MD1132Z

MD1132Z - Dispozitiv pentru fixarea pielii în procesul de decelularizare

Info

Publication number: MD1132Z
Application number: MDS20160131A
Authority: MD
Inventors: Ольга МАКАГОНОВА; Виорел НАКУ; Георге МУШЕТ; Адриан КОЧУГ
Original assignee: Государственный Медицинский И Фармацевтический Университет "Nicolae Testemitanu" Республики Молдова
Priority date: 2016-11-18
Filing date: 2016-11-18
Publication date: 2017-10-31
Also published as: MD1132Y

Abstract

Invenţia se referă la medicina regenerativă, şi anume la dispozitive pentru fixarea pielii în procesul de decelularizare.Dispozitivul pentru fixarea pielii în procesul de decelularizare include un recipient (1) executat rotund cu diametrul de 3 cm şi înălţimea de 3 cm, patru elemente de fixare (2) executate în formă de cilindru, pe centrul circumferinţei cărora sunt executate orificii cu diametrul de 1 mm, totodată elementele (2) sunt fixate pe circumferinţă, la aceeaşi distanţă unul faţă de altul, pe partea interioară a peretelui recipientului (1), patru tije (3) cu lungimea de 5 cm şi diametrul de 0,9 mm, un capăt al cărora este executat ascuţit, iar pe celălalt capăt este executat un mâner (4) în formă de cilindru, totodată toate elementele sunt executate din inox.

Description

Invenţia se referă la medicina regenerativă, şi anume la dispozitive pentru fixarea pielii în procesul de decelularizare.

Cea mai apropiată soluţie este vasul Petri, care reprezintă un rezervor în care este plasată pielea în procesul decelularizării [1].

Dezavantajul acestei soluţii constă în faptul că are o eficacitate scăzută, deoarece necesită un timp mai îndelungat şi efort în procesul de decelularizare a pielii.

Problema pe care o rezolvă prezenta invenţie constă în crearea unui dispozitiv, care ar permite o decelularizare mai uşoară şi eficace a pielii, favorizând un acces mai liber pentru schimbarea repetată şi succesivă a reactivilor în procesul de decelularizare şi asigurând o mişcare rotativă a dispozitivului.

Dispozitivul pentru fixarea pielii în procesul de decelularizare, conform invenţiei, înlătură dezavantajele menţionate mai sus prin aceea că include un recipient executat rotund cu diametrul de 3 cm şi înălţimea de 3 cm, patru elemente de fixare executate în formă de cilindru, pe centrul circumferinţei cărora sunt executate orificii cu diametrul de 1 mm, totodată elementele de fixare sunt fixate pe circumferinţă, la aceeaşi distanţă unul faţă de altul, pe partea interioară a peretelui recipientului, patru tije cu lungimea de 5 cm şi diametrul de 0,9 mm, un capăt al cărora este executat ascuţit, iar pe celălalt capăt este executat un mâner în formă de cilindru, totodată toate elementele sunt executate din inox.

Avantajele acestui dispozitiv constau în faptul că asigură scufundarea totală a pielii şi permite o decelularizare mai eficace.

Rezultatul tehnic al invenţiei constă în crearea unui dispozitiv pentru fixarea pielii în procesul decelularizării, care asigură operativ, sigur, calitativ, uşor, atraumatic, precum şi econom fixarea pielii de prelucrat.

Invenţia se explică prin desenele din fig. 1-3, care reprezintă:

- fig. 1, vedere de ansamblu a dispozitivului pentru fixarea pielii în procesul decelularizării;

- fig. 2, elementele constructive ale dispozitivului;

- fig. 3, vederea dispozitivului în procesul de decelularizare.

Dispozitivul pentru fixarea pielii în procesul de decelularizare include un recipient 1 executat rotund cu diametrul de 3 cm şi înălţimea de 3 cm, patru elemente de fixare 2 executate în formă de cilindru, pe centrul circumferinţei cărora sunt executate orificii cu diametrul de 1 mm, totodată elementele 2 sunt fixate pe circumferinţă, la aceeaşi distanţă unul faţă de altul, pe partea interioară a peretelui recipientului 1, patru tije 3 cu lungimea de 5 cm şi diametrul de 0,9 mm, un capăt al cărora este executat ascuţit, iar pe celălalt capăt este executat un mâner 4 în formă de cilindru, totodată toate elementele sunt executate din inox.

Dispozitivul pentru fixarea pielii în procesul de decelularizare se utilizează în modul următor.

