LU80297A1 - Amides tetrapeptidiques a activite pharmacologique,procede pour leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant - Google Patents

Description

· fv η—TT^r GRAND-DUCHÉ DE LUXEMBOURG BL“2 4 53/EM/Vd

Brevet . jbL......W / du ?..?.....septembre 197 8 ggjjjÿ Monsieur le Ministre ôyPIÎj de l’Économie Nationale et des Classes Moyennes

Titre délivré ; ........................................ aJS· ys? , _ . , , _ .,., _ , . . „

Service de la Propriété Industrielle

' T 7Π ô£lf LUXEMBOURG

//^i (F# demande de Brevet d’invention I. Requête

La soc.diteïRECKITT &.....COLl-afl PRODUCTS.....LIMITED.,...........................................................(1) .l“17....Burl^.................................................................................................

représentée par M......Ernest MEYERS,ing.oons,en propr.lnd................................ (2) 21 bd» Joseph II, LUXEMBOURG, agissant en qualité de mandataire * o^épese ce vingt-huit septembre mil neuf cent soixante-dtxffihui à_________1.5..............heures, au Ministère de l’Économie Nationale et des Classes Moyennes, à Luxembourg : 1. la présente requête pour l’obtention d’un brevet d’invention concernant : " Amides tétg&pgptidigues à activité pharmacologique, procédé (4) pour leur préparation et compositions pharmaceutiques les contenant w.............................................................................................................................................................................................................................

déclare, en assumant la responsabilité de cette déclaration, que l’(es) inventeur(s) est (sont) : 1.KichaëTirohn R?:KCS,......33 Keaälands Drive......Hass le y Horth__________________________(5) .....Grande-Bretagne..«...........Kristan...Ri^D&,......33....5hurch.„

Uatne, K JînrJserside, Grande-Bret agne, 3 Barrv àraold KQRGAÜ 8Denesv»ayt, Ksssle, N.KuKhs-rside, GrctndG—Brcpüttne 2. la délégation de pouvoir, datée de ........B” 1.1.............................................. le ......14.....f;-put.,..1978.............

3. la description en langue..........Ç..?-i.Ç..i?................................. de l’invention en deux exemplaires ; 4........./....................... planches de dessin, en deux exemplaires ; 5. la quittance des taxes versées au Bureau de l’Enregistrement à Luxembourg, le g&pt.....g.egter.'ibre rail neuf croit roisantc-rLtx-huit......................................................................

revendique pour la susdite demande de brevet la priorité d’une (des) demande(s) de (6) .................................................................... deposee(s) en (7) ...............................................

le vinot-aeuf.....sep:cf;:éMe...Mil.....neuf csat soixante-dix-sept sous.............(8) ...............4.0.4.7.6/71................................................................ ..........................................................................................................................................

au nom de .....1.3..................................................................................................................................................................................................(9) élit domicile pour lui (elle) et, si désigné, pour son mandataire, à Luxembourg ........................................

21 ?xl......ïïocsoîi II..........................................................................................................................................................................................................(io) t sollicite la délivrance d’un brevet d’invention pour l’objet décrit et représenté dans les annexes * susmentionnées, — avec ajournement de cette délivrance à ........... mois.

Le..................................... _ — ✓ II. Procès-verbal de Dépôt

La susdite demande de brevet d'invention a été déposée au Ministère de l’Économie Nationale ΐ et des Classes Moyennes, Service de la Propriété Industrielle à Luxembourg, en date du : 28 seotimbre 1978 ’ FtQ Pr. le Ministre à 15“ heures -i t'.-'iS de l’Économie Nationale et ces- Classes Moyennes,

(nU .. k...........λ'·ι A

* BL-2453 . ‘ / Q-Jl Revendication de la priorité d'une ——-demande de brevet déposée en Grande-N Bretagne le 29 septembre 1977 sous le / _No. 40476/77_

BREVET D'INVENTION

♦ ·»

Soc.dite : RECKITT & COLMAN PRODUCTS LIMITED

| 1-17 Burlington Lane

I GB - LONDON W4 2RW

\ \ x ! ] \ \ \ \ \ " Amides tétrapeptidiques à activité pharmacologique, procédé pour leur préparation et compositions : pharmaceutiques les contenant " \ ! i .

i i * i j j l i j !· m

La présente invention concerne des peptides, des procédés pour leur préparation ainsi que des compositions à usage thérapeutique contenant ces composés.

La présente invention porte plus particulièrement sur des composés de la formule T R1R2Tyr-A-Gly~B-N-C H S(0) C H Λ (I) • n 2n r p 2p+1

P

dans laquelle 1 R représente l'hydrogène, alkyle alkényle , propargyle, >

cycloalkylméthyle C. ou phénylalkyle C

T—o 2 ' R représente l'hydrogène ou alkyle A est un reste de D-sérine ou D-thréonine, chacun d'eux pouvant être éventuellement substitué sur le β-ΟΗ par alkyle ou un j reste D-méthionine, D-raéthionine sulfoxyde ou D-méthionine sulfone ' if if î ou encore le groupe -NH-CR -H-CO- (dans lequel R est alkyle ), |

Ile groupe ayant la configuration D; ß Q β

B est le groupe -NR -CBR-CO- (où R est l'hydrogène ou alkyle L

8 ! et R est -CH^Ar, Ar étant phényle éventuellement substitué par chlore, méthyle, hydroxyle ou méthoxy), le groupe ayant la I configuration L; ! ] est l'hydrogène, alkyle C. „ , phényle ou phényl-alkyle C. r;

J I “ l U i—O

j n est compris entre 2 et 5; p entre 1 et 5; r est 1 ou 2.

s 1 | , L'invention porte également sur les sels d'addition avec les t ; acides de ces composés.

A titre d'exemples pour A, on peut citer les restes I D-alanine, D-leucine, D-isoleucine, D-norleucine, D-valine et î 1 D-norvaline.

I A titre d'exemples pour B, on peut citer les restes | L-phénylalanine, L-o~chlorophény3.alanine, L-p-chlorophénylalanine, K -r * I *i f -1 - 1 . _ ^

Selon un aspect préférentiel , l'invention porte sur des composés de formule I dans laquelle : R représente l'hydrogène, méthyle, allyle, cyclopropylméthyle ou pli én éthyle; 2 : R est l’hydrogène; A est un reste R-sérine, D-thréonine, D-alanine, D-valine, D-norvaline, D-leucine, D-norleucine, D-o-méthylsérine, » D-méthionine, D-méthionine sulfoxyde ou D-raéthionine sulfone ou un résidu d'acide D-a-aminobutyrique; B est un reste L-phénylalanine, L-N-méthylphénylalanine ou L-p-chlorophénylalanine; R est l’hydrogène, alkyle ou phénylalkyle n est 2 ou P est 1 à ) et r est 1 ou 2; ' ainsi que les sels d’addition avec les acides de ces composés.

Les symboles qui sont utilisés dans la présente | description pour les dérivés d’amino-acïde sont ceux habituels l j dans la chimie des peptides tels que repris dans Biochem. J. 126, ! ~ ~ | 773 (1972). Tous les résidus d’amino-aeide sont de la configuration ! naturelle ou L sauf indication contraire.

j j La présente invention a pour un de ces objets j également des compositions thérapeutiques comportant un composé j de la formuleI ou un sel d’addition acide pharraaceutiquement acceptable de ce composé, en association avec les diluants, • supports ou excipients pharmaceutiques admissibles, ί " Les composés se distinguent par une activité pharmacologique. Ainsi, ils présentent une affinité pour les ,| sites récepteurs d'opiate et en tant que tels peuvent être j utilisés comme analgésiques, antagonistes des narcotiques et j agents anti-diarrhétiques. Le test utilisé pour la détection -, i \ ' " de leur activité antagoniste pour des sites récepteurs d'opiate est celui utilisé dans la préparation d'iléon du cobaye stimulé , transmuralement,décrit dans Kosterlitz H.W., et Watt A.J-, Brit. J.

Pharmacol and Chemotherapy 33 j 266-276 (1968)-

Les composés de l'invention peuvent être obtenus par les procédures classiques de la chimie des peptides.

- On peut par exemple les obtenir par couplage séquentiel,habituellement au départ d'un terme final C d'amino-acides activés et convenablement protégés soit par des méthodes en solution classique ou par des procédures en phase solide ou par couplage de fragments constitués de peptides convenablement protégés.

