)C(C)=O ROWKJAVDOGWPAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N Aesculin Natural products OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1Oc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 108700003918 Bacillus Thuringiensis insecticidal crystal Proteins 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N Cichoriin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1)c1c(O)cc2c(OC(=O)C=C2)c1 WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N 0.000 description 1
- 235000017788 Cydonia oblonga Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000179393 Lithodytes lineatus Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 240000004658 Medicago sativa Species 0.000 description 1
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 1
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 1
- 241000220324 Pyrus Species 0.000 description 1
- 241000544972 Rhynchitinae Species 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N Salicin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1)c1c(CO)cccc1 NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003570 air Substances 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N alpha-salicin Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021016 apples Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000000853 biopesticidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N esculin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC(C(=C1)O)=CC2=C1OC(=O)C=C2 XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N 0.000 description 1
- 229940093496 esculin Drugs 0.000 description 1
- AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N esculin Natural products OC1OC(COc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O)C(O)C(O)C1O AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M hydrogensulfate Chemical compound OS([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 235000021017 pears Nutrition 0.000 description 1
- 238000002135 phase contrast microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N salicin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N 0.000 description 1
- 229940120668 salicin Drugs 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
Invenţia se referă la biotehnologie şi poate fi utilizată în agricultură pentru combaterea coleopterelor curculionoide.Tulpina de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki, izolatădin mediu natural, este depozitată în Colecţia Naţională de Microorganisme Nepatogene cu numărul CNMN-BB-03 şi poate fi utilizată pentru producerea bioinsecticidelor.Tulpina de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki CNMN-BB-03 manifestă o activitate insecticidă pronunţată asupra coleopterelor curculionoide.
Description
Invenţia se referă la biotehnologie, în special la o tulpină de bacterii Bacillus thuringienis subsp. kurstaki care poate fi utilizată pentru combaterea coleopterelor curculionoide - dăunători ai pomilor fructiferi şi culturilor agricole.
Mai multe soiuri de fructe semincere, inclusiv de mere, pere şi gutui, sunt cultivate în zonele cu climă temperată. Numeroase specii de coleoptere curculionoide pot provoca daune pomilor fructiferi şi culturilor agricole, cele mai susceptibile specii depind atât de tipul de pomi fructiferi şi culturi agricole, cât şi de zona geografică.
Împotriva coleopterelor curculionoide se utilizează diferite insecticide şi alţi patogeni biologici, însă aplicarea largă a acestor preparate este limitată, deoarece ele manifestă acţiuni negative asupra altor insecte benefice şi provoacă poluarea mediului ambiant.
Elaborarea metodelor inofensive şi totodată efective de combatere a coleopterelor curculionoide este una dintre problemele stringente şi actuale.
Controlul microbiologic al insectelor dăunătoare a fost adesea considerat ca o alternativă favorabilă folosirii insecticidelor chimice, care posedă acţiune nespecifică, poluează mediul ambiant şi se acumulează în aer, apă şi sol.
Bacillus thuringiensis (Bt) este o bacterie cunoscută ca un agent important în controlul biologic. Aceasta este utilizată pe scară largă ca bioinsecticid pentru controlul multor insecte dăunătoare şi constituie baza a peste 90% din biopesticidele disponibile în comerţ datorită absenţei efectelor toxice asupra omului şi altor organisme homeoterme, precum şi asupra mediului ambiant.
Este cunoscută tulpina de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki H3a3b cu proprietăţi insecticide asupra lepidopterelor dăunătoare [1].
Dezavantajul tulpinii constă în aceea că se utilizează numai pentru lepidopterele dăunătoare.
Este cunoscută tulpina de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki IPM-46 care este activă împotriva dăunătorilor din ordinul lepidopterelor şi coleopterelor [2].
Dezavantajul tulpinii este dificultatea obţinerii şi utilizarea preparatelor costisitoare pentru modificarea genetică a tulpinii parentale Bacillus thuringiensis subsp. HD-73, activă contra lepidopterelor. De asemenea există riscul scăderii activităţii insecticide a tulpinii de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki IPM-46 modificate genetic.
