KR960701645A - 면역원성 종양 단백질 및 펩타이드, 및 이의 사용방법(Immunogenic cancer proteins and peptides and method of use) - Google Patents
면역원성 종양 단백질 및 펩타이드, 및 이의 사용방법(Immunogenic cancer proteins and peptides and method of use)Info
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Abstract
본 발명은, 종양 환자에 대해 선택적으로 면역원성인, 종양 세포중에 존재하는 단백질을 확인함으로써 제조할 수 있는 종양 세포의 종양 특이적 항원 및 작용적 단백질에 관한 것이다. 본 발명은 추가로, 종양 특이적 척액소성 항원의 펩타이드 라이브러리 제조방법, 종양-관련 항원의 면역원성 특이성을 증가시키는 방법, 종양-특이적 항원과 면역반응성인 항체 존재를 검출하기 위한 검정 키트 및 종양-특이적 항원으로 감작된 T세포 제조방법을 제공한다.
Description
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 31/65 두부 및 목암환자(SCC Pts) 및 40/65 대조군 환자(대조군)에 대한 편평세포암(SCC) 세포내 단백질-특이적인 IgE의 분포를 나타내는 도이다.
제2도는 고령 및 남성과 여성 대조군(1/63)에서보다 SCC세포내 단백질(17/65)에 결합되는 매우 우세한 혈청 IgA를 나타내는 환자를 나타내는 도이다.
제3a도는 개개환자 혈청 IgE를 IgA에 대해 풀롯팅한 것이다. 제3b도는 개개 환자 혈청 IgE를 IgG에-대해 플롯팅한 것이다.
제4도는 이형-특이적인 항원-억제 연구로써 확증되는, SCC 세포질 단백질에 결합하는 혈청 면역글로불린의 특이성을 나타내는 도이다.
제5a도는 SCC 세포질 단백질 분획 웨스턴 블롯 분석에 의해서 확인된 고 특이적인종양 항원(HSTA)을 나타내는 도이다.
제5b도는 SCC 세포질 단백질 분획의 웨스턴 블롯 분석에 의해 확인된고 특이적인 종양 항원(HSTA)을 나타내는 도이다.
Claims (70)
- 종양 세포내에 존재하는, 중양 환자에 대해 선택적으로 면역원성인 단백질을 확임함을 포함하여, 종양세포의 작용성 단백질을 확인하는 방법.
- 제1항에 있어서, 확인이, (a) 대조 및 중양 환자 혈청을 스크리닝하여, 종양 환자 혈청중에서 항체와 특이적으로 면역반응하는 단백질을 결정하는 단계를 포함하는 방법.
- 제3항에 있어서, 항체가 IgA, IgE, IgG 또는 IgM 면역글로불린인 방법.
- 제1항에 있어서, 종양 세포가 편평세포암(SCC) 세포 또는 유방암 세포인 방법.
- 제1항에 있어서, 작용성 단백질이 종양 세포에 대해 선택적으로 작용성인 방법.
- (a)종양 세포내에 존재하는, 종양 환자에 대해 선택적으로 면역원성인 단백질을 확인하는 단계; 및 (b) 이 단백질을 분리하여 정제하는 단계들을 포함하는, 종양 세포의 작용성 단백질의 제조방법.
- 제6항의 방법으로 제조된 단백질.
- 제6항에 있어서, (c) 분리되어 정제된 단백질을 서열화하는 단계; (d) 서열화된 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드의 제조 단계; (e) 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 숙주 세포를 형질감염시키는 단계; (f) 단백질 발현을 위해 충분한 조건하에서 형질감염된 숙주 세포를 유지하는 단계; 및 (g) 단백질을 수집하는 단계들을 추가로 포함하는 방법.
- (a) 종양 세포내에 존재하는 선택적으로 면역원성인 단백질을 확인하는 단계; 및 (b) 이 단백질을 분리 및 정제하는 단계들을 포함하는 방법으로 제조된 종양 특이적 항원.
