EA000295B1

EA000295B1 - Энтомопатогенный препарат против личинок комаров на основе штамма бактерий bacillus thuringiensis var. israelensis h-14 вкпм в-7572

Info

Publication number: EA000295B1
Application number: EA199900041A
Authority: EA
Inventors: Пенкер Бабаевна Авчиева; Ирина Анатольевна Буторова
Original assignee: Ооо "Био-3"
Priority date: 1998-12-24
Filing date: 1998-12-24
Publication date: 1999-02-25
Also published as: EA199900041A1

Description

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к производству средств борьбы с кровососущими комарами.

Известно, что комары и мошки являются переносчиками многих инфекций человека и животных. Особенно тревожное положение возникло с малярией, переносчиком которой является Anopheles maculipenis.

Основным профилактическим мероприятием, предупреждающим массовые заболевания малярией, является борьба с комарами переносчиками. Долгое время успешная борьба с комарами велась различными химическими средствами. При этом большой вред наносился другим обитателям водоемов, в том числе рыбам.

Биопрепараты на основе Вас. thuringiensis var. israelensis обладает высокой токсичностью только для комаров и мошек, но совершенно не токсичен против других насекомых, обитающих в водоемах, а также для рыб.

Наиболее близким к предлагаемому изобретению являются ларвицидные препараты, полученные на основе бактерий Вас. thuringiensis var. israelensis, описанные в патентах РФ № 2064264 и 1121806. Препараты, полученные на их основе, токсичны для комаров родов Aedes, Anopheles, Culex. В табл. 1 приведены данные по токсичности данных препаратов в отношении личинок некоторых видов комаров.

Таблица 1

	LK 50 (мл/л) на личинках комаров
Anopheles messeae	Aedes aegupti
Bac.thuringiensis BTS 393 (пат.РФ № 1121806)	0,00044	0,000030
Bac.thuringiensis ИПМ1501 (пат.РФ № 2064264)	0,0003	0,0004

Недостатком штамма ИПМ 1501 является то, что для культивирования штамма используется среда, содержащая дорогостоящие и дефицитные компоненты, такие как соевая мука, кукурузный крахмал, зеленая патока и т.д. Кроме того, при выращивании на довольно дорогой и дефицитной питательной среде штамм ИПМ1501 проявляет низкую патогенность для личинок всех исследованных видов комаров.

Штамм BTS 393 также имеет недостаточно высокую биологическую активность.

Поиск новых высокоэффективных штаммов является актуальной задачей, поскольку позволяет не только получить новый энтомопатогенный препарат с новыми свойствами, уменьшить риск фаголизиса в производстве, но и значительно снизить затраты на его производство.

Задачей настоящего изобретения является получение более эффективного ларвицидного препарата.

Для решения поставленной задачи предлагается штамм Bacillus thurmgiensis var. israelensis H-14 ВКПМ В - 7572 для приготовления энтомопатогенного препарата против кровососущих комаров. Препарат представ ляет собой стабилизированный спорокристаллический бактериальный комплекс.

Штамм выделен из природной среды и имеет следующие морфологическую и физиолого-биохимическую характеристики.

Клетки палочковидные, прямые с закругленными концами, расположенные одиночно, парами или короткими (2-5 кл) цепочками, размером 1,1-1,2 · 4,0-6,0 мкм, грамположительные, перетрихи. Клетки образуют терминальные споры овальной формы и параспоральные кристаллы неправильной округлой формы разного размера с преобладанием крупных включений размером 0,6-0,8 · 1,0-1,2 мкм. Споры и параспоральные включения формируются внутри вегетативных клеток с последующим высвобождением из клеток. Размеры спор 0,8-0,9 · 1,8-2,0 мкм. Соотношение спор и параспоральных кристаллов примерно 1:1. Степень рассыпания спор в оптимальных условиях роста культуры достигает 99 - 99,5 %. Штамм ВКПМ В - 7572 на L агаре образует крупные однородные колонии R - формы, серовато-белого цвета, матовые, плоские, с шероховатой сетчатой поверхностью с прозрачными изрезанными краями, округлой формы, диаметром 20 - 25 мм ( на 7-ые сутки роста при 28°С при свободном росте). При последовательных 3-х кратных пересевах наблюдается слабая диссоциация не более 1 %.

Штамм бактерий Bacillus thurmgiensis ВКПМ В - 7572 при расщеплении глюкозы образует кислоту и не образует газа, гидролизует крахмал и казеин, каталазоотрицательный, восстанавливает нитраты в нитриты, образуя щелочь на нитратно-солевом агаре. Штамм ВКПМ В-7572 усваивает маннозу и мальтозу. Слабо усваивает сахарозу и сорбит, не усваивает целлобиозу, арабинозу, лактозу, маннит, дульцит .

Штамм ВКПМ В - 7572 проявляет антигенное сродство с сывороткой типового штамма Н - 14 .

Штамм Bacillus thurmgiensis ВКПМ В 7572 непатогенен для человека и животных. Созданный на базе штамма препарат обладает токсичностью для личинок комаров Aedes, Anopheles и Culex. He токсичен для гусениц пчелиной огневки и непарного шелкопряда, капустной белянки.

Пример 1. Штамм Bacillus thurmgiensis ВКПМ В-7572 выращивали на дрожжеполисахаридной среде в колбах на качалке при 29±1С°. Время выращивания 44 ч при 220 об/мин. В качестве посевного материала использовали вегетативную культуру Bacillus thuringiensis, выращенную в течение 17 ч на L агаре.

Продуктивность штамма ВКПМ В - 7572 составила 3,0· 10⁹ кл/мл.

LK₅o в отношении личинок комаров Aedes aegupti составила 0,00002 - 0,000025 мл/л.

Пример 2. Штамм Bacillus thuringiensis ВКПМ В-7572 выращивали на дрожжеполисахаридной среде в ферментере «Ферматрон» с рабочим объемом 100 л. В качестве посевного материала использовали 17 часовую культуру бактерий, предварительно выращенную в колбах на качалке на дрожжеполисахаридной среде.

Температура выращивания 29±1°С. Время выращивания - 40 ч.

После ферментации в культуральную жидкость, представляющую собой спорокристаллический комплекс Bacillus thuringiensis ВКПМ В7572, добавляют определенную концентрацию консерванта и стабилизатора.

LK₅₀ полученного препарата в отношении личинок комаров Anopheles messeae составляет 0,00006 - 0,00009 мл/л.

Пример 3. Штамм бактерий Bacillus thuringiensis ВКПМ В-7572 выращивали на дрожжеполисахаридной среде в условиях Белгородского завода лимонной кислоты на ферментере объемом 10м.

Температура выращивания 29±1°С. Время выращивания 40 ч.

Препарат в виде спорокристаллического комплекса получают, как описано в примере 2.

LR₅₀ препарата в отношении личинок комаров Culex составляет 0,00003-0,00004 мл/л.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Энтомопатогенный препарат против личинок комаров на основе штамма бактерий B.thuringiensis var. israelensis ВКПМ В-7572.