KR950704496A - 안정한 세포의 티로시나이제의 제조방법 및 그에 의한 폴리페놀성 중합체의 합성방법(method for making stable, extracellular tyrosinase and synthesis of polyphenolic polymers therefrom) - Google Patents

안정한 세포의 티로시나이제의 제조방법 및 그에 의한 폴리페놀성 중합체의 합성방법(method for making stable, extracellular tyrosinase and synthesis of polyphenolic polymers therefrom)

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KR950704496A KR1019950702162A KR19950702162A KR950704496A KR 950704496 A KR950704496 A KR 950704496A KR 1019950702162 A KR1019950702162 A KR 1019950702162A KR 19950702162 A KR19950702162 A KR 19950702162A KR 950704496 A KR950704496 A KR 950704496A
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존 쥬니어 가르거 스테펜
배리 홀츠 리차드
제이 맥컬로크 마이클
글레브 스베르로우 게나디
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데이비드 알. 맥기
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Abstract

본 발명은 화학적으로 변형된 폴리페놀성 폴리머(PPP)의 생체의 제조방법에 관한 것으로서, 우선, 안정하고 활성이 높은 세포의 티로시나이제가 스트렙토마이세스 안티바이오티쿠스와 같은 유전학적으로 형질전환된 미생물로부터 생성된 후, 상기 티로시나아제를 1-티로신, 가수분해된 단백질, 또는 1-티로신과 결합된 올리고펩티드와 같은 반응 기질과 함께 배양시키며, 티로시나이제의 농도 변화 뿐 아니라 올리고펩티드/티로신 결합 비율이 색, 분자 크기, 및 생성된 PPP의 분광 흡광도 특성을 변형시키는데 사용될 수 있고, 추가로, 과산화수소 또는 아염소산염과 같은 산화제가 PPP의 제조방법과 관계없이 PPP의 색을 변형시키는데 사용되며, 상기 PPP는 분자량 컷-오프 초여과를 사용하여 순서대로 분별될 수 있고, 다양하지만 재생가능한 물리적 특성을 갖는 PPPs룔 제조하기 위한 PPP의 제조법에 유기 용매가 또한 사용되는 것을 특징으로 한다.

Description

안정한 세포의 티로시나이제의 제조방법 및 그에 의한 폴리페놀성 중합체의 합성방법(METHOD FOR MAKING STABLE, EXTRACELLULAR TYROSINASE AND SYNTHESIS OF POLYPHENOLIC POLYMERS THEREFROM)
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 본 발명에 따라서 Streptomyces antibioticus를 형질전환시키는데 사용되는 플라스미드 pBS1082S의 유전자 지도이다,
제2도는 티로시나이제의 수율과 발효 공정시 용해된 산소의 양 사이의 관계를 나타낸 것이다,
제3도는 3리터 반응 용기내에서 생체의 PPP생성의 비율을 400nm에서 흡광도의 증가에 의하여 모니터링하는 합성 비율로 나타낸 것이다.

Claims (24)