- 제9항의 방법으로 제조된 종양 특이적 항원.
- 제10항에 있어서, SCC 항원.
- 제11항에 있어서, SCC 항원 3.3, 16.1, 16.3, 16.4, 27.3, 35.1, 37.1, 37.2, 39.1, 39.2, 39.4, 40.1, 40.3, 40.4, 47.2, 47.3, 47.4, 49.2, 49.3, 50.1, 50.2 또는 50.3.
- 제10항에 있어서, 유방암에 대해 특이적인 항원.
- 제13항에 있어서, 포스포릴화 db1인 항원.
- 제14항에 있어서, db1이 서열확인번호:2의 아미노산 잔기 서열을 포함하는 항원.
- 제14항에 있어서, 포스포릴화 db1이 하나 이상의 포스포틸화 세린 잔기를 포함하는 항원.
- 제16항에 있어서, 포시포릴화 세린 잔기가 서열확인번호:2의 아미노산 잔기 위치 2, 3, 9, 23, 25, 47, 151, 202, 295, 299, 402, 436, 438 또는 42에 위치하는 항원.
- 제16항에 있어서, 포스포릴화 db1이 2개 이상의 포스포릴화 세린 잔기를 포함하는 항원.
- 제18항에 있어서, 포스포릴화 세린 잔기가 서열확인번호:2의 아미노산 잔기 위치 2와 3,2와 9,3과, 9,23과 25, 295와 299, 436과 438, 436과 438, 436과 442 또는 438과 442에 위치하는 항원.
- 제16항에 있어서, 포스포릴화 db1이 3개 이상의 포스포릴화 세린 잔기를 포함하는 항원.
- 제20항에 있어서, 포스포릴화 세린 잔기가 서열확인번호:2의 아미노산 잔기 위치 a 3 및 9 포는 436, 438 및 442에 위치하는 항원.
- 제16항에 있어서, 포스포틸화 db1이 하나 이상의 포스포릴화 트레오닌 잔기를 포함하는 항원.
- 제22항에 있어서, 포스포릴화 트레오닌 잔기가 서열확인번호:2의 아미노산 잔기 위치 38, 236, 380, 403 또는 406에 위치하는 항원.
- 제16항에 있어서, 포스포릴화 db1이 2개 이상의 포스포릴화 트레오닌 잔기를 포함하는 항원.
- 제24항에 있어서, 포스포릴화 트레오닌 잔기가 서열확인번호:2의 아미노산 잔기 위치 403 및 406에 위치하는 항원.
- 제16항에 있어서, 포스포릴화 db1이 하나 이상의 포스포릴화 티로신 잔기를 포함하는 항원.
- 제26항에 있어서, 포스포릴화 티로신 잔기가 서열확인번호:2의 아미노산 잔기 위치 201에 위치하는 항원.
- 제16항에 있어서, 포스포릴화 db1이 하나 이상의 포스포릴화 세린 잔기 및 하나 이상의 포스포릴화 트레오닌 잔기를 포함하는 항원.
- 제28항에 있어서, (a) 2개의 포스포릴화 세린 잔기가 서열확인번호:2의 아미노산 잔기 위치 23 및 25에 위치하고 하나의 포스포릴화 트레오닌 잔기는 아미노산 잔기 위치 38에 위치하거나; (b) 하나의 포시포릴화 세린 잔기가 서열확인번호:2의 아미노산 잔기 위치 402에 위치하고 2개의 포스포틸화 트레오닌 잔기는 서열확인번호:2의 아미노산 잔기 위치 403 및 406에 위치하거나; (c) 하나의 포스포릴화 세린 잔기가 서열확인:2의 아미노산 잔기 위치 402에 위치하고 하나의 포스포릴화 트레오닌 잔기는 서열확인번호:2의 아미노산 잔기 위치 403 또는 406에 위치하는 항원.
