KR960702474A - 항-금속 킬레이트 항체 분리방법(separation of anti-metal chelate antibodies) - Google Patents

항-금속 킬레이트 항체 분리방법(separation of anti-metal chelate antibodies)

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KR960702474A
KR960702474A KR1019950705067A KR19950705067A KR960702474A KR 960702474 A KR960702474 A KR 960702474A KR 1019950705067 A KR1019950705067 A KR 1019950705067A KR 19950705067 A KR19950705067 A KR 19950705067A KR 960702474 A KR960702474 A KR 960702474A
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metal chelate
antibody
carboxylate
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chelate antibody
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Application number
KR1019950705067A
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Inventor
다니엘 이. 베이들
Original Assignee
쥐. 알. 벨
하이브리테크 인코포레이티드
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
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    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
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    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins

Abstract

본 발명은 항체를 포함한 비-특징 단백질로부터 항-금속 킬레이트 항체의 분리방법을 제공하는데 카르복실산 유도된 고형서포트에 항-금속 킬레이트 항체를 포함하는 시료를 얹고 비특이적 단백질은 용출시키고 항-금속 킬레이트 항체는 용출시키지 않는 충분한 염농도를 포함한 용출완충액으로 1차 용출시키고 그 다음 항-금속 킬레이트 항체를 용출시키기 위해 용출용액의 염농도를 증가시킨다. 구체예에서 카르복실산 유도된 고형서포트는 카르복시메틸수지이다. 적절한 한 염에는 인산나트륨, 염화나트륨, 아세테이트나트륨과 황산나트륨이다. 본 발명은 비-특이적 단백질로부터 단클론성을 또는 다클론성 항-금속 킬레이트 항체를 분리하고 또한 일기능성 항-금속 킬레이트 항체와 다른 비특이적 단백질에서 항-금속 킬레이트 항체를 분리하는데 사용될 수 있다. 또한 이 방법은 비-특이적 단백질에서 항원 반응성 부분을 가지는 항-금속 킬레이트 항체단편을 분리하는데 사용될 수도 있다.

Description

항-금속 킬레이트 항체 분리방법(SEPARATION OF ANTI-METAL CHELATE ANTIBODIES)
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 금속킬레이트, 인디움-벤질 EDTA애 대해 발생된 항체의 비-코그네이트 카르복실산의 일련과 반응성을 설명하는 도표이다.
제2도는 용출염으로써 인산나트륨을 사용하는 실시예1에 상술된 설포프로필 유도된 컬럼에서 크로마트 그래프된 이기능기 항-금속킬레이트 항체(BxBFA)의 용출과정을 시간에 대해 나타내는 280nm의 UV 흡수그래프이다.

Claims (28)