  1. (a)티로신을 코딩하는 유전 서열을 함유하고 있는 발현 벡터를 포함하는 형질전환된 미생물을 적당한 성장 배지와 조건하에서 성장시키고 (b)상기 미생물이 세포의 티로신을 발현시키도록 하고 (c)여과 또는 원심분리에 의하여 세포성 폐물로부터 티로시나아제를 회수하는 단계로 구성된 것을 특징으로 하는 안정한 세포의 티로시나이제의 생체내 제조방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 회수된 세포의 티로시나이제를 냉동 건조시킴으로써 안정하시키는 추가의 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  3. 제1항에 있어서, 22℃이하의 온도에서 티로시나아제를 저장함으로써 상기 회수된 세포의 티로시나이제를 안정화시키는 추가의 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 제3항에 있어서, 상기 티로시나이제가 4℃이하의 온도에서 저장되는 것을 특징으로 하는 방법.
  5. 제1항에 있어서, 형질전환된 미생물을 성장시키는 단계가 플라스미드 pBS1082S인 발현벡터를 제조하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 제1항에 있어서, 상기 숙주 미생물이 스트렙토마이세스, 에스케리치아, 바실러스, 스트렙토코커스, 살모넬라, 스타필로코커스 및 비브리오로 구성된 군으로 부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 제6항에 있어서, 상기 미생물이 스트렙토마이세스인 것을 특징으로 하는 방법.
  8. 제1항에 있어서, (b)단계중에 용해된 산소의 양을 조절하여 상기 미생물이 세포의 티로시나이제를 발현시키도록 하는 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 안정하고 활성이 높은 것을 특징으로 하는 세포의 티로시나아제.
  10. 1-티로신, 가수분해 단백질, X/1-티로신, 및 1-티로신/X(X는 단일한 아미노산, 디펩티드 또는 올리고펩티드이다.)로 구성된 군으로부터 선택된 반응 기질을 세포외 티로시나이제와 적당한 반응 조건하에 접촉시켜 PPP를 형성하고 생성된 PPP를 회수하는 단계로 구성된 것을 특징으로 하는 폴리페놀성 폴리머("PPP")의 생체의 제조방법.
  11. 제10항에 있어서, 상기 티로시나이제를 상기 기질과 유기 용매내에서 접촉시키는 것을 특징으로 하는 방법.
  12. 제11항에 있어서, 상기 유기 용매가 메탄올, 프로판올, 에탄올 및 DMSO로 구성원 군으로 부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  13. 제10항에 있어서, X가 디펩티드인 것을 특징으로 하는 방법.
  14. 제10항에 있어서, 상기 기질이 1-tyr, tyr-ala, phe-tyr, va-tyr, n-아세틸-1-시스테인, n-아세틸-1-티로신, 글리실-1-티로신, ala-tyr, 1-티로신 메틸 에스테르, 1-티로신 에틸 에스테르, 5-히드록시도파민, 1-3-메톡실 티로신, n-아세틸글리신, 1-티로신 알릴 에스테르, 3-아미노-1-티로신, 카테콜, 3-아이오도-1-티로신, tyr-tyr, 6-히드록시도파민, 1-티로신 히드라지드, d1-m-티로신, n-클로로아세틸-1-티로신, 1-메틸도파, 클로로겐산, n-아세틸-1-티로신아미드, 폴리-1-티로신, trp-tyr, 1-3, 4-디히드록시 phe-ala-met-에스테르, tyr-gly, 1-도파, 5,6-디히드록시인돌(DHI)로 구성된 군으로 부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  15. 제10항에 있어서, 생성된 PPP의 색이 상기 기질의 결합량에 대해서 반응 용기내 존재하는 티로시나이제의 양을 변화시킴으로써 결정되는 것을 특징으로 하는 방법.
  16. 제10항에 있어서, 생성된 PPP의 색이 상기 1-티로신에 대한 기질의 비율을 변화시킴으로써 결정되는 것을 특징으로 하는 방법.
  17. 제10항에 있어서, X가 디펩티드 tyr-ala이고 1-티로신에 대한 상기 디펩티드의 비율이 4 : 1 내지 4 : 10으로 다양한 것을 특징으로 하는 방법.
  18. 제10항에 있어서, X가 디펩티드 phe-tyr이고 1-티로신에 대한 상기 디펩티드의 비율이 5 : 1 내지 1 : 1으로 다양한 것을 특징으로 하는 방법.
  19. 선택된 시간동안 강 산화제로 PPP를 결합하여 소망의 색을 갖는 PPP를 제조한 후 결합물로부터 산화제를 제거하는 단계로 구성된 것을 특징으로 하는 PPP의 제조 방법.
  20. 제19항에 있어서, 상기 산화제가 과산화수소, 아염소산 나트륨, 과망간산 칼륨, 과아세트산 및 과염소산으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  21. 제19항에 있어서, 초여과에 의하여 상기 산화제가 결합물로부터 제거되는 것을 특징으로 하는 방법.
  22. 제19항에 있어셔, 선택된 분자량 컷-오프 초여과를 사용하여 PPP를 분별시키는 단계가 추가로 포함되는 것을 특징으로 하는 방법.
  23. 제22항의 방법에 따라 제조되는 것을 특징으로 하는 분별된 PPPs.
  24. 제10항의 방법에 따라 제조되는 것을 특징으로 하는 폴리페놀성 폴리머.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019950702162A 1992-11-25 1993-11-22 안정한 세포의 티로시나이제의 제조방법 및 그에 의한 폴리페놀성 중합체의 합성방법(method for making stable, extracellular tyrosinase and synthesis of polyphenolic polymers therefrom) KR950704496A (ko)

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