- 제16항에 있어서, 포스포릴화 db1이 하나 이상의 포스포틸화 세린 잔기 및 하나 이상의 포스포릴화 티로신 잔기를 포함하는 항원.
- 제30항에 있어서, 하나의 포스포릴화 세린 잔기가 서열 확인번호:2의 아미노산 잔기 위치 202에 위치하고 하나의 포스포릴화 티로신 잔기는 서열확인번호:2의 아미노산 잔기 위치 201에 위치하는 항원.
- 제16항에 있어서, 포스포릴화 db1이 서열확인번호:3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37 또는 38의 아미노산잔기 서열을 포함하는 항원.
- 종양-관련 항원을 포스포릴화시킴을 포함하여, 종양-관련 항원의 면역원성 특이성을 증가시키는 방법.
- 제33항에 있어서, 종양 항원이 유방암 항원인 방법.
- 제34항에 있어서, 유방암 항원이 db1인 방법.
- 제34항에 있어사, db1이 서열확인번호:2의 아미노산 잔기 서열을 포함하는 방법.
- 하나 이상의 검정에 대해 종양-특이적 항원을 충분한 양으로 포함하는, 종양-특이적 항원과 면역반응성인 항체의 존재를 검출하기 위한 검정 키트.
- 제37항에 있어서, 종양 특이적 항윈이 SCC 항원 3.3, 16.1, 16.3, 16.4, 27.3, 35.1, 37.1, 37.2, 39.1, 39.2, 39.4, 40.1, 40.3, 40.4, 47.2, 47.3, 47.4, 49.2, 49.3, 50.1, 50.2 또는 50.3인 키트.
- 제37항에 있어서, 종양 특이적 항원이 포스포릴화 db1인 키트.
- 제37항에 있어서, 종양 특이적 항원과 면역 반응성인 항체를 검출하기 위한 수단을 포함하는 키트.
- 제37항에 있어서, 항체가 IgA, IgE, IgG 또는 IgM 면역글로불린인 키트.
- (a)체액 샘플과 종양-특이적 항원과의 혼합물을 형성하는 단계; (b) 생물학적 반응 존건하에서 샘플중 존재하는 항체와 종양-특이적 항원 사이에 접합체를 형성하기에 충분한 시간동안 혼합물을 유지하는 단계; 및 (c) 접합체의 존재를 검출하는 단계들을 포함하여, 종양 특이적 항원과 면역반응성인 항체의 존재를 생물학적 체액중에서 검출하는 방법.
- 제42항에 있어서, 종양 특이적 항원이 SCC 항원 3.3, 16.1, 16.3, 16.4, 27.3, 35.1, 37.1, 37.2, 39.1, 39.2, 39.4, 40.1, 40.3, 40.4, 47.2, 47.3, 47.4, 49.2, 49.3, 50.1, 50.2 또는 50.3인 방법.
- 제42항에 있어서, 종양 특이적 항원이 포스포릴화 db1인 방법.
- 제42항에 있어서, 항체가 IgA, IgE, IgG 또는 IgM 면역글로불린인 방법.
- (a) 버진(virgin) 비-항원 감작된 T세포를 함유하는 자연적으로 존재하는 T세포의 집단을 분리하는 단계; (b) 면역원성 중양-특이적 항원을 확인하는 단계; 및 (c)비-항원 감작된 T 세포를 면역원성 종양-특이적 항원으로 감작시키는 단계들을 포함하여, 종양-특이적 항원으로 감작된 T세포를 제조하는 방법.
- 제46항에 있어서, 면역원성 종양 특이적 항원이 SCC 항원 3.3, 16.1, 16.3, 16.4, 27.3, 35.1, 37.1, 37.2, 39.1, 39.2, 39.4, 40.1, 40.3, 40.4, 47.2, 47.3, 47.4, 49.2, 49.3, 50.1, 50.2 또는 50.3인 방법.
- 제46항에 있어서, 면역원성 종양 특이적 항원이 포스포릴화 db1인 방법.