Problema pe care o rezolvă invenţia constă în izolarea din mediul natural a unei tulpini de bacterii Bacillus thuringiensis - producătoare de proteine cu efecte insecticide, cu o activitate înaltă şi specifică contra coleopterelor curculionoide.
Problema a fost soluţionată prin identificarea tulpinii de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki, izolată din corpul insectei Neocoenorhinidius pauxillus Germ. (Thiery I., Frachon E. 1997. Identification, isolation, culture and preservation of enthomopathogenic bacteria, pp. 55-73. In: Lacey A.L. (eds) Manual of techniques in Insect Pathology, Academic Press, London), colectată pe teritoriul Republicii Moldova.
Tulpina de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki, izolată din mediu natural, este depozitată în Colecţia Naţională de Microorganisme Nepatogene cu numărul CNMN-BB-03 şi poate fi utilizată pentru producerea bioinsecticidelor.
Tulpina de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki CNMN-BB-03 manifestă o activitate insecticidă pronunţată asupra coleopterelor curculionoide.
Tulpina de bacterii sintetizează proteine cu efecte insecticide şi poate fi utilizată în calitate de insecticid biologic pentru combaterea coleopterelor curculionoide.
Rezultatul obţinut este determinat de particularităţile biochimice ale tulpinii propuse.
Tulpina propusă nu este patogenă pentru organismele homeoterme şi se păstrează în tuburi pe medii agarizate T3 (Travers R., Martin P., Reichelderfer C. Selective process for efficient isolation of soils Bacillus spp. Appl. Environ. Microbiol. 1987, 53 (6): 1263-1266), la temperatura de 4°C în Colecţia Naţională de Microorganisme Nepatogene a Institutului de Microbiologie şi Biotehnologie al AŞM.
Pentru cultivarea tulpinii poate fi utilizat mediul nutritiv cu următoarea componenţă (g/L): Tripton (sau Casein Trypsic Peptone) - 3, triptoză - 2; extract de drojdii - 1,5; NaH2PO4xH2O - 6,9; MnCl2x4H2O - 0,008; agar - 15; pH - 6,8.
Caracteristicile morfologice: bacterii gram-pozitive cu spori. Celulele vegetative sunt mari şi mobile, dispuse câte una, în perechi sau în lanţuri. Mărimea celulelor variază de la 1,5…1,7 până la 3,6…6,2 µm. Formează şi produc incluziuni proteice cristaline de formă bipiramidală. Pe mediul nutritiv agarizat peste 24 ore tulpina formează colonii de culoare albă-gri cu marginea filiformă şi suprafaţa mată.
Caracteristicile taxonomice şi biochimice ale tulpinii: microorganism aerob facultativ anaerob. Tulpina creşte în limitele de temperatură 5…40°C. Temperatura optimă de creştere 28…32°C. Valoarea optimă a pH-ului pentru dezvoltarea tulpinii este 5,2. Tulpina produce catalază, hidrolizează amidonul şi cazeina, lichefiază gelatina. Formează acetilmetilcarbinol, lecitinază şi urează. Nu descompune esculina şi salicina. Nu formează acizi şi gaze din maltoză, lactoză şi zaharoză. Asimilează glucoza, manoza cu formarea de acid. Nu formează sulfat de hidrogen şi indol. Tulpina sintetizează δ-endotoxine cu proprietăţi insecticide.
Invenţia poate fi ilustrată prin următoarele exemple de utilizare a tulpinii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki.
Tulpina de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki este cultivată timp de o zi pe agitator la temperatura de 30°C pe un mediu nutritiv agarizat T3 cu următoarea componenţă (g/L): Tripton (sau Casein Trypsic Peptone) - 3, triptoză - 2; extract de drojdii - 1,5; NaH2PO4xH2O - 6,9; MnCl2x4H2O - 0,008; agar - 15; pH - 6,8. Celulele sunt precipitate, resuspendate în apă distilată şi incubate într-un agitator rotativ pentru o noapte la 30°C. În acest timp celulele lizează eliberând spori şi cristale. Ulterior este determinată concentraţia de spori, de cristale şi de δ-endotoxină din lichidul cultural rezultat. Concentraţia de spori este determinată după numărul de colonii în creştere pe mediu agarizat T3 după însămânţarea diluţiei. Prezenţa cristalelor este monitorizată prin microscopie cu contrast de fază. Prezenţa δ-endotoxinei este determinată prin reacţia de precipitare, iar conţinutul lor cantitativ - folosind ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay).
