MD1132Z - Device for skin fixation in the decellularization process - Google Patents
Device for skin fixation in the decellularization process Download PDFInfo
- Publication number
- MD1132Z MD1132Z MDS20160131A MDS20160131A MD1132Z MD 1132 Z MD1132 Z MD 1132Z MD S20160131 A MDS20160131 A MD S20160131A MD S20160131 A MDS20160131 A MD S20160131A MD 1132 Z MD1132 Z MD 1132Z
- Authority
- MD
- Moldova
- Prior art keywords
- skin
- diameter
- decellularization process
- decellularization
- circumference
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 abstract description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 26
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 2
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 239000012487 rinsing solution Substances 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013382 DNA quantification Methods 0.000 description 1
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
Description
Invenţia se referă la medicina regenerativă, şi anume la dispozitive pentru fixarea pielii în procesul de decelularizare. The invention relates to regenerative medicine, namely to devices for fixing the skin in the decellularization process.
Cea mai apropiată soluţie este vasul Petri, care reprezintă un rezervor în care este plasată pielea în procesul decelularizării [1]. The closest solution is the Petri dish, which is a reservoir in which the skin is placed during the decellularization process [1].
Dezavantajul acestei soluţii constă în faptul că are o eficacitate scăzută, deoarece necesită un timp mai îndelungat şi efort în procesul de decelularizare a pielii. The disadvantage of this solution is that it has low effectiveness, as it requires more time and effort in the skin decellularization process.
Problema pe care o rezolvă prezenta invenţie constă în crearea unui dispozitiv, care ar permite o decelularizare mai uşoară şi eficace a pielii, favorizând un acces mai liber pentru schimbarea repetată şi succesivă a reactivilor în procesul de decelularizare şi asigurând o mişcare rotativă a dispozitivului. The problem solved by the present invention consists in creating a device that would allow easier and more effective decellularization of the skin, favoring freer access for repeated and successive change of reagents in the decellularization process and ensuring a rotary movement of the device.
Dispozitivul pentru fixarea pielii în procesul de decelularizare, conform invenţiei, înlătură dezavantajele menţionate mai sus prin aceea că include un recipient executat rotund cu diametrul de 3 cm şi înălţimea de 3 cm, patru elemente de fixare executate în formă de cilindru, pe centrul circumferinţei cărora sunt executate orificii cu diametrul de 1 mm, totodată elementele de fixare sunt fixate pe circumferinţă, la aceeaşi distanţă unul faţă de altul, pe partea interioară a peretelui recipientului, patru tije cu lungimea de 5 cm şi diametrul de 0,9 mm, un capăt al cărora este executat ascuţit, iar pe celălalt capăt este executat un mâner în formă de cilindru, totodată toate elementele sunt executate din inox. The device for fixing the skin in the decellularization process, according to the invention, eliminates the disadvantages mentioned above by including a round container with a diameter of 3 cm and a height of 3 cm, four fixing elements made in the shape of a cylinder, on the center of the circumference of which holes with a diameter of 1 mm are made, at the same time the fixing elements are fixed on the circumference, at the same distance from each other, on the inner side of the container wall, four rods with a length of 5 cm and a diameter of 0.9 mm, one end of which is made sharp, and on the other end a handle in the shape of a cylinder is made, at the same time all the elements are made of stainless steel.
Avantajele acestui dispozitiv constau în faptul că asigură scufundarea totală a pielii şi permite o decelularizare mai eficace. The advantages of this device are that it ensures total immersion of the skin and allows for more effective decellularization.
Rezultatul tehnic al invenţiei constă în crearea unui dispozitiv pentru fixarea pielii în procesul decelularizării, care asigură operativ, sigur, calitativ, uşor, atraumatic, precum şi econom fixarea pielii de prelucrat. The technical result of the invention consists in creating a device for fixing the skin in the decellularization process, which ensures operative, safe, qualitative, easy, atraumatic, as well as economical fixing of the skin to be processed.
Invenţia se explică prin desenele din fig. 1-3, care reprezintă: The invention is explained by the drawings in Fig. 1-3, which represent:
- fig. 1, vedere de ansamblu a dispozitivului pentru fixarea pielii în procesul decelularizării; - Fig. 1, overall view of the device for fixing the skin during the decellularization process;
- fig. 2, elementele constructive ale dispozitivului; - Fig. 2, the constructive elements of the device;
- fig. 3, vederea dispozitivului în procesul de decelularizare. - Fig. 3, view of the device during the decellularization process.
