KR970001562B1 - 신규플라스미드와 이 플라스미드로 형질전환된 미생물 및 이를 이용한 핵산 제조방법 - Google Patents

신규플라스미드와 이 플라스미드로 형질전환된 미생물 및 이를 이용한 핵산 제조방법 Download PDF

Info

Publication number
KR970001562B1
KR970001562B1 KR1019940000324A KR19940000324A KR970001562B1 KR 970001562 B1 KR970001562 B1 KR 970001562B1 KR 1019940000324 A KR1019940000324 A KR 1019940000324A KR 19940000324 A KR19940000324 A KR 19940000324A KR 970001562 B1 KR970001562 B1 KR 970001562B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
xmp
strain
prpp
brevibacterium
imp
Prior art date
Application number
KR1019940000324A
Other languages
English (en)
Other versions
KR950023712A (ko
Inventor
한종권
정성오
심재익
오윤석
고형곤
Original Assignee
제일제당 주식회사
김정순
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 제일제당 주식회사, 김정순 filed Critical 제일제당 주식회사
Priority to KR1019940000324A priority Critical patent/KR970001562B1/ko
Publication of KR950023712A publication Critical patent/KR950023712A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR970001562B1 publication Critical patent/KR970001562B1/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12N9/1077—Pentosyltransferases (2.4.2)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
    • C12N15/77—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora for Corynebacterium; for Brevibacterium
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
    • C12P19/28—N-glycosides
    • C12P19/30—Nucleotides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12Y204/02—Pentosyltransferases (2.4.2)
    • C12Y204/02014—Amidophosphoribosyltransferase (2.4.2.14)

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

내용 없음.