- 제46항에 있어서, T-세포가 T-헬퍼 임파구 또는 특이적 세포 독성 T세포인 방법.
- (a) 종양-특이적 항원으로 감작된 T세포를 분리하는 단계 및 (b) 감작된 T세포의 숫적인 증식을 유도하는 단계들을 포함하여, 종양-특이적 항원으로 감작된 T세포 집단을 제조하는 방법.
- 제50항에 있어서, T세포가 순환성 임파구, 임파절 또는 종양으로부터 분리되는 방법.
- 제50항에 있어서, 유도가 종양 특이적인 항원의 존재하에서 수행되는 방법.
- 제52항에 있어서, 유도가 항원 발현 세포의 존재하에서 수행되는 방법.
- 제50항에 있어서, (c) T세포를 아배양하여 특정 종양-특이적 에피토프로 감작된 T세포를 확인하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
- 제50항에 있어서, 면역원성 종양 특이적 항원이 SCC 항원 3.3, 16.1, 16.3, 16.4, 27.3, 35.1, 37.1, 37.2, 39.1, 39.4, 40.1, 40.3, 40.4, 47.2, 47.3, 47.4, 49.2, 49.3, 50.1, 50.2 또는 50.3인 방법.
- 제50항에 있어서, 면역원성 종양 특이적 항원이 포스포릴화 db1인 방법.
- (a) 종양 세포로부터 하나 이상의 선택적으로 면역원성인 단백질을 분리하는 단계; (b) 각각의 선택적으로 면역원성인 단백질중에서 종양 환자에 대해 선택적으로 면역원성인 하나 이상의 에피토프를 확인하는 단계; (c) 각각의 에피토프에 대해 에피토프를 함유하는 펩타이드(여기서, 단일 펩타이드는 비-종양 대상체에 의해인지되는 에피토프를 함유하지 않는다)를 제조하는 단계; 및 (d) 펩타이드의 라이브러리를 형성하는 단계들을 포함하여, 종양 특이적 액소성 항원의 펩타이드 라이브러리를 제조하는 방법.
- 제57항에 있어서, 분리가, (a) 종양 세포로부티 단백질을 추출하는 단계; (b) 대조 및 종양환자 혈청을 스크리닝하여 종양 환자 혈청중에서 항체와 특이적으로 면역반응하는 단백질을 결정하는 단계; 및 (c) 선택적으로 면역원성인 단백질을 분리하고 정제하는 단계들을 포함하는 방법.
- 제57항에 있어서, 확인이, (a) 단백질중의 잠재적 에피토프를 한정하는 단계; (b) 이러한 에피토프들중 하나를 함유하는 단백질 부위를 포함하는 펩타이드를 합성하는 단계; (c) 대조 및 종양 환자 혈청을 스크리닝하여 종양 환자 혈청중에서 항체와 특이적으로 면역반응하는 단백질을 결정함으로써, 종양 환자에 있어 선택적으로 면역원성인 단백질중의 에피토프를 확인하는 단계들을 포함하는 방법.
- 제57항의 방법으로 제조한 라이브러리.
- 제57항에 있어서, 선택적으로 면역원성인 단백질이 포스포릴화 단백질인 방법.
- (a) 유방암 환자에 대해 선택적으로 면역원성인, 유방암 세포중에 존재하는 단백질을 확인하는 단계; (b)이 단백질의 잠재적 포스포릴화 부위를 한정하는 단게; (c) 하나 이상의 포스포릴화 부위가 포스포릴화되어진 포스포릴화 부위 하나 이상을 함유하는 단백질의 부위를 포함하는 펩타이드를 합성하는 단계; (d) 펩타이드를 스크리닝하여 유방암 환자에 대해 선택적으로 면역원성인 포스포릴화 펩타이드를 확인하는 단계; 및 (e) 이와 같이 포스포릴화되고 선택적으로 면역원성인 펩타이드의 라이브러리를 형성하는 단계들을 포함하여, 유방암 특이적 액소성 항원의 펩타이드 라이브러리를 제조하는 방법.