I Des détails concernant la sélection des groupes j protecteurs et des procédés pour leur incorporation de même que ! concernant les conditions de réaction convenables pour la formation · l . e e .

| des liens amido (peptidiques) et l'élimination des groupes | protecteurs peuvent être retrouvés dans les références suivantes : ] (a) ïïouben Weyl ! | Methoden der Organischen Chemie Vol. 16 I Parts I et II Synthese von Peptiden (fhierne 197^0 * (b) Schröder & Lubke "The Peptides" *

Academie Press (1965)· i Les composés de formule I peuvent être préparés à ; \ .

| partir d'un compose de formule i ? H - m2 - W (II) 5 dans laquelle M est un reste d'amino acide ou de peptide * · 3 3 « protégé et W est le groupe NB C H SC EL . (dans laquelle R , j n 2n p 2p+1 u ä / n et p sont comme indiqué précédemment par : j (a) couplage avec un composé de formule ! t Y - ML, - OH (III) ‘ dans laquelle Y est un groupe N-protecteur et est un reste d'amino acide ou de peptide protégé (où et représentent ensemble -Tyr-A-Gly-B- et où A et B sont comme définis ci-dessus), suivi des étapes d’oxydation et d’élimination du ou des groupes „ protecteurs; ou' · (b) oxydation, suivie du couplage avec un composé de formule

Y - - OH

dans laquelle Y et sont comme défini ci-dessus, suivie de l'élimination des groupes protecteurs.

Il est apparu en pratique que dans le cas de la réaction (a), il est plus pratique d'éliminer les groupes ] protecteurs avant d'effectuer l'oxydation.

Le couplage peut être réalisé par des procédures classiques dans la synthèse des peptides, soit avec soit sans : isolation des composés activés correspondants aux composés de formule (III).

Les oxydations se réalisent habituellement dans un i * solvant convenable avec 3 à h équivalents molaires de l'agent d’oxydation. En pratique, il est apparu que des concentrations i i | de sulfure de l'ordre d’environ 20mM donnent des composés de ; „ formule I dans laquelle r = 1 (composés sulfinyles) tandis que j ' des concentrations plus élevées de l'ordre de 200 mM donnent essentiellement des composés de formule (I) dans laquelle r = 2 (composés sulfonyle). Les oxydations peuvent être avantageusement réalisées en utilisant du peroxyde d'hydrogène par exemple dans L'invention sera décrite à titre d'illustration non limitative dans les exemples qui suivent, les températures étant exprimées en degrés centigrades.

Les abréviations suivantes sont utilisées ci-après : BOC t-butyloxycarbonyle

Bu^ t-butyle IBCF isobutylchloroformate Z benzyloxycarbonyle ONSu N-hydroxysuccinimido DCCI dicyclohexylcarbodiimide DCU dicyclohexylurle HONSu N-hydroxysuccinimide NMM N-méthylmorpholine | DMF diméthylformamide i | DCHA dicyclobexylamine | DME 1,2-diméthoxyéthan.e i i | Tmp 3-méthylthiopropyle j Tos tosylate î TMG tétraméthylguanidine.

Les différents composés finale et intermédiaires ï . .

! ont été examinés par chromâtogranhie sur couche mince (t.l.c.) i “· { ! , sur des plaques de gel de silice Kieselgel GF 25^ en utilisant l i les systèmes suivants : ί I iF méthanol, chloroforme 1:9 i ' 1G méthanol, chloroforme 1:19 2B chloroforme, méthanol, acide acétique 19=9;1 2D chloroforme, méthanol, acide acétique JA chloroforme, méthanol, acide acétique, eau 60:18:2:3 ___ _ . _ __f r - 7 - * 4a n-butanol, acétate d'éthyle, acide acétique, eau 1:1:1:1 7B acétate d’éthyle, pyridine, acide acétique, eau 60:20:6:11 7C acétate d'éthyle, pyridine, acide acétique, eau 120:20:6:11 7D acétate d'éthyle, pyridine, acide acétique, eau 240:20:6:11 7E acétate d'éthyle, pyridine, acide acétique, eau 3^0:20:6:11 * 7G acétate d'éthyle, pyridine, acide acétique, eau 960:20:6:11 y 28B acétate d'éthyle, éther de pétrole 40-60° 10:1 32A acétate d'éthyle, i-propanol 9:1 32B acétate d'éthyle, i-propanol 19:1.

! A

M: Γ ^

t J

\ i i ! ! j i i :! i i j ] - !i if i j

H

J

i i 5 ή - δ - β \ I · Exemple 1

Chlorhydrate de L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-H-méthyl-L-phénylalanine-3-méthylsulfinylpropylaniide.

Ce composé a été préparé par un mode opératoire selon le schéma ci-dessous.

L-Tyr D-Ala Gly L-MePhe

BOC OH

BOC---NH Tmp

II

BOC — OH Cl hJ «... «NHTmp ! I (III) l Bu ^ j BOC--ONSU H----- OH BOC_.-—---NHTmp I (IV) l Bu J/ \/ ] / - + I * BOC ----—TC--OH Cl Hp--------NH.Tmp.

i a) - ο/) ! Bu*" J.

i / j BO/-------------------------—^--------1 'NH.Tmp ! 3 i 4' i H- ----------------------------------------------- ----------------------------------------------NH.Tmp : . (VU) 1 I i 2 1 I v ' — ____________ 1 ____________________X~NHT n tp ’ Cl hT1 O (VHI3

! I

i i i (a) N-t-butyloxycarbonyl-O-t-butyl-L-tyrosyl-D-alanine (i) \ t 2,5 6 de BOC-Tyr(Bu )-0H sont dissous dans le DUE, refroidis sur un bain eau et glace et ensuite 0,855 g de KOIÏSu * et 1 ,53 g de DCCI sont ajoutés. On peiunet au mélange réactionnel de s’échauffer à la température ambiante et on agite pendant une nuit- Le DCU est séparé par filtration et le solvant est évaporé. Le résidu est dissous dans 5 ml de DMF et ajouté à la température ambiante à une solution de 0,66 g de D-alanine dans 5 ml de DMF et 1 ml d’eau en présence de 0,86 g de TMG.

Le mélange réactionnel est agité pendant une nuit, le solvant est évaporé et le résidu est traité par Ί00 ml d’eau. La solution aqueuse est extraite par 2 x 50 ml d’acétate d'éthyle et acidifiée , à pH 4 par de l'acide citrique à 10 %. Le mélange est extrait par 2 x 100 ml d’acétate d'éthyle et les extraits organiques combinés 1 sont lavés par de l’eau jusqu'à fin d'acidité et séchés (Na^SO^).

Après évaporation du solvant, on obtient une gomme qui est cristal-| lisée dans l'acétate d'éthyle pour donner 1,5 g du dérivé i | dipeptide (I), rendement 43 Pf. 186-187°, Kf7C = 0,65, i I Bf8A =0,25.

j (b) N-t-butyloxycarhonyl-N-méthyl~L-phénylalanine-3~ 5 — ~ i méthylthiopropyl amide (II) j 1 g de BOC-MePhe-OH est dissous dans 10 ml de dichloro- i | 3 méthane et refroidi à -20° après quoi on ajoute 0,5 g d’isobutyl- ! ή i chloroformate de 0,37 g de KKM. Après 2 minutes, on ajoute 0,51 g !i I „ de Tmp.NH HCl et 0,37 g de UMM et on permet au mélange réactionnel d'atteindre la température ambiante. Après agitation pendant 3 heures, le solvant est évaporé et le résidu est distribué entre i! Ί ; . 100 ml d'acétate d'éthyle et 50 ml d'eau. La couche organique j est lavée par 2 x 50 ml d'une solution saturée de bicarbonate de l'eau jusqu'à fin d'acidité et ensuite par une solution de saumure saturée. La phase organique est séchée sur Na^SO^ et évaporée pour produire le composé (il) sous forme d’une huile (1,3 g. Rf32A = 0,75, Rf7G = 0,8- (c) Lr-t-butyloxycarbonylgIycyl-N-ffléthyl-h-phénylalanine-3-~ méthylthiopropylamide (IV) (i) 1,3 g de BOC-MePhe~NÏÏTmp est traité, à la température ambiante par un excès d'HCl 3,5 M dans 3 ml d’acétate d’éthyle pendant 4θ minutes. Le solvant est évaporé, le résidu est trituré par de l'éther diéthylique à 0°. Un solide hydroscopique est obtenu qui est filtré et séché sur P_0_ sous vide pour donner le 2 5 composé (III) (1 g). Rf7C = 0,25- (ii) 0,69 g de BOC-Gly-OH est dissous dans 10 ml de

J

i dichlorométhane et refroidi à -20°C. 0,53 g d'ïsobutylchloroformate S 1 jj et 0,g de NMM sont ajoutés en agitant. Après 2 minutes, 1,2 g 5 _ -f. , ; de Cl MePhe-NHTmp et 0,4 g de NMM sont ajoutes et on permet i au mélange réactionnel d’atteindre la température ambiante.

ji * On poursuit l'agitation pendant 3 heures supplémentaires, après

J

| quoi le produit réactionnel est traité comme décrit pour (il).