Description

신규플라스미드와 이 플라스미드로 형질전환된 미생물 및 이를 이용한 핵산 제조방법
제1도는 재조합 플라스미드 pMG 26의 제한 효소 Pst I, Hind III, EcoR I 및 EcoR V의 절단지도 및 그의 형성단계를 나타낸 것이다.
본 발명은 유전자 조작에 의해 퓨린 뉴클레오티드 생합성계의 주요 조절부위의 효소인 포스포리보실피로포스 페이트(PRPP) 아미도트랜스페라제를 코딩하는 유전자(purF)를 클로닝하고, 클로닝된 purF 유전자를 5'-이노신산(이하, IMP라 한다) 및 5'-크산틸산(이하, XMP라 한다) 생산균주에 도입하여 IMP 및 XMP의 생산능력을 증대시키고, 이 IMF 및 XMP 생산능이 증대된 균주를 이용하여 IMF 및 XMP를 생산하는 IMF 및 XMP의 제조방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 PRPP 아미도트랜스페라제 유전자가 함유된 재조합 플라스미드(pMG26)와 이 재조합 플라스미드로 형질전환된 IMF 및 XMP 생산능을 갖는 브레비박테리움 암모니아게네스 균주에 관한 것이다.
퓨린 핵산의 일종인 IMF는 5'-구아닐산(이하, GMP라 한다)과 더불어 정미성이 뛰어난 핵산계 조미료의 원료로서 널리 사용되고 있는 물질이며 GMP는 전구물질인 XMP를 5'-크산틸산 아미나제에 의해 GMP로 전환시키는 방법에 의해 주로 생산된다.
IMF 및 XMP의 제조방법으로는 통상 아나로그내성을 부여하여 되먹임 조절(feedback regulation)을 해제하고, 영양요구성을 부여하여 곁가지 반응경로(side chain reaction)가 차단된 인공변이주를 영양배지에 배양하여 배양액에 축적된 IMF 및 GMP를 회수하는 직접발효법이 사용되고 있다. 그러나, 인공변이주를 사용하는 직접 발효법에서 생산성을 향상시키는 데에는 한계가 있으므로, 최근 유전자 조작 기술을 사용하여 그 한계를 극복하고자 하는 연구가 많이 진행되고 있는 실정이다.
본 발명자들은 코리네형 글루타메이트 생산균의 숙주-벡터계의 개발을 위해 코리네박테리움 글루타미 ATCC 13058 균주로부터 크립틱 플라스미드(cryptic plasmid)인 pCB 1을 분리한 후 에쉐리시아 콜리 속 균주의 클로닝 벡터(cloning vector)인 pACYC 177과 결합시켜 코리네박테리움과 에쉐리시아 속의 균주들에서 모두 형질전환 및 발현이 가능한 셔틀벡터인 pECCG 1을 제작하였으며, 이 pECCG 1으로부터 앰피실린 내성유 전자 부분을 제거하고 플라스미드 pBluescript II KS+의 다발성 절단부위(multi-cloning site)를 도입하여 코리네박테리움속의 균주에서 안정하게 발현되는 셔틀벡터 pECCG 117을 제작하여 특허출원을 한 바 있으며 (대한민국특허 공고 제91-7853호 및 제92-7401호), 이 셔틀벡터 pECCG 117은 코리네박테리움 속 균주 뿐만 아니라 코리네형 글루타메이트 생산균의 일종인 브레비박테리움 속의 균주에서도 형질발현 및 안정성이 유지되는 것을 확인하고 본 발명에 이용하였다.
또한, 퓨린튜클레오티드 생합성계의 주요 조절부위인 PRPP 아미도트랜스펠제의 최종산물들(예로서 GMP, 5'-아데닐산(AMP)등)에 의한 되먹임 조절을 해제하기 위하여 퓨린 뉴클레오시드의 아나로그인 5'-메르캅토구아노신(이하, MG라 한다)에 대한 내성을 부여하고, 이 MG 내성 균주로부터 MG 내성을 선별마커(selection marker)로 하여 MG 내성이 없는 야생균주에서 PRPP 아미도트랜스페라제를 코딩하는 유전자를 클로닝하고, 이 형질전환체로부터 얻어진 재조합 플라스미드를 IMF 및 XMP 생산균주에 각각 도입하여 XMP 및 IMF의 생산성을 증대시킴으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명에 사용된 균주 및 플라스미드는 표 1과 같다.
재조합 플라스미드를 운반하는 형질 전화체에 의한 XMP 및 IMF의 생산은 공지의 방법에 의해 수행될 수 있다. 즉, 형질 전화체를 온도, pH 등을 조절하면서 호기성 조건하에 탄소원, 질소원, 무기화합물, 아미노산, 비타민 및 기타 영양 요구물질 등이 함유된 통상의 배양 생성된 균체를 전화반응의 효소원으로 사용한다.