Se pregăteşte suspensia de contaminare în apă distilată cu diferită concentraţie: 1,3 x 109 spori/mL, 1,3 x 108 spori/mL, 1,3 x 107 spori/mL, 1,3 x 106 spori/mL, 1,3 x 105 spori/mL. Cele mai efective dintre concentraţiile testate s-au dovedit a fi 1,3 x 109 spori/mL pentru Neocoenorhinidius pauxillus Germ., Sitona lineatus L. şi 1,3x108 spori/mL pentru Phyllobius oblongus L.
În experienţă se utilizează insecte din familia Curculionidae (Coleoptera), în special cei mai periculoşi dăunători ai pomilor fructiferi Neocoenorhinidius pauxillus Germ., Phyllobius oblongus L. şi Sitona lineatus L. - dăunător al culturilor agricole.
Efectul insecticid al tulpinii este evaluat prin monitorizarea efectivului numeric al dăunătorilor colectaţi după prelucrare şi cantitatea exemplarelor de gândaci pieriţi după infectare.
Exemplul 1
Estimarea eficacităţii tulpinii propuse pentru combaterea dăunătorului pomilor fructiferi Neocoenorhinidius pauxillus Germ. (Coleoptera, Rhynchitidae).
Activitatea insecticidă a tulpinii de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki a fost testată pe coleopterele adulte provenite din aceeaşi populaţie a speciei Neocoenorhinidius pauxillus Germ. Se prepară o serie din cinci diluţii ale culturii tulpinii de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki în soluţie de 0,9% NaCl cu pasul 10 (concentraţiile indicate mai sus). În calitate de martor a fost utilizată soluţia de 0,9% NaCl. În suspensiile pregătite au fost introduse frunze de măr de aproximativ aceeaşi mărime. Frunzele au fost uscate la temperatura de 20°C şi plasate în vase Petri. Pentru fiecare diluţie au fost utilizate câte 10 insecte şi 2…5 frunze de măr tratate. Mortalitatea insectelor a fost cuantificată după 3 zile de incubaţie în incubator la 21°C şi fotoperioada de 18 ore.
Activitatea biologică a tulpinii exprimată în LC50 a fost calculată după formula lui Kerber în valorile concentraţiei de spori în diluţiile culturii bacteriene: lg LC50 = lgCM-σ (ΣL - 0,5), unde CM - concentraţia maximă testată; σ - logaritmul multiplicării diluţiei; ΣL - suma valorilor L pentru toate concentraţiile. Rezultatele sunt prezentate în tabel.
Cultura bacteriană Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki în soluţie de 0,9% NaCl, în concentraţie de 1,3x109 spori/mL, provoacă o reducere cu 80% a efectivului dăunătorului Neocoenorhinidius pauxillus Germ. pe măr (vezi tabelul).
Exemplul 2
Estimarea eficacităţii tulpinii propuse pentru combaterea dăunătorului pomilor fructiferi Phyllobius oblongus L. (Coleoptera, Curculionidae).
Activitatea insecticidă a tulpinii de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki a fost testată pe coleopterele adulte provenite din aceeaşi populaţie a speciei Phyllobius oblongus L. Se prepară o serie din cinci diluţii ale culturii bacteriene în soluţie de 0,9% NaCl cu pasul 10 (concentraţiile indicate mai sus).
În calitate de martor a fost utilizată soluţie de 0,9% NaCl. În suspensiile pregătite au fost introduse frunze de măr de aproximativ aceeaşi mărime. Frunzele au fost uscate la temperatura de 20°C şi plasate în vase Petri. Pentru fiecare diluţie au fost utilizate câte 10 insecte şi 2…5 frunze de măr tratate.
Mortalitatea insectelor a fost cuantificată după 3 zile de incubaţie în incubator la 21°C şi fotoperioada de 18 ore.
