LV15003B

LV15003B - Farmaceitiska kompozīcija ķermeņa masas pieauguma kontrolei

Info

Publication number: LV15003B
Application number: LVP-13-157A
Authority: LV
Inventors: Ivars KALVIŅŠ; Līga ZVEJNIECE; Maija Dambrova; Baiba ŠVALBE; Edgars LIEPIŅŠ; Antons ĻEBEDEVS; Aleksandrs ČERNOBROVIJS; Larisa Varačeva
Original assignee: Latvijas Organiskās Sintēzes Institūts
Priority date: 2013-10-22
Filing date: 2013-10-22
Publication date: 2015-08-20
Also published as: CA2918741A1; WO2015060702A1; DE112014004843T5; US20160250185A1; LV15003A; WO2015060702A8

Description

Izgudrojums attiecas uz medicīnu, konkrēti uz S-fenotropilu ((S)-2-(2-okso-4fenilpirolidīn-1-il)acetamīdu) saturošām farmaceitiskām kompozīcijām un to pielietošanu ķermeņa masas pieauguma kontrolei.

Viena no neatrisinātām medicīnas problēmām ir aptaukošanās profillakse un 10 ārstēšana, it īpaši slimniekiem ar cukura diabētu vai metabolo sindromu, kā arī pacientiem, kuru pamatsaslimšana ierobežo to spēju veikt fiziskas aktivitātes (D. W. Haslam, W. Ph. T. James. Curbing the obesity epidemic, The Lancet, Vol. 367,

Issue 9522, 13-19 May 2006, Page 1549)

Ir zināmi mēģinājumi ierobežot svara pieaugumu medikamentozā ceļā, 15 pielietojot virkni dažādu medikamentu - tādus kā orlistatu (orlistat), lorkaserīnu (lorcaserin), sibutramīnu (sibutramine), rimonabantu (rimonabant), metformīnu (metformin), eksenatīdu (exenatide), pramlintīdu (pramlintide), kā arī to kombinācijas, tādas kā Redux un Phen-phen (http://en.wikipedia.org/wiki/Anti- obesitv medication).

Viens no retajiem medikamentiem, kurš joprojām ir atļauts lietošanai ķermeņa svara kontrolei, ir orlistats. Tas ir medikaments, kurš bloķē lipāžu darbību un tādējādi traucē taukvielu uzsūkšanos no kuņģa-zarnu trakta. Diemžēl šī preparāta lietošana izsauc nepatīkamas izjūtas pacientiem un kuņģa-zarnu trakta darbības traucējumus, tai skaitā steatoreju, un var izraisīt grūtības kontrolēt vēdera izeju. Daudz bīstamākas orlistata blaknes ir tā inducētie nopietnie aknu bojājumi (http://www.fda.gov/Drugs/DrugSafetv/PostmarketDrugSafetylnformationforPatientsa ndProviders/ucm213038.htm).

Savukārt lorkaserīns tika izstrādāts kā tāds anorektīvs medikaments, kura darbība saistīta ar tā spēju ir selektīvi agonizēt 5-HT₂c receptoru (Thomsen, W. J.;

Grottick, A. J.; Menzaghi, F.; Reyes-Saldana, H.; Espitia, S.; Yuskin, D.; VVhelan, K.; Martin, M. et al. (2008). Lorcaserin, a Novel Selective Human 5Hydroxytryptamine2C Agonist: in Vitro and in Vivo Pharmacological Characterization. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 325 (2): 577-587). Diemžēl šis preparāts izsauc tādas blaknes kā galvassāpes, augšējo elpošanas ceļu infekcijas, nazofaringītu, sinusītu un nelabu dūšu, bet diabēta pacientiem var izraisīt hipoglikēmiju, muguras sāpes, klepu un nelabumu. Šis preparāts uzrāda arī kancerogēnitāti eksperimentos ar žurkām un var izraisīt serotonīna sindromu (http://www.fda.qov/NewsEvents/Newsroom/PressAnnouncements/ucm30999

3.htm, http://www.sfqate.com/business/article/FDA-staff-says-Arena-diet-piH-linkedto-cancer-3174771 .php).

Ķermeņa masas kontrolei samērā plaši lieto sibutramīnu, kurš ir CNS aktīvs serotonīna-norepinefrīna atpakaļuzņemsanas inhibitors. Diemžēl šis preparāts pacientiem var izraisīt pēkšņu nāvi, sirds mazspēju, nieru infarktu un gremošanas trakta darbības traucējumus un tāpēc ir atsaukts no vairāku valstu tirgiem, piemēram, no ASV, Anglijas, ES, Austrālijas, Kanādas un Kolumbijas tirgiem. (http://en.wikipedia.org/wiki/Anti-obesity medication).