I Le dipeptide amide (IV) est obtenu sous forme d'une gomme.

S * Rendement - 1,25 g | ' Rf32A = 0,7, Rf?G = 0,75· j (d) N-t-butyloxycarbonyl-0-t-butyl-L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl- '3 ~ —— —- ...<-.-·· — - - ... ----.. -- “ ii | TÎ-méthyl-L-phénylalanine-3-raéthylthiopropylamide (VI) - ---» * — --.r - - - _ i \ (i) 1,2 g de BOC-Gly-MePhe-NHTmp est traité à la : ’ température ambiante avec du chlorure d'hydrogène 3,5 M dans ; 5 ml d'acétate d'éthyle pendant ;+5 minutes et ensuite le solvant . est évaporé. Le résidu est trituré par de l'éther et le chlorhydrate - 11 - ‘ ä î ] ’ Il est séché sur P ,,0^- sous vide poussé.

Rendement = 1 g (98 $)

Rf7C = 0,2.

(ii) 0,67 g de BQC-TyrCBu^-D-Ala-OH et 0,59 g de

Cl H^Gly-MePhe-NHTmp sont dissous dans 5 ml de DMF et ensuite refroidis dans un bain eau/glace lorsque 0,*fl5 g de HONSu et 0,338 g de DCCI sont ajoutés suivis de 0,166 g de NMM (1,66 ml 1 d’une solution à 10 °ß> dans le DMF). Le mélange réactionnel .

est amené à la température ambiante et agité pendant 18 heures après quoi le DCÏÏ est séparé par filtration et le solvant est évaporé. Le résidu est dissous dans 150 ml d’acétate d’éthyle, i j lavé par 3 x 50 sil d’une solution saturée de bicarbonate de ] sodium, 5 x 50 ml d’une solution d’acide citrique à 10 % et j l ] de l’eau jusqu’à neutralité et ensuite par une solution saturée j : de saumure. La phase organique est séchée (Na SO^) et évaporée i ' pour donner le composé (VI) sous forme d’une gomme semi-solide.

i Rf7G = 0,65.

j i I (e) ' L-tyrosyl-D-alanyl~glycyl-N-méthyl-L-phénylalanine-3- Ί j méthylthiopropylamide (Vil) j 0,95 g de BOC-Tyr(Bu^)-D-Ala-Gly-MePhe-NHTmp ï ] est traité à la température ambiante par du chlorure d’hydrogene 4 ; 5,5 M dans 5 ml d'acétate d’éthyle pendant -'+5 minutes, après ί quoi le solvant est évaporé. Le résidu est chromatographie sur colonne de gel de silice (60 cm x 2,5 cm) avec le système ; solvant 70· Les fractions appropriées sont rassemblées, évaporées et le résidu est lyophilisé avec de l’eau pour - 12 - > (Eenâeraent = 0,^5 g)

Rf7C = 0,25, Kf3A = 0,^5- (f) Chlorhydrate de L-tyrosyl-D-alanyl~glycyl-N-méthyl~L- phénylalanine-3-wéthyls'ülfinylpropylamide (VIII) - 0,1 g de H-Tyr-D-Ala-Gly-MePhe-NH-Tmp est dissous dans 5 ml d'éthanol et traité à la température ordinaire par du peroxyde d'hydrogène (0,25 ml de 20 volumes). Après .

2 heures, le solvant est évaporé et le résidu est chromatographie I sur une colonne de gel de silice (V? cm x 2,5 cm) avec le I système solvant 3C. Les fractions convenables sont ressemblées, évaporées et le résidu est lyophilisé dans 10 ml d'HCl 0,1 M | pour donner le composé (VIII) sous forme d'un solide blanc | (0,0*15 g).

s | RfpA = 0,13, Rf3B = 0,62, Rf?B = 0,16 fqj = 14,8° j (C = 0,25, HCl 0,1 M).

\ ä Exemple 2

J

| Chlorhydrate de N-méthyl-L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-N-méth;yl-L-_ I - j . phenylalanine-5-méthylsulfinylpropylamide.

\ | Ce composé est obtenu par la procédure schématisée j - au tableau qui suit : ! 5-k i ‘ Γ"

J

i - '15 - L-MeTyr D-Ala Gly L-MePhe

Bi/

BOC-/- ONSu H ...—OH BOC____OH

b/ BOC"/—:----> OH BOC —NHTmp BOC— OH cX~^2--ΝΗΤΓηΡ j · _ BOC----NH.Tmp ! ! i I _ j CI H*-------'--------------NH.Tmp 1 „ t j Bu i / i BOC ------------------"-—--rNH.Tmp ! | j ί j H~------{—-------------r—NHT mp !

I . O

j * . T

! C1 !#-- —------1--—---— NH.imp • f ^ i i S\ s <2;±___ i ' / [ j ' 4 (d) Chlorhydrate de N-métliyl-L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-N- méthyl-L-phénylalanine-3-méthylsulfinylpropylamide 0,1 g de N-Me-Tyr-D-Ala-Gly-MePhe-HHTmp est dissous dans 50 ml d'éthanol et traité à la température ambiante par du peroxyde d’hydrogène (0,25 ml de 20 volumes). Après 2 heures, le solvant est évaporé et le résidu est chromatographie sur colonne de gel de silice (^5 cm x 2,5 cm) avec le système solvant 3C. Les fractions convenables sont rassemblées, évaporées et le résidu est lyophilisé dans 10 ml HCl 0,1 M pour donner le composé du titre sous forme d’un solide blanc (0,055 g)· p L·

Rf3A = 0,15, Rf3B = 0,6*f, Rf?B = 0,16, ßtj* = 19,1° (C = 0,26 dans HCl 0,1 M).

EXEMPLE 3

Chlorhydrate de N-méthyl-L-tyrosyl-D-alanylglycyl-I-phénylalanine-i 3-méthylsulfinylpropylamide

Ce composé est préparé de la manière suivante : (a) K-t-butyloxycarbonyl~L-phénylalanine~3- j • j thiomethylpropylamide | Celui-ci est obtenu à partir de BOC-PheOH et de ί | 3-méthylthiopropylamide par le mode opératoire de l’exemple 1(b), l le produit étant obtenu sous forme d’une huile i | (b) Chlorhydrate de H-méthyl-L-tyrosyl-D-alanylglycyl-L- ! phénylalanine-3-méthylsulfinylpropylamide i Le composé est obtenu en supprimant la protection j de l’amide protégé ci-dessus et en couplant avec BOC Gly OH par j | le mode opératoire de l’exemple 1(c). Le dérivé dipeptide obtenu est séparé du groupe protecteur et couplé avec BOC- Me ïyr(Buu)D-jj Ala OH par le mode opératoire de l’exemple 1(d), après quoi le ! - J. £ J J—î JX ^ ΛΤ-Ιην,ι, λ ,·* 4· ri ^ 4- j-*-·-*' ? A A rci v» "1 cl -· r\ f} ci r » - ·--» λ H-roéthyl-N-t-butyloxycarbonyl O-.t-butyl-L-tyrosyl-D-alanine

Ce dipeptide est préparé (par le procédé de l'exemple 1{a)) en transformant 2,5 g de N-Me-N-BOC-Tyr(Bu )~0H I * en s0n ester actif ONSU et couplage avec 0,731 8 de D-alanine en présence de 0,95^ g de TMG. Le dipeptide est recristallisé dans j acétate d'éthyle/éther de pétrole, rendement = 2 g,

Pf. 109-110°, Bf7D = 0,50.

* (¾) N-méthyl-N-t-butyloxycarbonyl-O-t-butyl-L-tyrosyl-D- I alanyl-glycyl-N-méthyl-L-phénylalanine-3- méthylthiopropylaraide.

