MD1148Z

MD1148Z - Dispozitiv pentru fixarea etajată a pielii în procesul de decelularizare

Info

Publication number: MD1148Z
Application number: MDS20160141A
Authority: MD
Inventors: Ольга МАКАГОНОВА; Виорел НАКУ; Георге МУШЕТ; Адриан КОЧУГ; Марианна ЖИАН; Виолета САРЕВ; Виталие КОБЗАК
Original assignee: Государственный Медицинский И Фармацевтический Университет "Nicolae Testemitanu" Республики Молдова
Priority date: 2016-11-29
Filing date: 2016-11-29
Publication date: 2017-12-31
Also published as: MD1148Y

Abstract

Invenţia se referă la medicina regenerativă, şi anume la dispozitive pentru fixarea pielii în procesul de decelularizare.Dispozitivul pentru fixarea etajată a pielii în procesul de decelularizare include o carcasă formată din trei compartimente tubulare (1) cu diametrul tubului de 1 cm, executate în formă de cerc cu diametrul de 10 cm, amplasate coaxial şi fixate unul de altul prin intermediul a patru tuburi (2) cu lungimea de 10 cm şi diametrul de 1 cm, amplasate pe circumferinţă, la aceeaşi distanţă unul faţă de altul, totodată pe partea de sus a compartimentelor (1), diametral opus, sunt executate câte patru orificii cu diametrul de 2 mm. Dispozitivul mai conţine nişte tije (3) cu lungimea de 2 cm şi diametrul de 1 mm, un capăt al cărora este executat ascuţit, iar pe celălalt capăt este executat un mâner în formă de cilindru. Totodată pe partea de sus a compartimentului de jos al carcasei, diametral opus, sunt fixate cu un capăt patru tije, fixate cu celălalt capăt de o placă rotundă (4) pentru amplasarea unui magnet. Toate elementele dispozitivului sunt executate din inox.

Description

Invenţia se referă la medicina regenerativă, şi anume la dispozitive pentru fixarea pielii în procesul de decelularizare.

Cea mai apropiată soluţie este dispozitivul, care include un recipient cu diametrul de 3 cm şi înălţimea de 3 cm, care conţine patru elemente de fixare executate în formă de cilindru, pe centrul circumferinţei cărora sunt executate orificii cu diametrul de 1 mm, precum şi patru tije cu lungimea de 5 cm şi diametrul de 0,9 mm, un capăt al cărora este executat ascuţit, iar pe celălalt capăt este executat un mâner în formă de cilindru [1].

Dezavantajul acestei soluţii constă în faptul că are o eficacitate scăzută, deoarece necesită un timp mai îndelungat şi efort în procesul de decelularizare a pielii.

Problema pe care o rezolvă invenţia constă în crearea unui dispozitiv, care ar permite o decelularizare etajată, adică mai uşoară şi eficace a pielii, favorizând un acces mai bun pentru schimbarea repetată şi succesivă a reactivilor în procesul de decelularizare şi asigurând o mişcare rotativă dispozitivului.

Dispozitivul pentru fixarea etajată a pielii în procesul de decelularizare, conform invenţiei, înlătură dezavantajul menţionat mai sus prin aceea că include o carcasă compusă din trei compartimente tubulare cu diametrul tubului de 1 cm, executate în formă de cerc cu diametrul de 10 cm, amplasate coaxial şi fixate unul de altul prin intermediul a patru tuburi cu lungimea de 10 cm şi diametrul de 1 cm, amplasate pe circumferinţă, la aceeaşi distanţă unul faţă de altul, totodată pe partea de sus a compartimentelor, diametral opus, sunt executate câte patru orificii cu diametrul de 2 mm, nişte tije cu lungimea de 2 cm şi diametrul de 1 mm, un capăt al cărora este executat ascuţit, iar pe celălalt capăt este executat un mâner în formă de cilindru, totodată pe partea de sus a compartimentului de jos al carcasei, diametral opus, sunt fixate cu un capăt patru tije, iar cu celălalt capăt de o placă rotundă pentru amplasarea unui magnet, totodată toate elementele sunt executate din inox.

Avantajele acestui dispozitiv constau în faptul că asigură scufundarea totală a pielii şi permite o decelularizare etajată, adică mai eficace a ei.