Apetīti samazinošā preparāta rimonabanta, kurš ir kanabinoīdu receptora CB1 apgriezenisks inhibitors, izplatīšana tāpat ir pārtraukta, sakarā ar to, ka preparāts izraisa nopietnas depresijas un suicidālas tieksmes (http://news.bbc.co.Uk/2/hi/health/7687311 .stm).

Svara kontrolei diabēta pacientiem tiek lietots arī metformīns, kurš samazina glikozes neosintēzi aknās (George A. Bray and Frank L. Greenway (1999). Current and Potential Drugs for Treatment of Obesitv: Table 19: Clinical trials with metformin for the treatment of obese diabetics. Endocrine Reviews 20 (6): 805-87). Taču šis preparāts izraisa nopietnus kuņģa-zarnu darbības traucējumus, kā arī - tāpat kā fenformīns, tas var inducēt pienskābo acidozi un ar to saistītās veselības problēmas.

No lielmolekulārām vielām ķermeņa masas kontrolei tiek rekomendēts eksenatīds, kurš GLP-1 agonists (glukagonam līdzīgā peptīda -1 agonists) un parasti tiek lietots 2.tipa diabēta ārstēšanā. Šī medikamenta darbīgā viela ir sintētiskais hormons eksendīns-4, un tāpēc tam ir iespējama tikai parenterāla ievadīšana. Arī hormons amilīns un tā sintētiskais analogs pramlintīds, kuru lieto cukura diabēta ārstēšana, uzrāda zināmu aktivitāti attiecībā uz ķermeņa svara samazinājumu. Taču arī šajā gadījumā ir nepieciešama parenterāla ievadīšana (Jones MC (2007). Therapies for diabetes: pramlintide and exenatide American Family Physician 75 (12): 1831-5).

Virkne serotonīnu inducējošu medikamentu ir bijuši lietošanā arī ķermeņa svara kontrolei. Pie tādiem pieder fenfluramīns, deksfenfluramīns, levofluramīns, norfenfluramīns, benfluoreks u.c. Tās ir amfetamīnam līdzīgas vielas bez psihostimulējošas iedarbības. Diemžēl šī tipa preparātiem, līdzīgi kā sibutramīnam, ir raksturīga kaitīga ietekme uz sirdi, it īpaši sirds vārstuļiem ko saista ar to ietekmi un serotonīna 2B receptoru. Līdz ar to joprojām aktuāls ir jautājums par iigstošai lietošanai piemērota ķermeņa masas pieaugumu kontrolējoša perorāli lietojama medikamenta izstrādi, kurš neizraisītu atkarību vai citas nopietnas blaknes.

Mēs negaidīti atklājām, ka izgudrojuma mērķi var sasniegt, ja ķermeņa masas kontrolei izmanto S-fenotropilu ((S)-2-(2-okso-4-fenilpirolidīn-1-il)acetamīdu) saturošas farmaceitiskas kompozīcijas. Krievijā un dažās NVS valstī ir pazīstams preparāts R,S-fenotropils (karfedons). Racēmiskais R,S-fenotropils ir tipiski nootrops medikaments, kurš savā aktivitātē 30-60 reizes pārspēj piracetāmu (Malykh AG, Sadaie MR (2010) Piracetam and piracetam-like drugs: from basie Science to novel clinical applications to CNS disorders. Drugs 70:287-312). Farmaceitiskās kompozīcijas, kas satur racēmisko R,S-fenotropilu, un tiek rekomendētas kā medikamenti, kas stimulē arī cilvēka fiziskās spējas un toleranci pret aukstuma iedarbību.

Fenotropilam piemīt ari citas nootropām zālēm piemītošas īpašības, kā pierādīts klīniskajos un eksperimentālajos pētījumos (Malykh AG, Sadaie MR (2010) Piracetam and piracetam-like drugs: from basie Science to novel clinical applications to CNS disorders. Drugs 70:287-312). Pēc ilgstošas ievadīšanas VVistar žurkām racēmiskais fenotropils samazināja neiralģisko deficīta izpausmes un palīdzēja saglabāt kustību, izpētes un atmiņas eksperimentālās cerebrālās išēmijas modelī (Tiurenkov IN, Bagmetov MN, Epishina W (2007) Comparative evaluation of the neuroprotective activity of phenotropil and piracetam in laboratory animals vvith experimental cerebral ischemia. Eksp Klin Farmakol 70:24-29). Fenotropilam piemīt arī antiepileptiskas īpašības metrazola izraisīto krampju modelī pelēs (Malykh AG, Sadaie MR (2010) Piracetam and piracetam-like drugs: from basie Science to novel clinical applications to CNS disorders. Drugs 70:287-312); un tas arī ievērojami samazināja krampju un izmaiņas EEG epilepsijas pacientiem, kad lietots kopā ar citiem medikamentiem kompleksajā terapijā (Bel'skaia GN, Ponomareva IV,