Dispozitivul pentru fixarea pielii în procesul de decelularizare include un recipient 1 executat rotund cu diametrul de 3 cm şi înălţimea de 3 cm, patru elemente de fixare 2 executate în formă de cilindru, pe centrul circumferinţei cărora sunt executate orificii cu diametrul de 1 mm, totodată elementele 2 sunt fixate pe circumferinţă, la aceeaşi distanţă unul faţă de altul, pe partea interioară a peretelui recipientului 1, patru tije 3 cu lungimea de 5 cm şi diametrul de 0,9 mm, un capăt al cărora este executat ascuţit, iar pe celălalt capăt este executat un mâner 4 în formă de cilindru, totodată toate elementele sunt executate din inox. The device for fixing the skin in the decellularization process includes a round container 1 with a diameter of 3 cm and a height of 3 cm, four fixing elements 2 made in the shape of a cylinder, on the center of the circumference of which holes with a diameter of 1 mm are made, at the same time the elements 2 are fixed on the circumference, at the same distance from each other, on the inner side of the wall of the container 1, four rods 3 with a length of 5 cm and a diameter of 0.9 mm, one end of which is made sharp, and on the other end a handle 4 in the shape of a cylinder is made, at the same time all the elements are made of stainless steel.
Dispozitivul pentru fixarea pielii în procesul de decelularizare se utilizează în modul următor. The device for fixing the skin in the decellularization process is used in the following way.
Acest dispozitiv se utilizează în mediu steril în hota cu flux laminar de aer. În prealabil, dispozitivul se sterilizează în autoclavă şi se pregătesc soluţiile pentru decelularizare. Apoi se dezgheaţă o bucată de piele, după care cu ajutorul unui bisturiu se secţionează un fragment de piele cu dimensiunile de 2x2 cm. După înlăturarea ţesutului adipos de pe partea epidermo-dermală, fragmentul de piele se fixează de colţuri prin intermediul tijelor 3 în elementele de fixare 2, fixate pe circumferinţă, la aceeaşi distanţă unul faţă de altul, pe partea interioară a peretelui recipientului 1, în care ulterior se plasează un magnet, după aceasta recipientul se scufundă într-un vas de sticlă cu soluţie de 0,25% Tripsin-EDTA - 37°C, timp de 90 min. Ulterior vasul de sticlă este amplasat pe un agitator magnetic 6 (fig. 3) care, datorită magnetului plasat în recipientul 1, oferă o mişcare orbitală necesară procesului de decelularizare. Apoi fragmentul de piele se spală de 3 ori a câte 15 min în apă distilată şi se incubează în soluţie de 0,1M NaOH timp d 16 ore. Ulterior fragmentul de piele se spală în soluţie tampon salin fosfat Dulbec'o până când soluţia de clătire ajunge la un pH neutru. După o spălare minuţioasă, pielea se scufundă în soluţie de DMEM fără ser cu amestec de antibiotic şi antimicotic de 1%, continuând procesul pe agitatorul magnetic 6 (fig. 3) la temperatura de 37°C timp de 24 ore. This device is used in a sterile environment in a laminar air flow hood. First, the device is sterilized in an autoclave and the solutions for decellularization are prepared. Then a piece of skin is thawed, after which a 2x2 cm skin fragment is sectioned with a scalpel. After removing the adipose tissue from the epidermal side, the skin fragment is fixed at the corners by means of rods 3 in the fixing elements 2, fixed on the circumference, at the same distance from each other, on the inner side of the wall of the container 1, in which a magnet is subsequently placed, after which the container is immersed in a glass vessel with a 0.25% Trypsin-EDTA solution - 37°C, for 90 min. Subsequently, the glass vessel is placed on a magnetic stirrer 6 (fig. 3) which, due to the magnet placed in the container 1, provides an orbital movement necessary for the decellularization process. Then the skin fragment is washed 3 times for 15 min each in distilled water and incubated in 0.1M NaOH solution for 16 hours. Subsequently, the skin fragment is washed in Dulbecco's phosphate buffered saline until the rinsing solution reaches a neutral pH. After thorough washing, the skin is immersed in serum-free DMEM solution with a 1% antibiotic and antifungal mixture, continuing the process on the magnetic stirrer 6 (fig. 3) at 37°C for 24 hours.
Curăţarea dispozitivului se efectuează prin dezinfectarea cu detergenţi şi soluţii degresante şi sterilizarea ulterioară în autoclavă. The device is cleaned by disinfection with detergents and degreasing solutions and subsequent sterilization in an autoclave.