Le composé est préparé par le mode opératoire de l'exemple 1(d)(ii) en couplant 0,63^ g de N-Me-N-B0C-Tyr (Bu )-D-Ala-0H avec 0,5^ g de C1~H +.Gly-MePhe-NHTinp dans 5 ml de DMF en utilisant 0,38 g de H0NSU et 0,31 g de DCCI en présence de 0,152 g de I'JMM (1,52 ml d'une solution à 10 °/o dans le DMF) .

i ;! Après le traitement, on obtient une gomme qui solidifie sous vide i poussé.

Rendement : 0,75 g l ij j (c) N-méthyl-L-tyrosyl-D-alanyl-glycyl-N-Hethyl-Ii- l phénylalanine-3-méthylthiopropylajiîide 1 "fc ; 0,75 g de N-Me-K-B0C-ïyr(Bu )-D-Ala-Gly-MePhe-HB Tmp ! sont traités à la température ambiante avec du chlorure d'hydrogène j i 5i5 M en excès dans l'acétate d'éthyle pendant *t0 minutes et ensuite le solvant est évaporé. Le résidu est chromatographie sur colonne de gel de silice (60 cm x 2,5 cm) avec le système solvant 7C. Les fractions convenables sont rassemblées, évaporées et le résidu est lyophilisé dans 15 ml HCl 0,1 K pour donner le composé 1 .·» η _ . τι______i · _n _ f-i____ ( r\ ~z cr ,,Λ I *

Le composé résultant est lyophilisé à l’aide de IHC1 0,1 M pour produire un solide blanc.

2 li M3A * 0,11, Rf3B = 0,54, Rf7B = 0,16./¾^ = 35,8 (C = 0,25, HCl 0,1 M).

EXEMPLE 4 L-tyrosyl-D-sérylglycyl~N-méthyl-h~phénylalanine-3- méthylsulfinylpropylarnide » (a) N-t-butyloxycarbonyl-O-t-butyl-L-tyrosyl-D-sérine 0,95 g (9 mM) de D-sérine sont dissous dans 1,5 ml de NaOH 4M. 4 ml d’eau sont ajoutés suivis de 0,504 g de bicarbonate

Ide sodium solide (6 mM) pour obtenir une solution claire.

Une solution de 3548 g de BOC Tyr (Bu^) ONSu (8 mM) dans 4 ml de DMF est ajoutée et le mélange est agité pendant 48 heures à 22°.

Le solvant est ensuite évaporé et le résidu est dissous dans gO ml d'eaii. La solution aqueuse est réglée à pH 3 à l’aide d'acide citrique aqueux concentré et extraite par 2 x 50 ml de EtOAc. Les extraits combinés Et.OAc sont lavés jusqu’à neutralité, s séchés et évaporés jusqu’à environ 10 ml. 50 ml de cyclohexane sont \ ajoutés et la solution trouble est gardée à 5° pendant 48 heures.

| Le solide obtenu est recueilli par filtration et séché sous vide j pour donner 2,16 g (64 %) du dipeptide souhaité sous forme de ] cristaux, Pf. 158,5-160°.

1 (b) H-t-butyloxycarbonyl-O-t-butyl-L-tyrosyl-D-sérylglycyl- 1 H-méthyl-L-phénylalanine-3-méthylthiopropylamide.

I £ ] Ce composé est obtenu en faisant réagir BOC Tyr (Bu )- ' Pi <?i ‘ D-SerOH avec Cl GlyMePheiïHTmp par le mode opératoire de ' X * 6λ emple 1(d).

A.

(c) L-tyrosyl-D-sérylglycyl-N-méthyl-L-phénylalanine- 3-méthylsulfinylpropylamide

Ce composé est obtenu à partir de pentapeptide protégé en supprimant la protection et par oxydation par le mode opératoire des exemples 1(e) et l(f). Le composé sulfinyle . ‘souhaité est lyophilisé à l’aide d'eau pour donner un solide blanc.

Rf3A = 0,10; Rf^B = 0,47; Rf7B = 0,15.

’ EXEMPLE 5 * L-tyrosyl-D-rnéthionyl(sulfoxyde)glycyl-N-niéthyl-L~phénylalanine- 3-méthylsulfinylpropylamide.

: (a) N-t-butyloxycarbonyl-O-t-butyl-L-tyrosyl-D.-méthionine

Ce dipeptide est préparé par couplage de BOC Tyr (Bu ) ONSu avec le sel sodique de D-méthionine par le mode opératoire de l'exemple 4(a) . Le produit est obtenu sous forme ! | d'un solide vitreux. Rf3A = 0,69; Rf32A = 0,33. Pf. 229,5-230°.

| Le composé est homogène en chromatographie sur film l mince.

j (b) N-t-butyloxycarbonyl-O-t-butyl-L-tyrosyl-D- 5 ----- | méthionylglycyl-N-méthyl-L-phénylalanine-3“ | raéthylthiopropylamide i ] Ce composé est préparé par couplage du diueptide j préparé dans l'exemple 5(a) avec Cl^H^^ly Me Phe NH Tmp par le \ j mode opératoire de l'exemple 1(d). Après chromatographie sur gel 4 de silice, le produit est isolé sous forme d'un verre incolore i

J

I qui est homogène en chromatographie sur film mince.

| Rf7G = 0,4; Rf28B = 0,24.

' (c) l-tyrosyl-D-méthionylglycyl-IT-méthyl-L- • phénylalanine-3-raéthylthio propylamide ’ Ce composé est préparé en supprimant la protection du produit obtenu selon 5(h) par le mode opératoire de l'exemple - 18 - sur couche mince.

Rf2B = 0,67; Rf2D = 0,2^; Rf3B = 0,69.

(d) L-tyrosyl-D-m éthi onyl(sulfoxyde)-N-méthyl-L- phénylalanxne-3-niéthylsul finylpropylamide

Il est obtenu par oxydation du bis-sulfure • correspondant selon l'exemple 1(f). Le bis-sulfure purifié est homogène par chromatographie sur film mince.

pl1

RfJB = 0,59; Rf^A = 0,53; Rf7B = 0,075; = 20,½ (C = 0,525, HCl 0,1 M).

EXEMPLE 6 L-tyrosyl-P-norvalylglycyl-N-méthyl-L-phénylalanine-3-méthylsulfinylpropylamide (a) N-t-butoxycarbonyl-O-t-butyl-L-tyrosyl-D-norvaline 3,27 g de BOC-Tyr(Bu^)-ONSu sont dissous dans 3 ml de DMF. 0,867 g de TMG et 0,996 g de D-norvaline sont dissous dans * 10 ml de DMF. Les deux solutions sont mélangées et on agite pendant 4 jours à 22°.

| Le solvant est éliminé par évaporation et le résidu l est distribué entre 60 ml d'acétate d'éthyle et ^0 ml d'eau.

» * j * ' ] Le mélange est acidifié à pH 3- Les phases sont séparées et la ! phase aqueuse est extraite par 3 x 20 ml d'acétate d'éthyle.

• Les extraits organinues combinés sont lavés rar de l'eau jusqu'à l | neutralité et séchés sur Na^SO^.

j Le dipeptide est obtenu sous forme d'une huile ; incolore (2,02 g; rendement 61,½ %) par évaporation du solvant, i ·

La matière est homogène en chromatographie sur film mince, j · J Rf2B = 0,62; Rf2gB = 0,19; Rf32B = 0,29- ' . (b) N-t-butyloxycarbonyl-O-t-butyl-L-tyrosyl-D- norvalylglycyl-N-méthyl-L-phénylalanine-3" i méthylthiopropylamide ! Le composé est préparé par couplage du dipeptide i préparé en 6(a) avec Cl^H^îly Me Phe KH Tmp par le mode

V

opératoire de l’exemple 1(d). Après chromatographie sur silice, le produit est isolé sous forme d’un produit vitreux incolore qui est homogène en chromatographie sur film mince.

Rf7G = 0,44; Rf28B = 0,27.

Î l | .Ce) L-tyrosyl-D-norvalylglycyl-N-méthyl-L- 3 pli ényl al ani ne-3-m é thy 11 h i opr opylami de i j Il est obtenu par déprotection du produit préparé

H

' en 6(b) par le mode opératoire de l’exemple 1(e). Après i i chromatographie sur silice, l'araide tétrapeptidique est homogène 2 .

j en chromatographie sur film mince.

j Rf2B = 0,46, Rf2D = 0,23, Rf3B = 0,69- i (d) L-tyrosyl-D-norvalylglycyl-K-méthyl-L- ph ényl al a n i n e - 3-m é chy 1 Sul f i ny 1 pr opylami de

Il est préparé par oxydation du sulfure correspondant 6(c) par le mode opératoire de l’exemple 1(f). Le sulfoxyde épuré est homogène en chromatographie sur film mince.