Lukashevich IG, Tikhomirova IN (2007) Complex treatment of epilepsy vvith phenotropil. Zh Nevrol Psikhiatr Im S S Korsakova 107:40-43; Lybzikova GN, laglova Z, Kharlamova I (2008) The efficacy of phenotropil in the complex treatment of epilepsy. Zh Nevrol Psikhiatr Im S S Korsakova 108:69-70).

Lai gan racēmisko fenotropilu var sadalīt R- un S-enantiomēru veidā, klīniski tas joprojām tiek izmantots kā racēmisks enantiomēru maisījums. Levetiracetams, nootropā preparāta piracetama analogs, klīniski tiek izmantots kā optiski tīrs savienojums, un pretkrampju aktivitāte ir izteikta S-enantiomēra gadījumā (Gower AJ, Noyer M, Verloes R, Gobert J, VVulfert E (1992) ucb L059, a novel anticonvulsant drug: pharmacological profilē in animals. Eur J Pharmacol 222:193-203). Arī oksiracetams var tikt sadalīts R- un S-enantiomēru veidā, turklāt enentiomēriem piemīt stereoselektīva aktivitāte (Almeida JF, Grande M, Moran JR, Anaya J, Mussons ML, Caballero MC (1993) Synthesis of the 3-hydroxy oxiracetam enantiomers, potential nootropic drugs. Tetrahedron: Asymmetry 4:2483-2494). Salīdzinošā farmakoloģiskā aktivitāte R- un S-fenotropila gadījumā liecina, ka Rfenotropilam ir ievērojami lielāka psihostimulējošā aktivitāte nekā S-fenotropilam eksperimentālajos kustību aktivitātes un antidepresantās iedarbības testos (Zvejniece L, Svalbe B, Veinberg G, Grinberga S, Vorona M, Kalvinsh I, Dambrova M. Investigation into stereoselective pharmacological activity of phenotropil. Basic Clin Pharmacol Toxicol. 2011 ;109(5):407-12).

Tiek apgalvots arī, ka racēmiskais fenotropils var tikt lietots svara pieauguma kontrolei (piemēram, WO2013043085).

Tomēr tas, ka R,S-fenotropils jeb karfedons, ir iekļauts sportistiem neatļauto vielu sarakstā, jo tiek atzīts par dopingu, un tā psihostimulējošā ietekme rada arī bažas par iespējamās atkarības veidošanos pie šī preparāta ilgstošas lietošanas. Līdz ar to, lai šāda tipa struktūras varētu tikt plaši pielietotas ķermeņa masas samazināšanai un tās pieauguma kontrolei, bija nepieciešams izveidot tādu medikamentu, kura psihostimulējošā iedarbība būtu samazināta līdz minimumam un kurš neiedarbotos uz pacienta motorisko aktivitāti, kas ir arī šī izgudrojuma mērķis.

Mums negaidīti izdevās atklāt, ka izgudrojuma mērķi var sasniegt ar farmaceitiskas kompozīcijas palīdzību, kura kā darbīgo vielu satur nevis R,S fenotropilu, bet gan S-fenotropilu (1):

Ph

CONH.

(1)

Kaut arī bija zināms, ka racēmiskajam R,S-fenotropilam piemīt spēja samazināt ķermeņa masas pieaugumu, nebija zināms, vai ir iespējams izveidot uz kāda no fenotropiia enantiomēru bāzes medikamentu ķermeņa masas pieauguma kontrolei ar samazinātu ietekmi uz CNS, lai novērstu iespējamās atkarības veidošanos un citas R,S-fenotropilam piemītošās ietekmes uz CNS darbību. Ir labi zināms fenomens, ka vairumā tādu racēmisko zāļu, kuru saistības vietā ar receptoru ir viens vai vairāki optiski aktīvie centri, aktīvs ir tikai viens no enantiomēriem. Tā, piemēram, fenotropilam pēc fizioloģiskās iedarbības un struktūras tuvo fenibutā un baklofēna gadījumā CNS aktivitāti uzrāda tikai R-enantiomērs, kamēr S-enantiomērs ir neaktīvs (Dambrova M, Zvejniece L, Liepinsh E, Cirule H, Zharkova O, Veinberg G, Kalvinsh I. Comparative pharmacological activity of optical isomers of phenibut. Eur J Pharmacol. 2008;583(1):128-34.).