Acest dispozitiv se utilizează în mediu steril în hota cu flux laminar de aer. În prealabil, dispozitivul se sterilizează în autoclavă şi se pregătesc soluţiile pentru decelularizare. Apoi se dezgheaţă o bucată de piele, după care cu ajutorul unui bisturiu se secţionează un fragment de piele cu dimensiunile de 2x2 cm. După înlăturarea ţesutului adipos de pe partea epidermo-dermală, fragmentul de piele se fixează de colţuri prin intermediul tijelor 3 în elementele de fixare 2, fixate pe circumferinţă, la aceeaşi distanţă unul faţă de altul, pe partea interioară a peretelui recipientului 1, în care ulterior se plasează un magnet, după aceasta recipientul se scufundă într-un vas de sticlă cu soluţie de 0,25% Tripsin-EDTA - 37°C, timp de 90 min. Ulterior vasul de sticlă este amplasat pe un agitator magnetic 6 (fig. 3) care, datorită magnetului plasat în recipientul 1, oferă o mişcare orbitală necesară procesului de decelularizare. Apoi fragmentul de piele se spală de 3 ori a câte 15 min în apă distilată şi se incubează în soluţie de 0,1M NaOH timp d 16 ore. Ulterior fragmentul de piele se spală în soluţie tampon salin fosfat Dulbec'o până când soluţia de clătire ajunge la un pH neutru. După o spălare minuţioasă, pielea se scufundă în soluţie de DMEM fără ser cu amestec de antibiotic şi antimicotic de 1%, continuând procesul pe agitatorul magnetic 6 (fig. 3) la temperatura de 37°C timp de 24 ore.

Curăţarea dispozitivului se efectuează prin dezinfectarea cu detergenţi şi soluţii degresante şi sterilizarea ulterioară în autoclavă.

Exemplu

După o sterilizare prealabilă a dispozitivului, fragmentul de piele se fixează de colţuri prin intermediul tijelor 3 în elementele de fixare 2, fixate pe circumferinţă, la aceeaşi distanţă unul faţă de altul, pe partea interioară a peretelui recipientului 1, în care ulterior se plasează un magnet, după care recipientul 1 se scufundă într-un vas de sticlă cu soluţie de 0,25% Tripsin-EDTA - 37°C, timp de 90 min. Ulterior vasul de sticlă se amplasează pe un agitator magnetic care, datorită magnetului plasat în recipientul 1, oferă o mişcare orbitală necesară procesului de decelularizare. Apoi pielea se spală în apă distilată de 3 ori a câte 15 min, după care se incubează în soluţie 0,1M NaOH timp 16 ore. Ulterior fragmentul de piele se spală în soluţie tampon salin fosfat Dulbec'o până când soluţia de clătire ajunge la un pH neutru. După o spălare minuţioasă, fragmentul de piele se scufundă în soluţie DMEM fără ser cu amestec de antibiotic şi antimicotic 1%, continuând procesul pe agitatorul magnetic la temperatura de 37°C timp de 24 ore.

Toate fragmentele de piele au fost liofilizate şi stocate în desicator până la utilizare. Cu scopul detectării rezidiului celular, a resturilor nucleare, precum şi pentru vizualizarea arhitecturii matricei extracelulare, mostrele de piele au fost preparate pentru examen histologic şi ulterior colorate cu hematoxilin şi eosin şi după Vanghizon, utilizând protocoale standard. S-a efectuat cuantificarea spectrofotometrică a cantităţii de ADN şi s-au obţinut următoare rezultate:

Rezulatatele cuantificării cantităţii de ADN (ng/µl) Decelularizarea cu NaOH Control (pielea nedecelularizată) 27,9 Repitiţia 1 4,5 Repitiţia 2 5,1 Repitiţia 3 3,7

Dispozitivul corespunde cerinţelor şi normelor sanitare, toate piesele dispozitivului fiind executate din material inoxidabil şi asigură o uşoară decelularizare a pielii.

Acest dispozitiv se utilizează pentru fixarea pielii în procesul decelularizării în Laboratorul inginerie tisulară şi culturi celulare şi la catedrele universităţii.

1. Decellularization of human dermis using non-denaturing anionic detergent and endonuclease, 2015.09.11 [regăsit la 2017.01.10], găsit pe Internet: <http://www.lifenethealth.org/sites/default/files/files/WP%20-%20Decellularization%20of%20Human%20Dermis%20Using%20Non-Denaturing%20Anionic%20Detergent%20and%20Endonuclease,%20A%20Review.pdf, regăsit>

Claims

Dispozitiv pentru fixarea pielii în procesul de decelularizare, care include un recipient (1) executat rotund cu diametrul de 3 cm şi înălţimea de 3 cm, patru elemente de fixare (2) executate în formă de cilindru, pe centrul circumferinţei cărora sunt executate orificii cu diametrul de 1 mm, totodată elementele (2) sunt fixate pe circumferinţă, la aceeaşi distanţă unul faţă de altul, pe partea interioară a peretelui recipientului (1), patru tije (3) cu lungimea de 5 cm şi diametrul de 0,9 mm, un capăt al cărora este executat ascuţit, iar pe celălalt capăt este executat un mâner (4) în formă de cilindru, totodată toate elementele sunt executate din inox.