1 Oh

Rf3B = 0,63; Ef4A = 0,67; Rf?B - 0,18, =24,8 - (C = 0,49, HCl 0,1M).

; EXEMPLE 7 L-tyrosyl-D-alanylglycyl-N-méthyl-L-phénylalanine 2-méthylsulfi nylet hy1am i d e.

Le produit est préparé selon le schéma réactionnel I suivant :

Tyr D-Ala Gly MePhe BOC--CH -- CBzl t BOC---OB.zl

But / g ffi

BOC--ONSU CIH^--- __CBzl BCO-OH

Βυ^ BCa~--- CBzl BOC- - NH(Chy^SMe ßu BOC-^------CH Cl hjj?- NH(CH )2SMe BOC-il—_—--:- -:--NH<CH2)gSMe Θ 0

Gl Hg-j-—--—----NHCCH^SMe f 1 Θ © CF HgJ---L-L NH(CH2)2SOMe (a) t-butyloxycarbonyl-N-m éthyl-L-phénylalanine j 2-méthylthioéthylamide I ' ] Le composé est préparé par couplage de s BOC Me Phe OH avec la 2-méthylthioéthylamine par le mode | opératoire de l’exemple 1(b)- Le produit est obtenu sous forme l j d'une huile. RfIG - 0,71; Rf32A = 0,48.

| (b) N -méthyl-L-phénylalanine 2-méthylthioéthylamide i * ' - ................. ....... . - ------- —---... μ -- .i—"* --·~··— — ...I ' — j ' trifluoroacétate .—.- 3 | 410 mg de BOC Me Phe NH(CH ) SMe sont dissous dans | de l’eau/acide trifluoroacétique (1 : 9j5 ml) et la solution est J agitée pendant 1 heure. La solution est évaporée, évaporée à l j nouveau pour éliminer l’eau, l’éthanol et finalement triturée \ avec de l’éther pour produire 3.e sel trifluoroacétate souhaité t I ' * - sous forme d’un solide collant, t ’ Rf3A = 0,65; Ei4a = 0,67; Ef?C = 0,38- I - 21 - (c) Ν-t-butyloxycarbonyl-O-t-butyl-L-tyroayl-D- < „ alanylglycyl-N-méthyl~L-phenylalanine-2- méthylthioéthylamide

5^2 mg (1,16 mM) de BOC Tyr (Bu^D-ala Gly OH

Isont dissous dans 2 ml de EMF et 8 ml de CH^Cl^ et la solution est

refroidie à -20°C. 160 mg (1,16 mM) d’IBCF sont ajoutés suivis de 118 mg (1,16 mM) de NMM. Après 2 minutes, une solution de OîMePhe NH(CH ) SMe (provenant de 1,16 mM du dérivé BOC

correspondant) dans 5 ml de Cïï^Cl^ et 118 mg (1,16 mM) de NMM ! sont ajoutés et on permet au mélange agité d’atteindre la température ambiante. Après ^8 heures, la solution est distribuée j entre de l'acétate d'éthyle et NaHCO aqueux. La couche EtOAc ; est extraite 2 x par une solution aqueuse de KaHCO , 3 x par une solution aqueuse à 10 % d’acide citrique, séchée et évaporée.

•I

] Le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice i j (30 x 2,3 cm). L’élution à l’aide de IPA/EtOAc (1 : 19) donne j ; l’arnide tétrapeptidique pur sous forme d’une gomme clair qui est homogène en chromatographie sur couche mince.

I > Rf1G = 0,Vl, Rf7C = 0,73; Rf32B = 0,29.

! (d) L-tyrosyl-B-alanylglycyl-IT-méthyl-L- j phénylalanine 2-ruéthylthi oéthylamide | Le tétrapeptide protégé 7(c) est débloqué par le i

mode opératoire de l’exemple 1(e). Le produit brut est purifié par chromatographie sur silice à l'aide du système solvant 3A

jj i i pour donner une gomme.· j “ i | Rf3A = 0,hk; RrtA = 0,68; Bf7C = 0,19- i (e) L-tyrosyl-D-alanylglycyl-N-méthyl-L-phénylalanine 2-ra et hyl sul f i nyl éthylami de

Le sulfure de l’exemple 7(d) est oxydé par le mode » opératoire de l’exemple 1(f). Le produit brut est purifié par chromatographie avec échange d’ions sur de la carboxyméthyl-cellulose. La colonne (30 x 1,5 cm) est initialement équilibrée à l'aide de pyridine en solution aqueuse 0,05 et éluée avec un gradient de 1 % pyridine, 1 % acide acétique. L’éluant est analysé par chromatographie sur film mince et les fractions convenables sont recueillies et évaporées. Le résidu est lyophilisé par de l'eau pour produire le sulfoxyde peptidique souhaité sous forme de son sel d’acétate.

PO

Kf3A = 0,17: Rf^A = 0,53; Rf7B = 0,10 /07 s 21,6° (C = 1, HCl 0,1 M).

On notera que pour définir les composés indiqués, on a utilisé le système de nomenclature anglaise et qui permet I de mieux comprendre la succession des chaînons peptidiques et des sels formés en se référant au schéma réactionnel indiqué ! -! et aux composés de départ rois en oeuvre- j J v EXEMPLE 8 ? ! ? L-tyrosyl-D-alanylglycyl-h-méthyl-L-nhenvlalanine-N- { ------------—2--- méthyl-3-rnéthylsulfinyl propylamide

Le composé est préparé de la manière suivante : s 5 (a) H-mêthyl-3-méthylthiopropanarnide I ' | > ' 2,08 g du chlorure d'acide 3_méthylthiopropionique

S

l sont ajoutés à une solution de 5 ml (7,8 M) de méthylamine dans i - ? f de l’éther sec a 0°. Le précipité blanc est élimine par filtration ï « * ____ .

- 23 - • s i i i (b) N-méthyl-3-méthylthiopropylairiine . Le composé est préparé par réduction de N-méthyl-3- méthylthiopror.anamide comme décrit pour la préparation du composé !0(b). Le produit se présente sous forme d’une gomme.

Rf3A = 0,hk.

(c) t-butyloxycarbonyl-N-methyl-l-phénylalanine- • N-méthyl-3-méth.ylthiopropylamide

Ce composé est préparé par couplage de BOCMePheOH avec la N-méthyl-3-méthylthiopropylamine par le mode opératoire de l'exemple 1(b). Le produit pur est obtenu après chromatographie sur colonne de gel de silice à l'aide d'acétate d'éthyle/cyclohexane (1 : 3)· = 0,52, (acétate d'éthyle:cyclohexane, 1:1).

I (d) Chlorhydrate de N-méthyl-L-phénylalanine-N-méthyl-3- méthylthiopropylaraide CH I 3 j 0,8 g de BOC-Me-Phe-K-(CH^)_SCH_ sont dissous dans 2 5 5 I 6 ml de 3M HCl/acétate d'éthyle et agités à la temnérature ! ! ordinaire pendant 40 minutes lorsque le solvant est évaporé.

! Le résidu est trituré par de l'éther sec pour produire un solide l hygroscopique.

! | _ Fondement = 0,500 g. Rf3A = 0,8.

I (s) K-t-butyloxycarbonyl-O-t-butyl-L-tyrosyl-D-

Ialanylglycyl-N-méthyl-L-phénylalanine-N-méthyl- 3-méthylthiopropylamide ! ~~ ] 0,5 g du chlorhydrate de K-méthylphénylalanine-N- i " i Eiéthyl-3“tiéthylpropylamide (8d) sont couplés avec 0,736 g ce | B0C Tyr (Bu )D-Ala Gly OH comme décrit dans l'exemple 7(c).

T ^ ,κ — 13 s, -î 4- f.---T l----d- ---J- -» .... . .. n ____ -» « -i - T . .______ - dH - 4 * (f) L-tyrosyl-D-alanylglycyl-N^méthyl-L-phénylalanine-N-ffléthyl-3-méthylthiopropylamide 0,75 g du peptide protégé 8(e) sont débloqués dans 90 % de TFA comme décrit en ?(b). Un sel trifluoroacétate est obtenu sous forme d’un solide qui est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice en utilisant le système solvant JA. Le solide amorphe est obtenu par lyophilisation.