Pārbaudot R,S-fenotropilu un tā R- un S-enantiomēru lokomotoro, antidepresanto un kognitīvo iedarbību mums negaidīti izdevās atklāt, ka fenotropiia gadījums ir izņēmums, kur, pretēji gaidītajam, izrādījās, ka abi fenotropiia enantiomēri vairumā testu uzrāda līdzīga tipa fizioloģisko iedarbību, kas korelēja ar literatūrā zināmajiem racēmiskā fenotropiia efektiem. Tajā pašā laikā mums negaidīti izdevās atklāt, ka, kaut arī R- un S fenotropils virknē testu darbojas līdzīgi, un to koncentrācija smadzenēs arī ir līdzīga, tomēr ir būtiskas atšķirības šo aktivitāti izraisošajās devās. Tā, mēs atklājām, ka statistiski ticamu ietekmi S-fenotropils uz kustību aktivitāti atklātā lauka testā uzrāda tikai 10 reizes lielākā devā kā Rfenotropils. Turklāt S-fenotropils, atšķirībā no R-fenotropila, neuzrāda nekādu ietekmi uz CNS darbību vispārējos CNS testos. Mums izdevās arī atklāt, ka Sfenotropils neuzrāda nekādu aktivitāti pasīvā nosacījuma refleksa testā, kamēr Rfenotropils atmiņu ietekmē būtiski. Tajā pašā laikā mums izdevās parādīt, ka farmaceitiskām kompozīcijām, kas satur S-fenotropilu, piemīt ļoti izteikta aktivitāte uz ķermeņa svara pieaugumu dzīvniekiem, kas ģenētiski ir predisponēti uz aptaukošanos.

Tādējādi mums negaidīti izdevās atklāt, ka, kaut gan fenotropiia R- un Senantiomēri darbojas līdzīgi uz atsevišķiem fizioloģiskajiem procesiem, Sfenotropilam ir negaidītas un būtiskas priekšrocības attiecībā uz tā iespējām lietot šo preparātu saturošas farmaceitiskas kompozīcijas ķermeņa masas perorālai kontrolei, jo tam nepiemīt R,S- un R-fenotropilam raksturīgā ietekme uz CNS tādā mērā, lai tā varētu kavēt S-fenotropilu saturošu farmaceitisko kompozīciju pielietošanu medicīnā ar CNS darbību tieši nesaistītu pataloģiju kontrolei.

Līdz ar to mums negaidīti izdevās parādīt, ka atšķirībā no racēmiskā R,Sfenotropila un R-fenotropila, S-fenotropilu saturošās farmaceitiskās kompozīcijas nodrošina izgudrojuma mērķa sasniegšanu - tāda medikamenta izstrādi, kas būtu augsti efektīvs ķermeņa svara pieauguma kontrolei bez būtiski traucējošas ietekmes uz CNS darbību, un kuram nepiemīt dopingam raksturīgie psihostimulējošie efekti.

Izgudrojuma būtību raksturo, bet neierobežo sekojoši piemēri.

Eksperimentos tika izmantots S-fenotropils, kurš tika iegūts asimetriskajā sintēzē no S-2-etoksikarbonil-3-fenil-4-nitrosviestskābes etilestera (Shēma 1), ko pagatavoja sekojoši; 3,2 g magnija triflāta suspendē 1000 ml hloroforma, pievieno 0,7 ml ūdens, 4,2 g (SaS.S'aS.SaR.S'aRj^^'-ciklopropilidēnbis-tSa.eajdihidro-eH-indenofl ,2c/joksazola, 35,7 g molekulāro sietu 4A un maisa 30 min pie 20°C . Pēc tam pievieno

29,8 g β-nitrostirola, 35,2 g dietilmalonāta un 1,3 g N-metilmorfolīna. Iegūto maisījumu maisa pie 20°C līdz β-nitrostirols ir izreaģējis, reakcijas maisījumu filtrē, nogulsnes mazgā ar hloroformu, šķīdumu apstrādā ar 50 g silikagela, filtrē, un produktu no nogulsnēm atdala ar hloroformu, ietvaicē, pievieno heksānu, un, intensīvi maisot, dzesē.

Ph χ-^χΝ0₂

Mg(OTf)_z, H₂O, N-metilmorfolīns mol. sieti, CHCI₃, 20 °C

EtO

O O

Ph'

OEt

NO,

H₂ (3-4 atm)

Ni(Raney) i-PrOH, 20 °C ->.