탄소원으로는 글루코오즈, 프럭토오즈, 슈크로오즈, 말토오즈, 만노오즈 및 당밀 등과 같은 각종 탄수화물, 피루부산, 푸마르산, 락트산 및 아세트산과 같은 각종 유기산이 사용될 수 있고, 질소원으로는 암모니아, 염화 암모늄, 황산암모늄, 탄산암모늄 및 초산암모늄과 같은 각종 무기 및 유기암모늄염, 우레아 및 기타 질소 함유 물질 및 펩톤, NZ-아민, 육류 추출물, 각종 무기 및 유기암모늄염, 우레아 및 기타 질소 함유물질 및 펩톤, NZ-아민, 육류 추출물, 효모 추출물, 옥수수 침지액, 카세인 가수분해물, 어류 또는 그의 분해생성물, 탈지 대두 케이크, 또는 그의 분해 생성물 등이 사용될 수 있다. 무기 화합물로는 인산 1수소칼륨, 인산2수소칼륨, 황산마그네슘, 염화나트륨, 황산철, 황산망간, 탄산칼슘 등이 사용될 수 있으며, 이외에 필요에 따라 비타민, 아미노산 및 영양요구성 염기 등이 첨가될 수 있으며, 형질전환주의 배양시에는 가나마이신을 적당량 첨가하였다.
배앙은 호기적 조건하에 예를들면, 진탕배양 또는 통기교반배양에 의해 바람직하게는 20∼40℃의 온도에서 수행된다. 배지의 pH는 배양동안 중성 근처에서 유지하는 것이 바람직하며 10∼50시간 배양시켜 배양액에 XMP 혹은 IMP를 축적시키고 축적된 XMP 혹은 IMF를 고해상액체 크로마토그래피(HPLG)의 방법에 의해 분석하였다.
본 발명의 재조합 플라스미드 pMG 26에 의해 퓨린 생합성계의 주요 조절부위의 효소인 PRPP 아미도트랜스 페라제가 강화된 형질전환주를 배양함으로써 인공변이주를 배양하는 것에 비해 XMP 혹은 IMF의 생산성을 향성시킬 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명은 상세하게 설명한다.
실시예에서 유전자 조작방법은 주로 분자 클로닝 실험 조작법(Molecular Cloning; Aladoratory manual, 2nd ed., J. Sambrook, E.F., Fritch, ＆ T., Maniatis) 및 분자 클로닝 기술의 지표(Guide to Moleular Cloning Techniques, Methods in Enzymology, vol. 152, S.L., Berger, A. R., Kimme) 등의 방법에 준하여 실시하였으며, 본 발명에 사용된 브레비박테리움 암모니아게네스 ATCC 6872/pMG 26 균주는 1993년 12월 27일자로 한국 미생물 보존센터에 제 KFCC-10813호로 기탁하였다.
[실시예 1]
PRPP 아미도트랜스페라제 유전자의 클로닝
(1) 브레비박테리움 암모니아게네스 IPr-2의 염색체 DNA의 분리 및 브레비박테리움 암모니아게네스 ATCC 6872/pECCG 117 형질전화체로부터 pECCG 117의 분리
IPr-2의 균주를 하기 표 2에 나타낸 조성의 C 배지에서 32℃, 18시간 진탕배양하여 원심분리로 균체를 회수하고 10㎖의 1mM 트리스 완충액(pH 8.0)으로 세척한 다음 40㎖의 라이소자임 반응 완충액(10mM 트리스(pH 8.0), 5mM 염화나트륨, 1mM 에틸렌디아민-4-아세트산(EDTA), 0.5M 슈크로오즈, 10㎎/㎖ 라이소자임)에 현탁시킨 후 37℃에서 90분간 처리하였다. 이 세포를 원심분리로 회수하고 10㎖의 슈크로오즈와 라이소자임이 배제된 라이소자임 반응액에 현탁시키고, 0.5M EDTA를 0.6㎖, 4% 소디움도데실설페이트(SDS)를 4.4㎖넣어 세포를 분해시켰다. 여기에 염화세슘을 ㎖당 1g씩 첨가하고 1㎖의 에티디움 브로마이드(EtBr) 농축액(10㎎/㎖)을 섞어 주고, 이 혼합액을 초고속 원심분리기(ultracentrifuge)를 사용하여 16℃ 50.000rpm으로 48시간 원심분리시킨 후 주사기를 사용하여 염색체 DNA를 취하였다. 이소프로필알코올로 3∼4회 처리하여 에티디움 브로마이드를 제거한 후 TE 완충액(10mM 트리스(pH 8.0), 1mM EDTA)에서 24시간 투석하여 염색체 DNA를 분리 정제하였다.
셔틀벡터 pECCG 117도 형질전환주 ATCC 6872/pECCG 117로부터 동일한 방법으로 분리 정제하였으며, 이때 배양베지에 가나마이신을 50㎍/㎖되도록 첨가하였다.
(2) 유전자 라이브러리(genomic library)의 제조
IPr-2균주로부터 분리 정제된 염색체 DNA를 제한효소 Mbo I으로 미디움염 제한효소 완충액(50mM 염화나트륨, 10mM 트리스(pH 7.5), 10mM 염화마그네슘, 1mM 디티오쓰레이톨)에서 37℃, 15∼30분간 부분절단(partial digestion)하고, 이 제한효소를 열처리로 불활성화 시킨 다음 0.7% 저융점 아가로오즈 겔(low-melting point agarose gel)에서 전기영동한 후 3∼8kb 크리의 DNA 절편을 취하였다. 이를 68℃에서 10분간 물로 중탕 가열하여 겔을 녹인 후 동일 부피의 트리스 완충액(pH 8.0)으로 포화된 페놀을 섞어준 다음 원심분리하여 상등액을 취하고 다시 크로로포름 처리 및 에탄올로 침전시켜 목적 유전자원으로 사용하였다.