Rendement = 0,525 g; Rf3A = 0,45; Rf3B = 0,92, Rf7B = 0,¾.

(g) L-tyrosyl-D-alanylglycyl-N-méthyl-L-phénylalanine-N-ra éthyl-3-m éthylsulfi nylpr opylami de I ------- ] Le sulfure de l’exemple 8(f) est oxydé par le mode s I opératoire de l’exemple 1(b). Le produit brut est purifié par i chromatographie à échange d'ion sur carboxyméthyl-Sephadex ! comme décrit dans l'exemple 7(e). Le composé sulfinyle est obtenu à l'état d’un solide amorphe sous forme de son sel acétate.

Rf3A = 0,22; Rf3B = 0,64; Rf7B = 0,¾ = -8,6° (C = 0,5, HCl 0,1M).

EXEMPLE 9 | L-tyrosyl-D-alanylglycyl-K-mé thy1-L-phényl-alanine I * 2-propylsulfinyléthylamide , * ' ‘ ' " I (a) t-butyloxyearbonyl-IÎ-raéthyl-L-phénylalanine 1 2-propylthioéthylamide j -τπιι π . —. * “ “ i j II est préparé à partir de BOC Me Phe OH et de i I 2-propylthioéthylamine par le mode opératoire de l'exemple 1(b).

: * 1 ,39 g d'acide et 650 mg de 2-propylthioéthylamine donnent i j , 1,5 g de produit sous forme d'une gomme.

5 j Rf32B = 0,61; Ri JA = 0,87- (b) N-méthyl-L-phénylalanine 2-propylthi.oéthylamide trifluoracétate 1,4 g d'amide protégé de (a) est déprotégé avec 10 ml d'acide trifluoroacétique aqueux comme dans l’exemple 7(b). La chromatographie sur silice dans chloroforme:méthanol: acide acétique:eau (120 : 36 : 2:3) donne 1,1 g de gomme- Rf3A = 0,61; Rf7B = 0,71.

(c) N-t-butoxycarbonyl-O-t-butyl-L-tyrosyl-D- ‘ alanylglycyl-N-méthyl-L-phénylalanlne 2- -propylthioêthylamide

Par le mode opératoire décrit dans l'exemple 7(c), 11,0 g du sel trifluoroacétate décrit ci-dessus et 1,16 g de t IBOC Tyr (Bu ) D Ala Gly OH donnent un amide tétrapeptidique sous forme d'une gomme qui ne subit pas de purification ultérieure.

i | R13A = 0,73; Rf32A = 0,3- j (d) L-tyrosyl-D-alanylglycyl-N-méthyl-L- i ' | . phénylalanine 2-propylthioéthylamide 5 , , .

î La deprotection du produit résultant de (c) par ί ! | le mode opératoire de l'exemple 7(b) dans 305 mg de l'amide ! { | tétrapeptidique après chromatographie sur silice dans le î chloroforme:méthanol:acide acétique:eau (120 : 36 : 2 : 3).

i 3 Rf3A = 0,46.

Ij I (e) L-tyrosyl-D-alanylglycyl-N-méthyl-L- • -- ί # i phenylalanrne 2-propylsulfinyléthylaraide j | Le produit résultant de (d) est oxydé par le mode | opératoire de l'exemple 1(f). Une chromatographie sur une résine i , carboxyméthyl Sephadex avec un gradient variant de 0,05 So pyridine j dans l'eau à 2 % de pyridine, 2 % d'acide acétïcue dans l'eau i - .

\ permet d'obtenir le sulfoxyde.

i i 1 « Rf3A - 0,32; Rf4A = 0.65: Rf7B = 0.20 EXEMPLE 10 L-tyrosyl-D-alanylglycyl-N-méthyl-L-phénylalanine • . N-isoamyl-N-3-niéthylsulfinylpropylamide (a) 3-méthylthi opropan-N-i soamylamide 2.08 g de chlorure de 3-méthylthiopropionyle dans 30 ml d'éther diéthylique sont ajoutés lentement à une solution agitée de 2,9*4 g d'isoamylamine. Après 15 minutes, le mélange est • * - * extrait deux fois par de l'eau et la couche éthérée est lavée par une solution d'acide citrique et ensuite par de l'eau.

Le séchage et l'évaporation permettent d'ohtenir l'amide sous forme d'une gomme (2,8 g).

RflF = 0,63; Hf7E = 0,79; Rf32A = 0,/49. i (b) iso amyl 3-méthylthiopropylamine 1.9 g de l'amide provenant de (a) dans 20 ml de i tétrahydrofuranne sont traités sous atmosphère d'azote à 0°C i par un complexe borane-tétrahydrofuranne (1 molaire dans 20 ml I de tétrahydrofuranne) et agités pendant la nuit- Une quantité 2 molaires de chlorure d'hydrogène dans 20 ml d'éthanol est ajoutée et le mélange est soumis à reflux pendant 30 minutes, i | évaporé et le résidu est distribué entre l'acétate d'éthyle et j ^ j * de lTeau. La couche aqueuse est bas!fiée et extraite par de Ä * j l'éther. L'extrait séché est évaporé pour donner 1,6 g de l'amine 5 j sous forme d'une huile, j i Rf3A - 0,72; RÎ7B = 0,63; Rf*4A = 0,7k.

'à j ' (c) t-butoxycarbonyl-N-méthyl-L-phénylalanine | " N-isoamyl-N-3-ffléthylthiopropylamide

j . Le composé est préparé à partir de BOC Me Fhe OH

et 525 mg d'isoamyl 3~méthylthiopropylamine par le mode opératoire j - 27 - t · i * ï \ -·

S

acétate d'éthyle/isopropanol 95 : 5, le produit est obtenu sous forme d'une huile qui cristallise au repos (987 mg) ·

RflG = 0,71 - (d) N-méthyl-L-phénylalanine N-isoamyl-N-3-mêthylthio-propylamide trifluoroacétate • Ce composé est préparé selon le mode opératoire de l'exemple 7(b) et obtenu sous forme d'une gomme. .

Rf3A = 0,91; Rf?C = 0,35- (e) H-t-butoxycarbonyl-Q-t--butyl-L-tyrosyl~D- I alanylglycyl-N-méthyl-L-phénylalanine N-isoamyl- N-3-méthylthiopropylamide 1 Au départ de 900 mg du composé à groupe protecteur* j j le N-méthylphénylalanine N-isoamyl-N-3-méthylthiopropylaraide j j trifluoroacétate (d) est couplé avec 9&0 mg de BOC Tyr(Bu^)D-Ala ; ] Gly OH par le mode opératoire de l'exemple 7(c)- La chromatographie i 1 sur silice dans acétate d'éthyle/isopropanol (95:5) donne j i 633 mg d'une gomme.

i

J

j Rf32A = 0,36; RflG = 0,52.

i j (f) L-tyrosyl-D-alanylglycyl-N-mêthyl-L- I phénylalanine H-isoamyl-H-3-méthylthiopropylamide ! i trifluoroacétate j -- i i 580 mg d'amide peptidique protégé provenant de (e) I sont déprotégés par le mode opératoire de l'exemple 700- j La chromatographie sur silice dans le chloroforme/ffléthanol/ i acide acétique/eau (120:3^:2:3) donne 311 mg de produit.

Rf3A = 0,55; Rf7C = 0,28; Rf^A = 0,56.

! - 28 - ! (g) L-tyrosyl-D-alanylglycyl-N-méthyl-L-phénylalanine . . N-isoamyl-N-3-raéthylsulfinylpropylamide L’oxydation de 280 mg de méthylthiopropylamide provenant de (f) selon l'exemple 1(f) et la purification par chromatographie sur résine carboxyraéthyl Sephadex (forme pyridinium) dans 0,05 % de pyridine, suivies par un gradient variant de 1 % pyridine, 1 % d'acide acétique, donnent un produit qui est lyophilisé dans l'eau et obtenu sous forme de sel acétate (189 mg) *

Rf3A = 0,29; HfifA = 0,58; Rf7B = 0,26, /ajfS3 7,7° ; (C = 0,9 dans HCl 0,1M).