Rezultatul tehnic al invenţiei constă în crearea unui dispozitiv pentru fixarea etajată a pielii în procesul decelularizării, care asigură operativ, sigur, calitativ, uşor, atraumatic, precum şi econom fixarea pielii de prelucrat şi obţinerea unei mişcări rotative a dispozitivului în procesul de decelularizare.

Invenţia se explică prin desenele din fig. 1-3, care reprezintă:

- fig. 1, vederea de ansamblu a dispozitivului pentru fixarea etajată a pielii în procesul decelularizării;

- fig. 2, vederea de jos a dispozitivului.

Dispozitivul pentru fixarea etajată a pielii în procesul de decelularizare include o carcasă formată din trei compartimente tubulare 1 cu diametrul tubului de 1 cm, executate în formă de cerc cu diametrul de 10 cm, amplasate coaxial şi fixate unul de altul prin intermediul a patru tuburi 2 cu lungimea de 10 cm şi diametrul de 1 cm, amplasate pe circumferinţă, la aceeaşi distanţă unul faţă de altul, totodată pe partea de sus a compartimentelor 1, diametral opus, sunt executate câte patru orificii cu diametrul de 2 mm. Dispozitivul mai conţine nişte tije 3 cu lungimea de 2 cm şi diametrul de 1 mm, un capăt al cărora este executat ascuţit, iar pe celălalt capăt este executat un mâner în formă de cilindru. Totodată pe partea de sus a compartimentului de jos al carcasei, diametral opus, sunt fixate cu un capăt patru tije, iar cu celălalt capăt de o placă rotundă 4 pentru amplasarea unui magnet. Toate elementele dispozitivului sunt executate din inox.

Dispozitivul pentru fixarea etajată a pielii în procesul de decelularizare se utilizează în modul următor.

Acest dispozitiv se utilizează în mediu steril sub o hotă cu flux laminar de aer. Prealabil, dispozitivul se sterilizează în autoclavă şi se pregătesc soluţiile pentru decelularizare. Apoi se dezgheaţă o bucată de piele congelată şi cu ajutorul unui bisturiu se secţionează un fragment de piele cu dimensiunile de 10 x10 cm. După înlăturarea ţesutului adipos de pe partea epidermo-dermală, fragmentul de piele se fixează de colţuri prin intermediul tijelor 3 şi orificiilor executate pe partea de sus a compartimentelor 1. Ulterior carcasa se scufundă într-un vas de sticlă cu soluţie de 0,25% Tripsin-EDTA la temperatura camerei, timp de 6 ore. După aceasta vasul de sticlă este amplasat pe un agitator magnetic, care datorită magnetului plasat pe placa rotundă 4, imprimă o mişcare orbitală necesară procesului de decelularizare. Apoi fragmentul de piele se spală de 3 ori în apă distilată timp de 15 min de fiecare dată, după care se incubează în soluţie de 70% etanol timp de 12 ore. Ulterior fragmentul de piele se incubează în sol. Peroxid hidrogen 3% timp de 15 min. Fragmentul de piele iarăşi se spală de 3 ori în apă distilată timp de 15 min de fiecare dată, apoi se incubează în 1% Triton X-100 şi 0,26%Tris şi 0,69%EDTA timp de 6 ore, după care în final se spală de 6 ori în apă distilată timp de 15 min de fiecare dată. Toate aceste etape sunt efectuate la temperatura camerei cu ajutorul unui agitator orbital. Apoi fragmentul de piele se spală în soluţie de serum-free Dulbeco modificat Eagle mediu (DMEM) cu 1% penicilină/streptomicină cu ajutorul unui agitator magnetic la temperatura de 37°C timp de 24 ore. Ulterior pielea este liofilizată şi stocată într-un disicator pâna la utilizare. Fiecare fragment de piele este fixat şi preparat pentru investigaţie histologică, fiind colorat cu hematoxilin şi eosin. Pentru a măcina pielea decelularizată ea se taie în benzi de 1 cm lăţime şi se plasează într-un măcinător. După o spălare minuţioasă, pielea se scufundă în soluţie de DMEM fără ser cu amestecul antibiotic şi antimicotic de 1%, continuând procesul pe agitatorul magnetic la temperatura de 37°C timp de 24 ore.

Curăţarea dispozitivului se efectuează prin dezinfectarea cu detergenţi şi soluţii degresante şi sterilizarea ulterioară în autoclavă.