목적 유전자의 분리를 위하여 플라스미드 pECCG 117을 제한효소 BamH I으로 고농도염 제한효소 완충액(10mM 염화나트륨, 50mM 트리스(pH 7.5), 10mM 염화마그네슘, 1mM 디티오쓰레이톨)에서 37℃에서 2시간 처리하여 완전 절단하고, 카프 인테스틴 포스파타제(calf intestine phosphatase)를 처리한 후 3∼8kb의 DNA 절편과 혼합하여 리가제 완충액(0.5M 트리스(pH 7.4), 0.1M 염화마그네슘, 0.1M 디티오쓰레이톨, 10mM 스퍼미딘, 10mM ATP, 1㎎/㎖ 소혈청 알부민)에서 T4 DNA 리가제로 14℃에서 16시간 반응시킴으로써 유전자 라이브러리를 제작하였다.
(3) PRPP 아미도트랜스페라제 유전자(purF)의 클로닝
아데닌과 구아닌이 첨가된 C 배지에서 14∼15시간 배양한 브레비박테리움 암모니아게네스 ATCC 6872 균주를 1L의 동일 배지에 흡광도(600nm)가 0.1 이하가 되도록 접종하고 32℃에서 진탕 배양한 후 흡광도가 0.3에 도달했을 때 페니실린을 0.15U/㎖되도록 첨가하고 흡광도가 0.6에 도달한 때까지 배양한 후 형질전환에 사용하였다.
이 균체를 원심분리하여 회수한 후 1L의 1mM N-(2-히드록시에틸)피페리진-N'-(2-에타설폰산)(HEPES) 완충액으로 1회, 500㎖의 냉각된 멸균 탈이온 증류수로 1회, 20㎖의 10% 글리세롤 용액으로 2회 세척한 다음 2∼3㎖의 10% 글리세롤 용액에 현탁시켜 사용하였다. 이 현탁액을 적당량으로 나누어 드라이아이스로 급속 냉동시킨 후 -70℃에서 보관하면 형질전환 빈도의 감소없이 약 1개월 동안 사용가능하다. 냉동된 균체의 현탁액을 얼음속에서 서서히 녹인 후 여기에 적당량의 유전자 라이브러리 DNA를 첨가하여 잘 섞어주고 전기장 충격장치(Bic-Rad, Gene Pulser)로 1회 전기장 충격을 가한 후 1㎖의 C배지에 현탁하여 32℃에서 1시간 배양한 다음 멸균된 생리 식염수로 세척하고 MG가 1000㎍/㎖의 농도로 함유되고, 50㎍/㎖의가나마이신이 포함된 표 3의 조성의 최소 한천 평판 배지에 도말하여 1∼5일 배양하여 형질 전환체를 얻을 수 있었다.
이들 형질전환체들로부터 외부 DNA를 함유하고 있는 재조합 플라스미드들을 분리하여 브레비박테리움 암모니아게네스 ATCC 6872 균주에 재형질전환(retransformation)하여 MG 내성부여 여부를 확인하였으며, 그 결과를 표 4에 나타내었다.
[실시예 2]
브레비박테리움 형질전환주에서의 PRPP 아미도트랜스페라제 유전자(purF)의 발현
실시예 1에서 얻어진 재조합 플라스미드 pMG 26에 의해 형질전환된 형질전화체의 PRPP 아미도트랜스페라제의 효소활성을 측정하였다. 효소액을 얻기 위하여 형질 전화체들을 C 배지(필요한 경우 가나마이신을 50㎍/㎖되게 첨가하고, 아데닌, 구아닌을 소량첨가)에서 대수 증식기까지 키운 후 원심분리하여 균체를 회수하고 적당량의 균체현탁 완충액(50mM 트리스, 5mM 염화마그네숨, 1mM 이디티에이, 0.5mM 페닐메틴설포닐플루오라이드(PMSF)에 현탁하여 초음파 균체분쇄기(ultrasonicator)로 균체를 분쇄한 후 원심분리하여 얻어진 상동액을 효소액으로 사용하였다.
PRPP 아미도트랜스페라제의 효소반응은 공지의 방법(Methods in Enzymology, 6, 56(1963)에 의해 수행하였으며, 생성된 피로인산(pyrophosphate)의 정량적 측정은 산기수분해 후 LOwry와 Lopez의 방법에 의해 수행하였다. 그 결과 형질전화주의 비효소활성(specific enzyme activity)이 증가되었음을 확인할 수 있었다. 결과는 표 5와 같다.
* 효소활성의 단위(U)는 반응 후 단위 시간당 700nm에서의 흡광도의 증가로써 표시하였다.
[실시예 4]
형질전환주에 의한 XMP 및 IMP의 생산
C 배지를 종 배양배지로 하여 500㎖의 진탕용 삼각 플라스크에 30㎖씩 분주하고 121℃에서 15분간 가압 살균하여 형질전화주 OPr-2/pMG 26 및 XPr-5/pMG26 균주를 각각 1백금이씩 식균한 후 30℃에서 24시간 배양하여 종균액으로 사용하였다. 또한, 하기 표 6의 방효 배지 100㎖을 500㎖ 진탕용 플라스크에 분주하고 같은 조건에서 가압살균하여 5㎖(5%)의 종배양액을 식균하여 30℃에서 3일간 배양하였다. 이 때 회전속도는 200rpm으로 하였다. 배양이 완료된 배양액에 3.5% 트리클로로아세트산을 첨가하여 원심분리하여 균체 및 단백질을 제거한 후 HPLC 방법으로 IMP 및 XMP를 분석하였다. 그 결과는 표 7과 같다.