Activitatea biologică a tulpinii exprimată în LC50 a fost calculată după formula lui Kerber în valorile concentraţiei de spori în diluţiile culturii bacteriene: lg LC50 = lgCM - σ (ΣL - 0,5), unde CM - concentraţia maximă testată; σ - logaritmul multiplicării diluţiei; ΣL - suma valorilor L pentru toate concentraţiile. Rezultatele sunt prezentate în tabel.
Cultura bacteriană Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki în soluţie de 0,9% NaCl, în concentraţie de 1,3 x 108 spori/mL, provoacă o reducere cu 73,3% a efectivului dăunătorului Phyllobius oblongus L. pe măr (vezi tabelul).
Exemplul 3
Estimarea eficacităţii tulpinii propuse pentru combaterea dăunătorului lucernei Sitona lineatus L. (Coleoptera, Curculionidae).
Activitatea insecticidă a tulpinii de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki a fost testată pe coleopterele adulte provenite din aceeaşi populaţie a speciei Sitona lineatus L. Se prepară o serie din cinci diluţii ale culturii bacteriene în soluţie de 0,9% NaCl cu pasul 10 (concentraţiile indicate mai sus). În calitate de martor a fost utilizată soluţia de 0,9% NaCl. În suspensiile pregătite au fost introduse frunze de lucernă de aproximativ aceeaşi mărime. Frunzele au fost uscate la temperatura de 20°C şi plasate în vase Petri. Pentru fiecare diluţie au fost utilizate câte 10 insecte şi 2…5 frunze de lucernă tratate. Mortalitatea insectelor a fost cuantificată după 3 zile de incubaţie în incubator la 21°C şi fotoperioada de 18 ore.
Activitatea biologică a tulpinii exprimată în LC50 a fost calculată după formula lui Kerber în valorile concentraţiei de spori în diluţii ale culturii bacteriene: lg LC50 = lgCM -σ (ΣL - 0,5), unde CM - concentraţia maximă testată; σ - logaritmul multiplicării diluţiei; ΣL - suma valorilor L pentru toate concentraţiile. Rezultatele sunt prezentate în tabel.
Cultura bacteriană Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki în soluţie de 0,9% NaCl, în concentraţie de 1,3 x 109 spori/mL, provoacă o reducere cu 66,6% a efectivului dăunătorului Sitona lineatus L. pe lucernă (Tabelul).
Tabel
Nivelul pieirii dăunătorilor pomilor fructiferi după prelucrarea cu suspensie
de tulpină de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki
Nr. Specia dăunătorului Nivelul pieirii insectelor după prelucrare cu diverse concentraţii de suspensie bacteriană (%) Martor Activitatea insecticidă LC50 spori/mL 1,3x109 spori/mL 1,3x108 spori/mL 1,3x107 spori/mL 1,3x106 spori/mL 1,3x105 spori/mL NaCl (0,9%) 1. Neocoenorhinidius pauxillus Germ. 80,0 76,6 76,6 66,6 53,3 3,3 1,229x106 2. Phyllobius oblongus L. 73,3 73,3 70,0 56,6 50,0 3,3 2,467x106 3. Sitona lineatus L. 66,6 63,3 60,0 43,3 33,3 3,3 9,152x106
Aşadar, tulpina bacteriană propusă Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki posedă o activitate insecticidă pronunţată asupra coleopterelor curculionoide şi poate fi utilizată ca agent biologic în controlul efectivului lor numeric. Tulpina este ecologic inofensivă, deoarece este extrasă dintr-un mediu natural, nu este patogenă pentru plante şi organisme homeoterme. În natură nu sunt introduse organisme noi, ceea ce exclude deteriorarea ecosistemului cum se observă în cazul utilizării altor patogeni şi preparate.