Exemplu Example
După o sterilizare prealabilă a dispozitivului, fragmentul de piele se fixează de colţuri prin intermediul tijelor 3 în elementele de fixare 2, fixate pe circumferinţă, la aceeaşi distanţă unul faţă de altul, pe partea interioară a peretelui recipientului 1, în care ulterior se plasează un magnet, după care recipientul 1 se scufundă într-un vas de sticlă cu soluţie de 0,25% Tripsin-EDTA - 37°C, timp de 90 min. Ulterior vasul de sticlă se amplasează pe un agitator magnetic care, datorită magnetului plasat în recipientul 1, oferă o mişcare orbitală necesară procesului de decelularizare. Apoi pielea se spală în apă distilată de 3 ori a câte 15 min, după care se incubează în soluţie 0,1M NaOH timp 16 ore. Ulterior fragmentul de piele se spală în soluţie tampon salin fosfat Dulbec'o până când soluţia de clătire ajunge la un pH neutru. După o spălare minuţioasă, fragmentul de piele se scufundă în soluţie DMEM fără ser cu amestec de antibiotic şi antimicotic 1%, continuând procesul pe agitatorul magnetic la temperatura de 37°C timp de 24 ore. After prior sterilization of the device, the skin fragment is fixed to the corners by means of rods 3 in the fixing elements 2, fixed on the circumference, at the same distance from each other, on the inner side of the wall of the container 1, in which a magnet is subsequently placed, after which the container 1 is immersed in a glass vessel with a solution of 0.25% Trypsin-EDTA - 37°C, for 90 min. Subsequently, the glass vessel is placed on a magnetic stirrer which, thanks to the magnet placed in the container 1, provides an orbital movement necessary for the decellularization process. Then the skin is washed in distilled water 3 times for 15 min each, after which it is incubated in 0.1M NaOH solution for 16 hours. Subsequently, the skin fragment is washed in Dulbec'o phosphate buffered saline solution until the rinsing solution reaches a neutral pH. After thorough washing, the skin fragment is immersed in serum-free DMEM solution with a 1% antibiotic and antifungal mixture, continuing the process on a magnetic stirrer at 37°C for 24 hours.
Toate fragmentele de piele au fost liofilizate şi stocate în desicator până la utilizare. Cu scopul detectării rezidiului celular, a resturilor nucleare, precum şi pentru vizualizarea arhitecturii matricei extracelulare, mostrele de piele au fost preparate pentru examen histologic şi ulterior colorate cu hematoxilin şi eosin şi după Vanghizon, utilizând protocoale standard. S-a efectuat cuantificarea spectrofotometrică a cantităţii de ADN şi s-au obţinut următoare rezultate: All skin fragments were lyophilized and stored in a desiccator until use. In order to detect cellular debris, nuclear debris, and visualize the extracellular matrix architecture, skin samples were prepared for histological examination and subsequently stained with hematoxylin and eosin and Vanghizon, using standard protocols. Spectrophotometric quantification of DNA content was performed and the following results were obtained:
Rezulatatele cuantificării cantităţii de ADN (ng/µl) Decelularizarea cu NaOH Control (pielea nedecelularizată) 27,9 Repitiţia 1 4,5 Repitiţia 2 5,1 Repitiţia 3 3,7DNA quantification results (ng/µl) Decellularization with NaOH Control (non-cellularized skin) 27.9 Repetition 1 4.5 Repetition 2 5.1 Repetition 3 3.7
Dispozitivul corespunde cerinţelor şi normelor sanitare, toate piesele dispozitivului fiind executate din material inoxidabil şi asigură o uşoară decelularizare a pielii. The device complies with sanitary requirements and standards, all parts of the device being made of stainless steel and ensuring gentle decellularization of the skin.
Acest dispozitiv se utilizează pentru fixarea pielii în procesul decelularizării în Laboratorul inginerie tisulară şi culturi celulare şi la catedrele universităţii. This device is used to fix the skin during the decellularization process in the Tissue Engineering and Cell Culture Laboratory and at university departments.