I EXEMPLE 11 j L-tyrosyl-D-alanylglycyl-N-méthyl-L-phénylalanine I K-5-méthylsulfinylpropyl-N-2-phénylethylamide (a) 3-méthylthiopropan~N-2-phényléthylamide

Le composé est préparé à partir de 2,76 g de chlorure ; de 3-méthylthiopropionyle et 5,°4 g de 2-phényléthylamine par | le mode opératoire de l'exemple io(a). 5,79 g du produit solide l | , apparaissent purs par chromatographie sur couche mince- j V. Un échantillon cristallise à partir de ni éthanol aqueux sous

-I

J

I forme d'aiguilles, Pf- 56-59°- ' ) j (b) N-3-méthylthiopropyl-K-2-phényléthylamine , j - ----1 -----—"ur"1 ‘ J| La réduction de 2,23 g de 3-méthylthiopropan-N-2-

J

i phényléthylamide par le mode opératoire de l'exemple iO(b) Ί , .

.! > donne 1,ί g d'amide sous forme d'une huile.

!! I Rf7C = 0,29; Bf^A = 0,69, Rf3A = 0,5*1- ! 4 • fc ( <3 ) N-t-butoxycarbonyl-H-méthyl-L-ph énylalanine N~3-méthylthiopropy3.-N-2-phényléthylamide 627 mg de l'amine provenant de (b) sont couplés avec BOC MePhe OH (provenant de 1,38 g du sel dicyclohexylamine) par le mode opératoire de l'exemple 1(b). Le produit (1,39 g) , est obtenu sous forme d’une huile.

Rf3A = 0,89; Rf32A = 0,68.

(d) N-méthyl-L-phénylalanine N-3-méthylthiopropyl- N-2-phényléthylamide trifluoroacét.ate 1622 mg de l'amide protégé provenant de (c) sont traités avec de l’acide trifluoroacétique comme dans l’exemple 7(*>)< 5

H

ï j Le sel d’amine est obtenu sous forme d'une gomme.

3 \ Rf3A = 0,73; RfAA = 0,72;'Rf7C = 0,½.

.1 j (e) N-t-butoxycarbonyl-O-t-butyl-L-tyrosylr I D-alanylglycyl-N-méthyl-L^phénylalanine i “ r ; r \ N-3“^cthylthiopropyl-N-2-phénylêthylamide j — —«---— — i j Le composé est préparé à partir du sel provenant de i t ] (d) et de 6I3 mg c BOC Tyr (Bu ) D Ala Gly OH par le mode j 5 opératoire de l’exemple 7(c). Après chromatographie sur silice j | dans le solvant 32B, on l'obtient sous forme d’une gomme (^91 mg) .

î v RflG = 0,A3, Rf32A = 0,33.

\ j (f) L-tyrosyl-D-alanylglycyl-H-méthyl-L-phénylalanine j N-3-méthylthiopropyl-K-2-ph énylêthylami de i j trifluoroacétate i |i k-00 mg de l'amide protégé provenant de (e) sont deprotegés par une solution d’acide trifluoroacétique par le I · · mode opératoire de l'exemple 7(b) et permettent d’obtenir 290 mg 3 du composé du titre sous forme d’un solide.

! f . . * - 30 - _ (g). L-tyrosyl-D-alanylglycyl-N-méthyl-L-phénylalanine N-3-méthylsulfinylpropyl-iï-2-phényléthylamide 2β0 mg de L-tyrosyl-D-alanylglycyl-N-méthyl-L-phénylalanine N~3-méthylthiopropyl-N-2-phényléthylamide sont oxydés par le mode opératoire de l'exemple 1(f). La purification par chromatographie à échange d’ion sur une résine de carboxyméthyl-cellulose avec un gradient variant de 0,05 % de pyridine à 1 % de pyridine, 1 °/o d’acide acétique permet d’obtenir 176 mg j du sulfoxyde souhaité.

PO

Ef3A = 0,31; Ef*fA = 0,57, Ef7B = 0,23. /«/539 -13,9° (C = 1 dans HCl 0,1M).

| EXEMPLE 12

Chlorhydrate de h-tyrosyl-D-alanylglycyl-N-méthyl-L-phénylalanine- ! | 2-ra éthylsuifonylpr opylami de | Le composé est préparé par oxydation du sulfure \ j correspondant (voir exemple 1e). 110 mg de Tyr D-Ala Gly MePhe ; NH (CH_),SMe sont dissous dans 5 ml d’éthanol et traités à la ! 2 3 I température ambiante à l’aide de 0,25 ml de peroxyde d’hydrogène \ j à 20 volumes. Après agitation pendant 2 heures, le solvant est ] ( évaporé et le résidu est chromâtographié sur colonne de gel de \ \ silice (A-5 cm x 2,5 cm) avec le système solvant 3C- La sulfone j ! souhaitée est éluée avant le sulfoxyde correspondant. Les fractions î i sont analysées par chromatographie sur film mince (système 3A) et celles contenant la sulfone pure sont recueillies, évaporées ; et le résidu est lyophilisé à l’aide de HCl 0,1 îi pour donner i j Tyr D-Ala Gly Me Phe NH(CH) J3(0^)CH (30 mg) sous forme d’un j - · 3 ; solide blanc. Kf3A = 0,15; Rf3B = 0,67; Rf7B ~ 0,25-

n F

•i 1 I _ 1 /L /Λ in r\ on πλί n < re\ i - 31 - f · « i e EXEMPLE 13

Chlorhydrate de N-méthyl-L-tyrosyl-P~alanylglycyl-N-méthyl-L-phénylalanine 3-ffléthylsulfonylpropylamide

Le composé est préparé par oxydation du sulfure correspondant (exemple 2c) par le mode opératoire de l’exemple 12* On obtient Me Tyr D-Ala Gly Me Phe NHOCH^^SO^CH^ sous forme d’un solide blanc. Ef3A = 0,16; Rf3B = 0,33; Rf7B = 0,21.

EXEMPLE 14 I Chlorhydrate de L-tyrosyl-D-alanylglycyl-L-phénylalanine-3- ! | methylsulfonylpropylamide

Le produit est préparé par oxydation de L-tyrosyl-D-! alanylglycylphénylalanine-3-rnéthylthiopropylamide par le mode ; opératoire de l’exemple 12. Tyr D-Ala Gly Phe NHCCH^) SO^Me I est obtenu sous forme d'un solide blanc, Rf3A = 0,13j Rf3B = 0,59; i Rf7B = 0,23, /a/^ = 38,5 (C = 0,25 dans HCl 0,1 M) .

! Le tableau qui suit indique les caractéristiques :j i j d’autres composés de formule I qui peuvent être préparés par i j les modes opératoires des exemples qui précèdent ou par J d'autres techniques bien connues dans la chimie des peptides.

! /' ί ·./ "ί2 " «

TABLEAU

Allyl-Tyi—D-Ala-Gly~MePhe-NH(CH ) SOMe 2 o

Cpm-Tyi—D-Ala-Gly-MePhe-NH(CH ) SCMe 2 3 H -Ty r- D-Al a-Gl y-P h e-N H (CH ) S OM e o

Allyl-Tyr-D-Ala-Gly-Phe~NH(CH ) SOMe

2 O

Cpm-Tyr-D-Ala-Gly-Phe-NH(CH ) SOMe 2 3

Ph(CH ) Tyr-D-AIa-Gly-MePhe-NH(CH ) SOMe

2 2 O

H-Tyr-D-Met-Gly-MePhe—NH(CH ) SOMe 2 3

Allyl—Tyr-D-Met-Gly-MePhe-NH(CH ) SGMe 1 2 3

Allyl-Tyr-D-Ser-Gly-MePhe-NH(CH ) SOMe I 2 3 H-Tyr-D-Ala-Gly-MePhe(p-Cl)-NH(CH ) SOMe | 2 3

Allyl-Tyr-D-Ala-Gly-MePhe-NH(CH)2SOMe ! H-Tyr-D“Ala-Gly-MePhe-NH(CH2)4SOMe I Allyl-Tyr-D-Ala-Gly-MePhe-NH(CH2)4SCMe i

Me-Tyr-D-Met(0)-Gly-MePhe-NH(CH ) SOMe I 3 I H-Tyr~D~Ala~Gly-Phe~NH(CH ) SO Me 3 2 3 2 ] H-Tyr-D-Thr-Gly-MePhe-NH(CH ) SOMe I ^ d 5 H-Tyr-D-Val-Gly-MePhe-NH(CH-) SOMe 3 2 3 ! H-Tyr-D-Leu-Gly-MePh.£-NH(CH') SOMe ] 2 o ? I H-Tyr-D-NIe-Gly-MePhe-NH(CH ) SOMe ; I 2 3 i I H-Tyi—D“Ser(OMe)“Gly-MePhe-NH(CH ) SCMe * 2 3 1 ; · H-Tyr-D-Met(0 )-Gly-MePhe-NH(CH ) SCMe ΐ ; 2 2 3 1 ; i . H-Tyr-D-Abu-Gly-MePhe-NH(CH ) SOMe j 2 3 I H-Tyr-D-Ala-Gly-Phe(p-Cl)-NH(CH ) SCMe ' i l 2 3

Dans la technique d'essais mentionnés ci-dessus 1 ' s de Kosterlitz et Watt, des cobayes mâles et femelles (espèce

Duiican Hartley) sont sacrifiés par un coup sur la tête et une partie de l'iléon est prélevée et préparée sous forme d'un bain d'organes isolés de 50 ml de volume- Une réponse de "contraction11 convulsive est produite par une stimulation à basse fréquence (0,1 Hz) avec des impulsions rectilignes de 0,5 msec.