1. RU 2080065 C1 1997.05.27
2. RU 2167528 C1 2001.05.27
Claims (1)
- Tulpină de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki CNMN-BB-03 în calitate de bioinsecticid pentru combaterea coleopterelor curculionoide.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| MDA20120040A MD4196C1 (ro) | 2012-04-27 | 2012-04-27 | Tulpină de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki -bioinsecticid pentru combaterea coleopterelor curculionoide |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| MDA20120040A MD4196C1 (ro) | 2012-04-27 | 2012-04-27 | Tulpină de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki -bioinsecticid pentru combaterea coleopterelor curculionoide |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| MD4196B1 MD4196B1 (ro) | 2013-02-28 |
| MD4196C1 true MD4196C1 (ro) | 2013-09-30 |
Family
ID=47831217
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| MDA20120040A MD4196C1 (ro) | 2012-04-27 | 2012-04-27 | Tulpină de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki -bioinsecticid pentru combaterea coleopterelor curculionoide |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| MD (1) | MD4196C1 (ro) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MD4304C1 (ro) * | 2013-08-13 | 2015-04-30 | Институт Зоологии Академии Наук Молдовы | Tulpină de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki - bioinsecticid pentru combaterea lepidopterelor din genul Lymantria |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1266824A (en) * | 1986-03-21 | 1990-03-20 | Corinna Herrnstadt | Bacillus thuringienis toxin toxic to the cotton boll weevil, alfalfa weevil, and corn rootworm |
| RU2080065C1 (ru) * | 1993-05-27 | 1997-05-27 | Товарищество с ограниченной ответственностью "Нива" | Бактериальный инсектицид для борьбы с чешуекрылыми |
| RU2122791C1 (ru) * | 1997-12-08 | 1998-12-10 | Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов | Штамм бактерий bacillus thuringiensis var. israelensis, предназначенный для получения препарата, активного против личинок комаров |
| RU2167528C1 (ru) * | 1999-10-19 | 2001-05-27 | Государственный научный центр прикладной микробиологии | Штамм bacillus thuringiensis subsp.kurstaki ipm-46, активный против насекомых из отрядов coleoptera и lepidoptera |
| RU2278159C1 (ru) * | 2004-12-07 | 2006-06-20 | Сергей Ананьевич Тюрин | Штамм бактерий bacillus thuringiensis ssp. kurstaki, обладающий инсектоакарицидной активностью против представителей отрядов lepidoptera, coleoptera, homoptera, thysanoptera и acariformes |
| UA23463U (en) * | 2007-01-04 | 2007-05-25 | Univ Nat Agrarian | Method to control weevils (coleoptera, curculionidae) in forest biocenoses |
| RU2382822C2 (ru) * | 2003-07-07 | 2010-02-27 | Монсанто Текнолоджи, Ллс | ИНСЕКТИЦИДНЫЕ БЕЛКИ, ВЫДЕЛЕННЫЕ ИЗ ВИДОВ БАКТЕРИЙ Bacillus, И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ |
-
2012
- 2012-04-27 MD MDA20120040A patent/MD4196C1/ro not_active IP Right Cessation
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1266824A (en) * | 1986-03-21 | 1990-03-20 | Corinna Herrnstadt | Bacillus thuringienis toxin toxic to the cotton boll weevil, alfalfa weevil, and corn rootworm |
| RU2080065C1 (ru) * | 1993-05-27 | 1997-05-27 | Товарищество с ограниченной ответственностью "Нива" | Бактериальный инсектицид для борьбы с чешуекрылыми |
| RU2122791C1 (ru) * | 1997-12-08 | 1998-12-10 | Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов | Штамм бактерий bacillus thuringiensis var. israelensis, предназначенный для получения препарата, активного против личинок комаров |
| RU2167528C1 (ru) * | 1999-10-19 | 2001-05-27 | Государственный научный центр прикладной микробиологии | Штамм bacillus thuringiensis subsp.kurstaki ipm-46, активный против насекомых из отрядов coleoptera и lepidoptera |