1. Decellularization of human dermis using non-denaturing anionic detergent and endonuclease, 2015.09.11 [regăsit la 2017.01.10], găsit pe Internet: <http://www.lifenethealth.org/sites/default/files/files/WP%20-%20Decellularization%20of%20Human%20Dermis%20Using%20Non-Denaturing%20Anionic%20Detergent%20and%20Endonuclease,%20A%20Review.pdf, regăsit> 1. Decellularization of human dermis using non-denaturing anionic detergent and endonuclease, 2015.09.11 [retrieved 2017.01.10], found on the Internet: <http://www.lifenethealth.org/sites/default/files/files/WP%20-%20Decellularization%20of%20Human%20Dermis%20Using%20Non-Denaturing%20Anionic%20Detergent%20and%20Endonuclease,%20A%20Review.pdf, retrieved>
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| MDS20160131A MD1132Z (en) | 2016-11-18 | 2016-11-18 | Device for skin fixation in the decellularization process |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| MDS20160131A MD1132Z (en) | 2016-11-18 | 2016-11-18 | Device for skin fixation in the decellularization process |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| MD1132Y MD1132Y (en) | 2017-03-31 |
| MD1132Z true MD1132Z (en) | 2017-10-31 |
Family
ID=58412679
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| MDS20160131A MD1132Z (en) | 2016-11-18 | 2016-11-18 | Device for skin fixation in the decellularization process |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| MD (1) | MD1132Z (en) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2524619C2 (en) * | 2013-04-02 | 2014-07-27 | Государственное бюджетное учреждение здравоохранения города Москвы Научно-исследовательский институт скорой помощи имени Н.В. Склифосовского Департамента здравоохранения г. Москвы | Method for making dermal matrix |
| MD939Y (en) * | 2015-04-17 | 2015-08-31 | Ip Universitatea De Stat De Medicină Şi Farmacie "Nicolae Testemiţanu" Din Republica Moldova | Device for liver retention in the decellularization process |
-
2016
- 2016-11-18 MD MDS20160131A patent/MD1132Z/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2524619C2 (en) * | 2013-04-02 | 2014-07-27 | Государственное бюджетное учреждение здравоохранения города Москвы Научно-исследовательский институт скорой помощи имени Н.В. Склифосовского Департамента здравоохранения г. Москвы | Method for making dermal matrix |
| MD939Y (en) * | 2015-04-17 | 2015-08-31 | Ip Universitatea De Stat De Medicină Şi Farmacie "Nicolae Testemiţanu" Din Republica Moldova | Device for liver retention in the decellularization process |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Decellularization of human dermis using non-denaturing anionic detergent and endonuclease, 2015.09.11 [regăsit la 2017.01.10], găsit pe Internet: <http://www.lifenethealth.org/sites/default/files/files/WP%20-%20Decellularization%20of%20Human%20Dermis%20Using%20Non-Denaturing%20Anionic%20Detergent%20and%20Endonuclease,%20A%20Review.pdf, regăsit> * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MD1132Y (en) | 2017-03-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| MX9207627A (en) | METHOD FOR TREATING A BONE TO MAKE IT SUITABLE TO TRANSPLANT IT. | |
| CN1967196B (en) | Simplified thin-layer liquid-based cytology cell smeard preparation method | |
| MD1132Z (en) | Device for skin fixation in the decellularization process | |
| CN210583185U (en) | Instrument disinfection mechanism for general surgery department operation | |
| CN104940982B (en) | The preparation method of dressing skin | |
| MD1147Y (en) | Device for skin step-by-step fixation in the decellularization process | |
| CN203829361U (en) | Medical disinfection barrel | |
| MD1148Y (en) | Device for skin step-by-step fixation in the decellularization process | |
| MD939Z (en) | Device for liver retention in the decellularization process | |
| CN104940063A (en) | Medical liquid soap | |
| CN204520983U (en) | Thermometer sterilizing deposits integral box | |
| WO2008097885A3 (en) | Decellularization of soft tissue | |
| CN202761750U (en) | Disinfecting drum for medical instruments | |
| CN209529741U (en) | A kind of medical hysteroscope Minimally Invasive Surgery instrument decontaminating apparatus | |
| CN205729836U (en) | Stent-type apparatus sterilizing basket | |
| CN209518052U (en) | A kind of tiny seed disinfection case efficiently, easy | |
| CN204866778U (en) | Cell culture room glass straw soaks belt cleaning device | |
| CN215696342U (en) | Simple umbilical cord cleaning device capable of being used repeatedly | |
| Alsaedy et al. | Production and investigation of a new effective and safe hand antiseptic | |
| RU136718U1 (en) | DEVICE FOR STERILIZATION OF MEDICAL INSTRUMENTS | |
| CN205054948U (en) | Sterilizing box for acupuncture needles | |
| CN119082042A (en) | Preparation method of skin immortalized cell line of Yangtze river dolphin | |
| CN201394216Y (en) | Tourniquet disinfection container | |
| CN102535178A (en) | Antibacterial environment-friendly down feather making method | |
| CN202437765U (en) | Opening fixing fork for surgical instrument sterilization |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG9Y | Short term patent issued | ||
| KA4Y | Short-term patent lapsed due to non-payment of fees (with right of restoration) |