La réponse est abaissée par un grand nombre de différents agents ; pharmacologiquement actifs (anesthésiques locaux, dépressifs des muscles lisses, stimulants α-récepteur présynoptiques et agonistes narcotiques).

Le composé de l'essai est dissous dans de l'eau distillée pour produire une solution de base (stock) de

Iconcentration 1 mg/ml. Les dilutions en série sont effectuées en utilisant des solutions de Krebs pour obtenir des concentrations de 10 ug, 1ug et 0,1 yg/ml. Le composé est testé en ajoutant entre 0,1 et 0,3 ml de solutions au bain d'organes. Une courbe ! dose réponse est ensuite établie et comparée avec celle pour la ! !Met-enképhaline.

Dans cet essai, Me—Tyr-D-Ala-Gly-MePhe~NH(CH ) SOMe i . 23 | possède approximativement quinze fois l'activité de Met-enképhaline l !et H-Tyr-D-Ala-Gly-MePhe-NH(CH ) SOMe était approximativement *-· ✓ \ onze fois plus actif- Les composés ont été également évalués ! i \ dans l'essai de crispation produit par la phenylqumone dans la souris selon Hendershot L.C. et Forsaith J-, J. Pharm. Exp.

Therap. 125, 237 (1959); lorsqu'on les administre ï.v., ils ont des DEde l'ordre de 0,00½ et 0,00^5 mg/kg.

. 50 1 Les compositions thérapeutiques de l’invention • ...

* " " peuvent se présenter sous une forme convenant pour une administrât!o: ! I ....

. I ____~t _ ___ ____ ~ Λ -Γ»________ «/sv.tr/Kvmvil r.anr> UUÛ PI cfvOfl ΠΤΊ -3^- .

* » « parentérale. De telles compositions orales peuvent se présenter sous forme de capsules, comprimés, granules ou des préparations liquides telles que des extraits, des sirops ou des suspensions.

Des compositions prévues pour des administrations orales peuvent se présenter sous forme de préparations stériles telles que des solutions dans l'eau ou des solutions salines.

En vue de la facilité et de la précision de dosage, les compositions,de l'invention sont avantageusement utilisées sous une forme de dosage unitaire.

J.

r ! i * i i 4 •i l 3 i ’ * * i i "

Claims (10)

1. 2. Composés selon la revendication 1 caractérisés : en ce que : ? ^ 1 , ; R représente l'hydrogène, méthyle, allyle, cyclopropylméthyle ou | phénéthyle; il II !< 2 R est l'hydrogène; •i A est un reste D-sérine, D-thréonine, D-alanine, D-valine, D-norvalîne, D-leueine, D-norleucine, D-o-méthylsérine, D-méthionine, D-méthionine sulfoxyde ou D-méthionine sulfone , i mi nu rérn du d'ariiîo Τ>_η_3τί;·ϊ nnKnf'ur'i miP! B est un reste L-phénylalanine, L-N-méthylphényl alanine ou L-p-chlorophénylalanine; ] 3 R est l'hydrogène, alkyle ou phenylalkyle - n est 2 ou 3; p est 1 à 3 et r est 1 ou 2; ' * ainsi que les sels d'addition avec les acides de ces composés.
2. 3· L-tyrosyl-D-alanylglycyl-N-méthyl-L-phénylalanine-3-m éthy1sulfi nylpropylami de. b. N-méthyl-L-tyrosyl-D-alanylglycyl-ïï-méthyl-L“ phénylalanine-3-méthylsulfinylpropylarnide.
3. 5- N-méthyl-L-tyrosyl-D-alanylglycyl-L-phénylalanine-3-méthylsulfinylpropylamide. I 6. L-tyrosyl-D-sérylglycyl-N-méthyl-L-phénylalanine- | 3-méthylsulfinylpropylamxde. J 7- L-tyrosyl-D-jnéthionine(sulfoxyde)glycyl-N- :i \ méthyl-L-'phénylalanine-3-méthylsulfinylOronylajnide. | ; 8- L-tyrosyl-D-norvalylglycyl-N-méthyl-L- j phenylalanine-3-méthylsulfinylpropylamide. ] 9- L-tyrosyl-D-alanylglycyl-N-méthyl-L-phénylalanine- i j j 2-rnéthylsulfinyléthylamide. ! ! 10. L-tyrosyl-D-alanylglycyl-N-méthyl-L-phénylalanine- J ' K-rnéthyl-3-méthylsulfinylpropylamide. i 11. L-tyrosyl-D-alanylglycyl-N-méthyl-L- ! j * phénylalanine-2-propylsulfinyléthylamide.
4. 12. L-tyrosyl-D-alanylglycyl-Iï-méthyl-L-phénylalariinc- j ] N-isoamyl-K~3-méthylsulfinylpropylamide. i
5. 1. L-tyrosyl-D-alanylglycyl-N-méthyl-L-phénylalanine- îî-3-méthylsulfinylpropyl-K-2-phényléthylaraîde. 1;+. L-tyrosyl~D-alanylglycyl-K-méthyl-L~phénylalanine-3-m éthylsulfonylpropylami de. |i 15- K-méthyl-L-tyrosyl-D-alanylglycyl-N-méthyl-L- i i \ 16. L-tyrosyl-D-alanylglycyl-L-phénylalanine-3- )· ! ' méthylsulfonylpropylamide-
6. 17- L-tyrosyl-D-méthionylglycyl-N-méthyl-L-phénylalanine-3-méthylsulfinylpropylamide .
7. 18· L-tyrosyl-D-alanylglycyl-N-méthyl-L-p-chloro-phénylalanine-3-niéthylsulfinylpropylamide.
8. 19. L-tyrosyl-D-alanylglycyl-N-méthyl-L-phénylalanine-éthylsulfinylbutylami de. 20. ïi-méthyl-L~tyrosyl-D-méthionine(sulfoxyde)glycyl-N-méthyl-L-phénylalanine-3-fiiéthylsulfinylpropylamide.
9. 21. L-tyrosine-D-alanylglycyl-L-ph.énylalanine-3-méthylsulfinylpropylamide.
10. 22. Procédé pour la préparation de composés selon l'une quelconque des revendications 1 à 21, caractérisé en ce ; qu'un composé de formule H - M2 - ¥ (II) i i dans laauelle M est un reste d'araino acide ou de peptide i ‘ 2 I 3 3 | protégé et ¥ est le groupe ^aîls Ia9ueüe ® j i I n et p sont comme indiqué précédemment, subit | (a) un couplage avec un composé de formule j Y - Mlj - OH (III) ; ’ * dans laquelle Y est un groupe îî-protecteur et est un reste | d'amino acide ou de peptide protégé (où et représentent ensemble ~Tyr~A-Gly-B- et où A et B sont comme définis ci-dessus), | . - suivi des étapes d'oxydation et d'élimination du ou des groupes protecteurs; ou (b) une oxydation, suivie du couplage avec un composé de formule ; Y - - OH i dans laquelle Y et sont comme défini ci-dessus, suivie de J - 38 - <*- * - 23. Procédé pour la préparation d'un composé de formule I selon la revendication 1 essentiellement comme décrit : - ci-avant dans les exemples 1 à 1^. Il Zk. Produits obtenus par le procédé de la revendication 22 ou 23. «. 25- Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient un composé selon l'une quelconque des ! revendications 1 à 21 ou Zk ou un sel pharmaceutiquement acceptable d'un tel composé ainsi qu'un support, diluant ou } excipient acceptable pharmaceutiquement. i j ^ ^ j 'il i j i j: t j i