- 제62항에 있어서, 단백질이 db1인 방법.
- 제62항에 있어서, 잠잭적 포스포릴화 부위가, (a) 서열확인번호:2의 아미노산잔기 위치 2, 3, 9, 23, 25, 47, 151, 202, 295, 299, 402, 436, 438 또는 442에서의 포스포릴화 세린 잔기; (b) 서열확인번호:2의 아미노산 잔기 위치 2 및 3,2 및 9,3 및 9,23 및 25,295 및 299,436 및 438,436 및 442 또는 438 및 442에 위치한 2개 이상의 포스포릴화 세린 잔기; (c) 서열확인번호:2의 아미노산 잔기 위치 2,3 및 9 또는 436,438 및 442에 위치한 3개 이상의 포스포릴화 세린 잔기; (d) 서열확인번호:2의 아미노산 잔기 위치 38,263,380,403 또는 406에 위치한 포스포릴화 트레오닌 잔기; (e) 서열확인번호:2의 아미노산 잔기 위치 403 및 406에 위치한 2개이상의 포스포릴화 트레오닌 잔기; (f) 서열확인번호:2의 아미노산 잔기 위치 201에 위치한 1개 이상의 포스포릴화 티로신 잔기; (g) 하나 이상의 포스포릴화 세린 잔기 및 하나 이상의 포스포릴화 트레오닌 잔기 [여기서, (i) 포스포릴화 세린 잔기는 서열확인번호:2의 아미노산 잔기 위치 23 및 25에 위치하고, 하나의 포스프릴화트레오닌 잔기는 아미노산 잔기 위치 38에 위치하거나; (ii) 하나의 포스포릴화 세린 잔기는 서열확인번호:2의 아미노산 잔기 위치 402에 위치하고 2개의 포스포릴화 트레오닌 잔기는 서열확인번호:2의 아미노산 잔기 위치 403 및 406에 위치하거나; (iii) 하나의 포스포릴화 세린 잔기는 서열확인번호:2의 아미노산 잔기 위치 402에 위치하고 하나의 포스포릴화 트레오닌 잔기는 서열확인번호:2의 아미노산 잔기 위치 403 또는 406에 위치한다; 또는 (h) 하나 이상의 포스포릴화 세린 잔기 및 하나 이상의 포스포릴화 티로신 잔기[여기서, 포스포릴화 세린 잔기는 서열확인번호:2의 아미노산 잔기 위치 202에 위치하고 포스포릴화 티로신 잔기는 서열확인번호:2의 아미노산 잔기 위치 201에 위치한다]를 포함하는 방법.
- 제62항에 있어서, 상기 단백질 부위가 서열확인번호:3, 4, 5. 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37 또는 38의 아미노산 잔기 서열을 포함하는 방법.
- 제62항에 있어서, 상기 단백질이 온코진-전사된 단백질, 세포-사이클 단백질, 수용체, 전사 인자 또는 기타 조절 단백질 또는 기질 단백질인 방법.
- 제62항의 방법으로 제조한 라이브러리.
- 하나 이상의 검정에 대해 종양 특이적 액소성 항원의 펩타이드 라이브러리를 충분한 양으로 포함하는, 대상체의 종양 존재를 진단하기 위한 검정 키트.
- 제68항에 있어서, 종양이 SCC이고, 라이브러리가 2개 이상의 SCC 항원 3.3, 16.1, 16.3, 16.4, 27.3, 35.1, 37.1, 37.2, 39.1, 39.2, 39.4, 40.1, 40.3, 40.4, 47.2, 47.3, 47.4, 49.2, 49.3, 50.1, 50.2 또는 50.3을 포함하는 키트.
- 제68항에 있어서, 종양이 유방암이고, 라이브러리가 서열확인번호:3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35,36, 37 또는 38로 지정된 다수의 2개 이상의 펩타이드를 포함하는 키트.※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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