Claims (3)

  1. 5'-메르캅토구아노신(mercaptoguansine)에 내성을 갖는 브레비박테리움 암모니아 게네스 균주에서 클로닝된 프스포리보실 피로포스페이트(PRPP) 아미도트랜스페라제 유전자를 함유하는 플라스미드 pMG 26.
  2. 브레비박테리움 암모니아게네스에서 클로닝된 포스포리보실 피로포스페이트(PRPP) 아미드트랜스페라제 유전자를 함유하여 브레비박테리움에서 복제 및 발현이 가능한 플라스미드 pMG 26V으로 형질전환된 브레비박테리움 암모니아게네스 균주.
  3. 브레비박테리움 암모니아게네스에서 클로닝된 포스포리보실 피로포스페이트(PRPP) 아미도트랜스페라제 유전자를 함유하는 플라스미드 pMG 26으로 형질전환된 IMP 또는 XMP 생산능이 있는 브레비박테리움 암모니아게네스 균주를 배양배지에 배양하여, 배양액 중에 IMP 또는 XMP를 직접 축적시키고, 그로부터 IMP 또는 XMP를 회수함을 특징으로 하는 IMP 또는 XMP의 제조방법.
KR1019940000324A 1994-01-10 1994-01-10 신규플라스미드와 이 플라스미드로 형질전환된 미생물 및 이를 이용한 핵산 제조방법 KR970001562B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1019940000324A KR970001562B1 (ko) 1994-01-10 1994-01-10 신규플라스미드와 이 플라스미드로 형질전환된 미생물 및 이를 이용한 핵산 제조방법

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1019940000324A KR970001562B1 (ko) 1994-01-10 1994-01-10 신규플라스미드와 이 플라스미드로 형질전환된 미생물 및 이를 이용한 핵산 제조방법

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR950023712A KR950023712A (ko) 1995-08-18
KR970001562B1 true KR970001562B1 (ko) 1997-02-11

Family

ID=19375458

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1019940000324A KR970001562B1 (ko) 1994-01-10 1994-01-10 신규플라스미드와 이 플라스미드로 형질전환된 미생물 및 이를 이용한 핵산 제조방법

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR970001562B1 (ko)

Also Published As

Publication number Publication date
KR950023712A (ko) 1995-08-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2545078B2 (ja) 核酸関連物質の製造法
RU2482178C1 (ru) МИКРООРГАНИЗМЫ Corynebacterium С ПОВЫШЕННОЙ ПРОДУКЦИЕЙ 5'- ИНОЗИНОВОЙ КИСЛОТЫ И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ С ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ
JPS63233798A (ja) ５′−グアニル酸の製造法
KR100882418B1 (ko) 이노신을 생산하는 미생물 및 그를 이용한 이노신 제조방법
KR100830289B1 (ko) Ｌ－아르기닌 생산 변이주 및 이의 제조방법
KR20000076602A (ko) 푸린 뉴클레오티드의 제조법
US6656709B1 (en) Methods of increasing the production of cobalamins using cob gene expression
ŠIMÚTH et al. The synthesis of highly phosphorylated nucleotides, RNA and protein by Streptomyces aureofaciens
JPH0716431B2 (ja) ５′−グアニル酸の製造法
JP3369236B2 (ja) シチジンジリン酸コリンの製造法
KR970001562B1 (ko) 신규플라스미드와 이 플라스미드로 형질전환된 미생물 및 이를 이용한 핵산 제조방법
JP2886547B2 (ja) ノイラミニダーゼの製造法
US4598046A (en) Mutant strain of Escherichia coli and its use for the preparation of glutathione
EP0123903A2 (en) Method for producing L-aspartic acid
KR940005598B1 (ko) 아스코르빈산-2-인산의 제조법
KR100857379B1 (ko) 포스포라이보실 아미노이미다졸 카복실라아제가 과발현된미생물 및 이를 이용한 5'-이노신산의 생산 방법
JPH08168383A (ja) 核酸関連物質の製造法
KR970005914B1 (ko) 유전자 재조합 미생물에 의한 5'-구아닐산의 제조방법
JPH0630583B2 (ja) Ｄνａおよびその用途
KR960007743B1 (ko) 유전자 재조합 미생물에 의한 5'-구아닐산의 제조방법
EP0180192A1 (en) Novel plasmids
KR100785248B1 (ko) ｐｕｒＣ 유전자가 과발현된 미생물 및 이를 이용한5'-이노신산의 생산방법
KR100547585B1 (ko) 코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 5'-이노신산의 제조방법
JPH0459877B2 (ko)
CN114350688B (zh) guaA基因、质粒、菌株在表达固氮菌嗜铁素中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
G160 Decision to publish patent application
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20051229

Year of fee payment: 10

LAPS Lapse due to unpaid annual fee