| RU2382822C2 (ru) * | 2003-07-07 | 2010-02-27 | Монсанто Текнолоджи, Ллс | ИНСЕКТИЦИДНЫЕ БЕЛКИ, ВЫДЕЛЕННЫЕ ИЗ ВИДОВ БАКТЕРИЙ Bacillus, И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ |
| RU2278159C1 (ru) * | 2004-12-07 | 2006-06-20 | Сергей Ананьевич Тюрин | Штамм бактерий bacillus thuringiensis ssp. kurstaki, обладающий инсектоакарицидной активностью против представителей отрядов lepidoptera, coleoptera, homoptera, thysanoptera и acariformes |
| UA23463U (en) * | 2007-01-04 | 2007-05-25 | Univ Nat Agrarian | Method to control weevils (coleoptera, curculionidae) in forest biocenoses |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MD4304C1 (ro) * | 2013-08-13 | 2015-04-30 | Институт Зоологии Академии Наук Молдовы | Tulpină de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki - bioinsecticid pentru combaterea lepidopterelor din genul Lymantria |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MD4196B1 (ro) | 2013-02-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hata et al. | Induction of systemic resistance against bacterial leaf streak disease and growth promotion in rice plant by Streptomyces shenzhenesis TKSC3 and Streptomyces sp. SS8 | |
| Nicholson | Roles of Bacillus endospores in the environment | |
| KR101569737B1 (ko) | 벼 근권에서 분리된 신규 식물 내생세균 바실러스 오리지콜라 및 이를 이용한 천연식물 보호 및 식물 강화제 개발 | |
| Boyle et al. | Endophyte-host interactions III. Local vs. systemic colonization | |
| CN104762223A (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌ba-ka3及其应用 | |
| US20170238552A1 (en) | Bacterial endophytes from cucurbit species | |
| CN108728374B (zh) | 一株粘着剑菌dt8菌株及其在降解多效唑中的应用 | |
| CN112646735B (zh) | 一种鳞腮绿僵菌、微生物杀虫剂、制备方法及应用 | |
| US10327448B2 (en) | Bacterium of Bacillus genus and uses thereof | |
| KR101644338B1 (ko) | 살충 활성이 있는 바실러스 투린지엔시스 아종 쿠르스타키 cab565 균주 및 이의 용도 | |
| KR20220097325A (ko) | 포자 형성속도가 빠르며 나방목 해충에 살충 효과를 가지는 바실러스 투린지엔시스 아종 쿠르스타키(Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki) KNU-25 균주 및 이의 용도 | |
| Liu et al. | Evidence of induced systemic resistance against Botrytis elliptica in lily | |
| Aramideh et al. | Characterization and pathogenic evaluation of Bacillus thuringiensis isolates from West Azerbaijan province-Iran | |
| KR101144987B1 (ko) | 크리세오박테리움 ｆｂｆ-7 균주 배양물 및 이를 함유하는 뿌리혹선충 방제용 조성물 | |
| Naqvi et al. | Morphological and biochemical characterization of Xanthomonas campestris (Pammel) Dawson pv. sesami and it's management by bacterial antagonists. | |
| CN117736877B (zh) | 一种绿僵菌菌株及其应用 | |
| MD4304C1 (ro) | Tulpină de bacterii Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki - bioinsecticid pentru combaterea lepidopterelor din genul Lymantria | |
| CN112048457A (zh) | 一株芽孢杆菌31309及其在防治油菜菌核病中的应用 | |
| RU2514023C1 (ru) | Штамм bacillus thuringiensis var. darmstadiensis n 25 в качестве средства комплексного воздействия на вредных жесткокрылых насекомых и фитопатогенные грибы | |
| CN109749970B (zh) | 植物内芽孢杆菌在抗植物寄生线虫中的应用 | |
| KR101649139B1 (ko) | 살충 활성이 있는 바실러스 투린지엔시스 아종 아이자와이 cab566 균주 및 이의 용도 | |
| Khyami-Horani et al. | Efficacy of Jordanian isolates of Bacillus thuringiensis against the citrus leafminer, Phyllocnistis citrella Stainton (Lepidoptera: Gracillariidae) | |
| Ghassemi-Kahrizeh et al. | Isolation, characterization and toxicity of native Bacillus thuringiensis isolates from different hosts and habitats in Iran | |
| CN1132932C (zh) | 一株杀鞘翅目害虫的苏云金芽孢杆菌 | |
| Blibech et al. | Isolation of entomopathogenic Bacillus from a biodynamic olive farm and their pathogenicity to lepidopteran and coleopteran insect pests |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG4A | Patent for invention issued | ||
| KA4A | Patent for invention lapsed due to non-payment of fees (with right of restoration) | ||
| MM4A | Patent for invention definitely lapsed due to non-payment of fees |