DMF, H₂O 130-140 °C

KH, BrCH₂COOEt dioksāns, 125 °C

Ph, NH₃, MeOH Ph,

Shēma 1. S-Fenotropila sintēze.

Kristālisko masu filtrē, mazgā ar nelielu daudzumu auksta heksāna un žāvē gaisā pie 20°C. Iegūst 55,7 g produkta (90%; ee 95-98%). Produktu pārkristalizē no heksāna/etilacetāta maisījuma un iegūst 47,0 g. S-2-etoksikarbonil-3-fenil-4nitrosviestskābes etilestera (76%; ee - >99,9%). Nākošajā stadijā 43,0 g etoksikarbonil-3-fenil-4-nitrosviestskābes etilestera izšķīdina propanolā-2 un pievieno 10,0 g 50% Reneja niķeļa suspensijas ūdenī, kura pirms lietošanas izskalota ar propanolu-2. Reakcijas masu maisa autoklāvā ūdeņraža atmosfērā (H₂spiediens 3-4 atm) pie 20°C līdz S-2-etoksikarbonil-3-fenil-4-nitrosviestskābes etilesteris ir izreaģējis. Reakcijas maisījumu filtrē, niķeļa katalizatoru mazgā ar propanolu-2. Filtrātu ietvaicē līdz 50-60 ml tilpumam, atdzesē līdz -20°C, kamēr masa sakristalizējas. Produktam pievieno aukstu propanolu-2, nofiltrē, mazgā ar propanolu-2 un žāvē gaisā. Iegūst 21,0 g (65%) S-3-etoksikarbonil-4-fenilpirolidona2. Nākošajā stadijā 29,05 g S-3-etoksikarbonil-4-fenilpirolidona-2 ar optisko tīrību 96-97% izšķīdina DMF (54 ml), pievieno ūdeni (3,5 ml) un maisa iegūto šķīdumu 130-140°C temperatūrā, destilējot nost etanola un ūdens maisījumu. Ik pēc 1-2 st maisījumam pievieno pa 3,5 ml ūdens. Kad izejviela ir izreaģējusi, reakcijas maisījumu atdzesē līdz 60°C, ietvaicē vakuumā līdz 40-50 ml tilpumam un, intensīvi maisot, izlej ūdenī. Iegūto suspensiju atdzesē līdz -5°C, filtrē, mazgā ar ūdeni, žāvē vakuumā. Iegūst 16,66 g (83.3%) S-4-fenilpirolidona-2, ko pārkristalizē no toluola un iegūst 12,63 g (63.2%) S-4-fenilpirolidona-2 ar optisko tīrību 99,5%. Nākošajā stadijā 10,46 g kālija hidrīda 30% suspenziju minerāleļļā suspendē 30 ml dioksān un, intensīvi maisot, tai pie 20°C pievieno 11,74 g S-4-fenilpirolidona-2. Iegūto suspenziju maisa 1 st pie 90°C, atdzesē līdz 20°C un pievieno 13,07 g etilbromoacetāta šķīdumu 30 ml dioksāna. Iegūto suspensiju maisa pie 125°C 5-6 st, atdzesē līdz 20°C, intensīvi maisot vispirms pievieno 150 ml etilacetāta un 50 ml piesātināta NaCI šķīduma ūdenī, un pēc tam atšķaida ar ūdeni. Augšējo slāni žāvē ar Na₂SO₄ un ietvaicē vakuumā. Atlikumu izšķīdina 560 ml metanola, dekantē un iegūto S-N-(etoksikarbonil)metil-4-fenilpirolidona-2 šķīdumu metanolā pie 45°C piesātina ar sausu amonjaku un maisa 5 st. Kad izejviela ir izreaģējusi, reakcijas maisījumu ietvaicē, atlikumu izšķīdina etilacetātā un atkārtoti ietvaicē. Iegūto tehnisko produktu izšķīdina 500 ml CH₂CI₂, pievieno 20 g silikagela, maisa 30 min pie 20°C, filtrē, ietvaicē. Atlikumu pārkristalizē no etilacetāta ar aktīvo ogli. Iegūts 10,35 g S-fenotropila (66.6% rēķinot no S-4-fenilpirolidona-2) ar optisko tīrību 99,85%. Produktu pārkristalizē no etilacetāta, un iegūst produktu ar optisko tīrību

99,90%. Iegūtais S-fenotropils tika izmantots farmaceitisko kompozīciju gatavošanai un tā farmakoloģiskās efektivitātes pārbaudēm.