  1. 항-금속 킬레이트 항체와 비-특이적 단백질을 포함하는 시료에서 pI가 6 내지 9인 항-금속 킬레이트항체가 있는 용출물의 부분을 수득하는 방법에 있어서: a. 시발용액을 시발용액으로 균등화시킨 비-코그네이트 모노-카르복실산 유도된 고형 서포트에 얹고: b. 고형 서포트에서 비-특이적 단백질을 제거하고; c. 1) 고형 서포트에서 상기 항-금속 킬레이트 항체를 용출시키기에 충분한 증가된 염농도의 제1비-카르복실산염, 이때 컬럼의 PH, 분리를 물질을 포함하는 용액과 용출된 용액의 pH는 6.2 내지 6.8인 것: 또는 2) 항-금속 길레이트 항체에 친화성을 가지는 비-코그네이트 헵텐을 포함하는 용출액중 어느 하나를 용출액에 첨가하고; 그리고 d. c단계에서 용출된 부분을 수득하는 것을 특징으로 하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 산유도체가 카르복시에틸인 것을 특징으로 하는 방법.
  3. 제1항에 있어서, 고형 서포트는 중합체-피복된 서포트, 폴리스티벤, 폴리에스터, 유리, 텍스트란과 셀룰로오스에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 제1항에 있어서, 항-금속 킬레이트 항체는 항-금속 킬레이트 단클론 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
  5. 제1항에 있어서, 용출액에는 제1비-카르복실산염을 포함하고 제2단계에는 추가로 서포트에서 비-특이적 단백질을 용출시키는데 충분한 농도의 제2비-카르복실산염을 포함하는 용액을 제공하는 것으로 구성된 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 제5항에 있어서, 용출액에는 제1비-카르복실 산염을 포함하고 영은 인산나트륨, 염화나트륨, 아세테이트나트륨과 황산나트륨에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 제5항에 있어서, 제1과 제2카르복실산염은 동일한 화학구조를 가지는 것을 특징으로 하는 방법.
  8. 제5항에 있어서, 용출용액에는 제1비-카르복실산염을 포함하고 제공단계는 항-금속 킬레이트 항체에 결함을 방해하지 않고 비-특이척 단백질의 일부결함을 방해할 수 있는 충분한 염농도를 기는 시발용액에서 실시되는 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 제1항에 있어서, 항-금속 킬레이트 항체는 항원 반응부분을 가지는 단편인 것을 특징으로 하는 방법.
  10. 제1항에 있어서, 항-금속 킬레이트 항체는 하나 이상의 카르복시기와 킬레이트 하는 금속 킬레이팅제에 대해 발생하는 것을 특징으로 하는 방법.
  11. 제1항에 따른 방법에 의해 준비된 항-금속 킬레이트 항체가 풍부한 용출된 부분.
  12. 제1항에 있어서, 시로내의 비-특이적 단백질에서 약 6 내지 9의 pI를 가지는 항-금속 킬레이트 항체를 효과적으로 분리해 내는 것을 특징으로 하는 방법.
  13. 제12항에 따른 방법에 의해 분리된 것을 특징으로 하는 항-금속 킬레이트 항체.
  14. 이기능성과 일기능성 항-금속 킬레이트 항체와 비-특이적 단백질을 포함하는 시료에서 pI가 6 내지 9인 이기능성 항-금속 킬레이트 항체를 분리하는 방법에 있어서, 이때, 항-금속 킬레이트 항체는 하나 이상의 카르복시기와 킬레이트하는 금속 킬레이트제에 대해 발생되며: a. 시발용액을 시발용액으로 균등화시킨 비-코그네이트 모노-카르복실산 유도된 고형 서모트에 얹고; b. 고형 서포트에서 비-특이적 단백질을 제거하기 위해 이기능성 항-금속 킬레이트 항체와 일기능성 항-금속 킬레이트 항체를 떨어뜨리지 않고 서포트로부터 비-특이적 항체를 용출시키기에 충분한 증가된 염농도의 제1비-카르복실산염을 첨가하고; c. 서포트로부티 이기능성 항-금속 킬레이트 항체를 용출시키기 위해 충분한 증가된 염농도의 제2비-카르복실산염을 포함하는 용출액을 첨가하고, 이때 컬럼의 pH, 분리된 물질을 포함하는 용액과 용출된 용액의 pH는 6.2 내지 6.8 이고; d. c단계애서 용출된 2기능기 항-금속 킬레이트 항체를 포함하는 부분을 수득하는 것을 특징으로 하는 방법.
  15. 제14항에 있어서, 산유도체가 카르복시메틸인 것을 특징으로 하는 방법.
  16. 제14항에 있어서, 고형 서포트는 중합체-피복된 서포트, 폴리스티렌, 폴리에스터, 유리, 덱스트란과 셀룰로오스에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  17. 제14항에 있어 서, 용출액에는 제1비-카르복실산염을 포함하고 염은 인산나트륨, 염화나트륨, 아세테이트 나트륨과 황산나트륨에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  18. 제14항에 있어서, 항-금속 킬레이트 항체는 항원 반응부분을 가지는 단펀인 것을 특징으로 하는 방법.
  19. 제14항에 있어서, 제공단계는 2기능성 항-금쇽 킬레이트 항체에 결함을 방해하지 않고 비-특이적 단백질의 일부결함을 방해할 수 있는 충분한 염농도를 가지는 시발용액에서 실시되는 것을 특징으로 하는 방법.
  20. 제14항에 있어서, 제1과 제2비-카르복실산염은 동일한 화학구조를 가지는 것을 특징으로 하는 방법.
  21. 제14항에 따른 방법에 의해 분리된 것을 특징으로 하는 이기능성 항-금속 킬레이트 항체.
  22. 비-특이적 단백질을 포함하는 시료에서 pI가 6 내지 9인 이기능성 항-금속 킬레이트 항체를 분리하는 방법에 있어서, 이대, 항-금속 킬레이트 항체는 하나 이상의 카르복시기와 킬레이트하는 금속 킬레이트제에 대해 발생되며: a. 시발용액을 시발용액으로 균등화시킨 비-코그네이트 모노-카르복실산 유도된 고형 서포트에 얹고; b. 고형 서포트에서 항-금속 킬레이트 항체를 떨어뜨리지 않고 서포트로부터 비-특이적 항체를 용출시키기에 충분한 증가된 염농도의 제1비-카르복실산염을 첨가하고: c. 서포트로부터 이기능성 항-금속킬레이트 항체를 용출시키기 위해 충분한 증가된 염농도의 제2비-카르복실산염을 포함하는 용츨액을 첨가하고, 이때 컬럼의 pH, 분리될 물질은 포함하고 용액과 용출된 용액의 pH는 6.2 내지 6.8이고; d. c단계에서 용출된 항-금속 킬레이트 항체를 포함하는 부분을 수득하는 것을 특징으로 하는 방법.
  23. 제22항에 있어서, 산유도체가 카르복시메틸인 것을 특징으로 하는 방법.
  24. 제22항에 있어서, 고형 서포트는 중합체-피복된 서포트, 폴리스티렌, 폴리에스터, 유리, 텍스트란과 셀룰로오스에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  25. 제22항에 있어서, 용출액에는 제1비-카르복실산염을 포함하고 염은 인산나트륨, 염화나트륨, 아세테이트 나트륨과 황산나트륨에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  26. 제22항에 있어서, 항-금속 킬레이트 항체는 항원 반응부분을 가지는 단편인 것을 특징으로 하는 방법.
  27. 제22항에 있어서, 제공단계는 2기능성 항-금속 킬레이트 항체에 결함을 방해하지 않고 비-특이적 단백질의 일부결함을 방해할 수 있는 충분한 염농도를 가지는 시발용액에서 실시되는 것을 특징으로 하는 방법.
  28. 제22항에 따른 방법에 의해 분리된 것을 특징으로 하는 이기능성 항-금속 킬레이트 항체.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019950705067A 1993-05-11 1994-05-03 항-금속 킬레이트 항체 분리방법(separation of anti-metal chelate antibodies) KR960702474A (ko)

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