LU501549B1 - siRNA FOR INTERFERING WITH DNALI1 GENE EXPRESSION AND USE THEREOF IN INHIBITING CELL PROLIFERATION AND MIGRATION - Google Patents
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Claims (5)
1. Verwendung einer siRNA zum Stôren der DNALI1-Gen-Expression bei der Herstellung einer Formulierung zum Inhibieren der Zellproliferation und - migration, wobei die Zelle eine HEK-293-Zelle ist; die siRNA zum Stéren der DNALI1-Gen-Expression DNALI1-siRNA-66, DNALI1-siRNA-426 oder DNALI1- siRNA-777 ist; die DNALI1-siRNA-66 zum Stôren der DNALI1-Gen-Expression die folgenden Zielsequenzen aufweist: Sense-Strang: 5-CCGCAGACTCTTTGCTCAATT-3 (SEQ ID Nr. 1), Antisense-Strang: 5’-TTGAGCAAAGAGTCTGCGGTT-3' (SEQ ID Nr. 2); die DNALI1-siRNA-426 zum Stôren der DNALI1-Gen-Expression die folgenden Zielsequenzen aufweist: Sense-Strang: 5-GCAGGGAACTCTACTCACATT-3 (SEQ ID Nr. 3), Antisense-Strang: 5’-TGTGAGTAGAGTTCCCTGCTT-3' (SEQ ID Nr. 4); die DNALI1-siRNA-777 zum Stôren der DNALI1-Gen-Expression die folgenden Zielsequenzen aufweist: Sense-Strang: 5-GAACAAATCAGCAGCTGAATT-3’ (SEQ ID Nr. 5), Antisense-Strang: 5’-TTCAGCTGCTGATTTGTTCTT-3' (SEQ ID Nr. 6); und die Verwendung spezifisch die folgenden Schritte umfasst: Schritt 1, Transfizieren der DNALI1-siRNA-66, der DNALI1-siRNA-426 oder der DNALI1-siRNA-777 in eine Zelle und Lysieren, um Gesamt-RNA zu erhalten; Schritt 2, Synthetisieren einer ersten Strang-cDNA durch Umkehrtranskription unter Verwendung der Gesamt-RNA in Schritt 1 als eine Matrize; Schritt 3, Verwenden der cDNA in Schritt 2 als eine Matrize, Durchführen einer RT-PCR, um die Inhibitionseffizienz der DNALI1-siRNA gegen die DNALI1-Expression nachzuweisen; und Schritt 4, Transfizieren von DNALI1-siRNA mit der hôchsten Inhibitionseffizienz in Schritt 3 in eine Zelle, um eine Formulierung zum Inhibieren der Zellproliferation und -migration herzustellen.
2. Verwendung nach Anspruch 1, wobei die DNALI1-siRNA in Schritt 1 eine Konzentration von 20 pmol aufweist. 1
BL-5418 LU501549
3. Verwendung nach Anspruch 1, wobei die Menge der Gesamt-RNA in Schritt 2 10 ng bis 2 ug beträgt.
4. Verwendung nach Anspruch 1, wobei ein RT-PCR-System in Schritt 3 20 ul beträgt, umfassend: 20-100 ng einer cDNA-Matrize, 1 pul eines Vorwärtsprimers, 1 ul eines Rückwärtsprimers und 10 ul SuperReal PreMix, plus Auffüllen auf 20 ul mit RNASe-freiem ddH2O.
5. Verwendung nach Anspruch 1, wobei ein RT-PCR-Programm in Schritt 3 ist: anfängliche Denaturierung bei 95 °C für 15 min; 40 Denaturierungszyklen bei 95 °C für 10 s, Annealen bei 60 °C für 30 s und Erweiterung bei 72 °C für 30 s. 2
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