Piemērs 1. Kustību aktivitāte tika pārbaudīta atklātā lauka testā 30, 60, 120, 180 un 5 240 min pēc racēmiskā fenotropila un R- un S- enantiomēru vienreizējas i.p.

injekcijas (1A,B,C,D attēls). Visiem savienojumiem novēroja devas un laika atkarīgu kustības aktivitātes pieaugumu atklātā lauka testā, ko parāda gan noskrietā distance [F(49.360) = 7,781, p <0,0001], gan pārvietošanās ātrums [F(49.360) = 7,135, p <0,0001]. R-fenotropils devās 5, 10 un 50 mg/kg izsauca statistiski ticamu kustības aktivitātes pieaugumu salīdzinājumā ar kontroles dzīvniekiem (F(3,31) = 10.37, p < 0.0001] (1A,C attēls). Bez tam, R-fenotropils devā 50 mg/kg ticamu kustību aktivitātes pieaugumu saglabāja līdz pat 240 min [F(9,80) = 24.03, p < 0.0001] (1 B,D attēls).

Racēmiskais fenotropils bija mazāk aktīvs par R-fenotropilu, bet rezultāti attiecīgajās devās savstarpēji statistiski ticami neatšķīrās. Racēmiskais fenotropils ticami ietekmēja kustību aktivitāti devās 10 un 50 mg/kg un kustību aktivitātes pieaugumu saglabāja līdz pat 180 min (1A,B,C,D attēls).

S-enantiomērs kustību aktivitāti paaugstināja tikai devā 50 mg/kg [F(9,75) = 13.91, p < 0.0001], Bez tam, S-enantiomēra darbība devā 50 mg/kg bija statistiski ticami vājāka salīdzinājumā ar R-enantiomēru darbību atklātā lauka testā [F(9,75) = 10.79, p < 0.0001] (1A,B,C,D attēls).

Piemērs 2. Racēmiskā, R- un S-fenotropila antidepresīvā darbība tika pārbaudīta piespiedu peldēšanas testā (nosakot imobilitātes ilgumu) 30 min pēc savienojumu

i.p. injekcijas devās 10, 50 un 100 mg/kg (2. attēls). Visi pārbaudītie savienojumi parādīja antidepresīvu darbību salīdzinājumā ar kontroles dzīvniekiem [F(12,116) = 25.05, p < 0.0001]. R-fenotropils ticami samazināja imobilitātes ilgumu devās 50 un 100 mg/kg [F(2,27) = 52.99, p < 0.0001], devā 100 mg/kg imobilitātes ilgums tika samazināts 8 reizes salīdzinājumā ar kontroles grupu. R-fenotropila efekts bija ticami augstāks salīdzinājumā ar racēmisko un S-fenotropilu [F(2,27) = 39.13, p < 0.0001], Racēmiskais un S-fenotropils tikai devā 100 mg/kg statistiski ticami samazināja imobilitātes ilgumu salīdzinājumā ar kontroles grupu.

Piemērs 3. Racēmiskā, R- un S-fenotropila ietekme uz atmiņas procesiem tika noteikta ar pasīvo nosacījuma refleksa (PAR) testu, reģistrējot atcerēšanās procesa latento periodu. Racēmiskais un R-fenotropils devā 1 mg/kg ticami palielināja latento periodu salīdzinājumā ar kontroles grupu (3. attēls). Kā redzams 3. attēlā, R5 fenotropila ievadīšana pelēm devās 1 un 10 mg/kg latento periodu par 195% un 185%, respektīvi, salīdzinot ar kontroles grupu (p <0.05). S-fenotropils neietekmēja latento periodu. Bez tam, latentais periods S-fenotropita grupā devā 1 mg/kg statistiski ticami atšķīrās no R-fenotropila grupas (p < 0.05).

Piemērs 4. Inhibējošu ietekmi uz muskuļu spēku un koordināciju novēroja tikai Rfenotropilam cilindra, frakcijas un rotējošā-stieņa testos, kur R-fenotropilam ED50 bija 258 ± 25, 250 ± 40 un 320 ± 60 mg/kg, attiecīgi (1. tabula). Racēmiskais un Sfenotropils neietekmēja muskuļu spēku un koordināciju līdz pat devai 500 mg/kg. Neviens no savienojumiem neietekmēja rektālo temperatūru devā 500 mg/kg (1.

tabula).