Exemplu

După o sterilizare prealabilă a dispozitivului şi înlăturarea ţesutului adipos de pe partea epidermo-dermală, fragmentul de piele cu dimensiunile de 10 x10 cm a fost fixat de colţuri prin intermediul tijelor 3 şi orificiilor executate pe partea de sus a compartimentelor 1, fiind scufundată într-un vas de sticlă cu soluţie de 0,25% Tripsin-EDTA timp de 6 ore la temperatura camerei. Apoi fragmentul de piele a fost spălat de 3 ori în apă distilată timp de 15 min de fiecare dată, după care incubat în soluţie de 70% etanol timp de 12 ore. Ulterior fragmentul de piele a fost incubat în soluţie de Peroxid hidrogen 3% timp de 15 min, apoi spălat de 3 ori în apă distilată timp de 15 min de fiecare dată. După aceasta fragmentul de piele a fost incubat în soluţie de 1% Triton X-100 şi 0,26%Tris şi 0,69%EDTA timp de 6 ore, în final a fost spălat de 6 ori în apă distilată timp de 15 min de fiecare dată. Toate aceste etape au fost efectuate la temperatura camerei cu ajutorul unui agitator orbital. Apoi fragmentul de piele a fost spălat în soluţie de serum-free Dulbeco modificat Eagle mediu (DMEM) cu 1% penicilină/streptomicină cu ajutorul unui agitator magnetic la temperatura de 37°C timp de 24 ore. Ulterior pielea a fost liofilizata şi stocată într-un disicator până la utilizare. Fiecare fragment de piele a fost fixat şi preparat pentru investigaţie histologică fiind colorat cu hematoxilin şi eosin. Pentru a măcina pielea decelularizată ea a fost tăită în benzi de 1 cm lăţime şi plasată într-un măcinător. După o spălare minuţioasă, pielea a fost scufundată în soluţie de DMEM fără ser cu amestecul antibiotic - antimicotic de 1%, continuând procesul pe agitatorul magnetic la temperatura de 37°C timp de 24 ore.

Toate fragmentele de piele au fost liofilizate şi stocate în desicator până la utilizare. Cu scopul detectării rezidiului celular, a resturilor nucleare, precum şi pentru vizualizarea arhitecturii matricii extracelulare, mostrele de piele au fost fixate şi preparate pentru examen histologic, fiind colorate cu hematoxilin şi eosin. S-a efectuat cuantificarea spectrofotometrică a cantităţii de AND, s-au obţinut următoarele rezultate:

Rezulatatele cuantificării cantităţii de ADN (ng/µl) Decelularizarea cu tripsină şi triton Control (pielea nedecelularizată) 12,5 Repetiţia 1 4,8 Repetiţia 2 4,8 Repetiţia 3 4,8

Dispozitivul corespunde cerinţelor şi normelor sanitare, toate piesele dispozitivului fiind executate din material inoxidabil, şi asigură o uşoară decelularizare a pielii.

Acest dispozitiv se utilizează pentru fixarea pielii în procesul decelularizării în Laboratorul inginerie tisulară şi culturi celulare şi la catedrele universităţii.

1. MD s 2016 0131 2017.03.31

Claims

Dispozitiv pentru fixarea etajată a pielii în procesul de decelularizare, care include o carcasă formată din trei compartimente tubulare (1) cu diametrul tubului de 1 cm, executate în formă de cerc cu diametrul de 10 cm, amplasate coaxial şi fixate unul de altul prin intermediul a patru tuburi (2) cu lungimea de 10 cm şi diametrul de 1 cm, amplasate pe circumferinţă, la aceeaşi distanţă unul faţă de altul, totodată pe partea de sus a compartimentelor (1), diametral opus, sunt executate câte patru orificii cu diametrul de 2 mm, nişte tije (3) cu lungimea de 2 cm şi diametrul de 1 mm, un capăt al cărora este executat ascuţit, iar pe celălalt capăt este executat un mâner în formă de cilindru, totodată pe partea de sus a compartimentului de jos al carcasei, diametral opus, sunt fixate cu un capăt patru tije, fixate cu celălalt capăt de o placă rotundă (4) pentru amplasarea unui magnet, totodată toate elementele sunt executate din inox.