TESTI	Fenotropila racemāts ED₅₀ (mg/kg)	R-fenotropils ED₅o (mg/kg)	S-fenotropils ED₅₀ (mg/kg)
Cilindra	>500	258 ± 25	>500
Trakcijas	>500	250 ± 40	>500
Rotējošā-stieņa	>500	320 ± 65	>500
Rektālā temperatūra	>500	>500	>500

1. tabula. Vielu iedarbība uz kustību koordināciju, muskuļu tonusu un perifēro 20 inervāciju. Savienojumi vadīti i.p. devās 50,100, 250 and 500 mg/kg. Vielu iedarbība dažādos testos novērtēta 30, 60, 120 and 180 min pēc savienojumu ievadīšanas.

ED₅o vērtība tika aprēķināta, veicot probit analīzi.

Piemērs 5. S-fenotropilu saturošas kompozīcijas ietekme uz ķermeņa masu. 25 Eksperimentā tika izmantotas Zucker fa/fa (HsdOla:Zucker-Lepfre; Harlan

Laboratories) un Zucker lean līnijas žurkas (HsdOla:Zucker-Lean; Harlan Laboratories) ar ķermeņa masu 100-170 g. Eksperimenta sākumā dzīvnieki bija 6 ίΟ nedēļas veci. Tika nodrošināti eksperimentālo dzīvnieku uzturēšanas standarta apstākļi (gaisa temperatūra 21^OC-23°C, relatīvais gaisa mitrums 65% ± 10%, 12 stundu gaismas/tumsas cikls). Barībai izmantoja standartizēto diētu (R70) no firmas LABFOR (Lactamin AB, Zviedrija), dzeramais ūdens bija pieejams bez ierobežojuma.

Eksperimenta grupās iekļautajiem pieaugušiem žurku tēviņiem tika perorāli vadīta Sfenotropilu saturoša farmacetiska kompozīcija ūdeni vai ūdens vienu reizi dienā no rīta: Zucker lean grupai (n=10), ūdens p.o., Zucker fa/fa kontroles grupai (n=10), ūdens p.o. vai Zucker fa/fa grupai S-fenotropilu saturoša kompozīcija 50 mg/kg (n=5), p.o.. Rezultātu vērtības tika izteiktas kā vidējie lielumi + vidējā standarta kļūda (S.E.M). Rezultātu ticamību pārbaudīja ar t-testu. Rezultāti tika uzskatīti par ticamiem, ja p vērtība bija mazāka par 0,05. Kā redzams 4. attēlā, 12 eksperimenta nedēļu laikā S-fenotropila ievadīšana statistiski ticami samazina Zucker FF žurku svara pieaugumu. Kā redzams 5. attēlā, S-fenotropils kopējo svara pieaugumu samazinu par 22%. Tā kā ZuckerLean kontroles žurku masas pieaugums galvenokārt ir saistāms ar normālu muskuļu masas palielināšanos dzīvniekiem augot, tad S-fenotropila efekts ZuckerFF tauku masas pieauguma izteiksmē ir 39% (6. attēls).

Rezultātu tabula

Grupa	Svara pieaugums 12. nedēja, AUC vienības	Tauku masas pieaugums 12. nedēļa, g
ZucLean	1877 ±69	0
ZucFF-K	3060 ± 60*	173 ±10
ZucFF-S-fen	2645 ± 30’	106±7^#

Tādējādi eksperimenti in vivo pārliecinoši pierāda to, ka patentējamā farmaceitiskā kompozīcija, kas satur S-fenotropilu, ļauj sasniegt izgudrojuma mērķi nodrošināt būtisku ķermeņa masas pieauguma samazinājumu ģenētiski predisponētiem dzīvniekiem.

Savukārt perorālai vai sublingvālai lietošanai ir piemērotas S-fenotropila farmaceitiskās kompozīcijas ar vai bez pārklājuma kapsulu, kaplēšu, tablešu, granulu, dražeju formā, vai arī šķīdumu, sīrupu un citu orāli ievadāmu ārstniecisko formu veidā. To izgatavošanā var tikt izmantoti tradicionālie zāļu formu izgatavošanas paņēmieni. Priekšroka tiek dota kompozīcijām, kuras ir piemērotas, lai izgatavotu orāli ievadāmas ārstnieciskās formas, kā arī sīrupiem un šķīdumiem, kas satur S-fenotropilu un palīgvielas.

Piemēram, viena no iespējamām farmaceitiskajām kompozīcijām, kas ilustrē doto izgudrojumu, ir sekojoša S-fenotropilu saturoša kompozīcija tablešu ražošanai:

S-fenotropiis 50 mg

Ciete 18 mg

Ca-stearāts 1,5 mg

Laktoze 80,5 mg

Kopā 150 mg

Kapsulu ražošanai piemērotas kompozīcijas sastāva ilustrācija ir sekojoša:

S-fenotropils 100 mg

Laktoze 20 mg

Ciete 12 mg

Talks 3 mg

Ca-stearāts 5 mg

Kopā 140 mg

Gadījumā, ja S-fenotropils vai tā farmaceitiski akceptējamā sāls tiek ievadīta injekciju veidā vai pilienu, sīrupa vai dzēriena veidā perorāli, farmaceitiskā kompozīcija satur fenotropilu ar kopējo daudzumu 0,01 līdz 20% pēc svara un kādu no farmaceitiski pieļaujamiem šķīdinātājiem, piemēram - destilētu ūdeni, izotonisko, glikozes vai buferšķīdumu.

Gadījumā, kad aktīvā viela tiek ievadīta tabletēs, kapietēs, dražejās, granulās, pulveros vai kapsulās, tās satur S-fenotropilu vai tā farmaceitiski akceptējamo sāli pēc kopējā daudzuma no 0,01 līdz 0,1 gr tabletē, kapletē, dražejā, kapsulā vai vienā porcijā pulvera vai granulu.

Claims

PRETENZIJAS

1. (S)-2-(2-okso-4-fenilpirolidin-1-il)acetamīds (I) ar farmakoloģisku aktivitāti:

Ph

CONH_Z (I) kur * apzīmē hirālo oglekļa atomu.
2. Farmaceitiska kompozīcija, kas atšķiras ar to, ka tā bez farmaceitiski pielietojamām pildvielām kā darbīgo vielu satur S-fenotropilu ((S)-2-(2-okso-4fenilpirolidin-1 -iljacetamīdu).
3. Farmaceitiska kompozīcija saskaņā ar 2. pretenziju, kas atšķiras ar to, ka tā ir paredzēta ķermeņa masas pieauguma kontrolei cilvēkiem un dzīvniekiem.
4. Farmaceitiska kompozīcija saskaņā ar 2. pretenziju, kas atšķiras ar to, ka tā ir paredzēta perorālai vai sublingvālai ievadīšanai, un tai ir tabletes (ar vai bez pārklājuma), kapsulas, kapletes, dražejas, granulas, pulvera vai šķīduma forma, kura satur pēc masas katrā tabletē, kapsulā, dražejā, vai granulu vai pulvera devā, 0,01 līdz 0,5 g darbīgās vielas, vai arī tas ir 0,01 līdz 20 procentīgs šķīdums vai sīrups perorālai ievadīšanai.
5. Farmaceitiska kompozīcija saskaņā ar 2. pretenziju, kas atšķiras ar to, ka tā ir paredzēta parenterālai ievadīšanai, un tā ir sterils šķīdums, kas satur 0,01 līdz 0,5 g darbīgās vielas katrā parenterālās ievadīšanas devā, kopā ar farmaceitiski akceptējamu šķīdinātāju.
6. Farmaceitiska kompozīcija saskaņā ar 2. pretenziju, kas atšķiras ar to, ka S-fenotropila saturs tajā ir 10 līdz 500 mg.
7. Farmaceitiska kompozīcija saskaņā ar 2. pretenziju, kas atšķiras ar to, ka tā ir paredzēta parenterālai ievadīšanai, un tā ir šķīdums, kas satur S-fenotropilu 0,01 līdz 10 mg/ml.
8. Farmaceitiska kompozīcija saskaņā ar 2. pretenziju, kas atšķiras ar to, ka tā ir paredzēta tādu slimību profilaksei un ārstēšanai, kuru patoģenēze ir saistīta ar aptaukošanos.
9. Farmaceitiska kompozīcija saskaņā ar 2. pretenziju, kas atšķiras ar to, ka tā ir paredzēta aptaukošanās procesa kontrolei cilvēkiem un dzīvniekiem, kuriem ir tieksme uz aptaukošanos sakarā ar problēmām, kas izvēlētas no grupas, kas sastāv no mazkustīga dzīvesveida un palielinātas ēstgribas.
10. Farmaceitiska kompozīcija saskaņā ar 2. pretenziju, kas atšķiras ar to, ka tā ir paredzēta aptaukošanās procesa kontrolei cilvēkiem un dzīvniekiem, kuri slimo ar slimībām, kas izvēlētas no grupas, kas ietver metabolo sindromu un cukura diabētu.
11. Farmaceitiska kompozīcija saskaņā ar 2. pretenziju, kas atšķiras ar to, ka tā ir paredzēta aptaukošanās procesa kontrolei cilvēkiem un dzīvniekiem, kuri lieto medikamentus, kas veicina ķermeņa masas pieaugumu.